Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Активность (изо)ферментов креатинфосфокиназы, лактатдегидрогеназы, содержание креатина в сыворотке крови и мышечной ткани, проницаемость эритроцитарных мембран при трихинеллезе различной степени тяжести (экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Активность (изо)ферментов креатинфосфокиназы, лактатдегидрогеназы, содержание креатина в сыворотке крови и мышечной ткани, проницаемость эритроцитарных мембран при трихинеллезе различной степени тяжести (экспериментальное исследование)"

Р Г Б ОЛ

> Ь № «

МИНСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

УДК 61Г>. 995.132. 6-008. 9-07

БУТВИЛОВСКИЙ ВАЛЕРИЙ ЭДУАРДОВИЧ

АКТИВНОСТЬ (ИЗО)ФЕРМЕНТОВ КРЕАТИНФОСФОКИНАЗН, ЛАКТАТДЕГИДРО-ГЕНАЗЫ, СОДЕРЖАНИЕ КРЕАТИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ, ПРОНИЦАЕМОСТЬ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ МЕМБРАН ПРИ ТРИХИНЕЛЛЕЗЕ РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ).

03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой сюиини кандидата медицинских наук

Минск - 1996

Рабсиа выполнена на кафедрах биологии и биохимии Минскою меднцин-скшо института.

Научный руководители: докюр медицинских наук, профессор В. К. Кухта, кандидат медицинских наук, доцент Р. Г. Заяц.

Официальные оппонент: заслуженный деятель науки Республики Беларусь, доктор медицинских наук, профессор В. Г. Колб, доктор биологических наук; старший научный сотрудник А. Б. Чещооик.

Оппонирующая организация: Витебский медицинский институт.

Защита состоится "25~" 04-___ 1996 года в . часов на заседании совета по защите диссертаций (Д 03. 18. 08) при Минском государственном медицинском институте (220116, Минск, проспект Дзержинского, 83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан "¡¿" марта 1996 года.

Учений секретарь специализированного совета

кандидат биологических паук Л. А. Нвншпонич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследований. Трихинеллез является природнскраговым заболеванием. На территории Беларуси имеются стационарные природные (А. А. Богуш, 1988) и природно-синантропные (Ю. С. Клейн и соавт., 1984; Ю. С. Клейн, А. А. Веденьков, 1992) очаги инвазии, обеспечивающее высокую заболеваемость - 0,72+0,13 на 100 ООО населения (Г. Н. Чистенко, 1994).

В настоящее время решен ряд вопросов диагностики, патогенеза, клиники и лечения трихинеллеза. Изучены морфологические изменения мышечной ткани (Ю. А. Березанцев, 1963; И. В. Оксов, 1986; D. Ribas-MujаI, J. Н. Rivera-Pcmar, 1968; J. Zarzycki et al., 1969; Р. Gab Pye I etal., 1975, 1985, 1987; D. Despoimier, 1975, 1993; B. Kaczmareket al., 1992), некоторые показатели водно-солевого (0. -Я. Л. Бекиш, 1973; Я. Сенутайте, 1976), липидного (Я. Сенутайте, 1986), белкового (Н. Н. Озерецксеская и соавт., 1969, 1985; Е. М. Цветанова, 1975; Я. Сенутайте, 1976; Z. Pawlcwski, 1969), углеводного обмена (Ю. А. Березанцев, Д. В. Борщуков 1979; Я. Сенутайте, 1976; Z. Pawlcwski, 1969) в организме хозяина при трихинеллезе. Показано участие в формировании хозяино-паразитарных взаимоотношений при трихинеллезе систем гистамина (О.-Я. Л. Бекиш, 1973; И. И. Бурак, 1982), серотонина (В. В. За-творницкая, 1981), ацэтилхолина (Н. Н. Острейко, 1986), симпато-адреналовой системы (Ю. Т. Никулин, 1989), эйкозаноидов (В. Н. Федосов, О.-Я. Л. Бекиш, 1992).

Наряду с этим остается нераскрытой роль активности вамго энзима энергообеспечения - креатинфосфокиназы, терминального фермента гликолиза - лактатдегщюгеназы, а также их изоферментов, роль изменения содержания креатина - специфического компонента мышечной ткани, не изучена проницаемость эритроицтарных мембран инвазированного организма. Отсутствует работа по комплексной оценке морфологических и биохимических показателей при экспериментальном трихинеллезе.

Медицинская и социальная значимость трихинеллеза обусловлены такелым течением заболевания (Н. Н. Озерецковская, 1978; Н. Н. озерецковская и соавт., 1985) и наносимым им экономическим ущербом (Т. И. Тверцохпебова, 1988).

Важное значение проблема трихинеллеза имеет для ветеринарии и народного хозяйства, так как данное заболевание резко снижает продуктивность сельскохозяйственных животных, и инзазированное мясо непригодно для пищевой промышленности (В. П. Нелюбин и соавт., 1981).

Наиболее информативными и специфичными методами диагностики трихинеллеза являются обнаружение личинок в биоггтатах скелетных мышц и иммунологические методы (А. С. Бесга-юв, 1975). К сожалению, антитела появляются в крови на 3-4-ой неделях заболевания, а биопсия не всегда проводится из-за ее травматичное™. Поэтому особый интерес приобретает биохимиче-

ские метода и оценка функциональных изменений в фганизме, так как в мышечной ткани происходят глубокие морфологические перестройки и стойкие изменения метаболизма, развивающиеся на основе взаимоотношений в системе хозяин - паразит (Я. Сенутайте, 1990).

Создание моделей экспериментального трихинеллеза различной степени тяжести (0. -Я. Л. Бекиш и соавт., 1980) помогает изучать вопросы патогенеза заболевания, разрабатывать и совершенствовать метода диагностики.

Изучение метаболических изменений в фганизме животных на разных стадиях заболевания позволяет выявить и сщнить их значимость в биохимических аспектах патогенеза инвазии, и разработать теоретические предпосылки использования полученных данных в совершенствовании диагностики трихинеллеза человека.

Связь работы с крупными научными программами, темами. Диссертация является частью плана научно-исследовательской работы Минского медицинского института по теме "Действие антигельминпных соединений при трихинеллезе"(Государственный регистрационный номер 01920006454).

Цель настоящей работы: выяснить ценность комплексного изучения активности креа-тинфосфокиназы, участвующей в процзссах выработки и транспорта энергии, активности лактат-дэгмдрогеназы - фермента терминальной стадии гликолиза и их изоферментов, содержания креатина как индикатора состояния мышечной ткани, проницаемости плазматических мембран, состояния активности ядерного аппарата повревденных мышечных волокон при экспериментальном трихинеллезе различной степени тяжести в динамике для более глубокого понимания патогенеза инвазии, а также обосновать возможность использования констелляции этих показателей для ранней диагностики данного заболевания.

Задачи исследования:

1. Изучить в динамике экспериментального трихинеллеза различной степени тдазста активность (изо)ферментов креатинфосфокиназы и лактатдегидрогеназы, содержание креатина в сьворотке крови и различных нейромоторных (тонических, тетанических, смеш+ьх) единицах скелетной мускулатуры и сердечной мышце.

2. Исследовать проницаемость эритроцитарных мембран при экспериментальном трихинеллезе тяжелого, среднего и легкого течения в динамике.

3. Изучить кариометрические показатели мышечных волокон в динамике экспериментального трихинеллеза различной степени тяжэсти.

4. Оценить значимость изученных показателей в патогенезе трихинеллеза и использование их для оценки компенсаторных возмсишггей организма, степени тяжести инвазии.

Научная новизна работы. Проведенное комплексное изучение активности КФК, ее изоферментов, ЛДГ, а -ГВДГ, содержания креатина в сыворотке крови, диафрагме, икрокжой, бедренной и сердечной мышцах, проницаемости мембран эритрокгта и кариометрических показа-

телей (объем, плоишь, формиццекс) мышечных волокон белых крьс в динамике инвазии различной степени тяжести позволяет судить о их роли в системе паразит-хозяин при трихинеллезе.

Получены данные о характере изменений перечисленных выше биохимических и морфологических параметров и выявлены отличия в активности (содержании) их в мышечной ткани в динамике экспериментального трихинеллеза различной степени ттоести. Показана их значимость в углублении представлений о биохимических механизмах патогенеза инвазии.

Установлена возможность использования креатана в качестве инцикатора состояния мышечной ткани при определении степени патологических (склеротических) изменений в пораженных мышечных волокнах.

Показана необходимость расчета активности изучаемых фермента относительно единицу массы белка для объективной оценки их изменений в мышечных волокнах.

Данные об изменении проницаемости эритрсщгарных мембран в процессе развития инвазии, свидетельствует о нарушении проницаемости плазматических мембран пораженных мышечных волокон, что позволяет использовать их в качестве дополнительного теста диагностики.

Изучены кариометрические показатели волокон различных нейромоторных единиц и сердечной мышцу в динамике трихинеллеза, что позволяет судить об изменении функциональной активности ядерного аппарата пораженных мышечных волокон в процессах адаптации организма к инвазии.

Практическая значимость диссертации определяется возможностью использования содержания креатина в качестве индикатора патологических изменений миечной ткани в динамике трихинеллеза, а теста проницаемости Эритракгарных мембран - для определения степени тажеш инвазионного процесса.

Данные диссертационной работы используются в преподавании раздела "Паразитология" на кафедрах биологии вузов Республики Беларусь (Минского, Витебского, Гродненского медицинских институтов) и раздела "Паразитарные болезни" на кафедре инфекционных болезней Минского медицинского института.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Уменьшение активности креатанфосфокиназы, лактатдепщрогеназы, а -гидроксибутаратдегщогеназы и снижение ссщершния креатина в мышечной ткани при экспериментальном трихинеллезе различной степени тяжести на стадиях мигрирующих, неинкапсулиро-ванных личинок, ранней инкапсуляции является следствием патогенного действия паразитов и развивающейся гипоксии.

2. В скелетных мышцах при экспериментальном трихинеллезе происходит уменьшение поперечной исчерченности пораженных мышечных волокон и возврат к эмбриональному (МВ) типу изофермента креатанфосфокиназы.

3. Различнье нейромоторные единицы сблдцаш" разными компенсаторными возможностями в ответ на паразитирование в них личинок Trichinel la spi ral is, чти связано с неодинаковым количеством поражаемых тонических мышечных волокон.

4. Содержание креатана можно использовать в качестве индикатора патологических (склеротических) изменений мышечной ткани при трихинеллезной инвазии.

5. Показатели проницаемости эритроцитарных мембран мошз использовать для определения степени тяжести инвазионного процесса.

6. Констелляция изученных биохимических и морфологических показателей свидетельствует об их значимости в патогенезе трихинеллеза и позволяет рекомендовать их использование для оценки компенсаторных возможностей организма и степени тяжести инвазии.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на мевдунарсдной научной конференции "Актуальные проблемы медицинской и ветеринарной паразитологии" (Витебск, 1993), научной конференции молсдах ученых и студентов "Актуалы-ю вопросы медицины" (Витебск, 1994), научной конференции "Гельминттахнозы - меры борьбы и профилактика" (Москва, 1994), научной конференции "Актуальные вопросы биологии и медицины" (Минск, 1995).

Публикация материалов исследований. По материалам исследований опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 статьи, в которых изложены основные полсшния выполненных исследований.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации излдаэны на 170 страницах машинописного текста, иллюстрированы 48 рисунками и содержат 45 таблиц в прилдаениях.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3-х глав ссбствежых исследований, заключения, выведав, практических предложений, списка использованной литературы и прилдаения (материалы внедрения и цифровой материал в таблицах).

Библиографический указатель адершт 103 работы на русском и 96 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальная часть работы выполнена на 252-х белых крысах самиах линии Wistar средней массой 200 г., которые были разделены на 6 групп. В первой и в третьей группах, состоящих из 49 крыс каждая, в пятой группе, состояний из 28 животных, моделировали экспериментальный трихинеллез легкой, средней степени тяжести и тяжелого течения пероральным введением личинок Т. spi ral is лабораторного штамма 45-60-дневного возраста, 8 течение 20 лет пассированного на белых крысах сотрудниками кафедры биологии Минского медицинского институ-

та, в дозе 5, 20, 35 личинок на грамм массы тела соответственно (0. -Я. Л. Бекиш и соавт., 1980). Вторая и четвертое группы, состоящие из 49 крыс каждая, и шестая, состоящая из 28 животных, являлись контролем к животным опьгпных групп (интакггьье животные).

Животных 1-4-ой групп умерирляли декапитаиуей на 7-е, 14-е, 21-е, 30-е, 45-е, 60-е, 90-е сутки после заражения. Животных 5-6-ой групп декапитаровали на 7-е, 14-е, 21-е, 30-е сутки после заражения. 1<Ытрольнье и опытные группы составляли по 7 животных на кавдый срок инвазии. Следует отметать, что животные с трихинеллезом тяжелого течения погибали спустя 30-х суток инвазии из-за тяжеста клинического течения.

Кровь использовали для определения проницаемости эритроиуггарных мембран, содержания креатинина и креатина, активности (изо)ферментов ЛДГ и КФК.

После вскрытия животных отсепаровывали диафрагму, икронсшую, бедренную и сердечную мыший и отмывали их от крови физиологическим раствором. На аналитических весах взвешивали по 100 мг образцов вышеуказанных мышц и помещали их в среду гомогенизации (фосфат натрия - 0,1 моль/л, pH 7,3 и тритон Х-100 -1 г/л) в таком количестве, что соотношение ткани и среды гомогенизации составляло 1:29. Измельчение тканей проводили в стекляннсм гомогенизаторе с тефлоновым пестиком при 800 оборотах в 1 мин на протяжении 2 мин и 30 с. Гомогенаты центрифугировали при 10 ООО g в течение 20 мин. Все этапы гомогенизации и центрифугирования проводили при температуре № С. Получали надмитохонлриальный супернатант, содеркаи^й, в основном, икгоплазматические ферменты, который использовали для последующих исследований.

Определение проницаемости эритроцитарных мембран проводили по методу В. Н. Колмакова и соавт. (1982), в модификации В. С. Камышникова, В. Г. Колба, Е. Т. Зубовской (1985). Сущность метода заключается в том, что в смеси изотонических растворов мочевины и хлорида натрия происходит частичный гемолиз помешенных туда эритроцитов, обусловленный быстрой фильтрацией мочевины через дефекты мембраны внутрь эритроцитов. Интенсивность гемолиза прямо пропорциональна количеству дефектов эритроцитарной мембраны.

Определение содержания общего белка проводили колориметрическим методом по Лоури (1951).

Определение содержания креатина основывается на его способности превращаться гидэолитаческим путем в креатинин при высокой температуре в присутствии соляной кислоты. Определение креатанина проводили с помощью диагностических наборов "Согггау" (Польша) на автоматическом фотометре Сопгау Plus.

Определение активности креатинфосфокиназы проводили кинетическим спектрофо-ТОметрическим метода Ol iver-Rosalki (Т. Oliver, 1955, S. В. Rosalki, 1967) в модификации G. Szacz, W. Gruber, E. Bernt (1976) на автоматическом фотометре Corray Plus с использованием стандартных наборов Согаау CK (Польша).

Определение активности изоферментов креатинфосфокиназы проводили хромато-графичедам методам D. Mercer (1974) в модификации А. Н. Козина (1979) на колонках с ДЭАЭ-сефадекссм А-50 ("Pharmacia" llbeujw). Данный метод не позволяет разделить изоформы ММ и митохонприальный изоферменг КФК, но активность КФК митохонсриальной мы не определяли, так как не располагали крысиной антисывороткой против М субьединиц КФК.

Первая хроматографическая фракция содержала смесь КК- Ж и КК- мит., вторая - содержала смесь КК- MB с незначительным ссщерканием (около 1%) КК- ВВ. В полученных алюатах измеряли ферментативную активность по вышеупомянутой методте.

Определение активности лактатдегидрогеназы проводили на автоматическом фотометре Corraay Plus ("Сопгау" Польша) с использованием диагностических наборов Согтау LDH. Метод основан на регистрации убыли ИДЦН при его окислении в ходе прямой лактатдегццрогеназ-ной реакияи (Д. Вилкинсон, 1981).

Определение активности а-гидроксибутиратдегидрогеназы. Вместо измерения активности ДЦГ-] в сыворотке крови и гомогенатах мышечной ткани определяли активность а -ГВДГ, Из пяти изоферментов ЛДГ все они имеет одинаковое сропртво к пирувату, но ЛДГ-, и ЛДГ2 в отличие от других изоферментов способны использовать в качестве субстрата 2-оксимаслянную кислоту (а-гидроксибутират) (S. В. Rosalki, J. Н. Wilkinson, 1964).

Активность а-ГЕДГ измеряли на автоматическом фотометре Cormay Piuse использованием стандартных диагностических наборов. Метод основан на регистрации убыли НАДН при его окислении.

Морфологические методы. Для фиксации материала (участки диафрагмы, сердечной, икроножной, бедренной мышц) использовали 1С% нейтральный формалин. Материал заливали в парафин. Толщина парафиновых срезов составляла 6-8 микрометров. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, изменения регистрировали визуально с помощью светового микроскопа. Ка-риометрмо проводили с помощью окуляр-микрометра (К. Таило, 1980; Г. Г. Автаноилов, 1990). Изучали объем, площадь, показатель элонгации ядер. В процессе исследований проанализировано 1008 препаратов.

Приготовление морфологических препаратов выполнено в Центральной научно-исследовательской лаборатории Минского государственного медицинского института.

Расчет данных проводили с помощью персонального компьютера PC 486 пакетами SuperCalk 4 и Epistat. Используя t критерий Стъвдента, определяли показатель достоверности различий (Р).

КАРИОМЕТРИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ МЫИЕЧНОЙ ТКАНИ БЕЛЫХ КРЫС В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТРИХИНЕЛЛЕЗЕ

Результаты морфологических исследований показали, что трихинеллезная инвазия вызывает значительные изменения кариометрических показателей мышечных волокон различных нейромоторных единиц, а это свидетельствует об изменении функциональной актизности их ядер. Наиболее выражены изменения при трихинеллезе средней степени тяжести и тяжелого течения.

Так при трихинеллезе средней степени тяжести на 30-е сутки во всех изунаемых скелетных мышцах отмечено максимальное увеличение площади, объема и уменьшение показателя элонгации: для диафрагмы - плошддь увеличилась до 142,9%, объем - до 174,3% от контрольных величин (24,7+0,28 мкм2 и 41,2+0,81 мкм3 соответственно), форминдекс уменьшился до 83,8% (5,21+0,111 в контроле); для икроножной - площадь увеличилась до 132,6%, объем - до 169,7% от контрольных цифр (24,83+0,34 мкм2 и 40,46+0,94 мкм3 соответственно) и форминдекс уменьшился до 80% (5,51+0,104 в контроле); для четырехглавой - площадь увеличилась до 130%, объем - до 163,6% от уровня контроля (25,40+0,348 мкм2 и 42,66+0,962 мкм3 соответственно (Р < 0,001)).

При тяжелом течении к 30-м суткам площадь, объем ядер достигали для диафрагмы 167% и 310,5%, а показатель элонгации 48,2% от контрольных величин (Р < 0,001); для икроножной - 161,1%, 300,6%, 45,5% (Р < 0,001); для четырехглавой мьшиы - 142,9%, 228,7%, 54,2% соответственно (Р < 0,001).

В сердечной мышце при трихинеллезной инвазии различной степени тяжести обнаружена тенденция уменьшения площади и объема ядер кардиомиоцитов, начиная с 7-х по 21-е сутки после заражения, что особенно выражено при тяжелом теиении: до 77,7% и 66,99-й (Р < 0,001) по сравнению с контролем (28,18+0,37 мкм2, 52,73+1,135 мкм3 соответственно. На 30-е сутки трихинеллеза среднего и тяжелого течения обнаружено статистически достоверное (Р < 0,001) увеличение вышеупомянутых показателей, особенно при трихинеллезе тяжелого течения до 124,5%, 130,6% соответственно, и форминдекса до 111,7% от контрольных величин (4,75+0,09). На поздней мышечной стадии при трихинеллезе легкой и средней степени тяжести наблюдалась постепенная нормализация изучаемых показателей.

Эти даннье отражают динамику экспериментального трихинеллеза в мышечных волокнах. Нарастание инвазионного начала на 14-30-е сутки изменяет функциональную активность ядер за счет токсико-аллергического действия личинок Т. spiralis. На поздней мышечной стадии (45-S0-e с/тки) происходит ограничение патологического пооцесса за счет формирования капсул, что приводит к нормализации функциональной активности ядер посаженных мышечных волокон. Выраженность этих процессов прямо пропорциональна тяжести инвазии. Различная степень изменения кариометрических показателей разных нейромоторных единиц

подтверздэет мнение, что наиболее функционально активные мышцы инвазируются сильнее, чем мышцы, имеющие меньшую нагрузку (В. А. Калюс, 1952; Ю. А. Березанцез, 1974), а также то, что личинки Т. spiralis инвазирукгг только тонические мышечные волокна (A. Baghen et al., 1986) и оседают преимущественно в них (0. -Я. Л. Бекиш, М. И. Рим-жа, 1971; 0. -Я. Л. Бекиш, 1973).

Сердечная мышца характеризуется специфической реакцией на трихинеллезную инвазию. Она не поражается непосредственно личинками Т. spiralis, но токсико-аллергическое действие продуктов обмена половозрелых форм и формирующихся личинок оказывает значительное влияние на функциональную активность ядер кардиомиоцитов, в которых нарушаются обменные процессы, приводящие к дистрофическим изменениям клеток и уменьшению размеров ядер.

ПРОНИЦАЕМОСТЬ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ МЕМБРАН БЕЖ КРЫС В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТРИХИНЕЛЛЕЗЕ

Состояние плазматических мембран является одним из интегративных показателей степени адаптации организма, фактором поддержания постоянства внутренней среды и регуляции разнообразных процессов в клетке. Мы обнаружили, что на 7-е сутки инвазии легкой степени тяжести осмотическая резистентность эритроцитов оставалась высокой. В дальнейшие сроки заболевания (14-30-е сутки) осмотическая резистентность эритроцитов статистически достоверно (Р < 0,01-0,001) снижалась как при трихинеллезе легкой и средней степени тяжести, так и при тяжелом течении инвазии, что, вероятно, являлось результатом патогенного действия развивающихся личинок Т. spiralis. Наибольшая степень гемолиза эритроцитов (даже с 0,12-0,15 молярным раствором мочевины) наступала на 21-30-е сутки при легком течении, на 21-45-е сутки (средняя степень тяжести), на 14-30-е сутки (тяжелое течение), что совпадало с периодом внедрения личинок в мышцы и началом их инкапсуляции. При трихинеллезе легкого течения компенсаторные сдвиги в организме происходили уже на 45-е сутки после заражения, а при трихинеллезе средней степени тяжести на 60-90-сутки.

Так как установлена высокая корреляция мевду изменением свойств мембран эритроцитов и клеток внутренних органов (Ю. В. Постнов, 1985), то тест по изучению проницаемости эритроцитарных мембран, по-видимому, отражает причины увеличения в сыворотке крови активности ферментов, особенно на стадиях мигрирующих, неинкапсулированных личинок и на стадии ранней инкапсуляции.

СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКА И КРЕАТИНА, АКТИВНОСТЬ КФК, ЛДГ И ИХ ИЗОФЕРМЕНТОВ В МЬШЕЧНОЙ ТКАНИ И СЫВОРОТКЕ КРОВИ БЕЛЫХ КРЫС В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТРИХИНЕЛЛЕЗЕ

В своей работе мы выражали активность (изо)ферментов относительно единицы массы сырой ткани и на миллиграмм содержащегося в ней белка. Это было вызвано тем. что в течении инвазионного процесса значительно изменялось содержание белка в мышеиных волокнах как следствие токсико-аллерги«еского действия продуктов обмена паразитов и формирования капсул.

Мы установили, что содержание белка на 7-е сутки повышалось максимум з диафрагме: при легком течении инвазии до 47,25+0,46 мг/г ткани (Р < 0,001); при средней степени тяжести - до 51,86+0,14 мг/г ткани (Р < 0,001); при трихинеллезе тяжелого течения -до 51,71+0,18 мг/г ткани (Р < 0,001) от контрольных цифр (43,96+0,46 мг/г ткани). Уменьшение содержания белка з мышечной ткани на 14-21-е сутки трихинеллеза средней степени тяжес™ до 96,3% в диафрагме, 95,1% в икроножной мышце, 96,6% в четырехглавой мышце (Р < 0,05) и до 87,1%, 94,1%, 94,6% (Р < 0,01-0,001) в этих же мышцах соответственно при тяжелом течении, вероятно, является следствием механического и токсико-аллергического действия личинок. Увеличение содержания белка на 30-е сутки, происходило, по-видимому, за счет образования капсул: максимум в икроножной мышце до 50,25+0,75 мг/г ткани (123,4%) при трихинеллезе средней степени тяжести. Начиная с 45-х суток инвазии легкой и средней степени тяжести, показатели постепенно нормализовались, в связи с восстановлением компенсаторных возможностей организма.

В сердечной мышце набладалось статистически достоверное уменьшение содержания белка на 14-е сутки, особенно при среднетяжелом до 41,73+0,41 мг/г ткани и при тяжелом течении до 39,64+0,41 мг/г ткани (Р < 0,001), в отличие от 47,18+0,43 мг/г ткани а контроле, что, вероятно, является следствием токсико-аллергического действия продуктов обмена как половозрелых форм, так и личинок Т. spiralis.

При выражении активности исследуемых показателей на миллиграмм белка ошибки в их "истинных" уровнях значительно меньше, чем при выражении активности на грамм ткани.

Специфическим компонентом мышечных клеток является креатин (Z. Dvorak, 1981). Наши исследования выявили уменьшение содержания креатина в мышечных волокнах различных нейромоторных единиц скелетной мускулатуры и сердечной мышцы на стадиях мигрирующих, неинкапсулированных личинок, ранней инкапсуляции. Максимальные изменения содержания креатина обнаружены в диафрагме на 14-45-е сутки трихинеллеза средней степени тяжести: уменьшение до 37,^ и на 14-30-е сутки тяжелого течения-до 32,6% (Р < 0,001) от уровня контроля (1,788+ 0,01 мг/г ткани).

-10В икроножной мышце на 30-45-е сутки трихинеллеза средней степени тяжести содержание креатина статистически достоверно уменьшалось до 69,2% (Р < 0,001). При тяжелом течении до 21-х суток инвазии содержание креатина было повышено и составляло 130,5%, а на 30-е сутки уменьшалось до 66,3% (Р < 0,001) от контрольных величин (2,732+0,02 мг/г ткани).

В сердечной мышце также отмечен фазный, статистически достоверный характер изменений содержания креатина, особенно при тяжелом течении: на 7-е сутки содержание креатина составило 1,152+0,01 мг/г ткани, на 14-е сутки уменьшалось до 69,7%, на 21-е сутки несколько повышалось до 90,2%, а на 30-е сутки снижалось до 50,8% (Р < 0,001) от уровня контроля - 1,295+0,01 мг/г ткани.

Содержание креатина в сыворотке крови было увеличено при трихинеллезе всех степеней тяжести. Максимальное повышение данного показателя при легком течении обнаружено на 21-е сутки до 115,4%, при трихинеллезе средней степени тяжести на 21-е сутки до 148,3%, при трихинеллезе тяжелого течения на 30-е сутки до 155,2% (Р < 0,001) от контрольных величин - 30,42+0,02 мг/л. Указанные изменения объясняется патогенным действием паразитов, а также необходимостью энергетического обеспечения формирующихся вокруг личинок капсул.

В связи с этим мы считаем целесообразным рекомендовать содержание креатина в качестве индикатора состояния мышечной ткани при определении степени ее патологических изменений, поскольку в соединительной ткани, развивающейся в пораженных мышечных волокнах при трихинеллезе, он практически отсутствует.

Результаты проведенного исследования показали, что активность КФК, изоферментов КК-ММ и митохондриального (элюат 1), КК-МВ и КК-ВВ (элюат 2), ЛДГ иа-ГВДГ (ЛДГ, + ЛДГ2) в сыворотке крови и мышечной ткани при трихинеллезе различной степени тяжести значительно изменялось, по-видимому, за счет патогенного действия паразитов и возникающей в организме гипоксии.

В процессе трихинеллезной инвазии активность ферментов в диафрагме (тонические нейромоторные единицу) уменьшалась с 14-х по 21-е сутки (легкая степень тяжести), с 14-х по 30-45-е сутки (средняя степень тяжести), с 14-х по 30-е сутки (тяжелое течение). Наиболее выражены и статистически достоверны (Р < 0,001) изменения при тяжелом течении инвазии на 30-е сутки (уменьшение для КФК до 27,02+0,56 Е/мг белка (29,6%), для ЛДГ до 1,798+0,03 Е/мг белка (35,7%), для а-ГБДГ до 0,154+0,01 Е/мг белка (54,3% от контрольных величин). С 30-х (легкое течение) и с 45-60-х суток (средняя степень тяжести) данные показатели имели тенденцию приближения к контрольным цифрам.

В икроножной мышце (тетанические нейромоторные единицу) активность а-ПВДГ уменьшалась на 14-е сутки легкого течения до 69,6% (Р < 0,001), с 14-х по 21-е сутки

трихинелпеза средней степени тяжести и тяжелого течения до 75,4% и 77,1% соответственно (Р < 0,001), увеличивалась на 21-е сутки при легком течении до 117,3% (Р < 0,001) и на 30-е сутки при тяжелом течении до 110% (Р < 0,001) от контрольных цифр - 0,244+0,01 Е/мг белка. В дальнейшие сроки легкого и среднетяжелого течения наблюдалось приближение этого показателя к контрольным величинам.

Активность КФК и ЛДГ статистически достоверно (Р < 0,001) уменьшалась на 21-30-е сутки при легком течении до 79,9% и 86,5%, на 30-45-е сутки при среднетяжелом течении до 64% и 75,2%, на 30-е сутки при тяжелом течении до 68,9% и 75,6% от контрольных величин - 262,13+2,18 и 10,08+0,01 Е/мг белка соответственно. Статистически достоверное (Р < 0,001) увеличение активности этих ферментов набл,сдалось на 21-е сутки трихинеллеза среднетяжелого течения до 110,7% от контрольных величин для КФК и до 130,1% для ЛДГ, а также на 7-21-е сутки при тяжелом течении до 145,3% для КФК и до 157,6% для ЛДГ. В более поздние сроки трихинеллеза легкого и среднетяжелого течения наблюдалась тенденция нормализации активности этих ферментов.

Изменения активности ферментов в четырехглавой мышце (смешанные нейрсмоторные единицу) занимали промежуточное положение мезду тоническими и тетаническими нейромотор-ными единицами, но были более сходны с тоническими.

В миокарде при легком течении инвазии на 7-21-е сутки активность ЛДГ статистически достоверно увеличивалась до 124,2% (Р < 0,001) от уровня контроля - 5,68+0,07 Е/мг белка, а активность КФК и а-ГЕДГ уменьшалась до 74,1%, 84,5% (Р < 0,001) от контрольных цифр - 43,08+0,6 и 7,18+0,1 Е/мг белка соответственно, что, очевидно, является свидетельством развивающейся гипоксии. На 30-90-е сутки наступали компенсаторные изменения и показатели приближались к контрольным величинам и сердце возвращалось к обычному аэробному режиму работы. При трихинеллезе средней степени тяжести и при тяжелом течении обнаружено статистически достоверное (Р < 0,001) уменьшение активности всех изучаемых ферментов с 7-х по 21-30-е сутки (максимальное снижение активности ЛДГ до 79,8% на 14-е сутки трихинеллеза средней степени тяжести, максимальное снижение активности а-ГВДГ на 30-е сутки инвазии средней степени тяжести до 81,1%, максимальное снижение активности КФК до 63,3% в эти же сроки тяжелого течения), что свидетельствует о глубоких перестройках энергетических процессов. При трихинеллезе среднетяжелого течения на 30-45-е сутки становится заметна тенденция приближения этих показателей к контрольным цифрам.

Таким образом, повышение активности ЛДГ при однозгеменном снижении активности КФК и а-ГБДГ, по-видимому, свидетельствует о гипоксии, особенно для мышц требующих достаточного снабжения кислородом. Уменьшение активности ЛДГ при одновременном уменьшении активности КФК и а-ГБДГ может быть результатом значительных изменений энергообеспечения

мышц в условиях недостатка кислорода. Повышение активности ЛДГ, КФК, а-ГБДГ, очевидно, является отражением компенсаторных процессов в мышечной ткани, и чем раньше возникают указанные изменения, тем большими компенсаторными возможностями обладает данная нейро-моторная единица.

В сыворотке крови при легком течении инвазии активность ферментов увеличивалась с 7-х по 30-45-е сутки, достигая максимума для КФК 127,1% на 21-е сутки, для ЛДГ и а-ГЕДГ 125% и 134,7% соответственно на 30-е сутки (Р < 0,001). При среднетяжелом течении максимум активности для а-ГЕДГ (133,5%) наблюдался на 7-е сутки, для ЛДГ (129%) на 14-е сутки, для КФК (142,4%) на 21-е сутки (Р < 0,001). При тяжелом течении максимальное увеличение активности ферментов (Р < 0,001) наблкдалось на 30-е сутки: для а-ГЕДГ (130,9%), для ЛДГ до 168,7%, для КФК до 157,8% от уровня контрольных цифр: 244,4+1,54, 711,9+2,5 и 5523,6+10,56 Е/л соответственно, что объясняется выходом их в кровь из пораженных мышечных волокон через плазматические мембраны.

При изучении изоферментного состава КФК в скелетных мьацах установлено увеличение активности МВ- и ВВ- изоформ и уменьшение активности ММ- и митохондриальной изоформ КФК на стадиях кишечных трихинелл, мигрирующих, неинкапсулированных и инкапсулированных личинок (рис.1-3).

120 • ,00. р, 80 • 8 60 -Ш 40 20 • ]П п □ Эл ■ Эд пп

К 7 14 21 30 45 60 90 К 7 14 21 30 4) 60 90 К 7 14 21 30 45 60 90 К 7 14 21 30 45 60 90 К 7 14 21 30 45 60 90 Срок инвазии Диафрагма икроножная четырехглавая сердечная сыворотка мышца мышца мышца крови

Рис. 1. Активность изоферментов КК-ММ и КК-мит. (элюат 1), КК-МВ и КК-ВВ (элюат 2) в мышечной ткани и сыворотке крови в контроле, в различные сроки экспериментального трихинеллеза легкой степени тяжести.

Максимальные статистически достоверные изменения обнаружены в диафрагме: при трихинеллезе средней степени тяжести на 30-е сутки аетивность ММ - формы и митохондриальной формы уменьшалась до 80% в отличие от 95,2% в контроле, и повышалась активность МВ- и ВВ - форм до 20% в отличие от 5,01% в контроле (Р< 0,001); при тяжелом течении на

-1314-е сутки инвазии активность ММ - ¿юрмы и митохоццриальной формы уменьшалась до 74.9% в отличие от 94,9% в контроле, и повышалась активность МВ- и ВВ - форм до 25,1% з отличие от 5,07% в контроле (Р < 0,001).

Возвращение к эмбриональной МВ- форме КФК к 21-45-м суткам заболевания, вероятно, можно связать с разрушением поперечной исчериенности волокон пораженной мышечной ткани, ибо, как известно, в онтогенезе при формировании поперечной почерченное™ мышц фетальная форма КФК заменяется на КК-ММ (Р. Меиггеег е1: а1., 1981).

К 7 14 21 30 45 60 90 К 7 14 21 30 45 60 90 К 7 14 21 30 45 60 00 К 7 14 21 30 45 60 90 К 7 14 2 1 30 45 (

Срок инвазии

Диафрагма икронткная четырехглавая сердечная сыворотка мышца мышца мышца крови

Рио 2. Актовность изоферментов КК-ММ и КК-мит. (элюат 1), КК-МВ и КК-ВВ (элюат 2) в мышечной ткани и сыворотке крови в контроле, в различные сроки экспериментального трихинеллеза средней степени тяжести.

К 7 14 21 30 К 7 14 2 1 30 К 7 14 2 1 3 0 К 7 14 2 1 30 К 7 14 'I 30 Серии опыта

Диафрагма икроножная четырехглавая сердечная сыворотка мышца мышца мышца крови

Рис. 3. Аетивность изоферментов КК-ММ и КК-мит. (элюат 1), КК-МВ и КК-БВ (элюат 2) в мышечной ткани и сыворотке крови в контроле, в различные сроки экспериментального трихинеллеза тяжелого течения.

53312323324830532331

-14В сердечной мышце наиболее выраженные изменения (р < 0,001) происходили на 30-е сутки при среднетяжелом течении инвазии (уменьшение активности MB- и ВВ- изоформ до 3,96% в отличие от 15,8% в контроле и увеличение активности ММ- и митохоццриальной изоформ КФК до 96% в отличие от 84,7% в контроле). При трихинеллезе тяжелого течения в миокарде на 7-е сутки происходило увеличение активности ММ- и митохоцприальных форм КФК до 95,1% в отличие от 84,9% в контроле, а активность MB- и ВВ - форм уменьшалась до 4,96% в отличие от 15% в контроле. Затем на 14-30-е сутки происходило уменьшение активности ММ- и митохондриальных форм до 78,9% и увеличение активности MB- и ВВ- форм до 21,1%.

В сыворотке крови при трихинеллезе различной степени тяжести к 30-м суткам происходило (особенно выраженное при тяжелом течении) увеличение активности ММ- и митохондриальных изоформ до 95,7% в отличие от 90,1% в контроле и уменьшение активности МВ-и ВВ - форм до 4,33% в отличие от 9,91% а контроле (Р < 0,001).

Таким образом, впервые проведено комплексное исследование биохимических показателей (активность (изо)ферментов КФК и ЛДГ, содержание креатина, проницаемость эри-троцитарных мембран) и кариометрических показателей мышечной ткани в динамике экспериментального трихинеллеза. Впервые получены данные об изменениях активности (изо)ферментов КФК и ЛДГ, содержания креатина в различных нейромоторных единицах скелетной мускулатуры и сердечной мышие в динамике инвазии легкой, средней степени тяжести и тяжелого течения, что позволило выяснить их роль в патогенезе заболевания для оценки состояния компенсаторных процессов и степени тяжести экспериментального трихинеллеза.

ВЫВОДЫ

1. В динамике экспериментального трихинеллеза различной степени тяжести происходят значительные изменения биохимических (активность (изо)ферментов КФК, ЛДГ, содержание белка, креатина, проницаемость эритроцитарных мембран) и кариометрических показателей мышечной ткани (тонические, тетанические, смешанные нейромоторные единицы скелетной мускулатуры, миокард), которые пропорциональны тяжести инвазионного процесса.

2. Наиболее выраженнье изменения кариометрических показателей (формиццекс, объем, плошадь, логарифмы объема и плошдда ядер пораженных мышечных волокон) отмечены на 21-30-е сутки экспериментального трихинеллеза в диафрагме и четырехглавой мышце, что связано с процессом развития инвазии, а также с разным количеством тонических мышечных волокон в различных нейромоторных единицах, которые поражаются личинками Т. spiralis. Увеличение параметров ядер пораженных мышечных волокон свидетельствует об изменении их функциональной активности (это подтвервдется повышением содержания белка в мышечной

ткани) и является следстзием адаптационной реакции инвазиоованного организма к парази-тированию в нем личинок трихинелл.

3. Активность КФК и изо({ермеятов КК-ММ, КК-мит. на стадиях мигрирующих, неин-капсулированных личинок, ранней инкапсуляции в скелетных мышцах уменьшается, а активность КК-МВ и КК-ВВ изоФорм увеличивается, в связи с токсико-аллергическим действием паразитов и исчезновением поперечной исчерченности пораженных мышечных волокон в местах локализации личинок Т. spiralis.

4. Изменения содержания креатина соответствуют изменениям активности КФК, которые составляет единую систему энергообеспечения мышц и поэтому идентично реагируют на патогенное действие личинок Т. spiralis и развивающуюся в организме хозяина гипоксию. Содержание креатина может быть рекомендовано в качестве индикатора стегени поражения мышечной ткани в динамике трихинеллезной инвазии,

5. Изменения активности ЛДГ и а-ГЕДГ в тонических и смешанных нейромоторных единицах скелетной мускулатуры, работающих з анаэробных условиях, отличаются от активности их в тетанических нейромоторных единицах и миокарде, для которого характерен аэробный обмен. На ранних стадиях инвазии аюпвность ЛДГ и активность а-ГЕДГ, которая в тонических и смешанных нейромоторных единицах скелетной мускулатуры не играет особой роли, уменьшается; в тетанических - активность ЛДГ в эти же сроки увеличивается за счет анаэробных изоформ ЛДГ4 и ЛДГ5, а активность а-ГБДГ (ЛДГ, + ЛДГ2) уменьшается как результат патогенного действия личинок Т. spiralis и следствие гипоксии.

6. При экспериментальном трихинеллезе происходит снижение осмотической резистентности эритроцитов, особенно при тяжелом течении инвазии на 14-30-е сутки, что коррелирует с жизненным циклом паразита. Восстановление осмотической резистентности эритроцитов на 45-90-е сутки трихинеллеза легкой и средней степени тяжести отражает развитие компенсаторных процессов инвазированного организма и может использоваться как вспомогательный метод диагностики заболевания.

7. Изучение активности (изо)ферментов ЛДГ, КФК, содержания белка, креатина, проницаемости эритроцитарных мембран, кариометрических показателей мышечных волокон свидетельствует об их роли в патогенезе трихинеллезной инвазии и может бьггь рекомендовано для оценки компенсаторных процессов различных нейромоторных единиц скелетной мускулатуры и сердечной мышцы.

СЛИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бутвиловский В. 3., Давыдов В. В. Реакция различных нейромоторных единиц при экспериментальном трихинеллезе средней степени тяжести (по данным кариометрии) // Ак-туальнье вопросы мединской и ветеринарной паразитологии. Тез. докл. мездунар. науч. конф. - Витебск, 1993. - С. 4-5.

2. Бутвиловский В. Э., Давьдов В. В. Изменение активности креатинфосфокиназы в сь'зо-ротке крови и мышечной ткани при экспериментальном трихинеллезе // Актуальные вопросы медицины. Тез. докл. конф. - Витебск, 1994. - С. 5.

3. Заяц Р. Г. Бутвиловский В. Э. Динамика кариометрических показателей различных групп мышц при экспериментальном трихинеллезе // Материалы докл. науч. конф. Гель-минтозоонозы - меры борьбы и профилактика,- Москва, 1994. - С. 67-69.

4. Бутвиловский В. Э., Давьдов В. В. Динамика проницаемости эритроцитарных мембран при экспериментальном трихинеллезе различной степени тяжести // Актуальные вопросы биологии и медицины. Тез. докл. конф. - Минск, 1995. - С. 47-48.

5. Бутвиловскиий В. Э. Изменение содержания креатина в сыворотке крови и мышечной ткани при экспериментальном трихинеллезе // Актуальные вопросы биологии и медицины. Тез. докл. кок)). - Минск, 1995. - С. 45-46.

6. Бутвиловский В. Э. Изучение активности лактатдегидрогеназа в сыворотке крови и мышечной ткани при экспериментальном трихинеллезе // Здравоохранение.- 1995.- N 11. - С.25-27.

7. Действие антигельминтных соединений при трихинеллезе: Отчет о НИР (заключ.) / Минский гос. мед. ин-т; Руководители работы Р. Г. Заяц, И. В. Рачковская; № ГР 01920006454. - Минск, 1995. 55 с.

8. Изоферменты креатинфосфокиназы при экспериментальном трихинеллезе / Бутвиловский В. Э., Ддвьдов В. В., Заяц Р. Г., Колб А. В., Кухта В. К. // Здравоохранение - 1996. - N 2. - С. 27-30.

РЕЗЮМЕ

Бугвиловский Валерий Эдуардович

Активность (изо)фермектов креатинфосфокиназы, лактатдегидрогеназы, содержание креатина в сыворотке крови и мышечной ткани, проницаемость зритроци-тарных мембран при трихинеллезе различной степени тяжести (экспериментальное исследование).

Ключезые слова: креапнфосфокиназа, лактатдегщрогеназа, креатин, изсфермен-ты, проницаемость эртроцитарных мембран, кариометрические показатели, нейроюторнье единицы, трихинеллез.

Объектом исследования служили белые крысы самцы линии Wistar, у которых моделировали экспериментальный трихинеллез легкой, средней степени тяжести, тяжелого течения пероральным заражением личинками Trichinella spiralis лабораторного иггамма 45-60-суточного возраста.

Цель исследования : выяснить ценность комплексного изучения активности креатинфосфокиназы, участвующей в процессах выработки и транспорта энергии, активности лактатдегидрогеназы - фермента терминальной стадаи гликолиза и их изоферментов, содержания креатина как индикатора состояния мышечной ткани, проницаемости плазматических мембран, состояния активности ядерного аппарата поврежденных мышечных золокон при экспериментальном трихинеллезе различной степени тяжести в динамике для более глубокого понимания патогенеза инвазии, а также обосновать возможность использования констелляции этих показателей для ранней диагностики данного заболевания.

Научная новизна исследования состоит в комплексном изучении изменений вышеприведенных морфологических и биохимических параметров при трихинеллезе различной степени тяжести в различных нейромоторных единицах скелетной мускулатуры и миокарде.

На основании результатов собственных исследований обнаружены отличия в активности (содержании) исследуемых показателей в мышечной ткани в динамике трихинеллеза различной степени тяжести. Установлена возможность использования креатина в качестве индикатора состояния мышечной ткани при определении _ степени патологических (склеротических) изменений в пораженных мышечных волокнах. Показана необходимость расчета активности изучаемых ферментов относительно единицы массы белка для объективней оценки их изменений а лвечных волокнах. Выявлены изменения проницаемости эритроцитарных уембран в теиении инвазии. Изучены едзиги кариометрииеских показателей волокон различных нейромоторных единиц и сердечной мышцы в динамике экспериментального трихинеллеза, позволяют® судить об изменении функциональной актпзности ядерного аппарата пораженных мышечных золокон.

Р Э 3 ю м э

Бутв1лоуск1 Валерый Эдуардав1ч

Актъунасць (¡за)ферментау крэафнфосфакшазы, лактатдэпдрагеназы, ут-рыманно крэац1ну у сываратцы крыв1 i мышачнай тканцы, пранiкальнасць эрытрацы-тарных мембран при трыхшелезе рознай ступеж цяжкасш (эксперыментальнае дасле-даванне).

Ключавыя словы: крэац/нфосфак/наза, лактатдэг/драгеназа, крэац/н, ¡зафериенты, npaHiкальнасф эрьгграиьггарных мембран, карыяметрычныя паказчык/, нейраматорныя qipiHKi, трых1нелез.

Аб'ектам щспедавання з'яулял1ся белыя пацу«. самцу л1нп Wistar, у яга.х мадэл1ровал1 экспериментальны трьсанелез легкай, сярэдняй cryneHi цяжкасщ., цяжкага цячэння пераральным заражэннем Мчынкам1 Trichinella spiralis лабараторнага штамма 45-60 - сутачнага узросту.

Мэта лдслещвзнчя: высвятленне каштоунасщ. комплекснага вывучэння актыунасщ. крэац1нфосфак1назы, якая удзельн1чае у працэсах выпрацоук1 i транспарц1роук1 энергп, актыунасщ. лактатдэпдрагеназы - ферменту тэрм1нальнай стадьа гл1кол1зу i ix 1заферментау; вызначэнне утрымання крэащну як :.ндыкатара стану мышачнай ткана; вывучанне пран1кальнасщ плазматычных мембран; стану актыунасщ. ядзернага апарату пашкодканых мышачных валокан пры экспериментальным трьоанелезе рознай ступен1 цяж-касщ. у дламщы для больш глыбокага разумения патагенезу iHBa3ii, а таксама абгрун-таванне магчымасщ выкарыстання канстэляцьи гэтых паказчыкау для ранняй Д)|ягность:к1 захворвання.

Навуковая нав/зна дзсл$цава-ня складаециа у комплексным вывучэннг змен вышэй-прыведзеных марфалаачных i 61ях1м1чных параметрау пры трьсанелезе рознай ступен1 цяжкасц1 у розных нейраматорных ад31нках шк!летнай мускулатуры i сардэчнай мышцы.

На аснове вын/кау уласных дасл&аванняу выяулены эдрозненнт. у актыунасщ (утрыманн1) даследуемых паказчыкау у мышачнай тканцы у дь!нам1иь1 трых1нелеза рознай ступен1 цяжкасщ. Вызначана магчымасць выкарастання крэащну у якасщ щдыкатара стану мышачнай тканк1 пры вызначэнн1 стуген1 патапапчных (склератычных) змен у пажодааных мышачных валокнах. Паказана неабходнасць разл1ку актыунасщ вывучаемых ферментау адчосна адз1нк1 масы бялку для аб'ектыунай аизнк1 ix змяненняу у мышачных валокнах. Выяулены змены пран1кальнасщ эрьгграиьггарных мембран у цячэнн1 iHBa3ii. Вывучаны 3pyxi карыяметрычных паказчыкау валокнау розных нейраматорных адз1нак i сардэчнай мышцы у дынамщы эксперыменгальнага трых1нелезу, як1я дазваляюць меркаваць аб змяненн1 функцыянальнай актыунасщ ядзернага апарату пашкоджаных мышачных валокнау.

SUMMARY

Butvilovsky Valery Eduardovich

Creatine phosphokinase, lactate dehydrogenase (iso)enzymes activity, contents of creatine in serum and muscular tissue, permeability of red cell membranes in trichinellosis of different degree heaviness (experimental research).

Key words: creatine phosphokinase, lactate dehydrogenase, isoenzymes, creatine, permeability red cell membranes, caricmetric findings, neuromotion units, trichinellosis.

Wistar male rats vere the objects of the investigations. They were infected per os with 45-60 days old T. spiralis larvae and had mild, moderate and severe cases of trichinellosis.

The purpose of the investigations is to find out the value of comolex study of activity of creatine phosphokinase, taking part in the processis of creating and transporting energy, activity of lactate dehydrogenase - enzyme of terminal stage of glycolis and their isoenzymes; to determine contents of creatine - the muscular tissue indicator; to study permeability of red cell membranes; cariometric exponents of infected muscular fibres during trichinellosis of different degree heaviness for the deeper understanding of pathogenesis of invasion, and to base one's arguments on fact of possible emoloyment of constellation of these data for early trichinellosis diagnosis.

The scientific innovation of the investigations is the determination of complex study of aforesaid changes of biochemical and norfological parameters of different neuromotion units of sceleton and heart muscle in cases of trichinellosis of different degree heaviness.

Results of our investigation show some differences in activity (contents) of research indexes in muscular tissue during trichinellosis of different degree heaviness. Possibility of creatine contents using as the indicator of pathological (sclerotic) changes of impaired muscular fibres was found. Necessity of researcn enzymes activity calculation per unit of protein for objective estimation was shewn. Data of red cell membranes permeability changes vere revealed during trichinellosis invasion. Some differences in carionetnc findings of neuromotion units and heart giving possibility to regard about nucleus functional activity changes of imoaired muscular fibres m dynamics of experimental trichinellosis vere studied.