Ассоциации полиморфных вариантов генов CCK, CCK1R, CCK2R и MTHFR с социально значимыми неврологическими заболеваниями человека

Коробейникова, Любовь Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Ассоциации полиморфных вариантов генов CCK, CCK1R, CCK2R и MTHFR с социально значимыми неврологическими заболеваниями человека
ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Ассоциации полиморфных вариантов генов CCK, CCK1R, CCK2R и MTHFR с социально значимыми неврологическими заболеваниями человека"

На правах рукописи

Коробейникова Любовь Александровна

АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ССК, ССКШ, ССК2Я И С СОЦИАЛЬНО

ЗНАЧИМЫМИ НЕВРОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЧЕЛОВЕКА (ПАНИЧЕСКОЕ РАССТРОЙСТВО, МИГРЕНЬ)

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 9 МАЙ 2011

Москва-2011

4847110

Работа выполнена в лаборатории сравнительной генетики животных Учреждения Российской Академии наук Института общей генетики им Н.И.Вавилова РАН, г. Москва

Научный руководитель:

доктор биологических наук доцент

Климов Евгений Александрович

Учреждение Российской Академии наук

Институт общей генетики

им. Н.И. Вавилова РАН, г. Москва

Официальные оппоненты: Ганковская Оксана Анатольевна

доктор медицинских наук Научно-исследовательский институт

вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, г. Москва

кандидат биологических наук Соболев Владимир Васильевич

Учреждение Российской Академии наук

Институт общей генетики

им. Н.И. Вавилова РАН, г. Москва

Ведущее учреждение: Медико-генетический научный центр

РАМН, г. Москва

Защита состоится '-¿¿¿¿¡¿¿Л^.О! 1 г. в_часов на заседании диссертационного

совета Д 002.214.01 при Учреждении Российской академии наук Институте общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН по адресу: 119991, ГСП-1, г. Москва, ул. Губкина, д. 3. Тел.: (499) 135-62-13 Факс: (495) 132-89-62

электронная почта: iogcn@vigg.ru, aspirantura@vigg.ru адрес в Интернете: www.vigg.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской Академии наук Института общей генетики им Н.И.Вавилова РАН.

Автореферат разослан «_^>> и^ОЛ- 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Синелыцикова Татьяна Аркадьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Согласно данным Министерства Здравоохранения, эпидемиологическая ситуация в России приобретает все более напряженный характер. Экономическая и социальная нестабильность в обществе влечет за собой неумолимый рост числа заболеваний, получивших название социально значимых. Наряду с такими тяжелыми социально значимыми заболеваниями как туберкулез, гепатит В и С, сахарный диабет, ВИЧ-инфекция, онкологические к сердечнососудистые заболевания, все большее распространение получают неврологические и психические расстройства. Среди относящихся к этой группе заболеваний, характеризующихся высоким уровнем социальной дезадаптации и оказывающих негативное влияние на нормальную трудовую и социальную деятельность личности, стоит особенно отмстить паническое расстройство и мигрень.

Состояние патологической тревожности (F41 по МКБ-10) может возникнуть практически у любого человека, но для этого необходимы физические или эмоциональные перегрузки чрезвычайной силы (стихийные бедствия, катастрофы, террористические акты и другие угрожающие жизни ситуации). Однако, часть людей (от 2 до 5% популяции) страдают тревожными расстройствами и подвержены паническим атакам па протяжении всей жизни (Баранов П.А.).

Паническое расстройство (ПР) является мультифакториапьным заболеванием: на его развитие влияют как факторы окружающей среды, так и генетические факторы. Доказано, что панические расстройства имеют серьезную генетическую основу: обнаружены свидетельства прямой передачи заболевания из поколения в поколение (заболеванием страдает 15-17% родственников больных 1 степени), а также большой конкордантности у однояйцовых близнецов (80-90%). Величина наследуемости ПР оценивается в 48% (Hcttcma et а!., 2001). Однако генетическая природа этого заболевания остается крайне мало изученной. Предполагается, что ПР может вызываться взаимодействием различных факторов, включающие как наследственные нейрохимические нарушения, так и стресс, вызываемый окружающей средой (Bradwcjn, Koszycki, 2001). Не удивительно, что наибольшее распространение и социальная значимость ПР наблюдается в мегаполисах, что объясняется большим количеством внешних факторов, способствующих развитию заболевания при имеющейся генетической предрасположенности.

Широкая распространенность и неясная этиология Г1Р породила интерес к холецистокинину (ХЦК) как к фактору тревожности, с тех пор, как в 1984 году, Jens

Rehfeld обнаружил, что инъекции пептида, вводимого здоровым добровольцам, вызывают отчетливое чувство тревоги и паники (Rehfeld, Van Solinge, 1992). Центральные рецепторы ХЦК в большой концентрации располагаются в областях ЦНС, участвующих в формировании тревоги. Биологическое действие этого подтипа рецепторов заключается в модуляции ряда классических нейромедиаторов (включая эндогенные опиаты и дофамин) и контроле многих центральных функций. Предполагается, что изменения в активности холсцистокиникэргической системы (ХЦК-систсмы), будь это гиперчувствительность рецепторов ХЦК к внутриклеточным ответам, связанным с этими рецепторами, и/или нарушения в обороте ХЦК, могут быть нейробиологической основой панических атак (Bradwcjn et al., 1994; Shlik et al., 1997). Одним из возможных механизмов нарушения функции ХЦК-системы могут быть мутации в регуляторных и/или белок-кодирующих областях генов холецистокинина и его рецепторов.

В последнее время в литературе появилось много данных, свидетельствующих о корреляции ряда одионуклеотидных замен в последовательностях генов ХЦК и его рецепторов с развитием и особенностями протекания панических расстройств человека. Однако большинство из них остаются малоизученными, а имеющиеся данные об их влиянии на развитие состояний патологической тревожности противоречивы.

Ассоциативные исследования по генетике тревожных расстройств, включающие все гены холсцистокининергической системы, за рубежом ранее не проводились. Данные по частотам аллелей генов ССК, CCK1R и CCK2R среди жителей России отсутствуют, то есть исследований по данному направлению в нашей стране ранее не проводилось.

Еще одним социально значимым заболеванием, имеющим генетическую основу, является мигрень. Выделяют два основных типа мигрени: мигрень без ауры и мигрень с аурой. Аурой называются своеобразные, стереотипные ощущения, возникающие непосредственно перед болевым приступом: мелькания перед глазами, вспышки света, искажение восприятия окружающего мира, онемение конечностей, своеобразные ощущения в животе. К возникновению мигрени имеется четкая наследственная предрасположенность, причем вероятность передачи по наследству мигрени с аурой выше, чем мигрени без ауры (Азимова с соавт., 2008).

В 2000 году мигрень была включена в список заболеваний, представляющих глобальное значение и бремя для человечества (Global Burgen of Disease 2000), что обусловлено как ее широкой распространенностью, так и значимым влиянием на жизнь пациентов с этим заболеванием (Leonardi et al., 2005). В Европе, где число жителей составляет 450 миллионов, 600 тысяч человек ежедневно отсутствуют на работе или учебе по причине мигрени. По затратам среди всех существующих заболеваний мигрень

занимает 20-е место. Эти затраты включают как экономические потери в связи с невыходом пациентов на работу или значительным снижением их трудоспособности, так и расходы пациентов на лечение (Berg, Stovner, 2005). Таким образом, мигрень в настоящее время рассматривается как хроническое неврологическое заболевание, приводящее не только к выраженной дезадаптации пациентов, но и к значительным экономическим потерям.

В ходе многочисленных исследований было доказано, что к развитию мигрени имеется четкая генетическая предрасположенность (Baloh, 2004; Wessman et al., 2007; De Vries et al., 2006, 2009; Montagna, 2008 и др.). Однако до настоящего времени информация о генах, играющих роль в патогенезе данного заболевания, остается не полной. Одним из наиболее изученных генов, связываемых с мигренью, является ген MTHFR, кодирующий фермент 5,10-метилентетрагидрофолат редуктазу (МТГФР) (Hádemenos et al., 2001). Экспериментальные исследования показали, что мутация С677Т в гене MTHFR достоверно чаще встречается у больных мигренью, чем у здоровых людей (Kara et al., 2003, De Tomraaso et al., 2007), причем в ряде работ корреляция обнаружена только для группы пациентов, страдающих мигренью с аурой (Kara et al., 2003, Lea et al., 2004).

Цель исследования.

Целью настоящей работы является анализ частоты встречаемости семи однонуклеотидных замен в генах ССК, CCK1R и CCK2R в случайной выборке и выборке страдающих паническим расстройством жителей Москвы, анализ частоты встречаемости однонуклеотидной замены С677Т в гене MTHFR в выборке жителей Москвы страдающих мигренью, а также оценка значимости исследованных замен в патогенезе указанных социально значимых заболеваний человека.

Задачи исследования:

1. Оценить частоту встречаемости семи однонуклеотидных замен в генах ССК, CCK1R и CCK2R в контрольной случайной выборке жителей Москвы. Сопоставить полученные результаты с данными о соответствующих частотах в других крупных городах мира.

2. Оценить частоту встречаемости семи однонуклеотидных замен в генах ССК, CCK1R и CCK2R в выборке индивидуумов страдающих ПР. Провести сравнительный анализ частот аллелей в двух исследуемых выборках.

3. Провести поиск ассоциации комплексных генотипов генов ССК, CCK1R и CCK2R с часто повторяющимися паническими атаками.

4. Оценить частоту встречаемости однонуклеотидной замены С677Т в гене \fTHFR в выборке пациентов, страдающих мигренью с аурой и мигренью без ауры, проживающих в Москве.

5. Сопоставить генотипы пациентов страдающих мигренью по локусу СбПТМТНРЯ с рядом клинических и электрофизиологичсских характеристик течения заболевания.

6. Сопоставить генотипы пациентов страдающих мигренью по локусу Св111МГНРЯ с наличием сопутствующих заболеванию симптомов.

Научная новизна.

В работе впервые изучена частота полиморфных вариантов генов холсцистокининергичсской системы в связи с развитием панического расстройства в выборке жителей Москвы. Обнаружена тенденция к увеличению частоты встречаемости замены -128С/Т в гене ССК1Я в выборке пациентов, страдающих паническими расстройствами по сравнению с контролем. Для остальных изученных однонуклеотидных замен (-36С/Т и -3250/А в гене ССК, -81 АЛ} и 984Т/С в гене ССКШ. 109С/Т и 155(Ю/А в гене ССК2Щ достоверных различий частот аллелей в исследуемых выборках не обнаружено. Проведен поиск ассоциации комплексных генотипов генов ССК, ССК1Я и ССК2К с часто повторяющимися паническими атаками. Обнаружена одна комбинация аллелей (-36Т ССК, -128Т ССК1К) достоверно чаще встречавшаяся в выборке больных ПР по сравнению с контрольной выборкой.

Получены данные о частоте встречаемости однонуклеотидной замены С677Т в гене \1THFR в выборке жителей Москвы, страдающих мигренью с аурой и мигренью без ауры. В результате сравнительного анализа подтверждена роль аллсля 677Т гена МГНРЯ как фактора риска развития мигрени с аурой. Впервые проведен анализ на наличие у пациентов с мигренью с аурой и мигренью без ауры, имеющих разные генотипы по локусу 677МГЯга, таких сопутствующих симптомов, как тошнота, фото- и фонофобия, а также на чувствительность к различным провокаторам мигренозного приступа. Наибольшая представленность сопутствующих симптомов, а также чувствительность к провокаторам мигренозного приступа обнаружена у больных с ТТ-генотипом по локусу бПМТНРЯ.

Научно-практическая значимость.

Полученные в работе результаты расширяют представления о генетической основе двух социально значимых неврологических заболеваний человека. Результаты, полученные в данной работе, могут быть использованы в фундаментальных исследованиях, касающихся выяснения патогенетических механизмов панического

расстройства и мигрени, для создания диагностических тест-систем, а также для оптимизации подходов к лечению пациентов, страдающих паническим расстройством или мигренью.

Апробация работы.

Результаты исследования представлены па V съезде Вавиловского общества генетиков н селекционеров (Москва, 2009), па Международной научной конференции, посвященной 45-лстию основания Института генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси (Минск, 2010), на 15-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2011). Полученные в ходе работы данные были доложены на отчетных сессиях (февраль 2009, март 2010).

Декларация личного участия автора.

Диссертация написана автором лично с использованием собственных результатов. Работа с пациентами и постановка клинического диагноза проводились сотрудниками отдела клинической неврологии ММА им. И.М. Сеченова к.м.н. Азимовой Ю.Э. и к.м.н. Фокиной Н.М. Забор образцов крови проводился квалифицированным медицинским персоналом клиники нервных болезней им. А.Я.Кожевникова. Автор самостоятельно осуществлял выделение ДНК, постановку АС-ПЦР и ПЦР-ПДРФ, элсктрофорстичсский анализ. Статистическая обработка полученных результатов проведена совместно с к.б.н. Фаворовым A.B. и Львове Д. Обсуждение результатов исследования и написание научных публикаций проводилось при участии научного руководителя д.б.н. Климова Е.А. Процент личного участия в экспериментальных исследованиях составил не менее 80%.

Публикации.

По результатам работы опубликовано 11 печатных работ, из них две статьи в журнале, рецензируемом ВАК и 9 тезисов докладов.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа изложена на 122 страницах машинописного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и их обсуждение, выводы, список использованной литературы и приложение. Работа иллюстрирована 23 таблицами, 14 рисунками и 4 приложениями. Список литературы включает 210 источников, большинство ссылок на английском языке.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

В обзоре литературы рассматриваются общая характеристика, эпидемиология, клинические проявления и патогенез панического расстройства и мигрени, систематизируются данные об ассоциации полиморфных вариантов генов с развитием панического расстройства, дается характеристика холециетокинина, его рецепторов и их физиологической роли. В данном разделе подробно изложена информация о генах-кандидатах, предположительно участвующих в патогенезе мигрени и панического расстройства.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Материалом для исследования послужили образцы крови больных паническими расстройствами и мигренью предоставленные отделом клинической неврологии ММА им. И.М. Сеченова. В работе исследовались образцы ДНК, выделенной из цельной крови пациентов, с диагнозом паническос расстройство, соответствующим критериям DSM-1V. Объем выборки 76 человек, из них 64 женщины и 12 мужчин в возрасте от 19 до 72 лет, все пациенты - проживающие в Москве и ближайшем Подмосковье. В подавляющем большинстве случаев (около 95% выборки) возраст дебюта заболевания у обследованных пациентов приходился на период до 40 лет. В качестве контроля в работе использовались образцы ДНК, выделенной из цельной крови добровольцев, проживающих в Москве. Объем контрольной выборки 170 человек, выборка разнородна по половозрастному составу (107 женщин и 63 мужчины в возрасте от 18 до 57 лет). Забор крови проводился на московской станции переливания крови.

Объем выборки пациентов с мигренью составил 83 человека, проживающих в Москве, из них 71 женщина и 12 мужчин в возрасте от 18 до 69 лет. Постановка диагноза мигрень с аурой или мигрень без ауры проводилась в соответствии с критериями Международной классификации головной боли II (2003г). Группу контроля составили 50 здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту.

Все пациенты, принимающие участие в нашем исследовании были ознакомлены с целями работы и подписали информированное согласие. Данная работа одобрена локальным Этическим комитетом Учреждения Российской Академии наук Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН.

Выделение ДНК.

Геномную ДНК выделяли из цельной крови с помощью метода, основанного на использовании в качестве лизирующего реагента гуанидинтиоцианата, который эффективен также для солюбилизации клеточного дебриса и денатурации клеточных нуклеаз (набор реагентов DIAtora™ DNA Prep, набор Magna™ DNA Prep 200, фирма «IsoGenc», Москва).

Выделение ДНК проводили согласно прописям, представленным фирмой-изготовителем, под ламииаром во избежание загрязнения помещения и последующей контаминации.

Подбоп ппаймепов и оптимизация условий ПНР.

Праймеры к нужным фрагментам 5'- регуляториых и кодирующих областей генов ССК, CCK1R и CCK2R подобраны нами с помощью программы "Primer 5.0" или вручную (таблица 1). Температуру отжига для каждой пары праймеров, использованной в работе, подбирали опытным путем, принимая за исходную - температуру, рассчитанную с использование.« программы "OligoCalculator". При отработке условий ПЦР в качестве матрицы использовалась геномная ДНК человека.

Таблица 1. Характеристика праймеров, использованных в работе.

Название Последовательность праймеров ТртЖэ °C Геи Замена (регистрацион пыи номер в КСВГ) Размер продук та (П.Н.)

ССК.7,8 F: CCAACGCTGACGCAGACTG R: GAAGCTTCTCGGATCCAGA 64 ССК -36С/Т (rs 1157184) 168

CCK3.4-F CCK7,8-R F: G СТСТ АСССАССС AG АССТС R: GAAGCTTCTCGGATCCAGA 65 ССК -325G/A (rs 1799923) 498

CCK-AR F:GCATATGTACACATGTGTGTAAA AAGCAGCCAGAC R: GCCCTTTCCTGGGCCAGACT 64 ССК IR -81A/G (rsl799723) -128G/T (rs 1800908) 103

CCKBR-2 F: CATGGAGCTGCTAAAGCTGAAC R: CTGGGGTACAGTGAGAAATAGC 60 ССК 2R 109C/T (rs 1805000) 203

CCKBR-3 F: CTGGCAGTCAGCGACCTCCT R: CACAAGCATCAGTGGGACTTC 62 ССК 2R 1550G/A (rsl805002) 237

CCK1R-1 F: ATCGTGGGTCCAGTGATGT R: GGCTCCTTTGCTGTGATTGT 63 ССК 1R 984T/C (rsl800857) 472

Анализ частот олпопуклеотилпых замен.

Анализ частот однонуклеотидных аллелей проводился с помощью метода ПЦР-ПДРФ для всех замен в генах холецисгокишшергической системы (список эндонуклеаз рестрикции представлен в таблице 2) и метода аллель-специфической ПЦР для замены С677Т в rene MTHFR с использованием набора GenePakü; MTHFR PCR test («IsoGene», Москва).

Детекция продуктов рестрикции или амплификации проводилась в 2% агарозном геле, приготовленном по стандартной прописи (Маииатис и др., 1984). После электрофореза гель фотографировали в коротковолновом УФ-свете (длина волны 312 им) с выводом данных па экран монитора компьютера (использовалась гельдокументирующая система ViTran).

Таблица 2. Характеристика эндонуклеаз, использованных в работе и условия рестрикции.

Рестриктаза Замена и регистрационный номер в NCBI Ген Температура инкубации, °C Сайт узнавания

BslI С/ТХ-36) rsl 1571842 CCK 55 CCNNNNNINNGG GGNNîNNNNNCC

Smul (Faul) G/A(-325) rsl 799923 CCK 37 CCCGC(N)4 GGGCG(N)61

Hinfï A/G(-81)rsl799723, G/T(-128) rsl 800908 CCK1R 37 GIANTC CTNA\G

Pstl T/C (984) rsl 800857 CCK1R 37 С TGCAIG G\ACGTC

BstDEI C/T(109) rsl 805000 CCK2R 60 CÎTNAG GANTIC

Bst4CI G/A (1550) rsl 805002 CCK2R 65 ACN]GT TGINCA

Программы для статистической обработки данных.

Статистическую обработку данных проводили с использованием стандартных подходов, используемых при проведении популяционно-генстичсских исследований. Сравнение частот встречаемости аллелей и генотипов с целью выявления ассоциации с ПР или с мигренью и тест на соответствие выборок равновесию Харди-Вайнбсрга проводили с использованием метода х2- Статистически значимыми считались различия при р < 0,05. Для определения риска заболевания у носителей определенных аллелей и генотипов вычислялось отношение шансов (OR - odds ratio) с 95% доверительным интервалом (95%C.I. - Confidence Interval). Для вычисления этих показателей использовалась программа DcFinetti на сайте Института генетики человека (Мюнхен, Германия, http://ihg2.hclmholtz-muenchen.de/cgi-bin/hw/hwal.pl). Анализ tía совместное наследование изученых однонуклеотидных замен проводился с помощью компьютерной программы Arlequin 3.11.

Поиск комбинаций аллелей генов ассоциированных с ПР проведен с помощью программного обеспечения APSamplcr 3.5.8. Программа APSampler 3.5.8. основана на методе МСМС (Markov chain Monte Carlo technique). Достоверность выявленных этой программой ассоциаций генотипов с ПР верифицировали с помощью точного критерия Фишера, с последующей вапидацией результатов с помощью стандартного пермутационного теста. Силу ассоциации выражали в значениях отношения шансов (OR -odds ratio) с 95% доверительным интервалом (95%C.I. - Confidence Interval). Достоверным считали различия сравниваемых частот при значении р <0,05. Для визуализации данных в

виде диаграммы Всппа использовалась программа Googic Chart АРГ, доступная по ссылке http://www.mql5.eom/ru/articlcs/l 14.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Полиморфизм генов ССК, CCK1R и CCK2R и панические расстройства.

Для изучения частоты встречаемости полиморфных вариантов генов ССК, CCK1R и CCK2R в выборке пациентов, страдающих IIP, и случайной (контрольной) выборке использовался метод ПЦР-ПДРФ. Для каждой из семи исследованных однонуклеотидных замен была подобрана схсма детекции, включающая праймеры для амплификации соответствующего фрагмента геномной ДНК и специфическую эндонуклеазу рестрикции, сайт узнавания которой появляется или пропадает в результате замены соответствующего нуклеотида в последовательности ДНК.

Изучение частоты встречаемости полиморфных вариантов гена ССК.

Изучены частоты встречаемости двух однонуклеотидных замен (-36С/Т, -325G/A), расположенных в 5'-рсгуляторной области гена ССК. Результаты исследования частот полиморфных вариантов гена ССК в выборке пациентов, страдающих паническим расстройством, и случайной (контрольной) выборке представлены в таблице 3. Наблюдаемое распределение частот генотипов по исследованным локусам соответствует теоретически ожидаемому равновесному распределению Харди-Вайнбсрга как в выборке пациентов с ПР, так и в контрольной выборке.

Таблица 3. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов

гена ССК.

Частоты генотипов (Р) Частоты аллелей (P±S(p))

Замена -36С/Т СС СТ ТТ С Т

Больные ПР (п=76) 0,211 0,447 0,342 0,434±0,057 0,566±0,057

Контроль (п=170) 0,194 0,447 0,359 0,418±0,038 0,582±0,038

X2=0,ll;d.f.=2;p=0,741 x"=0,12;d.f.=l;p=0,731; OR=Q,934; 95% С.1.=[0,635-1,375]

Замена -325G/A GG GA АА G А

Больные ПР (п=76) 0,803 0,197 0,000 0,901±0,034 0,099±0,034

Контроль (п=170) 0,818 0,165 0,177 0,900±0,023 0,100±0,023

Х2=0,00; d.f.=2; р=0,965 x'=0,00;d.f.=l;p=0,964; QR=0,985; 95% C.I.=[0,520-1,869]

Примечания: п - объем выборки, Р - частота аллеля или г енотипа в долях, S(p) - стандартная ошибка, X - значение хи-квадрат, d.f. - число степеней свободы, р - значение достоверности, OR (odds ratio) - отношение шансов, 95% СЛ. - 95%-ный доверительный интервал (Confidence Interval).

Известно, что однонуклеотндная замена -36С/Т в гене ССК приводит к изменению сайта связывания фактора транскрипции Spl, что в свою очередь влечет за собой снижение транскрипционной активности этого гена (Kadonaga et al., 1986). Исследователями из Японии было установлено, что частота замены -36С/Т достоверно выше у людей, страдающих паническими и тревожными расстройствами по сравнению со здоровыми добровольцами (Wang et al., 1998). Однако в ряде последующих работ такой ассоциации обнаружено не было (Hamilton et al., 2001; Hosing et al., 2004). A исследователи из Дании, напротив, обнаружили протекторную роль замены -36С/Т (Koefoed et al., 2010).

По нашим данным частота этой замены в контрольной выборке и выборке больных ПР достоверно не отличается (х2=0,12; р=0,731), что позволяет предположить отсутствие значимого вклада этой замены в развитие заболевания. Однако, учитывая результаты других исследований, не представляется возможным сделать однозначный вывод о роли однонуклеотидной замены -36С/Т в гене ССК в патогенезе ПР.

Однонуклеотндная замена -325G/A также располагается 5'-рсгуляторной области гена ССК, но является менее изученной по сравнению с первой заменой (-36С/Т). Полученные нами частоты замены -325G/A в контрольной выборке и выборке пациентов с паническим расстройством также достоверно не отличаются (х2=0,00; р=0,964).

Таким образом, согласно полученным данным, изученные полиморфные варианты гена ССК не являются значимыми с точки зрения риска развития патологической тревожности.

Изучение частоты встречаемости полиморфных вариантов гена CCK1R.

Изучены частоты встречаемости трех однонуклеотидных замен в гене CCK1R, две из них расположены в промоторной области гена (-81A/G и -128G/T), а третья (984Т/С) расположена на границе первого интрона и второго экзона и, по всей видимости, может изменять сайт сплайсинга данного гена (Koefoed et al., 2009). Полученные значения частот генотипов и аллелей гена CCK1R приведены в таблице 4. Во всех случаях наблюдаемое распределение частот генотипов по полиморфным локусам гена CCK1R в исследованных выборках соответствовало теоретически ожидаемому равновесному распределению Харди-Вайнбсрга.

Таблица 4. Распределение частот агпелей и генотипов полиморфных вариантов

гена CCK1R.

Частоты генотипов (Р) Частоты аллелей (P±S(p))

Замена-81 А/й АА AG GG А G

Больные ПР (п=76) 0,869 0,131 0,000 0,934±0,028 0,066±0,028

Контроль (п=170) 0,906 0,094 0,000 0,953±0,016 0,047±0,016

Х2=0,78; d.f.=2; р=0,377 ^=0,74; d.f.=l; р=0,391; OR= 1,426; 95% C.I.=[0,632-3,220]

Замена-1280/Т GG GT ТТ G Т

Больные ПР (п=76) 0,882 0,118 0,000 0,941 ±0,027 0,05 9±0,027

Контроль (п=170) 0,953 0,047 0,000 0,977±0,012 0,023±0,012

X-4,16; d.f.=2; р=0,041 X2=4,01;d.f.=l;p=0,045; OR=2,612; 95% C.I.=[0,988-6.906]

Замена 984Т/С ТТ ТС сс Т С

Больные ПР (п=76) 0,763 0,197 0,039 0,862±0,040 0,138±0,040

Контроль (п=170) 0,717 0,265 0,018 0,850±0,027 0,150±0,027

Х2=0,12; d.f.=2; р=0,734 ХЧ),12; d.f.= l; р=0,731; OR=0,908; 95% С.1.=[0,525-1,572]

Примечания: п - объем выборки, Р - частота аллеля или генотипа в долях, S(p) - стандартная ошибка, х2 - значение хи-квадрат, d.f. - число степеней свободы, р - значение достоверности, OR (odds ratio) - отношение шансов, 95% C.I. - 95%-ный доверительный интервал (Confidence Interval).

Инвариантные позиции - (-81A/G) и (-128G/T) впервые обнаружены в ходе исследования полиморфных вариантов промоторной области гена CCK1R (Miyasaka ct al., 2004а). Установлено достоверное увеличение частоты -81G и -128Т аллелей у пациентов, страдающих паническим расстройством (Miyasaka ct al., 2004а, 2007) и шизофренией (Tachikawa ct al., 2001). Также получены экспериментальные доказательства повышенной частоты встречаемости аллеля -81G гена CCK1R у людей с алкогольной зависимостью (Miyasaka ct al., 2004b). Известно, что две эти замены наследуются преимущественно совместно (Miyasaka ct al., 2004а).

Полученные нами данные также свидетельствуют о повышении частоты встречаемости аллелей -81G и -128Т в выборке пациентов страдающих паническим расстройством по сравнению с контролем, однако, после статистической обработки лишь для одной из замен (-128G/T) корреляция признана достоверной (х2=4,01, р=0,045).

Однонуклеотидная замена 984Т/С расположена на границе первого интрона и второго экзона гена CCK1R (изменяется пятый нуклеотид от начала экзона). Ранее другими авторами показано незначительное увеличение частоты аллеля 984Т гена CCK1R

у больных страдающих ПР по сравнению с контролем, что может указывать на протекторную роль замены Т/С в патогенезе заболевания (¡ее е1 а1., 2003, КосАэес! ех а1., 2010). По нашим данным частота замены 984 Т/С в выборке пациентов с диагнозом ПР сходна с таковой в контрольной выборке (таблица 4), что свидетельствует об отсутствии значимого влияния данной замены на развитие заболевания.

Таким образом, в ходе изучения частоты встречаемости полиморфных вариантов гена ССК1Я, обнаружена одна однонуклеотидная замена достоверно чаще встречавшаяся в выборке пациентов, страдающих паническим расстройством, по сравнению с контрольной выборкой.

Изучение частоты встречаемости полиморфных вариантов гена ССК2К.

В гене рецептора холецистокинина 2-го типа (ССК2Я) были исследованы две однонуклеотидные замены 109С/Т и 15500/А, располагающиеся в кодирующей части гена и приводящие к аминокислотным заменам (Ьси37РЬс и Уа1125Пс, соответственно) в последовательности рецептора (ТасЫка\уа е1 а1., 1999). Частоты полиморфных вариантов гена ССК2Я в выборке пациентов, страдающих паническим расстройством, и контрольной выборке представлены в таблице 5.

Таблица 5. Распределение частот ачлелей и генотипов полиморфных вариантов

гена CCK2R.

Частоты генотипов (Р) Частоты аллелей (P±S(p))

Замена 109СЯ СС СТ ТТ С T

Больные ПР (п=76) 0,908 0,092 0,000 0,954±0,024 0,046±0,024

Контроль (п=170) ¡,000 0,000 0,000 1,000±0,000 0,000±0,000

/=16,12; d.f.=2;p=0,00006 /=15,88; d.f.=l;p=0,00048; OR=35,103; 95% С.I.=[1,992-618,6711

Замена1550G/A GG GA АА G A

Больные ПР (п=76) 0,750 0,224 0,026 0,862±0,040 0,138±0,040

Контроль (п=170) 0,818 0,159 0,023 0,897±0,023 0,103±0,023

/=1,16; d.f.=2; р=0,282 /=1,29; d.f.=l; p=0,256; OR=l,397; 95% C.I.=f0,783-2,4911

Примечания: п - объем выборки, Р - частота аллеля или генотипа в долях, S(p) - стандартная ошибка, / - значение хи-квадрат, d.f. - число степеней свободы, р - значение достоверности, OR (odds ratio) - отношение шансов, 95% C.I. - 95%-ный доверительный интервал (Confidence Interval).

При оценке соответствия распределения генотипов равновесию Харди-Вайнберга в исследуемых выборках было выявлено, что данному равновесию соответствует соотношение частот генотипов по локусу 109С/Т в выборке пациентов с ПР и по локусу J550G/A в выборке пациентов с ПР и контрольной выборке. Наблюдаемое распределение

частот генотипов по локусу 109С/Т в контрольной выборке не соответствует теоретически ожидаемому равновесному распределению Харди-Вайнбсрга. Несоответствие равновесию Харди-Вайнбсрга, по всей видимости, объясняется небольшим объемом исследованной выборки и низкой частотой встречаемости замены 109С/Т в популяции, в результате чего в контрольную выборку не вошли носители 109Т аллеля гена CCK2R.

Нами показано достоверное увеличение частоты встречаемости аллеля 109Т в выборке больных с диагнозом ПР по сравнению с контролем (х2=15,88; р=0,00048), однако несоответствие равновесию Харди-Вайнбсрга в контрольной выборке не позволяет сделать однозначный вывод о роли данной замены в этиологии ПР. Интересно отметить, что в контрольной выборке необследованных жителей Москвы не было найдено ни одного случая замены С/Т в положении 109 гена CCK2R, тогда как частота этой замены в выборке больных составила 4,6% (7 из 76 пациентов с диагнозом ПР оказались гстсрозиготами по исследуемому аллслю). В литературе не представлено работ по исследованию роли однонуклеотидной замены 109С/Т в развитии ПР. Однако ранее было показано, что данная замена приводит к изменению в аминокислотной последовательности рецептора CCK2R (Lcu37Phc). Аминокислотная замена затрагивает одну из экстрацсллюлярных петель белка, и, таким образом, может влиять на способность CCK2R рецептора передавать G-белок-опосрсдованный сигнал в клетку (Tachikawa ct al., 1999), что может иметь значительный физиологический эффект.

Однонуклеотндная замена 1550G/A, также как и предыдущая замена (109С/Т), приводит к изменению аминокислотной последовательности рецептора CCK2R (Valll2511c). Аминокислотная замена приходится на экстрацсллюлярную петлю между вторым и третьим трансмембранными доменами белка. Однако не достаточно хорошо изученная третичная структура рецептора CCK2R, а именно отсутствие данных об устройстве лиганд-связывающего сайта в этой петле, не позволяют оценить возможный вклад данного полиморфного варианта в функционирование рецептора.

По нашим данным частота встречаемости замены 1550G/A в гене CCK2R несколько повышена в выборке пациентов страдающих паническим расстройством по сравнению с контролем (таблица 5), однако после статистической обработки, ассоциация признана недостоверной. По всей видимости, данная однонуклеотндная замена не играет значимой роли в патогенезе ПР.

Таким образом, полученные нами данные не подтверждают наличие весомого вклада изученных полиморфных вариантов гена CCK2R в развитии панического расстройства. Однако факт обнаружения однонуклеотидной замены 109САГ только в

выборке пациентов с ПР, но не в контрольной выборке, представляется весьма интересным и требует дополнительных исследований.

Поиск ассоциации комплексных генотипов генов ССК. CCK1R и CCK2R с часто повторяющимися паническими атаками.

С помощью программного обеспечения APSampler 3.5.8. был проведен комплексный анализ полученых данных, целью которого являлось выявление комбинаций аллелей по семи исследованным локусам (-36С/Т ССК, -325G/A ССК, -81A/G CCK1R, -128G/T CCK1R, 984Т/С CCK1R, 109С/Т CCK2R, 1550G/A ССК2К) ассоциированных с развитием панического расстройства. Для определения достоверности выявленных ассоциаций использовался точный критерий Фишера.

В результате анализа была выявлена одна комбинация аллелей (-36Т ССК, -128Т CCK1R) достоверно чаще встречавшаяся в выборке больных ПР по сравнению с контрольной выборкой (р (Fisher's exact p-value) = 0.0156255, OR=3.67164, C.I. (95%)=[1.25766 - 10.71910]). Интересен тот факт, что достоверная ассоциация с ПР обнаружена нами только по локусу -128Т (хМ.01, р=0,045; р (Fisher's exact p-value) = 0,04227282), тогда как частота встречаемости замены -36С/Т достоверно не отличалась в группе больных Г1Р и контрольной группе (yf=0,\2, р=0,731; р (Fisher's exact p-value) = 0,42365). По-видимому, это может объясняться наличием эписгатического взаимодействия между рассматриваемыми генами (ССК, CCK1R). Данное взаимодействие схематически отображено в виде диаграммы Венна на рисунке 1.

-нет ссктк U -36Г сси

-зег ССК. -12ЯГ CCK1R

Рисунок 1. Диаграмма Венна. Схематическое отображение эписгатического взаимодействия генов ССК и CCK1R. В виде кружков изображены аллели генов ССК a CCK1R, в виде пересечения кружков -комбинация этих аллелей (обозначения на рисунке). Интенсивность окраски кружков и их пересечения пропорциональна значениям Fisher's exact p-value (р=0,42365 для аллеля -36Т ССК, р=0,04227282 для аллеля -128Т CCK1R, р=0,0156255 для комбинации аллелей -36Т ССК и -12ST CCKIR).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о значительно более высоком уровне ассоциации комбинации аллелей -36Т ССК, -128Т CCK1R с развитием панического

расстройства по сравнению с вкладом каждой из этих однонуклеотидных замен по отдельности.

Полиморфизм гена MTHFR и мигрень.

Изучение частоты встречаемости однонуклеотидной замены С677Т в гене MTHFR.

Частота встречаемости однонуклеотидной замены С677Т в гене MTHFR в выборке пациентов с мигренью, проживающих в Москве, определялась методом аллель-специфической ПЦР с использованием коммерческого набора GcnePak® MTHFR PCR test. Принцип метода заключается в том, что при полном совпадении последовательности специфических праймеров с комплементарной матрицей аллсля гена MTHFR амплифицируется соответствующая последовательность, а при несовпадении последнего нуклеотида на 3'-конце специфического праймера с комплементарной матрицей аллсля специфическая реакция не проходит. В той же реакции используется пара неспецифичсских праймеров, которая является комплементарной к обоим аллелям гена MTHFR и служит внутренним контролем реакции. Каждый неспецифический праймер создаст с одним из специфических пару и амплифицирует специфический продукт ПЦР определенного размера. Таким образом, гомозиготе по аллелю С соответствует набор фрагментов 399 и 262 п.н., гетерозиготс - набор фрагментов 399, 262 и 174 п.н., и, наконец, гомозиготе по аллелю Т - набор фрагментов 399 и 174 п.н. Типичная картина элсктрофоретического разделения продуктов аллель-специфической амплификации представлена на рисунке 2.

и жш вшим 1 4 ¡¡¡и Щ/ущШШШ.

здайр mm Й2 11 mm !s§ mm

2621«) И 1Ц

174!iiJ

Рисунок 2. Электрофореграмма разделения продуктов АС-ПЦР в 2%-ом агарозном геле. Для амплификации использовался коммерческий набор GenePak® MTHFR PCR test. Образцы 2 и 3 -гомозиготы СС, образцы 4, 6, 7 - гетерозиготы CT, образцы 1 и 5 - гомозиготы по аллелю Т.

Полученные частоты аллелей и генотипов по локусу С677Т в выборке пациентов с диагнозом мигрень и контрольной выборке представлены в таблице 6. Наблюдаемое распределение частот генотипов в исследованных выборках по локусу С677Т соответствует теоретически ожидаемому равновесному распределению Харди-Вайнбсрга.

Таблица 6. Частота встречаемости однонуклеотидной замены С677Т в гене МТНРЯ в

выборке пациентов с мигрень и контрольной выборке.

Частоты генотипов (Р) Частоты аллелей (P±S(p))

Замена С677Т СС ст ТТ с Т

Больные мигренью (п=83) 0,385 0,398 0,217 0,584±0,054 0,416±0,054

Контроль (п=50) 0,520 0,400 0,080 0,720±0,072 0,360±0,072

х2=4,35; d.f.=2; р=0,037 ^=4,96; d.f.=l; р=0,026; OR= 1,829; 95% C.I .=[1.072-3.122]

Примечания: п - объем выборки, Р - частота аллеля или генотипа в долях, S(p) - стандартная ошибка, х2 - значение хи-квадрат, d.f. - число степеней свободы, р - значение достоверности, OR (odds ratio) - отношение шансов, 95% СЛ. - 95%-ный доверительный интервал (Confidence Interval).

Согласно полученным данным частота встречаемости замены С677Т в выборке пациентов с мигренью достоверно выше частоты замены в выборке здоровых лиц (%2=4,96, р=0,026). Эти результаты хорошо согласуются с данными полученными ранее в других ассоциативных исследованиях (Kara et al., 2003, Lea ct al., 2004, De Tommaso ct al., 2007). Известно, что транзиция цитозина на тимин в позиции 677 гена MTHFR приводит к замене остатка аланина на остаток ватина (Ala222Val) в участке аминокислотной последовательности фермента, который приходится на сайт связывания фолата. В результате этого формируется термолабильная форма белка MTHFR со сниженной ферментативной активностью (у гомозигот ТТ677 активность снижается до 35% от среднего значения), что сопровождается повышением уровня гомоцистеина в крови (Frosst et al., 1995). Развитие гипергомоцистеинемии приводит к сснситизации болевых рецепторов твердой мозговой оболочки (Storcr, Goadsby, 1997) и гипервозбудимости нейронов коры головного мозга (Oterino ct al., 2004). Г'омоцистсин также повреждает эндотелий сосудистой стснки и вызывает выброс оксида азота (NO), приводя к нарушениям тонуса сосудистой стснки и свертываемости крови (Lea et al., 2004). По всей видимости, все эти эффекты могут обеспечивать предрасположенность носителей мутации С677Т в гене MTHFR к мигрени.

Анализ клинико-дсмографических показателей в группах пациентов с различными генотипами по локусу 677MTHFR.

Полученные частоты аллелей и генотипов по локусу 677MTHFR в выборке пациентов с мигренью были сопоставлены с рядом клинико-демографических показателей исследованной выборки (таблица 7). Стоит отмстить, что мигрень с аурой достоверно чаще встречалась в группе пациентов-носителей Т-аллеля (37.2%) по сравнению с пациентами с СС генотипом (0%), р<0.0001 (таблица 16), что подтверждает возможность

рассмотрения аллсля 677Т гена ШНРК в качестве фактора риска развития мигрени с аурой.

Таблица 7. Клинико-демографические показатели в группах пациентов с различными

генотипами МТНР1{.

Показатель СС-гснотип СТ-гснотип ТТ-гснотип Носители Т-аллсля

Общее число обследованных пациентов, N (%) 32 (38.5) 33 (39.8) 18 (21.7) 51 (61.5)

Возраст (годы) 41.9±11.8 42.8±13.7 47.9±12.8 43.4±13.6

Число пациентов с мигренью с аурой / с мигренью без ауры, (%) 0/32 (0/100) 14/19 (42.4/57.6) 5/13 (27.7/72.3) 19/32 (37.2/62.8)

Частота приступов в месяц 3.7±5.6 5.8±6.5 5.6±8.9 5.9±7.1

По нашим данным группы пациентов с мигренью с различными генотипами не различаются по возрасту и полу. Пациенты, страдающие как мигрсныо с аурой, так и мигренью без ауры, с различными генотипами по локусу бПМТНРЙ, статистически значимо не различаются по частоте и продолжительности приступов мигрени.

Анализ на наличие сопутствующих симптомов у пациентов, страдающих мнгренью. с различными генотипами по локусу 677А/ГЯКй.

После определения генотипов по локусу (¡ПМТНРК, был проведен анализ на наличие у пациентов с мигренью таких сопутствующих симптомов, как тошнота, фото- и фонофобия, а также на чувствительность к различным провокаторам мигрснозного приступа.

Показано, что у больных с ТТ-гснотипом имеет место большая представленность трех рассматриваемых сопутствующих симптомов (рисунок 3). После статистической обработки различия оказались достоверны для каждого из трех симптомов (р<0,01). Кроме этого, пациенты с ТТ генотипом достоверно чаще (100% пациентов) по сравнению с больными СС-гснотипа (63,6%), р=0.002, и СТ-гснотипа (82.6%), р=0,04, отмечают чувствительность к провокаторам мигрснозного приступа (перемене погоды, нарушению режима сна, пищевым провокаторам).

Тошнота Фотофобия Фонофобия

ПСС-генотип ЕЗСТ-генотип СПТ-генотип

Рисунок 3. Представленность сопутствующих симптомов (тошнота, фото- и фонофобия) у пациентов с различными генотипами по локусу 677Л/////Я, По оси ординат указано количество пациентов с соответствующим генотипом в процентах.

Таким образом, наличие генотипа ТТ по локусу (Л1 МГНЬ'К коррелирует не только с повышенным риском развития мигрени с аурой, но и целым рядом симптомов, отягчающих течение заболевания, при этом не оказывая влияния на частоту и продолжительность приступов мигрени.

ВЫВОДЫ.

1. Впервые определены частоты встречаемости семи однонуклеотидных замен в генах ССК, ССКШ и ССК2Я в выборке пациентов, страдающих паническим расстройством и случайной выборке жителей Москвы.

2. Обнаружена тенденция к увеличению частоты встречаемости замены -1280/Т в гене ССК1Я (х2=4,01, р=0,045), в выборке пациентов, страдающих паническими расстройством по сравнению с контрольной случайной выборкой жителей Москвы.

3. Выявлена комбинация аллелей (-36Т ССК, -128Т ССКШ) достоверно чаще встречавшаяся в выборке пациентов, страдающих паническим расстройством по сравнению с контрольной выборкой (р = 0.0156255, 010=3.67164, СХ (95%)=[1.25766 -10.71910]).

4. Частота встречаемости замены С677Т в гене МГНРК в выборке пациентов с мигренью достоверно выше частоты замены в выборке здоровых лиц (х2=4,96, р=0,026).

5. Мигрень с аурой достоверно чаще встречалась в группе пациснтов-носитслсй Т-аллеля локуса вПМТНРЯ по сравнению с группой пациентов с СС генотипом (р<0,0001).

6. У больных мигренью с аурой и мигренью без ауры с ТТ-гснотипом по локусу 677МТНРЯ имеет место большая представленность сопутствующих симптомов (тошнота, фотофобия, фонофобия) и отмечена повышенная чувствительность к провокаторам мигрснозного приступа (перемене погоды, нарушению режима сна, пищевым провокаторам).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

Статьи в рецензируемых журналах:

1. Коробейникова J1.A., Климов Е.А. Полиморфизм генов ССК, CCK1R и CCK2R у жителей Москвы //Медицинская генетика. 2010. Т.9. №4, С.40-43.

2. J1.A. Коробейникова, Ю.Э. Азимова, Н.М. Фокина, О.И. Рудько, Е.А. Климов. Частоты аллелей генов ССК, CCK1R и CCK2R у жителей Москвы, страдающих паническими расстройствами // Медицинская генетика. 2011. №3. С. 37-42.

Тезисы конференций:

1. Е.А. Климов, JI.A. Коробейникова, О.М. Рябинина, Ю.Э. Азимова, О.И. Рудько. Полиморфизм гена ССК и тревожные расстройства // Материалы XV международной конференции и дискуссионного научного клуба "Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии (IT + М&Ес'2007)" Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 31 мая - 09 июня 2007. С.32-34.

2. L.A. Korobcinikova, О.М. Ryabinina, Yu.E. Azimova, O.I. Rud'ko, Е.А. Klimov. Polymorphism of 5'-regions of CCK and CCKAR human genes // Abstract of "Conference for young scientists, PhD students and students oil molccular biology and genetics, dedicated to 120th anniversary of N.I. Vavilov". Ukraine, Kiev, 20-22 September 2007. P.22.

3. JI.A. Коробейникова, Ю.Э. Азимова, Е.А. Климов. Полиморфизм 5'-рсгулягорной области гена холсцистокинина человека. Сборник тезисов 12°" Пущинской школы-конференции молодых ученых "Биология - наука XXI века". Пущино, 10-14 ноября 2008. С.34.

4. J1.A. Коробейникова, Ю.Э. Азимова, Е.А. Климов. Полиморфизм генов холсцистокининовой системы мозга человека // Материалы Съезда генетиков и селекционеров, посвященного 200-летию со дня рождения Ч. Дарвина и V Съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров. 21 - 27 июня 2009 года. Москва. Часть II. С.119.

5. Климов Е.А., Азимова Ю.Э., Коробейникова Л.А., Шайхаев Г.О., Рудько О.И., Табесва Г.Р. Анализ аллслыюго состояния гена MTHFR у больных мигренью: результаты пилотного эксперимента // Медицинская генетика. 2010. 5. С.84. Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков. Ростов-на-Дону. 15-18 мая 2010.

6. JI.A. Коробейникова, Е.А. Климов. Частоты аллелей генов ССК, CCK1R и CCK2R у жителей Москвы. // Материалы I международной научно-практической конференции "Беккеровские чтения". Волгоград. 27-29 мая 2010. С.115-117.

7. Климов Е.А., Коробейникова Л.А., Азимова Ю.Э., Рудько О.И. Роль аллельных вариантов генов ССК, CCK1R и CCK2R в развитии панических расстройств у жителей Москвы // Тезисы XXI съезда физиологического общества им. И.П. Павлова. 19-25 Сентября 2010. Калуга. С.272-273.

8. Л.А. Коробейникова, Е.А. Климов, Ю.Э. Азимова, О.И. Рудько. Частоты аллелей генов ССК, CCK1R и CCK2R у условно-здоровых и страдающих паническими расстройствами жителей Москвы // Материалы Международной научной конференции, посвященной 45-лстию основания Института генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси. 25-29 октября 2010 года. Минск. С.135.

9. Коробейникова Л.А., Азимова Ю.Э., Сергеев A.B., Климов Е.А., Табесва Г.Р. Влияние полиморфизма гена MTHFR на развитие и особенности течения мигрени с аурой. Сборник тезисов 15ой Пущинской школы-конференции молодых ученых "Биология - наука XXI века". Пущино. 18-22 апреля 2011. С. 184.

Подписано в печать 04 мая 2011 г. Объем 1,2 п.л. Тираж 80 экз. Заказ № 358 Отпечатано в Центре оперативной полиграфии ООО «Ол Би Принт» Москва, Ленинский пр-т, д. 37

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Коробейникова, Любовь Александровна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Паническое расстройство

1.1.1. Общие сведения о паническом расстройстве

1.1.2. Эпидемиология

1.1.3. Клинические проявления

1.1.4. Этиология заболевания

1.2. Генетика панического расстройства

1.2.1. СОМТ

1.2.2. МАО-А

1.2.3. А2аАК

1.2.4. АСЕ

1.2.5. Серотонинергическая система

1.2.5.1. НТША

1.2.5.2. НТК2А

1.2.5.3. НТТ

1.2.5.4. ТРН1 и ТРН

1.2.6. Дофаминергическая система

1.3. Холецистокинин — гормон паники

1.3.1. Общие сведения о холецистокинине, его история в нейробиологии

1.3.2. Рецепторы холецистокинина

1.3.3. Анксиогенное действие холецистокинина

1.3.4. Ген холецистокинина

1.3.5. Гены ССК1Я и ССК2Я рецепторов холецистокинина

1.4. Мигрень

1.4.1. Общие сведения о мигрени

1.4.2. Эпидемиология

1.4.3. Клинические проявления

1.4.4. Этиология и патогенез мигрени

1.5. Генетика мигрени

1.5.1. Формы мигрени с моногенным наследованием

1.5.2. Гены предрасположенности к мигрени с аурой и без ауры

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Образцы

2.2. Реактивы

2.3. Оборудование

2.4. Выделение ДНК

2.5. Определение концентрации ДНК

2.6. Подбор праймеров и оптимизация условий ПЦР

2.7. Проведение ПЦР

2.8. Проведение рестрикции

2.9. Проведение аллельспецифической ПЦР

2.10. Приготовление 2%-ного агарозного геля

2.11. Детекция продуктов амплификации в 2%-ном агарозном геле

2.12. Компьютерные программы и базы данных

2.12.1. Программы для подбора праймеров

2.12.2. Программы для анализа нуклеотидных последовательностей

2.12.3. Программы для статистической обработки данных

2.12.4. Базы данных

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Полиморфизм генов ССК, ССК1Я и ССК2Я и панические расстройства

3.1.1. Изучение частоты встречаемости однонуклеотидной замены -36С/Т в промоторной области гена ССК

3.1.2. Изучение частоты встречаемости однонуклеотидной замены -З25в/А в промоторной области гена ССК

3.1.3. Анализ наследования изученных однонуклеотидных замен, расположенных в гене ССК

3.1.4. Изучение частоты встречаемости однонуклеотидных замен -81 А/О и -128в/Т в промоторной области гена ССКШ

3.1.5. Анализ наследования изученных однонуклеотидных замен, расположенных в гене ССКШ

3.1.6. Изучение частоты встречаемости однонуклеотидной замены 984Т/С в гене ССКШ

3.1.7. Изучение частоты встречаемости однонуклеотидной замены 109С/Т в гене ССК2Я

3.1.8. Изучение частоты встречаемости однонуклеотидной замены 155(Ю/А в гене ССК2Я

3.2. Полиморфизм гена МТНП1 и мигрень

3.2.1. Изучение частоты встречаемости однонуклеотидной замены С677Т в гене МТНРЯ

3.2.2. Анализ на наличие сопутствующих симптомов у пациентов, страдающих миргенью, с различными генотипами по локусу 677МТНРЯ

4. ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ассоциации полиморфных вариантов генов CCK, CCK1R, CCK2R и MTHFR с социально значимыми неврологическими заболеваниями человека"

Актуальность темы.

Согласно данным Министерства Здравоохранения, эпидемиологическая ситуация в России приобретает все более напряженный характер. Экономическая и социальная нестабильность в обществе влечет за собой неумолимый рост числа заболеваний, получивших название социально значимых. Наряду с такими тяжелыми социально значимыми заболеваниями как туберкулез, гепатит В и С, сахарный диабет, ВИЧ-инфекция, онкологические и сердечнососудистые заболевания, все большее распространение получают неврологические и психические расстройства. Среди заболеваний, относящихся к этой группе, характеризующихся высоким уровнем социальной дезадаптации и оказывающих негативное влияние на нормальную трудовую и социальную деятельность личности, стоит особенно отметить паническое расстройство и мигрень.

Состояние патологической тревожности (Б41 по МЕСБ-10) может возникнуть практически у любого человека, но для этого необходимы физические или эмоциональные перегрузки чрезвычайной силы (стихийные бедствия, катастрофы, террористические акты и другие угрожающие жизни ситуации). Однако, значительная часть людей (от 2 до 5% популяции) страдают тревожными расстройствами и подвержены паническим атакам на протяжении всей жизни (Баранов П.А.).

Паническое расстройство (ПР) является мультифакториальным заболеванием: на его развитие влияют как факторы окружающей среды, так и генетические факторы. Доказано, что панические расстройства имеют серьезную генетическую основу: обнаружены свидетельства прямой передачи заболевания из поколения в поколение (заболеванием страдает 1517% родственников больных 1 степени), а также большой конкордантности у однояйцовых близнецов (80-90%). Величина наследуемости ПР оценивается в 48% (Нейеша е1 а1.,2001). Однако генетическая природа этого заболевания остается крайне мало изученной. Предполагается, что ПР может вызываться взаимодействием различных факторов, включающие как наследственные нейрохимические нарушения, так и стресс, вызываемый окружающей средой (Bradwejn and Koszycki, 2001). Не удивительно, что наибольшее распространение и социальная значимость ПР наблюдается в мегаполисах, что объясняется большим количеством внешних факторов, способствующих развитию заболевания при имеющейся генетической предрасположенности.

Широкая распространенность и неясная этиология ПР породила интерес к холецистокинину (ХЦК) как к фактору тревожности, с тех пор, как в 1984 году, Jens Rehfeld обнаружил, что инъекции пептида, вводимого здоровым добровольцам, вызывают отчетливое чувство тревоги и паники (Rehfeld, Van Solinge, 1992). Центральные рецепторы ХЦК в большой концентрации располагаются в областях ЦНС, участвующих в формировании тревоги. Биологическое действие этого подтипа рецепторов заключается в модуляции ряда классических нейромедиаторов (включая эндогенные опиаты и дофамин) и контроле многих центральных функций. Предполагается, что изменения в активности холецистокининэргической системы (ХЦК-системы), будь это гиперчувствительность рецепторов ХЦК к внутриклеточным ответам, связанным с этими рецепторами, и/или нарушения в обороте ХЦК, могут быть нейробиологической основой панических атак (Bradwejn et al., 1994; Shlik et al., 1997). Одним из возможных механизмов нарушения функции ХЦК-системы могут быть мутации в регуляторных и/или белок-кодирующих областях генов холецистокинина и его рецепторов.

В последнее время в литературе появилось много данных, свидетельствующих о корреляции ряда однонуклеотидных замен в последовательностях генов ХЦК и его рецепторов с развитием и особенностями протекания панических расстройств человека. Однако большинство из них остаются малоизученными, а имеющиеся данные об их влиянии на развитие состояний патологической тревожности противоречивы.

Исследования, включающие все гены холецистокининэргической системы, за рубежом ранее не проводились. Данные по частотам аллелей генов ССК, CCK1R и CCK2R среди жителей России отсутствуют, то есть исследований по данному направлению в нашей стране ранее не проводилось.

Еще одним социально значимым заболеванием, имеющим генетическую основу, является мигрень. В 2000 году мигрень была включена в список заболеваний, представляющих глобальное значение и бремя для человечества (Global Burgen of Disease 2000), что обусловлено как ее широкой распространенностью, так и значимым влиянием на жизнь пациентов с этим заболеванием (Leonardi et al., 2005). В Европе, где популяция составляет 450 миллионов, 600 тысяч человек ежедневно отсутствуют на работе или учебе по причине мигрени. По затратам среди всех существующих заболеваний мигрень занимает 20-е место. Эти затраты включают как экономические потери в связи с невыходом пациентов на работу или значительным снижением их трудоспособности, так и расходы пациентов на лечение (Berg, Stovner, 2005). Таким образом, мигрень в настоящее время рассматривается как хроническое неврологическое заболевание, приводящее не только к выраженной дезадаптации пациентов, но и к значительным экономическим потерям.

В ходе многочисленных исследований было доказано, что к развитию мигрени имеется четкая генетическая предрасположенность. Однако до настоящего времени информация о генах, играющих роль в патогенезе данного заболевания, остается не полной. Одним из наиболее изученных генов, связываемых с мигренью, является ген MTHFR, кодирующий фермент 5,10-метилентетрагидрофолат редуктазу (МТГФР) (Hádemenos et al., 2001). Экспериментальные исследования показали, что мутация С677Т в гене MTHFR достоверно чаще встречается у больных мигренью, чем у здоровых людей (Kara et al., 2003, De Tommaso et al., 2007), причем в ряде работ корреляция обнаружена только для группы пациентов, страдающих мигренью с аурой (Kara et al., 2003, Lea et al., 2004).

Цель исследования.

Задачи исследования:

1. Оценить частоту встречаемости семи однонуклеотидных замен в генах ССК, CCK1R и CCK2R в контрольной выборке условно-здоровых жителей Москвы. Сопоставить полученные результаты с данными о соответствующих частотах в других крупных городах мира.

3. Оценить частоту встречаемости однонуклеотидной замены С677Т в гене MTHFR в выборке пациентов, страдающих мигренью с аурой и мигренью без ауры, проживающих в Москве.

4. Сопоставить генотипы, исследованных пациентов по локусу C677TMTHFR с рядом клинических и электрофизиологических характеристик течения заболевания.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Коробейникова, Любовь Александровна

4. ВЫВОДЫ.

1. Полученные нами данные подтверждают наличие роли полиморфизма генов холецистокининергической системы в развитии панического расстройства. Обнаружено повышение частоты встречаемости однонуклеотидной замены 109С/Т в гене ССК2Я, а также обнаружена тенденция к увеличению частот встречаемости замен -1280/Т в гене ССК1Я и 155(Ю/А в гене ССК2К (статистически не достоверно), в выборке пациентов, страдающих паническими расстройствами по сравнению с контролем.

2. Показано, что частоты встречаемости однонуклеотидных замен -36С/Т и -325С/А в гене ССК, -81 А/в и 984Т/С в гене ССК1Я достоверно не различаются в выборке больных ПР и контрольной выборке жителей Москвы, что может указывать на отсутствие значимого вклада этих полиморфных вариантов в патогенезе ПР.

3. Показано, что мигрень с аурой достоверно чаще встречалась в группе пациентов-носителей Т-аллели локуса вИМТНРЯ по сравнению с пациентами с СС генотипом, что подтверждает возможность рассмотрения аллеля 677Т гена МГНРЯ в качестве фактора риска развития мигрени с аурой.

4. Обнаружено, что у больных мигренью с аурой и мигренью без ауры с ТТ-генотипом по локусу 677МТНЕЯ имеет место большая представленность сопутствующих симптомов (тошнота, фотофобия, фонофобия). Статистически достоверные различия получены только по фотофобии. Кроме этого, пациенты с ТТ генотипом достоверно чаще по сравнению с больными СС-генотипа и СТ-генотипа, отмечают чувствительность к провокаторам мигренозного приступа (перемене погоды, нарушению режима сна, пищевым провокаторам).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Коробейникова, Любовь Александровна, Москва

1. Азимова Ю.Э., Табеева Г.Р., Климов Е.А. Генетика мигрени // Анналы неврологии 2008. 2: 41-47.

2. Александровский Ю.А. Пограничные психические расстройства. Учебное пособие. 3-е издание. М.: Медицина 2000. С. 111.

3. Амелин А.В., Игнатов Ю.Д., Скоромец А.А. Мигрень (патогенез, клиника и лечение). Санкт-Петербургское медицинское издательство. 2001.200с.

4. Баранов П.А. Паническое расстройство (клиника, диагностика, терапия), http://www.psychiatry.ru/practic/handbooky

5. Вейн A.M., Колосова О.А., Яковлев Н.А., Слюсарь Т.А. Мигрень. М., 1995. 180 с.

6. Левин Я.И. Сон и головная боль // Медицина для всех 1998. 4: 27-29.

7. Маниатис Т., Фрич Э., Сембрук Дж. Молекулярное клонирование. 1984. М.: Мир. 480.

8. С.С.Павленко. Диагноз и современное лечение мигрени. http://www.painstudy.ru/matls/migr/diagmigr.htm

9. А.П.Рачин, В.В.Осипова, Я.Б.Юдельсон. Мигрень: от правильной диагностики к адекватной терапии // Справочник поликлинического врача 2007. 1: 51-56.

10. Смулевич А.Б. Пограничные психические нарушения // Руководство по психиатрии / под ред. Тиганова А.С. М.: Медицина 1999. 2: 527-607.

11. Пивоварова A.M., Белоусова Е.Д. Панические атаки // Журнал «Трудный пациент». 2005. 12: 24-32.

12. Abelson JL, Nesse RM and Vinik A. Stimulation of corticotropin release by pentagastrin in normal subjects and patients with panic disorder // Biol Psychiatry 1991. 29: 1220-1223.

13. Abelson JL, Nesse RM, Vinik A. Pentagastrin infusions in patients with panic disorder. II. Neuroendocrinology // Biol Psychiatry 1994. 36: 84-96.

14. Akerman S., Goatsby P.J. Dopamine and migraine: biology and clinical implication // Cephalalgia. 2007.27: 1308-1314.

15. Ashfield R, Patel AJ, Bossone SA. et al. MAZ-dependent termination between closely spaced human complement genes // EMBO J. 1994. 13(1): 5656-67.

16. Barbas N.R., Schuyler E.A. Heredity, genes and headache // Seminars in Neurology 2006. 26: 507-514.

17. Berg J., Stovner L.J. Cost of migraine and other headaches in Europe // Eur J Neurol. 2005 Jun., 1:59-62.

18. Blandizzi C, Song I and Yamada T. Molecular cloning and structural analysis of the rabbit gastrin/CCKB receptor gene // Biochem Biophys Res Commun 1994. 202: 947-953.

19. Blaya C, Salum GA, Lima MS, Leistner-Segal S, Manfro GG. Lack of association between the Serotonin Transporter Promoter Polymorphism (5-HTTLPR) and Panic Disorder: a systematic review and meta-analysis // Behav Brain Funct. 2007 Aug. 18; 3: 41.

20. Bradwejn J and de Montigny C. Benzodiazepines antagonize cholecystokinin-induced activation of rat hippocampal neurons // Nature (Lond) 1984.312: 363-364.

21. Bradwejn J, Koszycki D and Meterissian G. Cholecystokinin-tetrapeptide induces panic attacks in patients with panic disorder // Can J Psychiatry 1990. 35: 83-85.

22. Bradwejn J, Koszycki D and Bourin M. Dose ranging study of the effects of cholecystokinin in healthy volunteers. // J Psychiatry Neurosci 1991a. 16: 9195.

23. Bradwejn J, Koszycki D and Shriqui C. Enhanced sensitivity to cholecystokinin tetrapeptide in panic disorder // Arch Gen Psychiatry 1991b. 48: 603-610.

24. Bradwejn J, Koszycki D, Payeur R, Bourin M and Borthwick F. Replication of action of cholecystokinin tetrapeptide in panic disorder: Clinical and behavioral findings II Am J Psychiatry 1992. 149: 962-964.

25. Brambilla F, Bellodi L, Perna G, Garberi A, Panerai A, Sacerdote P. Lymphocyte cholecystokinin concentrations in panic disorder II Am J Psychiatry 1993. 150(7): 1111-3.

26. Brawman-Mintzer O, Lydiard RB, Bradwejn J, Villarreal G, Knapp R, Emmanuel N, Ware MR, He Q and Ballenger JC. Effects of the cholecystokinin agonist pentagastrin in patients with generalized anxiety disorder // Am J Psychiatry 1997. 154: 700-702.

27. Cabib S, Puglisi-Allegra S. Opposite responses of mesolimbic dopamine system to controllable and uncontrollable aversive experiences // J Neurosci. 1994 May; 14(5 Pt 2):3333-40.

28. Choi W.S., Lee B.H., Yang J.C., Kim Y.K. Association Study between 5-HT1A Receptor Gene C(-1019)G Polymorphism and Panic Disorder in a Korean Population // Psychiatry Investig. 2010 Jun;7(2): 141-6.

29. Clerc P, Saillan-Barreau C, Desbois C, Pradayrol L, Fourmy D, Dufresne M. Transgenic mice expressing cholecystokinin 2 receptors in the pancreas // Pharmacol Toxicol 2002. 91(6): 321-6.

30. Corral J., Iniesta J.A., Gonzales-Conejero R., Lozano M.L., Rivera J., Vicente V. Migraine and prothrombotic risk factors // Cephalalgia 1998. 18: 257-260.

31. Crawley J.N. and Corwin R.L. Biological actions of cholecystokinin // Peptides 1994. 15: 731-755.

32. Daniels CY. Panic disorder. 2010. http://emedicine.medscape.com/article/287913-overview

33. Deakin JFW, Graeff F. 5-HT and mechanisms of defence // J Psychopharmacol 1991. 5: 305-315.

34. De Leeuw A.S., den Boer J.A., Slaap B.R. and Westenberg H.G. Pentagastrin has panic-inducing properties in obsessive compulsive disorder // Psychopharmacology 1996. 126: 339-344.

35. De Montigny C. Cholecystokinin tetrapeptide induces panic-like attacks in healthy volunteers // Arch Gen Psychiatry 1989. 46: 511-517.

36. De Vries B., Haan J., Frants R.R., Van den Maagdenberg A.M., Ferrari M.D. Genetic biomarkers for migraine // Headache 2006. 46: 1059-1068.

37. Dichgans M., Freilinger T., Eckstein G. Mutation in the neuronal voltage-gated sodium channel SCN1A in familial hemiplegic migraine // Lancet. 2005. 336: 371-377.

38. Dockray G.J., Barrington E.J. Gastrointestinal hormones II J. Endocrinol. 1976. 69: 299-325.

39. Dunn AJ. Stress-related changes in cerebral catecholamine and indoleamine metabolism: lack of effect of adrenalectomy and corticosterone // J Neurochem. 1988 Aug;51(2):406-12.

40. Erdal N., Herken H., Yilmaz M., Erdal E., Bayazit Y.A. The A218C polymorphism of tryptophan hydroxylase gene and migraine // J Clin Neurosci. 2007. 14:249-251.

41. Fehr C., Schleicher A., Szegedi A., Anghelescu I., Klawe C., Hiemke C., Dahmen N. Serotonergic polymorphisms in patients suffering from alcoholism, anxiety disorders and narcolepsy // Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 2001. 25: 965-982.

42. Flint A.J., Rifat S.L. The treatment of psychotic depression in later life: a comparison of pharmacotherapy and ECT // Int J Geriatr Psychiatry 1998. 13(1): 23-28.

43. Freitag CM, Domschke K, Rothe C, Lee YJ, Hohoff C, Gutknecht L, Sand P, Fimmers R, Lesch KP, Deckert J. Interaction of serotonergic and noradrenergic gene variants in panic disorder // Psychiatr Genet. 2006 Apr;16(2):59-65.

44. Fujii C., Harada S., Ohkoshi N., Hayashi A., Yoshizawa K., Ishizuka C., Nakamura T. Association between polymorphism of the cholecystokinin gene and idiopathic Parkinson's disease // Clin. Genet. 1999. 56: 394-399.

45. Gelernter J, Bonvicini K, Page G, Woods SW, Goddard AW, Kruger S, Pauls DL, Goodson S. Linkage genome scan for loci predisposing to panic disorder or agoraphobia // Am J Med Genet. 2001. 105(6):548-57.

46. Goldman J.G., Goetz C.G., BerryrKravis E., Leurgans S., Zhou L. Genetic polymorphisms in Parkinson disease subjects with and without hallucinations: an analysis of the cholecystokinin system II Arch. Neurol. 2004. 61(8): 1280-4.

47. Grahame-Smith DG. Tryptophan hydroxylation in brain // Biochem BiophysRes Commun. 1964 Aug 11;16(6):586-92.

48. Gross C, Zhuang X, Stark K, Ramboz S, Oosting R, Kirby L, Santarelli L, Beck S, Hen R. Serotonin-lA-receptor acts during development to establish normal anxietylike behavior in the adult //Nature. 2002. 416:369-400.

49. James C. Ballenger, M.D. Anxiety and depression: optimizing treatment. Primary care companion // J Clin Psychiatry. 2000. V. 2. P. 71—79.

50. Hamel E. Serotonin and migraine: biology and clinical implication // Cephalalgia 2007. 27: 1295-1300.

51. Hamilton S.P., Fyer A.J., Durner M., Heiman G.A., Baisre de Leon A., Hodge S.E., Knowles J. A., Weissman M.M. Further genetic evidence for a panic disorder syndrome mapping to chromosome 13q // Proc Natl Acad Sci USA. 2003. 100(5):2550-5.

52. Hansen T.O., Rehfeld J.F., Nielsen F.C. Function of the C36 to T polymorphism in the human cholecystokinin gene promoter // Molecular Psychiatry 2000. 5: 443-447.

53. Hansen T.O. Cholecystokinin gene transcription: promoter elements, transcription factors and signalling pathways // Peptides 2001. 22: 1201-1211.

54. Harvey M., Shink E., Tremblay M., Gagne B., Raymond C., Labbe M., Walther D.J., Bader M., Barden N. Support for the involvement of TPH2 gene in affective disorders // Mol. Psychiatry. 2004. 9: 980-981.

55. Heils A., Teufel A., Petri S., Stober G., Riederer P., Bengel D., Lesch K.P. Allelic variation of human serotonin transporter gene expression // J Neurochem. 1996 Jun;66(6): 2621-4.

56. Hettema J.M., Prescott C.A., Kendler K.S. A population-based twin study of generalized anxiety disorder in men and women // J Nerv Ment Dis. 2001 Jul; 189(7): 413-20.

57. Hosing V.G., Schimacher A., Kuhlenbaumer G., Freitag C., Sand P., Schlesiger C., Jacob C., Fritze J., Franke P., Rietchel M., Garritsen H., Nothen

58. M.M., Fimmers R., Stogbauer F., Deckert J. Cholecystokinin and cholecystokinin B receptor gene polymorphisms in panic disorder // J Neural Trasm Suppl. 2004. 68: 147-56.

59. Hovatta I., Kallela M., Farkkila M., Peltonen L. Familial migraine: exclusion of the susceptibility gene from the reported locus of familial hémiplégie migraine of 19p // Genomics 1994. 23: 707-709.

60. Huang Y.Y., Battistuzzi C., Oquendo M.A., Harkavy-Friedman J., Greenhill L., Zalsman G., Brodsky B., Arango V., Brent D.A., Mann J.J. Human 5-HT1A receptor C(-1019)G polymorphism and psychopathology // Int J Neuropsychopharmacol 2004. 7: 441-451.

61. Huston J.P., Schwarting R.W., Thiel C.M., Muller C.P. Relationship between anxiety and serotonin in the ventral striatu // Neuroreport 1998. 9: 1025-1029.

62. Innis R.B. and Snyder S.H. Cholecystokinin receptor binding in brain and pancreas: Regulation of pancreatic binding by cyclic and acyclic guanine nucleotides // Eur J Pharmacol 1980a. 65: 123-124.

63. Innis R.B. and Snyder S.H. Distinct cholecystokinin receptors in brain and pancreas // Proc Natl Acad Sci USA 1980b. 77: 6917-6921.

64. Ise K., Akiyoshi J., Horinouchi Y., Tsutshimi T., Isogava K., Nagayva H. Association between the CCK-A receptor gene and panic disorder // Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2003. 118(1): 29-31.

65. Ishiguro H., Saito T., Shibuya H., Toru M., Arinami T. No association between C-45T polymorphism in the Spl binding site of the promoter region of the cholecystokinin gene and alcoholism // Psyhiatry Res. 1999. 85(2): 209-13.

66. Ivy A.C. and Oldberg E. A hormone mechanism for gallbladder contraction and evacuation II Am J Physiol 1928. 86: 599-613.

67. Iwahashi K., Aoki J. A review of smoking behavior and smokers evidence (chemical modification, inducing nicotine metabolism, and individual variations by genotype: dopaminergic function and personality traits) // Drug Chem Toxicol. 2009. 32(4):301-6.

68. Kadonaga J.T., Briggs M.R., Bell S.P., Tjian R. Purification and biochemical characterization of the promoter-specific transcription factor, Spl // Science 1986. 234(4772): 47-52.

69. Kara I., Sazci A., Ergul E., Kaya G., Kilic G. Association of the C677 and A1298C polymorphisms in the 5, 10 methylenetetrahydrofolate reductase gene in patients with migraine risk // Brain Res Mol Brain Res. 2003. Ill: 84-90.

70. Katzman M., Bradwejn J., Koszycki D., Vaccarino F. and Richter M. The effect of CCK-4 in social phobia and OCD // American Psychiatry Association's 150th Annual Meeting. 1997. Washington, DC: American Psychiatry Association 105.

71. Kennedy J.L., Bradwejn J., Koszycki D., King N., Crowe R., Vincent J. Investigation of cholecystokinin system genes in panic disorder // Mol Psychiatry 1999.4:284-5.

72. Kent JM, Coplan JD, Gorman JM. Clinical utility of the selective serotonin reuptake inhibitors in the spectrum of anxiety. Biol Psychiatry 1998. 44: 812824.

73. Kirchmann M., Thompsen L.L., Olsen J. The CACNA1A and ATP1A2 genes are not involved in dominantly inherited migraine with aura // Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2006. - v. 141. - p.250-256.

74. Koefoed P, Woldbye DP, Hansen TO, Hansen ES, Knudsen GM, Bolwig TG, Rehfeld JF. Gene variations in the cholecystokinin system in patients with panic disorder // Psychiatr Genet. 2010 Apr; 20(2):59-64.

75. Kopin A.S., Lee Y.M., McBride E.W., Miller L.J., Lu M., Lin H.Y., Kolakowski L.F. and Beinborn M. Expression, cloning and characterization of the canine parietal cell gastrin receptor // Proc Natl Acad Sci USA 1992. 89: 3605-3609.

76. Kopin A.S., McBride E.W., Schaffer K., and Beinborn M. CCK receptor polymorphisms: an illustration of emerging themes in pharmacogenomics // Trends Pharmacol Sci 2000. 21: 346-353.

77. Koszycki D., Zacharko R.M., Le Melledo J.M., Bradwejn J. Behavioral, cardiovascular, and neuroendocrine profiles following CCK-4 challenge in healthy volunteers: a comparison of panickers and nonpanickers // Depress Anxiety 1998. 8: 1-7.

78. Kotani K., Shimomura T., Shimomura F., Ikawa S., Nanba E. A polymorphism in the serotonin transporter gene regulatory region and frequency of migraine attack // Headache 2002. 42: 893-895.

79. Kowa H., Yasui K., Takeshima T., Urakami K., Sakai F., Nakashima K. The homozygous C677 mutation in methylenetetrahydrofolate reductase gene -is a genetic risk factor for migraine II Am J Med Genet. 2000. 96: 762-764.

80. Kyrios M., Purcell R., Maruff P., Pantelis C. Neuropsychological function in young patients with unipolar major depression // Psychol Med. 1997.27(6): 1277-85.

81. Kushner M.G., Beitman B.D. Panic attacks without fear: an overview II Behav Res Ther. 1990. 28(6): 469-79.

82. Lacourse K.A., Lay J.M., Swanberg L.J., Jenkins C. and Samuelson L.C. Molecular structure of the mouse CCK-A receptor gene // Biochem Biophys Res Commun 1997. 236: 630-635.

83. Lea R.A., Ovcaric M., Sundholm J., MacMillan J., Griffiths L.R. The methylenetetrahydrofolate reductase gene variant C677T influences susceptibility to migraine with aura // BMC Medicine 2004. 2: 1741-1750.

84. Leonardi M., Steiner T.J., Scher A.T., Lipton R.B. The global burden of migraine: measuring disability in headache disorders with WHO's

85. Classification of Functioning, Disability and Health (ICF) // J Headache Pain 2005. Dec., 6(6): 429-40.

86. Lesch K.P., Wiesmann M., Hoh A., Muller T., Disselkamp-Tietze J., Osterheider M., Schulte H.M. 5-HT1A receptor-effector system responsivity in panic disorder. Psychopharmacology (Berlin) 1992.106:111-117.

87. Lesch K.P., Wolozin B.L., Estler H.C., Murphy D.L., Riederer P. Isolation of a cDNA encoding the human brain serotonin transporter // J Neural Transm Gen Sect. 1993. 91(l):67-72.

88. Lesch K.P., Balling U., Gross J., Strauss K., Wolozin B.L., Murphy D.L., Riederer P. Organization of the human serotonin transporter gene // J Neural Transm Gen Sect 1994, 95:157-162.

89. Lovenberg W., Jequier E., Sjoerdsma A. Tryptophan hydroxylation: measurement in pineal gland, brainstem, and carcinoid tumor // Science. 1967 Jan 13;155(759):217-9.

90. Lydiard R.B., Ballenger J.C., Laraia M.T., Fossey M.D., Beinfeld M.C. CSF cholecystokinin concentrations in patients with panic disorder and in normal comparison subjects II Am J Psychiatry 1992. 149(5): 691-3.

91. Maron E., Kuikka J.T., Shlik J., Vasar V., Vanninen E., Tiihonen J. Reduced brain serotonin transporter binding in patients with panic disorder // Psychiatry Res 2004a. 132: 173-181.

92. Maron E., Shlik J. Serotonin function in panic disorder: important, but why? // Neuropsychopharmacology 2006 Jan; 31(1): 1-11.

93. Maron E., Torn I., Must A., Tasa G., Toover E., Vasar V., Lang A., Shlik J. Association study of tryptophan hydroxylase 2 gene polymorphisms in panic disorder // Neurosci Lett. 2007 Jan 16; 411(3): 180-4.

94. Marziniak M., Mossner R., Schmitt A., Lesch K.P., Sommer C. A functional serotonin transporter gene polymorphism is associated with migraine with aura // Neurology 2005. 64: 157-159.

95. McCann U.D., Slate S.O., Geraci M. and Uhde T.W. Peptides and anxiety: A dose-response evaluation of pentagastrin in healthy volunteers // Anxiety 1994-1995. 1: 258-267.

96. Mercer J.G. and Lawrence C.B. Selectivity of cholecystokinin (CCK) receptor antagonists, MK-329 and L-365,260, for axonally-transported CCK binding sites on the rat vagus nerve // Neurosci Lett 1992. 137: 229-231.

97. Minato T., Tochigi M., Kato N., Sasaki T. Association study between the cholecystokinin A receptor gene and schizophrenia in the Japanese population // Psychiatr Genet. 2007. 17(2): 117-9.

98. Miyasaka K., Yoshida Y., Matsushita S., Higuchi S., Shirakawa O., Shimokata H., Funakoshi A. Association of cholecystokinin-A receptor gene polymorphisms and panic disorder in Japanise // Am. J. Med. Genetics 2004a. 127B: 78-80.

99. Miyasaka K., Takigushi S., Funakoshi A. Cholecystokinin 1(A) receptor polymorphisms // Current Topics in Medical Chemystry. 2007. 7: 12051210.

100. Moran T.H., Robinson P.H., Goldrich M.S. and McHugh P.R. Two brain cholecystokinin receptors: Implications for behavioral actions // Brain Res 1986. 362: 175-179.

101. Moskowitz M.A., Buzzi M.G., Sakas D.E., Linnik M.D. Pain mechanisms underlying vascular headaches // Progress Report 1989. Rev Neurol (Paris). 1989. 145(3): 181-93.

102. Muller J.E., Straus E. h Yalow R.S. Cholecystokinin and its carboxyl-terminal octapeptide in the pig brain // Proc. natn. Acad. Sei. U.S.A. 1977. 74: 3035.

103. Murphy T.K., Bengtson M.A., Tan J.Y., Carbonell E., Levin G.M. Selective serotonin reuptake inhibitors in the treatment of paediatric anxiety disorders: a review // Int Clin Psychopharmacol 2000 Aug; 15 Suppl 2:S47-63.

104. Mutt V., Jorpes J.E. Structure of porcine cholecystokinin-pancreozymin 1. Cleavage with thrombin and with trypsin // Eur op. J. Biochem. 1968. 6: 156-162.

105. Neumeister A., Bain E., Nugent A.C., Carson R.E., Bonne O., Luckenbaugh D.A., Eckelman W., Herscovitch P., Charney D.S., Drevets W.C. Reduced serotonin type 1A receptor binding in panic disorder // J Neurosci. 2004. 24:589-591.

106. Noble F., Wang S., Crawley J.N., Bradwejn J., Seroogy K.B., Hamon M., Roques B.P. International Union of Pharmacology. XXL. Structure, distribution, and functions of cholecystokinin receptors // Pharmacol. Rev. 1999. 51:745-781.

107. Noble-Topham S.E., Dyment D.A., Cader M.Z., Ganapathy R., Brown J.D., Rice G.P., Ebers G.C. Migraine with aura is not linked to the FHM gene CACNA1A or chromosomal region, 19pl3 II Neurology 2002. 59: 1099-1101.

108. Nutt D.J. Antidepressants in panic disorder: clinical and preclinical mechanisms IIJ Clin Psychiatry 1998. 59: 24-28.

109. Nutt D.J. Care of depressed patients with anxiety symptoms // J Clin Psychiatry. 1999. V. 60(17). P. 23-27.

110. Ohara K., Nagai M., Suzuki Y., Ochiai M., Ohara K. No association between anxiety disorders and catechol-O-methyltransferase polymorphism // Psychiatry Res. 1998. Aug 17; 80(2): 145-8.

111. Okubo T., Harada S., Higuchi S., Matsushita S. Genetic association between alcogol withdrawal symptoms and polymorphism of CCK gene promoter // Exp Res. 1999. 23(4): lls-12s.

112. Oterino A., Valle N., Bravo Y., Muñoz P., Sánchez-Velasco P., Ruiz-Alegría C., Castillo J., Leyva-Cobián F., Vadillo A., Pascual J. MTHFR T677 homozygosis influences the presence of aura in migreneurs // Cephalalgia 2004. 24: 491-494.

113. Perna G., Favaron E., Di Bella D., Bussi R., Bellodi L. Antipanic efficacy of paroxetine and polymorphism within the promoter of the serotonin transporter gene // Neuropsychopharmacology 2005. Epub ahead of print.

114. Pich E.M., Samanin R. Disinhibitory effects of buspirone and low doses of sulpiride and haloperidol in two experimental anxiety models in rats: possible role of dopamine // Psychopharmacology (Berl). 1986; 89(1): 125-30.

115. Polesskaya O.O., Sokolov B.P. Differential expression of the "C" and "T" alleles of the 5-HT2A receptor gene in the temporal cortex of normal individuals and schizophrenics // J. Neurosci. Res. 2002. 67: 812-822.

116. Ranade S.S., Mansour H., Wood J., Chowdari K.V., Brar L.K., Kupfer D.J., Nimgaonkar V.L. Linkage and association between serotonin 2A receptor gene polymorphisms and bipolar I disorder // Am. J. Med. Genet. B Neuropsychiatr. Genet. 2003. 121B: 28-34.

117. Rehfeld J.F., Van Solinge W.W. Co-transcription of the gastrin and cholecystokinin genes with selective translation of gastrin mRNA in a human gastric carcinoma cell line // FEBS Letters 1992. 309: 47-50.

118. Rehfeld J.F. The New Biology of Gastrointestinal Hormones // Physiol. Rev. 1998. 78: 1087-1108.

119. Russell M.B., Olesen J. Increased familial risk and evidence of genetic factor in migraine // BMJ 1995. 311: 541-544.

120. Sabol S.Z., Hu S., Hamer D. A functional polymorphism in the monoamine oxidase A gene promoter // Hum Genet. 1998 Sep; 103(3):273-9.

121. Saito A.H., Sankaran H., Goldfine I.D. and Williams J.A. Cholecystokinin receptors in the brain: Characterization and distribution // Science (Wash DC) 1980. 208: 1155-1156;

122. Schubert M.L. and Shamburek R.D. Control of acid secretion // Gasterenterol Clin North Am 1990. 19: 1-25.

123. Sheehan K., Lowe N., Kirley A., Mullins C., Fitzgerald M., Gill M., Hawi Z. Tryptophan hydroxylase 2 (TPH2) gene variants associated with ADHD // Mol. Psychiatry. 2005. 10: 944-949.

124. Shimokata H., Ando F., Nino N., Miyasaka K., Funakoshi A. Cholecystokinin A receptor gene promoter polymorphism and intelligence // Ann. Epidemiol. 2005. 15: 196-201.

125. Shindo S., Yoshioka N. Polymorphisms of the cholecystokinin gene promoter region in suicide victims in Japan // Forensic Sci Int. 2005. 150(1): 8590.

126. Shlik J., Vasar E. and Bradwejn J. Cholecystokinin and psychiatric disorders: Role in aetiology and potential of receptor antagonists in therapy // CNS Drugs 1997. 8: 134-152.

127. Simmons R.D., Blosser J.C. and Rosamond J.R. A novel CCK-8 agonist with potent intranasal anorectic activity in the rat // Pharmacol Biochem Behav 1994. 47: 701-708.

128. Slaap B.R., van Vliet I.M., den Boer J.A., Westenberg H.G.M. MHPG and heart rate as correlates of non-response to drug therapy in panic disorder patients IIPsychopharmacology 1996. 127: 353-358.

129. Smith G.P. and Gibbs J. The development and proof of the CCK hypothesis of satiety, in Multiple Cholecystokinin Receptors in the CNS // Oxford University Press 1992. Oxford, 166-182.

130. Song I., Brown D.R., Wiltshire R.N., Gantz I., Trent J.M. and Yamada T. The human gastrin/cholecystokinin type B receptor gene: Alternative splice donor site in exon 4 generates two variant mRNAs // Proc Natl Acad Sci USA 1993. 90: 9085-9089.

131. Steiner H., Fuchs S., Accili D. D3 dopamine receptor-deficient mouse: evidence for reduced anxiety // Physiol Behav. 1997. Dec 31; 63(1): 13 7-41.

132. Stewart W.F., Bigal M.E., Kolodner K., Dowson A., Liberman J.N., Lipton R.B. Familial risk of migraine: variation by proband age at onset and headache severity // Neurology 2006. 66: 344-348.

133. Storer R.J., Goadsby P.J. Microiontophoretic application of serotonin agonists inhibits trigeminal cell firing in the cat II Brain 1997. 120: 2171-2177.

134. Tachikawa H., Harada S., Kawanishi Y., Okubo T., Shiraishi H. Novel polymorphism in the promoter and coding regions of the human cholecystokinin B receptor gene: an association analysis with schizophrenia // Am J Med Genet. 1999. 88(6): 700-4.

135. Tachikawa H., Harada S., Kawanishi Y., Okubo T., Shiraishi H. Novel polymorphism of the cholecystokinin A receptor gene: an association analysis with schizophrenia// Am J Med Genet. 2000. 96: 141-145.

136. Tachikawa H., Harada S., Kawanishi Y., Okubo T., Suzuki T. Linked polymorphisms (-333G>T and -286A>G) in the promoter region of the CCK-A receptor gene may be associated with schizophrenia // Psychiatry Res. 2001. 103(2-3): 147-55.

137. Takahashi Y., Fukushige S., Murotsu T., Matsubara K. Structure of human cholecystokinin gene and its chromosomal location // Gene. 1986.50(1-3): 353-60.

138. Takata Y., Takiguchi S., Funakoshi A., Kono S. and Aono A. Gene structure of rat cholecystokinin type-A receptor // Biochem Biophys Res Commun 1995. 213: 958-966.

139. Takimoto T., Terayama H., Waga C., Okayama T., Ikeda K., Fukunishi I., Iwahashi K. Cholecystokinin (CCK) and the CCKA receptor gene polymorphism, and smoking behavior // Psychiatry Res. 2005. 133(2-3): 123-8.

140. Tyrer P., Shawcross C. Monoamine oxidase inhibitors in anxiety disorders IIJPsychiatr Res. 1988. 22: 87-98.

141. Vanakoski J., Virkkunen M., Naukkarinen H., Goldman D. No association of CCK and CCK(B) receptor polymorphisms with alcohol dependence II Psychiatry Res. 2001. 102(1): 1-7.

142. Vanderhaeghen J.J., Signeau J.C. and Gepts W. New peptide in vertebrate CNS reacting with antigastrin antibodies // Nature (Lond) 1975. 257: 601-605.

143. Van de Ven R.C.G., Kaja S., Plomp J.J., Frants R.R., van den Maagdenberg A.M., Ferrari M.D. Genetic models of migraine // Arch Neurol. 2007. 64: 643-646.

144. Van Megen H.G., Westenberg H.G., den Boer J.A., Haigh J.R. and Traub M. Pentagastrin induced panic attacks: Enhanced sensitivity in panic disorder patients // Psychopharmacology 1994. 114: 449-455.

145. Van Megen H.G., Westenberg M.G., den Boer J.A., Slaap B. and Scheepmakers A. Effect of the selective serotonin reuptake inhibitor fluvoxamine on CCK-4-induced panic attacks // Psychopharmacology 1997. 129: 357-364.

146. Vigna S.R., Thorndyke M.C. and Williams J.A. Evidence for a common evolutionary origin of brain and pancreas cholecystokinin receptors // Proc Natl Acad Sci USA 1986. 83: 4355-4359.

147. Walther D.J., Bader M. A unique central tryptophan hydroxylase isoform // Biochem Pharmacol. 2003. Nov 1; 66(9): 1673-80.

148. Walther D.J., Peter J.U., Bashammakh S., Hortnagl H., Voits M., Fink H., Bader M. Synthesis of serotonin by a second tryptophan hydroxylase isoform // Science. 2003. 299, 76.

149. Wang Z., Valdes J., Noyes R., Zoega T. and Crowe R.R. Possible association of a cholecystokinin promoter polymorphism (CCK-36CT) with panic disorder // Am J Med Genet 1998. 81: 228-234.

150. Wang Z., Wassink T., Andreansen N.C., Crowe R.R. Possible Association of Cholecystokinin Promoter Variant to Schizophrenia // Am J Med Genet. 2001. 114: 479-482.

151. Wei J., Hemmings G.P. The CCK-A receptor gene possibly associated with auditory gallucinations in schizophrenia // Eur. Psychiatry 1999. 14: 67-70.

152. Wessman M., Terwindt G.M., Kaunisto M., Palotie A., Ophoff R.A. Migraine: a complex genetic disorder // Lancet Neurol. 2007. 6: 521-532.

153. Wettstein J.G., Bueno L. and Junien J.L. CCK antagonists: Pharmacology and therapeutic interes // Pharmacol Ther 1994. 62: 267-282.

154. Wolkowitz O.M., Gertz B., Weingartner H., Beccaria L., Thompson K. and Liddle R.A. Hunger in humans induced by MK-329, a specific peripheral-type cholecystokinin receptor antagonist // Biol Psychiatry 1990. 28: 169-173.

155. Woo J.M., Yoon K.S., Yu B.H. Catechol O-methyltransferase genetic polymorphism in panic disorder II Am J Psychiatry. 2002 Oct; 159(10): 1785-7.

156. Zill P., Buttner A., Eisenmenger W., M'oller H.J., Bondy B., Ackenheil M. Single nucleotide polymorphism and haplotype analysis of a novel tryptophan hydroxylase isoform (TPH2) gene in suicide victims // Biol. Psychiatry 2004b. 56: 581-586. ,

157. Zhang X., Gainetdinov R.R., Beaulieu J.M., Sotnikova T.D., Burch L.H., Williams R.B., Schwartz D.A., Krishnan K.R., Caron M.G. Loss-offunction mutation in tryptophan hydroxylase-2 identified in unipolar major depression //Neuron. 2005.45: 11—16.

Информация о работе

Коробейникова, Любовь Александровна
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.02.07

Диссертация

Ассоциации полиморфных вариантов генов CCK, CCK1R, CCK2R и MTHFR с социально значимыми неврологическими заболеваниями человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Ассоциации полиморфных вариантов генов CCK, CCK1R, CCK2R и MTHFR с социально значимыми неврологическими заболеваниями человека - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы