Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Креатинкиназа и ее изоферменты при различных поражениях головного мозга и поиски путей их фармакологической коррекции

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Креатинкиназа и ее изоферменты при различных поражениях головного мозга и поиски путей их фармакологической коррекции"

_____- ч/

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи ЧУВАЕВ Игорь Валерьевич

КР^'АТИНКИНАЗА И ЕЕ ИЗОФЕРМЕНТЫ 1.РИ РАЗЛИЧНЫХ ПОРАЖЕНИЯХ ГОЛОВНОГО МОЗГА !! ПОИСКИ ПУТЕЙ ИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ

03.00.04 — Биологическая хими. 14.00,25 - Фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 1993 '

Работа выполнена в Научно-исследовательской иестит; экспериментальной медицины РАМЗ (директор - академик РАШ КИ. Ткачгчко).

Научные рукгаодкгаян:

доктор медицинских наук, профессор ЕС.Сапронов

Сфязеиввыэ сгаалюаш:

. доктор медицинских наук, профессор Е С. Гайцхоки доктор ыэдивдкеюос наук, профессор В. А. Крауз

Вадуздэо учроздеюэ - С. -Петербургский Государственный Университет

заседании Специализированного совета Д. 001.2а 01. при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАШ (197376, С. -Петербург, ул. акад. Павлова, 12).

С диссертацией ысжно ознакомиться в библиотеке ШС53И РАШ по адресу е. - Петербург, ух акад. Павлова, 12.

Автореферат разослан и_"_129 г.

доктор мэдицинских наук

и. С. Усатенко

/-г V—

.1993 г. в ¡А- часов на

Ученый секретарь Специализированного совета доктор биологических наук

Л. ЕПучкова

ОБЩ'Й ХАРАКТЕР В С Г ШК к РАБОТЫ

Актуальность прсвлвдл

Заболевания, связанные с пьраяэкти голивкого ыоага, а последнее время приобрета i все более распространенный характер. К часто встречающиеся поражениям центральной нервной стстеиы (цвд можно отнести шаш головного шага, интоксикации этанолом, а ?агата их сочетание (Jaswinder S. 1991). В связи с зтии, выяснение конкретных механизмов фзршфсзашш алкогольного и иптвтчэского поражения мозга, поиск путей их ранней диагностики и фармакологической коррекции представляют собой ваяяую задачу как для теоретической медицины к биологии, так и для практического здравоохранения.

При^няемые а настоящее время методы биохимической диагностики алкоголизма базируются, а основной, на исследовании ферментов, источником которых является ткань печени, в то время как для диагностики ишемкческого, гипоксического поражения головного мозга сущест-вуицие биотсгческие тести практически es ксаалъзуюсся из-за их аалой ннфоомативности.

Учитывая, что указанные патологические состояния связаны с развито;« деструктивных процессов в тканях, б частности, в клетках го-ленного ш?га, в диагностическом и прогностическом план«, представляется перспективным изучение динами® эктизгшстк тканеспеци^ическнх Оелков, одним из которых является кроаткнкнназа и ее изофериеяты.

Креа'п.'нкиназз (ЯЙ) - универсаманый фермой? энергетического обмена. Она представляет собой внутриклеточный ферыент, который имеет три тканеспецифическш (нейро-, каниоспецифяческув и шзгаччуи) мс декулярныо (£ормы. Определение их активности ео внэкпеточнйй дадкос-ги шлет слудага показателе« целостности тех или иных тканевых структур. Имеющиеся в литературе данные об изменении ист явности КК при ишемии головного мозга и интоксикации этанолом нося? несистематический и весьма противоречивый характер.

Во многой открытым остается вопрос фармакологической коррекции указанных патологических сог.толнкЧ. Поэтому поиск новых и э^ектив- • ньс препаратов для лечения к зшцити головного мозга при гыюксичвс-югх и интоксикационных сос^янтах является вес Jira акгуа^йой проблемой. "сходя из этого, для изучения Сил выбран ряд новых и оригинальных химических соединений,. синтезированных а Отдела кейро-фаркикологии им. С. а Аничкова КЮШ РШ на основе адаюкиолоты тау-

- р -

рина, выполняю^ тормозящую функциг в ЩЮ. Помимо этого, на наш взгляд остается перспективным поиск активных веществ в ряду адапто-генов с .тествег'ного происхоздекия, одним иа которых является экстракт Polysaias (сам. Araliaoya), известный в тибетской медицине как ■ардиотропноэ, противотоксическое средство. и аада<м кссладовогаш.

Целью работы явилось изучение динамики активности Ш и ее изо-ферментоь при различных поражениях головного мозга (иаеиш, острая и хроническая алкогольная интоксикация) у человека и швотш-тс и поиск путей Фармакологической коррекции указанных патологических состояний.

Для дасткяаши атой цели (Hum поставлены следуюа?» задачи:

1. Иэделфоваяке иве кии головного мозга, острой и хронической алкогольной иитоксикацит на животных.

Р.. Кэучение динамики активности КК и выяснение конкретных причиы изменения ее изоферментаого спектра & биологических жидкостях и тканях животных с ишемией головного шага и алкогольной интоксикацией.

3. Язучэни® динамики активности КК и ее изоферментов в тканях н биологических хидютях людей, страдающих ¡¡аемическим поражением головного мозга и алкоголизмом, на различных стечиях этих эаОоденэннй.

4. Изучен;» фармакологических свойств производных таурина и Фитоадаптсгена PolysoJas. Выяснение возможности применения указанных препаратов при поралзнклх ЦйС, вызванных ¡®?мией головного мо? га и интоксикацией этанолом в уловкях экспер!№нта..

Каучкз" ноиаана.

Шлучены новые данные о характере сдвигов изоферментного спектра КК в тканях и биологических жидкостях при ишемии, гипоксии головного мозга и алкогольной интоксикации у крыс » человека. Впервые проведено сравнительное исследование динамики акпганоста КК и ее иао-фэрментного профиля у больных, страдащшс указанными заболеваниями, и у животных в условиях моделирования данных патологических состояний. клиническом и экокримегаалаком материале Сули пслу-ккы доказательства однотипности сдвигов пэо'^р'тэнтяьго chivrrps- XX ПР»

«яемич-зскол и алкогольном поражении могга и различил s кокг.ргткых

«ианиэмах, приводящих к наблюдаемым сдвигам. Проведено систематическое изучение динамики активности КК и ее иэофермечтов при ишемии головного мозга и алкоголизм^ в различные периоды болезни. Впзрчиэ обнаружен фзкг изменения изофарментного профиля КК в скелетной »мускулатуре людей, больных алкоголизмом.

В процессе работы проведено фармакологическое обследозание новых оригинальных препаратов, производных аминокислоты таурина, синтезированных в Отд. нейрофармакологии им. С. В. Аничкова ШИЗи РАЮ, а так-яг изучено фармакологические действие неизвестного в официальной фармакопее фитоадаптогена Ро1узо1аз (сем. Ага1аоуа). Показана принципиальная возподность использования указанных препаратов для защиты годгвного мозга при ишмическом и алкогольном воздействии на него.

Научи»-теоретическая к практическая атшкхт работ.

Изучение изофермэнтных профилей КК при различных воздействиях на организм и выяснение конкретных путей, приводящих к пх изменению при фор'Лфогании патологических состояний, открывает новы* перспективы в исследовании -биохимических процессов, связанных с регуляцией синтеза изоферментов КК, и их биологической рольс е клетке.

В процессе работы подробьо изучена динамика активности КК и ьк-изоферментов при ишекическом и алкогольном поражении мозга. На основании исследований, проведенных нз животньтс, а также на клиническом материале, полученном от больных с цереброваскуля^лой недостаточностью и с хроническим злоупотреблением алкоголем, сформулированы представления о закономерностях изменения кзофор-мептных спектров КК при данных патологикх и выяснены конкретные причины этих изменений. Результаты углубляют теоретические представления о патогенезе алкоголизма и ишемического поражения головного мозга.

В экспериментальных условиях создана модель хронической илсмии головього мозга, позволяются выполнять физиологические и биохимические исследования, связанные о изучением патогенеза данного г.ато-. логического состояния. Разработанная модель и предлагаемый кк-тсд оцени! степени порзжония головного мозга (КК-тест) позволяют проводить направленный фармакологический скрининг веществ с кейропротек-тивным действием.

Шлучены новью даннш о фармаколс-ическик свойствах оригинальных препаратов ш ряда производных таурина, синтезированных в Отд. ней-рофарм-кологик им. С. а Аничкова НИИЭМ РАМН и фитоадаптогенов сак. Arale,гоуа. Шказана принципиальная возможность фармакологической коррекции гагэшквского и алкогольного поражения головного мозга нойротропннш веществами, производными таурина и фитоадаптогенами сем. Araleacya, что представляет значительный интерес для клинической практики.

Результаты исследований используются в лекционных курсах кафэдры биохимии СГЕРУ и кафэдры наркологии СПОГИДУВа Ссшянче ттшати вшххэшш ш aasmy.

1. Ишемия головного мозга и острая алкогольная интоксикация вы-аьшают однонаправленные изменения общей активности КК и ее изофер-ментов в сыворотке кровь и головном мозге крыс. Увеличение активности ВБ- изофермента КК в сыворотке крови происходит за счет его переноса кз ткани мозга в кровь и может быть использоваио в качестве показателя степени поражения головного мозга.

2. Острое вшршчэскдз пора;кенке головного шага у человека характеризуется временным увеличением сывороточной активности МБ- и ВВ- изоформ КК. Сходные изменения наблюдаются и у Солншх алкоголизмом, находящиеся в состоянии алкогольного абстинентного синдрома. Данные изменения связаны с нарувением проницаемости клеточных мембран мозга и могут Сыть использованы в качестве показателя степени поражякия головного моага и контроля эффективности лечебных мероприятий.

3. У больныг. алкоголизмом, находящихся в состоянии ремиссии, изоферментный. спзкгр КК з сыворотка крови снесён в сторону увеличения !£Е и ББ- иэоферм, что связано с переносом изофермеитов не из ткани мозга и миокарда, а из скелетной мускулатуры.

4. произвол"Ьй таурина ИЭУ-1799, ИЗУ-1702. КЭМ-1660 и экстракт Фитоэдалтол'енз Polysoias, обладают нейропротективными свойствами и могут быть рекомендовзны для згциты головного мозга при его ишеши или шиокеккации этанолом.

рзОохы.

Апробация работы состоялась на заседании отдела фармакологии им. акад. С. В. Аничкова ордена Трпового Красного Знамени КИТОМ АМН СССР (С.-Петербург, 1992). Основные положения диссертации долелены на городской конференции шлодшс ученых и спэцкадистоз "Перспективы знзишдиагностики" (Ленинград, 1988), Всесоюзной кокференцкп "Фармакологическая коррекция гапокеическте состояний" (Чйсква, 19.23), на заседании Ланккградского отделения Всесоюзного алхимического обпуэства (Дэнинград, 1988), на 2 Всесоюзной конференции "Фармакологическая коррекция гипоксических состояний" (Гродно, 1991) 05'ыш г структура работы.

Диссертация включает в себя следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, экспериментальную часть, обсувдекке результатов, выводы, библиографический указатель. Текст диссертации

яалсжэн на _ страницах машинописного текста, ссдердит ___

рисунков и _ таблиц. В библиографическом указателе - _

отечественных и _ иностранных источника.

Публикации.

Ш теме диссертации огуСликояано 12 печатных работ зарегистрировано 1 авторское ссидетелоство на изобретение.

в

СОДВДШШК РАБОТЫ

НА1КРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена на беспородных крысах самцах различной массы, белых беспородных мышах массой 16-18 г, а также на клиническом материале (бкоататы скелетной кускулатры, сыворотка крови), любезно предоставленном ка$едаой нервных болезней 1 С. -ПэтерОургского медицинского института им. И. П. Павлова, С. -Петербургским Гбиастным наркологическим диспансеров и С.-Петербургским Психоневрологическим институтом им. В. М. Е&хте^еаа.

Дня изучения динамики активности креатинкшази и ее иэоферментов в тканях к биологических жидкостях крыс с ишемией голоного мозга и Г,м оценки эффективности применяемых фармакологических препаратов нами была разработана модель циркуляторной гипоксии головного мозга на крысах, позволяющая регулировать степень ишемического воздействия. Суть модели сводится к двустороннему дозированному лигироьа-нии общих сонных артерий. Дозированзое сужение сосудов достигается благодаря использованию металлических стержней определенного диаметра, которые накладывается на сосуд в момент ег"> датирования. После затягивания лигатуры стержень быстро извлекают, г результате чэго просвет сосуда определяется диаметром стержня.

Изучение поведенческих реакций крыс с циркуляторной гипоксией головного мозга проводили через 3 надели после операции метода!® "открытое поле" и "норковый рефлекс", наряду с этим в многосекционном Т-оСраунам лабиринта изучали способность крыс к обучению.

Моделирование острой алкогольной интоксикации на ¡фысах осуществлял путем разового внутрибрюшинного введеьия 20% этанола в дозе Зг/кг.

Моделирование хронической алкогольной интоксикации осуществляли методом полупринудительной алкоголизации, при которой крысы в течении 1,блет получали 1Б% ргствор этанола в виде единственного источника питья. В тканях и биологических жидкостях животных определяли активность КК и ее иэоферментов. В ткани гологного мозга в Н21?оторьа случаях определяли содержанке лактатз и пирувата.

Для оценки фармакологических эффектов производных ряда танина и адаптогенов из семейс-ба АгаПзоуа использовали следующие

иокаэателн:

Л) Острая токсичность препаратов. Определение Щ-50 производили по методу йзрбара. Препарата вводили внутрибрюшинно, смертность животных регистрировали в течении ¿4 часоз.

В) Влияние препаратов на активность ЙК при циркуляториой гипоксии головного мозга, аивотным, после операции по сужению общих сонных артерий, внутрибрюшинно вводил! иссхедуемые препараты. Через 7 суток а сыворотке крови и ткани головного мозга определяли а гивност: FJL

В) Влияние препарэтов на продолжительность алкогольного сна. Экспериментальным животным внутрибрвшинно вводили 257. раствор этанол-'1 в дозе Лг/кг. Сразу после этого, таким да способом вводили исследуемые препараты. Регистрировали время бокового положения животных.

Г) Влияние препаратов на продолжительность гексеналового сна. Препараты животным вводили внутрибршинко сразу после гэксенала и регистрировали длительность Сокового п^ломения.

Д) Влияние препаратов на активность КК а сыворотке крови и ткаш; мозга крыс с острой алкогольной интоксикацией. !Кивотным за или через 30 мин после введения алкоголя вкутрибргаишно вводили исследуемые препараты. Через три часа после введения алкоголя в сызоротк* крови к ткани головного ыозга определяли активность КК

Е) Влияние препаратов на изменение ДД-50 этанола. Через 30 мин. после введения этанола в дозе ДД-30 животкчм внутрибри-инно вводили исследуемые препараты, йштеаедость мышей регистрировали в течение 24 часов.

Для изучения динамики активности КК и ее иэоферм?ктсв у людей была использована сыворотка крови 12 больных, поступивших а стационар 1-го ЛШ1 им. И. а Павлова с диагнозом острая цереброваскулярноя недостаточность. В качестве контроля использовали сыворотку крови 15" клинически здоровых добровольцев в возрасте от 20 до 40 лет. Все обследованный были лица мужского пола.

Клинический материал, предоставленный СПбОНД-ом и Институтов им. В. 11 ВехтерэЕЗ, включал в ?бя еызоротку крови 32 больных хроническим алкоголизмом второй стадии в возрасте от 20 до 50 лет. Из них 20 человек поступила в стационар с алкогольным абстинентным синдромом

(ААС) и бит разделаны на 3 группы: 1- с умеренным ААС, 2-е ААС средней тяжести, 3- с выраженным ААС. Остальные 12 человек прошли ранеь курс лс -'внт и находились на момент обследования в состоянии стойкой длительной ремиссии (от 1 до 14 лет).У них тага® определяли общую активность и проводили изучение изофержнтнего спектра КН. Контролем служила сыворотка крови от 15 клинически здоровых добровольцев в возрасте от 20 до 40 лет.

В работе Сипи использованы биоптаты мышечкой ткани, весом 40-50 мг, полученные от 1Б Солаякх алкоголизмом во время операцш' по имплантации препарата эспераль. Контролем служили биоптаты скелетной мускулатуры, полученные во время различных хирургических операций от лиц без клинических признаков алкоголизма.

Определение оСсрй активности КК производили колориметрическим методом {Петрова, Лызлова, 1985). Чувствительность метода 0,005-0,US ME фермента в проба. Разделений изоферментов КК осуЕ^ствлнли с помощью колоночной хроматографии на сефгдексе ДЭАЕ А-БО (Yasmtneh, Lewis, 1984 ). Элюции иаоферментов КК проводили ступенчатым методом, используя три буфера, которые содержали ЮОмЫ Nací, йООмУ Naol и АООмМ N&ol. В каждой фракции проводили определенна активности КК. В качестве одного из показателей энергетического обмана головного мозга у крыс, при острой алкогольной интоксикация использовали определение в нем содержания молочной кислоты (Bergweyer et al.,1985) содержания пировиноградпой кислоты (Ozok, Lanprecht, 1870) к юс соотношение.

Определение белка проводили микробиуротовын методом.

Статистическую обработку данных осуществляли с помощью программы MICROSIAT фирмы Ecosoft Ico..

зшдатшотдлш: дшиз я их огжющашн

1- Ктайв» галшггиго мтга

1.1 Квеття гожшшго шзгз. у крив.

Исследования, проведенные на модели хронической циркулягорпой гипоксии головного мезга-у крыс, показали, что дозированное сукеттэ оСези санных артерий приводит к гибели частя животных, к уменьшении гг. здсшитс-льности жизни, . а такяэ вызывает потери в весе. Следует подчеркнуть, что все исследованные показатели находились в прямой зависимости от степени сужепия сосудов и являлись наиболее вырако"нши для группы животных с полной окклюзией общих сонных артерий. Наибольший интерес для моделирования хронической цереброваскулярной недостаточности представляла группа животных, в которой при значительном сужении сонных артерий (БОХ), смертность минимальна. Поэтому, именно зту группу использовали в поведенческих испытаниях.

1.1.1. Повадэичоскт реакции крьк с вазгаазй гожшшго моага

Поведенческие реакции ишемизирозанньга: крыс изучали через 3 нодели после операции в тестах "открытое поле" и "норковый рефлекс". Опытную группу составили животные с сужением обвдк сонных артерий на 50%, контрольную ~ до »¡кооперированные.

Опытная группа животных значитезьно отличалась, по изученный показатзгяи, от группы ло.гаоопеолрованных и интактны» швотных. Животные с ишемией головного мозга проявляли повышенную двигательную активность и ориентировочную реакции, что снязано по-видимому, с нарушениями в эмоциональней сфере. О повышенной эмоциональной реактивности ии&икаированных • животных, свидетельствует, и тот факт, -что число балюсо" дефекации, характеризующее эмоциональную реакции, Выло так т увеличено а сравнении с контрольной группой.

Серия эксперишнтоЕ по обучае;кзсти крыс в Т-образном гяогосекцп-ощюи лабиринте показала, ото 80-90% ловдоаперирсвшшых животных-достигали критерия обученности к 10-1? -му предъявлению задачи. Животные с двухсторонней пг-реияакой общих сонних артерий (607.), существенно отставали по скорости приобретения навыка чередования лево- и правосторонних побелек так, что 80-901 животных достигали

критерия скученности лишь к 20-му педъявлению задачи. Анализируя микроструктуру поведения интактных, лодаооперировааных и шемизиро-ванши крыс г многосекционном Т-обраэном лабиринте, следует отметить, что ассоциативный компонент обучаемости (число подкрепляемых побежек) во всех трех группах был практически одинаков (33+11, 26+5, 30+7, соответственно). Статистически так т не различается и количество совориаэшх ошибок (не подкрепляемые побежки), в то м время эмоциональная реакция на лабиринт у ииекизироЕанггых «ibothux была существенно выше. Таким образок, отставание в обучав гати животных лшзшгаированной группы происходит, видимо, не аа счет нарушения механизмов, контролирующих когнитгзиыЛ компонент обучаемости, а скорее за счет повышенной эмоциональности животных. Данные по первичным нарушениям я эмоциональной сфере животных после нарушения мозгового кровообращения свидетельствуют о том, что предложенная нами модель хронической ишемии мозга на крысах (по поведенчигкш реакциям) действительно соответствует хроническому нарушению шагового кровообтаврния.

1.1.2. Дюсаича актныюсти КК и ее тгаофоршикш и еызарсггке кроаи крыс с нарувоншм шагового кровообращения.

Экспериментальная ишемия головного мозга у крыс, гчзванная дозированным, двусторонним актированием оСдах соиннх артерк* приводп к снятию активности КК в ткази мозга, причем минимальнее значение активности фермента (7,5+-0,2) наблюдалось в группе с максимальным сужением обода сонных артерий (9,0+-0,1 - значение характерное для ложнооперкрованных), -Параллельно со снижением активности КК в ткани мозга, наблщаэтися значительней подъем ее активности в сыворотке крови. Каб:псдаеыые изменения активности КК в ткани мозга и в сыворотка крови находятся в зависимости от степени сужения общих сонных артерий.

Изучение изеформентного спектра КК в крови животных с полным пережатием' сбарве сонных артерий и наиболее выраженными изменениями ебцэй активности КК показало, что наблидается значительный подъем активности МВ-КК и особенно ЕВ-КК, до 4D0+-45 И 7DCH-120 МЕЛ. соответственно, в то вреда как в группе лохноопзрированных активность этих изоферментов нэ привыкала 80+-Е5 и 120+-4Э ЫЕ/л. AJCTüBHüCTb lab изофермента, напротив изменялась висьма не значительно (2300+-180 и "2000 +-1-40). Таким образом, наблюдаемое

/величание обцэй истинности КК в сыворотке крови происходит, в основном, эз счет нейроспецифичаского ЕВ- и кардиоспецифич^ского ИВ-нэофермента, активкось которых, . в сравнении -с лолнооперировакными, возрастала в 6 раз.

Снклвние активности Ж в мозге и увеличение ее в сыворотке кроки, происходящее в соответствии со степенью сужьния общих сонных артерий, позволяет говорить о том ,что суирни? уугхакных еоеуд™ приводит к визсоду в кровь цитоюазизтичаских белков, в частности, причем "утечка" КК (и как причина этого деструкция мембран клеток мозга) тем больше, чем больше су чинив общих сонных артерий.

1.2 йе-ошш головгага шага у чашаека

1.2.1. Лтшссса активности КК а сшарс/пю нровж Оолмш с иирутвв-

юкш шзгового кройгоорзя^шзт.

Изучения общей активности кроатинкинаан в сыворотке крови Соленых с острым нарушением мозгового кроьоаОрзсуггия показало, чт• < илкеимаагно* увеличен»«" активности Лермвкта вр»ш>д.«ся на 1 развития цереброьаскулярной недостаточности и достигает значений 400 ИЕУл. Затем активность КК снижалась и к 7-2 дню пребывать* больного э стационара, при успеином проведении лечебньл юропрнтяй, достигала згычений, характерных для кяиж'чоск/ здорорнх доноров - 0-5Р НЕ/е.

Изучение изофермент.гого спектра КК з крови у этих Сильны) выявило существенное увеличение активности ШЗ- и ВЕ- ироф^риентсн (до 20+-5 н 40+-0 МЕ/л соотв^тствошю), что привышало значения характерные для клинически здоровых доноров в 10 и а 40 '"?.

Цроц^нтнзе соотношение »а с ферментов при -;том, менялось и сторону увеличения МВ- и ЬВ-КК. содердан;« »«порше к 3 дав пребывания в стационаре, достигало 16 и 251 от общей активности Щ, тогда как для здоровых лиц аналогичные пс.сазатели не превышали 0-8* и' Р-ЗХ.

Результаты наблюдений выполненных с использованием с!лз~г:тки крови больных с наруаыив-зм шзиовсго кровообращения согласуются с результатами исследования изофбрмеиых спектров КК у итамаровышых К! четных.

2 Острая я хроническая атгошая кнтвгсегасгсня

2.1. Дикамнса активности КК н ее йаоформвнтов в биологических хигпсггях я ткали ыоага. 1фас с острой и хронической алаа-голыгаЯ юттатспиацией.

Изучая изменения активности КК и ее изоферуектов в сыворотке крови крыс с острой и хронической алкогольной интоксикацией мы, в качестве коктролей использовали животных в возрасте- б мес и 24 месяца.

Как показали исследования, проведенные на интакткых животных, эСс^я активность КГ. и ее изофорнентный профиль в сыворотка крови крыс может меняться не только в зависимости от состояния животного., но также и в аависимости от его возраста. Контрольная группа, & которую входили молодые животные (6 мес.) по активности КК сыворотки крови к ее изоферментному спектру резко отличалась от контрольной группы старых животных (24 мес.). Общя активность КК у старых крыс била в 2,6 раза меньше, чем у молодых кшотныг.

При этой, происходит такжа и значительное изменение соотношения изоферментов. Так, у крьк в возрасте 24 нес наблюдалось повысениэ активности ИВ-и ВВ-изоформ КК до 120+-10 и 180+-36 ЫЕ/л в то время как у молодых животных эти аначенил не прививали к0+-4 и 80+-7 МЕ/л. Вместе с тем активность Ш-КЕ с возрастом реако счилалаоь и к 24 месяцам достигала значений Б00+-43 МЕ/л тогда как у крыс в возрасте е мес, ее активность составляла 1800+-170 12/л.

Серия экспериментов по изучению влияния острой алкогольной интоксикации на общую активность КК и ее изофершнтный спектр была проведена на крысах в возрасте 6 мес. Данное исследование позволило выявить, что разовое лзедение больной дозы алкоголг: (3 г/кг) приводит .. резкому (почти в 1,5 раза) повышаниа активности КК в крови. Наблюдаемое повышение происходит за счет всех 3 кзоферментов. Причем, активность 1М-КК увеличивается в 1,4 раза, 1Ш-КК в Б раз и ВВ-КК в 5 раз. В связи с тем, что относительный прирост активности для ив и ЕВ-КК был наибольшим, игченилось и процентное содержание изо-фермеятов в сыворотке крови.

Для выяснения вопроса об источнике увеличения ЕВ-КК 2 сыворотке крсЕи крыс г;ри острой алкогольной интоксикацией, мы , изучали динамику активности КК в системе ¡«зг-ликзор-кровь (Табл 1).

Таблща i.

Активность креатинкиизэы в головном ыозге, дикворе. и сыворотке крови крыс при острой алкогольной интоксикации.

N Группа Активность креагюгкгтазн

о/а животных (и) -----------------------------------------------

Шаг (WB/мг «елка) Литаср (ШЛа) К»ювь (ЦЕ/л)

1. Контроль

(физиологический

раствор) (10) . 9,2+-0,12 7Б+-16 21С0+-176

2. С алкогольной

интоксикацией а в с

(3 Г/кг) (10) а,1+-0,1 430+-58 3400+-244

3. С алкогольной

интоксикацией а в с

(S г/кг) (10) 6,9+-0,25 -020+-120 Б300+-310

Пре>">чзния:

а; в; с - различия, достоверные г.о отношении к контролю

Р<0,01.

Нак показаний в табл. 1, введение этанола приводит к снижению активности КК в мозге с одной стороны, и к увеличения ее активности в ликворе и сыворотке крови - с другой. У*сазатим изменения коррегч-рувт с тя.костьв ашюгсльяой интоксикации п носят дозозавпсимый характер. Тал для rpynnu м-еотных каторым ьводили этанол в максимальной доге (5* г/кг), указанные изменения били наиболее выражены. Активность КК б ткани мозга составляла B,SD+-D,25 Ж/мг б., в лик-воре 1020+-120 КЕ/л и в сыяоротке крови 5300+-310 Е'л, в то ¿рччя как в коятроль.тей группе агсгансс-ть КГС бипа соотзетсггоннс 9.29+-G, 12 LE/мг белка; 75+-:3 МЕ/л; 2100+-176 ИгЛя.

Серия экспериментов по изучен!» ¡¡¿^ферментного спектр?. КК а сыворотка крови у 1фыс с хронической алкогольной интоксикацией показала, что с возрастом у интакткых животных (как ут говорилось) наблюдается увеличение активности ЕВ и МВ-$орм КК, причем это пго-

исходит на йоне выраженного снижения общей активности фзрданта. Как показали исследования,уменьшение общэй активности ЕХ происходит за счет резкого с чгаюния (с 1800 1Е/л до 500 МЕ/л) активности Ш-КК. В группе животных того же возраста (24 мес.),которая получала в течении 1,6 лет 157. этанол в виде единственного источника пиля, наблюдаются аналогичные измеяения, однако достоверной разницы между спаиваемой и контрольной группой того же возраста (24 мес.) не выявление.

Результаты исследования поведенческих реакций крыс с хронической интоксикацией этанолом покатали, что число посещений квадратов, характеризующее двигательную активность, г- опытной группе значимо на отличалось от контрольной группы и составляло 37+-4 и 43+-6, так же не наблюдалось достоверной разницы и в параметрах определяющих ориентировочную реакцию и эмоцианальную реактивность крыс. Это. по-видимому, связано с адаптацией организма к длительно воздействующему фактору, с перестройкой метаболизма, активацией и стабилизацией на новом уровне систем утилизации алкоголя. Сравню ал контрольную группу в вограсте 24 мес с контрольной группой в возрасте 6 изс, следует отметить, что с течением времени двигательная активность, ориентировочная и аноцианалькан реакции крыс снижаются что является вполне естественным.

?.. 2. Дячамша антшшости Ш и во изоф^млтэя в скзиуктсо прош х ткани скшютиой ыускужшуры ладей Оолькш зжшголйзйоц.

Исследование, проведенное с использованием сыворотки крови, полученной от больных алкоголизмом 2 стадии, включаю в себя изучение динамики активности КК и ее изофер: 'нтов в различные периоды ААС (на 1 сутки; па а и на 7 сутки развития ААС); в пг "йод лечения в стационаре (до 2 мес.) и в период стойкой длительной ремиссии (от 1 до 14 лет).

Результаты изучения обпрй активности КК в сыворотке крови у больных находящихся в состоянии ААС представлены в табл. 2 ,

Таблица 2. -

. Динамика агаивности креаткнкияазн в сизоротке крови больных

алкоголизмом

Группа СОСТОЯ!». Воздержание Активность 1Ш в

обсладочатляс сЗсадованны* от ааетголя крови, (!Я/л)

(сутки)

Клинически

здоровш (П-1Б) в

добровольцы нормальное Г5+-3

умеренный 1 44+-3 а

Больпш ААС 3 В5+-7 а и

(п-7) 7 35+-5

алкоголю юк

средней 1 54+-4 а

а тляести 3 140+-9 а В

ААС (п»7) 7 41+-5 а

состояшш

выра»*»нный 1 63+-4 а

ДАО ААС 3 230+-31 а в

Об) 7 46+-5 а

Больные ?. состоянии ремиссии до 60 суток (п«8) 40+-4 а

Вольные з состоянии ремиссии от 1 до 14 лет (п-12) 53+-3 а

Примечания:

а - различия, достоверные по отношению к группе здоровья добровольцев

б - различия, достовеуные по отношению к первому дню ААС

р<о,ои

Как указанно в таблице, активность КК, в течении периода ААС

(1-7сутки) значимо изменяется, причем эти изменения наблюдаются во всех трех подгруппах и носят щноналравлешшй характер. Так в первый день развития ААС, в подгруппе с умеренным ААС, с ААС средней тялйсти и Еыра:*енныы ААС, активность КК была достоверно выше чем в контрольной группе и имела значения 44+-3 ЫЕ/л; ' S4+-4 ,4Е/л; ЕЗ+-4 lffl/л - соответственно. Затем к 3 дню ААС активность фермента в сыворотке крови больных указанных подгрупп резко возрастала и достигала значений 65+-7 ЫЕ/л; 140+-9 Ш/л; 23û+-ai Ш/л. Далее, к 7 дню прибивания в стационаре активность фермента снижалась, достигая значений характерных для 1-го дня ААС (33н5 МЕ/л; 41+-S ïb'i; 48 -5 ЬЕ/д).

Такии образом исследование показало,что в период /АС, у больных происходит значительный подъем сбп^й активности КК в сыворотке крови, причем имеется прямая эагсимость между степенью выраженности абстиненции и максимальным увеличением активности форинта в кроаи (табл. 2).

Раз^чление изоферментов КК в сыворотке крови больных находящихся . в состоянии абстинениции было произведено ь группе с выраженным АЛС. Как представлено на рис.1, больные с ААС из на1, льна (1 дань ААС), имели несколько повышенный уровень всех трех форм КК. Затем, к 3 дню воздержания от алкоголя, было зарегистрировано резкое увеличение все? трех форы КК; при атом следует отметить, что абсолютный прирост активности был наибольшим для МБ- к ВВизофермэнтов (в б и 10 раз соответственно, в сравнении с пераым днем ААС). Активность UU-KK достигала ¿00-110 Ш/л что примерно в Б раз выше нормы. Далее к 7 дню абстиненции, активность всех трех изоферментов снижалась до •уровня первого дня ААС, однако активность ME- :: ВЬформ КК оставалась выше Hopi.^L', а соответственно и процентное содержание каждого из изеферментов резко отличалось от значений контрольной группы. Следует отметить,что на протяжении пэсл.дуюцкх двух месяцев леденил в стационаре, общая активность КК (Табл. а) и ее изоферментьыЛ спектр (F/c.l) у всех наблюдаемых больных значимо не менялись. У данной группы больных (ремиссия до 2 мес.)общая активность КК оставалась, однако, в среднем выше ,а изоферментный профиль снащен в сторону увеличения MB- и Ю7 форм КК, в сравнении со здоровым:: испытуемыми.

МВ/л

120

100

ео. со

40

25

II 1 Шъ ш\ шп\тп\шп

| ,1

Рис.!.

Активность изофврментов креаткнганазн в сыворотке крови Сольных алкоголизмом

А- клинически здоровые добровольцы, В- больные в состокяик 1АС (1-1 сутки., 2- Зсуткк, 3- 7 сутки), С- больные в состоянии ремиссии до 2 кос., Л- больные в состоянии ремиссии от I до 14 лет

- МЧ-КК

-мв-"к СИ-вв-кк

Исследования, пров1д?шг«й с использованием сыворотки крови лиц находлщ&ся в стойкой дл»ггельной ремиссии от 1 года до 14 лет,показали, <г.-о активность КК в сыворотке крови этс': группы больных (Табл. 3) такте, в средней, была достоверно в ье-». чем в коотрслгнсй группе (п " рзза). Изучение кзо$ерментного спзкгра у этих пациентов ввяв.»и» сутгсстзь-ное смеярние его в сторону МБ-и ВВ-КК, в сравнении со гдеровьгз; добровольцами (рис.1). Процентное содержание $3- к ЕЖ" достигало у Сольных этой группы 20-30X, в то зромя как у эдо-р:зк\ добровольцев содгриание тох жэ изсформ состазляло 0-8Х и 0-3% соответственно.

Глл проверки предположения о возможных изменениях креатишшназ-

иого профиля ь скелетной «ускулатуре под воздействием хронической алкогольной интс.сспкации и д."ч выявления источника поступления ИЕи ВВ- иэоформ КК в сыворотку крови, ш провели разделение изофершн-тоа КК в экстрактах скелетной мшцы (m. Gluteus) людей, больных'алкоголизмом (Табл..?).

Таблица 3.

Изоферментный спектр креатшшшазц в ск&летной мускулатуре людей больных алкоголизмом

Группа Активность ЧК

обследованных , МЕ/мг белка

Ш-КК МВ-КК ВБ-КК X Ш-КК % ЫВ-КК % БВ-КК

Бсльнь© * * *

алкоголикам 350+-24 7б+-б 27+-3 78 16 б

Бэа клинических признаков алкоголизма

(контроль) 450+-30 20+-2 0 05,7 4,3 О

Примечания:

* - различия, достоверные по отношению к контролю.

Представлена» таблиц показывает ,что изоферментный спектр КК в скелетной мускулатуре человека представлен в норма Ш-Ж ЫЕ- КК, в

• следовых количествах, таклй может встречатся, однако активность этого изофершнта не превышает Ъ7. . Исследования проведенные в экстракта «мускулатуры Сольных алкоголизмом £ стадии, выявили, что у этой группы Ссльных появляется з на ч; .темные количества ЫВ и ЕЬ-форм креатинкиназы, содержание которых достигает 17 и 6Х соответственно-от оОщ>:й активности КК. Т о. скелетная мускулатура может быть потенциальным источником ИЗ и ЕВ-ироформ КК - сыворотки кроги.

3 ®аряттгпчсгага э^^екты кроизиз^м ряда, тадрши. и (¿отдадапта-п>«оя сен. Aral" ■кул

Анализ данных литературы и собственных исследований наводит на мысль о сходстве в механизмах пораяения ЦНС при гаемич, .ипоксии головного шага и интоксикации этанолом. Поэтому применение препаратов одной и той жэ фармакологической группа для коррекции указанных патологических состояний и, что особенно заино, при сочетмип алкогольного и ишемического поражений мозга, представляемся обоснованным.

Для изучения был выбран ряд оригинальных фармакологических соединений, синтезированных в Отделе нейрофармакологии им. С. В. Аничкова ЕЖИ FAMH на основе тормозящей аминокислоты - таурина а так т неязвесный в официальной фармакопее фитоадаптоген Polysciaá (сем. Araliacia). Как показали исследования, .-роведеннаэ на модели цирку-ляторной гипоксии моага, двустороннее лигирование сбжх сонных артерия приводит к значительному сниманию активности Kit в ткани головного мозга и к увеличении обярй активности з сыворотке крози (на ■ SOS) Таурин а данном исследовании не проявил фармакологический активности,а то время как ¿го производные (К2М-1799, J3í-""C2 и КЗШ.660) в значительной мере предотвратили сичиение активности КК в ткани мозга , а такмэ препятствовали увеличению сбарй а\.явности Фермента в сыворотке крови. Это позволяет говорить о той, что указанные препараты уменьшает нарушение проницаемости мембранных структур мозга. Наиболее выраженный эффект проявил ГЭИ-1799,в то время как JT'M714, как и сам таурин не оказал влияния на активность КС в мозге, хотя и в яначитэА^ной мере уменьзал выход КК в хрокпю* ; уело из тругих ткакэй (Табл.4).

Таблица 4

Влияние препаратов на актганость (среатинкингзы в сыворотка крови и мозге крыс с циркуляторнэй гипоксией ыозга

препарат (п) Активность в крови ШУл КК в мозге МЕ/мг белка

котроль

ктсмия +• а а

фиэ. раствор (10) 3270+-170 7.5+-0.2

ав а

171.4 (10) 2700+-140 7,б+-0,2

• в ав

1702 (10) 2300+-200 8,8+-0,1

в в

16*0 (10) 240СН-210 8,9+ 0,2

В В

1799 (1С, 2250+-170 9,1+-0,1

а. а

Таурин (10) 29 ОСИ-200 7.8+-0.1

Лодноопери-рооанные (10) в 21ОО+--10О : в 9.2+-0Д •

а - раз таю, достоверные по отношению к лсжюспврировзнным в - различия, достоверные по отношению к контролю Р<0,05

Серия экспериментов по изучен™ влияния производных таурина на продолжительность алкогольного сна показала, что. длительность аисо-гоаного сна при дозе этанола 7 г/к. составляла ь среднем 220 мин. Ввдение таурина не вызывало значимых изменений в ' продолжительности

сна , хотя и наблюдалась некоторая тенденция к его удлинив нию. Препараты 1777 и 1714 достоверно пролонгировали сон, в то время как 1680, 1702, и 1739 достоверно его сокращали (в 2 раза), т.е. по своему действию гтпошшалг эффэет. психоэнергизЕ.тороа, пек . стимуляторов. Производные 17Б8 и 1715 на продолжительность алкогольного сна влияния пе оказывал:! (Табл.Б).

Таблица S.

Влияние производных таурина на продолжительность алкогольного, геюсенаювого сна к на выживаемость мышей при введении этанола н

дозе LD-50 . (п-10)

препарат длительность алкогольного сна мин. длительность гексенагового сна мин. процент погибших мышей при введении этанола в дозе LD-60

физ. раствор ( KO'iTpOJffi) 220+-га 45+-Б 50

таургга 250+-2Б 54+- 5 БЗ

1777 * 3Q0+-35 50+-8 48

1714 * 230+-20 49+-5 55

1756 24П+-35 •41+-7 61

1716 210+-25 46+-5 49

1660 * 160 i— 3S+-7 * 20 ■

1702 А 13D+-20 40+- 4 А га

1709 100+-15 * 20+-4 * 22*

Примечания:

* - различия дс-товерные по отношении к контролю " Р<0,05

Исследования проведенные на моделе гексеналового сна показали, что и в этом тесте максимальную активность проявил ИЭк-1799. Препарат достоверно уменьиал его продолжительность сокращая латентный период выхода животного из бокового положения.

Изучая влияние препаратов на изменение показателя 10-60 этанола, мк обнаружили , что из всех исс*эдованных соединений, только ЙЭи-1733, КЭ1Ы702 и 1ЭК-1660 гчазыэают выраженное влияние, значимо г чихая процент погибших мший (Табл. Б).

Следвцэя серия экспериментов была посвящена изучению влияния производных таурина на активность КК в мозге и сыворотке крови при острой алкогольной интоксюсаци". Учитывая результаты предводитель-ных-опытов, изменение активности КК ^ крови и в мозге, на фоне фар-макологичь .¡кого воздействия, может отражать степень влияния препаратов на проницаемость мембранных структур головного мозга. Острая алкогольная интоксикация вызывает снидение активности КК в мозге и узеличение-в сыворотке крови. Таурин не менял эфф^.-ста этанола на активность КК, тогда как препараты ИЭ1М702, КЭЬЬ 1756, ЬЗИ799 и РШ-1660, в значительной мере предотвращали снижение активности КК в ткани мозга.

При изучении нейропротективных свойств препаратов из сем. Ага1е-аоуа, мы исяользозали те же модели, что и для изучения эффектов производных таурина.

Влияние полисциас на ИЬ50 этанола.

Раствор под..сциас, введенный мышам в дозе 100 мг/кг одновременно с этанолом ( 8,8г/кг, доза вызьшающзя БОХ -ную смертность) в 100% случаев предотвращал гибель животных. Поскольку известны другие представители аралиевых- элеутерококк г. жень-шень, у которых обнаружены адаптогенные свойства, нами было проведено сравнительное исследование противотоксических по отношению к алкоголю э^-ктов , представителей трех родов данного семейства. Степень предотвращения гибели животных, при аналогичном введении препаратов жень-шеня и элеутерококка, в тех же догах не превышала соотЕетственко 70Т. и Ь^г. . Следует подчеркнуть, что группа мышей, которой вьодкли полисциас, во время остро.1 алкогольной интоксикации, дегольке сильно ст^ича-

лась по внешнику виду от других групп. Уши, кончик коса и лапы, через некоторое время тосле введения алкоголя, у этой группы животных .становились не белыми, бескровными, как в других группа.? (и особенно в контроле), а напротив, - ярко-розовыми, что, по-види: ...¡у, связано с влиянием препарата на микроциркуляцию и предотвращением спазма сосудов.

Опыты по изучения продолжительности алкогольного сна у мышей на фоне введения фитоадаптогенов, показали, что действие всех трех изученных препаратов имеют тенденции к снижению длительности сна. Однако, наиболее ярко выраженный эффект проявил полксциас, сокращающий сон практически в 4 рэза.

Следующая серия опытов была посвящена изучению влияния фитоадаптогенов на активность КК в сыворотке крови и в мозга крыс в условиях острой алкогольной интоксикации.

1'лк было по;сазанио, все три представителя фитоадаптогенов, введенные предварительно (за 15 мин. до алкоголя в дезе 20 мг/i"^ в значительной мере предотвратили изменения активности КК ч крови и в мозге. Характерно, что и в этом исследовании, полксциас проявил максимальную активность,не только предотврасда падение активности КК в ткани мозга, но и увеличивая ее даже вышэ контрольного уровня.

Анализируя результаты опытов по изучению влияния производных та-урина,следует отметить .что те из них С1660. 1799,1702), которые проявили наиболее выраженный защитный эффект при воздействии острой алкогольной интоксикации, оказались наиболее эффективными и при поражении мозга з результате его иггемии.

Изучая в тех тестах гр,тппу адаятогенов, следует указать, что все они: . .ань-оень, элеутерококк и полисциас в той или кной с зелени оказывают положительный эффект как при алкогольном, так и при иш-мячбском поражении головного мозга, причем наиболее .зффветквныы оказался представитель семейства Aralracia - pol isolas. Данные фармакологических исследований с одной стороны подтверждают предположение об с хилеет:! конечных этапов порзаедия головного мозга при его ишемии и интоксикации этанолом, с другой стороны открывают принципиальную возможность для применения изученных препаратов с целью защиты головного мозга при его ишеыш, алкогольной интоксикации и что особенно важно, при их сочетанном воздействии.

Вывода

1. В сыворотке крови половозрелых кнтактных крыс активность креатинкиназы представлена в основном Ш-изоферментом. При старевии происходит снижение общей активности креатинкиназы в сыворотке крови, изоферментный спектр при этом сдвигается в сторону увеличения содержания НЕ- и НВ- форм КК.

2. Ишемия головного мозга и острая алкогольная интоксикация вызывают однонаправленные измекен"я общей активности КК и ее изофор-мегчш в сыворотку крови к головном мозге крыс. Наблюдаемые изменения (сни/.ение активности КК в мозге и увеличение в сыворотке крови) находятся в прямой зависимости от степени пережатия общих сонных артерий или от дозы введенного алкоголя. Увеличение активности ЗБ- изофермента КК в сыворотке кроьи происходит за счет его переноса из тка „1 мозга в кровь и может быть использовано в качестве показателя степени поражения головного мозга.

3. Острое ивемическое поражение головного мозга у человека характеризуется временным увеличением сывороточной ает .шностк 13- и ВВ- изоформ КК. Сходные изменения наблюдаются и у больных алкоголизмом, находящихся в состоянии алкогольного абстинентного синдрома. Данные изменения .вязаны с нар/иенкем проницаемости клеточных мембран мозга и могут Сыть использованы э качестве показателя степени поражения головного мезга и контроля эффективности лечебных мероприятий.

4. У больных алкоголизмом, находишься в состоянии ремиссии, изоферментный сы.чтр КК в сыворотке крови смещен в сторону увеличения Ш- и ВВ- изоформ, что связано с переносом пзефермектов не из ткани шзга и миокарда, а из скелетной мускулатуры, в клетках, которой происходит синтез нехарактерной для нее, онтогенетически оолее ранней формы - ВВ-КК и 13-КК.

Б. Производные аминокислоты таурина ( 1Ш-1799; ГС31М702; и ИЭи-1530) и фитоадаптогены полисциас и жзнь-шень обладают выраженными нейропротективными свойствами. Что проявляется в уменьшении сдвигов активности КК и ее изоферментов а ткани мозга и оыворстке кри^и при острой алкогольной интоксикации и циркуляторно.. гипоксии головного мозга у крыс, в снижении токсически эффектов этанола, сокращэ-

- 26 - -

ели длительности сна, вызванного этанолом и гексеналом. КЭМ-1799 обладает выраженными :имуностимулируицими свойствам!, обследованные препарата могут быть рекомендованы для защиты головного мозга при его ишемии и интоксикации -этанолом

Опта» работ, гагуОлвотванш ш тат диссертации.

1. Краснова Э. Л , ЬЬпгков К. А., Чувабн И. В., Бурмистров С. 0. Экспериментальная хроническая ишемия мозга и пути фармакологической коррекции гипоксичесгапс состояний. // <Хармакологическая коррекция ги-поксических состояний: Тез. докл. Всес. Конф.-М., 1983. - С. 48-49.

2. Краснова Э. И., Чуваез И. В. Эффекты нового антагониста Са - ью-готрииа в условиях различной патологии. // Фармакология - клинике / Под ред. ¡0. С. Бородккна. - Л., 1988. - С. Э2-98.

3. Чувздв И. В. , Герасимов В. К., Ильин П. С. Определение содержания креатинюгчазы в крови больных с неспецифичэоким ясвенньон коалитом как дополнительна диагностический тест.// Тер. архив- 1990. N 2. - ■ С. Й17-219.

4. Чувавв Л Б., Краснова Э. И., Усат&нко ¡Л. С., Крупицкий Е. II, Рыбакова Т. М. , Гриненко А. Я. Динамика активности крвслпнкиназы к ге кзофермвнтсв в сыворотке крови больных алкоголизмом. // Вс..р. код. химии - 1990. N 3. -С 150-159.

5. Бородкпн Ю. С., Усатанко М. С. , Петрова Ы. А., ¡.'аиек О. ¡0., Чува&в И. а , Шабанов 11 Д. Биохимические маркеры алкоголизма // Тез. докл. Созетско-Итах -некого симп. - Л. 1990. -С 12 4-135

6. иЗДанов Е Д. , Усатенкг1 М. С. , Петрова Ы А. , Чуваев й. В. Дкаг-ностяческг з критерии и сснсееыо принципы лечения алкоголизма.//

7. Еородкин К). С., Усатснко М.С, Петрова 11 А., Чуваев И.Е, Шбанов Е Д. Биохимические корреляты алкоголизма в раз л?' -ные периоды заболевания. // Сб. докл. Международного Сов. -Фин. Симпозиума по нзр-кологии. Я 1331 -с 36-37

8. Пугачева г к., Скоромец А. А., Сапронов ЕС., Чуьаев 11В., Говорова М Ю. Особенности биохимических показателей у больных ишеми-ческнм ::нсульто.х на ¿оне сахарного диабета // Гипертоническая болезнь и атеросклероз : Тез. кокф. Пермь., 19Э0. - С. 45-46.

9. "уваев И. К Игофермэнтный спектр креатинки^азы в скелетной мускулатуре больных алкоголизмом. // Актуарные пробьет наркологии:

- 20 -

СО. статей конф., Пенза., 1990. -С. 64-66.

10. Чуваев И. к Характеристика изоферментного спектра креатинки-нааы при острой алкогольной интоксикации и старении у крыс. // Билл, эксперим. биол. и медицины.- 1991. N 5. - С. 315-317.

И.Усатеико М.С., Петрова и. А., Матвеева И.М., чу».аеа И. Е , Рыбакова Т. Г. , Ершев 0.5., Бородкин С. С. Динамика активности ферментов - маркеров употребления алкоголя в крови больных алкоголизмом. // Вопр. наркологии - 1991, N 4. -С. 97-101.

12. Планов II Д., Полтавченко Г. и , Калишевич С. Г., Петрова и. А., Чуваев И. В. Поведение избегания 1 содержание пептида страха в мозгу кр"с хронически употреблявших этанол. // Условный рефлекс в системе нейронаук: Тез. докл. Бсес. Симп. - Л., 1991. - С. 105-106.

13. Котин А. >1 Бичевая , Чуваев И. В. и др. Средство для предотвратил ашаэголькой интоксикации. // Заявка на авторское свидетельство К 4285375/14 ., 1987.