Анализ генов предрасположенности к аллергическому риниту в Республике Башкортостан

Хузина, Альфия Хаматьяновна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ генов предрасположенности к аллергическому риниту в Республике Башкортостан
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Анализ генов предрасположенности к аллергическому риниту в Республике Башкортостан"

На плавах ткописи

003455ЭЭ0

ХУЗИНА АЛЬФИЯ ХАМАТЪЯНОВНА

АНАЛИЗ ГЕНОВ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К АЛЛЕРГИЧЕСКОМУ РИНИТУ В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

о*

г#

Уфа-2008

003455990

Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Хуснутдинова Эльза Камилевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Спицын Виктор Алексеевич ГУ Медико-генетический научный центр РАМН

доктор медицинских наук, профессор Викторова Татьяна Викторовна ГОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет

Ведущая организация:

Институт общей генетики имени Н.И. Вавилова РАН

Защита диссертации состоится « 24 » декабря 2008 г. в «» часов на заседании Объединенного диссертационного совета ДМ 002.133.01 при Институте биохимии и генетики УНЦ РАН по адресу: 450054, Уфа, просп. Октября, 71.

С диссертацией и авторефератом 'можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Уфа, просп. Октября, 71 и на сайте Института биохимии и генетики: http://www■anrb■ru./molgen/dissov.html

Автореферат разослан « о/Л» ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

С.М. Бикбулатова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Аллергический ринит (АР) - это заболевание, характеризующееся IgE-опосредованным воспалением, развивающимся в результате попадания аллергенов на слизистую оболочку носа, и наличием следующих симптомов: заложенность носа, ринорея, чихание, зуд в полости носа, снижение обоняния [Van Cauwenberge P.B.etal., 2001].

Распространенность аллергического ринита за прошедшее столетие выросла в десятки раз. В мире этим заболеванием страдают 10-30% населения всех возрастных групп, а в России, по данным Института иммунологии РАМН, распространенность АР в различных регионах среди взрослого населения колеблется от 12,7 до 24%, среди детского населения - от 15 до 28,7% [Ильина Н.И., 2000; Белозеров Е.С. с соавт., 2005; Salib RJ. et al-, 2003]. Симптомы, развивающиеся при АР, не являются угрожающими для жизни, однако связаны с различными ограничениями в физических, психологических и социальных аспектах жизни, являются причиной существенного снижения качества жизни, нарушений сна и в тяжелых случаях создают трудности в обучении и профессиональной карьере больного [Лопатин А.С., 2003]. Важность данной проблемы обусловлена еще и тем, что АР тесно связан с такими весьма распространенными заболеваниями, как острый и хронический риносинусит, аллергический конъюнктивит, а также является одним из факторов риска развития бронхиальной астмы (БА). Известно, что 32-64% больных АР страдают БА, в то же время 75% больных БА имеют АР [Лусс Л.В., 2003; Белозеров Е.С. с соавт., 2005; Pawankar R., 2006].

важность изучения факторов предрасположенности к аллергии, реализующихся под воздействием окружающей среды на организм - генов, кодирующих ферменты биотрансформации ксенобиотиков [Вавилин В.А. с соавт., 2002; Carroll W., 2005]. Однако, результаты многочисленных исследований противоречивы, молекулярно-генетические основы формирования заболевания пока изучены недостаточно. Все это превращает АР в серьезную медико-социальную проблему и диктует необходимость исследования причин и механизмов развития данного заболевания для разработки адекватных лечебно-профилактических мероприятий, учитывающих этническую принадлежность и генетические особенности больных.

В РБ молекулярно-генетическое изучение АР ранее не проводилось и выявление полиморфных вариантов генов-кандидатов, наиболее значимых в развитии заболевания, представляет собой актуальную задачу, как для фундаментальной науки, так и практической медицины.

В связи с вышесказанным были определены цели и задачи исследования.

Цель работы: анализ роли полиморфных вариантов генов цитокинов и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков в развитии аллергического ринита в Республике Башкортостан.

Задачи исследования: Провести у детей, больных аллергическим ринитом, и в соответствующей контрольной ipynne из РБ:

1. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов цитокинов: IL4 (-5900Т), IL4Ra (IleSOVal, Gln576Arg), IL13 (ArgI30Gln), IL18 (-133C>G, 1I3T>G), IFNG ((CA)„ повторы) и CCL11 ( 384A>G, Ala23Thr).

2. Анализ' полиморфных локусов' генов ферментов био^рансформации ксенобиотиков CYP1A1 (4887С>А, 4889A>G, 6235Т>С), CYP2C9 {430С>Т, 1075С>Т), CYP2C19 (681G>A), CYP2D6 (1934G>A), GSTMI (делеция), GSTT1 (делеция), NAT2 (481С>Т\ 590G>A, 857G>A), MTHFR (6770Т).

3. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта Glu237Gly гена высокоаффинного рецептора тучных клеток FceRip.

4. Анализ ассоциаций исследованных полиморфных вариантов генов и возможных их сочетаний с риском развития аллергического ринита с учетом этнической принадлежности анализируемых групп, уровня общего сывороточного IgE, наличия отягощенной по атопическим заболеваниям наследственности.

5. Анализ роли межгенных взаимодействий полиморфных вариантов генов цитокинов и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков в развитии аллергического ринита.

6. Анализ экспрессии генов ÍL13, IL18, CCL11 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови.

Научная новизна исследования.

Впервые собрана коллекция ДНК детей, больных АР, и соответствующей контрольной группы без атопических заболеваний, проживающих в РБ. Проведен анализ ассоциаций полиморфных локусов генов цитокинов, генов, кодирующих ферменты биотрансформации ксенобиотиков, гена высокоафинного рецептора тучных клеток с АР. Установлены ключевые межгенные взаимодействия, детерминирующие риск развития АР. Впервые определен уровень экспрессии генов IL13, IL18, CCL11 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных АР и индивидов контрольной группы из РБ. Показано, что полиморфные варианты генов IL4Ra, IL13, IL 18, IFNG, CCL11, CYP1AI, CYP2D6, GST Ml, NAT2, MTHFR участвуют в формировании генетической структуры предрасположенности к аллергическому риниту в нашей республике.

Научно-практическая значимость работы.

Результаты работы вносят вклад в общее представление о генетических основах предрасположенности к АР. Впервые получены статистические оценки частот аллелей и генотипов исследуемых ДНК-локусов у больных АР и выявлены генетические маркеры предрасположенности к заболеванию у детей в РБ. Данные диссертационной работы могут послужить основой для последующих исследований по определению генетических факторов риска развития АР. Результаты исследования также могут быть использованы при чтении спецкурсов на факультетах биологии, в медицинских ВУЗах, на курсах повышения квалификации медицинских работников.

Апробация работы

Основные положения диссертации были представлены на Balkan Meeting of Human Genetics (Scopje, 2006), Congress of the European Academy of Allergology and Clinical Immunology (Gothenburg, 2007; Barcelona, 2008), European Human Genetics Conference (Nice, 2007; Barcelona, 2008), European Respiratory Society Annual Congress (Stockholm, 2007), школе-семинаре «Биомика-наука XXI века» (Уфа, 2007), на ученом совете Института биохимии и генетики УНЦ РАН 11 ноября 2008 года.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 10 работ, из них 3 статьи - в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации

Работа изложена на 226 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 303 источника, из них 273 работы зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 33 рисунками, 45 таблицами и дополнена приложением (48 стр., 16 рис., 34 табл.).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы исследования

В работе использованы образцы ДНК 576 неродственных индивидов в возрасте 1-18 лет, проживающих на территории Республики Башкортостан и прошедших обследование в детской поликлинике №1 г.Уфы и детском отделении Клиники Башкирского государственного медицинского университета.

Группу больных составили 301 человек различной этнической принадлежности (124 русских, 72 татарина, 11 башкир и 94 метиса). В зависимости от уровня общего IgE (МЕ/мл) в сыворотке крови выборка больных АР была разделена на следующие группы: 1) с очень низким уровнем - до 60 (N=10); 2) низким - 60-150 (N=18); 3) умеренным - 150-400 (N=107); 4) высоким -более 400 (N=62). Среди пациентов с АР 150 человек имели отягощенную наследственность (наличие атонических заболеваний у ближайших родственников) и ' 111 человек имели сопутствующий диагноз - атипическая бронхиальная астма.

В качестве контроля исследована группа здоровых детей без каких-либо признаков атопических заболеваний с очень низким или низким уровнем IgE, состоящая из 275 человек различной этнической принадлежности (88 русских, 65 татар, 36 башкир и 86 метисов).

Методы исследования

ДНК была выделена из периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции [Mathew et а1.,1984]. Анализ полиморфных ДНК-локусов генов IL4, IL4Ra, IL13, ILJ8, CCLU, IFNG, CYP1A1, NAT2, FccRIfi осуществляли методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) на амплификаторе 'Терцик" производства компании «ДНК-технология» (г. Москва) и

ПДРФ-анализом с последующим электрофорезом в 7-8% полиакриламидном геле. Исследование однонуклеотидных замен и делеций в генах ФБК (CYP1AI, CYP2D6, GSTT1, GSTM1, MTHFR, CYP2C9, CYP2C19 и NAT2) проводилось при помощи биочипа, созданного в лаборатории биологических микрочипов ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН [Глотов А.С. и др., 2005]. Тотальную РНК выделяли из соскоба слизистой оболочки носа и из периферической крови сразу после взятия материала с использованием набора SV Total RNA isolation system (Promega, США) в соответствии с протоколом фирмы-производителя. Концентрацию РНК в образцах определяли по оптической плотности на спектрофотометре SmartSpec Plus (BioRad, США) и электрофоретически, используя 1%-ый агарозный гель. Комплементарную ДНК получали из 200-240 нг суммарной РНК с использованием набора ImProm-II™ Reverse Transcription System (Promega, США) в соответствии с протоколом фирмы-производителя. Количественную ПЦР в реальном времени проводили на приборе АНК-32 (ИАП РАН / ЗАО Синтол, Россия). Для анализа уровня экспрессии генов CCLll, IL13, IL18 и GAPDH использовали соответствующие праймеры RT2 qPCR Primer Assays и RT2 SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (SuperArray Bioscience Corporation, США).

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ: MS Office Excel 2003 [Microsoft], STATISTICA v.6.0. [StatSoft], BIOSTAT [Гланц., 1999], GraphPad Prism v.5. [http://www.graphpad.com/prism/Prism.htm]. При попарном сравнении частот аллелей и генотипов в группах больных и контроля использовался критерий х2 (р) для таблиц сопряженности 2x2 с поправкой Иэйтса на непрерывность. Силу ассоциаций оценивали в значениях показателя соотношения шансов Odds Ratio (OR) [Schlesselman J. et al., 1982]. В исследованиях полиморфных маркеров с числом аллелей больше двух, вводилась поправка Бонферрони на число множественных сравнений. Соответствие наблюдаемого распределения значений количественных показателей нормальному закону распределения оценивалось с использованием критерия Шапиро-Уилка. При сравнении групп по количественному признаку в случае соответствия его нормальному распределению использовался t-критерий Стьюдента для независимых групп, равенство дисперсий распределений признаков проверялось при помощи критерия Левена, в противном случае применялся U-критерий Манна-Уитни. Для оценки неравновесия по сцеплению пары полиморфных локусов использовался показатель D', рассчитанный с помощью программы LDA rhttp://www.chgb.org.cn/lda/lda.htm1. Определение частот гаплотипов и

тестирование различий в распределении частот гаплотипов в группах с АР и в контроле осуществлялось с помощью программы CHAPLIN rvyww.genetics.emorv.edu/labs/epstein/software/chaplin/index.html. Анализ

межгенных взаимодействий проводился с помощью программы GMDR (Generalized Multifactor-Dimensionality Reduction) [Lou X.Y. et al., 2007; http://www.healthsystem.virginia.edU/internet/addiction-genomics/Soilware/l.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов цитокинов с аллергическим ринитом в Республике Башкортостан

Большое значение для понимания молекулярных основ АР имеет изучение полиморфных вариантов генов цитокинов, принимающих участие в модулировании иммунного ответа практически на всех стадиях воспаления при аллергическом рините [Белозеров Е.С. с соавт., 2005; Фрейдин М.Б. с соавт., 2006; Passali D. et al, 2001], в связи с чем нами проведен анализ полиморфных вариантов генов цитокинов IL4, IL4Ra, IL13, IL18, IFNG и CCL1I у больных АР и в соответствующей контрольной группе из РБ.

Анализ ассоциации полиморфных вариантов ~590С>Т гена IL4 и IleSOVa!

(148 A>G) и Gln576Arz <¡652 A>G) гена IL4Ra с аллергическим ринитом

Интерлейкин-4 играет ключевую роль в патогенезе АР: индуцирует дифференцировку CD4 Т-лимфоцитов в ТЪ2-клетки (Т-хелперы второго типа) и подавляет развитие Thl (Т-хелперов первого типа), способствует продукции IgE В-лимфоцитами, поддерживает пролиферацию серозных тучных клеток [Белозеров Е.С. с соавт., 2005]. Проведенный анализ однонуклеотидной замены -590С>Т, локализованной в промоторной области'гена IL4, у пациентов с АР и контроля из РБ не выявил ассоциации данного ДНК-локуса с АР.

Интерлейкин-4 взаимодействует с клетками-мишенями, связываясь со специфическими рецепторами, расположенными на их поверхности. Во многих изученных популяциях различные аллели, генотипы и гаплотипы полиморфных вариантов гена а-цепи рецептора интерлейкина-4 IL4Ra ассоциированы с атопией [Ober С. et al., 2000; Loza M.J. et al., 2007]. Проведено исследование полиморфного варианта Ile50Val (148 A>G) гена IL4Ra у больных АР и в контрольной группе из РБ, в результате которого у лиц татарской этнической принадлежности выявлены статистически значимые различия в распределении частот аллелей данного локуса между пациентами н контролем (х2'-=4,11, р=0,04): в группе больных АР чаще (50,7%), чем в контроле (38,46%), определялся аллель IL4Ra*50Val (OR=l,6;

95%С1 1,02-2,67), тогда как аллель 1Ь4Яа*5011е с более высокой частотой встречался в контрольной группе - в 61,54% случаев по сравнению с 49,3% у пациентов с АР ((Ж=0,6; 95%С1 0,37-0,98) (рис. 1). Результаты нашего исследования частично согласуются с данными НуШпеп А. М. с соавт., которые показали в популяции европеоидов ассоциацию ганлотипа гена 114 Иа, содержащего аллель И4Яа*50Уа1, с атопической астмой [Нукшеп А.-М. еЛ а1., 2004]. Исследование полиморфного варианта ап516Аг% гена И4Яа показало отсутствие ассоциации данного ДНК-локуса с АР в РБ.

Ile/Ile Ile/Val Val/Val lie Val

В больные 25,35% 47,69% 26,76% 43,30%, 50,70%

иконтраль 38,46% 46,15% 16,38% 61,54% 38,46%

Рис. 1. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта Ile50Val гена IL4Ra у больных АР и контроля татарской этнической принадлежности.

Анализ ассоииаиии полиморфного варианта ArgISOGlrt ('2044 G>A) гена IL13 с аллергическим ринитом Интерлейкин-13 вовлечен в патогенез АР, участвует в активации эозинофилов и регуляции синтеза IgE [Wang M. et al., 2003]. У больных АР и в контрольной группе из РБ проведен анализ полиморфного варианта Argl30GIn (2044G>A) гена IL13. При сравнении групп пациентов и контроля согласно их этнической принадлежности у татар выявлены статистически значимые различия в распределении частот генотипов в целом - х2 б,376, р=0,041. Установлено, что гомозиготный по редкому аллелю генотип IL13*130Gln/GIn, обнаруженный у 12,86% пациентов с АР и у 1,54% индивидов в контрольной группе, является маркером повышенного риска развития заболевания в татарской этнической группе - ^=4,75, р=0,03, OR=9,44 (95%С1 1,16-76,76), RR=1,8 (95%С1 1,4-2,42) (рис. 2). В исследованиях зарубежных авторов показано, что наличие аллельного варианта IL13*130Gln характеризуется повышенной активностью фермента по сравнению с IL13*130Arg, а также связано со стабильностью и более высокой концентрацией IL 13 в плазме человека и, таким образом, может влиять на развитие воспаления и аллергической реакции [Arima К. et al., 2002; Vercelli D.,

2002]. Результаты нашего исследования согласуются с данными Kim J.J. с соавт., которые в корейской популяции также обнаружили ассоциацию данного полиморфного варианта с АР [Kim JJ. et al., 2007].

80% 70% 90% 60% «X 30% 20% 10% OX

Я больны« я контроль

Рис. 2. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта Argl30Gln гена IL13 у больных АР и контроля татарской этнической принадлежности.

Анализ ассоциации полиморфных вариантов 113 T>G и -133 C>G гена IL18 с аллергическим ринитом Впервые IL 18 был описан как важный фактор в Thl иммунном ответе из-за его способности индуцировать продукцию IFNy [Okamura Н. et al., 1998]. Позже была доказана плейотропная роль IL 18 в Thl и ТЪ2 иммунных ответах и показано, что IL18 также может индуцировать Th2 цитокины (IL13, ILIO и IL4) и способствовать развитию аллергического воспаления [Wild J.S. et al., 2000]. У больных АР и в контрольной группе из РБ проведен анализ двух полиморфных вариантов в гене IL18: 113T>G, расположенного в первом экзоне, и ~133C>G, локализованного во втором промоторе в сайте связывания с транскрипционным фактором NF-1, который, предположительно, активирует транскрипцию целого ряда иммунорегуляторных протеинов [Kruse S. et al, 2003].

При анализе полиморфного локуса 113T>G гена IL18 у пациентов с высоким уровнем общего IgE выявлена тенденция к увеличению частоты гомозиготного по редкому аллелю генотипа IL18*113G/G - 13,11% по сравнению с 6,18% - в контрольной группе (^=3,48, р=0,06).

Проведенное исследование полиморфного варианта -133C>G гена ILI8 у больных АР и контроля из РБ показало ассоциацию генотипа IL18*~133G/G с высоким уровнем общего сывороточного IgE (OR=4,16; 95%CI 1,84-9,42), с отягощенной по атопии наследственностью (OR=2,l; 95%С1 1,01-4,38) и с сопутствующей атопической БА (OR=2,32; 95%С1 1,07-5,06) (рис. 3). Полученные данные согласуются с результатами Kruse S. с соавт., которые в 2003 г.

Агд/Агд Агд/Gln Gln/Gln Ars G!n

40,00% 47,14% 12,86% 63,57% 36,43%

47,69% 50,77% 1,54% 73,08* 26,92%

обнаружили у больных АР в Германии ассоциацию аллелей IL18*113G и IL18*-133G гена IL18 с развитием атопических признаков, высоким уровнем общего сывороточного IgE и сенсибилизацией к распространенным аллергенам [Kruse S. et al., 2003].

с/с с/а g/a с/с c/g g/g с/с c/g g/g

Я больные 52.70% 36.49% 10.81 % 51 ,«256 36,36% 11.82% 50.00% 30.65% 19.35%

Я контроль 51.64% 42.91% 5.45% 51.64% 42.91% 5.45% 51.64% 42.91% 5.45%

I 2 3

Рис. 3. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта -133C>G гена IL18: 1 - у больных АР с отягощенной по атопии наследственностью и контроля, 2 - у больных АР с сопутствующей БА и контроля, 3 - у больных АР с высоким уровнем общего сывороточного IgE и контроля.

Определено сильное неравновесие по сцеплению 1131>G и -133C>G полиморфных локусов гена ¡118 (D'=0,94±0,02; %2=т647,55; р<0,00001) и проведен их гаплотипический анализ, в результате которого выявлено 4 гаплотииа. Показано, что гаплотип IL18*113Т/-133С достоверно реже встречался в группе больных АР с высоким уровнем общего IgE - 61,27%, чем в контроле - 71,04% (LR=4,029; р=0,045; ß= - 0,4).

Анализ ассоииаиии (СА)„ повторов гена IFNG с аллергическим ринитом

Являясь основным продуктом Thl-клеток, IFNG снижает секреторную активность ТЬ2-клеток и супрессируег синтез IgE [Ярилин A.A., 1999; Chung K.F. et al., 1999]. Рядом автором было описано, что у индивидов с атопическими заболеваниями снижен уровень секреции IFNG [Jujo К. et al., 1992; Tang M. et al., 1993] и его концентрация в слизистой оболочке носовой полости у больных АР ниже, чем у здоровых индивидов без атопии [Benson M. et al., 2000; Testa В. et al., 2001].

У больных АР и индивидов контрольной группы из РБ проведен анализ VNTR-полиморфизма - (СА)„ в первом интроне гена IFNG, для которого в литературе описана положительная корреляция уровня продукции IFNG с числом

повторов [Pravica V. et al., 1999]. Идентифицировано шесть аллельных вариантов: IFNG*11, IFNG* ¡2, IFNG*13, IFNG*14, IFNG*15 и IFNG*16, содержащих 11, 12, 13,14, 15 и 16 (CA)n повторов, соответственно. Между объединенными выборками больных АР и контроля обнаружены различия в распределении частот генотипов микросателлитного локуса (СА)„ гена IFNG (х2=13,37, р=0,01, df=14), однако при попарном сравнении частот генотипов статистически значимых различий между данными группами не выявлено. При сравнении контрольных групп русских и татар между ними обнаружены статистически значимые различия в распределении частот генотипов данного полиморфного варианта в целом (х2=16,38, р=0,001, df=ll). У лиц татарской этнической принадлежности установлено, что генотип IFNG*13/13 является маркером пониженного риска развития заболевания -ЗС2=6,12, р=0,01, (Ж=0,33 (95%С1 0,13-0,81) (рис. 4).

40% 35% 30% 25% 20У. 15К 10% 5% 0% О батька

■ гантрмь

Рис. 4. Распределение частот генотипов полиморфного варианта (СА)п гена IFNG у больных АР и контроля татарской этнической принадлежности.

Анализ ассоциации полиморфных вариантов -38-4A>G и Ala23Thr (67G>A)

гена CCLllc аллергическим ринитом Эотаксин - активный эозинофильный хемоаттрактант, влияющий на мобилизацию эозинофилов и ТЪ2-лимфоцитов в процессе аллергического воспаления [Schall T.J. et al., 1994]. Проведен анализ -384A>G и Ala23Thr (67G>A) полиморфных локусов гена CCLI1 у больных АР и контроля из РБ. При исследовании однонуклеотидной замены -384A>G обнаружена ассоциация генотипа CCLI1*-384G/G с риском развития АР у девочек - ^=4,44, р=0,035, OR=l,9 (95%С1 1,04-3,28). Частота встречаемости данного генотипа в группе пациенток составила 34,44%, в группе контроля - 22,15% (рис. 5).

Проведенный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта Ala23Thr (67G>A) гена CCL11 не выявил ассоциации данного локуса с АР.

Исследованные полиморфные варианты гена CCL11 находятся в сильном неравновесии по сцеплению (D'=0,84±0,02; х2= 122,34; р<0,00001), в связи с чем проведен их гаплотипический анализ, в результате которого выявлено 4 гаплотипа, частоты которых в выборках больных и контроля статистически достоверно не различались.

604 SOU «ПС 30% 20X 10* о%

□ больные и контроль

Рис. 5. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта -384A>G гена CCL11 у девочек.

2. Авалю ассоциаций полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с аллергическим ринитом в Республике Башкортостан

В связи с увеличением за последние 30 лет распространенности аллергических заболеваний, одной из причин которого является резкое ухудшение экологической обстановки, актуально изучение факторов предрасположенности к АР, реализующихся под воздействием окружающей среды на организм [Вавилин В.А. с соавт., 2002; Jlycc JI.B., 2003]. Ферменты биотрансформации ксенобиотиков (ФБК) участвуют в метаболизме медиаторов аллергического воспаления лейкотриенов и простагландинов, а также в регуляции механизмов оксидативного стресса [Carroll W., 2005]. При помощи биочипа, созданного в лаборатории биологических микрочипов ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН, нами проведено исследование 11 однонуклеотидных замен и 2 делеций в восьми различных генах ФБК: CYP1A1, CYP2D6, GSTT1, GSTM1, MTHFR, CYP2C9, CYP2C19 и NAT2 у больных АР и индивидов контрольной группы из РБ.

а/а a/g g/g a g

22,22% 43,33% 34,44% 43,89% 56,11%

24,68% ¡3,16% 22.15% 51,27% 48.73%

Анализ ассоциации полиморфных вариантов 4887С>А, 4889A>G и 6235Т>С

гена CYPIA1 с аллергическим ринитом Фермент CYP1A1 участвует в окислительном метаболизме ряда веществ, в том числе, вероятно, и аллергенов, попадающих в организм [Krajinovic М. et al., 1999, D'Alo F. et al., 2004, Hefler L.A. et al., 2004]. У больных AP и в конрольной группе проведен анализ полиморфных вариантов 4887С>А (Thr46¡Asp), 4889A>G (Ile462Vaí) и 6235Т>С в гене цитохрома Р450 CYP1A1, что позволило идентифицировать в группах больных АР и контроля мутантные аллели CYP1A1*2A (CYPIAI *6235С), CYP1A1*2B (CYP1AI*4889G + CYP1A14235Q, CYP1A1*4 (CYP1A1*4887A) и аллель дикого типа CYP1A1*IA, характеризующийся отсутствием замен в исследованных полиморфных локусах. Обнаружены статистически значимые различия в распределении частот генотипов гена CYPIAI между больными АР русской и татарской этнической принадлежности (-¿= 12,07; р=0,02). У пациентов русской этнической принадлежности частота гомозиготного генотипа CYPIAI*1A/1A была выше (73,5%), чем в соответствующей группе татар (55,65%) - р=0,011. Установлено, что у татар генотип CYP1AI*1AJIA

встречался с более высокой частотой в контрольной группе - в 72,58% случаев по сравнению с 55,65% случаев у больных АР (%2=4,16, р=0,041, OR=0,47; 95%С1 0,23-0,98) (Рис. 6).

• eos

70S

вох

ВОН 40% ЗОН 20% 10% OK

1А/1А 1А/2А 2А/2А Zfi/4 ÍA2S 2В/28 28/4 1А/4 и вольные 55.65% 15.28% 1.39% О.ООК 20.83% 1.39% 0.00% 5.56% Ш контроль ?Z5a% 9.68% 0.00% 0.00% 14.52% 1.61% 0.00% 1.61%

Рис. 6. Распределение частот генотипов полиморфных вариантов гена CYPIAI у больных АР и контроля татарской этнической принадлежности.

Анализ ассоциации полиморфного варианта 1934G>A гена CYP2D6 с аллергическим ринитом Цитохром Р450 2D6 участвует в метаболизме большого количества субстратов, включая ПАУ и около 20% всех известных лекарственных средств, в том числе и антигистаминных препаратов, широко применяемых при лечении АР [Кукес В.Г., 2004]. Проведен анализ замены 1934G>A (последняя позиция в

Ц-Ш- OR=0.47-

1Л ^

1-5Г

интроне 3) гена СУР2В6, приводящей к неправильному сплайсингу и синтезу неактивного фермента [ЯосИат Р.Ь. й а1., 2000], у больных АР и контроля из РБ.

Между контрольными группами русских и татар выявлены различия в распределении частот генотипов (х2=6,49, р=0,04): у индивидов татарской этнической принадлежности генотип СУР2В6*1934СЮ встречался чаще (80,65%), чем у русских (62,67%) - у?=5,3, р 0,02. Обнаружены статистически значимые различия в распределении частот генотипов {-¿=7$6, р=0,02) и частот аллелей (Х2=7,52, р=0,006) между мальчиками и девочками контрольной группы. У девочек частоты генотипа СУР2В6*1934в/С и аллеля СУР21)6*19340 (79,59% и 89,25%, соответственно) были более высокими, чем у мальчиков (58,62% и 77,59%, соответственно). У мальчиков определены маркеры повышенного риска развития АР - генотип СУР2В6*1934СЮ (011=1,9; 95%С1 1,01-3,63) и аллель СУР2В6*19340 (011=1,86; 95%С1 1,07-3,23) и маркер пониженного риска - аллель СУР2Пб*1934А (011=0,54; 95%С1 0,31-0,93) (рис. 7). У девочек, больных АР, выявлена тенденция к увеличению частоты гетерозиготного генотипа СУР20б*1934С/А (33,33%) по сравнению с соответствующей контрольной группой (19,35%) - р=0,054.

е/о о/а а/а а А

а больны* 73,10% 26,90'уй О.ОО-Л 86.55% 13.4594

т контроль 58.62"Л 37.93% 3,45% 77.59% 22.41К

Рис. 7. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта 1934С>А гена СУР2П6 у мальчиков.

Анализ ассоциации делеиионного полиморфизма гена 05ТМ1 с аллергическим ринитом Проведен анализ делеционного полиморфизма гена глутатион-8-трансферазы М1 у больных АР и в контрольной группе из РБ. Выявлена ассоциация генотипа С$ТМ1*+/+ с развитием аллергического ринита (0111,9; 95%С1 1,35-2,67). Показатель соотношения шансов развития АР у индивидов с отягощенной наследственностью составил ОЯ=2,17 (95%С1 1,42-3,33), с сопутствующей БА - 011=1,87 (95%С1 1,16-2,99). Кроме того, показана ассоциация данного генотипа с умеренно-повышенным уровнем общего ^Е в сыворотке

крови - OR=2,26 (95%CI 1,39-3,67) (рис. 8). Наши результаты согласуются с данными, описанными в работе Ляхович В.В. с соавт. [Ляхович В.В. с соавт., 2002], которые также обнаружили ассоциацию генотипа GSTM1 *+/+ с аллергией. Возможно, это объясняется тем, что глутатион-Б-трансферазы участвуют в реакциях перехода простагландина (Pg) Н2 в биологически активные PgD2, PgE2 и PgF2a, осуществляют превращение лейкотриена А в лейкотриен С [Wang W. et al., 1998]. При наличии по крайней мере одного функционального аллеля GSTM1, что соответствует генотипам GSTM1*+/+ и GSTMl*+/0, чаще встречающимся в группе больных, происходит эффективный синтез медиаторов воспаления -простагландинов и лейкотриенов, что и приводит к дальнейшему развитию воспаления и аллергической реакции.

♦/+ о/о В больные 68,24 31,76 ■ контроль 53,16 46,84

*/* О/О 71,96 2 В, 04 53,16 46,64

53,16 46,84

1 2 3

Рис. 8. Распределение частот генотипов делеционного полиморфизма гена <?5ГЛ//: 1 - у больных АР и контроля в целом, 2 - у больных с умеренно-повышенным уровнем 1ёЕ и контроля, 3 - у больных с отягощенной наследственностью и контроля (над стрелками - значение (Ж).

Анализ ассоциации полиморфных вариантов 481С>Т. 590G>A и 857G>A гена NAT2 с аллергическим ринитом У больных АР и контрольной группы из РБ проведен анализ трех полиморфных вариантов гена NAT2, в сумме влияющих на фенотип ацетилирования [Cascorbi I. et al., 1995]. Это транзиции 481С>Т, 590G>A (Argl97Glu), 857G>A (Gly286Glu), которые соответствуют следующей номенклатуре аллелей - NAТ2*5, NAT2*6 и NAT2*7. Отсутствие замен в гене NAТ2 соответствует генотипу дикого типа NAT2*4/4 [Vatsis К. et al., 1995].

Обнаружены статистически значимые различия в распределении частот генотипов (х2=20,783, р=0,0001) и аллелей (^=15,598, р=0,002) гена NAT2 между индивидами контрольных групп русской и татарской этнической принадлежности.

У татар по сравнению с русскими чаще встречались генотип дикого типа ЫАТ2*4/4 (18,46% и 6,98%, соответственно) - ^=4,65, р=0,03 и аллель ЫАТ2*4 (40,77% и 24,42%, соответственно) - х2=9,18, р=0,002. У русских с более высокой частотой выявлены генотип ЫАТ2*5/5 - в 24,42% случаев по сравнению с 4,62% у татар (х2=10,86, р=0,001), и аллель №472*5 - 46,51% случаев по сравнению с 26,15% у татар (х^ 13,06, р=0,0003). Установлено, что генотип ЫЛТ2*5/6 ассоциирован с высоким уровнем общего сывороточного ^Е - ^=4,438, р=0,035, 011= 1,9 (95%С1 1,04-3,59): частота встречаемости данного аллеля у пациентов с высоким уровнем общего составила 30,65%, тогда как в группе контроля с низким или очень низким уровнем общего ^Е - 18,61% (рис. 9).

4/4 4/5 4/6 4/7 5/5 57 6/6 6/7 Т/7

а больные 3.23% 20.97% 12,90% 0.00% 12,90% 30,65% 4,84% 11,29% 3,23% 0,00%

■ контроль 7,66% 21.90% 16,06% 1,82% 13,67% 18,61% 5,11% 8,33% 5,84% 0,73%

Рис. 9. Распределение частот генотипов гена NAT2 у больных АР с высоким уровнем общего сывороточного IgE и контроля РБ.

Данные нашего исследования согласуются с результатами Khan Е. с соавт. [Khan Е. et al., 2004], проведенного в Германии, и Batra J. с соавт. - в Индии [Batra J. et al., 2006], которые выявили ассоциацию полиморфного варианта 4810Т, соответствующего аллелю NAT2*5, с высоким уровнем общего IgE.

Анализ ассоииаиии полиморфного вариантаAla222Val (677С>Т) гена MTHFR с аллергическим ринитом При дефиците фолата происходит изменение Thl/Th2 баланса, а именно, увеличение продукции цитокинов ТЫ-типа и уменьшение цитокинов Thl-типа, что приводит к развитию аллергического типа иммунного ответа. У индивидов с генотипом MTHFR*222Val/Val полиморфного варианта Ala222Val (677С>Т) гена MTHFR, который ассоциирован с дефицитом фолата и связан с ингибированием цикла реметилирования, преобладающим становится ТЬ2-тип иммунного ответа. [Yamada К. et al., 2001; Husemoen L. et al., 2006].

Проведен анализ замены Ala222Val (677С>Т) данного гена, в результате которого не выявлено статистически значимых различий в распределении частот аллелей и генотипов данного локуса как в объединенных группах больных АР и контроля, так и при разделении их по этнической принадлежности. Установлено, что в контрольной группе частота гетерозиготного генотипа MTHFR*222Ala/Val достоверно выше (36,42%), чем у больных с умеренно-повышенным уровнем общего сывороточного IgE (23,75%) - ^=3,86, р=0,049, C)R=0,5 (95%С1 0,29-1,00) и у больных с отягощенной по атопическим заболеваниям наследственностью (24,76%) - х2=3,89, р=0,048, OR=0,6 (95%С1 0,33-1,00).

В результате проведенного анализа полиморфных вариантов 430С>Т и 1075А>С гена CYP2C9, 68Ю>А гена CYP2C19, делении гена GSTTI и замены Glu237Gly гена FceRIfi не выявлено ассоциаций данных ДНК-локусов с развитием аллергического ринита у детей в РБ.

4. Анализ межгенных взаимодействий в формировании наследственной предрасположенности к развитию аллергического ринита.

Учитывая то, что анализ ассоциации отдельных полиморфных вариантов генов, вовлеченных в контроль многофакторных заболеваний, не дает достаточно полного представления о механизмах формировании наследственной предрасположенности, нами проведен анализ межгенных взаимодействий с помощью компьютерной программы GMDR (Generalized Multifactor-Dimensionality Reduction), предложенной Lou и соавт. [Lou X.Y. et al., 2007]. Данный подход позволяет при моделировании межгенных и ген-средовых взаимодействий учитывать и качественные, и количественные признаки, дихотомические и непрерывные фенотипы, а также анализировать неодинаковые по числу выборки неродственных индивидов. При исследовании межгенных взаимодействий полиморфных вариантов генов цитокинов была определена четырехфакторная модель взаимодействия ДНК-локусов, приводящая к развитию аллергического ринита: IL4Ra (Ile50Val), IL4Ra (Gln576Arg), IL13 (Argl30Gln), ILI8 (-133C>G), тестируемая сбалансированная точность (Bal.Acc.) которой составила 0,5631 (табл.1). К сочетаниям повышенного риска развития заболевания были отнесены 33 различные комбинации генотипов, к сочетаниям пониженного риска - 27. Кроме того, при исследовании межгенных взаимодействий полиморфных вариантов генов цитокинов были определены ДНК-локусы, взаимодействие которых ассоциировано с высоким уровнем сывороточного IgE (>400 МЕ/мл): IL4 (-5900Т), IL4Ra (lleSOVal), CCLll (-384A>G), IL18 (-133C>G)

(табл.1). Сбалансированная точность (BaLAcc.) данной модели составила 0,5756. Были определены 23 сочетания генотипов повышенного риска и 41 сочетание генотипов пониженного риска. Нами также проводился анализ межгенных взаимодействий между изученными полиморфными вариантами генов цитокинов и генов ФБК в формировании наследственной предрасположенности к АР, что позволило выявить 5-локусную модель, в состав которой входили IL4 (-590С>Т), lL4Ra (ÍIe50Val), CCLll (-384A>G), NAT2 и CYPIA (табл.1). Сбалансированная точность (Bal.Acc.) данной модели составила 0,7028. Выявлены 59 сочетаний генотипов повышенного риска и 93 сочетания генотипов пониженного риска.

Таблица 1

Ключевые межгенные взаимодействия, приводящие к развитию АР (результаты моделирования при помощи программы GMDR)

Модель Ассоциированный признак Bal.Acc.* Se Sp CV

IL4R (lleSOVal) IL4Ra(GlnS76Arg), IL13 (Argl30Gln) IL18 (-133C>G') Аллергический ринит 0,5631 0,5200 0,6062 10/10

1L4 (-5900T) IL4Ra (IleSO Val) CCLll (-384A>G■) IL18 (-1330G) Высокий уровень общего сывороточного ^Е 0,5756 0,4528 0,6984 10/10

IL4 (-590C>T), ¡L4Ra (lleSOVal) CCLll (-384A>G) NAT2, CYP1A1 Аллергический ринит у индивидов с отягощенной наследственностью 0,7028 0,6583 0,7472 10/10

* Примечание: Bal.Acc. - сбалансированная точность, Se - чувствительность, Sp - специфичность, CV - повторяемость результата

Таким образом, данное исследование подтвердило полученные нами результаты при анализе ассоциаций отдельных полиморфных вариантов генов с АР и показало, что основу генетической предрасположенности к АР составляет взаимодействие генов ¡1.4, 114Яа, 1ЫЗ, 1Ы8, ССЫ, ЫАТ2 и СУР1А1.

5. Анализ экспрессии генов цитокинов в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных АР и контрольной группы из Республики Башкортостан

Изучение экспрессии генов в клетках слизистой оболочки носа и периферической крови у больных АР имеет большое значение для понимания патогенетических основ заболевания, а также для индивидуального подбора

лекарственных препаратов [Kakinoki Y. et al., 2000; Benson et al., 2005; Zhang R.X. et al., 2007]. Мы провели анализ экспрессии генов IL13, IL18 и CCLU в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных АР и контроля в РБ. Для изученных нами полиморфных вариантов данных генов показаны ассоциации с АР у детей в нашей республике. В данном исследовании приняли участие 7 больных АР и 13 здоровых индивидов без атопии. Забор материала проводился в период обострения заболевания у больных АР, трое из которых имели тяжелую форму заболевания и ярко выраженную местную воспалительную реакцию, а четверо - среднетяжелую форму заболевания.

Анализ экспрессии генов IL13, ¡L18 и CCL11 у больных АР и контроля из РБ позволил определить, что пациенты с тяжелой формой АР характеризуются гиперэкспрессией всех изученных нами генов в клетках слизистой оболочки носа по сравнению с контрольной группой (рис. 10). Установлена ассоциация генотипа IL13*130Arg/Gln с повышенным уровнем экспрессии гена IL13 (р=0,05), у носителей генотипов CCL11 *-384А/А и CCL 11*23Ala/Ala выявлена выраженная тенденция повышения экспрессии гена CCL11 в клетках слизистой оболочки носа (рис. 11).

р=0,005

р=0,04

Рис.10. Уровень экспрессии генов IL13 (1), IL18 (2), CCL11 (3) в клетках слизистой оболочки носа у больных с тяжелой формой АР и контроля.

100 I ю I»

i 40

Рис.11. Уровень экспрессии генов 1113 (1) и СС111 (2,3) в клетках слизистой оболочки носа у лиц с различными генотипами полиморфных вариантов А^13(Ю1п (1), -384 А>в (2) и А1а23Ткг (3).

В лейкоцитах периферической крови не обнаружено различий в экспрессии данных генов между больными АР и индивидами контрольной группы, что свидетельствует о важности изучения именно тканеспецифичной экспрессии генов при АР и согласуется с результатами работ многих авторов [Pawankar R. et al.,

1997; Verhaeghe et al., 2002; Salib RJ. et al„ 2005; Zhang R.X. et al, 2007].

***

Таким образом, проведенное молекулярно-генетическое исследование АР в РБ показало, что полиморфные варианты генов IL4Ra, ILJ3, IL18, IFNG, CCLH, CYPlAl, CYP2D6, GSTM1, NAT2, MTHFR вносят вклад в формирование генетической структуры предрасположенности к аллергическому риниту в нашей республике. Определены ключевые межгенные взаимодействия, детерминирующие риск развития АР. Обнаружено повышение уровня экспрессии генов IL13, IL18 и CCL11 в клетках слизистой оболочки носа у больных с тяжелым течением аллергического ринита в период обострения заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Маркерами повышенного риска развития аллергического ринита у индивидов татарской этнической принадлежности являются аллель ¡L4Ra*50Val полиморфного варианта lleSOVal гена IL4Ra и генотип IL13*130Gln/GIn полиморфного варианта Glnl30Arg гена 1L13, маркерами пониженного риска - аллель IL4Ra*50Ile полиморфного варианта lleSOVal гена IL4Ra, генотип IFNG*J3/13 микросатеялитного локуса (СЛ)„ гена IFNG и генотип CYP1A1*1A/1A гена CYP1A1.

2. Обнаружена ассоциация генотипа IL18*-133G/G полиморфного варианта -¡33C>G Гена IL18 и генотипа NAT2*5/6 гена NAT2 с высокйм уровнем общего сывороточного IgE, генотипа GSTMJ*+/+ гена GSTMI с умеренно-повышенным уровнем общего IgE, гаплотипа ÍL18*lI3T/-I33C гена IL18 с низким уровнем общего IgE в сыворотке крови.

3. Маркерами повышенного риска развития аллергического ринита у индивидов с отягощенной по атопии наследственностью являются генотип IL18*-I33G/G полиморфного варианта -I33C>G гена IL18 и генотип GSTMI*+/+ гена GSTM1, маркерами пониженного риска - генотип GSTM1 *0/0 гена GSTMI и генотип MTHFR*222Ala/Val полиморфного варианта Ala222 Val гена MTHFR.

4. Обнаружены тендерные различия в распределении частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов CYP2D6 и CCLII. Маркерами

повышенного риска развития аллергического ринита у мальчиков являются генотип CYP2D6*1934G/G и аллель CYP2D6*1934G, маркером пониженного риска - аллель CYP2D6*1934A полиморфного варианта 1934G>A гена CYP2D6. У девочек маркером повышенного риска развития аллергического ринита является генотип CCLI1*-384G/G полиморфного варианта -384A>G гена CCLI1.

5. Установлено межгенное взаимодействие полиморфных вариантов генов цитокинов lL4Ra, IL13, IL18 в детерминации риска развития аллергического ринита, а также сочетания полиморфных локусов, ассоциированные с высоким уровнем общего сывороточного IgE - IL4, IL4Ra, ILI8, CCL1. Определены комбинации полиморфных вариантов генов цитокинов и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков IL4, ILÀRa, CCL11, NAT2 и CYP1A1, предрасполагающие к развитию аллергического ринита у индивидов с отягощенной по атопии наследственностью.

6. Обнаружено повышение уровня экспрессии генов IL13, IL18 и CCL11 в клетках слизистой оболочки носа у больных с тяжелым течением аллергического ринита в период обострения заболевания. Установлена ассоциация высокого уровня экспрессии гена IL13 с генотипом IL13*I30Arg/GIn. В лейкоцитах периферической крови не выявлено различий в экспрессии данных генов между больными АР и индивидами контрольной группы.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хузина А.Х.. Карунас А.Х., Хуснутдинова Э.К. Молекулярно-генетические аспекты аллергического ринита // Медицинская генетика. - 2007. - Т.6. - №6. -С. 9-16.

2. Рамазанова Н.Н., Эткина Э.И., Хузина А.Х.. Карунас А.С., Гурьева Л.Л., ОрловаН.А., Хуснутдинова Э.К. Ассоциация полиморфизма генов IL4(-5900Т) и IL4R<x (Ile50Val) с бронхиальной астмой у детей в республике Башкортостан // Казанский медицинский журнал. - 2007. - Т.88. - №6. - С. 574-576.

3. Хузина А.Х.. Карунас А.С., Бикташева А.Р., Юлдашева А.А., Эткина Э.И., Хуснутдинова Э.К. Исследование ассоциаций полиморфных вариантов ряда генов цитокинов с аллергическим ринитом в Республике Башкортостан // Медицинская генетика. - 2008. - Т.7. - №7. - С. 27-35.

4. A.Khuzina. A. Karunas, A.Biktasheva, A.Yuldasheva, Е. Khusnutdinova. Association analysis of the interferon-gamma gene polymorphism with allergie rhinitis in Volga-Ural région of Russia // 7 Balkan Meeting of Human Genetics, Scopje, 2006, Macedonia. - P.97.

5. A.Khuzina. A.Karunas. A.Biktasheva, A.Yuldasheva, E.Etkina,, E.Khusnutdinova. Association analysis of the IL4 and IL4Ra genes with allergic rhinitis in Volga-Ural region of Russia // XXVI Congress of the European Academy of Allergology and Clinical Immunology, Gothenburg, 2007. - Allergy. - V.62. - Sup.83. - P.228.

6. A.Khuzina. A.Karunas, A.Biktasheva, A.YuIdasheva, E.Etkina, E.Khusnutdinova. The analysis of Eotaxin (CCL11) gene single nucleotide polymorphisms in allergic rhinitis patients and healthy donors from Volga-Ural region of Russia // European Human Genetics Conference, Nice, 2007. - European Journal of Human Genetics. -V.15. - Sup.l. - P.234.

7. A.Khuzina. A.Karunas, A.Biktasheva, A.YuIdasheva, E.Etkina, E.Khusnutdinova. The study of genetic susceptibility to allergic rhinitis in Volga-Ural region of Russia // European Respiratory Society 17-th Annual Congress, Stockholm, 2007. -European Respiratory Journal. - Sup. 1. - P.536

8. Хузина A.X.. Карунас A.C., Бикташева A.P., Юлдашева А.А., Эткина Э.И., Хуснутдинова Э.К. Анализ полиморфных вариантов генов цитокинов у больных аллергическим ринитом и здоровых доноров в республике Башкортостан // Биомика - наука XXI века: Материалы школы-семинара молодых ученых Уфимского научного центра РАН и Волго-Уральского региона по физико-химической биологии и биотехнологии. -Уфа, 2007.-С. 133.

9. A.Khuzina. A.Karunas, A.Biktasheva, A.YuIdasheva, E.Etkina, E.Khusnutdinova. Association of the IL18 gene polymorphisms with allergic rhinitis in Volga-Ural region of Russia // XXVII Congress of the European Academy of Allergology and Clinical Immunology, Barcelona, 2008 - Allergy. - V.63. - Sup.88. - P.595.

10. A.Khuzina. A.Karunas, A.Biktasheva, A.Yuldasheva, E.Etkina, E.Khusnutdinova. Association between the ^V-acetyltransferase 2 (NAT2) gene polymorphisms and allergic rhinitis in Volga-Ural region of Russia // European Human Genetics Conference, Barcelona, 2008 - European Journal of Human Genetics. - V.16. -Sup.2. - P.290.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АР - Аллергический ринит

БА - Бронхиальная астма

ПДРФ - Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов

ПЦР - Полимеразная цепная реакция

ФБК - Ферменты биотрансформации ксенобиотиков

CCL11 - Эотаксин 1

CYP - Цитохром Р450

FceRip - Высокоафинный рецептор тучных клеток

GAPDH - Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа

GMDR - Generalized Multifactor-Dimensionality Reduction

GST - Глутатион-в-трансфераза

IgE - Иммуноглобулин Е

IL - Интерлейкин

IFNG - Интерферон у

MTHFR - Метилентетрагидрофолатредуктаза

NAT2 - N-ацетилтрансфераза 2

OR - Соотношение шансов

95% CI - Доверительный интервал

Подписано в печать 20.11.08 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать ризографическая. Тираж 120 экз. Заказ 207. Гарнитура «TimesNewRoman». Отпечатано в типографии «ПЕЧАТНЫЙ ДОМЪ» ИП ВЕРКО. Объем 1,1 п.л. Уфа, Карла Маркса 12 корп. 4, т/ф: 27-27-600, 27-29-123

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Хузина, Альфия Хаматьяновна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Этиология и классификация аллергического ринита.

1.2. Патогенез аллергического ринита.

1.3.Гены предрасположенности к аллергическому риниту.

1.3.1. Ген высокоафинного рецептора тучных клеток {FceRI/J).

1.3.2. Ген ADAM33 (A disintegrin and metalloprotease domain 33).

1.3.3. Гены цитокинов и их рецепторов (.IL4, IL4Ra, IL13, IL18, IFNG, CCL11, CCL24, CCL26).

1.3.4. Гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков оCYP1A1, CYP2D6, GSTTJ, GSTM1, MTHFR, CYP2C9, CYP2C19 и NAT2).

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1.Материалы исследования.

2.2.Методы исследования.

2.2.1. Выделение геномной ДНК.

2.2.2. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК.

2.2.3. Рестрикционный анализ.

2.2.4. Метод электрофореза.

2.2.5. Биочип для анализа полиморфных вариантов в генах системы биотрансформации.

2.2.5.1. Мультиплексная полимеразная цепная реакция.

2.2.5.2. Гибридизация, регистрация изображения и обработка полученных результатов.

2.2.6. Выделение тотальной РНК.

2.2.7. Синтез кДНК с помощью реакции обратной транскрипции.

2.2.8. Полимеразная цепная реакция в реальном времени.

2.2.9. Статистическая обработка полученных результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1.Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов цитокинов с аллергическим ринитом в Республике Башкортостан.

3.1.1. Анализ ассоциации полиморфного варианта -590С>Т гена IL4 с аллергическим ринитом.

3.1.2. Анализ ассоциации полиморфных вариантов Ile50Val (148 A>G) и Gln576Arg (1652 A>G) гена IL4Ra с аллергическим ринитом.

3.1.3. Анализ ассоциации полиморфного варианта Argl30Gln (2044 G>A) гена IL13 с аллергическим ринитом.

3.1.4. Анализ ассоциации полиморфных вариантов 113 T>G и -133 C>G гена IL18 с аллергическим ринитом.

3.1.5. Анализ ассоциации (СА)„ повторов гена IFNG с аллергическим ринитом.

3.1.6. Анализ ассоциации полиморфных вариантов ~384A>G и Ala23Thr (67G>A) гена CCLllc аллергическим ринитом.

3.2. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с аллергическим ринитом в

Республике Башкортостан.

3.2.1. Анализ ассоциации полиморфных вариантов 4887С>А, 4889A>G и 6235Т>С гена CYP1A1 с аллергическим ринитом.

3.2.2. Анализ ассоциации полиморфных вариантов 430С>Т и 1075А>С гена CYP2C9 с аллергическим ринитом.

3.2.3. Анализ ассоциации полиморфного варианта 681G>A гена CYP2C19 с аллергическим ринитом.

3.2.4. Анализ ассоциации полиморфного варианта 1934G>A гена CYP2D6 с аллергическим ринитом.

3.2.5. Анализ ассоциации делеционного полиморфизма гена GSTM1 с аллергическим ринитом.

3.2.6. Анализ ассоциации делеционного полиморфизма гена GSTT1 с аллергическим ринитом.

3.2.7. Анализ ассоциации полиморфных вариантов 481С>Т, 590G>A и 857G>А гена NAT2 с аллергическим ринитом.

3.2.8. Анализ ассоциации полиморфного варианта Ala222Val (677С>Т) гена MTHFR с аллергическим ринитом.

3.3. Анализ ассоциации полиморфного варианта Glu237Gly (6960A>G) гена FceRIfí с аллергическим ринитом.

3.4. Анализ межгенных взаимодействий в формировании наследственной предрасположенности к развитию аллергического ринита.

3.5.Анализ экспрессии генов цитокинов в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных

АР и в контрольной группе.

3.5.1. Анализ экспрессии гена IL13 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных АР и в контрольной группе.

3.5.2. Анализ экспрессии гена IL18 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных АР и в контрольной группе.

3.5.3. Анализ экспрессии гена CCL11 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных АР и в контрольной группе.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ генов предрасположенности к аллергическому риниту в Республике Башкортостан"

Актуальность проблемы

Распространенность аллергического ринита за прошедшее столетие выросла в десятки раз. В мире этим заболеванием страдают 10-30% населения всех возрастных групп, а в России, по данным Института иммунологии РАМН, распространенность АР в различных регионах среди взрослого населения колеблется от 12,7 до 24%, среди детского населения -от 15 до 28,7% [Ильина Н.И., 2000; Белозеров Е.С. и соавт., 2005; Salib R.J. et al., 2003]. Симптомы, развивающиеся при АР, не являются угрожающими для жизни, однако связаны с различными ограничениями в физических, психологических и социальных аспектах жизни, являются причиной существенного снижения качества жизни, нарушений сна и в тяжелых случаях создают трудности в обучении и профессиональной карьере больного [Лопатин А.С., 2003]. Важность данной проблемы обусловлена еще и тем, что АР тесно связан с такими весьма распространенными заболеваниями, как острый и хронический риносинусит, аллергический конъюнктивит, а также является одним из факторов риска развития бронхиальной астмы (БА). Известно, что 32-64% больных АР страдают БА, в то же время 75% больных БА имеют АР [Лусс Л.В., 2003; Белозеров Е.С. и соавт., 2005; Pawankar R., 2006].

В настоящее время признана точка зрения, согласно которой АР является многофакторным заболеванием. Наряду с факторами окружающей среды, большая роль в развитии данного заболевания отводится наследственной предрасположенности. На сегодняшний день известно множество генов-кандидатов АР, белковые продукты которых участвуют в его патогенезе, при проведении полно-геномных скринингов выявлен ряд ДНК-локусов, сцепленных с заболеванием. Установлена ассоциация АР и характерного для данного заболевания высокого уровня общего сывороточного IgE с полиморфными локусами генов цитокинов, играющих важную роль в развитии аллергического воспаления - IL4, IL4Ra, JLJ3, IL18, CCL11, с геном высокоафинного рецептора тучных клеток FcsRIfl [Nataga Н. et al., 2001; Kruse S. et al., 2003; Shin H.D. et al., 2003; Loza M.J. et al., 2007; Apter A.J. et al., 2008; Huebner M. et al., 2008]. Показана важность изучения факторов предрасположенности к аллергии, реализующихся под воздействием окружающей среды на организм - генов, кодирующих ферменты биотрансформации ксенобиотиков [Вавилин В.А. и соавт., 2002; Carroll W., 2005]. Однако, результаты многочисленных исследований противоречивы, молекулярно-генетические основы формирования заболевания пока изучены недостаточно. Все это превращает АР в серьезную медико-социальную проблему и диктует необходимость исследования причин и механизмов развития данного заболевания для разработки адекватных лечебно-профилактических мероприятий, учитывающих этническую принадлежность и генетические особенности больных.

В связи с вышеизложенным были определены цели и задачи исследования.

Задачи исследования:

Провести у детей, больных аллергическим ринитом, и в соответствующей контрольной группе из РБ:

1. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов цитокинов: 1Ь4 (-590С>Т), 1Ь4Яа (Пе50Уа1, в1п576Аг§), 1113 (А^130в1п), 1118 (-1330в, 113Т>0), Шв ((СА)„ повторы) и ССЫ1 (~384А>С, АЫЗТкг).

2. Анализ полиморфных 'локусов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков СУР1А1 (4887С>А, 4889А>в, 6235Т>С), СУР2С9 (■4300Т, 1075С>Т), СУР2С19 (68Ю>А), СУР206 {19340А), вЗТМ! (делеция), С5Т77 (делеция), АЫТ2 (481 С>Т, 5900А, 8570А), МТНРЯ (677ОТ).

3. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта аи237С1у гена высокоаффинного рецептора тучных клеток ТсеШ/З.

4. Анализ ассоциаций исследованных полиморфных вариантов генов и возможных их сочетаний с риском развития аллергического ринита с учетом этнической принадлежности анализируемых групп, уровня общего сывороточного ^Е, наличия отягощенной по атопическим заболеваниям наследственности.

6. Анализ экспрессии генов 1Ь13, 1Ы8, ССЫ1 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови.

Научная новизна исследования.

Впервые собрана коллекция ДНК детей, больных АР, и соответствующей контрольной группы без атопических заболеваний, проживающих в РБ. Проведен анализ ассоциаций полиморфных локусов генов цитокинов, генов, кодирующих ферменты биотрансформации ксенобиотиков, гена высокоафинного рецептора тучных клеток с АР. Установлены ключевые межгенные взаимодействия, детерминирующие риск развития АР. Впервые определен уровень экспрессии генов IL13, IL18, CCL11 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных АР и индивидов контрольной группы из РБ. Показано, что полиморфные варианты генов IL4Ra, ILJ3, IL18, IFNG, CCLJJ, CYP1A1, CYP2D6, GSTM1, NAT2, MTHFR участвуют в формировании генетической структуры предрасположенности к аллергическому риниту в нашей республике.

Научно-практическая значимость работы.

Положения, выносимые на защиту:

1. Маркеры повышенного риска развития аллергического ринита у индивидов татарской этнической принадлежности - аллель IL4Ra*50Val, генотип IL13* 130Gln/Gln, маркеры пониженного риска - аллель lL4Ra*501le, генотипы IFNG*J3/J3 и CYP 1А1*1А/1А.

2. Ассоциация генотипов IL18*—133G/G и NAT2*5/6 с высоким уровнем общего IgE, генотипа GSTM1 *+/+ — с умеренно-повышенным уровнем общего IgE, гаплотипа IL18*113Т/-133С гена IL18 - с низким уровнем общего IgE в сыворотке крови.

3. Маркеры повышенного риска развития аллергического ринита у индивидов с отягощенной по атопии наследственностью — генотипы

IL18*-133G/G и GSTM1*+/+, маркеры пониженного риска -генотипы GSTM1 *0/0 и MTHFR*222Ala/Val.

Маркеры повышенного риска развития аллергического ринита у мальчиков - генотип CYP2D6*1934G/G и аллель CYP2D6*1934G, маркер пониженного риска - аллель CYP2D6*J934A. Маркер повышенного риска развития аллергического ринита у девочек -генотип CCL11 *-384G/G.

Межгенное взаимодействие полиморфных вариантов генов цитокинов IL4Ra, IL13, IL18 в детерминации риска развития аллергического ринита. Сочетания полиморфных ДНК-локусов генов цитокинов -IL4, IL4Ra, IL18 и CCLJ, ассоциированные с высоким уровнем общего сывороточного IgE. Комбинации полиморфных вариантов генов цитокинов и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков -IL4, IL4Ra, CCL11, NAT2 и CYP1A1, предрасполагающие к развитию аллергического ринита у индивидов с отягощенной по атопии наследственностью.

Повышение уровня экспрессии генов IL13, IL18 и CCL11 в клетках слизистой оболочки носа у больных с тяжелым течением аллергического ринита в период обострения заболевания.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Хузина, Альфия Хаматьяновна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Аллергический ринит является классическим многофакторным заболеванием, на развитие которого оказывают влияние как средовые, так и генетические факторы. Генетическая предрасположенность к АР формируется за счет взаимодействия множества генов. Во всем мире активно исследуются ассоциации полиморфных вариантов генов-кандидатов АР с фенотипическими проявлениями заболевания, а также уровень их экспрессии в слизистой оболочке носа и клетках крови.

В рамках данного исследования проведен анализ молекулярно-генетических основ развития аллергического ринита в РБ. Исследованы 9 полиморфных вариантов в 6-ти генах цитокинов (.IL4, IL4Ra, IL13, IL18, IFNG, CCL11) и 13 полиморных локусов в 8-ми генах ферментов биотрансформации ксенобиотиков (CYP1A1, CYP2D6, GSTT1, GSTM1, MTHFR, CYP2C9, CYP2C19, NAT2), а также замена Glu237Gly гена высокоафинного рецептора тучных клеток FceRIfi с целью оценки их роли в развитии предрасположенности к аллергическому риниту у детей в Республике Башкортостан. Определены профили экспрессии генов IL13, IL18 и CCL11 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у пациентов с АР в период обострения заболевания.

Учитывая то, что цитокины играют важную роль в процессе развития воспалительной реакции при АР, нами проведено исследование полиморфных вариантов ряда генов цитокинов. Анализ полиморфных вариантов Ile50Val и Gln576Arg в гене IL4Ra обнаружил у лиц татарской этнической принадлежности статистически значимые различия в распределении частот аллелей полиморфного локуса Ile50Val между пациентами и здоровыми донорами. Аллель IL4Ra*50Val (OR=l,6; 95%CI 1,02-2,67) является маркером повышенного риска развития заболевания, а аллель IL4Ra*50Ile, соответственно, маркером пониженного риска (OR=0,6; 95%С1 0,37-0,98). В результате исследования полиморфного варианта

Glnl30Arg в гене IL13 установлено, что гомозиготный по редкому аллелю генотип IL13*130Gln/Gln является маркером повышенного риска развития заболевания у татар - OR=9,44 (95%С1 1,16-76,76), RR=1,8 (95%С1 1,4-2,42).

Исследование двух полиморфных вариантов 113T>G и -133C>G гена IL18 выявило ассоциации генотипа 1L18*-133G/G ДНК-локуса -133C>G с высоким уровнем общего IgE (OR=4,16; 95%CI 1,84-9,42), с отягощенной по атопии наследственностью (OR=2,l; 95%С1 1,01-4,38) и с сопутствующей атопической БА (OR=2,32; 95%С1 1,07-5,06). Нами было определено сильное неравновесие по сцеплению полиморфных локусов 113 T>G и —133 C>G гена IL18 (D-0,94±0,02; х2=647,55; р<0,00001) и проведен их гаплотипический анализ, в результате которого показано, что гаплотип IL18*113Т/-133С ассоциирован с низким уровнем общего IgE в сыворотке крови (LR=4,029; р=0,045; ß= -0,4).

При изучении микросателлитного локуса (СА)п гена IFNG обнаружено, что генотип IFNG* 13/13 является маркером пониженного риска развития заболевания у татар - OR=0,33, 95%С1 0,13-0,81. Выявлены статистические значимые различия в распределении частот генотипов данного полиморфного варианта между объединенными выборками больных АР и здоровых доноров, контрольными группами индивидов русской и татарской этнической принадлежности, больными АР русской и татарской этнической принадлежности, мальчиками и девочками, больными АР с высоким уровнем общего сывороточного IgE и здоровыми донорами.

Проведенный анализ полиморфных локусов -384A>G и Ala23Thr (67G>A) гена эотаксина CCL11 позволил определить у девочек ассоциацию генотипа CCL11*-384G/G с риском развития АР - OR=l,9 (95%С1 1,04-3,28). Установлено, что данные полиморфные варианты гена CCL11 находятся в сильном неравновесии по сцеплению (D'=0,84±0,02; х2=122,34; р<0,00001), и проведен их гаплотипический анализ, но различий в распределении частот гаплотипов по данным локусам между больными АР и здоровыми донорами не обнаружено.

Распространенность аллергических заболеваний за последние 30 лет резко возрасла, что может быть связано с ухудшением экологической обстановки [Jlycc JI.B., 2003]. Учитывая это, актуально изучение факторов предрасположенности к АР, реализующихся под воздействием окружающей среды на организм. Ферменты биотрансформации ксенобиотиков (ФБК) участвуют в метаболизме медиаторов аллергического воспаления лейкотриенов и простагландинов, а также в регуляции механизмов оксидативного стресса [Carroll W., 2005]. При помощи биочипа, созданного в лаборатории биологических микрочипов ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН, нами исследован ряд полиморфных локусов генов ФБК. Изучение полиморфных вариантов 48870А (Thr461Asp), 4889A>G (Ile462Vaï) и 6235Т>С гена CYP1A1 позволило установить, что у татар генотип CYP1A1*1A/1A, характеризующийся отсутствием замен в исследованных ДНК-локусах данного гена, является маркером пониженного риска развития заболевания (OR=0,47; 95%С1 0,23-0,98).

Анализ полиморфного варианта 1934G>A гена CYP2D6 выявил между контрольными группами мальчиков и девочек статистически значимые различия в распределении частот генотипов и аллелей. Для мальчиков определены маркеры повышенного риска развития АР - генотип CYP2D6*1934G/G (OR=l,9; 95%С1 1,01-3,63) и аллель CYP2D6*1934G (OR=l,86; 95%CI 1,07-3,23) и маркер пониженного риска развития заболевания - аллель CYP2D6*1934A (OR=0,54; 95%CI 0,31-0,93) данного полиморфного локуса. При изучении делеционных полиморфизмов генов GSTM1 и GSTT1 выявлены ассоциации генотипа GSTM1*+/+ с АР в объединенной выборке больных (OR=l,9; 95%С1 1,35-2,67), у мальчиков (OR=l,67; 95%С1 1,03-1,69), у девочек (OR=2,01; 95%С1 1,17-3,44), в группах больных с отягощенной наследственностью (OR=2,17; 95%С1 1,42-3,33), сопутствующей БА (OR=l,87; 95%С1 1,16-2,99). Кроме того, обнаружена ассоциация данного генотипа с умеренно-повышенным уровнем общего IgE - OR=2,26 (95%CI 1,39-3,67).

В гене NAT2 проведен анализ полиморфных вариантов 481С>Т (NAТ2*5), 590G>A (NAT2*6), 857G>A (NAT2*7) и показаны статистически значимые различия в распределении частот генотипов и аллелей между контрольными группами русской и татарской этнической принадлежности. Также обнаружены статистически достоверные различия между больными АР и здоровыми донорами татарской этнической принадлежности в распределении частот генотипов в целом. Для генотипа NAT2*5/6 выявлена ассоциация с высоким уровнем общего сывороточного IgE - OR=l,9 (95%CI 1,04-3,59). При изучении полиморфного локуса (677С>Т) гена MTHFR установлено, что в контрольной группе частота гетерозиготного генотипа MTHFR*222Ala/Val достоверно выше, чем у больных с умеренно-повышенным уровнем общего сывороточного IgE (OR=0,49; 95%CI 0,291,00) и у больных с отягощенной по атопии наследственностью (OR=0,6; 95%С1 0,33-1,00).

В результате проведенного анализа полиморфных вариантов —590С>Т гена IL4, Gln576Arg гена IL4Ra, 113T>G гена IL18, Ala23Thr гена CCL11, 430С>Т и 1075А>С гена CYP2C9, 681G>A гена CYP2C19, делеции гена GSTT1 и замены Glu237Gly гена FceRI/З не выявлено ассоциаций данных ДНК-локусов с развитием аллергического ринита у детей в РБ.

Анализ межгенных взаимодействий, проведенный с помощью компьютерных программ MDR и GMDR, показал, что риск развития АР детерминирован взаимным влиянием генов цитокинов IL4Ra, IL13, IL18, а с высоким уровнем общего сывороточного IgE ассоциированы сочетания полиморфных локусов генов IL4, IL4Ra, IL18, CCL1. Определены комбинации полиморфных вариантов генов цитокинов и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков IL4, IL4Ra, ССЫ1, NAT2 и CYP1A1, предрасполагающие к развитию аллергического ринита у индивидов с отягощенной по атопии наследственностью.

Проведен анализ экспрессии генов цитокинов IL13, IL18 и CCL11 в клетках слизистой оболочки носа и лейкоцитах периферической крови у больных АР и здоровых доноров, в результате которого выявлено повышение уровня экспрессии данных генов в клетках слизистой оболочки носа у больных АР с тяжелым течением аллергического ринита в период обострения заболевания. Обнаружена ассоциация генотипа IL13*130Arg/Gin с повышенным уровнем экспрессии гена IL13 (р=0,05), также показано, что носители генотипов CCL11*-384А/А и CCL11*23Ala/Ala имеют выраженную тенденцию к повышению экспрессии гена CCL11 в клетках слизистой оболочки носа. В лейкоцитах периферической крови не обнаружено различий в экспрессии данных генов между больными АР и индивидами контрольной группы, что свидетельствует о важности изучения именно тканеспецифичной экспрессии генов при АР.

Таким образом, полученные нами данные о роли полиморфных локусов генов IL4R, IL13, IL18, IFNG, CCL11, CYP1A1, CYP2D6, GSTM1, NAT2, MTHFR в предрасположенности к аллергическому риниту в Республике Башкортостан, раскрывают некоторые патогенетические аспекты данного заболевания. Результаты настоящего исследования имеют высокую научную новизну и вносят вклад в общее представление о молекулярно-генетических основах развития данного заболевания у детей в Республике Башкортостан.

1. Маркерами повышенного риска развития аллергического ринита у индивидов татарской этнической принадлежности являются аллель IL4Ra*50Val полиморфного варианта Ile50Val гена IL4Ra и генотип IL13*130Gln/Gln полиморфного варианта Glnl30Arg гена IL13, маркерами пониженного риска - аллель IL4Ra*50Ile полиморфного варианта Ile50Val гена IL4Ra, генотип IFNG* 13/13 микросателлитного локуса (СА)п гена IFNG и генотип CYP1A1*1A/1A гена CYP1A1.

2. Обнаружена ассоциация генотипа IL18*-133G/G полиморфного варианта -133C>G гена 1L18 и генотипа NAT2*5/6 гена NAT2 с высоким уровнем общего сывороточного IgE, генотипа GSTM1*+/+ гена GSTM1 с умеренно-повышенным уровнем общего IgE, гаплотипа IL18*113Т/-133С гена IL18 с низким уровнем общего IgE в сыворотке крови.

3. Маркерами повышенного риска развития аллергического ринита у индивидов с отягощенной по атопии наследственностью являются генотип IL18*—133G/G полиморфного варианта -133C>G гена IL18 и генотип GSTM1*+/+ гена GSTM1, маркерами пониженного риска — генотип GSTM 1*0/0 гена GSTM1 и генотип MTHFR*222Ala/Val полиморфного вариантаAla222Val гена MTHFR.

4. Обнаружены тендерные различия в распределении частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов CYP2D6 и CCL11. Маркерами повышенного риска развития аллергического ринита у мальчиков являются генотип CYP2D6*1934G/G и аллель CYP2D6*1934G, маркером пониженного риска - аллель CYP2D6*1934А полиморфного варианта 1934G>A гена CYP2D6. У девочек маркером повышенного риска развития аллергического ринита является генотип CCL11*-384G/G полиморфного варианта -384A>G гена CCL11.

5. Установлено межгенное взаимодействие полиморфных вариантов генов цитокинов 1Ь4Яа, 1Ь13, 1Ы8 в детерминации риска развития аллергического ринита, а также сочетания полиморфных локусов, ассоциированные с высоким уровнем общего сывороточного ^Е -1Ь4, 1Ь41{а, 1Ь18, ССЬ1. Определены комбинации полиморфных вариантов генов цитокинов и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков 1Ь4, 1Ь4Яа, ССЫ1, ЫАТ2 и СУР1А1, предрасполагающие к развитию аллергического ринита у индивидов с отягощенной по атопии наследственностью.

6. Обнаружено повышение уровня экспрессии генов 1Ь13,1Ь18 и ССЫ1 в клетках слизистой оболочки носа у больных с тяжелым течением аллергического ринита в период обострения заболевания. Установлена ассоциация высокого уровня экспрессии гена 1ЫЗ с генотипом 1Ь13*130А^/01п. В лейкоцитах периферической крови не выявлено различий в экспрессии данных генов между больными АР и индивидами контрольной группы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Хузина, Альфия Хаматьяновна, Уфа

1. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены "предрасположенности ". (Введение в предиктивную медицину).- СПб, Интермедика, 2000. 272 с.

2. Белозеров Е.С., Буланьков Ю.И., Митин Ю.А. Болезни иммунной системы. Элиста: АПП «Джангар», 2005. - 272с.

3. Брагина С.Ю., Фрейдин М.Б., Тен И.А., Огородова JI.M. Полиморфизм генов биотрансформации ксенобиотиков GSTT1, GSTM1, CYP2E1 и CYP2C19 у больных атопической бронхиальной астмой // Бюллетень СО РАМНю. 2005. - Т.117. - №3. - С. 121-125.

4. Гланц С. Медико- биологическая статистика. М., Практика, 1999. -459с.

5. Животовский JI.A. Популяционная биометрия. Москва. Наука, 1991. — 272 с.

6. Иванова В.В., Буловская J1.H., Железникова Г.Ф., Дробаченко O.A. Особенности иммунометаболических взаимоотношений у детей, переносящих респираторно-вирусные инфекции // Иммунология. 1997.- №6. С.45-47.

7. Ильина Н.И. Аллергический ринит // Consilium medicum. 2000. -№2(8). - С.338-344.

8. Ю.Исаков В.А. Фармакогенетический анализ метаболизма и клинической эффективности ингибиторов протонного насоса // Клиническая фармакология и терапия. 2003. - Т. 12. - № 1. - С.32-37.

9. П.Карунас А.С., Измайлова А.Р., Загидуллин Ш.З., Хуснутдинова Э.К. Анализ ассоциации полиморфных вариантов генов цитокинов с бронхиальной астмой // Цитокины и воспаление. 2007. - Т.6. - №4. -С.22-28.

10. Кулинский В.И. Обезвреживание ксенобиотиков // Соросовский образовательный журнал. 1999. -№1. - С. 8-12.

11. Кукес В.Г. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты Москва, Реафарм, 2004. - 144с.

12. Лопатин А.С. Аллергический ринит // Русский медицинский журнал. -2003. Т. 11, №8. - С.446-452.

13. Лусс Л.В. Этиология, патогенез, проблемы диагностики и лечения аллергического ринита // Русский медицинский журнал. 2003. - Т.11, №12. - С.718-728.

14. Ляхович В.В., Вавилин В. А., Макарова С.И. Роль ферментов биотрансформации ксенобиотиков в предрасположенности к бронхиальной астме и формировании особенностей ее клинического фенотипа // Вестник РАМН. 2000. - №12. - С.36-41.

15. Макарова С.И., Вавилин В.А., Часовников О.Б., Гавалов С.М., Рябова О.А., Ляхович В.В. Влияние возраста и пола на предрасположенность кбронхиальной астме детей с различными генотипами GSTT1, GSTM1 и NAT2 //Пульмонология. 2002. - №5. - С.46-52.

16. Макарова С.И., Додунова Е.М., Иванова Г.Г., Вавилин В.А., Казначеева Л.Ф., Ляховия В.В. Полиморфизм гена NAT2 ассоциирован с риском развития атопического дерматита // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. - Т. 139. - №6. - С.628-631.

17. Райе Р.Х., Гуляева Л.Ф. Биологические эффекты токсических соединений: курс лекций. Новосибирск. 2003. — 203с.

18. Саприн А.Н. Ферменты метаболизма и детоксикации ксенобиотиков // Успехи биологической химии. 1991. - Т. 32. - С. 146-172.

19. Сибиряк С. В. Цитокины как регуляторы цитохром Р450 зависимых монооксигеназ. Теоретические и прикладные аспекты // Цитокины и воспаление. - 2003. - Т.2. - №2. - С. 12-21.

20. Сибиряк C.B., Черешнев В.А., Симбирцев A.C., Сибиряк Д.С., Гаврилова Т.В. Цитокиновая регуляция биотрансформации ксенобиотиков и эндогенных соединений. Екатеринбург, «Центр Академического обслуживания» УрО РАН, 2006. - 160 с.

21. Фрейдин М.Б., Брагина Е.Ю., Огородова Л.М., Пузырев В.П. Генетика атопии: современное состояние // Вестник ВОГиС. 2006. - Т. 10. - № 3. - С.492-503.

22. Фрейдин М.Б., Брагина Е.Ю., Огородова Л.М., Пузырев В.П. Полиморфизм генов глутатионтрансфераз ql и ml (GSTT1 и GSTM1) убольных атопической бронхиальной астмой в Западно-Сибирском регионе // Молекулярная биология. 2002. - Т.36. - № 4. - С.630-634.

23. Яковлева О. А., Косован А.И., Царук В.В. Прогностические фармакогенетические аспекты индивидуальной лекарственной переносимости нерешенные проблемы и перспективы // Украинский химиотерапевтический журнал. - 2000. — №1— С.63-70.

24. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 608с.

25. Apter A.J., Schelleman H., Walker A., Addya K., Rebbeck T. Clinical and genetic risk factors of self-reported penicillin allergy // J. Allergy Clin. Immunol. 2008. - V.l22. - P. 152-158.

26. Arai N., Nomura D., Villaret D., DeWaal Malefijt R., Seiki M., Yoshida M., Minoshima S., Fukuyama R., Maekawa M., Kudoh J. Complete nucleotide sequence of the chromosomal gene for human IL-4 and its expression // J. Immun. 1989. - V.142. - P.274-282.

27. Arakawa H., Morikawa A. The genetics of pollinosis // Clin. Exp. All. Rev. -2004. V.4. - P.3-7.

28. Ates N. A., Tursen U., Tamer L., Kanik A., Derici E., Ercan В., Atik U. Glutathione S-transferase polymorphisms in patients with drug eruption // Arch. Dermatol. Res. 2004. - V.295. - P.429-433.

29. Autrup H. Genetic polymorphisms in human xenobiotica metabolizing enzymes as susceptibility factors in toxic response // Mutat. Res. 2000. -V.464. - P.65-76.

30. Bae J.-W., Kim H.-K, Kim J.-H., Yang S.-I., Kim M.-J., Jang C.-G., Park Y.-S., Lee S.-Y. Allele and genotype frequencies of CYP2C9 in a Korean population // Br. J. Clin. Pharmacol. 2005. - V.60. - P.418-422.

31. Bartsch H., Nair U., Risch A., Rojas M., Wikman H., Alexandrov K. Genetic polymorphism of CYP genes, alone or in combination, as a risk modifier of tobacco-related cancers // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2000. - V.9. -P.3-28.

32. Batra J., Sharma S.K., Ghosh B. Arylamine N-acetyltransferase gene polymorphisms: markers for atopic asthma, serum IgE and blood eosinophil counts // Pharmacogenomics. 2006. - V.7. - P. 673-682.

33. Beierle I, Meibohm B, Derendorf H. Gender differences in pharmacokinetics and pharmacodynamics // Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. 1999. - V.37. -P.529-547.

34. Benson M., Strannegard I.L., Wennergren G.3 Strannegard O. Low levels of interferon-gamma in nasal fluid accompany raised levels of T-helper 2 cytokines in children with ongoing allergic rhinitis // Pediatr. Allergy Immunol. 2000. - V. 11. - P.20-28

35. Bertz R.J., Granneman G.R. Use of in vitro and in vivo data to estimate the likelihood of metabolic pharmacokinetic interactions // Clin. Pharmacokinet.- 1997.-V.32.-P.210-258.

36. Bidwell J., Keen L., Galagher G., Kimberly R., Huizinga T., McDermott M.F., Oksenberg J., McNicholl J., Pociot F., Hardt C., D'Alfonso S. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases // Genes Immun. -1999. V.l. - P.3-19.

37. Blum M., Grant D.M., McBride W., Heim M., Meyer U.A. Human arylamine N-acetyltransferase genes: isolation, chromosomal localization, and functional expression // DNA Cell Biol. 1990. - V.9. - P. 193-203.

38. Boduroglu K., Alanay Y., Alikasifoglu M., Aktas D., Tuncbilek E. Analysis of MTHFR 1298A>C in addition to MTHFR 677C>T polymorphism as a risk factor for neural tube defects in the Turkish population // Turk. J. Pediatr. -2005. V.47. - P.327-333.

39. Bouchardy C., Benhamou S., Dayer P. The effect of tobacco on lung cancer risk depends on CYP2D6 activity // Cancer Res. 1996. - V.56. - P.251-253.

40. Bustin S.A. Absolute quantification of mRNAusing real-time reverse transcription polymerase chain reaction assays // J. Mol. Endocrinol. 2000.- V.25. P.169-193.

41. Carroll W. Ashtma genetics: pitfalls and triumphs // Paed. Respir. Reviews. -2005. V.6. - P.68-74.

42. Cascorbi I., Brockmoller J., Roots I. A C4887A Polymorphism in Exon 7 of Human CYP1A1: Population Frequency, Mutation Linkages, and Impact on Lung Cancer Susceptibility // Cancer Research. 1996. - V.56. - P.4965-4969.

43. Celander M., Weisbrod R., Stegeman J.J. Glucocorticoid potentiation of cytochrome P4501A1 induction by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in porcine and human endothelial cells in culture // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1997. V. 232. - P. 749-753.

44. Ceyhan B.B., Burgos A., Palmer L.J., Drazen J. Lack of association of NAT2 (N-acetyl transferase 2) gene polymorphism with atopic asthma in Turkish subjects // Ind. J. of Human Genetics. 2004. - V.10. - P.65-69.

45. Chae S.C., Park Y.R., Oh G.J., Lee J.H., Chung H.T. The suggestive association of eotaxin-2 and eotaxin-3 gene polymorphisms in Korean population with allergic rhinitis // Immunogenetics. 2005. - V.56. - P.760-764.

46. Chan I.H.S., Tang N.L.S., Leung T.F., Huang W., Lam Y.Y.O., Li C.Y., Wong C.K., Wong G. W.K., Lam C.W.K. Study of gene-gene interactions for endophenotypic quantitative traits in Chinese asthmatic children // Allergy. -2008. V.63. - P. 1031-1039.

47. Chang H.S., Kim J.S., Lee J.H., Cho J.I, Rhim T.Y., Uh S.-T, Park B.L., Chung I.Y, Park C.-S, Shin H.D. A Single Nucleotide Polymorphism on the

48. Promoter of eotaxinl Associates with Its mRNA Expression and Asthma Phenotypes 1 //The J. of Immunol. 2005. - V. 174. - P. 1525-1531.

49. Chung K.F., Barnes P.J. Cytokines in asthma // Thorax. 1999. - V.54. -P.825-857.

50. Ciccarone V.C., Chrivia J., Hardy K.J., Young H.A. Identification of enhancer-like elements in human IFN-gamma genomic DNA // J. Immunol. -1990. V.144. - P.725-730.

51. Coffman R.L., Catty J. A T cell activity that enhances polyclonal IgE production and its inhibition by interferon-gamma // J. Immunol. 1986. -V.136. - P.949-954.

52. Cookson W.O., Hopcin J.M. Dominant inheritance of atopic immunoglobulin-E responsiveness // Lancet. 1988. - V.l. - P.86-88.

53. Cosma G., Crofts F., Taioli E., Toniolo P., Garte S. Relationship between genotype and function of the human CYP1A1 gene // J. Toxicol. Environ. Health. 1993.-V. 40.-P. 309-316.

54. S-mephenytoin metabolism in humans // J. Biol. Chem. 1994. - V.269. -P. 15419-15422.

55. Deichmann K., Bardutzky J., Forster J., Heinzmann A., Kuehr J. Common polymorphisms in the coding part of the IL4-receptor gene // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - V.231. - P.696-697.

56. Ding X., Kaminsky L.S. Human extrahepatic cytochromes P450: function in xenobiotic metabolism and tissue-selective chemical toxicity in the respiratory and gastrointestinal tracts // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. -2003.-V. 43.-P. 149-173.

57. Dizier M.-H., Bouzigon E., Guilloud-Bataille M. Genome screen in the French EGEA study: detection of Linked regions shared or not shared by allergic rhinitis and asthma // Genes and Immunity. 2005. - V.5. - P.95-102.

58. Donnadieu E., Cookson W.O., Jouvin M.-FI. Allergy-associated polymorphisms of the FceRip subunit do not impact its two amplification function // J. Immunol. 2000. - V. 165. - P.3917-3922.

59. Fantuzzi G., Dinarello C.A. Interleukin-18 and interleukine-lb: two cytokine substrates for ICE (caspase-1) // J. Clin. Immunol. 1999.-V. 19. - P. 1-11.

60. Fleming I. Cytochrome P450 epoxygenases as EDHF synthase // Pharmacol. Res. 2004. - V.49. - P.525-533.

61. Fryer A.A., Spiteri M.A., Bianco A. The -403G>A promoter polymorphism in the RANTES gene is associated witm atopy znd asthma // Genes Immun. -2000. V.l. -P.509-514.

62. Furumoto Y., Hiraoka S., Kawamoto K., Masaki S., Kitamura T., Okumura K., Ra C. Polymorphisms in FcepsilonRI beta chain do not affect IgE-mediated mast cell activation // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. -V.273. - P.765-771.

63. Giedraitis V, He B., Hillert J. Mutation screening of the interferon-gamma gene as a candidate gene for multiple sclerosis // Eur. J. Immunogenet. -1999. V.26. - P.257-259

64. Giedraitis V., He B., Huang W.X. Cloning and mutation analysis of the human IL-18 promoter: a possible role of polymorphisms in expression regulation // J. Neuroimmunol. 2001. - V. 112. - P. 146-152.

65. Glazier A.M., Nadeau J.H., Aitman T.J. Finding genes that underlie complex traits // Science. 2002 - Vol. 20. - P. 2345-2349.

66. Goldstein J.A. Clinical relevance of genetic polymorphisms in the human CYP2C subfamily // Br. J. Clin. Pharmacol. 2001. - V.52. - P.349-355.

67. Gonzalez F.J., Skoda R.C., Kimura S., Umeno M., Zanger U.M., Nebert D.W., GelboinH.V., Hardwick J.P., Meyer U.A. Characterization of the common genetic defect in humans deficient in debrisoquine metabolism // Nature. 1988. - V.331. - P.442-446.

68. Gough A.C., Smith C.A., Howell S.M, Wolf C.R., Bryant S.P., Spurr N.K. Localization of the CYP2D gene locus to human chromosome 22ql3.1 by polymerase chain reaction, in situ hybridization, and linkage analysis // Genomics. 1993. - V. 15.- P.430-432.

69. Goyette P., Pai A., Milos R., Frosst P., Tran P., Chen Z., Chan M., Rozen R. Gene structure of human and mouse methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) // Mamm. Genome. 1998. - V.9. - P.652-656.

70. Goyette P., Sumner J.S., Milos R., Duncan A.M., Rosenblatt D.S., Matthews R.G., Rozen R. Human methylenetetrahydrofolate reductase: isolation of cDNA, mapping and mutation identification // Nat. Genet. 1994. - V.7. -P. 195-200.

71. Graves P.E., Kabesch M., Halonen M., Holberg C.J., Baldini M., Fritzsch C., Weiland S.K., Erickson R.P., von Mutius E., Martinez F.D. A cluster of seven tightly linked polymorphisms in the IL13 gene is associated with total serum

72. E levels in three populations of white children // J. Allergy Clin. Immunol. 2000. - V.105. - P.506-513.

73. Gray I.C., Nobile C., Muresu R., Ford S., Spurr N.K. A 2.4-megabase physical map spanning the CYP2C gene cluster on chromosome 10q24 // Genomics. 1995. - V.28. - P.328-332.

74. Gronau S., Koenig-Greger D., Jerg M., Riechelmann H. GSTM1 enzyme concentration and enzyme activity in correlation to the genotype of detoxification enzymes in squamous cell carcinoma of the oral cavity // Oral Diseases. 2003. - Vol.9. - P. 62-67.

75. Hagg S., Spigset O., Dahlqvist R. Influence of gender and oral contraceptives on CYP2D6 and CYP2C19 activity in healthy volunteers // Br. J. Clin. Pharmacol. 2001. -V.51. - P. 169-173.

76. Haagerup A., Bjerke T., Schoitz P.O., Binderup H.G., Dahl R., Kruse T.A. Rhinitis-a total genome-scan for susceptibility genes suggests a locus on chromosome 4q24-q27 // Eur. J. Hum. Genet. 2001. - V.9. - P.945-952.

77. Hambali Z., Ngah W.Z., Wahid S.A., ICadir K.A. Effect of ovariectomy and sex hormone replacement on glutathione and glutathione-related enzymes in rat hepatocarcinogenesis // Pathology. 1995. - V.27. P.30-35.

78. Hanson B., McGue M., Roitman-Johnson B., Segal N.L., Bouchard T.J. Jr., Blumenthal M.N. Atopic disease and immunoglobulin E in twins reared apart and together//Am. J. Human Genet. 1991. - Vol.48. -P.873-879.

79. Hasler J., Estabrook R., Murray M., Pikuleva I.; Waterman M.; Capdevila J.; Holla V.; I-Ielvig C.; Falck J.R.; Farrell G.; Kaminsky L.S.; Spivack S.D.; Boitier E.; Beaune P. Human cytochromes P450 // Mol. Asp. of Medicine. -1999. V.20. - P. 1-137.

80. Hatagima A. Genetic polymorphisms and metabolism of endocrine disruptors in cancer susceptibility // Cad. Saude Publica. 2002. -V. 18. - P. 357-377.

81. Hayashi S.I., Watanabe J., Nakachi K., Kawajiri K. PCR detection of an A/G polymorphism within exon 7 of the CYP1A1 gene // Nucleic Acids Res. -1991.-V. 19. P. 4797.

82. He J-Q., Chan-Yeung M., Becker A.B., Dimich-Ward H., Ferguson A.C., Manfreda J., Watson W.T., Sandford A.J. Genetic variants of the IL 13 and IL4 genes and atopic diseases in at-risk children // Genes and Immunity.2003. V.4. - P.385-389.

83. Hein H., Schlüter C., Kulke R., Christophers E., Schroder J.M., Bartels J. Genomic organization, sequence, and transcriptional regulation of the human eotaxin gene // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - V.237. - P.537-542.

84. Heinzmann A., Gerhold K., Ganter K., Kurz T., Schuchmann L., Keitzer R., Berner R., Deichmann K.A. Association study of polymorphisms within interleukin-18 in juvenile idiopatic arthritis and bronchial asthma // Allergy.2004. V.59. - P.845-849.

85. Hershey G., Friedrich M.5 Esswein L., Thomas M.L., Chatila T.A. The association of atopy with a gain-of-function mutation in the alpha subunit of the interleukin-4 receptor // New Eng. J. Med. 1997. - V.337. - P. 17201725.

86. Hickman D., Risch A., Buckle V., Spurr N.K., Jeremiah S.J., McCarthy A., Sim E. Chromosomal localization of human genes for arylamine N-acetyltransferase // Biochem. J. 1994. - V.297. - P.441-445.

87. Hill M.R., James A.L., Faux J.A., Ryan G., Hopkin J.M., le Souef P., Musk A.W., Cookson W.O. FceRI-p polymorphism and risk of atopy in a general population sample // Br. Med. J. 1995. - V.311. - P.776-779.

88. Hill M.R., Cookson W.O. A new variant of the 3 subunit of the high-affinity receptor for Immunoglobulin E (FceRI-p E237G): association with measures of atopy and bronchial hyper-responsiveness // Hum. Mol. Genet. 1996. -V.5. -P.959-962.

89. Holla L.I., Stejskalova A., Vasku A. Polymorphisms of the GSTM1 and GSTT1 genes in patients with allergic diseases in the Czech population// Allergy. 2006. - V.61. - P.265-267.

90. Hobbs C.A., Sherman S.L., Yi P., Hopkins S.E., Torfs C.P., Hine R.J., Pogribna M., Rozen R., James S.J. Polymorphisms in genes involved in folate metabolism as maternal risk factors for Down syndrome // Am. J. Hum. Genet. 2000. - V.67. - P.623-630.

91. Hoh J, .Wille A., Ott J. Trimming, weighting, and grouping SNPs in human case-control association studies // Genome Res. V.l 1. - P.2115-2119.

92. Hopkin J.M. Molecular genetics of the high affinity IgE reseptor // Monogr. Allergy. 1996.- V.33.-P.97-108.

93. Horiguchi S., Okamoto Y. Role of T cell in allergic rhinitis // Clin. Exp. All. Rev. 2005. - V.5. -P.64-67.

94. Howard T.D., Whittaker P.A., Zaiman A.L., Koppelman G.H., Xu J., Hanley M.T., Meyers D.A., Postma D.S., Bleecker E.R. Identification and association of polymorphisms in the interleukin-13 gene with asthma and atopy in a

95. Huebner M., Kim D.Y., Ewart S., Karmaus W., Sadeghnejad A., Arshad S.H. Patterns of GATA3 and IL13 gene polymorphisms associated with childhood rhinitis and atopy in a birth cohort // J. Allergy Clin. Immunol. -2008. V.121. -P.408-414.

96. Hurme M., Pessi T., Karjalainen J. Genetics of onflammation and atopy // Ann. Med. 2003. - V.35. - P.256-258.

97. Infante-Rivard C., Gauthrin D., Malo J.L, Suissa S. Maternal smoking and childhood asthma // Am. J. Epidemiol. 1999. - V.47. - P.529-531.

98. Inoue K, Asao T, Shimada T. Ethnic-related differences in the frequency distribution of genetic polymorphisms in the CYP1A1 and CYP1B1 genes in Japanese and Caucasian populations // Xenobiotica. 2000. -V.30. - №3. -P. 285-295.

99. Ivaschenko T.E, Sideleva O.G, Baranov V.S. Glutathione-S-transferase jj. and theta gene polymorphisms as new risk factors of atopic bronchial asthma // J. Mol. Med. 2002. - V.80. - P.39-43.

100. Jujo K, Renz H, Abe J, Gelfand E.W, Leung D.Y. Decreased interferon gamma and increased interleukin-4 production in atopic dermatitis promotes IgE synthesis// J. Allergy Clin. Immunol. 1992. - V.90. - P.323-331.

101. Jurima-Romet M, Foster B.C., Casley W.L, Rode A, Vloshinsky P, Huang H.S, Geertsen S. CYP2D6-related oxidation polymorphism in a Canadian Inuit population // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1997. - V.75. - P. 165-172.

102. Khan E., Tchekanda H., Dickel T., Bruckner H.F., Merk B. N-acetyltransferase 2 Acetylation Genotypes and Serum IgE Levels // 34th. Annual European Society for Dermatological Research (ESDR) Meeting, 911 September, 2004, Vienna, Austria.

103. Khedhaier A., Hassen E., Bouaouina N., Gabbouj S., Ahmed S.B., Chouchane L. Implication of Xenobiotic Metabolizing Enzyme gene (CYP2E1, CYP2C19, CYP2D6, mEH and NAT2) polymorphisms in breast carcinoma // BMC Cancer. 2008. - V. 18. - P. 109.

104. Kim J.J., Min J.Y., Lee J.H. Polymorphisms in the IL-13 and IL-4 receptor alpha genes and allergic rhinitis // Eur. Arch. Otorhinolaryngol. 2007. -V.264. - P.395-399.

105. Kimura M., Ieiri I., Mamiya K., Urae A., Higuchi S. Genetic polymorphism of cytochrome P450s, CYP2C19, and CYP2C9 in a Japanese population // Ther. Drug. Monit. 1998. -V. 20. - P. 243-247.

106. Kimura S., Umeno M., Skoda R.C., Meyer U.A., Gonzalez F.J. The human debrisoquine 4-hydroxylase (CYP2D) locus: sequence and identification ofthe polymorphic CYP2D6 gene, a related gene, and a pseudogene // Am. J. Hum. Genet. 1989. - V.45. - P.889-904.

107. Krajinovic M., Labuda D., Richer C., Karimi S., Sinnett D. Susceptibility to childhood acute lymphoblastic leukemia: influence of CYP1A1, CYP2D6, GSTM1, and GSTT1 genetic polymorphisms // Blood. 1999. - V. 93. - №5. -P. 1496-1501.

108. Kruse S., Foster J., Kuehr J., Deichmann K.A. Characterization of the membrane bound and a soluble form of human IL4R produced by alternative splicing // Int. Immun. 1999a. - V. 11. - P. 1956-1970.

109. Kumar A., Ghosh B. A single nucleotide polymorphism (A --> G) in intron 3 of IFNgamma gene is associated with asthma // Genes Immun. 2008. -V.9. -P.294-301.

110. Kuster H, Zhang L, Brini A, MacGlashan D.W, Kinet J.P. The gene and cDNA for the human high affinity immunoglobulin E receptor beta chain and expression of the complete human receptor // J. Biol. Chem. 1992. - V.267. -P.12782-12787.

111. Llanes E, Quiralte J, Lopez E, Sastre B, Chacartegui M, Del Pozo V, Palomino P, Lahoz C, Cardaba B. Analysis of Polymorphisms in Olive Pollen Allergy: IL13, IL4RA, IL5 and ADRB2 Genes // Int. Arch. Allergy Immunol. 2008. -V. 148. - P.228-238.

112. Lee A.J, Cai M.X, Thomas P.E, Conney A.H, Zhu B.T. Characterization of the oxidative metabolites of 17beta-estradiol and estrone formed by 15 selectively expressed human cytochrome p450 isoforms // Endocrinology. -2003. V. 144. - P.3382-3398.

113. Lee C.-C, Lin W.-Y, Wan L, Tsai Y, Tsai C.-H, Huang C.-M, Chen C.-P, Tsai F.-J. Association of Interleukin-18 Gene Polymorphism With Asthma in Chinese Patients // J. Clin. Lab. Anal. 2008. - V.22. - P.39-44.

114. Lee H.-M, Park S.A, Chung S.-W, Woo J.S, Chae S.W, Lee S.H, Kang H.J, Hwang S.J. Interleukin-18/-607 gene polymorphism in allergic rhinitis // Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol. 2006. - V.70. - P. 1085-1088.

115. Leff M.A, Fretland A.J, Doll M.A, Hein D.W. Novel human N-acetyltransferase 2 alleles that differ in mechanism for slow acetylator phenotype // J. Biol. Chem. 1999. - V.274. - P.34519-34522.

116. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2A(-AACt) Method // METHODS. 2001. - V.25. -P.402-408.

117. Loza M.J., Chang B.-L. Association between Q551R IL4R genetic variants and atopic asthma risk demonstrated by meta-analysis // J. Allergy Clin. Immunol. 2007. - V. 120. - P.578-585.

118. Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in molecular biology / Ed. Walker J.M. N.Y.; Haman press, 1984. -V.2. P.31-34.

119. Meisel C., Roots I., Cascorbi I., Brinkmann U., Brockmoller J. How to manage individualized drug therapy: application of pharmacogenetic knowledge of drug metabolism and transport // Clin. Chem. Lab. Med. -2000. V.38. - P.869-876.

120. Mechanic L.E., Luke B.T., Goodman J.E., Chanock S.J., Harris C.C. Polymorphism Interaction Analysis (PIA): a method for investigating complex gene-gene interactions // BMC Bioinformatics. 2008. - V.9. -P.146.

121. Meyer U.A., Zanger U.M. Molecular mechanisms of genetic polymorphisms of drug metabolism // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1997. - V.37. -P.269-296.

122. Miners J.O., Birkett D.J. Cytochrome P4502C9: an enzyme of major importance in human drug metabolism // Br. J. Clin. Pharmacol. 1998. — V.45. - P.525-538.

123. Miyahara S., Miyahara N., Takeda K., Joetham A., Gelfand E.W. Physiologic assessment of allergic rhinitis in mice: Role of the high-affinity IgE receptor (FceRI) // J. Allergy Clin. Immunol. 2005. - V.116, №5. -P. 1020-1027.

124. Miyamasu M., Sekiya T., Ohta K., Ra C., Yoshie O., Yamamoto K., Tsuchiya N., Tokunaga K., Hirai K. Variations in the human CC chemokine eotaxin gene // Genes. Immun. 2001. - V.2. - P.461-463.

125. Miyuki K., Ichiro I., Koshuke M., Akinori U., Shun H. Genetic polymorphism of cytochrome P450s, CYP2C19 and CYP2C9 in a Japanese population // Therapeutic Drug Monitoring. 1998. - V.20. - P.243-247.

126. Moore J.H., Williams S.M. New strategies for identifying gene-gene interactions in hypertension // Ann. Med. 2002. - V.34. - P.88-95.

127. Motsinger-Reif A.A., Fanelli T.J., Davis A.C., Ritchie M.D. Power of grammatical evolution neural networks to detect gene-gene interactions in the presence of error // BMC Res. Notes 2008. - V. 1. - P.65.

128. Mosmann T.R., Cherwinski H., Bond M.W., Giedlin M.A., Coffman R.L. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins // J. Immunol. 1986. - V.136. -P.2348-2357.

129. Muntjewerff J.W., Kahn R.S., Blom H.J., den Heijer M. Homocysteine, methylenetetrahydrofolate reductase and risk of schizophrenia: a metaanalysis // Mol. Psychiatry. 2006. - V.l 1. - P. 143-149.

130. Nacak M., Aynacioglu A.S., Filiz A. Cascorbi I., Erdal M.E., Yilmaz N., Ekinci E., Roots I. Association between the N-acetilation genetic polymorphism and bronchial asthma // Br. J. Clin. Pharmacol. 2002. - V.54. -P.671-674.

131. Nacak M., Erbagsi Z., Aynacioglu A.S. Human arylamine N-acetyltransferase 2 polymorphism and susceptibility to allergic contact dermatitis // Int. J. of Dermatology. 2004. - V.45. - P.323-326.

132. Nakachi K., Imai K., Hayashi S., Kawajiri K. Polymorphisms of the CYP1A1 and glutathione S-transferase genes associated with susceptibility to lung cancer in relation to cigarette dose in a Japanese population // Cancer Res. 1993. V.53. - P.2994-2999.

133. Nakamotoa K., Kiddb J. R., Jenisonc R. D., Klaassena C. D., Wana Y.-J. Y., Kiddb K. K., Zhonga X. Genotyping and haplotyping of CYP2C19 functional alleles on thin-film biosensor chips // Pharmacogenetics and Genomics. -2007. V.l7. - P. 103-114.

134. Nakamura H., Luster A.D., Nakamura T., In K.H., Sonna L.A., Deykin A., Israel E., Drazen J.M., Lilly C.M. Variant eotaxin: its effects on the asthma phenotype // J. Allergy Clin. Immunol. 2001. - V.l08, №6. - P.946-953.

135. Nakao F., Ihara K., Kusuhara K., Sasaki Y., Kinukawa N., Takabayashi A., Nishima S., Hara T. Association of IFN-gamma and IFN regulatory factor 1 polymorphisms with childhood atopic asthma // J. Allergy Clin. Immunol. -2001. -V. 107. -P.499-504.

136. Nataga H., Muton H., Kumahara K., Arimoto Y., Tomemori T., Sakurai D., Arase K., Ohno K., Yamakoshi T., Nakano K., Okawa T., Numata T., Konno

137. Nishiyama C, Akizawa Y, Nishiyama M. Polymorphisms in the FceRI(3 Promotor Region Affecting Transcription Activity: A Possible Promoter-Depent Mechanism for Association between FceRI(3 and Atopy // J. Immunol. 2004. - V.173. - P.6458-6464.

138. Noguchi E, Shibasaki M., Arinami T, Takeda K, Yokouchi Y, Kawashima T, Yanagi H, Matsui A, Hamaguchi H. Association of asthma and the interleukin-4 promoter gene in Japanese // Clin. Exp. Allergy. 1998. - V.28. -P.449-453.

139. Ott J., Hoh J. Set association analysis of SNP case-control and microarray data. J Comput Biol. 2003. - V. 10. - P.569-574.

140. Passali D., Lauriello M., Mezzedini C., Passali G.C.; Bellussi L. Natural history of allergic rhinitis // Clin. Applied Immunol. Rev. 2001. - V.l. -P.207-216.

141. Paul W.E., Seder R.A. Lymphocyte responses and cytokines // Cell. 1994. - V.76.-P.241-251.

142. Pavanello S., Clonfero E. Biological indicators of genotoxic polymorphisms // Mutat. Res. 2000. - V.463. P.285-308.

143. Pawankar R. Allergic rhinitis and asthma: are they manifestations of one syndrome? // Clin. Experim. Allergy. 2006. - V.36. - P. 1 -4.

144. Pawankar R., Okuda M., Hasegawa S., Suzuki K., Yssel H., Okubo K., Okumura K., Ra C. Interleukin-13 expression in the nasal mucosa of perennial allergic rhinitis // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995. - V.l52. -P.2059-2067.

145. Pene J., Chretien I., Rousset F., Briere F., Bonnefoy J.Y., de Vries J.E. Modulation of IL-4-induced human IgE production in vitro by IFN-gamma and IL-5: the role of soluble CD23 (s-CD23) // J. Cell Biochem. 1989. -V.39. - P.253-264

146. Pompeo F., Brooke E., Kawamura A., Mushtaq A., Sim E. The pharmacogenetics of NAT: structural aspects // Pharmacogenomics. 2002. -V.3. - P.19-30.

147. Pravica V., Asderakis A., Perrey C., Hajeer A., Sinnott P.J., Hutchinson I.V. In vitro production of IFN-g correlates with CA repeat polymorphism in the human IFN-g gene // Eur. J. Immunogenet. 1999. - V.26. - P. 1-3.

148. Primakoff P., Myles D. The ADAM gene family: surface proteins with adhesion and protease activity // Trends Genet. 2000. - V. 16. - P.83-87.

149. Pullerits T., Linden A., Praks L., Cardell L.O., Lotvall J. Upregulation of nasal mucosal eotaxin in patients with allergic rhinitis during grass pollen season: effect of a local glucocorticoid // Clin. Exp. Allergy. 2000. - V.30. - P.1469-1475.

150. Raby B., Steen K., Lazarus R. Eotaxin polymorphisms and serum total IgE levels in children with asthma // J. Allergy Clin. Immunol. 2006. - V.l 17. -P.298-305.

151. Rademaker M. Gender differences in pharmacokinetics // Eur. J. Drug. Metab. Pharmacokinet. 1996. - V.21. - P. 123-128.

152. Rocha L., Garcia C., de Mendonca A., Gil J.P., Bishop D.T., Lechner M.C. N-acetyltransferase (NAT2) genotype and susceptibility of sporadic Alzheimer's disease // Pharmacogenetics. 1999 - V. 9. - P. 9-15.

153. Roddam P.L., Rollinson S., Kane E., Roman E., Moorman A., Cartwright R., Morgan G.J. Poor metabolizers at the cytochrome P450 2D6 and 2C19 loci are at increased risk of developing adult acute leukaemia // Pharmacogenetics. -2000. V. 10.-P. 605-615.

154. Romagnani S. The Thl/Th2 paradigm // Immunol. Today. 1997. - V.18. -P.263-266.

155. Rosenwasser L.J., Klemm D.J., Dresback J.K., Inamura H., Mascali J.J., Klinnert M., Borish L. Promoter polymorphisms in the chromosome 5 gene cluster in asthma and atopy // Clin. Exp. Allergy. 1995. - V.25. - P.74-78.

156. Ruiz-Linares A. Dinucleotide repeat polymorphism in the interferongamma (IFNG) gene//Hum. Mol. Genet. 1993. - V.2. - P. 1508.

157. Sachse C., Brockmoller J., Bauer S., Roots I. Cytochrome P450 2D6 variants in a Caucasian population: allele frequencies and phenotypic consequences // Am J Hum Genet. 1997. - V.602 - P.265-271.

158. Salib R.J., Drake-Lee A., Howarth P.H. Allergic rhinitis: past, present and the future // Clin. Otolaryngol. 2003. - V.28. - P.291-303.

159. Sandfor A.J, Shirakawa T, Moffatt M.F, Daniels S.E, Ra C, Faux J.A, Young R.P, Nakamura Y, Lathrop G.M, Cookson W.O. Localization of atopy and beta subunit of high-affinity IgE receptor (FceRI) on chromosome 11 q // Lancet. 1993. - V.341. - P.332-334.

160. Savage V.M, Webb C.T, Norberg J. A general multi-trait-based framework for studying the effects of biodiversity on ecosystem functioning // J. Theor. Biol. 2007 - V.21. - P. 213-229.

161. Schall T.J, Bacon K.B. Chemokines, leukocyte trafficking, and inflammation // Curr. Opin. Immunol. 1994. - V.6. - P.865-873.

162. Scordo M.G, Caputi A.P, D'Arrigo C, Fava G, Spina E. Allele and genotype frequencies of CYP2C9, CYP2C19 and CYP2D6 in an Italian population // Pharmacol Res. 2004. - V.50. - P. 195-200.

163. Seng K. C, Gin G. G, Sangkar J. V, Phipps M. E. Frequency of Cytochrome P450 2C9 (CYP2C9) Alleles in Three Ethnic Groups in Malaysia// Asia Pacific J. of Mol. Biol, and Biotech. 2003. - V.l 1. - P.83-91.

164. Shaida A, Kenyon G, Devalia J, Davies R.J, MacDonald T.T, Pender S.L. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in the nasal mucosa of patients with perennial allergic rhinitis // J. Allergy Clin. Immunol. 2001. - V.108. -P.791-796.

165. Schall T.J, Bacon K.B. Chemokines, leukocyte trafficking, and inflammation // Curr. Opin. Immunol. 1994. - V.6. - P.865-873.

166. Schlesselman J, Case-control studies. Design, conduct, analysis // New York, Oxford: Oxford University Press. 1982. - P.58-96.

167. Schuller M., Stelcl M., Izakovicova-Holla L., Vasku A. Lack of association of the Glu237Gly polymorphism in the gene for the Fee receptor (3-subunit with atopic diseases in a Czech population // Scripta Medica. 2000. - V.73. -P.237-244.

168. Smirnov D.V., Smirnova M.G., Korobko V.G., Frolova E.l. Tandem arrangement of human genes for interleukin-4 and interleukin-13: resemblance in their organization // Gene. 1995. - V.155. - P.277-281.

169. Smith G., Stanley L.A., Sim E., Strange R.C., Wolf C.R. Metabolic polymorphisms and cancer susceptibility // Cancer Surv. 1995. V.25. -P.27-65.

170. Stellato C., Matsukura S., Fal A., White J., Beck L.A., Proud D., Schleimer R.P. Differential regulation of epithelial-derived C-C chemokine expression by IL-4 and the glucocorticoid budesonide // J. Immunol. 1999. - V.163. -P.5624-5632.

171. Sullivan-Klose T.H., Ghanayem B.I., Bell D.A., Zhang Z.Y., Kaminsky L.S., Shenfield G.M., Miners J.O., Birkett D.J., Goldstein J. A. The role of the

172. CYP2C9-Leu359 allelic variant in the tolbutamide polymorphism // Pharmacogenetics. 1996. - V.6. - P.341-349.

173. Suzuki I, Yamaguchi E, Hizawa N, Itoh A, Kawakami Y.A. new polymorphism in the 5' flanking region of the human interleukin (IL)-4 gene // Immunogenetics. 1999. - V.49. -P.738-739.

174. Tamer L, Calico M, Ates N.A, Yildirim H, Ercan B, Saritas E, Unlu A, Atik U. Glutathione-S-transferase gene polymorphisms (GSTT1, GSTM1, GSTP1) as increased risk factors for asthma // Respirology. 2004. - V.9. -P.493-498.

175. Tamer L, Calikoglu M, Ates N.A, Yildirim H, Karakas S, Atik U. Relationship between N-acetyl transferase-2 gene polymorphism and risk of bronchial asthma // Tuberk. Toraks. 2006. - V.54. - P. 137-143.

176. Tang M, Kemp A, Varigos G. IL-4 and interferon-gamma production in children with atopic disease // Clin. Exp. Immunol. 1993. - V.92. - P. 120124.

177. Targowski T, Jahnz-Rozyk K, Plusa T, Glodzinslca-Wyszogrodzka E. Influence of age and gender on serum eotaxin concentration in healthy and allergic people // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. 2005. - V.15. -P.277-282.

178. Terumichi F, Tatsuo S, Ikuhisa Y. Regulatory effect of histamine HI reseptor antagonist on the expression of messenger RNA encoding CCchemokines in the human nasal mucosa // J. Allergy Clin. Immunol. 2001. -V.107. - P.123-128.

179. Tone M., Thompson S.A., Tone Y., Fairchild P.J., Waldmann H. Regulation of IL-18 (IFN-gamma-inducing factor) gene expression // J. Immunol. 1997. -V. 159. - P.6156-6163.

180. Umland S.P., Garlisi C.G., Shah H., Wan Y., Zou J., Devito K.E., Huang W.M., Gustafson E.L., Ralston R. Human ADAM33 mRNA expression profile and post-transcriptional regulation // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. -2003.-V.29.-P.571-582.

181. Van Cauwenberge P.B., Ciprandi G., Vermeiren J.S.J. Epidemiology of Allergic Rhinitis. The UCB Institute of allegy, 2001. - 27p.

182. Van Eerdewegh P., Little R.D., Dupuis J., Del Mastro R.G., Falls K., Simon J., Torrey D., Pandit S., McKenny J., Braunschweiger K., Walsh A., Liu Z.,

183. Hayward B., Folz C., Manning S.P., Bawa A., Saracino L., Thackston M., Benchekroun Y., Capparell N. Association of the ADAM33 gene with asthma and bronchial hyperresponsiveness // Nature. 2002. - V.418. - P.426-430.

184. Vatsis K.P., Weber W.W., Bell D.A. Dupret J.M., Evans D.A., Grant D.M., Hein D.W., Lin H.J., Meyer U.A., Relling M.V. Nomenclature for N-acetyltransferases//Pharmacogenetics. 1995. -V. 5. - P. 1-17.

185. Verhaeghe B., Gevaert P., Holtappels G., Lukat K.F., Lange B., Van Cauwenberge P., Bachert C. Up-regulation of IL18 in allergic rhinitis // Allergy. 2002. - V.57. - P.825-830.

186. Vercelli D. Genetics of IL-13 and functional relevance of IL-13 variants // Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 2002. - V.2. - P.389-393.

187. Walley A.J., Cookson W.O. Investigation of an interleukin-4 promoter polymorphism for associations with asthma and atopy // J. Med. Genet. -1996. V. 33. - P.689-692.

188. Wang M., Xing Z.-M, Lu C., Ma Y.X., Yu D.L., Yan Z., Wang S.W., Yu L.S. A common IL13 Argl30Gln single nucleotide polymorphism among Chinese atopy patients with allergic rhinitis // Hum. Genet. 2003. - V.l 13. -P.387-390.

189. Wang T.-N, Chiang W., Tseng H.-I., Chu Y.-T., Chen W.-Y., Shin N.-FI., Ko Y.-C. The polymorphisms of Eotaxin 1 and CCR3 genes influence on serum IgE, Eotaxin levels and mild asthmatic children in Taiwan // Allergy. -2007.-V.62.-P.1125-1130.

190. Wang W., Ballatori N. Endogenous glutathione conjugates: occurrence and biological function // Pharmacol. Rev. 1998. - V.50. - P.335-355.

191. Webb G., Vaska V., Coggan M., Board P. Chromosomal localization of the gene for the human theta class glutathione transferase (GSTT1) // Genomics.- 1996.-V. 33. P.121-123.

192. Wen S.Y., Wang H., Sun O.J., Wang S.Q. Rapid detection of the known SNPs of CYP2D9 using oligonucleotide microarray // World J. Gastroenterol. -2003. -V.9. P. 1342-1346.

193. Werner M., Herbon N., Gohlke H., Altmuller J., Knapp M., Heinrich J., Wjst M. Asthma is associated with single-nucleotide polymorphisms in ADAM33 // Clin. Exp. Allergy 2004. - V.34. - P.26-31.

194. Wester M.R, Yano J.K., Schoch G.A., Yang C., Griffin K.J., Stout C.D., Johnson E.F. The structure of human cytochrome P450 2C9 complexed with flurbiprofen at 2.0-A resolution // J. Biol. Chem. 2004. - V.279. - P.35630-35637.

195. Wills-Karp M. IL12/IL13 axis in allergic asthma // J. Allergy Clin. Immunol. 2001. -V. 107. - P.9-18.

196. Wills-Karp M., Chiaramonte M. Interleukin-13 in asthma // Curr. Opin. Pulm. Med. 2003. -V.9. - P.21-27.

197. Wolf C.R., Smith G. Cytochrome P450 CYP2D6 // IARC Sci. Publ. 1999.- V.148. P.209-229.

198. Wu X, Di Rienzo A, Ober C. A population genetics study of single nucleotide polymorphisms in the interleukin 4 receptor alpha (IL4RA) gene. -Genes Immun. 2001. V.2. - P. 128-134.

199. Wuthrich B, Baumann E, Fries R.A, Schnyder U.W. Total and specific IgE (RAST) in atopic twins // Clin. Allergy. 1981. - V.l 1. - P. 147-154.

200. Xu S, Wang Y, Roe B, Pearson W.R. Characterization of the human class Mu glutathione S-transferase gene cluster and the GSTM1 deletion // J. Biol. Chem.- 1998.-V.273.-P.3517-3527.

201. Yamada K, Chen Z, Rozen R, Matthews R.G. Effects of common polymorphisms on the properties of recombinant human methylenetetrahydrofolate Reductase // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2001. -V.98. - P.14853-14858.

202. Yasar U, Eliasson E, Dahl M.L, Johansson I, Ingelman-Sundberg M, Sjoqvist F. Validation of methods for CYP2C9 genotyping: frequencies of mutant alleles in a Swedish population // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1999. V. 254-P. 628-631.

203. Yoshinaka T, Nishii K., Yamada K, Sawada H, Nishiwaki E, Smith K, Yoshino K, Ishiguro H, Higashiyama S. Identification and characterizationof novel mouse and human ADAM33 with potential metalloprotease activity // Gene. 2002. - V.282. - P.227-236.

204. Zeldin D. Epoxygenase Pathways of Arachidonic Acid Metabolism // The Journal of Biological Chemistry. 2001. - V.276. - P.36059-36062.

205. Zhang H., Zhang Q., Wang L., Chen H., Li Y., Cui T., Huang W., Zhang L., Yan F., Wang L., Xu Y., Hu L., Kong X. Association of IL4R gene polymorphisms with asthma in Chinese populations // Hum. Mutat. 2007. -V.28. - P. 1046-1060.

206. Zhang R.X., Yu S.Q., Jiang J.Z., Liu G.J. Complementary DNA microarray analysis of chemokines and their receptors in allergic rhinitis // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. 2007. - V. 17. - P.329-336.

207. Znahg W., Zhang X., Qiu D., Sandford. A., Tan W.C. IL-4 receptor genetic polymorphisms and asthma in Asian populations // Respir. Med. 2007. -V.101. - P.186-190.

208. Zielinnska E., Niewiarowski W., Bodalski J., Stanczyk A., Bolanowski W., Rebowski G. Arylamine N-acetyltransferase (NAT2) gene mutations in children with allergic diseases // Clin. Pharmacol. Ther. 1997. - V.62. -P.635-642.

209. Zou C.C., Tang L.F., Jiang M.Z., Zhao Z.Y., Hirokazu T., Mitsufumi M. Methylenetetrahydrofolate reductase polymorphism and asthma // Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi. 2003. - V.26. - P. 161-164.

Информация о работе

Хузина, Альфия Хаматьяновна
кандидата биологических наук
Уфа, 2008
ВАК 03.00.15

Диссертация

Анализ генов предрасположенности к аллергическому риниту в Республике Башкортостан - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы