Анализ функционального состояния эмбрионального нейротрансплантата коры головного мозга

Гафиятуллина, Гюзяль Шамилевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ функционального состояния эмбрионального нейротрансплантата коры головного мозга
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Анализ функционального состояния эмбрионального нейротрансплантата коры головного мозга"

КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

ГАФИЯТУЛЛИНА Гюзяль Шамилевна

АНАЛИЗ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЭМБРИОНАЛЬНОГО НЕЙРОТРАНСПЛАНТАТА КОРЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Краснодар 2005

Работа выполнена в Ростовском государственном медицинском университете.

Научный консультант: доктор медицинских наук профессор

Хананашвили Яков Абрамович.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор

Абушкевич Валерий Гордеевич;

доктор медицинских наук профессор Азин Александр Леонидович;

член-корреспондент РАМН профессор Зефиров Андрей Львович.

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт

экспериментальной медицины РАМН.

Защита состоится « /т^ » ОЮ^-СсЯ^ 2005 г. в 10.00 на заседании диссертационного совета Д 208.038.01 при Кубанском государственном медицинском университете (350063, Краснодар, ул. Седина, 4, тел. {861} 262-73-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан « 1С"» 111СЫЯУ 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор

Ю.Р.Шейх-Заде

mi^L

ть

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Современными исследованиями экспериментальной и клинической медицины созданы серьезные предпосылки для практического использования трансплантации эмбриональной ткани и клеток с целью стимуляции и восстановления функций организма (Шумаков В.И. и соавт., 1995-2005). В рамках данного научного направления одно из ведущих мест принадлежит трансплантации эмбриональной нервной ткани, которую рассматривают как возможную альтернативу традиционным консервативным и хирургическим методам лечения ряда неврологических заболеваний человека (Snyder Е. et al., 1997; Сухих Г.Т., 1998; Отеллин В.А., 1999; Guzman R.et al., 1999; Hodges H.et al., 2000; Станков Д.С. и соавт., 2003), а также как методологическую основу экспериментальной разработки механизмов самоорганизации мозга и способов протезирования сенсорных систем (Брюховецкий A.C., 1998; Wenning G.K. et al., 1999; Гилерович Е.Г. и соавт., 2001). Эти обстоятельства подчеркивают актуальность проблемы экспериментальной нейротрансплантологии и перспективность практического применения пересадки эмбриональной нервной ткани (Bjorklund A.et al., 1998; Виноградова О.С., 2000; Александрова М.А. и соавт., 2004; Журавлева З.Н., 2004).

Однако, являясь перспективным направлением медицины, проблема трансплантации эмбриональной нервной ткани находится в самом начале своего развития, поскольку для принятия решения о возможности ее практического внедрения необходимо решить вопросы медико-биологического, морально-этического и юридического характера.

с мозгом реципиента, а также об условиях увеличения жизнеспособности нейротрансплантата.

В этом отношении известно, что после гомотопической аллогенной трансплантации фрагмента эмбриональной нервной ткани в кору мозга взрослого животного, трансплантат растет и дифференцируется, образуя межнейронные связи с клетками хозяина (Lindval О., 1999; Gaillard A. et al., 2000), прорастает кровеносными сосудами (Лосева Е.В., 2001), создавая тем самым основу для оксигенации и энергетического обеспечения своей деятельности.

Вместе с тем представляется очевидным, что жизнеспособность нейротрансплантата определяется не столько восстановлением структуры нейронных сетей и кровеносного русла, сколько воссозданием исходной иннервации мозга реципиента и способности сосудов к осуществлению адаптивных сосудистых реакций (Виноградова О.С., 1994). Это положение обусловливает повышенный интерес к выяснению функционального состояния эмбриональной нервной ткани в процессе ее интеграции с мозгом реципиента.

Однако, сведения об условиях функционирования эмбрионального нейротрансплантата (ЭНТ) в динамике его приживления не нашли должного отражения в литературе. Так, в частности, в трансплантированной эмбриональной нервной ткани не определены характеристики биоэлектрической активности, кровоснабжения и кислородного обеспечения, а также их сопряженности; отсутствуют данные о характере реакций нейронов и микрососудов трансплантата; остаются невыясненными сроки жизнеспособности пересаженной эмбриональной нервной ткани при разных видах и методиках трансплантации.

Учитывая вышеизложенные обстоятельства, целью работы явилось установление закономерностей процесса интеграции аллогенного эмбрио-

нального нейротрансплантата с мозгом реципиента на основе комплексного анализа его функционального состояния.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. определить влияние гомотопической аллотрансплантации эмбриональной нервной ткани на функционирование мозга реципиента посредством оценки характера поведенческих реакций;

2. определить фоновые значения биоэлектрической активности, кровоснабжения и кислородного обеспечения в трансплантированной эмбриональной нервной ткани в разные сроки после ее пересадки;

3. определить характер вызванной импульсной активности клеток эмбрионального нейротрансплантата в разные сроки после его пересадки;

4. определить характер регуляторных микрососудистых реакций в эмбриональном нейротрансплантате в разные сроки после его пересадки;

5. определить характер сопряженности между биоэлектрической активностью, кровоснабжением и кислородным обеспечением в трансплантированной эмбриональной нервной ткани в разные сроки после ее пересадки;

6. определить направленность и величину изменений фоновых показателей биоэлектрической активности, микрогемодинамики и кислородного обеспечения в трансплантированной эмбриональной нервной ткани в разные сроки после ее пересадки;

7. определить направленность и величину изменений вызванной импульсной активности клеток и регуляторных микрососудистых реакций в эмбриональном нейротрансплантате в разные сроки после его пересадки.

Новизна результатов исследования заключается в том, что впервые:

- проведено комплексное исследование биоэлектрической активности, микрогемодинамики и кислородного обеспечения аллогенной эмбрио-

нальной нервной ткани, пересаженной в гомотопическую область сомато-сенсорной коры мозга реципиента, в процессе ее интеграции;

- изучено влияние гомотопической аллотрансплантации эмбриональной нервной ткани на функционирование мозга реципиента посредством оценки характера поведенческих реакций, специфичность которых определяется сроком после пересадки;

- получены результаты, отражающие динамику формирования адаптивных регуляторных реакций микрососудов эмбрионального нейротранс-плантата, проявляющиеся в 4-месячном сроке после пересадки в повышении дилататорной способности микрососудов, а в 8-месячном - в снижении интенсивности кровоснабжения и эффективности вазодилатации;

- установлены варианты паттернов биоэлектрической активности фоновоактивных нейронов, а также особенности вызванной импульсной активности клеток эмбриональной нервной ткани, характеризующие динамику ее функционального состояния;

- установлен сопряженный характер изменений и усиление взаимного влияния показателей частоты импульсной активности нейронов, интенсивности кровотока и кислородного обеспечения пересаженной эмбриональной нервной ткани при активации, вызванной афферентной сенсорной стимуляцией;

- показано, что гомотопические трансплантаты эмбрионального не-окортекса, имеющие высокую реактивность к сенсорной стимуляции, способны компенсировать функции удаленного участка коры мозга, при этом интеграция нейротрансплантата с мозгом реципиента, зависящая от адекватности гемодинамического обеспечения, определяется сроком, прошедшим после пересадки.

плантированной в кору головного мозга, носят фундаментальный характер и позволяют установить закономерности процесса интеграции трансплантированной эмбриональной нервной ткани с мозгом реципиента. Данные 12-месячного наблюдения и комплексного анализа показателей ЭНТ, осуществленного в динамике его приживления в состоянии покоя и при сенсорной активации, позволяют заключить, что несмотря на сходный характер протекания ряда физиологических процессов в эмбриональной и зрелой нервной ткани, ЭНТ не обладает достаточными функциональными свойствами. Результаты исследования функционального состояния мозга крыс-реципиентов через 4 месяца после нейротрансплантации, свидетельствующие о повышении у них двигательной и ориентировочно-исследовательской активности, реорганизации биоэлектрических процессов и реактивности мозговых микрососудов, свидетельствуют о перспективности разработки оптимальных условий для длительного выживания трансплантата.

Практическая значимость исследования заключается в получении физиологического обоснования возможности испытания и применения нейротрансплантации эмбриональной ткани в качестве нейропротекторно-го и нейромодулирущего средства. Результаты исследования позволяют определить перспективы применения незрелой нервной ткани для коррекции и протезирования нарушенных функций нервной системы после повреждения. Данные о наличии у нейронов ЭНТ функциональной активности ставят вопрос о возможности компенсации явлений, зависящих от структурно-функциональной организации отделов мозга, восстановлении посредством трансплантации разрушенной системы связей. Результаты работы могут быть использованы в научных исследованиях в области физиологии и фармакологии мозгового кровообращения, экспериментальной трансплантологии, неврологии и нейрохирургии.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 239 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания метода исследования, трех глав с результатами собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего всего 372 источника, из них 149 - на русском и 223 - на иностранном языках, и приложений. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 46 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика материала исследования. Эксперименты выполнены на 115 крысах-самцах линии Wistar массой 180-200 г. Основную группу составили крысы с ЭНТ (п=51). Контрольная группа была представлена крысами с интактной соматосенсорной корой (ССК) (п=64), возраст которых соответствовал возрасту животных основной группы. Исследование эмбриональной нервной ткани осуществляли через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки.

Проведение оперативных вмешательств. Крысам основной группы осуществляли аллогенную гомотопическую трансплантацию эмбриональной нервной ткани по общепринятой методике (Брагин А.Г. и соавт., 1981; Виноградова О.С., 1994; Olsson M.et al., 1997). Наркотизированных кетамином (12,5 мг/кг, внутрибрюшинно) крыс фиксировали в стереотак-сическом приборе. Теменную кость трепанировали справа над зоной проекции ССК на поверхности мозга (стереотаксические координаты АР=+2,0 мм; L=5,5 мм) (Konig J. et al., 1963). Твердую мозговую оболочку надрезали и с помощью шприца со стеклопластиковым наконечником удаляли 1 мм3 серого вещества, формируя в коре углубление, в которое после тщательного гемостаза под микроскопическим контролем помещали донорскую эмбриональную ткань. Производили костную аутопластику, ткани головы ушивали.

Донорскую ткань получали от 17-дневных эмбрионов (Bjorklund А. et al., 1980; Fricker R. et al., 1997). Самкам с датированным сроком беременности с соблюдением стерильности под кетаминовым наркозом производили кесарево сечение. Эмбрионы после извлечения из рога матки помещали в стерильный 5% раствор глюкозы (t=37°C). После декапитации эмбриона и вскрытия мозговых оболочек выделяли мозг из полости черепа и переносили его в новую порцию стерильного раствора глюкозы. Выделение эмбриональной ССК производили в соответствии со стереотаксиче-ским атласом пренатального развития мозга крысы (Sherwood N. et al., 1970; Altman J. et al., 1995). С помощью шприца со стеклопластиковым наконечником, содержащим 0,01мл 0,9% раствора NaCl, под микроскопическим контролем извлекали фрагмент ткани объемом 1 мм3, используемый в качестве трансплантата. Процедура от извлечения эмбрионов до имплантации эмбриональной ткани в мозг реципиента составляла 15-20 минут.

По истечении необходимого срока после операции по пересадке эмбриональной ткани животное, наркотизированное кетамином, фиксировали в стереотаксическом приборе. Кость черепа вновь трепанировали над зоной проекции имплантата и ССК у контрольных крыс. Поверхность мозга покрывали слоем агар-агара и заливали вазелиновым маслом (t = 37°С).

Оценка поведенческих реакций крыс основной и контрольной групп осуществлялась при следующих видах тестирования (Буреш Я. и со-авт., 1991):

1) в открытом поле, представлявшем собой площадку размером 0,7*0,7 м, расчерченную на квадраты с длиной стороны 10 см. Регистрировали число перемещений по квадратам (горизонтальную двигательную активность), вертикальную двигательную активность (стойки), частоту входа в центр и число актов груминга.

2) в Y-образном лабиринте с освещенным и затемненным отсеками величиной 50* 10*40 см регистрировали число стоек, заходов в отсеки ла-

биринта и актов груминга, время нахождения в движении и пребывания в освещенном отсеке.

3) в условиях теста принудительного плавания в бассейне 60'60'40 см (1° воды 28°С). Регистрировали время активного и пассивного плавания, частоту активного избегания, время иммобилизации.

Идентификация области представительства вибриссы С1 в ЭНТ и контрольной ССК производилась путем определения фокуса максимальной активности вызванного потенциала при ее адекватной сенсорной стимуляции на контралатеральной к оперированному полушарию стороне. Вибриссу раздражали отклонением металлической пластины шириной 1,5 мм, прикрепленной к электромеханическому преобразователю, напряжение на который подавали от электростимулятора (Хананашвили Я.А. и со-авт., 2001). Электрические импульсы, поступающие на электромагнит устройства, имели длительность 10 мсек. Стимулы подавали 1 раз в секунду сериями длительностью 10 с. Отведение фокальных ответов осуществляли эпидурально от поверхности мозга, монополярно, хлорированными серебряными шариковыми электродами диаметром 200 мкм при полосе пропускания усилителей 1-2000 Гц. Для автоматизированного анализа сигналы подвергали аналогово-цифровому преобразованию с записью на жесткий магнитный диск компьютера.

В идентифицированную зону проекции вибриссы С1 с шагом 10 мкм с помощью микроманипулятора погружали блок электродов для синхронной регистрации импульсной активности нейронов, локального мозгового кровотока (ЛМК) и парциального напряжения кислорода (р02). Глубину погружения определяли по показаниям микрометрического индикатора.

Анализ биоэлектрической активности нейронов ЭНТ. Импульсную активность отводили на глубине 0,4-0,7 мм от поверхности мозга посредством стеклянных микроэлектродов с капиллярами (диаметр кончика 2-4 мкм, сопротивление 15-20 мОм), заполненными 0,9% раствором ЫаС1.

Сигнал от микроэлектрода усиливали биоусилителем и с помощью аналогово-цифрового преобразователя записывали на жесткий магнитный диск компьютера (частота дискретизации сигнала - 10 кГц). При исследовании вызванной импульсной активности нейронов в период ответной реакции на стимуляцию в качестве адекватного сенсорного стимула использовали механическое раздражение вибриссы С1. Для анализа цифровых записей нейронной активности применяли компьютерные программы, позволявшие выделять импульсные потоки отдельных нейронов на основании идентификации их спайков по амплитуде, длительности, соотношению позитивного и негативного компонентов импульса. После выделения и децимации записи представляли собой последовательности межимпульсных интервалов с разрешением по времени 1 мс. Оценивали значения средней частоты импульсной активности нейронов, латентного периода их ответа на афферентную стимуляцию, продолжительности и дисперсии межимпульсных интервалов с построением гистограмм плотности вероятности их распределения и постстимульных гистограмм с периодом усреднения 4, 8 или 50 мс, суммарное количество усреднений составляло 2000. Зарегистрирована импульсная активность 303 нейронов трансплантатов и 357 нейронов контрольной ССК.

Анализ локального мозгового кровотока и р02. ЛМК регистрировали с использованием метода полярографического определения рН2 при электрохимической генерации водорода непосредственно в мозговую ткань (Зк^еск К. et а1., 1974). Генерирующий платиновый электрод имел диаметр 30 мкм, величина тока генерации составляла 1 мкА, напряжение поляризации цепи - 200 мВ. Диаметр измерительного платинового электрода был 10 мкм, напряжение поляризации - 0,29 В. Количественные величины ЛМК рассчитывали методом начального наклона (Москаленко Ю.Е. и соавт., 1994). Применяли компьютерные программы, позволяющие

определить время, за которое начальное значение кривой клиренса Н2, снижалось в 2 раза (Т Уг), затем осуществляли расчет ЛМК по формуле:

ЛМК=100^0,693: ТА (мл/1 ООг/мин), где К - коэффициент распределения Н2 в системе кровь-ткань, равный 1.

Регистрацию р02 производили полярографическим методом (Березовский В.А., 1975). Диаметр измерительного платинового электрода равнялся 10 мкм. Напряжение поляризации в измерительной цепи составляло (~)0,68 В. Количественный уровень р02 рассчитывали по величине диффузионного тока с помощью разработанной компьютерной программы. Хлорсеребряные электроды сравнения для цепей измерения рН2 и р02 и референтный платиновый электрод для цепи генерации Н2 помещали под кожу животного в области шеи. Для регистрации ЛМК и р02 использовали прибор «Физиоблок-01», выход которого соединяли через аналогово-цифровой преобразователь Ы 52 с компьютером. Сигналы усиливали биоусилителем и записывали на жесткий магнитный диск компьютера. Строили гистограммы распределения величин ЛМК и р02. Осуществляли проверку нормальности распределения величин с помощью расчета коэффициента асимметрии, являющегося количественной характеристикой степени отклонения вариационной кривой. При исследовании характера микрососудистых реакций в качестве сенсорного стимула использовали меха-ностимуляцию вибриссы С1. Анализировали латентные периоды развития реакций и их амплитуду (% прироста величины показателя). Исследовано 283 паттерна кровотока и р02 трансплантатов и 289 - контрольной ССК.

Морфологическая верификация приживления и положения ЭНТ, топики стерсотаксических манипуляций. В точке регистрации делали проходку микроэлектродом, окрашенным тушью, до заданной глубины. Животное подвергали эвтаназии введением большой дозы кетамина, череп вскрывали и мозг крысы вместе с погруженными в него кончиками

микроэлектродов перфузировали вначале 0,9% раствором NaCl, а затем 10% нейтральным формалином. Через 10 часов извлекали микроэлектроды, а место их вхождения фиксировали коагуляцией постоянным током. После 7-дневной фиксации фрагмент мозга обезвоживали и заключали в целлоидин. Срезы подкрашивали гематоксилин-эозином (Лапенко Т.К., 1983). Препараты подвергали микроскопированию (ок.х7, об.хЗ,5). Учитывали записи импульсной активности нейронов, сделанные в пределах ЭНТ.

Статистический анализ результатов производили с помощью программы Statistica 5.0. Для проверки статистических гипотез, определения значимости различий между выборками использовали t-критерий Стью-дента для независимых выборок. При наличии достоверных (р<0,05) отличий распределения признаков от нормального (критерий yv2), применяли Т-критерий Уилкоксона и U-критерий Манна-Уитни. Статистически достоверными считали различия между выборками при значении р<0,05.

Кросскорреляционный анализ проводили для оценки уровня сопряженности между попарно сравниваемыми величинами показателей частоты импульсной активности нейронов, ЛМК и р02 в исходном состоянии и при механостимуляции вибрисс. Рассчитывали коэффициенты парной кросскорреляции (г) с определением их достоверности. По величине коэффициентов кросскорреляции выявляли уровень взаимосвязи: слабый (г = 00,33); средний (г = 0,34-0,66); сильный (г = 0,67-1,0) (Лакин Г.Ф., 1990), что позволило определить тесноту линейной взаимосвязи параметров. При анализе коэффициентов кросскорреляции между соответствующими парами показателей учитывали их значения в фоне и при стимуляции, а также качественные сдвиги, обусловливающие переход кросскорреляционных связей в иной по уровню диапазон.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Характер влияния трансплантации эмбриональной нервной ткани на функционирование мозга реципиента

Поскольку один из ключевых вопросов проблемы трансплантации эмбриональной нервной ткани о влиянии ЭНТ на функционирование мозга реципиента оставался нерешенным, целью данной серии исследования явилось изучение характера поведенческих реакций у крыс с гомотопическим эмбриональным аллотрансплантатом в соматосенсорной области коры головного мозга.

Результаты исследований представлены в табл.1, из которой следует, что у крыс с ЭНТ через 4 месяца после пересадки по сравнению с контрольными в тесте открытого поля выявлены повышенная горизонтальная двигательная активность, возрастание числа вертикальных стоек и актов груминга, свидетельствовавшее об увеличении тревожности.

В У-образном лабиринте отмечено возрастание горизонтальных и вертикальных двигательных реакций, а также повышение уровня тревожности, проявившееся в уменьшении времени нахождения в освещенном отсеке. В тесте принудительного плавания выявлено укорочение периодов активного плавания, возрастание числа реакций избегания и уменьшение продолжительности иммобилизации. Уровень эмоционального напряжения был повышен, что проявилось в уменьшении продолжительности пассивного плавания.

Крысы с ЭНТ через 8 месяцев после пересадки характеризовались активацией поведенческих реакций: возросшей локомоцией, повышением ориентировочно-исследовательской деятельности и уровня эмоционального напряжения, уменьшением реакции страха в тестах открытого поля и У-образном лабиринте, сокращением времени иммобилизации и возросшей частотой избегания в тесте принудительного плавания.

Таблица 1

Показатели поведенческих реакций контрольных крыс и крыс с эмбриональным нейротрансплантатом (ЭНТ) через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки, М±т

Показатели Контрольные крысы ЭНТ

1 2 3

через 4 месяца

Тест открытого поля: ■ перемещения по квадратам - стойки -груминг - выходы в центр 62,8±11,42 12,5±6,44 14,0±2,45 0,8±0,05 80,3±9,43* 25,3±3,89* 27,7±5,44* 1,3±0,60

У-образный лабиринт: - стойки - время в движении, с - число заходов в отсеки - нахождение в освещенном отсеке, с - груминг 10,5±3,41 5,7±3,12 16,7±2,34 6,8±1,39 25,8±2,82 20,3±4,45* 12,8±4,12* 14,4±5,78 3,3±0,40* 23,1±4,13

Принудительное плавание: - активное плавание, с - пассивное плавание, с - частота избегания - время иммобилизации, с 35,8±2,52 13,0±2,53 2,5±0,04 54,2±4,34 11,3±1,66** 3,4±0,40* 25,3±3,43** 26,8±4,42*

через 8 месяцев

Тест открытого поля: - перемещения по квадратам - стойки -груминг - выходы в центр 66,8±4,81 14,5±3,58 5,9±1,54 1,4±0,41 82,1±11,63* 12,5±3,22 19,3±2,34** 2,9±0,36*

У-образный лабиринт: - стойки - время в движении, с - число заходов в отсеки - нахождение в освещенном отсеке, с -груминг 13,5±2,26 7,9±4,13 13,5±3,76 7,4±1,21 18,8±4,21 24,5±4,21* 14,5±2,5* 22,4±4,81* 12,4±2,23* 16,4±4,98

1 2 3

Принудительное плавание: - активное плавание, с - пассивное плавание, с - частота избегания - время иммобилизации, с 32,8±4,41 12,4±2,64 5,8±3,63 67,2±3,8 28,2±4,34 6,8±2,41 * 27,4±3,42** 16,4±2,51***

через 12 месяцев

Тест открытого поля: - перемещения по квадратам - стойки -груминг - выходы в центр 69,4± 10,23 13,3±2,07 12,8±1,2 1,2±0,73 35,7±5,13* 4,6±2,76* 23,7±3,1** 0,9±0,50

У-образный лабиринт: - стойки - время в движении, с - число заходов в отсеки - нахождение в освещенном отсеке, с -груминг 12,2±5,14 13,7±2,58 1б,7±2,3 8,2±2,43 11,4±6,22 19,8±3,36* 6,3±2,35* 7,2±3,17* 4,3±2,16* 14,8±3,93

Принудительное плавание: - активное плавание, с - пассивное плавание с - частота избегания - время иммобилизации с 30,7±4,21 15,8±3,98 8,8±2,44 48,8±4,74 12,4±3,25** 26,4±3,78* 2,1±0,09** 64,6±7,31*

Примечание: * - различие достоверно между ЭНТ и контролем при р<0,05; **-при/><0,01; *** - при ¿><0,001.

Через 12 месяцев после пересадки у крыс с ЭНТ происходило угнетение поведенческих реакций: снижение двигательной и ориентировочно-исследовательской активности, возрастание числа актов груминга, повышение уровня эмоционального напряжения.

Таким образом результаты поведенческих тестов по ряду параметров приближены к характерным для контрольных крыс. Можно полагать, что нейротрансплантация целенаправленно воздействует на мозг реципиента. В присутствии ЭНТ изменяются исследовательское поведение и двигательные функции, что может свидетельствовать об интеграции пересаженной эмбриональной ткани с взрослым мозгом, требующей воссоздания его

структурно-функциональных характеристик. Возрастание поведенческой активности в присутствии ЭНТ можно расценивать как свидетельство адаптации и нормализации функционального состояния центральной нервной системы реципиента.

Характер биоэлектрической активности, кровоснабжения и кислородного обеспечения эмбрионального нейротрансплантата соматосенсор-ной коры головного мозга через 4 месяца после пересадки

В ЭНТ зарегистрирована импульсная активность 108 нейронов, из которых 89 (82%) были фоновоактивны. Среди них выявлены три популяции клеток, первая из которых (17%) была представлена высокочастотными нейронами, генерировавшими импульсную активность с частотой 21-35 имп/с; вторая (67%) - среднечастотными (7-20 имп/с) и третья (16%) -низкочастотными (1-6 имп/с).

Таблица 2

Соотношение нейронов (в %) контрольной соматосенсорной коры (ССК) и эмбрионального нейротрансплантата (ЭНТ) через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки с разной частотой разрядов и типом активности

Сроки

Показатель 4 месяца 8 месяцев 12 месяцев

ССК ЭНТ ССК ЭНТ ССК ЭНТ

Общее количество

нейронов 129 108 112 106 116 89

По частоте разрядов:

- высокочастотные 4 17 7 11 11 4

- среднечастотные 87 67 82 68 61 58

- низкочастотные 9 16 11 21 28 38

По типу активности:

-непрерывно-аритмический 45 62 48 53 63 79

-пачечный 8 4 18 24 8 7

-пачечно-групповой 4 6 4 9 12 5

-смешанный 43 28 30 14 17 9

Текущая средняя частота импульсной активности клеток ЭНТ составила 3,9±0,37 имп/с. Из приведенных в табл.2 данных следует, что в паттернах активности клеток ЭНТ доминировал непрерывно-аритмический тип генерации разрядов (62%), выявлены также пачечный, пачечно-групповой и смешанный типы.

В ССК контрольных крыс зарегистрировано 129 нейронов, из них 108 (84%) были фоновоактивны. Среди нейронных популяций преобладали среднечастотные клетки. Разновидности нейронов контрольной коры представлены в табл.2. Текущая средняя частота генерации импульсов равнялась 13,4+1,76 имп/с и была выше (р<0,01), чем в ЭНТ. Гистограммы плотности вероятности распределения межимпульсных интервалов активности клеток ЭНТ и контрольной ССК имели мономодальную форму с максимальными значениями в диапазоне 80-120 мс и 70-90 мс (рис.1 А).

Таким образом, среди фоновоактивных клеток ЭНТ и ССК контрольных крыс установлено наличие трех популяций нейронов, среди которых преобладали среднечастотные нейроны с непрерывно-аритмическим типом генерации импульсной активности, однако средняя частота импуль-сации нейронов ЭНТ была ниже, чем в контроле.

Анализ вызванной активности нейронов показал, что из 108 зарегистрированных клеток ЭНТ отреагировали на стимуляцию вибриссы С1 77 нейронов (71%), 19 из которых относились к фоновомолчащим. 42 нейрона (54%) из 77 отреагировавших отвечали развитием возбудительной реакции в виде увеличения частоты импульсации. У 23 нейронов (30%) чередовались периоды учащения и урежения импульсации, а у 12 (16%)-начальное снижение частоты генерации импульсов сменялось ее восстановлением до первоначального уровня.

Нейроны ЭНТ отвечали на сенсорную стимуляцию с латентным периодом 28±2,1 мс и последующей тормозной фазой, отставленной по

энт

7 6

800

сск

ilk.

800

'^ihkiMi».

800

Jlhtiu^

400

10 5'

0 500

5000

>Ш1

800

Рис. 1. Гистограммы плотности вероятности распределения межимпульсных интервалов фоновой импульсной активности нейронов эмбрионального нейротрансплантата (ЭНТ) через 4 (А), 8 (Б), 12 (В) месяцев после пересадки и соматосенсорной коры (ССК) контрольных крыс.

Обозначения:

по оси абсцисс - продолжительность межимпульсных интервалов; по оси ординат - количество интервалов, выраженное в %.

времени на 100 мс. Средняя частота составила 7,6±1,58 имп/с, что было на 95% больше (р<0,05) по сравнению с фоном.

В ССК контрольных крыс из 129 клеток на стимуляцию отреагировали 115 (89%>), среди которых 21 нейрон относился к фоновомолчащим. 97 нейронов (84%) отвечали возбуждением, повышая частоту генерации импульсов. У 14 нейронов (12%) выявлено наличие чередования периодов активации и угасания импульсации, у 4 клеток (4%) - начальное снижение уровня импульсной активности. Латентный период постстимульных ответов составил 12±1,8 мс и был в 2,3 раза короче (р<0,05), чем у клеток ЭНТ.

Средняя частота вызванной активности нейронов возросла до 18,4+3,89 имп/с, что было на 43% больше (р<0,05) по сравнению с фоном.

Таким образом в ЭНТ по сравнению с ССК контрольных крыс выявлено увеличение латентного периода постстимульных ответов нейронов. Паттерны активности характеризовались повышением частоты генерации импульсов, либо чередованием периодов активации и снижения импульсации с последующим ее восстановлением до первоначального уровня, в чем проявлено сходство с таковыми у нейронов контрольной ССК.

Анализ результатов исследования позволяет заключить о нормальном функциональном состоянии ЭНТ, что нашло отражение в сходстве паттернов биоэлектрической активности ЭНТ и контрольной ССК. Следует отметить, что наличие в ЭНТ большого объема фоновоактивных и реагирующих на стимуляцию клеток сопровождается значительным улучшением поведенческих реакций крыс-реципиентов. Взаимодействие ЭНТ с мозгом реципиента, вероятно, обусловлено формированием развитой системы функциональных связей между их клеточными популяциями на данном этапе после имплантации.

Первостепенное значение для приживления ЭНТ имеет восстановление капиллярной сети пересаженной ткани (Miyoshi Y. et al., 1995).

лмк

ро2

месяца

О 10 20 30 40 50 60 70 мл/1Ш>г/мин

10 20 30 40 "»ртст

месяцев

О 10 20 30 40 50 60 70 мллоог/иии

О 10 20 30 40 ммртст

месяцев

О 10 20 30 40 50 60 70 мпЛООг/мин

10 20 30 40 »»Ш-ет

Рис. 2. Гистограммы распределения величин кровотока и р02 в ЭНТ (А) через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки и контрольной ССК (Б).

Обозначения:

по оси абсцисс - класс значений ЛМК и р02; по оси ординат - число значений в каждом классе (в % к общей выборке).

Поддержание оптимального уровня микрогемодинамики и кислородного режима ЭНТ связано с развитием метаболической кооперации клеточных систем донора и реципиента (Вгапс1пег Б. й а1., 1998).

Результаты измерения ЛМК в зоне представительства вибриссы С1 в ЭНТ показали, что при ступенчатом погружении электрода его значения варьировали в диапазоне от 26-69 мл/100г/мин (рис.2). Наибольшие значения кровотока регистрировали на глубине 0,5-0,7 мм.

Гистограмма распределения величин ЛМК имела близкую к симметричной форму, а его интенсивность составила в среднем 48,1 + 1,6 мл/100г/мин. У контрольных крыс величины ЛМК варьировали от 35 до 81 мл/100г/мин, а максимальные значения зарегистрированы на глубине 0,6-0,8 мм. Интенсивность ЛМК составила 56,7±2,17 мл/100г/ мин.

Результаты измерения р02 в ЭНТ показали, что его значения варьировали в пределах 11-42 мм рт.ст., а наибольшие из них регистрировались на глубине 0,5-0,7 мм. Модальный класс значений на гистограмме соответствовал 25-30 мм рт. ст. (рис.2). Средний уровень р02 составил 25,8+2,91 мм рт.ст.. В контрольной ССК максимальные значения р02были зарегистрированы на глубине 0,6-0,8 мм, средний уровень р02 составил 25,8± 1,83 мм рт.ст..

Таким образом в ЭНТ интенсивность ЛМК снижалась по сравнению с контролем на 13,1% (р<0,05), в значениях р02 различий не обнаружено.

Из приведенных в табл.3 данных следует, что в ЭНТ латентный период повышения ЛМК составил 4,2+1,15 с, а амплитуда прироста его величины относительно исходного уровня - 60,8+5,23%. Реакция возрастания тканевого р02 в ЭНТ развивалась с латентным периодом, составившим 4,03 + 1,93 с, амплитуда прироста его величины достигала 40,1+6,33%. Прирост кровотока в ЭНТ составил в 2,4 раза большую (р<0,01), а р02 - в 1,7 раз большую (р<0,01) величину, чем у контрольных животных.

Таблица 3

Параметры функциональной гиперемии (ФГ) и реакции возрастания р02 (Вр02) в соматосенсорной коре (ССК) контрольных крыс и эмбриональном нейротрансплантате (ЭНТ) при механостимуляции вибрисс через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки, М±т

Сроки

Показатель 4 месяца 8 месяцев 12 месяцев

ССК ЭНТ ССК ЭНТ ССК ЭНТ

Латентный 5,1 + 4,2+ 4,8+ 6,8+ 6,2± 12,2+

период ФГ, с 1,02 1,15 0,47 0,76 1,23 4,25*

Амплитуда 25,3± 60,8+ 21,8+ 12,7+ 21,3+ 8,9±

ФГ, % 3,82 5,23** 2,26 1,34** 2,64 2,16**

Латентный 5,1 + 4,03 ± 5,1 + 6,9± 7,2± 16,4+

период Вр02, с 2,43 1,93 0,49 0,68 2,90 3,18*

Амплитуда 23,2+ 40,1 + 22,7+ 10,4+ 18,9+ 8,9+

Вр02, % 2,12 6,33** 2,32 1,12** 4,23 2,41**

Примечание: * - различие достоверно между ЭНТ и контролем при р<0,05; ** - при р<0,01.

Формирование в ЭНТ в ответ на раздражение вибриссы С1 высокого уровня локальной функциональной гиперемии, развивающейся посредством местных сосудистых реакций, может свидетельствовать о повышенной дилататорной способности микрососудов при осуществлении ими регуля-торных адаптивных реакций, компенсирующих снижение исходной величины мозгового кровотока, благодаря чему в нервной ткани поддерживается стабильный уровень р02

Анализ корреляционных взаимоотношений между импульсной активностью нейронов, микрогемодинамикой и кислородным обеспечением ЭНТ выявил, что в исходном состоянии в ЭНТ парная кросскорреляцион-ная связь сильного уровня наблюдалась между значениями ЛМК и р02. В ССК контрольных крыс имели место прямые средние по силе кросскорре-ляционные связи между всеми попарно сравниваемыми показателями (табл.4). При механостимуляции вибрисс в ЭНТ между показателями им-

пульсной активности нейронов, кровотока и р02 происходила качественная перестройка обратных кросскорреляционных связей, приобретавших сильный уровень. В ССК контрольных крыс средние по силе прямые кросскорреляционные связи между показателями сохранялись.

Результаты данной серии исследования свидетельствуют, что в 4-месячном сроке после пересадки характер функциональной активности ЭНТ имеет сходство с областью представительства вибрисс контрольной ССК. Спустя 4 месяца после пересадки морфологическая организация клеток ЭНТ соответствует достижению in situ дифференцированного состояния (Журавлева З.Н., 2004), а количество кровеносных сосудов адекватно плотности созревающих нейронов (Dusart I. et al., 1989).

Таблица 4

Показатели парных коэффициентов кросскорреляции между показателями средней частоты импульсной активности (ИА) нейронов, локального мозгового кровотока (JIMK) и р02 в соматосенсорной коре (ССК) контрольных крыс и эмбриональном нейротрансплантате (ЭНТ) в исходном состоянии (г) и при механостимуляции вибрисс (ri)

Показатель Сроки

4месяца 8 месяцев 12 месяцев

ССК ЭНТ ССК ЭНТ ССК ЭНТ

лмк- Ро2 г= 0,43* г= 0,83** г= 0,51* г= 0,56* г= 0,68** г= 0,44*

Г1 = 0,65** г(= 0,85** Г1 = 0,26 Г1 = 0,89** 0,97** Г] = 0,95*

ЛМК- ИА г= 0,48* г = -0,24 г= 0,62* г= 0,77** г= 0,72** г= 0,68*

Г) = 0,52* 0,71* П= 0,59* Г) = 0,92** Г) = 0,98** Г] = 0,96**

р02- ИА г= 0,46* г= -0,17 г= 0,58** г= 0,69** г= 0,71** г= 0,62**

П= 0,28 П= 0,29 Г1 = 0,31 П= 0,89** Г1 = 0,36* Г1 = 0,99**

Обозначения:

г - в исходном состоянии; гг при механостимуляции вибрисс. Примечание: * - достоверно при р<0,05; ** - при ¿><0,01.

Можно полагать, что ЭНТ обменивается аксонами с мозгом хозяина и образует систему, в пределах которой создаются условия для реализации нормального режима работы нейронов и их участия в обработке информации. При этом в ЭНТ устанавливается необходимый уровень гемодинами-ческого и кислородного обеспечения, а показатели реакций функциональной гиперемии и возрастания р02 существенно превышают значения, зарегистрированные в контрольной коре, что может свидетельствовать о повышенной дилататорной способности микрососудов при осуществлении ими регуляторных адаптивных реакций.

Характер биоэлектрической активности, кровоснабжения и кислородного обеспечения эмбрионального нейротрансплантата соматосенсор-

ной коры головного мозга через 8 месяцев после пересадки

Из 106 нейронов, импульсная активность которых зарегистрирована в ЭНТ, 83 (78%) были фоновоактивны. Среди нейронов преобладали сред-нечастотные. Текущая средняя частота импульсной активности клеток ЭНТ составила 3,8+0,87 имп/с. Из приведенных в табл. 2 данных следует, что в ЭНТ наиболее часто встречался непрерывно-аритмический тип генерации разрядов.

В ССК контрольных крыс зарегистрировано 112 нейронов, из них 102 (91%) были фоновоактивны. Наиболее многочисленной была популяция среднечастотных нейронов с непрерывно-аритмическим и смешанным типами импульсации (табл.2). Средняя частота равнялась 15,4+1,28 имп/с и была выше (р<0,01), чем в ЭНТ. Гистограммы межимпульсных интервалов клеточной активности ЭНТ имели бимодальную форму с пиковыми значениями 120 и 170 мс, а у нейронов контрольной ССК оставались мономодальными, с максимумом в диапазоне 50-60 мс (рис.1 Б).

Таким образом характер генерации импульсной активности нейронами ЭНТ видоизменялся, что нашло отражение в перестройке паттернов гистограмм межимпульсных интервалов, при этом текущая средняя частота импульсации клеток была ниже, чем в контрольной ССК.

Анализ вызванной активности нейронов показал, что из 106 зарегистрированных клеток ЭНТ на стимуляцию вибриссы С1 отреагировала 71 клетка (67%), 23 из них относились к фоновомолчащим. Установлено, что 54 нейрона (76%) из 71 отреагировавшего повышали частоту импульсации. У 10 нейронов (14%) при стимуляции происходило чередование периодов учащения и угасания импульсации, а у 7 клеток (10%) - снижение ее частоты. Латентный период ответа нейронов ЭНТ составил 31 ±3,4 мс. Средняя частота вызванной импульсной активности составила 5,8+ 0,87 имп/с, что было на 52% больше (р<0,05), чем в фоне.

В ССК контрольных крыс из 112 зарегистрированных клеток на стимуляцию отреагировали 95 нейронов (85%), среди которых 9 были фоно-вомолчащими. Из числа активированных клеток 87 (92%) отвечали возбуждением. У 4 нейронов (5%) выявлено наличие сменяющихся периодов активации и угасания импульсной активности, у 3 клеток (3%) - начальное ее снижение. Латентный период постстимульных ответов составил в среднем 18 ±4,1 мс и был в 1,7 раза короче (р<0,01), чем в ЭНТ. Средняя частота вызванной активности нейронов возросла до 19,2±2,28 имп/с, что было на 24% больше (р<0,05) по сравнению с фоном.

Таким образом в ЭНТ по сравнению с ССК контрольных крыс выявлено увеличение латентного периода реакции нейронов на сенсорную стимуляцию. При этом частота импульсации нейронов ЭНТ и контрольной ССК повышалась или происходила их фазная активация.

В ЭНТ интенсивность ЛМК варьировала в пределах 26-69 мл/100г/мин (рис.2). Наибольшие значения ЛМК регистрировали на глу-

бине 0,5-0,7 мм. Гистограмма распределения величин ЛМК имела близкую к симметричной форму, модальный класс значений соответствовал 4550 мл/100г/мин. Интенсивность ЛМК в ЭНТ составила в среднем 47,0+2,5 мл/100г/мин. В ССК контрольных крыс значения ЛМК варьировали по глубине коры от 37 до 77 мл/100г/мин, а интенсивность кровотока составила в среднем 58,7+3,93 мл/100г/мин.

Результаты измерения р02 показали, что его значения варьировали в пределах 11-43 мм рт.ст. (рис.2). Наибольшие значения р02 регистрировали на глубине 0,5-0,7 мм. Гистограмма распределения величин р02 имела близкую к симметричной форму. Средняя величина р02 в ЭНТ составляла 23,8±2,96 мм рт.ст.. В контрольной ССК значения показателя р02 варьировали по глубине от И до 43 мм рт.ст., средняя величина р02 составила 2б,2±2,78 мм рт.ст.. Таким образом, интенсивность ЛМК в ЭНТ была снижена по сравнению с контролем на 19,9% (р<0,05), тогда как в значениях р02 различий не обнаружено.

Из анализа результатов реакций функциональной гиперемии и возрастания р02, представленных в табл.3 следует, что в ЭНТ и ССК контрольных крыс отсутствовали значимые различия продолжительности их латентных периодов. В то же время в ЭНТ прирост кровотока составил в 1,7 раза меньшую (р<0,01), а р02 - в 2,1 раз меньшую (р<0,01) величину, чем у контрольной группы животных.

Результаты анализа парных коэффициентов кросскорреляции между показателями представлены в табл.4, из которой следует, что среди коэффициентов кросскорреляции, вычисленных для всех анализируемых пар показателей, преобладали указывавшие на наличие прямых средних и сильных взаимосвязей. В ССК контрольных крыс средние по силе прямые кросскорреляционные связи между показателями сохранялись. При меха-ностимуляции вибрисс в ЭНТ между всеми парами показателей устанавли-

валась сильная прямая взаимосвязь, что могло отражать формирование более тесного уровня сопряженности между ними.

Таким образом в данной серии экспериментов продемонстрировано, что через 8 месяцев после пересадки нейроны имплантата, сохраняя нормальную дифференциацию (Tandon Р., 1992), проявляют свои фенотипиче-ские свойства, ЭНТ устанавливает межнейронные контакты с мозгом реципиента (Брагин А.Г. и соавт., 1992), содержание медиаторов в нем нормализуется (S. Jacobs е.а., 1994). В паттернах активности клеточных популяций присутствуют компоненты, характерные для удаленной зоны коры, более 60% нейронов ЭНТ реагируют на стимуляцию вибриссных входов реципиента, что, вероятно, свидетельствует о сохранении установившихся нервных связей между ЭНТ и мозгом хозяина. В то же время уровень локальной функциональной гиперемии и реакции возрастания р02 в ЭНТ снижен, что может свидетельствовать об уменьшении эффективности ва-зодилатации его микрососудов и нарушении реализации метаболических потребностей пересаженной ткани.

ной коры головного мозга через 12 месяцев после пересадки

В ЭНТ из 89 зарегистрированных нейронов 63 (71%) обладали фоновой импульсной активностью. Из данных, представленных в табл.2, следует, что в ЭНТ сохранялись три основные популяции клеток, среди которых доминировали нейроны с непрерывно-аритмическим типом генерации разрядов. Текущая средняя частота импульсной активности составляла 0,210,008 имп/с.

В ССК контрольных крыс зарегистрировано 116 нейронов, из них 97 (84%) были фоновоактивны. Разновидности нейронов представлены в

табл.2. Средняя частота генерации разрядов составила 8,8+2,78 имп/с и была выше, (р<0,001) чем в ЭНТ. Гистограммы межимпульсных интервалов клеток ЭНТ и ССК были мономодальными с пиком значений, соответствовавших 200 мс и 110-120 мс (рис.1 В). Таким образом среди фоновоак-тивных клеток ЭНТ установлено возрастание численности нейронов низкочастотной популяции, при этом текущая средняя частота импульсации клеток была снижена по сравнению с ССК контрольных крыс.

Анализ вызванной активности показал, что из 89 зарегистрированных клеток ЭНТ отреагировали на стимуляцию вибриссы С1 56 нейронов (63%), из числа которых 26 относились к фоновомолчащим. 29 клеток (51%) из 56 отреагировавших отвечали развитием возбудительной реакции. У 22 нейронов (40%) выявлена смена периодов учащения и урежения генерации импульсов, а у 5 нейронов (9%) отмечено начальное снижение ее частоты. Латентный период вызванной активности нейронов составил 48±2,9 мс, а текущая средняя частота — 8,8+2,17 имп/с, что было больше (р<0,001) по сравнению с фоном.

В контрольной ССК из 116 нейронов на стимуляцию отреагировали 85 (73%), среди которых 19 клеток относились к фоновомолчащим. 57 клеток (67%) отвечали возбуждением, у 18 нейронов (21%) выявлено чередование периодов активации и угасания импульсации, у 10 (12%) - начальное снижение импульсной активности. Латентный период вызванной активности составил в среднем 19±3,7 мс и был в 2,5 раза короче (р<0,01), чем у нейронов ЭНТ, а средняя частота их импульсации возросла до 14,6±2,77 имп/с, что было на 34% больше (р<0,01) по сравнению с фоном.

Таким образом латентный период постстимульных ответов нейронов ЭНТ возрастал по сравнению с ССК контрольных крыс. Паттерны активности характеризовались повышением частоты генерации импульсов, либо формированием фазной активации нейронов.

Значения ЛМК варьировали в пределах 14-69 мл/100г/мин (рис.2), наибольшие из них регистрировали на глубине 0,5-0,7 мм. Модальный класс значений на гистограмме их распределения соответствовал 40-45 мл/1 ООг/мин. Интенсивность ЛМК в ЭНТ составила в среднем 41,712,82 мл/100г/мин. У контрольных крыс значения ЛМК варьировали в пределах 28-77 мл/1 ООг/мин. Интенсивность кровотока в ССК составила 54,1+2,46 мл/1 ООг/мин. В ЭНТ значения р(Э2 изменялись в пределах 15-45 мм рт. ст. (рис.2). Наибольшие уровни р02 регистрировали на глубине 0,5-0,7 мм. Модальный класс гистограммы распределения величин р02 соответствовал 23-28 мм рт.ст.. Средняя величина р02 в ЭНТ равнялась 18,7±2,95 мм рт.ст.. В контрольной ССК средняя величина р02 составила 23,4+2,92 мм рт.ст.. Таким образом интенсивность ЛМК в ЭНТ была снижена по сравнению с контрольной ССК на 21% (р<0,05).

Из приведенных в табл.3 данных следует, что при механостимуля-ции вибриссы С1 латентный период повышения ЛМК составил в среднем 12,2+ 4,25 с, а амплитуда прироста его величины относительно исходного уровня - 8,9±2,16 %. Тканевое р02 в ЭНТ возрастало с латентным периодом 16,4±3,18 с, а амплитуда прироста его величины составила 8,9±2,41%.

Таким образом латентные периоды функциональной гиперемии и реакции возрастания р02 в ЭНТ были выше, чем в ССК контрольных крыс (р<0,05). В то же время в ЭНТ прирост кровотока составил в 2,3 раза меньшую (р<0,01), а р02 - в 2,1 раз меньшую (р<0,01) величину, чем у животных контрольных групп.

В ЭНТ и контрольной ССК кросскорреляционный анализ показателей циркуляторно-метаболического обеспечения биоэлектрической активности выявил наличие между ними прямых средних по силе взаимосвязей (табл.4). При механостимуляции вибрисс в ЭНТ между всеми парами пока-

зателей устанавливалась сильная взаимосвязь, что могло отражать формирование более тесного уровня сопряженности между ними.

Результаты данной серии исследования свидетельствуют, что через 12 месяцев после пересадки функциональное состояние пересаженной ткани видоизменяется: снижается средняя частота импульсации и уменьшается число фоновоактивных нейронов, клетки отвечают на стимуляцию с существенно возросшим латентным периодом, что может быть связано с дистрофическими изменениями и снижением плотности нейронов (Shetty А., 1991; Петрова Е.С., 2000). Интенсивность гемодинамического обеспечения имплантата снижается, нарушаются пространственно-временные характеристики локальных сосудистых реакций.

Динамика показателей функционального состояния ЭНТ через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки

Через 4, 8 и 12 месяцев фоновая активность нейронов ЭНТ и ССК контрольных крыс имела качественное сходство, что проявлялось в наличии высоко-, средне- и низкочастотной популяций нейронов, в паттернах которых сохранялись основные типы генерации разрядов. В то же время различия импульсных потоков проявлялись в уменьшении числа фоновоактивных нейронов, снижении текущей средней частоты импульсной активности, а также доли высокочастотных клеток, что было особенно выражено через 12 месяцев после пересадки.

В паттернах вызванной импульсной активности клеток ЭНТ через 4, 8 и 12 месяцев наблюдались реакции, характерные для нейронов зоны представительства вибриссы С1 контрольной ССК: увеличение средней частоты импульсной активности, появление импульсных разрядов и тормозных фаз, коррелирующих с моментом нанесения стимулов. Факт перестройки активности в ответ на стимуляцию используется для доказательства жизнеспособности ЭНТ (Fisher L. et al., 1991) и свидетельствует об

установлении функциональных взаимоотношений между аксонами реципиента и постсинаптическими локусами ЭНТ (Taylor D. et а!., 1978). Таким образом формирование функциональной активности ЭНТ может быть связано с реконструкцией связей с мозгом хозяина и восстановлением его структурной целостности. Это подтверждается данными о наличии в реци-пиентной области ССК группировок нейронов, фактором объединения которых являются специфические таламо-кортикальные афференты (Krist D., 1978; Steriade М., 2001).

Вместе с тем через 8 и 12 месяцев после пересадки происходило постепенное удлинение латентных периодов импульсных ответов нейронов ЭНТ на афферентную стимуляцию, что позволяет предположить нарушение вовлечения нейронов ЭНТ в процесс сенсорного анализа. Вероятно, возобновившиеся связи кортикального ЭНТ с мозгом реципиента не в полной мере обеспечивают функциональную интеграцию. Это может быть связано с замедлением поступления афферентной информации к клеткам ЭНТ, повышением порога инициации ими импульсов (Брагин А.Г. и со-авт., 1987) и нарушением их вовлечения в процесс сенсорного анализа (Сухов А.Г., 1992), вследствие наличия зон неполного слияния с нейропи-лем мозга реципиента (Виноградова О. С., 1994).

Полученные данные показали, что у крыс с ЭНТ в зоне проекции вибриссы С1 имела место неравномерность распределения р02 и кровотока, максимальные значения которого наблюдались на глубине, соответствующей I1I-IV слоям коры. Полученные данные согласуются с представлением о мозаичности микрогемодинамики в разных слоях коры (Демченко И.Т., 1983) и позволяют сделать допущение о качественном сходстве условий кровоснабжения ЭНТ и интактной ССК. Однако модальные значения гистограмм распределения величин J1MK и его интенсивность снижалась в ЭНТ через 4, 8 и 12 месяцев по сравнению с контролем, что может

свидетельствовать о прогрессивно нараставшей недостаточности кровоснабжения пересаженной ткани.

Отсутствие при этом отклонений в уровне снабжения нейронов ЭНТ кислородом не согласуется с концепцией о корреляции между интенсивностью кровоснабжения и окислительного метаболизма в нервной ткани (Демченко И.Т., 1983). Данный факт может быть связан с характерным для нейронов ЭНТ снижением фоновой импульсной активности (Ханана-швили Я. А. и соавт., 2000), сопровождающимся уменьшением потребления ими кислорода, а также с особенностями васкуляризации и структурно-функциональным состоянием капилляров имплантированной нервной ткани (Ыетесек Б., 1995). Кроме того, ЭНТ как ткань с длительно сохраняющимися признаками ювенильности (Журавлева З.Н., 2004), может использовать альтернативные источники клеточного метаболизма: лактата и кетоновых тел и, усиливая анаэробный гликолиз в поврежденном мозге (НоБег^еш Т й а1., 1994,1995), снижает его потребность в кислороде в условиях неэффективной микроциркуляции. Сопоставление латентных периодов возникновения постстимульных разрядов клеток ЭНТ и развития в нервной ткани местных сосудистых реакций позволяет заключить, что последние инициируются локальными изменениями нейронной активности.

В динамике приживления ЭНТ в исходном состоянии имело место повышение уровня и качественное изменение направленности взаимосвязей между показателями частоты импульсной активности нейронов, ЛМК и кислородным обеспечением, что проявилось в инверсии знаков коэффициентов кросскорреляции между показателями и свидетельствовало о сопряженном характере их изменений. При механостимуляции вибрисс в ЭНТ через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки особенностью кросскорреля-ционных связей между всеми попарно сравниваемыми показателями являлась однонаправленность их качественных и количественных изменений

по сравнению с фоном, что можно ра усиления

БИБЛИОТЕКА С. Петербург I О» М МЕТ I

взаимного влияния показателей и формирование более тесного уровня сопряженности между ними.

Таким образом функциональное состояние ЭНТ зависит от срока, прошедшего со времени его имплантации. Вызванные нейротранспланта-цией изменения неврологически проявляются повышением поведенческой активности и двигательных функций реципиента, реорганизация которых, вероятно, зависит от количества фоновоактивных и реагирующих на афферентную стимуляцию нейронов ЭНТ. В свою очередь, биоэлектрическая активность клеточных популяций пересаженной эмбриональной ткани определяется сроком, прошедшим со времени имплантации. Микрососудистая сеть ЭНТ проявляет способность к осуществлению активных сосудистых реакций, направленных на регулирование кровотока в нервной ткани.

Повышение уровня и качественное изменение направленности взаимосвязей между показателями импульсной активности нейронов, уровнем микрогемодинамики и кислородного обеспечения ЭНТ, может указывать на сопряженный характер их изменений и усиление взаимного влияния показателей при активации, вызванной афферентной сенсорной стимуляцией.

* * *

Полученные нами результаты свидетельствуют, что гомотопические трансплантаты эмбрионального неокортекса, пересаженные в зону проекции вибрисс, имеют высокую реактивность к сенсорной стимуляции, а их клеточные популяции включаются в анализ поступающей специфической афферентной информации. Однако нормализация функционального состояния ЭНТ, интеграция эмбриональной ткани с мозгом реципиента и особенности поведенческих функций существенно зависят от срока, прошедшего со времени имплантации. На определенном этапе после пересадки, ограниченном 4 и 8 месяцами, нами показана возможность компенсации трансплантатом функции удаленного участка коры мозга, тесно связанная с адекватным гемодинамическим обеспечением эмбриональной

нервной ткани. При этом в условиях снижения интенсивности кровотока, неизбежно возникающего после пересадки в процессе реорганизации сосудистой сети ЭНТ, восстановление уровня необходимого циркуляторно-метаболического обеспечения, вероятно, достигается за счет реализации в пересаженной ткани местных сосудистых реакций. В пользу данного предположения свидетельствует усиление взаимного влияния и сопряженный характер изменения показателей импульсной активности нейронов, кровотока и р02 при активации, вызванной сенсорной стимуляцией.

ВЫВОДЫ

1. Трансплантация эмбриональной нервной ткани оказывает влияние на функционирование мозга у реципиента, что проявляется в характере поведенческих реакций у крыс. Через 4 и 8 месяцев после пересадки у крыс с эмбриональным нейротрансплантатом, по сравнению с контрольными, происходит повышение двигательной и ориентировочно-исследовательской активности, возрастание уровня тревожности. Через 12 месяцев после нейротрансплантации выявляется торможение поведенческих реакций, сопровождающееся повышением уровня эмоционального напряжения.

2. Через 4 месяца после пересадки в эмбриональной нервной ткани установлено наличие высоко-, средне- и низкочастотной популяций клеток, среди них преобладают нейроны с непрерывно-аритмическим типом генерации разрядов, текущая средняя частота которых снижена по сравнению с контролем. Вызванная импульсная активность нейронов характеризуется увеличением ее средней частоты, появлением импульсных разрядов и тормозных фаз, коррелирующих с моментом нанесения стимулов, что свидетельствует о способности клеточных популяций нейротрансплантата к восприятию адекватной сенсорной информации.

3. В 4-месячном сроке после пересадки в эмбриональной нервной ткани устанавливается необходимый уровень гемодинамического и кислородного обеспечения, возрастает дилататорная способность микрососудов при осуществлении ими регуляторных адаптивных реакций, направленных на регулирование кровотока в нервной ткани, о чем свидетельствует повышение амплитуды функциональной гиперемии и величины прироста парциального напряжения кислорода по сравнению с соматосенсор-ной корой контрольных крыс. В то же время в эмбриональном ней-ротрансплантате наблюдается усиление уровня сопряженности между показателями кровотока, импульсной активности нейронов и кислородного обеспечения при активации, вызванной механостимуляцией вибрисс.

4. Через 8 месяцев после пересадки функциональные свойства нейронных популяций эмбриональной нервной ткани сохраняются: присутствуют основные типы клеток, текущая средняя частота импульсной активности нейронов не изменяется, более 60% клеток нейротрансплантата реагируют на стимуляцию вибрисс, однако латентные периоды ответов вызванной импульсной активности удлиняются.

5. В 8-месячном сроке после пересадки в эмбриональной нервной ткани происходит снижение интенсивности кровоснабжения и эффективности вазодилатации микрососудов, что проявляется в уменьшении выраженности реакций локальной функциональной гиперемии и возрастания парциального напряжения кислорода, удлинении латентных периодов их формирования. Между показателями импульсной активности нейронов, микрогемодинамики и р02 при адекватной сенсорной стимуляции происходит отчетливое усиление уровня сопряженности.

сравнению с контролем, латентные периоды импульсных ответов нейронов эмбрионального нейротрансплантата на афферентную стимуляцию удлиняются, происходит нарушение вовлечения его клеток в процесс сенсорного анализа.

7. В 12-месячном сроке после пересадки в эмбриональной нервной ткани интенсивность кровоснабжения снижается, что проявляется в уменьшении выраженности реакций локальной функциональной гиперемии и возрастания р02, удлинении латентных периодов их формирования. В нейротрансплантате имеет место тенденция к усилению кросскорреля-ционных связей между показателями биоэлектрической активности и цир-куляторно-метаболического обеспечения при сенсорной стимуляции.

8. Через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки в паттернах фоновой биоэлектрической активности нейронов ЭНТ преобладает среднечастотная популяция нейронов, однако происходит уменьшение числа фоновоактив-ных нейронов, снижение текущей средней частоты импульсной активности, а также доли высокочастотных клеток. Вызванная активность клеток эмбрионального нейротрансплантата видоизменяется в зависимости от исходного характера импульсации, продолжительность латентных периодов ответов возрастает по сравнению с контролем.

9. Характер микрогемодинамики и кислородного режима эмбриональной нервной ткани изменяется в зависимости от срока, прошедшего со времени ее пересадки. Через 4, 8 и 12 месяцев в микроучастках нейротрансплантата имеет место неравномерность распределения локального кровотока и снижение его интенсивности по сравнению с интактной сома-тосенсорной корой контрольных крыс.

зодилатации; местные сосудистые реакции инициируются локальными изменениями нейронной активности.

10. В эмбриональной нервной ткани через 4 месяца после пересадки в исходном состоянии достоверные прямые сильные кросскорреляционные связи устанавливаются между значениями микрогемодинамики и кислородного обеспечения; через 8 и 12 месяцев - средние и сильные кросскорреляционные связи имеют место между значениями импульсной активности нейронов, локального мозгового кровотока и р02. В процессе интеграции трансплантированной эмбриональной нервной ткани с мозгом реципиента при активации, вызванной сенсорной стимуляцией, между значениями импульсной активности нейронов, кровотока и р02 происходит качественная перестройка и отчетливое усиление прямых кросскорреляционных связей, что свидетельствует о повышении взаимного влияния и сопряженном характере изменения показателей.

ОСНОВНЫЕ РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хананашвили Я.А., Демидова A.A., Гафиятуллина Г.Ш. Функциональная организация микроциркуляторного и нейронного модуля соматосен-сорной коры у нормотензивных и наследственно гипертензивных крыс // Проблемы нейрокибернетики: Тез. докл. X Междунар. конф.- Ростов-на-Дону: Изд-во РГУ, 1992. - С. 40-41.

2. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Особенности циркуляторно-метаболического обеспечения эмбрионального неокортикального трансплантата // Матер. III съезда анатомов, гистологов, эмбриологов РФ. - Тюмень, 1994.-С.47.

3. Хананашвили Я.А., Демидова A.A., Гафиятуллина Г.Ш. Особенности сопряжения «активность-метаболизм-кровоток» в нейронном модуле коры полушарий большого мозга // Современные представления о структурно-функциональной организации мозга.- М., 1995. - С.131.

4. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Циркуляторно-метаболическое обеспечение нейронного модуля эмбрионального нервного трансплантата коры головного мозга // Проблемы нейрокибернетики: Тез. докл. XI Междунар. конф. - Ростов-на-Дону: Изд-во РГУ, 1995. - С. 67.

5. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Relation between the functional activity, blood flow and oxygen supply of an embryonic neural transplant // X European Congresses of Neurosurgery.- Berlin, 1995.- P. 250.

6. Гафиятуллина Г.Ш. Циркуляторно-метаболическое обеспечение функциональной активности эмбрионального нейротрансплантата // Тез. докл. II научн. сессии Рост. гос. мед. университета. - Ростов-на-Дону, 1998.- С. 27.

7. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Циркуляторное обеспечение функционирования нейротрансплантата в динамике его приживления в коре мозга крыс // XVII съезд физиологов России: Тез. докл.- Ростов-на-Дону, 1998.-С. 98.

8. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Функциональные особенности локального кровоснабжения, кислородного обеспечения и нейронной активности эмбрионального нейротрансплантата // Физиология в высших учебных заведениях России и СНГ: Матер, научн. конф., поев. 100-летию каф. норм, физиол. СПбГМУ,- Санкт- Петербург, 1998. - С. 28-30.

9. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Характер циркуляторных и биоэлектрических процессов в нейротрансплантате зрительной области коры мозга крыс // Регуляция мозгового кровообращения в норме и патологии: Матер, симп. - Ростов-на-Дону, 1999. - С. 92-94.

10. Гафиятуллина Г.Ш., Хананашвили Я.А. Особенности протекания мик-роциркуляторных и биоэлектрических процессов в эмбриональном нейротрансплантате мозга крыс // Тез. докл. III научной сессии Рост. гос. мед. университета. - Ростов-на-Дону, 2000.- С. 84-85.

11. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Характер локального кровоснабжения и функциональной гиперемии эмбрионального нейротрансплантата у крыс // Архив клин, и эксперимент, медицины,- 2000,- Т. 9, №1. - С. 84-86.

12. Гафиятуллина Г.Ш., Хананашвили Я.А. Комплексный методический подход в оценке функционального состояния эмбрионального нейротрансплантата соматосенсорной коры мозга у крыс // Вест, новых мед. технологий. - 2002. - Т. IX, №1,- С. 13-15.

13. Гафиятуллина Г.Ш., Хананашвили Я.А. Характер поведенческих реакций крыс с эмбриональным нейротрансплантатом в соматосенсорной коре // Изв. вузов. Сев.-Кавк. регион. Естеств. науки.- 2004. - № 3. - С. 76-78.

14. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Характер сосудистых реакций в эмбриональном нейротрансплантате в процессе его приживления // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова.- 2004. - Т. 90, №8,- С. 501.

15. Гафиятуллина Г.Ш. Методика применения эмбриональной ткани в экспериментальной нейротрансплантологии // Актуальные вопросы акушерства, гинекологии и педиатрии: матер, научно-практ. конф. - Ростов-на-Дону, 2004.-С. 25.

16. Гафиятуллина Г.Ш. Экспериментальное обоснование возможности применения эмбриональной нервной ткани в протезировании сенсорных систем // Актуальные вопросы акушерства, гинекологии и педиатрии: матер. научно-практ. конф. - Ростов-на-Дону, 2004. - С. 25.

17. Гафиятуллина Г.Ш., Хананашвили Я.А. Характер локального кровоснабжения и кислородного обеспечения эмбрионального нейротрансплан-тата в различные сроки его приживления у крыс // Кубан. науч. мед. вестник. - 2004. - №4 (70). - С.43-47.

18. Гафиятуллина Г.Ш., Хананашвили Я.А. Характер фоновой и вызванной биоэлектрической активности эмбрионального нейротрансплантата в разные сроки его приживления у крыс // Кубан. науч. мед. вестник. - 2004. -№5-6 (71-72).- С.54-59.

19. Гафиятуллина Г.Ш. Экспериментальная оценка эффективности использования эмбрионального нейротрансплантата // Актуальные проблемы экономики, права и естествознания: матер, научно-практ. конф.- Египет (г.Хургада), 2005. - С. 86-88.

20. Гафиятуллина Г.Ш. Структурная организация эмбрионального нейротрансплантата соматосенсорной коры мозга крыс // Актуальные вопросы современной морфологии. Ростов-на-Дону, 2004. - С. 10-11.

21. Гафиятуллина Г.Ш., Хананашвили Я.А. Характер микрососудистых реакций в эмбриональном нейротрансплантате соматосенсорной коры у крыс // Изв. вузов. Сев.-Кавк. регион. Естеств. науки. Приложение. - 2004. -№12. - С. 49-54.

22. Гафиятуллина Г.Ш. Характер парциального напряжения кислорода в эмбриональном нейротрансплантате коры мозга крыс // Обмен веществ при адаптации и повреждении: труды IV межвузовской междунар. конф. -Ростов-на-Дону, 2005. - С.50-53.

23. Гафиятуллина Г.Ш. Циркуляторное обеспечение эмбрионального нейротрансплантата коры мозга у крыс // Аллергол. и иммунол. - 2005. - Т.6, №2. - С.221.

24. Гафиятуллина Г.Ш., Хананашвили Я.А. Фоновая и вызванная импульсная активность нейронов эмбрионального нейротрансплантата соматосенсорной коры мозга у крыс // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова. - 2005. -Т. 91, №5. - С.473-480.

Печать цифровая Бумага офсетная Гарнитура «Тайме» Формат 60x84/16 Объем 2,0 уч -изд -л

Заказ №534 Тираж 100 экз Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г Ростов-на-Дону, ул. Суворова, 19, тел. 247-34-88

И 059 3

РНБ Русский фонд

2006-4 9226

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Гафиятуллина, Гюзяль Шамилевна

Список используемых сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Общие принципы и механизмы действия нейротрансплантата на мозг реципиента.

1.2. Современные представления о структурно-функциональной организации и циркуляторно-метаболическом обеспечении ЭНТ коры полушарий большого мозга крыс.

1.2.1. Принципы васкуляризации ЭНТ.

1.2.2. Принципы гистогенеза ЭНТ.

1.2.3. Особенности функциональной биоэлектрической активности ЭНТ.

1.2.4. Особенности поведенческих реакций крыс с ЭНТ.

Глава 2. Материал и методы исследований.

2.1. Объект исследования.

2.2. Методика трансплантации эмбриональной нервной ткани.

2.2.1. Проведение оперативных вмешательств по пересадке эмбриональной нервной ткани.

2.3. Последовательность выполнения и техническое оснащение экспериментов.

2.3.1. Методика проведения исследований поведенческих реакций крыс с эмбриональным нейротрансплантатом.

2.3.1.1. Тест открытого поля.

2.3.1.2. Тестирование в У-образном лабиринте.

2.3.1.3. Тест принудительного плавания.

2.3.2. Методика проведения электрофизиологических исследований эмбрионального нейротрансплантата в динамике его приживления.

2.3.2.1. Регистрация биоэлектрической активности.

2.3.2.2. Контроль локализации ЭНТ и микроэлектродов.

2.3.2.3. Регистрация локального кровоснабжения и кислородного обеспечения.

2.3.3. Приборы и оборудование.

2.4. Методы анализа экспериментального материала.

2.4.1. Анализ локального мозгового кровотока и р02.

2.4.2.Анализ суммарной биоэлектрической активности мозга.

2.4.3. Анализ импульсной активности.

2.4.4. Проверка статистических гипотез.

Глава 3. Показатели поведенческих реакций у крыс с эмбриональным ней-ротрансплантатом в динамике его приживления.

3.1. Показатели поведенческих реакций у крыс с эмбриональным ней-ротрансплантатом через 4 месяца после пересадки.

3.2. Показатели поведенческих реакций у крыс с эмбриональным ней-ротрансплантатом через 8 месяцев после пересадки.

3.3. Показатели поведенческих реакций у крыс с эмбриональным ней-ротрансплантатом через 12 месяцев после пересадки.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ функционального состояния эмбрионального нейротрансплантата коры головного мозга"

Из числа нерешенных вопросов, имеющих медико-биологическое значение, ключевыми представляются вопросы о характере функционирования пересаженной эмбриональной нервной ткани и уровня ее интеграции с мозгом реципиента, а также об условиях увеличения жизнеспособности нейротрансплантата.

Однако, сведения об условиях функционирования эмбрионального нейротрансплантата в динамике его приживления не нашли должного отражения в литературе. Так, в частности, в трансплантированной эмбриональной нервной ткани не определены характеристики биоэлектрической активности, кровоснабжения и кислородного обеспечения, а также их сопряженности; отсутствуют данные о характере реакций нейронов и микрососудов трансплантата; остаются невыясненными сроки жизнеспособности пересаженной эмбриональной нервной ткани при разных видах и методиках трансплантации.

Учитывая вышеизложенные обстоятельства, целью работы явилось установление закономерностей процесса интеграции аллогенного эмбрионального нейротрансплантата с мозгом реципиента на основе комплексного анализа его функционального состояния.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

Новизна результатов исследования заключается в том, что впервые:

- проведено комплексное исследование биоэлектрической активности, микрогемодинамики и кислородного обеспечения аллогенной эмбриональной нервной ткани, пересаженной в гомотопическую область сомато-сенсорной коры мозга реципиента, в процессе ее интеграции;

- получены результаты, отражающие динамику формирования адаптивных регуляторных реакций микрососудов эмбрионального нейротранс-плантата, проявляющиеся в 4-месячном сроке после пересадки в повышении дилататорной способности микрососудов, а в 8-месячном — в снижении интенсивности кровоснабжения и эффективности вазодилатации;

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1) Функциональное состояние трансплантированной аллогенной эмбриональной нервной ткани зависит от срока после ее пересадки. Вызванные нейротрансплантацией изменения неврологически проявляются повышением поведенческой активности и двигательных функций реципиента, реорганизация которых зависит от количества фоновоактивных и peaгирующих на афферентную стимуляцию нейронов эмбрионального ней-ротрансплантата.

2) Гомотопические аллотрансплантаты эмбриональной нервной ткани соматосенсорной коры головного мозга, имеющие высокую реактивность к сенсорной стимуляции, на определенном этапе после пересадки, ограниченном 4 и 8 месяцами, способны компенсировать функции удаленного участка коры мозга.

3) Интеграция эмбрионального нейротрансплантата с мозгом реципиента зависит от адекватности гемодинамического обеспечения и определяется сроком, прошедшим после пересадки. Микрососудистая сеть нейротрансплантата проявляет способность к осуществлению активных сосудистых реакций, направленных на регулирование кровотока в нервной ткани.

Теоретическая значимость исследования. Полученные в работе данные о характере биоэлектрической активности, гемодинамического обеспечения и кислородного режима эмбриональной нервной ткани, имплантированной в кору головного мозга, носят фундаментальный характер и позволяют установить закономерности процесса интеграции трансплантированной эмбриональной нервной ткани с мозгом реципиента. Данные 12-месячного наблюдения и комплексного анализа показателей ЭНТ, осуществленного в динамике его приживления в состоянии покоя и при сенсорной активации, позволяют заключить, что несмотря на сходный характер протекания ряда физиологических процессов в эмбриональной и зрелой нервной ткани, ЭНТ не обладает достаточными функциональными свойствами. Результаты исследования функционального состояния мозга крыс-реципиентов через 4 месяца после нейротрансплантации, свидетельствующие о повышении у них двигательной и ориентировочно-исследовательской активности, реорганизации биоэлектрических процессов и реактивности мозговых микрососудов, свидетельствуют о перепективности разработки оптимальных условий для длительного выживания трансплантата.

Сведения о практическом использовании результатов исследования

На основании полученных фактов предложены практические рекомендации по дальнейшему использованию результатов исследования (см. приложение 2), которые могут найти применение в научных исследованиях по физиологии, патологической физиологии и фармакологии мозгового кровообращения и экспериментальной трансплантологии, а также при обучении студентов и слушателей факультетов постдипломной подготовки медвузов по специальностям: нормальная и патологическая физиология, неврология и нейрохирургия. По результатам исследования опубликовано 24 печатных работы (см. приложение 1).

Результаты работы доложены на X и XI Международных конференциях по нейрокибернетике (Ростов-на-Дону, 1992, 1995), П1 съезде анатомов, гистологов, эмбриологов РФ (Тюмень, 1994), X European Congresses of Neurosurgery (Germany, Berlin, 1995), I, II и III научных сессиях Ростовского государственного медицинского университета (Ростов-на-Дону,

1996, 1998, 2000), Всероссийском симпозиуме «Регуляция мозгового кровообращения в норме и патологии» (Ростов-на-Дону, 1999), научной конференции, посвященной 100-летию кафедры нормальной физиологии СПбГМУ (Санкт-Петербург, 1998), научно-практической конференции по акушерству, гинекологии и педиатрии (Ростов-на-Дону, 2004), XVII и XIX съездах физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998; Екатеринбург, 2004), научно-практической конференции «Актуальные проблемы экономики, права и естествознания» (Egypt, Hurgada, 2005), IV межвузовской международной научно-практической конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 2005), III всемирном конгрессе по клинической патологии и реабилитации (Thailand, Pattaya, 2005).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Гафиятуллина, Гюзяль Шамилевна

ВЫВОДЫ

6. Через 12 месяцев после пересадки в эмбриональном нейротранс-плантате уменьшается количество фоновоактивных клеток, среди которых относительно возрастает численность нейронов низкочастотной популяции, текущая средняя частота импульсации существенно снижается по сравнению с контролем, латентные периоды импульсных ответов нейронов эмбрионального нейротрансплантата на афферентную стимуляцию удлиняются, происходит нарушение вовлечения его клеток в процесс сенсорного анализа.

7. В 12-месячном сроке после пересадки в эмбриональной нервной ткани интенсивность кровоснабжения снижается, что проявляется в уменьшении выраженности реакций локальной функциональной гиперемии и возрастания р02, удлинении латентных периодов их формирования. В нейротрансплантате имеет место тенденция к усилению кросскорреляционных связей между показателями биоэлектрической активности и цир-куляторно-метаболического обеспечения при сенсорной стимуляции.

9. Характер микрогемодйнамики и кислородного режима эмбриональной нервной ткани изменяется в зависимости от срока, прошедшего со времени ее пересадки. Через 4, 8 и 12 месяцев в микроучастках нейротрансплантата имеет место неравномерность распределения локального кровотока и снижение его интенсивности по сравнению с интактной сома-тосенсорной корой контрольных крыс.

При сенсорной стимуляции через 4 месяца после пересадки дилата-торная способность микрососудов эмбрионального нейротрансплантата возрастает, через 8 и 12 месяцев происходит снижение эффективности ва-зодилатации; местные сосудистые реакции инициируются локальными изменениями нейронной активности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Гомотопический аллогеииый ЭНТ, помещенный в мозг взрослого животного-реципиента, растет, заполняя полость дефекта, дифференцируется, образуя межнейронные связи с мозгом хозяина, воспроизводит характеристики функциональной биоэлектрической активности, присущие пересаженной ткани in situ (Guzman R. et al., 1999; Lindval O., 1999; Лосева E.B., 2001; Шумаков В. И. и соавт., 2002 б; Журавлева З.Н., 2004).

Нейротрансплантация стимулирует репаративно-регенеративные процессы в поврежденном мозге и компенсацию нарушенных функций центральной нервной системы реципиента (Гилерович Е.Г. и соавт., 2001; Lewis R., 2000). Ограниченная способность зрелой нервной ткани к регенерации за счет деления клеток обусловливает необходимость трансплантации эмбриональной. В этой связи наибольшую актуальность приобретают вопросы оптимизации условий выживания и функционирования ней-ротрансплантата, его интеграция с тканью головного мозга реципиента.

Данные, полученные с использованием новых методических подходов, часто не укладываются в существующие схемы. При этом особую проблему составляет изучение динамики и особенностей развития компенсаторно-приспособительных реакций различного генеза на этапах становления системы «хозяин-трансплантат». Для понимания механизмов приживления отчетливо ощущается недостаточность имеющихся сведений о функциональных, биоэлектрических и гемодинамических характеристиках ЭНТ, кислородном обеспечении пересаженных нейронов. Особенности ре-гуляторных реакций микрососудов на разных этапах реорганизации им-плантатов, на протяжении всей жизни животного-реципиента продолжают оставаться невыясненными. Уровень современных знаний по вопросам контроля кровоснабжения пересаженной нервной ткани не только не соответствует теоретической значимости проблемы, но и не позволяет решать задачи, связанные с разработкой методов коррекции приживления ЭНТ как в экспериментах у животных, так и при лечении нейродегенеративных заболеваний человека (Guerra М. et al., 1997; Lee М. et al., 1998; Spalding К. et al., 1998).

Оценка эффективности приживления пересаженной эмбриональной ткани в мозге реципиента может быть установлена при изучении циркуля-торно-метаболического обеспечения нейрофизиологических процессов в ЭНТ, имплантированного в ССК. Структура данной области мозга имеет модульную организацию нейронных популяций (Москаленко Ю.Е. и соавт., 1992; Mountcastle V.B. ,1997), отличающуюся строгой соматотопией расположения представительства вибрисс, при стимуляции которых в коре возникают локальные очаги активации (Сухов А.Г., 1992; Хананашвили Я.А. и соавт., 2001). Процессы формирования регуляции пересаженной нервной ткани, поддержания ее функционального состояния, могут быть установлены при поэтапном анализе приживления эмбрионального зачатка в мозге взрослого животного. Современная нейронаука не располагает данными длительного наблюдения гемодинамических, метаболических и биоэлектрических процессов, протекающих в ЭНТ, а также их функциональных коррелятов - поведенческих реакций. Вопросы становления адекватного кровоснабжения и кислородного обеспечения ЭНТ, осуществления в пересаженной ткани адаптивных сосудистых реакций, образования эффективных афферентных входов к ЭНТ от мозга реципиента, установления специфических связей и реципрокной реиннервации мало изучены и требуют поиска новых экспериментальных подходов.

Нами проведено комплексное исследование характера циркулятор-но-метаболических и биоэлектрических изменений ЭНТ в динамике его приживления в зоне проекции вибрисс ССК головного мозга крыс-реципиентов. В соответствие с задачами работы производили внутримоз-говую интрапаренхиматозную (Клещинов В. Н.,1990; Cenci М. et al., 1997) трансплантацию эмбриональной нервной ткани в область представительства вибрисс ССК головного мозга, используя при этом гомотопические фрагменты эмбрионального мозга (Bjorklund A. et al., 1980). При данном типе пересадки (Olsson M. et al., 1997) повышены темпы дифференциров-ки и степень пролиферации клеточных элементов, возможна полноценная реконструкция поврежденных систем мозга (Отеллин В.А. и соавт., 1998; 1999). Степень приживления эмбриональной нервной ткани возрастает при неотсроченной (Mickley G. et al., 1990) аллогенной нейротранс-плантации (Perlow M., 1980) и использовании свежезабранной донорской ткани (Gonzalez M. et al., 1990). Лучше приживаются небольшие фрагменты (1-1,5 мм3) эмбриональной нервной ткани вследствие оптимизации их питания (Семченко В.В. и соавт., 2000). Пересадка цельного фрагмента эмбриональной ткани облегчает идентификацию трансплантированных клеток, и делает возможным отведение от ЭНТ биопотенциалов (Полежаев Л.В., 1983; Виноградова О.С., 1985). Наибольший эффект восстановления и структурной интеграции донора и реципиента достигается при ней-ротрансплантации ткани более молодых эмбрионов (Flicker R. et al., 1997).

С учетом всех вышеперечисленных требований мы производили пересадку фрагмента 17-дневной эмбриональной аллогенной ткани ССК (Sherwood N. et al., 1970; Altman J. et al., 1995) в гомотопическую зону проекции вибрисс ССК головного мозга 6-месячных крыс-самцов линии Wistar (Konig J., Klippel R., 1963).

Через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки трансплантаты были обнаружены у большинства реципиентов (у 85-95% животных). Они заполняли полость, сделанную при операции в зоне проекции вибрисс ССК мозга, тесно срастаясь с паренхимой мозга хозяина. Критериями приживления служили увеличение объема пересаженной ткани, васкуляризация ЭНТ, наличие зон прямого слияния ткани с мозгом реципиента. В качестве контроля нами использованы 2 группы животных: крысы с интактной ССК (К-1) и «ложнооперированные»- К-2. У последних ограничивались надрезом твердой мозговой оболочки, после чего производили костную аутопластику и ушивание мягких тканей головы.

Через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки исследовали реакции у животных с ЭНТ в различных моделях поведения, определяли их адаптивные возможности. Далее производили комплексный анализ ЛМК, рОг и импульсной активности нейронов в исходном состоянии и при дозированной механостимуляции вибриссы С1.

Нами показано, что через 4 месяца после пересадки крысы с ЭНТ по сравнению с контрольными характеризовались повышением двигательной и ориентировочно-исследовательской активности, возрастанием уровня тревожности в тестах открытого поля и У-образном лабиринте. В тесте принудительного плавания выявлено снижение активации, большая эмоциональность и увеличение частоты избегания. Таким образом можно полагать, что ЭНТ оказывал на мозг крысы-реципиента адаптогенное воздействие, способствовал регенерации нервной ткани. Возможными механизмами защитного влияния ЭНТ на когнитивную функцию мозга считают активацию гиперпластических механизмов в нейронах (Ьее М. е! а1., 1998; 1е£Гегу N. е! а1., 1999), действие нейротрофических факторов, а также афферентные влияния ядер таламуса на ЭНТ при отсутствии исходящих от него эфферентных (Сюега1а Е. е1 а1., 1992). ЭНТ активирует механизмы формирования долгосрочной памяти и способности к обучению (Ерениев С.И. и соавт., 1993; Семченко В.В., и соавт., 2000). Восстановление в присутствии ЭНТ поведенческих реакций связано с генерализованным адап-тогенным воздействием на мозг реципиента (ТиБгупБк! М. й а1., 1997).

Кроме того, при гомотопической трансплантации поведенческие функции нормализуются вследствие ускоренной компенсации повреждения за счет усиления синтеза антиокислительных ферментов (Ермакова И.В. и соавт., 1989; Гуляева Н.В. и соавт., 1995). При этом ткань ЭНТ активирует процессы гликолиза в мозге реципиента и снижает его потребность в кислороде в условиях неэффективной микроциркуляции (Лосева

Е.В., 2001), что может быть причиной зарегистрировааного неизменного уровня рОг при снижении ЛМК в динамике приживления.

У крыс с ЭНТ через 4 месяца после пересадки в условиях открытого поля сохранялась исследовательская мотивация, доказательством чего являются проявления негативного эмоционального состояния и повышение ориентировочно-исследовательской активности (Симонов П.В., 1997). Повышение тревожности, сопровождающееся у крыс с ЭНТ возрастанием двигательной и исследовательской активности, вероятно, является проявлением приспособительной реакции (Жуков Д.А. и соавт., 1994). Наблюдаемое увеличение исследовательского компонента поведенческой активности животных может быть связано со способностью ЭНТ оказывать активирующее действие на центральную нервную систему (Lee М. et al., 1998; Ormsby С. et al., 1998). У крыс с ЭНТ в динамике его приживления частота возникновения эпизодов груминга, являющегося защитным механизмом, тормозящим формирование мобилизационного стресса (Ермакова И.В. и соавт., 1994), была повышена по сравнению с контролем, что свидетельствует об усилении у них состояния тревожности (Айрапетянц М.Г., 1987; Ливанова Л.М. и соавт., 1994).

Отмеченное у крыс с ЭНТ через 4 месяца после пересадки чередование спонтанных побежек в отсеки лабиринта с уменьшением времени пребывания в освещенной части, наряду с возросшей вертикальной двигательной активностью, свидетельствует о наличии определенного объема рабочей памяти и оптимальности поведения (Жуков Д.А. и соавт., 1994). Выявленные особенности поведения, вероятно, являются отражением удовлетворительного кровоснабжения ЭНТ, высокого уровня локальной функциональной гиперемии и реакции возрастания рОг при активации, стабильной и регулярной импульсной активности клеточных популяций.

Через 8 месяцев после пересадки у крыс с ЭНТ сохранялась поведенческая активация, животные обладали возможностями адаптивной перестройки поведения. В тестах открытого поля и Y-образном лабиринте усиливались локомоция и ориентировочно-исследовательская деятельность, повышался уровень эмоционального напряжения, уменьшалась реакция страха, анализируемая по возрастанию количества выходов в центр открытого поля. Подобную двигательную активность проявляют животные с сильным типом высшей нервной деятельности (Ливанова Л.М. и соавт., 1993; Симонов П.В., 2000). В тесте принудительного плавания сокращалось время иммобилизации и возрастала частота избегания. У крыс с ЭНТ повышенная двигательная активность сопровождалась возрастанием ориентировочно-исследовательской деятельности, что свидетельствует о продолжающемся позитивном воздействии ЭНТ на поведение крысы-реципиента через 8 месяцев после пересадки. Наряду с этим животные характеризовались возросшей скоростью решения пространственных задач, направленных на осуществление локомоторных актов (Левшина И.П. и соавт., 2003).

Через 12 месяцев после пересадки у крыс с ЭНТ отмечено торможением поведенческих реакций: существенное снижение двигательной и ориентировочно-исследовательской активности, сопровождавшееся повышением уровня эмоционального напряжения в тестах открытого поля и У-образном лабиринте. Одновременное возрастание количества актов груминга позволяет говорить об ограничении адаптационных возможностей у крыс с ЭНТ при помещении их в новые условия. Изменения параметров поведения крыс в тесте открытого поля связывают с воздействием фактора гипоксии (Ливанова Л.М. и соавт., 1994), однако это противоречит нашим данным о неизменнности р02 на всем протяжении наблюдения за пересаженной эмбриональной тканью. В то же время такой характер реагирования отчасти связан с общепопуляционными особенностями белых крыс, у которых с возрастом повышается эмоциональность и снижается активная реакция (Левшина И.П. и соавт., 1995). Следовательно, в динамике приживления ЭНТ в ССК мозга крыс повышается уровень тревожности, на фоне которой через 12 месяцев после пересадки происходит формирование элементов депрессии (Орлова Н.В. и соавт., 2003), подавление ориентировочно-поискового поведения и развитие гипертрофированной реакции страха, что является проявлениями неврозоподобного состояния (Батурин В.А. и соавт., 1988; Арушанян Э.Б. и соавт., 1994).

В тесте принудительного плавания у крыс с ЭНТ отмечено снижение частоты повторения прыжков и удлинение периодов иммобилизации. Итак, через 12 месяцев после пересадки формируется комплексный дефект поведения - сочетание дефицита способности к обучению с нарушением реагирования в ситуации водного стресса (Плескачева М.Г. и соавт., 2002). В свою очередь, это влечет за собой усиление пассивно-оборонительных реакций и снижение стрессоустойчивости (Базян A.C. и соавт., 1999; Ю.Г.Камскова и соавт., 2003; Орлова Н.В. и соавт., 2003).

Таким образом проведенные исследования продемонстрировали, что у крыс с ЭНТ через 4 и 8 месяцев после гомотопической аллотранспланта-ции эмбриональной ткани ССК головного мозга характер поведенческих реакций приобретает специфические черты (Lindvall О., 1999), что может являться результатом восстановления структуры иннервации и кровоснабжения пересаженной нервной ткани. Через 12 месяцев после трансплантации поведение крыс с ЭНТ, в целом, характеризовалось снижением активного компонента, на фоне возрастания пассивного, что, согласно нашим наблюдениям, может быть связано с значительным снижением ЛМК и эффективности вазодилатации, а также частоты импульсации нейронов.

Таким образом, у крыс с ЭНТ в динамике его приживления существует установившаяся система реализации поведенческих реакций, компоненты которой находят отражение в предъявляемых нами различных оценочных тестах. Об эффективности трансплантации можно судить по существенному приближению ряда поведенческих реакций крыс с ЭНТ, замещающим дефект удаленной нервной ткани ССК, к характерным для контрольных животных.

Известно, что трансплантация эмбриональной нервной ткани способствует восстановлению некоторых форм поведения, требующих воссоздания структурных характеристик мозга, в том числе новой коры (Sinden J. et al., 1997; Gould E. et al., 2000; Подгорный O.B. и соавт., 2004). С этих позиций установление специфических особенностей поведения у крыс с ЭНТ в динамике его приживления представляется как результат совместной деятельности нервных структур и свидетельствует о функциональной интеграции между пересаженной эмбриональной тканью донора и мозгом реципиента. Следовательно, трансплантация эмбриональной нервной ткани влияет на процессы обучения, виды реагирования животных на внешние стимулы и реорганизацию сложных форм поведения. В динамике приживления ЭНТ, несмотря на наличие ряда комплексных дефектов реагирования на внешние стимулы, у животных выражена исследовательская мотивация, сохранена рабочая память и естественная динамика организации ориентировочного поведения, а также возможность его адаптивной коррекции, степень которой поведения зависит от срока, прошедшего после пересадки.

Исследование характера микрогемодинамики и кислородного режима нейронных популяций ЭНТ, помещенного в зону представительства вибрисс через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки выявило, что в исходном состоянии величина объемной скорости ЛМК в пересаженной ткани была ниже (Р<0,05), чем в ССК контрольных крыс. В микроучастках циркуля-торной сети в динамике приживления ЭНТ отмечалась гетерогенность ЛЕС. Максимальное кровоснабжение было характерно для нейронных популяций нейротрансплантата, залегавших на глубине 0,4-0,7 мм.

В исследуемых участках ССК контрольных крыс К-1 и К-2 распределение ЛМК по глубине было также неравномерным. Максимальные значения показателя зарегистрированы на глубине 0,4-0,8 мм, что соответствовало III-V слоям ССК (Лапенко Т.К., 1983), где отмечена наибольшая плотность микрососудов и нейронов (Мозка1епко Уи.Е. е1 а1., 1996; АМоо1-эеу Т. й а1., 1996; МоигйсазИе V., 1997).

Вероятно, неоднородное распределение кровотока определяется неравномерностью цитоархитектоники и плотности васкуляризации

ЭНТ. Сразу после пересадки оксигенация, пластическое и энергетическое обеспечение ЭНТ осуществляется за счет диффузии из окружающей ткани реципиента (Баэ О. е1 а1., 1986). Прилежащие пиальные сосуды вначале окружают ЭНТ по периметру, а затем врастают в него, а спустя 3-5 суток появляются первые анастомозы, включающие сосуды реципиента и собственные, воспроизводящие сходный характер роста (Кгит ^ е1 а1., 1988). Сосуды ЭНТ имеют двойное происхождение, что проявляется наличием в его новых капиллярах эндотелиоцитов реципиента (1асдие С. е1 а1., 1990), продуцирующих биологически активные вещества, участвующие в регуляции ЛМК (Хананашвили Я.А., 1999,2001). В ЭНТ в течение 12 месяцев присутствуют сосуды, происходящие из донорской ткани, а в его глиальных элементах - проросшие сосуды реципиента (Вгоас1\уе11 Я. е1 а1., 1990). Регионарная капилляризация трансплантатов ССК соответствует принципам васкуляризации неокортекса (Вгоас1\уе11 Я. е! а1., 1990а; Са1гпз В. е1 а1., 1996; Лосева Е.В., 2001). Беспорядочное врастание сосудов в ЭНТ приводит к бессистемному расположению в нем нейронов (Полежаев Л.В и соавт., 1993).

Существенную роль в выживании нервной ткани играет способность к восстановлению гемато-энцефалического барьера (ВгипсНп Р. е1 а1., 1989), компенсаторно-восстановительные свойства которого изменяются под влиянием ЭНТ (11о8еп51ет Т е1 а1., 1988,1995). Капиллярам ЭНТ присущи все типичные характеристики барьерных сосудов (Мо11§агс1 К. е1 а1., 1978) однако, их размеры и степень ветвления при неокортикальных пересадках наименьшие (Оутес1а Т й а1., 1990 а), что может создавать морфологическую основу зарегистрированного нами снижения интенсивности ЛМК на всем протяжении периода наблюдения. При этом нами показано, что уровень тканевого р02 не различался в ЭНТ по сравнению с контролем через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки. Поскольку количество кровеносных сосудов в ЭНТ спустя 2 месяца после пересадки считают адекватным плотности созревающих нейронов (Dusart I. et al., 1989), можно полагать, что особенности ангиоархитектоники не являются препятствием для адекватного микроциркуляторного и кислородного обеспечения клеточных элементов ЭНТ. Вероятно, структурные изменения микроциркуляции определяют неизменный через 4 и 8 месяцев после пересадки, но сниженный, по сравнению с контролем уровень объемной скорости кровотока в ЭНТ.

Система, образовавшаяся между ЭНТ и мозгом реципиента, осуществляет совместный ответ на воздействия, дозируя их по интенсивности и длительности, что позволяет судить об ее компенсаторных возможностях и способности к адаптации (Москаленко Ю.Е., 1991; К.В.Анохин и соавт., 2003). Результаты, свидетельствующие о постоянстве кислородного обеспечения пересажанной ткани при возрастании общего числа высоких значений на гистограммах его распределения в ЭНТ через 4 месяца после пересадки, можно интерпретировать как проявление процессов пассивной диффузии или диффузно-кинетической доставки кислорода к активной в функциональном отношении нервной ткани (Демченко И.Т., 1983).

Выявленное в динамике приживления ЭНТ снижение ЛМК, сопровождавшееся не изменявшимся по сравнению с контролем тканевым р02> может определяться выраженностью в недифференцированных эмбриональных фетальных клетках анаэробных процессов гликолиза (Махинько В.И. и соавт., 1975), за счет чего компенсируется часть затрат при осуществлении метаболических процессов, а ЭНТ обладают высокой устойчивостью к гипоксии, и потому легче переносят критический период после трансплантации, когда находятся в ликворе и не васкуляризированы (Виноградова О.С., 1984). В этом период нейроны ЭНТ используют энергетические субстраты взрослого мозга, диффузно проникающие вследствие разрушения гемато-энцефалического барьера реципиента после пересадки. (Mallat М. et al., 1994).

В то же время в начальный период интеграции в ЭНТ энзимы для кислородозависимого фосфорилирования отсутствуют, а активность аэробного гликолиза снижена (Rosenstein J., 1987, 1995b). Поэтому, в ответ на возникающие в трансплантате преходящие периоды ишемии, запускаются процессы, связанные с использованием альтернативных энергетических источников - лактата и кетоновых тел, анаэробного пути гликолиза (Rosenstein J. е .а., 1994). Особенности протекания окислительных процессов в совокупности с данными о снижении плотности васкуляризации и интенсивности кровоснабжения в ЭНТ, позволяют предполагать нарушение межкапиллярного распределения кислорода в пересаженной ткани (Демченко И.Т., 1983). Отмеченное при этом сходство паттернов распределения тканевого р02 в ЭНТ и контрольной ССК свидетельствует об отсутствии предпосылок для функционирования клеток ЭНТ в условиях тканевой гипоксии и об его адекватном метаболическом обеспечении.

Анализ динамики микроциркуляторного обеспечения популяции нейронов ЭНТ через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки выявил, что в ответ на механостимуляцию вибриссы С1 с некоторым латентным периодом имело место возрастание кровотока, паттерны которого во всех случаях характеризовались однонаправленностью и стабильностью воспроизведения. ЛМК поддерживался на повышенном уровне в течение всего периода стимуляции, а после ее прекращения принимал близким к исходным значения. р02 в нейронных популяциях нейротрансплантата также возрастало, оставаясь на повышенном уровне в течение периода афферентной стимуляции, а после ее отмены снижалось до уровня, близкого к исходному. Следовательно, воспроизведение в ЭНТ с большой степенью точности сосудистых реакций возрастания кровотока и р02, присущих нормальной ткани мозга при сенсорной активации (Москаленко Ю.Е. и соавт., 1997), свидетельствует о жизнеспособности пересаженной эмбриональной ткани.

Через 4 месяца после пересадки ЭНТ в условиях адекватной сенсорной стимуляции вибриссы С1 при неизменном латентном периоде реакций микрососудов амплитуды постстимуляционного повышения объемной скорости кровотока и рОг в ЭНТ оказались достоверно выше, чем в контрольной коре. Через 8 и 12 месяцев после пересадки происходило снижение локальной функциональной гиперемии, сопровождавшееся увеличением латентных периодов ее формирования, что отражало прогрессивное снижение дилататорной способности микрососудов.

Поскольку анализ циркуляторно-метаболических особенностей ЭНТ осуществлялся при стимуляции его клеточных популяций, можно полагать, что наблюдаемые местные сосудистые реакции инициированы локальными изменениями функциональной активности нейронов (Ханана-швили Я.А., 1999, 2001). При этом микрососудистая сеть ЭНТ проявляет способность к осуществлению активных сосудистых реакций, направленных на регулирование кровотока в соответствии с метаболическими потребностями нервной ткани.

Вероятной причиной выявленного ухудшения локального кровоснабжения ЭНТ через 8 и 12 месяцев после пересадки являются функциональные особенности микрососудов: повышение структурного компонента сосудистого сопротивления, снижение эффективности вазодилата-ции и, как следствие, уровня кровотока в сосудах пересаженной нервной ткани. Между тем, развитие реакции на стимуляцию происходило в пределах сопоставимого с интактной тканью ССК временного отрезка, что, вероятно, определялось возможностями реагирования гладкой сосудистой стенки (Демченко И.Т., 1983; Москаленко Ю.Е. и соавт., 1997; Ханана-швили Я.А. и соавт., 2001). Повышение рОг, происходящее одновременно с возрастанием ЛМК, характерно для реакции функциональной гиперемии (Килибаева Г.С.,1985,1988).

Амплитуда отклонения ЛМК от исходного уровня в ЭНТ существенно отличалась через 4 месяца приживления: отмечен существенный прирост ее уровня, по сравнению с контролем. Развитие в ЭНТ выраженной локальной функциональной гиперемии в ответ на сенсорную стимуляцию вибрисс может также свидетельствовать о повышенной дилататорной способности микрососудов при осуществлении ими регуляторных адаптивных реакций (Килибаева Г.С. и соавт., 1988; Хананашвили Я.А. и соавт., 1999). При этом в пересаженной ткани достигается компенсация сниженного JIMK, благодаря чему, вероятно, и поддерживается фоновый стабильный уровень р02 в динамике ее приживления, а также реализуется повышенная потребность в кислороде при формировании локального очага активации в ЭНТ. Поскольку газовый состав крови в наших опытах не изменялся, можно считать, что увеличение поверхности диффузии достигалось с помощью вазодилататорных реакций. Повышение объемной скорости кровотока в этих условиях было бы малоэффективным (Москаленко Ю.Е., 1991).

Сосудистые реакции, зарегистрированные в структуре нейронных популяций ЭНТ через 4 и 8 месяцев после пересадки, не различались с контролем по времени их формирования и продолжительности латентных периодов. Однако, спустя 12 месяцев после пересадки, значения последних вдвое превышали величины показателей в ССК контрольных крыс, что также отражало отмеченное снижение эффективности вазоди-латации микрососудов ЭНТ (Демченко И.Т., 1983; Москаленко Ю.Е. и соавт., 1986,1991).

Таким образом, характеристики устойчивости системы локального кровоснабжения функционально однородных нейронных популяций ЭНТ, его циркуляторного гомеостаза в целом, а также реактивность мозговых сосудов пересаженной нервной ткани являются одними из инициальных факторов, обеспечивающих физиологическую активность ЭНТ и определяющих его компенсаторные возможности. Очевидно, популяции нервных клеток ЭНТ, отличающиеся друг от друга активностью функционирования, нуждаются в адекватном гемоцнркуляторном обеспечении и, следовательно, наличии оперативных механизмов местной регуляции кровотока.

Было установлено, что в динамике приживления ЭНТ фоновая суммарная биоэлектрическая активность ЭНТ характеризовалась наличием дельта- и тета-ритмов, имевших высокую энергетическую мощность, а также колебаний в диапазоне 4-30 Гц с пиками спектральной мощности на частотах 3-11 Гц. В электрокортикограммах ССК контрольных крыс выявлены дельта- и тета- ритмы, а также частоты альфа- и бета-диапазонов с доминированием активности 7-12 Гц. Сходство функциональной организации паттернов суммарной биоэлектрической активности ЭНТ и ССК контрольных крыс позволяет предположить восстановление у крыс с ЭНТ функциональной целостности систем мозга, принимающих участие в генерации соответствующих ритмов.

Структурно - функциональная организация нейронных популяций ЭНТ имела качественное сходство с зоной представительства вибрисс ССК мозга контрольных крыс К-1 и К-2: в динамике приживления сохранялись три популяции нейронов: высоко,- средне- и низкочастотные. Во всех случаях доминировала среднечастотная импульсная активность в диапазоне 7-20 имп/с. Наиболее характерным типом генерации импульсной активности являлся непрерывно-аритмический, сопровождавшийся периодическим возникновением пачечных и пачечно-групповых разрядов. Данные о качественном сходстве паттернов импульсации, имевшей регулярный характер, свидетельствуют об упорядоченности и регулярности генерации имплантатами нейронной активности, и, как следствие, о стабильной энергетике клеток.

В ЭНТ присутствовали нейроны, повышающие частоту одиночных разрядов на фоне веретенообразной активности, а также генерирующие пачечные разряды в связи со вспышками медленноволновой ритмической активности. Генез веретенообразной активности, регистрируемой в не-окортексе, связан с интраталамической локализацией ее пейсмекерных механизмов и ритмическими таламофугальными залпами импульсов (McCormic D. et al., 1997; Steriade M. et al., 1999). Кроме того, кортикальные веретена являются результатом интеграции подкорковых влияний и деятельности коркового ритмогенного механизма, участвующего в генерации пачечной импульсной активности (Franceschetti S. et al., 1995). Следовательно, имеющиеся морфо-функциональные предпосылки, а также особенности зарегистрированных нами паттернов суммарной и импульсной биоэлектрической активности ЭНТ, позволяют предполагать включение клеток пересаженной эмбриональной ткани в существующие нейронные сети крысы-реципиента.

В ЭНТ изменялись количественные характеристики импульсного потока, что проявлялось в уменьшении популяции фоновоактивных нейронов, доля которых сокращалась в динамике его приживления. Текущая средняя частота фоновой импульсной активности нейронов в трансплантате достоверно снижалась по сравнению с контрольными животными в каждом из анализируемых периодов после пересадки, а через 12 месяцев имела выраженную тенденцию к угнетению.

Паттерны вызванной нейронной активности клеток ЭНТ при адекватной сенсорной стимуляции через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки видоизменялись в зависимости от исходного характера импульсации. В структуре паттернов присутствовали реакции, характерные для нейронов зоны представительства вибриссы С1 ССК контрольных крыс, а именно: увеличение средней частоты импульсной активности, появление импульсных разрядов и тормозных фаз, коррелирующих с моментом нанесения стимулов.

Латентные периоды вызванной активности ответов клеток ЭНТ в динамике его приживления возрастали по сравнению с ССК контрольных крыс. Из этого следует, что популяционные ответы носили специфический характер, что наряду с данными о воспроизведении в ЭНТ ламинарной организации (Chung F. et al. 1986), может свидетельствовать о стимуляции эмбриональной тканью регенерации перерезанных аксонов мозга реципиента (Rostaing -Rigatieri S. et al., 1997; Sinson G. et al., 1997). В результате поврежденные нейроны восстанавливают важнейшие нейрональные тракты - проекционные сенсорные системы (Гирман С. В., 1994). В то же время типичная послойная организация неокортекса в ЭНТ отсутствует (Козлова Е.Н., 1989; Черкасова JT.B. и соавт., 1990; Love S. et al., 1999), что, вероятно, определяет зарегистрированные нами электрофизиологические и, соответственно, гемодинамические изменения в ЭНТ.

Среди популяций нейронов ЭНТ нами зарегистрированы перестраивающие паттерн вызванной активности на пачечный при механостимуля-ции вибрисс. При синхронной регистрации суммарной биоэлектрической активности выявлено, что при десинхронизации ее ритмов возникают одиночные разряды клеток, а при альфа-подобной ритмической активности -пачечные, коррелирующие, в свою очередь, с ритмической активностью. Можно полагать, что, во-первых, ЭНТ и нервная ткань мозга крысы-реципиента взаимодействуют между собой при генерации ритмической активности, а, во-вторых, что к ЭНТ афферентная информация поступает через таламо-кортикальные входы.

Очевидно, зарегистрированные нами электрофизиологические реакции могут являться коррелятами морфологической интеграции нейронов ЭНТ, что подтверждаются данными об эквипотенциальное™ неокортикальных трансплантатов в отношении получения кортикальных контрала-теральных, таламо-кортикальных или каллозальных проекций от мозга хозяина (Chung F. et al., 1986). Известно, что перинатальный период формирования нервной ткани определяет функции дефинитивного мозга, что выявляется при перекрестных пересадках ЭНТ в сопредельные области мозга (И.П.Быстронь, 1994; В.А.Отеллин, 2000). Популяции нейронов ЭНТ адекватно дифференцируются в ответ на индуцирующие сигналы мозга хозяина (C.Lundberg, 1996). Однако работами Е. С. Петровой (2000) показано, что афферентные влияния нейронов хозяина не является определяющими на начальных этапах пролиферации эмбриональной ткани, но имеет существенное значение для функционирования нейронов на поздних этапах приживления.

Таким образом, факты перестройки импульсной активности нейронов ЭНТ на стимуляцию, воспроизведение типичных специфических паттернов импульсации клеточными популяциями пересаженной ткани могут являться доказательством жизнеспособности нейротрансплантата и выступать в качестве функционального прогностического критерия адекватности биоэлектрической активности ЭНТ.

Вместе с тем установлено, что клетки ЭНТ характеризовались значительно более длинными латентными периодами ответов на адекватную сенсорную стимуляцию. Разница средних значений латентных периодов обусловлена большим числом длиннолатентных ответов в ЭНТ. Причина данного явления может быть связана с меньшей плотностью и диффузно-стью иннервации нейронов ЭНТ аксонами, врастающими из мозга реципиента (Лущекина Е.А. и соавт., 1990; Журавлева З.Н., 2004). Поскольку известно, что латентный период ответа нейронов проекционных зон коры мозга на афферентную стимуляцию является одним из существенных характеристик их вовлечения в процесс сенсорного анализа (Сухов А.Г., 1992), можно предположить, что после трансплантации ЭНТ не полностью восстанавливают свои функциональные свойства. В ЭНТ нарушена пространственная локализация афферентов на его нейронах (Александрова М.А., 1984,1998). Поскольку в ЭНТ происходит также и повышение порога инициации импульсов (Брагин А.Г. и соавт., 1987), можно полагать, что зарегистрированное удлинение латентных периодов может зависеть от низкой крутизны нарастания ВПСП.

Таким образом, главными факторами, определяющими природу и рост афферентных и эфферентных волокон ЭНТ при реиннервации отделов мозга, являются среда, в которой расположены ЭНТ, его ростовые способности, выраженность глиального рубца (Oblinger М. et al., 1980), а также адекватность гемодинамического обеспечения (Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш., 2000).

Удлинение латентного периода вызванной импульсной активности нейронов ЭНТ, относительно интактной ССК может быть связано с замедленным поступлением афферентной информации от соответствующих вибрисс к клеткам пересаженной эмбриональной нервной ткани по волокнам, которые в норме компактно входят в интактную ССК и направляются к бочонкам (Лапенко Т.К., 1982; Сухов А.Г., 1992). Кроме того отведение на глубине 0,4-0,7 мм соответствовало уровню III-IV слоев коры зоны представительства вибрисс интактной ССК, где активация происходит с минимальными латентными периодами 5-15 (20) мс, вследствие локализации входной части колонки. К этим клеткам подходят специфические та-ламо-кортикальные афференты и от них распространяются волны транскортикальной активности к эфферентам V слоя (Сухов А.Г., 1992). Их активация сопровождается возвратными тормозными влияниями на нейроны вышележащих слоев (Сухов А.Г. и соавт., 1987), о чем также свидетельствует торможение вызванной активности нейронов ССК, особенно выраженное через 12 месяцев после пересадки. Зарегистрированное нами в ЭНТ тормозные влияния: начальное и поствозбудительное торможение, отсутствие эпилептиформной готовности может, в свою очередь, быть следствием изменений характера связей или размещения тормозных синапсов афферентных волокон на нейронах (Clough С. et al., 1990; Van Muiswinkel E. et al., 1993).

Следует отметить, что несмотря на большую плотность нейронов верхних слоев коры, лишь небольшая их часть имеет фоновую импульсную активность (Лапенко Т.К., 1982; Сухов А.Г., 1992), что, вероятно, находит отражение в обнаруженном нами относительном снижении фоново-активных нейронов ЭНТ в динамике его приживления, а также в контрольной ССК.

Нейроны ЭНТ в динамике приживления характеризовались высокой реактивностью к стимулам, адекватным для ССК. Механостимуляция вибрисс приводила к значительному возрастанию текущей средней частоты импульсации, наиболее выраженному через 12 месяцев после пересадки. Это может быть связано с расширением рецептивного поля в ЭНТ (Брагин и соавт., 1986, 1987), являющегося проявлением разнонаправленного ветвления аксонов, врастающих в ЭНТ, и свидетельствует о слабой выраженности пространственного кодирования расположения вибрисс (Сухов А.Г., 1992). Преобладание нейронов с широкими рецептивными полями в популяциях является следствием ювенильности имплантатов (Виноградова О. С. 1994; Лосева Е.В., 2001), и, в свою очередь, влечет за собой недоразвитие тормозных процессов. Однако, ЭНТ, интегрируясь с мозгом реципиента, могут осуществлять некоторые процессы приема и обработки сенсорной информации, характерной для замещаемой удаленной зоны ССК.

Итак, функциональные характеристики аллогенного ЭНТ, помещенного в гомотопическую зону представительства вибрисс ССК, видоизменяются в процессе приживления. Характер и средняя частота фоновой и вызванной биоэлектрической активности ЭНТ, имеющих непосредственные контакты с мозговой тканью, обладает рядом черт, присущих нормальному мозгу реципиента, и является надежным показателем функциональной интеграции в динамике приживления.

Таким образом, нами выявлен функциональный характер устанавливающихся афферентных связей, поскольку нейроны трансплантата приобретают и длительно сохраняют способность отвечать на сенсорную стимуляцию крысы-реципиента. Исследование нейронов ЭНТ показало их высокую реактивность и наличие специфических ответов на стимуляцию вибрисс, вместе с тем латентные периоды вызванной импульсной активности нейронов были увеличены, по сравнению с контрольной ССК. Несмотря на то, что количество фоновоактивных нейронов ЭНТ и их реактивность была снижена, стимуляция вибрисс, которые в нормальных условиях иннер-вируют высокоорганизованную и строго дифференцированную зону их представительства в ССК, оказалась эффективной для вызова ответа клеток трансплантата. При этом структура вызванной импульсной активности имела сходство с контрольной ССК.

Таким образом, при модулирующем воздействии ЭНТ в динамике его приживления, сохраняются и проявляются уникальные свойства незрелой нервной ткани. Ее метаболические потребности компенсируются за счет протекания ряда биохимических процессов, направленных на использование разнообразных, в том числе альтернативных энергетических субстратов. При этом в мозге реципиента, очевидно, запускаются механизмы, необходимые для поддержания в нем гомеостатического равновесия. Наряду с этим ЭНТ синтезирует и выделяет в мозг реципиента комплекс веществ, модулирующих каскад химических процессов регуляции окислительного метаболизма. Действие пересаженных клеток приводят к активации регенераторных процессов, регулируемых на клеточном уровне (Mallat М. et al., 1994; Ikeda Е. et al., 1996; Colombo J.et al., 1998; Лосева E.B., 2001). Данные, полученные нами в результате динамического наблюдения пересаженной эмбриональной нервной ткани, указывают на адекватность ее биоэлектрической активности, циркуляторно-метаболического обеспечения и могут служить функциональными прогностическими критериями оценки степени интеграции с тканью мозга реципиента. ЭНТ. * *

Таким образом, функциональные характеристики аллогенного ЭНТ, помещенного в гомотопическую зону представительства вибрисс ССК головного мозга крысы-реципиента, видоизменяются в процессе приживления. Через 4, 8 и 12 месяцев после пересадки ЭНТ компенсирует нарушения, возникшие в результате удаления нервной ткани, и воспроизводит нейрофизиологические и циркуляторно-метаболические характеристики гомотопической области головного мозга.

Основными показателями эффективности приживления ЭНТ в мозге реципиента можно считать наличие у пересаженных клеток функциональной биоэлектрической активности, оптимальный уровень которой поддерживается при адекватном гемодинамическом обеспечении нервной ткани. Критериями нормального функционального состояния ЭНТ, а также уровня его интеграции являются изменения видоспецифических и восстановление ранее нарушенных поведенческих реакций после пересадки эмбриональной ткани.

Продолжение и развитие экспериментальных исследований в направлении дальнейшего изучения функциональных, биоэлектрических, гемо-динамических и метаболических характеристик ЭНТ на разных этапах его интеграции с нервной тканью головного мозга реципиента, позволит конкретизировать характер процессов приживления эмбриональной нервной ткани, использовать ЭНТ для коррекции, восстановления и протезирования функций центральной нервной системы после повреждения, связанного с гибелью части нейронов в различных ее отделах, а также определить характер соответствующего научного направления.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Гафиятуллина, Гюзяль Шамилевна, Краснодар

1. Анохин К. В., Судаков К. В. Геном нейронов мозга в организации системных механизмов поведения // Бюл. эксперим. биол. и медицины. -2003.- Т. 135,№ 2. С. 124-131.

2. Александрова М. А. Биологические основы нейротрансплантации // Онтогенез. 2001. - Т. 32,№ 2. - С. 106-113.

3. Александрова М. А. Дифференцировка эмбрионального неокортекса при трансплантации у крыс // Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 1998. Т. 126. -Прил. I. - С. 88-91.

4. Александрова М. А. Межнейрональные связи при трансплантации эмбриональной ткани мозга в головной мозг взрослых млекопитающихв норме и патологии // Докл. АН СССР. -1984. Т. 278,№ 1. - С. 220-223.

5. Александрова М. А., Гирман C.B., Полетаева И.И., Корочкин Л.И. Трофическое влияние нейротрансплантатов на подавление судорожной активности у крс с наследственной эпилепсией // Докл. АН СССР. -1995. -Т. 341,№3.-С. 412-414.

6. Александрова М. А., Ермакова И.В., Лосева Е.В. Миграция клеток от неокортикальных трансплантатов // Докл. АН. 1993а. - Т.328,№5.-С.619-621.

7. Александрова М.А., Лосева Е.В., Ермакова И.В. Поведение трансплантированных эмбриональных клеток // Онтогенез. 19936. - Т.24,№5. -С.43-50.

8. Александрова М.А., Ревищин A.B., Подгорный О.В. и др. Трансплантация культивированных нейральных стволовых клеток плода человека в мозг крыс, подвергавшихся острой гипоксии // Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 2004. Т. 137,№3. - С. 296-300.

9. Арушанян Э.Б., Попов A.B. Влияние повреждение супрахиазматических ядер гипоталамуса крыс на динамику их короткопериодных колебаний нормального и абнормального поведения // Физиол. журн. им. И. М. Сеченова.- 1994. Т. 80,№ 3.- С. 1-7.

10. Ашмарин И.П., Стукалов П.В. Нейрохимия.- М.: Институт биомедицинской химии РАМН, 1996. 469 с.

11. Базян A.C., Гецова В.Н., Орлова Н.В. Некоторые нейрохимические механизмы формирования и консолидации галоперидоловой каталепсии // Журн. высш. нервн. деят. -1999. Т.49,№6. - С.982-989.

12. Баканова JI.A., Друзин М.Я., Козлов А.П. и др. Эффекты проактивной интерференции в задаче пространственного выбора в Y-образном лабиринте у крыс /АЖурн. высш. нервн. деят. -1997. Т.47,№1. - С.78-85.

13. Батуев A.C., Рябинская Е.А., Ашихмина О.В. Поведенческие тактики у крыс в радиальном лабиринте // Журн. высш. нервн. деят.- 1984.-Т.34,№1. С.36-39.

14. Батурин В.А.,Манжикова Г.И., Щетинин Е.В., Арушанян Э.Б. Ритмическая активность принудительного плавания и ее связь с особенностями поведения крыс // Журн. высш. нервн. деят. 1988. - Т.38,№1.- С.293-297.

15. Березовский В. А. Напряжение кислорода в тканях животных и человека. -Киев: Наукова думка, 1975. — 194 с.

16. Брагин А.Г. Включение нейронов трансплантатов эмбрионального неокор-текса крыс в осуществление сенсорной функции коры мозга реципиента // Журн. высш. нервн. деят. 1986. - Т.36, №5.- С. 930-938.

17. Брагин А.Г., Боне А. Природа вызванных потенциалов, регистрируемых в неокортикальных трансплантатах // Нейрофизиология. 1989. - Т.21, №4. - С. 490-497.

18. Брагин А.Г., Боне А., Павлик В.Д. Электрофизиологические показатели степени функциональной интеграции кортикального трансплантата с мозгом реципиента // Нейрофизиология. 1987. - Т. 19,№4. - С. 498-504.

19. Брагин А. Г., Виноградова О. С. Гомо- и гетеровидная трансплантация эмбриональной ткани нервной системы // Бюл. эксперим. биол. и медицины. 1981.- Т. 92,№ 10. - С. 486-489.

20. Брагин А. Г., Виноградова О. С., Громова Е. А. Влияние трансплантации норадренергической нервной ткани на уровень норадреналина мозга и поведение крыс с разрушением катехоламинергическихсистем // Докл. АН СССР. 1984. - Т. 276,№ 4. - С. 999-1002.

21. Брагин А. Г., Зенченко К. И., Пичкур JI. Д. и др. Сравнительные характеристики активности нейронов в переживающих срезах трансплантированного и интактного неокортекса // Нейрофизиология. 1991. — Т.23, №3. - С. 273-280.

22. Брагин А.Г., Стафехина B.C. Нейронная активность в суспензионных трансплантатах неокортекса // Журн. высш. нервн. деят. 1992.- Т. 42,№ 5. - С. 955-964.

23. Брюховецкий A.C. Информационный подход — методологическая, теоретическая и технологическая база развития нейротрансплантологии как науки биоуправления мозгом // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. -1998.- Т.126. Прил.1.- С. 196-203.

24. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М.: Высшая школа, 1991.-399 с.

25. Виноградова О.С. Нейронаука конца второго тысячелетия: смена парадигм //Журн. высш. нервн. деят. 2000.- Т.50,№.5.- С. 743-774.

26. Виноградова О. С. Некоторые факторы, определяющие морфо-функциональную интеграцию трансплантированной ткани головного мозга эмбрионов // Журн. высш. нервн. деят.- 1994. Т.44,№3. - С.229-251.

27. Виноградова О. С. Проблема трансплантации в центральную нервную систему млекопитающих // Журн. высш. нервн. деят. 1985.- Т. 35,№ 1.- С. 132-138.

28. Виноградова О.С. Развитие нервной ткани млекопитающих при трансплантации в мозг и переднюю камеру глаза: проблемы и перспективы // Онтогенез. 1984. - Т.15,№3. - С.229-251.

29. Викторов И.В. Роль оксида азота и других свободных радикалов в ишеми-ческой патологии мозга // Вест. РАМН. 2000. - №4.- С.5-10.

30. Владимирский Б.М. Математические методы в биологии,- Ростов-на-Дону: Изд-воРГУ, 1983.-304 с.

31. Ганнушкина И.В., Антелава A.JL, Баранчикова М.В. Влияние ноотропа -церебролизина при ишемии мозга у крыс с разными поведенческими реакциями в тесте открытого поля // Пат. физиология и эксп. терапия.-1998.-№2/1.-С. 3-8.

32. Гилерович Е.Г., Отеллин В.А. Трансплантация эмбриональной нервной ткани как модель изучения ранних этапов становления центральной нервной системы // Успехи физиол. наук. 2001. - Т.32,№1.- С.38-47.

33. Гирман C.B. Изучение регенеративной способности нейронов, относящихся к специфическим нейрональным системам мозга взрослых млекопитающих // Онтогенез. 1994.- Т.25,№4.- С. 62-63.

34. Гирман C.B., Головина И.Л. Трансплантация эмбриональной нервной ткани нормализует обучение крыс активному избеганию, нарушенное в результате воздействия острой гипоксической гипоксии // Докл. АН СССР. 1989. - Т. 304,№ 5.- С. 1262-1265.

35. Говалло В.И. Иммунология репродукции. М.: Медицина, 1987.- 304 с.

36. Гомазков O.A. Мозг и нейропептиды. М.,1997. - 172 с.

37. Гомазков O.A. Молекулярные механизмы регуляции нейрохимических процессов. История и современный взгляд // Успехи физиол. наук. -2003. Т.34,№3. - С.42-54.

38. Гуляева Н.В., Ерин А.Н. Роль свободнорадикальных процессов в развитии нейродегенеративных заболеваний (болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера) //Нейрохимия. 1990.- Т. 9.- Вып.1.- С. 68-74.

39. Демченко И.Т. Кровоснабжение бодрствующего мозга. Л.: Наука, 1983. -173 с.

40. Дмитриева Н.М. О периодах развития структур головного мозга в онтогенезе крысы // Журн. эволюц. биохим. и физиол. 1981. - Т. 17, №3.-С.287. '

41. Држевецкая И.А. Эндокринная система растущего организма.- М.: Высшая школа, 1987. 208 с.

42. Ермакова И. В. Компенсация нарушенных поведенческих функций с помощью нейротрансплантации // Бюл. эксперим. биол. и медицины. -1998. Т. 126. - Прил. I. - С. 82-86.

43. Ермакова И.В., Жулин В.В. Восстановление поведенческих функций после трансплантации эмбрионального стриатума в поврежденную амигдалу мозга крыс// Физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1994.- Т.80,№3.-С.113-115.

44. Ермакова И.В., Лосева Е.В., Подачин В.П. Влияние нейротрансплантации на поиск пищи у крыс после электролитического повреждения амигда-лы// Журн. высш. нервн. деят.- 1989. Т.39,№6. - С.1163-1166.

45. Ермакова И.В., Кузнецова Г.Д., Лосева Е.В. и др. Влияние нейротранс-плантации на аудиогенные судороги у крыс разных генетических линий //Журн. высш. нервн. деят.- 1996. Т.46,№4.- С.776-785.

46. Ермакова И. В., Лосева Е. В., Гуляева Н.В. Поведенческие, морфологические и биохимические корреляты раннего влияния нейротрансплантата на поврежденный мозг взрослых крыс // Журн. высш. нервн. деят. -1988 а. Т. 38,№ 5. - С. 922-930.

47. Жуков Д.А., Виноградова Е.П. Различная тревожность у крыс, селектированных по способности к выработке условного рефлекса активного избегания //Журн. высш. нервн. деят. 1994.- Т.44,№7. - С.591-595.

48. Журавлева З.Н. Гиппокамп и нейротрансплантация. // Журн. высш. нервн. деят. 2004. - Т.54,№2. - С. 149-162.

49. Журавлева З.Н. Дифференцировка нейронов и синапсов мшистых волокон в трансплантатах зубчатой фасции, развивающейся в неокортексе крыс // Онтогенез. 1999. - Т. 30,№ 2.- С. 85-91.

50. Журавлева З.Н. Синаптические контакты нейронов трансплантатов зубчатой фасции с неспецифическими мишенями в неокортексе реципиентов // Онтогенез. 2002.- Т.33,№3.- С. 230-235.

51. Журавлева З.Н., Брагин А.Г., Виноградова О.С. Ультраструктура кровеносных капилляров трансплантатов нервной ткани, развивающихся в передней камере глаза //Арх. анат., гист. и эмбриол. 1985. - Т.88,№1.-С.34-40.

52. Загваздин Ю.С., Жиляев С.Ю., Моргалев Ю.Н. и др. Количественная оценка локального мозгового кровотока методом клиренса, с ингаляцией и электрохимической генерацией водорода. Физиол. журн. СССР им. И.М.Сеченова. 1986. - Т. 72,№12. - С. 1693-1696.

53. Зенков Л.Р. Клиническая электроэнцефалография (с элементами эпилептологии). М.: МЕДпресс-информ, 2001. - 368 с.

54. Камскова Ю.Г., Локтионова И.В. Особенности поведенческого статуса, ГАМКергической системы и церебральной монооксидазной активности у крыс в динамике 30-суточной гипокинезии // Пат.физиология и эксп. терапия. 2003. - №3/1. - С. 17-18.

55. Килибаева Г.С. Распределение кровотока в соматосенсорной области коры мозга кроликов при раздражении вибрисс // Физиол. журн. СССР им. И.М.Сеченова.- 1985.- Т.71,№9.-С. 1166-1170.

56. Килибаева Г.С., Демченко И.Т., Москаленко Ю.Е. Структурно-функциональный модуль микроциркуляторной сети коры головного мозга крыс // Физиол. журн. СССР им. И.М.Сеченова.- 1988.- Т.74,№9. -С. 1235-1242.

57. Кисляков Ю.Я., Лучаков Ю.И., Смирнов Г.К. Теоретическое обоснование метода расчета объемной скорости кровотока по клиренсным кривым водорода // Физиол. журн. СССР им. И.М.Сеченова.- 1986.- Т.72, №11. -С. 1502-11515.

58. Клещинов В.Н. Изменение нейронов мозга реципиента вокруг трансплантата эмбриональной нервной ткани // Онтогенез. 1989. - Т. 20, № 2. С. 216-220.

59. Клещинов В. Н., Александрова М. А. Эмбриональные ней-ротрансплантаты прекращают дегенеративные процессы в нервных клетках мозга реципиента // Докл. АН СССР. 1990. - Т. 313,№ 5. - С. 1238-1241.

60. Клюшник Т.П. Нейротрофические факторы как возможное эффекторное звено при терапии с использованием фетальных клеток и тканей человека.- М.,1996. С.103- 107.

61. Копаладзе P.A. Работа с лабораторными животными в контексте биоэтики история, современность, перспективы // Успехи физиол. наук. 2004.-Т.35,№2. - С. 92-109.

62. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.:Высш. школа, 1990. - 352 с.

63. Лапенко Т.К. Структурно-функциональная организация нейронов зоны проекции вибрисс соматической коры крысы. Дисс. на соиск. учен, степени канд. биол. наук.- Ростов-на-Дону, 1983.- 146 с.

64. Лапенко Т.К. Цитоархитектоническая и количественная характеристика клеточных группировок IV слоя коры большого мозга крысы в области представительства вибрисс // Арх. анат., гист. и эмбриол.- 1982. -Т.32,№1.- С.33-38.

65. Лазаренко Н.С., Петров Е.С., Забродин И.Ю. и др. Вероятностные характеристики поведения крыс в условиях открытого поля // Журн. высш. нервн. деят. 1982. - Т.32,№6.- С. 1096-1102.

66. Левшина И.П., Ноздрачева Л.В., Курочкина Е.В. Соотношение физиологических и биоэнергетических характеристик старых крыс при невро-тизации III Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 1995.- №3.- С. 242-245.

67. Левшина И.П., Шуйкин H.H. Особенности исследовательского поведения социально депривированных крыс в стрессовой ситуации // Журн. высш. нервн. деят. 2002. - Т.52,№5.- С.613-618.

68. Левшина И.П., Шуйкин H.H. Особенности поведения крыс в У-лабиринте, связанные с альтернативным выбором, и их интерпретация в терминах комплексных амплитуд вероятностей. // Журн. высш. нервн. деят. -2003.- Т.53,№1.- С.94-99.

69. Ливанова Л.М., Айрапетянц М.Г. Реакция крыс активного и пассивного типов поведения при «сшибке» двух безусловных рефлексов // Журн. высш. нервн. деят. 1993. - Т.43,№5. - С. 1030-1032.

70. Ливанова Л.М., Левшина И.П., Курочкина Е.В. Влияние хронического стресса, длительной адаптации к гипоксии и их сочетания на поведение крыс с разными типологическими особенностями // Журн. высш. нервн. деят. 1994.- Т.44,№1. - С.75-79.

71. Лосева E.B. Нейротрансплантация фетальных тканей и компенсаторно-восстановительные процессы в центральной нервной системе //Успехи физиол. наук. 2001.- Т.32,№1. - С. 19-37.

72. Лосева Е.В., Ермакова И.В., Михеева Т.С. Влияние нейротрансплантата эмбриональной ткани на реактивные процессы при травмах мозга крыс // Изв. АН СССР 1988. - Т. 38,№ 5. - С. 1262-1265.

73. Лосева Е.В., Ермакова И.В., Тарасова Л.Ю. Действие нейротранспланта-ции на мозг крыс с поврежденной височной корой // Нейрофизиология. 1990. - Т. 22,№ 5. - С. 586-595.

74. Лущекина Е.А., Хоничева Н.М., Лущекин B.C. Особенности строения дендритного аппарата трансплантированных нейронов эмбриональной миндалины //Нейрофизиология. 1990. - Т. 22,№ 5. - С. 579-585.

75. Лыжин A.A., Викторов И. В., Вербицкая Л. Б. Трансплантация культивируемой эмбриональной нервной ткани // Трансплантация ткани мозга млекопитающих: Тез. докл. Всес. симпоз. Пущино, 1988. С. 44-46.

76. Майский В. А., Дорошенко Н. 3., Клещинов В. Н., Полежаев Л. В. Исследование межнейронных связей трансплантированной эмбриональной нервной ткани с головным мозгом у крыс // Физиол. журн. 1988.- Т. 34,№2. -С. 10-14.

77. Марпл мл. С. Л. Цифровой спектральный анализ и его приложение. — М.:Мир, 1990.-584 с.

78. Маункастл В. Организующий принцип функции мозга — элементарный модуль и распределенная система // Разумный мозг. М., Мир. — С. 15-67.

79. Махинько В.И., Никитин В.Н. Обмен веществ и энергии в онтогенезе // Возрастная физиология.- Л., Наука. 1975. С.221-262.

80. Михайлов А.Т Эмбриональные индукторы. М.:Наука,1988.- 216 с.

81. Михайлова Н. Г., Зухарь А. В., Лосева Е. В., Ермакова И. В. Влияние трансплантации эмбриональной ткани мозга (ранние сроки) на реакции избегания искусственных и зоосоциальных стимулов у крыс // Журн. высш. нервн. деят. 1990.- Т. 40,№ 1.- С. 179-182.

82. Мицкевич М.С. Гормональная регуляция в онтогенезе животных. -М.: Наука, 1978. 224 с.

83. Москаленко Ю.Е. О функциональных задачах деятельности механизма регуляции мозгового кровообращения // Физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1991. -Т.77,№9. - С. 55-65.

84. Москаленко Ю.Е., Вайнштейн Г.Б., Демченко И.Т. и др. Внутричерепная гемодинамика: биофизические аспекты. Л.:Наука,1975. 203 с.

85. Москаленко Ю.Е., Вулсей Т.А., Ровайен К., и др. Динамика кровотока в различных слоях соматосенсорной коры головного мозга у крыс при механической стимуляции вибрисс // Физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1997. - Т.83,№4. - С. 67-76.

86. Москаленко Ю.Е., Журавин И.А., Рясина Т.В. и др. Особенности корреляции функциональной активности кровоснабжения и структурной организации в сенсорно-депривированной коре мозга крыс // Физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1992. - Т.78,№11. - С. 87-97.

87. Москаленко Ю.Е., Ровайен К., Вулсей Т.А. и др. Комбинации методов для мониторинга микроциркуляции мозга // Физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1994а. - Т.80,№2. - С. 144-153.

88. Мчедлишвили Г. И. Нарушения нормального структурирования кровотока в микрососудах как причина гемореологических расстройств // Физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1996. - Т.82,№12. С. 41-47.

89. Ордян Н.Э., Нестеров H.H., Васильев В.Ю. и др. Влияние препарата лик-вора пациентов с опийной зависимостью мужского и женского пола на поведение крыс-реципиентов в тесте открытого поля // Журн. высш. нервн. деят. 2001.- Т. 51,№2.- С.244-247.

90. Орлова Н.В., Фоломкина A.A., Базян A.C. Поведение крыс в «открытом поле» на следующий день после инъекции галоперидола: зависимость от условий эксперимента // Журн. высш. нервн. деят. 2003. - Т. 53, №2.- С.243-244.

91. Отеллин В. А. Морфологические основы клинической трансплантологии // Морфология. 1999. - Т. 115,№ 3. - С. 7-17.

92. Отеллин В. А. Реакции нервной ткани человека на повреждающие воздействия в пренатальном периоде воздействия. Материалы конференции «Актуальные проблемы фундаментальных исследований в области биологии и медицины». Наука, С-Пб.: 2000, 239 с.

93. Отеллин В. А., Арушанян Э.Б. Нигрострионигральная система. М.,1989. -270 с.

94. Отеллин В. А., Гусихина В. И., Гилерович Е. Г. Структурные основы нарушения формирования цитоархитектоники в трансплантатах неокор-текса человека // Арх. анат., гистол. и эмбриол. 1990. - Т. 99, - № 10. -С. 20-25.

95. Отеллин В. А., Петрова Е. С. Строение длительно живущих трансплантатов // Морфология. 1998. - Т. 114,№ 3. - С. 39-43.

96. Охотин В.Е., Калиничеснко С.Г., Дудина Ю.В. NO-ергическая трансмиссия и NO как объемный нейропередатчик, влияние N0 на механизмы синаптической платичности и эпилептогенез // Успехи физиол. наук. -2002. Т.33,№2. - С. 19-37.

97. Плескачева М.Г., Зорина З.А., Николенко JI.JI. и др. Поведение в водном тесте Морриса крыс линии Крушинского-Молодкиной, селектированных на повышенную судорожную активность // Журн. высш. нервн. де-ят. 2002.- Т. 52,№3. - С.356-365.

98. Подачин В.П. Компенсация нарушений поведения методом трансплантации эмбриональной нервной ткани // Мозг и поведение. М.,1990. - С. 532-541.

99. Полежаев Л. В. Нормализация дистрофированных нейронов и ее значение для биологии и медицины // Успехи соврем, биол. 1992. - Т. 112, № 5-6. - С. 680-696.

100. Полежаев Л. В. Трансплантация участков и клеток нервной ткани в головной мозг и проблема восстановления функций // Успехи соврем, биол. 1983. - Т. 95,№ 3. - С. 453-469.

101. Полежаев Л.В., Александрова М.А. Аплотрансплантация эмбриональной ткани мозга в головной мозг взрослых млекопитающих при гипоксиче-ской гипоксии// Журн. невролог., психиатр. 1983 . - Т. 83,№ 7. - С. 990-997.

102. Полежаев Л. В., Александрова М. А. Трансплантация ткани мозга в норме и патологии. М.: Наука, 1986. - 152 с.

103. Полежаев Jl. В., Сабурина И. Н., Черкасова Л. В. и др. Нормализация синтеза РНК в коре мозга крыс после гипоксии путем трансплантации эмбриональной нервной ткани // Докл. АН СССР. 1988 б. - Т. 300,№ 6. -С. 1477-1482.

104. Полежаев Л.В., Александрова М.А., Витвицкий В.Н. и др. Трансплантация ткани мозга в биологии и медицине.- М.: Наука, 1993.- 239 с.

105. Пономарев Д.Б., Виноградова Е.С. Сравнительный анализ способности к обучению в водном тесте Морриса крыс, различающихся по скорости выработки условного рефлекса активного избегания эмоций // Журн. высш. нерв. деят. 2000.- Т.50,№6. - С.974-981.

106. Раевский В.В. Онтогенез медиаторных систем мозга.- М.:Наука, 1991.144 с.

107. Родина В.И., Крупина H.A., Крыжановский Г.Н., Окнина Н.Б. Многопара-метровый метод оценки тревожно-фобических состояний у крыс // Журн. высш. нерв, деят.- 1993.- Т.43,№5. С.1006-1017.

108. Сабурина И. Н. Изменение гемато-энцефалического барьера при трансплантации нервной ткани // Трансплантация ткани мозга в биологии и медицине. М.: Наука,1993. С.62-73.

109. Савельев С. В. Трансплантация ткани эмбрионального головного мозга // Арх. патол. 1992. - Т. 54,№ 11. - С. 43-46.

110. Семченко В.В., Ерениев С.И., Степанов С., и др. Трансплантация незрелой нервной ткани в экспериментальной и клинической неврологии. -Омск: ГУИПП «Омский дом печати»,2000.- 340 с.

111. Семьянов A.B. Диффузная внесинаптическая нейропередача посредством глутамата и ГАМК // Журн. высш. нервн. деят.- 2004.- Т.54,№1. С.68-84.

112. Симонов П.В. Лекции о работе головного мозга. Потребностно-информационная теория высшей нервной деятельности. М.:Наука,2001. -95 с.

113. Симонов П.В. Мозговые механизмы эмоций // Журн. высш. нерв. деят. -1997.- Т.47,№2.- С.320-328.

114. Симонов П.В. Физиологическое и субъективное: принцип дополнительности //Журн. высш. нервн. деят.- 2000.- Т.50,№4. С.587-589.

115. Сосунов A.A., Челышев Ю.А. Стволовая нервная клетка // Успехи физиол. наук. 2002. - Т.33,№1. - С.17-28.

116. Станков Д.С., Катунян П.И., Крашенинников М.Е., Онищенко H.A. Ней-ротрансплантация в лечение травмы спинного мозга // Вестн/ транс-плант. и искусств, органов. 2003. - №1. С. 44-52.

117. Сухих Г.Т. Трансплантация фетальных клеток в медицине: настоящее и будущее // Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 1998.- Т. 126. Прил.1.-С. 3-13.

118. Сухов А.Г. Нейронная организация тактильного анализатора крысы. Ростов-на-Дону: Изд-во РГУ ,1992. - 104 с.

119. Сухов А.Г., Бездудная Т. Г., Медведев Д.С. Особенности посттетаниче-ской модификации синаптической передачи в таламо-кортикальном входе соматосенсорной коры крыс // Журн. высш. нервн. деят. 2003-Т.53,№5.- С. 622-632.

120. Сухов А.Г., Лапенко Т.К. Конвергенция различных афферентных входов как фактор эволюционного развития мозга // Развивающийся мозг.-М.,1987. С.49-51.

121. Сухов А.Г., Лапенко Т.К. Нейронная организация торможения в колонках соматической коры головного мозга крысы // Физиол. журн.- 1985.-Т.31,№5.- С.584-589.

122. Титов С.А., Каменский A.A. Роль ориентировочного и оборонительногокомпонентов в поведении белых крыс в условиях «открытого поля» //

123. Журн. высш. нерв. деят. 1980. - Т.30,№4. - С.704-709.

124. Трухачева A.A., Александрова М.А. Исследовагние развития таламо-кортикальных связей с помощью карбоцианиновых крсителей в раннем онтогенезе у крыс // Онтогенез. Т.30,№3. - С.210-219.

125. Уразаев А.Х., Зефиров А.Л. Физиологическая роль оксида азота // Успехи физиол. наук. 1999. - Т.30,№4.- С.54-72.

126. Хананашвили Я.А. Физиология мозгового кровообращения. Фармакологическая регуляция тонуса сосудов. М.: Изд-во РАМН, 1999. - 608 с.

127. Хананашвили Я.А., Гафиятуллина Г.Ш. Характер локального кровоснабжения и функциональной гиперемии эмбрионального нейротрансплантата у крыс // Арх. клин, и эксперим. медицины. 2000. - Т.9,№1. - С. 84-86.

128. Хананашвили Я.А., Демидова A.A. Динамика развития микрососудистых реакций в проекционных зонах соматосенсорной коры мозга у крыс // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 2001.- Т. 87,№1. С. 60-70.

129. Хананашвили Я.А., Хлопонин П.А., Хлопонин Д.П. Апоптоз: морфогене-тические и физиологические аспекты. Ростов-на-Дону,2001.- 69 с.

130. Хухо Ф. Нейрохимия. М.:Мир,1990. - 348 с.

131. Черкасова Л. В. Внутримозговые трансплантаты эмбриональной нервной ткани вызывают восстановление ультраструктуры дистрофированных после гипоксии нейронов взрослых крыс // Онтогенез. 1992. - Т. 23,№ 5. - С. 534-541.

132. Черкасова JI. В., Давлетшина Р. Ф. Ультраструктура нейронов трансплантата, развивающегося в мозге крыс, перенесших гипоксию // Онтогенез.- 1990. Т. 21,№ 4. - С. 359-402.

133. Шумаков В.И., Онищенко H.A., Крашенинников М.Е. и др. Костный мозг как источник получения мезенхимальных клеток для восстановительной терапии поврежденных органов// Вест, трансплант. и искусств, орг.- 2002 а, №4. С. 3-6.

134. Adinolfi M.,Haddad S.A. Levels of plasma proteins in human and rat fetal CSF and the development of the blood CSF barrier // Neuropediatrie. -1977.- V.8, N 4.- P.345-353.

135. Altman J., Bayer S. A. Atlas of Prenatal Rat Brain Development. FL. USA: CRC Press. Boca Raton., 1995.- 664 c.

136. Akalan N., Grady M. Angiogenesis and blood brain barrier in intracerebral solid and cell suspension grafts // Surgical Neurology. 1994. - V.42, N.6.-P.517-522.

137. Arbuthnot G., Dunnett S., McLeod N. Electrophysiological properties of single units in dopamine-rich mesencephalic transplants in rat brain // Neurosci. Lett. 1985. - V. 57. - P. 205-210.

138. Aznar S., Tender N., Bele S. et al. c-JUN, k-ROX-24, and c-FOS expression in hippocampal grafts placed in excitotoxic hippocampal lesions of the rat // Exp. Neurol. 1995. - V. 136, N 2. - P. 205-211.

139. Baker B. J., Charlton H. M., Puklavec M. Monoclonal antibodies and CNS graft vasculature // Restor. Neurol, and Neurosci. 1990. - V. 1, N 2. - P. 114-115.

140. Baker-Cairns B J., Sloan D.J., Broadwell R.D. et al. Contributions of donor and host blood vessels in CNS allografts // Exp Neurol. -1996.-V.142, N1.- P.36-46.

141. Bele S., Kiessling M., Gass P. Embryonic cortical neurons differentiate into various types of interneurons when heterotopically transplanted into the adult rat brain // Brain Res.- 1995.-V.704, N2.-P.210-217.

142. Bjorklund A., Kromer L. F., Stenevi U. Cholinergic reinnervation of the rat hippocampus by septal implants is stimulated by perforant path lesion // Brain Res. 1979. - V. 173. - P. 57-64.

143. Bjorklund A., Schmidt R. H., Stenevi U. Functional reinnervation of the neostriatum in the adult rat by use of the intraparenchymal grafting of dissociated cell suspensions from the substantia nigra // Cell and Tissue Res. -1980.-V. 212, N l.-P. 39-45.

144. Bjorklund L., Spender C., Stromberg I. Tirilazad mesylate increases dopaminergic neuronal survival in the in Oculo grafting model // Exp.Neurol.1997. V. 148, N 1. - P. 324-333.

145. Bjorklund L., Stenevi U., Schmidt R. H. et al. Intracerebral grafting of neural cell suspensions. I. Intraduction and general methods of preparation // Acta Physiol. Scand. Suppl. 1983. - V. 522. - P. 1-7.

146. Bjorklund L., Stromberg I. Dopaminergic growth patterns induced by striatal and cortical grafts show differences in sensitivity to increased striatal trophic activity induced by haloperidol // J. Neurosci. Res. 1998. - V. 53, N 2. - P. 165-176.

147. Bjorklund L., Vidal N., Stromberg I. Lazaroid-enhanced survival of grafted dopamine neurons does not increase target innervation // Neuroreport.1998. V. 9, N 12. P. 2815-2819.

148. Borges L. F. Historical development of neural transplantation // Appl. Neuro-physiol.- 1988. V. 51, N 6. - P. 265-277.

149. Borlongan C. V., Koutouzis T. K., Jorden J. R. et.al. Neural transplantation as an experimental treatment modality for cerebral ischemia // Neurosci. Biote-hav. Rev. 1997. - V. 1, N 1. - P. 79-90.

150. Borlongan C.V., Tajima Y., Trojanowski J.Q. et.al. Cerebral ischemia and CNS transplantation: differential effects of grafted fetal rat striatal cells and human neurons derived from a clonal cell line // Neuroreport. 1998,- V. 9, N 16.-P. 3703-3709.

151. Borlongan C. V., Saporta S., Poulos S. G. et al. Viability and survival of hNT neurons determine degree of functional recovery in grafted ischemic rats // Neuroreport. 1998. - V. 9, N 12. - P. 2837-2842.

152. Bradbury E. J., Kershaw T. R., Marchbanks R. M., Sinden J. D. Astrocyte transplants alleviate lesion induced memory deficits independently of cholinergic recovery //Neurosci. 1995. - V. 65, N 4. - P. 955-972.

153. Bragin A.G., BohneV.F., Kichigina V.F., Vinogradova O.S. Functional integration of neurons in homotopic and heterotopic intra-cortical grafts with the host brain // Progress in Brain Research.- 1990.- V.82.- P. 287-300.

154. Brandner S., Isenmann S., Kuhne G., et.al. Identification of the end stage of scarpie using infected neural grafts // Brain Pathology.- 1998. V.8, N1.- P. 19-27.

155. Broadwell R., Baker B., Ebert P. et.al. Allografts of CNS tissue possess blood brain barrier: 111. Neuropathological, Methodological , and immunological considarations // Microscopy Res. and Tech.- 1994.-V.27,N.4.- P.471-494.

156. Broadwell R.D., Charlton H.M., Ebert P.et al. Angiogenesis and the blood-brain barrier in solid and dissociated cell grafts within the CNS // Brain Res. -1990.-V. 82.-P. 95-101.

157. Brundin P., Winner H., Nilsson O. G. et al. Intracerebral xenografts of dopamine neurons: the role of immunosuppression and the blood-brain barrier // Exp. Brain Res. 1989. - V. 75, N 1. - P. 195-207.

158. Calaminici M., Abdulla F., Sinden D., Stephenson J. D. Direct evidence for axonal outgrowth from cholinergic grafts to cholinergically deafferented rat cortex // Neuro Report. 1993. - V. 4, N 5. - P. 585-587.

159. Carlsson P.O., Mattsson G. Oxygen tension and blood flow in relation to revascularization in transplanted adult and fetal rat pancreatic islets // Cell Transplant.- 2002.-V.ll,N 8.-P.813-820,

160. Cairns B.J., Sloan D.J., Broadwell R.D. et al. Contributions of donor and host blood vessels in CNS allografts // Exp. Neurol. 1996. - V.142, N 1. - P.36.46.

161. Chung F., J. Steedman, R. Lund The lamination and Connectivity of embrionic cerebral cortex transplanted into newborn rat cortex // J. of Comp.Neurol.1986.- V.244.- P.401-411.

162. Coronas V., Durand M., Chabot J. G. et.al. Acetylcholine induces neuritic outgrowth in rat primary olfactory bulb cultures // Neurosci.- 2000.- V.70.- P. 213-219.

163. Dalm S., Grootendorst J., de Kloet E.R., Oitzl M.S. Quantification of swim patterns in the Morris water maze // Behav. Res. Methods, Instruments, and computers. 2000.- V.32, N 1.- P.134-139.

164. Date I., Ohmoto T. Neural transplantation for Parkinson's disease // Cell Mol. Neurobiol.- 1999.- V. 19, N 1. 67-78.

165. Das G.D. Transplantation of embrionic neural tissue in the brain of the adult rats // Anat. Rec.- 1977.-V.187.- P. 563.

166. Das G. D., Hallas B.H. Transplantation of brain tissue in the brain of adult rats // Experientia. 1978. - V. 34, N 10. - P. 1304-1306.

167. Das G. D. Development of neocortical transplants // Neural grafting in the Mammalian CNS // Ed. A. Bjorklund, U. Stenevi. Amsterdam etc.: Elsevier, 1985.-P. 101-123.

168. Das G. D., Wallace R. B. Neural transplantation and regeneration. N. Y. etc.: Springer, 1986. - 330 p.

169. Dunnett S. Cholinergic grafts, memory and ageing // Trends Neurosci. 1991. -V. 14,N8.-P. 371-376.

170. Dunnett S., BjorklandA. Mechanisms of function of neural grafts in the adult mammalian brain // J. Exp. Biol.- 1987.- V.132.- P.265-289.

171. Dusart I., Nothias F., Roudier F. et.al. Vascularization of fetal cell suspension grafts in the excitotoxically lesioned adult rat thalamus // Brain Res. Dev. Brain Res.- 1989.- V.48, N 2. P.215-228.

172. Dymecki J., Wierzba-Bobrowicz T, Malec I. et al. Development of vessels in the fetal cortical graft in relation to the place of graftings in the brain // Re-stor. Neurol. And Neurosci. 1990 a. - V. 1, N 2. - P. 114.

173. Dymecki J., Wierzba-Bobrowicz T., Malec I. Development of vessels in the fetal cortical transplant depending on the place of grafting in the rat brain // Acta Neurobiol. Exp. 1990 b, N 4-5. - P. 397-403.

174. Eilam R., Malach R., Bergman F. Hypertension induced by hypothalamic transplantation from genetically hypertensive to normotensive rats // J.Neurosci. -1991. -V.l 1. N.2. - P.401-411.

175. Fagiolini M., Pizzorusso T., Porciatti V. et al. Transplant of Schwann ceils allows normal development of the visual cortex of dark-reared rats // Eur. J. Neurosci. 1997. - V. 9, N 1. - P. 102-112.

176. Fantie B. D., Kolb B. An examination of prefrontal lesion size and the effects of cortical grafts on performance of the Morris water task by rat //Psychobiology. 1990. - V. 18, N 1. - P. 74-80.

177. Fisher L .J., Young S J., Tepper J.M.et al. Electrophysiological characteristics of cells within mesencephalon suspension grafts // Exp. Neurol. 1991. - V. 138.-P. 318-326.

178. Fonseca M., DeFelipe J., Fairen A. Local connections in transplanted and normal cerebral cjrtex of rats // Exp. Brain Res. 1988. - V. 69,N 2. - P. 387398.

179. Franceschetti S., Guatteo E., Panzica F. et al. Ionic mechanisms underlying burst firing in pyramidal neurons: intracellular study in rat sensorimotor cortex // Brain Res.- 1995.- V.696. -P. 127-139.

180. Frappé I., Roger M., Gaillard A. Transplants of fetal frontal cortex grafted into the ocipital cortex of newborn rats receive a substantial thalamic input from nuclei normally projecting to the frontal cortex // Neurosci.- 1999. -V. 69. -P. 409-421.

181. Freed W.J. Neural transplantation: prospects for clinical use// Cell Transplantation.- 1993. V.2. - P. 13-31.

182. Fricker R. A., Torres E. M., Dunnett S. B. The effects of donor stage on the survival and function of embryonic striatal grafts in the adult rat brain. I. Morphological characteristics // Neuroscience. 1997. - V. 79, N 3. - P. 695710.

183. Fukunaga A., Uchida K., Hara K. et al. Differentiation and angiogenesis of central nervous system stem cells implanted with mesenchyme into ischemic rat brain// Cell Transplant. 1999.- V. 8, N 4. - P.435-441.

184. Gage F.H. Mammalian neural stem cells // Science. 2000.- V.287.-P.1433-1438.

185. Gage F.H., Coates P.W., Palmer T.D. et al. Survival and differentiation of adult neuronal progenitor cells transplanted to the adult brain. Proc.Nat. Acad. Sci.USA. 1995.-V.92. - N 25.- P. 11879-11883.

186. Gaillard A., Gaillard F., Roger M. Neocortical grafting to newborn and adult rats: developmental, anatomical and functional aspects. London: Springer — Verlag, 1999.- 86 c.

187. Gaillard A., Letang J., Frappe I. et al. Abnormalities in the development of the tectal projection from transplants of embryonic occipital cortex placed in the damaged occipital cortex of newborn rats // Exp. Neurol. 1997. - V. 147, N 2. - P. 476-486.

188. Gaillard A., Roger M. Early commitment of embryonic neocortical cells to develop area-specific thalamic connections // Cereb. Cortex. 2000.- V.10. - P. 443-453.

189. Gaillard F., Girman S.V., Gaillard A. Afferents to Visually Responsive Grafts of Embryonic Occipital Neocortex Tissue Implanted into VI (Ocl) Cortical Area of Adult Rats. // Restor. Neurol. Neurosci. 1998, N 12. - P. 13-25.

190. Gaillard F., Létang J., Frappe I., Gaillard A. Laminar distribution of isocortical neurons projecting to occipital grafts in neonate and adult rats // Exp Neurol.- 2000. V.162. - P.225-233.

191. Gash D. M., Sladek J.R. (Jr.). Transplantation into the mammalian CNS. Amsterdam etc.: Elseiver, 1988. - 663 p.

192. Gash D. M., Sladek J. R. Neural transplantation: problems and prospects -where do we go from here? // Mayo Clin. Proc. 1989. - V. 64, N 3. - P. 363-367.

193. Giordano M., Salado-Castillo R., Sanchez-Alvares Striatal transplants prevent AF64A-induced retention deficits // Life Sci. 1998. -V. 63, N 2. - P. 19531961.

194. Goldberg W. J., Bernstein J. J. Migration of cultured fetal spinal cord astrocytes into adult host cervical cord an medulla following transplantation into thoracic spinal cord //J. Neurosci. Res. 1988. - V. 19, N 1,- P. 34-42.

195. Gonzalez M. F, Jacobowitz D. M., Sharp F. R. Cellular and behavioral characterization of fetal neocortical transplants. Restor. Neurol, and Neurosci. -1990.- V.1,N2.-P. 137.

196. Gonzalez M. F, Sharp F. R. Fetal frontal cortex transplanted to injured motor/sensory cortex of adult rats. I. NADPH-diaphorase neurons // J. Neurosci. 1987. - V. 7, N 10. - P. 2991-3001.

197. Gopinath G. Neural transplantation //Ann. Nat. Acad. Sci. (India). 1988. - V. 24,N2.-P. 56-61.

198. Grabowski M., Brundin P., Chistofferson R. H.et al. Connectivity and vascularization of fetal cortical grafts implanted in the infarcted cortex of hypertensive rats // Restor. Neurol, and Neurosci. 1990. - V. 1, N 2. - P. 139.

199. Grabowski M., Johansson B. B., Brundin P. Fetal neocortical grafts placed in brain infarcts do not improve powreaching deficits in adult spontaneously hypertensive rats // Acta Neurochir. Suppl. Wien. - 1996. - V. 66. - P. 6872.

200. Grabowski M., Johansson B. B., Brundin P. Neocortical grafts placed in the infarcted brain of adult rats: Few or efferent fibers grow from transplant to host //Exp. Neurol. 1995 . - V. 134, N 2. - P. 273-276.

201. Gray J.A., Hodges H., Sinden J. Prospects for the clinical application of neural transplantation with the use of conditionally immortalized neuroepithelial stem cells// Biol. Sci.- 1999.-V.354,N 1388.- P. 1407-1421.

202. Gould E., Tanapat P., Rydel T.et al. Regulation of hyppocampal neurogenesis in adulthood // Biol. Psychiatry.- 2000.- V.48.- P.715-720.

203. Grauer E., Kapon Y. Wistar-Kyoto rats in the water maze: impaired working memory and hyper-reactivity to stress // Behav. Brain Res. 1994. - V.59.-P.147-151.

204. Guerra M. J., Liste I., Labandeira-GarciaJ. L. Effects of lesions of the nigrostri-atal pathway and of nigral grafts on striatal serotonergic innervation in adult rats //Neuroreport. 1997. - V. 8, N 16. - P. 3485-3488.

205. Gullo R., Benedetto D., Salemi G. Trapianto di tessuto cerebrate e morbo di Parkinson: revisione critica della literatura // Acta Med.Mediterr. 1992. - V. 8, Nl.-P. 11-15.

206. Guzman R., Meyer M., Lovblad K. O.et al. Striatal grafts in arat model of Huntington's disease: time course comparison of MRI and histology // Exp. Neurol. 1999. - V. 156, Nl.-P. 180-190.

207. Hamilton L.W. Хамильтон Л.У. Основы анатомии лимбической системы крысы. -М.: Изд-во МГУ, 1984.- 183 с.

208. Hamasaki Т., Hirakawa К., Toyama К. Electrophysiological and histological study of synaptic connections between lateral geniculate transplant and host visual cortex // Appl. Neurophysiol. 1987. - V. 50, N 1-6. - P. 463-464.

209. Harper J. W. Augmentation of basal for brain cell populations with fetal tissue transplants //Develop. Neurosci. 1987. - V. 9, N1. - P. 19-32.

210. Hauser R.A., Freeman T.B., SnowB.J.et al. Long-term evaluation of bilateral fetal nigral transplantation in Parkinson disease // Arch.Neurol. 1999. - V. 56, N2.-P. 179-187.

211. Heredia M., Santacana M. Transplant connectivity in the rat cerebral cortex // Restor. Neurol, and Neurosci. 1990. - V. 1, N 2. - P. 136.

212. Herken R., Giotz W., Wattjes K. Initial development of capillaries in the neu-roepithelium of mice // J.Anat. 1989. V.164.- P.85-92.

213. Hodges H. Graft-induced recovery of cognitive-function after diffuse and local brain damage: implications for neural transplantation in man // Zh. Vyssh.Nerv. Deiat. Im. I. P. Pavlova. -1995. -V. 45, N 1. P. 29-58.

214. Hodges H., Nelson A., Virley D. Cognitive deficits induced by global cerebral ischaemia: prospects for transplant therapy // Pharmacol.Biochem. Behav. 1997. - V. 56, N 4. - P. 763-780.

215. Horner P.J., Reier P J., Stokes B.T. Quantitative analysis of vascularization and cytochrome oxidase following fetal transplantation in the contused rat spinal cord // J. Comp. Neurol.- 1996.- V.364, N 4.- P. 690-703.

216. Jacobson M. Developmental neurobiology, N.Y.: Plenum press,1978. 465 p.

217. Jacque C., Mrejen S., Moinard F. et al. Neovascularisation of newborn and adult brain transplants do graft and host endothelia both participate // Restor. Neurol, and Neurosci. 1990. - V. 1, N 2.- P. 115.

218. Jaeger С. В., Aebischer P., Greene L. A. Neural transplants of encapsulated PC12 and NX31-T28 cells // Restor Neurol, and Neurosci. 199 V. 1, N 2. -P. 103.

219. Jaeger С. В., Lund R. D. Transplantation of embryonic occipital cortex to the brain of newborn rats: a Golgi study of mature and developing transplants // J. Сотр. Neurol. 1981. - V. 200. - P. 213-230.

220. Jansen E. M., Solberg L., Underhill S. et.al. Transplantation of fetal neocortex ameliorates sensorimotor and locomotor deficits followingneonatal ischemic-hypoxic brain injury in rats // Exp. Neurol. 1997. - V. 147, N 2. -P. 487-497.

221. Jeffery N.D, Crang A.J, O'leary M.T. et.al. Behavioural consequences of oligodendrocyte progenitor cell transplantation into experimental demyelinat-ing lesions in the rat spinal cord // Eur. J. Neurosci.- 1999.- V. 11, N 5.- P. 1508-1514.

222. Jensen S., Sorensen T, Moller A.G., Zimmer J. Intraocular grafts of fresh and freeze-stored rat hippocampal tissue: a comparison of survivatility and histological and connective organization // J. Сотр. Neurol.-1984. V. 227, N 4. - R 558-568.

223. John J. e. a., Kumar V. M., Gopinath G. Recovery of sleep after fetal preoptic transplantation in medial preoptic area-lesioned rats // Sleep. 1998. -V. 21, N6.-P. 601-601.

224. Karlsson J., Love R.M., Clarke D.J., Brundin P. Effects of anaesthetics and lazaroid U-83836E on survival of transplanted rat dopaminergic neurons // Brain Res.- 1999.- V. 821, N 2.- P. 546-550.

225. Kato A. C., Martinou J. C., Demierre B. Embryonic motouneurons grafted into the adult CNS can differentiate and migrate // Restor.Neurol. and Neurosci. -1990.-V. 1, N 2. P. 103.

226. Kesslak J. P., Walencewicz A., Calin L. Hippocampal but not astrocyte transplants enhance recovery on a forced choice alternation task after kainate lesions // Brain Res. 1988. - V. 454, N 1-2. - P. 347-354.

227. Kobb В., Reynolds В., Fantie B. Frontal cortex grafts have opposite effects at different postoperative recovery times // Behav. and Neural Biol. 1988. - V. 50, N2.-P. 193-206.

228. Konig J., Klippel R.A. Stereotaxic Atlas of Forebrain and Lower Parts of the Brain Stem. Baltimor: Williams and Wilkins, 1963.- 162 c.

229. Kromer L. F, Bjorklund A., Stenevi U. Innervation of embryonic hippocampal implants by regenerating axons of cholinergic septal neurons in the adult rat // Brain Res. 1981. - V. 210, N 1-2. - P. 153-171.

230. Mahoney M., Saltzman M. Cultures of cells from fetal rat brain: Methods to control composition, morphology and biochemical activity // Inc. Biotechnol. Bioeng. 1999, N 62. - P.461-467.

231. Mallat M., Chamak B. Macrophages: neurotoxic and neurotrophic effector cells? // J. Leukocyte Biol. -1994.- V.56.- P.416-422.

232. Matthews M. A. Transplantation of fetal lateral geniculate nucleus to the occipital cortex: connectivity with host's area // Exp. Brain Res. 1985. - V. 58. p. 473-489.

233. Mazur J.E. Preferences for and against stimuli paired with food // J.Exp. Anal. Behav.- 1999. V.72, N1.- P.21-32.

234. McConnell S. K. The specification of neuronal identity in the mammalian cerebral cortex //Experientia. 1990. - V. 46, N 9. - P. 922-929.

235. McCormic D., Bal T. Sleep and arousal: thalamocortical mechanisms // Annual Rev. Neurosci.- 1997.-V.70.- P. 1244-1248.

236. Mickley G., Andrev T., Terguson J. L. Neural grafts attenuate behavioral deficits produced by early radiation-induced hypoplasia of fascia dentata granule cells // Brain Res. 1990.- V. 509, N2.- P. 280-292.

237. Misra B. K. Trends in experimental neural transplantation // Curr.Sci. (India). -1992.-V. 63,N 4. P. 163-165.

238. Mollgard K., Lundberg J.J.,Beebe B.K. et.al. The intracerebrally cultured "mi-crobrain": a new tool in developmental neurobiology // Neurosci.Lett.-1978.-V.4, N 3. P.295-301.

239. Moskalenko Yu.E., Dowling J., Rovainen C. LCBF changes in rat somatosensory cortex during whisker stimulation monitored by dynamic H2 clearance // Int. J. Psychophysiol. 1996. - V.21,N.l. -P.45-59.

240. Moskowitz N. Theories on the promotion of CNS transplant integration by selective activation of presynaptic enzyme cascades: Prospects for future clinical applications // Med Hypotheses. 1990. - V. 32, N 3. - P. 191-201.

241. Mountcastle V.B. The columnar organization of the neocortex // Brain.- 1997.-V.120.-P. 701-722.

242. Murthy S. K., Desiraju T. Quantitative assessment of dendritic branching and spine densities of neurons of hippocampal embryonic tissue transplanted into juvenile neocortex // Dev. Brain Res. 1989. - V. 46, N 1. - P. 33-45.

243. Nakao N., Ogura M., Nakai K., Itakura T. Embryonic striatal grafts restore neuronal activity of the globus pallidus in a rodent modelof Huntington's disease //Neurosci.- 1999.- V. 88, N 2. P. 469-477.

244. Nemecek S., Mazurova Y., Valouskova V., Mokry J. Transplantace em-bryonalniho neokortexu do mozku potkana: angioarchitectonika stepuza 5 mesicu pooperaci // Cs. Neurol, a Neurochir. 1989. - V. 52.- № 3. - P. 171-175.

245. Nemecek S., Mokry J., Mazurova Y. et.al. Cerebrospinal fluid dissemination et fetal neural isografts in brain of adult rats // Sb. Ved. Pr. Lek. Fak. Karlovy Univerzity. Hradci Kralove. - 1995. - V. 38, N 1. - P. 5-9.

246. Nguyen H. M., Alksne H. S., Hatton J. D. Migration of rat neonatal cortical, hippocampal and hypothalamic astrocytes transplanted into neonatal rat cerebrum // J. Cell Biol. 1990. - V. Ill, N 5.- Pt. 2. - P. 490.

247. Nieto-Sampedro M., Saneto R. P., De Vellis J. The control of glial populations in brain: Changes in astrocyte mitogenic and morphogenic factors in response to injury // Brain Res. 1985. - V. 343. - P. 320-328.

248. Nishino N., Hashitani T, Kumazaki M. Variation in striatal D1 and D2 receptor binding after fetal nigral dopaminergic cell grafting in rats // Jap. J. Physiol. Suppl. 1990 a. - V. 40. - P. 219.

249. Oblinger M. M., Hal las B. H., Das G. Neocortical transplants in the cerebellum of the rat: Their afferents and efferents // Brain Res. 1980. - V. 189, N 1. - P. 228-232.

250. Ohkuma S., Katsura M. Nitric oxyde and peroxinitric as factors to stimulate neurotransmitter release in the CNS // Prog. Neurobiol. 2001. -V.64. -P.97-108.

251. Olsson M., Bentlage C., Wictorin K. et al. Extensive migration and target innervation by striatal precursors after grafting into the neonatal striatum // Neu-rosci.- 1997. V. 79, N 1. - P. 57-78.

252. Ormsby C. E., Ramirez-Amaya V., Bermudez-Rattoni F. Long-term memory retrieval deficits of learned taste aversions are ameliorated by cortical fetal brain implants // Behav. Neurosci. 1998. - V. 112, N 1. - P. 172-182.

253. Patel U. Non-random distribution of blood vessels in the posterior of rat somatosensory cortex // Brain Res.- 1983. -V. 289, N 1.- P. 65-70.

254. Pellow S., Chopin P., File S. et.al. Validation of open: closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat // Neurosci. Methods. -1985.-V.14.- P.147-150.

255. Pennell NA, Streit W.J. Colonization of neural allografts by host microglial cells: relationship to graft neovascularization // Cell Transplant. — 1997.-V. 6, N 3. P.221-230.

256. Perlow M. J. Functional brain transplants // Peptides Suppl. 1980.- V.l. — P. 101-110.

257. Pinaudeau C., Gaillard A., Roger M. Timing of specification of the spinal cord and tectal projections from cortical grafts // Eur. J. Neurosci. 2000.- V. 12. - P.2486-2496.

258. Popovic N., Jovanova-Nesic K., Popovic M. Learning and memory in Nucleus Basalis Magnocellularis-lesioned rats after transplantation of fetal frontal cortex//Intern.J.Neuroscience. 1997.-V.9, N 1-2. - P. 11-28.

259. Ridley R. M., Baker H. F. Can fetal neural transplants restore function in monkeys with lesion-induced behavioural deficits? // Trends Neurosci. 1991. -V. 14, N8.-P. 366-370.

260. Rose G., Gerhardt G., Stromberg I. et al. Monoamine release from dopamine-depleted rat caudate nucleus reinnervated by substantia nigra transplants: An in vivo electrochemical study // Brain Res. 1985. - V. 341, N 1. - P. 92100.

261. Rosenstein J.M. Adrenal medulla grafts produce blood-brain barrier dysfunction //Brain Res. 1987. - V. 41. - P. 192-196.

262. Rosenstein J. M. Dimished expression of microtubule-associated protein (Hap-2) and betatubulin as putative marker for ischemic injury in neocortical transplants // Cell. Transplant. 1995 a. - V. 4, N 1. - P. 83-91.

263. Rosenstein J. M. Why do neural transplants survive? An examination of some metabolic and pathophysiological considerations in neural transplantstion // Exp. Neurol. 1995b . - V. 133, N 1. - P. 1-6.

264. Rosenstein J. M., More N. S. Immunocytochemical expression of the blood-brain barrier glucose transporter (GLUT-1) in neural transplants and brain wounds // J. Comp. Neurol. 1994. - V.58, N 2. - P.229-240.

265. Rosenstein J. M., Phillips T. M. Blood-brain and blood cerebrospinal fluid alterations following neural transplantation // Transplant, into Mammal. CNS. Amsterdam etc., 1988. - P. 297-302.

266. Rostaing -Rigatieri S., Flores-Guevara R., Peschanski M., et.al. Glial and endothelial cell response to a fetal transplant of purified neurons // Neurosci. -1997.-V. 79, N 3. -P.723-734.

267. Sanders V. J., Mehta A. P., White M. J. et. al. Amurine model of HIV encephalitis: Xenotransplantation of HIV-infected human neuroglia into SCID mouse brain // Neuropathol. Appl. Neurobiol. 1998. - V. 24, N 6. - P. 461467.

268. Sawada H., Ibi M., Kihara T. et.al. Dopamine D2-type agonists protect mesencephalic neurons from glutamate neurotoxicity: mechanisms of neuroprotective treatment against oxidative stress // Ann. Neurol. —1998. V.44.- P.l 10119.

269. Sherwood N.M. Titiras P.S. A stereotaxic atlas of the developing rat brain. -London, 1970.- 209 p.

270. Segal M., Bjorklund A., Gage F. H. Transplanted septal neurons make viable cholinergic synapses with a host hippocampus // Brain Res. 1985. - V. 336.- P. 302-307.

271. Segal M., Greenberger J., Rearl E. Septal transplants ameliorate spatial eficits and restore cholinergic functions in rats with a damaged septo-hippocampal connection // Brain Res. 1989. - V. 500, N 1-2. - P. 139-148.

272. Senatorov V. V., Vilagi I., Tarnava I. et al. Low extracellular magnesium unmasks N-methyl-D-aspartate-mediated graft-host connections in rat neocortex slice preparation // Neurbscience. 1995. - V. 64, N 2. - P. 443-458.

273. Schenk E, Contant B., Werffeli P. Intrahippocampal cholinergic grafts in aged rats compensate impairments in a radial maze and in a place learning task // Exp. Brain Res. 1990. - V. 82, N 3. - P. 641-650.

274. Shetty A. K., Rapoza D., Madison R. D., Turner D. A. Selective laser-activated lesioning of prelabeled fetal hippocampal grafts byintracellular photolytic chromophore //Neuroscience. 1995 a. - V. 69, N 2. -P. 407-416.

275. Shetty A. K., Turner D. A. Enhanced cell survival in fetal hippocampal suspension transplants grafted to adult rat hippocampus following kainate lesions: a three-dimensional graft reconstruction study //Neurosci. 1995 b. -V. 67, N 3. - P. 561-582.

276. Snyder E. Y, Senut M. C. The use of nonneuronal cells for genedelivery // Neurobiol. Dis. 1997. - V. 4, N 2. - P. 69-102.

277. Silverman R. C., Gibson M. J., Silverman A. J. Application of a fluorescent dye to tudy connectivity between third ventricular preoptic area grafts and host hypothalamus // J. Neurosci. Res. 1992. - V. 31.- N 1. - P. 156-165.

278. Sinden J. D., Rashid-Doubell F., Kershaw T. R. et al. Recovery of spatial learning by grafts of a conditionally immortalized hippocampal neuroepithelial cell line into the ischemia-lesioned hippocampus //Neuroscience. 1997. -V. 81, N3.-P. 599-608.

279. Sinson G., Voddi M., Mc Intosh T. K. Combined fetal neural transplantation and nerve growth factor infusion: effects on neurological outcome following fluid-percussion brain injury in the rat // J. Neurosurg. 1996. - V. 84, N 4. -P. 655-662.

280. Snyder E.Y, Park K.I., Flax J.D. et.al. Potential of neural "stem-like" cells for gene therapy and repair of the degenerating central nervous system // Adv. Neurol. 1997 a. - V. 72. - P. 121-132.

281. Sprick U. Transient and long-lasting behavioral effects of grafts in the damaged hippocampus of rat // Behav. Brain Res. 1995. - V. 42, N 2. - P. 187-199.

282. Steriade M. Impact of network activities on neuronal properties in corticothalamic system// J. Neurophysiol. 2001.-V.86.-P. 1-39.

283. Steriade M., Jones E., McCormic D. // Thalamus.- Amst.: Elsevier.- 1997.- 9591. P

284. StosseckK., Lubbers D.W., Cottin S. Determination of local blood flow (micro flow) by electrochemically generated hydrogen. Construction and application of the measuring probe. // Pflüg. Arch. 1974.- V. 343.- P. 225-238.

285. Suzuki M., Kikuchi T., Ninimiya S., Kawamura K. // J.Iwate Med. Assoc. -1987. V. 39, N 5. - P. 749-760.

286. Tuba A., Kaiman M. The early phase of vascularization in intraocular telen-cephalic transplants // J. Neural transplant, plast. 1997. - V. 6, N 2. - P. 97103.

287. Tsubaki S., Brightman M.W., Nakagawa H., et.al. Local blood flow and vascular permeability of autonomic ganglion-transplants in the brain // Brain Res. 1987.-V.424, N 1.-P.71-83.

288. Uehara H., Yoshioka H., Kawase S. et.al. A new model of white matter injury in neonatal rats with bilateral carotid artery occlusion // Brain Res. -1999.-V. 837, N.l-2. P. 213- 220.

289. Van Muiswinkel F. L, Drukarch B., Steinbusch H. W. et.al. Sustained pharma-cologocal inhibition of nitric oxide synthase does not affect the survival of intrastriatal rat fetal mesencephalic transplants // Brain Res. 1998. - V. 792, N1.-P. 48-58.

290. VanHimbergen D.J., Koenig S.C., Jaber S.F. et.al. A review of transit-time flow measurement for assessing graft patency // Heart Surg Forum.- 1999.- V.2, N 3. -P.226-229.

291. Van Muiswinkel E.L.,Steinhusch H.W.M., Drukarch B. et.al. Neuronal grafting in a rat model of Parkinson's disease: identification of nitric oxide synthase and EGMP in both host and grafted tissue. // Pharm. World and Sci. -1993. -V. 15, N6.-P. 14.

292. Vinogradova O. S. Perspectives and limitation of neurotransplantation // Proc. Indian Nat. Sci. Acad. B. 1990. - V. 56, N 1. - P. 109-124.

293. Wenning G.K., Granata R., Puschban Z. et al. Neural transplantation in animal models of multiple system atrophy: a review // J. Neural Trans. Suppl.-1999.-V. 55.-P. 103-13.

294. West C.H., Weiss J.M. Effects of antidepressants drugs on rats bred for low activity in the swim test// Pharmacol. Biochem. and Behav. 1998. - V.61, N 1. - P.67-79.

295. Widner H. Immunologic aspects of intracerebral CNS tissue transplantation // Restoration of brain function by tissue transplantation. Berlin: Springer-Verlag,1993. V.5. - P.63-74.

296. Wilson C. J., Xu Z. C., Emson P. C, Feler C. Electrophysiological evidence for the formation of a corticostriatal pathway in neostriatal tissue grafts // Restor. Neurol, and Neurosci. 1990. - V. 1, N 2. - P. 105.

297. Woolsey T., Rovainen C., Cox S. et al. Neuronal units linked to microvascular moduls in cerebral cortex: response elements for imaging the brain // Cerebr. Cortex. 1996. V.6, N.647. - P.647-660.

298. Xu L. C., Wilson C. J., Emson P.C. Morphological ^characteristics of intracellu-larly labeled spiny neurons in rat neostriatal grafts // Restor. Neurol, and Neurosci. 1990. - V. 1.- № 2. - P. 165-166.

299. Xu L. C., Wilson C. J., Emson P. C. Restoration of thalamostriatal projections in rat neostriatal grafts: an electron microscopic analysis // J. Compar. Neurol. -1991.-V. 303, N 1.-P. 22-34.

300. Zangen A., Overstreet D.H., Yadid G. High serotonin and 5-hydroxyindoleacetic acid levels in limbic brain regions in a rat model of depression: normalization by chronic antidepressant treatment // J. Neurochem. 1997. V.69. - P.2477-2483.

301. Zhang S. C., Ge B., Duncan I. D. Adult brain retains the potential to generate oligodendroglial progenitors with extensive myelination capacity // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1999. - V. 96, N 7. - P. 4089-4094.

302. Zhou C.-F., Li Y., Morris R. J., Raisman G. Accurate reconstruction of three complementary laminar afferents to the adult hippocampus by embryonic neural grafts // Neurosci. Res. Suppl.- 1990, N 13. P. 543-553.

303. Zhou H., Lund R. D. Neonatal host astrocyte migration into xenogeneic cerebral cortical grafts // Dev. Brain Res. 1992. - V. 65, N 1. - P. 127-131.

304. Zin-Ka-Ieu S., Roger M., Arnault P. Direct contacts between fibers from the ventrolateral thalamic nucleus and frontal cortical neurons projecting to thestriatum: a light microscopy study in the rat // Anat. Embryol.-1998 a.-V.197.- P. 77-87.

305. Zin-Ka-Ieu S., Roger M., Arnault P. The thalamo-fronto-striate system: ultrastructural evidence of appropriate synaptic integration of embryonic neurons grafted within the frontal cortex of newborn rats // Somatosens. Mot. Res.-1999.-V.16.- P. 338-351.

306. Zukhar A.V., Mikhailova N.G., Ermakova I.V., Loseva E.V. Influence of neurotransplantation on rats behavior with different conditions of reinforcement // Physiol, and Behav. 1991. - V. 50, N 6. - P. 1087-1091.

Информация о работе

Гафиятуллина, Гюзяль Шамилевна
доктора медицинских наук
Краснодар, 2005
ВАК 03.00.13

Диссертация

Анализ функционального состояния эмбрионального нейротрансплантата коры головного мозга - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы