Анализ изменений агрегации эритроцитов, адгезии лейкоцитов и суспензионной стабильности крови в физиологических и патофизиологических условиях

Турова, Елена Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ изменений агрегации эритроцитов, адгезии лейкоцитов и суспензионной стабильности крови в физиологических и патофизиологических условиях
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Анализ изменений агрегации эритроцитов, адгезии лейкоцитов и суспензионной стабильности крови в физиологических и патофизиологических условиях"

Направахрукописи

ТУРОВА Елена Викторовна

АНАЛИЗ ИЗМЕНЕНИЙ АГРЕГАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ, АДГЕЗИИ ЛЕЙКОЦИТОВ И СУСПЕНЗИОННОЙ СТАБИЛЬНОСТИ КРОВИ В ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ И ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ

Специальность 03.00.13. - Физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ярославль - 2005

Диссертационная работа выполнена в Ярославском государственном педагогическом университете им. К. Д. Ушинского

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор А.В. Муравьев

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.П. Михайлов

кандидат биологических наук В Д. Горичева

Ведущая организация:

Ивановская государственная медицинская академия

Защита состоится «_» марта 2005 года в «_» часов на заседании

диссертационного Совета Д.212.307.02 при Ярославском государственном педагогическом университете им. К. Д. Ушинского по адресу: 150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, 108.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ярославского государственного педагогического университета им. К. Д. Ушинского.

Автореферат разослан «_»_2005 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук,

доцент И. А. Тихомирова

ОБШДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Исследование микрогемоциркуляции включает не только анализ состояния микрососудистых сетей, но и изучение микрореологических свойств клеток крови (A.M. Чернух и др., 1975; К.Каро и др., 1981; П. Джонсон, 1982; В. Zweifach, 1992). Именно агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов являются теми важными внутрисосудистыми феноменами, которые существенно влияют на микроциркуляцию крови (P. Johnson, 1999; G. Schmid-Schoenbein, 2002).

Феномен адгезии лейкоцитов заключается в их контакте с эндотелиальными клетками сосудистой стенки (L. Grant, 1973; T.J. Williams et. al., 1984; G. Thurston et al., 2000). Процессам адгезии предшествует активация клеток в ответ на действие сигнальных молекул (И.И. Долгушин и др., 1986; Ю.М. Захарова и др.,1995). Внешним проявлением процесса активации лейкоцитов является образование псевдоподий, их перемещение из центральной части сосуда в краевой пул и роллинг по эндотелию с последующей фиксацией на стенке сосуда (G. Schmid-Schoenbein et al., 1995). Активация наиболее представительной части популяции лейкоцитов крови -нейтрофилов может вести к их аккумуляции с последующей облитерацией сосудов и повреждением эндотелия (N.T. Luu, et al., 1998).

Другой внутрисосудистый феномен - агрегация эритроцитов в настоящее время рассматривается не только как патогенетический механизм развития заболеваний или их осложнений (В.А. Люсов и др., 1979; Е.И. Соколов и др., 1996; ВА. Шабанов и др., 1997; А.В. Муравьев и др., 1998; Н.А. Романов и др., 1999), но отмечается и ее адаптивная роль, особенно в условиях стресса и мышечной активности (А.А. Мельников, А.Д. Викулов, 2002; Р. Johanson, 1995; Н. Meiselman et. al., 2002).

Активировать лейкоциты могут многие факторы, в том числе и такие медиаторы симпатоадреналовой системы как адреналин и норадреналин (П.В. Михайлов, 2004). Имеются данные, свидетельствующие о том, что эндокринные и паракринные сигнальные молекулы - катехоламины, ингибиторы фосфодиэстераз, стимуляторы аденилатциклазной системы, Са2+ влияют на микрореологические свойства эритроцитов. (А.В. Муравьев, и др., 2002,2003; Dowd et al.,1981; Langer et al.,1995; Hilario et al.,1999; J.F. Horga et al., 2000). С другой стороны, имеются многочисленные свидетельства существенного изменения микрореологических свойств эритроцитов - их агрегации и деформации при патологических состояниях (В.В. Якусевич, 2000; А.В.Замышляев, 2002; R. Amani, 1997; Н. Meiselman, 2002). Кроме того, имеются данные о том, что агрегация эритроцитов изменяется при их инкубации с некоторыми гормонами и простагландинами и в частности с адреналином и норадреналином и их синтетическими аналогами (А.В. Муравьев и др, 2003; ПА. Гужова, 2004).

Согласно литературным данным у лиц с воспалительными реакциями повышается тонус симпатоадреналовой системы, в том числе происходит

увеличение концентрации адреналина и норадреналина (Р. Шмидт, Г. Тевс, 1986). Механизмы изменения агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов могут быть связаны с влиянием этих лигандов на обмен внутриклеточного кальция, а также с установлением между различными мессенджерными системами определенных взаимосвязей.

В настоящее время имеется большое количество работ, посвященных как изучению агрегации эритроцитов и ее механизмов (Н.Н. Фирсов, 2001; А.В. Муравьев, 2002; ИА. Тихомирова, 2004; О. Baskurt, 2001; Н. Schmid-Schoenbein, 2001; W. Reinhart, 2002; M. Rampling, 2004), так и анализу механизмов адгезии лейкоцитов (М. Baggiolini, 1995; Н. Lipowsky, 1999; G. Thurston et al., 2000; S. Yedgar. et al., 2003). Вместе с тем лишь отдельные работы посвящены исследованию вне- и внутриклеточных сигнальных систем при анализе изменения агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов (П.А. Гужова, 2004; П.В. Михайлов, 2004). Не исследованными остаются механизмы агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов при воздействии на клетки катехоламинов в физиологических и патофизиологических условиях. Не проведено сравнительное изучение в этих условиях внутриклеточных сигнальных путей. Кроме того, остается не исследованным изменение суспензионной стабильности крови при инкубировании суспензии эритроцитов с препаратами, изменяющими агрегатное состояние крови.

Учитывая все вышесказанное, было выполнено настоящее диссертационное исследование.

Цель работы: комплексное исследование механизмов изменения агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов в условиях нормы и патологии. Задачи исследования:

1. Выполнить сравнительный анализ изменения адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов в физиологических и патофизиологических условиях.

2. Изучить влияние катехоламинов на адгезию лейкоцитов и агрегацию эритроцитов в физиологических и патофизиологических условиях.

3. Оценить роль ингибиторов фосфодиэстераз в адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов.

4. Провести исследование ионизированного кальция (Са2+) в процессах адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов.

Научная новизна исследования

Впервые проведено комплексное исследование изменений адгезии полиморфноядерных лейкоцитов, агрегации эритроцитов и суспензионной стабильности крови в физиологических и патофизиологических условиях: при воспалительных реакциях и изменениях сосудистого русла.

патофизиологических условиях. Получены данные, которые позволяют говорить о более выраженном влиянии данных препаратов на адгезию лейкоцитов, чем агрегацию эритроцитов. Было показано, что в условиях патологии эфедрин в большей степени стимулировал как адгезию лейкоцитов, так и агрегацию эритроцитов, тогда как в условиях нормы изменения показателей данных процессов были практически одинаковыми.

Впервые проведено сравнение изменений адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов при ингибировании активности фосфодиэстераз эуфиллином, папаверином и дротаверином в физиологических и патофизиологических условиях. Установлено, что наибольшее снижение, как адгезии лейкоцитов, так и агрегации эритроцитов вызывает (среди ингибиторов фосфодиэстераз) дротаверин.

Впервые в комплексном исследовании показана роль Са2+ в изменениях адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов как в физиологических, так и в патофизиологических условиях. Установлено, что блокирование кальциевых каналов верапамилом приводит к более заметному снижению адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов, чем действие ЭДТА.

Впервые выявлено влияние адреналина и эфедрина, а также ингибиторов фосфодиэстераз: эуфиллина, папаверина, дротаверина; антагониста кальция верапамила и хелатирующего агента ЭДТА на скорость оседания эритроцитов и суспензионную стабильность крови. Впервые было показано, что ингибиторы фосфодиэстераз замедляют СОЭ и повышают суспензионную стабильность крови в патофизиологических условиях.

Научно-практическая значимость

Результаты исследований дополняют знания о механизмах межклеточных взаимодействий, влиянии сигнальных молекул на процессы адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов. Исследованы новые, плиотропные свойства таких лекарственных препаратов как верапамил, папаверин и Но-шпа (дротаверин), установлены их выраженные антиагрегационные и антиадгезивные эффекты, особенно в условиях патологии. Выявленные изменения в суспензионной стабильности крови (ее повышение) при действии ингибиторов фосфодиэстераз и антагониста кальция в патофизиологических условиях могут быть учтены при назначении этих препаратов в клинической практике.

Материалы диссертации могут быть использованы для преподавания физиологии и патофизиологии, при написании обзоров, монографий и учебных пособий, а также служить основой для проведения дальнейшей научно-исследовательской работы в этой области.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов более выражены в условиях патологии, чем в физиологических условиях.

2. Во всех группах наблюдения природный катехоламин адреналин и его синтетический аналог эфедрин стимулируют как адгезию лейкоцитов так и агрегацию эритроцитов.

3. Ингибиторы фосфодиэстераз оказывают заметное влияние на показатели агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов. Эуфиллин, папаверин, дротаверин в основном снижают агрегацию эритроцитов и адгезию лейкоцитов при разном количественном эффекте. Наибольший эффект ингибирования выявлен у препарата дротаверин (Но-шпа).

4. Снижение концентрации ионизированного кальция в клетках путем блокады кальциевых каналов верапамилом и связывание кальция в среде инкубации при помощи ЭДТА приводит к достоверному снижению агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов.

5. У лиц с воспалительными реакциями и у лиц с изменениями сосудистого русла суспензионная стабильность крови уменьшается по сравнению с показателями физиологической нормы. Ингибиторы фосфодиэстераз и верапамил не только снижают агрегацию эритроцитов, но и повышают суспензионную стабильность крови особенно у лиц с изменениями сосудистого русла.

Апробация результатов работы

Материалы работы доложены и обсуждены на международном конфессе по биореологии и клинической гемореологии (Анталия, Турция, 2002), международной конференции по гемореологии и микроциркуляции (Ярославль, 2003) и на межвузовских научных конференциях (Ярославль, 2002,2003,2004).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 131 странице печатного текста, включает 34 таблицы и 41 рисунок. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, главы по обсуждению результатов и выводов. Библиофафический указатель содержит 81 отечественный и 132 иностранных источников.

ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование влияния различных препаратов на адгезию лейкоцитов, агрегацию эритроцитов и суспензионную стабильность крови в физиологических и патофизиологических условиях проводилось в трех фуппах наблюдения.

• Группу контроля (контроль) составили практически здоровые лица в количестве п = 48 человек, средний возраст их был равен 37,2±0,8 года.

• В первую группу были включены испытуемые, у которых были выявлены системные воспалительные реакции (п = 58; средний возраст 47,0± 1,4 года).

• Вторую группу составили лица, имеющие системные изменения сосудистого русла из-за атеросклеротического поражения сосудов нижних конечностей (стадия ишемии 11-Б). Количество испытуемых - 62, средний возраст - 48,4+1,6 года.

Для работы использовали гепаринизированную кровь (10 ед/мл), полученную путем венопункции локтевой вены в условиях лечебного учреждения. Оценку общего функционального состояния испытуемых всех групп проводили, регистрируя основные показатели сердечно-сосудистой системы и крови.

Частоту сердечных сокращений (ЧСС) определяли при помощи записи ЭКГ, систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) - методом Короткова. Среднее артериальное давление (АДср.) и двойное произведение (ДП) рассчитывали общепринятыми способами.

Подсчет числа лейкоцитов и эритроцитов производили с помощью унифицированных методов в счетной камере Горяева.

Концентрацию гемоглобина крови (НЬ) измеряли при помощи цианметгемоглобинового метода. На основе регистрации общей концентрации гемоглобина крови и числа эритроцитов рассчитывали среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН).

Исследование общего белка в сыворотке крови проводили классическим биуретовым методом используя стандартный набор реагентов (ЗАО «Диакон ДС»). Определение альбумина проводилось по реакции с бромкрезоловым зеленым, утвержденным в качестве унифицированного метода в 1979 году. Для определения концентрации глобулиновых фракций из общей концентрации белка вычитали концентрацию альбуминов и таким образом определяли содержание глобулинов в крови. На основе полученных концентраций основных белковых фракций плазмы рассчитывали альбумино - глобулиновый коэффициент (А/Г), как отношение содержания альбуминов и глобулинов.

Концентрацию глюкозы в плазме крови определяли глюкозооксидантным методом. Для исследований использовали стандартный набор реагентов фирмы «Диакон-ДС».

Для исследования адгезии лейкоцитов, агрегации эритроцитов и суспензионной стабильности крови во всех группах наблюдения было проведено по три серии опытов, в которых использовали следующие препараты:

в первой серии опытов (п=171) использовали ингибиторы фосфодиэстераз: эуфиллин (10-8 М), папаверина гидрохлорид (10-3 М) и дротаверина гидрохлорид (10-3 М). Действие препаратов этой группы обусловлено ингибированием фосфодиэстераз и увеличением внутриклеточного накопления цАМФ;

во второй серии опытов (п=110) изменения адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов исследовали под воздействием верапамила -антагониста кальция (10"5 М) и Э Д10Т В этой серии исследований основная задача состояла в блокировании кальциевых каналов клеточных мембран и снижении уровня Са2+в среде инкубации (плазме);

в третьей серии опытов (п-112) исследовали влияние на адгезию лейкоцитов и агрегацию эритроцитов адреналина гидрохлорида (10"6 М) и синтетического аналога катехоламинов - эфедрина гидрохлорида (Ю^М).

Контрольными были пробы, приготовленные с добавлением изотонического раствора хлорида натрия в объемах, соответствующих выбранным препаратам (буфер).

Исследования адгезии лейкоцитов проводились по методу McGregor (1971) модифицированному в лаборатории кафедры медико-биологических основ спорта ЯГПУ. Пробу цельной, хорошо перемешанной крови, объемом 0,5 мл пропускали через фильтр из синтетической ваты. Время фильтрации - 30 мин., в термостате при 37°С. Индекс лейкоцитарной адгезии (ИЛА) определяли путем соотношения подсчитанного в камере Горяева числа лейкоцитов в пробе крови после фильтрации к числу лейкоцитов в пробе крови до фильтрации, взятого в процентах:

ИЛА= (L,-L2)-100/Li

где исходное количество лейкоцитов после

фильтрации.

Для исследования механизмов изменения адгезии лейкоцитов при их инкубации с вышеуказанными препаратами использовали лейкоконцентрат. Регистрацию изменений адгезии под воздействием препаратов также проводили по методике Me Gregor.

Исследование агрегации эритроцитов проводили общепринятым методом оптической микроскопии с помощью светового микроскопа с длиннофокусным объективом Юх и фотоокуляром Юх. Регистрировали число агрегатов и количество неагрегированных эритроцитов (рис. 1).

Рис. 1. Соотношение агрегатов эритроцитов и неагрегированных клеток.

Исследования агрегации под воздействием выбранных препаратов проводили после 15 минутной инкубации при 37° С. Рассчитывали отношение числа агрегатов к количеству неагрегированных клеток и это отношение рассматривали как показатель агрегации эритроцитов (индекс агрегации).

Суспензионная стабильность крови оценивалась с помощью стандартного теста СОЭ. Скорость оседания эритроцитов регистрировали в капилляре Панченкова на 15, 30,45 и 60 минутах. На основе полученных данных строили график зависимости время-СОЭ, выполняли расчеты коэффициентов регрессии. Tg угла наклона кривой являлся показателем скорости агрегации эритроцитов (Рис. 2).

Рис. 2. Оценка суспензионной стабильности крови как тангенса угла наклона линии тренда кривой скорости оседания эритроцитов (точечная диаграмма Excel 7).

Статистическую обработку материала проводили с помощью пакета статистической обработки данных «Stadia», а также с помощью программы «Microsoft-Excel - 2000». Использовался метод дисперсионного анализа с вычислением среднеарифметических величин (М), ошибки средней арифметической (т). Поскольку гемореологические параметры не всегда соответствуют критерию нормального распределения, то оценку статистической значимости различий в группах наблюдения осуществляли по непараметрическому методу Вилкоксона. За уровень статистически значимых принимали различия при Р< 0,05 и Р< 0,01.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Комплекс характеристик сердечно-сосудистой системы, показателей белкового состава плазмы крови, гематологические параметры свидетельствовали о том, что функциональное состояние лиц разных групп наблюдения заметно различались (рис. 3).

Рис. 3. Профиль изменений основных показателей, характеризующих функциональное состояние организма лиц в первой и второй группах (относительно данных группы лиц в физиологических условиях, принятых за

нулевую линию).

Обозначения: 1 -двойное произведение (ДП); 2 -среднее артериальное давление (АДср.); 3 - общий белок; 4 - альбумины; 5 - глобулины; 6 -глюкоза крови; 7 - кол-во лейкоцитов; 8 - Э/Л; 9 —Нв; 10 — МСН.

Сравнение гематологических и биохимических показателей у испытуемых показало, что в первой и второй группах наблюдались изменения, характерные для патофизиологических состояний (А.Д. Адо и др., 2001). В частности отмечалось увеличение числа лейкоцитов, превышающее норму, а также более чем двукратное ускорение СОЭ у лиц с воспалительными реакциями и превышающее норму ускорение СОЭ в группе лиц с изменениями сосудистого русла. Увеличение СОЭ является одним из важнейших проявлений «ответа острой фазы» (В.В.Меньшиков, 1987; А.Д. Адо и др., 2001) и свидетельством выраженного снижения суспензионной стабильности крови (С.А. Селезнев и др., 1975).

Исследование степени агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов у лиц в патофизиологических условиях показало, что эти два вида проявления клеточной активности достоверно повышаются по сравнению с данными, полученными у лиц в условиях физиологической нормы (рис. 4).

На агрегацию эритроцитов существенное влияние оказывает концентрация белка плазмы и соотношение основных белковых фракций (В.А. Левтов и др., 1982; А.В. Муравьев и др., 2002; Е.МепШ et а1., 1963; L.Dintenfass, 1981; H.Meiselman, 1993). Однако изменение агрегации эритроцитов в патофизиологических условиях не может быть объяснено проявлением вышеуказанного механизма, поскольку соотношение основных белковых фракций - альбуминов и глобулинов не было достоверно изменено.

123,2

120,2

1 2 3

Рис. 4. Сравнение показателей адгезии лейкоцитов (А) и агрегации эритроцитов (Б) в физиологических и патофизиологических условиях.

Обозначения 1- группа контроля; 2 - группа 1; 3 - группа 2.

У лиц с измененным сосудистым руслом отмечались признаки активизации симпатоадреналовой системы - повышенное артериальное давление, прирост ЧСС, числа лейкоцитов и концентрации глюкозы по сравнению с показателями контрольной группы (В А. Галенок и др., 1987; Р. Эккерт и др., 1991; ПА. Гужова, 2004; К. Eliasson, 1984). Высокий уровень активности симпатоадреналовой системы может быть одной из причин увеличения агрегации эритроцитов.

Одной из причин изменения агрегации эритроцитов у лиц с системными воспалительными реакциями может быть влияние цитокинов, уровень которых в данных условиях выражено повышается (З.Г. Кадагидзе, 2003). Многие авторы указывают на повышение агрегатообразования при снижении деформируемости эритроцитов (В.А. Галенок и др., 1987; АА. Муравьев, 1999; Л.Г. Зайцев, 2000). Из-за повышенной внутренней вязкости клеток их общая способность к деформации снижается. На это указывал достоверный прирост концентрации НЬ в эритроцитах (G. Cokelet, H. Meiselman, 1986). Кроме того, гемоглобин связываясь с белками цитоскелета изменяет эластичность мембраны (Э. Эванс и Р. Скейлак, 1982; G. Nash and H. Meiselman, 1983) Это взаимодействие зависит от концентрации гемоглобина - при ее повышении деформация эритроцитов снижена.

При воспалении происходит замедление кровотока с образованием агрегатов эритроцитов (A.M. Чернух, 1979). Формирование агрегатов ведет к смещению лейкоцитов на маргинальную позицию (D. Sutton, G. Schmid-Schoenbein, 1995), что повышает вероятность их адгезии с сосудистым эндотелием (У. Багги, М. Брэйд, 1998).

Увеличение адгезии лейкоцитов в патофизиологических условиях может быть связано и с повышенной экспрессией рецепторов, ответственных за процессы межклеточной коммуникации (В. Эллиот, Д. Элиот, 2000; Д. Фаллер, Д. Шилдс, 2003; P.J. Spagnuollo, J.J. Ellnez, 1980).

У испытуемых первой группы в связи с лейкоцитозом количество эритроцитов, приходящихся на один лейкоцит, оказалось почти в два раза

меньше, чем у лиц в группе контроля, то есть плотность лейкоцитов была выше, что, очевидно, способствовало более активной их адгезии (Д. Дорманди, 1980).

Увеличению адгезии лейкоцитов у лиц второй группы могли способствовать также морфологические изменения в сосудистом эндотелии, характеризующиеся нарастанием деструктивных изменений. Это может быть связано с активацией сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза на фоне снижения компенсаторного фибринолиза. (Б И. Кузник, 3 С. Баркаган, 1991). Гипергликемия, выявленная в данных патофизиологических условиях, повышает концентрацию адгезивных молекул семейства интегринов, что усиливает адгезию лейкоцитов к клеткам эндотелия (Д А.Чистякова, ИИ. Дедов, 1999, Д. Фаллер, Д. Шилдс, 2003).

Поскольку известно, что в условиях патологии повышается активность симпатоадреналовой системы (АД. Адо, МА. Адо и др. 2001), то было важно оценить в опытах in vitro влияние адреналина и эфедрина на микрореологическое поведение эритроцитов и лейкоцитов Было установлено, что инкубация с этими препаратами привела к увеличению адгезии лейкоцитов, особенно в патофизиологических условиях, особенно у лиц второй группы (под воздействием адреналина до 124%, эфедрина до 119% от 100% в буфере) (рис. 5). Агрегация эритроцитов под воздействием катехоламинов увеличилась не очень существенно во всех группах наблюдения и составила после инкубации с адреналином в группе контроля 103%, в первой и второй группах по 102%. Можно отметить, что эфедрин в большей степени стимулировал агрегацию, особенно в услових патологии: до 114% в первой и до 110% во второй группах (рис. 5)

Рис 5. Изменение адгезии лейкоцитов (А) и агрегации эритроцитов (Б) при инкубации их с адреналином и эфедрином в группах наблюдения

Изменения адгезии лейкоцитов, а также изменения агрегации эритроцитов у лиц контрольной группы под влиянием, как адреналина, так и эфедрина практически одинаковы. Изменения агрегации эритроцитов после инкубации их с адреналином практически не зависели от изменившихся условий, характерных для первой и второй групп наблюдения.

Между изменением показателей адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов не было выявлено заметной корреляционной зависимости.

Один из механизмов стимулирования клеточной активности связан с усиленным входом Са2+ в клетку (Ткачук, 1998; A. Wulf, A. Schwab, 2002; А. Abramov, M. Duchen, 2003). Связывание адреналина с рецепторами клеточной мембраны может стимулировать вход кальция (Дж, Теппермен, X. Теппермен, 1989) и результатом этой стимуляции является подъем агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов.

Прекращение гормонального эффекта, реализуемого через систему аденилатциклаза-цАМФ, осуществляется с помощью специального фермента фосфодиэстеразы цАМФ, вызывающей гидролиз этого вторичного посредника (В.Эллиот, Д.Эллиот, 2000; М. Herzog et al., 2002). Снижение активности аденилатциклазы происходит при присоединении лигандов к альфа-адренорецепторам клеточной мембраны (Дж. Таппермен и ХЛеппермен, 1989; Н. Rasmussen et al., 1975; J.Sundquist et al., 1992). Следовательно, можно предположить, что адреналин и эфедрин стимулировали клеточный ответ эритроцитов и лейкоцитов путем активации преимущественно альфа-рецепторов. В этом случае в качестве второго посредника выступает циклический аденозинмонофосфат. Для проверки этого предположения уровень цАМФ в эритроцитах и лейкоцитах повышали путем ингибирования активности фасфодиэстераз (Е. Sutherland, 1972). С этой целью был применен ряд препаратов, который включал: эуфиллин, папаверин и дротаверин.

Результаты исследования показали, что эритроциты и лейкоциты реагировали однотипно на действие ингибиторов фосфодиэстераз -происходило выраженное снижение агрегации эритроцитов и адгезивности лейкоцитов.

Вместе с тем обращает на себя внимание факт разного влияния этих препаратов на показатели адгезии и агрегации. Эффект эуфиллина -умеренный: показатель адгезии лейкоцитов в контрольной группе составил 98%, в первой группе - 93% и 111% - во второй от 100% в буфере. Под воздействием папаверина и, особенно, дротаверина снижение было более выраженным. В группе контроля папаверин снизил показатель адгезии до 84%, дротаверин до 80%; в первой группе изменения были практически одинаковые - до 92% и 91%, а во второй - до 98% и до 74% соответственно. И если под воздействием эуфиллина во второй группе снижение оказалось более заметным, то здесь эффект папаверина и дротаверина был меньше, чем в группе контроля (рис. 6). Такое выравнивание реакции может свидетельствовать о меньшей чувствительности к действию препаратов при воспалительных реакциях.

Наибольшие изменения агрегации эритроцитов наблюдались в физиологических условиях, где степень агрегации снизилась до 85% под воздействием эуфиллина, под воздействием папаверина до 89% и до 83% под воздействием дротаверина. Необходимо отметить, что здесь агрегация при действии всех трех препаратов снижались практически одинаково. Эуфиллин и папаверин незначительно и также практически одинаково снизили ее в первой группе (эуфиллин до 97%, папаверин до 98%) и более существенно - во второй

(эуфиллин до 90%, папаверин до 91%). Можно отметить, что наибольшие изменения происходили после инкубации проб с дротаверином. Здесь степень агрегации снизилась до 83% в группе контроля, до 88% в первой и до 89% во второй группе по сравнению со 100% в буфере (рис.6).

Рис. 6. Изменение адгезии лейкоцитов (А) и агрегации эритроцитов (Б) при инкубации их с эуфиллином, папаверином и дротаверином в группах

наблюдения.

Исследование агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов после инкубации с ингибиторами фосфодиэстераз показало, что стимулирование активности внутриклеточных посредников биохимических реакций с помощью эуфиллина, папаверина и дротаверина ведет к снижению степени адгезии и достоверному уменьшению агрегации эритроцитов.

Анализ данных, полученных при инкубации эритроцитов и лейкоцитов с препаратами, ингибирующими активность фосфодиэстераз, может привести к выводу о том, что в качестве второго внутриклеточного посредника, в этих условиях, служит циклический аденозинмонофосфат. Повышение его уровня в наших опытах при инкубации клеток с тремя препаратами, блокирующими распад цАМФ, вело к однотипному снижению клеточной активности эритроцитов и лейкоцитов. Можно предположить, что накопление цАМФ в клетках может стимулировать протеинкиназу А (Б.Альбертс и др., 1987; В.Эллиот, Д.Элиот, 2000), а она, в свою очередь, будет фосфорилировать интегральные белки мембраны и способствовать экспонированию отрицательно заряженных группировок на сахарных остатках их внешних доменов (Д. Фаллер, Д. Шилдс, 2003). Однако известно, что повышение уровня цАМФ, при уменьшении активности фосфодиэстераз приводит к блокированию входа Са2+ в клетку. Этот механизм и может способствовать угнетению клеточной активности (Т.ОопвЫ Ы а1., 1997). Таким образом, можно полагать, что роль ионизированного кальция как внутриклеточного посредника при изменениях агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов, должна быть существенной.

На мембранах клеток имеются четыре основных подтипа адренорецепторов (Дж. Теппермен, X. Теппермен, 1989) и при активации а(-адренорецепторов в качестве второго посредника используется Са2+. Известно, что адреналин и синтетические неселективные агонисты присоединяются как к

а- так и р-рецепторам (Р. Эккерт и др., 1991). Следовательно, механизмы повышения агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов могут быть связаны со стимулированием этими лигандами (адреналином и эфедрином) входа кальция внутрь клеток.

Для проверки этого предположения мы блокировали кальциевые каналы данных клеток верапамилом и получили выраженное снижение, как агрегации эритроцитов, так и адгезии лейкоцитов. Более того, связывание Са2+ в среде инкубации клеток при помощи ЭДТА тоже привело к угнетению рассматриваемых клеточных реакций, что подтверждает важную роль Са2+ в механизмах изменения агрегации и адгезии клеток крови. Вместе с тем, опыты свидетельствующие об изменении клеточного ответа лейкоцитов и эритроцитов при ингибировании активности фосфодиэстераз ставят проблему взаимодействия двух внутриклеточных сигнальных систем в этих условиях. Можно полагать, что активация системы «аденилатциклаза-цАМФ» ингибиторами фосфодиэстераз, приводит к блокированию входа Са2+ в клетку (В.А.Ткачук, 1998) и снижению агрегации и адгезии клеток.

Возможен механизм стимуляции клеточного ответа путем подъема активности адренорецепторов адреналином или эфедрином. Это может вести к открытию кальциевых каналов мембран клеток, интенсивному поступлению в них Са2+ и ингибированию активности аденилатциклазы (М. Brain et al, 2004). Следовательно, можно предположить, что в условиях стимулирования агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов катехоламинами два основных вторых внутриклеточных посредника - цАМФ и Са2+ находятся в антагонистических взаимоотношениях - стимулирование активности одного, приводит к угнетению другого.

Для изменения адгезии лейкоцитов возможно и синергетическое взаимоотношение системы Са2+ и цАМФ. Стимулирование активности протеинкиназы А при помощи цАМФ, ведет к стимулированию продукции ИФ3 (A. Bugrim, 1999) и использовании его в качестве второго посредника при адгезивных контактах клеток. Вместе с тем нельзя исключить, что в наших условиях агонисты стимулировали преимущественно аг - адренорецепторы клеточных мембран и ответ клетки включал активацию Gi-белков, которые угнетают активность аденилатциклазы, что стимулировало кальциевую сигнальную систему и усиленный ответ клетки (В.А. Ткачук, 1998). В этом случае внутриклеточным эффектором могли выступать сократительные белки подмембранного цитоскелета эритроцитов (спектрин, анкирин, белки полосы 3) и актиноподобные белки лейкоцитов. Их фосфорилирование, при участии протеинкиназы С, могло способствовать изменению эластичности мембран клеток и их большей деформируемости и подвижности (J.F. Horga et al., 2000).

При блокировании кальциевых каналов верапамилом, а также при связывании кальция плазмы ЭДТА было получено снижение клеточной реакции как эритроцитов так и лейкоцитов. Важно иметь в виду, что одним из эффектов антагонистов кальция является увеличение внутриклеточной концентрации цАМФ (O.R. Etinqin, D.P. Hajjar, 1990).

Анализ полученных данных позволил установить, что наиболее выраженные изменения при воздействии верапамила и ЭДТА на клетки крови отмечались в группе контроля, т.е. в физиологических условиях (под воздействием верапамила процент адгезии составил 53%, а под воздействием ЭДТА - 63%). В меньшей степени адгезия снижалась у лиц первой группы: до 83% под воздействием верапамила и до 90% под воздействием ЭДТА (рис.7). Афегация эритроцитов под воздействием верапамила здесь была самой низкой из всех трех групп. Следует отметить, что изменения показателей под воздействием верапамила в патофизиологических условиях были более выраженными чем после инкубации с ЭДТА, то есть в данных условиях более эффективно блокирование кальциевых каналов, а не связывание Са2+ в плазме хелатирующим агентом.

Рис. 7. Изменение адгезии лейкоцитов (А) и агрегации эритроцитов (Б) при инкубации их с верапамилом и ЭДТА в группах наблюдения.

Несмотря на некоторое сходство во влиянии ингибиторов фосфодиэстераз и антагониста кальция верапамила и ЭДТА на агрегацию эритроцитов и адгезию лейкоцитов, наши исследования позволяют говорить о несколько более выраженном эффекте верапамила и ЭДТА по сравнению с ингибиторами фосфодиэстераз in vitro. На это указывало большее снижение показателей. Более эффективное влияние верапамила можно объяснить тем, что он кроме блокирования входа Са2+ в клетку уменьшает расход АТФ (П.В. Лялякин, 2001). Результаты исследования показали, что хотя, действие антагониста кальция и связывание кальция в среде инкубации сопровождались однонаправленным изменением агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов и между этими клеточными реакциями, несомненно, имеется функциональная связь, однако статистической зависимости не было выявлено. Наиболее высокий коэффициент корреляции между этими параметрами был обнаружен в первой и второй группах под воздействием эфедрина, но он не превышал 0,33 и не был статистически достоверным.

Детальный анализ изменения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) показал, что в патофизиологических условиях суспензионная стабильность крови уменьшается. СОЭ была значительно выше, чем у испытуемых в физиологических условиях. Оценка суспензионной стабильности крови на

основе уравнений регрессии, полученных при графическом построении зависимостей СОЭ от времени показала, что величина тангенса угла наклона линии тренда СОЭ-граммы у лиц первой и второй групп была значительно больше, чем у лиц группы контроля. Это свидетельствует о снижении суспензионной стабильности крови в этих условиях (С.А. Селезнев и др., 1986).

В группе контроля применение катехоламинов привело к снижению суспензионной стабильности крови. В первой группе произошла некоторая стабилизация, а во второй препараты практически не повлияли на этот показатель (рис.8).

О -,---

Буфер Адреналин Эфедрин

Рис. 8. Изменение СОЭ-граммы в группах наблюдения при инкубации эритроцитов с адреналином и эфедрином.

После воздействия ингибиторов фосфодиэстераз отмечено заметное повышение суспензионной стабильности крови во всех группах и, особенно у лиц с изменениями периферического сосудистого русла (рис. 9).

Буфер Эуфиллин Папаверин Дротаверин

Рис. 9. Изменение СОЭ-граммы в группах наблюдения при инкубации эритроцитов с ингибиторами фосфодиэстераз.

После инкубации с верапамилом и ЭДТА в группе контроля произошло снижение величины тангенса угла наклона линии тренда, то есть суспензионная стабильность крови несколько повысилась. Можно также отметить некоторое

повышение этого параметра и у испытуемых второй группы после инкубации с ЭДТА (рис. 10).

12 , -10+- -

8 !—

-♦-Гр.контр. -•-Группа 1 | -*- Группа 2 ■

4 \ — 2 -—

0 -

Буфер

Верапамил ЭДТА

Рис. 10. Изменение СОЭ-граммы в группах наблюдения при инкубации

В физиологических условиях катехоламины снижают суспензионную стабильность крови. Верапамил и ЭДТА, наоборот, способствуют некоторой стабилизации этого показателя. Практически не изменились показатели после воздействия ингибиторов фосфодиэстераз, за исключением эуфиллина, способствовавшего повышению суспензионной стабильности крови. В патофизиологических условиях можно отметить повышение суспензионной стабильности крови в группе лиц с изменениями периферического сосудистого русла после воздействия ингибиторов фосфодиэстераз.

Таким образом, проведенное исследование показало, что величина агрегации эритроцитов, адгезии лейкоцитов, а также суспензионная стабильность крови зависят от функционального состояния организма и заметно различаются в условиях нормы и патологии.

Анализ полученных данных свидетельствовал о том, что исследуемые показатели изменялись при стимулировании клеток крови сигнальными молекулами.

1. Функциональное состояние организма лиц в патофизиологических условиях характеризовалось достоверно более высокими значениями частоты сердечных сокращений, артериального давления, двойного произведения, скорости оседаний эритроцитов, числа лейкоцитов и концентрации глюкозы по сравнению с таковыми у испытуемых контрольной группы.

2. Величины агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов заметно различаются в физиологических и патофизиологических условиях. Эти микрореологические показатели клеток крови в условиях патологии достоверно выше, чем в условиях физиологической нормы.

3. Адреналин и эфедрин в микромолярных концентрациях выражено стимулируют адгезию лейкоцитов, особенно в патофизиологических

эритроцитов с верапамилом и ЭДТА.

ВЫВОДЫ

условиях. Стимулирующие влияние этих препаратов на агрегацию эритроцитов было менее существенным и сходным для всех групп наблюдения.

4. Ингибиторы фосфодиэстераз (эуфиллин, папаверин и дротаверин) снижают агрегацию эритроцитов и адгезию лейкоцитов, однако величина эффекта каждого препарата была разной. Наибольшие изменения происходили после инкубации клеток с дротаверином, который проявил наибольший ингибирующий агрегацию эритроцитов и адгезию лейкоцитов эффект.

5. Изменение уровня внутриклеточного кальция с помощью верапамила, блокирующего мембранные каналы клеток или посредством связывания его в среде инкубации с помощью ЭДТА приводит к выраженному снижению агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов во всех группах наблюдения. Это свидетельствует о роли кальция в регуляторных изменениях микрореологических свойств эритроцитов и лейкоцитов.

6. Суспензионная стабильность крови, оцененная по динамике СОЭ, заметно снижена в патофизиологических условиях. Ингибиторы фосфодиэстераз повышают суспензионную стабильность во всех группах наблюдения. У испытуемых в патофизиологических условиях, под влиянием указанных выше препаратов, происходит нормализация суспензионной стабильности крови.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПОТЕМЕДИССЕРТАЦИИ

1. Турова Е.В., Михайлов П.В., Гужова ПА., Кабанов А.В. Влияние агрегации эритроцитов на адгезию лейкоцитов // Современные проблемы физического воспитания: Материалы конференции «Чтения Ушинского» Фак-та физической культуры ЯГПУ.-Ярославль.-2002-С. 38-39.

2. Turova E.V., Muravyov A.V., Mikhailov P.V., Guzhova P.A., Tikhomirova I.A. Study of the role of Ca 2+ as a second messenger in changes of red cell aggregation // Biorheology. - 2002.- Vol.39 -S.I - P.102.

3. Турова Е.В., Гужова П А., Муравьев А.В.,Дубкова М.С. Агрегация эритроцитов при инкубации их с адреналином // Проблематика физического воспитания на современном этапе: Материалы конференции «Чтения Ушинского» Фак-та физической культуры ЯГПУ.- Ярославль -2003.-С.77-80.

4. Турова Е.В. Исследование лейкоцитарной адгезии под воздействием препаратов Но-шпа и ЭДТА // Материалы международной конференции «Гемореология и микроциркуляция». - Ярославль. - 2003.- С. 19.

5. Турова Е.В. Исследование механизмов лейкоцитарной адгезии и агрегации эритроцитов под воздействием препаратов верапамил и ЭДТА в норме и патологии // Физкультура, спорт, здоровье: Материалы конференции «Чтения Ушинского» Фак-та физической культуры ЯГПУ.-Ярославль- 2004.- С.74-80.

Подписано в печать «_»_2005г.

Формат60x84 '/ц Бумага тип. № 1 Усл.печл. 1,25 Тираж 100 экз. Заказ №

Ярославский государственный педагогический

университет им. К. Д. Ушинского 150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, 108.

Типофафия Ярославского государственного педагогического университета им. К. Д. Ушинского 150000, г. Ярославль, Которосльная наб., 44

565

'у \

; . *

S " <• '

Ч -< J

16 ФЕЗ 2005

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Турова, Елена Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА

Обзор литературы.

1.1. Адгезия лейкоцитов.

1.2. Агрегация эритроцитов.

1.3. Функции лейкоцитов и эритроцитов при воспалительных реакциях.

1.4. Функции леикоцитов и эритроцитов при изменениях сосудистого русла.

1.5. Анализ действия сигнальных молекул на эффекторные клетки крови при их агрегации и адгезии.

ГЛАВА

Организация эксперимента, материалы и методы исследования

ГЛАВА

Состояние адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов в физиологических и патофизиологических условиях.

3.1. Состояние основных показателей сердечнососудистой системы и крови в группах наблюдения.

3.2. Сравнение состояния адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов в нормальных и патофизиологических условиях.

3.3. Влияние сигнальных молекул на адгезию лейкоцитов и агрегацию эритроцитов.

3.4. Исследование изменений СОЭ под воздействием выбранных препаратов в группах наблюдения.

ГЛАВА

Обсуждение результатов исследования.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ изменений агрегации эритроцитов, адгезии лейкоцитов и суспензионной стабильности крови в физиологических и патофизиологических условиях"

Агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов являются важными внутрисосудистыми феноменами, влияющими на микроциркуляцию крови.

Феномен адгезии лейкоцитов заключается в их контакте с эндотелиальными клетками сосудистой стенки (L. Grant, 1973; T.J. Williams et. al., 1984; G. Thurston et al., 2000;). Процессам адгезии предшествует активация клеток в ответ на действие сигнальных веществ (И.И. Долгушин и др., 1986; Ю.М. Захарова и др., 1995). Происходит образование псевдоподий, перемещение лейкоцита из центральной части сосуда в краевой пул и роллинг по эндотелию сосуда (G. Schmid-Schoenbein et al., 1995). Активация нейтрофилов в сосудистом русле ведет к аккумуляции их в микрососудах с последующей закупоркой этих сосудов и повреждением эндотелия (N.T. Luu, et al., 1998). Нейтрофилы в определенной мере управляют распределением эритроцитов в микроциркуляторном русле. При их вхождении в одно из ответвлений сосудистой сети и его закупорке, эритроциты не попадают в данный сосуд, превращающийся тем самым в плазматический капилляр (G.B. Nash., 1995; Н.Н. Lipowsky, 2002).

Другой внутрисосудистый феномен - агрегация эритроцитов в настоящее время рассматривается не только как патогенетический механизм развития заболеваний или их осложнений (В.А. Люсов и др., 1979; Е.И. Соколов и др., 1996; В.А. Шабанов и др., 1997; А.В. Муравьев и др., 1998; Н.А. Романов и др., 1999), но отмечается и ее адаптивная роль (P. Johanson, 1995; Н. Meiselman et. al., 2002).

Са2+ влияют на микрореологические свойства эритроцитов. (А.В. Муравьев, и др., 2002, 2003; Dowd et al.,1981; Langer et al.,1995; Hilario et al.,1999; J.F. Horga et al., 2000). Можно полагать, что и агрегация эритроцитов изменяется при связывании мембранными рецепторами сигнальных молекул. Согласно литературным данным у лиц с воспалительными реакциями повышается тонус симпатоадреналовой системы, в том числе происходит увеличение концентрации адреналина и норадреналина (Р. Шмидт, Г. Тевс, 1986). В этих условиях их роль может оказаться решающей. Механизмы изменения агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов могут быть связаны с влиянием этих лигандов на обмен внутриклеточного кальция, а также с установлением между различными мессенджерными системами определенных взаимосвязей. Для проверки данного предположения было выполнено комплексное исследование механизмов клеточного ответа на действие сигнальных молекул в физиологических условиях и при патологии.

В настоящее время имеется большое количество работ, посвященных как изучению агрегации эритроцитов и ее механизмов (Н.Н. Фирсов, 2001; А.В. Муравьев, 2002; И.А. Тихомирова, 2004; О. Baskurt, 2001; Н. Schmid-Schoenbein, 2001; W. Reinhart, 2002; М. Rampling, 2004;), так и изучению адгезии лейкоцитов (М. Baggiolini, 1995; Н. Lipowsky, 1999; G. Thurston et al., 2000; S. Yedgar. et al., 2003). Опубликованы материалы о структурных изменениях плазматических мембран при различных патологических состояниях организма (П.М. Шварцбурд, 1980; Ю.А. Уманский, 1982; А.А. Галкин, 1997;), имеются данные об изменении клеток крови при различных формах воспаления (L. Grant, 1973; Н.Г. Кручинский, 1994; Б.С. Брискин и др., 1996). Вместе с тем есть лишь отдельные работы по исследованию внутриклеточных сигнальных систем при анализе изменения агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов (П.А. Гужова, 2004; П.В. Михайлов, 2004). Однако, до настоящего времени не исследован механизм клеточного ответа, не проведено сравнение реакции двух типов клеток (эритроцитов и лейкоцитов) на разные лиганды в физиологических и патофизиологических условиях. Не исследовано изменение суспензионной стабильности крови в этих условиях.

Учитывая все вышесказанное была выполнена настоящая диссертационная работа.

Цель работы: комплексное исследование механизмов изменения агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов в условиях нормы и патологии

Задачи исследования.

3. Оценить роль ингибиторов фосфодиэстераз в адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов.

4. Провести исследование роли ионизированного кальция (Са2+) в процессах адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов.

Научная новизна исследования

Установлено, что катехоламины адреналин и его синтетический аналог эфедрин в избранных концентрациях стимулируют адгезию лейкоцитов и агрегацию эритроцитов в условиях нормы, и, более выражено, в патофизиологических условиях. Получены данные, которые позволяют говорить о более выраженном влиянии данных препаратов на адгезию лейкоцитов, чем агрегацию эритроцитов. Было показано, что в условиях патологии эфедрин в большей степени стимулировал как адгезию лейкоцитов, так и агрегацию эритроцитов, тогда как в условиях нормы изменения показателей данных процессов были практически одинаковыми.

Впервые в комплексном исследовании показана роль Са в изменениях адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов как в физиологических, так и в патофизиологических условиях. Установлено, что блокирование кальциевых каналов верапамилом приводит к более заметному снижению адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов, чем действие ЭДТА.

Впервые выявлено влияние адреналина и эфедрина, а также ингибиторов фосфодиэстераз: эуфиллина, папаверина, дротаверина; антагониста кальция верапамила и хелатирующего реагента ЭДТА на скорость оседания эритроцитов и суспензионную стабильность крови. Впервые было показано, что ингибиторы фосфодиэстераз замедляют СОЭ и повышают суспензионную стабильность крови в патофизиологических условиях.

Научно-практическая значимость.

Результаты исследований дополняют знания о механизмах межклеточных взаимодействий, влиянии сигнальных молекул на процессы адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов. Исследованы новые, плиотропные свойства таких лекарственных препаратов как верапамил, папаверин, Но-шпа (дротаверин), установлены их выраженные антиагрегационные и антиадгезивные эффекты, особенно в условиях патологии. Выявленные изменения в суспензионной стабильности крови (ее повышение) при действии ингибиторов фосфодиэстераз и антагониста кальция в патофизиологических условиях могут быть учтены при назначении этих препаратов в клинической практике.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

4. Снижение концентрации ионизированного кальция в инкубируемых клетках путем блокады кальциевых каналов верапамилом или связывание кальция в среде инкубации при помощи ЭДТА приводит к достоверному снижению агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Турова, Елена Викторовна

выводы

1. Функциональное состояние организма лиц в патофизиологических условиях характеризовалось достоверно более высокими значениями частоты сердечных сокращений, артериального давления, двойного произведения, скорости оседания эритроцитов, числа лейкоцитов и концентрации глюкозы по сравнению с таковыми у испытуемых контрольной группы.

3. Адреналин и эфедрин в микромолярных концентрациях выражено стимулируют адгезию лейкоцитов, особенно в патофизиологических условиях. Стимулирующее влияние этих препаратов на агрегацию эритроцитов было менее существенным и сходным для всех групп наблюдения.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Турова, Елена Викторовна, Ярославль

1. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Участие Са -зависимого активатора в2+регуляции активности аденилатциклазы сердца ионами Са . Докл. АН СССР, 1978.-238 (3).-С.726-729.

2. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж. Молекулярная биология клетки.- М.: Мир, 1986.-С.1-5.

3. Александров А.А., Джексон A.M., Румянцев А.Г. Анализ механизма модуляции межклеточных молекул адгезии ICAM // Иммунология.-1997.-С.4-12.

4. Альбертсон П.-О. Разделение клеточных частиц и макромолекул — М.: Мир, 1974.-381с.

5. Андрианова И.Г. Плазма крови: Физиологические системы крови.— Л.: Наука, 1968. С.419-457.

6. Архипов Б.Ф., Субач В.И., Сидорова Л.Д., Дегтярева М.М., Л.З. Баркаган. Участие лейкоцитов в первичном гемостазе. // Терапевтический архив. -1987.- №6 С.62.

7. Атаман О.В. Змши активное™ ендофермеш!в стшки кровоносних судин за умов старшня та стресу. // Ф1зюлопчний журнал. 1996.-Т.44., N3-4.-С. 56.

8. Атлас лекарственных средств / Сост. Лялякин П.В. М.: Мир, 2001.- С. 212-214.

9. Багги У., Брэйд М. Лейкоцитарная обструкция (plugging) капилляров in vivo // Вестник АМН СССР.-1988.- №2.- С. 27-31.

10. Базарновой М.А., Морозовой В.Т. Руководство по клинической лабораторной диагностике. Часть 3. Клиническая биохимия.- Киев: Вища школа, 1986. 278 с.

11. Балаховский С.Д. Реакция оседания эритроцитов М.-Л.: ГИЗ, 1928-149.-С.20.

12. Боценовский В.А., Барышников А.Ю. // Успехи современной биологии. -1994. -Т.114- Вып.6.-С.741-753.

13. Брин В.Б., Вартанян И.А., Данияров С.Б. и др. Основы физиологии человека. С.-Петербург, 1994.- Т.1.- 566 с.

14. Бычков С.М., Кузьмина С.А. Агрегация эритроцитов в крови при различных состояниях организма // Бюл. экспер. биол. мед.-1993.-Т.115.-№6.-С.604-607.

15. Виру А.А., Кырге П.К. Гормоны и спортивная работоспособность М.: ФиС, 1983.- 159 с.

16. Воейков B.JI. Физико-химические и физиологические аспекты реакции оседания эритроцитов // Усп. физиол. наук. -1998. -№4.- С.55-73.

17. Воейков В.Л., Гурфинкель Ю.И., Дмитриев А.Ю., Кондаков С.Э. Немонотонные изменения скорости оседания эритроцитов в цельной крови: Доклады РАН. 1998.- Т. №5. - С.686-690.

18. Гавалов С.М. К механизму фракционной реакции оседания эритроцитов // Сов. медицина 1957. - № 8. - С.62-66.

19. Галенок В.А., Гостинская Е.В., Диккер В.Е. Гемореология при нарушениях углеводного обмена.- Новосибирск: Наука, 1987 237 с.

20. Галкин А.А. Локомоторные свойства нейтрофилов и механизмы регуляции их движения // Успехи совр. биологии-1997.-Т.117. -Вып.6 С.690-703.

21. Гужова П.А. Внеклеточные сигнальные пути и внутриклеточные механизмы агрегации эритроцитов: Автореф. дис. канд. биолог, наук. — Ярославль, 2004. 22 с.

22. Джонсон П. Периферическое кровообращение.- М.: Медицина, 1982-369с.

23. Долгушин И.И., Зурочка А.В., Марачев С.И. Влияние активированных и интактных нейтрофилов на функции моноцитов периферической крови // Иммунология 1986. - №2.-С.79-80.

24. Жамбалова Б.А., Азазова О.А., Лопухин Ю.М. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1999. №5. - С.520.

25. Захарова Н.Б., Титова Г.П. Ультраструктура эритроцитов со сниженными текучими свойствами и их роль в развитии микроциркуляторных расстройств при экстремальных состояниях // Патологическая физиология и экспериментальная медицина. 1992.-№1. - С. 50-52.

26. Захарова Ю.М., Волков А.В., Долгушин И.И., Зурочка А.В. Влияние секреторных продуктов нейтрофилов на эритропоэз в эритробластические островки костного мозга // Физиол. журн 1995.-Т.81-№2.- С.53-58.

27. Иванов К.П. Успехи и спорные вопросы в изучении микроциркуляции // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. 1995. -T.81-N6- С.1-17.

28. Ивенс И., Скейлак Р. Механика и термодинамика биологических мембран М.: Мир, 1981 - 623 с.

29. Каро К., Педли Т., Шротер Р., Сид У. Механика кровообращения.- М.: Мир, 1981.-С. 179-214.

30. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета // Иммунология. 1995. - №3. - С.8-10.

31. Клименко Н.А., Павлова Е.А. О значении лейкоцитов в повышенной сосудистой проницаемости при воспалении // Бюлл. экперим. биологии и медицины. -1999 №8.- С. 165-167.

32. Климов А.Н. Иммунореактивность и атеросклероз.- JL: Медицина, 1989.-С. 6-20.

33. Нагорнов В.А., Кетлинский С.А. Клеточно-молекулярные механизмы становления и развития атерогенеза (CD40-CD40L-иммунорегуляторный сигнал) // Бюлл. экспер. биологии 1999.-Т.128.-№ 10 - С.364-371.

34. Козлов В.И., Мельман Е.П., Нейко Е.М. Гистофизиология капилляров. СПб.: Наука, 1994 -232с.

35. Коркушко О.В., Саркисов К.Г., Лишневская В.Ю. Морфо-функциональное состояние тромбоцитов при старении //Украинский кардиологический журнал 1998.- N5-С. 18-22.

36. Кочемасова Т.В. Состояние эндотелия и адгезия лейкоцитов при сахарном диабете М.: Эндокринологический научный центр РАМН, 1996.-214с.

37. Кузник Б., Скипетров В.П. Форменные элементы крови. Сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз. М.: Медицина, 1974.- 230 с.

38. Кузник Б.И., Баркаган З.С. Современные представления о процессе свертывания крови, фибринолизе и действии естественных антикоагулянтов // Гематология и трансфузиология. 1991. - №11 -С.22-24.

39. Кулаков В.И. и др. Хроническая венозная недостаточность и беременность.-М.: Медицина, 1982 214 с.

40. Лабораторные методы исследования в клинике / Сост.В.В. Меньшиков М.: Медицина, 1987 - 364с.

41. Лебедев К.А. с соавт. Очистка организма от токсических веществ как способ нормализации функционирования иммунной системы // Физиология человека. 1995.- Т.21.- №5.- С. 131 -143.

42. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике (введение в прикладную иммунологию). 1990. - М.: Наука. - 224 с.

43. Левтов В.А., Регирер С.А., Шадрина Н.Х. Реология крови.- М.: Наука, 1982.- 246 с.

44. Левтов В.А., Шуваев В.Н., Шустова Н.Я. и др. Влияние высокомолекулярных соединений на реологические свойства крови и реактивность сосудов скелетной мышцы // Физиол. ж. СССР-1991.— Т.Н.- №11- С.72-81.

45. Лизунова А.А., Добросердова В.П. О трех характерных типах РОЭ. // Сб. науч. работ ворон, обл. инст. охраны мат. и млад. Воронеж. 1938. -Т.З.-С. 141-150.

46. Люсов В.А., Савенков М.П. и др. Состояние гемостаза и реологии крови при застойной недостаточности кровообращения // Кардиология.— 1979.-Т. 19.-№4.-С.86-89.

47. Михайлов П.В. Влияние макро- и микрореологических параметров крови на адгезию лейкоцитов: Автореф. дис. канд. биол. наук. -Ярославль, 2004 22с.

48. Муравьев А.А. Гемореологические профили при физической активности и повышенном артериальном давлении: Автореф. дисс. канд. биол. наук.-Ярославль, 1999. -21 с.

49. Муравьев А.В., Тихомирова И.А., Борисов Д.В. Анализ влияния плазменных и клеточных факторов на агрегацию эритроцитов разных возрастных популяций // Физиология человека.-2002.-Т.28.-№4.-С.144-148.

50. Муравьев А.В., Якусевич В.В. и др. Гемореологические профили пациентов с артериальной гипертензией в сочетании с синдромом гипервязкости // Физиология человека.-1998.-Т.24.-№4- С. 113-117.

51. Негреску Е.Б., Балденков Г.Н., Григорян Г.Ю., Ткачук В.А. Биохимические особенности альфа-2-адренорецепторов тромбоцитов и их связь с повышением концентрации внутриклеточного Са2+ // Биохимия.- 1989.- Т.54 -№6.- С. 909-915.

52. Пальцев М.А., Иванов.А.А. Межклеточные взаимодействия.— М.: Наука,1995.- 153с.

53. Патологическая физиология. Адо А.Д., Адо М.А., Пыцкий В.И., Порядин Г.В., Владимиров Ю.А. М.:Триада-Х, 2001 - 573 с.

54. Покалев Г.М., Китаева Н.Д., Столяр Г.М. и др. О связи дзета-потенциала эритроцитов со степенью их агрегации при гипертонической и ишемической болезни сердца // Кардиология.-1977.-№5 С. 122-124.

55. Ротердамская О.М., Ашумертов Р.И. Возможность нормализации микроциркуляции под воздействием гемосорбции при экспериментальном перитоните // Анестезиология и реаниматология. -1991. -№2. -С.62.

56. Селезнев С.А., Назаренко Г.И., Зайцев B.C. Клинические аспекты микрогемоциркуляции. JL: Медицина, 1985. - С - 52-72.

57. Славин М.Б. Методы системного анализа в медицинских исследованиях-М: Медицина, 1989-С.24.

58. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. М.: Мир.,1989.- 656 с.

59. Тихвинский Г.В. Геометрические и динамические характеристики лейкоцитов при экстремальных состояниях организма: Автореф. дис. канд. биол. наук. Ярославль, 1999- 20с.

60. Ткачук В.А. Гормональная регуляция транспорта Са в клетках крови и сосудов. //Физиол. журн.- 1998.- Т.84.-№10.-С. 1006-1018.

61. Фармако-терапевтический справочник. / Сост. Ф.П. Тринус Киев: Здоровья, 1988.-639с.

62. Фалл ер Д., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки.- М.: Мир, 2003-272с.

63. Физиология человека. Шмидт Р. Тевс Г М.: Мир, 1986 -312 с.

64. Фирсов Н.Н. Реологические свойства крови и патология сердечнососудистой системы //Тромбоз, Гемостаз, Реология-2001,-№.2 -С.26-32.

65. Фролова О.Е. Морфофункциональная характеристика моноцитов. Значение исследования мононуклеолярного аппарата // Клинич. лабор. диагностика. -1998.- №10.- С.3-8.

66. Фолков Б., Нил Э. Кровообращение М.: Медицина, 1986. - 426 с.

67. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса // Иммунология 1995 - №4.- С.3-8.

68. Харланова Н.Г.Ультраструктурные и цитоинтерферометрические изменения некоторых клеток крови, вызванные действием эндотоксинов. // Известия АН. серия Биологическая. 1993 - №3.- С. 468-471.

69. Хармоненко С.С., Ракитянская А.А. Электрофорез клеток крови в норме и патологии.-Минск.: Беларусь., 1974 143 с.

70. Цюрупович В.П. Механизм повышения вязкости крови при острых формах вирусного гепатита // Здравоохранение Казахстана. 1988. -№8.- С.35-38.

71. Справочник по клинической фармакологии и фармакотерапии / Под ред. И.С. Чекмана., А.П. Пелещука, О.А. Пятака К.: Здоровье, 1986.736 с.

72. Чемоданов В.В. Микрогемореологические нарушения при инфекционном токсикозе у детей с острыми заболеваниями респираторной системы: патогенетические механизмы, дифференциальная диагностика, терапия / Дисс. докт. мед. наук. — Иваново, 1996.-481 с.

73. Чернух A.M. Воспаление (очерки патологии и экспериментальной терапии). — М.: Медицина, 1979.- 448с.

74. Чернух A.M., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция. -М.: Медицина, 1975.-455 с.

75. Чижевский A.J1. Биофизические механизмы реакции оседания эритроцитов. Новосибирск: Наука, 1980.-С.154-157.

76. Чистякова Д.А., Дедов И.И. // Сахарный диабет 1999. - №3 - С.52-55.

77. Шабанов В.А., Левин Г.Я., Терехина Е.В. Изменения гемореологии при артериальной гипертензии // Реологические исследования в медицине — 1997-Вып 1- С.84-93.

78. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология.- М.: РАМН, 2000.-372 с.

79. Якусевич В.В. Макро- и микрогемореологические нарушения при эссенциальной артериальной гипертонии и их модификация под действием основных классов антигипертензивных средств : Автореф. дисс. докт. мед. наук М., 2000 - 46 с.

80. Alonso С., Pries A.R., Gaehtgens P. Red blood cell aggregation and its effect on blood flow in the microcirculation // Hemorheologie et agregation erythrocytaire. -1994.- Vol. 4 P. 119-124.

81. Ambler S.K. et al. Agonist-stimulated oscillations and cycling in intracellular free calcium in individual cultured muscle cells // J. Biol., 1988- Chem.263.- P. 1952-1959.

82. Arnaout M.A. Structure and function of the leukocyte adhesion molecules CD11/CD18 // Blood.-1990.-Vol.75.- P.1037-1050.

83. Bagge U., Branemark P.-I. White blood cell rheology. An intravital study in man // Adv. microcirculation.-1997.-Vol.7.-P.l-17.

84. Ajmani R. Hypertension and hemorheology // Clin. Hemorheol. and Microcirc.-l 997.- Vol. 17 P.397-420.

85. Baggiolini M. Activation and recruitment of neutrophil leukocytes // Clin, andexp. immunol- 1995- Vol.l01.-№1-P.5-6.

86. Baggiolini M. Activation and recruitment of neutrophil leukocytes // Clin, and exp. immunol.-1995 -Vol. 101.- № 1P. 5-6.

87. Barras J., The capillary flow of suspensions of human red blood cells in plasma substitutes // Bibl. Anat.-1969.-Vol. 10 P.38-44.

88. Baskurt O.K. Hemodynamic effects of red blood cell aggregation: Materials of 11th International Congress of Biorheology and 4th International Conference on Clinical Hemorheology.- Antalya-Turkey, 2002 P.63.

89. Bertoluzzo S., Bollini A., Rasia M., Raynal A. Kinetic Model for Erythrocyte Aggregation // Blood cells, molecules, and diseases. 1999-Vol. 25.- P.-339-349.

90. Bongrand P. Physical basis of cell-cell adhesion Boca Raton: CRC Press,1988.- P.267.

91. Brain M. et al. Evidence for a mechanosensitive calcium influx into red cells // Blood cells, molecules, and disease 2004 - Vol.32.-N. 3 - P.349-352.

92. Brooks D., Goodwin J., Seaman G. Rheology of erythrosyte suspensions: electrostatic factors in the dextranmedialed aggregation oferythrocytes // Biorheology-1974 Vol. 2. - P. 69-76.

93. Brun J.F., Belhabas H., Granat M.Ch. et al. Post exercise red cell aggregation is negatively correlated with blood lactatte rate of disappearance // Clin. Hemorheol. and Microcirculation 2002. - Vol.26.- P.231-239.

94. Bugrim A.E. Regulation of Ca2+ release by cAMP-dependent protein kinase A mechanism for agonist-specific calcium signaling? // Cell Calcium1999.- Vol.25.- № 3.- P.219-226.

95. Charm S.E., Kurland G.S. Blood flow and microcirculation.- John Wiley and Sons LTD, New York. Toronto. 1974.- P.243.

96. Chien S, Barshtein G., Gavish B. et al. Monitoring of red blood cell aggregability in a flow-chamber by computerized image analysis // Clin. Hemorheol.- 1994.-Vol.4.- P.497-508.

97. Chien S. Biophysical behaviour of red cells in suspensions.-In:The red blood cell.- N.Y.,1975.- Vol.2. P. 1031 -1133.

98. Chien S., Lung L. Physicocemical basis and clinical implications of red cell aggregation//Clin. Hemorheol 1987.-Vol.7.-P.71-91.

99. Chien S., Usami S., Jan K.M. Electrocemical and mechanical factors in red cell interaction // Microcirculation. 1976 - Vol.1.- P. 113-114.

100. Cokelet G.B. Macroscopic rheology and tube of human blood // Microcirculation, 1976. Vol.1. -P.9-14.

101. Cokelet G.B., Meiselman H.J. Rheological comparison of hemoglobin Solutions and erythrocyte suspensions // Science.- 1968. Vol. 162. - P.275-277.

102. Colantuini A. Vasomotion in hypoxia and hyperoxia // Microcirc. Clin, and exp.~ 1990.- Vol.9- №1- P.7.

103. Dewitz T. S.,Martin R.R., Solis R.T. et al II Microvasc. Res. -1978 V. 16.-N2.- P. 265-261.

104. Dintenfass L. Red cell rigidity "Tk" and filtration // Hemoreol-1985-Vol.5.- P.241-244.

105. Dintenfass L. Clinical Applications of heamorheology: The Rheology of blood, bloodvessels and associated tissues Oxford Press, 1981. - P.22-50.

106. Dobashi T, Goto H, Sakanishi A, Oka S. Erythrocyte sedimentation rate I. Volume fraction dependence in saline solution // Biorheology. 1987.-V. 24- N 2.- P. 153-162.

107. Dormandy J. Medical and engineering problems of blood viscosity // Biomed. eng.- 1974.- Vol.9 -№17. -P.284-291.

108. Dormandy J.A. Blood viscosity and cell deformability: Methods in Angiology.- London, 1980 P.214-266.

109. Dowd P.M., Koracs I.V., Bland C.J., Kirby J.D. Effect of prostaglandins 12 and El on red cell deformability in patients with Raynand,s phenomenon systemic sclerosis (Abstract) || J. Br. Med.,1981.- Vol. 283.- P.350.

110. Drissen G., Heidtman H., Schmid-Schonbein H. Reaction of erythrocyte velocity in capillaries upon reduction of hematocrit value // Bioreology.-1979.- Vol.16.- P.125-126.

111. Etinqin O.R., Hajjar D.P. // Circ. Res.- 1990.-V.66.- P. 185 -190.

112. Ercan Meltem, Konukolu Dilbar, Erdem Tijen, Onen Sinan. The effects ofcholesterol levels on hemorheological parameters in diabetic patients // Clin. Hemorheol. and Microcircalation 2002 - Vol.26.- №4- P. 257-263.

113. Fahraeus R. The suspension stability of blood // Physiol. Rev. 1929.- Vol. 9.-P. 241-274.

114. Fashing P., Veitl M., Rahac M., Streli C., et.al. // Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 1996.-Vol.81.-№12.-P. 4313-4317.

115. Gaehtgens P., Schmid-Schonbein H. Mechanisms of Dynamic Flow

116. Adaptation of Mammalian Erythrocytes // Naturwssenschaften.-1982-Vol.69- P.294-296.

117. Gaspar-Rosas A., Thurston G.B. Erythrocyte aggregation rheology by transmitted and reflected light // Biorheology- 1988 Vol.25.- P.471-487.

118. Gavin J., Maxwell L., Edgar S. Microvascular involvement in cardiac pathology/ // J. Mol. Cell. Cardiol. 1998.- Vol.30.- N12.- P. 2531-2540.

119. Goldstone J., Schmid-Schonbein H., Wells R. The rheology of red cell

120. Aggregates //Microvasc.Res.-1970.-Vol.2 P.273-286.

121. Grant L. The sticking and emigration of white blood cells in inflammation.-In: The inflammatory process 1973- 2nd - Vol.2.- P.205-249.

122. Gustafsson L., Appelgren L., Myrvold H.E. Effects of increased plasma viscosity and red blood cell aggregation blood viscosity in vivo // Amer. J.

123. Physiol. -1981. Vol. 241P.513-518.

124. Hansson G.K. Cell-mediated immunity in atherosclerosis // Curr.Opin.Lipidd.- 1997 №8.- P.301-311.

125. S. Hilario, C. Saldanha, J. Martins e Silva. An in vitro study of adrenaline effect on human erythrocyte properties in both gender // Clin. Hemorheol. and Microcirculation.- 2003 Vol.28 - P.89-98.

126. S. Hilario, C. Saldanha, J. Martins e Silva. The effect of adrenaline upon human erythrocyties Sex-related differences? // Biorheology- 1999 Vol. 36, №1-2,- P. 124.

127. Hirata K., Shikata K., Matsuda M., Akijoma K., Sugimoto H., Kushiro M., Makino H.// Diabetology- 1998-V. 41- P. 185-192.

128. Honiq C.R,Connett R.J.,Thomas E.J. 02 Transport and its interaction with metabolism: a systems view of aerobic capacity// Med. Sci. Sports Exers. 1992. -Vol.24 - №1.- P.47.

129. Horga J.F., Gisbert J., De Agustin J.C. et al. A (32-adrenergic receptor activates adenilate cyclase in human erythrocyte membranes at physiological calcium plasma concentrations // Blood cells, molecules, and diseases-2000.- Vol.26.- №3.- P.223-228.

130. Houslay M. "Crosstalk": a pivotal role for proteinkinase С in modulating relationship between signal transduction pathways // Eur. J. Beochem.— 1991.- Vol.195.- P.2-27.

131. Jansen J., Brooks D. Do plasma proteins absorb to red cells? // Clin. Haemathol-1989 -№ 9.-P. 695-714.

132. Johnson P., Cabel M., Popel A. Venous resistance and red cell aggregation : Abstr. Microcirculatory Soc. 41st Annu. Conf.-Anaheim, California, 1994.-P.82-83.

133. Kameneva M.V., Antaki J.F., Watach M.J., et al. Heparin effect on red blood cell aggregation. // Biorheology 1994. - V.31. -P. 297-304.

134. Kuo C.D., Bai J J., Chien S. A fractal model for erythrocyte sedimentation //Biorheology. 1994.-Vol. 31.-N. 1.-P.77-89.

135. Kuo CD, Bai JJ, Chang IT, Wang JH, Chien S. Continuous monitoring of erythrocyte sedimentation process: a new possible mechanism of erythrocyte sedimentation. // J Biomech Eng.- 1988 Vol.110: 4, - P.392 .

136. Langer R., Rossmanith K., Uysaka N. Hemorheological action of the prostaglandins D2, El, Fl, F2 and 110 prost // Clin.Hemorheol 1995-Vol. 15.- P.829-839.

137. Lim. В., Bascom P., Cobbold R. Simulation of red blood cell aggregation in shear flow // Biorheology-1997.-Vol.34.- N6.- P.423-443.

138. Lipowsky H.H., Mulivor A. Assessment of the relative contribution of leukocytes and endothelium to their adhesive interactions by intravital microscopy in the mesentery of the ret // Biorheology.- 1999.- Vol.36.- №1-2.-P.58.

139. Lowe G.D.O., Barbenel J.C. Plasma and blood viscosity: Clinical Blood Rheology -CRC Press, Boca Raton G.D.O. Lowe ed., 1988.- Vol. 1. P.l -44.

140. Luu N.T., Rainger G.E., Nash G.B. Transendothelial migration of flowing neutrophils: differential by activating agents: Abstracts 20th European Conference on Microcirculation Parish, 1998. - P.59. Journal of vascular research.-1998.

141. Maeda N., Shiga T. Inhibition and acceleration of erythrocyte aggregation induced by small macromolecules // Boichim. Biophys. Acta. 1985. -V.843.- №1-2. - P.128-136.

142. Maeda N., Shiga T. Opposite effect of albumin on erythrocyte aggregation induced by immunoglobulin G and fibrinogen // Biochim. Biophys. Acta.-1986.-Vol.855.- P.127-135.

143. Maeda N., Suzuki Y., Tanaka J., Tateishi N. Erytrocyte flow and elastici of microvessels evaluated by marginal cellfree layer and flow resistance // Am. J. Physiol.- 1996. -Vol. 271.- P.2454-2461.

144. Marietta F. Biologic aaggressiveness of essential hypertension and the rheologic pattern of blood // Clin. Hemorheol.-1995.- Vol.15.- №3. P.543-544.

145. Meiselman H.J. In vivo circulatory correlates of altered RBC aggregation: Materials of 11th International Congress of Biorheology and 4th International Conference on Clinical Hemorheology -Antalya.-Turkey, 2002.-P.63.

146. Meiselman H.J. Red blood cell role in RBC aggregation: 1963-1993 and beyond // Clin. Hemorheol.-1993.- Vol.13.- P.575-592

147. Meiselman H.J. In vivo circulatory correlates of altered RBC aggregation. Materials of 11th International Congress of Biorheology and 4th International Conference on Clinical Hemorheology.-Antalya.-Turkey.-September 22-26, 2002 P.63.

148. Merrill E.W., Gilliland E.R., Cokelet G. et al. Non Newtonian rheology of human blood effect of fibrinogen deduced by "Subtration" // Circulat. Res. - 1963.-Vol.13.-P.48-55.

149. Merrill. E, Pelletier G. A., Cheng C.S. Yield stress of normal human blood as a function of the endogenous fibrinogen // J. Appl. Physiol. -1968. -Vol.26.-P.l-3.

150. Morrison D.S., Henson P.M. Release of mediators from mast cells and basophils induced by different stimuli // J. Immunol. 1978. - Ser.Z. - P.43-436.

151. Miiller R. Hemorheology and peripheral vascular diseases: a new therapeutic approach // J. Med. -1981.-Vol. 12.- P.209-236.

152. Nash G.B., Buttrum S., Lalor P. Adhesion between neutrophils and platelets as a promoter of vascular pathology // Biorheology.- 1995.- Vol.32. -№2-3.- P. 188.

153. Nash G.B., Meiselman H. Red cell and ghost viscoelasticity; Effect of hemoglobin concentration and in vivo aging // Biophys. J.-l983.-Vol.43.— P.63-67.

154. Nash G.B., Wenby R.B., Sowemimo Coker S.O. et al. Influence of cellular properties on red cell aggregation // Clin.Hemorheol-1987-Vol.7 — P.93-108.

155. Oonishi Т., Sakashita K., Uysaka N. Regulation of red blood cell filtrability by Ca2+ inflax and cAMP-mediated signaling pathways // Am. J. Physiol.- 1997.- Vol. 273. (Cell. Physiol. 42).- P.1828-1834.

156. Patel K.D., Moore K.L., Nollert M.U. A comparison of neutrophil rolling on E-selectin and P-selectin //Biorheology 1995 - Vol.32.-№ 2-3 -P.140-141.

157. Pearson M.J., Rampling M.W. Enzyme treatment on age fractionated red blood cells. // Biorheology.-1995.-Vol.32.-№2-3- P. 222.

158. Pearson M.J., Rampling M.W., Gribbon P. et al. Microscopic observations of fluorescently labelled fibrinogen fixed to the red blood cell surface! // Clin. Hemorheol.-l995.-Vol. 15-3.- P.453.

159. Plasenzotti R., Stoiber В., Posch M., Windberger U. Red blood cell deformability and aggregation behaviour in different animal species // Clin. Hemorheol. and Microcirculation 2003- V.31 -№2.-P.105-l 11.

160. Potron G., Pignon В., Mailliot J.L. et al. Erythrocyte aggregation and sedimentation: influence of acute phase mediators // Hemorheology at aggregation erythrocytaire.-l994.-Vol.4.- P.51-56.

161. Pribush A., Meiselman H.J., Meyerstein D. et al. Dielectric approach to investigation of erythrocyte aggregation. II. Kinetics of erythrocyte aggregation-disaggregation in quiescent and flowing blood // Biorhelogy.-2000.-Vol.37.-№5-6.- P.28-32.

162. Pries A.R., Secomb T.W. Rheology of the microcirculation // Clin. Hemorheol. and Microcirculation 2003.-Vol.29.- №3-4.- P.143-148.

163. Putnam F.M. Structure and function of plasma proteins. The Proteins. Composition. Structure and Function. Second Edition. Ed.: Hans Neurath. Academic Press. New York and London, 1965- P. 154 -267.

164. Rampling M.W., Martin G. Albumin and rouleaux formation // Clin. Hemorheol.- 1992.- Vol. 12.- P.761 -765.

165. Rampling M.W., Meiselman H.J., Neu В., Baskurt O.K. Influence of cell-specific factors on red blood cell aggregation.// Biorheology.- 2004.-Vol.41-P. 91-112.

166. Rasmussen H., Lakew and Alien L.E. The effect of catecholamines and prostaglandins upon human and erythrosytes // Biochim. Biophys. Acta.-1875.- Vol.411.- P. 63-73.

167. Reinhart W.H. Fibrinogen: marker or mediator of cardiovascular disease? Materials of 11th International Congress of Biorheology and 4th International Conference on Clinical Hemorheology.-Antalya.-Turkey.-September 22-26, 2002.- P.51.

168. Reinhart W.H., Nagy C. Albumin effects erythrocyte aggregation and sedimentation. // Eur. J. Clin. Invest 1995. - Vol. 7. - P.523-528.

169. Reinhart W.H., Singh A. Erythrocyte aggregation: the roles of cell deformability and geometry // Eur. J. Clin. Invest.-1990.-Vol.20 P. 458462.

170. Reinhart W.H., Singh A., Straub P.W. Red blood cell aggregation and sedimentation: the role of the cell shape. // Br. J. Haemotol. 1989.- Vol. 73.-№4.- P.551-556.

171. Reuter H. Calcium channel modulation by neurotransmitters enzymes and drugs //Natur (L).-1983.-Vol. 301.-P.569-574.

172. Richard J. Schimmel. Role of cell calcium in alpha-1 adrenergic receptor control of arachidonic acid release from brown adipocytes // Cellular Signalling. -2003.- Vol.l.-№ 6.- P. 607-616.

173. Richter W. Normalizing effect of low molecular weight dextran fractions on the reduced suspension stability of human erythrocytes in vitro. // Acta Chir. Scand.- 1996.-Vol. 131.-P. 1-8.

174. Rourke M.D., Ernstene A.C. A method for correcting the erythrocyte sedimentation rate for variation in the cell volume percentage of blood. // J. Clin. Invest.- 1930. Vol. 8.- P.549-559.

175. Ruoslahti E., Pierschbacher M.D. Arg-Gly-Asp: a versatile cell recognition signal // Cell- 1986.- 44.- P.517-518.

176. Samsel R.W., Perelson A.S. Kinetics of rouleau formation. A mass action approach with geometric feature // Biophys. J. -1982.-Vol.37.- P.493-514.

177. Schmid-Schoenbein G. et al., Suzuki H., Suematsu M., Zweifach B.W. Leucosyte-endothelial interaction in the spontaneously hypertensive rat.// Bioreology.- 1995.-Vol.32.- N.2-3.- P.200.

178. Schmidt A.M., Crandoll J., Hori O., Rong C. // British Journal of Haematology. 1996 - Vol.92.- P. 747-750.

179. Schmid-Schonbein H.W. Erythrocyte rheology and optimization of mass transport in the microcirculation // Blood Cells. -1975 -Vol. 1.- P.285-306.

180. Schmid-Schonbein H.W., Grebe R., Heidtvann H. et al. Passive axial drift of fluid-drop like mammalian RBC: results of spontaneous self-organization in a system far from fluid dynamics equilibrium // Microcirc. clin. and exper.- 1992-Vol.11.- P. 88-97.

181. Schmid-Schonbein H.W. Blood rheology in hemoconcentration//In.:High Altitude Physiol, and Med.-N.Y.: Springer, 1982.-P. 109-116.

182. Schmid-Schonbein G.W., Sofianos A., Kistler E. Mechanisms of cell activation in-vivo // Biorheology.- 1999. Abstracts 10th internationalcongress of biorheology and 3rd international conference of clinical hemorheology. P. 41.

183. Secomb T.W. Flow Dependent Rheologycal properties of blood in capillaries // Microvasc.Res- 1987.- Vol.34. - P.46-58.

184. Simon S.I., Smith C.W. L-selectin crosslinking signals neutrophil adhesive functions via f3-integrin. Biorheology.-1995.-Vol.32.-№2-3.-P.133.

185. Smith C.W., Kishimoto Т.К., Abbass O. et al. Chemotactic factors regulate lectin adhesion molecule 1 (LECAM-1) dependent neutrophil adhesion to cytokine-stimulated endothelial cells in vitro // J. Clin. Invest.1991.- Vol.87.- P.609-618.

186. Steck T.L., Dawson G. Topographical distribution of complex carbohydrates in the erythrocyte membrane. // J. Biol. Chem. 1974.-V.249.- P. 2135-2142.

187. Steiner G.// Diabetes 1981.- V.30.- P.l-7.

188. Stokke R.T., Mikkelsen A., Elgsaeter A. The human erythrocyte skeleton may be an ionic fel. Membrane mechanochemical properties // Europ. Bophys. J.-l986.-Vol. 13.- P.203-218.

189. Stoltz J.F. Blood cell adhesion: an overview // Biorheology-1995.-Vol.32.-№2-3.- P. 195.

190. Stoltz J.F., Donner M. Red blood cell aggregation: measurements and clinical applications // Turkish. J. Med, Sci 1991- Vol.15. - P. 26-39.

191. Stoltz J.F., Donner M., Muller S. Hemorheology in practice: an introduction to the concept of a hemorheological profile // Rev. Port. Hemorreol.-1991.-Vol.5- P.175-188.

192. Sundquist J., Susan D. et al. The al-adrenergic receptor in human erythrocyte membranes mediates interaction in vitro of epinephrine and thyroid hormone at the membrane Ca -ATPase.// Cellular Signalling.1992.-№4.- P.795-799.

193. Sutherland E. Studies on the mechanisms of hormone action. // Science.-1972.-VoI. 177.- P.401-412.

194. Sutton D., Schmid-Schonbein G. Evaluation of microvascular perfusion: The contribution of different blood cell // Leukocyte and endothelial interactions. Prous. Science, Barcelona / Philadelphia, 1995- P.31-41.

195. Thurston G., Balk P., Mcdonald M. Determinants of endothelial cell phenotype in venules // Microcirculation 2000 - P.67-80.

196. Tromp S.C., Slaaf D.W., Tangelder GJ. The involvement of selectins in leukocyte rolling in rabbit mesenteric venules: Abstracts 20th European Conference on Microcirculation. Parish: Journal of vascular research-1998 -P.57.

197. Tsai S.P., Wong J.T. Enhancement of eythrocyte sedimentation rate by polymerized hemoglobin. // Artif. Cell Blood Sustit. Immobil. Biotechnol. -1996.- Vol.24.-№ 5.-P. 513-523.

198. Turi-Blasko S., Demeter J. The Effect of Intramuscularly Administered Drotaverine on the Dilatation Stage of Uncomplicated Deliveries // Obs.&Gynae.- 1998. -Vol. III.-№ 12.-P. 707-794.

199. Van Oss C.J., Arnold K., Coakley W.T. Depletion flocculation and depletion stabilization of erythrocytes // Cell Biophys.-1990.-Vol. 17.- P.l-10.

200. Vo.ger E., Schmid-Schonbein H., Gosen Jv., et al. Microrheology and light transmission of blood. IV. The kinetics of artificial red cell aggregation induced by dextran. // Pflugers Arch.- 1975 Vol.354.- №4. - P. 319 -337.

201. Walter H., Krob E.J. Partitioning behavior of erythrocytes in aqueous two-phase systems containing hydroxypropyl starch and polyethylene glycol. // J. Chromatogr. -1988. -Vol. 441.- №2. -P.261-273.

202. Walter H., Krob E.J., Brooks D.E. Membrane surface properties other than charge involved in cell separation by partition in polymer, aqueous two-phase systems. // Biochemistry 1976-Vol. 15 - №14. - P. 2959- 2964.

203. Weissmann G., Zurier R.B., Hoffstein S. Leukosytes as secretoiy organs of inflammation I I Agents. Actions. 1973. - Vol.3. - P.370-374.

204. Wells R. Rheologic factors in inflammation.- In: The Inflammatory process. 1973.-Vol.2.-P. 149.

205. Woodland N.B., Cordatos K., Hung W.T., Reuben A., Holley L. Erythrocyte sedimentation in columns and the significance of ESR. // Biorheology.- 1996. Vol. 33. - P. 477-88.

206. Yedgar S., Koskaryev A., Relevi H., Barshtein G. Red sell intercellular interaction in circulatory disorders. Материалы междунар. конф. Гемореол. и микроцирк. Ярославль 2003.- 13 с.

207. Zhao T.X., Jacobson B. Quantitative correlations among fibrinogen concetration, sedimentation rate and electrical impedance of blood. // Med. Biol. Eng. Comput.- 1997.-Vol.35.-№3.~ P. 181-185.

208. Zweifach B.W. Microvascular aspects of tissue injury. In: Inflammatory process. - 1973.- Vol.2.- P.3.

Информация о работе

Турова, Елена Викторовна
кандидата биологических наук
Ярославль, 2005
ВАК 03.00.13

Диссертация

Анализ изменений агрегации эритроцитов, адгезии лейкоцитов и суспензионной стабильности крови в физиологических и патофизиологических условиях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы