Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Актомиозин из равдомиосарком и генетическая регуляция цитодифференцировки

ВАК РФ 03.00.17, Цитология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Матвеев, Владимир Владимирович

ВВЕДЕНИЕ. ОПУХОЛИ, АКТ0Ш03ИН И ЦИТОДИФФЕРЕНЦИРОВКА.

Цитодифференцировка.

Актомиозин

Опухоли. II

ГЛАВА I. АКГ0МИ03ИН0ВЫЕ ПРЕПАРАТЫ, ПОЛУЧЕННЫЕ ИЗ НИЗКО ДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ РАБДОМИОСАРКОМЫ С ПОМОЩЬЮ ТРАДИЦИОННЫХ МЕТОДОВ МЫШЕЧНОЙ

БИОХИМИИ.

Материалы и методы.

Результаты и обсуждение.

ГЛАВА 2. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ АКТ0МИ03ИНА ИЗ НИЗКО ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫХ РАБДОМИОСАРКОМ.

Материалы и методы.

Результаты.

Критерий степени чистоты опухолевого актомиозина.

Факторы, влияющие на содержание примесей в препаратах опухолевого актомиозина.

Обсуждение.

Проблемы вьщеления актомиозина из низкодифференцированных рабдомиосарком

Возможные подходы к получению опухолевого экстракта, содержащего большое количество актомиозина и минимальную примесь хроматина. . 41 Условия, препятствующие экстракции хроматина и благоприятные для экстракции актомиозина при 0.3 <^<0.5, рН 7.0.

Гомогенизация

Растворы для гомогенизации и отмывка гомогената.

Экстракция актомиозина.

Локализация опухолевого миозина

Возможность применения метода 5 для выделения актомиозина из клеток, сходных с клетками А7.

ГЛАВА 3. АКТО МИОЗИН ИЗ РАБДОМИОСАРКОМ.

Материалы и методы.

Результаты.

ДСН-электрофорез

М-электрофорез

Соотношения концентраций легких цепей миозина в опухолевых и скелетно-мышечных актомиозиновых препаратах

Активность Са -АТФазы.

Синтетические миозиновые филаменты

Обсуждение

Электрофорез.

Соотношения концентраций миозиновых легких цепей.

АТФаза и филаменты.

ГЛАВА 4. СОДЕРЖАНИЕ МИОЗИНА И АКТИНА В НИЗШДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ РАБДОМИОСАРКОМЕ.

Материалы и методы.

Результаты.

Обсуждение.

ГЛАВА 5. ОСНОВНЫЕ ИТОГИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТАВА СОКРАТИТЕЛЬНЫХ

БЕЛКОВ РАБДОМИОСАРКОМ.

ГЛАВА б. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ СВЕДЕНИЯ, СЛЕДУЮЩИЕ ИЗ ДАННЫХ О

СОСТАВЕ ОПУХОЛЕВЫХ БЕЛКОВ.

Диагностика рабдомиосарком.

Определение тканевого типа клеток, не имеющих выраженных морфологических тканеспецифичных признаков.

Индивидуальные характеристики линий опухолевых и нормальных клеток in vitro

Метод исследования многокомпонентных субклеточных элементов.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Актомиозин из равдомиосарком и генетическая регуляция цитодифференцировки"

ОПУХОЛИ, АКТОМИОЗИН И ЦИТОДИФФЕРЕНЦИРОВКА

Исследование генной экспрессии в опухолевых клетках может быть источником данных, полезных для выяснения механизма цитодиф-ференцировки. Анализ полипептидного состава опухолевого актомио-зина (в качестве белкового этапа исследования такого рода) составляет основу настоящей работы. Рассмотрим предварительно ее важнейшие элементы: опухоли, белки, суждения о регуляции генной экспрессии и цитодифференцировки.

Цитодифференцировка

В основе процесса цитодифференцировки лежит, как принято считать, регуляция генной экспрессии. Вследствие этой регуляции изменяется состав клеточных белков. Разнообразие таких изменений, включающее появление, исчезновение, увеличение или уменьшение содержания отдельных полипептидов и их групп /41,119,133,137/ свидетельствует о разнообразии актов регуляции генной экспрессии, которые можно систематизировать следующим образом.

1. Некоординированные изменения генной экспрессии: а) инициация или прекращение экспрессии отдельных генов вне связи с какими-либо другими; б) усиление или ослабление экспрессии отдельных генов.

2. Координированные изменения генной экспрессии: а) одновременная инициация или прекращение экспрессии группы генов; б) прекращение экспрессии одного или нескольких генов в момент инициации экспрессии другого гена или группы (взаимоисключения) ; в) одновременное прямо пропорциональное изменение экспрессии группы генов; г) одновременное обратнопропорциональное изменение экспрессии двух генов или генных групп; д) непропорциональные координированные изменения генных активностей; е) жесткая координация, однозначно определяющая соотношение количеств генных продуктов; ж) не жесткая координация, допускающая варьирование соотношения генных продуктов в некоторых пределах (в зависимости от привходящих обстоятельст).

3. Кратковременные изменения генной экспрессии (и координированные, и некоординированные).

4. Долговременные изменения генной экспрессии (и координированные, и не координированные).

Для осуществления большого количества различных регулятор-ных актов в клетках должны существовать один или несколько полифункциональных или большое количество монофункциональных регуля-торных элементов, различающихся по структуре и воздействию на генную экспрессию.

Для обнаружения и исследования значительного количества различных регуляторных элементов необходимо проанализировать дифференцировочные изменения в такой группе генов, которая (а) достаточно велика, (б) большинство компонентов которой экспрес-сируются не независимо друг от друга и (в) обладают связанными с цитодифференцировкой фенотипическими проявлениями, совместимыми с приведенной выше схемой регуляторных актов.

Актомиозин

Одна из групп генов, удовлетворяющая выдвинутым выше требованиям, - гены, кодирующие сократительные белки, насколько можно судить по следующим данным. В настоящее время выделено и охарактеризовано большое количество сократительных белков; многие из них имеют несколько изоформ; молекулы некоторых из них состоят из нескольких неидентичных субъединиц; суммарное количество известных полипептидов сократительной системы достигает в клетках высших животных нескольких десятков /39,49,74,96,133/. Построение в процессе цитодифференцировки сократительного аппарата и поддержание его в дифференцированных клетках требует строгой координации синтеза соответствующих полипептидов. Это следует и из данных о высокоупорядоченной структуре некоторых типов сократительного аппарата /38,50,53,77,78,103,107,117/ и из результатов определения относительных количеств сократительных белков и их субъединиц в нормальных тканях, клетках, миофибриллах и филаментах /26,35, 44,49,83,87,106,108,125,130/. В клетках различных типов и на разных этапах цитодифференцировки синтезируются различные наборы полипептидов сократительной системы и различные относительные количества последних /29,31,32,33,34,36,46,47,51,59,62,72,75,85,91, 92,94,97,100,113,115,135,136/. Состав каждого из таких частично перекрывающихся наборов постоянен и может рассматриваться как константа, характеризующая клеточный тип или стадию дифференци-ровки.

Характер изменений полипептидного состава, возникающих в ходе дифференцировки, указывает на многообразие актов регуляции экспрессии в группе генов, кодирующих сократительные белки. Рассмотрим, например, изменения состава сократительных белков в процессе дифференцировки предшественников быстрых скелетных мышц /37,41,49,134/(схема1). Митотические (недифференцированные) мио-бласты синтезируют немышечные изоформы актина и миозина, включающие следующие полипептиды: актин-£> (A-f> ), актин-1 (A-Jf ), тяжелые цепи миозина немышечного типа (Н^) и легкие цепи миозина немышечного типа (L20, L17). После слияния миобластов (первый этап нормального миогенеза) постепенно снижается содержание k-f* , А-1 и быстро исчезают L17, 120 и, по-видимому, Нш. В это же время начинают синтезироваться и быстро накапливаться субъединицы мышечного миозина (Не, L26, L18), тропомиозин(ТМ^ , ) и тропонины (TNt, TNC и, вероятно, и^). Молярные скорости накопления большинства полипептидов (н, Ы8, тм^ , , TNt, шы ) одинаковы /49/.

Но накопление актина-с»- происходит в 3-4 раза быстрее. Картина же изменений экспрессии генов, кодирующих миозиновые легкие цепи L26 ("эмбриональная" легкая цепь /129,134/), Ь25 и Ыб относительно сложна. В начале процесса образования миосимпластов синтезируются и накапливаются L26 и Ь18 (одновременно с Не ). Но вскоре содержание Ь2б начинает снижаться, одновременно начинает синтезироваться и накапливаться L25; создается впечатление, что L25 вытесняет L26. Теперь L25 накапливается одновременно с L18, Н и многими другими сократительными белками. Третья мио-зиновая легкая цепь L16 не синтезируется до конца эмбриогенеза, но в дефинитивных мышцах ее содержание координировано с содержанием Н, L25 и L18. Рассмотренный пример показывает, что в группе генов, кодирующих сократительные белки, можно обнаружить все формы координированных изменений генной экспрессии (соответствуй ющие приведенной выше классификации регуляторных актов) даже в процессе развития клеток одного типа (предшественников быстрых Q

Тяжелые genu миозине

Легкие цепи м и аи не

А кгин

Митогич(4Миос им пласты Мышцы ские мио in v/ it го и&Э мЬрио- новоро ж Ъддсгы. паль них мышца* денчыу.

Десрини-т ивние

МЫШЦЫ

Тропоииозин

Тропонини 9 н л m Не

Hsmf

L20

U7

L26

125 U8 L16

А-/

А-Г А-к тм — я тм^ -I

TNt -—

Схема I. Изменения состава сократительных белков в процессе дифференцировки быстрых скелетных мышц /37,41,49,134/.

Тяжелые цепи миозиновых изоформгн^ - немышечной, Не - эмбриональной, НпЬ - из мышц новорожденных, Hsmf - из дефинитивных быстрых скелетных мышц.

L2o, L17 - легкие цепи немышечной и гладкомышечной изоформ миозина; L26 - эмбриональная скелетно-мышеч-ная легкая цепь миозина; L25, L18, L16 - легкие цепи миозина быстрых скелетных мышц. А-]ь , A-i - немышечные и гладкомышечные изоформы актина; - ске-летно-мышечная (миофибриллярная) изоформа актина. ТМ<*. ТШр - тропомиозин. тыс - тропонины. скелетно-мышечных волокон). Еще большее разнообразие актов регуляции экспрессии генов сократительных белков вовлечено, по-видимому, в процессы дифференциации клеток различных типов (как мышечных, так и немышечных) и поддержания их дифференцировочных статусов.

Методы выделения и анализа сократительных белков из различных тканей и клеток достаточно хорошо разработаны /4,7,8,9,17, 18,19,40,45,76,114/.

Морфология сократительного аппарата в некоторых случаях исключительно благоприятна для визуального контроля хода цитодиф-ференцировки: образование миосимпластов и высокоупорядоченных миофибриллярных структур (это независимые признаки /52,137/) можно наблюдать даже при малом увеличении, используя богатый набор хорошо разработанных морфологических и иммуноморфологических методов /28,54,63,93,111/.

Мышечные клетки - наиболее богатый и удобный источник сократительных белков - хорошо поддаются синхронизации стадий цитодиф-ференцировки in vitro/55/.

Все это вместе взятое делает гены сократительных белков привлекательным объектом для исследования механизма регуляции генной экспрессии как основы цитодифференцировки.

Наилучший как с препаративной, так и с аналитической точки зрения комплекс сократительных белков - миофибриллы: их легко выделить достаточно чистыми и в большом количестве; они довольно устойчивы и при выделении сохраняют структуры и свойства, характеризующие интактный сократительный аппарат, а следовательно, можно надеяться, сохраняют все важнейшие белковые компоненты, притом в исходных соотношениях /57,73,118,133/. Но немышечные клетки и мышечные на ранних стадиях миогенеза или в некоторых патологических состояниях (например, при злокачественной трансформации) не содержат миофибрилл. В этих случаях материалом для белковой части работы может служить взамен миофибрилл также естественный, также богатый по составу, также довольно устойчивый, также довольно легко выделяемый комплекс сократительных белков - актомиозин (см. главы 2 и 3).

Опухоли

Злокачественные опухоли будут рассматриваться здесь как популяции клеток, генетический аппарат которых содержит такие наследуемые изменения, благодаря которым опухолевые клетки дифференцируются необычным образом. Дифференцировочные аномалии опухолевых клеток очень разнообразны /16,21,25,58,90,99,127,128,131/, особого внимания, в связи с проблематикой данной работы заслуживают следующие:

1. Отсутствие некоторых полипептидов, свойственных клеткам нормальной гомологичной ткани.

2. Аномальность относительных количеств некоторых полипептидов при наличии каждого из них.

3. Наличие полипептидов, не свойственных нормальным клеткам данного типа.

4. Сочетание признаков, характерных для различных стадий нормальной цитодифференцировки клеток данного типа, в том числе, признаков терминальной дифференцировки и ранних стадий развития. Частным случаем такой аномалии может быть "эмбриональный" фенотип опухолевых клеток, когда в число признаков, не получивших полного развития входит комплекс симптомов, используемых обычно для определения стадии цитодифференцировки.

Все эти особенности опухолевых клеток сводятся к необычным сочетаниям признаков, каждый из которых может быть нормальным элементом фенотипа каких-либо не опухолевых клеток.

Данные о сохранении опухолевыми клетками всей полноты генетической информации, о возможности реверсии и о возможности развития нормального организма или его отдельных частей из опухолевых клеток /1,2,95,101,112/ позволяют заключить, что эти особенности -результат нарушений (обратимых, по крайней мере, иногда) в работе механизма, координирующего генную экспрессию.

Таким образом,одна из существенных характеристик клеток злокачественных опухолей состоит в том, что в этих клетках условия, способствующие дискоординации генной экспрессии, преобладают над координирующими факторами.

Разнообразие опухолей по степени и характеру аномальности дифференцировки свидетельствуют о том, что степени дискоординации и точки приложения активности факторов, вызывающих дискоординацию, могут быть разными. Можно надеяться, что исследование состава опухолевых полипептидов позволит обнаружить такие группы генов, дискоординация экспрессии которых имеет различные вероятности и допустимые пределы. Регуляторные элементы, контролирующие экспрессию в таких группах различаются по способности обеспечивать в опухолевых клетках нормальную координацию экспрессии, т.е. - по стабильности координации. Не одинаковая функциональная стабильность детерминирована, вероятно, структурными особенностями координирующих элементов,.

Итак, опухоли могут рассматриваться как многообещающий объект для обнаружения координирующих генную экспрессию элементов, различающихся по стабильности и структуре. Это открывает перспективу сравнительного исследования таких элементов. Каковы их структурные и функциональные особенности, соответствующие различной стабильности? Какую роль эти особенности играют в процессе цитодифференци-ровки? Вот основные вопросы, к решению которых можно подойти таким образом.

Остается определить тип опухолей, наиболее подходящих для таких целей. Описанные выше (раздел "Актомиозин") достоинства сократительного аппарата, в особенности скелетно-мышечного, как объекта для изучения механизма регуляции генной экспрессии и цито-дифференцировки дают основания для выбора рабдомиосарком (РМС), многие из которых (если не все) можно рассматривать как продукт дифференцировочной аномалии клеток предшественников скелетно-мы-шечных волокон. Наиболее глубокие дифференцировочные изменения и, следовательно, наиболее богатую картину нарушений координации можно, по-видимому, наблюдать в клетках низкодифференцированных РМС (НД РМС), опухолей, которые наиболее далеки по морфологическим признакам от гомологичной им скелетно-мышечной ткани. Особенно важно следующее: если среди полипептидов, содержание которых в норме координировано, удастся обнаружить такие, относительные количества которых остаются нормальными в НД РМС на фоне глубоких нарушений координации, то тем самым будет обнаружена группа структурных генов, экспрессия которых находится под контролем координирующих элементов, относящихся к числу наиболее стабильных.

По этим причинам исследование особенностей экспресии генов сократительных белков в клетках НД РМС представляется особенно многообещающим. Начало такому исследованию положено в настоящей работе, задачи которой формулируются следующим образом.

1. Выделение из РМС (в первую очередь НД РМС) белковых препаратов, богатых сократительными белками.

2. Идентификация полипептидов сократительной системы, содержащихся в этих препаратах.

3. Определение таких свойств некоторых опухолевых сократительных белков, которые наиболее явным образом связаны с развитием и функциональной активностью сократительного аппарата.

4. Определение изоформ некоторых опухолевых сократительных белков.

5. Определение относительных и абсолютных количеств полипептидов сократительной системы в РМС и скелетных мышцах.

6. Обнаружение таких групп опухолевых полипептидов сократительной системы, в одних из которых относительные количества компонентов соответствуют норме, в других - изменены.

Наиболее важные результаты работы, полученные впервые, таковы.

1. Определен качественный и количественный состав легких цепей миозина из РМС: а) миозин, выделенный как из высокодифференцированных (ВД), так и из НД РМС, содержит все легкие цепи миозина быстрых скелетных мышц, в том числе L16 и L18P, присущие только дефинитивной изоформе; б) соотношение концентраций опухолевых легких цепей миозина отличается от соответствующего показателя миозина дефинитивных быстрых скелетных мышц; в) особенности состава опухолевых легких цепей миозина объясняется не аномальностью экспрессии миозиновых генов, а особенностями клеточного состава опухолей.

2. Миозин НД РМС (А7) обладает высокой АТФазной активностью, такой же как скелетно-мышечный.

3. Миозин НД РМС (А7) образует агрегаты, сходные с синтетическими миозиновыми филаментами.

4. Изоформы миозина, синтезируемые клетками НД РМС определены как эмбриональная (миотубная) и дефинитивная быстрых скелетных мышц. Опухолевая ткань содержит равные количества этих изоформ.

5. Определено содержание миозина и актина в НД PMC (А7). Опухолевая ткань содержит в 22.7 раза меньше миозина и в 6.9 раза меньше актина, чем скелетно-мышечная. В пересчете на единицу объема цитоплазмы опухолевые концентрации миозина в 8.2, актина в

2.5 раза ниже скелетно-мышечных.

6. Экспрессию генов, кодирующих субъединицы миозина (принадлежащие как одной, так и различным изоформам миозина) контролируют высокостабильные координирующие элементы. Согласование экспрессии актиновых и миозиновых генов осуществляют менее стабильные координирующие элементы.

Данные о координации экспрессии актиновых и миозиновых генов в совокупности с данными о глубоких нарушениях координации, выражающихся в сосуществовании в клетках НД РМС признаков немышечных клеток и признаков терминальной скелетно-мышечной дифференциров-ки, позволяют сформулировать гипотезу о наличии в клетках млекопитающих иерархии координирующих генную экспрессию элементов, различающихся по стабильности координации, и об их роли в регуляции цитодифференцировки. Анализ опухолевых сократительных белков может рассматриваться как очень перспективный метод диагностики РМС, заслуживающий дальнейшей разработки для использования и в исследовательской, и в клинической практике.

Заключение Диссертация по теме "Цитология", Матвеев, Владимир Владимирович

ВЫВОДЫ

1. Разработан метод выделения актомиозина из низкодифферен-цированных рабдомиосарком (НД РМС), достаточно чистого для анализа полипептидного состава и определения свойств основных сократительных белков. Метод пригоден, по-видимому, для выделения комплекса сократительных белков из тканей и клеток многих типов, богатых хроматином и содержащих относительно низкие количества сократительных белков.

2. Разработаны методы электрофореза актомиозина в полиак-риламиде без додецилсульфата натрия и электрофоретической идентификации полипептидов, изоэлектрические точки которых выше 7.

3. Все исследованные РМС содержат все типы легких цепей, присущие миозиновой изоформе дефинитивных быстрых скелетных мышц (L25, L18, L18P, Ы6). Миозин НД РМС по соотношению количеств легких цепей (40.9$ L25$ 47.4$ L18; 11.7$ Ь16) отличается от миозина дефинитивных быстрых скелетных мышц (28.4$ L25; 50.9$ L18; 20.7$ L16) и идентичен смеси равных доз эмбриональной (миотубной) и дефинитивной скелетно-мышечных изоформ (40.7% "L25"; 48.5$ L18; 10.8$ Ь16). Косвенные данные (АТФазная активность) указывают на то, что тяжелые цепи опухолевого миозина также принадлежат скелетно-мышечным изоформам. Субъединицы иных изоформ миозина не обнаружены ни в одной РМС.

4. Особенности субъединичного состава миозина, вццеленного из НД РМС, объясняются особенностями клеточного состава опухолей.

5. Миозин НД РМС обладает столь же высокой АТФазной активностью, как скелетно-мышечный, и сходен с последним по способности формировать синтетические филаменты.

6. Содержание миозина в 23, актина в 7 раз ниже в ткани НД

РМС А7, чем в скелетных мышцах. При пересчете концентраций на единицу объема цитоплазмы величины этих отношений снижаются до 8 и 2.5 соответственно.

7. Действие регуляторного механизма, координирующего экспрессию миозиновых генов (и, вероятно, генов киназы легких цепей миозина), не нарушено под влиянием опухолевых дискоординирую-щих факторов.

Действие регуляторного механизма, обеспечивающего координацию экспрессии миозиновых генов с актиновыми нарушено под влиянием опухолевых дискоординирующих факторов. Это нарушение ограниченное .

Координация экспрессии некоторых компонентов генома в клетках БД РМС резко нарушена: признаки немышечных клеток (или мито-тических миобластов) сочетаются в них с признаками терминальной скелетно-мышечной дифференцировки.

8. Полученные данные в совокупности с литературными позволяют предложить гипотетическую схему действия аппарата координации генной экспрессии в процессе адаптивных изменений, цитодифференцировки и поддержания дифференцировочного статуса.

9. Исследование состава сократительных белков рабдомиосар-ком позволяет обнаружить группы генов, находящиеся под контролем координирующих экспрессию элементов, различающихся по функциональным свойствам и, вероятно, по структуре. Особенности этих координирующих элементов связаны, по-видимому, с характерными проявлениями цитодифференцировки: сохранением и ограниченными в разной степени изменениями относительных количеств полипептидов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Матвеев, Владимир Владимирович, Ленинград

1. Аль-Рубей А.К., Черпакова А.В., Пинчук В.Г., Швембергер И.Н.

2. Способность к дифференцировке и нормализации популяций опухолевых клеток при трансплантации в переднюю камеру глаза. I.Изменения полиморфноклеточных рабдомиосарком мыши MX-III и А-7. Цитология, 1983, т. 25, № 4, с. 458-465.

3. Бендолл Дж. Мышцы, молекулы и движение. М.: Мир, 1970. 256 с.

4. Бут Е.В. Методы получения и характеристика тропомиозина. Вкн.: Биофизические и биохимические методы исследования мышечных белков. Л.: Наука, 1978, с. I4I-I50.5. (Бахтин Ю.Б., Санчакова Е.В.) VaMitin Yu.B., Sanchakova E.V.

5. H polymorphism of rat and mouse rhabdomyosarcomas. Isosyme Bull., 1981, vol. 41, p. 61-63.

6. Бахтин Ю.Б., Швембергер И.Н. Цитология и генетика рабдомиосарком. Л.: Наука, 1968, 277 с.

7. Гусев Н.Б., Добровольская А.Б. Методы выделения и разделениятропонинового комплекса из скелетных мышц кролика. В кн.: Биофизические и биохимические методы исследования мышечных белков. Л.: Наука, 1978, с. I5I-I65.

8. Данилова В.М. Методы получения и характеристика гладкомышечного миозина. В кн.: Биофизические и биохимические методы исследования мышечных белков. Л.: Наука, 1978,с.76-90.

9. Заалишвили М.М. Актинины. В кн.: Биофизические и биохимические методы исследования мышечных белков. Л.: Наука, 1978, с. 165-179.

10. Матвеев В.В., Еорхсениус Т.В., Швембергер И.Н., Пинаев Г.П.,

11. Бахтин Ю.Б. Сохранение активности генов миозина в клетках перевивных рабдомиосарком. В кн.: Науч. конф. Ин-та цитологии АН СССР, посвященная 15-летию ин-та. 1972, с. 60-61.

12. Матвеев Вл.Вл. Выделение и характеристика актомиозина изнизко дифференцированной скелетно-мышечной опухоли. В кн.: 1-й Всесоюзный биофизический съезд: Тез. докл., М., 1982, т. 2, с. 75.

13. Матвеев Вл.Вл. Актомиозиновые препараты, полученные из низко дифференцированной скелетно-мышечной опухоли с помощью традиционных методов мышечной биохимии. Цитология, 1984а, т. 26, Р 4, с. 438-443.

14. Матвеев Вл.Вл. Выделение актомиозина из низкодифференцированной скелетно-мышечной опухоли. Цитология, 19846, т. 26, Р 4, с. 444-449.

15. Пенман Ш. Получение очищенных ядер и ядрышек из клеток млекопитающих. В кн.: Методы вирусологии и молекулярной биологии. М.: Мир, 1972, с. 31-42.

16. Пирс Э. Гистохимия. М.: ИЛ, 1962, 962 с.

17. Салямон Л.С. Рак и дисфункция клетки. Л.: Наука, 1974, 319 с.

18. Стефаненко Г.А. Методы выделения и свойства белков М-линиии С-белка. В кн.: Биофизические и биохимические методы исследования мышечных белков. Л.: Наука, 1978, с. 106121.

19. Тартаковский А.Д. Методы выделения и характеристика миозинаи его субъединиц из поперечнополосатых мышц. В кн.: Биофизические и биохимические методы исследования мышечных белков. Л.: Наука, 1978, с. 55-76.

20. Хайтлина С.Ю. Методы выделения и очистки актина. Оценка чистоты и нативности. В кн.: Биофизические и биохимические методы исследования мышечных белков. Л.: Наука, 1978, с. I22-I4I.

21. Харрис Дж., Агуттер П. Выделение и характеристика ядернойоболочки. В кн.: Биохимическое исследование мембран. М.: Мир, 1979, с. 124-159.

22. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста. М.: Медицина, 1975, 271 с.

23. Швембергер И.Н. Гистогенез и прогрессия рабдомиосарком.

24. Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Л. 1974. 50 с.

25. Швембергер И.Н., Мосевич Т.Н., Чернина Л.Д., Аль-Рубей А.К.

26. Генетическая классификация рабдомиосарком. Л.: Наука, 1981, 116 с.

27. Шелудько Н.С. Белковый состав миофибрилл кролика, определенный методом диск-электрофореза в присутствии додецил-сульфата натрия. Цитология, 1975, т. 17, №10, с. 11481154.

28. Adelstein R.S., Conti М.А. The effect of phosphorylation onplatelet myosin and studies on substrates for platelet myosin light-chain kinase. Cell Motility. Cold Spring Harbor conf. on cell proliferation, "1976, vol. 3, p. 725-738.

29. Allen Н.Б., Stronor M.H., Goll D.E., Robson R.M. Accumulation of myosin, actin, tropomyosin, and ot-actinin in cultured muscle cells. Devel. Biol., 1979, vol. 69,1. N 2, p. 655-660.

30. Axel R., Gerad H., Felsenfeld G. Synthesis of globin ribonucleic acid from duck-reticulocyte chromatin in vitro. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1973, vol. 70, N 7, p.2029-2032.

31. Bayne E.K., Sympson S.B., Jr. Detection of myosin in profusion Gq gizard myoblasts in vitro. Devel. Biol., 1977, vol. 55, N 2, p. 306-319.

32. Beach R.L., Kelly P.Т., Babitch J.A., Cotman C.W. Identification of myosin in isolated synaptic junctions. Brain Res., 1981, vol. 225, N 1, p. 75-93.

33. Benoff S., Nadal-Ginard B. Transient induction of Poly (A)

34. Short myosin heavy chain messenger RNA during terminal differentiation of LgE^ myoblasts. J. Mol. Biol., 1980, vol. 140, N 2, p. 283-298.

35. Bhatnagar G.M., Freedberg I.M. Contractile proteins in epidermis. Isolation and properties of guinea-pig epidermal myosin. Biochim. et biophys. acta, 1979i vol. 581, N 2, p. 295-306.

36. Billeter R., Heizmann C.W., Howald H.J.E. Analysis of myosinlight and heavy chain types in single human skeletal muscle fibers. Eur. J. Biochem., 1981, vol. 116, N 2, p. 389-395.

37. Billeter R., Heizmann C.W., Reist U., Howald H., Jenny E.a- and j5-tropomyosin in tiped single fibers of human skeletal muscle. FEBS Lett., 1981, vol. 132, N 1, p. 133-136. •

38. Biral D., Damiani E., Volpe P., Salviati G., Margreth A.

39. Buckley I.K. Fine-structural and related aspects of nonmuscle-cell motility. Cell and Muscle Motility, vol. 1. New York; London. Plenum Press, 1981, p. 135-204. 39- Burridge K. Multiple forms of non-muscle myosin. In: Cell

40. Motility. Cold Spring Harbor conf. on cell proliferation, 1976, vol. 3, p. 739-74-7.

41. Burridge K., Bray D. Purification and structural analysis ofmyosins from brain and other non-muscle tissues. J. Mol. Biol., 1975, vol. 99, p. 1-14.

42. Caravatti M., Minty A., Robert В., Montarass D., Weydert A.,

43. Cohen A., Daubas P., Buckingham M. Regulation of muscle gene expression. The accumulation of messenger RNA coding for muscle-specific proteins during myogenesis in a mouse cell line. J. Mol. Biol., 1982, vol. 160, N 1, p. 59-76.

44. Cardinaud R. Proteolytic fragmentation of myosin: locationof SH-1 and SH-2 thiols. Biochimie, 1979, vol. 61, N 7, p. 807-821.

45. Gonnell J.J. Studies on the proteins of fish skeletal muscle.

46. Denaturation and aggregation of cod myosin. Biochem. J., 1960, vol. 75, p. 530-538.

47. Cot& G.P., Smillie L.B. The interaction of equine platelettropomyosin with skeletal muscle actin. J. Biol. Chem., 1981, vol. 256, N 14, p. 7257-7261.

48. Cotb G.P., Smillie L.B. Preperation and some properties ofequine platelet tropomyosin. J. Biol. Chem., 1981, vol. 256, N 21, p. 11004-11010.

49. D'Albis A., Pantaloni C., Bechet J-J. An electrophoreticstudy of native myosin isozymes and of their subunit content. Eur. J. Biochem., 1979, vol. 99, N 2, p. 261272.

50. D'Albis A., Pantaloni C., Bechet J-J. Structural relationship of myosin isoenzymes. Proteolytic digestion patterns of heavy chain components from fast muscles, and comparison with other muscle tupes. FEBS Lett., 1979, vol. 106, N 1, p. 81-84.

51. Daulas P., Caput D., Buckingham M., Gros F. A comparison between the synthesis of contractile proteins and the accumulation of their translatable in RNA during calf myoblast differentiation. Devel. Biol., 1981, vol. 84, p. 133-143.

52. Devlin R.B., Emerson Ch.P. Coordinate regulation.of contractile protein synthesis during myoblast differentiation. Cell, 1978, vol. 13, N 2 , p. 599-611.

53. D'Hease J., Henssen H. Aggregation of myosin extracted fromslime mold of amoeba. In: Proteins of contractile systems: Proc. of 9-th FEBS meeting. Budapest, 1975, vol. 31, p. 215-220.

54. DeRosier D., Mandelkow E., Sillman A., Tilney L., Kane R.

55. Structure of actin-conteining filaments from two types of non-muscle cells. J. Mol. Biol., 1977» vol. 113, p. 679-695.

56. Deinstmann S.R., Holtzer M. Skeletal myogenesis. Control prolifiration in a normal cell lineage. Exp. Cell. Res., 1977, vol. 107, N 3 , p. 355-364.о

57. Eaton B.L., Pepe P.A. Myosin filament showing a 4-30 A axialperiodicity. J. Mol. Biol., 1974» vol. 82, N 3, p. 421423.

58. Eisenberg B.R., Salmons S. The reorganisation of subcellularstructure in muscle undergoing fast-to-slow type transformation. Cell and Tissue Res., 1981, vol. 220, N 3, p. 449-471.

59. Emerson C.P. Control of myosin synthesis during myoblast differentiation. In: Pathogenesis of human muscular dystrophies. Amsterdam: Excerpta Medica, 1977, P- 799-811.

60. Epstein H.F., Waterson R.H., Brenner S. A mutant affectingthe heavy chains of myosin in Caenorhabditis elegans. J. Mol. Biol., 1974, vol. 90, N 2, p. 291-300.

61. Etlinger J.D., Zak R., Fishman D.A. Compositional studies ofmyofibrills from rabbit striated muscle. J. Cell. Biol., 1976, vol. 68, N1 , p. 123-141.

62. Fidler I.J. General considerations for studies of experimental methastalis. Meth. Cane. Res., 1978, vol. 15,p. 399-439.

63. Fine R.E., Blitz A.L. A chemical comparison of tropomyosinsfrom muscle and non-muscle tissues. J. Mol. Biol., 19751 vol. 95, P. 447-454.

64. Frank G., Weeds A.G. The amino-acid sequence of alkali lightchains of rabbit skeletal-muscle myosin. Eur. J. Bio-chem., 1974, vol. 44, N 2, p. 317-334.

65. Frearson N., Perry S.V. Phosphorylation of the light-chaincomponents of myosin from cardiac and red skeletal muscles. Biochem. J., 1975, vol. 151, N 1, p. 99-107.

66. Garrels J.I. Changes in protein synthesis during myogenesisin a clonal cell line. Develop. Biol., 1979, vol. 73, N 1, p. 134-152.

67. Gauthier G.F., Lowey S., Hobbs A.W. Fast and slow myosin indeveloping muscle fibers. Nature, 1978, vol. 274, N 5666, p. 25-29.

68. Goldberg A.R. Increased protease levels in transformed cells:a casein overlay assay for detection of plasminogen activator production. Cell, 1974, vol. 2, N 2, p. 95-100.

69. Hanson J., Huxley H.E. The molecular basis of contraction incross-striated muscles. In: Structure and Function of Muscle, 1960, vol. 1, p. 183-225.

70. Hasselbach V/., Schneider G. Der Z-myosin und Aktingehalt der

71. Kaninchenmuskels. Biochem. Z., 1951, vol. 321, II 3, S. 462-475.

72. Hildebrand H.F., Biserte G. Ultrastructural investigation of

73. Ni^Sg-induced rhabdomyosarcoma in wistar-rat. Comparative study with emphasis on myofibrillar differentiation and ciliar formation. Cancer, 1978, vol. 42, N 3,p. 528-55^.

74. Hirabayashi T. Defference in protein constituents among various chicken skeletal musckles. Muscle Contraction, Tokyo etc., 1980, p. 515-525.

75. Hiramoto R., Jurandowski J"., Bernecky J., Pressman D. Immunochemical differentiation of rhabdomyosarcomas. Cancer Res., 1961, vol. 21, N 3, p. 383-386.

76. Hoh J.P.Y., McGrath P.A., Hale P.T. Electrophoretic analysisof multiple forms of rat cardiac myosin: effects of hy-pophysectomy and thyroxine replacement. J. Mol. and Cell. Cardiol., 1978, vol. 10, N 11, p. 1053-Ю76.

77. Holroyde M.J., Small D.A.R., Howe E., Solaro R.I. Isolationof cardiac myofibrils and myosin light chains with in vivo levels of light chain phosphorylation. Biochim. Biophys. Acta, 1979, vol. 587, N 4, p. 628-637.

78. Holtzer H., Pellini S., Rubinstein N., Chi J., Strahs K.

79. Cells myosin and 100 i-Filaments. Cell Motility, book B. Cold Spring Harbor Conf. on Cell Prolifiration, 1974,vol. 3, p. 823-839.

80. Hudlickfx 0., Tyler K.R., Srihar Т., Heilig A., Pette D. Theeffect of different patterns of long-term stimulation on contractile properties and myosin light chains in rabbit fast muscles. Pflugers Arch., 1982, vol. 393, N 2, p. 164-170.

81. Huszar G., Bailey P. Isolation and characterization of myosin in the human term placenta. Amer. J. Obstet. and Gynecol., 1979, vol. 135, N 6, p. 707-712.

82. Huxley H.E. Electron microscope studies on structure of natural and synthetic protein filaments from striated muscle. J. Mol. Biol., 1963, vol. 7, N 1, p. 281-308.

83. Huxley H.E., Brown V/. X-ray diffraction studies of muscle.

84. J. Mol. Biol., 1967, vol. 30, p. 383.

85. Itzhaki R.P., Gill D.M. A micro-biuret method for estimating proteins. Anal. Biochem., 1964, vol. 9, N 4, p. 401-410.

86. Jablecki C., Kaufman S. Myosin adenosine triphosphotase activity during work-induced growth of slow and fast skeletal muscle in the normal rat. J. Biol. Chem. ,1973 »vol. 248, N 5, P. 1056-1062.

87. John H.A., Patrinou-Georgonlas M., Jones K.W. Detection ofmyosin heavy chain m-RNA during myogenesis in tissue culture in vitro and in situ hybridization. Cell, 1977, vol. 12, p. 501.

88. Jouffroy F.K., Lessertisseur J. Systeme musculaire. In:

89. Traite de zoologie, 1968, t. 16, fasc. 2, p. 1-77.

90. Katoh N., Kubo S. Light chains of chiken embryonic gizzardmyosin. Biochim. Biophys. Acta, 1978, vol. 535,p. 401-411.

91. Kochhar O.S. Changes in plasma membran and microfilamentsaccompaning morphologic differentiation in Chinese hamster ovary (CHO) cells. Exp. Cell Res., 1979, vol. 118, N 1, p. 191-203.

92. Kondo S., Morita P. Smooth muscle of scalop adductor containsat least two kinds of myosin. Biochem., 1981, vol. 90, N 3, P. 673-681.

93. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970, vol. 227, N 3, p. 680-685.

94. Lobley G.E., Lovie J.M. The synthesis of myosin, actin andthe major protein fractions in rabbit skeletal muscle. Biochem. J., 1979, vol. 182, N 3, p. 867-874.

95. Lowey S., Holt J. An immunochemical approach to the interaction of light and heavy chains in myosin. Cold Spring Harbor symp. quant, biol., 1973, vol. 37, P. 19-28.

96. Lowey S., Risby D. Light chains from fast and slow musclemyosin. Nature, 1971, vol. 234, N 5324, p. 81-85.

97. Macartney J.C., Path M.R.C., Trevithick M.A., Kricka L.,

98. Phil D., Curran R.C., Path P.R.C. Identification of myosin human epitelial cancers with immunofluorescence. Laboratory Investigation, 1979, vol. 41, N 5, P. 4-37445.

99. Maimon J., Puszkin S. Erythrocyte troponin inhibitor-likeprotein: isolation and characterization. J. Supramol. Struct., 1978, vol. 9, N 1, p. 131-141.

100. Makioka A., Hirabayashi T. Troponin C-like protein in chicken gizzard muscle. J. Biochem., 1979, vol. 85» N 4,1. P. 967-975.

101. Mendelson E.A. Fluorescent-probe studies of contractile proteins. Cell and Muscle Motility, vol. 2. New York; London: Plenum Press, 1982, p. 257-278.

102. Mikawa Т., Takeda S., Shimizu Т., Kitaura T. Gene expressionof myofibrillar proteins in single muscle fibers of adult chiken: micro two dimensional gel electrophore-tic analysis. J. Biochem., 1981, vol. 89, N 6, p. 19511962.

103. Mintz B. Gene expression in neoplasia and differentiation.1.: Harvey Lectures, 1978, vol. 71, p. 193-246.

104. Morton H.J., Tolnai S. Preparation of medium 199. Tissue culture association manual, 1978, vol. 4, N 1, p. 729-736.

105. Nature, 1975, vol. 258, p. 72-75.

106. Peterson B.M., Roberts Б.Е., Vaffe D. Determination of actin messenger RNA in cultures of differentiating em-brionic chick skeletal muscle. PNAS USA, 1974, vol. 71, p. 4467-44-71.

107. Pepe P.A. The structure of vertebrate skeletal-muscle myosin filaments. Cell and muscle motility, vol. 2. New York; London: Plenum Press, 1982, p. 141-172.

108. Perriard J.-C. Developmental regulation of creatine kinaseisosimes in myogenic cell cultures from chicken: levels of mRNA for creatine kinase subunites M and B. J. Biol. Chem., 1979, vol. 254, p. 7036.

109. Perrie W.T., Perry S.V. An electrophoretic study of low-mole cular-weight components of myosin. Biochem. J., 1970, vol. 119, N.1, p. 31-38.

110. Perry S.V., Cole H.A., Morgan M., Moir A.J.G., Pires E.

111. Phosphorylation of the proteins of the myofibril. In: Proteins of contractile systems: Proc. of 9-th FEBS meeting. Budapest, 1975, vol. 31, p. 163-176.

112. Pinset-Harstrom J., Morel J.E. Morphogenesis of syntheticmyosin filaments. In: Proteins of contractil systems: Proc. of 9-th FEBS meeting. Budapest, 1975, vol. 31, p. 193-203.

113. Potter J.D. The content of troponin, tropomyosin, actin,and myosin in rabbit skeletal muscle myofibrils. Arch. Biochem. Biophys., 1976, vol. 162, p. 436-441.

114. Ramackers F.C.S., Boomlcens T.R., Bloemendal H. Cytoskeletaland contractile structures in bovine lens cell differentiation. Exp. Cell. Res., 1981, vol. 135, N 2,p. 454-461.

115. Richards E.G., Chung C.-S., Menzel D.B., Olcott H.S. Chromatography of myosin on DEAE-sephadex A-50. Biochemistry, 1967, vol. 6, N 2, p. 528-531.

116. Ringertz N.R., Krondahl U., Coleman J.R. Reconstitution ofcells by fusion of cell fragments. I. Myogenic expression after fusion of minicells from rat myoblasts (L6) with mouse fibroblast (A9) cytoplasm. Exp. Cell. Res.,1978, vol. 113, p. 233-246.

117. Rosen D. On the reversibiliti of tumor cells. Med. Hypotheses, 1981, vol. 7, P. 615-620.

118. Schaub H.C., Perry S.V. The regulatory proteins of the myofibrils. Characterization and properties of inhibitory factor (troponin B). Biochem. J., 1973, vol. 123, N 2, p. 367-377.

119. ScordiisS.P., Uhlendorf B.W., Scarpa S., Cantoni G.L.,

120. Miles J.M., Adelstein R.S. Changes in myosin and myosin light chain kinase during myogenesis. Biochemistry, 1981, vol. 20, N 12, p. 3511-3516.

121. Shapira P. Isosymes and cancer. Adv. Cancer. Res., 1973,vol. 18, p. 77-153.

122. Sobieszek A. Cross bridges on self-assembled smooth-musclemyosin filament. J. Mol. Biol., 1972, vol. 70, N 3, p. 741-744.

123. Sobieszek A., Bremel R.D. Preparation and properties of vertebrate smooth-muscle myofibrils and actomyosin. Eur. J. Biochem., 1975, vol. 55, N 1, p. 49-50.

124. Storti R.V., Horovitch S.J., Scott M.P., Rich A., Pardue

125. M.L. Myogenesis in primary cell cultures from Drosophi-la melanogaster: protein synthesis and actin heterogeneity during development. Cell, 1978, vol. 13, p. 589-598.

126. Strohman R.C., Moss P.S., Micon-Eastwood J., Spectro D.,

127. Przybla A., Peterson B. Messenger RNA for myosin polypeptides: isolation from single myogenic cell cultures. Cell, 1977, vol. 10, p. 265-273.

128. Szent-Gyorgyi A.G. A new method for the preparation of actin. J. Biol. Chem., 1951, vol. 192, N 1, p. 361-369.

129. Tolnai S. A method for viable cell count. Tissue Culture

130. Association Manual, 1975, vol. 1, N 1, p. 37-38.

131. Tonomura Y. Muscle proteins, muscle contraction and cationtransport. Tokyo: Univers. of Tokyo Press, 1972. 749 p.

132. Trayer J.P., Perry S.V. The myosin of developing skeletalmuscle. Biochem. Z., 1966, vol. 345, N 1, p. 87-100.

133. Tregear R.T., Squire J.M. Myosin content and filament structure in smooth and striated muscle. J. Mol. Biol., 1973, vol. 77, N 2, p. 279-290.

134. Van Belle H. New and sensitive reaction for automatic determination of inorganic phosphate and its application to serum. Anal. Biochem., 1970, vol. 33, N 1, p. 132-142.

135. Vandekerckhove J., Leavitt J., Kalmnaga T., Weber K. Coexpression of a mutant p-actin and the two normal jb~ and ^-cytoplasmic actins in a stably transformed numan- 106 cell line. Cell, 1980, vol. 22, N 3, p. 893-899.

136. Verderame M., Alcorta D., Egnor M., Smith K., Pollack R.

137. Cytoskeletal P-actin patterns quantitated with fluorescein isothiocyanate-phalloidin in normal and transformed cells. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. Biol Sci., 1980, vol. 77, N 11, p. 6624-6628.

138. Waterson R.H., Fishpool R.M., Brenner S. Mutants affectingpar.amyosin in Caenorhabhabditis elegans. J. Mol. Biol.,1977, vol. 117, p. 679-697.

139. Watras J. Changes in rat cardiac myosin during developmentand in culture. J. Mol. and Cell. Cardiol., 1981, vol. 13, N 11, p. 1011-1021.

140. Watt F., Harris H., Weber K., Osborn M. The distribution ofactin cables and microtubules in hybrids between malignant and non-malignant cells, and in tumors derived from them. J. Cell Sci., 1978, vol. 32, № 8 ,, p. 419-432.

141. Weber K., Osborn M. The reliability of molecular weight determination by sodium dodecyl sulfate-polyacrilamide gel electrophoresis. J. Biol. Chem., 1969, vol. 244, N 16, p. 4406-4412.

142. Whalen R.G., Butler-Browne G.S., Gros F. Identification ofnovel form of myosin light chain present in embryonic muscle tissue and cultured muscle cells. J. Mol. Biol.,1978, vol. 126, N 3, p. 415-431.

143. Whalen R.G., Butler-Browne G.S., Sell S.M., Gross F.

144. Transitions in contractile protein isozymes during muscle cell differentiation. Biochimie, 1979, vol. 61, p. 625-632.

145. Whalen E.G, Sell S.M., Butler-Browne Gt.S., Schwartz K.,

146. Bouveret P., Pinset-Harstrom I. Three myosin heavy chain isozymes apper sequentially in rat muscle development. Nature, 1981, vol. 292, p. 805-809.

147. Whalen R.G., Sell S.M., Ericson A., Thornell L.E. Myosinsubunit types in skeletal and cardiac tissues and their developmental distribution. Devel. Biol., 1982, vol. 91, N 2, p. 478-484.

148. Write W.E. The regulation of myosin light-chains synthesisin heterocarion between differentiated and undifferentiated myogenic cells. Cell and Muscle Motility, 1982, vol. 2, p. 177-184.