Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Актиномицеты засоленных почв

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Актиномицеты засоленных почв"

На правах рукописи

ОБОРОТОВ Геннадий Вячеславович

Актиномицеты засоленных почв

Специальность 03 00 07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2007

003066225

Работа выполнена на кафедре биологии почв факультета почвоведения Московского государственного университета имени М В Ломоносова

Ведущая организация:

Научный руководитель-

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Д Г Звягинцев доктор биологических наук АН Лихачев

кандидат биологических наук АС Терехов

Российский государственный аграрный университет -МСХА имени К А Тимирязева

Защита диссертации состоится «16» октября 2007 г в 15 час 30 мин в ауд 199 на заседании диссертационного совета К 501 001 05 при МГУ имени M В Ломоносова по адресу 119992, Россия, Москва, ГСП-2, Ленинские горы, МГУ имени MB Ломоносова, факультет почвоведения

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке факультета почвоведения МГУ Автореферат разослан «14» октября 2007 г

Приглашаем Вас принять участие в обсуждении диссертации на заседании диссертационного совета Отзывы на автореферат в двух экземплярах просим направлять по адресу 119992, Россия, Москва, ГСП-2, Ленинские горы, МГУ имени M В Ломоносова, факультет почвоведения, Ученый совет

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук,

профессор

Г M Зенова

Актуальность проблемы Засоленные почвы - это большая группа почв разного генезиса и свойств, объединенных одним диагностическим признаком -наличием в профиле легкорастворимых солей в количестве, ухудшающим плодородие почв и отрицательно влияющим на рост и развитие большинства растений (Засоленные почвы России, 2006) Эти почвы представляют собой своеобразные природные экосистемы, в которых высокие концентрации солей и недостаток влаги создают экстремальные условия для существования живых организмов, здесь формируются специфические микробные сообщества

В микробиологических исследованиях засоленных почв большое внимание уделялось галофильным, осмотолерантным и алкалотолерантным микроорганизмам Подробно исследованы разнообразие и функциональные проявления галоалкалофильных и галоалкалотолерангаых прокариот (Заварзин и др, 1999) Среди сведений о бактериальном населении засоленных местообитаний находим лишь единичные сведения о мицелиальных бактериях (Калакуцкий, Агре, 1977, Gochnauer et al, 1975, The Prokaryotes, 1991, Jang et al, 2003)

Среди актиномицетов обнаружены галофильные формы Saccharopolyspora halophila (Gochnauuer et al, 1975), Actinopofyspora, Nocardiopsis (AL-Tia and Ruan, 2001), Prauserella halophila и P alba (Li et al, 2003), способные расти на средах, содержащих 10-20% или даже 15-25% NaCl

Для засоленных почв нередко характерны высокие значения рН, особенно, если засоление обусловлено содержанием в почве ионов Na+, Са2+ и СОз2" Поэтому в этих почвах можно ожидать развитие не только галофильных, но и алкалофильных микроорганизмов, в том числе и актиномицетов (Звягинцев, Зенова, 2001)

Целью работы является экологическая характеристика комплекса актиномицетов в засоленных почвах для расширения представлений о разнообразии микробного мира и выявления культур актиномицетов, перспективных в отношении биотехнологии

Задачи исследования

1) Разработка и подбор методических приемов для учета и выделения актшюмицеов из засоленных почв

2) Сравнительная характеристика акганомицетных комплексов различных засоленных почв

3) Оценка радиальной скорости роста галофильных, алкалофильных и галоалкалофильных актиномицетов при различных концентрациях №С1 и значениях рН среды для построения кривых толерантности культур в отношении содержания соли и рН среды

4) Исследование динамики численности и биомассы актиномицетов в ходе сукцессии, инициированной увлажнением засоленной почвы

5) Изучение особенностей дифференцировки мицелия галоалкалофильных актиномицетов на средах с различными концентрациями солей и значениями рН

Научная новизна Впервые установлены закономерности распространения и таксономическая структура комплексов галофильных, алкалофильных и галоалкалофильных актиномицетов в широком ряду засоленных почв Установлено, что разнообразие актиномицетного комплекса засоленных почв ограничено присутствием родов ЗяерЮтусев и Мгсготопоярого. Установлен диапазон значений концентрации соли (ЫаС1) и рН среды, пригодных для роста актиномицетов засоленных почв Выявлены особенности развития мицелия галоалхаяофильного стрептомицета на средах с различными значениями рН (7 и 9) и концентрациями солей (0,02% и 5%) Показано увеличение количества выделяемых из засоленных почв актиномицетов при использовании сред с повышенными концентрациями солей и высокими значениями рН. Впервые в засоленных почвах установлено развитие актиномицетного мицелия, длина которого достигает до 140 м/г почвы

Практическая значимость. Выявлены экологические ниши алкалофильных, галофильных и галоалкалофильных актиномицетов, что важно для расширения наших представлений о биоразнообразии микробного комплекса почв

Знание об особенностях распространения и жизнедеятельности галофильных, алкалофильных и галоалкалофильных актиномицетов могут представлять существенный интерес для биотехнологии и сельскохозяйственной микробиологии

Сведения, полученные в диссертационной работе, используются в лекциях по курсу "Биология почв" для студентов факультета почвоведения МГУ имени М В Ломоносова

Апробация работы. Основные положения работы доложены на заседании Московского общества естествоиспытателей природы (Москва, 2005), на X и XI Международных конференциях студентов и аспирантов по фундаментальным наукам "Ломоносов 2003" (Москва, 2003) и "Ломоносов 2005" (Москва, 2005), на конференции "Биотехнология, экология, охрана окружающей среды" (Москва, 2005), на школе-конференции "Актуальные аспекты современной микробиологии" (Москва, 2005), на Международной научной конференции "Экология и биология почв" (Ростов-на-Дону, 2005), на Международной научной конференции "Экология и биология почв проблемы диагностики и индикации" (Ростов-на-Дону, 2006), на заседании кафедры биологии почв факультета почвоведения МГУ имени М В Ломоносова

Публикации. Материалы проведенных исследований изложены в 9 печатных работах, в том числе в 3 статьях в реферируемых журналах

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора

литературы,_ разделов экспериментальной части, обсуждения, выводов и

списка цитируемой литературы

Работа изложена на _ страницах компьютерного текста, содержит _

иллюстраций, _таблиц Список литературы включает_наименований, из

них_на иностранных языках.

з

Объекты и методы исследования

Объектами исследования явились засоленные почвы солончаки, бурая полупустынная и бурая пустынно-степная, каштановая и серо-бурая почвы Почвенные образцы были отобраны на территории России и Монголии (табл 1)

Для выделения и дифференцированного учета актиномицетов использовали метод посева из разведений почвенных суспензий на плотные питательные среды и метод «рассыпки» почвенного мелкозема на поверхность плотной питательной среды Для выделения актиномицетов из засоленных почв использовали следующие среды: минеральный агар (Гаузе 1) (Гаузе и др, 1983) и среду с пропионатом натрия (Зенова, 2000), а также их модификации Модификации состояли в том, что в среде Гаузе 1 использовали соли MgCl2H NajSCU, а в середе с пропионатом натрия соли MgS04 и NaClB 5%-ной концентрации Для выделения и дифференцированного учета актиномицетов из содовых солончаков использовали селективную среду с высокой концентрацией соды (№гСОз Юг/л), рН 10 (Sato et al, 1983) В среды добавляли нистатин (50 мкг/мл) для ограничения роста грибов и налидихеовую кислоту (1,5 мкг/мл) для ограничения роста немицелиальных бактерий

Использовали среды со значениями рН 7,2, 7,8, 9,0, которые создавали и поддерживали с помощью фосфатной и фосфатно-цитратной буферной смеси (Методы общей бактериологии, 1983)

Проводили дифференцированный учет актиномицетов Для этого с помощью оптического микроскопа (х40) просматривали колонии актиномицетов на чашках с питательной средой, выявляли морфотипы, представители которых выделяли в чистую культуру на среде овсяный агар (Гаузе и др, 1983)

Актиномицеты, выделенные из солончаков, предварительно идентифицировали согласно "Определителю бактерий Берджи" (1997) по следующим морфологическим и хемотахсономическим признакам наличию или отсутствию фрагментации мицелия, образованию спор на воздушном и/или субстратном мицелии, присутствию в гидролизатах целых клеток LL - или

Таблица 1

Характеристика объектов исследования_

Название почвы Горизонт или слой, глубина взятия образца, см рНягО Характер и степень (% легко растворимых солей) засоления Район взятия образца

Солончак корково-пухлый образецы NsNs 1, 2,4,6(0-1) образцы № 3, 5 (3-8) 7,9 7,8 хлоридное, 1% дельта р Аму-Дарьи

Солончак корковый (соровый) образны N¿N'2 1,2, 3,4(0-3) 8,0 сульфатно-хлоридное, 6% и хлоридное Прикаспийская низменность, Северовосточное побережье Каспийского моря, п-ов Бузачи

образец 68, солевая корка образец 4 (0-4) 9,0 9,0 хлоридно-сульфашое, 6% с небольшим содержанием соды Бурятия, озеро Оронгойское, озеро Щучье

Солончак луговый пздроморфный разрез В-02 Ad П слой (0-8) Ш слой (25-38) IV слой (38-60) 7,0 6,5 7,0 7,2 хлоридное, 3% Астраханская обл. Волгоградский р-он, бугор Большой Барфон

разрез В-05 I слой (0-8) Е слой (8-14) Ш слой (14-24) IV слой (24-43) V спой (43-62) 7,2 7,2 7.1 7.2 7,1 хлоридное, 3% Тоже

образец 65, солевая корка образец 66 (1-6) 9,5 9,5 хлоридно-сульфашое, 6% с небольшим содержанием соды, Бурятия, территория пересыхающих соленых озер, озеро Сульфатное

Солончак пухлый образцы 1,2, 3,14,15,16,17, 18(0-5) 9,0 хлоридно-сульфашое, 5%, содовое Монголия, Убсу-Нурская котловина, пересыхающие соленые озера

Солончак содовый образцы №№ 9, 11,12,13 (0-5) 9,0 хлоридно-сульфашое, 5%, содовое Монголия, Убсу-Нурская котловина, пересыхающие соленые озера

Каштановая образец №№ 63, 64 (0-6) 9,0 хлоридно-сульфашое, 2%, присутствие карбонатов Бурятия, территория пересыхающих соленых озер, озеро Оронгойское

Бурая полупустынная Ad (0-7) В1 (7-22) Bsol (22-57) В2(57-87) ВЗ(87-110) 7,3 7,3 7,0 7,5 8,2 хлоридное, 3% Прикаспийская низменность, Астраханская обл. Волгоградский р-он, бугор Большой Барфон

Бурая пустынно-степная Ad (0-10) В1 (10-35) Вса (35-50) ВСса (50-60) Сел (60-70) Сса (70-110) 9,0 9.0 8,9 8,9 9.1 9,1 хлоридно-сульфашое, 1% с высоким: содержанием карбонатов по всему профилю Монголия ЮжныйГоби, Булган сомон

Серо-бурая образец №№ 113, 207 (2-6) 8,0 хлоридно-сульфашое, 1% Монголия Южный Гоби,

мезо - изомера диаминопимелиновой кислоты (ДАПк) и присутствие или отсутствие дифференцирующих Сахаров

Для видовой идентификации стрепгомицетов использовали фенотипические и генетические показатели согласно определителям бактерий (Bergeys Manual, 1989, Гаузе и др, 1983)

Оптимальные и ограничительные для роста культур стрепгомицетов, выделенных из засоленных почв, концешрации NaCl и значения рН среды определяли по величине радиальной скорости роста колоний, которую расчитывали как увеличение диаметра колоний стрепгомицетов за определенный промежуток времени на плотной питательной среде Гаузе 1 с различными концентрациями соли NaCl (1-8%, шаг 1%) и на среде с различными значениями рН (4,0-10,0, шаг 1,0)

Для расчета радиальной скорости роста использовали следующую формулу

Kr = (d2-d1)/(t2-t1),

где di и d2 - диаметр колоний (мм) в начальный (ti) и конечный (t2) моменты времени измерения соответственно (сут) Измерения проводили в 20 - ти кратной повторности

Наблюдение за динамикой длины мицелия актиномицетов проводили методом люминесцентной микроскопии в ходе сукцессии, инициированной увлажнением воздушно-сухих образцов бурой полупустынной почвы до 60% от полной влагоемкости.

Для расчета длины мицелия использовали следующую формулу М=(4ап/р)хЮ10, где М - длина мицелия актиномицетов в 1 г почвы, а - средняя длина мицелия в поле зрения люминесцентного микроскопа, п - разведение наносимой суспензии, р - площадь поля зрения

При расчете биомассы учитывали, что 1 мегр актиномицетного мицелия диаметром 0,5 мм имеет биомассу 3,9х10"8 (Методы почвенной микробиологии и биохимии, 1991)

б

Наблюдение за развитием галоалкалофильного стрептомицета 81герЮтусе.ч р1ипсо!огевсет шг 2 проводили на средах с различными значениями рН (7,2 и 9,0) и различными концентрациями соли, исследуя под микроскопом мицелий и спорьг Покровные стекла помещали под углом к поверхности агаризованной среды с растущей культурой (Определитель бактерий Берджи, 1997) После инкубации покровные стекла вынимали и рассматривали в оптическом микроскопе (х900) Описание культур проводили на 3-е, б-е и 9-е сутки опыта Использовали среду Гаузе 1 со значениями рН 7,2 и 9,0 концентрациями солей М{*С1г и ЫагЭОд 0,02% и 5%

Результаты и обсуждение 1. Численность и таксономический состав актиномицетных комплексов

засоленных почв

Численность стрептомицетов, выделяемых из различных засоленных почв, колеблется от сотен колониеобразующих единиц (КОБ) до тысяч и десятков тысяч КОЕ/г почвы в зависимости от типа почвы и горизонта (рис 1)

Наименьшее количество стрептомицетов обнаружено в малогумусовом корковом (соровом) солончаке Численность стрептомицетов в этой почве не превышает сотен КОЕ/г почвы, что на 1-3 порядка уступает количеству актиномицетов, выделяемых из дерново-подзолистых почв и чернозема соответственно

Наибольшее количество стрептомицетов обнаружено в бурой пустынно-степной почве, луговом гидроморфном солончаке и корковом (соровом) солончаке, образцы которого были отобраны в Бурятии на территории пересохших соляных озер Численность стрептомицетов в этих почвах составляет тысячи КОЕ/г почвы, что сопоставимо с численностью стрептомицетов в дерново-подзолистой почве Более высокое, по сравнению с другими исследованными почвами количество актиномицетов, обусловлено более высоким содержанием гумуса в

Рис- 1, Численность стрептомицетов, выделяемых из засоленных леШ на срыс е различными концентрациями солей

■ с 0,02%-ной концентрацией с алей М£СЬиТ\а2ЯОл □ 5%-ной концентрацией смей М^СЬ и Ка;,й04, N - КОЕ/г плчвы

Корково-пухшй солончак (А), корковый (соровый) солончак (Б, В), солончак луговый гидроморфнмй С!'. Д, Е), солончак пухлый (Ж), го^дачак содсьый (3), хаштааоаая тточк» (И), бурая полупустынная почва (К), бурая цустъшпо-стиши почва (Л), серо-бурая почва (М)

этих почвах и значительным количеством карбонатов по всему профилю в бурой пустынно-степной почве Известно, что актиномицеты являются кальцефилами (Звягинцев, Зенова, 2001)

Численность стрептомицетов, выделяемых из засоленных почв, возрастает с увеличением концентрации солей в среде выделения На среде с 5%-ными концентрациями солей М^Ь и Ка2804 количество мицелиальных прокариот, как цравило, было большим, чем на традиционно используемой среде Гаузе 1 (с 0,02%-ной концентрацией солей) (рис 1)

Однако увеличение концентрации солей в среде выделения до 10% не дало возможности выделить стрептомицеты из засоленных почв

Численность стрептомицетов, выделяющихся из содовых солончаков, значительно возрастала при использовании среды с содержанием соды (1%) и высоким значением рН (10,0), и на порядок превышала численность стрептомицетов, вырастающих на среде Гаузе 1 и на среде Гаузе 1 модифицированной (рис 2)

Для сравнения, при выделении стрептомицетов из чернозема обыкновенного наблюдаем уменьшение численности актиномицетов на 2 порядка на среде Гаузе 1 с 5%-ыми концентрациями солей МяС1г и ШгБО« по сравнению с традиционно используемой средой Гаузе 1 (от сотен тысяч КОЕ/г до тысяч КОЕ/г) (рис 3)

Все изученные нами засоленные почвы имели рН выше 1, за исключением солончака лугового гадроморфного, образцы которого отобраны из разреза В02 на Большом Барфоне (таб 1) Высокое значение рН объясняется присутствием карбонатов или соды в исследованных почвах

При повышении значения рН среды до рН 9 численность мицелиальных прокариот, выделяемых из засоленных почв, как правило, увеличивалась по сравнению с количеством стрептомицетов, выявляемых на среде с аналогичным содержанием солей и значением рН 7,2 Исключение составлял солончак луговый

Рис. 2. Численность стрептомщсгов выделенных из содовых солончаков на следах с различными когщентрадияик солей: среда Гаузе 1 с 0,02%-ой концентрацией солей

МеСЬ и " среда Гаузе ] с 3%-ой кошгешрацней сшей МеС1; и Ыа^ЭОд, среда

с 1%-иым содержанием соды

А

1д КОЕ/г

почеы

% соли

рис. 3 Численность стрегтго\Ш|етон, вьЩеденных из чернозема обыкновенного на средах: 1с 0,02%-ной концентрацией солей, 2-е 5%-ной концентрацией солей

Рис. 4. Числен!]ость стрептомицетов, выделяемых из засоленных ПОЧв на среды с различными значениями рН

Щ рН7Д Г] рН 9, М - КОН/г почва

Корково-пухлый солончак (А), корковый (соровый) солончак (К. В), солончак луговый гидроморфный(Г, Д. Е), солончак пухлый ГЖ), солончак содовый (3), кашановая почва (И), бурая полупустынная почва (К), бурая пустынно-степная почва (Л), серо-бурая почва (М)

_

гидроморфный (образцы разреза В02, отобранные на бугре Большой Барфон (табл 1)), где на среде срН9 не происходит увеличение количества выделяемых стрептомицетов, что объясняется нейтральной реакцией среды в этой почве (рис 4,

Г)

Использовали следующие коэффициенты коэффициент галофильности (Кы), рассчитываемый как соотношение численности стрептомицетов, вырастающих на среде Гаузе 1 с повышенными концентрациями солей (5%) и количества стрептомицетов, вырастающих на традиционной среде Гаузе 1, коэффициент алкалофильности (К^), рассчитывался как соотношение численности стрептомицетов, вырастающих на среде с повышенным значением рН (9,0) и количества стрептомицетов, вырастающих на среде с рН 7,0 Кы и Кл стрептомицетных комплексов почти всех исследованных образцов засоленных почв превышали единицу

Таким образом, использование селективных сред с высокой концешрацией солей и высоким значением рН, соответствующим почвенным условиям, позволило выделить акгиномицеты из засоленных почв в количестве в 10 раз большем, чем при использовании традиционных сред, и обнаружить в засоленных почвах специфические комплексы алкалофильных и галофильных актиномицетов

Численность актиномицетов в засоленных почвах оказалась на 1-3 порядка меньше по сравнению с количеством актиномицетов, выявленном в зональных типах почв

Использование метода множественной регрессии дало возможность установить связь между зависимой переменной (численность стрептомиетов) и независимыми переменными (значения концентрации солей и значения рН в среде выделения) (рис 5)

Исследование таксономичекого состава актиномицетного комплекса засоленных почв выявило присутствие только двух родов актиномицетов

3&щ>1огпусе1 и Мсготопозрога. На среде с гтрошюнатом натрия: с 5%-ным содержанием солей преобладали представители рода ЗИ'врТотуСЩ а на традиционной среде с пропиодатом натрий (с 0,02% - ной концентрацией солей) представители родов 51герюптусех и Мкгогпопозрога находились примерно в равных долях (рис. 6).

зо О-Ног С-л-.1 .-.--:<:- кс*1 .Г-::\

% садя и среде

Рис. Зависимость численности стрепгомицетов, выделенных ю засоленных почв, от концентрации солей ирН

Таким образом, в ксспедсваккых засоленных почвах выя: исутстЕие

актиномицегых родов Зггершпусе* и Мсготоповрога, причем представители рода ШсгбШогюарогЦ проявляли меньшую, чем стрептомицетьг, приспособленность к высокой концентрации соли.

Видовое разнообразие етрептомицетов В засоленных почвах более ограничено по сравнению с основными типами почв.

С увеличением концентрации соли и значения рП в среде выделения увеличивается видовое разнообразие актиномицстного комплекса.

На примере бурой пустынно-степной почвы показано, что при увеличений концентраций солей и рН и среде выделения разнообразие (Ярептомицетного комплекса расширяется: обнаруживаются представители видов секции Козеи.ч и

чаще встречаются виды, принадлежащие секции 1гпрегГесШ£ (рис. 7). Во всех почвах доминируют виды секции Стегеив серии СЬгопк^епез

с рада

01,ЩЙЛЕ>НИ*

РОД1.1 ЯХТ И И О Н Н Ц В ГО R

Рис. 6. Численность (1а, И) равных родов акгиношщетов, выделенных из бурой пустынно-степной почвы на среде с пропиокатим нагрия с разной концентрацией солей (МеЗОг и ЫаС1) 1-Зггер!отусе г, 2- Шсготопозрога, ] - среда с пропни и атом натрия с 0,02% - ной концентрацией солей, II - среда с пропионатом натрия с 5%-иой концентрацией солей, N - КОЕ/г почвы

Рис. 7 Видовое разнообразие стрептомицетного комплекса {%), выделяемого из бурой пустынно-степной почвы на среде с разными концентрациями сшей (MgCb и NhjSCU) и значениями рН, I - соли 0,02%, рН 9; II - соли 5%. рН 7,2, III - сади 5%, рН 9, 1 - Cmereus Chromogenes 2- С. AcliromoeeiKs 3 - Rosens 4 - Imp ertec tils

2. Диапазоны значений концентраций солей и значений рН, пригодных для роста стрептомицетов, выделенных из засоленных почв

В результате проведенных исследований собрана коллекция культур стрептомицетов, выделенных из засоленных почв на средах с различными концентрациями солей и различными значениями рН.

С помощью расчета радиальной скорости роста классифицировали культуры по их рН потребностям и потребностям в определенной концентрации соли (рис 8) Выделенные культуры были разделены на три группы У умеренных галофилов оптимум роста наблюдается при 4-5 %-ной концентрации соли в среде, границы роста - в области от 1 до 8 % У слабых галофилов - оптимум роста при 2-3 %-ной концентрации соли, границы роста - в области от 1 до 7 % У негалофилов оптимум

роста отмечен при 0,5%-ной концентрации соли, границы роста в области от ОД до 4 %

Рис 8 Диапазон концентрации NaCl, пригодных для роста умеренных галофильных

(1,2,3,4,5) слабых галофильных (6,7) и негалофильных(8,9) стрептомицетов 1 - Streptomyces chrysomallus шг 3,2 - S Candidus шг 2,3 - S chrysomallus шт 4, 4 - S

chrysomallus шт 5,5-5 viridogenes шт 1,6-5 xanlholiücus шт 12-1,

7-S chromofiiscusнгг 12-2, 8 -S xanthocidicus шт 10-2, 9-S aburaviensis шт 10-3

Культуры, выделенные на средах с разными значениями рН, были разделены на две группы нейтрофильные стрептомицеты имеют наибольшую радиальную скорость роста при рН около 7,0, диапазон значений рН, пригодных для роста культур, лежит в пределах от рН 5,0 до 8 Культуры второй группы оказались алкалофильными, диапазон значений рН, пригодных для роста, наблюдается в пределах рН от б до 12, а оптимум - в области значения рН 8,0-9,0 (рис 9)

Умеренные галофильные и алкалофильные культуры выделены на средах с 5% - ными концентрациями солей и рН 8 - 9 Таким образом, оптимальные для роста стрептомицетов значения концентрации соли и значения рН коррелируют с концентрацией соли и значением рН в среде выделения и почве

В коллекции культур, выделенных из засоленных почв, обнаружено несколько культур, которые можно назвать галоалкалофильными. Оптимальный рост исследованных культур стрептомицетов наблюдался в области концентрации соли 5% и значении рН 9 (рис 10)

среды

Рис 9 Диапазон значений pH среды, пригодных для роста алкалофильных стрептомицетов (1,2) и нейтрофильного стрепгомицета (3)1- Streptomyces Candidus шт б, 2 - S chrysomallus шт 4, 3 - S chromofiiscus шг 12-2

Показано, что при многократном пересеве галоалкалофильных культур на среду с малой концентрацией соли и низким значением pH оптимальная величина радиальной скорости роста не изменяется и отмечена, по прежнему, при концентрации соли 5% и pH около 8 (рис 11)

Рис. 10 Диапазоны концентрации сшш и значений рН, ожймалЬНых для роста галоалкалофШ!ьных стрспт£>мицетгов

Способность культур расти на среде с повышенной концентрацией соли и повышенным значением рН является генетичесш закрепленным признаком.

Таким образом, Ю исследованных засоленных почв были выделены умеренные, слабые га.тофильные и негало фи льные, нейтрофилыше, ал&алофильные и гадоаДОкалофштышс стреггтомицеты.

3. Динамики численности и биомассы акпШемицетов в ходе сукцессии,

инициированной увлажнением засоленной почвы Плотность популяции актин ом ицетов (1£ КОЕ/г почвы) изменялась в ходе сукцессии, инициированной увлажнением засоленной почвы, следующим образам. Численность аетиномицетов в начальный момент опыта составила тысячи на 1 г почвы. Затем наблюдается уменьшение плотности популяции актином ицетов до сотен КОЕ'Г почвы к 8-м суткам опыта. Небольшое недостоверное возрастание плотности популяции (в пределах порядка) отмечено в промежуточный период вплоть до 20-х суток опыта с последующей стабилизацией или небольшим увеличением плотности к 35 суткам.

А

Б

Рис 11 Оптимальные и ограничительные для роста акганомицетов концентрации соли (А, В) и значения рН среды (Б, Г) для роста культур галоалкалофильной культуры 5Ь-ерЬтусев р1ипсо1оге$сеп5 шт 2 после многократного культивирования на среде с концентрацией солей 5% (А,1) и культивирования на среде с концентрацией солей 0,02% (А,2), после многократного культивирования на средей с рН 8 (БД) и после многократного культивирования на среде с рН 7,2 (Б,2) и нейгрофильной культуры 5 аЬигстепви шт 10-3 после культивирования на среде с концентрацией солей 5% (ВД) и после культивирования на среде с концентрацией соли 0,02% (В,2), после многократного культивирования на среде с рН 9,0 (ГД) и после многократного культивирования на среде с рН 7,2 (Г,2)

Динамика длины мицелия актиномицетов диаметрально противоположно динамике численности Длина мицелия в начальный момент опыта составляет 40 м/г, затем начинает возрастать и увеличивается в 4 раза, достигая максимума к 15 суткам (140 м/г почвы), далее в ходе опыта отмечена стабилизация длины актиномицешого мицелия

Величина биомассы актиномицетов мицелия в начале опыта составляет 18

мкг/г почеы. Затем в ходе инициированное микробной сукцессии наблюдается увеличение биомассы актиномицетов в 4 pa;ia. Максимум накопления биомассы отмечен н£ 17-е сутки опыта до 60 мкг/г с последующей стабилизацией вплоть до 35 суткам опыта на уровне 5 мкг/г почвы (рис. 12).

Проведенные опыты по наблюдению за динамикой длины мицелия и биомассы актиномицетов свидетельствуют о том, что актиномицеты в бурой полупустынной почве активно растут. Выявлено присутствие мицелия длина которого достигает 140 м/г почвы.

Динамика численности представителей рода Strepiomyces в ходе сукцессии, инициированной увлажнением бурой полупустынно-степной почвы, отличается от динамики численности представителей рода Micromonospora. Количество стрегггомицетов, как правило, больше на среде с высокой концентрацией солсй в ранние сроки опыта по сравнению с численностью на традиционной среде выделешга (рис. 13, А), в то время как количество микром он ос пор выше на традиционной среде, чем на среде с повышенным содержанием солей (рис. ] 3, Б). Отмеченная закономерность подтверждает' наш вывод о меньшей приспособленности микромоноспор к высоким концентрациям солей.

сутки

Рис. 12. Динамики биомассы актином и летав в ходе сукцессии, инициированной увлажнением бурой полупустынной почвы

А Б

18 N

4 ■

3,5 32,52. 151. 0,5-О-

Рис 13 Динамака численности стрептомицетов (А) и микромоноспор (Б) в ходе сукцессии, иницированной увлажнением бурой полупустынной почвы ц численность акгиномицетов на среде с 5% солей (М^вОд и КаС1) □ численность акпшомицетов на среде с 0,02% солей (г^ЭОд и НаС1), N - КОЕ/г почвы

4. Наблюдение за морфологической дифференцировкой мицелия галоалкалофильного стрептомицета

У галоалкалофильного штамма Бгггрготусе^ р1ипсо1оге$сет шт 2 на нейтральной среде с 0,02%-ными концентрациями солей уже к третьим суткам роста формируются колонии с развитым субстратным, воздушным мицелием и длинными прямыми спороносцами К шестым суткам роста споры освобождаются из цепочек

При росте на нейтральной среде с 5%-ным содержанием солей (М^12, №2804) к третьим суткам отмечено формирование субстратного и воздушного мицелия Размер колоний галоалкалофильного стрептомицета на этой среде оказался большим, чем на нейтральной среде с 0,02%-ными концентрациями солей, во все сроки наблюдения Спороносцы формируются только к шестым суткам роста культуры, на 9-е сутки отмечено освобождение спор

При культивировании галоалкалофильного штамма на щелочной среде (рН 9,0) и содержанием солей (¡\lgCL2, ИагБОд) 5% к третьим суткам роста формируются колонии с развитым субстратным и воздушным мицелием,

ШШ

Ш ШЖ

т ш т 1ш

17 25 35

Сутки

^^ р ^^

г р г

т шш

7 17 25 35 сутки

формирование спороносцев со спорами отмечено на шестые сутки, на девятые сутки - освобождение спор Размер колоний на этой среде оказался большим, чем на нейтральной среде с 0,02%-ным содржанием солей и такой же, как на нейтральной среде с 5%-ым содержанием солей во все сроки наблюдения

Особенностью развитая галоалкалофильного стрептомицета является удлинение стадий жизненного цикла, которое выражается в задержке спорообразования на средах с повышенной концентрацией солей Галоалкалофильный стрептомицет характеризуется высокой радиальной скоростью роста колоний (скорость колонизации субстрата) на среде с содержанием соли 5%, по сравнению с этим показателем на среде с 0,02%-ым содержанием сопи

Можно предположить, что галоалкалофильные стрептомицеты обладают особым механизмом адаптации к условиям высокого содержания солей Механизм проявляется в их способности интенсивнее колонизировать среду с содержанием соли 5%, чем среду с содержанием соли 0,02%

Обладание этим механизмом позволяет галоалкалофильным формам снижать конкуренцию негалофильных стрепгомицетов за счет более быстрого освоения субстрата

Способность культур расти на среде с повышенными концентрациями соли и значением рН является генетически закрепленным признаком

Выводы

1 Разработаны и подобраны методические приемы для выделения актиномицетов из засоленных почв, позволяющие увеличить количество изолируемых актиномицетов в 2-10 раз и состоящие в использовании среды с концентрациями солей и значениями рН, соответствующими экологическим условиям местообитания

2 Установлено, что численность стрептомицетов в засоленных почвах составляет от сотен до тысяч и десятков тысяч КОЕ/г в зависимости от типа почвы и горизонта, что 1-3 порядка меньше, чем в почвах зональных типов

3 Впервые показано увеличение количества выделяемых из засоленных почв стрептомицетов при использовании среды выделения с повышенными концентрациями солей и высокими значениями рН Выявлено присутствие в засоленных почвах умеренных, слабых галофильных и негалофильных, нейтрофильных, алкалофильных и галоалкалофильных стрептомицетов

4 Разнообразие актиномицетного комплекса засоленных почв ограниченно присутствием родов Streptomyces и Micromonospora, причем численность стрептомицетов увеличивается с увеличением концентрации соли в среде выделения до 5%, а количество микромоноспор при 5% уменьшается

5 Установлено, что видовой состав стрепгомицетного комплекса засоленных почв ограничен видами, принадлежащими секции Cinereus сериям Chromo genes и Achromogenes, секциям Roseus, Imperfectas Доминируют виды принадлежащие к секции Cinereus серии Chromogenes

6 Впервые с помощью метода люминесцентной микроскопии установлен рост актиномицетов в засоленных почвах, выявлено присутствие мицелия, длина которого достигает до 140 м/г почвы

Работы опубликованные по теме диссертации

1 Оборотов Г В Актиномицеты засоленных почв // Тезисы докладов X международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам "Ломоносов 2003" M -2003 С 97

2 Зенова Г M, Оборотов Г В, Звягинцев Д Г Солончаки - местообитание галофильных и алкалофильных стрептомицетов// Почвоведение 2005 № 11, С 1341-1344

3 Селянин В В , Оборотов Г В , Зенова Г М., Звягинцев Д Г, Почвенные алкалофильные актиномицеты // Микробиология 2005 Том 74 № 6, С 1-6

4 Оборотов Г В, Зенова Г M Акгиномицетное население засоленных корково-пухлых солончаков // Тезисы конференции "Биотехнология, экология, охрана окружающий среды" M 2005 С 213

5 Оборотов Г В Стрептомицеты засоленных почв // Тезисы всероссийской молодежной школы-конференции "Актуальные аспекты современный микробиологии" M 2005 С 46

6 Зенова Г M, Оборотов Г В Галофильные и алкалофильные стрептомицеты засоленных почв// Доклады московского общества испытателей природы M 2005 Т 36, С 51

7 Оборотов Г В Актиномицеты засоленных почв // Тезисы международной научной конференции "Экология и биология почв" Ростов-на-Дону-2006 С 363

8 Оборотов Г В Актиномицетное население засоленных почв // Тезисы международной научной конференции "Экология и биология почв проблемы диагностики" Ростов-на-Дону 2006 С 361-362

9 Норовсурен Ж, Оборотов Г В , Зенова Г M, Алиев Р А, Звягинцев Д Г Галоалкалотолерантные актиномицеты в почвах пустынных степей Монголии // Известия РАН 2007 № 4, С 501 - 507

Подписано в печать 07 09 2007 г Исполнено 07 09 2007 г Печать трафаретная

Заказ № 674 Тираж 100экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (495) 975-78-56 www autoreferat ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Оборотов, Геннадий Вячеславович

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Экология актиномицетов.

1.2. Влияние солевого режима почв на развитие актиномицетов.

1.3. Бактериальное население засоленных почв.

1.4. Галофильные бактерии.

1.5. Механизмы адаптации бактерий к высокому содержанию солей.

1.6. Алкалофильные бактерии.

1.7. Механизм адаптации бактерий к высокому значению рН.

1.8. Алкалофильные актиномицеты: выделение из почвы, таксономическое положение и образование биологически активных веществ.

Глава 2. Объекты и методы исследования

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

Глава 3. Результаты исследований

3.1. Численность и таксономический состав актиномицетных комплексов засоленных почв.

3.2. Диапазоны значений концентраций соли и значений рН, пригодных для роста стрептомицетов, выделенных из засоленных почв.

3.3. Динамики численности и биомассы актиномицетов в ходе сукцессии, инициированной увлажнением засоленной почвы.

3.4. Наблюдение за морфологической дифференцировкой мицелия галоалкалофильного стрептомицета.

Обсуждение.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Актиномицеты засоленных почв"

Актуальность проблемы. Засоленные почвы - это большая группа почв разного генезиса и свойств, объединенных одним диагностическим признаком - наличием в профиле легкорастворимых солей в количестве, ухудшающим плодородие почв и отрицательно влияющим на рост и развитие большинства растений (Засоленные почвы России, 2006). Эти почвы представляют собой своеобразные природные экосистемы, в которых высокие концентрации солей и недостаток влаги создают экстремальные условия для существования живых организмов, здесь формируются специфические микробные сообщества.

В микробиологических исследованиях засоленных почв большое внимание уделялось галофильным, осмотолерантным и алкалотолерантным микроорганизмам. Подробно исследованы разнообразие и функциональные проявления галоалкалофильных и галоалкалотолерантных прокариот (Заварзин и др., 1999). Среди сведений о бактериальном населении засоленных местообитаний находим лишь единичные сведения о мицелиальных бактериях (Калакуцкий, Агре, 1977; Gochnauer et al., 1975; The Prokaryotes, 1991).

Среди актиномицетов обнаружены галофильные формы: Saccharopolyspora halophila (Gochnauuer et al., 1975), Actinopolyspora, Nocardiopsis (AL-Tia and Ruan, 2001), Prauserella halophila и P. alba (Li et al., 2003), способные расти на средах, содержащих 10-20% или даже 15-25% NaCl.

Для засоленных почв нередко характерны высокие значения рН,

2+особенно, если засоление обусловлено содержанием в почве ионов Na , Са и л

СОз *. Поэтому в этих почвах можно ожидать развитие не только галофильных, но и алкалофильных микроорганизмов, в том числе и актиномицетов (Звягинцев, Зенова, 2001).

Целью работы, является экологическая характеристика комплекса актиномицетов в засоленных почвах для расширения представлений о разнообразии микробного мира и выявления культур актиномицетов, перспективных в отношении биотехнологии.

Задачи исследования

1) Разработка и подбор методических приемов для учета и выделения актиномицеов из засоленных почв.

2) Сравнительная характеристика актиномицетных комплексов различных засоленных почв.

3) Оценка радиальной скорости роста галофильных, алкалофильных и галоалкалофильных актиномицетов при различных концентрациях NaCl и значениях рН среды для построения кривых толерантности культур в отношении содержания соли и рН среды.

4) Исследование динамики численности и биомассы актиномицетов в ходе сукцессии, инициированной увлажнением засоленной почвы.

5) Изучение особенностей дифференцировки мицелия галоалкалофильных актиномицетов на средах с различными концентрациями солей и значениями рН.

Научная новизна. Впервые установлены закономерности распространения и таксономическая структура комплексов галофильных, алкалофильных и галоалкалофильных актиномицетов в широком ряду засоленных почв. Установлено, что разнообразие актиномицетного комплекса засоленных почв ограничено присутствием родов Streptomyces и Micromonospora. Установлен диапазон значений концентрации соли (NaCl) и рН среды, пригодных для роста актиномицетов засоленных почв. Выявлены особенности развития мицелия галоалкалофильного стрептомицета на средах с различными значениями рН (7 и 9) и концентрациями солей (0,02% и 5%). Показано увеличение количества выделяемых из засоленных почв актиномицетов при использовании сред с повышенными концентрациями солей и высокими значениями рН. Впервые в засоленных почвах установлено развитие актиномицетного мицелия, длина которого достигает до 140 м/г почвы.

Практическая значимость. Выявлены экологические ниши алкалофильных, галофильных и галоалкалофильных актиномицетов, что важно для расширения наших представлений о биоразнообразии микробного комплекса почв.

Знание об особенностях распространения и жизнедеятельности галофильных, алкалофильных и галоалкалофильных актиномицетов могут представлять существенный интерес для биотехнологии и сельскохозяйственной микробиологии.

Сведения, полученные в диссертационной работе, используются в лекциях по курсу "Биология почв" для студентов факультета почвоведения МГУ имени М. В. Ломоносова.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на заседании Московского общества естествоиспытателей природы (Москва, 2005), на X и XI Международных конференциях студентов и аспирантов по фундаментальным наукам "Ломоносов 2003" (Москва, 2003) и "Ломоносов 2005" (Москва, 2005), на конференции "Биотехнология, экология, охрана окружающей среды" (Москва, 2005), на школе-конференции "Актуальные аспекты современной микробиологии" (Москва, 2005), на Международной научной конференции "Экология и биология почв" (Ростов-на-Дону, 2005), на Международной научной конференции "Экология и биология почв: проблемы диагностики и индикации" (Ростов-на-Дону, 2006), на заседании кафедры биологии почв факультета почвоведения МГУ имени М.В. Ломоносова.

Публикации. Материалы проведенных исследований изложены в 9 печатных работах, в том числе в 3 статьях в реферируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения,

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Оборотов, Геннадий Вячеславович

Выводы

1. Разработаны и подобраны методические приемы для выделения стрептомицетов из засоленных почв, позволяющие увеличить количество изолируемых актиномицетов в 2-10 раз и состоящие в использовании среды с концентрациями солей и значениями рН, соответствующими экологическим условиям местообитания.

2. Установлено, что численность стрептомицетов в засоленных почвах составляет от сотен до тысяч и десятков тысяч КОЕ/г в зависимости от типа почвы и горизонта, что 1-3 порядка меньше, чем в почвах основных типов.

3. Впервые показано увеличение количества выделяемых из засоленных почв стрептомицетов при использовании среды выделения с повышенными концентрациями солей и высокими значениями рН. Выявлено присутствие в засоленных почвах умеренных, слабых галофильных и негалофильных, нейтрофильных, алкалофильных и галоалкалофильных стрептомицетов.

4. Разнообразие актиномицетного комплекса засоленных почв ограниченно присутствием родов Streptomyces и Micromonospora, причем численность стрептомицетов увеличивается с увеличением концентрации соли в среде выделения до 5%, а количество микромоноспор - уменьшается.

5. Установлено, что видовой состав стрептомицетного комплекса засоленных почв ограничен видами, принадлежащими секции Cinereus сериям Chromogenes и Achromogenes, секциям Roseus, Irnperfectus. Доминируют виды, принадлежащие к секции Cinereus серии Chromogenes.

6. Впервые с помощью метода люминесцентной микроскопии установлен рост актиномицетов в засоленных почвах, выявлено присутствие мицелия, длина которого достигает до 140 м/г почвы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Оборотов, Геннадий Вячеславович, Москва

1. Агре Н. С. Систематика термофильных актиномицетов. Пущино, 1986. 130с.

2. Бабьева И. П. Зенова. Г. М. Биология почв. М.: Изд-во МГУ 1989. 336с.

3. Гаузе Г. Ф., Преображенская Т.П., Свешникова М. А., Терехова JI. П., Максимова Т. С. Определитель актиномицетов. М.: Наука. 1983. 245с.

4. Гиляров A.M. Популяционная экология. М.: Изд-во МГУ. 1987.319с.

5. Гусев М. В., Минеева J1. А., Микробиология. М.: Изд-во МГУ. 1992. 461с.

6. Джиллер П. Структура сообществ и экологические ниши. М.: «Мир». 1988. 184с.

7. Добровольская Т. Г. Структура бактериальных сообществ почв. М.: "Академкнига". 2002. 281с.

8. Доржготова Д. Почвы Монголии (генезис, систематика, география, ресурсы, использование). Автореф. дисс.д.б.н. Москва. МГУ 1992. 340с.

9. Жизнь микробов в экстремальных условиях. Под ред. Д. Кашнера М.: Изд-во Мир. 1981. 519с.

10. Заварзин Г.А. Лекции по природоведческой микробиологии. М.: Наука. 2003. 84-86с.

11. Заварзин. Г.А., Жилина Т.Н., Кевбрин В.В. Алкалофильное мткробное сообщество и его функциональное разнообразие// Микробиология, 1999, Т. 68. С.579 599.

12. Звягинцев Д.Г., Зенова Г. М. Экология актиномицетов. М.: ГЕОС, 2001.257с.

13. Звягинцев Д.Г., Зенова Г.М., Судницин И.И., Дорошенко Е.А. Способность почвенных актиномицетов развиваться при экстремально низкой влажности // ДАН. 2005. Т.405. № 5 С. 702 704.

14. Звягинцев Д.Г. Почва и микроорганизмы М.: Издательство московского университета. 1987. 255с.17.3вягинцева И.С. Галобактерии // Успехи микробиологии. 1989. В.23.С. 112-137.

15. Зенова Г. М. Почвенные актиномицеты. М.: Изд-во МГУ. 1992. 78с.

16. Зенова Г.М. Актиномицеты в наземных экосистемах. Автореферат докт. дис. М.: МГУ. 1998. 56 с.

17. Зенова Г. М. Почвенные актиномицеты редких родов. М.: Изд-во МГУ. 2000.81с.

18. Зенова Г.М. Закалюкина. Ю.В. Звягинцев. Д.Г. Ацидотолерантные актиномицеты в почвах.// Почвоведение. 2000. №9. С 1114-1116.

19. Зенова Г.М., Калакуцкая А.Н. Характеристика водорослевого и бактериального комплекса альго-бактериальных ценозов навыходах карбонатных пород. // Микробиология, 1993. Т.62 B.l С.156-162 .

20. Зенова Г.М., Михайлова Н.В., Звягинцев Д.Г. Диагностикапопуляций олигоспоровых актиномицетов в черноземе.// Микробиология. 2000. № 1. С. 127-131.

21. Калакуцкий JI.B., Агре Н.С. Развитие актиномицетов. М.: Наука. 1977. 287с.

22. Калакуцкий JI.B. Зенова Г.М. Экология актиномицетов.// Успехи микробиологии. 1984. В.19. С 203-223.

23. Ковда. В.А. Происхождение и режим засоленных почв. М.: Изд-во АН СССР. Т 1. 1982.403 с.

24. Ковда. В. А. Солончаки и солонцы. М. Изд. АН СССР. 1973. 368с.

25. Ковда. В. А. Розанов. Б.Г. Почвоведение. М.: Т.2 1988. 368 с.

26. Кожевин П. А. Микробные популяции в природе. М.: Изд-во МГУ, 1989. 173с.

27. Красильников Н. А. Лучистые грибки и родственные им организмы. М.: Изд-во АН. 1938.56с.

28. Красильников Н.А. Лучистые грибки. М.: Наука. 1970. 328с.

29. Лихачев А.Н. Грибы рода Botrytis micheli. Автореф. Дисс. д.б.н. М.: МГУ. 2000. 38с.

30. Лихачева. А. А. Михайлова Н. В. Зенова. Г. М.Методы выявления в почвах актиномицетов редких родов // Вестник МГУ. Сер 17 почвоведение. 1998. № 1. С. 44-48.

31. Лысак Л.В., Трошин Д.В., Чернов И.Ю. Бактериальные сообщества солончаков // Микробиология. 1994. В. 4. С. 721-729.

32. Методы почвенной микробиологии и биохимии. М.: Изд-во МГУ, 1991. 303с.

33. Михайлова Н.В. Захарова. О.С. Зенова. Г.М. Олигоспоровые актиномицеты в почвах разных типов. Докл. РАСХН.1998. №6. С 13-16.

34. Ногина Н. А. Почвы Забайкалья. М.: Наука, 1964.204-207с.

35. Определитель бактерий Берджи. Под ред. Дж. Хоулта, М. Крига, П. Смита, Дж. Стейли и С. Уилльямса. М. Изд-во Мир, Т. 2 1997. 356 с.

36. Полянская Л.М. Микробная сукцессия в почве. Автореферат диссертации доктора биологических наук. М.: МГУ. 1996. 96с.

37. Преображенская Т. П. Лаврова Н. В. Ухолина Э. С. Нечаева Н. П. Выделение новых видов рода Actinomadura на селективных средах со стрептомицином и бруниомицином//Антибиотики. 1975. Т. 20. С 404-409.

38. Преображенская Т.П., Агре Н.С., Калакуцкий Л.В. Новые формы актиномицетов // Успехи микробиологии. 1978 № 13 С. 432 440.

39. Селянин В.В., Оборотов Г.В., Зенова Г.М., Звягинцев Д.Г. Почвенные алкалофильные актиномицеты // Микробиология 2005. Т. 74. № 6. С. 838 844.

40. Современная микробиология. Прокариоты. Т.2 / отв. редакторы Й. Ленглер., Г. Дрефе., Г. Шлегель. М.: Мир. 2005. 496с.

41. Терехов А.С. Экологические ниши почвенных актиномицетов. Дис.к.б.н. М.: МГУ. 2003. 126с.

42. Терехова Л. П, Таксономия актиномицетов и поиск продуцентов антибиотиков. Автореф. Дисс. докт.биол.наук. МЛ 992. 45с.

43. Троценко Ю. А., Доронина Н.А., Ли Ц.Д., Решетников А.С. Умеренные галоалкалофильные аэробные метилобактерии // Микробиология. 2007. Т. 76., № 3. С.293.

44. Шлегель. Г. Общая микробиология. М.: Мир. 1987. 566 с.

45. Шишов Л.Л., Пашкова Е.И., Засоленные почвы России. М.: ИКЦ. "Академкнига". 2006. 254с.

46. Al-Tai A.M., Ruan J.S. chemotaxonomy of halophilic actinomycetes // Feb. 2001. №1. P.23 30

47. Aoki H., Sakai H., Kohsaka M., Konomi T, a new monociclic b-laktam antibiotic. I. Discoveri, isolation and characterization. J. Antibiotics. 1979. 29. P.426-500.

48. Gochnauer. M. В., G. G. Leppard, P. Komaratat, Kates, T. Novitski et D. J. Kushner Isolation and characterization of Actinopolispora halophila,gen.et.sp. nov., an extremely halophilic actinomycete// Journal of Microbilogical. 1975. 21. P. 1500-1511.

49. Goodfellow M., Williams S.T. Ecology of actinomycetes // Ann. Rev. Microbiol. 1983. V. 37. P. 189-216.

50. Horikoshi K., Akiba T. Alkalophilic microorganisms. A new micro-bial world. Japan Scientific Frees. Tokyo. Japan. 1982. P 213.

51. Jadd Lez. G. S. Goodfeellow. M. Isolation and characterisation of al-kalophilic actinomycetes.//Actinomycetes. 1990. 1(2). P 60.

52. Korn-Wendish F., Kutzner H.J. The family of Streptomycetaceae.// The Prokaryotes. N.-Y. 1991. P 932-948.

53. Lehman, R.M., Colwell F.S., Ringelberg D.B., White D.C. Combined microbial community-level analyses for quality assurance of terrestrial subsurface cores // Journal of Microbilogical Methods.1995. 22. P. 263-281.

54. Li M.G., Li W.Z., Xu P., Cui X.L., Xu L.H., Jiang C.L., Nocardiohsis xinjiagensis sp. nov., a halophilic actinomycete isolated from a saline soil sample in China. Int. J. Syst. Evol.Microbiol. 2003 b. V. 53. P. 317 321.

55. Li W.J., Zhang Y.G., Zhang Y.Q., Tang S.K., Xu P., Xu L.H., Jang C.L., Streptomyces sodiiphilus s.nov., a novel alkaliphilic actinomycete // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2005. V. 55. P. 1329 1333.

56. Minas W., Bailey J. E., Duetz W. Streptomycetes in microcultures; Growth, production of secondary metabolites, and storage and retrieval in the 96-well format.// 2000, Antonie van Leeuwenhoek, V 78, P. 297-305.

57. Mikami. Y. Miyashita. K. Arai. T. Alcalophilic aktinomycetes // Aktinomycetes. 1985-1986. 19(3) P 176-191.

58. Nakanishi Т., Yamamoto T. Action and specificity of a Streptomyces alcalofilic proteinas. Agric. Biol. Chem. 1974. V39. P 2391-2397.

59. Ohta K. Kiyomiya A. The basis of the alkalophilic properti of a species of Bacillus. J. Gen. Microbiol. 1975. V37. P 259-266.

60. Taber W. A. Evidence for the existence of acid-sensitive actinomycetes in soil. Can. J. Microbiol. 1960. V6. P 534-514.

61. Tresner H.D., Hages J.S., Backes E.J., Differential tolerance of streptomycetes to sodium chloride as a taxonomic tool // Microbiol. 1968. V.16. P. 1134- 1136.

62. The Prokaryotes. A Handbook on the Biology of Bacteria. Ecophysiology, Isolation, Identification, Application / Eds. A. Balows, H.G. Truper, M. Dworkin et al. Springer Verlag. N.Y., Berlin ets. 1991. P. 921 - 1157.

63. Ventosa A., Nieto J.J., Oren A. Biology of moderately halophilic aerobic bacteria // Microbiol., Mol. Biol. Rev. 1998. V.62. P. 504 544.

64. Waksman S. A. The actinomyces classification, identification and description of genera and speesies. Vol. 2. The Williams A. Wilkins C. Baltimor 1961.P. 363.

65. Wang. L. Li-Shend. R. Classificashion of actinomycetes isolated from salin-alkali soil // 9-th Symposium of actinomycetes. M. 1994.

66. Williams S. T. Davies F. L. Studies on ecology of actinomycetes in soil// Soil Biology and Biochem. 1971. V3. P 187-195.

67. Sato M., Beppu T. and Arima K. Studies on antibiotics produced at higt alkaline pH // Agric. Biol. Chem. 1983.V.47.P.2019 2027.

68. Yan F., A.B.McBratney, L.Copeland. Functional substrate biodiversity of cultivated and uncultivated A horizons of vertisols in NW New South Wales.// 2000, Geoderma. 2000. V96. P. 321-343.

69. Yoshida K. Iguchi A. Murakami M. Aoki H. Japan Patent 151196. 977. cit Cit. Mikami etal. 1985.