Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Активность и изоферментный спектр креатинкиназы в тканях и сыворотке крови крыс при токсическом действии этанола и ацетона

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Активность и изоферментный спектр креатинкиназы в тканях и сыворотке крови крыс при токсическом действии этанола и ацетона"

РГ8 ОД

сагсст-шгербургсшй государственна униезрситгт

На празах рукописи

МАШЕК Ольга Николаевна

активность и изоетазпньй спектр креатишназы В ШАНЯХ И сывороше крови крыс ори токсическом действий этанола и ацетона

03,00.04 - биохи,-.;ия

" Автореферат

. диссертации яа'соиекггаю ученой степени ■ кандидата биологических наук

. САНГСГ-ПЕПЕРЕКТ 1993 .

Работа выполнена на кафздре биохимии биолого-почвенного факультета Санкт-Петербургского государственного университета и в отделе фармакологии Института &кспериментальной медицины Российской академии медицинских наук.

Научные руководители: доктор биологических наук,

профессор ЛЫЗЛОВА С.Н.; доктор медицинских наук, профессор БОРОДКИН D.C.

Официальные оппоненты: академик- РАМН, доктор

биологических наук, профессор ЖМАРКН И.П.; доктор биологических наук, профессор АРУТШЯН A.B.

Ведущее учреждение - Санкт-Петербургский медицинский институт им. акад. И.Л.Павлова

Задмта диссертации состоится 1993 г.

в /Jq час. на заседании специализированного совета К С63.57.09 по присуждению ученой степени кандидата биологических наук в Санкт-Петербургском-государственном университете по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 7/9, ауд. 90.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке им. А.М.Горького Санкт-Петербургского государственного университета.

Автореферат разослан

" М " CtLftMipa 1993 г.

Ученый секретарь специализированного

совета, кандидат биологических наук МАРКОВ А.Г.

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. В настоящее время среди причин, вызывающих презздевременную смерть людей, алкоголизм и токсикомания' стоят на одном из первых мест в мире наряду с сердечно-сосудистыми и онкологическими заболеваниями. Одним из самых тяжких и опасных последствий алкоголизма является его влияние на потомство. Комплекс возникающих при этом нарушений, названных алкогольным синдромом плода (АСП) - одна из основных причин умственной отсталости детей (Кругляков Р.И., гЛайзслис М.31., I9S7). В последнее время, наряду с этанолом, з целях достижения опьянения и эйфории, широко распространился среди молодых лидей особый тип токсикоманий, а именно: ингаляции органическими растворителями,. такими как толуол, ацетон, бензин, хлороформ и др. Кроме того, многие из этих соединений входят в состав промышленных газов, влияют_ка окружкощув среду, наносят вред здоровью людей (Ковалевский Г.А. и др., IS8G; Панкина H.A. и др., 1989), Высокая токсичность указанных соединений к связанная с их употреблением реальная угроза тяжелых поражений различных органов и тканей определяют важность исследования биохимических изменений, происходящих при алкоголизме, АСП и токсикоманки .

Известно, что при нарушениях регуляции вегетативных функций, проявляющихся при устойчивых патологических состояниях, происходит изменение тканевого энергетического обмена. Кр;атин-киназа (КК) (АТФ: креатин- if -фосфогрансфераза; 2.7.3.2) является одним из важнейших ферментов энергетического обмена d жи-. вотной ¡слетке, активность." и изоферментный спектр которой могут быть показателями структурного и функционального состояния различных тканей многоклеточного организма (Лызлова С.Н., 1937). Таким образом, существует реальная возможность участия КК в механизмах клеточной адаптации, вызванной в,ответ на введение в организм высоких доз алкоголя и ацетона. Сравнительное исследование КК системы в энергообеспечении ЦПС, миокарда и г.асщ при гячяичтге патологических состояниях," иодолируеких на жкзот-ных, иояет и.:??ь больше значение в расшифровке патогенеза хронического алкоголизма, алкогольного синдрома плода, и токсико-аалии; позволит-выявить обдие закономерности влияния токсичес-

ких соединения на энергетический обмен различных тканей.

Кромз того, в настоящее время .отсутствуют объективные биохимические критерии этих заболеваний. Следовательно, определение а::гишости к изоферментного спектра КК в сыворотке крови может найти применение в клинической практике в качестве диагностического теста исследуемых заболеваний.

Цель к задачи.;исследования. Основной целью работы явилось сравнительное изучение токсических эффектов этанола и ацетона на активность и изоферментный спектр КК в тканях и в сыворотке крови крыс, а такяе исследование этих показателей у эмбрионов ц потомства алкоголизированных животных. В соответствии с поставленной целью в задачи работы входило:

1) созд&чие. экспериментальной установки для ингаляционной затравки животных различными органическими растворителями к моделирование хронической алкогольной и ацетоновой интоксикации крас-,

2) моделирование алкогольного синдрома плода (использовали методюсу, разработанную в отделе эмбриологии НИИЭМ РАМН);

3) исследование острого .и хронического воздействия этанола на динамику-активности КК мозга эмбрионов крыс, а также особенности формирования изо^ерментного спектра КК в мозге и сердце омбрионов алкоголизированных крыс на разных стадиях внутриутробного развития; ;

4)- исследование динамики изменения активности и изофер-ментного спектра КК в мозге, сердце и сыворотке крови потомства крыс на разных стадиях постнатального развития;

5) изучение антиалкогольного действия фитогдаптогенов из семейства аралиевых: лолисциас и элеутерококка - на некоторые показатели физического развития эмбрионов и потомства алкого-лиэировакных крыс, а также на активность и изоферментныЯ спек КХ в мозге, сердце, сыворотке крови эмбрионов и потомства кры с признаками ДСП;

6) сравнительны*} анализ активности и изоферлентного спея тра КК в мозге, сердце, скелегных мышцах и сыворотке кроЕИ крао чирез 2 суток и через I месяц после окончания хронически зат-раики животных этанолом и ацетоном;

7) исследование кзо'рерментного спектра КК в мозге крыс,

3.

потреблявших 15%-П этанол в качестве единственного источника питья в течение одного года;

8) разработка быстрого способа разделения изофор.'.:ситов КК з тканевых экстрактах: крыс с помочью модификации метода 'в орт:*- ■ кального электрофореза в подиакрила-мидком теле в пластиках.

Научная новизна работы. Впервые проведено исследование токсических эффектов этанола на активность к изофзрментнкй спектр КК в тканях, сыворотке крови э.мбрлонов и потомства крЕ;с с признаками АСП, а такке дан сравнительный анализ этих биохимических показателен при хроническо": алкогольной п ацетоновой интоксикации половозрелых крыс.

Показано, что острое однократное воздействие этанола на беременны?; самок крыс приводит к снижении активности КК в мозге плода с последующим восстановлением значений активности КК по кере снижения концентрации этанола,в крови (нейротоксичес-кое действие этанола).

Впервые методом коннообменноП хроматографии на колонке с ДЭАЕ-сефадексом А-50 установлено, что наряду с ВБ-НК в мозге 20-дневных эмбрионов крыс присутствуют в нсболылом количестве Ш- и МБ—КК. Хроническая алкоголизация эмбрионов к потомства крыс в течение пренатального периода приводит к снижению активности всех трех изоферментов. КК.

Показано, что хроническая алкоголизация беременных са>.".ок крыс приводит к повышении активности КК .а сердце эмбрконоз, а также з сердце м сцворотке кропи потомства. крыс; изсфэркентныЯ спектр-КК при этом сдвигается в сторону МВ- и 33-КК, что может быть одним из. доказательств'Задержки развития крысят с признаками АСП. -.,'..'.-' 1

Впервые установлено, что антиалкогольное действие нового " растительного адаптогона'полисциас сопровождается нормализацией значений активности л изоферменгного спектра КК в Тканях ' эмбрионов, а тшеке в тканях и сшоротхе крови потомства едкого-' лазкров&чнше крыс. Влияние препарата полисциас наисследуе.'.'.из ваг.н: бксхи!<::чес8ие показатели сходно с действием элеутерококка.

Зплгстч", показало пркнцшшачьное сходство в действия этанола j; зцё'л- на изоферменткьй спектр КК в тканях и смаоротке крози кр»с при хронической'алкогольной и ацетоново" интоксикации:' в скелетных.шзцах крнс наряду с-О-ШС пеявлшгея ;0~ и -

ВВ-КК, в сердце увеличивается доля МЕ-КК (в случае ацетоновой интоксикации обнаруживается также повышенная активность ЗВ-КК), в мозге, кроме кеГ1роспец;ф;ческого ВВ-КК, синтезируется в значительном количестве КМ-изофермент КК.

Научно-практическое значение работы. Обнаруженные в работе существенные изменения активности и изоферментного спектра КК в тканях и сыворотке крови крыс при токсическом действии этанола и ацетона расширяют представления о молекулярных механизмах, лежких в основе патогенеза алкоголизма, алкогольного синдрома плода к токсикомании.

Практическая ценность работы определяется возможностью использования креатинкшазного теста в качестве дополнительного биохимического критерия при диагностике вышеупомянутых патологических состояний. Полученные в работе данные могут служить одной из рекомендаций для практического применения препарата полисциас в качестве антиалкогольного средства, предотвращающего развитие ДСП. Кроме того, креатинкиназный тест может быть предложен в качестве высокочувствительного маркера для изучения действия лекарственных препаратов на энергетический обмен в клетке при различных патологических состояниях.

Разработанная ингаляционная установка для затравки животных ь камере различными органическими растворителями может был использована в научно-исследовательской работе при создании экспериментальных моделей хронической и острой интоксикации.

Предложенный быстрый и чувствительный способ разделения изоферкентов КК в тканевых экстрактах с помощью модифицированного нами метода вертикального электрофореза в полиакриламид-ном геле в пластинах может быть рекомендован для применения в экспериментальных к клинических лабораториях.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на совместном научном семинаре СССР - Западный Берлин ".шгаляци-оннке токсикомании: клкнико-экспериментальные аспекты" (Ленинград, 1989), на УШ Советско-Итальянском симпозиуме по нейропси-хофаркакологии (Ленинград, 1990), на конференции "Проблемы био логки и медицины сегодня и завтра", посвященной 100-летию Института экспериментальной медицины (Ленинград, 1990), на конфе-рта:и 15311 Физиологии ЛГУ "Доминантные механизмы поведенческой (Ленинград, 1990), заседаниях кафедры биохимии

СПбГУ, отдела фармакологии НИИЭМ РАМН и кафедры биохимии СППМИ (I987-I99I гг.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано б работ.

Структура и объем работы. Диссертация содержит следующие разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, их обсуждение, выводы и библиографический указатель. Текст диссертации изложен на 180 стр. машинописного текста," иллюстрирован 13 таблицами и 27 рисунками. Библиографический указатель содержит 80 отечественных и 165 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа была выполнена на белых беспородных крысах-самцах и самках массой 200-240 г (питомник РАМН, "Рапполово'Ъ

При моделировании АСП самкам в период беременности давали 20&-й раствор этанола, что обеспечивало потребление этанола в среднесуточной дозе 10 - II,б г/кг (Котин A.M., 1986).

В параллельных экспериментах самкам, начиная с первого дяя беременности, в качестве единственного.источника питья давали 2СЙ-Й раствор этанола совместно с препаратами- фитоадапто-генов* полисциас и элеутерококком, которые добавляли в питьевой раствор этанола в соотношении 1:125 до конечной концентраций 0',.8/i. Контрольные животные в этой серии.экспериментов получали Ф качестве' питья как воду, так и воду совместно • с препаратами фитоадаптогейов в тех же концентрациях, что и в опыте.

Острое однократное введение этанола самкам.крыс проводили. • внутрижелудочмо в дозах L и 3 г/кг на 14-й день беременности. Контрольной Группе внутрижелудочно вводили эквивалентный объем воды, йивотных брали в опыт через I, 3 часа и I сутки.

В целях создания модели хронической алкогольной и ацетоновой интоксикации нами была разработана оригинальная установка для ингаляции животных органическими растворителями (Машек О.Н. и др., 1991). Затравку крыс парами этанола осуществляли в ночное время по 12-14 часов ежедневно в течение 3-4 недель. Для этой серии окслериментов проводили отбор крыс с высокой алкогольной мотивацией по длительности "алкогольного наркоза" (Буров Ю.В., Ведерникова H.H., 1985). Максимальная концентрация

6.

паров этанола в опытной камере была 60 мг/л. Ингаляцию крыс парами ацетона проводили в течение 3-4 недель по I - 1,6 часе ежедневно. Максимальная концентрация ацетона в камере составляла 310 ur/л. Адекватность модели оценивали по следующим параметрам; уменьшение массы тела подопытных животных, увеличение толерантности крыс к этанолу и ацетону, по поведенческим реакциям крыс в тесте "открытое поле";

"Дельный мозг и сердце эмбрионов, а также мозг, сердце и скелетные ыьшцы крыс п'/омывали 0,1 М трис-HGI буфером (pH « 7,4) и гомогенизировали в гом же буфере в соотношении 1:4 (вес/объем) Гомогенаты центрифуг' 'ровали при 18000 в 50 мин. Конечный супер-натант отбирали и и< пользовали для определения активности и изо-ферментного спектр.!, КК, Концентрации белка определяли ыикробиу-ретовьм методом (Рсчетов Г.А., 1980). Активность кре&тинкиназы определяли в ткан .ас и сыворотке крови колориметрическим методом по реакции образования креатина (Петрова Т,А., Лыэлова С.Н., 1965)» Изоферменты КС разделяли методой ионнообменной хроматографии на колонке с ДЭАЕ-сефадексом А-50 (Mercer , 1974) в модификации (tasaineh, Xeyiia, 1984) , а также с помощью кодифицированного нами метода электрофореза в 7,5$-м полиакриламид-ном геле, После окончания электрофореза белки фиксировали в ТХУ и окрашивали кумасси по методу Ригатти и Чиллеми (Остер-ман Л.А,, 1983). Гистохимическое прокрашивание гелей на активность осуществляли ПО методу (Trainer, Gruenitig, 1968)

Результаты экспериментов обрабатывали статистически, используя t-критерий Стьюдента. .

ОСНОВНЫЕ Н23ИЬТА*Ш И ИХ ОБСЩЕНИЕ

I. Влияние острой и хронической алкогольной интоксикации на активность и изоферментный спектр КК в мозге и сердце змбрИ' онов крыс. Предотвращение э<Яектов этанола с помощью фитоадап-тогенов из семейства аралиевых, полисциас и элеутерококка.

При изучении влияния хронической алкогольной интоксикации на активность и изоферменгНый спектр НКв мозге крыс нами уста новлено снижение активности КК в мозге эмбрионов на всех иссле дованных нами сроках внутриутробного развития (13-20 сутки) (рисЛ). Наибольшее различие между контрольными и опытнши зне

чениями отмечено в более ранние сроки антенатального развития (13-14 сутки). Это соответствует представлениям о том, что этанол оказывает значительное влияние на ранние стадии развития зародыша, включающие "критические точки" внутриутробного развития, когда эмбрион наиболее чувствителен к неблагоприятным воздействиям (Кругликов Р.И., Майзелис М.Я., 1987).

Рис.1. Активность КК в мозге Рис.2. Динамика активности КК эмбрионов крысы при в мозге 14-дневных эмбрионов

хронической ангенаталь- крыс при остром однократном ной'алкоголизации. воздействии этанола.

(I - контроль, 2 - опыт)- •- (----контроль,-:—• - опыт)

Исследование острой алкогольной интоксикации на динамику активности КК в мозге 14-дневных эмбрионов показало, что через I час после однократного введения этанола в дозе I и 3 г/кг активность КК снижается на 25$ относительно контрольных значений, через 3 часа активность КК возвращается к контрольному уровню, а через 24 часа - становится выше нормы на 36% (рис.2). Эти данные согласуются с предположением Фишера о существовании двухфазного дозозависимого эффекта на синтез белков мозга ( 1Чв-сЬег , 1985). ' . . ' ■

Анализ изоферментов КК в мозге 20-дневных эмбрионов с помощью метода ионнообменной хроматографии на колонке■с ДЭАЕ-се-фадексом А-') показал, что в контрольной группе животных, наряду с нейроспецифическим изоферментом ВВ-КК, присутствуют в не- ' большом количестве Ш- и МВ-КГС, Хроническая интоксикация этано-

ЯШ етжт? щ>мврттв изсферменгов в мозге плодов крыс.

ß 3Kai()jMuew8K во изучению аятенательной алкоголизации на активность SC в сердце 20-дневнкх эмбрионов крыс нами показано, что активность КК при хроническом воздействии отанола возрастает в 1,8 раза по уравнению с контрольными значениями, При исследования изоферментного состава КК в сердце 20-дневных э^рИОНОВ крыс обнаружено наличие всех трех изоферментов КК, Предам преобладающими формами являются Ш- 4*755 и MB - 49/5, а на долю ВВ-КК приходится лишь 4% от общей активности. Антенатальная алкоголизация приводит к значительному увеличению доли ВВ-КК в сердце зародышей крыс, до 23Й от общей активности Kit. Увеличение содержания "эмбриональных" форм КК при такого рода воздействии является'одним из биохимических доказательств задержки развития алкоголизированного потомства. Кроме того, эти данные согласуются с нашими результатами по тератогенному влиянию этанола на показатели массы мозга и тела эмбрионов крыс.

Таким образом, изменение активности и изоферментного спектра КК в клетках мозга и кардиомиоцитах плода является проявлением эмбриотоксического действия этанола.

При изучении антиалкогольных свойств препарата полисциас нами установлено, что этот фитоадаптоген предотвращает эффекты этанола на активность КК в мозге 15-дневных эмбрионов сходным образом с элеутерококком, противоалкогольное действие которого описано в литературе {Чеботарь H.A. и др., 1986). Показано нормализующее действие полисциас на активность и изоферментный спектр Ж в мозге и активность КК в сердце 20-дневных пренаталь-но алкоголизированных плодов. Кроме того можно отметить также тенденцию к нормализации изоферментного спектра КК в сердечной мышце 20-дневных эмбрионов алкоголизированных крыс при потреблении беременными самками наря&у с 2055-м этанолом раствора полисциас.

Полученные данные согласуются с предположением о том, что препарат полисциас, так же как элеутерококк, оказывает антитератогенное влияние на потомство алкоголизированных животных. Нормализующее действие фитоадаптогенов на активность и изоферментный спектр КН в мозге н сердце эмбрионов крыс указывает на возможность фармакологической коррекции нарушений энергетического обмена в мозговой и сердечной ткани плода, вызванных хроничес-

«ой антенатальной алкоголизацией,

П, Влияние хронической пренатальной алкоголизации на активность и изоферментный спектр ЮС в мозге, сердпе и сыворотке крови потомства крыс с признаками АСП. Предотвращение эффектов этанола с помощью препарата полисциас.

Нами установлено, что активность КК в сыворотке крови пре-натально аякоголизированных крыс выше контрольного уровня на всех исследованных сроках постнатального развития (25, 50 и 70-е сутки) (табл.1). Анализ изоферментного спектра КК в сыворотке крови крысят показал, что преобладающим иэоферментом является ММ-КК как в контрольной, так и в опытной группе животных. Вместе с . тем у потомства с признаками АСП наблюдается повышенное содержание МВ- и БВ-КК (см. рис.5), что является одним из доказательств токсического действия этанола на клеточные мембраны мозга и сердца. При изучении изоферментного спектра КК нами отмече-10, что в мозге крыс, наряду с нейроспецифическии изоферыентом ЭВ-КК, присутствуют в небольшом количестве Ш- и МВ-КК. Хроническая алкоголизация сдвигает иэоферментный спектр в сторону ¿В-КК (рис.3). Этот факт свидетельствует о том, что одним из воз-ложных источников повышенной активности МВ-КК в сыворотке крови ложет быть не только сердечная, но также и ыозговая ткань.

Исследование влияния хронической алкоголизации беременных :амок на активность КК'в сердце потомства крыс показало, что об-^ая активность фермента несколько выше контрольного уровня на )сех исследованных сроках постнатального развития, шесте с тем различия мезеду контролем и опытом не гак выражены, как у змбрио-юв (см. табл.1). Изучение изоферментного спектра Ж в сердце 1ренатально алкоголизированных крыс показало наличие повышенной 1Ктивности ВВ-КК, особенно на 9-е сутки постнатального развития рис.4, А), что также является'одним из биохимических доказа-•ельств задержки развития животных с признаками АСП.

Препарат полисциас нормализует -значения активности КК на юех исследованных нами сроках в сыворотке крови потомства алко-'олизированных йрыс (см, табл.1), а также иэоферментный спектр К к 70-му дно постнатального развития (рис.5, В И). Кроме того, олисциас снижает уровень МВ-КН в мозге и ВВ-КН в сердечной мып-;е (рис.3 и 4, Б). Эти эксперименты также доказывают антиалхо-ольное действие препарата. Определение активности ИВ- и ВВ-КК

Таблица I

Динамика активности КК в мозге, сердце я сыворотке крови потомства ярое в различные

возрастные периоды.

; ' Показатели активности КК

• Ткань или биол. ........I-7 ■ "• ■ ■ ■.—■...................................... '

явдкость мозг (Е/мг) . сердце (Е/мг) сыворотка крови (Е/мл)

Возраст крысят з днях Группа животных 8 25 50 , 8 25 50 25 50 70

Контроль а = 10 Ю,в+ 1.2" . 26,9+2,7 39,6+ 3,9 64,4+ 6,0 " 171+15 •220+22 2,1+ 0,2 2,7+ '0,2*7 2,9+ 0,2"

"Этанол" а= ю 12,7+к 1.3 22,9+2,4 35,% 3,2 ~ 72,5+ 7,0"" 194+20 260+26 3,5+* 0,3 3,7+* 0,3 4,9+* 0,4~

"Этанол + полисциас" а- 10 13,9+« 1'4~ 24,8+2,9 38,8+ 3,9 65,5+ 6,2 ~ 210+20 260+20 2,5+ 0,2" 2,9+ 0,3~ 3,1+ 0,3"

Примечание: п- число животных в каждой группе; * - достоверность различий по

—'—л т^^игг-тл^тто» Г П У О . П1Л *

А I П Ш Б I П Ш

Рис.4, Изоферментный спектр КК э сердце 8 (А) и 50-дневного д потомства крыс (Б). 4

100$

г1!

г1! 1

г~

.

Ж Щ т ш»

А I П Ш Б I П Ш

Рис.5. Изоферментный спектр КК в сыворотке- крови 25-дневного (А) и 70-дневного потомства крыс (Б).

(На рис.3-5 обозначено: I - контроль; П -*Ьтанольная группа; Ш - "этанол + полисциас ; О - ЫМ-КК, Ш - МВ-КК, Я - ВВ-КК)

в сыворотке крови может служить дополнительным биохимическим тестом при диагностике АСП.

В» Влияние хронической интоксикашти этанолом и ацетоном на активность и изоферментный спектр КК в мозге, сердце. ске-' летных мышах и сыворотке крови крке.

Как показали наш исследования, активность Ш в сыворотке крови крыс, подвергавшихся хроническому воздействию' этанолом а ацетоном, значительно повышается. Анализ язсферметяото состава КК в сыворотке крови показал,' что в юшпэге от контрольной группы, -где активность представлена преимущественно Ш-КК, в группах ингаяированюя крыс наблюдается резкий1 сдвиг изофер-ментного спектра КК в сторону МВ- и ВВ-КК (рис,6> А). Причем через 2 месяц после прекращения ингаляции эти показатели не возвращаются к контрольному уровню (рис.б, Б), что указывает на довольно стойкие биохимические измененияг происходящие в организме при хронической алкогольной и ацетоновой интоксикацииг

А 100*

80 60

40 20

А I П • Ш Б I. ."' П Ш Рис.б. Изоферментный спектр КК в сыворотке крови крыс через

2 суток (А) и через I месяц (Б) после окончания хрони-. ческой интоксикации этанолом и ацетоном (здесь, а также на рис.7-9 обозначено: I - контроль, П - "этанольная группа", Ш - "ацетоновая группа"; □ - Ш-КК, Щ МВ-И . В - ВВ-КК).

Как уже было отмечено, значительное повышение активности МВ- и ВВ-КК в. сыворотке крови может свидетельствовать о Поражении клеток мозга и сердца. 'Исследование активности КК в мозге "ин-гадированных"крыс каких-либо информативных данных не дало. Вме те с тем в мозге подопытных животных нами было обнаружено знач

тельное содержание ММ-КК (до 10$ от общей активности) (см. рис.7, А). Результаты проведенных исследований изоферментного профиля КК через I месяц после отмены этанола и ацетона свидетельствовали о том, что содержание ММ-КК в мозге крыс не только не снижалось, но даже увеличивалось, особенно' в ацетоновой группе (до 4395 от общей активности КК) (рис.7. В). Кроме того нами установлено, что в мозге крыс, которые в течение I года в качестве единственного источника питья получали только 15%-й этанол, содержание ЫМ-КК было в 2 раза выше, чем в контрольной группе животных того же возраста. Таким образом, можно предпо-тожить, что этанол и ацетон стимулируют синтез ММ-КК в мозге срыс, что указывает на необратимый характер воздействия указан-шх соединений на креатинкиназу в клетках мозга.

При исследовании изоферментного спектра КК в сердечной и ¡келетной мышцах хронически ингалированных крыс нами были обнажены сходные изменения, а именно: изоферментный профиль едзи-■ается в сторону МВ-КК при обоих типах воздействия (рис.8, 9). 'роме того, при токсическом действии ацетона возрастает также ,оля ВВ-КК в скелетных и сердечных мышцах крыс (рис.8 и 9, А), лявление повышенного содержания "эмбрионального" изофермента скелетных и сердечных мышцах половозрелых крыс, возможно, видетельствуег о дерепрессии гена, ответственного за синтез -субъединицы КК. Наличие аналогичных изменений, обнаруженных алиро ( Зсггар1га , 1968) в изоферментном спектре КК в денер-ируемых скелетных мышцах животных, а также при мышечной дист-офии'у людей, косвенно пожег свидетельствовать о сходных нару-зни'ях, происходящих в мышцах при хронической интоксикации эта-элом и ацетоном;

Результаты экспериментов показали, что через I месяц после эекрещения ингаляции как этанолом, так и ацетоном•значения ак-1вности и изоферментный спектр КК в скелетных и сердечных мышце возвращаются к контрольному уровню в отличие от мозга, где »реализации этих параметров не происходило. Следовательно, эти инке предполагают неодинаковую чувствительность различных кл°— 1К к токсическому действии 'исследуемых нами веществ.

Таким образом, на основании результатов нашей работы можно юдположить существование общих механизмов нарушения энергети-сяого о б: гена прк алкоголизме и токсикомании. Изофермента же

80 60 4&

Рис.

А ' 100£

80

.60 40

20

Рис А

10036

80 60

' 40

20

р ■ 1 '

р

Гд N

AI.il Ш ' Б I П. Ш

7. Изоферментный спектр КК в мозге крыс через 2 суток (А) и через I месяц (Б) после окончания хронической интоксикации этанолом и ацетоном.

г®п Г*1 Л-.

Яя щ ь

1 * .ЖЗ 7Л

А I ¡1 - Ш Б I П Ш

.8. Изоферментный спектр КК в сердце крыс .через 2 суток (. . и через I месяц (Б) после окончания хронической инток сикации этанолом, и ацетоном."

ми -х. •" . -3- л. гН

г*4

^¡а ш

П

111

А I П . Ш Б I

Рис.9, Изоферментный спектр Ж в скелетноГ мышце крыс через 2 суток (А) и через I месяц (Б) после окончания хрою ческой интоксикации этанолом и ацетоном.

MC могут служить высокочувствительными маркерами морфофункцио-нальных нар^тлеяий тканей при изучаемых нами патологических состояниях.

выводы■

I. Острое однократное введение этанола внутрижелудочно в ^озах I и 3 г/кг самкам крыс на 14-й день беременности приводит * изменению активности Ш в мозге эмбрионов: через I час после введения активность КК уменьшается на 25$, через 3 часа прибли-кается к контрольному уровни и через сутки увеличивается на 36%.

Z. Хроническая алкоголизация беременных самок крыс приводит к снижению.активности КК в мозге эмбрионов на всех исследо-занных сроках внутриутробного развития.

3. В мозге 20-днезных плодов крыс и 35-дневных крысят, наряду с ВВ-КК, присутствуют в небольшом количестве ММ- и МВ-КК. Активность всех трех изоферментов КК в мозге 20-дневных эмбрио-50в алкоголиэированных крыс снижается.

4. Хроническая антенатальная алкоголизация беременных са-!ок крыс вызывает увеличение активности КК в сердце 20-дневных >мбрионов и потомства с признаками АСП, а также перераспределе-1ие изоферментного спектра в сторону MB- и ВБ-КК,

5. Пренатальное воздействие этанола приводит к увеличению .ктивности КК и сдвигу изоферментного гатектра КК в сторону МЗ-: ВВ-КК а сыворотке крови потомства алкоголиэированных живот-:ых; источниками повышенной активности MB- и ВВ-КК в сыворотке рови могут быть как ткань мозга, так'и сердёчная мышца.

6. Шитоадаптоген полисциас оказывает нормализуиций эффект

а активность и изоферментный спектр КК а мозге и сердце эмбрио-ов и потомства алкоголиэированных крыс, а также в -сыворотке рови животных о признаками АСП.'

7. Хроническая интоксикация этанолом и ацетоном приводит сходным изменениям в активности и изоферменгном спектре КК в

канях и сыворотке крови половозрелых крыс, а именно: аэтивнос-ь К в сыворотке крови и сердце возрастает при обоих типах воздей-тпия, изоферментнкй спектр КК в сыьоротке крови и скелетных ьащах сдвигается в сторону MB- и ВВ-КК, в сердце повышается ктивность I.3-KK, в мозге - Щ-КК.

Г6.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ГО ТЕШ ДИССЕРТАЦИИ'

2. Модек О.Н. Активность и изоферментный спектр креатин-киназы в тканях и сыворотке крови крыс при хронической интоксикации этанолом и ацетоном // Доминантные механизмы поведенческих адаптации :• Тез. докл. ко.чф. Л., 1990. Вып.2. C.I4-I5.

2. Бородкин D.C., Усатенко М.С., Машек О.Н. и др. Биохимические маркеры алкоголизма // Тез. докл. УШ советско-итальянского симп. по нейрофармакологии. Л., 1990. С.II.

3. Шабанов П.Д., Усатенко М.С., Машек О.Н. и др. Диагностические критерии и основные принципы лечения алкоголизма // Проблемы медицины и биологии сегодня и завтра: Тез. докл. конф. посвященной 200-летию Института экспериментальной медицины

АМН СССР. Л., 1990. С.126-127.

4. Машек О.Н., Лызяова С.Н., Еородкин Ю.С. и др. Влияние хронической интоксикации этанолом и ацетоном на активность и изоферментный спектр КК мозга, сердца и сыворотки крови крыс /, Вестник ЛГУ. 1991.. Сер.З, вып.1. С.64-68. ■

5. Бурмистров С.О., Машек О.Н., Котин A.M. Действие острой алкогольной интоксикации на антаоксиданткую систему и акот ность креатинкиназы в мозге эмбрионов -крыс // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1992. Т.55, №5. С.54-56.

6. Бурмистров С.0., Машек "О.Н., Степанов И.И. Влияние ингаляции этанола и ацетона на' показатели системы антиоксидант-ной защиты и перекисное окисление ли.пидов ткани мозга и скво-ротки крови крыс // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1992. Т.55, JS5. С.56-58.