Ангиотензин-превращающий фермент в тканевых структурах и жидких средах глаза в норме и патологии, пути регуляции.

Павленко, Татьяна Аркадьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Ангиотензин-превращающий фермент в тканевых структурах и жидких средах глаза в норме и патологии, пути регуляции.
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Ангиотензин-превращающий фермент в тканевых структурах и жидких средах глаза в норме и патологии, пути регуляции."

На правах рукописи

ПАВЛЕНКО Татьяна Аркадьевна

АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩИЙ ФЕРМЕНТ В ТКАНЕВЫХ СТРУКТУРАХ И ЖИДКИХ СРЕДАХ ГЛАЗА В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ, ПУТИ РЕГУЛЯЦИИ.

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2009

¿ли

003477238

Диссертационная работа выполнена в Федеральном Государственном Учреждении «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Росмедтехнологий»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Н.Б.Чеснокова

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

ЕГ.Н. Ивков

доктор медицинских наук С.В. Пирожков

Ведущая организация:

ГОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования

Защита диссертации состоится « 16 » октября 2009 года в 14 часов на заседании диссертационного совета при Д 212.203.13 при ГОУ ВПО Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8, Медицинский факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6. Автореферат разослан сентября 2009 года

Ученый секретарь Диссертационного Совета

доктор биологических наук, профессор Е.В. Лукашева

Общая характеристика работы. Актуальность темы.

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) в 1999 году в Женеве официально дала старт всемирной программе «Ликвидация устранимой слепоты в мире». По данным ВОЗ в мире насчитывается 45 млн. слепых, при не выполнении лечебно-профилактических мер, к 2020 году это число удвоится. Применительно к РФ понятие «устранимая слепота» включает в себя в том числе: травмы, воспалительные заболевания, патологию сетчатки различной этиологии, глаукому, которые трудно поддаются лечению, что определяет актуальность разработки новых эффективных методов медикаментозной терапии (Либман Е.С., 2000, Южаков A.M., 2003).

Ренин-ангиотепзиновая система (РАС) является одной из важнейших регуляторных систем организма. Основной и. наиболее известной функцией РАС является регуляция кровяного давления и водно-солевого баланса.

Ангиотензин-превращаклций фермент (АПФ) - это ключевой фермент РАС. АПФ является цинк-зависимой пептидазой, состоит из одной олигопептидной цепи, включающей в себя два высокогомологичных домена, каждый из которых содержит активный центр. Первым выделил АПФ JI.T. Скегтс из сыворотки крови лошади (Skeggs L.T. et al., 1956). Интенсивное исследование фермента началось в 60-х годах, когда было показано, что основным местом энзиматического превращения ангиотензин I (AI) в ангиотензин II (All) и инактивация брадикинина является система легочного кровообращения (Ferreira S.H. et al., 1967; Ng K.K.F. et al., 1968; Ryan J.W. et al., 1968). Однако, несколькими годами ранее Ю.Е. Елисеева и В.Н. Орехович опубликовали работу о выделении карбоксикатепсина, тканевой протеиназы из почек быка, которая отщепляла С-концевые дипептиды в синтетических субстратах (Елисеева Ю.Е,. Орехович В.Н., 1963). Они также впервые обратили внимание на двойственную функцию этого фермента в отношении основных субстратов - брадикинина и AI (Елисеева Ю.Е. и соавт., 1970). Под действием АПФ из физиологически неактивного субстрата AI образуется основной эффектор РАС -All), являющийся очень мощным вазоконстриктором. Ангиотензин II способен также усиливать процессы пролиферации и миграции гладкомышечных клеток, а продукт его дальнейшего гидролиза ангиотензин III стимулирует секрецию альдостерона (Opie L., 1999; Kim J.H., 2009). Установлено, что помимо сосудосуживающего действия АН оказывает провоепалительный эффект - он инициирует инфильтрацию тканей воспалительными и иммунокомпетентными клетками, активирует фактор транскрипции NF-kappaB, запускающий синтез провоспалительных веществ: молекул адгезии, цитокинов, хемоаттрактантов (Suzuki Y. et al, 2004). АН также

способствует образованию активных форм кислорода, стимулирует производство ингибитора активатора плазминогена, сдвигая гемостаз крови в сторону тромбоза (Моисеев С.В., 1999; Brown N.J. et al., 2000; Labinjoh С. et al., 2000).

С другой стороны, АПФ расщепляет вазодилятатор брадикинин - основной эффектор калликреин-кининовой системы, до неактивных в отношении воздействия на тонус сосудов пептидов. Помимо способности расширять просвет периферических и коронарных сосудов и снижать АД, брадикинин может повышать проницаемость капилляров, сокращать гладкую мускулатуру бронхов и других органов, стимулировать диаледез лейкоцитов и вызывать болевой эффект. Показано, что брадикинин освобождает гистамин из тучных клеток, активирует специфические рецепторы эндотелия, что приводит к образованию вазодилататоров - простациклина и N0, стимулирует синтез и освобождение простагландинов, фактора некроза опухоли, освобождение ряда интерлейкинов, способствует процессам репарации и обладает инсулиноподобным действием, стимулируя захват глюкозы периферическими тканями, модулирует передачу нервных импульсов в ЦНС и периферической нервной системе, изменяет состояние гематоэнцефалического барьера (Шилкин Г.А. и др., 2001; Farrell R. et al., 1999; Silvestre J.S., 2004).

Помимо AI и брадикинина АПФ гидролизует другие физиологически активные пептиды: гематопоэтический пептид, fi-цепь инсулина и нейропептиды (Гомазков О.А., 1997; Елисеева Ю.А., 2001).

Таким образом, АПФ, участвуя в метаболизме функционально активных пептидов, влияет не только на гемоциркуляцию, но и на развитие воспалительного и ишемичесхого процесса.

Помимо циркуляторной РАС в различных тканях выявлено наличие локальных РАС. Так, в тканевых структурах и жидких средах глаза обнаружены многие компоненты РАС, причем в концентрациях, намного превосходящих те, которые можно было бы объяснить примесью крови, и показано, что в глазу происходит их местный синтез (Savaskan Е. et al, 2004; Luhtala S. et al, 2009). Имеются сведения об участии локальной РАС глаза в развитии диабетических изменений в глазу, регуляции внутриглазного давления, в развитии глазных проявлений при саркоидозе и других патологических процессах (Кост О.А. и соавт., 1996; Бенделик Е.К. и соавт., 1999; Чеснокова Н.Б. и соавт., 2000; Shah G.B. et al., 2000; .Нероев В.В. и соавт., 2005; Kim JH. et al, 2009). Вероятно, локальная регуляция активности АПФ может быть использована в терапевтических целях.

Цель работы.

Выяснение возможностей локальной регуляции активности АПФ для коррекции течения патологического процесса в глазу. Задачи исследования.

1. изучить динамику изменения активности АПФ, протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости при ожогах глаз различной локализации у кроликов и проанализировать взаимосвязь исследуемых биохимических параметров слезы с клиническими проявлениями постожогового процесса;

2. определить распределение активности АПФ в тканевых структурах и жидких средах глаза кроликов в норме и при ожоговой травме глаза;

3. оценить влияние местного применения ингибиторов АПФ (иАПФ) на активность АПФ в слезной жидкости и во влаге, на антиокислительную активность (АОА) в слезной жидкости и на характер течения ожоговой болезни глаз.

4. оценить влияние местного применения иАПФ на состояние сетчатки кроликов при экспериментальном диабете и острой ишемии сетчатки.

5. определить влияние местного применения иАПФ на внутриглазное давление (ВГД) и гидродинамику глаза у кроликов и оценить целесообразность местного применения иАПФ при глаукоме.

Научная новизпа.

-Впервые определена активность АПФ в тканевых структурах и жидких средах глаза у кролика в норме и после ожога роговицы.

-Впервые установлена схожая динамика между клиническими проявлениями ожоговой болезни глаз различной локализации и количественными показателями состояния локальной РАС по активности АПФ.

-Впервые устаповлено повышение активности АПФ в слезной жидкости при иммуногеном увейте у кроликов.

-Впервые продемонстрировано действие инсталляций иАПФ на характер течения постожогового процесса при ожогах глаз различной локализации, которое выражается в улучшении репаративных процессов и противоишемическом действии. - Впервые показано влияние инсталляций активных форм и проформы иАПФ на гидродинамику глаза у интактных кроликов

-Впервые показано, что местное применение иАПФ оказывает влияние на состояние сосудов сетчатки при экспериментальном диабете и острой ишемии сетчатки у кроликов. Практическая значимость результатов исследования.

-Установлено, что изменение активности АПФ в слезной жидкости может служить критерием для оценки характера течения постгравматического процесса в роговице и конъюнктиве, его прогноза, а также для проведения обоснованной терапии и ее контроля. -Дано обоснование для местного применения иАПФ при заболеваниях глаз, связанных с воспалительными и/или ишемическими процессами, в том числе при травмах глаза и ишемии сетчатки различной этиологии.

-Результаты исследования влияния инсталляций иАПФ (как активных, так и проформы) на внутриглазное давление, гидродинамику глаза и активность АПФ в водянистой влаге свидетельствуют о перспективности включения местного применения иАПФ в комплексную терапию глаукомы.

Положения диссертационной работы, выносимые на защиту.

-Установлено, что у кроликов в слезной жидкости при ожогах глаза различной локализации возрастает активность АПФ при изъязвлении роговицы и ишемии конъюнктивы. Установлена схожая динамика между активностью АПФ в слезе и выраженностью клинических проявлений патологического процесса. -Определена повышенная активность АПФ в слезной жидкости у кроликов с иммуногенным увеитом.

- Изучено распределение и активность АПФ в тканевых структурах и жидких средах глаза у интактных кроликов. При ожоговой болезни глаз выявлено повышение активности АПФ как во внешних, так и во внутренних структурах глаза.

-Выявлена способность иАПФ при инсталляциях снижать активность АПФ в слезе как интактных кроликов, так и после экспериментального ожога глаз.

-Показано, что иАПФ в виде инсталляций могут применяться как для профилактики изъязвлений, так и лечения уже развившихся язв роговицы.

-Выявлено противоишемическое действие инсталляций иАПФ при ожоговой ишемии конъюнктивы у кроликов.

-Выявлена способность инсталляций иАПФ снижать активность АПФ у интактных животных во внутриглазной жидкости - водянистой влаге (Вв).

-Показано, что при инсталляциях иАПФ значительно улучшается микроциркуляция сетчатки при экспериментальном диабете и острой ретинальной ишемии у кроликов. -Установлено повышение активности АПФ в слезе у больных первичной открьггоугольной глаукомой.

-Определено, что инсталляции иАПФ как в активной форме, так и в виде проформы, вызывают снижение ВГД у здоровых кроликов, существенно увеличивают отток водянистой влаги и ее секрецию. Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: Международной конференции "Биокатализ" в 2002 г., Москва; VII Международном медицинском конгрессе студентов и молодых ученых, 2003 г., Тернополь; Московской международной конференции "Биотехнология и медицина", 2006 г., Москва. Диссертационная работа апробирована на межотделенческой конференции в МНИИ ГБ им. Гельмгольца (28 мая, 2009 г.). Публикации.

По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, из них 4 - в центральной печати, 3 - в зарубежных изданиях. Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на (152) страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована (40) таблицами, (19) рисунками, (4) фотографиями. Список литературы включает в себя (249) источников, из которых (35) отечественных и (214) иностранных.

Содержание работы. Материалы и методы исследования.

Экспериментальные исследования выполнены на 299 кроликах-самцах (598 глаз) породы шиншилла массой 2-2,5 кг. Работа с экспериментальными животными проводилась в соответствии с приказом министерства Здравоохранения №755 от 12.08.77. и положениями Хельсинкской декларации.

У кроликов моделировали патологические процессы воспалительного и ишемического характера, затрагивающие внешние и внутренние структуры глаза. Выбор моделей воспаления и ишемии обусловлен тем, что они являются типовыми реакциями, принимающими участие в патогенезе многих заболеваний глаз.

Исследовано 2302 образцов слезы, 200 образцов крови, 160 образцов глазных тканей и 60 камерной влаги кроликов. Отбор слезы у кроликов проводили с помощью дисков из фильтровальной бумаги. Слезную жидкость элюировали в фосфатном буфере рН 7,4. Элюат центрифугировали и надосадочную жидкость использовали для измерения активности биохимических показателей. Отбор влаги производили парацентезом.

Приготовление гомогенатов тканей глаза кроликов проводили на холоду. Выделяли следующие ткани: бульбарную конъюнктиву, хрусталик в капсуле, радужную оболочку, цилиарное тело с корнем радужки, сетчатку, сосудистую оболочку (хориоидею), роговицу. Гомогенаты центрифугировали и для анализа отбирали надосадочную жидкость. Кровь брали из краевой ушной вены кролика, для исследований использовали сыворотку крови.

Проведено исследование 25 образцов слезы пациентов с первичной открытоугольной глаукомой (ПОУГ) и 27 образцов слезы здоровых людей. Отбор слезы у пациентов с глаукомой осуществляли при помощи микрокапилляра из нижнего конъюнктивального свода.

Экспериментальные модели.

Одинаковые по площади щелочной ожог роговицы, ожог лимба и сочетанный ожог конъюнктивы, роговицы и части лимба (модель ожоговой ишемии конъюнктивы-) моделировали под общим наркозом и местной анестезией модифицированным методом ОЬепЬегдег. Для нанесения ожога использовали диски из хлопчатобумажной ткани диаметром 7 мм, для ожога лимба - полоску такой же площади ткани шириной 2 мм, пропитанные 10% КаОН, через 40с ткань удаляли, а глаз промывали 20 мл физиологического раствора. Слезу отбирали до и на 1, 3, 7, 14, 21 и 28 сутки после нанесения травмы.

Иммуногенный увеит моделировали методом Ройб. Вначале проводили первичную сенсибилизацию организма путем подкожного введения 5 мл нормальной лошадиной сыворотки. Увеит развивался в ответ на интравитриальное введение на 8-9 сутки разрешающей дозы антигена. В качестве местной анестезии использовали 1% раствор дикаина. Слезу отбирали до эксперимента, на 4 сутки после первичного введения антигена и на 1,2, 3 сутки увеита.

Моделирование диабета. Первой группе кроликов после 48 часов голодания внутривенно вводили стрептозотоцин (бОмг/кг в 50мМ нитратном буфере рН=4,0). Несмотря на тяжелое состояние кроликов, повышение панкреатической амилазы и аланинаминотрансферазы, увеличения концентрации глюкозы в крови не происходило. Диабет у второй группы кроликов моделировали тоже после 48 часов голодания путем внутривенного введения 5% раствора аллоксана в фосфатном буфере (рН=5-5,2) в дозе 130-150 мг аллоксана на 1 кг массы. Развитие диабета наступало через 24-30 ч.

Модель острой ишемии сетчатки воспроизводили путем лазеркоагуляции ретинальных сосудов 1-Н порядка в наружном квадранте глазного дна: ЮОмкм, 0.9 Вт, объем поражения сосуда на протяжении около 1 диаметра ДЗН, количество коагулятов -

до обтурации сосудов (от 15 до 65) по методу А.Н. Иванова и соавт. (Патент РФ на изобретение № 2313312, от 27.12.2007 г.).

При постановке эксперимента всегда формировали группу интактных животных, у которых слезу собирали в те же сроки, что и у опытных для исключения влияния режима содержания животных на исследуемые биохимические параметры.

Биохимические исследования.

Активность АПФ оценивали по начальным скоростям гидролиза субстрата N-карбобензокси-Ь-фенилаланил-Ь-гистидил-Ь-лейцина (Cbz-Phe-His-Leu) (Serva,Германия), определяя продукт реакции (His-Leu) с помощью орто-фталевого альдегида (Koch-Light, Великобритания) флуориметрическим методом [Conroy I.M. et al., 1978]. Флуоресценцию образованного аддукта измеряли на спектрофлуориметре Hitachi MPF-4 (Япония) при длине волны возбуждения 370 нм и длине волны эмиссии 500 нм. За единицу активности АПФ принимали то его количество, которое гидролизует 1 мкмоль субстрата за 1 мин в стандартных условиях. Активность выражали в единицах на мл пробы или на мг белка (удельная активность - мкмоль/мипхмг). Метод исследования активности АПФ был адаптирован для микроколичеств тканей и жидкостей глаза.

Для измерения антиокислительной активности (АОА) слезной жидкости была использована система гемоглобин - перекись водорода -люминол (Hb- H2O2-JIM), в которой в качестве субстрата окисления выступает люминол (Гулидова О.М и соват.,1999). Метод основан на регистрации кинетики хемилюминесценции люминола. Введение в модельную систему антиоксидантов приводит к торможению свободно-радикального окисления люминола. Измеряемым параметром является латентный период - время от момента инициирования свободнорадикального окисления люминола перекисью водорода до начала развития свечения.

Трипсиноподобную активность (ТПА) определяли, используя метод Эрлангера с соавт. в модификации В.А. Шатерникова. Об уровне протеолитической активности в исследуемых образцах судили по их способности расщеплять N-óeinora-DL-apniiinii-n-нитроанилид (БАПНА). Для определения антитшптической активности (ATA) использовали метод Хавербека в модификации В.А. Шатерникова, основанный на торможении расщепления трипсином белковых и низкомолекулярных субстратов. Определение активности а2-макроглобулина (а2-МГ) основано на том, что комплекс аг-МГ-трипсин сохраняет протеолитическую активность по отношению к низкомолекулярным субстратам, и на эту активность не влияет ингибитор трипсина из бобов сои. Расчет активности производили с помощью калибровочной кривой, построенной по я-нитроанилину. Активность в слезе выражали в нмоль/минхмл образца,

удельную - в нмоль/мннхмг белка в образце. Измерения в слезной жидкости проводили на спектрофотометре UV 160А (Shimadzu, Япония).

Для измерения концентрации белка использовали метод Лоури и соавт.

Гликозилированный гемоглобин определяли методом ионообменной хроматографии с помощью миниколонок с катионнообменной смолой (набор BioRad).

Определяли концентрацию глюкозы на анализаторе «Биосен» методом, основанном на электрохимическом амперометрическом определении продуктов ферментативной реакции окисления глюкозы, катализируемой глюкооксидазой.

Содержание общего холестерина, триглицеридов. панкреатической амилазы, аланинаминотрансферазы в сыворотке крови определяли на автоанализаторе "Reflotron " (Германия).

Клиническую оценку течения патологического процесса у животных проводили при помощи биомикроскопии. Оценивали состояние конъюнктивы (отек, гйперемия, отделяемое, площадь ишемии) и роговицы (отек, васкуляризация, площадь и глубина изъязвления), данные выражали в условных баллах.

Для оценки состояния сетчатки использовали электрофизиологические методы, биомикроскопию, офтальмоскопию, фоторегистрацию глазного дна.

В работе использованы игибиторы АПФ: калтоприл, эналаприлат, эналаприл, лизиноприл; ингибитор сериновых протеиназ - Гордокс.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием статистического пакета программ "XL" и Statistica 6.0. Исследуемые выборки были подвергнуты тесту на нормальность распределения. Показатели с нормальным распределением представлены как среднее значение (М) и стандартное отклонение (SD), достоверность различий между группами, с уровнем значимости не менее 95%, оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента.

Работа проводилась в отделении патофизиологии и биохимии МНИИ ГБ им. Гельмгольца (рук. проф. Чеснокова Н.Б.) и кафедре химической энзимологии МГУ им. М.В. Ломоносова (зав. проф. Варфоломеев В.И.) совместно с в.н.с. к.х.н. Кост O.A. и с.н.с. к.х.н. Никольской И.И.. Часть исследований проводилась совместно с сотрудниками МНИИ ГБ им. Гельмгольца: отделения патологии сетчатки и зрительного нерва (рук. д.м.н., проф., Нероев В.В.) - к.м.н. Давыдовой Г.А., Перовой Т.С.; отделения травматологии, реконструктивной, пластической хирургии и глазного протезирования (рук. д.м.н., проф. Гундорова P.A.) совместно с д.м.н. Ивановым А.Н., д.м.н. Макаровым П.В.; лаборатории клинической физиологии зрения им. Кравкова (рук. д.б.н., проф. Зуева

М.В.) - к.б.н. Цапенко И.В., д.б.н. Зуевой М.В.; отделения глаукомы (руководитель д.м.н.О.А.Кисилева) - к.м.н. Ловпаче Д.Н. Результаты исследований.

Динамика изменения активности АПФ и протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости при ожогах глаз разной локализации.

Характерным и грозным осложнением при ожогах роговицы было образование стромальных язв роговицы, при сочетанном ожоге конъюнктивы, роговицы и части лимба - ишемия конъюнктивы. Ожог лимба характеризовался субатрофией глаза.

Изменение активности АПФ и протеиназно-ингибиторного баланса в СЖ при ожоговых повреждениях глаз кроликов носило фазовый характер, имелась зависимость от стадии процесса и локализации травмы.

Активность АПФ в слезе при ожоге роговицы и сочетанном ожоге достоверно возрастала на 1-3 сутки после травмы, однако при сочетанном ожоге активность фермента была выше. В дальнейшие сроки наблюдения в обеих группах активность АПФ на 7-14 сутки снижалась и вновь увеличивалась в течение последующих 2-х недель, когда усиливались процессы изъязвления ткани роговицы. При ожоге лимба активность АПФ была наиболее высокой: на 1 сутки превышала норму практически в 4 раза, к 3 суткам возвращалась к норме, а затем в период с 7 по 21 сутки вновь значительно увеличивалась (рис.1, а).

При сравнительной оценке изменения протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости при ожогах глаз различной локализации выявлен схожий двухфазовый характер изменений ТПА, ATA, а2-МГ(рис.1, б, в, г). Отмечалось два пика подъема ТПА и ATA при всех видах ожогов: первый на 1-3 сутки и второй на 14-21 сутки. Активация протеаз на ранних стадиях необходима для удаления некротизированных тканей, активация их на 14-21 сутки соответствует периоду интенсивного формирования язв роговицы. Подъем ATA по-видимому связан с поступлением плазменных антипротеаз в слезу при увеличении проницаемости сосудов и направлен на ограничение действия протеолитических ферментов. Снижение уровня а2-МГ в первые сутки вероятно происходит вследствие образования комплексов с протеолитическими ферментами и постепенное повышение а2-МГ можно объяснить усилением местного образования этого ингибитора. Самые значительные изменения ТПА, ATA, а2-МГ отмечены в группе кроликов с ожогом лимба, где последствия ожога были наиболее тяжелыми.

Ранее было показано, что локальное ингибирование протеолитической активности с помощью поливалентных ингибиторов сериновьи протеиназ на основе апротинина

(Гордокса) способствует уменьшению воспаления и снижает степень изъязвления

роговицы, что обосновало широкое применение инсталляций этого ингибитора протеаз для лечения ожогов глаз (Чеснокова Н.Б., 1992). Полученные нами данные указывают на участие локального АПФ, наряду с трипсиноподобными ферментами, в патогенезе ожоговой болезни глаз, а также наличие взаимосвязи между клиническими проявлениями этого процесса и характером изменения активности в слезе. Ранее не исследовалось действие ингибиторе АПФ (иАПФ) на течение репаративных процессов в глазу после травмы.

ожог роговицы сочетанныйожог ожоглимба ---интактные

Рис.1 Изменение активности АПФ и протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости кролика после ожога глаз различной локализации, а) активность АПФ, б) трипснноподобпая активность, в) антитриптическая активность, г) активность аг-макроглобулина;

ось У- % от контроля, X -сутки после ожога. * - р< 0,05 по сравнению со здоровыми животными.

Показанное нами повышение активности АПФ в слезе в момент формирования язв роговицы и ишемии конъюнктивы позволило предположить участие АПФ в этих процессах. Проведенное нами сравнение активности АПФ в слезной жидкости у кроликов с поверхностными и глубокими язвами роговицы показало, что у кроликов с глубокими язвами роговицы активность АПФ в слезе была в 2-3 раза выше, чем с поверхностными изъязвлениями, что подтвердило предположение об участии АПФ в развитии язв

роговицы (рис.2). Полученные данные явились обоснованием для местного применения иАПФ при ожогах глаз для улучшения течения постожогового процесса и предотвращения осложнений.

Рис.2 Активность АПФ в слезной жидкости у кроликов в зависимости от характера течения постожогового процесса.

По оси У - активность в (ммоль/минхмг белка) * 10"4- по оси X -сутки

- развитие поверхностных дефектов роговицы, I I - развитие глубоких дефектов роговицы;

* - р< 0,05 достоверно по отношению к поверхностным и глубоким язвам роговицы.

Влияние инсталляций ингибиторов АПФ (иАПФ') на активность АПФ в слезе у здоровых кроликов и при ожоге роговицы.

Для выяснения возможности и продолжительности подавления локальной активности АПФ при инстилляциях иАПФ мы исследовали влияние инсталляций иАПФ в разных концентрациями на активность АПФ в слезе у здоровых кроликов (рис. 3). Оказалось, что после местных инсталляций 0,1% каптоприла у интактных кроликов в слезной жидкости происходит падение активности АПФ более чем в 2 раза в течение 1 часа. На следующие сутки активность фермента восстанавливалась. При большей концентрации (1% каптоприл) подавление активности фермента было более значительное и длительное: не менее 5 часов и через 24 часа активность фермента еще не достигала исходного уровня. Таким образом, ингибитор при инстилляциях способен снижать активность АПФ в слезной жидкости.

Рис.3 Влияние однократпой инсталляции иЛПФ на активность АПФ в слезной жидкости у здоровых кроликов: а) 0,1% каптоприл, б) 1% каптоприл.

По оси У - активность АПФ, % от нормы; по оси X - часы после инсталляции;

* - р< 0,05 достоверно по отношению к исходным значениям.

Исследовали влияние инсталляций различных иАПФ на активность АПФ в слезной жидкости при ожоге роговицы у кроликов. При ежедневных (в течение 2-х недель) инсталляциях иАПФ 0,1% каптоприла или 0,1% лизиноприла активность АПФ в слезной жидкости была значительно ниже, чем у нелеченных (рис.4, а). Действие лизиноприла начинается в более ранние сроки (1-е сутки), чем каптоприла (3-й сутки). Таким образом, с помощью инсталляций иАПФ можно снизить активность локального АПФ, что может оказать при ожогах глаз протавоишемическое и противовоспалительное действие.

Изменение активности АПФ в слезе объясняет положительное влияние иАПФ каптоприла и лизиноприла на характер течения постожогового процесса (рис.4, б). Сравнение влияния на клиническое течение каптоприла и лизиноприла показало, что при применении обоих ингибиторов значительно снижается частота возникновения язв роговицы, быстрее восстанавливается микроциркуляция, происходит образование более нежной и прозрачной рубцовой ткани, что позволяет сохранять зрительные функции. По клиническим проявлениям действие лизиноприла начинается в более ранние сроки, чем каптоприла, что можно объяснить более ранним ингибированием активности АПФ.

200

300

100

о А—,—,—,—,—.—,—> о -I-еь—I-1-1

0 I 2 3 4 5 6 7 0 7 14 21 28

Рис.4 Влияние инсталляций иАПФ (0,1% каптоприл и 0,1% лишноприл) при ожоге роговицы у кролика на активпость АПФ в слезной жидкости и клиническое течение ожоговой болезни глаз.

а) активность АПФ; ось Y - % от контроля, ось X - сутки после ожога;

б) глубина язв; ось Y - усл. ед., ось X - сутки после ожога;

* - р< 0,05 достоверно по отношению к контролю.

Влияние иАПФ на антиокислительную активность в слезной жидкости при ожоге глаз различной локализации.

Показано, что после ожога глаза в слезе снижается антиокислительная активность (АОА), т.к. в условиях развивающегося при данной патологии окислительного стресса происходит расходование эндогенных антиоксидантов. Нами было изучено влияние ежедневных в течение 2-х недель инсталляций 0,1% каптоприла на АОА в слезной жидкости при ожоге роговицы и ожоговой ишемии конъюнктивы у кроликов (рис. 5). В предварительных опытах in vitro не было выявлено влияния каптоприла на кинетику хемилюминесценции люминола в модельной системе как в отсутствии, так и в присутствии слезной жидкости. Однако оказалось, что после ожога роговицы и сочетанного ожога, при которых в слезной жидкости падает АОА, у кроликов леченых каптоприлом, АОА была выше, чем у нелеченных животных.

Таким образом, каптоприл препятствует усилению свободно-радикальных процессов, развивающихся при ожоге, что является еще одним подтверждением положительного воздействия инсталляций иАПФ на клиническое течение ожоговой болезни глаз.

Рис.5 Влияние иАПФ (каптоприла) на АОА в слезной жидкости при а) ожоге роговицы и б) сочетанием ожоге,

Ось У - АОА, % от контроля, ось X - сутки после ожога

* - р< 0,05 достоверно по отношению к здоровым животным.

Нами было проведено сравнение влияния инсталляций каптоприла и широко

применяемого в лечебной практике ингибитора сериновых протеиназ Гордокса и их

сочетания на течение постожогового процесса. Препараты закапывали с первого дня после

ожога роговицы ежедневно в течение 14 дней. Обнаружено, что каптоприл снижал

частоту образования глубоких язв роговицы даже в несколько большей степени, чем

Гордокс. Совместное применение этих ингибиторов не усиливало этот эффект (Рис.6).

—у—гордокс —о— каптопрпп —о- фпз.р-р

Рис.6 Влияние инсталляций каптоприла, Гордокса и их сочетания на развитие язв при ожоге роговицы.

Ось У - процент глубоких язв (частота развития глубоких язв роговицы в %), ось Х-сутки после ожога.

Активность АПФ в тканевых структурах и жидких средах глаза интактных кроликов и после ожога роговицы.

В водянистой влаге (Вв) измеренная нами общая активность АПФ (в расчете на мл) более чем в 5 раз меньше, чем в крови и слезе. При расчете удельной активности АПФ (на мг белка) оказалось, что во влаге в 5 раз выше (1,00+0,79х10"4 ммоль/минхмг), чем в крови, но в 13 меньше, чем в слезной жидкости (рис.7). Выявлена высокая активность АПФ в васкуляризированных тканях. В хориоидее обнаружен наибольший уровень активности АПФ (32,04+6,72><10'4 ммоль/минхмг).

После ожога роговицы происходит активация фермента, причем не только в области повреждения или в прилежащих тканях, но и во многих внутренних структурах глаза (в водянистой влаге, стекловидном и цилиарном теле, радужке). Эти изменения показывают значимость изучаемого фермента во внутренних структурах и жидких средах глаза при ожоге глаз. Можно предположить, что и при других патологических состояниях в заднем отрезке глаза, связанных с ишемическими и воспалительными процессами, активность АПФ возрастает в тканях, и местное введение иАПФ будет способствовать улучшению течения репаративных процессов и предотвращению развития осложнений, затрагивающих внутренние структуры глаза таких как, например, увеит.

Рис.7. Удельная активность АПФ а) в гомогенатах тканей глаз кроликов, б) во влаге передней камеры.

По оси У - активность АПФ в (ммоль/минхмг белка) хЮ"4, У - активность в (ммоль/минхмл) хЮ"4. На всех диаграммах: | | - здоровые животные,3 сутки после ожога роговицы.

* - р< 0,05 достоверно по отношению к здоровым животным.

Изучение возможности влияния местного введения иАПФ на течение

патологического процесса в заднем отрезке глаза.

Нами проведено исследование активности АПФ после инсталляции каптоприла и эналаприлата в водянистой влаге у здоровых кроликов.

Обнаружено, что в водянистой влаге после однократного закапывания 1% каптоприла (через 45 мин.), 0,125% (через 3 часа) эналаприлата и 1% эналаприла (через 3 часа) активность АПФ значительно снижалась (рис.8), т.е. ингибитор при инсталляциях способен снижать активность АПФ во внутренних средах глаза. Таким образом, перспективным является изучение влияния инсталляций иАПФ при патологиях, затрагивающих задний отрезок глаза, в качестве таких патологий мы выбрали диабетическую ретинопатии и острую ишемию сетчатки.

0,40 -1 0,30 -0,20 0,10 0,00 4

4,00 2,00 -|

3,00 гИ 1,50 -

2,00 - * 1,00 -

1,00 - § ¡ш 0,50 -

0,00 - -1- — 0,00 -

{"*"'1

интактные кяптопрнл

птэдпныс таалапршиг

интактные энплаприл

Рис.8 Активность АПФ во влаге после однократной инстилляции каптоприла, эналаприлата и эналаприл; ось У - активность АПФ, % от контроля. * - р< 0,05 достоверно по отношению к здоровым животным.

Изучение влияния местного введения иАПФ на клиническое течение патологических

процессов, протекающих в задних отделах глаза, мы проводили с помощью электрофизиологического исследования сетчатки на моделях аллоксанового диабета и острой ишемии сетчатки у кроликов. У кроликов с аллоксановым диабетом отмечалась резкая гиперреакция всех слоев сетчатки. Амплитуды а- и Ь-волн электроретинограммы (ЭРГ), а также низкочастотная и высокочастотная ритмической электроретинограммы (РЭРГ) превышали исходные значения в среднем на 70%. На 4 и 5 месяце диабета нарастала гиперреакция внутренних слоев сетчатки. Амплитуды Ь-волны ЭРГ, низкочастотной и высокочастотной РЭРГ достигали в среднем 190%. Указанные изменения развивались на фоне стойкого повышения уровня глюкозы в крови. После инсталляций эналаприлата кроликам с аллоксановым диабетом улучшений показателей ЭФИ сетчатки не было выявлено. Однако после субконъюкктивальных инъекций иАПФ (эналаприлат) в течение 2-х недель, происходило уменьшение супернормальных значений биопотенциалов сетчатки.

На модели острой ишемии сетчатки у кроликов по данным фоторегистрации глазного дна выявлено, что инсталляции эналалрилата приводят к восстановлению кровотока в сетчатке в более ранние сроки и в более полном объеме, чем у животных без лечения. На фоне инсталляций эналалрилата при острой ретанальной ишемии отмечаются менее выраженные нарушения электрогенеза сетчатки, чем в группе животных без лечения (амплитуды Ь-волны ЭРГ и РЭРГ у кроликов без лечения снижались соответственно в среднем на 45% и 20% от исходных значений, у леченных эналалрилатом амплитуды Ь-волны ЭРГ и РЭРГ - на 20% и 11% от исходных данных). Этот эффект связан с возможным нейропротекторным свойством иАПФ.

Таким образом, при нарушении микроциркуляции в сетчатке местное применение иАПФ может оказывать лечебное действие. Активность АПФ в слезе у больных глаукомой.

Нами впервые показано, что с возрастом у здоровых людей активность АПФ повышается, а у больных. первичной открытоугольной глаукомой (ПОУГ) этого же возраста значение активности фермента еще выше (рис.9). Увеличение активности АПФ в слезе с возрастом у здоровых людей и больных ПОУГ указывает на возможное вовлечение этого фермента в развитие глаукоматозного процесса.

3,5 3

2,5 -2 -1,5 -1

0,5

Норма 47,5 л. Норма 65 л. Глаукома 64,5

Рис.9 Активность АПФ в слезе у здоровых людей разных возрастных групп и у пациентов с первичной открытоугольной глаукомой.

Ось У - активность АПФ в (ммоль/минхмг белка) хЮ"*, ось X - средний возраст

* - р< 0,05 достоверно по отношению к норме (ср. возраст 47,5 +.4,2 лет).

Влияние местного применения иАПФ на внутриглазное давление и гидродинамику глаза у

кроликов.

Мы исследовали влияние однократной инсталляции различных иАПФ как в активной форме (каптоприл, лизиноприл и эналаприлат), так и в виде проформы (эналаприл) на внутриглазное давление (ВГД) у здоровых кроликов.

Инсталляции иАПФ как в активной форме (каптоприл, лизиноприл и эналаприлат), так и в виде проформы (эналаприл), вызывают снижение ВГД (рис.10). Максимальное снижение ВГД у разных кроликов наблюдалось не одновременно, а в диапазоне от 1 до 3 ч после инсталляции. На графике представлены средние значения снижения ВГД на каждый момент времени (Дсред)- Влияние местных инсталляций иАПФ мы сравнили с действием широко применяемого для снижения ВГД препаратом - Тимололом. Полученные данные о способности проформы эналаприла при введении в виде инсталляций снижать ВГД, вероятно, свидетельствует о наличии в глазу ферментов, переводящих эналаприл в активную форму - эналаприлат.

0 1 2 3 4 —®—1% каптоприл

Рис.10. Изменение ВГД под действием различных иАПФ и Тимолола.

По оси X - часы, У - среднее значение разности между исходным ВГД и ВГД после инсталляции иАПФ - Дсрсд (мм рт. ст.).

Исследование гидродинамики глаза у здоровых кроликов показало, что инсталляции

иАПФ как активной формы (0,125%эналаприлат), так и проформы (1%эналаприл)

существенно усиливают отток влаги, при этом увеличивается и ее секреция (Рис.11).

Важно подчеркнуть, что в нашем эксперименте проформа иАПФ - эналаприл оказывала

столь же выраженное действие, как и активная форма - эналаприлат. Тимолол оказывал

на гидродинамику глаза кроликов противоположное действие - коэффициент легкости

оттока и минутный объем водянистой влаги снижались в среднем на 23% и 30%

соответственно.

Рис.11. Влияние 1% эналаприла, 0,125% эналаприлата и Тимолола на показатели гидродинамики глаза (через 24 часа после инсталляции).

По оси У:а) коэффициент легкости оттока - С (мм3/мин*мм рт. ст.); б) скорость секреции водянистой влаги - Р (мм3/мин). | |- до инсталляции, - через 4 ч после

инсталляции; * - р<0,01 достоверно по отношению к исходным данным .

Таким образом, показано благоприятное воздействие местного применения иАПФ на ВГД и гидродинамику глаза. По-видимому, причины снижения ВГД после инсталляций иАПФ являются комплексными и затрагивают одновременно несколько механизмов регуляции ВГД, возможно, одним из них является превосходство увеличения оттока над увеличением секреции водянистой влаги.

Выводы.

1. При экспериментальных ожогах глаз у кроликов в слезной жидкости происходит увеличение активности АПФ в периоды развития язв роговицы и ишемии конъюнктивы. Активность АПФ зависит от стадии процесса, его локализации.

2. Увеличение активности АПФ в слезе происходит при экспериментальном иммуногеном увейте у кроликов, как в глазу с увеитом, так и в парном без увеита.

3. Изучено распределение активности АПФ в тканях глаза кролика. Установлено, что активность АПФ при ожогах роговицы у кроликов увеличивается не только в тканях, окружающих зону ожога, но и во внутренних структурах глаза.

4. Применение ингибиторов АПФ в виде инсталляций при экспериментальном ожоге глаз у кроликов оказывает противовоспалительное и противоишемическое действие, что благоприятно сказывается на характере течения ожоговой болезни глаза.

5. Инсталляции ингибиторов АПФ вызывают длительное дозозависимое снижение активности АПФ в слезе, а также приводят к снижению активности АПФ в водянистой влаге.

6. На моделях диабета и острой ишемии сетчатки показано, что местное применение ингибиторов АПФ оказывает ретинопротекторное действие.

7. У больных глаукомой в слезе выявлена повышенная активность АПФ.

8. Инсталляции ингибиторов АПФ как в виде активной формы, так и проформы кроликам вызывает снижение внутриглазного давления и значительное улучшение гидродинамических показателей глаза.

Практические рекомендации.

Проведенные экспериментальные исследования позволяют рекомендовать местное применение иАПФ при лечении широкого спектра патологий глаза, сопровождающихся воспалительными и/или ишемическими процессами, затрагивающих внешние и внутренние структуры, а также глаукомы.

Благодарность. Выражаю глубокую благодарность и признательность за большую помощь и ценные консультации при выполнении данной работы сотрудникам' кафедры химической этимологии химического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова к.х.н. Кост

0. А., а также к.х.н. Никольской И.И.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Pavlenko Т.A., Kost О.A., Nikolskaya I.I., Beznos O.V., Makarov P.V., Chesnokova N.B. "Influence of eye burn localization on proteinase-inhibitor balance and angiotensin-converting enzyme activity in tears. Н XV International congress of eye research. - Geneva. - Switzerland. -

2002,-6-10.10-P.30.

2. Chesnokova N.B., Kost O.A., Nikolskaya I.I., Beznos O.V., Makarov P.V., Pavlenko T.A.. Kazanskaya N.F. Influence of eye burn localizatoin on proteinase-inhibitor balance and angiotensin-converting enzyme activity in tears. II МГУ, International conference «Biocathalysis-2002: fundamentals and applications». - Moscow. - 2002. - 22-27.06. - P.125-126.

3. Чеснокова Н.Б., Павленко T.A.. Никольская И.И., Кост О.А., Казанская Н.Ф. Локальная ренин-ангиотензиновая система глаза, роль в офталъмопатологии. // Вестник РАМН. -

2003. - №9. - С.29-32.

4. Павленко Т.А.. Кост О.А., Никольская И.И., Безнос О.В., Макаров П.В., Чеспокова Н.Б. Характер изменений биохимических показателей в слезе кроликов при ожогах глаз различной локализации. II Материалы VII Международного медицинского конгресса студентов и молодых ученых. - Тернополь. -2003. - 21-23.05. - С.206.

5. Чеснокова Н.Б., Кузнецова Т.П., Казанская Н.Ф., Кост О.А., Никольская И.И., Безнос О.В., Павленко Т.А.. Столярова Е.П., Скиргелло О.А. Значение исследования протеолитических ферментов и их ингибиторов в слезе для изучения патогенеза раневого процесса в глазу. II Материалы II Московского международного конгресса "Биотехнология: состояние и перспективы развития". - Москва. - 2003. - 10-14.11. - С. 193.

6. Chesnokova N.B., Kuznetsova Т.Р., Kazanskaya N.F., Kost O.A., Nikolskaya I.I., Beznos O.V., Pavlenko T.A., Stolyarova E.P., Skirgello O.E. Significance of proteinase-inhibitory balance in tears for the study of pathogenesis and for elaboration of methods for therapy and prognosis of the burn wound healing in the eye. И Biocataliytic technology and nanatechnology, ed. J.I. Zaikov, Nova Science Publishers Inc. - New York. - 2004. - P.l 19-126.

7. Еричев В.П., Никольская И.И., Ловпаче Дж.Н., Павленко Т.А.. Чеснокова Н.Б. Активность ангиотензин-превращающего фермента в слезе у больных глаукомой и здоровых людей разного возраста. 11 Тезисы докладов: VIII съезд офтальмологов России. -Москва. -2005. - 1-4.06. - С. 169.

8. Чеснокова Н.Б., Казанская Н.Ф., Безнос О.В., Макаров П.В., Павленко Т.А.. Столярова Е.П. Экспериментальное обоснование местного применения ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента для лечения глазных болезней, связанных с нарушением микроциркуляции и/или воспалительными процессами. И Тезисы докладов: УШсъезд офтальмологов России. - Москва. - 2005. - 1-4.06. - С. 551.

9.Нероев В.В.,. Чеснокова Н.Б, Охоцимская Т.Д., Рябина М.В., Кост O.A., Никольская И.И., Павленко Т.А. Активность ангиотензинпревращающего фермента в крови и слезе у больных диабетической ретинопатией. II Вестник офтальмологии. - 2006. - Т. 122. - № 3. -С. 11-14.

10. Кост O.A., Чеснокова Н.Б., Макаров П.В., Никольская И.И., Биневский П.В., Безнос О.В., Павленко Т.А. Новое применение ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента в офтальмологии. И Сборник тезисов Московской международной конференции "Биотехнология и медицина". - Москва. - 2006. - 14-17.03. - С.207.

11. Чеснокова Н.Б., Кост O.A., Никольская И.И., Безнос О.В., Биневский П.В., Столярова Е.П., Павленко Т.А. Экспериментальное обоснование местного применения ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента в лечении воспалительных процессов в глазу. II Вестник офтальмологии. -20Ü8. - Т.124. - №2. - С.16-19.

12. Чеснокова Н.Б., Кост O.A., Никольская И.И., Безнос О.В., Биневский П.В., Макаров П.В., Столярова Е.П., Павленко Т.А. Экспериментальное обоснование местного применения ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента для лечения ишемии тканей глаза на модели постожоговой ишемии конъюнктивы. // Вестник офтальмологии. -2008.-Т.124, - №4.-С.28-31.

13. Чеснокова Н.Б., Кост O.A., Никольская И.И., Безнос О.В., Столярова Е.П., Давыдова Н.Г., Павленко Т.А. Перспективы применения ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента в офтальмологии. // Российский общенациональный офтальмологический форум. - Москва. - 2008. - С.467-470.

14. Чеснокова Н.Б., Кост O.A., Никольская И.И., Безнос О.В., Давыдова Н.Г., Столярова Е.П., Биневский П.В.. Павленко Т.А. Влияние местного применения ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента на внутриглазное давление, гидродинамику глаза и активность ангиотензин-превращающего фермента в слезе и водянистой влаге (экспериментальное исследование). // Российский офтальмологический журнал. - 2009. -Т.2. - №1. - С.42-49.

Аннотация.

Работа посвящена изучению возможности локальной регуляции активности АПФ для коррекции течения патологического процесса в глазу. Проведенная оценка активности АПФ в слезной жидкости при ожогах глаз различной локализации, а также в тканевых структурах и жидких средах глаз интактных кроликов и после ожога позволили обосновать целесообразность местного применения ингибиторов АПФ для лечения заболеваний глаза, связанных с воспалительными и/или ишемическими процессами. Выявлена способность ингибиторов АПФ при инсталляциях снижать активность АПФ в слезе и во влаге. На моделях ожога глаза показано, что ингибиторы АПФ в виде инсталляций могут применяться как для профилактики изъязвлений, так и лечения уже развившихся язв роговицы, а также оказывать противоишемическое действие. На моделях экспериментального диабета и острой ретинальной ишемии у кроликов установлено, что при инсталляциях ингибиторов АПФ значительно улучшается микроциркуляция сетчатки. Показано, что инсталляции ингибиторов АПФ как в активной форме, так и в виде проформы вызывают снижение ВГД и улучшают состояние гидродинамики глаза.

Таким образом, в работе на основании изучения роли АПФ в глазной патологии дано экспериментальное обоснование местного применения ингибиторов АПФ для лечения заболеваний глаза.

The study devotes the possibility of local regulation of ACE activity for treatment the pathologic processes in the eye.

Estimation of ACE activity in tear fluid, tissues and fluids of the eyes of intact rabbits and rabbits with severe alkali eye bums grounds the topical administration of ACE inhibitors in the therapy of inflammatory and ischemic eye diseases. It was revealed that topical ACE inhibitors can decrease ACE activity in tear fluid and aqueous humor of rabbits. It was demonstrated on the eye bum model that instillations of ACE inhibitors can be used for the prevention and treatment of corneal ulceration and ischemia of eye tissues. Experiments with the models of diabetes and acute retinal ischemia demonstrated that instillations of ACE inhibitors improve microcirculation in retina. Instillation of ACE inhibitors both in active form and in proform was proved to decrease intraocular pressure in healthy rabbits and sufficiently improve hydrodynamic of the eye.

Thus the dissertation gives the experimental grounds for He topical administration of ACE inhibitors for the treatment of eye diseases, based on the results of investigation of ACE role in the eye pathology.

Заказ №367. Объем 1 п.л. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Петроруш». г. Москва, ул. Палиха-2а, тел. 250-92-06 www.postator.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Павленко, Татьяна Аркадьевна

Введение.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные представления о роли ренин-ангиотензиновой системе (РАС) в норме и патологии.

1.2 АПФ как компонент тканевых РАС в норме и патологии.

1.3 РАС и АПФ глаза и их роль в офтальмопатологии.

1.4 Ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) и их применение в клинике.

Собственные исследования.

Глава 2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2'. 1 .Характеристика материала исследования.

2.2. Экспериментальные модели.

2.2.1. Щелочной ожог роговицы, лимба, сочетанный ожог (роговица, лимб и конъюнктива).

2.2.2. Иммуногенный увеит.

2.2.3. Диабет.

2.2.4. Ишемия сетчатки.

2.3. Обследованные больные.

2.4. Методы исследования.

2.4.1. Измерение активности ангиотензин-превращающего фермента.

2.4.2. Измерение антиокислительной активности.

2.4.3. Методы измерения трипсиноподобной, антитриптической активности и уровня а2макроглобулина.

2.4.4. Измерение содержания гликозилированного гемоглобина

2.4.5. Измерение концентрации глюкозы.

2.4.6. Определение панкреатической амилазы (ПА), аланинаминотрасферазы (АЛТ), холестерина, триглицеридов.

2.4.7. Определение белка в слезе.

2.4.8. Клинико-экспериментальные методы оценки патологического процесса.

2.4.8.1. Оценка клинической картины ожоговой болезни глаз.

2.4.8.2. Измерение внутриглазного давления.

2.4.8.3. Измерение гидродинамики глаза.

2.4.8.4. Электрофизиологическое исследование сетчатки.

2.4.9. Статистические методы.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1 Динамика изменения активности АПФ и протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости кроликов при ожоге глаз различной локализации.

3.2. Активность АПФ в тканевых структурах и жидких средах глаза в норме и при ожоге роговицы.

3.3. Активность АПФ в слезной жидкости при экспериментальном увейте у кроликов.

3.4. Влияние однократных инсталляций ингибиторов АПФ (иАПФ) на активность АПФ в слезе кроликов и во влаге.

3.5. Влияние инсталляций иАПФ на активность АПФ в слезе и клиническое течение ожога глаз различной локализации.

3.5.1. Влияние однократной инсталляции на активность АПФ в слезе при сочетанном ожоге глаз.

3.5.2. Влияние инсталляций иАПФ на характер течения ожоговой болезни глаз.

3.5.2.1 .Ожоги роговицы.

3.5.2.2. Сочетанный ожог роговицы, конъюнктивы и части лимба.

3.6. Влияние иАПФ на антиокислительную активность в слезной жидкости при ожоге глаз различной локализации у кроликов.

3.7. Изучение возможности влияния местного применения иАПФ на течение патологического процесса в заднем отрезке глаза.

3.7.1. Экспериментальный диабет.

3.7.2. Экспериментальная ишемия сетчатки.

3.8. Активность АПФ в слезе у здоровых людей и больных первичной открытоугольной глаукомой.

3.9. Влияние местного применения иАПФ на внутриглазное давление и гидродинамику глаза у кроликов.

Обсуждение

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ангиотензин-превращающий фермент в тканевых структурах и жидких средах глаза в норме и патологии, пути регуляции."

Актуальность темы

Ренин-ангиотензиновая система (РАС) является одной из важнейших регуляторных систем организма. Основной и наиболее известной функцией РАС является регуляция кровяного давления и водно-солевого баланса.

Ангиотензин-превращающий фермент (АПФ) - это ключевой фермент РАС. АПФ является цинк-зависимой пептидазой, состоит из одной олигопептидной цепи, включающей в себя два высокогомологичных домена, каждый из которых содержит активный центр. Интенсивное исследование фермента началось в 60-х годах, когда было показано, что основным местом энзиматического превращения А1 в А11 и инактивация брадикинина является система легочного кровообращения [99; 165; 190]. Однако несколькими годами ранее Ю.Е. Елисеева и В.Н. Орехович [13] опубликовали работу о выделении карбоксикатепсина, тканевой протеиназы из почек быка, который отщеплял С-концевые дипептиды в синтетических субстратах. Они таюке обратили внимание на двойственную функцию этого фермента в отношении основных субстратов - брадикинина и А1 [15]. Выделенный ими карбоксикатепсин оказался идентичным АПФ [80; 98; 247]. Под действием АПФ из физиологически неактивного субстрата А1 образуется основной эффектор РАС - ангиотензин II (All), являющийся очень мощным вазоконстриктором. Ангиотензин II способен также усиливать процессы пролиферации и миграции гладкомышечных клеток [47], а продукт его дальнейшего гидролиза ангиотензин III стимулирует секрецию альдостерона. Установлено, что помимо- сосудосуживающего действия All оказывает провоспалительный эффект - он инициирует инфильтрацию тканей воспалительными, и иммунокомпетентными клетками, активирует фактор транскрипции NE-kappaB, запускающий синтез провоспалительных веществ: молекул адгезии, цитокинов, хемоаттрактантов [14]. All также способствует образованию активных форм кислорода, стимулирует производство ингибитора активатора плазминогена, сдвигая'гемостаз, в сторону тромбоза [51; 137].

С другой стороны, АПФ расщепляет вазодилятатор брадикинин — основной- эффектор калликреин-кининовой системы, до неактивных в отношении воздействия^ на тонус сосудов8 пептидов. Помимо способности расширять, просвет периферических и коронарных сосудов и снижать АД; брадикинин может повышать проницаемость капилляров, сокращать гладкую мускулатуру бронхов и других органов, стимулировать диапедез лейкоцитов и вызывать болевой эффект. Показано, что брадикинин> освобождает гистамин из тучных клеток, активирует специфические рецепторы эндотелия, что приводит к образованию вазодилататоров - простациклина и NO; стимулирует синтез и освобождение простагландинов, фактора- некроза опухоли в различных тканях, освобождение ряда интерлейкинов, способствует процессам репарации и обладает инсулиноподобным действием, стимулируя^ захват глюкозы периферическими тканями, модулирует передачу нервных импульсов в ЦНС и периферической нервной системе, изменяет состояние гематоэнцефалического барьера [144; 207].

Помимо А1 и брадикинина АПФ гидролизует другие физиологически активные пептиды: гематопоэтический пептид, р-цепь инсулина, эндотелии и нейропептиды [14].

Таким образом, АПФ, участвуя в метаболизме функционально активных пептидов, влияет не только на гемоциркуляцию, но и на развитие воспалительного и ишемического процесса.

Помимо циркуляторной РАС в различных тканях выявлено наличие локальных РАС. Так, в тканевых структурах и жидких средах глаза обнаружены многие компоненты РАС, причем в концентрациях, намного превосходящих те, которые можно было бы объяснить примесью крови, и показано, что в глазу происходит их местный синтез [196; 152]. Имеются сведения об участии локальной РАС глаза в развитии диабетических изменений в глазу, регуляции внутриглазного давления, в развитии глазных проявлений при саркоидозе и других патологических процессах [19; 5; 201; 173; 130]. Вероятно, локальная регуляция активности АПФ может быть использована в терапевтических целях. Цель работы.

2. определить распределение активности АПФ в тканевых структурах и жидких средах глаза кроликов в норме и при ожоговой травме глаза.

Научная новизна.

-Впервые при ожогах глаз различной локализации у кроликов проведено сравнительное исследование динамики биохимических сдвигов в слезной жидкости и характера клинического течения постожогового процесса. -Впервые определена активность АПФ в тканевых структурах и жидких средах глаза у кролика в норме и после ожога роговицы. -Впервые установлена схожая динамика между клиническими проявлениями ожоговой болезни глаз различной локализации и активностью АПФ. -Впервые установлено повышение активности АПФ в слезной жидкости при иммуногеном увейте у кроликов.

- Впервые показано влияние инстилляций активных форм и проформы иАПФ на гидродинамику глаза у интактных кроликов

-Впервые показано, что местное применение иАПФ оказывает влияние на состояние сосудов сетчатки при экспериментальном диабете и острой ишемии сетчатки у кроликов.

Практическая значимость результатов исследования

-Установлено, что изменение активности АПФ в слезной жидкости может служить критерием для оценки характера течения посттравматического процесса в роговице и конъюнктиве, его прогноза, а также для проведения обоснованной терапии и ее контроля.

-Дано обоснование для местного применения иАПФ при заболеваниях глаз, связанных с воспалительными и/или ишемическими процессами, в том числе при травмах глаза и ишемии сетчатки различной этиологии. -Результаты исследования влияния инстилляций иАПФ (как активных, так и проформы) на внутриглазное давление, гидродинамику глаза и активность АПФ в водянистой влаге свидетельствуют о перспективности включения местного применения иАПФ в комплексную терапию глаукомы. Положения диссертационной работы, выносимые на защиту. -Установлено, что у кроликов в слезной жидкости при ожогах глаза различной локализации возрастает активность АПФ при изъязвлении роговицы и ишемии конъюнктивы. Установлена схожая динамика между активностью АПФ в слезе и выраженностью клинических проявлений патологического процесса.

-Определена повышенная активность АПФ в слезной жидкости у кроликов с иммуногенным увеитом.

-Изучено распределение и активность АПФ в тканевых структурах и жидких средах глаза у интактных кроликов. При ожоговой болезни глаз выявлено повышение активности АПФ как во внешних, так и во внутренних структурах глаза.

-Выявлена способность иАПФ при инсталляциях снижать активность АПФ в слезе как интактных кроликов, так и после экспериментального ожога глаз. -Показано, что иАПФ в виде инстилляций могут применяться как для профилактики изъязвлений, так и лечения уже развившихся язв роговицы. -Выявлено противоишемическое действие инстилляций иАПФ при ожоговой ишемии конъюнктивы у кроликов.

-Выявлена способность инстилляций иАПФ снижать активность АПФ у интактных животных во внутриглазной жидкости - водянистой влаге (Вв).

-Показано, что при инсталляциях иАПФ значительно улучшается микроциркуляция сетчатки при экспериментальном диабете и острой ретинальной ишемии у кроликов.

-Установлено повышение активности АПФ в слезе у больных первичной открытоугольной глаукомой.

-Определено, что инсталляции иАПФ как в активной форме, так, и в виде проформы, вызывают снижение ВРД у здоровых кроликов,, существенно увеличивают отток водянистой влаги и ее секрецию. Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: Международной конференции "Биокатализ" в 2002 г., Москва; VII Международном медицинском конгрессе студентов и молодых ученых, 2003 г., Тернополь; Московской международной конференции "Биотехнология и медицина", 2006 г., Москва: Диссертационная работа апробирована на межотделенческой конференции в МНИИ ГБ им. Гельмгольца (28'мая, 2009 г.). Публикации.

По теме диссертации опубликовано 14 научных работ; из них 4 - в центральной печати, 3 - в зарубежных изданиях. Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на (152) страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов , исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована (40) таблицами, (19) рисунками, (4) фотографиями. Список литературы включает в себя (249) источников, из которых (35) отечественных и (214) иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Павленко, Татьяна Аркадьевна

Выводы:

4. Применение ингибиторов АПФ в виде инсталляций при экспериментальном ожоге глаз у кроликов оказывает противоспалительное и противоишемическое действие, что благоприятно сказывается на характере течения ожоговой болезни глаза.

7. У больных глаукомой в слезе выявлена повышенная активность АПФ.

8. Инсталляции ингибиторов АПФ как в виде активной формы, так и проформы кроликам вызывает снижение ВГД и значительное улучшение гидродинамических показателей глаза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Павленко, Татьяна Аркадьевна, Москва

1. Арутюнов Г.П., Розанов A.B. Антагонисты к рецепторам ангиотензина II. Известные факты и возмоэ/сные перспективы применения у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. II Кардиология. 2004. - №2. - С. 1-8.

2. Белова JI.A. Ангиотензин II образующие ферменты .// Биохимия. М. -2000. - №65(12). - С.1337-45.

3. Биохимические методы исследования в клинике. // ред. Покровский A.A. М. -1969. - С.206-209.

4. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты. II Вестник РАМН. 1998. - №7 - С. 43-51.

5. Голиков П.П. Глюкокортикоидный механизм регулирования ренин-ангиотензиновой системы. II Пат. физиол. — 1991. № 5. - С. 3-5.

6. Гомазков O.A., Калинина Е.В., Ангиотензин-превращающий фермент: бинарная активность, ингибиторы и функциональная роль кининового звена. // Успехи современной биологии. 1997. - Т. 117(2). - С. 172182.

7. Григорьев А.В Значение клинико-биохимических показателей в прогнозе течения диабетической ретинопатии и экспериментальное обоснование применения ликопина для их коррекции. II Автореферат дисс.канд. мед. наук. Москва. — 2005 г.

8. Ю.Гулидова О.В, Любицкий О.Б., Клебанов Г.И., Чеснокова Н. Б. Изменение антиокислительной активности слезной жидкости при экспериментальной ожоговой болезни глаз: II Бюлл. экспер. биол. и медицины. 1999.-Т.128. - №11. - С. 571-574.

9. П.Гундорова Р. А., Швецова Н. Е., Иванов А. Н., Цапенко И. В. ФедоровА. А., Зуева М. В., Танковский В. Э., Рябина М. В. Модель ишемии сетчатки: клинико-функциональное и гистологическое исследование: II Вестник офтальмологии. 2008.- №3: - С. 18-23.

10. Дзизинский А.А.,,Гомазков O.A. // Кинины в физиологии и патологии сердечнососудистой системы.//Новосибирск: Наука, 1976., С. 207.

11. Елисеева Ю.Е., Орехович В.Н., Павлихина Л.В., Алексеенко Л.П., Карбоксикатепсин — ключевой фермент двух систем, регулирующих кровяное давление. И Вопр. мед. химии. — 1970. №6. - С. 646.

12. Елисеева Ю.Е. АПФ и его физиологическая роль. II Вопросы медицинской химии. 2001. - № 1. - Р. 43-54.

13. Карягина И.Ю., Эмануэль Ю.В. Лабораторные технологии> диагностики и мониторинга сахарного диабета. И Лекция Государственный мед. Университет СПб. - 2002.

14. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. II Руководство для врачей. — СПб. — 1999. — С. 139-147.

15. Кост O.A., Чеснокова Н.Б., Кузнецова Т.П. Активность ангиотензин-превращающего фермента в слезной жидкости после ожога роговицы. II Вопросы Мед. Химии. 19941 - №42(2). - С.130-4.

16. Либман Е.С., Шахова Е.В. Эпидемиологические характеристики глаукомы. II Тезисы докладов VIII Съезда офтальмологов России.- М.-2005- С.78-79.

17. Любицкий О.Б. Определение антиоксидантной активности биологических жидкостей хемилюминесцентным методом. // Автореф. дис. к.б.н.-М.- 1999.

18. Мареев В.Ю. Четверть века эры ингибиторов АПФ в кардиологии. II Русский Медицинский Журнал. 2000. - №15-16. - С.602-609.

19. Медицинские лабораторные технологии. // ред. Карпищенко А.И. -Санкт-Петербург. 1999. - Т.2. - С.77-78.

20. Нероев В.В., Рябина М.В., Охоцимская Т.Д. Применение ингибиторов АПФ в лечении диабетической ретинопатии. II Сборник трудов юбилейной научной конференции, посвященной 70-ти летию КГМУ.-Курск.- 2005.- С. 49-50.

21. Сахаров Н.Ю., Духанина Е.А., Пучкина Е.А., Данилов С.М., Музыкантов В.Р.// Биохимия. 1991- Т. 56(1). - С. 55-62.

22. Селиванова Л.Ю. Непролиферативная диабетическая ретинопатия при инсулиннезависимом сахарном диабете, в сочетании с артериальной гипертензией: клинические особенности, комплексное лечение. //Автореферат дисс.к. м. н. Оренбург. — 2002.

23. Сидоренко Б.А., Преображенский Д.В. Трандолаприл (Гоптен) — ингибитор АПФ третьего поколения: II Клин. фарм. и терапия.,- 1998. -№7. Т.З. - С.68-75.

24. Чеснокова Н. Б. Роль протеолитических ферментов и их ингибиторовв патологии роговицы. //Автореф. дис.доктора биологических наук.-М.- 1991.

25. Чеснокова Н.Б., Григорьев A.B., Кузнецова Т.П., Экспериментальное обоснование использования ликопидсодержащего препарата «Томатола» в комплексном лечении диабетической ретинопатии. II Вестник офтальмологии. 2000. - №5. - С.29-31.

26. ЗЗ.Шамшинова A.M., Зуева М.В:, Цапенко И.В., Яковлев A.A. Нейрофизиологические особенности сетчатки и возможности клинической электроретинографии. //Вестник офталмол.- 1996. -Т. 112, №2. С.52-55. 7.

27. Шестакова М.В. Блокада ренин-ангиотензиновой системы в лечении сосудистых осложнений сахарного диабета. // Русский медицинский журнал. 2000. - Т. 8. - №15-16. - С. 15-16.

28. Южаков A.M. Основные направления в ликвидации устранимой слепоты в Российской Федерации. II Материалы Российского межрегионального симпозиума «Ликвидация устранимой слепоты: всемирная инициатива ВОЗ. — М. — 2003. — С. 27-3 Г.

29. Allen A.M., Moeller I., Jenkins T.A., Zhuo J., Aldred G.P., Chai S.Y., Mendelsohn F.A. Angiotensin receptors in the nervous system. // Brain Res Bull. 1998.-V. 1;47(1). - P.17-28.

30. Barbe F., Su J.B., Guyene T.T., Crozatier В., Menard J., Hittinger L. Bradykinin pathway is involved in acute hemodynamic effects of enalaprilat in dogs with heart failure. И Am J Physiol. 1996. - V.270(6 Pt 2). -P.1985-92.

31. Barchowsky A., Kent R., Whorton A. Recovery of porcine aortic endothelial cell prostaglandin synthesis following inhibition by sublethal concentrations of hydrogen peroxide. И Biochim. Et biophys. Acta. 1987. - V. 927. - № 3. -P. 372-381.

32. Barley J., Blackwood A.,, Carter N.D., Crews D.E., Cruickshank J.K., Jeffery S., Ogunlesi A.O., Sagnella G.A. Angiotensin converting enzyme insertion/deletion polymorphism: association with ethnic origin. II J. Hypertension. 1994. - V. 12(8). - P. 955.

33. Baudin B., Giboudeau J. Carboxypeptida.se A hydrolyses benzoylglycyl-histidyl-leucine but not furylacryloyl-phenylalanyl-glycyl-glycine, two usual substrates for angiotensin I-converting enzyme. II Enzyme and Protein. -1995. -V.48(2). P. 81-9.

34. Belz G.G., Breithaupt K., Erb K. Review of studies on the clinical pharmacodynamics of cilazapril.il J. Cardiovasc. Pharmacol. 1994. - V. 24. -P. 514.

35. Bensaoula T., Ottlecz A. Biochemical and ultrastructural studies in the neural retina and retinal pigment epithelium of STZ-diabetic rats effect of Captopril. II J.-Ocul.-Pharmacol.-Ther. 2001. - V. 17(6). - P.573-85.

36. Bill A., Barany E.H. Gross facility of conventional routes, and pseudofacility of aqueous humor outflow in the cynomolgus monkeys. II Arch. Ophthalmol. 1971. V.75. 65-73.

37. Binderup'L., Bramm E. Captopril (SQ'14,225): In vitri in vivo influence on the proliferative response of rat lymphocytes. II Experientia. — 1982. -V.38. -P.399-400.

38. Bohacek R., Delombaert S., Mcmartin C., Priestle J., Grutter M. // J. Amer. Chem. Soc. 1996. V. 118. P. 8231.

39. Booz G.M., Baker K.M. Role of type 1 and type 2 angiotensin receptors in angiotensin II—induced cardiomyocyte hypertrophy. II Hypertension. 1996. -V.-28.-P. 635.

40. Borovic D, Bendelic E, Chiselitä D. Stady of kinin-kalikrenin and angiotensin systems in patients with primary open angle glaucoma. II Oftalmologia. 2009. - V. 53(2). - P. 61-8.

41. Brandt C.R., Pumfery A.M., Micales B, Bindley CD, Lyons GE, Sramek SJ,

42. Wallow IH. Renin mRNA is synthesized locally in rat ocular tissues. II

43. Current Eye Reserche 1994. - Vol. 13. - P. 755-763.125

44. Brasil-Vita J., Anderson J.A., Hulem C.D., Leopold I.H. Angiotensinconverting enzyme activity in ocular fluids. II Investgative Ophtalmology Visual Science 1981. - Vol.20. - P. 255-257.

45. Brown N.J., Vaughan D.E. Protrhombotic effects of angiotensin. // Adv-Intern-Med. 2000. - V. -45. - P. - 419-29.

46. Bucolo G., David H. Quantitative determination of serum triglycerides by the use of enzymes. 1973. - 19. - P. 476-482.

47. Burrell LM, Johnston CI, Tikellis C, Cooper ME. ACE, a new reguletor of the rennin-angiotensin system. II Trends Endocrinol Metab. -2004. — V. -15(4).-P. 166-9.

48. Caldwell P., Seegal B. Hsu K., Das M., Soffer R. Angiotensin-Converting enzyme: vascular endothelial localization. II Science. 1976. - V. 191. - P. 1050- 1051.

49. Calver A., Colliner J., Vallance P. Inhibition and stimulation of nitric oxide synthesis in the human forearm arterial bed of patients with insulin-dependent diabetes. II J Clin. Invest. 1992. - Vol. 90. - P. 2548-2554.

50. Carmona A.K., Juliano L. Inhibition of angiotensin converting enzyme and potentiation of bradykinin by retro-inverso analogues of short peptides and sequences related to angiotensin I and bradykinin. II Biochem. Pharmacol. -1996.-V. 51.-P. 1051-60.

51. Ceikova J. Histochemical study of leukocyte elastase activity in alkali-burned rabbit cornea. II Ophthalmic Res. 1997. - Vol. 29, № 3. - P. 15460.

52. Chase H.P1, Garg S.K., Harris S., Hoops S., Jekson W.E., Holmes D.L. Angiotensin-Converting enzyme inhibitor treatment for young normotensive diabetic subjects: a two-year trial. II Ann Ophtalmol. 1993. - Vol. 25. - № 8. - P. 284-289.

53. Chen JJ., Tseng SC. Abnormal corneal epithelial wound healing in partial-thickness removal of limbal epithelium. II Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1991. Vol. 32, № 8. - P. 2219-33.

54. Chen JJ., Tseng SC. Corneal epithelial wound healing in partial limbal deficiency. II Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1990. - Vol. 31, № 7. - P. 130114.

55. Chen Y.-N.P., Riordan J.F. Identification of essential tyrosine and lysine residues in angiotensin converting enzyme: Evidence for a single active site. II Biochemistry. 1990. - V. 29. - P. 10493.

56. Chiselita D., Vancea P.P., Haulica I. The ocular hypotonic effect induced by an angiotensin-converting enzyme inhibitor (captopril). II Ophthalmologia. 1996. V.40. №1. P.18-25.

57. Cohen R.A. // Circulation. 1993. - Vol. 87. - P. 67-76.

58. Constad W.H., Fiore P., Samson C., Cunotti A.A. Use of an angiotensin converting enzyme inhibitor in ocular hypertension and primary open-angle glaucoma. II American journal of Ophthalmology. 1989 - Vol. 105. — P. 674-677.

59. Corvol P., Michaud A., Soubrier F., Williams T.A. // J. Hypertension. -1995.-V. 13. Suppl. 3. P. 53.

60. Costagliola C., Benedetto R., De Caprio L. Effect of oral captopril (SQ 14225) on intraocular pressure in man. II Eur. J. Ophthalmol. 1995. V.5. №1. P.19-25.

61. Costerousse O., Jaspard E., Alhenc-Gelas F. Angiotensin I-converting enzyme in human circulating mononuclear cells: genetic polymorphism of expression in T-lymphocytes. II Adv. Neuroimmunol. — 1993. V. — 3. P. 217-224.

62. Cushman D.W., Cheung H.S., Sabo E.F., Endetti M.A. Design of potent competitive inhibitors of angiotensin-converting enzyme. Carboxyalkanoyl and mercaptoalkanoyl amino acids. II Biochemistry. 1977. - V. 16(25). - P. 5484.

63. Cushman D.W., Wang F.L., Fung W.C. Comparisons in vitro, ex vivo, and in vivo of the actions of seven structurally diverse inhibitors of angiotensin converting enzyme (ACE). II Brit. J. Clin. Pharmacol. 1989. - V. 28. -P.115.

64. Daemen M.J., Lombardi D.M., Bosman F.T., Schwartz S.M. Angiotensin II induces smooth muscle cell proliferation in the normal and injured rat arterial wall. II Circ Res. 1991. -Vol. 68. - P. 450-456.

65. Danser A.H., van den Dorpel M.A., Deinum J., Derkx F.H., Franken A.A.M. Renin, prorenin, and immunoreactive renin in vitreous fluid from eyes with and without diabetic retinopathy. II Clin. Endocrinol. Metab. — 1989. Vol. 68. - P. 160-166.

66. Danser A.H., Derkx F.H., Admiraal P.J., Deinum J., de Jong P.T., Schalekamp M.A. Angiotensin levels in' the eye. II Invest. Ophtalmol. Vis. Sci. 1994. - Vol. 35(3). - P. 99-103.

67. Danser AH., Schalenkamp M., Bax W., Vandenbrink A., Saxena P., Riegger G., Schunkert H. Angiotensin-converting enzyme in the human heart. Effect of the deletion/insertion polymorphism. II Circulation. 1995.- V. 15; 92(6). -P. 1387.

68. Dean R., Nirk H., Schnebli N. Free radicals inactivate human neutrophih elastase and its inhibitors with comparable efficiency. II Biochem. and Biophys. Res. Communs. 1989. - V. 159. - № 2. - P. 821-827.

69. Derad I., Otterbein, A., Molle M., Pietrowsky R.,Born J., Fehm H.L. The angiotensin converting1 enzyme inhibitors fosinopril and enalapril differ in their central nervous effects in humans. //J Hypertens. — 1996. — V.14(l 1). — P.1309-15.

70. Derad I., Piettrowsky R., Dodt C., Fehm H., Bon J. Enhanced psychophysiological signs> of attention after angiotensin-converting enzyme inhibition by captopril. II Psychophysiol. 1996. - V. 33. - P. 295.

71. Diet F., Pratt R.E., Beny G.J., Momose N., Gibbons G.H., Dzau VJ., Increased accumulation of tissue ACE in human atherosclerotic coronary artery disease. II Circulation. 1996. - V.94. - P. 2756-67.

72. Dorer F.E., Skeggs L.T., Kahn J.R., Lentz K.E., Levine M. Angiotensin converting enzyme: method of assay and partial purification.il An. Biochem. — 1970. — V. 33.-P. 102.

73. Ebrahimian TG, Tamarat R, Clergue M, Duriez M, Levy BI, Silvestre JS.

74. Dual effect of angiotensin-converting enzyme inhibition on angiogenesis in129type 1 diabetic mice. //Arterioscler Thromb Vase Biol. — 2005. V.25(l). — P. 65-70.

75. Ehlers M.K., Riordan J.F. Angiotensin-Converting enzyme: new concepts concerning its biological role. II Biochemistry. — 1989. V. 28. - P. 53115318.

76. Ehlers M.R., Chen Y.N., Riordan J.F. The unique N-terminal sequence of testis angiotensin-converting enzyme is heavily O-glycosylated and unessential for activity or stability. II Biochem. Biophys. Res. Commun., -1992.- V.183.-P. 199-205.

77. Ehlers M.R., Chen Y.N., Riordan J.F. The unique N-terminal sequence of testis angiotensin-converting enzyme is heavily O-glycosylated and unessential for activity or stability. II Biochem. Biophys. Res. Commun., -1992.-V. 183.-P. 199-205

78. Ehlers M.R., Riordan J.F. Angiotensin converting enzyme. Biochemistry and molecular biology. II Hypertension. Pathophysiology. -NY.- 1990. — P. 12171231.

79. Elisseeva Yu.E., Pavlikhina L.V., Shavghulidze T.V., Messina E., Giacomello A., Salerno C., Perricone R. Angiotensin-converting enzyme activator from purified human neutrophils. //Biochem Mol Biol Int. 1993. - V.30(4). - P.665-73.

80. Engerman R.L., Kern T.S. Experimental Diabetic retinopathy in dogs. H Arch. Ophthal. 1965.- Vol.-N3.-P.209-11.

81. Erdos E.G. Angiotensin I converting enzyme. Il Circulât. Res. 1975. - V. 36. - P. 247.

82. Erdös E.G. The angiotensin I-converting enzyme.H Lab. Invest. 1987. - № 56. - P. 345-348.

83. Fennessy P.A., Campbell J.H., Mendelsohn F.A.O., Campbell G.R. Angiotensin-Converting enzyme inhibitors and atherosclerosis: relevance of animal models to human disease. II Clin. Exper. Pharmacol. Physiol. 1996- V.23. P. 30-32.

84. Fernandes L.A., Twickler J., Mead A. Neovascularization produced by angiotensin II. II J Lab Clin med. 1985. - Vol. 105(2). - P. 141-145.

85. Ferrari R., Cargnoni A., Curello S., Ceconi C., Boraso A., Visioli O. Protection of the ischemic myocardium by the converting-enzyme inhibitor zofenopril: insight into its mechanism of action. II J: Cardiovasc. Pharmacol.- 1992. V. 20(5). - P.694-704.

86. Ferrari-Dileo G., Ryan J.W., Rockwood E.J., Davis E.B. Anderson DR., Angiotensin-Converting enzyme in bovine, feline, and human ocular tissues. II Investgative Ophtalmology Visual Science. 1988. - Vol. 29. - P. 876-881.

87. Ferreia S.H., Greene L J., Alabaster V.A., Bakhle Y.S., Vane J.R. Activity of various fractions of bradykinin potentiating factor against angiotensin I converting enzyme. //Nature. 1970. - V. 225. - P. 379.

88. Ferreira S.H., Vane J.R. The disappearance of bradykinin and eledoisin in the circulation and vascular beds of the cat. II Brit. J. Pharmacol. Chemotherapy.- 1967. V.30. - P. 417.

89. Fleminq I, Kohlsted K., Busse R. The tissue renin-angiotensin system and intracellular signalling. //Cur Opin Nefrol Hipertens. 2006. - V.15(l).- P.8-13.

90. Foss B. Experimental Anaphylactic Iridocyclitis. II Acta Pathol. Microbiol. Scand. 1949. - Suppl.81.

91. French J.F., Anderson B.A., Downs TR., Dage R.C. Dual inhibition of angiotensin-converting enzyme and neutral endopeptidase in rats withhypertension. II J. Cardiovasc. Pharmacol. 1995. - V. 26. - P. 107.

92. Friedland J., Setton C., Silverstein E. Induction of angiotensin converting enzyme in human monocytes in culture. II Biochem. and Biophys. Res. Communs.- 1978. V. 83. - P. 843.

93. Funtsu H., Yamashita H., Nakanishi Y., Hori S. Angiotensin II and vascular endothelial growth in the vitreous fluid of patients with proliferative diabetic retinopathy. II Br.-J.-Ophthalmol. — 2002. — V. 86(3). — P.311-5.

94. Ganten D, Lang RE, Lehmann E, Unger T. Brain angiotensin: on the way to becoming a well-studied neuropeptide system. II Biochem. Pharmacol. 1984. -V. 15; 33(22). - P. 3523.

95. Gao L., Yu D.M. Molecular mechanism of limbs' postischemic revascularization improved by perindopril in diabetic rats. II Chin Med J. (Engl. ). -2008. V.5;121(21). -P.2129-33.

96. Gavras I., Gavras H. Cardioprotective potential of angiotensin■■ converting enzyme inhibitors. II Braz. J. Med. Biol. Res. -1996. V. 29. - P. 701.

97. Goel A.K., Jabbour N.M. //Investgative Ophtalmology Visual Science. -1991. -Vol. 32. P. 1027.

98. Govantes C., Marin J. Effect of angiotensin converting' enzyme inhibitors on quality of life in hypertensive patients. Pharmacodynamic basis. II Fundam. Clin. Pharmacol. 1996. - V. 10. - P: 400.

99. Guenther E., Schmid S., Hewing B: Kohler K. Two-fold effect of Angiotensin II on voltage-dependent calcium currents in rat retinal ganglion cells. II Brain Reserch. 1996. - № 29. - Vol. 718. -P. 112-116.

100. Gurzu B, Costuleanu M, Petrescu G. Alternative pathways for the activation of the renin-angiotensin system. II Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi. 2003. -V. 107(4). -P.710-7.

101. Haefliger I.O., Dettmann E.S. Nitric oxide and endothelin in the pathogenesis of glaucoma: an overview. II J. USA: Lippincott-Raven Publishers. 1998. - P.22-34.

102. Haefliger I.O., Dettmann E.S. Potential role of nitric oxide and endothelin in the pathogenesis of glaucoma. II Surv. Ophtalmol. -1999. -V.43-P. 51-8.

103. Head G.A., Mayorov D.N. Central angiotensin and baroreceptor control of circulation. //Ann N Y Acad Sci. 2001. - V. 940. - P. 361-79.

104. Hirooka K., Baba T., Fujimura T. Prevention of visual field defect progression with angiotensin-converting enzyme inhibitor in eyes with normal-tension glaucoma. II Am. J. Ophthalmol. 2006. - V.142. №3. -P.523-525.

105. Hooper N.M. Angiotensin converting enzyme: implications from molecular biology for its physiological functions. II Int. J. Bioehem. 1991. — V.23.-P. 641-647.

106. Horder M., Rej J. II Ann. Biol. Clin. 1986. - V.44. - P.321.

107. Idic R., Robinson C.J.G., Milosevic Z., Wilson C.M., Erdos E.G. Activity of renin and angiotensin I converting enzyme in retina and ciliary body (author's transl). II Lijec Vjesn. 1977. - V.99(8). -P.482-4.

108. Igic R., Erdos E.G.,Yeh H.S.J., Sorrells K., Nakajjama T. Angiotensin I converting enzyme of the lung. II Circ. Res. 1972. - № 31(9) - Suppl.2. -P. 51-61.

109. Immonen I., Fribery K., Sorsila R., Fyhranist F. Concentration of angiotensin-converting enzyme in tears of patients with sarcoidosis. II Acta Opthalmol. 1987. - Vol. 65(1). - P. 27-29.

110. Itoh H., Mukoyama M., Pratt R.E., Gibbons G.H., Dzau V.J. // J Clin Invest. 1993. - Vol. 91.- P. 2268-2274.

111. Johnston C.I. Renin-angiotensin system: a dual tissue and hormonal system for cardiovascular control. II J. Hypertension. — 1992.- V. 10(7). -P.13-26.

112. Jurklies B., Eckstein A., Jacobi P., Kohler K. The renin-angiotensin system—a possible neuromodulator in the human retina? I I Ger J Ophtalmol. 1995. - Vol. 4. - № 3. - P. 144-150.

113. Kailash C., Durga K. Bhuyan, Octavio Santos, Steven M. Podos Antioxidant and anticataractogenic effects of topical captopril in diquat-induced cataract in rabbits. II Clinical Biology & Medicine. 1992. - V.12. -P. 251-261.

114. Kaufman P.L., Bárány E.H. Adrenergic drug effects on aqueous outflow facility following ciliary muscle retrodisplacement in the cynomolgus monkey. II Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. — 1981. Vol. 20(5) — P. 644-651.

115. Kelley J., Clirin L.11 Amer. Rev. resp. Dis. 1987. - V. 135(1). - P. 141.

116. Kelley J. Lavage angiotensin-converting enzyme as a marker of lung injury. II Amer. Rev. Resp. Dis. 1988. - V. 137(2). - P. 531-534.

117. Kim J.H., Kim J.H., Yu Y.S., Cho C.S., Kim K.W. Blockade of angiotensin II attenuates VEGF-mediated blood-retinal barrier breakdown in diabetic retinopathy. //J Cereb Blood Flow Metab. 2009. - V.29(3). -P.621-8.

118. Kohner E.M. The rennin-angiotensin system and diabetic retinopathy. II Klin-Wochenschr. 1992. - 69(29). - P. 25-7.

119. Kramkowski K, Mogielnicki A, Buczko W. The physiological significance of the alternative pathways of angiotensin II production. //J Physiol Pharmacol. 2006. - №57(4). - P.529-39.

120. Krum H., Gilbert R.E. Novel therapies blocking the renin-angiotensin-aldosterone system in the management of hypertension and related disorders. IIJ Hypertens. 2007. - V.25(l). - P.25-35.

121. Kulkarni P.S., Hamid H., Barati M. Angiotensin II-induced constrictions are masked by bovine retinal vessels. IIIOVS. 1999. - Vol. 40(3).-P. 721.

122. Kupari M., Perola M., Koskinen P., Virolainen J. Karhunen P.l. Left ventricular size, mass, and function in relation to angiotensin-converting enzyme gene polymorphism in humans. II Amer. J. Physiol. 1994. - V. 267 (3 Part 2).-P. HI 107.

123. Labinjoh C. Newby DE, Dawson P, Johnston NR, Ludlam CA, Boon NA, Webb DJ. Fibrinolytic actions of intra-arterial angiotensin II and bradykinin in vivo in man. //Cardiovasc Res. — 2000. V.47(4). - P.707-14.

124. Laliberte F., Laliberte M.-F., Alhenc-Gelalas F., Chevillard C., Angiotensin converting enzyme (ACE) in iris vessels. An ultrastructural study. II Ibid. 1989. - Vol. 49(1). - P. 153-157.

125. Lamontagne D., Nadeau R., Adam A. Effect of enalaprilat on bradykinin and des-Arg9-bradykinin release following reperfusion of the ischaemic rat heart.ll Brit. J. Pharmacol. 1995.- V. 115. - P. 476.

126. Langman M. J. S., ancashire R. J. L., Cheng K. K., Stewart P. M. Systemic hypertension and glaucoma: mechanisms in common and cooccurrence. II Br J Ophthalmol. 2005. - V.89(8). - P. 960-963.

127. Leonetti G., Cuspidi C. Choosing the right ACE inhibitor. A guide to selection. II Drugs. 1995. - V. 49(4). - P: 516.

128. Linz W, Wohlfart P, Scholkens BA, Malinski T, Wiemer G., Interactions among ACE, kinins and NO. //Cardiovasc Res.- 1999. — V. 15;43(3). P.549-61.

129. Linz W., Wiemer G., Gohlke P., Unger T., Scholkens B.A. Contribution of kinins to the cardiovascular actions of angiotensin-converting enzyme inhibitors. II Pharmacol. Rev. 1995. - V. 47. - P 25.

130. Liozon E, Pradelles P., Venot J. // Leikemia. 1993. - V.7. - P. 808812.

131. Lip P.L., Jones A.F., Price N. Do intraocular angiotensin II levels, plasma prothrombotic factors and endothelial dysfunction contribute to proliferative diabetic retinopathy? II Acta Ophthalmology Scand. 1998. -Vol. 76. -№ 5. - P. 533-536.

132. Lippoldt A., Paul M., Fuxe K., Ganten D. The brain renin-angiotensin system: molecular mechanisms of cell to cell interactions. II Clin: Exp. Hypertens. 1995. - V. 17(1-2). - P. 251.

133. Lonchampt M., Pennel L., Duhault J. Hyperoxia/normoxia-driven retinal angiogenesis in mice: a role for angiotensin II. II Invest.-Ophthalmol.-Vis.-Sci. 2001. - V.42(2). - P.429-32.

134. Lonn E.M., Yusuf S., Jha P., Montague T.I., Teo K.K., Benedict C.R. Emerging role of angiotensin-converting enzyme inhibitors in cardiac and vascular protection. II Circulation. 1994. - V. 90. - P.2056.

135. Lotti V.J., Pawlowski N. Prostaglandins mediate the ocular hypotensive action of the angiotensin converting enzyme inhibitor MK-422 (enalaprilat) in African Green monkeys. II J. Ocul. Pharmacol. 1990. - V.6. P. 1-7.

136. Loury O., Rozebrough N., Farr A., Randell R. Protein Measurement with the folin phenol reagent. II J. Biol. Chem. 1951. - V.193. - P.265-275.

137. Luhtala S, Vaajanen A, Oksala O, Valjakka J, Vapaatalo H. Actovitiesof angiotesin-converting enzymes ACE1 and ACE2 and inhibition by137bioactive peptides in porcine ocular tissues. II J Ocul Pharmacol Ther. — 2009. — V.25(l). — P.23-8.

138. Mailloux A., Deslandes B., Vaubourdolle M., Baudin B. Captopril and enalaprilat decrease antioxidant defences in human endothelial cells and unable to protect against apoptosis. II Cell Biology Internetional. — 2003. — V.27. — P.825-830.

139. Mallorga P., Babilon R.W., Sugrue M.F. Angiotensin, II receptors labelled with 125I~Sarl, Ile8.-AII in albino rabbit ocular tissues. // Curr. Eye Res. 1989. - Vol. 8 (8). - P. 841-849.

140. Mario R., Ehlers W., Riordan J. F. Angiotensin-Converting enzyme: new concepts concerning its biological role. II Biochemistry. 1989. - 28 (13).-P. 5311-5318.

141. Mombouli J.V., Vanhoutte P.M. Kinins and endothelial control of vascular smooth muscle. II Ann Rew Pharmacol. Toxixol. 1995. - Vol. 35.- P. 679-705.

142. Moravski CJ., Kelly D.J., Cooper M.E., Gilbert R.E., Bertram J.F., Shahinfar S., Skinner S.L., Wilkinson-Berka J.L. Retinal neovascularization is prevented by blockade of the rennin-angiotensin system. II Hypertension.- 2000. V.36(6) - P. 1099-104.

143. Murata M., Nakaqawa N., Takahashi S. Angiotensinogen mRNA is synthesized locally in rat ocular tissues. II Ophtalmoloqica. — 1997. — V.211(5). -P.301-4.

144. Nadal J. A., Scicli G.M., Carbini L.A., Nussbaum J J. Angiotensin II and retinal pericytes migration. II Biochem. Biophys. res. Commun. 1999.- Vol. 266(2). № 2. - P. 382-385.

145. Nadal J.A., Scicli G.M., Carbini L.A., Scicli A.G. Angiotensin II stimulates migration of retinal microvascular pericytes: involvement of TGF-beta and PDGF-BB. //Am J. Physiol Heart Circ Physiol. 2002. -V.282(2). - P.739-48.

146. Nepp J., Abela C., Polzer I., Derbolow A., Wedrich A. Is there correlation between the of diabetic retinophathy and keratoconjunctivitis sicca? II Cornea. 2000. - Jul. - 19(4). - P. -487-91.

147. Ng K.K.F., Vane J.R. Fate of angiotensin I in the circulation.!I Nature. 1968. - V. - 30. - P. - 144.

148. Obenberger J., Babicky A. Experimental alkali burns of the cornea. Study of 45 Ca incorporation in vivo into the aqueous humor and cornea. II Cesk Oftalmol. 1972. - V. 28(2). - P.79-82.

149. Ohia S.E., Jumblatt J.S. Prejunctional receptors and second messengers for angiotensin II in the rabbit iris-ciliary body. II Exp. Eye Res. 1993. - Vol. 57(4). - P. 419-425.

150. Okada Y., yamanaka I., Sakamoto T., Hata Y., Sassa Y., Yoshikawa H., Fujisawa K., Ishibashi T., Inomata H. Increased expression of angiotensin-converting enzyme in retinas of diabetic rats. II Jpn.-J.-Ophthalmol. -2001. -V.45(6). -P.585-91.

151. Okunuki Y, Usui Y, Nagai N, Kezuka T, Ishida S, Takeuchi M, Goto H. Suppression of experimental autoimmune uveitis by II typK1 receptor blocker termisartan. II Invest Ophthalmol Vis Sci. — 2009.- May. — V. -50(5).-P. 2255-61.

152. Patel V., Rassam S.M., Chen H.C. Effect of angiotensin-converting enzyme ingibition with perindopril and beta-blockade with atenolol on retinal blood flow in hypertensive diabetis subjects. II Metabolism. — 1998. -№12. — P.28-33.

153. Petrou P., Reddy M.A. Unusually resistant post-traumatic uveitis with high serum ACE-an occult ocular sarcoidosis? //Ocul Immunol Inflamm. -2008. -V.16(3).-P.l 17-8.

154. Pinto J.M., Vangilst WH., Kingma JH., Schunkert H. // J. Amer. Cell. Cardiol. 1995. V. 25.P.1622.

155. Piquilloud Y., Reinharz A., Roth M. Studies on the angiotensin converting enzyme with different substrates. II Biochem. Biophys. Acta. -1970.-V. 206.-P.136-142.

156. Pitt B., Nicklas J.M.S'pecialized heart failure centers—a success or an indicator of the failure of our health care delivery system. II Clin. Cardiol. -2000. V.23(12). - 909-14.

157. Ramchandran R, Kasturi S, Douglas JG, Sen I. Metalloprotease-mediated cleavage secretion of pulmonary ACE by vascular endothelial and kidney epithelial cells. //Am J Physiol. 1996. - V. 271(2 Pt 2). - P.744-51.

158. Re R.N. Cellular biology of the renin-angiotensin systems.// Arch.Intern.Mrd. 1984. - Vol. 144. - P. 2037-2041.

159. Rett K.,Wieklmayr M., Dieze G J. Metabolic effects of kinins: historical and recent developments. II J Cardiovase Pharmacol. 1990. -Vol. 15.-P. 57-59.45.

160. Richardson J., Beaulnes A. The cellular site of action of angiotensin.

161. J. Cellular Biology. -1971. -V. 51(21). P. 419.141

162. Roberts W.l. Effects of hemoglobin c and s traits on eight glycohemoglobin metohods. II Clin. Chem. 2002. - V.48. -P383-385.

163. Roeschlau P., Berndt E., Gruber W. Enzymatische bestimmung des gesamtcholestrines in serum. II Clin. Chem. — 1974. — V. 12. P. 226-231.

164. Rogerson F.M., Schlave I., Paxinos G., Chai S.Y., Mckinley M.I., Mendelsohn- F.A.O. Localization of angiotensin converting enzyme by in vitro autoradiography in the'rabbit brain. II J. Chem. Neuroanat. 1995. -V. 8. - P. 227.

165. Ronk J:F., Ruiz-Esmenjaud S., Osorio M., Baciqalupi M. Goosey G.D. Limbal conjunctival autograft in a subacute alkaline corneal burn. II Cornea. 1994. - Vol. 13, №58. - P. 465-8.

166. Rothe A. // Clin. Chem. 1988,- V.34. -P.1289.

167. Ryan J.W., Robelero J., Stewart Inactivation ofbradykinin in the pulmonary circulation.il Biochemistry. 1968. — V. — 110. — P. 795.

168. Ryu J.H., Vuk-Pavlovic Z., Rohrbach M.S. Monocyte heterogeneity in angiotensin-converting enzyme induction mediated by autologous T lymphocytes. II Clin Exp Immunol. -1992. V.88(2). - P.288-94.

169. Saijonma O, Nyman T, Fyhrquist F. Atorvastatin inhibits angiotensin-converting enzyme induction in differentiating human macrophages. II Am J Physiol Heart Circ Physiol. -2007.- V.292(4).-P.1917-21.

170. Sancho J., Re R, Burton J., Burger A.C., Harbor E. The role angiotensin II homeostasis in normal human subjects. II Circulation. 1976. -Vol. 53.-P. 400-405.

171. Sande G.E., West D.W., Huggins C.G. Peptide inhibitors of pulmonary angiotensin I converting enzyme. II Biochim. et biophys. acta. -1971,-V.-242(3).- P. 662.

172. Sarlos S, Wilkinson-Berka JL. The rennin-angiotensin system and the developing retinal vasculature. II Invest Ophthalmol Vis Sei. 2005. - V. 46(3).-P. 1069-77.

173. Savaskan E, Löffler KU, Meier F, Müller-Spahn F, Flammer J, Meyer P. Immunohistochemical localization of ACE, angiotensin II and ATI receptor in human ocular tissues. II Ophthalmic Res. Switzerland . — 2004.- V. 36(6).-P. 312-20.

174. Schiffman R.M., Fisher L., Nussbaun J., Edwards P., Scicli G., Chu J-W. The renin-angiotensin system in the human eye. II Invest. Ophtalmol. Vis. Sei. 1991. - Vol. 32. - P. 772.

175. Schraufstatter I., Resar S., Cohrane C. Proteases and oxidants in experimental pulmonary inflammatory injury. II J. Clin. Invet. 1984. - V. 73.-№4.-P. 1175-1184.

176. Schriefer J.A., Broudy E.P., Hassen A.H. Endopeptidase inhibitors decrease myocardial ischemia/reperfusion injury in an in vivo rabbit model. II J. Pharmacol, and Exptl Therap. 1996. - V.278. - P. 1034.

177. Senanayke P., Drazba J., Shadrach K., Milsted A, Rungger-Brandle E,

178. Nishiyama K, Miura S, Karnik S, Sears JE, Holly field JG. Angiotensin II143and its receptor subtypes in the human retina. II Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007. - V. 48 №7. - P.3301-3311.

179. Shah G.B., Sharma S., Mechta A.A., Goyl R.K. Oculohypotensive effect of angiotensin-converting enzyme inhibitors in acute and chronic models of glaucoma. II J. Cardiovascular Pharmacol. — 2000. V.36(2). — P. 169-75.

180. Shapiro R., Riordan J.F. Inhibition of angiotensin converting enzyme: mechanism and substrate dependence. II Biochemistry. 1984. - V. 23(22). -P. 5234.

181. Sharma O.P., Vita B.J. Determination of angiotensin-converting enzyme activity in tears. A noninvasive test for evaluation of ocular sarcoidosis. II Arch, ophthalm. 1983. - Vol. 101(4). - P. 559-561.

182. Sharma O.P. Diagnosis of ocular sarcoidosis and ACE in tears. II Eur respir J. -1996. Jun. - 9(6). - P. - 1201-5.

183. Shibata MC, Tsuyuki RT, Wiebe N. The effects of angiotensin-receptor blockers on mortality and morbidity in heart failure: a systematic review. //Int J Clin Pract. 2008. - V.62(9). - P. 1397-402.

184. Siems W.E., Heder G., Komissarowa N.W. Procedure for the determination of angiotensin converting enzyme. II J. Lab. Diagn. — 1985. — V.26. — P.232-234.28.

185. Silvestre JS, Levy BI., The renin-angiotensin system and postishemic angiogenesis. // Bull Acad Natl Med. 2004. -V. 188(4). - P.649-59.

186. Skeggs L.T, Kahn J.R., Shumway N.P. The preparation and function of the angiotensin converting enzyme/ // J. of Experimental Medicine. -1956.-V. 103.-P. 295.

187. Skeggs L.T., Dorer F.E., Kahn J.R. Angiotensin II: receptors and mechanisms of action. II In: Biochemical Regulation of blood pressure. Ed. By Soffer R.L., Wiley, New York. 1981. - P. 4-38.

188. Skidgel R.A., Engelbrecht S., Johnson. A. R., Erdos E.G. Hydrolysis of substance p and neurotensin by converting enzyme and neutral endopeptidase. II Peptides. 1984. - Vol. 5. - P. 769- 776.

189. Skidgel KA., Erdos E.G. The broad substrate specificity of humantangiotensin I converting enzyme. II Clin. Exp. Hypert. A. 1987. — 9 (2-3). -P. 243-259.

190. Sosula L. Caillar radius and wall thickness. II Microvasc. Res. — 1974: Vol. 7. - N2. - P.274-276.

191. Soubrier F., Alhenc-Gelas F., Hubert C., Allegrini J., John M., Tregear G., Corvol P. Two putative active centers in human angiotensin I-converting enzyme revealed by molecular cloning. II Biochemistry. 1988. -V. 85 (24). - P. 9386.

192. Staessen J.A, Wang Ji G., Ginocchio G., Petrov V. // J. Hypertension, -1997-V. 15, P.-1579-1592.

193. Stefansson B., Ricksten A., Rymo L., Aurell M., Herlitz H. Angiotensin-Converting enzyme gene I/D polymorphism in malignant hypertension. //Blood Press. 2000. - 9(2-3). - P. 104-9.

194. Stephellson S.L., Kenny A.J.// Biochem. J. 1987. - V. 241. - P. 237247.

195. Steuhl K.P., Pavlidis C., Knorr M., Thanos S, Thiel HJ. Immunohistologic, ultrastructural and morphometric characterization of organ cultures of the human limbus epithelium. II Ophthalmologic. 1993. -Vol. 90, №6.-P. 656-61.

196. Stewart. T.A., Weare J.A., Erdos E.G. Purification and characterization of human converting enzyme (kininase II). II Peptides. — 1981.-Vol. 2. — P. 145-152.

197. Strittmatter S., Shyder S. Angiotensin converting enzyme immunohistochemistry in rat brain and pituitary gland: correlation of isozyme type with cellular localization. II Neuroscience. 1987. - V. 21. - P. 407.j

198. Sun G., Haqinova K., Dai H., Chiba Y., Uematsu M., Hino-Fukuyo N., Onuma A., Iinuma K., Tsuchiva S. Intramuscular renin-angiotensin system is activated in human muscular dystrophy. II J. Neurol Sci. — 2009. -V. 15;280(l-2). -P.40-8.

199. Sun Y., Weber K.T. Angiotensin converting enzyme and myofibroblasts during tissue repair in the rat heart. II J. Mol. Cell. Cardiol. -1996.- V. 28.- P. 851-858.

200. Sun Y., Ratajska A., Zhou G.P., Weber K.T. Angiotensin II and aldosterone receptor binding in rat heart and kidney: response to chronic angiotensin II or aldosterone administration. II J. Lab. Clin. Med. — 1993. — V.122. — P.395-403.

201. Sundmacher R., Reinhard T. Systemic Ciclosporin A in high-risk keratoplasties. I I Graefe's Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 1996. - Vol. 234, suppl. 1. - P. 122-5.

202. Timmermans P.B., Benfield P., Chiu A.T., Herblin W.F., Wong P.C., Smith R.D. Angiotensin II receptors and functional correlates. II Am J Hyertens. 1992. - Vol. 5. - P. 221-235.

203. Turner A.J. // Adv. Neuroimmunol -1993. V. 3 - P. 163-170.

204. Ueda S., Ellicott H.L., Morton J.I., Connell J.M.C. Enhanced pressor response to angiotensin I in normotensive men with the deletion genotype (DD) for angiotens in-converting enzyme. II Hypertension. 1995. - V. 25(6). - P. 1266.

205. Vago T., Bevilacqua M., Conci F., Rogolino A., Norbiato G. // Amer. J. Cardiol. 1995. -V. 75 (16). - P. 13.

206. Varani J., Fliegel S., Till G., Kunkel R., Ryan U., Ward P. Pulmonary endothelial cell killing by human neutrophils. Possible involvement of hydroxyl radical. II Lab. Invest. 1985 V. 53. № 6. P. 656-663.

207. Vita J.B., Anderson J.A., Hulem C.D., Leopold I.H. Angiotensin-Converting enzyme activity in ocular fluids. II Ibid. 1981. - Vol. 20(2). - P. 255-257.

208. Waeber B., Brunner H.R. Do we need new antihypertensive drugs? II J. Cardiovasc. Pharmacol. 1996. - V. 27. Suppl. 2. - P. 536.

209. Wahl M., Whalley E.T., Unterberg A., Sehilling L., Parson A., Baethmann A., Young A.R. Vasomotor and permeability effects of bradykinin in the cerebral microcirculation. //Immunopharmacology. -1996.-V. 33.-P. 257.

210. Wallow I.H.L., Pumfery A.M., Brandt C.R. // Investigative Ophthalmology Visual Science. 1994. - Vol. 35 - P. 1787.

211. Watanabe T., Barker T.A., Berk B.C. Angiotensin II and the endothelium: diverse signals and effects. II Hipertensión. — 2005. V. 45(2).1. P.163-9.

212. Weber K.T., Sun Y., Katwa L.C., Cleutjens J.P.M. Bradykinin receptor and tissue ACE binding in myocardial fibrosis: response to chronic angiotensin II or aldosterone administration in rats. II J. Mol. Cell. Cardiol.- 1995.-V. 27.-P. 107.

213. Wei L., Alhenc-Celas F., Corvol P., Clauser E. The two homologous domains of human angiotensin I-converting enzyme are both catalytically active. II J. Biol. Chem. -1991. V. 266. - P. 9002.

214. Wei L., Clauser E., Alhenc-Celas F., Corvol P. The two homologous domains of human angiotensin I-converting enzyme interact differently with competitive inhibitors. II J. Biol. Chem. 1992. - V. 267(19). - P. 13398.

215. Weinreb R.W., Saudman R., Ryder M.I., Friberg T.R. Angiotensinconverting enzyme activity in human aqueous humor. II Arch, ophtal. 1985. -Vol. 103. - № 1. - P. 34-36.

216. Wilke A, Funck R., Rupp H., Brilla C.G. Effect of the renin-angiotensin-aldosterone system on the cardiac interstitium in heart failure. II Basic Res. Cardiology. 1996. - V.91( 2). - P.79-84.

217. Wilkinson-Berka J.L., Kelly D.J., Gilbert R.E. The interaction between the rennin-angiotensin system and vascular endothelial growth factor in the pathogenesis of retinal neovascularization in diabetes. II J. Vasc.-Res. -2001. -38(6). -P.527-35.

218. Williams TA., Soubrier F., Corvol P. Zincmetalloproteases in Health and Disease. // Ed. by Hooper N.M. London: Taylor & Francis. Ltd. 1996. -P. 83.

219. Wolf G. The renin-angiotensin-aldosterone system — more complex as previously thought. II Med Klin (Munich). 2005. - № 15; 100(8). - P.471-7.

220. Wolf G. Novel aspects of the renin-angiotensin-aldosterone-system. II Front Biosci. -2008. №1;13. -P.4993-5005.

221. Wyrwoll C.S., Mark P.J., Waddell B J. Developmental programming of renal glucocorticoid sensitivity and the renin-angiotensin system. //Hypertension. 2007. - V.50(3). - P.579-84.

222. Yang Z., Arnet U., Von Segesser L., Siebenmann R., Turina M., Luscher T.F. Different effects of angiotensin-converting enzyme inhibition in human arteries and veins. IIJ Cardiovasc. Pharmacol. 1993. - Vol. 22. - P. 17-22.

223. Yang H.Y.T., Erdos E.C., Levin V. A dipeptidyl carboxypeptidase that converts angiotensin 1 and inactivates bradykinin. II Biochim. et biophys. acta. 1970. - V. 214. - P. 374.

224. Zhang J.Z. Xi X., Gao L., Kern T.S. Captopril inhibits capillary degeneration in the early stages of diabetic retinopathy. II Curr Eye Res. — 2007.- 0ct.32(10). P.883-9.

225. Zhuo J., Moeller I., Jenkins T., Chai S.Y., Allen A.M., Ohishi M., Mendelsohn F.A. Mapping tissue angiotensin-converting enzyme and angiotensin ATI, AT2 and AT4 receptors. II J Hypertens. 1998. - V. 16(12 Pt 2). — P.2027-37.

226. Список работ, опубликованных по теме диссертации.

227. Чеснокова Н.Б., Павленко T.A., Никольская И.И., Кост О.А., Казанская

228. H.Ф. Локальная ренин-ангиотензиновая система глаза, роль в /офтальмопатологии. // Вестник РАМН. 2003. - №9. - С.29-32.

229. Chesnokova N.B., Kuznetsova Т.Р., Kazanskaya N.F., Kost O.A., Nikolskaya

230. Чеснокова Н.Б., Кост O.A., Никольская И.И., Безнос О.В., Биневский

Информация о работе

Павленко, Татьяна Аркадьевна
кандидата медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.04

Диссертация

Ангиотензин-превращающий фермент в тканевых структурах и жидких средах глаза в норме и патологии, пути регуляции. - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы