Антиоксидантная активность плазмы крови как критерий оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов

Теселкин, Юрий Олегович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антиоксидантная активность плазмы крови как критерий оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Антиоксидантная активность плазмы крови как критерий оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов"

На правах рукописи

ТЕСЕЛКИН ЮРИЙ ОЛЕГОВИЧ

АНТИОКСИДА НТНАЯ АКТИВНОСТЬ ПЛАЗМЫ КРОВИ КАК КРИТЕРИЙ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ЭКЗОГЕННЫХ АНТИОКСИДАНТОВ

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 2003

Работа выполнена в Научно-исследовательском и учебно-методическом центре биомедшщнских технологий ВИЛАР

Научные консультанты:

доктор биологических наук, профессор

Л.Б. Ребров

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

А.А. Карелин

СС. Шишкин

П.З. Хасигов

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт биомедицинской химии РАМН

Защита состоится «20 » июня 2003 г. в 14 часов на заседании

диссертационного совета Д 212.203.13

при Российском университете дружбы народов

по адресу: 117198, ГСП, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов

по адресу: 117198, ГСП, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. б.

Автореферат разослан « -/?> » мпа 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат фармацевтических наук.

доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Известно, что развитие целого ряда патологических состояний организма человека сопровождается усилением образования активных форм кислорода (АФК) и свободных радикалов, которые могут вызвать повреждение биологически важных молекул и, в конечном итоге, привести к гибели клетки [Владимиров Ю.А., 1998; Gutteridge J.M.C., Mitchell J., 1999J. Так, установлено, что свободнорадикальное окисление и, в частности, пероксидное окисление линидов (ПОЛ) ифает важную роль в патогенезе инфаркта миокарда, атеросклероза, злокачественного роста, бронхолегочных и других заболеваний [Коган А.Х. с соавт., 1997; Aruoma O.I., 1996; Rahman I., MacNee W., 19%]. Кроме того, активация реакций свободморадикального окисления может наблюдаться при воздействии на организм человека ряда внешних факторов, например, ионизирующей радиации [Барабой В.А. с соавт., 1991], УФ-излучения [Рощупкин Д.И., Мурина М.А., 1993], озона [Pryor W. et al., 1995], табачного дыма [Valkonen М.М., Kuusi Т., 2000], промышленных пылей [Коркина Л.Г., Величковский Б.Т., 1988].

В норме регуляция продукции АФК и свободных радикалов в тканях и органах человека осуществляемся многоуровневой физиологической антиоксидан'шой системой, которая включает в себя соединения различной химической природы: витамины, пигменты, гормоны, ферменты [Ланкии В.З. с соавт., 2000; Hailiwell В. et al., 1995; Síes Н., 1991]. Несмотря на высокую эффективность антиоксидантной системы, она не всегда способна защитить организм человека от развития оксидантного стресса. В связи с этим одним из приоритетных направлений свободнорадикальной биологии и медицины является создание препаратов, обладающих антиоксидантаыми свойствами, с целью применения их для профилактки и лечения заболеваний, сопровождающихся усилением свободнорадикальных реакций.

В настоящее время для оценки состояния антиоксидантной системы организма человека наряду с определением содержания отдельных антиоксидантов в плазме и клетках крови [Бабаян Т.О. с соавт., 1998; Голиков А.П. с соавт., 2002; Pryor W., 2000] используют показатель, обозначаемый как антиоксидантная активность (АОА) плазмы крови. АОА плазмы (сыворотки) крови - это интегральный показатель, отражающий ее способность противодействовать развитию свободнорадикальных реакций [Клебанов Г.И. с соавт., 1999]. Основными компонентами тест-систем для определения АОА плазмы крови являются: система генерации радикалов и субстрат или молекула-мишень, которая подвергается свободнорадикальному окислению [Hailiwell В., Gutteridge J.M.C., 1990]. Добавление в модельную систему плазмы крови, содержащей различные водо- и жирорастворимые антиоксиданты, приводит к уменьшению

рос. НАЦИОНАЛЬНАЯ

библиотека С.Петербург _

образования радикалов и торможению окисления субстрата. Изменение параметров окисления субстрата в присутствии плазмы крови, регистрируемое с помощью полярографии, флуоресцентной и абсорбционной спектроскопии, хемилюмннесценции и других методов, используется для характеристики ее АОА.

Существует много способов определения АОА плазмы крови [Клебанов Г.И., 2001; Rice-Evans С.А., Miller N.J., 1994]. Вместе с тем, большинство из них не получило широкого внедрения в клиническую практику, что обусловлено отдельными недостатками, к числу которых можно отнести сложность в приготовлении и хранении модельных систем окисления [Дремина Е.С. с соавт., 1993; Stocks J. et al., 1974], значительную продолжительность процедуры определения [Wayner D.D.M. е( al., 1987], низкую чувствительность некоторых тестов [Арутюнян А.В. с соавт., 2000], необходимость дорогостоящего оборудования [Popov I.N., Lewin G., 1994; Sakakibara H. et al. 2002; Winston G.W. el al., 1998] или токсичность используемых реактивов [Ghiselli A. et al., 1995; Uotila J.T. et al., 1994]. Существенным недостатком ряда известных способов определения АОА плазмы крови является отсутствие достаточного клинического материала, подтверждающего их практическую значимость. В связи с этим динамика АОА плазмы крови при многих заболеваниях организма человека, сопровождающихся усилением свобо днорад и кал ь н ы х реакций, остается не изученной, а вопрос об использовании этого показателя для оценки эффективности антиоксидантной терапии остается до конца не решенным.

Цель и задачи исследования

Цель работы - получить экспериментальное и клиническое обоснование определения АОА плазмы крови для оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма в условиях развития оксидантного стресса и эффективности его коррекции с помощью экзогенных антиоксидантов.

Для досшжения поставленной цели были определены следующие задачи исследования:

1. Разработать новую радикал-генерирующую хемилюминесцентиую систему для определения АОА плазмы крови, других биологических жидкостей, биологически активных веществ и лекарственных препаратов, отличающуюся высокой чувствительностью и адаптированную к условиям клинико-лабораторного анализа.

2. Исследовать влияние белков и низкомолекулярных антиоксидантов на параметры хемилюмннесценции модельной системы и их вклад в общую АОА плазмы крови.

3. Исследовать динамику АОА плазмы крови, а также слезной жидкости при некоторых патологических процессах (острая пневмония, острый

деструктивный панкреатит, первичная открытоугольная глаукома) и использовании экзогенных антиоксвдантов.

4. С помощью различных систем свободнорадикального окисления изучить антиоксидантные свойства флавоиоидного соединения дигидрокверцети на (ДГК).

5. Исследовать антиоксидантное действие ДГК in vivo при моделировании свободнорадикальной патологии (внешнее общее 7-облучение и тетрахлорметановы й гепатит).

6. Оценить эффективность применения биофлавоноидного препарата "Диквертин" на основе ДГК для коррекции антиоксидантного статуса организма человека при лечении острой пневмонии.

Научная новизна

Разработана новая хемилюминссценгная система генерации свободных радикалов, основными компонентами которой являются гемоглобин, псроксид водорода и люминол (система НЬ-НдСЬ-люминод). Отличительная особенность предлагаемой системы заключается в том, что образующиеся в ней радикалы-инициаторы составляют один из возможных путей инициирования свободнорадикальных реакций in vivo.

На основе системы НЬ-НгОз-люминол разработан новый способ определения АОА плазмы крови, других биологических жидкостей (водянистая влага глаза, моча, спинномозговая, слезная и синовиальная жидкость), биологически активных веществ и лекарственных препаратов.

Впервые изучена АОА плазмы крови на разных стадиях развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). исследована динамика АОА плазмы крови при острой пневмонии, остром деструктивном панкреатите.

С помощью системы НЬ-НгОг-люминол впервые исследована АОА слезной жидкости в норме и при развитии ПОУГ. Обнаружено уменьшение АОА слезной жидкости по мере прогрессирования глаукоматозного процесса.

С использованием различных модельных систем свободнорадикального окисления и экспериментальных моделей свободнорадикальной патологии получены приоритетные данные об амиоксидантных свойствах ДПС - основного компонента нового перспективного биофлавоноидного препарата "Диквертин". Получены новые сведения об АОА антиоксидантного препарата "Гистохром", приготовленного на основе хиноидного пигмента морских беспозвоночных и предлагаемого в качестве антиоксидантного средства для лечения глазных и сердечно-сосудистых заболеваний.

Впервые проведена оценка эффективности применения препарата "Диквертин" как антиоксидантного средства в комплексном лечении острой пневмонии.

Впервые проведено использование нового ангиоксидантного препарата "Гистохром" для лечения ПОУГ. Обнаружено увеличение АОА слезной жидкости и улучшение зрительных функций у больных ПОУГ после проведения курса парабульбарных инъекций гистохрома.

Данная работа соответствует одному из приоритетных направлений научных исследований но отделению медико-биологических наук РАМН на 2002 г., утвержденных президентом РАМН 25 мая 2002 г. (постановление № 62, протокол № 7, параграф 3) "Изучение фармакологической регуляции нормальных и метаболических процессов. Разработка новых оригинальных лекарственных средств". Диссертационная работа выполнялась также в рамках научных исследований на 2002-2003 г. Межведомственного научного Совета по медицинской биотехнологии при РАМН и Министерстве здравоохранения РФ по проблеме: "Изучение факторов биорегуляции и коррекции состояний организма на молекулярном, клеточном, тканевом и организменном уровнях".

Положения, выносимые на защиту

1. Разработка нового способа определения АОА шюмы крови и других биологических жидкостей на основе хемилюминесцентной системы НЬ-НгОг-люминол.

2. Применение системы НЪ-НзОглюмипол для оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма в норме, при различных патологических процессах и использовании экзогенных антиоксидантов.

3. Биофлавоноидное соединение ДГК является эффективным антиоксидантом в модельных системах свободнорадикального окисления и при моделировании свободнорадикальной патологии у животных.

4. Биофлавоноидный препарат "Диквертин" - перспективное аптиоксидантное средство для комплексного лечения острой пневмонии.

Практическая значимость результатов работы

Разработанная система НЬ-Н^Оа-люмипол отличается от других аналогичных систем простотой, доступностью основных компонентов и высокой чувствительностью. Предлагаемый способ определения АОА плазмы крови и других биологических жидкостей на основе системы НЬ-НгОглюминол может использоваться для наблюдения за состоянием антиоксидантной системы организма, оценки эффективности антиоксидантной терапии, а также для изучения антиоксидантных свойств биологически активных веществ и лекарственных препаратов.

Результаты изучения АОА плазмы крови и слезной жидкости в норме и при некоторых патологических процессах: острой пневмонии,

остром деструктивном панкреатите, ПОУГ - имеют как общее медико-биологическое, так и важное клиническое значение для понимания патогенеза этих заболеваний и прогнозирования их течения. Так, в частности, предложен новый способ прогнозирования npoi-рессирования ПОУГ на основе определения АОА слезной жидкости. .

На основании результатов проведенных исследований препарат "Диквертин" разрешен для применения (приказ МЗ РФ № 302 от 29.07.%) у взрослых в качестве антиоксидактного и капилляропротекторного средства при бронхолегочных заболеваниях (острая пневмония, хронический обструктивный бронхит, бронхиальная астма) в составе комплексной терапии в сочетании с другими лекарственными средствами.

Данные, полученные в ходе экспериментальных и клинических исследований, реализованы при создании продуктов питания с добавкой диквертина (кондитерские изделия на жировой основе — АО Московская кондитерская фабрика "Красный Октябрь**, сухое молоко "Флаволакт" -ВНИИ молочной промышленности) лечебно-профилактического назначения для предупреждения и коррекции состояний, связанных с недостаточным уровнем антиоксидантов в организме.

Методические подходы, разработанные на основе применения системы НЬ-НгОгЛЮМинол, имеют практическое значение и дополняют арсенал методов, использующихся в клинико-биохимических и научно-исследовательских лабораториях.

Отдельные разделы диссертации используются в учебном процессе на кафедре биофизики медико-биологического факультета Российского государственного медицинского университета.

Апробация работы

Основные результаты диссероционной работы обсуждались на IV Всес. съезде патофизиологов (Кишинев, 1989); III-VI Междунар. конф. "Биоаитиоксвдант" (Москва, 1989,1992,1998,2002); I Междунар. конф. по клинической хемилюминесценции (Берлин, Германия, 1994); П Междунар. конф. "Антиоксидангные витамины и Э-каротин в предотвращении болезней" (Берлин, Германия, 1994); Ш Междунар. симпоз. "Экология человека: проблемы и состояние лечебно-профилактического питания" (Москва, 1994); IV Междунар. симпоз. "Экология человека: пищевые технологии и продукты" (Москва-Видное, 1995); Междунар. симпоз. по природным антиоксидантам (Пекин, Китай, 1995); IV и V Нац. конг. по болезням органов дыхания (Москва, 1994, 1995); XII Междунар. конф. по фотобиологии (Вена, Австрия, 1996); I Всерос. конф. фогобиологов (Пущино, 19%); Междунар. конф. "Новые направления лазерной медицины" (Москва, 19%); III, V и IX Рос. нац. конг. "Человек и лекарство" (Москва, 19%, 1998, 2002); Междунар. симпоз. "Биоантиоксидант" в рамках междунар. выставки "Медицина и охрана

здоровья. Медгехника и Аптека" (Тюмень, 1997); X Междунар. конф. по химии органических и элементоорганических пероксидов (Москва, 1997); I Междунар. конф. "Научные и практические аспекты совершенствования качества продуктов детского и геродиетического питания" (Москва, 1997); Междунар. симпоз. "Регуляция биологических процессов с помощью свободных радикалов: роль антиоксидангов, свободнорадикальных перехватчиков и хепаторов" (Москва-Ярославль, 1998); XIX и XXI Междунар. конф. по полифенолам (Лилль, Франция, 1998; Марракеш, Марокко, 2002); 1П Междунар. конф. по таннинам (Орегон, США, 1998); Ш Междунар. симп. по глазной фармакологии и фармацевтике (Лиссабон, Португалия, 2000); Всерос. конф. с междунар. участием "Патология и современная медицина" (Москва, 2000); V Междунар. съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения" (Санкт-Петербург, 2001).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 42 научные работы, оформлено 1 авторское свидетельство на изобретение, получен 1 патент РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа включает следующие разделы: введение, обзор литературы, главу с описанием материалов и методов исследования, 5 глав с результатами экспериментов, обсуждение результатов, заключение, выводы и список литературы. Работа изложена на 272 стр. машинописного текста, содержит 25 таблиц, проиллюстрирована 60 рисунками и схемами. Библиографический указатель содержит 416 ссылок на работы отечественных и иностранных авторов, из которых 235 опубликовано в зарубежных изданиях.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Обзор литературы

В обзоре литературы рассмотрены: (1) источники образования АФК и свободных радикалов в организме человека; (2) основные компоненты антиоксидантной системы, их распределение в клетке и внеклеточных жидкостях, механизм действия; (3) особенности антиоксидантной системы плазмы крови; (4) способы определения АОА плазмы (сыворотки) крови в эксперименте и клинике.

Глава 2. Материалы и методы исследования

В работе использованы следующие реактивы: а-токоферол, мочевая кислота, тролокс ("Serva", Германия), гемоглобин (НЬ), p-каротин, рутин ("Sigma", США), люминол ("Метек", Германия). ДГК (3,3',4,5,7-пентагидроксифлаванон) стандартный образец (98%) был любезно предоставлен кафедрой органической химии Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова (зав. - д.х.н., профессор Н.А. Тюкавкина).

Препарат "Диквертин" (не менее 90% ДПС) получен от ООО "Флавир" (Иркутск). Препарат "Гистохром" разработан в Тихоокеанском институте биоорганической химии (Дальневосточное отделение РАН, Владивосток).

Основным объектом исследования являлась плазма крови здоровых людей (19-65 лет, п=156), а также больных острым деструктивным панкреатитом (32-72 лет, п=18), острой пневмонией (19-40 лет, п=112), хроническим обструктивным бронхитом (17-65 лет, п=40), ПОУГ (57-70 лет, п=35) и катарактой (55-68 лет, п=10). Забор крови осуществляли из пальца или путем венопункции. В качестве антикоагулянта использовали гепарин (20 ЕД/мл крови).

В плазме крови определяли содержание витамина Е [Taylor S.L. et al., 1976J, общих липидов, мочевой кислоты, продуктов липидной пероксидации, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП) [Tanizawa Н. et al., 1981] и диеновых конъюгатов (ДК) [Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И., 1983]. Для определения концентрации мочевой кислоты и общих липидов использовали диагностические наборы реактивов "R canal" (Венгрия) и "Био-Lachema-TecT** (Чехия). Фракционирование плазмы крови проводили на геле TOYOFERL HW-40 (Япония). Выделение полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови осуществляли по методу [Boyum А., 1968].

АО А плазмы крови и других биологических жидкостей измеряли с помощью системы НЬ-НгОз-люминол. Хемилюминесценцию (XJ1) модельной системы регистрировали на хемилюминомегре ХЛМ-3 ("Бикал", Москва). Реакционная среда содержала 0,21 мкМ НЬДО мкМ люминола и 100 мкМ ЭДТА в 50 мМ КН2РО4, рН 7,4. Инициирование свободнорадикального окисления люминола осуществляли введением Н2О2 (20 мкМ). Основными измеряемыми параметрами XJI системы НЬ-НгОг-люминол являлись максимальная интенсивность (амплитуда) свечения и латентный период, который определяли как время от момента инициирования окисления люминола до начала развития свечения.

При изучении антиоксидантных свойств и механизма антиоксидантного действия ДГК кроме системы НЬ-НгОг-люминол были использованы: система ПОЛ липосом, активированные полиморфноядерные лейкоциты [Клебанов Г.И. с соавт., 1998], система ксантиноксидаза-ксантин-нитросиний тетразолий [Goldstein S. et al., 1988], реактив Фентона [Якутова Э.Ш. с соавт., 1994]. Оценку железо-связывающей способности ДГК проводили по тесту с о-фенантролином [Клебанов Г.И. с соавт., 1998].

Дня получения липосом использовали общую фракцию яичных фосфолипидов [Кейтс М., 1975]. Процедуру приготовления мультиламеллярных фосфолипидных липосом выполняли согласно Bangham A.D. et al. [Bangham A.D. et al., 1965]. ПОЛ липосомальных мембран индуцировали двумя способами: (1) используя систему Ре2+-

аскорбат [Chatterjec S.N., Agarwal S., 1988]; (2) облучая суспензию лилосом гелий-неоновым лазером (632,8 им) в присутствии производных гсматопорфирина. За протеканием процесса ПОЛ липосом наблюдали по накоплению ТБК-РП [Asakawa T. et al., 1980].

Изучение антиоксидантного действия ДГК in vivo проводили на экспериментальных моделях свободнорадикалъной патологии: внешнего общего ^-облучения и тетрахлормеганового гепатита.

Эксперименты с у-облучением были выполнены на мышах*самках линии BALB (16,6-25 г). Животные были разделены на три группы: 1 -интактные (п=45), 2 — облученные (п=50), 3 - облученные, получавшие ДГК (п=60). Однократное внешнее общее f-облучение мышей проводили на установке ГУТ-60 (®Со) в дозе 3,3 Гр (мощность дозы 0,6 Гр/мин). ДГК животным 3 группы вводили ежедневно перорально через зонд в виде водной суспензии из расчета 100 мг/кг в течение первых 40 суток после облучения и 5 мг/кг в последующие сутки до конца эксперимента. Перед облучением и на 15,40,70 и 155 сутки после облучения по 6-30 животных из каждой группы забивали.

Опыты с тетрахлорметановым гепатитом были выполнены на крысах-самцах линии Вистар (155-220 г). Животные были разделены на три группы: 1 - интактные, 2 - контрольные (ССЦ), 3 - подопытные (ССЦ + ДГК), по 9 крыс в каждой. Крысам 2 и 3 групп на протяжении 4 дней подкожно вводили 50% раствор ССЦ в подсолнечном масле [Левшин Б.И., 1972]. Животные 3 группы за 4 дня до первого введения ССЦ и на протяжении последующего периода эксперимента получали ДГК, который вводили перорально в виде водной суспензии (100 мг/кг). На 7 сутки с момента первого введения ССЦ (7 сутки эксперимента) у животных всех ipynn осуществляли взятие крови из хвостовой вены. На 15 сутки эксперимента животных забивали.

Об эффективности антиоксидантного действия ДГК in vivo судили по изменению АОА плазмы крови и содержанию ТБК-РП в плазме крови и органах (печень, сердце) животных 3 группы по отношению к животным 1 и 2 групп.

Статистическую обработку данных проводили с использованием (критерия Стьюдента. Все результаты представлены в виде значений среднсй величины ± стандартная ошибка среднего.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 3. Разработка новой хемилюмимесцентной системы на основе

Hb, Н2О2 и люминала

Несмотря на многообразие существующих модельных систем, далеко не все из них могут использоваться дня определения АОА плазмы крови при проведении клинических исследований. В настоящей работе при разработке новой системы учитывалось, что она должна быть простой и

чувствительной, и образующиеся в ней радикалы, индуцирующие окисление молекулы-мишени, должны являться инициаторами свободнорадикальных реакций in vivo.

В качестве модельной системы для определения АОА плазмы крови нами была предложена система НЬ-ШОглюминол. В этой системе образование радикалов-инициаторов происходит при взаимодействии НЬ и НдСЬ, а люминол играет роль субстрата окисления. Для наблюдения за процессом окисления люминола использовали метод XJI.

Обнаружено, что добавление Н2О2 в реакционную среду, содержащую НЬ и люминол, сопровождается развитием XJI (рис. 1). Свечение развивалось примерно через 1 мин после введения Н2О2 (латентный период), достигало максимальной амплитуды на 5-7 минутах и далее постепенно уменьшалось. В отсутствие хотя бы одного из компонентов системы свечение не регистрировалось.

Развитие XJ1 сопровождалось частичным разрушением гема НЬ, о чем свидетельствует уменьшение оптической плотности реакционной среды при 408 нм (рис. 1). Изменение D40g носило двухфазный характер. Вначале наблюдалась фаза быстрого уменьшения D-tog длительностью около 1 мин, после которой значения указанного параметра оставались практически на постоянном уровне.

Для подтверждения свободнорадикального механизма окисления люминола в присутствии НЬ и Н2О2 в модельную систему были добавлены некоторые перехватчики свободных радикалов и АФК. Обнаружено, что введение в систему НЬ-НгОглюминол антиоксидангов приводило к изменению кинетики ее XJI: увеличению латентного периода (() и понижению максимальной интенсивности свечения (I) (рис. 2). С повышением концентрации добавляемого антиоксиданта латентный период увеличивался прямо пропорционально, тогда как зависимость интенсивности XJI от концентрации ингибитора имела нелинейный характер. На рис. За,б в качестве примера показано влияние аскорбата и альбумина на параметры кинетики XJI системы НЬ-Н^Оз-люминал.

В табл. 1 суммированы результаты изучения влияния отдельных антиоксидангов на ХЛ системы Hb-H¡Orлюминол - указана концентрация ингибитора, вызывающая уменьшение интенсивности свечения (1/1о) модельной системы на 50% (С»), относительное увеличение латентного периода (t/to), соответствующее этой концентрации, а также значение тангенса угла наклона прямой (к), описывающей зависимость t/to от концентрации ингибитора:

1Ло = kC + I, где С - концентрация ингибитора в мкМ.

Увеличение отношения t/to в большей степени было характерно для низкомалекулярных антиоксидангов - а-токоферола, урата, аскорбата, восстановленного глутатиона (GSH) и синтетического антиоксиданта трояокса (б-гидрокси-2,5,7,8-тетрамегилхроман-2- карбоновая кислота),

Время, мин Время, мин

Рис. 1 Рис. 2

Рис. 1. Кинетики ХЛ. 1 - НЬ-Н202-люминол; 2 - НЬ-НгСЬ; 3 - НЬ-люминол; 4 - Н^Ог-люминол; 5 - НгОг-люминол и РеБО^ или РсСЬ (0,84 мкМ); б -изменение оптической плотности (0«ж) системы НЬ-Н^СЬ-люминол.

Рис. 2. Типичные кинетики ХЛ системы НЬ-НгОг-люминол без (1) и в присутствии антиоксиданта (2). ^ 1 - латентный период и 1о, I -интенсивность ХЛ модельной системы без 0о, 1о) и в присутствии антиоксиданта (1,1). Стрелкой отмечен момент добавления Н^СЬ.

Концентрация, мкМ Концеирация, мкМ

Рис. 3. Влияние аскорбата (I) и альбумина (2) на латентный период (а) и интенсивность ХЛ (б) системы НЬ-НгСЬ-люминол. ^ и 1Ло -относительные изменения латентного периода и интенсивности ХЛ в присутствии антиоксидантов.

чем для белков. В частности, перечисленные низкомолекулярные антиоксиданта, в отличие от белков, имели более высокие значения

Таблица 1.

Влияние антиоксидантов на ХЛ системы НЬ-Н-СЬ-люминол

Антиоксидант С»,мкМ 1Л0 1сх106, М"1

- 0,00 1,0 1,00 0,00

Каталаза 0,001 0,5 1,15 0,18

(0,52 ЕД/мл)

Церулоплазмин 0,32 0,5 1,00 0,00

(5,3 ЕД/мл)

а-Токоферап 0,97 0,5 4,99 4,32

(в 1% тритоне Х-100)

Альбумин 1,06 0,5 2,06 0,73

Урат 2,37 0,5 7,08 2,58

Тролокс 2,38 0,5 14,04 5,60

Аскорбат 2,54 0,5 8,25 2,75

вБН 3,42 0,5 9,22 2,52

Супероксидцисмутаза 5,82 0,5 1,54 0,09

(384 ЕД/мл)

Трансферрин 11,89 0,5 2,46 0,12

Примечание: в скобках указана активность ферментов. Стандартная ошибка среднего не превышает 5%.

коэффициента к.

Увеличение латентного периода ХЛ модельной системы в присутствии антиоксидантов можно рассматривать как время, необходимое для их инактивации в процессе взаимодействия с образующимися в ней радикалами-инициаторами. Это увеличение не связано с разрушением антиоксидантами Н2О2, поскольку добавление катал азы существенного влияния на латентный период не оказывало.

В отдельной серии экспериментов было продемонстрировано, что все исследованные вещества не влияют на интенсивность флуоресценции люминола (Янп. = 355 им, Аде,. = 425 им) в концентрациях, вызывающих снижение интенсивности ХЛ системы НЪ-НзСЪ-люминол на 50%. Это указывает на то, что уменьшение интенсивности ХЛ системы НЪ-НгОг-люминол в присутствии антиоксидантов осуществляется не за счет тушения ими возбужденного состояния продуктов окисления люминола или реабсорбции свечения, а за счет взаимодействия с возникающими в ней радикальными интермедиатами.

На рис. 4 показана предполагаемая схема реакций, приводящих к образованию радикалов-инициаторов окисления люминола и испусканию квантов ХЛ в системе НЬ-НгСЬ-люминол. Как следует из этой схемы, Н2О2 и метНЬ, составляющий основную часть коммерческих препаратов НЬ

НЬ-Ре3*

приводящих к генерации квантов ХЛ. Обозначения: ЬН" - люминол; I/ -радикал люминола; ЪОг~ - эндопероксид люминол а; АР2" и (АР2"")* - 3-аминофталат дианион в основном и возбужденном состояниях соответственно; Ьу - кванты ХЛ. Остальные пояснения в тексте.

[Рирро А., На1Ь%уе1] В., 1988], могут индуцировать окисление люминола по двум основным механизмам. Так, с одной стороны, взаимодействие Н2О2 с метНЪ сопровождается разрушением гема и выходом из него ионов железа, которое участвует в образовании 'ОН, с другой стороны, приводит к возникновению радикалов феррилНЬ (НЬ(*+)-Ре,+=0). Образующиеся радикалы инициируют окисление люминола, последовательность реакций которого в настоящее время хорошо известна |Таи1кпег К., РгиктсЬ I.. 1993].

Механизм инициирования окисления люминола с участием НЬ(**)-Ре4+=0 представляется более предпочтительным, поскольку добавление в систему вместо НЬ солей двухвалентного или трехвалентного железа не вызывало развития свечения (рис. 1). Это указывает на необходимость наличия гемовой структуры и глобиновых цепей у радикалов-инициаторов. Введение в систему НЬ-НгОг-люминол антиоксидантов, перехватывающих радикалы и АФК, приводит к ингибированию окисления люминола и уменьшению образования возбужденного продукта его окисления - (АР3-)*, что проявляется в увеличении латентного периода и уменьшении интенсивности свечения. Указанные параметры кинетики ХЛ системы НЬ-НзОг-лгоминол могут быть использованы для изучения АОА исследуемых веществ и биологических жидкостей.

Глава 4. Аптиоксидаптная активность плазмы кровн в системе НЬ-НгОгЛЮминол

Введение в систему НЬ-НгСЪ-люминол плазмы крови человека сопровождалось такими же изменениями кинетики ее ХЛ, как и при добавлении отдельных ингибиторов (рис. 5). С увеличением количества добавленной плазмы крови наблюдалось прямо пропорциональное увеличение латентного периода и дозозависимое уменьшение интенсивности ХЛ (рис. б). Такое влияние плазмы крови на параметры ХЛ модельной системы можно объяснить присутствием в ней а-токоферола, аскорбата, урата, билирубина, 5Н-групп белков и других биоантиоксидантов.

Время, мин

12 16 20 Объем плазмы крови, мкл

Рис. 5. Рис. 6.

Рис. 5. Кинетики ХЛ системы НЬ-НгОг-люминол. 1 - контроль; 2,3,4 - в присутствии 5,10 и 20 мкл плазмы крови соответственно.

Рис. 6. Изменение латентного периода (1) и интенсивности ХЛ (2) системы НЬ-Н202-люминол от количества добавленной плазмы крови.

Влияние водорастворимых низкомолекулярных антиоксидантов (аскорбата, урата), а также белков плазмы крови на параметры ХЛ системы НЬ-НзОг-люминол было подтверждено с помощью гель-фильтрации плазмы крови на геле ТОУОРЕЯЬ Н\У-40 с последующим определением ингибирующей активности полученных фракций. В частости, было показано, что фракции плазмы крови, содержащие белки или низкомолекулярные водорастворимые антиоксиданты, сходным образом влияют на параметры ХЛ системы НЬ-НгОг-люминол: увеличивают латентный период и уменьшают интенсивность свечения.

Для количественного определения АОА плазмы крови с помощью системы НЬ-НгОг-люминол ее выражали через концентрацию антиоксиданта сравнения. В качестве антиоксиданта сравнения

использовалась аскорбиновая кислота. С этой целью в систему вносили 10-20 мкл исследуемой плазмы крови и измеряли латентный период XJI. Поскольку изменение латентного периода от объема добавленной плазмы крови и концентрации стандартного антиоксиданта носит линейный характер, то с помощью уравнения прямой t/to(C), полученного для аскорбата, находили концентрацию этого антиоксиданта С**, вызывающую изменение отношения t/to аналогичное его изменению при добавлении плазмы. АОА плазмы крови вычисляли по формуле:

АОА (мкМ) = С«* d, где d - разведение плазмы крови в модельной системе. Таким образом, численное значение АОА плазмы крови, измеряемое в предлагаемом тесте, будет равно концентрации раствора антиоксиданта сравнения, введение которого в модельную систему приведет к такому же увеличению латентного периода XJI, как и при добавлении соответствующего объема плазмы.

Известно, что вклад низкомолекулярных водорастворимых антиоксидантов в общую АОА плазмы крови человека составляет 40-90%, тогда как SH-групп белков - 10-65% [Ghiselli A. et al., 1995; Wayner D.D.M. et al., 1987]. Для определения вклада водорастворимых низкомолекулярных антиоксидантов и белков в общую АОА плазмы крови в системе НЬ-НгОг-люминол использовали нативную плазму крови и ее депротеииизированный супернатант, полученный после добавления к плазме 10% раствора трихлоруксусной кислоты (табл. 2). Обнаружено, что в норме на долю водорастворимых низкомолекулярных антиоксидантов плазмы приходится около половины от ее общей АОА, тогда как другая половина приходится на долю белков и связанных с белками веществ.

Таблица 2.

АОА депротеинизированной и белковой части плазмы крови

АОА мкМ %

Общая АОА АОАс АОАе 1005,5±54,5 534,9±56,0 470,6±52,6 100±5,4 53,2±5,6 46,8±5,2

Примечание: исследовано 15 образцов плазмы крови здоровых доноров. АОАс - ингибирующая активность депротеинизированного супернатанта плазмы крови; АОАв - ингибирующая активность белковой части плазмы крови. АОАв вычисляли как разность между общей АОА и АОАс.

В табл. 3 представлены результаты определения общей АОА плазмы крови при некоторых заболеваниях организма человека. Обнаружено понижение АОА плазмы крови при острой пневмонии и хроническом обструктивном бронхите, тогда как при остром

Таблица 3.

АОА плазмы крови при некоторых патологических процессах

№ Заболевание АОА, мкМ

1 Здоровые доноры (п=30) 980,8±45,2

2 Острая пневмония (п=50) 734,2±38,5***

3 Хронический обструктивный бронхит (п=40)

в стадии обострения 69б,7±51,0*"

в стадии ремиссии 830,5+44,6*

4 Острый деструктивный панкреатит (п=18) 1455,8±135,3"

5 Зрелая катаракта (п=10) 934,5±43,3

Примечание: * - Р<0,05," - Р<0,01, *** - Р<0,001 по отношению к норме.

деструктивном панкреатите зарегистрировано ее повышение.

Уменьшение АОА плазмы крови при острой пневмонии и хроническом обструктивном бронхите, по-видимому, обусловлено усилением расходования биоантиоксидантов в условиях развития оксидантного стресса [Белоногов MB., 2000; Нагибина М.В. с соавт., 1996; Хышиктуев Б.С., 1996; Rahman I., MacNee W., 1996]. Что касаегся увеличения АОА плазмы крови у больных острым деструктивным панкреатитом, то оно может быть связано с выходом из очага повреждения в кровоток веществ пептидной природы, обладающих анти оке и дантны м и свойствами [Фархугдинов Р.Р., 1984]. Кроме того, нами установлено более чем двухкратное повышение в плазме крови больных острым деструктивным панкреатитом уровня мочевой кислоты (Р<0,001), которая относится к числу ключевых биоантиоксидантов [Halliwell В., Gutteridge J.M.C., 1990]. Коэффициент корреляции между АОА плазмы крови пациентов с этим заболеванием и содержанием в ней мочевой кислоты составил +0,79 (Р<0,001), тогда как у здоровых людей - +0,39 (Р<0,05).

Важным направлением современной медицины является использование антиоксидантов для коррекции антиоксидантного статуса организма [Голиков А.П. с соавт., 2002; Дюмаев K.M. с соавт., 1995]. В качестве перспективных антиоксидантов многие исследователи рассматривают вещества природного происхождения [Бабаян Т.О. с соавт., 1998; Коган А.Х. с соавт., 1997; Недосугова JJ.B., с соавт., 2000; Ргуог W., 2000]. В проведенном исследовании было показано увеличение АОА плазмы крови добровольцев после перорального приема 1 и 2 г аскорбиновой кислоты (рис. 7а), а также кроликов после перорального введения аскорбата в дозе 100 мг/кг (рис. 76). Исследовано влияние на АОА плазмы крови добровольцев однократного и длительного приема биологически активной добавки к пище "Магнум С*, которая в качестве основных антиоксидантных компонентов содержит витамин С в этерифицированной форме и смесь биофлавоноидов (рис. 8а,б).

180

V» 160

<г 140

о 120

100

1 ♦** а

;

Ж X*

1.1.1. —____1.......

О 5 10 15 20 25 Время, ч

0 5 10 15 20 25 Время, ч

Рис. 7. Изменение АОА плазмы крови человека (а) и кролика (б) после однократного перорального приема (введения) аскорбата. (а): 1 - 1 г; 2 - 2 г. За 100% принята исходная величина АОА плазмы крови. * - Р<0,05, *** - Р<0,001 по отношению к исходному значению данного показателя у добровольцев (п=5) и кроликов (п=5).

140

о4*

120

100

»* ** а

1 * VI

1 ■ 1_|_ 1 1.1.1

0 5 10 15 20 25 Срок наблюдения, ч

0 10 20 30 40 Срок наблюдения, сутки

Рис. 8. Изменение АОА плазмы крови добровольцев при однократном (а) и длительном (б) приеме "Магнум С". 1 - экспериментальная группа (п=б); 2

- контрольная группа (п=6). Стрелкой указан момент отмены препарата. *

- Р<0,05, ** - Р<0,01, - Р<0,001 по отношению к контрольной группе.

Установлено, что в случае длительного приема этого препарата максимальное увеличение АОА плазмы крови наблюдалось на 14 сутки. После прекращения приема препарата происходило постепенное снижение этого показателя до исходного уровня.

Полученные результаты показывают, что изменение АОА плазмы крови может иметь место не только при развитии патологического процесса, но и при поступлении в организм человека и животных

экзогенных антиоксндантов. Изучение динамики АОА плазмы крови может оказаться полезным при выборе доз и определении оптимальных сроков для профилактического или лечебного применения экзогенных антиоксидантов и биологически активных добавок к пище с антиоксид антными свойствами.

Глава 5. Применение системы НЬ-И^СЬ-люминол для определения антиоксидантной активности лекарственных препаратов и слезной жидкости

Известно, что в патогенезе многих воспалительных, дистрофических и инфекционных заболеваний органа зрения существенную роль играет активация реакций свободнорадикального окисления [Тарасова JI.H. с соавт., 1999; Архипова М.М. с соавт., 2001; Polansky J.R. et al., 1984]. В связи с этим в офтальмологической практике широко используются лекарственные препараты с шгшоксидантным механизмом действия.

Среди перспективных антиоксидантных препаратов, предлагаемых для лечения глазных заболеваний, следует назвать новый отечественный препарат "Гистохром" [Егоров Е.А. с соавт., 1999]. Действующим компонентом гистохром а является эхинохром (2,3,5,6,8-пентагидрокси-7-этил-1,4-нафтохинон) - хиноидный пигмент морских беспозвоночных, относящихся к типу иглокожих. Антиоксидантные свойства эхинохрома связывают с его способностью перехватывать свободные радикалы и< хелатироватъ ионы Fe2+ [Лебедев А.В. с соавт., 1988].

В настоящей работе с помощью системы НЬ-НгОг-люминол было проведено сравнение АОА гистохрома с АОА ряда препаратов, применяемых в клинике глазных болезней - дицинона, аскорбиновой' кислоты, церебролизина, л-аминобензойной кислоты и эмоксипина, а также некоторых антиоксидантов - ДГК, кверцетина и рутина (рис. 9).

На рис. 9 представлена АОА препаратов относительно тролокса, который является водорастворимым аналогом витамина Е и обычно применяется в качестве антиоксиданта сравнения при проведении подобных исследований [Lien Е. et al., 1999; Rice-Evans С.А. et al., 19%; Wasil M., Kelly FJ., 1995]. Наибольшую АОА в системе НЬ-НгОг-люминол проявили вещества флавоноидной природы (ДГК, кверцетин и рутин), а также гистохром. Так, например, АОА гистохрома в 1,7 раза превышала АОА тролокса. Эмоксипин в пределах исследованных концентраций (1-120 мкМ) АОА не обладал.

К числу заболеваний, для лечения которых показано применение антиоксидантной терапии, принадлежит ПОУГ. В ряде исследований установлено увеличение уровня продуктов липидной пероксидации в водянистой влаге и тканях дренажной системы глаз больных глаукомой [Бунин АЛ. с соавт., 1985; Курышева Н.И. с соавт., 1996] и уменьшение содержания в них отдельных антиоксидантов [Алексидзе А.Т. с соавт.,

Рис. 9. АОА препаратов в системе НЬ-НгОг-люминол. 1 - ДГК, 2 -кверцетии, 3 - рутин, 4 - гистохром, 5 - дицинон, 6 - тролокс, 7 -аскорбат, 8 - л-аминобензойная кислота, 9 - церебролизин, 10 -эмоксипин. АОА вычисляли как тангенс угла наклона прямой Ь^С). АОА тролокса принята за 1.

1989; Бунин А.Я. с соавт., 1992,1993].

Для характеристики функционального состояния антиоксидангной системы больных ПОУГ нами была изучена АОА плазмы крови и слезной жидкости. Обнаружено понижение АОА плазмы крови и слезной жидкости у пациентов с 3 стадией глаукомы по сравнению нормой (табл. 4). Это подтверждает существующие данные о том, что нарушение регуляции свободнорадикальных реакций при глаукоме происходит как на уровне всего организма [Завадская Ю.С., Каржаубаева Г.Г., 1985], так и на местном уровне [Филина А.А., 1994; Курышева Н.И. с соавт., 1996],

Таблица 4.

АОА плазмы 1фови и слезной жидкости больных ПОУГ

Больные Количество АОА слезы, мкМ

глаз Плазма крови Слезная жидкость

Глаукома: 1 стадия 26 1058,б±45,0 15б,9±21,3

2 стадия 22 1012,4±42,1 113,0±24,6

3 стадия 19 765,2±37,5*** 68,1±19,3**

Норма 20 1031,8±473 150,4±21,б

Примечание: ** - Р<0,01, - Р<0,001 по отношению к норме.

Конечно, АОА слезной жидкости не может в полной мере характеризовать состояние антиоксидантной системы глаза. Наиболее

адекватное представление об этом давало бы определение АОА водянистой влаги. Однако ее забор возможен только при хирургическом вмешательстве. В отличие от водянистой влаги, слеза является более доступным объектом и может использоваться при динамическом наблюдении за больными.

Для лечения больных ПОУГ в настоящем исследовании в качестве антиоксидантного средства было апробировано местное применение препарата Тистохром*' в виде 10 парабульбарных инъекций (0,003% раствор). Предполагалось, что местное введение гистохрома увеличит антиоксидантную защиту тканей и жидких сред глаза, что будет препятствовать развитию функциональных и метаболических нарушений или в определенной степени стабилизировать их. Как следует из рис. 10, лечение гистохромом привело к повышению АОА слезной жидкости у больных со 2 и 3 стадиями глаукомы по отношению к исходному уровню. При этом у пациентов с 3 стадией глаукомы, имевших до лечения более низкие значения АОА слезы по сравнению со здоровыми людьми, после проведения антиоксидантной терапии АОА слезной жидкости достоверно не отличалась от уровня нормы.

12 3 12 3

До лечения После лечения Норма

Рис. 10. АОА слезной жидкости больных ПОУГ до и после курса лечения гистохромом. 1,2,3 - стадии заболевания. Количество обследованных глаз см. в табл. 4. * - Р<0,05 по отношению к исходной АОА слезы; г - Р<0,05 по отношению к норме.

Необходимо отметить, что лечение гистохромом приводило не только к увеличению АОА слезы, но и улучшению глазных функций. Это проявлялось в расширении полей зрения, повышении порога контрастной чувствительности, уменьшении количества скотом. В частности, порог контрастной чувствительности у больных с 1 стадией ПОУГ повысился на 72%, а со 2 и 3 стадиями - на 65% и 53% соответственно. Если до лечения общее количество скотом у обследованных пациентов составляло 81±3,6, то после курса лечения - 54±2,8 (Р<0,001). При этом наблюдалось

уменьшение числа глубоких и средних скотом у больных со 2 и 3 стадиями ГТОУГ за счет некоторого увеличения числа поверхностных скотом.

Таким образом, определение АОА слезной жидкости с помощью системы НЬ-Н2Оглюминол - простой, неинвазивный, безопасный и информативный способ оценки функционального состояния системы регуляции свободнорадикальных реакций в глазу. Полученные результаты могут служить обоснованием для применения препарата "Гистохром" в качестве антиоксидантного средства для лечения ПОУГ и других заболеваний глаз, сопровождающихся усилением продукции свободных радикалов и АФК.

Глава 6. Экспериментальное обоснование применения препарата "Диквертин" в условиях оксидантиого стресса

В настоящее время кафедрой органической химии ММА им. И.М. Сеченова совместно с ВИЛАР разработан флавоноидный препарат "Диквертин" получаемый из древесины лиственницы [Тюкавкина H.A. с соавт., 1997; Селиванова И.А., 1998]. В составе диквертина содержится не менее 90% ДГК и не более 10% его биогенетических предшественников -дигидрокемпферола и нарингенина. При экспериментальном доклиническом изучении диквертина показано, что препарат обладает кап илляропротекторны м, гепатопротекторным и радиопротекторным действием [Ильюченок Т.Ф. с соавт., 1975, Колхир В.К. с соавт., 1995]. На основании полученных результатов высказано предположение, что многие защитные эффекты диквертина обусловлены антиоксидантными свойствами ДГК. В связи с этим в задачи исследования входило изучение АОА ДГК в модельных системах свободнорадикального окисления, а также его влияния на состояние процесса ПОЛ и антиоксидантную систему организма в условиях развития оксидантиого стресса.

Структурная формула ДГК показана на рис. 11. Из нее видно, что ДГК содержит о-дигидроксигруппировку в B-кольце, а также 4-

ОН О

Рис. 11. Структурная формула ДГК.

карбонильную группу в сочетании с 3-ОН и 5-ОН группами в А и С-кольцах. С этими структурными фрагментами в молекуле флавоноидов

связывают их антирадикалъные [van Acker S.A.B.E. et al., 1996, 1998; Heijnen C.G.M. et al., 2002; Lien E. et al., 1999; Rice-Evans C.A. et al., 1996] и металл-хелатирующис свойства [Тюкавкина Н.А. с соавт., 1996; Hall III С.А., Cuppett S.L., 1997; Morel I. et al., 1998]. В проведенном исследовании для изучения АОА ДГК кроме системы НЬ-НгСЬ-люминол были использованы различные радикал-генерирующие системы (см. главу 2. Материалы и методы исследования).

При добавлении ДГК к липосомам, ПОЛ в которых индуцировали с помощью системы'Fe^-аскорбат, было обнаружено (рис. 12), что с увеличением концентрации флавоноида в модельной системе происходило уменьшение накопления ТБК-РП. Антиоксидантный эффект ДГК существенно не отличался от эффекта а-токоферола и превосходил действие некоторых других природных антиоксидантов: p-каротина и рутина. Значительный антиоксидантный эффект наблюдался у хелатора ионов Fe2+ - ЭДТА. При концентрации ЭДТА, равной 13 мкМ, ПОЛ липосом ингибировалось полностью.

Рис. 12. Влияние а-токоферола (1), ЭДТА (2), ДГК (3), рутина (4), р-каротина (5) на ПОЛ липосом, индуцированное системой Feí+-acKop6ar. Условия: FeS04 - 2,5 мкМ; аскорбат - 200 мкМ; липосомы - 1 мг/мл по фосфолипидам в 10 мМ Трис-HCl буфере, рН 7,4. Время инкубации липосом с системой Ре2+-аскорбат - 30 мин.

Согласно Fukuzawa К. et al. [Fukuzawa К. et al., 1981] реакции ПОЛ липосом, инициированные системой Fei+-acKop6aT, не ингибируются перехватчиками Ог1, Н2О2, 'Ог и *ОН, но ингибируются цепь-обрывающими антиоксидантами. Это позволяет предположить, что АОА ДГК в используемой модельной системе обусловлена взаимодействием с липидными радикалами и/или хелатированием ионов Fe2*.

4 -

0 20 40 60 Концентрация, мкМ

В качестве другого способа индуцирования ПОЛ липосомальных мембран использовали АФК, образующиеся при облучении производных гематопорфирина гелий-неоновым лазером. Известно, что в этом случае одним из инициаторов фотосенсибилизированной производными гемаггопорфирина лилмдной пероксидации является 'Ог [Kessel D., 1984]. Установлено (рис. 13), что в данной модельной системе ДГК также обладал высокой АОА. Так, например, при концентрации 75 мкМ ДГК ингибировал ПОЛ липосом на 61% тогда, как а-токоферол, Р-каротин и рутин - на 57%, 50% и 37% соответственно. Азид натрия (тушитель '00 проявлял ингибирующие свойства только при миллимолярных концентрациях. В отличие от других актиоксидантов, ЭДТА тормозил процесс ПОЛ липосом на 11%. Это свидетельствует о том, что в данных условиях примесное железо не играет ключевой роли в инициировании свободнорадикальных реакций.

g Сц

4 -

2 -

Азид натрия, мМ

40 80 120 Концентрация, мкМ

Рис. 13. Влияние ДГК (1), а-токоферола (2), р-каротина (3), рутина (4), ЫаЫз (5) и ЭДТА (6) на фотосснсибилизированное производными гематопорфирина ПОЛ липосом. Условия: липосомы - 1 мг/мл по фосфолипидам в 40 мМ КН2Р04, 100 мМ КО, рН 7,4; производные гематопорфирина - 32,5 мкг/мл; доза облучения гелий-неоновым лазером -10,5 Дж/см2.

Полученные результаты показывают, что ДГК обладает выраженным антиоксидантным действием и защищает мембраны липосом как от железо-индуцированного, так и железо-независимого ПОЛ.

Для изучения способности ДГК взаимодействовать с ионами Те2* были исследованы его спектры поглощения в водных растворах. Добавление ионов Те2* к раствору ДГК вызывало изменение спектра

поглощения флавоноида (рис. 14): в УФ-области спектра наблюдалось увеличение коротковолнового максимума поглощения (294 нм) и уменьшение длинноволнового максимума поглощения (325 нм), тогда как в видимой области спектра появлялась дополнительная полоса малой амплитуды без четко выраженного максимума.

Рис. 14. Спектры поглощения ДГК. 1 - в отсутствие ионов Ре2+; 2 - в присутствии ионов Ре2+. Условия: ДГК - 40 мкМ; РеБОд - 20 мкМ; 50 мМ Трис-НС1 буфер, рН 7.

Рис. 15. Влияние ДГК иа уровень свободного двухвалентного железа. Условия: Ре504 - 20 мкМ, ДГК - 0-60 мкМ; о-фенантролии - 450 мкМ; 50 мМ Трис-НС1 буфер, рН 7.

, Инкубация ионов Бе2* в присутствии различных концентраций ДГК

1 сопровождалась дозо зависимым уменьшением концентрации свободного

1 двухвалентного железа, регистрируемого с помощью о-фенантролина (рис.

! I

15). Причем, начиная с отношения ДГК/Ре2+, равного 2, свободное двухвалентное железо уже не обнаруживалось. Это позволило прийти к выводу, что взаимодействие ДГК с ионами Ре2+ сопровождается образованием комплекса ДГК-Ре2*.

Результаты изучения АОА ДГК в модельных системах показывают, что это соединение проявляет как радикал-перехватывающие, так и железо-хелатирующие свойства. Однако наличие АОА m vilro еще не означает, что исследуемое вещество будет проявлять указанные свойства in vivo. Подтверждение АОА ДГК in vivo было получено с использованием экспериментальных моделей внешнего общего 7-облучения мышей и тетрахлорметанового гепатита у крыс.

Обнаружено, что 7-облучение мышей вызывало активацию в их организме процесса ПОЛ. Это проявлялось в повышении содержания ТБК-РП лииидной пероксидации в плазме крови и печени облученных животных (2 группа) по мере увеличения срока наблюдения (рис. 1ба,б). Так, в частности, к 155 суткам наблюдения уровень ТБК-РП в плазме крови и печени животных 2 труппы был соответственно в 2,1 и 1,5 раза выше, чем у интактных животных (1 группа).

Введение облученным животным ДГК (3 группа) приводило к уменьшению содержания продуктов ПОЛ в их плазме крови и печени по сравнению с животными 2 труппы.

Срок наблюдения, сутки Срок наблюдения, сутки

Рис. 16. Содержание ТБК-РП в плазме крови (а) и печени (б) мышей. 1 -интактные; 2 - контрольные (облуч.); 3 - подопытные (облуч. + ДГК). * -Р<0,05, *♦♦ - Р<0,001 по отношению к животным 1 и 3 групп.

Развитие оксидантного стресса у облученных животных сопровождалось не только повышением содержания продуктов ПОЛ в плазме крови и печени, но и понижением АОА плазмы крови (рис. 17).

Так, к концу эксперимента АОА плазмы крови мышей 2 группы уменьшилась в 1,4 и 1,6 раз по отношению к значению этого показателя у животных 1 и 3 фупп соответственно, что, по-видимому, связано с усилением расходования биоангиоксидантов на фоне активации свободнорадикальных реакций.

180 •

s 140

о < 100

О 50 100 150 Срок наблюдения, сутки

Рис. 17 Рис. 18.

Рис. 17. АОА плазмы крови мышей. 1 - интакшые; 2 - контрольные (облуч.); 3 - подопытные (облуч. + ДГК). * - Р<0,05, *** - Р<0,001 по отношению к животным 1 и 2 групп, ** — Р<0,01 отношению к животным 1 и 3 фупп.

Рис. 18. Содержание витамина Б в печени мышей на 155 сутки эксперимента. I - интактные; 2 - контрольные (облуч.); 3 - подопытные (облуч. + ДГК). * - Р<0,05 по отношению к животным 1 и 3 групп.

Введение экзогенного антиоксиданта животным 3 группы привело к повышению АОА плазмы крови к 40 суткам эксперимента в 1,4 раза по отношению к АОА плазмы крови животных 1 и 2 групп. В конце эксперимента АОА плазмы крови мышей 3 фуппы достоверно не отличалась от АОА плазмы мышей 1 фуппы.

Защитное действие ДГК на облученных животных может быть обусловлено не только антиоксидантными свойствами самого флавоноида, но и его влиянием на уровень других радикальных ингибиторов. В частности, обнаружено, что внешнее общее у-облучение мышей вызывало уменьшение содержания витамина Е в их печени на 155 сутки наблюдения по сравнению с интактными животными (рис. 18). Введение облученным животным ДГК препятствовало расходованию витамина Е и сохраняло его содержание в печени на том же уровне, который был зарегистрирован у интактных животных.

Тетрахлормстановый гепатит вызывали у крыс. На фоне отравления ССЦ у контрольных животных (2 группа) наблюдалось повышение уровней продуктов ПОЛ в плазме крови и печени (рис. 19а,б и рис. 20). Так, на 7 и 15 сутки эксперимента содержание ТБК-РП липидной пероксидации в плазме крови и печени животных 2 фуппы в 1,7-2,1 раза превышало их содержание у интактных животных (1 группа).

При использовании ДГК в качестве антиоксидантного средства было зарегистрировано уменьшение в 1,5 раза уровней ТБК-РП в плазме крови и печени подопытных животных (3 группа) по сравнению с контрольными.

•3

Ё >

I о

ш т

-ас- ш

№ ж ш

11 Ж Ш:

Рис. 19. Содержание ТБК-РП в плазме крови крыс на 7 (а) и 15 (б) сутки эксперимента. 1 - интактные; 2 - контрольные (ССЦ); 3 - подопытные (ССЦ + ДГК). *** -Р<0,001 по отношению к животным 1 и 3 групп.

Рис. 20. Содержание ТБК-РП в печени крыс на 15 сутки эксперимента. 1 -интакгаые; 2 - контрольные (ССЦ); 3 — подопытные (ССЦ + ДГК). ** -Р<0,01 по отношению к животным 1 и 3 групп.

На рис. 21а,б представлены результаты определения АОА плазмы крови у животных исследуемых групп. Обнаружено понижение АОА

плазмы крови у животных 2 группы на 7 и 15 сутки эксперимента в 1,5-2 раза по отношению к интактным животным. В то же время АОА плазмы крови животных 3 группы, получавших ДГК, на 7 сутки эксперимента была в 1,5 и 2,2 раза выше, чем у животных 1 и 2 групп соответственно (РОДИ). К концу эксперимента АОА плазмы крови животных 3 группы в 1,8 раза превышала АОА плазмы крови животных 2 группы, достоверно не отличаясь от этого показателя у животных 1 (руины.

600

а 400 < 200

r^T-i

'Ш

W-

Ш: ** я:»

ш йп Ш

йЗж IHs

IS- iff" •fi

1 2 3

Рис. 21. АОА плазмы крови крыс на 7 (а) и 15 (б) сутки эксперимента. 1 -интактные; 2 - контрольные (ССЦ); 3 - подопытные (ССЦ + ДГК). ** — Р<0,01 по отношению к животным 1 и 3 групп.

Таким образом, результаты, полученные на экспериментальных моделях внешнего обшего у-облучения и тетрахлорметанового гепатита свидетельствуют о том, что ДГК проявляет антиоксидантные свойства не только в модельных системах свободнорадикального окисления, но и при развитии оксидантного стресса у животных.

Глава 7. Применение биофллвоноидного препарата "Диквертин* для коррекции антиоксидактпого статуса организма при лечении острой пневмонии

Логическим завершением всего комплекса исследований по изучению АОА ДГК в модельных системах и в экспериментах на животных было проведение клинической апробации препарата "Диквертин" как антиоксидантного средства при лечении больных острой пневмонией. Известно, что развитие острой пневмонии сопровождается усилением реакций ПОЛ, которое трает важную роль в патогенезе многих воспалительных заболеваний бронхоальвеолярной системы [Выстрищак В.В. с соавт., 1997; Cross С.Е. cl al, 1994; Rahman 1., MacNee W., 19%].

Работа проводилось на базе терапевтических отделений Центрального госпиталя внутренних войск г. Москвы. Больные, лица мужского пола (19-40 лет), были разделены на три группы: 1 -контрольную группу (п=50), получавшую стандартную терапию без

антиоксидантов; 2 - группу сравнения (п=32), получавшую комплексное лечение, включающее стандартную терапию и антмоксидантный комплекс (АОК) - а-токоферола ацетат (в капсулах по 0,1 г) и тиосульфат натрия (10% раствор); 3 — опытную группу (п=30), которая на фоне основной терапии получала диквертин (в таблетках по 0,02 г). Суточная доза ос-то кофероя а ацетата и тиосульфата натрия составляла 0,4 г (per os) и 20 мл (внутривенно) соответственно, а диквертина - 0,24 г (per os). Курс антиоксидантной терапии проводили в течение первых 14 суток после госпитализации (острый и подострый период заболевания). Все показатели сравнивали с группой практически здоровых людей (п=30) того же пола и возрастной категории.

Обнаружено, что у больных, получавших в составе комплексной терапии антиоксид анты, наблюдалось более быстрое исчезновение признаков легочного воспаления по сравнению с больными 1 группы. Так, в частности, у больных 2 и 3 групп сокращалась продолжительность и выраженность интоксикации, укорачивались сроки рентгенологического разрешения пневмонии, снижалась частота рентгенологически выявляемых остаточных явлений в легких, уменьшался процент пневмофиброза, сокращались сроки пребывания в стационаре. При этом выраженность лечебного эффекта диквертина не уступала клинической эффективности применения АОК.

В острый период заболевания (1-3 сутки) содержание продуктов липидной пероксидации - ДК и ТБК-РП - в плазме крови больных всех трех групп было более высоким, чем у здоровых людей (рис. 22а,б). Включение в комплексную терапию больных 2 и 3 групп антиоксидантов приводило к снижению содержания продуктов ПОЛ до уровня нормы уже в подострый период заболевания (10-14 сутки), в то время как у больных 1 группы оно оставалось выше нормы.

Развитие острой нневмонии сопровождалось не только усилением процесса ПОЛ в организме больных, но и нарушениями в их антиоксидантной системе. Так, в острый период заболевания в плазме крови пациентов обследуемых групп было зарегистрировано уменьшение содержания жирорастворимого антиоксиданта витамина Е (рис. 23). Назначение больным 2 и 3 групп антиоксидантов вызывало повышение содержания витамина Е в их плазме крови до уровня нормы. Однако в отличие от больных 2 и 3 групп, у больных 1 группы содержание витамина Е в плазме крови не достигало нормальных значений даже в фазу клинического выздоровления (20-25 сутки).

При изучении АОА плазмы крови было обнаружено снижение этого показателя у больных острой пневмонией 1 хрупны в подострый период заболевания и в фазу клинического выздоровления (рис. 24). В отличие от больных 1 группы, АОА плазмы крови больных 2 и 3 групп находилась в

§ I

1-3 сутки 10-14 сутки 20-25 сутки

к! '

* *

1-3 сутки 10-14 сутки 20-25 сутки Группы: □ - контрольная; Ш - сравнения; ■ - опытная; О - норма

Рис. 22. Содержание ДК (а) и ТБК-РП (б) в плазме крови больных острой пневмонией. * - Р<0,05 по отношению к больным 1 группы в соответствующем периоде заболевания,г- Р<0,05 по отношению к норме.

цГ я

1-3 сутки 10-14 сутки 20-25 сутки Группы: □ - контрольная; 1 - сравнения; ■ - опытная; □ - норма

Рис. 23. Содержание витамина Е в плазме крови больных острой пневмонией. * - Р<0,05 по отношению к больным 1 труппы в соответствующем периоде заболевания, г~ Р<0,05 по отношению к норме.

пределах нормы на протяжении всего периода наблюдения.

Таким образом, несмотря на проводимые лечебные мероприятия, у больных 1 группы не происходит восстановления функционального состояния антиоксидантной системы. Повышение содержания витамина Е

в плазме крови пациентов 2 и 3 трупп но сравнению с 1 группой, а также АОА плазмы крови свидетельствует об увеличении способности их организма противостоять оксидантному стрессу.

1200

* 900

<Т боо о

< 300

Группы: □ - контрольная; 0 - сравнения; ■ - опытная; □ - норма

Рис. 24. АОА плазмы крови больных острой пневмонией. * - Р<0,05 по отношению к больным 1 группы в соответствующем периоде заболевания, г- Р<0,05 по отношению к норме.

Результаты выполненного исследования позволяют рекомендовать диквертин для использования в качестве антиоксидантного средства при лечении воспалительных заболеваний бронхоальвеолярной системы (острая пневмония, хронический обструкгивиый бронхит, бронхиальная астма и др.) для предотвращения развития оксидантного стресса и коррекции нарушений в антиоксидантной системе.

ВЫВОДЫ

1. Разработана новая радикал-генерирующая хемилюминесцектная система, основными компонентами которой являются НЬ, НзОг и люминол (система НЬ-Н^Ог-люминол). На основе системы НЬ-Н202-люминол предложен новый способ определения АОА плазмы крови, других биологических жидкостей и биологически активных вещест в.

2. АОА плазмы крови в системе НЬ-НзОглюминол обусловлена белками и низкомолекулярными веществами. Вклад низкомолекулярных водорастворимых антиоксидантов в общую АОА плазмы крови человека составляет в среднем 53%, вклад белков и связанных с ними веществ - 47%.

3. Развитие патологических процессов в организме и введение экзогенных антиоксидантов приводит к изменению АОА плазмы крови. При острой пневмонии, хроническом обаруюивном бронхите и первичной открытоугольной глаукоме наблюдалось уменьшение АОА плазмы крови, при остром деструктивном панкреатите - увеличение. При использовании антиоксидантов (витамин С) и биологически активных

Тйв г АА L АЙ

§1 nil nil

jl__.1L_.1L

1 -3 сутки 10-14 сутки 20-25 сутки

добавок к пище (этерифицированная форма витамина С и смссь биофлавоноидов, масло зародышей пшеницы) зарегистрировано повышение АОА плазмы крови у добровольцев и животных.

4. С помощью системы НЬ-НзОглюминол изучена АОА слезной жидкости при первичной открытоугольной глаукоме. Уменьшение АОА слезной жидкости у больных глаукомой коррелирует с тяжест ью заболевания. Применение антиоксидантного препарата "Гистохром" при лечении больных глаукомой приводит к увеличению АОА слезной жидкости и улучшению зрительных функций.

5. Дигидрокверцетин - основной компонент нового биофлавоноидного препарата "Диквертин" - проявляет свойства ингибитора свободных радикалов и хелатора ионов двухвалентного железа в модельных системах свободнорадикального окисления.

6. На экспериментальных моделях свободнорадикальной патологии (общее внешнее у-облучение и тетрахлорметановый гепатит) изучено антиоксидантное действие дигидрокверцетина in vivo. В условиях развития оксидантного стресса, индуцированного воздействием на животных повреждающего фактора, антиоксидантное действие дигидрокверцетина проявлялось через снижение уровня продуктов пероксидного окисления липидов в плазме крови и органах и повышение АОА плазмы крови.

7. Диквертин является эффективным аптиоксидантным средством для комплексного лечения острой пневмонии. Улучшение клинических показателей у больных острой пневмонией, получавших диквертин, по сравнению с больными, не получавшими антиоксидантов, коррелировало с увеличением АОА плазмы крови, повышением в ней уровня витамина Е и уменьшением содержания продуктов липидной пероксидации. Выраженность антиоксидантного эффекта диквертина не уступала эффективности применения антиоксидантного комплекса, включающего а-токоферола ацетат и тиосульфат натрия.

8. Совокупность полученных результатов показывает, что АОА плазмы крови и других биологических жидкостей является важным интегральным показателем для контроля за функциональным состоянием антиоксидантной системы организма и эффективностью применения экзогенных антиоксидантов в условиях развития оксидантного стресса.

Список работ, опубликованных но теме диссертации

1. Ковалевский Е.И., Клебанов ГЛ., Теселкин Ю.О. и др. Антиоксидантная активность фармацевтических препаратов, применяемых для лечения заболеваний глаз // Вестн. офтальмол. -1987. - Т. 103, № 4. - С. 48-51. __________,

Статьи

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

2. Ситников В.Ф., Хренников В.Ю., Теселкин Ю.О. Хемилюминесценция плазмы крови и функциональное состояние эритроцитов у больных с некоторыми наследственными нервно-мышечными заболеваниями //Ж. невропатол. и психиат. - 1987. - Т. 87, № 3. - С. 376—381.

3. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. и др. Роль активации полиморфноядерных лейкоцитов крови в развитии экспериментального увеита // Вопр. мед. химии. - 1988. - Т. 34, № 6. - С. 128-132.

4. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. и др. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеинов // Лаб. дело. - 1988. - № 5. - С. 59-62.

5. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Владимиров Ю.А. Ингибирование антиокислительной активности плазмы крови азидом натрия // Биофизика. - 1988. - Т. 33, Jfe 3. - С. 512-516.

6. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Груне К., Владимиров Ю.А. Влияние холестерина на перекисное окисление липидов мембран липосом // Биол. мембраны. - 1988. - Т. 5, № 10. - С. 1072-1080.

7. Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Гусева М.Р., Комаров О.С. Клиническое значение определения активности церулоппазмина в сыворотке крови при увситах у детей // Вестн. офтальмол. — 1989. - Т. 105, №2.-С. 60-62.

8. Клебанов Г.И., Смирнов A.A., Теселкин Ю.О. и др. Взаимодействие холестерина с фосфолипидами в мембранах однослойных липосом и его влияние на перекисное окисление липидов // Биофизика. - 1990. -Т. 35, № 1. - С. 173.

9. Корочкин И.М., Барбараш OJI-, Теселкин Ю.О. и др. Влияние низкоинтенсивнот лазерного излучения на функциональную активность лейкоцитов и антиоксидантную систему плазмы крови при остром инфаркте миокарда // Сов. медицина. - 1990. - № 5. - С 36-39.

10. Капитанов А.Б., Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О. и др. Зависимость изменения относительного содержания холестерина в плазматической мембране клеток растущей культуры Acholeplasma laidlawii от окисленности липидов сыворотки питательной среды // Биол. мембраны. - 1990. - Т. 7,№ 5. -С. 506-513.

П.Новоженов В.Г., Маньков Ю.У., Теселкин Ю.О., Коломоец Н.М. Изменения перекисного окисления липидов у больных с хроническим обструкгивным бронхитом //Воен.-мвд. журн. - 1993. — № 8. - С. 57.

12.Ткжавкина H.A., Руленко И А, Теселкин Ю.О. и др. Кондитерские изделия с добавками биологически активных веществ. 1. Влияние дигидрокверцетина на процесс пероксидного окисления жиросодержащих компонентов кондитерских изделий И Биотехнология и управление. - 1993. - № 3-4. - С. 24-27.

13.Руленко И.А., Колесник Ю.А., Теселкин Ю.О. и др. Кондитерские изделия с добавками биологически активных веществ. 2. Антиоксидантное действие дигидрокверцетина в составе сахаристых кондитерских изделий на жировой основе // Биотехнология и управление. -1993. -№ 3-4. - С. 27-30.

14. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Ингибирование дигидрокверцетином свободнорадикального окисления липидов сухого молока // Биотехнология и управление. - 1995. - № 1. - С. 36-39.

15.Новоженов В.Г., Белоногов М.А., Теселкин Ю.О., Коломоец Н.М. Активность перекисного окисления липидов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа у больных хроническим обструктивным бронхитом // Воен.-мед. журн. - 1995. - № 1. - С. 57-58.

16.Новоженов В.Г., Белоногов М.А., Теселкин Ю.О. и др. К патогенезу бронхообструктнвного синдрома у больных хроническим бронхитом // Клин, медицина. - 1995. - Т. 73, № 3. - С. 40-44.

17.Новоженов В.Г., Белоногов М.А., Теселкин Ю.О. и др. Хронический обструктивный бронхит: некоторые аспекты патогенеза и особенности клинического течения И Терапевт, архив. - 1996. - Т. 68, № 3. - С. 58-62.

18. Теселкин Ю.О., Жамбалова Б. А., Бабенкова И.В. и др. Антиоксидантные свойства дигидрокверцетина // Биофизика. - 1996. -Т. 41, № 3. - Р. 620-624.

19. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Влияние липофильных антиоксидантов на фотосенсибилизированную производными гематопорфирина пероксидацию липосомальных мембран при облучении гелий-неоновым лазером // Биол. мембраны. -19%.-Т. 13, №2.-С. 133-137.

20. Klebanov G.I., Teselkin Y.O., Babenkova l.V. et al. Free Tadical mechanisms oflaser therapy // Laser therapy. - 1996. - Vol. 8, № 1. - P. 15.

21. Klebanov G.I., Teselkin Y.O., Babenkova l.V. et al. Effect of laser irradiation on the photosensitized lipid peroxidation of liposomes and photosensitized hemolysis of human erythrocytes // Laser therapy. - 1996. -Vol. 8, № 1. -P. 83.

22. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на функциональный потенциал лейкоцитов // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1997. - Т. 123, №4.-С. 395-398.

23. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б. и др. Ингибирование сывороточными антиоксидантами окисления люминола в присутствии гемоглобина и пероксида водорода // Вопр. мед. химии. - 1997 - Т. 43, №2.-С. 87-93.

24.Klebanov G.I., Teselkin Yu.O., Babenkova I.V. et al. Evidence for a direct interaction of superoxide anion radical with carnosine II Biochem. Mol. Biol. Intern. - 1997. - Vol. 43, № 1. - P. 99-106.

25.Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Влияние карнозина и его составляющих на свободнорадикальные реакции // Биал. мембраны. - 1998. - Т. 15, № 1. - Р. 74-82.

26. Новоженов В.Г., Белоногов М.А., Теселкин Ю.О. и др. Амбулаторная антиоксидантная терапия при хроническом обструктивном бронхит« // Врач,-1998.-№12.-С. 16-18.

27. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б. и др. Определение антиокислительной активности плазмы крови с помощью системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол // Волр. мед. химии. - 1998. -Т. 44, № 1. - С. 70-76.

28. Клебанов Г.И., Капитанов А.Б., Теселкин Ю.О. и др. Антиоксидантные свойства ликопина // Биол. мембраны. - 1998. - Т. 15, № 2. - С. 227-237.

29.Klebanov G.I., Teselkin Yu.O., Babenkova I.V. et al. Low-power laser irradiation induces leukocyte priming // Gen. Physiol. Biophys. - 1998. -Vol. 17, №6.-P. 1-11.

30. Teselkin Yu.O., Babenkova I.V., Tjukavkina N.A. et al. Influence of dihydroquercetra on the lipid peroxidation of mice during post-radiation period // Phytother. Res. -1998. - Vol. 12. - P. 517-519.

31.Kolhir V.K., Bykov V.A., Teselkin Yu.O. et al. Use of new antioxidant diquertin as an adjuvant in therapy of patients with acute pneumonia // Phytother. Res. -1998. - Vol. 12. - P. 606-608.

32. Любицкий О.Б., Давыдов Б.В., Теселкин Ю.О. и др. Динамика показателей пероксидного окисления липидов и состояния антиоксидантной системы сыворотки крови при остром деструктивном паюфеатитс И Вопр. мед. химии. - 1998. - Т. 44, № 3. - С. 565-570.

33. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Антиоксидантная активность сыворотки крови // Вестн. РАМН. - 1999. - № 2. - С. 15-22.

34. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Клебанов Г.И. и др. Антиоксидантное действие дигидрокверцетина при общем у-облучении // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. - 1999. - № 2. - С. 45-48.

35. Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Асейче» А.В., Ятуров Б.Х. Влияние антиоксидан того препарата на основе биофлавоноидов и витамина С на антиоксидантную активность плазмы крови // Вопр. питания. - 1999. -№3.-С. 9-11.

36. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Колхир В.К. и др. Антиоксидантное действие дигидрокверцетина при тетрахлорметановом гепатите у крыс // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. - 1999. - № 3. - С. 44-47.

37.Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Макашова Н.В., Гусева М.Р. Антиоксидантная активность гистохрома и некоторых лекарственных препаратов, применяемых в офтальмологии //Весгн. офгальмол. - 1999.

4.-С. 22-35.

38. Макашова Н.В., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. Антиоксидантная активность слезной жидкости у больных открытоугольной глаукомой // Вестн. офгальмол. -1999. - № 5. - С. 3-4.

39. Teselkin Yu.O., Babenkova I.V., Kolhir V.K. et al. Dihydroquercetin as a means of antioxidative defence in rats with tetrachloromethane hepatitis H Phytother. Res. - 2000. - V. 14. - P. 160-162.

40. Кожура ВЛ., Таланцев K.B., Теселкин Ю.О. и др. Механизмы органопротекгорного действия низкоинтенсивного лазерного излучения при массивной кровопотере и клинической смерти // Ансстсзиол. и рсаниматол. - 2000. - № 6. - Р. 39-43.

41. Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Медведева С.А., Ребров Л.Б. и др. Влияние природного мальтола на процесс пероксидного окисления липосомапьных мембран // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. - 2001. -№ 4. - С. 22-26.

42. Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Тюкавкина H.A., Ребров Л.Б. и др. Антиоксидантная активность масла из зародышей пшеницы // Фармация.-200!.-Т. 50, №2.-С. 15-18.

Изобретения и рацпредложения

1. Рацпредложение 0-2849. Новый метод оценки суммарной антиокислительной активности / Теселкин Ю.О., Клебанов Г.И., Бабенкова И.В. и др. - Зарегистр. 27.02.87.

2. А. с. 1550673 СССР, А 61 N 5/00. Способ лечения нестабильной стенокардии / Напидзе Г.Э., Корочкин И.М., Теселкин Ю.О. и др. (СССР). -4364140/28-14; Заявл. 28.01.88; Зарегистр. 15.11.89.

3. Пат. 2139538 РФ, 6 G 01N 33/52, А 61 F 9/00. Способ прогнозирования прогрессирования глаукомы / Макашова Н.В., Алексеев Б.Н., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. (РФ). - 98119515/14; Заявл. 28.10.98; Опубл. 10.10.99, Бюл. №28.-4 с.

Теселхин Юрий Олегович (Россия) Антнок-сндянтняя активность плазмы крови как критерий оценки функционального состоянии антиоксндянтной системы организма и эффективности применения экзогенных ян гиоксидантов

Предложен новый способ определения антиоксидангной активности (АОА) плазмы крови, основанный на применении системы Hb-HjOi-люмииол. Изучена АОА плазмы крови при ряде патологических процессов и использовании некоторых экзогенных антиоксидантов. Исследован механизм антиоксидаотного действия дигидрокверцетина (3,з\4,5,7-пентагидроксифлаванон), который является действующим компонентом нового биофлавоноидного препарата "Диквертин". Показано, что in vitro дигидрокверцетин проявляет антирадикальные и железо-хелатируютие свойства. Подтверждение АОА дигидрокверцетина in vivo получено с использованием экспериментальных моделей свободнорадикальной патологии - внешнего общего у-облучения и тетрахлорметанового гепатита. Проведена оценка эффективности применения препарата "Диквертин" в комплексном лечении острой пневмонии. Улучшение клинических показателей у больных острой пневмонией, получавших диквертин, по сравнению с больными, не получавшими антиоксидантов, коррелировало с увеличением АОА плазмы крови и уменьшением содержания в ней продуктов липидной пероксидаши. Проведена клиническая апробация нового антиоксидантного препарата Тнстохром" (2,3,5,6,8-лента1идрокси-7-этнл-1,4-нафтохинон) при лечении больных глаукомой. Обнаружено увеличение АОА слезной жидкости и улучшение глазных функций у больных с развитой и далеко зашедшей стадиями глаукомы после проведения курса лечения гисгохромом. Полученные результаты показывают, что АОА плазмы крови и других биологических жидкостей является важным интегральным показателем для контроля за функциональным состоянием антиоксидактной системы организма и эффективностью применения экзогенных антиоксидантов.

Yuriy О. Teselkin (Russia) Antioxidant activity of human blood plasma as the criterion of the functional condition of antioxidant system and effectiveness of antioxidant therapy

The new method of valuation of the blood plasma antioxidant activity (AOA) by the hemoglobin-hydrogen peroxide-luminol chemiluminescence system is suggested. The blood plasma AOA in some diseases and alter administration of several antioxidant preparations was investigated. It was shown that dihydroquercetin (3,3',4',5,7- pentahydroxyflavanon), which is the main component of the new bioflavonoid drug Diquertin exhibited radical scavenging and tron-chelating properties in vitro. The evidence for the AOA of dihydroquercetin in vi'vo was received in experimental models of total single y-irradiation of mice and tetrachloromethane hepatitis in rats Clinical tests of the drug Diquertin in the treatment of patients with acute pneumonia were carried out. The patients receiving complex therapy in combination with Diquertin stowed a more rapid cessation of the signs of pulmonary inflammation, higher the blood plasma AOA and lower plasma levels of lipid peroxidation products than did the patients taking conventional therapy. Clinical tests of the new antioxidant Histochrome (2,3,5,6,8-penlahydroxy-7-ethyl-l,4-naphtoquinone) in the treatment of patients with primary open-angle glaucoma were carried out. Increase of the lacrimal fluid AOA and the improvement of eye functions in patients with the developed and far-advanced stages of glaucoma were observed after the course of treatment by Histochrome. The results of the study indicate that AOA of the blood plasma and other biological fluids is the important integral parameter, which allows to observe the functional condition of human antioxidant system and effectiveness of antioxidant therapy.

Теселкин Ю.О. Антиоксидантная активность плазмы крови как критерий оценки функционального состояния анти оксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов: Автореф. дис. ... д-ра. биол. наук. - М., 2003. - С. 1-38.

Подписано к печати 01.04.2003 г.

Формат А 5. Бумага тан. Печать ризогр. Тираж 100 экз.

Научно-исследовательский и учебно-методический центр биомедицинских технологий, 123056, Москва, ул. Красина 2.

»71Ж

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Теселкин, Юрий Олегович

Сокращения и условные обозначения.

Введение.

Цель и задачи исследования.

Научная новизна.

Положения, выносимые на защиту.

Практическая значимость.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Свободные радикалы и активированные кислородные метаболиты.

1.2. Антиоксидантная система человека и животных.

1.3. Антиоксидантная система плазмы крови.

1.4. Модельные системы для определения антиоксидантной активности плазмы крови.

• 1.4.1. Модельные системы на основе металл-индуцированного пероксидного окисления липидов.

1.4.2. Модельные системы на основе генерации водорастворимых пероксильных радикалов.

1.4.3. Модельные системы на основе генерации активных форм кислорода.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Использован н ые хи м ические реактивы.

2.2. Характеристика и методы получения экспериментального материалы.

2.3. Методы биохимического анализа.

2.4. Хемилюминесцентные измерения.

2.5. Модельные системы для изучения антиоксидантных свойств биологически активных веществ.

2.6. Измерение спектров поглощения и флуоресценции.

2.7. Экспериментальные модели свободнорадикальной патологии.

2.8. Условия изучения влияния экзогенных антиоксидантов и биологически активных добавок к пище на антиоксидантную активность плазмы крови человека и животных.

2.9. Клиническая характеристика больных.

2.10. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 3. Разработка новой хемилюминесцентной системы на основе НЬ, Н202 и люминола.

3.1. Система НЬ-Н202-люминол как система генерации свободных радикалов.

3.2. Механизм тушения интенсивности хемилюминесценции системы НЬ-Н2С>2-люминол.

Глава 4. Антйоксидантная активность плазмы крови в системе НЬ-Н202-люминол.

4.1. Влияние плазмы крови на параметры хемилюминесценции системы НЬ-Н2С>2-люминол.

4.2. Определение антиоксидантной активности плазмы крови с помощью системы НЬ-Н202-люминол.

4.3. Антиоксидантная активность плазмы крови при некоторых патологических процессах.

4.4. Влияние экзогенных антиоксидантов и биологически активных добавок к пище на антиоксидантную активность плазмы крови.

Глава 5. Применение системы НЬ-Н202-люминол для определения антиоксидантной активности лекарственных препаратов и слезной жидкости.

5.1. Антиоксидантная активность некоторых лекарственных препаратов, применяемых в офтальмологии.

Антиоксидантная активность плазмы крови и жидкости при первичной открытоугольной глаукоме слезной

Глава 6. Экспериментальное обоснование применения препарата "Диквертин" в условиях оксидантного стресса.

6.1. Влияние дигидрокверцетина на пероксидацию фосфолипидных липосом в присутствии системы Fe2+-аскорбат.

6.2. Влияние дигидрокверцетина на фотосенсибилизированное производными гематопорфирина пероксидное окисление липидов липосомальных мембран.

6.3. Влияние дигидрокверцетина на люминол-зависимую хемилюминесценцию полиморфноядерных лейкоцитов крови.

6.4. Железо-связывающая активность дигидрокверцетина.

6.5. Исследование антиоксидантного действия дигидрокверцетина на экспериментальных моделях свободнорадикальной патологии.

Глава 7. Применение биофлавоноидного препарата "Диквертин" для коррекции антиоксидантного статуса организма при лечении острой пневмонии.

Глава 8. Обсуждение результатов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антиоксидантная активность плазмы крови как критерий оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов"

Известно, что развитие целого ряда патологических состояний организма человека сопровождается усилением образования активированных кислородных метаболитов (АКМ) и свободных радикалов, которые могут вызвать повреждение биологически важных молекул и, в конечном итоге, привести к гибели клетки [117, 197, 268]. Так, установлено, что свободнорадикальное окисление и, в частности, пероксидное окисление липидов (ПОЛ) играет важную роль в патогенезе инфаркта миокарда, атеросклероза, злокачественного роста, бронхолегочных и других заболеваний [87, 109, 192, 268, 349]. Кроме того, активация реакций свободнорадикального окисления может наблюдаться при воздействии на организм человека ряда внешних факторов, например, ионизирующей радиации [19], УФ-излучения [140], гипербарической оксигенации [176], озона [144, 344], табачного дыма [297, 349а 394], промышленных пылей [97, 336].

В норме регуляция продукции АКМ и свободных радикалов в тканях и органах человека осуществляется многоуровневой физиологической антиоксидантной системой, которая включает в себя соединения различной химической природы: витамины, пигменты, гормоны, ферменты [44, 54, 192, 267, 370]. Несмотря на высокую эффективность антиоксидантной системы, она не всегда способна защитить организм человека от развития оксидантного стресса. В связи с этим одним из приоритетных направлений свободнорадикальной биологии и медицины является создание препаратов, обладающих антиоксидантными свойствами, с целью применения их для профилактики и лечения заболеваний, сопровождающихся усилением свободнорадикальных реакций. Широкие перспективы для практического использования в качестве лекарственных препаратов антиоксидантного действия представляют биологически активные вещества природного происхождения, например, вещества флавоноидной природы [182, 183, 286, 301, 355]. Однако клиническое применение многих из них затруднено в связи с недостаточно изученным механизмом антиоксидантного действия, а также отсутствием недорогих и эффективных способов оценки состояния антиоксидантной системы.

В настоящее время для оценки состояния антиоксидантной системы организма человека наряду с определением содержания отдельных антиоксидантов в плазме [10, 13, 48, 50, 346] и клетках крови [10, 51, 105, 122] используют показатель, обозначаемый как антиоксидантная активность (АОА) плазмы крови. АОА плазмы (сыворотки) крови - это интегральный показатель, отражающий ее способность противодействовать развитию свободнорадикальных реакций [84, 162]. Основными компонентами тест-систем для определения АОА плазмы крови являются: система генерации радикалов и субстрат или молекула-мишень, которая подвергается свободнорадикальному окислению [267, 290]. Добавление в модельную систему плазмы крови, содержащей различные водо- и жирорастворимые антиоксиданты, приводит к уменьшению образования радикалов и торможению окисления субстрата. Изменение параметров окисления субстрата в присутствии плазмы крови, регистрируемое с помощью полярографии, флуоресцентной и абсорбционной спектроскопии, хемилюминесценции и других методов, используется для характеристики ее АОА [175, 240, 354].

Существует много способов определения АОА плазмы крови [84, 267, 354]. Вместе с тем, большинство из них не получило широкого внедрения в клиническую практику, что обусловлено отдельными недостатками, к числу которых можно отнести сложность в приготовлении и хранении модельных систем окисления [60, 379], значительную продолжительность процедуры определения [138, 400], низкую чувствительность некоторых тестов [10], необходимость дорогостоящего оборудования [209, 340, 362, 411] или токсичность используемых реактивов [240, 306, 392, 400]. Существенным недостатком ряда предлагаемых способов определения АОА плазмы крови является отсутствие достаточного клинического материала, подтверждающего их практическую значимость [60, 68]. В связи с этим динамика АОА плазмы крови при многих заболеваниях организма человека, сопровождающихся усилением свободнорадикальных реакций, остается не изученной, а вопрос об использовании этого показателя для оценки эффективности антиоксидантной терапии остается до конца не решенным.

Цель и задачи исследования. Цель работы - получить экспериментальное и клиническое обоснование определения АОА плазмы крови для оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма в условиях развития оксидантного стресса и эффективности его коррекции с помощью экзогенных антиоксидантов.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи исследования:

1. Разработать новую радикал-генерирующую хемилюминесцентную систему для определения АОА плазмы крови, других биологических жидкостей, биологически активных веществ и лекарственных препаратов, отличающуюся высокой чувствительностью и адаптированную к условиям клинико-лабораторного анализа.

2. Исследовать влияние белков и низкомолекулярных антиоксидантов на параметры хемилюминесценции модельной системы и их вклад в общую АОА плазмы крови.

3. Исследовать динамику АОА плазмы крови, а также слезной жидкости при некоторых патологических процессах (острая пневмония, острый деструктивный панкреатит, первичная открытоугольная глаукома) и использовании экзогенных антиоксидантов.

4. С помощью различных систем свободнорадикального окисления изучить антиоксидантные свойства флавоноидного соединения дигидрокверцетина

ДГК)

5. Исследовать антиоксидантное действие ДГК in vivo при моделировании свободнорадикальной патологии (внешнее общее y-облучение и тетрахлорметановый гепатит).

Научная новизна. Разработана новая хемилюминесцентная система генерации свободных радикалов, основными компонентами которой являются гемоглобин, пероксид водорода и люминол (система НЬ-Н202-люминол). Отличительная особенность предлагаемой системы заключается в том, что образующиеся в ней радикалы-инициаторы составляют один из возможных путей инициирования свободнорадикальных реакций in vivo.

На основе системы НЬ-Н202-люминол разработан новый способ определения АОА плазмы крови, других биологических жидкостей (водянистая влага глаза, моча, спинномозговая, слезная и синовиальная жидкость), биологически активных веществ и лекарственных препаратов.

Впервые изучена АОА плазмы крови на разных стадиях развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ), исследована динамика АОА плазмы крови при острой пневмонии, остром деструктивном панкреатите.

С помощью системы НЬ-Н202-люминол впервые исследована АОА слезной жидкости в норме и при развитии ПОУГ. Обнаружено уменьшение АОА слезной жидкости по мере прогрессирования глаукоматозного процесса.

С использованием различных модельных систем свободнорадикального окисления и экспериментальных моделей свободнорадикальной патологии получены приоритетные данные об антиоксидантных свойствах ДГК -основного компонента нового перспективного биофлавоноидного препарата "Диквертин". Получены новые сведения об АОА антиоксидантного препарата "Гистохром", приготовленного на основе хиноидного пигмента морских беспозвоночных и предлагаемого в качестве антиоксидантного средства для лечения глазных и сердечно-сосудистых заболеваний.

Впервые проведено использование нового антиоксидантного препарата "Гистохром" для лечения ПОУГ. Обнаружено увеличение АОА слезной жидкости и улучшение зрительных функций у больных ПОУГ после проведения курса парабульбарных инъекций гистохрома.

Данная работа соответствует одному из приоритетных направлений научных исследований по отделению медико-биологических наук РАМН на 2002 г., утвержденных президентом РАМН 25 мая 2002 г. (постановление № 62, протокол № 7, параграф 3) "Изучение фармакологической регуляции нормальных и метаболических процессов. Разработка новых оригинальных лекарственных средств". Диссертационная работа выполнялась также в рамках научных исследований на 2002-2005 г. Межведомственного научного Совета по медицинской биотехнологии при РАМН и Министерства здравоохранения РФ по проблеме: "Изучение факторов биорегуляции и коррекции состояний организма на молекулярном, клеточном, тканевом и организменном уровнях".

Положения, выносимые на защиту

1. Разработка нового способа определения АОА плазмы крови и других биологических жидкостей на основе хемилюминесцентной системы НЬ-Н2Ог-люминол.

2. Применение системы НЬ-Н202-люминол для оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма в норме, при различных патологических процессах и использовании экзогенных антиоксидантов.

4. Биофлавоноидный препарат "Диквертин" - перспективное антиоксидантное средство для комплексного лечения острой пневмонии.

Практическая значимость. Разработанная система НЬ-Н2Ог-люминол отличается от других аналогичных систем простотой, доступностью основных компонентов и высокой чувствительностью. Предлагаемый способ определения АОА плазмы крови и других биологических жидкостей на основе системы НЬ-Н202-люминол может использоваться для наблюдения за состоянием антиоксидантной системы организма, оценки эффективности антиоксидантной терапии, а также для изучения антиоксидантных свойств биологически активных веществ и лекарственных препаратов.

Результаты изучения АОА плазмы крови и слезной жидкости в норме и при некоторых патологических процессах: острой пневмонии, остром деструктивном панкреатите, ПОУГ - имеют как общее медико-биологическое, так и важное клиническое значение для понимания патогенеза этих заболеваний и прогнозирования их течения. Так, в частности, предложен новый способ прогнозирования прогрессирования ПОУГ на основе определения АОА слезной жидкости (Пат. № 2139538 РФ "Способ прогнозирования прогрессирования глаукомы").

На основании результатов проведенных исследований препарат "Диквертин" разрешен для применения (приказ МЗ РФ № 302 от 29.07.96) у взрослых в качестве антиоксидантного и капилляропротекторного средства при бронхолегочных заболеваниях (острая пневмония, хронический обструктивный бронхит, бронхиальная астма) в составе комплексной терапии в сочетании с другими лекарственными средствами.

Данные, полученные в ходе экспериментальных и клинических исследований, реализованы при создании продуктов питания с добавкой диквертина (кондитерские изделия на жировой основе - АО Московская кондитерская фабрика "Красный Октябрь", сухое молоко "Флаволакт" - ВНИИ молочной промышленности) лечебно-профилактического назначения для предупреждения и коррекции состояний, связанных с недостаточным уровнем антиоксидантов в организме.

Методические подходы, разработанные на основе применения системы НЬ-Н202-люминол, имеют практическое значение и дополняют арсенал методов, использующихся в клинико-биохимических и научно-исследовательских лабораториях.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Теселкин, Юрий Олегович

выводы

1. Разработана новая радикал-генерирующая хемилюминесцентная система, основными компонентами которой являются НЬ, Н202 и люминол (система НЬ-Н2Ог-люминол). На основе системы НЬ-Н202-люминол предложен новый способ определения АОА плазмы крови, других биологических жидкостей и биологически активных веществ.

2. АОА плазмы крови в системе НЬ-Н202-люминол обусловлена белками и низкомолекулярными веществами. Вклад низкомолекулярных водорастворимых антиоксидантов в общую АОА плазмы крови человека составляет в среднем 53%, вклад белков и связанных с ними веществ -47%.

3. Развитие патологических процессов в организме и введение экзогенных антиоксидантов приводит к изменению АОА плазмы крови. При острой пневмонии, хроническом обструктивном бронхите и первичной открытоугольной глаукоме наблюдалось уменьшение АОА плазмы крови, при остром деструктивном панкреатите - увеличение. При использовании антиоксидантов (витамин С) и биологически активных добавок к пище (этерифицированная форма витамина С и смесь биофлавоноидов, масло зародышей пшеницы) зарегистрировано повышение АОА плазмы крови у добровольцев и животных.

4. С помощью системы НЬ-НгОг-люминол изучена АОА слезной жидкости при первичной открытоугольной глаукоме. Уменьшение АОА слезной жидкости у больных глаукомой коррелирует с тяжестью заболевания. Применение антиоксидантного препарата "Гистохром" при лечении больных глаукомой приводит к увеличению АОА слезной жидкости и улучшению зрительных функций.

6. На экспериментальных моделях свободнорадикальной патологии (общее внешнее y-облучение и тетрахпорметановый гепатит) изучено антиоксидантное действие дигидрокверцетина in vivo. В условиях развития оксидантного стресса, индуцированного воздействием на животных повреждающего фактора, антиоксидантное действие дигидрокверцетина проявлялось через снижение уровня продуктов пероксидного окисления липидов в плазме крови и органах и повышение АОА плазмы крови.

7. Диквертин является эффективным антиоксидантным средством для комплексного лечения острой пневмонии. Улучшение клинических показателей у больных острой пневмонией, получавших диквертин, по сравнению с больными, не получавшими антиоксидантов, коррелировало с увеличением АОА плазмы крови, повышением в ней уровня витамина Е и уменьшением содержания продуктов липидной пероксидации. Выраженность антиоксидантного эффекта диквертина не уступала эффективности применения антиоксидантного комплекса, включающего а-токоферола ацетат и тиосульфат натрия.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенного исследования была предложена новая радикал-генерирующая хем и люминесцентная система, основными компонентами которой являются НЬ, Н202 и люминол (система НЬ-Н202-люминол). Взаимодействие НЬ и Н202 в этой системе приводит к частичному разрушению гема НЬ и образованию радикалов-инициаторов, в качестве которых выступают радикалы феррилНЬ и *ОН. Люминол в данной системе играет роль субстрата окисления. Процесс окисления люминола сопровождается развитием характерной кинетики ХЛ. В отсутствие хотя бы одного из компонентов системы или при замене НЬ на ионы железа свечение не развивается. Добавление в модельную систему радикальных ингибиторов или плазмы крови, содержащей различные биоантиоксиданты, приводит к изменению параметров ХЛ: увеличению латентного периода и уменьшению интенсивности свечения.

На основе разработанной системы был предложен новый способ определения АОА плазмы крови, который заключается в регистрации латентного периода ХЛ модельной системы без и в присутствии плазмы крови. Для количественной оценки АОА плазмы крови ее выражают через концентрацию антиоксиданта сравнения, в качестве которого использовалась аскорбиновая кислота. Предлагаемый способ позволяет определять АОА не только плазмы крови, но и других биологических жидкостей: мочи, камерной влаги глаза, спинномозговой, слезной и синовиальной жидкости.

Основными преимуществами системы НЬ-НгОг-люминол перед другими системами являются следующие:

1. в качестве компонентов системы используются простые и доступные вещества;

2. инициаторами окисления молекулы-мишени являются физиологически важные радикалы-инициаторы, которые составляют один из путей инициирования свободнорадикальных реакций in vivo;

3. высокая чувствительность. Для проведения анализа требуется небольшое количество биологического материала. Минимальное количество плазмы крови составляет 10 мкл, что позволяет осуществлять забор крови из пальца и проводить динамическое наблюдение за состоянием ее антиоксидантного потенциала.

С помощью системы НЬ-Н202-люминол было зарегистрировано изменение АОА плазмы крови при некоторых заболеваниях организма человека, сопровождающихся усилением свободнорадикальных реакций: уменьшение - при острой пневмонии, хроническом обструктивном бронхите и ПОУГ, увеличение - при остром деструктивном панкреатите. Уменьшение АОА плазмы крови при исследованных заболеваниях, по-видимому, обусловлено усилением расходования биоантиоксидантов в условиях развития оксидантного стресса. Что касается увеличения АОА плазмы крови при остром деструктивном панкреатите, то оно может быть следствием повышения содержания в плазме мочевой кислоты, которая является продуктом катаболизма пуриновых оснований, входящих в состав ДНК и РНК погибших клеток. При ПОУГ, кроме уменьшения АОА плазмы крови, было установлено уменьшение АОА слезной жидкости. В частности, достоверное уменьшение АОА слезы было обнаружено у больных с 3 (далеко зашедшей) стадией ПОУГ, которая характеризуется существенным усилением свободнорадикальных реакций как в глазу, так и на уровне всего организма [24, 29, 106, 172].

Разработанная система может использоваться для изучения антиоксидантных свойств как биологических жидкостей, так и лекарственных препаратов. Так, с помощью системы НЬ-Н202-люминол была изучена АОА некоторых препаратов, применяемых в офтальмологии. Показано, что наибольшей АОА в исследованной модельной системе обладали ДГК, кверцетин, рутин и гистохром, а наименьшей - эмоксипин.

Для коррекции антиоксидантного статуса организма человека в условиях развития оксидантного стресса широко используется антиоксидантная терапия [11, 50, 51, 121, 124, 130, 132, 345, 349]. Весьма перспективными для клинического применения антиоксидантами являются вещества природного происхождения [13, 59, 87, 134, 135, 148, 345]. К их числу следует отнести новый антиоксид а нтный препарат "Гистохром", который в качестве основного действующего начала содержит эхинохром -хиноидный пигмент морских беспозвоночных, относящихся к типу иглокожих. Упомянутый препарат хорошо зарекомендовал себя при лечении некоторых видов глазной патологии [66]. В настоящей работе впервые апробировано местное применение гистохрома для лечения ПОУГ. Обнаружено увеличение АОА слезной жидкости и улучшение зрительных функций у больных с ПОУГ после проведения курса парабульбарных инъекций гистохрома. Полученные результаты показывают, что определение АОА слезы - это простой, неинвазивный и информативный способ оценки функционального состояния системы регуляции свободнорадикальных реакций в глазу и эффективности антиоксидантной терапии.

Среди природных антиоксидантов особое место занимают вещества флавоноидной природы, многие представители которых обладают выраженными антиоксидантными свойствами [182, 183, 271, 286, 294, 301, 355, 362]. Одним из представителей флавоноидов является ДГК. Промышленное получение ДГК в нашей стране осуществляется на основе древесины лиственницы [166]. В настоящей работе, в отличие от предыдущих исследований, для изучения антиоксидантных свойств ДГК использовались такие модельные системы, в которых инициирование свободнорадикальных реакций происходит при участии ионов двухвалентного железа или физиологически важных АКМ и свободных радикалов. Для этого, кроме разработанной радикал-генерирующей системы, были использованы: система ПОЛ липосом, система КСО-ксантин, активированные фагоциты, реактив Фентона. Анализ результатов, полученных с использованием всех модельных систем, позволил прийти к выводу, что механизм антиоксидантного действия

ДГК заключается во взаимодействии со свободными радикалами и в хелатировании ионов двухвалентного железа.

Подтверждение АОА ДГК in vivo было получено с использованием экспериментальных моделей свободнорадикальной патологии - внешнего общего y-облучения и тетрахлорметанового гепатита. Обнаружено, что развитие оксидантного стресса, индуцированного воздействием внешнего повреждающего фактора, сопровождалось не только повышением содержания продуктов ПОЛ в организме животных (мыши, крысы), но и уменьшением АОА их плазмы крови. Введение животным в качестве антиоксидантного средства ДГК приводило к торможению процесса ПОЛ и повышению АОА плазмы крови.

Логическим завершением всего комплекса исследований по изучению антиоксидантной активности ДГК в модельных системах и экспериментах на животных было создание на основе ДГК нового биофлавоноидного лекарственного препарата "Диквертин". Клиническая апробация диквертина как антиоксидантного средства была проведена при лечении больных острой пневмонией. Показано, что диквертин является эффективным антиоксидантным средством для комплексного лечения острой пневмонии. Включение диквертина в состав комплексной терапии больных острой пневмонией приводило к более быстрому исчезновению признаков легочного воспаления, а также уменьшению содержания продуктов липидной пероксидации в их плазме крови, повышению в ней уровня витамина Е и увеличению ее АОА по сравнению с больными, не получавшими антиоксидантов. Антиоксидантный эффект диквертина не уступал эффективности применения АОК, включающего а-токоферола ацетат и тиосульфат натрия.

Результаты проведенного исследования показывают, что АОА плазмы крови и других биологических жидкостей может использоваться в качестве одного из критериев оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Теселкин, Юрий Олегович, Москва

1. Айдарханов Б.Б., Лакшина Э.А., Ленская Е.Г. Молекулярные аспекты механизма антиокислительной активности витамина Е: особенности действия а- и у-токоферолов // Вопр. мед. химии. - 1989. - Т. 35, № 3. - С. 2-9.

2. Акберова С.И., Леонтьева Н.А., Строева О.Г., Галегов Г.А. Действие пара-аминобензойной кислоты и ее комбинаций с ацикповиром на герпетическую инфекцию // Антибиотики и химиотерапия. 1995. - Т. 40, № 10. - С. 25-29.

3. Акберова С.И., Мусаев Галнибур П.И., Магомедов Н.М. и др. Пара-аминобензойная кислота как антиоксидант // Докл. АН. 1998. - Т. 361, № 3. - С. 419-421.

4. Акберова С.И., Мусаев Галнибур П.И., Магомедов Н.М. и др. Сравнительная оценка антиоксидантного действия лара-аминобензойной кислоты и эмоксипина в сетчатке // Вестн. офтальмол. 1998. - Т. 114, № 6. - С. 39-44.

5. Акберова С.И., Тазулахова Э.Б., Мусаев Галнибур П.И. и др. Изучение интерферониндуцирующей активности лара-аминобензойной кислоты в глазах кроликов при субконъюнктивальном введении // Вестн. офтальмол. 1999. - Т. 115, № 1. - С. 24-26.

6. Алексидзе А.Т., Берадзе И.Н., Головачев О.Г. Влияние аскорбиновой кислоты на перекисное окисление липидов при первичной глаукоме // Офтальмол. журн. 1989. - № 2. - С. 114-116.

7. Аматуни В.Г., Бекмезян Н.Г., Авакян А.Х. Хемилюминесцентное определение антирадикальной активности сыворотки крови больныхбронхиальной астмой // Клин. мед. 1987. - Т. 65, № 7. - С. 80-84.

8. Арутюнян В.М., Григорян Р.А. Диагностика и патогенетические основы лечения панкреатита. Ереван: Айастан, 1995. - 284 с.

9. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма / Методические рекомендации под ред. В.Х. Хавинсона. СПб.: ИКФ Фолиант, 2000. - 104 с.

10. Архипова М.М., Ванин А.Ф. Патогенетические принципы терапии ишемии сетчатки при некоторой сосудистой патологии глазного дна на основе изучения роли оксида азота // Вестн. офтальмол. 2001. - Т. 117, № 1. -С. 51-53.

11. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. М.: Наука, 1975. - 327 с.

12. Бабаян Т.О., Арзамасцев А.Л., Кушлинский Н.Е., Родионова Г.М. Применение антиоксидантов в комплексном лечении онкологических больных // Фармация. 1998. - № 3. - С. 39-40.

13. Бабенкова И.В. Роль функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов крови и перекисного окисления липидов в патогенезе увеита: Дис. канд. мед. наук. М.,1991 - С. 1-178.

14. Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Медведева С.А. и др. Влияние природного мальтола на процесс пероксидного окисления липосомальных мембран // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 2001. - № 4. - С. 22-26.

15. Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Тюкавкина Н.А. и др. Антиоксидантная активность масла из зародышей пшеницы // Фармация. 2001. - Т. 50, № 2.-С. 15-18.

16. Бабижаев М.А., Деев А.И. Модификация мембранных структур при катаракте // Вопр. мед. химии. 1987. - Т. 33, № 2. - С. 125-132.

17. Бангэм А.Д. Развитие представления о липосомах // Липосомы в биологических системах. Пер. с анг. М.: Медицина, 1983. - С. 13-35.

18. Барабой В.А., Орел В.Э., Карнаух И.М. Перекисное окисление и радиация. Киев: Наук, думка, 1991. - 252 с.

19. Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин Ю.Б., Кудряшов Ю.Б. Перекисное окисление и стресс. СПб.: Наука, 1992. - 148 с.

20. Белова Л.А., Оглоблина О.Г., Белов А.А., Кухарчук В.В. Процессы модификации липопротеинов, физиологическая и патогенетическая роль модифицированных липопротеинов // Вопр. мед. химии. 2000. - Т. 46, № 1.-С. 8-21.

21. Бергельсон Л.Д., Дятловицкая Э.Д., Молотковский Ю.Г. и др. Препаративная биохимия липидов. М.: Наука, 1981. - 256 с.

22. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов (молекулярные механизмы, пути предупреждения и лечения). М.: Медицина, 1989. - 368 с.

23. Бирич Т.В., Бирич Т.А., Марченко Л.Н. и др. Витамин Е в комплексном лечении больных первичной глаукомой // Вестн. офтальмол. 1986. - Т. 102, №2. - С. 10-13.

24. Болдырев А.А., Стволинский С.Л., Паскуаль К. и др. Влияние карнозина и тролокса на клеточную хемилюминесценцию лейкоцитов // Биохимия. -1992. Т. 57, № 9. - С. 1337-1342.

25. Болевич С., Даниляк И.Г., Коган А.Х. Новые доказательства включения активных форм кислорода в патогенез бронхиальной астмы // Клин. мед. -1997. Т. 75, № 8. - С. 34-36.

26. Бондарь Т.Н., Ланкин В.З., Антоновский В.Л. Восстановление органических гидропероксидов глутатионпероксидазой и глутатион-в-трансферазой: влияние структуры субстрата // Докл. АН СССР. 1989. - Т. 304, № 1. - С. 217-220.

27. Боровикова М.С., Мащакевич И.И. Влияние антиоксидантной терапии на перекисное окисление липидов у больных острой и затяжной пневмонией // Клин. мед. 1988. - Т. 66, № 12. - С. 62-64.

28. Бунин А.Я., Бабижаев М.А., Супрун М.В. Об участии процесса перекисногоокисления липидов в деструкции дренажной системы глаз при открытоугольной глаукоме // Вестн. офтальмол. 1985. - Т. 101, № 2. - С. 13-16.

29. Бунин А.Я., Филина А.А., Еричев В.П. Дефицит глутатиона при открытоугольной глаукоме и подходы к его коррекции // Вестн. офтальмол. 1992. - Т. 108, № 4-6. - С. 13-15.

30. Бунин А.Я., Ермакова В.Н., Филина А.А. Новые направления гипотензивной терапии открытоугольной глаукомы (экспериментально-клинические исследования) // Вестн. офтальмол. 1993. - Т. 109, № 1. -С. 3-6.

31. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты // Успехи химии. 1985. - Т. 54, № 9. - С. 1540-1558.

32. Бурлакова Е.Б., Сторожок Н.М., Храпова Н.Г. Изучение суммарной активности природных антиоксидантов хемилюминесцентным методом // Биофизика. 1988. - Т. 33, № 4. - С. 584-588.

33. Бурлакова Е.Б., Сторожок Н.М., Храпова Н.Г. и др. Изучение аддитивности антиокислительного действия суммы природных антиоксидантов липидов // Вопр. мед. химии. 1990. - Т. 36, № 4. - С. 72-74.

34. Бушма М.И., Лукиненко П.И. Роль витаминов в функции монооксигеназ // Эксперим. и клин, фармакол. 1994. - Т. 57, № 5. - С. 53-57.

35. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.

36. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. 1987. -Т. 32, № 5. - С. 830-844.

37. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция клеток животных // Итоги науки и техники. Сер.: Биофизика. М., 1989. - Т. 24. - С. 1-176.

38. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Пирязев А.П. Стимулированная кристаллами бария хемилюминесценция лейкоцитов цельной крови // Биофизика. 1989. - Т. 34, №6. - С. 1051-1054.

39. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер.: Биофизика. М., 1991. - Т. 29. - С. 1-252.

40. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Оценка антиокислительной и антирадикальной активностей веществ и биологических объектов с помощью железо-инициированной хемилюминесценции // Биофизика. 1992. - Т. 37, № 6. - С. 1041-1047.

41. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Активированная кумарином хемилюминесценция липопротеидов низкой плотности в присутствии ионов двухвалентного железа // Биофизика. 1995. - Т. 40, № 2. - С. 323-326.

42. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн. РАМН. 1998. - Т. 98, № 7. - С. 43-51.

43. Волчегорский И.А., Львовская Е.И., Глузмин М.И. и др. Изменения антиокислительной активности сыворотки крови при воспалительной патологии // Вопр. мед. химии. 1997. - Т. 43, № 4. - С. 233-237.

44. Воскобойникова И.В. Фармакокинетическое исследование биологически активных ксантоновых и флаваноновых соединений: Дис. . канд. фарм. наук.-М., 1993.-С. 1-157.

45. Воскресенский О.Н., Бобырев В.Н. Биоантиоксиданты облигатные факторы питания // Вопр. мед. химии. - 1992. - Т. 38, № 4. - С. 21-26.

46. Выстрищак В.В., Гавриленко И.С., Харитонов М.А., Федоришкин А.А. К233вопросу о роли перекисного окисления липидов и состояния антиоксидантной системы в патогенезе острой пневмонии II Клин. лаб. диагн. 1997. - № 6. - С. 26-27.

47. Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови // Лаб. дело. 1983.- № 3. С. 33-36.

48. Голиков А.П., Голиков П.П., Давыдов Б.В. и др. Влияние мексидола на состояние окислительного стресса у больных гипертонической болезнью, осложненной гипертоническим кризом по церебральному варианту // Кардиология. 2002. - Т. 42, № 3. - С. 25-29.

49. Гусева М.Р. Диагностика и патогенетическая терапия увеитов у детей: Дис. . д-ра мед. наук в форме научного доклада. М.,1996 - С. 1-64.

50. Гусейнова Л.М., Сафаралиева Э.С., Аширов М.Г. и др. Изменение содержания витамина Е и эффективность его применения при пневмонии у детей // Педиатрия. 1986. - № 10. - С. 78-79.

51. Дадали В.А. Процессы перекисного окисления в организме и природные антиоксиданты // Введение в микронутриентологию. Новосибирск, 1999.- С. 240-263.

52. Даниляк И.Г., Коган А.Х., Болевич С. Аевит и глутаминовая кислота в лечении больных бронхиальной астмой // Клин. мед. 1995. - Т. 73, № 5.1. С. 50-53.

53. Девис М., Остин Дж., Патридж Д. Витамин С: химия и биохимия. Пер. с анг. М.: Мир, 1999. - 176 с.

54. Деев А.И., Добрецов Г.Е., Владимиров Ю.А. Влияние физической структуры фосфолипидных мембран на перекисное окисление, индуцированное ионами Fe2+ // Вопр. мед. химии. 1977. - Т. 23, № 4. - С. 545-549.

55. Дементьева Г.С., Фарбер Н.А., Брагинский Д.М. и др. Кверцетин в терапии вирусного гепатита В // Сов. мед. 1990. - № 3. - С. 102-104.

56. Дремина Е.С., Шаров B.C., Владимиров Ю.А. Использование кинетики Ре2+-индуцированной хемилюминесценции в трис-буферной суспензии липосом для исследования антиоксидантной активности плазмы крови // Биофизика. 1993. - Т. 38, № 6. - С.1047-1052.

57. Дубинина Е.Е. Некоторые особенности функционирования ферментативной антиоксидантной защиты плазмы крови человека // Биохимия. 1993. - Т. 58, № 2. - С. 268-273.

58. Дудник Л.Б., Хренов А.В., Храпова Н.Г., Алесенко А.В. Антиоксидантные и антиапоптические свойства билирубина // Тез. докл. V Междунар. конф. "Биоантиоксидант", 18-20 ноября 1998, Москва. М., 1998. - С. 127-128.

59. Дудник Л.Б., Виксна Л.М., Майоре А.Я. Пероксидное окисление липидов и его связь с изменением состава и антиокислительных свойств липидов при коматогенных формах острого вирусного гепатита В // Вопр. мед. химии. 2000. - Т. 46, № 6. - С. 597-609.

60. Дудник Л.Б., Цюпко А.Н., Хренов А.В., Алесенко А.В. Влияние билирубина на пероксидное окисление липидов, активность сфингомиелиназы и апоптоз, индуцированный сфингозидом и УФ-облучением // Биохимия. -2001. Т. 66, №9. - С. 1252-1262.

61. Дюмаев К.М., Воронина Т.А., Смирнов Л.Д. Антиоксиданты в профилактике и терапии патологий ЦНС. М.: Ин-т биомед. химии РАМН, 1995. - 272 с.

62. Егоров Е.А., Алехина В.А., Волобуев Т.М. Новый биоантиоксидант "Гистохром" в клинике глазных болезней // Вестн. офтальмол. 1999. - Т. 115, №3. - С. 34-35.

63. Завадская Ю.С., Каржаубаева Г.Г. Значение исследования процессов перекисного окисления липидов при глаукоме // Вестн. офтальмол. 1986. -Т. 102, № 5. - С. 6-8.

64. Завьялов С.А., Завьялова Л.М., Трахтенберг Л.И. и др. Определение антиоксидантного потенциала биологических жидкостей с помощью полупроводниковых химических сенсоров // Вестн. РАМН. 1998. - Т. 98, № 7. - С. 55-57.

65. Захарова Н.А., Богданов Г.Н., Запрометов М.Н. и др. Антирадикальная эффективность некоторых природных фенольных соединений // Ж. общей химии. 1970. - Т. 42, № 6. - С. 1414-1420.

66. Иванов И.И. Эстафетные механизмы в процессах перекисного окисления липидов биологических мембран // Успехи биол. химии. 1994. - Т. 25. -С.110-124.

67. Иванов Л.В., Хаджай Я.И., Кошелева Л.П. и др. Сродство к биомембранам и некоторые особенности фармакокинетики соединений флавоноидной природы // Хим.-фарм. журн. 1992. - Т. 26, № 2. - С. 20-23.

68. Ивашкин В.Т., Драпкина О.М. Клиническое значение оксида азота и белков теплового шока. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 88 с.

69. Илларионов В.Е. Основы лазерной терапии. М.: Изд-во "Респект" объединения "ИНОТЕХ-Прогресс", 1992. - 128 с.

70. Ильюченок Т.Ф., Хоменко А.И., Фригидова Л.М. и др. Фармакологические и радиозащитные свойства некоторых производных у-пирона (флаваноны и флаванолы) // Фармакол. и токсикол. 1975. - № 5. - С. 607-612.

71. Каган В.Е., Орлов О.Н., Прилипко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов // Итоги науки и техники. Сер.: Биофизика. М., 1986. - Т. 18. - С. 1-136.

72. Каламев И.И., Можеренков В.П., Прокофьева Г.Л. Аскорбиновая кислота в офтальмологии // Вестн. офтальмол. 1994. - Т. 110, № 1. - С. 35-36.

73. Кейтс М. Техника липидологии. М.: Мир, 1975. - 322 с.

74. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. и др. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеинов // Лаб. дело. 1988. - № 5. - С. 59-62.

75. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Ингибирование дигидрокверцетином свободнорадикального окисления липидов сухого молока // Биотехнология и управление. 1995. - № 1. - С. 36-39.

76. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на функциональный потенциал лейкоцитов // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1997. - Т. 123, № 4. - С. 395-398.

77. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Влияние карнозина и его составляющих на свободнорадикальные реакции // Биол. мембраны. -1998.-Т. 15, № 1. С. 74-82.

78. Клебанов Г.И., Капитанов А.Б., Теселкин Ю.О. и др. Антиоксидантные свойства ликопина // Биол. мембраны. 1998. - Т. 15, № 2. - С. 227-237.

79. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. и др. Антиоксидантная активность сыворотки крови // Вестн. РАМН. 1999. - Т. 99, № 2. - 15-22.

80. Клебанов Г.И., Любицкий О.Б., Васильева О.В. и др. Антиоксидантные свойства производных 3-оксипиридина: мексидола, эмоксипина и проксипина // Вопр. мед. химии. 2001. - Т. 47, № 3. - С. 288-300.

81. Ковалевский Е.И., Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О. и др. Антиоксидантная активность фармацевтических препаратов, применяемых для лечения заболевания глаз // Вестн. офтальмол. 1987. - Т. 103, № 4. - С. 48-51.

82. Кожевникова Н.А., Рапопорт И.А. Восстановление активности панкреатической дезоксирибонуклеазы с помощью л-аминобензойной кислоты // Докл. АН СССР. 1987. - Т. 295, № 4. - С. 1009-1012.

83. Кожевникова Н.А., Рапопорт И.А. Исследование способности п-аминобензойной кислоты восстанавливать активность щелочной рибонуклеазы // Изв. АН СССР. Сер.: Биология. 1987. - № 5. - С. 787-792.

84. Кожура В.Л., Таланцев К.В., Новодержкина И.С. и др. Механизмы органопротекторного действия низкоинтенсивного лазерного излучения при массивной кровопотере и клинической смерти // Анестезиол. и реаниматол. 2000. - № 6. - Р. 39-43.

85. Козлов А.В., Шинкаренко Л И., Владимиров Ю.А., Азизова О.А. Роль эндогенного свободного железа в активации перекисного окисления липидов II Бюл. эксперим. биол. и мед. 1985. - Т. 99, № 1. - С. 38-40.

86. Козлов В.И., Буйлин В.А. Лазеротерапия. М.: Центр "АСТР", 1993. - 149 с.

87. Колхир В.К., Тюкавкина Н.А., Быков В.А. и др. Диквертин новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство // Хим.-фарм. журнал. - 1995. - № 9. - С. 61-64.

88. Колхир В.К., Тюкавкина Н.А., Быков В.А. Новое антиоксидантное средство "Диквертин" // Практ. фитотер. 1997. - № 1. - С. 12-16.

89. Кондакова Н.В., Рипа Н.В., Кузнецова Н.В., Амирагова М.И. Радиационно-химические превращения сывороточного альбумина в водном растворе // Химия высоких энергий. 1994. - Т. 28, № 6. - С. 497-503.

90. Кондакова Н.В., Сахарова В.В., Рипа Н.В. и др. Константы скоростей реакций флавоноидов и родственных соединений природногопроисхождения с радикалами ОН при радиолизе в водном растворе // Химия высоких энергий. 1998. - Т. 32, № 2. - С. 106-111.

91. Коркина Л.Г., Величковский Б.Т. Роль свободных радикалов кислорода в пылевой патологии легких // Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине. Рига: РМИ, 1988. - С. 153-163.

92. Корочкин И.М., Бабенко Е.В. Механизмы терапевтической эффективности излучения гелий-неонового лазера // Сов. мед. 1990. - № 3. - С. 3-8.

93. Корочкин И.М., Барбараш О.Л., Чукаева И И. и др. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на функциональную активность лейкоцитов и антиоксидантную систему плазмы крови при остром инфаркте миокарда // Сов. мед. 1990. - № 5. - С 36-39.

94. Костюк В.А., Потапович А.И., Ковалева Ж.В. Простой и чувствительный метод определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина // Вопр. мед. химии. 1990. - Т. 36, № 2. -С. 88-91.

95. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высш. школа, 1980.-272 с.

96. Краморенко Ю.С., Добрица Т.А., Иманбаева З.А., Егоров Е.А. Эмоксипин в лечении первичной глаукомы // Вестн. офтальмол. 1992. - Т. 108, № 1. -С. 14-15.

97. Красновский А.А. Люминесценция при фотосенсибилизированном образовании синглетного кислорода в растворах // Возбужденные молекулы. Кинетика превращений. Л.: Наука, 1982. - С. 32-50.

98. Кубатиев А.А., Ядигарова З.Т., Рудько И.А. и др. Влияние диквертина на содержание циклических нукпеотидов в тромбоцитах // Бюл. экспер. биол. и мед. 1999. - Т. 128, № 9. - С. 267-269.

99. Кумерова АО., Петухов В.И., Шкестерс А.П. и др. Возможность использования антиоксидантных ферментов эритроцитов в качестве индикаторов, характеризующих течение болезни у больных гемобластозами // Вопр. мед. химии. 1996. - Т. 42, № 2. - С. 144-147.

100. Курышева Н.И., Винецкая М.И., Еричев В.П. и др. // Роль свободнорадикальных реакций камерной влаги в развитии первичной открытоугольной глаукомы // Вестн. офтальмол. 1996. - Т. 112, № 4. - С. 3-5.

101. Курышева Н.И., Деева И.Б., Деев А.И., Еричев В.П. Сравнительное изучение антирадикального действия некоторых антиглаукоматозных препаратов // Вестн. офтальмол. 1998. - Т. 114, № 2. - С. 6-9.

102. Панкин В.З., Тихазе А.К., Осис Ю Г. и др. Ферментативная регуляция перекисного окисления липидов в биомембранах: роль фосфолипазы А2 и глутатионтрансферазы // Докл. АН СССР. 1985. - Т. 281, № 1. - С. 204-207.

103. Панкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы // Кардиология. 2000. - Т. 40, № 7. - С. 48-61.

104. Лебедев А.В., Богуславская Л.В., Левицкий Д.О., Максимов О.Б. Механизм ингибирования Ре2+-индуцированного окисления фосфатидилхолина полигидроксинафтахинонами // Биохимия. 1988. - Т. 53, № 4. - С. 598-603.

105. Левшин Б.И. Экспериментальная фармакотерапия токсического гепатита // Патол. физиол. и экспер. терапия. 1972. - Т. 13, № 2. - С. 66-67.

106. Лопухин Ю.М., Владимиров Ю.А., Молоденков М.Н. и др. Хемилюминесценция липопротеидов сыворотки крови, выделенных ультрацентрифугированием и осаждением в присутствии гепарина и кальция // Вопр. мед. химии. 1983. - Т. 29, № 1. - С. 116-120.

107. Магин Д.В., Измайлов Д.Ю., Попов И.Н. и др. Фотохемилюминесценция как метод изучения антиоксидантной активности в биологических системах. Математическое моделирование // Вопр. мед. химии. 2000. -Т. 46, №4.-С. 419—425.

108. Малая Л.Т., Реус Л.П., Бондаренко М.И. Перекисное окисление липидовв оценке заживления инфаркта миокарда // Терапевт, архив. 1985. - Т. 57, № 5. - С. 52-58.

109. Мартынюк В.Б., Ковальчук С.Н., Тымочко М.Ф., Панасюк Е.Н. Индекс антиокислительной активности биологического материала // Лаб. дело. -1991.-№3.-С. 19-22.

110. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань: Магариф, 1993. - 192 с.

111. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., Шергин С.М. Биохимия окислительного стресса. Оксиданты и антиоксиданты. Новосибирск, 1994. - 203 с.

112. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Реутов В.П. Оксид азота и NO-синтазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях // Биохимия. 2000. - Т. 65, № 4. - С. 485-503.

113. Момыналиев К.Т., Панасенко О.М., Говорун В.М., Сергиенко В.И. Гипохлорит-индуцированная деструкция липидного компонента липопротеинов крови человека // Биол. мембраны. 1995. - Т. 12, № 4. -С.385-390.

114. Нагибина М.В., Нейфах Е.А., Крылов В.Ф. и др. О лечении пневмоний при гриппе антиоксидантами // Терапевт, архив. 1996. - Т. 68, № 11. - С. 33-35.

115. Недосугова Л.В., Волковой А.К., Рудько И.А. и др. Сравнительная оценка эффективности биофлавоноидов Диквертина и Танакана в терапии сахарного диабета 2 типа // Клин, фармакол. и тер. 2000. - Т. 9, № 4. -С.65-67.

116. Нестеров А.П. Глаукома. М.: Медицина, 1995. - 256 с.

117. Новоженов Н.Г., Белоногов М.А., Прищепов И.А. и др. Антиоксиданты при хроническом обструктивном бронхите // Врач. 1997. - № 1. - С. 9-11.

118. Осипов А.Н., Якутова Э.Ш., Владимиров Ю.А. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа // Биофизика. 1993. - Т. 38, № 3. - С. 390-396.

119. Осипов А.Н., Брюханова Э.В., Вахрушева Т.В. и др. Влияние гипохлорита и перекиси водорода на способность гемоглобина стимулировать перекисное окисление липидов липопротеинов низкой плотности // Биофизика. 1997. - Т. 42, № 2. - С. 400-407.

120. Палагина М.В., Хасина М.А., Гельцер Б.И., Девятое А.П. Антиокислительное действие препарата солодки уральской при остром поражении сурфактанта легких тотальным y-облучением // Вопр. мед. химии. 1995. - Т. 41, № 1. - С. 32-34.

121. Панасенко О.М., Сергиенко В.И. Свободнорадикальная модификация липопротеинов крови и атеросклероз // Биол. мембраны. 1993. - Т. 10, № 4. - С. 341-382.

122. Пересадин Н.А., Фролов В.М., Пинский Л.Л. Коррекция антиоксидантами цитогенетических нарушений при вирусном гепатите // Врач. дело. 1995. - № 1-2. - С. 76-78.

123. Петрович Ю.А., Терехина Н.А. Биохимия слезы и ее изменение при патологии (обзор) // Вопр. мед. химии. 1990. - Т. 36, №3. - С. 13-18.

124. Петруня A.M. Иммунные и микроциркуляторные нарушения у больных с затяжным течением вирусного гепатита В и их коррекция // Врач. дело. -1995. №1-2. - С. 130-132.

125. Пикаев А.К., Кабакчи С.А. Реакционная способность первичных продуктов радиолиза воды. Справочник. М.: Энергоиздат, 1982. - 103 с.

126. Плотников М.Б., Логвинов С.В., Пугаченко Н.В. и др. Церебропротекторные эффекты смеси диквертина и аскорбиновой кислоты // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2000. - Т. 130, № 11. - С. 543-547.

127. Плотников М.Б., Маслов М.Ю., Алиев О.И. и др. Реологический статус крыс при совместном введении циклофосфамида и антиоксидантного комплекса // Экспер. онкол. 2000. - № 4. - С. 228-230.

128. Плотников М.Б., Маслов М.Ю., Алиев О.И. и др. Коррекция гемореологических расстройств при остром инфаркте миокарда у крыс комплексом диквертина и аскорбиновой кислоты // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 2000. - 2. - С. 31-33.

129. Плотников М.Б., Маслов М.Ю., Алиев О.И. и др. Гемореологическое действие асковертина при аллоксановом диабете у крыс // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 2001. - № 4. - С. 26-28.

130. Промыслов М.Ш., Демчук М.Л. Модификация метода определения суммарной антиокислительной активности сыворотки крови // Вопр. мед. химии. 1990. - Т. 36, № 4. - С. 90-92.

131. Рапопорт И.А. Химические мутагены и пара-аминобензойная кислота в повышении урожайности сельскохозяйственных растений. М.: Наука, 1989. -253 с.

132. Рощупкин Д.И., Мурина М.А. Фотобиологические процессы в биомембранах при действии ультрафиолетового излучения на клетки, ткани и органы животных // Биофизика. 1993. - Т. 38, № 6. - С. 1053-1068.

133. Русин Б.А. Хемилюминесценция фталгидразидов // Биохемилюминесценция. Труды московского общества испытателей природы. М.: Наука, 1983. - Т. 58. - С. 69-117.

134. Санина О.Л., Бердинских Н.К. Биологическая роль церулоплазмина и возможность его применения (обзор литературы) // Вопр. мед. химии. -1986.-Т. 32, №5.-С. 7-14.

135. Свободные радикалы в биологии / Под ред. У. Прайор. Пер. с анг. М.: Мир, 1979. - Т. 1.-318 с.

136. Селиванова И.А. Физико-химические основы создания лекарственных средств и пищевых добавок на базе биологически активных веществ древесины Larix gmelinii Rupr. (Rupr.) и Larix sibirica Ledeb: Дис. . д-ра фарм. наук. М.,1998. - С. 1-276.

137. Селиванова И.А., Тюкавкина Н.А., Колесник Ю.А. и др. Изучение всасывания диквертина в условиях моделирования желудочно-кишечного тракта // Фармация. 1998. - № 2. - С. 27-29.

138. Сергиенко В.И., Мурина М.А., Панасенко О.М. и др. Молекулярные механизмы действия гипохлорита натрия на тромбоциты и липопротеины // Вестн. РАМН. 1995. - Т. 95, № 3. - 48-53.

139. Скакун Н.П. Использование антиоксидантов для лечения больных туберкулезом // Фармакол. и токсикол. 1991. - Т. 54, № 1. - С. 80-84.

140. Смирнов Л.Д., Дюмаев К.М. p-Оксипроизводные шестичленных азотистых гетероциклов. Синтез, ингибирующая активность и биологические свойства (обзор) // Хим.-фарм. журн. 1982. - № 4. - С.28.44.

141. Смирнов А.А. Получение липосом методом с обращением фаз и замораживанием-оттаиванием // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1984. - Т. 97, № 8. - С. 249-252.

142. Сорокина Д.А. Гетерогенность сывороточного альбумина // Вопр. мед. химии. 1991. - Т. 37, № 2. - С. 14-17.

143. Сорокина И.В., Крысин А.П., Хлебникова B.C. и др. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободнорадикальному окислению. Новосибирск: СО РАН, ГПНТБ, Новосиб. ин-т орган, химии, 1997. - 68 с.

144. Спектор Е.Б., Ананенко А.А., Политова Л.Н. Определение общей антиокислительной активности плазмы крови и ликвора // Лаб. дело. -1984.-№1.-С. 26-28.

145. Спиричев В.Б., Конь И.Я. Биологическая роль жирорастворимых витаминов // Итоги науки и техники. Сер.: Физиология человека и животных. М., 1989. - Т. 37. - С. 1-225.

146. Столяров В.А., Репин А.Н., Марков В.А. Антиагрегационная активность синтетического антиоксиданта эмоксипина // Эксперим. и клин, фармакол. 1993. - Т. 56, № 2. - С. 35-36.

147. Сторожок Н.М., Крысин А.П., Гуреева Н.В. Антиоксидантное действие новых аналогов пробу кол а и их композиций с а-токоферолом // Вопр. мед. химии. 2001. - Т. 47, № 5. - С. 517-525.

148. Сухарев А.Е. Лактоферрин, его свойства и значение в патологии // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1992. - № 3. - С. 55-58.

149. Таран Ю.П., Шишкина Л.Н. Исследование противолучевого действия 6-метилурацила // Радиобиология. 1993. - Т. 33, № 2. - Р. 285-290.

150. Тарасова Л.Н., Киселева Т.Н., Орлова Н.С. Значение биохимических показателей слезной жидкости для диагностики прогноза течения травматического увеита // Вестн. офтальмол. 1999. - Т. 115, № 2. - С. 11-13.

151. Тарусов Б.Н. Физико-химические механизмы биологического действия ионизирующих излучений // Успехи совр. биол. 1957. - Т. 44, № 2. - С. 171-185.

152. Терехина Н.А., Петрович Ю.А., Соловьева Л.И., Реук С.Э. Антиоксиданты слезной жидкости при вирусном кератите // Клин. лаб. диагн. 2000. - № 10. - С. 16.

153. Теселкин Ю.О. Изучение антиоксидантных свойств сыворотки крови человека: Дис. . канд. биол. наук. М.,1991. - С. 1-155.

154. Турпаев К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов // Биохимия. 2002. - Т. 67, № 3. - 339-352.

155. Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко С .А. и др. Селен в организме: метаболизм, антиоксидантные свойства, роль в канцерогенезе. М.: Изд-во РАМН, 2002. - 224 с.

156. Тюкавкина Н.А., Погодаева Н.Н. Ультрафиолетовая абсорбция флавоноидов. VIII. Константы ионизации кемпферола и кверцетина // Химия природн. соединений. 1975. - № 6. - С. 708-711.

157. Тюкавкина Н.А., Руленко И.А., Колесник Ю.А. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки // Вопр. питания. 1996. - № 2. - С. 33-38.

158. Тюкавкина Н.А., Хуторянский В.А., Баженов Б.Н. и др. Средство для комплексной терапии заболеваний "Диквертин" и способ его получения: Пат. 2088256 RU // Открытия. Изобретения. 1997. - № 24.

159. Удилова Н., Попов И.Н., Левин Г.И., Владимиров Ю.А. Антиокислительные свойства УФ-облученной плазмы крови и ее компонентов, оцениваемые методом фотохемилюминесценции // Биофизика. 1997. - Т. 42, № 1. - С. 187-190.

160. Фархутдинов P.P. Клинические аспекты применения метода регистрации хемилюминесценции крови // Терапевт, архив. 1984. - Т. 56, № 8. - С.150.153.

161. Филина А.А., Давыдова Н.Г., Коломойцева Е.М. Влияние липоевой кислоты на компоненты системы глутатиона в слезной жидкости больных открытоугольной глаукомой И Вестн. офтальмол. 1993. - Т. 109, № 5. -С. 5-6.

162. Филина А.А. Антиоксидантная терапия первичной глаукомы // Вестн. офтальмол. 1994. - Т. 110, № 1. - С. 33-35.

163. Хышиктуев Б.С. Антиоксидантные системы организма при бронхолегочной патологии // Вестн. РАМН. 1996. - № 9. - С. 23-27.

164. Шведова А.А. Роль процессов перекисного окисления липидов в повреждении мембранных структур сетчатки и использование антиоксидантов как средств химической профилактики и лечения глаз: Дис. д-ра биол. наук. М.,1986. - С. 1-310.

165. Шерстнев М.П. Разработка хемилюминесцентных методик исследования плазмы и клеток крови для оценки состояния больных: Дис. . д-ра мед. наук.-М., 1997.-С. 1-331.

166. Эмануэль Н.М., Липчина Л.П. Лейкоз у мышей и особенности его развития при воздействии ингибиторов цепных окислительных процессов //Докл. АН СССР. 1958. - Т. 121, № 1. - С. 141-144.

167. Яковлева О.А., Пентюк А.А., Луцюк Н.Б. и др. Обеспеченность витаминами А и Е при действии ксенобиотиков // Вопр. питания. 1987. -№3.-С. 21-29.

168. Якутова Э.Ш., Осипов А.Н., Костенко О.В. и др. Взаимодействие гипохлорита с оксигемоглобином приводит к освобождению железа в каталитически активной форме // Биофизика. 1992. - Т. 37, № 6. - С.1021-1028.

169. Якутова Э.Ш., Дремина Е.С., Евгина С.А. и др. Образование свободных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа (II) // Биофизика. 1994. - Т. 39, № 2. - С. 272-279.

170. Adachi Т., Ohta H., Yamada H. et al. Quantitative analysis of extracellular superoxide dismutase in serum and urine by ELISA with monoclonal antibody // Clin. Chim. Acta. 1992. - Vol. 212, № 1. - P. 89-102.

171. Aebi H. Catalase in vitro // Methods in enzymology. Oxygen radicals in biological systems / Ed. L. Packer. San Diego, California: Academic Press, Inc., 1984. - Vol. 105. - P. 121 -126.

172. Afanas'ev I.В., Dorozhko A.I., Brodskii A.V. et al. Chelating and free radical scavenging mechanisms of inhibitory action of rutin and quercetin in lipid peroxidation // Biochem. Pharmacol. 1989. - Vol. 38, № 11. - P. 1763-1769.

173. Ames B.N., Cathcard R., Schwiers E., Hochstein P. Uric acid provides an antioxidant defense in human against oxidant- and radical-caused aging andcancer: a hypothesis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. - Vol. 78, № 11. -P. 6855-6862.

174. Antwerpen L.V., Theron A.J., Myer M.S. et al. Cigarette smoke-mediated oxidant stress, phagocytes, vitamin C, vitamin E and tissue injury // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1993. - Vol. 686, № 1. - P. 53-56.

175. Arrigoni O., Dipierro S., Borraccino G. Ascorbate free radical reductase, a key enzyme of ascorbic acid system // FEBS Lett. 1981. - Vol. 125, № 2. - P. 242-244.

176. Aruoma O.l, Halliwell B. Inactivation of a-antiproteinase by hydroxyl radicals // FEBS Lett. 1989. - Vol. 244, № 1. - P. 76-80.

177. Aruoma O.l. Characterization of drugs antioxidant prophylactics // Free Radiic. Biol. Med. 1996. - Vol. 20, № 5. - P. 675-705.

178. Asakawa Т., Matsushita S. Coloring conditions of thiobarbituric acid test for detecting lipid hydroperoxides // Lipids. 1980. - Vol. 15, № 3. - P. 137-140.

179. Bannister J.V., Bannister W.R., Hill H.A.O. et al. Does caeruloplasmin dismute superoxide? No if FEBS Lett. 1980. - Vol. 118, № 1. - P. 127-129.

180. Barber A.A., Wilbur K.M. The effect of X-irradiation on the antioxidant activity of mammalian tissues // Radiat. Res. 1959. - Vol. 10, № 2. - P. 163-175.

181. Barber A.A. Inhibition of lipid peroxide formation by vertebrate blood serum // Arch. Biochem. Biophys. 1961. - Vol. 92, № 1. - P. 38-43.

182. Bast A., Haenen G.R.M.M., Doelman C.J.A. Oxidants and antioxidants: state of the art // Amer. J. Med. 1991. - Vol. 91, Suppl. 3C. - P. 2S-13S.

183. Boyum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood // Scand. J. Clin. Invest. 1968. - Vol. 21, Suppl. 97. - P. 77-89.

184. Brand-Williams W., Cuvelier M.E., Berset C. Use of free radical method of evaluate antioxidant activity // Lebensm.-Wiss. Technol. 1995. - Vol. 28, № 1. - P. 25-30.

185. Briviba K., Sies H. Flavonoids as singlet oxygen quenchers assayed by 1270 nm photoemission using a germanium diode // Intern, conf. on clinicalchemiluminescence, 25-28 april 1994, Berlin. Berlin, 1994. - P. A6.

186. Buonocore G., Zani S., Perrone S. et al. Intraerythrocyte nonprotein-bound iron and plasma malondialdehyde in the hypoxic newborn // Free Radiic. Biol. Med. 1998. - Vol. 25, № 7. - P. 766-770.

187. Burkhard H., Kay В., Andreas P. Nitric oxide inhibits inducible nitric oxide synthase mRNA expression in RAW 264.7 macrophages // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - Vol. 271, № 2. - P. 353-357.

188. Bush M.J., Verlangieri A.J. An acute study on the relative gastro-intestinal absorption of a novel form of calcium ascorbate // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol. 1987. - Vol. 57, № 1. - P. 137-140.

189. Cao G., Alessio H.M., Cutler R.G. Oxygen-radical absorbance capacity assay for antioxidants // Free Radiic. Biol. Med. 1993. - Vol. 14, № 3. - P. 303-311.

190. Carrido A., Garate M., Valenzuela A. Changes in the antioxidant capacity of blood plasma are produced after the ingestion of high doses of fish oil // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol. 1993. - Vol. 82, № 3. - P. 367-370.

191. Catz S.D., Carreras M.C., Proderoso J.J. Nitric oxide synthase inhibitors decrease human polymorphonuclear leukocyte luminol-dependent chemiluminescence // Free Radiic. Biol. Med. 1995. - Vol. 19, № 6. - P. 741-748.

192. Chatterjee S.N., Agarwal S. Liposomes as membrane model for study of lipid peroxidation // Free Radiic. Biol. Med. 1988. - Vol. 4, № 1. - P. 51-72.

193. Chevion M., Liang Y., Har-EI R., Berenstein E. et al. Copper and iron are mobilised following myocardial ischemia: possible productive criteria for tissue injury II Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. - Vol. 90. - P. 1102-1106.

194. Chevion S., Berry E.M., Kitrossky N., Kohen R. Evaluation of plasma low molecular weight antioxidant capacity by cyclic voltammetry II Free Radiic. Biol. Med. 1997. - Vol. 22, № 3. - P. 411-421.

195. Chevion S., Roberts M., Chevion M. The use of cyclic voltammetry for the evaluation of antioxidant capacity II Free Radiic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 6. - P. 860-870.

196. Chow С.К., Thacker R„ Bridges R.B., Rehm S. R. et al. Lower levels of vitamin С and carotenes in plasma of cigarette smokers // J. Am. Coll. Nutr. -1986.-Vol. 5-P. 305-312.

197. Chu F.-F., Doroshow J.H., Esworthy R.S. Expression, characterization, and tissue distribution of a new cellular selenium-dependent glutathione peroxidase, GSHPx-G1 // J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268, № 4. - P. 2571-2576.

198. Crisham M.B., Gaginell T.S., Von Ritter C. et al. Effects of neutrophil-derived oxidants on intestinal permeability, electrolyte transport and epithelial cell viability И Inflammation. 1990. - Vol. 14. - P. 531-542.

199. Crisham M.B., Granger D.N., Lefer D.J. Modulation of leukocyte-endothelial interactions by reactive metabolites of oxygen and nitrogen: relevance to ischemic heart disease // Free Radiic. Biol. Med. 1998. - Vol. 25, № 4-5. - P. 404-433.

200. Cross C.E., Van Viet A., O'Neill C.A., Eiserich J.P. Reactive oxygen species and the lung // Lancet. 1994. - Vol. 344, № 1. - P. 930-933.

201. Cuppett S., Schnep F.M., Hall C. Ill Natural antioxidants are they a reality? // Natural antioxidants. Chemistry, health effects, and applications / Ed. F. Shahidi. - Champaign, Illinois: AOCS Press, 1997. - P. 12-24.

202. Das D.K., Maulic N. Antioxidant effectiveness in ishemia-reperfusion tissue injury // Methods in enzymology. Oxygen radicals in biological systems / Ed. L. Packer. San Diego, California: Academic Pres, Inc., 1994. - Vol. 233. - P. 601-610.

203. Davies K.J.A., Sevanian A., Muakkassan-Kelly S.F., Hochstein P. Uric acid-iron complexes. A new aspects of the antioxidant function of uric acid // Biochem. J. 1986. - Vol. 235, № 3. - P. 747-754.

204. DeLange R.J., Glazer A.N. Phycoerythrin fluorescence-based assay for peroxy radicals: a screen for biologically relevant protective agents // Anal. Biochem. 1989. - Vol. 177, № 2. - P. 300-306.

205. Del Bello В., Maellaro E., Sugherini L. et al. Purification of NADPH-dependent dehydroascorbate reductase from rat liver and its identification with За-hydroxysteroid dehydrogenase // Biochem J. 1994. - Vol. 304, № 2. - P. 385-390.

206. Di-Mascio P., Kaiser S., Sies H. Lycopene as the efficient biological carotenoid singlet oxygen quencher // Arch. Biohem. Bophys. 1989. - Vol. 274, № 2. - P. 532-538.

207. Diplock A.T. Antioxidant and disease prevention // Mol. Asp. Med. 1994. -Vol 15. - P. 293-376.

208. Dugas T.R., Morel D.W., Harrison E.A. Dietary supplementation with p-carotene, but not with lycopene, inhibits endothelial cell-mediated oxidation of low-density lipoprotein // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol. 26, № 9-10. -P. 1238-1244.

209. Edlund A., Edlund Т., Hjalmarsson K. et al. A non-glycosylated extracellular superoxide dismutase variant // Biochem J. 1992. - Vol. 288, № 2. - P. 451-456.

210. Edwards S.W. Luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence of neutrophils: role of degranulation // J. Clin. Immunol. 1987. - Vol. 22, № 1. -P. 35-39.

211. Esterbauer H., Streigl G., Puhl H., Rotheneder M. Continuous monitoring of in vitro oxidation of human low density lipoprotein // Free Radic. Res. Commun. 1989. - Vol. 6, № 1. - P. 67-75.

212. Esterbauer H., Dieber-Rotheneder M., Waeg G. et al. Biochemical, structural, and functional properties of oxidized low-density lipoprotein // Chemical. Res. Toxicol. 1990. - Vol. 3, № 2. - P. 77-92.

213. Esterbauer H., Puhl H., Dieber-Rotheneder M. et al. Effects of antioxidants on oxidative modification of LDL // Ann. Med. 1991. - Vol. 23, № 5. - P. 573-581.

214. Everse J., Hsia N. The toxicities of native and modified hemoglobins // Free Radic. Biol. Med. 1997. - Vol. 22, № 6. - P. 1075-1099.

215. Faulkner K., Fridovich I. Luminol and lucigenin as detectors for 02! // Free Radiic. Biol. Med. 1993. - Vol. 15, № 4. - P. 447-451.

216. Folch J., Lees M., Stanley G.H.S. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues II J. Biol. Chem. 1957. - Vol. 226, № 1. - P. 497-509.

217. Frei В., Stocker R., Ames B. Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. - Vol. 85, № 24. -P. 9748-9752.

218. Fuchs J., Weber S. Kaufmann R. Genotoxic potential of porphyrin type photosensitizers with particular emphasis on 5-aminolevilinic acid: implications for clinical photodynamic therapy // Free Radiic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 4. - P. 537-548.

219. Fukuzawa K., Chida H., Tokomura A., Tsukatani H. Antioxidative effect of a-tocopherol incorporation into lecithin liposomes on ascorbic acid-Fe2+-induced lipid peroxidation // Arch. Biochem. Biophys. 1981. - Vol. 206, № 1. - P. 173-180.

220. Fullard R.J., Snyder C. Protein levels in nonstimulated and stimulated tears of normal human subjects // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1990. - Vol. 31, № 6 . - P. 1119-1126.

221. Geiszt M., Szeberenyi J.В., Kaldi К., Ligeti E. Role of dependent Ca2+ sources in the superoxide production of human neutrophil granulocytes // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol. 26, № 10. - P. 1092-1099.

222. Ghiselli A., Serafini M., Maiani G. et al. A fuorescence-based method for measuring total plasma antioxidant capability // Free Radic. Biol. Med. 1995. -Vol. 18, №3.-P. 29-36.

223. Girotti A.W., Thomas J., Jordan J.E. Lipid photooxidation in erythrocyte ghosts: sensitization of the membranes toward ascorbate- and superoxide-induced peroxidation and lysis // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - Vol. 236, № 1.- P. 238-251.

224. Girotti A.W. Photodynamic lipid peroxidation in biological systems // Photochem. Photobiol. 1990. - Vol. 51, № 4. - P. 497-509.

225. Giulivi C., Davies K.J. A novel antioxidant role for hemoglobin. The comproportionation of ferrylhemoglobin with oxyhemoglobin // J. Biol. Chem. -1990. Vol. 265, № 32. - P. 19453-19460.

226. Goldstein I.M., Kaplan H.B., Edelson H.S., Weissmann G. Ceruloplasmin a scavenger of superoxide anion radicals // J. Biol. Chem. 1979. - Vol. 254, № 10. - P. 4040—4045.

227. Goldstein S., Michel C., Bors W. et al. A critical reevaluation of some methods for superoxide dismutase activity // Free Radiic. Biol. Med. 1988. -Vol. 4, № 5. - P. 295-303.

228. Grootveld M., Halliwell B. Measurements of allantoin and uric acid in human body fluids // Biochem. J. 1987. - Vol. 243, № 3. - P. 803-808.

229. Grossweiner L.I., Patel A.S., Grossweiner J.B. Type I and type II mechanisms in the photosensitized lysis of phosphatidylcholine liposomes by hematoporhyrin // Photochem. Photobiol. 1982. - Vol. 36, № 2. - P. 159-167.

230. Gutteridge J.M.C., Richmond R., Halliwell B. Oxygen free-radicals and lipid peroxidation: inhibition by the protein caeruloplasmin // FEBS Lett. 1980. -Vol. 112, № 2. - P. 269-272.

231. Gutteridge J.M.C., Paterson S.K., Segal A.W., Halliwell B. Inhibition of lipid peroxidation by the iron-binding protein lactoferrin // Biochem. J. 1981. - Vol. 199, №1.-P. 259-261.

232. Gutteridge J.M.C. Antioxidant properties of caeruloplasmin towards iron- and copper-dependent oxygen radical formation II FEBS Lett. 1983. - Vol. 157, № 1. - P. 37-40.

233. Gutteridge J.M.C., Wilkins S. Copper salt-dependent hydroxyl radical formation. Damage to proteins acting as antioxidants // Biochim. Biophys. Acta. 1983. - Vol. 759, № 1-2. - P. 38-41.

234. Gutteridge J.M.C. Copper-phenanthroline-induced site-specific oxygen-radical damage to DNA. Detection of loosely bound trace copper in biological fluids // Biochem. J. 1984. - Vol. 218, № 3. - P. 983-985.

235. Gutteridge J.M.C. Tissue damage by oxy-radicals: the possible involvement of iron and copper complexes // Med. Biol. 1984. - Vol. 64, № 2. - P. 101-104.

236. Gutteridge J.M.C. Inhibition of Fenton reaction by protein caeruluplasmin and other copper complexes. Assessment of ferroxidase and radical scavenging activities // Chem.-Biol. Interactions. 1985. - Vol. 56, №1. - P. 113-120.

237. Gutteridge J.M.C. Iron promoters of the Fenton reaction and lipid peroxidation can be released from haemoglobin by peroxides II FEBS Lett. -1986. Vol. 201, № 2. - P. 291-295.

238. Gutteridge J.M.C. The antioxidant activity of haptoglobin towards hemoglobin-stimulated lipid peroxidation // Biochim. Biophys. Acta. 1987. -Vol. 917, №2.-219-223.

239. Gutteridge J.M.C., Smith A. Antioxidant protection by haemopexin of haem-stimulated lipid peroxidation // Biochem J. 1988. - Vol. 256, № 3. - P. 861865.

240. Gutteridge J.M.C. Hydroxyl radical formation from the auto-reduction of a ferric citrate complex // Free Radiic. Biol. Med. 1991. - Vol. 11, № 4. - P. 401-406.

241. Gutteridge J.M.C., Mitchell J. Redox imbalance in the critically ill // Brit. Med. Bull. 1999. - Vol. 55, № 1. - P. 49-75.

242. Guyan P.M., Uden S., Braganza J.M. Heightened free radical activity in pancreatitis // Free Radiic. Biol. Med. 1990. - Vol. 8, № 4. - P. 347-354.

243. Hall III C.A., Cuppett S.L. Structure-activities of natural antioxidants // Antioxidant methodology. In vivo and in vitro concepts / Eds. O.I. Auroma, S.L. Cuppett. Champaign, Illinois: AOCS Press, 1997. - P. 141-172.

244. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease II Biochem. J. 1984. - Vol. 219, № 1. - P. 1-14.

245. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Free radicals in biology and medicine. -Oxford: Clarendon Press, 1985. P. 1-332.

246. Halliwell B. Albumin an important extracellular antioxidant? // Biochem. Pharmacol. - 1988. - V. 37, № 4. - P. 569-571.

247. Halliwell B. How to characterize a biological antioxidant // Free Rad. Res. Commun. 1990.-Vol. 9, №1.-P. 1-32.

248. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. The antooxidants of human extracellular fluids // Arch. Biochem. Biophys. 1990. - V. 280, № 1. - P. 1-8.

249. Halliwell B. Reactive oxygen species in living systems: source, biochemistry, and role in human disease // Amer. J. Med. 1991. - Vol. 91, Suppl. 3C. - P. 14S--22S.

250. Halliwell В., Aeschbach R., Loliger J., Auroma O.I. The characterization of antioxidants // Fd. Chem. Toxic. 1995. - Vol. 33, № 7. - P. 601-617.

251. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. The definition and measurement of antioxidants in biological systems // Free Radic. Biol. Med. 1995. - Vol. 18, № 1.-P. 125-126.

252. Heijnen C.G.M., Haenen G.R.M.M., Oostveen R.M. et al. Protection of flavonoids against lipid peroxidation: the structure activity relationship revisited // Free Radic. Res. 2002. - Vol. 36, № 5. - P. 575-581.

253. Heinecke J.W., Rosen H., Suzuki L.A., Chait A. The role of sulfur-containing amino acids in superoxide production and modification of low density lipoprotein by arterial smooth muscle cells // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262, № 2. - P. 1098-1103.

254. Henderson M.C., Miranda C.L., Stevens J.F. et al. II In vitro inhibition of human P450 enzymes by prenylated flavonoids from hops, Humulus lupulus II Xenobiotica. 2000. - Vol. 30, № 3. - P. 235-251.

255. Hermann M., Kapiotis S., Hofbauer R. et al. Salicylate promotes myeloperoxidase-initiated LDL oxidation: antagonization by its metabolite gentisic acid // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol. 26, № 9-10. - P. 1253-1260.

256. Hollman P.C.H., Katan M.B. Absorption, metabolism, and bioavailability of flavonoids // Flavonoids in health and disease / Eds. C.A. Rice-Evans, L. Packer. New York: Marcel Dekker, Inc., 1998. - P. 483-522.

257. Holt M.E., Ryall M.E.T., Campbell A.K. Albumin inhibits human polymorphonuclear leukocyte luminol-dependent chemiluminescence: evidence for oxygen radical scavenging // Br. J. exp. Path. 1984. Vol. 65, № 2. - P. 231-241.

258. Hwang J., Peterson H., Hodis H.N. et al. Ascorbic acid enhanced 17p-estradiol-mediated inhibition of oxidized low density lipoprotein formation II Atherosclerosis. 2000. - Vol. 150, № 2. - P. 275-284.

259. Ishwarlal J., Sridevi D. Assessment of LDL oxidation, in vivo and ex vivo measurements // Antioxidant methodology. In vivo and in vitro concepts / Eds. O.I. Auroma, S.L. Cuppett. Champaign, Illinois: AOCS Press, 1997. - P. 85-100.

260. Iwaoka Т., Tobato F., Takahashi T. Lipid peroxidation and lipid peroxide detected by chemiluminescence U Free Radic. Biol. Med. 1987. - Vol. 3, № 5.- P. 329-333.

261. Jan C.-Y., Takahama U., Kimura M. Inhibition of photooxidation of a-tocopherol by quercetin in human blood cell membranes in the presence of hematoporphyrin as a photosensitizer // Biochim. Biophys. Acta. 1991. - Vol. 1086, № 1. - P. 7-14.

262. Jareno E.J., Bosch-Morell F., Fernandez-Delgado R. et al. Serum malondialdehyde in HIV seropositive children // Free Radic. Biol. Med. 1998.- Vol. 24, № 3. P. 503-506.

263. Jareno E.J., Roma J., Romero B. et al. Serum malondialdehyde correlates with therapeutic efficiency of high activity antiretroviral therapies (HAART) in HIV-1 infected children // Free Radic. Res. 2002. - Vol. 36, № 3. - P. 341-344.

264. Jones D.P., Carlson J.L., Mody V.C. et al. Redox state of glutathione in human plasma // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 4. - P. 625-635.

265. Kahn M.G., Giblin F.J., Epstein D.L. Glutathione in calf trabecular meshwork and its relation to aqueous humor outflow facility II Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- 1983. Vol. 24, № 9 . - P. 1283-1287.

266. Kandaswami C., Middleton E. Flavonoids as antioxidants // Natural antioxidants. Chemistry, health effects, and applications / Ed. F. Shahidi. -Champaign, Illinois: AOCS Press, 1997. P. 174-203.

267. Kessel D. Hematoporphyrin and HPD: photophysics, photochemistry and phototherapy // Photochem. Photobiol. 1984. - Vol. 39, № 6. -P. 851-859.

268. Kettle A., Winterbourn C.C. Superoxide enhances hypochlorous acid production by stimulated human neutrophils // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - Vol. 1052, № 3. - P. 379-385.

269. Kim I.G., Seon Y.P. Requirement of intact human ceruloplasmin for the glutathione-linked peroxidase activity // FEBS Lett. 1998. - Vol. 437, № 3. -P. 293-296.

270. Kittridge K.J., Willson R.L. Uric acid substantially enhances the free radical-induced inactivation of alcohol dehydrogenase // FEBS Lett. 1984. - Vol. 170, № 1. - P. 162-164.

271. Knight J.A., Anderson S., Rawle J.M. Chemical basis of the sulfo-phosphovanilin reaction for estimating total serum lipids // Clin. Chem. 1972. -Vol. 18, №3. - P. 199-202.

272. Kohen R., Vellaichamy E., Hrbac J. et al. Quantification of the overall reactive oxygen species scavenging capacity of biological fluids and tissues // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 6. - P. 871-879.

273. Korkina L.G., Afanas'ev I.B. Antioxidant and chelating properties of flavonoids // Adv. in Pharmacol. 1997. - Vol. 38. - P. 151-163.

274. Kozlov A.B., Ostrachovitch E.A., Afanas'ev I.B. Mechanism of inchibitory effects of chelating drugs on peroxidation in rat brain homogenates // Biochem. Pharmacol. 1994. - Vol. 47, № 5. - P. 795-799.

275. Kukovetz E.M., Bratschitsch G., Hofer H P. et al. Influence of age on the release of reactive oxygen species by phagocytes as measured by a wholeblood chemiluminescence assay // Free Radic. Biol. Med. 1997. - Vol. 22, № 3. - P. 433-438.

276. Lapenna D., Mezetti A., de Gioia S., Pierdomenico S.D. Plasma copper and lipid peroxidation in cigarette smokers // Free Radic. Biol. Med. 1995. - Vol. 19, № 6. - P. 849-852.

277. Liebler D.C. The role of metabolism in antioxidant function of vitamin E // Crit. Rev. Toxicol. 1993. - Vol. 23. - P. 147-169.

278. Liebler D.C. Tocopherone and epoxytocopherone products of vitamin E oxidation // Methods in enzymology. Oxygen radicals in biological systems I Ed. L. Packer. San Diego, California: Academic Press, Inc., 1994. - Vol. 234, Part D.-P. 310-316.

279. Lien E.J., Ren S., Bui H.-H., Wang R. Quantitative structure-activity relationship analysis of phenolic antioxidants // Free Radic. Biol. Med. 1999. -Vol. 26, № 3-4. - P. 285-295.

280. Linderman J., wan Zoeren-Grobben D., Schrijver J. et al. The total free radical trapping ability of cord blood plasma in preterm and term babies U Pediatr. Res. 1989. - Vol. 26, № 1. - P. 20-24.

281. Lindig B.A., Rodgers M.A.J. Rate parameters for the quenching of singlet oxygen by water-soluble and lipid-soluble substrates in aqueous and micellar systems H Photochem. Photobiol. 1981. - Vol. 33, № 5. - P. 627-634.

282. Lissi E., Pascual C., del Castillo M.D. Luminol luminescence induced by 2,2'-azo-bis(2-amidinopropane) termolysis // Free Radic. Res. Commun. 1992. -Vol. 17, № 5. - P. 229-311.

283. Lissi E.A., Escobar J., Pascual C. et al. Visible chemiluminescence associated with the reaction between methemoglobin or oxyhemoglobin withhydrogen peroxide // Photochem. Photobiol. 1994. - Vol. 60, № 5. - P. 405-411.

284. Lissi E., Salim-Hanna M., Pascual C., del Castillio M.D. Evaluation of total potential (TRAP) and total antioxidant reactivity from luminol-enhanced chemiluminescence measurements II Free Radic. Biol. Med. 1995. - Vol. 18, №2. - P. 153-158.

285. Lotito S.B., Fraga C.G. (+)-Catechin prevents human plasma oxidation // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 24, № 3. - P. 435-441.

286. Lougheed M., Steinbrecher U.P. Mechanism of uptake copper-oxidized low density lipoproteins in macrophages is dependent on its extent of oxidation // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271, № 20. - P. 11798-11805.

287. Lubart R., Malik Z., Rochkind S., Fisher T. A possible mechanism of low level laser-living cell interaction // Laser Ther. 1990. - Vol. 2, № 1. - P. 65-68.

288. Maddipati K.R., Marnett L.J. Characterization of major hydroperoxide-reducing activity of human plasma. Purification and properties of a selenium-dependent glutathione peroxidase // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262, № 36. -P. 17398-17403.

289. Maples K.R., Mason R.P. Free radical metabolite of uric acid // J. Biol. Chem. 1988. - Vol. 263, №4. - P. 1709-1712.

290. Marklund S.L., Karlsson K. Extracellular-superoxide dismutase, distribution in the body and therapeutic implication II Antioxidants in therapy and preventive medicine. New York: Plenum Press, 1990. - P. 1-4.

291. Mazzetti A., Lapenna D., Pierdomenico S.D. et al. Vitamins E, С and lipid peroxidation in plasma and arterial tissue of smokers and nonsmokers II Atherosclerosis. 1995. - Vol. 112, № 1. - P. 91-99.

292. McAdams M., Freeman B. Receptor-mediated binding of xanthine oxidase to vascular endothelium // Free Radic. Biol. Med. 1993. - Vol. 15 - P. 521.

293. McCay P.В., Lai E.K., Poyer L.J. Oxygen- and carbon-centered free radical formation during carbon tetrachloride metabolism // J. Biol. Chem. 1984. -Vol. 259, № 4. - P. 2135-2143.

294. McCay P.B. Vitamin E: interactions with free radicals and ascorbate // Ann. Rev. Nutr. 1985. - Vol. 5. - P. 323-340.

295. Miesel R., Zuber M., Hartung R. et al. Total radical-trapping antioxidative capacity of plasma and whole blood chemiluminescence in patients with inflammatory and autoimmune rheumatic diseases // Redox Report. 1995. -Vol. 1, № 5. - P. 323-330.

296. Miller N.J., Rice-Evans C., Davies M.J. et al. A novel method for measuring antioxidant capacity and its application to monitoring the antioxidant status in premature neonates // Clin. Sci. 1993. - Vol. 84. - P. 407-412.

297. Miller N.J., Sampson J., Candeias L.P. et al. Antioxidant activities of carotenes and xanthophylls // FEBS. Lett. 1996. - Vol. 384, № 3 - P. 240-242.

298. Misra H.P., Fridovich I. The generation of superoxide radical during the autoxidation of hemoglobin // J. Biol. Chem. 1972. - Vol. 247, № 21. - P. 6960-6962.

299. Miura Т., Sekurai K., Ogiso T. Enhanced lipid peroxidation of erythrocyte membranes and phosphatidylcholine liposomes induced by a xanthine oxidase system in the presence of catalase // Chem. Pharm. Bull. 1984. - Vol. 32, № 8. - P. 3227-3234.

300. Moncada S. Nitric oxide gas mediator, modulator, and pathophysiologic entity // J. Lab. Clin. Med. - 1992. - Vol. 120, № 1. - P. 187-191.

301. Morel I., Cillard P., Cillard J. Flavonoid-metal interactions in biological systems // Flavonoids in health and disease / Eds. C.A. Rice-Evans, L. Packer. New York: Marcel Dekker, Inc., 1998. - P. 163-177.

302. Motchnic P.A., Frei В., Ames B.N. Measurement of antioxidants in human blood plasma // Methods in enzymology. Oxygen radicals in biological systems /

303. Ed. L. Packer. San Diego, California: Academic Press, Inc., 1994. - Vol. 234, Part D. - P. 269 -279.

304. Nacitarhan S., Ozben Т., Tuncer N. Serum and urine malondialdehyde levels in NIDDM patients with and without hyperlipidemia // Free Radic. Biol. Med. -1995. V. 19, № 6. - P. 893-986.

305. Neuzh J., Thomas S., Stocker R. Requirement, for promotion, or inhibition by a-tocopherol of radical-induced initiation of plasma lipoprotein lipid peroxidation // Free Radic. Biol. Med. 1997. - Vol. 22, № 1-2. - P. 57-71.

306. Niki E., Saito Т., Kawakami A., Kamiya Y. Inhibition of oxidation of methyl linoleate in solution by vitamin E and vitamin С // J. Biol. Chem. 1984. - Vol. 259, №7.-P. 4177-4182.

307. Nohl H., Stolze K. Chemiluminescence from activated heme compounds detected in the reaction of various xenobiotics with oxyhemoglobin: comparison with several heme/hydrogen peroxide systems // Free Radic. Biol. Med. 1993. -Vol. 15, №3. - P. 257-263.

308. Ojima F., Sakamoto H., Ishiguro Y., Terao J. Consumption of carotenoids in photosensitized oxidation of human plasma and plasma low-density lipoprotein // Free Radic. Biol. Med. 1993. - Vol. 15, № 4. - P. 377-384.

309. Okabayashi H., Tsuru M. Effects of bilirubin on lipid peroxidation induced by carbon tetrachloride in rat liver microsomes // Free Radic. Biol. Med. 1990. -Vol.9, Suppl. 1.-P. 19.

310. Oshiro S., Nakajima H. Intrahepatocellular site of the catabolism of heme and globin moiety of hemaglobin-haptoglobin after intravenous administration to rats // J. Biol. Chem. 1988. - Vol. 263, № 31. - P. 16032-16038.

311. Palozza P., Krinsky N.I. The inhibition of radical-initiated peroxidation of microsomal lipids by both a-tocopherol and 0-carotene // Free Radic. Biol. Med. -1991.-Vol. 11, №4.-P. 407—414.

312. Panasenko O.M., Volnova T.V., Osipov A.N. et al. Free radical generation by monocyte and neutrophils: a possible cause of plasma protein modification // Biomed. Sci. 1991. - Vol. 2, № 5. - P. 581-589.

313. Petruska J.M., Leslie K.O., Mossman B.T. Enhanced lipid peroxidation in lung lavage of rats after inhalation of asbestos // Free Radic. Biol. Med. 1991. -Vol. 17, №4.-P. 425—432.

314. Polansky J.R., Wood I., Maglio M. et al. Peroxide damage to human trabecular cells: a possible model for morphologic alterations in aging and glaucoma // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1984. - Vol. 25, № 3, Suppl. - P.122.

315. Polidori M.C., Frei В., Cherubine A. et al. Increased plasma levels of lipid hydroperoxides in patients with ischemic stroke // Free Radic. Biol. Med. -1998. Vol. 25, № 4-5. - P. 561-567.

316. Popov I.N., Lewin G. Photochemiluminescent detection of antiradical activity. II. Testing of nonenzymic water-soluble antioxidants // Free Radic. Biol. Med. -1994. Vol. 17, № 3. - P. 267-271.

317. Popov I.N., Lewin G. Photochemiluminescent detection of antiradical activity. II. A simple assay of ascorbate in blood plasma // J. Biochem. Biophys. Methods. 1994. - Vol. 28, № 4. - P. 277-282.

318. Pryor W., Squadrito G.L., Priedman M. The cascade mechanism to explain toxicity the role of lipid ozonation products // Free Radic. Biol. Med. 1995. -Vol. 19, №6.-P. 935-941.

319. Pryor W. Vitamin E and heart disease: basic science to clinical intervention trials // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 1. - P. 141-164.

320. Pucheu S., Coudray C., Vanzetto G. et al. Assessment of radical activity during the acute phase of myocardial infarction following fibrinolysis: utility of assaying plasma malondialdehyde // Free Radic. Biol. Med. 1995. - Vol. 19, №6. - P. 873-881.

321. Puppo A., Halliwell B. Formation of hydroxyl radicals from hydrogen peroxide in the presence of iron. Is haemoglobin a biological Fenton reagent? // Biochem. J. 1988. - Vol. 249, № 1. - P. 185-190.

322. Rahman I., MacNee W. Role of oxidants/antioxidants in smoking-induced lung diseases // Free Radic. Biol. Med. 1996. - Vol. 21, № 5. - P. 669-681.

323. Ramos C.L., Pou S., Britigan B.E. et al. Spin trapping evidence for myeloperoxidase-dependent hydroxyl radical formation by human neutrophils and monocytes // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267, № 31. - P. 8307-8312.

324. Ravin H.A. An improved colorimetric enzymatic assay of ceruloplasmin // J. Lab. Clin. Med. 1961.-Vol. 58, №1.-P. 161-168.

325. Re R., Pellegrini N., Proteggente A. et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay // Free Radic. Biol. Med. -1999. Vol. 26, № 9-10. - P. 1231 -1237.

326. Ribarov S.R., Bochev P.G. A chemiluminescent method for measurement of activated oxygen forms in biological fluids and homogenates // J. Biochem. Biophys Methods. 1983. - Vol. 8, № 3. - P. 205-212.

327. Rice-Evans C., Miller N.J. Total antioxidant status in plasma and body fluids // Methods in enzymology. Oxygen radicals in biological systems / Ed. L. Packer. San Diego, California: Academic Press, Inc., 1994. - Vol. 234, Part D. - P. 279-291.

328. Rice-Evans C.A., Miller N.J., Paganga G. Structure-antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids // Free Radic. Biol. Med. 1996. - Vol. 20, № 7. - P. 933-956.

329. Rohrdanz E., Kahl R. Alterations of enzyme expression in response to hydrogen peroxide // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 24, № 1. - P. 27-38.

330. Rosenblat M., Aviram M. Macrophage glutathione content and glutathione peroxidase activity are inversely related to cell-mediated oxidation of LDL: in vitro and in vivo studies // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 24, № 2. - P. 305-317.

331. Rowley D.A., Halliwell B. Superoxide-dependent and ascorbate-dependent formation of hydroxyl radicals in the presence of copper salts: a physiologically significant reaction? // Arch. Biochem. Biophys. 1983. - Vol. 225, № 1. - P. 279-284.

332. Ryter S.W., Tyrrell R.M. The heme synthesis and degradation pathways: role in oxidant sensitivity // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 2. - P. 289-309.

333. Saija A., Bonina F., Trombetta D. et al. Flavonoid-biomembrane interactions: a calorimetric study on dipalmitoylphosphatidylcholine vesicles // Int. J. Pharm. -1995.-Vol. 124. № 1. P. 1-8.

334. Saija A., Scalese M., Lanza M. et al. Flavonoids as antioxidant agents: importance of their interaction with biomembranes // Free Radic. Biol. Med. -1995. Vol. 19, № 4. - P. 481-486.

335. Sakakibara H., Ashida H., Kanazawa K. A novel method using 8-hydroperoxy-2'-deoxyguanosine formation for evaluating antioxidative potency // Free Radic. Res. 2002. - Vol. 36, № 3. - P. 307-316.

336. Schlesier K., Harwat M., Bohm V., Bitsch R. Assessment of antioxidant activity by using different in vitro methods // Free Radic. Res. 2002. - Vol. 36, №2. - P. 177-187.

337. Schotte V., Sevanian A., Hochstein P., Weitmann K.U. Effect of uric acid and chemical analogues on oxidation of human low density lipoprotein in vitro II Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 25, № 7. - P. 839-847.

338. Scorolli L., Grossi G., Scorolli L. et al. Antioxidants and glaucoma: blood and aqueous vitamin E dosage in primary open angle glaucoma II Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1997. - Vol. 38, № 4. - P. S1053.

339. Shahidi F. Natural antioxidants: an overview // Natural antioxidants. Chemistry, health effects, and applications / Ed. F. Shahidi. Champaign, Illinois: AOCS Press, 1997. - P. 1-11.

340. Sharonov B.P., Govorova N.Ju., Lyzlova S.N. A comparative study of serum proteins ability to scavenge active oxygen species: 025 and ОСГ // Biochem. Int. 1988. - Vol. 17, № 4. - P. 783-790.

341. Sienkiewicz A., Graczyk A. Photodynamic therapy photochemical and photophysical principle // Biocybem. Biomed. Eng. - 1991. - Vol. 11, № 1-2. -P. 23-36.

342. Sies H. Oxidative stress: from basic research to clinical application // Amer. J. Med. 1991. - Vol. 91, Suppl. 3C. - P. 31S-38S.

343. Slater T.F. Free-radical mechanisms in injury // Biochem. J. 1984. - Vol. 222, № 1. - P. 1-15.

344. Slavikova H., Lojek A., Hamar J. et. al. Total antioxidant capacity of serum increased in early but not late period after intestinal ischemia in rats // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 25, № 1. - P. 9-18.

345. Smith A., Morgan W.T. Haem transport to the liver by haemopexin: receptor-mediated uptake with recycling of the protein // Biochem. J. 1979. - Vol. 182, № 1. - P. 47-54.

346. Smith R., Gore J.Z., Doyle M.P. Degradation of uric acid during autocatalytic oxidation of oxyhemoglobin induced by sodium nitrite // Free Radic. Biol. Med. -1991.-Vol. 11, №4.-P. 373-377.

347. Sorata Y., Takahama U., Kimura M. Cooperation of quercetin with ascorbate in the protection of photosensitized lysis of human erythrocytes in the presence of hematoporphyrin // Photohem. Photobiol. 1988. - Vol. 48, № 2. - P. 195-199.

348. Squadrito G.L., Pryor W.A. Oxidative chemistry of nitric oxide: the roles of superoxide, peroxynitrite, and carbon dioxide // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 25, № 4-5. - P. 392—403.

349. Stocker R., Peterhans E. Synergistic interaction between vitamin E and the bile pigments bilirubin and billiverdin // Biochem. Biophys. Acta. 1989. - Vol. 1002, № 2. - P. 238-244.

350. Stocks J., Gutteridge J.M.C., Sharp R.J., Dormandy T.L. Assay using brain homogenate for measuring the antioxidant activity of biological fluids // Clin. Sci. Mol. Med. 1974. - Vol. 47, № 3. - P. 215-222.

351. Stocks J., Gutteridge J.M.C., Sharp R.J., Dormandy T.L. The inhibition of lipid autoxidation by human serum and its relation to serum proteins and a-tocopherol // Clin. Sci. Mol. Med. 1974. - Vol. 47, № 3. - P. 223-233.

352. Stohs S.J., Bagchi D. Oxidative mechanisms in the toxicity of metal ions // Free Radiic. Biol. Med. 1995. - Vol. 18, № 2. - P. 321-336.

353. Sutton H.C., Winterbourn C.C. On the participation of higher oxidation status of iron and copper in Fenton reactions // Free Radic. Biol. Med. 1989. - Vol. 6, № 1.-P. 53-60.

354. Takahama U. 02*-dependent and -independent photooxidation of quercetin in the presence and absence of riboflavin and effects of ascorbate on the photooxidation // Photochem. Photobiol. 1985. - Vol. 42, № 1. - P. 89-91.

355. Takahama U. Spectrophotometry study on the oxidation of rutin by horseradish peroxidase and characteristics of the oxidized products // Biochim. Biophys. Acta. 1986. - Vol. 882, № 3. - P. 445-451.

356. Takahashi K., Avissar N., Whitin J., Cohen H. Purification and characterization of human plasma glutathione peroxidase: a selenoglycoprotein distinct from the know cellular enzyme // Arch. Biochem. Biophys. 1987. -Vol. 256, № 2. - P. 677-686.

357. Tan S., Yokoyama Y., Dickens E. et al. Xanthine oxidase activity in the circulation of rats following hemorragic shock // Free Radic. Biol. Med. 1993. - Vol. 15, № 4. - P. 407-414.

358. Tanizawa H., Sazuka Y., Takino Y. Micro-determination of lipoperoxide in the mouse myocardium by thiobarbituric acid fluorophotometry // Chem. Pharm. Bull. 1981. - Vol. 29, № 10. - P. 2910-2914.

359. Taylor S.L., Lamden M.P., Tappel A.L. Sensitive fluorometric method for tissue tocopherol analysis // Lipids. 1976. - Vol. 11, № 7. - P. 530-538.

360. Terao J., Piskula M., Yao Q. Protective effect epicatechin, epicatechin gatlate, and quercetin on lipid peroxidation in phospholipid bilayers II Arch. Biochem. Biophys. 1994. - Vol. 308, № 1. - P. 278-284.

361. Thomas J.P., Girotti A.W. Photogeneration of singlet oxygen by membrane-bound hematoporphyrin derivative // Photochem. Photobiol. 1988. - Vol. 47, Suppl. - P. 79S.

362. Tsai K., Hsu T.-G., Kong C.-W. et al. Is the endogenous peroxyl-radical scavenging capacity of plasma protective in systemic inflammatory disorders in humans? // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 6. - P. 926-933.

363. Uotila J.T., Kirkkola A.L., Rorarius M. et al. The total peroxyl radical-trapping ability of plasma and cerebrospinal fluid in normal and preeclamptic parturients // Free Radic. Biol. Med. 1994. - Vol. 16, № 5. - P. 581-590.

364. Ushijima Y., Totsune H., Nishida A., Nacano M. Chemiluminescence from human polymorphonuclear leukocytes activated with opsonized zymosan // Free Radiic. Biol. Med. 1997. - Vol. 22, № 3. - P. 401-409.

365. Valkonen M.M., Kuusi T. Vitamin С prevents the acute atherogenic effects of passive smoking II Free Radiic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 3. - P. 428-436.

366. Vasiljeva O.V., Lyubitsky O.B., Klebanov G.I., Vladimirov Yu.A. Effect of antioxidants on the kinetics of chain lipid peroxidation in liposomes // Membr. Cell. Biol.-1998.-Vol. 12, № 2. P. 223-231.

367. Vidlakova M., Erazimova J., Forky J., Placer Z. Relationship of serum antioxidative activity to tocopherol and serum inhibitor of lipid peroxidation // Clin. Chim. Acta. 1972. - Vol. 36, № 1. - P. 61-66.

368. Vladimirov Yu.A. Free radicals lipid peroxidation in biomembranes: mechanism, regulation, and biological consequences И Free radicals, aging and degenerative diseases. Alan R. Liss, Inc., 1986. - P. 141-195.

369. Wasil M., Kelly F.J. Evaluation of the antioxidant properties of the angiotensin-converting enzyme inhibitor, captopril and the nucleotide enhancing agent, acadesine // Redox Report. 1995. - Vol. 1, № 5. - P. 361-367.

370. Wefers H., Sies H. The protection by ascorbate and glutathione against microsomal lipid peroxidation is dependent on vitamin E // Eur. J. Biochem. -1988. Vol. 174, № 2. - P. 353-357.

371. Weis S.J. Oxygen, ischemia and inflammation // Acta Physiol. Scand. 1986. - Suppl. 548. - P. 9-37.

372. White E.H., Bursey M.M. Chemiluminescence of luminol and related hydrazides: the light emission step // J. Am. Chem. Soc. 1964. - Vol. 86, № 5. -P. 941-942.

373. White E.H., Zafiriou O., Kagi H.H. Chemiluminescence of luminol: the chemical reaction // Ibid. 1964. - Vol. 86, № 5. - P. 940-941.

374. Whitehead T.P., Thorpe G.H.G., Maxwell S.R.J. Enhanced chemiluminescent assay for antioxidant capacity in biological fluids // Anal. Chim. Acta. 1992. -Vol. 266, № 2. - P. 265-277.

375. Whitehead T.P., Robinson D., Allaway S. et al. Effect of red wine ingestion on the antioxidant capacity of serum // Clin. Chem. 1995. - Vol. 41, № 1. - P. 32-35.

376. Wilkins G., Leake D. The effects of the free radical scavengers on the oxidation of low-density lipoproteins by macrophages // Biochim. Biophys Acta. -1994. Vol. 1215, № 3. - P. 250-258.

377. Wills E.D. Mechanisms of lipid peroxide formation in tissues. Role of metals and haematin proteins in the catalysis of the oxidation of unsaturated fatty acids // Biochim. Biophys Acta. -1965. Vol. 98, № 2. - P. 238-251.

378. Wink D., Mitchell J.B. Chemical biology of nitric oxide: insights into regulatory cytotoxic, and cytoprotective mechanisms of nitric oxide // Free Radiic. Biol. Med. 1998. - Vol. 25, № 4-5. - P. 434-456.

379. Winklhofer-Roob B.M., Ziouzenkova O., Puhl H. et al. Impaired resistance to oxidation of low density lipoprotein in cystic fibrosis: improvement during vitamin E supplementation // Free Radiic. Biol. Med. 1995. - Vol. 19, № 6. -P. 725-733.

380. Winston G.W., Regoli F., Dugas A.J. et al. A rapid gas chromatographic assay for determining oxyradical scavenging capacity of antioxidants and biological fluids // Free Radiic. Biol. Med. 1998. - Vol. 24, № 3. - P. 480-493.

381. Yamamoto Y., Ames B.N. Detection of lipid hydroperoxides and hydrogen peroxide at picamole levels by an HPLC and isoluminol chemiluminescence assay // Free Radiic. Biol. Med. 1987. - Vol. 3, № 5. - P. 359-361.

382. Yamamoto Y., Nagata Y., Niki E. et al. Plasma glutathione peroxidase reduced phosphatidylcholine hydroperoxide II Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. - Vol. 193, № 1. - P. 133-138.

383. Yamana Т., Volkmer, Grishan M.B. The effects of sulfasalazine metabolites on hemoglobin-catalyzed lipid peroxidation // Free Radiic. Biol. Med. 1991. -Vol. 10, № 1. - P. 41-49.

384. Yamashoji S., Kajimoto G. Antioxidant affect caeruloplasmin on microsomal lipid peroxidation II FEBS Lett. 1983. - Vol. 152, № 2. - P. 168-170.

385. Yokoyama Y., Beckman J.S., Beckman Т.К. et al. Circulating xanthine oxidase: potential mediator of ischemic injury // Am. J. Physiol. 1990. - Vol. 258, № 4. - P. G564-570.

Информация о работе

Теселкин, Юрий Олегович
доктора биологических наук
Москва, 2003
ВАК 03.00.04

Диссертация

Антиоксидантная активность плазмы крови как критерий оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы