Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Аллергический метод диагностики токсоплазмоза животных.

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Коломацкий, Александр Прокофьевич

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ТОКСОПЛАЗМШОВ, ИЗГОТОВЛЕННЫХ РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ

3. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПОСОБА ИЗГОТОВЛЕНИЯ ТОКСО-ПЛАЗМЕННОГО АЛЛЕРГЕНА

4. ИСПЫТАНИЕ ОПЫТНЫХ ОБРАЗЦОВ ТОКСОШ1АЗМЕИН0Г0 АЛЛЕРГЕНА а/ антигенная активность б/ стерильность и безвредность в/ аллергические пробы на животных

5. ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОСТИ РАЗНЫХ РАЗВЕДЕНИЙ ТОКСО-Ш1АЗММНА

6. ПРОЯВЛЕНИЕ ВНУТРШШНОЙ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПРОБЫ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ, ДОМАШНИХ И ДИКИХ ЖИВОТНЫХ

7. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ Т0КС01ШАЗМИН0В ИЗ ТОКСО-ПЛАЗМ ПОЛЕВЫХ И ЛАБОРАТОРНОГО / НН / ШТАММОВ

8. ИЗУЧЕНИЕ СРОКОВ СОХРАНЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТОКСО-ПЛАЗМИНАМИ

У, ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ИСПЫТАНИЕ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ВНУ

ТРИКОШОИ ПРОБЫ НА МВОТНЫХ . IOI

10. ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ ТОКСОПЛАШИНА УНЙИЭВ И ВНУТРИКОЖНОЙ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПРОБЫ НА ТОКСОНЛАЗМОЗ

11. ПОЛЕВЫЕ ШТАММЫ TOXOPLASMA GONDII , ВЫДЕЛЕННЫЕ ОТ ЖИВОТНЫХ НА ТЕРРИТОРИИ ХАРЬКОВСКОЙ ОБЛАСТИ УССР.

12. СПОСОБНОСТЬ ТОКСОПЛАЗМ РАЗЛИЧНОЙ ВИРУЛЕНТНОСТИ

К ОБРАЗОВАНИЮ ООЦИСТ

Ш. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ .I4S

Введение Диссертация по биологии, на тему "Аллергический метод диагностики токсоплазмоза животных."

Постановление июльского / 1978 г. / Пленума ЦК КПСС " и дальнейшем развитии сельского хозяйства СССР" предусматривает в ближайшие годы значительное увеличение производства мяса и других продуктов; животноводства. В осуществлении этой ответственной задачи большое значение имеет создание устойчивого благополучия специализированных хозяйств и комплексов в отношении инфекционных и инвазионных болезней животных.

Разработка и усовершенствование высокоспецифичных и легко доступных для практического применения методов диагностики про-тозоиных заболеваний животных является важной составной частью всестороннего изучения инвазии и эффективной борьбы с ней.

Это положение в полной мере относится также к такому опасному энтропозоонозу, как токеоплазыоз.

Актуальность изучения токсоплазмоза определяется ещё и тем, что наряду с существенным экономическим ущербом, наносимым животноводству, он представляет серьёзную социальную опасность, так как больные животные являются основным источником заражения людей.

У человека токсоплазмоз может быть одной из причин патологии беременности, различных аномалий развития и внутриутробных заболеваний плода, ранней детской смертности, а также поражения центральной нервной системы, органов зрения и др.

За последние годы медицинская наука и практика нашей страны достигли существенных успехов в борьбе с этим опасным заболеванием. Разработаны и успешно применяются методы диагностики, лечения и научно обоснованные меры профилактики / М.Н.Мельник с соавт., 1972; Е.А.Шевкунова, 1972 /.

Б литературе описаны вспышки острого течения токсоплазмоза у животных, сопровождавшиеся абортами, рождением слабого нежизнеспособного приплода, поражением нервной системы, желудочно-кишечного тракта и лёгких, которые иногда приводили к истощению и гибели значительного поголовья молодняка. диагноз на токсоплазмоз устанавливается на основании эпи-зоотологических, клинических показателей и результатов лабораторных исследований. Клиническое проявление токсоплазмоза у животных бывает весьма разнообразным и не является строго характерным» Инвазия может протекать бессимптомно или принимать субклинический характер. У диких и домашних животных токсоплазмы часто находятся в авирулентной форме, что определяет широкий круг латентных па ра з и т он ос и те л е й, обеспечивающих длительное сохранение в природе источников инвазии для человека и животных /И.Г.Галузо,1963/. диагноз на токсоплазмоз по одним лишь клиническим и эпи-зоотологическим показателям установить нельзя без подтверждения лабораторными методами, которые позволяют оонаружить паразитов в организме путём биологической пробы, индикацией их микроскопией или косвенно иммунологическими исследованиями. Чаще всего для биопросы используют белых мышей, выращиваемых в лабораторных условиях. Обнаружить возбудителя микроскопией удаётся только в исключительных случаях при выполнении её квалифицированными прото-зоологами. Постановка биопроб с целью диагностики требует проведения повторных "слепых" пассажей материала, что связано со значительном затратой средств и времени. зсё это является причиной того, что паразитологические методы диагностики токсоплазмоза до настоящего времени не нашли широкого применения в практике. В этой связи для диагностики токсоплазмоза животных используют наиболее перспективные и удобные серологические методы.

Из числа предложенных серологических методов диагностики токсоплазмоза в настоящее время наиболее широко используются и продолжают совершенствоваться: PCК, РСФ, РИГА, РИФ, РДП и другие .

Широкое применение в нашей стране получила PCК. Не перечисляя всех положительных сторон этой реакции необходимо отметить, что её основные недостатки обусловлены убывающей чувствительностью, связанной с увеличением истёкшего времени после заражения токсоплазмами животного, то есть связанной со снижением титров специфических антител в сыворотке крови животных. С её помощью не всегда удаётся выявить носителей токеоплазы в более отдалённые сроки после заражения / 1-2 года /.

Б медицинской практике нашей страны и за рубежом с целью диагностики токсоплазмоза не менее широкое применение, чем PCК, нашёл метод внутриконной пробы, то есть аллергический метод.

Попытки применения аллергического метода для диагностики токсоплазмоза у животных, предпринятые ранее Ангеловым с соавт., 1957; Cuboni, 1958; Rohde, 1959; Nobuto et al., 1964 и др., позволили получить результаты весьма разноречивого характера. Причиной тому являлось отсутствие унифицированного способа изготовления аллергена, а также неполная завершенность исследований по установлению оптимальной концентрации препарата, продолжительности развития и характера проявления аллергической реакции, совпадаемости показаний с другими иммунологическими тестами, специфичности и целого ряда других, имеющих непосредственное отношение к окончательному решению вопроса о приемственнос-ти и целесообразности использования этого метода для диагностики токсоплазмоза у животных.

В настоящей работе представлены результаты исследований по усовершенствованию способа изготовления токе опла з ме иного аллергена / токсоплазмина / для аллергической диагностики токсоплазмоза у животных.

В лабораторных условиях приготовлено несколько серий ыо-новалентных токсоплазминов, проведено изучение их безвредности, антигенной активности, специфичности в РдСК и как аллергенов на животных.

Комиссионно на экспериментально зараженных, естественно больных и здоровых сельскохозяйственных, домашних и диких животных, в сравнительном аспекте с РДСК, испытан аллергический метод диагностики токсоплазмоза, изучен характер проявления реакции организма на введенный аллерген и разработаны критерии его диагностической оценка.

Научная новизна работы заключается в том, что для диагностики латентных форм течения токсоплазмозной инвазии у животных предлагается более активный, по сравнению с медицинским, токсоплазменным аллерген.

В лабораторных и производственных опытах установлена целесообразность использования для индивидуального и массового обследования животных на токсоплазмоз, наряду с общеизвестной РДСК, внутрикожной аллергической пробы.

Нами впервые доказана возможность выявления среди клинически здорового поголовья животных, с помощью аллергического метода, скрытых паразитоносителей и изоляции от положительно реа-гиру :ощих токе оплазм.

В опытах на кошках и лабораторных животных показано эпи-зоотологическое значение слабовирулентных штаммов токсоплазм, выделенных от естественно зараженных животных.

Б связи с изложенным на защиту выносятся следующие положения диссертации и предложения, вытекающие из них:

I. Результаты исследований по усовершенствованию способа изготовления токеоплазменного аллергена для аллергической диагнос тики токсоплазмоза у животных.

2. Изучение динамики, характера проявления и критериев учёта внутрикоЕнои пробы на токсоплазмоз у животных.

3. Лабораторное и производственное испытание активности и специфичности токеоплазмеиного аллергена УНЛИЭВ.

4. Результаты изучения некоторых биологических свойств полевых штаммов токсоплазм, выделенных от животных.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Токсоплазмоз - протозойное, паразитарное заболевание человека и животных, которое вызывается одноклеточным паразитом

Toxoplasma gondii /Nicole et Manceaux, 1909/.

Это заболевание имеет довольно широкое распространение среди самых различных видов теплокровных животных на всех континентах земного шара.

Клиническое проявление инвазии зависит от формы течения и преимущественного поражения возбудителем тех или иных органов, тканей и систем восприимчивого организма.

Приобретенный токсоплазмоз у людей - одна из причин мерт-ворождений, самопроизвольных абортов, преждевременных родов, акушерских осложнений, рождения детей с различными уродствами и ранней детской смертности / А.Г.Пап с соавт., 1971; Kimball et al., 1971; Hume, 1972; Altshuler, 1973/. ТОКСОПЛЭЗМЫ, прОНИкая в организм, могут вызывать не только у детей, но и у взрослых тяжелое заболевание с поражением центральной нервной системы, глаз, внутренних органов, эндокринной, лимфатической, сердечно-сосудистой и других систем организма /Л.Е.Бронштейн, 1967; И.Д.Нетребко с соавт., 1968; Н.И.Шпак, 1971; Perkins, 1973; А.Г.Пап, Д.Н.ЗасухиН, 1974; Desmonts, Couvreur, 1974; Gustavo, 1975; Morin, Карек, 1975/.

У животных токсоплазмоз вызывает аборты, рождение слабого недоразвитого молодняка, отставание в росте, истощение, снижение продуктивности и другую патологию /Н.В.Кастравец, 1968; Wai-deland, Cveras, 1968; 0'Brain et al,, 1971; Archer et al., 1971; Frei, 1975; Hartley, Bridge, 1975; Waldeland, 1976/.

Beverley /1971/ подсчитал, что в Англии только за один сезон погибает от токсоплазмоза около 250 тыс. ягнят.

По данным М.Х.Маккаева / 1972 / в Дагестане выход ягнят от овцематок положительно реагирующих серологически на токсопяазмоз на 12% ниже по сравнению с овцематками, дающими отрицательную реакцию. При этом от каждой из них за год недополучают в среднем 100 г шерсти и 1,8 кг живого веса, что составляет в денежном выражении 2 руб. 75 коп., а в масштабе республики - 841 тыс. рублей. Ежегодный ущерб от снижения надоев молока от коров составляет около 530 тыс. рублей. В целом же по республике ежегодный экономический ущерб овцеводству и скотоводству за счет недополучения мясной, молочной и шерстной продукции достигает I млн. 371 тыс. рублей.

Долгое время были известны только две формы возбудителя токсоплазмоза: вегетативная / трофозоит, псевдоциста / и цистная, содержащая зоиты. Отсутствие полных сведений о биологии возбудителя создавали большие затруднения в понимании многих аспектов этой проблемы и, в частности, вопросов эпизоотологии, эпидемиологии, систематики, некоторых сторон патогенеза, иммунитета, диагностики и др.

В 1969 году Hutchison, Work установили половой цикл развития Toxoplasma gondii, который, как оказалось, осуществляется в кишечнике домашней кошки и других представителей этого семейства /Siim et al., 1969; Dubey et al. , 1970; Frenkel et al.,I970; 1973; Janitschke, 1970; Overdulve, 1970; Sheffield, Melton, 1970; WeHand, Kuhn, 1970; ffitte, Piekarski, 1970 ; И.Г.ГалуЗО C соавт., 1971 а,б,в; Jevei et ai., 1972; Miller et aL,i97^ и заканчивается образованием ооцист / зигоцист /.

Исходя из данных о сходстве морфологического строения и некоторых этапов В циклах развития Toxoplasma gondii И кокцидий /Kuhn, Weiland, 1969; Sheffild, Melton, 1970; Hutchison et al., 1971; Д.Н.Засухин с соавт., 1971; Т.А. Шибалова, В.И.Петренко,

1972/ считают, что они свидетельствуют о родстве этих паразитов. Но наличие у токсоплазм стадии цисты, размножение эндодиогени-ей, способность проспорулировавших ооцист заражать животных после парэнтерального введения, внутриутробно поражать плод, преодолевая плацентарный барьер, а также отсутствие специфичности в отношении хозяев не характерно для возбудителей семейства Eime-riidae / Й.Г.Галузо, 1974/.

С учетом перечисленных особенностей систематика токсоплаз-мид выглядит следующим образом:

Класс Sporozoa Leukart, 1879.

Подкласс Coccidiomorpha Doflein, 1901. Отряд Coccidiida Labbe, 1899. Отряд Toxoplasmida Biocca, 1957.

Сем. Toxoplasmidae Dubey, Frenkel, 1970. РОД Toxoplasma РОД Isospora РОД Sarcocystis РОД Frenkelia РОД Besnoitia.

Ооцисты токсоплазм, выделившиеся с фекалиями во внешнюю среду и находясь в благоприятных условиях, подобно кокцидиям, осуществляют споруляцию, после чего становятся инвазионными /Frenkel et al., 1969; Hutchison et al., 1969; Dubey et al.,I970; Й.Г.Галузо с соавт., 1970/. Поэтому кошке, являющейся продуцентом ооцист, по мнению многих исследователей /Frenkel, 1970; Scheffild, Melton, 1970; Witte, Piekarski, 1970; Hutchison, 1970; Й.Г.Галузо С соавт., 1971; Wallace, Marshall, 1972; Siqweira, Voronoff, 1975; Frenkel, 1975; Iindrichova et al., 1975; Ulmanen, Leinikki, 1975; Б.А.Тимофеев, А.В.Акулов, 1975; С.М.Пак, 1976/ отводится роль основного источника токсоплазмозной инвазии.

Дролиферативные формы токсоплазм, находящиеся вне организма-хозяина, малоустойчивы во внешней среде и довольно быстро теряют свою жизнеспособность.

Цистная же форма паразитов, благодаря наличию защитной оболочки, более устойчива к неблагоприятному воздействию различных физических и химических факторов, в том числе и желудочного СОКа /Jacobs, Remington, Melton, I960; Work, 1967; Frenkel,1970/.

Ооцисты токсоплазм ПО данным Qubey et al., 1970; Yilmaz, Hopkins, 1972; Ito, 1975; Умбеталиев С.С,, 1975, 1976, как и других кокцидий, исключительно устойчивы к воздействию самых различных дезинфецирующих веществ. Это свойство ооцист обеспечивает, по мнению Dubey et al., 1970; И.Г.Галузо с соавт., 1971; KJell, 1972; С.И.Коноваловой, 1972; Yilmaz, Hopkins, 1972; Lagardere, Gentilini, 1973; Swartzberg,Remingtcn,1975 И других, широкую циркуляцию возбудителя среди людей и животных. В связи с этим алиментарный путь заражения животных и человека продуктами, инфицированными инвазионными ооцистами, по-видимому, наиболее частый /Land, 1964; Aurstad, 1972; Palioka,1975; Peychl et aL, 1976/. Хотя в естественных условиях не исключаются и другие способы заражения: при попадании возбудителя на слизистые оболочки, поврежденные кожные покровы и через плаценту /Quinn, Craw, 1972/.

В ответ на. внедрение токсоплазм восприимчивый организм, независимо от формы и вирулентности возбудителя, реагирует клеточной реакцией и выработкой специфических антител. Б случае выздоровления пролиферативные формы токсоплазм под непосредственным воздействием иммунных факторов хозяина инцистируются /Frenkel, 1956; Matsubayashi, Okao, 1963; и др./. Такие животные становятся хроническими носителями токсоплазмозной инвазии. Об этом свидетельствуют случаи выделение возбудителя от внешне клинически здоровых ЖИВОТНЫХ /Jacobs et al., 1957; Simitch et al.,I96I; Booh, Rommel, 1964; 2ardi} 1964; И.Г.Галузо С сотр., 1965; Kellmann, Fanscher, 1967; Work, 1967; Katsube, 1968; Amaral, Mak-rus, 1969/.

Большинство исследователей склонны считать, что иммунитет при токсоплазмозе нестерильный /\foibrechtshausen, 1955; С.Г.Васина, I960; Г.В.Корнилова, С.И.Коновалова, 1966, 1969; И.Г.Галузо, 1969; stadtsbaeder et ai.,1971; И.Г.Галузо, С.И.Коновалова, 1971; Lai,1975/. Он формируется в процессе переболевания организма после естественного, а также экспериментального заражения живыми или ослабленными токсоплазмаьш. Особенность иммунитета к токсоплазмам состоит в том, что организм, зараженный авирулент-ным /цистныы/ штаммом возбудителя, приобретает устойчивость к развитию инвазии и проявлению заболевания при реинфекции вирулентным, но не убивает последний, а создает условия для носи -тельства двух штаммов /Nakayama, 1964; С.И.Коновалова, 1972/.

Парэнтеральное введение животным иммунной противотоксо -плазменной сыворотки с высоким титром антител /Eichenwaia, 1949; Е.М.Кузовкин, 1965; Г.В.Коновалова, С.И.Корнилова, 1966; Б.Г.Ма-геррамов, 1966; Е.Ф.Мольченко, 1971; С.И.Коновалова, 1972/ оказывает лишь незначительное защитное влияние при заражении токсоплазмами вирулентного штамма.

В специальной литературе имеются сообщения /Ruskin, Remington, 1971; Krahenbuhl et al., 1972; П.В,Михайлова с соавт., 1974 и др./, свидетельствующие о возможности создания довольно напряженного стерильного противотоксоплазмозного иммунитета у животных с помощью парэнтерального введения убитого возбудителя.

Согласно современным представлениям /Б.Г.Магеррамов, 1969; Rommel, 1970; П.Н.Косяков, 1970; Т.А.Кривец, 1971; И.Г.Галузо,

С.И.Коновалова, 1974/ механизм защитных реакций при токсоплаз-.мозе неразрывно связан с клетками ретикулоэндотелиальной системы, являющихся продуцентами не только антител, но и таких важных факторов как интерферона и ингибиторов.

Клиническое проявление токсоплазмоза у различных видов животных очень многообразно и наблюдается только при остром течении. В большинстве же случаев инвазия протекает скрыто, хронически. Поэтому для диагностики этого заболевания применяются, в основном, лабораторные иммунологические методы.

Обнаружение токсоплазм в патологическом материале и выделение их из тканей организма сравнительно легко осуществляется только при генерализованной форме инвазии.

Выявление возбудителя считается наиболее убедительным доказательством токсоплазмозной инвазии /Roger, 1956; Oiroud et al., 195бЛ Это достигается инокуляцией подозрительного в отношении наличия в нем паразитов материала лабораторным животным, в инкубированные яйца или в культуру тканей.

В практике биопробу ставят чаще всего на белых мышах. Для этих целей используют кровь, эксудаты, материал полученный при биопсии из лимфатических узлов, а также пробы головного мозга, печени, селезенки, почек и легких.

Garnham, Lainson /I960/ рекомендуют для постановки биопроб ИСПОЛЬЗОВаТЬ МНОГОСОСКОВЫХ КРЫС И ЗОЛОТИСТЫХ ХОМЯЧКОВ. Jacobs, Melton, 1955; Krause, 1955; Slmich et al., 1956; - сусликов, a Е.А.Шевкунова и М.Ф.Нугуманова /1974/ - морских свинок, как наиболее чувствительных к токсоплазмам животных. й.Г.Галузо с соавт. /1971/ предлагают постановку биопроб осуществлять на котятах. Для этого исследуемый материал надо скормить животным и на 4-6 день обследовать их фекалии методом флотации на наличие ооцист. С целью оолегчения их выявления Kordy, 1973 / предложил исследуемые фекалии предварительно обрабатывать раствором водного красителя специального состава, который является одновременно и консервантом. Ооцисты токсоплазм после этого приобретают зеленую окраску и при обычной микроскопии становятся хорошо заметны на красном фоне.

Трудности, связанные с обнаружением токсоплазм микроскопией и выделением паразитов биопробой / В.Н.Калякин, 1969 /, а также получением достаточного количества материала для исследования из нужного органа при жизни животного, ограничивают возможности использования паразитологических методов в повседневной практике. Поэтому иммунологические исследования в настоящее время занимают ведущее место среди других методов лабораторной диагностики токсоплазмоза.

С этой целью были предложены следующие тесты: реакция о красителем Сэбина-Фельдмана / РСФ /, реакция связывания комплемента / РСК /, реакция непрямой гемагглютинации / РИГА /, реакция иммунофлуоресценции / РИФ /, реакция нейтрализации на культуре тканей / РН /, реакция диффузионной преципитации / РДП /, реакция агглютинации / РА /, реакция флокуляции / РФ / и внутри-кожная аллергическая проба / ВКАП / у людей.

Реакция Сэбин-Фельдмана была предложена sabin et Feidman /1948/ для серологической диагностики токсоплазмоза и вскоре нашла широкое применение в исследованиях зарубежных авторов не только У людей, НО И У животных /Booh et al., 1964; Zastera et al., 1965; Weismsnn, Sohallibaum, 1967; Zardi et al., 1968; Weiland, Lalchow, 1970/.

В СССР РСФ впервые была использована С.Г.Васиной, д.а.За-сухиным /1962/, С.Г.Васиной /1963/.

Реакция основана на том принципе, что пролиферативные внеклеточные токсоплазмы под воздействием сыворотки, содержащей антитела, в присутствии активатора и при добавлении спиртового раствора метиленовой синьки сохраняют свою форму и не окрашиваются. Б тех случаях, когда исследуемая сыворотка не содержит специфических противотоксоплазмеиных антител, большинство паразитов изменяют форму и окрашиваются в синий цвет.

Обязательным ингредиентом для постановки РСФ является активатор / добавочный фактор /, содержащийся в сыворотках крови около 20% здоровых людей /Jirovec, i960/.

Установлено, что если поместить токсоплазмы в иммунную сыворотку и добавить краситель они изменяют свою форму и окрашиваются. Б тех случаях, когда в эту смесь добавляется активатор, токсоплазмы резко меняют своё отношение к красителю - протоплазма остаётся прозрачной, сохраняется форма и окрашивается только ядерная субстанция.

Исследования многочисленных авторов позволили установить сходство активатора с комплементом.

Foikers /1964/ указывает, что сыворотки крови людей, которые с отрицательным контролем дают менее 20% неокрашенных токсоплазм тоже могут быть использованы в качестве активатора. Для этого необходимо их перед применением разводить физиологическим раствором 1:1 или 1:3.

KobayasM. et ai.,/1969/ установили, что сыворотки морских свинок 50-дневного возраста являются вполне пригодными к использованию как активатор. Б последующем эти данные были подтверждены И другими исследователями /Morin, Vermeil, 1973/.

Исследуемше сыворотки крови в день постановки реакции инак-тивируют на водяной бане в течение 30 минут при различных температурах, в зависимости от вида животных. К приготовленным разведениям исследуемой сыворотки добавляют смесь активатора и токсоплазм, а затем в пробирках выдерживают в течение I часа при температуре +37°. После добавки свежеприготовленного раствора метилен овой синьки пробирки встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 4-5 минут. Реакцию учитывают микроскопически путём подсчёта окрашенных и неокрашенных простейших в количестве 100 паразитов с обязательным наличием соответствующих контролей. Положительной считается реакция, когда после подсчёта 50 и более процентов паразитов остались неокрашенными сохранив свою форму. Предельным титром антител является такое разведение сыворотки, в котором более 50$ токсоплазм остается неокрашенными.

Если для учета реакции применяется фазовоконтрастный микроскоп, тогда метиленовую синьку заменяют раствором формалина .

Известно много модификаций реакции с красителем. С целью облегчения учёта этой реакции Feidman, ЬашЪ /1966/ разработали микромодификацию этой реакции, которая ставится в специальных лоточках с плоским дном из неорганического стекла.

РСФ является высокочувствительным и специфическим индикатором противотоксоплазменных антител как у человека, так и у животных /Kuiasiri, i960/. Она позволяет выявлять антитела обычно через неделю после заражения. В последующие 3-4 недели их титры резко возрастают и сохраняются на определенном уровне 1-1,5 года, а затем постепенно снижаются, но всё же реакция остаётся положительной более продолжительное время, чем РСК.

Несмотря на высокую чувствительность и специфичность РСФ довольно сложна в выполнении, требует исключительно точного соблюдения режимов постановки, специального лабораторного оборудования, а также наличия антигена - живых токсоплазм, для чего не-ооходимо постоянно поддерживать в лаборатории высоковирулентный штамм возбудителя» Сыворотка-активатор быстро теряет свои свойства при хранении её в ооычных условиях холодильника. Поэтому даже при глубоком замораживании активность активатора надо определять каждый раз накануне постановки реакции. И, наконец, необходимо определенное умение и соответствующие меры безопасности, чтобы избежать заражения.

Реакция связывания комплемента / РСК / для диагностики токсоплазмоза была впервые применена Nicoiau et Raveio/1937/, а в практику введена Warren et Satin /1942/. Сущность её состоит в том, что специфические антитела, содержащиеся в сыворотке крови переболевших животных, обладают свойством в присутствии комплемента вступать в связь, то есть образовывать комплекс "антитело-антиген". В этом случае комплемент уходит на связь с этим комплексом. ввиду отсутствия свободного комплемента эритроциты барана остаются во взвешенном состоянии, а затем оседают на дно пробирки. Когда исследуемая сыворотка не содержит специфических антител, комплекса "антитело-антиген" не ооразуется и комплемент остается свободным. Поэтому он используется в качестве связующего звена между гемолизином и эритроцитами барана, являющихся в этом случае антителом и антигеном. При таком сочетании компонентов наступает полный гемолиз эритроцитов.

Специфические комплементсвязывающие антитела в сыворотке крови зараженных токсоплазмами животных обычно появляются к концу второй недели. Установлено, что продолжительность сохранения их в диагностических титрах может зависеть от вида животного, возраста, способа заражения, дозы возбудителя, вирулентности штамма и целого ряда других факторов.

В литературе описано довольно много способов приготовления токсоплазмозного антигена необходимого для постановки реакции.

Nicoiau и Ravelо /1937/ использовали в качестве антигена для РСК спиртовый экстракт высушенных селезёнок кроликов, погибших от токсоплазмоза. warren и Huss /1948/ для изготовления антигена использовали хориоаллантоисные оболочки куриных, a Heyi и Gispen /1955/ -утиных эмбрионов, зараженных токсоплазмами.

В антигенах, приготовленных из тканей лабораторных животных и околоплодных оболочек птичьих зародышей, содержалось слишком много баластных примесей, которые придавали им антикомплементарные свойства, снижая активность, специфичность и продолжительность срока хранения. Поэтому в последующие годы токсо-плазмозный антиген для РСК готовили, в основном, из перитонеаль-ного эксудата мышей, зараженных токсоплазмами, который, по убеждению Френкеля /1948/, представляет наиболее подходящий материал. westphai /1951/ получал антиген из перитонеального эксудата путём двукратной обработки ультразвуком и консервированием его 0,4% раствором фенола.

В.А.Саляев и А.К.Шустров /1959/ готовили антиген путём обработки перитонеального эксудата эфиром, гомогенизации и высушиванием в чашках Коха при температуре +37°. Образовавшиеся через 2-3 дня корочки тщательно растирали в ступке. Полученный порошок растворяли физиологическим раствором, а затем использовали в качестве антигена.

А.В.Левит /I960/ получал антиген из отмытых физиологическим раствором токсоплазм, подвергнутых многократному замораживанию в ледяной углекислоте и оттаиванию. Образовавшаяся после центрифугирования надосадочная жидкость, консервированная 0,5% фенолом, служила антигеном.

Desmonts / I960/ получал антиген путём трёхкратной отмывки с центрифугированием осадка перитонеального эксудата, который затем подвергал замораживанию в смеси, состоящей из спирта и кристаллической углекислоты, с последующим оттаиванием. Препарат хранился в замороженном состоянии при температуре -20°.

Tsunematsu /I960/ предложил метод получения токсоплазм, свободных от клеток хозяина, для изготовления антигена, заключающийся в кратковременной обработке перитонеального эксудата ультразвуком, фильтрацией через мелкоячеистую проволочную сетку, центрифугированием и обработкой трипсином.

Korting /I960/ готовил антиген из взвеси токсоплазм разрушенных ультразвуком. Полученный им препарат обладал высокой активностью.

Jacobs / 1956/, Balducci, Tyrell /1956/, Г.Т.Акиншина, Л .И.Грачёва /1963/, Schuhova /1963/, Betz /1968/ И другие ИСпользовали для изготовления антигена культуру тканей, зараженную токсоплазмами высоковирулентного штамма. Культуральная жидкость, содержащая накопившиеся в процессе размножения паразитов антигенные вещества, не уступала по своей активности антигенам, приготовленным из перитонеального эксудата.

Petersen /1968/ получал антиген из токсоплазм щелочной экстракцией. По данным этого автора щелочная обработка разрушала ингибитор, что приводило к значительному повышению активности препарата.

Yanovsky et al;, /1968/ предложили использовать в качестве антигена продукт, полученный из осадка токсоплазм вначале обработанного 0,25% пепсином, а затем подвергнутого высокому давлению, которое вызывало разрушение паразитов. Титр антигена достигал разведения 1:100 с сохранением активности в течение 6 месяцев.

В.Р.Сыргабаева и Ъ.Я.Воробьёва /1969/ предложили способ изготовления токсоплазмозного антигена с постоянным составом антигенных компонентов, в основу которого был положен метод в.А.Са-ляева и А.К.Шустрова /1959/.

Рокоту et aL,/i97i/ установили, что твин-обработанный антиген почти в 10 раз повышает свою активность»

Казахским научно-исследовательским ветеринарным институтом и институтом зоологии АН Казахской ССР / В.М.Красов, И.Г.Галузо, ж.К.Омаров, А.А.Боровиков, Е.М.Бокова, 1975 / разработан и предложен ветеринарной практике новый способ приготовления антигена для серологической диагностики токсоплазмоза сельскохозяйственных животных. Этот антиген, по данным авторов, отличается от всех предшествующих препаратов более высокой степенью очистки от баластных примесей, чувствительностью и специфичностью.

РСК является весьма доступным и специфичным методом диагностики токсоплазмоза у различных видов животных. Об этом свидетельствуют многочисленные данные отечественных и зарубежных исследователей / И.Г.Галузо, ВД.Голосов, 1962; Е.П.Ковалёва с соавт., 1962; Robertson et aL, 1963; Е.М.Кузовкин, 1964; Н.М.Лапшин, В.Н.Глущенко, 1963; У.Д.Вустина, 1970; Kynstyr et ai., 1970; А.С.Бердыев, 1971; И.З.Кастравец, 1971; Д.Арнаудов, 1971; М.Х.Маккаев, 1972 и др./.

Однако титры специфических антител, особенно при хроническом течении инвазии, чаще всего бывают невысокими /1:5 - 1:10/, поэтому выявить их с помощью этой реакции не всегда удаётся. Этим и обуславливается низкая чувствительность реакции.

Реакция имм.унофлуоресценции / РИФ / даёт возможность обнаруживать возбудителя в патологическом материале и специфические антитела в исследуемых сыворотках крови. Прямым методом выявляют паразитов, а непрямым и реакцией торможения флуоресценции с комплементом - антитела.

По данным Cramar, 1963; Nfunen, Veen, 1965; Е.А.Шевкуновой, 1969; Chessum, 1970; Carmichaei, 1975 и других РИФ по непрямому методу обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Установлено, что с помощью этой реакции, как и по РСФ, определяются сходные антитела против поверхностных антигенов токсоплазм значительно раньше, чем по РСК и в более высоких титрах.

Простота постановки и специфичность РИФ свидетельствуют о её перспективности /Riohter, 1969; Л.И.Грачёва, Н.В.Градков -екая, 1971; Calarael, Giauffret , 1975; Stoll, Kraft, 1976; Timo-ney, 1976/.

Braveny, Disko /1976/ указывают на необходимость стандартизации техники постановки данной реакции, материалов, микроскопа и значения высоты титров антител при исследовании сывороток крови, которые могут оказывать определенное влияние при окончательной оценке результатов.

Кроме этого, некоторые авторы /Ruckerbauer, Robertson, 1963; Budde et ai., 1969 и др. / на основании результатов учёта реакции торможения флуоресценции в сравнении с показаниями РСК и РСФ пришли к выводу, что её нельзя рекомендовать к использованию в широкой практике из-за низкой чувствительности.

Реакцию непрямой гемагглютинации / РИГА/ для диагностики токсоплазмоза впервые применили Jacobs et Lunde /1957/.

По данным отечественных и зарубежных исследователей /Sato et ai.,1962; Н.А.Бакулиной, 1965; Rеу, Mira, 1966; В.И,Литвинен-ко, 1966; Zaman et al.,1967; Л.Ф.Рябовой, 1971; Sharman, 1972;

Ishizuka, 1974; Amaral et al., 1975 И др./ эта реакция обладает высокой специфичностью и чувствительностью.

С помощью РИГА гемагглютинирующие антитела выявляются у больных токсоплазмозом почти в тоже самое время после заражения, что и по РСК или немного позже, но зато более продолжительное время. Совпадаемость положительных результатов между РИГА и РСФ достигает 82-90 и более процентов.

Другие исследователи /Durfee et al., 1974; Riemann et al.,

1975/, основываясь на отрицательных результатах биологических проб от положительно реагировавших на токсоплазмоз по РИГА животных, ставят под сомнение её специфичность.

В связи с тем, что продукция специфических антител в организме инвазированного токсоплазмами животного начинается в разные сроки после заражения, для получения более достоверных результатов Soltys, Woo, 1972; Enders, Henning, 1973; У.Д.Вус-тина, 1973 и другие считают более целесообразным проводить комплексное обследование с использованием нескольких серологических тестов. Наиболее подходящими для этого, по их мнению, являются РСФ, РИФ, РСК и РНГА.

Внутрикожная аллергическая проба / ВКП / с токсоплазмином для диагностики токсоплазмоза у людей впервые была предложена и описана Frenkel /1948/.

Изготовление аллергена производилось следующим образом. Вначале перитонеальный эксудат, полученный от внутрибрюшинно зараженных токсоплазмами мышей, подвергался центрифугированию. На-досадочная жидкость удалялась, а осадок, состоящий, в основном, из лейкоцитов и пролиферативных форм токсоплазм, суспензировался в 10-кратном объёме физиологического раствора. Образовавшуюся взвесь после 5-10-кратного замораживания и оттаивания повторно центрифугировали. В последующем надосадочная жидкость подвергалась стерилизации ультрафиолетовыми лучами или прогреванием, а затем разводилась физиологическим раствором с добавлением карболовой кислоты до 0,25% концентрации.

Активность аллергена проверялась на морских свинках с хроническим токсоплазмозом. Контролем служил антиген из селезёнок здоровых мышей.

Feidman et Sabin /1949/ ИСПОЛЬЗОВЭЛИ ТОКСОПЛаЗМИН, прИГОтовленный из аллантоисных оболочек зараженных токсоплазмами куриных зародышей, активность которого определяли в РСК.

Контролем служил аллерген из хориоаллантоисных оболочек незараженных куриных эмбрионов.

Внутрикожная аллергическая проба для диагностики токсоплазмоза у людей впервые была применена в нашей стране Л.И.Грачёвой /1961/ с использованием аллергена Чехословацкого произ -водства.

Затем в Московском ИЭМ им. Н.Ф.Гамалея АМН СССР Л.И.Грачёвой /1961/ был разработан способ и получен токсоплазменный аллерген, методика изготовления которого состояла в следующем. Перитонеальный эксудат, полученный от внутрибрюшинно зараженных токсоплазмами штамма RH мышей, центрифугировали при 2500 об/мин. в течение 30 минут. Осадок суспензировали в физиологическом растворе и на 3-4 суток оставляли в холодильнике, после чего лио-филизировали. К высушенному препарату из расчёта 1:100 добавляли физиологический раствор, 2,5 объёма серного эфира и подвергали встряхиванию в банке с бусами в течение часа. Затем смесь выливали для отстаивания в делительную воронку и оставляли при комнатной температуре на одни сутки. На следующий день отбирали водный слой, который представлял собой антиген.

После контроля препарата на стерильность и безвредность, пробная партия аллергена в разведении 1:10, 1:40, 1:50 и 1:60 апробировалась на морских свинках, а затем на добровольцах.

Отечественный токсоплазменный аллерген при сравнительном изучении путём постановки внутрикожной пробы одним и тем же лицам оказался идентичным чехословацкому.

Внутрикожная проба у людей ставится путём внутрикожного введения 0,1 мл токсоплазмина и учитывается через 24 и 48 часов по величине и интенсивности гиперемии и инфильтрации возникших на месте инъекции препарата, которые измеряются в двух взаимно перпендикулярных направлениях.

Как указывает Jirovec и Jira /1958/ у некоторых людей, больных токсоплазмозом, можно наблюдать реакции более замедленного типа, когда только через 48 часов внутрикожная проба становится положительной, а через 72 часа достигает своего максимального развития. В связи с этим они предлагают контрольный учёт обследуемых людей производить и через 72 часа.

Специфичность ВКП на токсоплазмоз у людей в настоящее время не подлежит сомнению. Это доказано многочисленными исследованиями, проведенными в нашей стране и за рубежом. Высокую специфичность ВКП, как диагностического теста при исследованиях людей на токсоплазмоз, подтверждают Е.П.Ковалёва /1961/, И.Ф.Егоров с соавт. /1962/, Л.И.Грачёва /1963/, Т.А.Овчаренко /1966/ и др.

Благодаря своей простоте в постановке, учёте, высокой чувствительности, экономической выгодности и целому ряду других преимуществ, по сравнению с серологическими реакциями, ВКП в настоящее время является одним из основных методов иммунологической диагностики токсоплазмоза у людей в нашей стране.

Вместе с тем, большое многообразие сходных клинических признаков, в случаях острого течения токсоплазмозной инвазии, наблюдающихся как у человека, так и у животных, сравнительно частое бессимптомное паразитоносительство, успешное применение одних и тех же серологических тестов, близкое родство изолированных штаммов токсоплазм и целый ряд других данных позволяют предполагать о возможности развития аллергического состояния, в связи с переболеванием токсоплазмозом не только в человеческом, но также и в животном организме.

Ряд исследователей ранее предпринимали попытку использования аллергической внутрикожной пробы для диагностики токсо плазмоза у животных.

Так, Ангелов с соавт. /1957/ в Болгарии, обследуя внутри-кожной пробой, получили положительную реакцию у 5 из 114 голов крупного рогатого скота, I из 13 лошадей, 4 из 138 овец, 28 из 115 коз и у б из 45 собак.

Guboni /1958/ наблюдал положительную внутрикожную пробу у морских свинок и кроликов, экспериментально инфицированных токсоплазмами.

Roh.de /1959/ в Германии при эпизоотологическом обследовании 203 бродячих собак с помощью РСФ и ВКП на токсоплазмоз у 38 /18,7%/ животных получил положительную кожную реакцию. Сов-падаемость показаний обеих реакций оказалась равной 100%. При этом высота титров по РСФ колебалась в пределах от 1:16 до 1:64 у 35 голов, 1:256 у 2 и только у одной собаки - 1:4. Попытки выделить возбудителя от положительно реагировавших животных не предпринимались.

Японские исследователи Sato et ai.,/1961/ провели опыты по изучению проявления внутрикожной пробы в зависимости от способа заражения и дозы токсоплазм на двухмесячных поросятах. Было установлено, что при интраназальном введении до 100 трофо-зоитов токсоплазм клинически выраженного заболевания и образования антител не наблюдалось. ВКП на токсоплазмоз дала отрицательный результат. После внутрибрюшинного введения токсоплазм в дозе от 200 до 2000 паразитов каждому поросёнку, при отсут -ствии каких-либо клинических симптомов заболевания, отмечено нарастание титра антител по РСФ и развитие аллергического состояния, установленного внутрикожной пробой. Клинически выраженное заболевание можно было наблюдать у подопытных поросят только после внутрибрюшинного введения около 20 тысяч токсоплазм.

Позже Sato et ai., /1962/ обследуя с помощью РСФ, реакции гемагглютинации и ВКП на токсоплазмоз 87 подсвинков установили совпадаемость результатов в 90% случаях.

Robertson et al., /1963/ наблюдали отчётливо выраженную кожную реакцию в виде покраснения и припухания кожи у овец и подсвинков к 48 часу учёта, у коз на 72, а у телят на 96 часу через 16 недель после экспериментального заражения токсоплазма-ми штамма RH. При обследовании животных через 4, 6 и 10 недель только у овец была отмечена слабая реакция в виде незначительного изменения цвета кожи на месте введения аллергена. Остальные подопытные животные реагировали отрицательно. На основании по -лученных результатов авторы пришли к выводу, что кожная чувствительность у инвазированных животных к токсоплазмину появляется в более отдалённое время. Что же касается самого метода, то необходимы ещё дополнительные исследования по усовершенствованию аллергена для того, чтобы он приобрёл диагностическую ценность.

Nobuto et ai.,/1964/ разработали способ получения кон -центрированного токеоплазмеиного аллергена /гзс - антиген / для аллергической диагностики токсоплазмоза у свиней, процесс изготовления которого состоял в следующем: перитонеальный эксудат, отобранный от убитых на 3 день после внутрибрюшинного заражения токсоплазмами мышей, центрифугировали при 3000 об/мин. Полученный осадок паразитов трёхкратно отмывали физиологическим раствором с центрифугированием. Затем к осадку токсоплазм, находящемуся в центрифужных пробирках, добавляли холодную дистиллированную воду в равном объёме и полученную взвесь, для разрушения паразитов, восьмикратно замораживали в смеси сухого льда и спирта с последующим оттаиванием в проточной воде. Ли-зат оставляли на ночь в рефрижераторе при температуре 4°. Осадок, почти не содержащий антигенного начала, после центрифугирования выбрасывали. Надосадочная жидкость являлась так называемым сырым антигеном, который подвергали очистке двумя способами.

По первому способу: к сырому антигену добавляли 5 объёмов охлаждённого безводного ацетона. Через 15 минут образовавшуюся суспензию центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 минут и получали белый осадок. Этот осадок вначале отмывали холодным безводным ацетоном, а затем дважды безводным эфиром. После удаления эфира в эксикаторе под вакуумом добавляли физиологический раствор до первоначального объёма и полученный антиген лиофили-зировали.

По второму способу: для максимального извлечения Сахаров и липидов к сырому антигену добавляли трихлоруксусную кислоту до 5% концентрации и оставляли на ночь при температуре 4°. Полученный после центрифугирования осадок разводили фосфатным буфером / рН 7,5-8,0 / и подвергали в течение 4 дней диализу вначале в проточной, а затем дистиллированной воде. К диализату добавляли охлажденный ацетон и последующую обработку проводили в такой же последовательности как и по первому способу.

При исследовании активности концентрированного токсоплаз-менного аллергена внутрикожной пробой на 29 свиньях с экспериментальным токсоплазмозом была получена характерная аллергическая кожная реакция.

Для обнаружения животных с естественным токсоплазмозом авторы обследовали аллергически 168 свиней. Из этого поголовья реагировало 24 головы, из них у 22 возникла явно положительная кожная реакция, а у двух - сомнительная.

Для проверки аллергена на специфичность были обследованы с помощью ВКП 17 свиней 6-месячного возраста. Из этого поголовья 8 реагировало положительно, 2 - сомнительно, остальные 7 отрицательно.

От 5 положительно реагировавших свиней было выделено биопробой 5 штаммов токсоплазм, из которых один по вирулентности оказался аналогичен штамму re, а 4 - слабовирулентные.

На основании полученных результатов авторы пришли к выводу, что ВКП на токсоплазмоз у свиней является вполне приемлемым тестом, а антиген "обещает быть ценным средством при исследовании свиней на токсоплазмоз, диагностика которого до сих" пор остаётся неясной и сомнительной".

Проводя опыт на здоровых поросятах эти же авторы определили влияние неоднократного введения аллергена на появление и нарастание титров антител по реакции с красителем. Они установили, что при инъекции по 0,2 мл концентрированного антигена при 2-недельных интервалах не вызывали появления специфических антител в сыворотках крови обследуемых поросят. Это послужило основанием для вывода о возможности неоднократного применения токсоплазменного аллергена одним и тем же животным,

Gabrys,/1964/, обследуя внутрикожной пробой с помощью аллергена / 1:400/ 102 собаки, у II получил положительную реакцию. Совпадаемость положительных результатов составила по РСФ-94,1%, а по РСК - 81,3%. По мнению автора аллергический метод способен лишь выявить инвазированность организма токсоплазмами, но не может дать полной оценки состояния процесса. Поэтому для восполнения существующего недостатка предлагает применять ал-лергометрию, которая используется в медицине. Применив этот метод результаты аллергометрии совпали с данными РСК в 77,8% случаев.

Автор считает, что аллергический метод диагностики токсо-плазмоза у собак, по сравнению с РСФ, РСК и РГА, является наиболее приемлемым для практического осуществления.

Boch et al., /1966/ обследовали серологически и аллергически на токсоплазмоз немецких овчарок, содержавшихся в различных условиях. По РСК дали положительную реакцию 15,9% животных, а по ВКП - 21,4%.

Несмотря на успешное применение ВКП, авторы всё же считают РСК более надёжным методом в диагностике токсоплазмоза собак по сравнению с аллергической пробой, которая требует дальнейшего усовершенствования.

А.С.Кочерли /1966/, используя медицинский токсоплазмин производства ЙЭМ им. Н.Ф.Гамалея АМН СССР методом внутрикожной пробы обследовал 735 овец, 95 коз и 1000 кур. Реакция оказалась положительной у 45 /6,1%/ овец и 6 /6,3%/ коз. После введения аллергена в дозе 0,2 мл реагировало положительно почти в два раза больше животных, чем 0,1 мл. Результаты ВКП совпали с данными РСК в 71,5 - 73,5% случаев. У многих животных получена положительная ВКП при отрицательной РСК. Автор предлагает использовать аллергическую пробу для ориентировочного, массового обследования овец и коз на токсоплазмоз с одновременным применением РСК как два дополняющих друг друга метода.

А.Е.Григорашенко, М.Н.Мельник, Н.И.Севастьянова и Л.С.Бог-данюк /1966/ испытали медицинский токсоплазмин в более высокой концентрации на кроликах и морских свинках с экспериментальным и естественным токсоплазмозом. Контролем служили здоровые животные аналогичного вида. Из 37 подопытных кроликов реагировало положительно 25 голов, а из 15 морских свинок - 12. Наиболее чёткая реакция наблюдалась через 24 часа после инъекции токсо-плазмина. К 48 часу её интенсивность несколько снижалась, но всё же оставалась положительной. Все контрольные животные реагировали отрицательно.

Последующее испытание токсоплазмина в различной концентрации было проведено на овцах в одном из очагов массовых абортов в Одесской области. Из 114 овец, подвергнутых аллергическому и серологическому обследованию, полное совпадение результатов было получено в 25,4%, а частичное - 34,2% животных.

На основании полученных результатов авторы пришли к выводу, что для постановки внутрикожной пробы животным необходимо использовать токсоплазменный аллерген в 3-4 раза большей кон -центрации, чем применяемый для людей.

Rifaat et al., /1968/ в ОАР, используя токсоплазмин в разведении 1:100, приготовленный по методу Френкеля, провели эпи-зоотологическое обследование внутрикожной пробой на токсоплаз-моз буйволов и крупного рогатого скота. Из III буйволов положительно реагировало 8 /7,2%/. Все 35 телят и 10 буйволят 12-месячного возраста реагировали отрицательно. Контролем служил антиген, приготовленный из селезёнок здоровых мышей, на который все животные дали отрицательную реакцию.

Dorosz et al., /1968/ обследовали на токсоплазмоз с помощью РСК и ВКП 84 собаки, из них 45 голов городских и 39 - из посёлков. При этом реагировало положительно по РСК 9 голов в титре 1:5 - 1:40, а по ВКП - 18 голов.

Ardujo et al., /1973/ в опытах на 48 обезьянах, зараженных токсоплазмами высоковирулентных штаммов / в мозг, внутри -венно, внутрибрюшинно, подкожно, внутрь и конъюнктиву / установили, что спустя 3,5 месяца внутрикожная проба оказалась положительной у всех животных, в то время как реакция с красителем в низких титрах только у 9.

Анализируя приведенные литературные данные следует отметить следующее. Значительное большинство серологических тестов, предложенных для диагностики токсоплазмоза животных, признаны специфичными. Но они довольно громоздки, требуют значительной затраты средств, времени и труда, что подчас ограничивает их практическое применение. Из них только РСК нашла широкое использование и оправдала себя как надёжный метод по выявлению специфических антител у животных. Но и эта реакция часто не может дать исчерпывающего ответа, так как у крупных животных, заразившихся токсоплазмами в естественных условиях, титры антител обнаруживаются, как правило, невысокие. С течением времени такие животные начинают реагировать отрицательно и, естественно, считаются абсолютно здоровыми в отношении этого заболевания. Таким образом, в обследуемых группах, в зависимости от общей зараженности животных, может оставаться значительное количество недовыявленных паразитоносителей.

Вторым существенным недостатком серологических тестов является то, что показатели их трудно сопоставимы, так как методики постановок не унифицированы, применяются различные по активности антигены, а поэтому сравнительная степень достоверности их довольно низка. Отсюда вполне понятна большая актуаль -ность и необходимость усовершенствования уже существующих и разработки новых, более приемлемых для практического осуществления методов диагностики.

В большинстве случаев авторам, изучавшим возможность использования внутрикожной пробы для аллергической диагностики токсоплазмоза у животных, удалось получить положительные результаты. Однако, многие стороны данного вопроса остались нерешенными. В частности, пока ещё нет единой методики получения ток-соплазменного аллергена, не установлена его оптимальная концентрация и дозы для животных различных видов, времени учёта и целый ряд других. Недостаточно сведений и о продолжительности развития аллергического состояния организма в ответ на введение токсоплазм различной вирулентности, критериев оценки положителыюй и сомнительной реакции и, наконец, немногочисленность исследований с использованием небольшого поголовья животных.

Одним из основных недостатков ранее проведенных исследований по изучению пригодности аллергического метода для обследования животных является то, что никем из упомянутых исследователей, кроме Nobuto et al.,/1964/, не была доказана возможность изоляции возбудителя от положительно реагировавших на токсоплазмоз животных.

Учитывая высокую диагностическую ценность аллергического метода при бактериальных, вирусных и паразитарных заболеваниях, мы решили усовершенствовать способ изготовления токсоплазмина с тем, чтобы использовать ВКП для выявления животных со скрытым, бессимптомным течением токсоплазмозной инвазии.

В связи с изложенным проводимыми исследованиями предусматривалось разрешить следующие задачи:

1. Определить пригодность медицинских токсоплазминов и других токсоплазменных антигенов для аллергической диагностики токсоплазмоза у животных.

2. Разработать способ изготовления токсоплазмина, пригодного для ветеринарных целей.

3. Приготовить токсоплазмины и испытать их безвредность, активность и специфичность на животных.

4. При получении положительных результатов предложить ветеринарной практике аллергический метод диагностики токсоплазмоза животных.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Место проведения исследований. Исследования по выяснению пригодности медицинских токсоплазминов, разработке способа приготовления и применения новых токсоплазменных аллергенов / токсоплазминов /, изучению их активности, специфичности и возможности практического использования в качестве диагностикумов для аллергической внутрикожной пробы на токсоплазмоз у животных проведены в лаборатории протозоологии Украинского ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии.

Лабораторное и производственное испытание токсоплазминов, приготовленных по методу УНШЭВ, произведено на животных, принадлежащих лаборатории токсоплазмоза института зоологии АН Каз.ССР, экспериментальной базе Казахского научно-исследовательского института и откормочным хозяйствам Харьковского гор-общепита.

Виды животных и их количество. Для приготовления токсоплазминов УНМИЭВ, проверки их на безвредность / токсичность /, активность и специфичность, постановки биологических проб, поддержания лабораторного и полевых штаммов токсоплазм, изучения некоторых биологических свойств ооцист токсоплазм использовали более чем 2500 белых мышей, 76 морских свинок, 68 кроликов, 10 собак, 28 кур и 22 котёнка. лабораторное испытание приготовленных нами токсоплазминов произведено на 249 животных различных видов, в том числе: 14 голов крупного рогатого скота, 6 лошадей, 2 осла, 25 овец, 37 коз, 4 козерога, 2 архара, 26 собак, 57 кроликов и 76 кур.

Производственное испытание токсоплазминов УНИИЭВ осуществлено на 50 головах крупного рогатого скота, 200 овцах и 50 кроликах.

Изучение специфичности токсоплазменного аллергена и аллергического метода диагностики токсоплазмоза животных проведено на 29 головах крупного рогатого скота, 350 свиньях, 20 кроликах и 35 морских свинках.

Штаммы токсоплазм. Лабораторный штамм вн, полученный из производственного отдела Одесского ИЭМ им. И.И.Мечникова, поддерживали в лаборатории пассированием на белых мышах и использовали для заражения подопытных животных, получения перитонеаль-ного эксудата для изготовления токеоплазминов и антигена для РСФ.

Полевые штаммы токсоплазм, выделенные от: овцы - odg-2 / й.Г.Галузо с сотр., 1962 /, свиньи - sdk-i / Е.М.Кузовкин, 1961 /, сайги - stg-i / й.Г.Галузо с сотр., 1962 /, собаки -gdg-i / Й.Г.Галузо с сотр., 1963 /, петуха - ggp / С.М.Пак, 1964 /, суслика - cfg-i / Й.Г.Галузо с сотр., 1963 /, серебристо-черной лисицы - vfg-3 / Й.Г.Галузо с сотр., 1964 / на территории Казахской ССР предоставлены нам академиком Й.Г.Галузо, а также изолированные от кроликов - ockl-i, ocxl-2 и свиней - sdkl- 1-13 / А.П.иоломацкий с сотр., 1972 /, использовали для приготовления токсоплазминов и экспериментального заражения лабораторных животных.

С целью получения исходного материала для изготовления токсоплазминов группе здоровых взрослых мышей в количестве 50100 голов весом 20-25 грамм внутрибрюшинно вводили 0,2 - 0,3 мл перитонеального эксудата или суспензии 1:5 головного мозга, печени и селезёнки на физиологическом растворе отобранных от подкожно зараженных мышей, в которых находились живые токсоплазмы определенного штамма.

На 3-4 день после заражения мышей убивали. Не вскрывая брюшной полости, 1-2 граммовым шприцом с иглой отсасывали пери-тонеальный эксудат. При его отсутствии или же когда в первично отобранной порции эксудата содержалось очень большое количество / 120-150 и более в одном поле зрения микроскопа об. х40 ок.хЮ/ трофозоитов токсоплазм, в брюшную полость дополнительно вводили 1-2 мл 3,8% раствора лимоннокислого натра, а затем отсасывали. Эксудат, полученный от каждой мыши, сразу же микроскопировали в нативном состоянии, определяли количество вегетативных форм ток-соплазм, псевдоцист, непораженных клеток ретикуло-эндотелиаль-ной системы и загрязненность его посторонней микрофлорой. Для приготовления токсоплазмина отбирали эксудат, содержащий в одном поле зрения микроскопа не менее 25-30 трофозоитов, небольшое количество лейкоцитов и свободный от кокковой или палочковидной микрофлоры.

Собранный эксудат центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочный слой жидкости сливали, осадок /клеточную массу/ ресуспензировали в стерильном физиологическом растворе до половины первоначального объёма.

Для освобождения токсоплазм из псевдоцист материал 6-6 раз с помощью шприца пропускали через тонкую иглу, а затем повторно центрифугировали при тех же условиях. После удаления надо-садочной жидкости осадок еще дважды ресуспензировали и центрифугировали. Полученный в конечном итоге осадок трофозоитов токсоплазм служил исходным материалом для изготовления токсоплазмина.

1эелы& а серых мышей, морских свинок, кроликов, собак, кур и других, в зависимости от поставленной цели, заражали токсо-плазмами в различных дозах парэнтерально / внутрибрюшинно, внутримышечно и подкожно /, а котят, кроликов, морских свинок и мышей, кроме этого, внутрь.

Материалом для заражения животных вирулентными штаммами токсоплазм служил перитонеальный эксудат белых мышей, отобранный от них на 3-4 день после инвазирования. Для заражения апа-тогенными штаммами токсоплазм использовали суспензию, приготовленную из головного мозга мышей, убитых через 30-40 и более дней после инокуляции им цистных форм возбудителя.

Количество паразитов, вводимых при заражении животным, а также содержащихся в исходном материале для изготовления токсо-плазмина, определяли в счётной камере Горяева.

Всех павших и вынужденно убитых животных вскрывали для установления патологоанатомических изменений во внутренних оргаг нах и паразитоносительства. С этой целью из отобранных проб органов и тканей готовили мазки-отпечатки для микроскопии и ставили биологические пробы на белых мышах.

Животные, выздоровевшие после экспериментального заражения, а также инвазированные токсоплазмами в естественных условиях, служили объектом для проверки активности и специфичности изготовленных нами токсоплазминов и донорами положительных сывороток крови.

Контролем служили заведомо здоровые, серонегативные на токсоплазмоз животные аналогичных видов.

Способность токсоплазм различной вирулентности к образованию ооцист изучали в опытах на кошках. Материал / фекалии /, индивидуально отобранный от каждого животного, вначале растирали в ступке, а затем смешивали с насыщенным раствором поваренной соли до образования однородной жидкой взвеси. Приготовленную взвесь фильтровали через капроновую сетку с ячейками размером 200 , а затем отстаивали. Через 15-20 минут с поверхности фильтрата снимали проволочной петлёй поверхностную плёнку и nogвергали микроскопическому исследованию / об. х40, ок.хЮ /. Если при этом обнаруживали ооцисты токсоплазм весь фильтрат центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 минут. Верхнюю часть / 1/3 / надосадочной жидкости отсасывали шприцом с иглой или сливали в отдельную посуду. Определяли объем этой жидкости, разводили её водопроводной водой в соотношении 1:10 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. После этого надосадочную жидкость сливали, а осадок, в котором находились ооцисты токсоплазм, смывали 2% раствором двухромовокисло-го калия. Полученные ооцисты токсоплазм служили объектом для изучения морфологических и биологических изменений, которые наступали в процессе споруляции и заражения лабораторных животных.

Реакцию связывания комплемента ставили по методу длительного связывания комплемента / РДСК / на холоду при температуре t4t5° в течение 16-18 часов, который по данным Straezynska, Uminski, /1959/, Boadech, Jira, /1961/ и др. является более чувствительным и достоверным по сравнению с обычным.

Для постановки реакции использовали токсоплазмозный антиген производства Московского ИЭМ им. Н.Ф.Гамалея и завода бактерийных препаратов ОНИИВЭ им. И.И.Мечникова, а также изготовленные нами.

В качестве комплемента применяли сухой комплемент, выпускаемый Курской биофабрикой Всесоюзного треста биопромышленности, оттитрованный до рабочего титра с 20-30% надбавкой.

Гемолитическую систему готовили из равных объёмов 2,5% взвеси трёхкратно отмытых физиологическим раствором с центрифугированием свежеполученных или же хранившихся до 3 недель в консервирующей жидкости Альсивера эритроцитов барана и гемолитической сыворотки изготовленной Курской биофабрикой, разведенной в тройном титре.

Сыворотки крови животных инактивировали в разведении 1:5 прогреванием на водяной бане в течение 30 минут при температуре: крупного рогатого скота и свиней - 57°С, лошадей, овец, коз, козерогов, архаров - 58-59°С; ослов - 64°С; кроликов, соОак, кошек - 65°С; морских свинок - 56°С и кур - 59-60°С.

Результаты РСК учитывали двукратно: через I час после извлечения пробирок из водяной бани / +38°С / и на следующий день через 24 часа. Данные последней проверки считались положительными при задержке гемолиза эритроцитов на четыре, три и два креста / ++++, +++, ++ /, сомнительными на один крест / + / и отрицательными / - /.

Сыворотки крови, давшие положительные результаты при первичной постановке РСК в разведении 1:5 на четыре креста в дальнейшем повторно исследовали для определения предельных титров.

Контролями служили: контрольный ряд пробирок без антигена, заведомо положительные и отрицательные сыворотки крови животных аналогичного вида, а также контрольные системы на от -дельные компоненты реакции - КАА / контроль антигена на анти-комплементарность /, КАГ / контроль антигена на гемотоксич -ность /, КК / контроль комплемента /, КЭР / контроль эритроцитов /, КГС / контроль гемолитической системы / и ККГ / контроль комплемента на гемотоксичность /.

Реакцию Сэбин-Фельдмана / РСФ, реакцию с красителем / ставили по предложенному Сэбиным и Фельдманом /feabin, Feidman, 1948/ методу в модификации описанной профессором Д.Н.Засухиным /1962/.

Антигеном служил перитонеальный эксудат, полученный от мышей убитых на 3-4 день после внутрибрюшинного заражения токсоплазмами штамма ин.

В качестве активатора использовали нормальные свежие человеческие сыворотки, полученные из Харьковской станции переливания крови. Сыворотка, показавшая свойства активатора, сразу же использовалась в реакции, остальную часть оставляли в холодильнике / -8-12°С /.

Учёт реакции осуществляли путём подсчёта окрашенных и неокрашенных токсоплазм под микроскопом. Положительным считали то разведение сыворотки, при котором более 50% паразитов оставались неокрашенными.

Контролями служили: контроль эксудата, активатора, заведомо положительной и отрицательной сывороток.

Несмотря на то, что РСФ является одной из наиболее чувствительных и специфичных реакций при исследовании животных на токсоплазмоз, из-за отсутствия специальных условий для хранения активатора, мы не всегда получали устойчивые показатели, поэтому результаты внутрикожной аллергической пробы контролировали в большинстве случаев исследованиями в РСК.

Микроскопический метод исследования использован для обнаружения различных стадий развития токсоплазм в органах и тканях подопытных, контрольных и обследуемых на естественную зараженность животных.

Указанному исследованию подвергали нативный материал /пе-ритонеальный эксудат, взвесь внутренних органов и тканей, кусочки головного мозга, лимфоузлы и др. /, а также мазки и мазки -отпечатки из них, окрашенные по Романовскому-Гимза. Для этого готовили препараты в виде раздавленной под покровным стеклом капли кусочков головного мозга и мазки на предметных стёклах.

В каждом окрашенном мазке и нативном материале просматривали, в зависимости от поставленной цели, от единичных до 100150 и более полей зрения.

Биологические пробы на белых мышах ставили двумя способами: ооычным и с предварительной обработкой исследуемого материала искусственным желудочным СОКОМ по методу Jacobs,Remington, Melton /I960/,

Целью постановки биологических проб было установление па-разитоносительства у животных с экспериментальным, а также спонтанным токсоплазмозом, серопозитивных и положительно реагирующих аллергически на токсоплазмоз.

Материалом для этих исследований служили кусочки органов и тканей головного мозга, печени, селезёнки, сердца, лёгких,почек, лимфоузлов, диафрагмальных, внутренних поясничных и жевательных мышц.

При обычном способе кусочки органов и тканей измельчали ножницами, тщательно растирали в фарфоровой ступке, суспензировали в стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:3 или 1:5, добавляли стрептомицин и пенициллин в равных количествах с таким расчётом, чтобы общая концентрация антибиотиков на I мл суспензии не превышала 3000 Е.Д. Через 15-20 минут приготовленную суспензию вводили внутрибрюшинно 3-4 мышам в дозе по 0,5 - 1,0 мл каждой. За биопробными мышами постоянно вели наблюдения. Мышей, павших в течение первых двух суток, не исследовали и уничтожали. Погибших на 3 и последующие дни после введения материала вскрывали и микроскопировали нативную асцит-ную жидкость. При её отсутствии - смыв из поверхности органов брюшной полости на предмет обнаружения вегетативных форм токсоплазм. Кроме этого, из печени, селезёнки и головного мозга готовили мазки-отпечатки, которые после окрашивания микроскопиро-вали на наличие внутри- или внеклеточных форм простейших. Оставшихся мышей спустя 15-25 дней убивали для производства последующих "слепых" пассажей. Материал / взвесь печени, селезёнки и головного мозга /, отобранный от этих мышей, вводили вну-трибрюшинно следующей группе животных описанным способом /очередной пассаж/. После третьего пассажа исследуемого материала от убитых через 1-2 месяца мышей отбирали головной мозг для микроскопического исследования на наличие цист токсоплазм. При обнаружении их биопроба считалась положительной. В отрицательных случаях дальнейшие пассажи материала не производились.

По второму методу, отобранные пробы от подозреваемых в заражении токсопдазмами животных, преимущественно диафрагмальные, поясничные и жевательные мышцы весом каждая, в среднем, от 2530 до 60-120 грамм, освобождали от фасций, жира и сухожилий, измельчали сначала ножницами на мелкие кусочки, а затем с помощью размельчителя тканей PT-I. Процесс подготовки продолжался 5-8 минут. Затем к измельченным тканям добавляли в соотношении 1:10 переваривающую жидкость следующего состава: пепсина -2,6 г, соляной кислоты - 7 мл, хлористого натра - 5 г, дистиллированной воды до 1000 мл. Образовавшуюся суспензию переливали в колбы, которые ставили на I час в водяную баню при температуре +37+38°С и периодически взбалтывали. По истечению указанного срока суспензию, для освобождения от крупных частиц тканей,фильтровали через два слоя стерильной марли. Полученный фильтрат центрифугировали при 2500 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость сливали. Осадок отмывали физиологическим раствором с центрифугированием при 3000 об/мин в течение 10 минут. В конечном итоге осадок суспензировали в стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:3, добавляли антибиотики, а затем вну-триорюшинно вводили мышам, как и при обычном способе постановки биопробы.

Описанные методы постановки оиологических проб были использованы нами и для изоляции полевых штаммов токсоплазм.

Аллергические методы исследования. Изучение пригодности и активности медицинских токсоплазминов, а также изготовленных нами, производили на экспериментально, спонтанно зараженных токсоплазмами и здоровых животных, с помощью глазной и внутри-кожной проб.

При глазной пробе изучаемый препарат вводили пипеткой в конъюнктивальный мешок в дозе 1-3 капли. В другой, для контроля, физиологический раствор или же один из медицинских токсоплазминов.

Результаты глазной пробы учитывали через I-3-6-I2-I8 и 24 часа после введения препаратов визуально. Отсутствие изменений со стороны конъюнктивы / гиперемия, отёк, истечение / расценивали как отрицательный результат.

Бнутрикожную пробу ставили обычным способом, принятым в ветеринарной практике при диагностических исследованиях животных на туберкулёз, бруцеллёз, сап и др. Изучаемый или уже испытанный токсогшазмин вводили строго внутрикожно с помощью шприца ёмкостью I мл и тонких игл / № 28-32 / в дозах 0,05, 0,1, 0,2 и 0,3 мл лошадям, крупному рогатому скоту и ослам в области средней трети шеи; овцам, козам, козерогам и архарам в под-хвостовую или подлоктевую складку кожи; свиньям в центральную часть наружной поверхности уха или же ближе к его основанию; собакам на внутренней поверхности бедра; кроликам и морским свинкам на боковой поверхности груди за лопаткой; курам в бородку.

Перед введением токсоплазмина шерсть на месте предполагаемой инъекции выстригали, кожу обрабатывали 70° спиртом-ректификатом или 3% раствором карболовой кислоты.

Кожную реакцию учитывали через 3-6-12-24, 48, 72 и 96 часов путём осмотра, прощупывания и измерения припухлости и отёка кожи, возникших на месте введения токе аплазии на.

Критерии оценки положительной, сомнительной и отрицательной внутрикожной пробы на токсоплазмоз устанавливали в процессе разработки аллергического метода диагностики токсоплазмоза животных.

Активность токсоплазменных аллергенов, приготовленных по методу Frenkel /1948/, Westphal /1951/, Jacobs, Lunde /1957/ и ILiA.Грачёвой /1961/ из токсоплазм штамма re, определяли с помощью глазной и внутрикожной проб на экспериментально, естественно зараженных токсоплазмами и контрольных здоровых животных.

Динамику накопления антигенных веществ в процессе изготовления токсоплазминов определяли по методу Lowry /1951/.

Антигенные свойства токсоплазминов, приготовленных нами из лабораторного / RH / и полевых штаммов токсоплазм, изучали с помощью РСК. Реакцию ставили по общепринятой методике в объёме 1,25 мл.

С этой целью токсоплазмин вначале разводили физиологическим раствором от 1:2 до 1:64. Затем каждое разведение аллергена было добавлено, вместо антигена, в ряд пробирок при постановке реакции с заведомо положительными, в предельных титрах, и отрицательной кроличьими сыворотками крови.

Контролями служили токсоплазмозный антиген для РСК производства Московского ИЭМ им.Н.Ф.Гамалея, разведенный до рабочего титра и контроли компонентов реакции.

Реакцию оценивали по четырёхбальной системе в крестах.

О степени антигенной активности препаратов судили по высоте их титров, то есть наибольших разведений, способных вызывать задержку гемолиза эритроцитов с положительной сывороткой не менее чем на четыре креста / ++++ /.

Проверку изготовленных токсоплазминов на стерильность производили путём посева на ооычные питательные среды: ыясо-пептон-ный бульон, мясо-пептонный агар для выявления гемолитических стрепто- и стафилококков. Посевы выдерживали в термостате при температуре 37°С в течение 24-96 часов. Для исключения присутствия споровых форм микроорганизмов экспозицию продливали до 7-8 дней.

Визуальное и микроскопическое исследование питательных сред осуществляли обычным способом.

Изучение токсичности и авирулентности токсоплазминов проводилось на взрослых белых мышах весом 18-20 г.

С этой целью испытуемый токсоплазмин в исходной концентрации / 1:20 / внутрибрюшинно вводили 12 мышам в дозе 0,05, 0,1, 0,2 и 0,3 мл. Контрольным - стерильный 0,25% раствор карболовой кислоты на физиологическом растворе или дистиллированной воде.

После введения препаратов за мышами в течение трёх первых часов и последующих четырёх дней вели клиническое наблюдение.

О степени токсичности токсоплазминов судили на основании развития или же отсутствия резких изменении в поведении животных, конечного исхода, а также результатов микроскопических исследований и биологической пробы на наличие возбудителя.

Сравнительное изучение токсоплазминов производили на животных экспериментально зараженных различными методами и в разное время токсоплазмами штаммов: odg, sdk, vfg, stg, fdg, aln, pop, algr, ADP и vfn с помощью внутрикожной пробы. Ответную реакцию кожи учитывали через 24 часа,

Критерием в определении антигенного родства служило совпадение показаний кожной реакции у животных, зараженных токсоплазмами известного штамма в ответ на введение токсоплазмина, приготовленного из возбудителя аналогичного или гетерологично-го штамма.

Продолжительность сохранения активности токсоплазминов выясняли на экспериментально и естественно зараженных токсоплаз-мами одних и тех же серопозитивных по РДСК и здоровых кроликах.

С этой целью с помощью внутрикожной пробы определяли активность свежеприготовленных токсоплазминов, а затем через 3, б, 10, 12 и 18 месяцев после хранения в холодильнике при температуре +4+5°с и комнатной - +20+2б°С.

Контролем служили два токсоплазыина: один свежеполучае-мый из токсоплазм штамма Нн, а другой - медицинский.

Продолжительность сохранения активности устанавливали по степени выраженности реакции кожи животных в ответ на введение испытуемых и контрольных препаратов.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Коломацкий, Александр Прокофьевич

1У. В ы В О д ы

1. Медицинские токсоплазмины недостаточно активны и непригодны для аллергической диагностики токсоплазмоза животных.

2. Токсоплазмин УНИИЭВ представляет собой стерильный, безвредный лизат токсоплазм, полученный путём поочередного 10-кратного замораживания в жидком азоте / - 196°С / с последующим оттаиванием на водяной бане / +60-62°С / взвеси 1:20 возбудителя трофозоитов / в физиологическом растворе высоковирулентного штамма, содержащий 0,280 - 0,320 г% общего белка.

3. С диагностической целью токсоплазмин вводится животным строго внутрикожно, однократно в общепринятые места: крупному рогатому скоту, лошадям и ослам в среднюю треть шеи; свиньям -в центральную часть наружной поверхности уха; овцам, козам, козерогам, архарам в подхвостовую или подлоктевую складку кожи -в дозе 0,2 мл ; собакам на внутренней поверхности бедра в дозе 0,1 или 0,2 мл. Мелким животным - кроликам и морским свинкам на боковой поверхности груди за лопаткой; курам - в бородку в дозе 0,1 мл.

Правильность введения контролируется по образованию припухлости кожи в виде горошины.

4. У крупного рогатого скота, лошадей, ослов, овец, свиней, коз, козерогов, архаров, собак, кроликов, морских свинок и кур с хронической формой течения экспериментальной и естественной токсоплазмозной инвазии внутрикожное введение токсоплазмина УШШЭВ в дозе 0,1 - 0,2 мл вызывает развитие горячей, болезненной, тестоватой отёчности размером 10-12 и более миллиметров в диаметре и гиперемии непигментированной кожи. Клиническое проявление кожной реакции достигает наибольшей выраженности спустя 24-48 часов. В последующие 2-3 суток наблюдается постепенное угасание кожной реакции.

5. Основным критерием оценки аллергической внутрикожной пробы на токсоплазмоз у животных является размер воспалительной отёчности кожи, возникающей в ответ на введение токсоплазмина. При положительной реакции - 10-12 и более миллиметров в диаметре, при сомнительной - у крупных животных до 10 мм, а у мелких до 5 мм. При отрицательной - видимые изменения воспалительного характера отсутствуют или же имеется только незначительное безболезненное уплотнение кожи размером 2-3 мм.

6. Моновалентные токсоплазмины из полевых /odg, gap, cdg, sdk, stg / и лабораторного / rh / штаммов в антигенном отношении являются близкородственными. Незначительные различия в степени их активности, установленные титрацией в РДСК и с помощью внутрикожной аллергической пробы, зависят от количества трофо-зоитов, содержащихся в исходной массе материала.

7. Токсоплазмины из штаммов odg и нн , сохраняемые в холодильнике / +4+5°С / и при температуре +20+2б°С, не теряют своей активности в течение 12 месяцев после изготовления.

8. Внутрикожная аллергическая проба с токсоплазмином УНИИЭВ является простым, легко осуществимым в полевых условиях, высокочувствительным методом прижизненной диагностики латентных форм паразитоносительства у животных. Среди крупного рогатого скота выявлено положительно реагирующих 10%, овец - 8,5%, свиней - 9,1% и кроликов - 20%.

Высокая специфичность аллергического метода подтверждена выделением 14 штаммов возбудителя из организма 17 положительно реагирующих свиней и кроликов, что составляет более 80%.

9. Полевые штаммы токсоплазм /sdkl-2, sdkl-5 и sdkl-8 /, изолированные от свиней, в организме кошек осуществляли половой цикл развития с образованием ооцист, что имеет большое эпидемиологическое и эпизоотологическое значение.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Инструкция по изготовлению токсоплазменного аллергена УНйМЭВ для аллергической диагностики токсоплазмоза сельскохо -зяйственных, домашних и диких животных.

2. Наставление по применению токсоплазменного аллергена УНИИЭВ для аллергической диагностики токсоплазмоза сельскохо -зяйственных, домашних и диких животных.

Заключение

Сравнительный анализ результатов иммунологического и паразитологи ческого обследования свиней на токсоплазмоз показывает, что внутрикожная аллергическая проба с токсоплазмином УНШЭВ является более чувствительным и эффективным методом прижизненной диагностики токсоплазмозной инвазии у этого вида животных по сравнению с РДСК.

В чем и составлен настоящий акт.

Ст.научный сотрудник л а бо рл ngo то зо ологии У

И э В

Директор Харьковской раиветбаклаборатории

Ветврач-серолог

Ветфельдшер хозяйства

Верно: УЧШЙЗ^^Ь

И о В

А .П.КОЛОМАЦКИЙ

П. И. БОРОДАВКА

В.Т.НАДОйМНЫЙ Н.П.ГОДГОРНЫЙ

1/

I/

А.А.ОМЕЛАЕНЮ/ J

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Коломацкий, Александр Прокофьевич, Харьков

1. Акиншина Г.Т., Грачёва Л.И. Получение токсоплазмозного антигена для P K с помощью метода культуры тканей. Тезисы доклаG дов Укр.республ.научно-практич.конш. по проблеме токсоплазмоза. Одесса, 25-27 апреля 1963 г. 34-35.

2. Алаев й.А. Токсоплазмоз плотоядных Узбекистана и некоторые вопросы биологии возбудителя. Автореф.канд.дисо. Алма-Ата, 3 ьакулина Н.А, Реакция непрямой гемагглютинации в диагностике токсоплазмоза. Автореф.канд.дисс. М., 1

3. Бердыев А.С. и токооплазмозе в Туркменской ССР, 1 к н Мате5 риалы I съезда Всесоюзн,об-ва протозоологов. Баку, I97I, 20U-20I.

4. Бронштейн Л.Е. Поражение центральной нервной системы при токооплазмозе. Автореф.канд.дисо. М.,19ь7.

5. Васина Г. К вопросу о наличии цист у Toxoplasma gondii. Мед.паразитол, и паразитарные болезни. I960, 29, 5, 598-601,

6. Васина Г. Реакция с красителем при токооплазмозе. Труды ин-та зоологии А Каз.ССР. Алма-Ата, 1963, 19, 16-30. Н

7. Вустина У.Д., Коновалова С И Тобольская Л.В, Сравнительное изучение серологических тестов в диагностике токсоплазмоза животных. Тезисы докл. У Всесоюзн.конф, по природн,очаговосП ти болезней и общим вопросам паразитол.животы. Алма-Ата Самарканд, 1969, 31-33.

8. Вустина ,Д. Серологическая диагностика токсоплазмоза животных. Автореф.канд.дисс. Алма-Ата, 1970.

9. Вустина У.Д. изучение серологических реакций на сыворотках диких копытных при токооплазмозе. В сб. Вопросы природн,очаговости болезней. Вып.6, Алма-Ата, 1973, I07-II4.

10. Галузо И.Г., Голосов З.И. Токсоплазмоз овец в Алма-Атинской области. В кн.: Паразиты с/х :швотных Казахстана. Алма-Ата, 1962, I 270.

11. Галузо И.Г. Регистр штаммов токсоплазм Toxoplasma gondii, выделенных в СССР. Тр. ин-та зоологии А Каз.ССР. Алма-Ата, Н 1963, 19, 38-42.

12. Галузо И.Г. Штаммы токсоплазм, выделенные от животных, В кн.: Токсоплазмоз животных. Алма-Ата, 1965, 343-357,

13. Галузо й.Г,, Кривкова А,М. Новые каналы циркуляции токсоплазм в природе, "известия А Каз.ССР, сер.биол.",1970, вып. 5. Н

14. Галузо И.Г. Новые данные в жзученрш жизненного цикла токсоллазм и использование их в практике. В к н И.Г.Галузо и СИ.Коноваловой "Диагностжа токсоплазмоза животных*. Алма-Ата, 1971а, 122-136.

15. Галузо И.Г. Новое в развитии токсоплазм и их циркуляции в природе. В кн.: Всесоюзный сшушозиум по токсоплазмозу. iVi., I97I, Ю I I

16. Галузо И.Г. Новое о токсоплазмах и их циркуляции в природе. В кн.: Материалы I съезда Всесоюзн. об-ва протозоологов. Баку, I97IB, 25-27.

17. Галузо И.Г., Бугаев A.M. О }КйЗненном цикле Toxoplasma gondii и положении вида в системе. В кн.: Материалы I съезда всесоюзного об-ва протозоологов. Баку, I97I, 201-203.

18. Галузо И.Г., Коновалова СИ. Диагностика токсоплазмоза животных. Ажш-Ата, I97I, 144.

19. Галузо И,Г., Коновалова С И Бугаев A.M. Жизненный цикл токсоплазм и их циркуляция в природе. В с б Вопросы природной очаговости болезней. Вып. 5, Алма-Ата, 1972, 64-99.

20. Галузо И.Г., Коновалова СИ. Иглмунитет при разных стадиях развития токсоплазм. В кн.: Жизненный цикл токсоплазм. Изд. Наука, Ажла-Ата, 1974, 193-209.

21. Галузо И.Г. О положении Toxoplasma gondii в системе простейших. в кн.: Жизненный цикл токсоплазм. Изд. Наука, ЬжаАта, 1974, 219-221.

22. Грачева Л.И. Материалы по изучению внутрикожной пробы при токсошхазмозе. Б кн.: Вопросы токсоплазмоза. Тезисы докл. конф. М., I96I, 8-10.

23. Грачева Л.л. Приготовление аллергена для внутрикожнои реакции при токсоплазмозе. Журнал микроб., эяидемиол. и шшунологии, I96I, 7, 124-126.

24. Грачева Л.И. Результаты обследования населения внутрикожнои аллергической пробой с токсоплазмииом. В кн.: Токсоплазмоз. /Эпидемиология, клиника, диагностика и лечение/. Наушше труды Центр, ин-та усовершенст. врачей, М., 1963, 4-5.

25. Грачева Л.И., Градковская Н.ь. Сравнительная оценка диагностических тестов на токсоплазмоз. Б кн.: Всесоюзн. СШУШОЗИум погоксоплазмозу. Краткие тезисы. 14-16 декабря I97I, ш., 62.

26. Григорашенко А.И., Мельник М.Н., Севастьянова Н.И., Богдашок Л.С Роль внутршюжной аллергической пробы с токсо плазмином Б диагностике обследования очага эпизоотии токсоплазмоза. В кн.: Проблемы токсоплазмоза животных. АЖла-Ата, 1966, 32-34.

27. Пгоров И.и>., Ковалюх А.И., Смага М.у., Павлова Е.В. Сравнительнае показатели реакции связывания комплемента и внутрикожной пробы при диагностше токсоплазмоза. Журнал микроб., эяидемиол. и шмунолог., 1962, 10, 51-54.

28. Засухин Да!., Акиншина Г.Т., Калякин В Л!. Новые данные о Toxoplasma gondii И С О Н Х паразитах. В кн.: Ыагеоиалы I съеХДЫ зда Бсесоюзн. об-ва протозоологов. Баку, 1971, 120-122.

29. Калякин B.ti. Токсоплазмы и дикие ;алекопитающие. В кн.: Zone-хи протозоологии. Тезисы докл. и сообщен., представлен. I I I хлеждунар. конгрессу протозоологов. Л., 1969, 246-247. о2. .ласпаоов Р.Л. Toкcoплaзivюз каракульских овец в условиях Сагларкандскок области Узбекистана. Автореш. канд. дрюс. Самарканд, 1971.

30. Яастравец И.З. Экспериментальный токсоплазмоз овец. Об.: Паразиты животных и растений. Зып. U Наука, М., 1968. 34. х{астраБец И.З. Предварительные данные кivlмyнoлoгичecкoгo обследования крупного рогатого скота на токсоплазмоз в Молдавии, В кн.: Материалы I съезда Всесоюзн. об-ва протозоологов. Batty, ib 1 218.

31. Ковалева Е.и. Оценка специфичности аллершческок кожной пробы на токсоплазмоз» В кн.: У Всесоюзн. конф. врачей-лаборантов. Тезисы докл. iL I96I, 30-31. vio. Ковалева В.П., Рыбалтовский О.В., 1&аяова ;.1.А. и Дедаш В.Г. уюследование свшей м крупного рогатого скота по РСК на токсоплазмоз. Ветеринария, 1962, В, 2±-26.

32. Коломацький O.ii., Лапшин 1,1.М., Андрус ci.I. В1шчення алерг1чЕого методу д1агностики токсои-аазмозу TBapnii. Зетеоинасия. Респ. М1жв1д. темат. наук, з б КИ1Б, 1969, вия. 23, 90-110.

33. Коломаыкий А...., Лапшин К.ш., Лапшина Т.П. Изоляция штаммов Toxoplasma gondii ОТ лабораторных И сельскохозяжственныс Ш1В0ТНЫХ. Тез. докл. научн. произвол, конф. по пробл.: "Паразитарные болезни с/х животных". .VIHHCK, 1972, 27-29.

34. Коломацрши А.П., Лапшин Н.Ы., Лапшина Тл

35. Диагностика латентного токсоплазмоза свиней. Труды УН научн. конш. паоазитологов УССР. Киев, 1972, ч.Х, 378-380. iO. Коломаиький С и Лапшин Ы.л., Лашияа Т.И. Морйолого-б1олоГ1ЧН1 особливое г 1 ЗИГОЦИСТ Toxoplasma g o n d i i Респ. м1жв1Д. темат. наук, з б Ки1в, 1974, вип. 38, 71-80.

36. Коломацкии А.а. Лапшин Н.М. Дщферешщащт морфологических и биологических разлишш экзогенных срорм Toxopia"sraa gondii и isospora f e i i s .Материалы Jill научн. кониз. паразитологов УССР, Киев, 1975, ч 1 239-240.

37. Коновалова СИ. Особенности шмйувЕТдта при токсоплазмозе. Материалы Всесоюзн. симпозиума по токсогшазмозу. М., I97I, 42-4". ВвТ31>кктр1Я,

38. Коновалова С И Биологические особенности токсоплазх\1 их цись куляцш в природе и вопросы иммунитета. Автореф. докт. дисс. /шла-Ата, 1972.

39. Корнилова Г.В., Коновалова С И Об иммунитете у кроликов яри экспериментальном токсоплазмозе. Материалы к Бсесоюзн. коню. по гоксоплазмозу животных. Алма-Ата, 1966, 126-127.

40. Корнилова Г.В., Коновалова С И Современное представление о механизме шшунитега к токсоплазмам. В сб.: У Н Всесоюзной конф. по природн. очаговоегй болезней и общим вопросам паоазитол. животных. Алма-Ата Сшларканд, 1969, 41-42.

41. Косяков il.H. Клеточные факторы и механизмы противомикробного иммунитета в свете идей Мечникова. В кн.: уМлунологическая реактивность органов при введении бактеррюлогических препаратов. М., 1970, т. 8.

42. Кочарли А С О возможности применения реакции аллергии для диагностики токсоплазмоза животных и птиц. Известия АН Аз. ССР, сер. биологйчн. наук. Баку, 196Я, 4, 49-52.

43. Красов В.М., Галузо И.Г., Омаров Ж.К., Боровиков А.А., Бокова Е.М. Антиген для серологической диагностики токсоплазмоза сельскохозяйственных животных. Состояние изученности кровепа разитарных и малоизученных протозойяых болеяней сельскохозяйственных живот11ых и перспективы их лршвидации в стране. Тезисы докл. на научи, конф. Самарканд, 1975, 75-76.

44. Кривец Т.А. Плазмоцитарная реакщш у белых крыс, вызванная повторным;>введеяжем токсоплазм штамма RH В кн.: Токсоплазмоз. Киев, 1971, 41-51. Ю. Кузовкин Е.М. Токсоплазмоз свиней в Казахстане. Б кн.: Природная очаговость болезней и вопросы паразитологш. Фрунзе, 1964, 186-187. f- Кузовкин Е.М. Токсоплазмоз свиней. В кн.: Токсоплазмоз животных. ктла-кта, 1965, 66-126.

45. Кузовкин Е.И., Коломацкий А.И. Течение и формы клинического проявления эксперимантальяого токсоплазмоза у свиней. Материалы Бсесоюзн. сршпозиума по токсоплазмозу. Уи, I97I, 172-173.

46. Кузовкин E.ivl., Микитюк В.В., Коломацкий А. 11., Лашин Н.М., Котляр З.И. Выживаемость токсоплазм в организме синаятропных мух и муравьев рода Formica. Материалы I I Всесоюзного съезда протозоологов. Киев, 1976, ч.Х, 80-81.

47. Лапшин Н.М., Глущенко В.В. К вопросу о серологической ддатностике токсоплазмоза домашних и сельскохозяйственных животных. Тезисы докл. Укр. респ. научно-практичн. конф. по проблеме токсоплазмоза. Одесса, 1963, 112.

48. Лапшш Н.М., Коломацкий А.П. Результаты изучения распространения, методов диагностики и терапии токсоплазмоза животных. Труды У конф. паразитологов УССР. Киев, 1966, 106-107.

49. Лапшин li.M., Коломацкий А.П. К вопросу эпизоотологии и диагностики токсоплазмоза сельскохозяйственных животнкх на Украине. Тезисы докл. научно-производств. конф. по совершенств. методов борьбы с паразитозами с/х зшвотн. Минск, 1956, 9495.

50. Лапшин Н.М., Коломацкий А.П, Методы диагностики токсоплазмоза животных. Материалы к Всесоюзн. конф. по токсоплазмозу. Алма-Ата, 1966, Зь-37.

51. Лапшин Н.М., Коломацкий А.П. Изучение экспериментального токсоплазмоза животных. Ветеринария. Республ. иежведомств. тематмчн. сб. Киев, вып. 15, 92-99. so Лапшин Н.М., Коломацкий А.П. Состояние и результаты изучения токсоплазмоза животных на территории У{ХР. Токсоплазыоз. Республ. межведомств, сб. Киев, I97I, 27-28.

52. Левит А.В. К серологической диагностике токсоплазмоза. Труды йн-та зоологии АН Каз.ССР. Алма-Ата, I960, 12, 75-77.

53. Литвйненко В.И. К вопросу рационального .использования некоторых лабораторных методов при диагностике токсоплазмоза. Материалы к Всесоюзн. конф. по токсоплазмозу животных. Алма-Ата, 1966, 37-38.

54. Магеррамов Б.Г. Токсоплазмоз в Азербайджане и некоторые вопросы экспериментального иммунитета при этой инфекции. Автореб;. докт. дисс. Баку, 1969.

55. Маккаев М.Х. Материалы о распространении токсоплазмоза крупного и мелкого рогатого скота в Дагестанской АССР. Известия АН Аз. ССР, сер. биол. наук, Баку, 1969, 4, 46-50.

56. Маккаев М.Х. Токсоплазмоз домашних и диких животных в Дагестане. Автореф. канд. дисс. Баку, 1972,

57. Маиков А.А., Степанова Н.Й., Тимофеев Б.А. Изучение токсоплазмоза свиней. Ветеринария, 1965, 7, 45-46.

58. Мельник М.Н., Нестерова Е.Н., Григоращенко А.Г, Пути профилактики токсоплазмоза. В кн.: Актуальные проблемы токсоплазмоза. М., 1972, 121-127.

59. Михайлова П.В., Чернышева П.В., Лапшин Н.М., Коломацький А.П До питания стерильного гмунхтету при токсоплазмоз!. Ветеринар!я. Республ М 1 Ж Б 1 Д тематичн. науков. зб. Кихв, 1974, вип.39, 33-35.

60. Уольченко Е.Ф. Вопросы иммунитета при экспериментальном токсоплазыозе. Материалы Всесоюзн. симпозиума по токсоплазмозу. М., I97I, 43-44. 69 Нетребко И.Д., Касьянова Л.П., йова Н.А,, Береговая Л.А., Филипкович Н.М.д Омельченко М.П., Федорченко Ф.В., Мейзлер М.С., Глушко В.Г. Клинические признаки токсоплазмоза. Ветеринария. М., 1968, 10, 68-70.

61. Рябова Л.Ф. Иммунологическая реактивность на токсоплазмоз крупного рогатого скота в некоторых районах Ленинграда и области. Научн. тр. Ленинградского ин-та усовершен. врачей им. М.Кирова, I97I, вып.116, 200-206.

62. Садккова С Б Токсоплазмоз крупного рогатого скота, свиней и птиц в хозяйствах Самаркандской области Узбекской ССР. Автореф. канд. дисс. Душанбе, 1974.

63. Саляев В.А., Шустров А.К. Биологические особенности токсоплазмоза и методика получения антигена. Материалы X совещания по паразйтол. проблемам. М.-Л., 1959, 2, 227.

64. Сыргабаева З.Р., Воробьева В.Н. Возможность стабилизации компонентов токсоплазменного диагностикума, применяемого в реакции связывания комплемента. В сб.: Седьмая Всесоюзн. конш. по природн. очаговости болезней и общим вопросам паразитологии животных. Секция токсоплазмоза. Алма-Ата Самарканд, 1969, 82-84.

65. Тимофеев Б.А., Акулов А.В. Жизненный цикл токсоплазм и их эпизоотическая опасность для животных. Журнал сельхоз. биология, 1975, т.10, 257-263.

66. Умбеталиев С С Влияние некоторых химических веществ на зигоцисты токсоплазм вне организма хозяина. Труды ин-та зоологии АН Каз.ССР. Алма-Ата, 1975, 13.

67. Умбеталиев С С Влияние физико-химических факторов на выживаемость зигоцист токсоплазм в природе. В сб.: Природноочаговые антропозоонозы. Материалы к IX Всесоюзн. конф. по природ. очаговости болезн. человека и животных. Омск, 1976, 221-222.

68. Шевкунова Е.А., Мищенко Н.К., Засухин Д.Н. Некоторые данные по обследованию сельскохозяйственных животных на токсоплазмоз, Журнал микробиол. эпидем. и иммунолог., 1961, б, 125-128.

69. Шевкунова Е.А., Виноградова Л.И. Сравнительная оценка реакции Флюоресцирующих антител и других иммунологических тестов в лабораторной диагностике токсоплазмоза. В сб.: Седьмая Всесоюзная кони, по природн. очагов, болезней и общим вопросам паразйтол. Алма-Ата Самарканд, 1969, 94-96.

70. Шевкунова Е.А. Лабораторная диагностика токсоплазмоза. В кн.: Актуальные проблемы токсоплазмоза. М., 1972, 38-46.

71. Шевкунова Е.А,, Нугуманова М.Ф. Оценка эффективности различных методов обнаружения токсоплазм у экспериментально зараженных животных. Журнал мед. паразитол. и паразитарн. болезни, 1974, 43, б, 672-676.

72. Шибалова Т.А., Петренко В.И. Развитие isospora bigemina в культуре ткани при заражении спорозоитами. Паразитология, 1972, Т.У1, вып.З.

73. Шпак Н.И. Современное состояние проблемы токсоплазмоза в офтальмологии. Токсоплазмоз. Республ. меетедомств. сб. Киев, I97I, 89-95.

74. Шустров А.К., Хавкин Т.Н. Реактивные процессы в брюшине морских свинок и белых мышей при инвазии штшаюм нн Toxoplasma gondii. Токсоплазмоз. Республ. межведомсств. сб. Киев, I97I, 52-53.

75. Altshuler G. Toxoplasmosis as a cause of hydranencephaly. Am.J.Dis.Child.,1973,125,251-252.

76. Amaral V., Macruz R. Toxoplasma gondii: isolamento de amostras a partir de diafragmas de swines clinioamente sadios, ahatidos, em matadowros de Sao Paulo Brazil. Arquivos Inst. biol.,1969,36,1,47-54.

77. Amaral V., Santos S., Reboucas M. Preliminary studies on the prevalence of antitoxoplasma haemaglutinating antibodies in serum samples from swine in Sao Paulo and Rio Grande de Sul States, Brazil. Biologico,1975,41(4),105-107.

78. Ангелов С Гълъбов С Гигов А., Николов П. Токсоплазмозата по домашните животни. Селскостоп. мисъл., 1958, 3, 2,133-138.

79. Arsher J.Р., Beverley J.К., Watson W.A., Hunter D. Further field studies on the fluorescent antibody test in the diagnosio of ovine abortion due to toxoplasmosis. Vet.Rec.,1971, 88,7,178-180.

80. Ardujo F.G., Wong M.M., Theis J., Remington J. Experimental Toxoplasma gondii infection in a попкхшап primate. Amer.J. Trop.Med.and Hyg.,1973,22,4,465-472.

81. Арназдов Д. Прочване въерх распространениею на токсоплазыозата по селскостопанските животни, Вет.мед.наук,1971,7,61.

82. Aurstad К. Toxoplasmose og dens naeringsmiddelhygieniske betydning. Norsk veterinaertidsskr.,1972,84,9,512-516.

83. Balducci D., Tyrrel D. Quantitative studies of Toxoplasma gondii in culture of tripsindispersed mammalian cells. Brit. J.Ixp.Pathol.,1956,37,2,168-178.

84. Beverley J.K. Krankheitsbilder, Pathogenese und Prophylaxe der Toxoplasmose bei Tieren. Monatsh.Veterinarmed.,1971,26, 23,893-900.

85. Betz A* Серологическая диагностика токсоплазмоза с помощью антигенов, полеченных на клеточных культэрах. Бюл. Всемирн. организ. здравоохр., 1968, 39, 3, 370-376.

86. Boch J.M., Rommel M.und Janitsohke R. Beitrage zur Toxoplasmose des Schweines. Berl.Munch.Tierarztl.Wsohr.,1964,77,244.

87. Boch J., Rommel G., Weiland K,, Janitohke und Sommer R. Experimentelle Toxoplasma-Infectionen bei Legehennen. Berl. Munch.Tierarztl.Wsohr.,1966,79,18,352-356.

88. Braveni I., Disko R. Der Toxoplasma-Immunfluoreszenztest: Standardisierung und Bedeutung. Arztl.Lab.,1976,22,1,16-20.

89. Budde E., Naumann G., Quoss A. Der Eeinstufen-Fluoreszenzhemmtest zum Kachweis von Antikorpern gegen Toxoplasma gondii. Pathol.et Microbiol.,1969,33,6,336-343.

90. Carmichael G.A. The application of the indirect fluorescent antibody technique for the detection of toxoplasmosis. Can,J.Med.Teohnol.,1975,37,6,168-178.

91. Chessum B.S. Examination of sera for toxoplasmosis antibody using immunofluorescence. J.Med.Lab.Technol.,X970,27,X, 49-54.

92. Cuboni E. Lintradermoreazione con il Toxoplasma gondii. Boll.Xst.Sieroter.Milan,1958,37,II-X2.

93. Desmonts G. Diagnostic serologique de la toxoplasmose. Semaine hopitaux, Pathol.et biol., I960, 8,1-2, I09-X25.

94. Desmonts G., Couvreur J. Congenital toxoplasmosis. N.Engl. J.Med., 1974,290,20,XXX0-XXI6.

95. Dorosz J., Tos-Luty S., Uminski J, Badania serologiczne i alergiczne owczarkow niemieokich w kierunku toksoplasmozy. Medecyna Wet.,1968,X,5-8.

96. Dubey J.P., Miller N.L. and Frenkel J.K. The Toxoplasma gondii oocyst from cat Feces. J.Exptl.Med.,X970,132,636-662.

97. Dubey J.P., Miller N.L,, Frenkel J.K. Charecterization of the new fecal form of Toxoplasma gondii. J.Parasitology, 1970,56,3,447-456.

98. Durfee P.Т., Leksana S.B., Joseph S.W., Koesharjono C. The relationship between haemagglutinating antibody titres and infection with Toxoplasma gondii in swine. South As.J. Trop.Med.Publ.Healht.,I974,5,I,4-8, 1X

99. Dymowska Z. Wlaoiwosci immunologiczne i patogennosc Toxoplasma gondii. Warszawa, 1966. XX

100. Eiohenwald H.F. Experimental toxoplasmosis. II.Effect of sulfadiazine and antiserum on congenital toxoplasmosis in mice. Proc.Soo.Exper.Biol.,1949,71,1,45-49. 1X5, Enders B., Henning J. Zur Serodiagnose veterinarmedizinisch bedeutssuner Endoparasitosen. Blauen Hefte Tierarztl., 1973, 50,543-552.

101. Feldman H.A., Sabin H. Skin reaction to toxoplasmose antigen in peaple of different ages withaut known history of infection. Pediatrics, 1949,4,6,798-804.

102. Feldman H.A., Lamb G.A. Microraodifioation of the toxoplasma dye test. J.Parasitol.,1966,52,2,4X5. XX

103. Folkers С Evaluation of Aagaards method in the search for activator sera for the Sabin-Feldman test in toxoplasmosis. Nature,1964,202,4929,307,

104. Frei U. Toxoplasmen-Aborte bei Schafen in der Schweiz. Schweiz.Arch.Tierheilk.,1975,1X7,7,401-406.

105. Frenkel J.K. Dermal hypersensitivity to toxoplasma antigens (Toxoplasmin). Proc.Soc.Exper.Biol.Med.,1948,68,3,634-639.

106. Frenkel J.K. Pathogenesis of toxoplasmosis and of infections with organism resembling Toxoplasma. Ann.N.Y.Acad.Sci., 1956,64,2,215-251.

107. Frenkel J.K., Dubey J.P., Miller N.L. Toxoplasma gondii: A coccidian of cats, with a wide range of mammalian and avian intermediate hosts. J.Parasitol,,1970,56,4,107.

108. Frenkel J.K., Miller R.b., Dubey J.P. Toxoplasma gondii in cats: fecal stages identified as coccidian oocysts. Science ,1970,167,3919т 893-896.

109. Frenkel J.K. Toxoplasmosis: Parasite, life cycle, pathology, immunology. In the coccidia: Eimeria, Isospora, Toxoplasma and Related Genera. Univ.Park Press, Baltimore,1973, 343-410.

110. Frenkel J.K. Toxoplasmosis in cats and man. Feline Practice, I975,5,I,28-29x

111. Gabrys K. Toxoplasmosis skine test and allergometry in dogs. Mh.Vet.Med.,1964,19,228-230.

112. Garnham P.O., Lainson R. Sheep as a potential reservoir of toxoplasma for man. Yet.record, 1960,72,41,835-858.

113. Giroud P., Roger F., Le Gac P. La valeur de Iisolement des souches de toxoplasme ne peut etre raise en doute par Iexistence daffections possibles des animaux de laboratoire dans un elevage correctement surveille. Bull.Soc.Path.Exot., 1956,49,1,31-35.

114. Gustavo S.G. Toxoplasmosis. Araer.J.Clin.Pathol.,1975,63,6, 909-9X5.

115. Hartley W,, Bridge P. A case of suspected congenital Toxoplasma encephalomyelitis in a lamb associated with a spinal cord anomaly. Brit.vet.J.,1975,4,380-384.

116. Hellmann E., Tauscher L. Occurrence of Toxoplasma in fresh beef and pork. Berl.Munch.Tierarztl.Wschr,,1967,80,209-212.

117. Hume O.S. Toxoplasmosis and pregnancy. Am.J.Obst. and Gynea, 1972,114,703-7X5.

118. Hutchison W.M. Observations on the faecal transmission of Toxoplasma gondii. Acta pathol.microbiol.Scand.,1969,77,2, 275-282.

119. Hutchison W.M., Dunachie J.F. Vork K., Siira J.С The life cycle of the coccidian parasite Toxoplasma gondii in the domestic oat. Tr.Roy.Sos.Trop.Med.and Hyg.l97X,65,380-399. J

120. Xindrichova J., Kraraarova K., Rosicky В., Jira J., Simko A. The cat as a possible source of Toxoplasma infection for man. Folia parasitol.,1975,22,4,309-3X5.

121. Ishizuka М.М., Miguel 0., Franca В. Estudo comparativo das provas de Sabin-Feldman e immunofluorescencia Indireota (IFI) com a de hemaglutinaoao (HA) para a avaliacao de anticorpos antl-toxoplasma em soros de caes. Rev.Fac.raed.vet.e zootec.Univ.Sao Paulo,1974,11,133-138. 137. Ito S. Destructive effect of heating against toxoplasma oocysts. Nat.Inst.Anim.Healrh.Q.,1975,15,3,128-130.

122. Jacobs L., Melton M. Immunity in murine toxoplasmosis. J.Parasitol.,1955,41,6,2,20.

123. Jacobs L. Propagationraorfologyand biology of toxoplasma. Ann.N.Y.Acad.Sci.,1956,64,2,154-179.

124. Jacobs L., Lunde M. A hemagglutination test for toxoplasmosis. J.Parasitol., 1957,43,308-314.

125. Jacobs L., Melton M. A procedure for testing meat samples for toxoplasma with preliminary results of a survey of pork samples. J.Parasitol,,1957a,43,suppl,,5,38-39.

126. Jacobs L., Remington J.S., Melton M.L. The resistance of the encysted forms of Toxoplasma gondii. J.Parasitol.,1960,46,

127. Jacobs L,, Remington J.S., Melton M.L. A survey of meat samples from swine, cattle and sheep for the presence of encysted Toxoplasma. J.Parasitol.,1960,46,1,23-28.

128. Jadin J., Francosis J., Y/ery M., Van de Casteele J. Limmunite dans la toxoplasmose experimentale. Ann.Soc.beige med. trop.,1965,45,2,161-168.

129. Janitscke K. Further investigations on the fecal form of Toxoplasma gondii. J.Parasitol.,1970,56,4,430.

130. Jewell M.L., Frenkel J.K., Johnson K.M., Reed V., Ruiz A. Development of toxoplasma oocysts in neotropical Felidae. Am.J.Trop.Med.,1972,21,512-517.

131. Jirovec 0., Jira J. Pouziti toxoplasmineveho testu joko standardni diagnosticke metody v klinicke praxi. Acta Univ. Carolinae, Biol., 1958,127-143.

132. Toxoplasma gondii und Toxoplasmosis. Parasitol. fur Arzte.Jena,6,Tischer Verl.,1960,226-255.

133. Katsube Y. Latent infection of Toxoplasma in swine eyes and diaJJhragm. Japan J.Med.Sci. and Biol. ,1968,21,6,427-430.

134. Katsube Y., Hagiwara T. Studies on toxoplasmosis. Distribution of Toxoplasma in the organs of cat and dog cases of latent infection occurring naturally. Japan J.Med.Sci. and Biol.,1969,22,5,319-326.

135. Katsube Y. Reliability of the dye and modified hemagglutination tests for the lant infection of Toxoplasma. Japan J. Vet.Sci.,1972,34,3,123-133.

136. Kimball A C Kean B.H. Fuchs F. Congenital Toxoplasmosis: a prospective study 4,048 obstetric patients. Ara.J.Obst. and Gynec,1971,1X1,211-218.

137. Kjell A. Toxoplasraose og dens naeringmiddelygieniske betydning. Norsk veterinaertidsskr.,1972,84,9,512-516.

138. Kobayashi A., Kuraada M. Studies on the accessory factor for toxoplasma dye test gwinea pig serum as a sowrce of the accesory factor. Japan J.Med.Sci. and Biol.,1969,22,5,327-336.

139. Kordy M.I. A new stain technique for the diagnosis of intestinal protozoa. J.Egypt.Med.Assoc.,1973,56,3,274-276.

140. Korting H.J. Toxoplasraose Koraplementbindugsreaction rait ultraschallbehandelten Antigenen. Zbl.Bact.Abt.Orig.,1960, 179,2,278-288.

141. Krahenbuhl J.L., Ruskin J., Remington J. The use of killed vaccines in immunization against an intracellular parasite: Toxoplasma gondii. J.Immunol.,1972,108,2,425-431.

142. Krause A.C. Toxoplasma in tissues ofгагалand pets. J.Parasitol.,1955,41,5,545-548.

143. Kuhn D,, Weiland G. Experimentelle Toxoplasraa-Infectionen bei der Katze. I.Wiedarholte ubertragung von Toxoplasma gondii durch Kot von mit Nematoden infizierten Katzen. Berl.Munch.Tierarztl.Wchnschr.,1969,82,401-404.

144. Kulasiri C. The specifity of the Sabin-Feldman dye test with the reference to protozoal infections. J.Clin.Pathol., I960, 13,4,339-348.

145. Kunstyr I., Jira J., Princova D., Mika J. Survey of toxoplasma antibodies in domestic rabits. Follia parasitol., 1970, 17,3,277-280. 162. Lai C.H. The mechanism of immunity of Toxoplasma gondii. Dissert.Abstr.Internat.,1975,36 B(l)I22.

146. Lagardere В., Gentilini M. Le cycle la toxoplasraose. Nouv.Press.med.,1973,2,23,1600.

147. Lang K. Studien zum Toxoplasmose-problera. II.Mitt Die Toxoplasraose aus der sicht der Fleisch und Lebensmittelhygiene. Fleischwirtschaft., 1964,16,6,514-518.

148. Lowry H.O., Rosenbroug T.N., Farr G.A., Randall R.I. J.Biol.Chera.,1951,193,265.

149. Lunde M.N., Jacobs L. Properties of toxoplasma lysates toxic to rabbits on intravenous injection.- L.J.Parasitol., 1964, 50,1,49-51.

150. Matsubayashi H., Akao S. Morphological studies on the development of the toxoplasma cyst. Amer.J.Trop.Med. and Hyg., 1963,12,3,321-333.

151. Miller N.L., Frenkel J.K., Duhey J.P. Oral infections with Toxoplasma cysts and oocysts in Felines, orther mammalis and in birds. J.Parasitol.,1972,58,928-937.

152. Morin 0., Vermeil С Le serum de cobaye citrate peut-il etre utilise comme complement de Lepreuve de lyse. Ann. parasitol.hum. et сотр. ,1973 ,48,3 ,423--428.

153. Morin 0., Kapek B. Nouvelle contribution a Ietude de la toxoplasraose oculaire dans Iouest de la France. Ann.parasitol.hum. et сотр.,1975,50,2,161-165.

154. Nakayama J. Persistence of the rirulent RH strain of Toxoplasma gondii in the brains of immune mice. Keio jour.med., 1964,13,1,7.

155. Nicolle C Manceaux L. Sur un protozoaire noureau du gondii Toxoplasma. Arch.Inst.Pasteur.Tunis,1909,2,37-109.

156. Nicolau S., Ravelo A. La reaction de fixation du complement dans le serum et dans des extraits dorganes danimaux atteints de toxoplasmose experiraentale. Bull.Soc.Path.Exot., 1937,30,855-859.

157. Nobuto K., Sato U., Hanaki T. Preparation of the concentrated skine-test antigen for swine toxoplasmosis. Japan.J. Vet.Sci. ,1962,24,297-308.

158. Nobuto K., Sato U,, Hanaki T. Preparation of the concentrated skine-test antigen for portine toxoplasmosis (TSC-antigen). Bull.off.int.Epiaoot.,1964,61,437-455.

159. Nobuto K., Hanaki Т., Koiaumi Т., Yonemochi K. Some aspects of natural infection of toxoplasmosis in pigs. Nath.Inst. Anim.Hlth.Qt.,Току0,1969,9,136-148.

160. Nunen M.C., Veen J. Examination for toxoplasmosis by the fluorescent antibody technique. Trop. and Geogr.Med. 1965, 17,3,246-253. 178. OBrien J.J., Mc Caughey W.J., Hanna J. Abortion in sheep in Northern irelandyetanother cause. Agr.North.Irel.,1971, 46,7,218-219.

161. Otten E., Piekarski G., Westphal A. Die Bedeutung der Toxoplasmose fur die Veterinarmedizin. Dtsch.Tierarztl.Wschr., 1951,58,24-26.

162. OverdulYe J.P. The identity of Toxoplasma Nicolle and Manceaux, 1909 with Isospora Schneider I88I. Proc.Kon.Med. Akad.Wetensch.Ser.C,1970,73,129-151.

163. Overdulve J.P. The probable identity of Toxoplasma and Isospora and the role of the cat in the transmission of toxoplasmosis. TiJdschr.Diergeneesk., 1970b,95,149-155.

164. Palicka P. Vyskyt toxoplasmozy u lidi a hospodarskych zvirat. Veterlnarstvi,1975,25,10,457-458.

165. Pellerdy L., Janko M. Toxoplasmosis. Magyar allatory.LapJa, 1974,29,11,784-787.

166. Perkins E.S. Ocular Toxoplasmosis. Brit.J.Gphth.,1975,57, I-I7.

167. Pettersen Б.К. Preparation of Toxoplasma gondii antigen for the complement-fixation test. Acta pathol, et microbiol.Scand.,1968,74,1,35-40.

168. Peychl L., Zastera M., Dostal Yt ЙатОЛОГИЯ ТОКСОПЛазМОЗа лимфатических узлов. /Аннотация/. 1урн. гигиены, эпид., микробиол. и иммунологии., 1976, 20, 2, 229-231.

169. Рокоту J., Truhbauer Z., Curio В., Zastera М. Komplementfixacni antigen toxoplasma gondii pripraveny tween-eterovou preparaci.Ceskosl.epid.mikrobiol.immunol.,1971,20,2,73-74.

170. Quinn P., Mc Craw B. Current status of Toxoplasma and toxoplasmosis. Canad.veter.J.,1972,13,11,247-262. 189. Rey C.J., Mira G. Estudio de las fracciones de los antiouerpos responsables de las pruebas serologicas en la toxoplasmosis: „immunofluorescencia indireeta, hemoaglutinacion у dye test. Rev.iber.parasitol.,1966,26,4,391-403.

171. Richter J. Pouziti neprime fluorescencni metody к diagnostioe protilatek vazanych na frakci igm u Trozene toxoplasmozy. Casop.lekaru.cesk,,1969,108,51,1553-1554.

172. Riemann H.P., Howarth J.A., Ruppanner R,, Franti C.E. Toxoplasma antibodies among bobcats and other carnivores of Northern California. J.Wildlife diseases, 1975,11,2,272-276.

173. Rifaat M.A., Michael S.A., Morsy T.A. Toxoplasmin skin test survey among buffaloes and cattle in UiiR. J.trop.Med.Hyg., 1968,71,297-298.

174. Robertson A., Bannister G., Ruckerbauer G., Poulanger P. Toxoplasmosis. II.Studies of animalsera using complementfixation tests. Canad.J.Compar.Med. and Yet.Sci. ,1963 ,27, 7,169-175.

175. Roger F. Lisolement de la souche reste le seul critere indiscutable didentification du toxoplasme lorsque le diagnostic doit etre pose sur des pieces dautopie. Bull.See. Path.Exot.,1956,2,239-241.

176. Rhode R. Der Toxoplasminhauttest beim Hund, ein diagnostisches Hilfsmittel fur die Praxis. Monatsch.Yeterinar.Med., 1959,19,594-597.

177. Rommel M. The nature of immunity against protozoa. Berl.Munch.Tierarztl.vschr. ,1970,83,461-465.

178. Ruckerbauer G.M., Robertson A. Toxoplasmosis. I.Stadies by the fluorescein-labelled antibody technique. Canad.J.Cornpar.Med. a.Vet.Sci., 1963,27,2,27-33.

179. Ruskin J., Remington J.S. Resistance to intracellular infection in mice immunised with toxoplasma vacoine aad adjuvant. RES J.Reticuloendothel.,SoG.,1971,9,5,465-479.

180. Sabin A.В., Feldman H.A. Dyes as microchemioal indicators of a new immunity phenomen affecting a protozoon parasite (Toxoplasma). Science,1948,108,2815,660-663.

181. Satao N. Etudes sur la repartition des anticorps du dye test Chez les animaux dHokkaido et sur Iantigene fixant le complement dans la toxoplasraose. Japan J.Yet.Res.,1960,8,2,217.

182. Sato U., Hanaki Т., Nishimura V., Nobuto K. Determination of minimum infectious doses of toxoplasma in swine by intranasal and intraperitoneal routes and haematological finding infected swine. J.Japan.Vet.Med.Ass.,1961,14,518-522.

183. Sato U,, Hanaki Т., Nobuto K. Haemogglutination test for porcine toxoplasmosis with TSC antigen. J.Japan.Vet.Med.Ass., 1962,15,273-278.

184. Schuhora V., Stumpa G., ZavadoTa H. Приготовление на тканевых культурах связывающего комплемент токсоплазматического антигена. Журн. гигиены, эпид. микроб, иммунол., 1963, 7, I, 99-106.

185. Sharman G. Studies of serological reactions in ovine toxoplasmosis encountered in intensively-bred sheep. Veter.Res., 1972,91,27,670-675.

186. Sheffild H.G., Melton M.L. Observations on the sporozoites of Toxoplasma gondii and their behaviour in cultured cells. J.Parasitol., 1970,56,4,Sec.II,

187. Sheffield E.G., Melton M.L. Toxoplasma gondii: The oocyst sporozoite and infection of culture cells. Science,1970,167, 892-893. 206.

188. Shimizu K. Studies on toxoplasmosis. IV.Complement-fixing antigen from the tissue culture fluid. Japan J.Vet.Sci.,1961, 23,3,167-180.

189. Siim J., Hutchison W,, Work K. Transmission of Toxoplasma gondii. Acta path.miorobiol.Scand.,1969,77,756-757.

190. Simitch Т., Petrovitch Z., Bordjochki A. Citelus citelus de animal de ohoix pour 1etude biologique et Iisolement de Toxoplasma gondii. Arch.Inst.Pasteur.Algerie,1956,34,I,93-99.

191. Simitch Т., Bordjochki A., Petrovitch Z., Toraanovitch В., Savin Z. La toxoplasraose des oiseaux. I.LInfection naturelle de la volaille doraestique par Toxoplasma gondii on lougoslavie. Arch.Inst.Pasteur.Algerie,I96I,39,135-139.

192. Siqueira A.V., Voronoff S. Toxoplasma gondii. Papel do dato em seu ciclo de vida. Rev.Brasil med.,1075,32,1,23-25.

193. Soltys M.A., Woo P. Immunological methods in diagnosis of protozoan diseases in man and domestic animals. Z.Tropenmed. a. Parasitol.,1972,23,2,172-187.

194. Stadtsbaeder S., Piret L., Clotuche B. Immunisation contre la toxoplasraose chez la souris. Lyon med. ,1971,225,3 175-179. 2X

195. Stoll L., Kraft B. Fluoreszenzhistologischer Nachweis von Toxoplasma gondii in Lymphknoten des Schweines. Deut.Tierar, Woohensch., 1976,83(4),137-140.

196. Straczynska M,, Uminski J,, Tos-Luty S. Ooena metod cieplej i zinnej obczynu wiazania dopelniacza (przy bad nad toxoplasmoza). Wiadora.Parazytol.,1959,5,6,531-536. 2X

197. Studies of toxoplasma precipitinogens and their corresponding antibodies by means of diffusion in gelmethods. Brit.J.exp.Path.,1962,43,600-6X3.

198. Swartzberg J.E., Remington J.S. Transmission of toxoplasma. Amer.J.Diseases child.,1975,129,7,777-779.

199. Timoney J.F. Toxoplasma anribody in sera from Dublin dogs. Irish.Yet.Jour.,I$76,30(3),41-42. 2X

200. Tsunematsu Y. Purification of toxoplasma by means of sonic vibration and triptic digestion. Am.J.Trop.Med.Hyg,, X960, 9,556-56X.

201. Ulmanen X., Leinikki P. Role of pet cats in the seroepidemiology of toxoplasmosis. Scand.Journ.Xnfeot.Diseas.,1975,7,1, 67-71.

202. Vilmaz S.M., Hopkins S.H. Effects of different conditions on duration of infectivity of Toxoplasma gondii oocysts. J.Parasitol.,I972,58,5,938-939.

203. Vollbrechtshausen R. Tierexperiraentelle Untersuchungen zur Frage der aktiven Xmraunisierung bei Toxoplasmose. Z.Tropen. Med.Parasitol.,X955,6,2,X59-X65.

204. Waldeland H., Overas J. Toxoplasraa-abort hos sau. Medlerasbl. Norske veterinaerforen.,1968,20,11,497-505. 224. iValdeland H. Toxoplasmosis in sheep. The relative importance of the infection as a cause of reproductive loss in sheep in Norwey. Acta veter.Scand.,1976,17,4,4X2-425.

205. Yifallace G.D., Marshal L. Cats, rats and toxoplasmosis on a small pacific Island. Amer.J.Epidemiology,1972,95,5,475-482.

206. Walton B.C., Vi/erner J.K. Schizont, gamete and oocyst production in the cat by human and porcine strains of Toxoplasma gondii from Japan. Jap.J.Parasitol.,1970,X9,6,628-634.

207. Warren J., Russ S. Cultivation of Toxoplasma in embrionated egg. Antigen derived from chorioallantoic membrane. Proc.Soc.Exper.Biol.Med.,1948,67,1,85-89. 228. v/eiland G.D. Kuhn D. Experimentelle Toxoplasma-infection bei der Katze. lI.Entwicklungsstadien des Parasiten in Darm. Berl. und Munch.Tierarztl.Wschr.,X970,7,X28-X32.

208. Weiland G.D., Dalohow W. Toxoplasmosis in domestic animals in Turkey: serological investigation. Berl.Munch.Tierarztl. Wschr,,1970,83,65-68. 230. V/erner H., Egger J,, Meisel C. Dber den Nachweis von Toxoplasma gondii durch den Tierversuch. III.Mitt. Experimentelle Untersuchungen uber die Abhangigkeit der Anzuchtungsversuche von Anzahl und Virulenz der injizierten Toxoplasmen. Z.Tropenmed. und Parasitol.,1968,19,1,132-138.

209. Westphal A. Eine neue Toxoplasmose. Kompleraentbindungsreaction. Z.Tropen.Med.Parasitol.,1651,3,2,191-204.

210. Wiesmann E., Schallibaum R. Toxoplasma infection among pigs in eastern Switzerland. Sohweizer.Arch.Tierheilk,,1967,109, 463-468.

211. Witte H.M., Piekarski G. Die oocysten-Ausscheidung bei experimentell infizierten Katzen in Abhangigkeit vom ToxoplasmaStamm. Zeitschr.Parasitenkunde, 1970,33,358-360.

212. Work K. Isolation of Toxoplasma gondii from the flesh of sheep, swine and cattle. Acta path.microbiol.Scand.,1967,71, 296-306.

213. Yanovsky J.F., Traversa O.C,, Schmunis G.A., Cantarella A., Pandiella A., Pothier M. Nouvel antigene pour la reaction du complement pour le diagnostic de la toxoplasmose. Ann.Parasitol. humaine et comparee.,1968,43,5,539-544.

214. Zaman V., Singh M,, Spence J., Chew M. Porcine toxoplasmosis in Singapore. Singapore med.J.,1967,8,246-247.

215. Zardi 0., Pana A., Nobili 0., Giorgi G,, Gabrielli G. Correlazione tra infezione toxoplasmica ал1та1е ed umana. III.Ricerche immunobiologiche su conigli gatti cavie e soggetti umani addetti al loro govemo. Zooprofilassi. ,1968,23, 4-5,209-230