Анализ участия индуцибельной изоформы NO-синтазы в реакции повышения давления в малом круге кровообращения, вызванной дисфункцией эндотелия

Бонарцев, Антон Павлович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ участия индуцибельной изоформы NO-синтазы в реакции повышения давления в малом круге кровообращения, вызванной дисфункцией эндотелия
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Анализ участия индуцибельной изоформы NO-синтазы в реакции повышения давления в малом круге кровообращения, вызванной дисфункцией эндотелия"

На правах рукописи

Бонарцев Антон Павлович

АНАЛИЗ УЧАСТИЯ ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ ИЗОФОРМЫ ^-СИНГАЗЫ В РЕАКЦИИ ПОВЫШЕНИЯ ДАВЛЕНИЯ В МАЛОМ КРУГЕ КРОВООБРАЩЕНИЯ, ВЫЗВАННОЙ ДИСФУНКЦИЕЙ ЭНДОТЕЛИЯ

03.00.13 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2004

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова (заведующий кафедрой академик РАМН И.П.Ашмарин)

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор НА Медведева

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Б.Н. Манухин доктор медицинских наук, профессор И.Ю. Малышев

Ведущая организация:

Российский кардиологический научно-производственный комплекс МЗ РФ

Защита диссертации состоится 11 мая 2004 года в 1530 часов на заседании диссертационного совета Д 501.001.93

на биологическом факультете Московского Государственного Университета им. М.В. Ломоносова по адресу: 119992 Москва, Воробьевы горы, МГУ им. М.В. Ломоносова, биологический факультет, ауд._

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ.

Автореферат разослан "_"_2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Б.А.Умарова

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Дисфункция эндотелия сосудов является одной из причин нарушения регуляции сосудистого тонуса [Becker B.F. et al., 2000]. Существует модель дисфункции эндотелия, вызываемая инъекцией алкалоида монокроталина (МКТ). Это вещество избирательно действует на эндотелий легочных сосудов, нарушая его функционирование, что приводит к развитию легочной гипертензии (ЛГ) [Wilson D.W. et al., 1992]. ЛГ - это тяжелое заболевание, плохо поддающееся лечению, которое характеризуется повышением давления в малом круге кровообращения и гипертрофией правого желудочка сердца, что часто приводит к сердечной недостаточности, влекущей за собой смертельный исход [Уейр Е. К. и Ривс Дж. Т., 1995]. Таким образом, монокроталиновая модель легочной гипертензии (МКТ-ЛГ) ярко демонстрирует взаимосвязь дисфункции эндотелия с нарушением регуляции сосудистого тонуса. В частности, при этой патологии происходит уменьшение реакций эндотелийзависимого расслабления (ЭЗР) сосудов [Dihn-Xuan A.T. et al., 1991; Ito К.М. et al., 2000; Fullerton D.A. et al., 1996; Morita K. et al., 1996]. ЭЗР осуществляется посредством оксида азота (NO), синтезируемого в эндотелии эндотелиальной NO-синтазой (eNOS). NO активирует растворимую изоформу гуанилатциклазы (sGC) в гладкомышечных клетках сосудов. Циклический гуанозинмонофосфат (cGMP), синтезируемый этим ферментом, приводит к расслаблению гладкомышечной мускулатуры сосудов [Mateo A.O. et al., 2000].

При различных сердечно-сосудистых заболеваниях нарушение эндотелийзависимого расслабления сосудов сопровождается активацией индуцибельной NO-синтазы (iNOS) [Stoclet JC et al., 1997]. Этот фермент продуцирует в больших количествах свободнорадикальные цитотоксичные молекулы, такие как NO, а при недостатке субстрата и супероксиданион [Hobbs A.J. et al., 1999; Bryk R. et al., 1999; Packiasamy A.R. et al., 2003]. Экспрессия этого фермента обычно многократно повышается при различных воспалительных процессах, при которых повышенная продукция NO этим ферментом выполняет защитную функцию против бактерий, паразитов и раковых клеток. Однако, продукция больших количеств NO приводит к окислительному повреждению окружающих тканей, в частности к повреждению sGC и eNOS - основных ферментов ЭЗР [Stoclet JC et al., 1997; Filippov G. et al., 1997; Sheehy A.M. et al., 1998].

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

3 ¿тар»?.

артериальной гипертензии. Была увеличена также экспрессия этого фермента [Obst M., Bonartsev A. et al., 2004]. У крыс линии SHR также повышена концентрация нитритов и нитратов в плазме крови, увеличена экспрессия iNOS в тканях аорты. Эти исследователи применили селективный ингибитор iNOS -аминогуанидин и показали, что хроническое ингибирование этого фермента приводит к частичному восстановлению артериального давления и эндотелийзависимого расслабления системных сосудов у SHR крыс с артериальной гипертензией [Hong H-J. et al., 2000].

Цель данной работы - изучить участие индуцибельной изоформы NO-синтазы в патогенезе легочной гипертензии, вызванной эскпериментальной дисфункцией эндотелия в модельных экспериментах на крысах (монокроталиновая легочная гипертензия).

Задачи исследования были следующими:

1. Изучить влияние хронического применения ингибитора индуцибельной NO-синтазы на степень проявления легочной гипертензии по величине изменения систолического правожелудочкового давления и гипертрофии правого желудочка сердца.

2. Исследовать изменение реактивности показателей системной гемоднамики на гипо- и гипертензивные агенты у крыс с монокроталиновой легочной гипертензией на фоне блокады индуцибельной NO-синтазы.

3. Провести сравнительный анализ изменения эндотелийзависимого и эндотелийнезависимого расширения изолированных легочных и системных сосудов у крыс с монокроталиновой моделью легочной гипертензии на фоне блокады индуцибельной NO-синтазы.

4. Изучить изменение продукции основных метаболитов оксида азота (нитритов и нитратов) в ходе развития легочной гипертензии на фоне хронической блокады индуцибельной NO-синтазы.

5. Изучить влияние хронического ингибирования индуцибельной NO-синтазы на активность растворимой изоформы гуанилатциклазы в гомогенатах легочных и системных артерий у крыс с монокроталиновой моделью легочной гипертензии.

Научная новизна полученных результатов

В работе была впервые изучена динамика продукции N0 в течение развития монокроталиновой ЛГ. Показано, что продукция N0 значительно возрастает уже через неделю после введения монокроталина и остается повышенной до конца четвертой недели развития заболевания. Продемонстрировано, что повышенная продукция N0 осуществляется индуцибельной NO-синтазой, так как хроническое введение селективного

ингибитора этого фермента, аминогуанидина, снижает продукцию N0 у животных с монокроталиновой ЛГ до контрольного уровня.

В работе впервые показано, что хроническое ингибирование iNOS сопровождается уменьшением степени развития ЛГ, что выражается снижении давления в малом круге кровообращения у крыс с МКТ моделью ЛГ-Наблюдается восстановление расслабления легочных сосудов осуществляемого по NO/cGMP-зависимому пути. Впервые было исследовано влияние хронического ингибирование iNOS на параметры большого круга кровообращения и реактивность системных сосудов у крыс с МКТ моделью ЛГ. Показано, что хроническое ингибирование iNOS приводит к восстановлению реакций АД, вызываемых донорами N0 и ингибитором NO-синтазы, и увеличению эндотелийзависимого расслабления системных сосудов у крыс с МКТ-ЛГ. Хроническое ингибирование iNOS приводит к восстановлению активности sGC в легочных и системных сосудах у крыс с МКТ-ЛГ.

Теоретическая и практическая значимость работы

В работе впервые комплексно, на нескольких уровнях - in vivo, in vitro, в биохимических экспериментах, было продемонстрировано участие индуцибельной NO-синтазы в нарушении функционирования NO/cGMP-зависимого пути расслабления как легочных, так и системных сосудов при монокроталиновой ЛГ, что представляет теоретический интерес в рамках исследований физиологии и патофизиологии сердечно-сосудистой системы. Результаты работы могут быть применены для дальнейшего изучения процессов патогенеза легочной гипертензии и поисков новых методов лечения.

Апробация работы

Основные результаты работы были представлены на следующих конференциях: на И-ой научно-практической конференции "Дисфукция эндотелия: экспериментальные и клинические исследования", (Витебск, 23-24 мая 2002 г.); на Ш-ей всероссийской конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем", (Санкт-Петербург, 29 сентября-1 октября 2003 г.); на 3-ей всероссийской с международным участием школы-конференции по физиологии кровообращения (Москва, 27-30 января 2004 г.); 17th Scientific Meeting ofAmerican Society of Hypertension (New York, USA, May 19-22, 2002); 2nd International Conference Nitric Oxide Society (Prague, Czech Republic, June 24-26, 2002); Joint 19th Meeting of the International Society of Hypertension and 12th European Meeting on Hypertension (Prague. Czech Republic, June 23-27,2002).

Структура работы

Диссертация изложена на страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, экспериментальной

части, обсуждения результатов, выводов, списка цитируемой литературы ( наименований). Иллюстрирована 7 таблицами и 15 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Протокол зксперимента

Для создания физиологической модели ЛГ крысам линии Вистар весом 180-200 г. осуществляли инъекцию алкалоидом - монокроталином (МКТ). растворенным в 60% растворе этилового спирта, подкожно, в дозе 60 мг/кг [Давыдова М.П. и др., 2003; Ito K.M. et al., 2000]; контрольные крысы получали инъекцию растворителя [Давыдова М.П. и др., 2003]. Через неделю каждая из этих двух групп крыс была разделена в свою очередь также на две группы: крысы из первой группы получали АГ, растворенный в питьевой воде, в дозе 15 мг/кг в сутки, крысы из второй группы получали питьевую воду без АГ. Таким образом, в эксперимент вступало 4 группы животных: контроль-контроль (К-К). контроль-АГ (К-АГ), монокроталин-контроль (МКТ-К) и монокроталин-АГ (МКТ-АГ). Через месяц после введения МКТ крыс брали в эксперименты.

В процессе развития заболевания на временных отметках: за день до укола МКТ животным опытных групп, на 7-ой день после инъекции МКТ и за день до начала введения АГ, на 14-ый день после инъекции МКТ и на 7-ой день после начала введения АГ животных групп МКТ-АГ и К-АГ, на 28-ой день после инъекции МКТ у животных всех 4-х исследуемых групп производился сбор суточной мочи крыс при помощи метаболических камер.

2.. Физиологические эксперименты

2 1 Эксперименты in vivo

Перед экспериментом производили операцию по имплантации катетеров в правый желудочек сердца и в бедренные артерию и вену под этаминал-натриевым наркозом (40 мг/кг, внутрибрюшинно). Полиэтиленовый катетер, изогнутый под углом в 45° на расстоянии в 1 см от конца, заполненный 0.9% NaCl и подсоединенный к датчику давления, вводили через яремную вену в полость правого желудочка. Для регистрации артериального давления и для внутривенного введения веществ в бедренные, соответственно, артерию и вену вводили прямые полиэтиленовые катетеры. Для катетеров были использованы полиэтиленовые трубки РЕ-10 и РЕ-50 (Portex, Великобритания). Катетеры заполняли 0 9% NaCl с гепарином (50 МЕ/мл). Правожелудочковый катетер использовали только во время операции, после чего их извлекали. Катетеры в бедренные артерию и вену вживляли для использования в хронических экспериментах.

Под наркозом проводили регистрацию систолического правожелудочкового давления (СПЖД) и среднего артериального давления (САД) в течение 20 мин после 20 мин адаптации. Для регистрации давления использовали датчик STATHAM, USA. Сигнал, обработанный аналогово-

цифровым преобразователем, записывали на компьютер с частотой оцифровки 512 Гц и обсчитывали с помощью модифицированной программы "Bioshel [Давыдова М.П. с соавт., 2003; Nesterova M.A. et al., 1999]. Через двое суток после операции при помоши тех же технических средств производили измерение САД и ЧСС у бодрствующих крыс. Среднее АД и ЧСС измеряли после периода адаптации (20-40 мин) в течение 30 мин, и регистрировали изменение этих параметров в ответ на введение донора NO, нитропруссида натрия (SNP; Sigma, USA) в дозе 4 мкг/кг, агониста альфа-1 адренорецепторов, фенилэфрина (РЕ; Sigma, USA) в дозе 2 мкт/кг, неселективного блокатора NOS, L-нитро-метилового эфира аргинина (L-NAME; Sigma, USA) в дозе 5 мг/кг и активатора sGC, пиридазин ди^-оксид 4.7-диметил-1,2,5-оксадиазоло[3,4-d]пирадазин1,5,6-триоксид (FPTO; [Kots A. Ya., et al., 2000]), в дозе 100 мкг/кг. Вещества вводили внутривенно, болюсно, с 20-минутным интервалом. Следует отметить, что FPTO вводился на фоне действия L-NAME, т.е. в условиях блокады всех изоформ NO-синтазы, что позволяет исключить влияние эндогенного NO. Оценивали максимальное изменение САД и ЧСС в ответ на введение этих веществ. Помимо реакций изменения среднего АД и ЧСС на введение веществ, оценивали чувствительность барорефлекса (ЧБР) для SNP и РЕ. Коэффициент ЧБР рассчитывали по формуле:

КоэффициентЧБР= |ДЧССшах/ДСАДшах|;

где - максимальное изменение ЧСС в ответ на введение

тестирующего вещества, - максимальная реакция изменения

среднего АД в ответ на введение этого вещества.

2.2. Эксперименты на изолированных легочных и системных сосудах

Сосуды легочного и большого кругов кровообращения выделяли у декапитированных животных на льду. Перед выделением сосудистое русло промывали холодным физиологическим раствором (модифицированный физиологический раствор Кребса-Хенсляйта) для предотвращения образования тромбов, через катетер, введенный в легочную или в левую бедренную артерию. Внутрилегочную артерию второго порядка из левого легкого и системную артерию второго порядка (superior muscular branch of a. popliteal) выделяли с небольшой частью предшествующего сосуда большего диаметра; остальные ответвления и ответвления меньшего порядка перевязывали. Сосуды перфузировали с постоянным расходом, который составлял 2 мл/мин для внутреннего протока и 4 мл/мин для внешнего протока. Раствор аэрировали карбогеном (5% СО2, 95% О2), температуру раствора поддерживали на уровне 38°С [Nesterova M.A. et al., 1999]. О реакции сосуда судили по изменению перфузионного давления. Установка для перфузии состояла из системы насосов, камеры для перфузии сосуда, манометра, тензодатчика (STATHAM, USA) и аналогово-цифрового преобразователя. Обработанный АЦП сигнал записывали на компьютере с частотой отцифровки 128 Гц. Запись и обработку данных

производили при помощи оригинальной программы. Данные получали путем усреднения сигнала за 2 минуты после достижения стабильной записи.

Для анализа констрикторной реакции были проведены опыты с перфузией сосудов растворами серотоиина (5-НТ) в случае легочных сосудов в концентрациях от 5-10'3 М ДО 5-Ю"6 М (используемые концентрации: 5-Ю"8 М. ЫО'7 М, 5-10"7 М, МО-6 М и 5-Ю"0 М), а в случае системных сосудов от МО"3 М д о 1 • 10"*5 М (используемые к о н ц Ы<ЛМ,т5-10-8 М, М0"?1М,и5-Ш"7 М и МО"4 М). Мы использовали этот агент для моделирования сократительного тонуса сосудов, который в норме присутствует в организме, так как легочные сосуды слабо отвечают на агонисты адренорецепторов [Уейр Е. К. и Ривс Дж. Т., 1995]. В нашем эксперименте перфузионное давление в ответ на серотонин возрастало до 10 мм.рт.ст. в случае легочных сосудов и до 60 мм.рт.ст. в случае системных сосудов, что соответствует нормальным значениям [Уейр Е. К. и Ривс Дж. Т., 1995]. Концентрацию серотонина, на которую сосуд отвечал наибольшей констрикцией (5-10-6 М) использовали в последующих опытах. На фоне этого сократительного тонуса перфузировали сосуд растворами других веществ. Данные представлены как величины перфузионного давления (ПД) в мм.рт.ст. за вычетом ПД, создаваемого перфузией физ. раствора.

Для получения эндотелийзависимого расслабления сосуды перфузировали растворами ацетилхолина (Ach) (используемые концентрации: 1-Ю"8, 5-108, 1-10", 5-10"7, МО"6 М). Для изучения эндотелийнезависимого расслабления легочных сосудов, один из основных механизмов которого осуществляется через активацию растворимой гунилатциклазы (sGC), использовали FPTO. Это вещество является донором N0 и независимым активатором sGC [Kots А. Ya., et al., 2000]. Используемые нами концентрации были: МО'10, МО"9,1-Ю'8, МО"7 и МО"6 М. Для исключения влияния эндогенного NO эндотелий перед перфузией FPTO разрушали путем перфузии легочных и системных сосудов пузырьками воздуха в течение 1 мин. После чего сосуд снова перфузировали серотонином, для получения сократительного тонуса.

Данные представлены как величины относительного перфузионного давления (ОПД), которое рассчитывали по следующей формуле:

ОПД(8иЬ)% = (ПД^иЬ) - ЦД(5-НТ))/ЦД(5-НТ) • 100%, где

ОПД^иЬ) - относительное перфузионное давление для ацетилхолина или FPTO в %; ПД^иЬ) - перфузионное давление, создаваемое, соответственно, ацетилхолином или FPTO в данной концентрации на фоне перфузии серотонином в выбранной концентрации, в мм.ртст.; ПД(5-НТ) - перфузионное давление, создаваемое до перфузии ацетилхолина или FPTO перфузией серотонина в выбранной концентрации, в мм.рт.ст.

2.3. Измерение веса правого и левого желудочков сердца.

В конце эксперимента у умерщвленных животных извлекали сердце, промывали его и проводили взвешивание отделов сердца. Оценивали как

реальную массу сердца с удаленными предсердиями (Мс), правого и левого желудочков сердца (Мпжс) и левого желудочка сердца (Млжс), так и массу правого и левого желудочков сердца, отнесенные к массе тела (Мпжс/Мт и Млжс/Мт, соотв.) и относительные массы правого и левого желудочков сердца (ОМпжс и ОМлжс), рассчитанные по формулам:

Мпжс/Мт = (М пр.жел. (лев.жел.) (г)/М тела (кг)) o.e.[Chen L. et al., 2001]; ОМпжс = (М пр.жел. (лев.жел.) (г)/(М пр.жел (г) + М лев.жел (г) + М переп (г))) • 100 % pto K.M. et al., 2000].;

М пр. жел. (лев. жел.) (г) - вес правого (или по аналогии левого) желудочка сердца в г, М лев. жел. (г) - вес левого желудочка сердца в г, М перег. - вес внутрисердечной перегородки в г, М тела (кг) - вес тела животного в кг, о.е. -относительные единицы измерения.

3. Биохимические эксперименты

3.1. Измерение концентрации нитритов и нитратов.

Концентрацию нитритов в моче измеряли при помощи реакции Грейсса. Для химического превращения нитратов мочи в нитриты использовали хлорид ванадия. Для сравнения и расчета концентрации использовали стандартную кривую для нитрита и нитрата [Miranda K.M. et al., 2001]. Таким образом, производилось измерение суммарной концентрации продуктов метаболизма. NO, нитритов и нитратов (NOx) в моче. Скорость выведения нитритов и нитратов (CBNOx) рассчитывали как произведение суммарной концентрации нитритов и нитратов в моче и объема мочи, выведенного животными за 24 часа.

3.2. Измерение индуцируемой активности растворимой изоформы гуанилатциклазы в системных и легочных сосудах крыс.

Следующей серией экспериментов было измерение индуцированной активности sGC. Животных всех 4-х групп декапитировали и выделяли из них легочные и системные (бедренные и сонные) артерии, очищенные от соседних тканей. В гомогенатах сосудов измеряли активность sGC, индуцированную SNP (0.1 мМ) согласно ранее описанной методике. Данные по активности sGC представлены в виде пмоль cGMP/мин/мг белка. Содержание белка в пробах измеряли по методу Лоури [Kots A. Ya., et al., 2000].

3.3. Измерение содержания углекислого газа в выдыхаемом животными воздухе.

Для измерения объема выдыхаемого СО2 - крысу помешали в герметически закрываемый стеклянный сосуд объемом 3.3 л, соединенный гибкой трубкой с анализатором СО2 (Gambro Engstrom AB, Швеция). Данные представлены как скорость накопления СО2 в мл/мин на 100 г веса животного.

4. Реактивы

FPTO и AG были предоставлены ПНИИЛ "Химия ферментов" кафедры Биохимии Животных Биологического факультета МГУ. Остальные реактивы,

фирма-изготовитель которых не отмечена в тексте методики, были предоставлены фирмой Sigma.

5. Статистическая обработка

Данные предоставлены в виде средних значений ± ц (ja = SEM ¿J~n\i\ae SEM - стандартное отклонение, an- количество аргументов) или для массивов с количеством аргументов более 10 в виде средних значений ± SEM. Обработку данных проводили с помощью программы STATISTIKA 6.0. Для статистического анализа при сравнении четырех групп животных, участвующих в эксперименте, мы использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Для сравнения данных, полученных при измерении суточного выведения нитритов и нитратов у крыс на различных временных этапах эксперимента мы использовали тест Счеффера (Scheffe test) многофакторного критерия MANOVA. Различия считали достоверными при р<0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Скорость выведения нитритов и нитратов с мочой v крыс с монокроталнновой ЛГ на различных этапах развития заболевания. Влияние хронического введения АГ на скорость выведения нитритов и нитратов.

До инъекции МКТ животным скорость выведения NOx с мочой (CBNCK) не различалось в группах животных и составляла в среднем 0.11+0.02 мкмоль/сутки. В течение развития ЛГ CBNOx в группе МКТ-К увеличивалась уже на 7-ой день (0.95+0.22 мкмоль/сутки), достигала максимума на 14-ый день (2.59+0 25 мкмоль/сутки) и затем снижалась на 28-ой день (0.8б±0.17 мкмоль/сутки). Эти значения были достоверно больше, чем CBNOx на начальном этапе и у контрольных животных на тех же временных этапах (р<0.01). В группе МКТ-АГ на 14-ый и 28-ой дни после инъекции МКТ CBNOx составляло 0.023+0.007 и 0.11+0.06 мкмоль/сутки, соотв. Эти значения были достоверно снижены по сравнению с соответствующей величиной на 7-ой день (0.65+0.19 мкмоль/сутки; р<0.05), с гр. МКТ-К (р<0 05) и не отличались от начального и контрольного уровней. Значения CBNOx в гр. К-К и К-АГ не отличались друг от друга и от начального уровня (рис. 1).

Нитриты и нитраты являются основными метаболитами N0 в организме, если нет поступления этих веществ с водой и пищей. Скорость выведения NOx с мочой отражает интенсивность продукции N0 в организме [Abelson J.N. and Simon M.I, 1999]. Таким образом, продукция NO повышается уже на 7-ой день после инъекции МКТ, на 14-ый день - достигает максимального значения, а к концу развития ЛГ - снижается, но остается повышенной по сравнению с контролем. Хроническое введение селективного ингибитора iNOS, АГ, приводит к полной блокаде продукции N0 в организме, что позволяет говорить о том, что продукция N0 производится iNOS. Этот фермент активируется в

*, **, •*• -достоверные отличия по сравнению с соответствующей контрольной группой (р<0.05; р<0.01; р<0.001, соотв.);

#, ##, ### - достоверные отличия группы МКТ-АГ от группы МКТ-К (р<0.05; р<0.01; р<0.001, соотв.); * , ** , *** -достоверные отличия между данными различных временных этапов внутри одной и той же группы (рассчитаны методом 4-хфакторной МАКОУА) (р<0.05; р<0.01; р<0.001, соотв.).

ходе возникновения неспецифического воспалительного процесса [Forstermann U. et al., 1994]. Неспецифические воспалительные процессы сопровождают различные сердечно-сосудистые заболевания [Stoclet J.C. et al., 1997], в том числе МКТ-ЛГ [Kato S. et. al., 1997]. Повышение продукции NO индуцибельной NO-синтазой также наблюдается при сердечно-сосудистые заболеваниях [Stoclet J.C. et al., 1999], в том числе при артериальной гипертензии [Obst M, Bonartsev A. et al., 2004; Hong H-J. e al., 2000], ЛГ у людей [Berger R.M.F. et al., 2001] и МКТ-ЛГ [Takahashi Т. et al., 1996].

2.. Измерение веса н интенсивности дыхания животных исследуемых ГРУПП.

Монокроталиновая ЛГ влияет на массу тела (Мт) животных. К концу развития этого заболевания Мт животных с МКТ-ЛГ из гр. МКТ-К (235+39 г. и 249±24 г в гр. МКТ-К и МКТ-ЛГ, соотв.) достоверно ниже, чем в контроле (298+38 г и 306+31 г в гр. К-К и К-АГ, соотв.) (р<0.001 и р<0.01, соотв.). Однако, хроническое введение АГ привело к достоверному увеличению Мт животных с МКТ-ЛГ (249+24 г в гр. МКТ-АГ по сравнению с 235+39 г. в гр. МКТ-К, р<0.05). Мт животных из контрольных групп К-К и К-АГ не различались (табл. 1).

Интенсивность выдыхания углекислого газа (ИВУГ) у животных групп МКТ-К и МКТ-АГ (2.58+0,10 мл/мин на 100 г веса и 2.65+0,10 мл/мин на 100 г веса, соответственно) была достоверно ниже ИВУГ животными из контрольных групп К-К и К-АГ (3.04+0.0б мл/мин на 100 г веса; р<0.01 и 3.18+0.11 мл/мин на 100 г веса; р<0.01). Хроническое введение АГ не повлияло на ИВУГ с МКТ-ЛГ. Таким образом, МКТ-ЛГ приводит к снижению интенсивности выдыхания СО2 у животных с этим заболеванием.

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют о том, что МКТ-ЛГ приводит к снижению массы тела животных и интенсивности выдыхания СО2, характеристики, указывающие на суммарную скорость метаболизма и функционирование дыхательной системы, что было показано и другими авторами [Chen L. et al., 2001; Takahashi T. et al., 1998]. Хроническое введение АГ приводит к частичному восстановлению массы тела животных.

3. Исследование давления в малом круге кровообращения и реактивности легочных СОСУДОВ

3.1. Систолическое давление в правом желудочке сердца

У крыс, получивших инъекцию монокроталина, развивалась легочная гипертензия, о чем свидетельствует повышенное систолическое давление в правом желудочке сердца (СПЖД) (76+10 мм.рт.ст) у животных из гр. МКТ-К, по сравнению с контрольными животными (гр. К-К), у которых СПЖД составляло 25+2 мм.рт.ст. (р<0.01). Хроническое введение. АГ, привело к частичному восстановлению СПЖД у МКТ-животных. В гр. МКТ-АГ СПЖД

Рис. 2. Систолическое давление и правом желудочке сердца у наркотизированных животных (А) и относительная масса правого желудочка сердца (Б)

*, **, *** - достоверные отличия по сравнению с группой К-К (р<0.05; р<0.01; р<0.001, соотв.), # - достоверные отличия группы МКТ-АГ по сравнению с группой МКТ-К (р<0.05).

снижено (47±6 мм.рт.ст.) по сравнению с гр. МКТ-К (р<0.05), хотя остается повышенной, по сравнению с группой К-АГ (2б±2 мм.рт.ст., р<0.05). Применение АГ не привело к изменению СПЖД У контрольных крыс (рис. 2А).

3.2. Реальный и относительные веса правого желудочке сердца

На развитие заболевания указывает также гипертрофия правого желудочка сердца в гр. МКТ-К. Реальные и относительные массы правого желудочка (Мпжс, Впжс/Вт и ОВпжс) были достоверно повышены у животных с МКТ-ЛГ (0.34+0.09 г, 1.46+0.42 о.е. и 33.6+5.1 %, соответственно в МКТ-К гр.), по сравнению с контрольными животными (0.19+0.04 г, 0.65+0.13 о.е. и 22.6+3.4 %. соответственно, в К-К гр.) (р<0.001). Хроническое введение АГ не привело к восстановлению реальных и относительных весов правого желудочка сердца. Впжс, Впжс/Вт и ОВпжс в гр. МКТ-АГ (0.33+0.09 г, 1.28+0.42 о.е. и 31.1 +5.2. соотв.) не отличались от этих параметров в гр. МКТ-К и оставались достоверно повышенными по сравнению с гр. К-АГ (0.20+0.04 г, 0.66+0.12 о.е., 22.3+3.5, соотв.) (р<0.001) (рис. 2Б, табл. 1).

Таким образом, хроническое ингибирование iNOS приводит к уменьшению признаков развития легочной гипертензии, о чем свидетельствует частичное восстановление правожелудочкового давления.

3.3. Результаты опытов на изолированных легочных сосудах

3.3.1. Дозозависимое изменение перфузионного давления изолированных легочных сосудов на серотонин

Изучение реактивности изолированных легочных сосудов животных всех исследуемых групп в ответ на перфузию серотонином в возрастающих концентрациях (5-10-8 М - 5-10-6 М) показало, что происходит дозозависимое увеличение ПД легочных сосудов. Максимальный эффект наблюдался при концентрации 5-НТ в 5-10-6 М (lg [5-HTJ: -5.3). Статистических различий по этим данным между различными группами не наблюдалось, однако, можно заметить тенденцию более выраженного сократительного ответа у животных с МКТ-ЛГ (гр. МКТ-К и МКТ-АГ) при относительно высоких концентрациях серотонина (рис. 3А).

3.3.2. Эндотелийзависимоерасслаблениелегочных сосудов

Изучение эндотелийзависимого расслабления изолированных легочных сосудов с интактным эндотелием в состоянии тонуса, вызываемого перфузией серотонина, животных всех четырех групп, показало, что перфузия Ach приводит к расширению легочных сосудов уже при концентрации Ach в 1-10-8 М, затем при концентрациях Ach в 5-10-8 М, 1-10-7 М и 5-10-7 М реакция расслабления легочных сосудов выходит на плато и достигает наибольших величин. При концентрациях Ach в 1-10-8 М и 5-10"* М (lg [Ach]: -8 и -7.3, соотв.) реакция вазодилятации в группе МКТ-К ( -9+3 и -24+3 %, соотв.) были достоверно уменьшены (р<0.05 и р<0.01, соотв.), по сравнению с вазодилятационными ответами в группе К-К (-59+17 и -85 + 11 %). В гр. МКТ-АГ величины реакции расширения сосудов не отличались при всех

Рис 3. Изменение перфузионного давления изолированных легочных сосудов в ответ на перфузию серотонином (5-10-8 М - 5-106 М) (А); ацетилхолином (1*10-8 М - 1*10-6 М) (Б) и FPTO (1*10-10 М - МО"6 М) (В) на фоне сократительного тонуса, вызываемого серотонином (1*10-6М)

*, ** - достоверные отличия по сравнению с соответствующей контрольной группой (р<0.05; р<0.01, соотв ),

#, ## - достоверные отличия группы МКТ-АГ от группы МКТ-К (р<0 05;р<0 01,соотв.).

концентрациях АХ от соответствующих величин в группе К-АГ. Однако при концентрации АХ в 5*10-8 М, 1-Ю'7 М, 5-Ю'7 М и 1-10-6 М (lg [Ach]: -7-3, -7, -6.3 и -6, соотв.) вазодилятаторные реакции в гр. МКТ-АГ ( -69±9 %, —72±11, -61 ±1 и -75±8, соотв.) достоверно отличались (р<0.01, р<0 05, р<0.05 и р<0.01, соотв.) от величин в группе МКТ-К (-24±3, —31+5, -41±9 и - 33±7, соотв.) (рис. ЗБ)!

Таким образом, у животных с МКТ-ЛГ эндотелийзависимое расслабление легочных сосудов ослаблено, что наблюдали и другие исследователи [Давыдова М.П. с соавт., 2003; Ito K.M. et al., 2000], тогда как хроническое введение АГ приводит к восстановлению нормальной реакции вазодилятации. Участие iNOS в ухудшении ЭЗР при артериальной гипертензии показано другими исследователями [Hong H-J. et al., 2000]. Эндотелийзависимое расслабление легочных сосудов осуществляется как за счет механизмов, реализуемых эндотелием (синтез N0 эндотелиальной NO-синтазой и его секреция), так и за счет механизмов, реализуемых гладкой мускулатурой сосудов. Одним из этих механизмов является sGC-cGMP-опосредуемое расслабление гладкой мускулатуры сосудов.

3 3 3 Эндотелийнезависимое расслабление легочных сосудов на фоне перфузии FPTO

Изучение расслабления изолированных легочных сосудов с разрушенным эндотелием, находящихся в состоянии тонуса, вызываемого перфузией серотонина, животных всех исследуемых групп в ответ на перфузию активатором sGC, FPTO, в различных его концентрациях показало, что перфузия FPTO приводит к дозозависимому расширению легочных сосудов. При концентрации FPTO в 1-Ю"7 М наблюдались достоверно значимое различия между гр. МКТ-К и К-К в относительной величине реакции расслабления легочных сосудов. Так, реакции вазодилятации в группе МКТ-К (-58+11 %) были достоверно меньше (р<0.05), по сравнению с вазодилятаторным ответом в группе К-К (-88+8 %). В группе МКТ-АГ величины реакции расслабления сосудов при всех концентрациях АХ не отличалась от соответствующих величин в группах К-АГ и МКТ-К (рис. ЗВ).

Таким образом, хроническое ингибирование iNOS приводит к восстановлению расслабления легочных сосудов, реализуемого по NO/cGMP-зависимому механизму у животных с МКТ-ЛГ, ключевым ферментом которого является sGC.

3.4. Исследование индуцированной активности растворимой изоформы

гуанилатциклазы в легочных сосудах.

Исследование индуцированной активности (ИА) sGC в легочных артериях показало, что активность sGC у животных с МКТ-ЛГ была достоверно ниже (14 6+1.3 пмоль cGMP/мг белка/мин в группе МКТ-К) по сравнению с активностью sGC в контрольной группе (44.7+9.3 пмоль cGMP/мг белка/мин в гр. К-К) (р<0,01). Хроническое введение АГ привело к частичному восстановлению ИА sGC у животных с МКТ-ЛГ (35.4+0.7 пмоль cGMP/мг

белка/мин в гр. МКТ-АГ; р<0,01 по сравнению с гр. МКТ-К). Однако, ИА sGC остается достоверно более низкой в гр. МКТ-АГ, по сравнению с соответствующей контрольной группой (72.5+11.0 пмоль cGMP/мг белка/мин в гр. К-АГ) (р<0,01). Таким образом, индуцированная активность sGC в легочных сосудах у животных с МКТ-ЛГ ниже, чем у контрольных животных. Уменьшение активности sGC в легочных сосудах наблюдали ранее в нашей лаборатории [Давыдова М.П. с соавт., 2003]. Хроническое введение АГ приводит к частичному восстановлению индуцированной активности sGC в легочных сосудах. Это подтверждает исследования, в которых было показано, что N0 в высоких концентрациях приводит к снижению активности sGC [FilippovG. etal., 1997].

4. Исследование давления в большом круге кровообращения и реактивности системных СОСУДОВ

Развитие легочной гипертензии выражалось не только в увеличении давления в правом желудочке сердца и его гипертрофии, но и в изменении основных показателей и реактивности сосудов большого круга кровообращения (БКК).

4.1. Среднее артериальное давление и частота сердечных сокращений

Среднее АД у животных с МКТ-ЛГ было достоверно ниже (102+6 мм.рт.ст.

в МКТ-К гр.), чем у контрольных животных (116+2 мм.рт.ст. в К-К гр.. р<0.01). ЧСС у животных с ЛГ не отличалась достоверно от ЧСС контрольных животных. Хроническое введение АГ не привело к изменению САД, оно оставалось достоверно более низким в гр. МКТ-АГ (102+6 мм.рт.ст.), по сравнению с гр. К-АГ (117+3 мм.рт.ст., р<0.05). Введение АГ не привело также к изменению ЧСС (табл. 2). Таким образом, среднее АД у животных с МКТ-ЛГ снижено, а ЧСС не изменено. АГ не повлиял на эти показатели. Снижение САД при МКТ-ЛГ наблюдали другие исследователи [Chen L. et al., 2001].

4.2. Реальный и относительные веса левого желудочка сердца

Реальный вес левого желудочка сердца (Влжс) у животных с МКТ-ЛГ не отличался от Влжс контрольных животных. АГ также не повлиял на этот показатель. Однако, наблюдаются достоверные различия по Влжс/Вт и ОВлжс между группами МКТ-К и К-К и между группами МКТ-АГ и К-АГ (которые существенно различались по массе тела и массе сердца). Различий по этим показателям между группами МКТ-К и МКТ-АГ не наблюдалось. Таким образом, реальный вес левого желудочка сердца не увеличен у животных с МКТ-ЛГ. АГ не повлиял на эти показатели (табл. 1).

Помимо уменьшения среднего АД, у животных с МКТ-ЛГ (гр МКТ-К) были изменены реакции артериального АД в ответ на введение гипер- и гипотензивных агентов.

4.3. Реакции АД в ответ на введение SNP. РЕ, L-NAME и FPTO

Снижение САД в ответ на введение SNP у животных из гр. МКТ-К составило -17.5+1.6 мм.рт.ст. Реакция была достоверно меньше по сравнению с гр. К-К (-23.5+).5 мм.рт.ст., р<0.05). Хроническое введение АГ привело к восстановлению реакции САД. Реакция снижения среднего АД в ответ на введение SNP была увеличена у животных из гр. МКТ-АГ (-25.6+1.6 мм.рт.ст.), по сравнению с гр. МКТ-К (р<0.05) и не отличалась от значений в контрольной группе (-23.0+3.6 мм.рт.ст. в гр. К-АГ). АГ не влиял на реакцию изменения САД у контрольных животных. Реакция изменения ЧСС и чувствительность барорефлекса не различались между всеми группами животных (рис. 4, табл. 2).

Повышение САД в ответ на введение РЕ у животных из гр. МКТ-К (+12.4+1.8 мм.рт.ст.) было достоверно меньше, чем у контрольных животных (+21.9+3.0 мм.рт.ст. в К-К гр., р<0.01). Реакция уменьшения ЧСС в ответ на РЕ в гр. МКТ-К была также достоверно уменьшена, по сравнению с гр. К-К (р<0.05). Введение АГ не привело к изменению реакции САД на РЕ у животных с МКТ-ЛГ (+10.2+1.3 мм.рт.ст.), она оставалась достоверно уменьшенной по сравнению с контролем (+18.9+1.8 мм рт.ст. в К-К гр., р<0.01). Реакции изменения ЧСС в группах К-АГ и К-К не различалась. ЧБР не различалась между всеми группами животных (рис. 4, табл. 2).

Повышение среднего АД в ответ на введение L-NAME в гр. МКТ-К составило +20.7+4.2 мм.рт.ст., что было достоверно меньше по сравнению с К-К гр. (+33.8+2,0 мм.рт.ст.) (р<0.05). Увеличение САД в ответ на введение L-NAME было достоверно более высоким у животных из гр. МКТ-АГ (+34.6+3.6 мм рт.ст.), по сравнению с гр. МКТ-К (р<0.05), и не отличалась от значений в соответствующей контрольной группе (+36.2+5.7 мм.рт.ст. в гр. К-АГ). Введение АГ не вызвало изменение реакции САД на введение L-NAME у контрольных животных. Реакция изменения ЧСС и ЧБР не различались между всеми группами животных (рис. 4, табл. 2).

Снижение САД в ответ на введение FPTO у животных из гр. МКТ-К (14.4+1.9 мм.рт.ст.) было уменьшено, по сравнению с гр. К-К (-23.5+2.2 мм.рт.ст.) (р<0.01). Реакция снижения среднего АД в ответ на введение FPTO была увеличена в гр. МКТ-АГ (-29.8+2.8 мм.рт.ст.), по сравнению с гр. МКТ-К (р<0.01) и не отличалась от значений в контрольной группе (-26.2+3.7 мм.рт.ст. в гр. К-АГ). Величина уменьшения среднего АД в ответ на введение FPTO в гр. К-АГ не отличалась от соответствующих величин в гр. К-К. Различий реакции изменения ЧСС и коэффициент ЧБР, рассчитанные для FPTO в условиях неспецифической блокады эндогенного синтеза N0, не различаются между всеми группами животных (рис. 4, табл. 2).

Таким образом, у животных с монокроталиновой ЛГ реакции артериального давления в ответ на гипо- и гипертензивные агенты были уменьшены по сравнению с контрольными животными. Хроническое введение АГ привело к восстановлению реакций АД в ответ на введение SNP, L-NAME и FPTO.

*, ** - достоверные ОТЛИЧИЯ ПО сравнению с соответствующей контрольной группой (р<0.05, р<0.01, соотв.); #, ## — достоверные отличия группы МКТ-АГ от группы МКТ-К (р<0.05, р<0.01, соотп.).

Однако, реакция повышения АД в ответ на введение РЕ не восстановилась и осталась уменьшенной, по сравнению с контролем. Для выявления механизма восстановления реакций АД были проведены серии экспериментов на изолированных сосудах.

4 4 Результаты опытов на изолированных системных сосудах 4 4 1 Дозозависимое изменение перфузионного давления изопированных системных сосудов на серотонин

Изучение реактивности изолированных системных сосудов животных всех исследуемых групп в ответ на перфузию серотонином в различных концентрациях показало, что происходит дозозависимое сокращение системных сосудов. При концентрации серотонина в 5-10-7 М (lg [5-HT]: -6.3) возрастание ПД в гр. МКТ-К (19.4+3.8 мм.рт.ст.) было достоверно уменьшено (р<0.01), по сравнению с гр. К-К (39.0+3.5 мм.рт.ст.). Повышение ПД в гр. МКТ-АГ (43.5+3.8 мм.рт.ст.) при этой концентрации серотонина не различалось от соответствующей величины в гр. К-АГ и было достоверно увеличено (р<0.05), по сравнению с гр. МКТ-К (рис. 5 а). Таким образом, хроническое введение АГ привело к восстановлению сократительного ответа системных сосудов на серотонин в одной из промежуточных концентраций.

4 4 2 Эндотелийзависимое расслабление системных сосудов на фоне перфузииаиетилхолина

Изучение эндотелийзависимого расслабления изолированных системных сосудов с интактным эндотелием в состоянии тонуса, вызываемого перфузией серотонина, животных всех четырех групп, показало, что перфузия Ach приводит к дозозависимому расслаблению легочных сосудов. При концентрациях Ach 5-10-7 М и 1*10-6 М (Ig [Ach]: -6.3 и -6.0, соотв.) реакции вазодилятации в группе МКТ-К (-9+3 и -12±4 %) были достоверно уменьшены (р<0.05), по сравнению с вазодилятационными ответами в группе К-К (-23+2 и -33±5 %). В гр. МКТ-АГ величины реакции расслабления сосудов при всех используемых нами концентрациях Ach были достоверно (р<0.01) увеличены (-23±6, -39±9, -46±11, -54±12 и -60±11 %, соответственно, для Ach в концентрации 1*10-8 М, 5-10-8 М, 1*10-7 М, 5-10-7 М и 1*10-6 М (lg [Ach]: -8.0, -7.3, -7.0, -6.3 и -6.0)), как по сравнению с гр. МКТ-К Н±2, -7±2, -9 + 3, -9±3, -12±4, соотв.), так и по сравнению с гр. К-АГ при концентрации АХ в 1*10-7 М и 5-10-7 М ( -19+2 и -25±2 %, соотв.). Более того, при концентрации АХ в 5-10-8 М и 1*10-7 М реакции снижения относительного ПД были достоверно увеличены (р<0.01 и р<0.05, соотв.) в гр. К-АГ (-15+3 и -19+2 %, соотв.), по сравнению с величинами в гр. К-К (-5±1 и -12±2, соотв.) (рис. 5б). Таким образом, у животных с монокроталиновой легочной гипертензией эндотелийзависимое расслабление системных сосудов ослаблено, что было показано ранее в нашей лаборатории [Давыдова М.П. с соавт., 2003], тогда как хроническое введение АГ приводит к значительному увеличению реакции вазодилятации до величин даже превосходящих контрольные значения.

Рис. 5. Изменение перфузионного давления изолированных системных сосудов в ответ на перфузию серотонином (5-10-8 М - 5-10-4 М) (А); ацетилхолином (1*10-8 М - 1*10-6М) (Б) и РРТО (1*10-10 М - 1*10-6М) (В) на фоне сократительного тонуса, вызываемого серотонином (1*10-6 М)

*, ** - достоверные отличия по сравнению с соответствующей контрольной группой (р<0.05; р<0.01, соотв.);

#, ## - достоверные отличия группы МКТ-АГ от группы МКТ-К (р<0.05;р<0.01, соотв.).

4 4 3 Эндотелийнезависимое расслабление системных сосудов на фоне перфузии 1РТ((

Изучение расслабления изолированных системных сосудов с разрушенным эндотелием, находящихся в состоянии тонуса, вызываемого перфузией серотонина, животных всех исследуемых групп в ответ на перфузию активатором звС, БРТО, в различных его концентрациях показало, что перфузия БРТО приводит к дозозависимому расслаблению системных сосудов. Достоверных различий между группами животных получено не было (рис. 5в)

4 4 4Исследование индуцированной активности растворимой изоформы гуанилатииклазы в системных сосудах

Исследование ИА звС бедренных и сонных артерий показало, что активность звС была также ниже в гр. МКТ-К (35.8+4.3 пмоль свМР/мг белка/мин), по сравнению с гр. К-К (74.4+9.5 пмоль евМР/мг белка/мин) (р<0.05). В группе МКТ-АГ ИА звС (48.4+11.0 пмоль евМР/мг белка/мин) не отличалась от активности звС в контрольной группе (50,8+6,8 пмоль евМР/мг белка/мин в гр. К-АГ). Таким образом, индуцированная активность звС в системных сосудах у животных с МКТ-ЛГ ниже, чем у контрольных животных. Хроническое введение АГ приводит к восстановлению индуцированной активности звС в системных сосудах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При экспериментальной дисфункции эндотелия легочных сосудов, вызванной введением монокроталина, происходит развитие легочной гипертензии. Показано, что при этом происходит увеличение активности индуцибельной МО-синтазы — фермента, участвующего в неспецифических воспалительных процессах. Повышенная продукция N0 этим ферментом, а также возможная продукция других свободнорадикальных молекул, по-видимому, приводит к повреждению еМО8 и звС, ферментов, обеспечивающих эндотелийзависимое расслабление, как в легочных, так и в системных сосудах. Об этом свидетельствует восстановление реакций расслабления легочных и системных сосудов, а также восстановление активности растворимой гуанилатциклазы в легочных и системных сосудах при хроническом ингибировании индуцибельной МО-синтазы. Нарушение МО/свМР-зависимого расслабления легочных сосудов, вызываемое активацией индуцибельной МО-синтазы приводит, по-видимому, к повышению давления в малом круге кровообращения при монокроталиновой легочной гипертензии, так как хроническое ингибирование этого фермента приводит к частичному восстановлению давления в малом круге кровообращения у крыс с этим заболеванием.

выводы

1. Хроническое ингибирование индуцибельной NO-синтазы приводит к уменьшению степени развития легочной гипертензии, о чем свидетельствует достоверное снижение систолического давления в правом желудочке сердца у крыс с монокроталиновой легочной гипертензией. Однако эти показатели остаются повышенными по сравнению со здоровыми животными.

2. Наблюдается восстановление реакций среднего артериального давления в ответ на введение активаторов растворимой изоформы гуанилатциклазы и неселективного блокатора NO-синтазы у крыс с монокроталиновой легочной гипертензией на фоне хронической блокады индуцибельной NO-синтазы.

3. Анализ реакций эндотелийзависимого и эндотелийнезависимого расслабления изолированных легочных сосудов у крыс с монокроталиновой легочной гипертензией при хронической блокаде индуцибельной NO-синтазы выявил их достоверное восстановление.

4. Хроническое введение селективного ингибитора индуцибельной NO-синтазы, аминогуанидина, приводит к полной блокаде повышенной продукции оксида азота, которая наблюдается в ходе развития монокроталиновой легочной гипертензии у крыс.

5. Хроническое ингибирование индуцибельной NO-синтазы приводит к частичному восстановлению сниженной при монокроталиновой легочной гипертензии индуцированной активности растворимой изоформы гуанилатциклазы в гомогенатах легочных и системных артерий у крыс.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает благодарность научному руководителю д.б.н., проф. Медведевой Н.А., м.н.с. кафедры факультета Фундаментальной медицины МГУ Давыдовой М.П. и Гавриловой С.А. за помощь в освоении физиологических методик, ст.н.с. кафедры Биоорганической химии Коцу А.Я. и м.н.с. Постникову А.Б. за руководство и помощь в биохимических исследованиях активности sGC, асп. кафедры ФЧЖ Цвиркун Д.В. за проведения исследований дыхания животных, д.б.н., проф. Гросса В. и асп. Обста М. молекулярно-медицинского центра "MDC" медицинского факультета Гумбольдского университета г. Берлина, ФРГ, за участие в предварительных исследованиях роли iNOS в патогенезе артериальной гипертензии в рамках программы аспирантских стипендий "DAAD".

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Бонарцев А.П., Славуцкая А.В., Постников А.Б., Медведева НА Влияние хронического введения аминогуанидина на реактивность легочных сосудов у крыс с монокроталиновой моделью легочной гипертензии. Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова (принята к публикации).

»-683 4

2. Бонарцев А.П., Дьяконов К.Б., Постников А.Б., Медведева Н.А Влияние хронического введения аминогуанидина на реактивность сосудов большого круга кровообращения у крыс с монокроталиновой легочной гипертензией. Известия РАН. Серия биологическая (принята к публикации).

3. Obst М., Bonartsev A., Gross V., Janke J., Muller D.N., Park J.-K., Kargel E., and Luft F.C. Nitric oxide synthase expression in AT2-receptor deficient mice after DOCA-salt. J.Am.Soc.Nephrol. (принята к публикации).

4. Бонарцев А.П., Гаврилова СА, Постников А.Б., Хропов Ю.В., Медведева, Н.А Влияние хронического введения блокатора индуцибельной N0-синтазы - аминогуанидина на развитие легочной гипертензии у крыс. Материалы И-ой научно-практической конференции "Дисфукция эндотелия: экспериментальные и клинические исследования", Витебск, 2324 мая 2002 г., стр. 76-78.

5. Бонарцев А.П., Славуцкая А.В., Медведева НА Влияние хронического введения аминогуанидина на реактивность легочных сосудов у крыс с монокроталиновой легочной гипертензией. Материалы III Всероссийской конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем", Санкт-Петербург, 29 сентября-1 октября 2003 г., стр. 42-43.

6. Бонарцев А.П., Славуцкая А.Т., Постников А.Б., Медведева Н.А Хроническая блокада индуцибельной изоформы синтазы оксида азота восстанавливает реактивность легочных сосудов у крыс с монокроталиновой легочной гипертензией. Материалы 3-ей всероссийской с международным участием школы-конференции по физиологии кровообращения, Москва, 27-30 января 2004 г., стр. 8-9.

7. Medvedeva, N.A., Bonartsev А.Р., Khropov, Y.V., Postnikov, A.B., Gavrilova, S.A Chronic administration of aminoguanidine improves function of cardiovascular system in rats with monocrotaline-induced pulmonary hypertension. Abs. 17th Scientific Meeting of American Society of Hypertension, New York, USA, May 19-22, 2002; American Journal of Hypertension 15(4), 2002,p.A150-A150.

8. Medvedeva, N. A., Bonartsev A.P., Postnikov, A.B., Gavrilova, S.A., Khropov, Yu.V. Aminoguanidine increases activity of soluble guanylate cyclase in vessels of rats with monocrotaline-induced pulmonary hypertension. Abs. 2nd International Conference Nitric Oxide Society, June 24-26, 2002, Prague, Czech Republic, Nitric Oxide: Biology and Chemistry, 6(4), 2002, p. 431.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бонарцев, Антон Павлович

ВВЕДЕНИЕ

СОКРАЩЕНИЯ, использованные в тексте

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I. Характеристика легочной гипертензии

II. Модели легочной гипертензии

1. Модели легочной гипертензии

2. Монокроталиновая модель легочной гипертензии

III. Изменение функции эндотелия и гладкой мускулатуры легочных и 19 системных сосудов при легочной гипертензии

1. Нарушение соотношения вазоактивных веществ и изменение ответов сосудов на эти факторы при ЛГ

2. Эндотелийзависимое расслабление при ЛГ

3. Характеристика ферментативных систем, участвующих в ЭЗР, и изменение их функционирования при ЛГ

IV. Роль воспалительных процессов в гипертензии

1. Роль воспалительных процессов в гипертензии

2. Роль воспалительных процессов в легочной гипертензии

3. Роль повышенной продукции свободнорадикальных молекул при различных типах гипертензии

V. Роль индуцибельной синтазы оксида азота в патофизиологии кровеносных сосудов

1. Характеристика индуцибельной NO-синтазы

2. Роль индуцибельной NO-синтазы в патофизиологии кровеносных сосудов.

VI. Ингибиторы индуцибельной NO-синтазы

1. Общая характеристика ингибиторов NO-синтазы

2. Ингбиторы индуцибельной NO-синтазы.

3. Аминогуанидин.

VII. Роль индуцибельной NO-синтазы в легочной гипертензии.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. Протокол эксперимента

II. Эксперименты in vivo

1. Операции по имплантации катетеров

2. Измерение правожелудочкового и артериального давления

3. Эксперименты на изолированных легочных и системных 76 сосудах

4. Измерение массы правого и левого желудочков сердца

III. Биохимические эксперименты

1. Измерение содержания нитритов и нитратов в моче крыс

2. Измерение индуцируемой активности растворимой изоформы гуанилатциклазы в системных и легочных сосудах крыс.

3. Измерение содержания углекислого газа в выдыхаемом животными воздухе.

IV. Реактивы

V. Статистическая обработка

РЕЗУЛЬТАТЫ

I. Скорость выведения нитритов и нитратов с мочой у крыс с монокроталиновой ЛГ на различных этапах развития заболевания. Влияние хронического введения АГ на скорость выведения нитритов и нитратов.

II. Измерение веса и интенсивности дыхания животных исследуемых групп

III. Исследование давления в малом круге кровообращения и реактивности легочных сосудов

1. Систолическое давление в правом желудочке сердца

2. Реальный и относительные массы правого желудочке сердца

3. Результаты опытов на изолированных легочных сосудах

4. Исследование индуцированной активности растворимой изоформы гуанилатциклазы в легочных сосудах

IV. Исследование давления в большом круге кровообращения и реактивности системных сосудов

1. Среднее артериальное давление и частота сердечных сокращений

2. Реальный и относительные веса левого желудочка сердца

3. Реакции АД в ответ на введение SNP, РЕ, L-NAME и FPTO

4. Результаты опытов на изолированных системных сосудах

5. Исследование индуцированной активности растворимой изоформы гуанилатциклазы в системных сосудах

ОБСУЖДЕНИЕ

I. Продукция оксида азота при монокроталиновой JIT. Хроническое ингибирование индуцибельной NO-синтазы аминогуанидином

II. Давление в малом круге кровообращения и реактивность легочных сосудов при хронической блокаде индуцибельной NO-синтазы при монокроталиновой JIT

III. Функционирование большого круга кровообращения при хронической блокаде индуцибельной NO-синтазы при монокроталиновой JIT

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ участия индуцибельной изоформы NO-синтазы в реакции повышения давления в малом круге кровообращения, вызванной дисфункцией эндотелия"

Дисфункция эндотелия сосудов является одной из причин нарушения регуляции сосудистого тонуса [Becker B.F. et al., 2000]. Существует модель дисфункции эндотелия, вызываемая инъекцией алкалоида монокроталина (MKT). Это вещество избирательно действует на эндотелий легочных сосудов, нарушая его функционирование, что приводит к развитию легочной гипертензии (JIT) [Wilson D.W. et al., 1992]. ЛГ - это тяжелое заболевание, плохо поддающееся лечению, которое характеризуется повышением давления в малом круге кровообращения и гипертрофией правого желудочка сердца, что часто приводит к сердечной недостаточности, влекущей за собой смертельный исход [Уейр Е. К. и Ривс Дж. Т., 1995]. Таким образом, монокроталиновая модель легочной гипертензии (МКТ-ЛГ) ярко демонстрирует взаимосвязь дисфункции эндотелия с нарушением регуляции сосудистого тонуса. В частности, при этой патологии происходит уменьшение реакций эндотелийзависимого расслабления (ЭЗР) сосудов [Dihn-Xuan А.Т. et al., 1991; Ito К.М. et al., 2000; Fullerton D.A. et al., 1996; Morita K. et al., 1996]. ЭЗР осуществляется посредством оксида азота (NO), синтезируемого в эндотелии эндотелиальной NO-синтазой (eNOS). NO активирует растворимую изоформу гуанилатциклазы (sGC) в гладкомышечных клетках сосудов. Циклический гуанозинмонофосфат (cGMP), синтезируемый этим ферментом, приводит к расслаблению гладкомышечной мускулатуры сосудов [Mateo А.О. et al., 2000].

Экспрессия этого фермента обычно многократно повышается при различных воспалительных процессах, при которых повышенная продукция NO этим ферментом выполняет защитную функцию против бактерий, паразитов и раковых клеток. Однако, продукция больших количеств NO приводит к окислительному повреждению окружающих тканей, в частности к повреждению sGC и eNOS - основных ферментов ЭЗР [Stoclet JC et al., 1997; Filippov G. et al., 1997; Sheehy A.M. et al., 1998].

Ранее было показано, что у крыс с монокроталиновой моделью легочной гипертензии повышена активность iNOS в гомогенатах легочных сосудов, что сопровождалось уменьшением активности sGC и уменьшением эндотелийзависимого расслабления легочных сосудов у этих животных [Давыдова М.П. и др., 2003]. Между тем, в артериальной гипертензии роль iNOS уже была продемонстрирована на различных моделях этого заболевания. Так, было показано, что уровень выведения продуктов метаболизма NO — нитратов и нитритов (NOx) повышены у мышей с солевой моделью артериальной гипертензии. Была увеличена также экспрессия этого фермента [Obst М., Bonartsev A. et al., 2004]. У крыс линии SHR также повышена концентрация нитритов и нитратов в плазме крови, увеличена экспрессия iNOS в тканях аорты. Эти исследователи применили селективный ингибитор iNOS - аминогуанидин (AG) и показали, что хроническое ингибирование этого фермента приводит к частичному восстановлению артериального давления и эндотелийзависимого расслабления системных сосудов у SHR крыс с артериальной гипертензией [Hong H-J. et al., 2000].

СОКРАЩЕНИЯ, использованные в тексте

JIT - легочная гипертензия;

МКТ-ЛГ — монокроталиновая модель легочной гипертензии;

АД - артериальное давление;

САД - среднее артериальное давление;

ЧСС - частота сердечных сокращений;

ЧБР - чувствительность барорефлекса;

КЧБР — коэффициент чувствительности барорефлекса;

СПЖД — давление в правом желудочке сердца;

ПД - перфузионное давление;

ОПД - относительное перфузионное давление;

Мт - масса тела животного;

Мпжс - масса правого желудочка сердца;

Млжс - масса левого желудочка сердца;

ОМпжс — относительная масса правого желудочка сердца;

ОМлжс — относительная масса левого желудочка сердца;

ЭЗР - эндотелийзависимое расслабление;

ЭНЗР - эндотелийнезависимое расслабление;

МКК - малый круг кровообращения;

БКК - большой круг кровообращения;

СРПК - свободнорадикальные производные кислорода;

CBNOx — скорость выведения нитритов и нитратов (NOx);

MKT - монокроталин;

NOS - синтазы оксида азота; eNOS - эндотелиальная изоформа NO-синтазы; iNOS - индуцибельная изоформа NO-синтазы; nNOS - нейрональная изоформа NO-синтазы; cNOS - конститутивные изоформы NO-синтазы;

NADPH - никотинамиддинуклеотидмонофосфат;

FAD - флавинадениндинуклеотид; FMN - флавинмононуклеотид; BH4 - (6К)-5,6,7,8-тетрагидро-Ь-биоптерин; СаМ - кальмодулин; sGC - растворимая изоформа гуанилатциклазы; cGMP - циклический гуанозинмонофосфат;

GTP - гуанозинтрифосфат; сАМР - циклический аденозинмонофосфат;

АТР - аденозинмонофосфат;

РКА - сАМР-зависимая протеинкиназа;

FPTO — пиридазин ди-КГ-оксид 4,7-диметил-1,2,5-оксадиазоло[3,4-с1]-пирадазин-1,5,6-триоксид;

YC-1 - 3-(5'-гидроксиметил-2'-фурил)-1-бензилиндазол; Ach - ацетилхолин;

5-НТ - 5-гидрокситриптамин, серотонин; ЕТ - эндотелии; АИ - ангиотензин И;

АСЕ - ангиотензинпревращающий фермент;

PG - простагландин;

ЕТ - эндотелии;

SNP - нитропруссид натрия;

РЕ - фелилэфрин;

L-NAME - метиловый эфир М-омега-нитро-Ь-аргинина;

L-NNA - N-омега-нитро-Ь-аргинин;

L-NIL - Ь-1М-(1-иминоэтил)лизин гидрофлорид;

AG - аминогуанидин;

HIF-1 - индуцируемый гипоксией фактор 1;

PDGF - ростовой фактор, продуцируемый тромбоцитами;

VEGF - ростовой фактор эндотелия сосудов;

SHR - spontaneous hypertensive rats, крысы с врожденной гипертензией.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I. ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕГОЧНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ

Легочная гипертензия (ЛГ) - это заболевание, которое характеризуется повышением среднего артериального давления в малом круге кровообращения до 25 мм.рт.ст. и больше (в норме этот показатель колеблется от 12 до 16 мм.рт.ст.) и увеличением сосудистого сопротивления. Это в дальнейшем приводит к гипертрофии правых отделов сердца и в конечном итоге - сердечной недостаточности и отеку легких, что в большинстве случаев в течение нескольких лет приводит к смерти. ЛГ -тяжелое, быстро прогрессирующее заболевание [Уейр Е. К. и Ривс Дж. Т., 1995; Runo J.R. and Loyd J.E., 2003; Berkowitz D.S. and Coyne N.G., 2003].

По этиологии различают первичную и вторичную легочную гипертензию. Первичная ЛГ — очень редко встречающееся заболевание. За год диагностируется примерно один на миллион случаев первичной ЛГ. Однако, это очень тяжелое заболевание, приводящее к смерти. При первичной легочной гипертензии повышение давления развивается за счет тромбоэмболии мелких легочных сосудов, чаще вен, уменьшения просвета легочных вен вследствие пролиферации и фиброза интимы, и увеличения сопротивления артерий из-за гипертрофии гладких мышц средней оболочки сосудов и фиброза интимы. Также при первичной ЛГ происходит нарушение структуры и функции соединительной ткани. Таким образом, часть сосудов оказывается выключенной из кровотока из-за уменьшения их просвета и за счет тромбоэмболии или утолщения сосудистой стенки. Из-за уменьшения общей площади артерий, вовлеченных в кровообращение, увеличивается сопротивление току крови и скорость кровотока. Это ухудшает газообмен и, кроме того, ведет к вазоконстрикции, а в дальнейшем - к гипертрофии мышечного слоя [Rubin L., 1997; Archer S. and Rich S., 2000; Runo J.R. and Loyd J.E., 2003; Berkowitz D.S. and Coyne N.G., 2003].

По квалификации Всемирной Организации Здравоохранения первичная легочная гипертензия - это легочная артериальная гипертензия, имеющая все патофизиологические признаки, присущие этому заболеванию, которая не имеет диагностических отличий от вторичной ЛГ. Под это определение может подойти собственно первичная ЛГ и любой другой тип ЛГ, который нельзя диагностически отличить от вторичной ЛГ [Rubin L., 1997; Archer S. and Rich S., 2000].

Причина первичной легочной гипертензии остается не выясненной. В настоящее время поиск предполагаемых причин первичной ЛГ идет в следующий областях сердечно-сосудистой физиологии и биохимии: функции эндотелия, роль вазоактивных веществ, роль провоспалительных агентов, функции и электрофизиология гладкомышечной мускулатуры, структура сосудистого русла, химия металлопротеинкиназ межтканевой соединительной ткани, биология тромбоцитов, генетика и молекулярная биология [Archer S. and Rich S., 2000; Hopkins N. and McLoughlin P., 2002; Runo J.R. and Loyd J.E., 2003; Berkowitz D.S. and Coyne N.G., 2003].

Увеличение давления в легочном круге кровообращения при вторичной легочной гипертензии происходит в результате разнообразных нарушений функционирования сердечно-сосудистой системы, таких как врожденные внутрисердечные шунты или шунт между дугой аорты и легочной артерией (незаросший ductus arteriosis), за счет которых увеличивается поток крови в легочном русле, коллаген-сосудистые заболевания, повышенное давление наполнения левого сердца (до более, чем 12 мм.рт.ст.), хроническая гипоксия различного происхождения, стенозы периферических легочных артерий. ЛГ может сопровождать такие заболевания сердечно-сосудистой системы, как хроническое обструктивное заболевание легких, легочный фиброз, респираторный дистресс-синдром, стеноз митрального клапана сердца, врожденные дефекты сердца [Уейр Е. К. и Ривс Дж. Т., 1995; Hampl V. and Herget J., 2000; Hopkins N. and McLoughlin P., 2002].

Хотя ЛГ вызывают различные причины, развитие этого заболевание имеет ряд характерных особенностей, присущих как первичной JTT, так и вторичной ЛГ.

Среди наиболее ранних изменений происходящих при развитии ЛГ были выявлены повреждение эндотелиальных клеток, вызываемое локальным повышением давления и повышение трансмурального давления. В первую очередь эти изменения приводят к повреждению эндотелия легочных сосудов. Эндотелий легочных сосудов участвует в синтезе, активации и деструкции многих вазоактивных факторов. В легочных сосудах происходит превращение ангиотензина-I в анигиотензин-Н (АН) ангиотензинпревращающим ферментом (АСЕ), инактивация брадикинина этим же ферментом, захват и запасание (в тромбоцитах и эндотелии) серотонина, инактивация простагландинов (PG) Еь Е2 и А2а, захват значительной части (до 30%) норадреналина. Однако, адреналин, PG А, и А2, АН и вазопрессин не метаболизируются в сосудах легочного круга кровообращения [West J.B., 1990]. Поэтому повреждение эндотелия затрагивает системы вазоактивных факторов. Отчасти это обусловлено нарушением метаболической функции легких из-за уменьшения общей площади функционирующих мелких сосудов. В норме большая площадь легочных сосудов и низкое давление обусловливают "метаболическую" функцию. При развитии ЛГ происходит нарушение соотношения сосудорасширяющих и сосудосуживающих факторов в сторону преобладания последних. Кроме того, нарушение функций эндотелия и его целостности может привести как к продуцированию факторов роста, так и к подавлению активности факторов, блокирующих рост клеток, вызывая пролиферацию медии и интимы, и к активации процессов свертывания крови - адгезии тромбоцитов и фибринолизу [Archer S. and Rich S., 2000; Hopkins N. and McLoughlin P., 2002].

Изменения диаметра просвета сосуда начинаются, видимо, с гипертрофии мышечного слоя. При исследовании легочных сосудов у пациентов с начальной стадией заболевания были обнаружены выраженная гипертрофия среднего слоя в мелких легочных артериях и начало пролиферации перицитов - предшественников гладкомышечных клеток. При пролиферации гладкомышечных клеток изменяется их фенотип - из способных к сокращению клеток они превращаются в клетки с "синтетическим фенотипом". Клетки "синтетического" фенотипа могут мигрировать в другие слои сосудистой стенки, делиться и продуцировать компаненты межтканевой соединительной ткани. Деление гладкомышечных клеток сопровождается продуцированием немышечного актина - бета-актина взамен альфа-формы и немышечного миозина. Изменение затрагивает также промежуточные филаменты: уменьшается соотношение десмина, характерного для мышечных клеток, и виментина, который встречается во многих клетках мезенхимного происхождения [Уейр Е. К. и Ривс Дж. Т., 1995] В клетках уменьшается содержание тяжелой изоформы кальдесмона - белка, регулирующего сокращение гладких мышц, и появляется его легкая изоформа, характерная для немышечных типов клеток. [Reckless J, Fleetwood G, 1994] После деления клетки дифференцируются в гладкомышечные и опять приобретают способность к сокращению, затем наблюдается их гипертрофия [Runo J.R. and Loyd J.E., 2003; Berkowitz D.S. and Coyne N.G., 2003].

Однако гипертрофия мышечного слоя сосудов и перестройка структуры сосудистой стенки могут иметь место и при других заболеваниях легких, которые не сопровождаются легочной гипертензией [Hopkins N. and McLoughlin P., 2002].

Изменения, которые затрагивают перестройку сосудистой сети, стимулируют пролиферацию всех слоев легочных артерий и проявляются на поздних стадиях легочной гипертензии. Тогда же происходит гипертрофия правых отделов сердца или образование так называемого "легочного сердца". Это приводит к прекращению функционирования правого желудочка сердца, что и является основной причиной смертельных случаев при ЛГ [Archer S. and Rich S., 2000; Hopkins N. and McLoughlin P., 2002].

При ЛГ происходит также нарущение функционирования тромбоцитов. Нарушается активность свертывающей и противосвертывающей систем крови: уменьшается фибринолитическая активность, падает уровень протеина С, увеличивается содержание фибриногена, происходит выброс тромбоцитами серотонина [Badesch D.V., 1997].

При развитии ЛГ происходят изменения структуры, метаболизма и функции соединительнотканной оболочки сосудов и межтканевой соединительной ткани легких. Соединительная ткань ответственна за миграцию, рост и дифференциацию мезенхимальных клеток [Archer S. and Rich S., 2000; Hopkins N. and McLoughlin P., 2002].

До сих пор не существует эффективных методов лечения ЛГ. На сегодняшний день для улучшения состояния больных с ЛГ используют вазодилятаторы, в том числе блокаторы кальциевых каналов и ингаляцию оксида азота, длительное введение простациклина и его производных, антикоагулянты, антогонисты эндотелиновых рецепторов, ингибиторы фосфодиэстеразы, диуретики [Runo J.R. and Loyd J.E., 2003; Berkowitz D.S. and Coyne N.G., 2003]. Применение блокаторов кальциевых каналов часто не вызывает улучшения состояния пациентов. Встречаются сообщения, что у некоторых пациентов с первичной ЛГ наблюдалось улучшение после применения блокатора ангиотензинпревращающего фермента каптоприла или блокатора а-1 адренорецепторов - празозина. Ингаляция оксида азота успешно применяется при персистирующей легочной гипертензии новорожденных и респираторном дистресс-синдроме, но дает только краткосрочное снижение давления в легочном русле у пациентов с легочной гипертензией [Galinier М., Rouge Р., 1997]. Применение простациклина (эпопростенола) ведет к долговременному понижению давления легочных сосудов и увеличению сердечного выброса, а так же нормализации содержания эндотелина-1. Возможно, что действие простациклина основано не только на его дилятаторных и антиагригационных свойствах, но и способности ингибировать рост гладкомышечных клеток, как это было показано в опытах in vitro [Langleben D., Barst RJ. et al., 1999]. Однако единственным методом долгосрочного улучшения состояния остается хирургическое вмешательство, т.е. пересадка легких [Runo J.R. and Loyd J.E., 2003; Berkowitz D.S. and Coyne N.G., 2003].

II. МОДЕЛИ ЛЕГОЧНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Бонарцев, Антон Павлович

выводы

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бонарцев, Антон Павлович, Москва

1. Гаврилова С.А., Гусева А.А., Медведева Н.А. Влияние дозы и способа введения эндотелина-1 на среднее артериальное давление у бодрствующих крыс // Бюллетень эксперимент, биол. мед., 1997. Т. 124(11). С. 491-494.

2. Графов М.А., Лапшин А.В., Рубина А.Ю., Манухина Е.Б., Медведева Н.А., Медведев О.С. Эндотелии-1 стимулирует вызываемое ацетилхолином расслабление изолированной аорты крысы // Доклады РАН. 1996. Т. 351(1) С. 128-130.

3. Манухина Е.Б., Малышев И.Ю., Смирин Б.В., Машина С.Ю., Салтыкова В.А., Ванин А.Ф. Продукция и аккумуляция оксида азота в процессе адаптации к гипоксии // Известия РАН, серия биологическая. 1999. Т. 2. С. 211-215.

4. Манухина Е.Б., Смирин Б.В., Малышев И.Ю., Стоклет Дж.Ц., Мюллер Б., Солодков А.П. Резерв оксида азота в сердечнососудистой системе // Известия РАН, серия биологическая. 2002. Т. 5. С. 585-596.

5. Покидышев Д.А., Бондаренко Н.А., Малышев И.Ю., Микоян В.Д., Кубрина Л.Н., Ванин А.Ф., Манухина Е.Б. // Росс, физиол. жур. им. И.М. Сеченова. 1998. Т. 84(12). С. 1420-1427.

6. Уейр Е. К. и Ривс Дж. Т. (под редакцией). Физиология и патофизиология легочных сосудов. Медицина. М. 1995.

7. Abelson J.N. and Simon M.I. (editors-in-chief) Methods in enzymology. V. 301 "Nitric oxide". Part C. Biological and antioxidant activities. Academic Press, p. 50., 1999.

8. Adnot S.S., Raffestin В., Eddahibi S., Braquet P., Chabrier P.E. Loss of endothelium-dependent relaxant activity in the pulmonary circulation of rats exposed to chronic hypoxia // J. Clin. Invest. 1991. V. 87(1). P. 155162.

9. Archer S. and Rich S. Primary pulmonary hypertension a vascular biology and translational research "Work in Progress" // Circulation. 2000. V. 102 P. 2781-2791.

10. Arcot S.S., Lipke D.W., Gillespie M.N., Olson J.W. Alterations of growth factor transcripts in rat lungs during development of monocrotaline-induced pulmonary hypertension // Biochem. Pharmacol. 1993. V. 46(6). P. 1086-1091.

11. Baas A.S. and Berk B.C. Differential activation of mitogen-activated protein kinases by H202 and 02 in vascular smooth muscle // Circ. Res. 1995. V. 77.

12. Badesch D.V. Clinical trials in pulmonary hypertension // Annu. Rev. Med. 1997. V. 48 P. 399-408.

13. Becker B.F., Heindl В., Kupatt C., Zahler S. Endothelial function and hemostasis // Z. Kardiol. 2000. V. 89(3). P. 160-167.

14. Beckman J.S., Beckman T.W., Chen J., Marshall P.A., Freeman B.A. Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrite: implications for endothelial injury from nitric oxide and superoxide // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. P. 1620-1624.

15. Bellotto F., Chiavacci P., Laveder F., Angelini A., Thiene G., Marcolongo R. Effective immunosuppressive therapy in a patient with primary pulmonary hypertension // Thorax. 1999. V. 54(4). P. 372-374.

16. Berkowitz D.S. and Coyne N.G. Understanding primary pulmonary hypertension // Crit. Care Nurs. Q. 2003. V. 26(1). P. 28-34.

17. Bhat G.B. and Block E.R. Hypoxia directly increases serotonin transport by porcine pulmonary artery endothelial cell plasma membrane vesicles // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1990. V. 3(4). P. 363-367.

18. Block E.R and Edwards D. Mechanism of hypoxic injury in pulmonary artery endothelial cell plasma membranes // Am. J. Physiol. 1989. V. 257. P. C223-C231.

19. Bogdan M., Humbert M., Francoual J., Claise C., Duroux P., Simonneau G., Lindenbaum A. Urinary cGMP concentrations in severe primary pulmonary hypertension // Thorax. 1998. V. 53(12). P. 1059-1062.

20. Bohme E., Grossmann G., Herz J., Mtilsch A., Spies C., Schultz G. Regulation of cyclic GMP formation by soluble guanylate cyclase: stimulation by NO-containing compounds // Adv. Cyclic. Nucleotide Protein Phosphorylation Res. 1984. V. 17. P. 259 -266.

21. Bonvallet S.T., Zamora M.R., Hasunuma K., Sato K., Hanasato N., Anderson D., Sato K., Stelzner T.J. BQ123, an ETA-receptor antagonist, attenuates hypoxic pulmonary hypertension in rats // Am. J. Physiol. 1994. V. 266(4 Pt 2) P. H1327-H1331.

22. Braddock M., Schwachtgen J.-L., Houston P., Dickson M.C., Lee M.J., Campbell C.J. Fluid shear stress modulation of gene expression in endothelial cells // News Physiol. Sci. 1998. V. 13. P. 241-246.

23. Bryk R. and Wolff D.J. Mechanism of inducible nitric oxide synthase inactivation by aminoguanidine and L-N 6 -(l-iminoethyl)-lysine // Biochemistry. 1998. V. 37. P. 4844-4852.

24. Bryk R. and Wolff D.J. Pharmacological modulation of nitric oxide synthesis by mechanism-based inactivators and related inhibitors // Pharm. Therap. 1999. V. 84. P. 157-178.

25. Carville C., Adnot S., Eddahibi S., Teiger E., Rideau D., Raffestin B. Induction of nitric oxide synthase activity in pulmonary arteries from normoxic and chronically hypoxic rats // Eur. Respir. J. 1997. V. 10. P. 437-445.

26. Chen M.J., Chiang L.Y., Lai Y.L. Reactive oxygen species and substance P in monocrotaline-induced pulmonary hypertension // 2001. V. 171(3). P. 165-173.

27. Chen X. Changes of endothelin in rats with normobaric hypoxia-induced pulmonary hypertension. (статья на китайском языке) // Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 1993. V. 73(7). P. 400-402.

28. Chen Y.F., Li H., Elton T.S., Yang R.H., Jin H., Oparil S. The role of atrial natriuretic peptide and endothelin in hypoxia induced pulmonary hypertension// Chin. J. Physiol. 1994. V. 37(3). P. 165-183.

29. Cherry P.D., Omar H.A., Farrell K.A., Stuart J.S., Wolin M.S. Superoxide anion inhibits cGMP-associated bovine pulmonary arterial relaxation // Am. J. Physiol. 1990. V. 259. P. H1056-H1062.

30. Christman B.W. Lipid mediator dysregulation in primary pulmonary hypertension// Chest. 1998. V. 114. P. 205S-207S.

31. Comini L., Bachetti Т., Gaia G., Pasini E., Agnoletti L., Pepi P., Ceconi

32. C., Curello S., Ferrari R. Aorta and skeletal muscle NO synthase expression in experimental heart failure // J. Mol. Cell. Cardiol. 1996 V. 28(11). P. 2241-2248.

33. Conraads V.M., Bosmans J.M., Claeys M.J., Vrints C.J., Snoeck J.P., De Clerck L., Vermeire Р.А. Paradoxic pulmonary vasoconstriction in response to acetylcholine in patients with primary pulmonary hypertension //Chest. 1994. V. 106(2). P. 385-390.

34. Corson M.A., James N.L., Latta S.E., Nerem R.M., Berk B.C., Harrison

35. D.G. Phosphorylation of endothelial nitric oxide synthase in response to fluid shear stress // Circ. Res. 1996. V. 79. P. 984-991.

36. Cosentino F., Patton S., d'Uscio L. V., Werner E. R., Werner-Felmayer G., Moreau P., Malinski Т., Luscher T. F. Tetrahydrobiopterin alters superoxide and nitric oxide release in prehypertensive rats // J. Clin. Invest. 1998. V. 101. P. 1530-1537.

37. Courderot-Masuyer C., Dalloz F., Maupoil V., Rochette L. Antioxidant properties of aminoguanidine // Fundam. Clin. Pharmacol. 1999. V. 13(5). P. 535-540.

38. Crawley D.E., Zhao L., Giembycz M.A., Liu S., Barnes P.J., Winter R.J., Evans T.W. Chronic hypoxia impairs soluble guanylyl cyclase-mediated pulmonary arterial relaxation in the rat // Am. J. Physiol. 1992 V. 326. P. L325-L332.

39. Cruz W.S., Corbett J.A., Longmore W.J., Moxley M.A. Nitric oxide • participates in early events associated with NNMU-induced acute lunginjury in rats // Am. J. Physiol. 1999. V. 276. P. L263-L268.

40. Davis K.L., Martin E., Turko I.V., Murad F. Novel effects of nitric oxide // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2001. V. 41. P. 203-236.

41. Diez-Fernandez C., Sanz N., Alvarez A.M., Zaragoza A., Cascales M. Influence of aminoguanidine on parameters of liver injury and regeneration induced in rats by a necrogenic dose of thioacetamide // Br. J. Pharmacol. 1998. V. 125(1). P. 102-108.

42. Doursout M.F., Hartley C.J., Chelly J.E. Comparison of cardiac and regional hemodynamic responses to N-methyl-L-arginine andaminoguanidine infusions in conscious pigs // J Cardiovasc Pharmacol.2001. V. 37(4). P. 349-358.

43. Dupuis J., Goresky C.A., Fournier A. Pulmonary clearance of circulating endothelin-1 in dogs in vivo: exclusive role of ETB receptors // J. Appl. Physiol. 1996. V. 81(4). P. 1510-1515.

44. Elton T.S., Oparil S., Taylor G.R., Hicks P.H., Yang R.H., Jin H., Chen Y.F. Normobaric hypoxia stimulates endothelin-1 gene expression in the rat // Am. J. Physiol. 1992. V. 263(6 Pt 2). P. R1260-R1264.

45. Filippov G., Bloch D. В., Bloch K. D. Nitric oxide decreases stability of mRNAs encoding soluble guanylate cyclase subunits in rat pulmonary artery smooth muscle cells // J. Clin. Invest. 1997. V. 100. P. 942-948.

46. Forstermann U., Closs E.I., Pollock J.S., Nakane M., Schwarz P., Gath I., Kleinert H. Nitric oxide synthase isozymes. Characterization, purification, molecular cloning, and functions // Hypertension. 1994. V. 23. P. 11211131.

47. Forstermann U., Boissel J.P., Kleinert H. Expressional control of the "constitutive" isoforms of nitric oxide synthase (NOS I and NOS III) // FASEB J. 1998. V. 12. P. 773-790.

48. Fouty В., Komalavilas P., Muramatsu M., Cohen A., McMurtry I.F., Lincoln T.M., Rodman D.M. Protein kinase G is not essential to NO-cGMP modulation of basal tone in rat pulmonary circulation // Am. J. Physiol. 1998. V. 274(2 Pt 2). P. H672-H678.

49. Frank D.U., Horstman D.J., Morris G.N., Johns R.A., Rich G.F. Regulation of the endogenous NO pathway by prolonged inhaled NO in rats // J. Appl. Physiol. 1998. V. 85. P. 1070-1078.

50. Freeman B. Free radical chemistry of nitric oxide. Looking at the dark side // Chest. 1994. V. 105(3 Suppl). P. 79S-84S.

51. Friebe A., Miillershausen F., Smolenski A., Walter U., Schultz G., Koesling D. YC-1 potentiates NO- and СО-induced cGMP effects in human platelets // Mol. Pharmacol. 1998. V. 54. P. 962-967.

52. Friebe A., Schultz G., Koesling D. Stimulation of soluble guanylyl cyclase by superoxide dismutase is mediated by NO // Biochem. J. 1998. V. 335. P. 527-531.

53. Friebe A. and Kosling D. Regulation of nitric oxide-sensitive guanylyl cyclase // Circ. Res. 2003. V. 93. P. 96-105.

54. Fullerton D.A., Hahn A.R., Mclnture R.C. Mechanistic imbalance of pulmonary vasomotor control in progressive lung injury // Surgery. 1996. V. 119. P. 98-103.

55. Galie N., Manes A., Branzi A. Prostanoids for pulmonary arterial hypertension. Am. J. Respir. Med. 2003. V. 2(2). P. 123-137.

56. Galinier M., Rouge P., Fourcade J., Senard J.-M. Lack of haemodynamic effects of nitric oxide on post-capillary pulmonary hypertension induced by acute sino-aortic denervation // Br. J. Pharmacol. 1997. P. 120. P. 7-12.

57. Galle J., Zabel U., Hubner U., Hatzelmann A., Wagner В., Wanner C., Schmidt H.H. Effects of the soluble guanylyl cyclase activator, YC-1, on vascular tone, cyclic GMP levels and phosphodiesterase activity // Br. J. Pharmacol. 1999. V. 127. P. 195-203.

58. Ganey P.E., Roth R.A. 6-Ketoprostaglandin F1 alpha and thromboxane B2 in isolated, blood-perfused lungs from monocrotaline pyrrole-treated rats // J. Toxicol. Environ. Health. 1988. V. 23(1). P. 127-137.

59. Geng Y., Hansson G.K., Holme E. Interferon-gamma and tumor necrosis factor synergize to induce nitric oxide production and inhibit mitochondrial respiration in vascular smooth muscle cells // Circ. Res. 1992. V. 71. P. 1268-1276.

60. Gess В., Schricker K., Pfeifer M., Kurtz A. Acute hypoxia upregulates NOS gene expression in rats // Am. J. Physiol. Reg. Int. Сотр. Physiol. 1997. V. 273. P. R905-R910.

61. Giaid A. and Saleh D. Reduced expression of endothelial nitric oxide synthase in the lungs of patients with pulmonary hypertension // N. Engl. J. Med. 1995. V. 333. P. 214-221.

62. Giardino I.; Fard A.K.; Hatchell D.L.; Brownlee M. Aminoguanidine inhibits reactive oxygen species formation, lipid peroxidation, and oxidant-induced apoptosis // Diabetes. 1998. V. 47(7). P. 1114-1120.

63. Griscavage J.M., Hobbs A.J., Ignarro L.J. Negative modulation of nitric oxide synthase by nitric oxide and nitroso compounds // Adv. Pharmacol. 1995. V. 34. P. 215-234.

64. Guillemin K. and Krasnow M.A. The hypoxic response: huffing or HIFing //Cell. 1997. V. 87. P. 9-12.

65. Hampl V., Archer S.L., Nelson D.P., Weir E.K. Chronic EDRF inhibition and hypoxia: effects on pulmonary circulation and systemic blood pressure // J. Appl. Physiol. 1993. V. 75. P. 1748-1757.

66. Hampl V. and Herget J. Role of nitric oxide in the pathogenesis of chronic pulmonary hypertension // Physiol. Rev. 2000. V. 80(4). P. 1337-1372.

67. Hecker M., Mulsch A., Bassenge E., Busse R. Vasoconstriction and increased flow: two principal mechanisms of shear stress-dependent endothelial autacoid release // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 1993. V. 265. P. H828-H833.

68. Heinzel В., John M., Klatt P., Bohme E., Mayer B. Ca2+/calmodulin-dependent formation of hydrogen peroxide by brain nitric oxide synthase //Biochem. J. 1992. V. 281. P. 627-630.

69. Herget J., Novotna J., Bibova J., Hampl V., Povyshilova V. Hypoxic pulmonary hypertension in rats is inhibited by antioxidant, N-acetyl cystein // Physiol. Res. 1999. V. 48. P. 54-57.

70. Herget J., Wilhelm J., Novotna J., Eckhardt A., Vytashek R., Mrazkova L., Oshtadal M. A possible role of the oxidant tissue injury in the development of hypoxic pulmonary hypertension // Physiol. Res. 2000. V. 49. P. 493-501.

71. Hill N.S., Warburton R.R., Pietras L., Klinger J.R. Nonspecific endothelin-receptor antagonist blunts monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats // J. Appl. Physiol. 1997. V. 83(4). P. 1209-1215.

72. Hilliker K.S., Roth R.A. Increased vascular responsiveness in lungs of rats with pulmonary hypertension induced by monocrotaline pyrrole // Am. Rev. Respir. Dis. 1985. V. 273. P. 46-50.

73. Hobbs A. H., Higgs A., Moncada S. Inhibition of nitric oxide synthase as a potential therapeutic target // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1999. V. 39. P. 191-220.

74. Hoeper M.M., Taha N., Bekjarova A., Gatzke R., Spiekerkoetter E. Bosentan treatment in patients with primary pulmonary hypertension receiving nonparenteral prostanoids. Eur. Respir. J. 2003. V. 22(2). P. 330-334.

75. Hofmann F., Ammendola A., Schlossmann J. Rising behind NO: cGMP-dependent protein kinases // J. Cell. Sci. 2000. V. 113. P. 1671-1676.

76. Hong H-J., Loh S-H., Yen M-H. Suppression of the development of hypertension by the inhibitor of iNOS // Br. J. Pharm. 2000. V. 131. P. 631-637.

77. Hoorn C.M. and Roth R.A. Monocrotaline pyrrole-induced changes in angiotensin-converting enzyme activity of cultured pulmonary artery endothelial cells // Br. J. Pharmacol. 1993. V. 110. P. 597-602.

78. Hoorn CM and Roth RA. Monocrotaline pyrrole-induced changes in angiotensin-converting enzyme activity of cultured pulmonary artery endothelial cells // Br. J. Pharmacol. 1993. V. 110(2). P. 597-602.

79. Hopkins N. and McLoughlin P. The structural basis of pulmonary hypertension in chronic lung disease: remodelling, rarefaction or angiogenesis? // J. Anat. 2002. V. 201 (4). P. 335-348.

80. Ни C.T., Chang K.C., Wu C.Y., Chen H.I. Acute effects of nitric oxide blockade with L-NAME on arterial haemodynamics in the rat. Br. J. Pharmacol. 1997. V. 122(6). P. 1237-1243.

81. Huang K.L. and Lin Y.C. Activation of complement and neutrophils increases vascular permeability during air embolism // Aviat. Space Environ. Med. 1997. V. 68(4). P. 300-305.

82. Igari H., Tatsumi K, Sugito K., Kasahara Y., Saito M., Tani Т., Kimura H., Kuriyama T. Role of EDRF in pulmonary circulation during sustained hypoxia // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1998. V. 31. P. 299-305.

83. Ihm S.H., Yoo H.J., Park S.W., Ihm J. Effect of aminoguanidine on lipid peroxidation in streptozotocin-induced diabetic rats // Metabolism. 1999. V. 48(9). P. 1141-1145.

84. Irodova N.L., Lankin V.Z., Konovalova G.K., Kochetov A.G., Chazova I.E. Oxidative stress in patients with primary pulmonary hypertension // Bull. Exp. Biol. Med. 2002. V. 133(6). P. 580-582.

85. Isaacson T.C., Hampl V., Weir E.K., Nelson D.P., Archer S.L. Increased endothelium-derived nitric oxide in hypertensive pulmonary circulation of chronically hypoxic rats // J. Appl. Physiol. 1994. V. 76. P. 933-940.

86. Itoh Т., Nagaya N., Fujii Т., Iwase Т., Nakanishi N., Hamada K., Kangawa K., Kimura H. A combination of oral sildenafil and beraprost ameliorates pulmonary hypertension in rats // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2004. V. 169(1). P. 34-8.

87. Jakus V., Hrnciarova M., Carsky J., Krahulec В., Rietbrock N. Inhibition of nonenzymatic protein glycation and lipid peroxidation by drugs with antioxidant activity // Life Sci. 1999. V. 65(18-19). P. 1991-1993.

88. Jones R.D. and Morice A.H. Hydrogen peroxide an intracellular signal in the pulmonary circulation: involvement in hypoxic pulmonary vasoconstriction // Pharm. Ther. 2000. V. 88. P. 153-161.

89. Kagota S., Tamashiro A., Yamaguchi Y., Sugiura R., Kuno Т., Nakamura K., Kunitomo M. Downregulation of vascular soluble guanylate cyclase induced by high salt intake in spontaneously hypertensive rats // Br. J. Pharmacol. 2001. V. 134. P. 737-744.

90. Kang K.K., Ahn G.J., Sohn Y.S., Ahn B.O., Kim W.B. DA-8159, a new PDE5 inhibitor, attenuates the development of compensatory right ventricular hypertrophy in a rat model of pulmonary hypertension // J. Int. Med. Res. 2003. V. 31(6). P. 517-528.

91. Kantrow S.P., Huang Y.C., Whorton A.R., Grayck E.N., Knight J.M., Millington D.S., Piantadosi C.A. Hypoxia inhibits nitric oxide synthesis in isolated rabbit lung // Am. J. Physiol. 1997. V. 272(6 Pt 1). P. LI 167-L1173.

92. Karamsetty V.S.N.M.R., Maclean M.R., Mccoulloch K.M., Kane K.A., Wadsworth R.M. Hypoxic constrictor response in the isolated pulmonary artery from chronically hypoxic rats // Respir. Physiol. 1996. V. 105. P. 85-93.

93. Kato Y., Iwase M., Kanazawa H., Kawata N. Progressive development of pulmonary hypertension leading to right ventricular hypertrophy assessed by echocardiography in rats // Exp. Anim. 2003. V. 52(4). P. 285-294.

94. Kay J.M., Keane P.M., Suyama K.L. Pulmonary hypertension induced in rats by monocrotaline and chronic hypoxia pulmonary hypertension in rats // J. Appl. Physiol. 1985. V. 75. P. 1615-1623.

95. Kedziora-Kornatowska К. and Luciak M. Effect of aminoguanidine on lipid peroxidation and activities of antioxidant enzymes in the diabetic kidney. Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. V. 46(3). P. 577-583.

96. Kedziora-Kornatowska K.Z., Luciak M., Blaszczyk J., Pawlak W. Effect of aminoguanidine on erythrocyte lipid peroxidation and activities of antioxidant enzymes in experimental diabetes // Clin. Chem. Lab. Med. 1998. V. 36(10). P. 771-775.

97. Kim S.Z., Kyung W.C., Suhn H. K. Modulation of endocardial natriuretic peptide receptors in right ventricular hypertrophy // Am. J. Physiol. 1999. V. 277 (Heart Circ. Physiol. 46). P. H2280-H2289.

98. Klinger J.R., Petit R.D., Warburton R.R., Wrenn D.S., Arnal F., Hill N.S. Neutral endopeptidase inhibition attenuates development of hypoxic pulmonary hypertension in rats // J. Appl. Physiol. 1993. V. 75(4). P. 1615-1623.

99. Kloss S., Bouloumie A., Mulsch A. Aging and chronic hypertension decrease expression of rat aortic soluble guanylyl cyclase // Hypertension. 2000. V. 35. P. 43- 47.

100. Kloss S., Furneaux H., Mulsch A. Post-transcriptional regulation of soluble guanylyl cyclase expression in rat aorta // J. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 2377-2383.

101. Knirsch W., Eiselt M., Nurnberg J., Haas N.A., Berger F., Dahnert I., Uhlemann F., Lange P.E. Pulmonary plasma catecholamine levels and pulmonary hypertension in congenital heart disease. // Z. Kardiol. 2002. V. 91(12). P. 1035-1043.

102. Kodama K. and Adachi H. Improvement of mortality by long-term E4010 treatment in monocrotaline-induced pulmonary hypertensive rats // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999. V. 290(2). P. 748-752.

103. Kooy N.W. and Royall J.A. Agonist-induced peroxynitrite production from endothelial cells // Arch. Biochem. Biophys. 1994. V. 310. P. 352359.

104. Kourembanas S., Morita Т., Liu Y.X., Christou H. Mechanisms by which oxygen regulates gene expression and cell-cell interaction in the vasculature // Kidney Int. 1997. V. 51. P. 438-443.

105. Krumenacker J.S., Hyder S.M., Murad F. Estradiol rapidly inhibits soluble guanylyl cyclase expression in rat uterus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V. 98. P. 717-722.

106. Kuchan M.J., Jo H., Frangos J.A. Role of G proteins in shear stress-mediated nitric oxide production by endothelial cells // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1994. V. 267. P. C753-C758.

107. Lai Y.L., Thacker A.A., Diana J.N. Hypoxemia and elevated tachykinins in rat monocrotaline pneumotoxicity // Lung. 1996. V. 174. P. 195-203.

108. Lai Y.L., Wu H.D., Chen C.F. Antioxidants attenuate chronic hypoxic pulmonary hypertension // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1998. V. 32(5). P. 714-720.

109. Langleben D., Barst R.J., Badesch D.M., Groves B.M. Continious infusion of epoprostenol improves the net balance between pulmonary endothelin-1 clearance and release in primary pulmonary hypertension // Circulation. 1999. V. 99. P. 3266-3271.

110. Langleben D., Fox R.B., Jones R.C., Reid L.M. Effects of dimethylthiourea on chronic hypoxia-induced pulmonary arterial remodelling and ventricular hypertrophy in rats // Clin. Invest. Med. 1989. V. 12(4). P. 235-240.

111. Le Cras T.D., Xue C., Rengasamy A., Johns R.A. Chronic hypoxia upregulates endothelial and inducible NO synthase gene and protein expression in rat lung // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1996. V. 270. P. L164-L170.

112. Lee S.L., Fanburg B.L. Glycolytic activity and enhancement of serotonin uptake by endothelial cells exposed to hypoxia/anoxia // Circ. Res. 1987. V. 62. P. 653-658.

113. Levy R.D., Langleben D., Cernacek P., Stewart D.J. Increased plasma levels of the endothelium-derived vasoconstrictor endotelin in pulmonary gipertension marker or mediator of disease // Am.Rev.Resp.Dis. 1990. V. 141. P. 889-891

114. Li H., He J., Lee S., Quan C., Ding J. The study of the relationship between the activity of phospholipase A2 and acute hypoxic pulmonary arterial pressure // Ann. 1st. Super. Sanita. 1997. V. 33(2). P. 273-277.

115. Li W.Y., Che D.Y. Monocrotaline-induced structural remodeling of the intra-acinar pulmonary arteries and pulmonary hypertension // J. Tongji Med. Univ. 1992. V. 12. P. 227-233.

116. Li Z.-H., Zhang F.-Q., Song J.-C., Mei Q.-B., Zhao D.-H. Therapeutic effects of DCDDP, a calcium channel blocker, on chronic pulmonary hypertension in rat // J. Appl. Physiol. 2002. V. 92. P. 997-1003.

117. Lincoln T.M. Cyclic GMP and mechanisms of vasodilation // Pharmacol. Ther. 1989. V. 41. P. 479 -502.

118. Liu Q., Wiener C.M., Flavahan N.A. Superoxide and endothelium-dependent constriction to flow in porcine small pulmonary arteries // Br. J. Pharmacol. 1998. V. 124. P. 331-336.

119. MacLean M.R., Sweeney G., Baird M., McCulloch K.M, Houslay M., Morecroft I. 5 -Hydroxytryptamine receptors mediating vasoconstriction in pulmonary arteries from control and pulmonary hypertensive rats // Br. J. Pharmacol. 1996. V. 119(5). P. 917-930.

120. MacLean M.R. and McCulloch K.M. Influence of applied tension and nitric oxide on responses to endothelins in rat pulmonary resistance arteries: effect of chronic hypoxia // Br. J. Pharmacol. 1998. V. 123. P. 991-999.

121. MacLean M.R. Endothelin-1 and serotonin: mediators of primary and secondary pulmonary hypertension? // J.Lab.Clin.Med. 1999. V. 134. P. 105-114.

122. MacMicking J., Xie Q., Nathan C. Nitric oxide and macrophage function // Annu Rev. Immunol. 1997. V. 15. P. 323-350.

123. MacMillan-Crow L.A., Crow J.P., Kerby J.D., Beckman J.S., Thompson J.A. Nitration and inactivation of manganese super-oxide dismutase in chronic rejection of human renal allografts // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93(21). P. 11853-11858.

124. Madden J. A., Keller P.A., Choy J.S. L-arginine-related resposes topressure and vasoactive agents in monocrotaline-treated rat pulmonary arteries // J. Appl. Physiol. 1995. V. 79. P. 589-593.

125. Manukhina E.B., Malyshev I.Y., Smirin B.V., Mashina S.Y., Saltykova V.A., Vanin A.F. Production and storage of nitric oxide in adaptation to hypoxia//Nitric Oxide. 1999. V. 3(5). P. 393-401.

126. Manukhina E.B., Mashina S.Yu., Smirin B.V., Lyamina N.P., Senchikhin V.N., Vanin A.F., Malyshev I.Yu. Role of nitric oxide in adaptation to hypoxia and adaptive defense // Physiol. Res. 2000. V. 49(1). P. 89-97.

127. Marczin N., Ryan U.S., Catravas J.D. Effects of oxidant stress on endothelium-derived relaxing factor-induced and nitrovasodilator-induced cGMP accumulation in vascular cells in culture // Circ. Res. 1992. V. 70(2). P. 326-340.

128. Marczin N., Ryan U.S., Catravas J.D. Endothelial cGMP does not regulate basal release of endothelium-derived relaxing factor in culture // Am. J.m Physiol. 1992. V. 263(1 Pt 1): P. L113-L121.

129. Maruyama J. and Maruyama K. Impaired nitric oxide-dependent responses and their recovery in hypertensive pulmonary arteries of rats // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 1994. V. 266. P. H2476-H2488.

130. Maruyama J., Yokochi A., Maruyama K., Nosaka S. Acetylcholine induced endothelium-derived contracting factor in hypoxic pulmonary hypertensive rats. J. Appl. Physiol. 1999. V. 86. P. 1687-1695.

131. Mashina S.Y., Vanin A.F., Serezhenkov V.A., Kubrina L.N., Malenkova I.V., Malyshev I.Y., Manukhina E.B. Detection and evaluation of NO stores in awake rats // Bull. Exp. Biol. Med. 2003. V. 136(1). P. 26-29.

132. Mason N.A., Springall D.R., Burke M., Pollock J., Mikhail G., Yacoub M.H., Polak J.M. High expression of endothelial nitric oxide synthase in plexiform lesions of pulmonary hypertension // J. Pathol. 1998. V. 185. P.313.318.

133. Mateo A.O. and Nano M.A.A. Nitric oxide reactivity and mechanisms involved in its biological effects // Pharm. Res. 2000. V. 42(5). P. 421427.

134. Mathew R., Yuan N., Rosenfeld L., Gewitz M.H., Kumar A. Effects of monocrotaline on endothelial nitric oxide synthase expression and sulfhydryl levels in rat lungs // Heart Dis. 2002. V. 4(3). P. 152-158.

135. Mathew R., Zeballos G.A. Role of nitric oxide and endotelin-1 in monocrataline-induced pulmonary hypertension in rats // Cardiovasc. Res. 1995. V. 30. P. 739-746.

136. Mattson D.L., Maeda C.Y., Bachman T.D., Cowley A.W. Inducible nitric oxide synthase and blood pressure // Hypertension. 1998 V. 31 part 1. P. 15-20.

137. Mclntyre R.C., Baneijee A., Hahn A.R., Agrafojo J., Fullerton D.A. Selective inhibition of cyclic adenosine monophosphate-mediated pulmonary vasodilation by acute hypoxia // Surgery. 1995. V. 117(3). P.314.318.

138. Melkumyants A.M., Balashov S.A., Khayutin V.M. Control of arterial lumen by shear stress on endothelium I I News Physiol. Sci. 1995. V. 10. P. 204-210.

139. Michelakis E., Tymchak W., Lien D., Webster L., Hashimoto K., Archer S. Oral sildenafil is an effective and specific pulmonary vasodilator in

140. W patients with pulmonary arterial hypertension: comparison with inhalednitric oxide // Circulation. 2002. V. 21.105(20). P. 2398-403.

141. Mikami O., Nagaoka I., Hasunuma K., Takahashi H. Angiotensin II receptors in a rat model of hypobaric hypoxic pulmonary hypertension. (статья на японском языке) // Nihon Kyobu Shikkan Gakkai Zasshi. 1996. V. 34(2). P. 186-193.

142. Miranda K.M., Espey M.G., Wink D.A. A rapid, simple spectrophotometric method for simultaneous detection of nitrate and nitrite // Nitric Oxide: Biology and Chemistry. 2001. V. 5(1). P. 62-71.

143. Miyata M., Sakuma F., Yoshimura A., Ishikawa H., Nishimaki Т., Kasukawa R. Pulmonary hypertension in rats. 1. Role of bromodeoxyuridine-positive mononuclear cells and alveolar macrophages // Int. Arch. Allergy Immunol. 1995. V. 108(3). P. 281-286.

144. Miyauchi Т., Yorikane R., Sakai S., Sakurai T. Contribution of4 endogenous endothelin-1 to the progression of cardio-pulmonaryihypertension. Circ. Res. 1993. V. 73. P. 887-897.

145. Mohazzab-H. K.M., Fayngersh R.P., Wolin M.S. Nitric oxide inhibits pulmonary artery catalase and H202-associated relaxation // Am. J. Physiol. 1996. V. 271(5 Pt 2). P. H1900-H1906.

146. Moncada S., Palmer R.M.J, and Higgs A. Biosynthesis of nitric oxide from L-arginine. A pathway for the regulation of cell function and communication// Biochem. Pharmacol. 1989. V. 38, P. 1709-1715.

147. Moncada S., Rees D.D., Schulz R., Palmer R.M. Development and mechanism of a specific supersensitivity to nitrovasodilators after inhibition of vascular nitric oxide synthesis in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V. 88. P. 2166 -2170.

148. Morita K., Ogawa Y., Tobise K. Effect of endothelium of pulmonary artery vasoreactivity in monocrotaline-induced pulmonary hypertensive rats // Jpn. Circ. J. 1996. V. 42. P. 585-592.

149. Morrell N.W., Morris K.G., Stenmark K.R. Role of angiotensin-converting enzyme and angiotensin II in development of hypoxic pulmonary hypertension // Am. J. Physiol. 1995. V. 269(4 Pt 2). P. HI 186-H1194.

150. Morrell N.W., Danilov S.M., Satyan K.B., Morris K.G., Stenmark K.R. Right ventricular angiotensin converting enzyme activity and expression is increased during hypoxic pulmonary hypertension // Cardiovasc. Res. 1997. V. 34(2). P. 393-403.

151. Muramatsu M., Tyler R.C., Gutkowska J., Klinger J.R., Hill N.S., Rodman D.M., McMurtry I.F. Atrial natriuretic peptide accounts for increased cGMP in hypoxia-induced hypertensive rat lungs // Am. J. Physiol. 1997. V. 272(6 Pt 1). P. LI 126-L1132.

152. Nagata Т., Uehara Y., Нага K., Igarashi K., Hazama H., Hisada Т., Kimura K., Goto A., Omata M. Thromboxane inhibition and monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats // Respirology. 1997. V. 2(4). P. 283-289.

153. Nakazawa H., Hon M., Ozaki H., Karaki H. Mechanisms underlying theimpairment of endothelium-dependent relaxation in the pulmonary artery of monocrotaline-induced pulmonary hypertensive rats // Br. J. Pharmacol. 1999. V. 128(5). P. 1098-1104.

154. Nathan C.F. and Hibbs J.B. Role of nitric oxide synthesis in macrophage antimicrobial activity// Curr. Opin. Immunol. 1991. V. 3. P. 65-70.

155. Obst M., Bonartsev A., Gross V., Janke J., Muller D.N., Park J.-K., Kargel E., and Luft F.C. Nitric oxide synthase expression in AT2-receptor deficient mice after DOCA-salt. J. Am. Soc. Nephrol. 2004. (принята к публикации).

156. Oka M., Hasunuma К., Webb S.A., Stelzner T.J., Rodman D.M.,

157. McMurtry I.F. EDRF suppresses an unidentified vasoconstrictormechanism in hypertensive rat lungs // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1993. V. 264. P. L587-L597.

158. Oparil S., Chen S.J., Meng Q.C., Elton T.S., Yano M., Chen Y.F. Endothelin-A receptor antagonist prevents acute hypoxia-inducedpulmonary hypertension in the rat // Am. J. Physiol. 1995. V. 268(1 Pt 1). P. L95-L100.

159. Palmer R.M.J., Bridge L., Foxwell N.A., Moncada S. The role of nitric oxide in endothelial cell damage and its inhibition by glucocorticoids // Br. J. Pharmacol. 1992. V. 105. P. 11-12.

160. Papapetropoulos A., Abou-Mohamed G., Marczin N., Murad F., Caldwell R.W., Catravas J.D. Downregulation of nitrovasodilator-induced cyclic GMP accumulation in cells exposed to endotoxin or interleukin-1 // Br. J.

161. Pharmacol. 1996. V. 118. P. 1359-1366.

162. Pasquet J.P., Zou M.H., Ullrich V. Peroxynitrite inhibition of nitric oxide synthases//Biochimie. 1996. V. 78(8-9). P. 785-791.

163. Pfeifer M., Wolf K., Blumberg F.C., Eisner D., Muders F., Holmer S.R., Riegger G.A., Kurtz A. ANP gene expression in rat hearts during hypoxia // Pflugers Arch. 1997. V. 434(1). P. 63-69.

164. Pollman M.J., Yamada Т., Horiuchi M., Gibbons G.H. Vasoactive substances regulate vascular smooth muscle cell apoptosis. Countervailing influences of nitric oxide and angiotensin II // Circ. Res. 1996. V. 79. P.1 748-756.

165. Pou S., Pou W.S., Bredt D.S., Snyder S.H., Rosen GM. 1992. Generation of superoxide by purified brain nitric oxide synthase // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 24173-24176.

166. Price D.L., Rhett P.M., Thorpe S.R., Baynes J.W. Chelating activity of advanced glycation end-product inhibitors // J. Biol. Chem. 2001. V. 276 (52), P. 48967^48972.

167. Prie S., Stewart D.J., Dupuis J. Endotelin A receptor blockade improves nitric oxidemediated vasodilation in monocrotaline-induced pulmonary hypertension // Circulation. 1998. V. 97. P. 2169-2174.

168. Ranjan V., Xiao Z., Diamond S.L. Constitutive NOS expression in cultured endothelial cells is elevated by fluid shear stress // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 1995. V. 269. P. H550-H555.

169. Reckless J., Fleetwood G., Tilling L., Huber P. Changes in the caldesmon isoform content and intimal thickening in the rabbit carotid artery induced by a silicone elastomer collar // Arterioscler. Thromb. 1994. V. 14. P. 1837-1845.

170. Redmond E.M., Cahill P.A., Hodges R., Zhang S., Sitzmann J.V. Regulation of endothelin receptors by nitric oxide in cultured rat vascular smooth muscle cells // J. Cell. Physiol. 1996. V. 166(3). P. 469-479.

171. Resta T.C., Gonzales R.J., Dail W.G., Sanders T.C., Walker B.R. Selective upregulation of arterial endothelial nitric oxide synthase inф pulmonary hypertension // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1997. V.272. P. H806-H813.

172. Resta T.C., Chicoine L.G., Omdahl J.L., Walker B.R. Maintained upregulation of pulmonary eNOS gene and protein expression during recovery from chronic hypoxia // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1999 V. 276. P. H699-H708.

173. Resta T.C., O'Donaughy Th.L., Earley S., Chicoine L.G., Walker B.R. Unaltered vasoconstrictor responsiveness after iNOS inhibition in lungs from chronically hypoxic rats // Am. J. Physiol. 1999. V. 276 (Lung Cell. Mol. Physiol. 20). P. L122-L130.

174. Robbins I.M., Barst R.J., Rubin L.J., Gaine S.P., Price P.V., Morrow J.D., Christman B.W. Increased levels of prostaglandin D(2) suggest macrophage activation in patients with primary pulmonary hypertension // Chest. 2001. V. 120(5). P. 1639-1644.

175. Rodriguez-Iturbe В., Quiroz Y., Herrera-Acosta J., Johnson R.J., Pons H.A. The role of immune cells infiltrating the kidney in the pathogenesis of salt-sensitive hypertension // J. Hypertens. 2002. V. 20(Suppl 3). P. S9-S14.

176. Rodriguez-Iturbe В., Zhan C.D., Quiroz Y., Sindhu R.K., Vaziri N.D. % Antioxidant-rich diet relieves hypertension and reduces renal immuneinfiltration in spontaneously hypertensive rats // Hypertension. 2003. V. 41(2). P. 341-346.

177. Rubanyi G.M. and Polokoff M.A. Endothelins: molecular biology, biochemistry, pharmacology, physiology, and pathophysiology // Pharmacol. Rev. 1994. V. 46(3). P. 325-415.

178. Rubin L.J. Primary pulmonary hypertension // N. Engl. J. Med. 1997. V. 336. P. 111-117.

179. Ruetten H., Zabel U., Linz W., Schmidt H.H. Downregulation of soluble guanylyl cyclase in young and aging spontaneously hypertensive rats // Circ. Res. 1999. V. 85. P. 534-541.

180. Runo J.R. and Loyd J.E. Primary pulmonary hypertension // Lancet. 2003. V. 361(9368). P. 1533-1544.

181. Rutherford S., Johnson M.P., Curtain R.P., Griffiths L.R. Chromosome 17 and the inducible nitric oxide synthase gene in human essential hypertension // Hum. Genet. 2001. V. 109(4). P. 408-415.

182. Salceda S., Beck I., Srinivas V., Caro J. Complex role of protein phosphorylation in gene activation by hypoxia // Kidney Int. 1997. V. 51. V. 556-559.

183. Salvi S.S. Alfa-1-adrenergic hypothesis for pulmonary hypertension // Chest. 1999. V. 115. P. 1708-1719.

184. Sato K., Webb S., Tucker A., Rabinovitch M., O'Brien R.F., McMurtry I.F., Stelzner T.J. Factors influencing the idiopathic development of pulmonary hypertension in the fawn hooded rat // Am. Rev. Respir. Dis. 1992. V. 145(4 Pt 1). P. 793-797.

185. Sato K., Rodman D.M., McMurtry I.F. Hypoxia inhibits increased ETB receptor-mediated NO synthesis in hypertensive rat lungs // Am. J. Physiol. 1999. V. 276(4 Pt 1). P. L571-L581.

186. Scott J.A. and McCormack D.G. Selective in vivo inhibition of inducible nitric oxide synthase in a rat model of sepsis // J. Appl. Physiol. 1999. V. 86(5). P. 1739-1744.

187. Sessa W.C., Pritchard K., Seyedi N., Wang J., Hintze Т.Н. Chronic exercise in dogs increases coronary vascular nitric oxide production and endothelial cell nitric oxide synthase gene expression // Circ. Res. 1994. V. 74. P. 349-353.

188. Schaul P.W. Regulation of endothelial nitric oxide synthase: location, location, location // Annu. Rev. Physiol. 2002. V. 64. P. 749-774.

189. Shaul P.W., Muntz K.H., Buja L.M. Comparison of beta adrenergic receptor binding characteristics and coupling to adenylate cyclase in rat pulmonary artery versus aorta // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1990. V. 252(1). P. 86-92.

190. Shaul P.W., Muntz K.H., DeBeltz D., Buja L.M. Effects of prolonged hypoxia on adenylate cyclase activity and beta-adrenergic receptors in pulmonary and systemic arteries of the rat // Circ. Res. 1990. V. 66(6). P. 1526-1534.

191. Shaul P.W., Kinane В., Farrar M.A., Buja L.M., Magness R.R. Prostacyclin production and mediation of adenylate cyclase activity in the pulmonary artery. Alterations after prolonged hypoxia in the rat // J. Clin. Invest. 1991. V. 88(2). P. 447-455.

192. Sheehy A.M., Burson M.A., Black S.M. Nitric oxide exposure inhibits endothelial NOS activity but not gene expression: a role for superoxide // Am. J. Physiol. 1998. V. 274(5 Pt 1). P. L833-L841.

193. Smith R.M., Brown T.J., Roach A.G., Williams K.I., Woodward B. Evidence for endothelin involvement in the pulmonary vasoconstrictor response to systemic hypoxia in the isolated rat lung // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. V. 283(2). P. 419-425.

194. Steudel W., Watanabe M., Dikranian K., Jacobson M., Jones R.C. Expression of nitric oxide synthase isoforms (NOS II and NOS III) in adult rat lung in hyperoxic pulmonary hypertension // Cell. Tissue Res. 1999. V. 295(2). P. 317-329.

195. Stoclet J.C., Muller В., Gyorgy К., Andriantsiothaina R., Kleschyov A.L. The inducible nitric oxide synthase in vascular and cardiac tissue // Eur. J. Pharmacol. 1999. V. 375(1-3). P. 139-155.

196. Stoclet JC, Muller B, Gyorgy K, Andriantsiothaina R, Kleschyov AL. Overproduction of nitric oxide in pathophysiology of blood vessels. 1997

197. Suematsu M., Suzuki H., Delano F.A., Schmid-Schonbein G.W. The inflammatory aspect of the microcirculation in hypertension: oxidative stress, leukocytes/endothelial interaction, apoptosis // Microcirculation. 2002. V. 9(4). P. 259-276.

198. Sun R., Wang A., Yan Y., Zhang H. The role of activated neutrophils and free radical in the pathogenesis of pulmonary hypertension // Chin. Med. Sci. J. 1993. V. 8(1). P. 15-19.

199. Takaya J., Teraguchi M., Nogi S., Ikemoto Y., Kobayashi Y. Relation between plasma nitrate and mean pulmonary arterial pressure in ventricular septal defect // Arch. Dis. Child. 1998. V. 79. P. 498-501.

200. Tanaka Y., Bernstein M.L., Mecham R.P. Site-specific responses to monocrotaline-induced vascular injury : evidence for two distinct mechanisms of remodelling // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1996. V. 15. P. 390-397.

201. Teng C.M., Wu C.C., Ко F.N., Lee F.Y., Kuo S.C. YC-1, a nitric oxide-independent activator of soluble guanylate cyclase, inhibits platelet-rich thrombosis in mice // Eur. J. Pharmacol. 1997. V. 320. P. 161-166.

202. Thomassen M.J. and Kavuru M.S. Human alveolar macrophages and monocytes as a source and target for nitric oxide // Int. Immunopharmacol. 2001. V. 1(8). P. 1479-1490.

203. Thompson J.S. and Morice A.H. Neutral endopeptidase inhibitors and the pulmonary circulation // Gen. Pharmacol. 1996. V. 27(4). P. 581-585.

204. Tyler R.C., Muramatsu M., Abman S.H., Stelzner T.J., Rodman D.M., Bloch K.D., McMurtry I.F. Variable expression of endothelial NO synthase in three forms of rat pulmonary hypertension // Am. J. Physiol. 1999. V. 276. P. L297-L303.

205. Vapaatalo H. and Mervaala E. Clinically important factors influencing endothelial function // Med. Sci. Monit. 2001. V. 7(5). P. 1075-1085.

206. Vaziri N.D., Ni Zh., Oveisi F. Upregulation of renal and vascular nitric oxide synthase in young spontaneously hypertensive rats // Hypertension. 1998. V. 31. P. 1248-1254.

207. Vlasova M.A., Vanin A.F., Muller В., Smirin B.V., Malyshev I.Y., Manukhina E.B. Detection and description of various stores of nitric oxide store in vascular wall // Bull. Exp. Biol. Med. 2003. V. 136(3). P. 226230.

208. Vouldoukis I., Riveros-Moreno V., Dugas В., Ouaaz F., Becherel P., Debre P., Moncada S., Mossalayi M.D. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 7804-7808.

209. Waldman S.A., Murad F. Cyclic GMP synthesis and function // Pharmacol. Rev. 1987. V. 39. P. 163-196.

210. Waldman S.A., Rapoport R.M., Ginsburg R., Murad F. Desensitization to nitroglycerin in vascular smooth muscle from rat and human // Biochem. Pharmacol. 1986. V. 35. P. 3525-3531.

211. Wang G.L., Jiang B.H., Rue E.A., Semenza G.L. Hypoxia-inducible factor 1 is a basic-helix-loop-helix-PAS heterodimer regulated by cellular 02 tension // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 5510-5514.

212. Wanstall J.C., O'Donnell S.R. Endothelin and 5-hydroxytryptamine on rat pulmonary artery in pulmonary hypertension // Eur. J. Pharmacol. 1990. V. 176. P. 159-168.

213. Wanstall J.C., Hughes I.E., O'Donnell S.R. Reduced relaxant potency of nitroprusside on pulmonary artery preparations taken from rats during the development of hypoxic pulmonary hypertension // Br. J. Pharmacol. 1992. V. 107. P. 407-413.

214. Wegener J.W., Nawrath H. Differential effects of isoliquiritigenin and YC-1 in rat aortic smooth muscle // Eur. J. Pharmacol. 1997. V. 3203. P. 89-91.

215. Weinberger В., Fakhrzadeh L., Heck D.E., Laskin J.D., Gardner C.R. Inhaled nitric oxide primes lung macrophages to produce reactive oxygen and nitrogen intermediates // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998. V. 158(3). P. 931-938.

216. West J.В. (ed.). Best and Taylor's physiological basis of medical practice. 12th edition. Williams and Wilkins, Baltimore, USA, 1990.

217. Whorton A.R., Simonds D.B., Piantadosi C.A. Regulation of nitric oxide synthesis by oxygen in vascular endothelial cells // Am. J. Physiol. 1997. V. 272(6 Ptl). P. LI 161-L1166.

218. Wilson D.W., Segall H.J., Pan L.C., Lame M.W. Mechanisms and pathology of monocrotaline pulmonary toxicity // Critical. Rev. Toxicol. 1992. V. 22. P. 307-325.

219. Winlaw D.S., Smythe G.A., Keogh A.M., Schyvens C.G., Spratt P.M., Macdonald P.S. Increased nitric oxide production in heart failure // Lancet. 1994. V. 344. P. 373-374.

220. Winlaw DS, Smythe GA, Keogh AM, Schyvens CG, Spratt PM, Macdonald PS (1995). Nitric oxide production and heart failure. Lancet 345: 390-391.

221. Winter R.J., Zhao L., Krausz Т., Hughes J.M. Neutral endopeptidase 24.11 inhibition reduces pulmonary vascular remodeling in rats exposed to chronic hypoxia// Am. Rev. Respir. Dis. 1991. V. 144(6). P. 1342-1346.

222. Wolff D.J. and Lubeskie A. Aminoguanidine is an isoform-selective, mechanism-based inactivator of nitric oxide synthase // Arch. Biochem. Biophys. 1995. V. 316. P. 290-301.

223. Woodman C.R., Muller J.M., Rush J.W.E., Laughlin M.H., Price E.M. Flow regulation of ecNOS and Cu/Zn SOD mRNA expression in porcine coronary arterioles // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1999. V. 276. P. H1058—H1063.

224. Xiao Z., Zhang Z., Diamond S.L. Shear stress induction of the endothelial nitric oxide synthase gene is calcium-dependent but not calcium-activated //J. Cell Physiol. 1997. V. 171. P. 205-211.

225. Xue C., Rengasamy A., Le Cras T.D., Koberna P.A., Dailey G.C., Johns R.A. Distribution of NOS in normoxic vs. hypoxic rat lung: upregulation of NOS by chronic hypoxia // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1994. V. 267. P. L667-L678.

226. Xue C. and Johns R.A. Endothelial nitric oxide synthase in the lungs of patients with pulmonary hypertension // N. Engl. J. Med. 1995. V. 333. P. 1642-1644.

227. Xue C., Reynolds P.R., Johns R.A. Developmental expression of NOS isoforms in fetal rat lung: implications for transitional circulation and pulmonary angiogenesis // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1996. V. 270. P. L88-L100.

228. Xue C. and Johns R.A. Upregulation of nitric oxide synthase corre-lates temporally with onset of pulmonary vascular remodeling in the hypoxic rat // Hypertension. 1996. V. 28. P. 743-753.

229. Yildiz G., Demiryurek А. Т., Sahin-Erdemli I., Kanzik I. Comparison of antioxidant activities of aminoguanidine, methylguanidine and guanidine by luminol-enhanced chemiluminescence // Br. J. Pharmacol. 1998. V. 124(5). P. 905-910.

230. Yorikane R., Miyauchi Т., Sakai S., Sakurai Т., Yamaguchi I., Sugishita Y., Goto K.J. Altered expression of ETB-receptor mRNA in the lung of rats with pulmonary hypertension // Cardiovasc. Pharmacol. 1993. V. 22(Suppl 8). P. S336-S338.

231. Yu A.Y., Frid M.G., Shimoda L.A., Wiener C.M., Stenmark K., Semenza G.L. Temporal, spatial, and oxygen-regulated expression of hypoxia-inducible factor-1 in the lung // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1998. V. 275. P. L818-L826.

232. Zakhary R., Gaine S.P., Dinerman J.L. Nitric oxide exposure inhibits endothelial NOS activity but not gene expression: a role for superoxide. Am. J. Physiol. 1998. V. 93. P. L833-L841.

233. Zhao L., al-Tubuly R., Sebkhi A., Owji A.A., Nunez D.J., Wilkins M.R. Angiotensin II receptor expression and inhibition in the chronically hypoxic rat lung // Br. J. Pharmacol. 1996. V. 119(6). P. 1217-1222.

234. Zhao L., Long L., Morrell N.W., Wilkins M.R. NPR-A-Deficient mice show increased susceptibility to hypoxia-induced pulmonary hypertension // Circulation. 1999. V. 99(5). P. 605-607.

235. Zhao Y., Brandish P.E., Ballou D.P., Marietta M.A. A molecular basis for nitric oxide sensing by soluble guanylate cyclase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V. 96. P. 14753-14758.

236. Zhao Y.J., Wang J., Rubin L.J, Yuan X.J. Inhibition of K(V) and K(Ca) channels antagonizes NO-induced relaxation in pulmonary artery // Am. J. Physiol. 1997. V. 276. P. H904-H912.

237. Zhuo M, Hawkins R.D. Long-term depression: a learning-related type of synaptic plasticity in the mammalian central nervous system // Rev. Neurosci. 1995. V. 6. P. 259 -277.

238. Zou M.H., Leist M., Ullrich V. Selective nitration of prostacyclin synthase and defective vasorelaxation in atherosclerotic bovine coronary arteries // Am. J. Pathol. 1999. V. 154(5). P. 1359-1365.

Информация о работе

Бонарцев, Антон Павлович
кандидата биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.13

Диссертация

Анализ участия индуцибельной изоформы NO-синтазы в реакции повышения давления в малом круге кровообращения, вызванной дисфункцией эндотелия - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы