Бесплатный автореферат и диссертация по географии на тему

Аккумуляция и метаболизм генотоксических соединений различными компонентами модифицированных экосистем

ВАК РФ 11.00.11, Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов

Автореферат диссертации по теме "Аккумуляция и метаболизм генотоксических соединений различными компонентами модифицированных экосистем"

Го V.

На правах рукописи

ИВАНОВА Екатерина Юрьевна

АККУМУЛЯЦИЯ И МЕТАБОЛИЗМ ГЕНОТОКСИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ РАЗЛИЧНЫМИ КОМПОНЕНТАМИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ЭКОСИСТЕМ.

11.00.11 - Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов (по биологическим наукам) 03.00.12 - Физиология растений

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-1995

Работа выполнена в лаборатории физико-химии биомембран и на кафедре физиологии растений Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Н.Д.Алехина, кандидат биологических наук, ст. науч. сотр. С. В. Котелевцев.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Тамбиев А.Х. кандидат биологических наук, ст. науч. сотр. Абилев С.К.

Ведущая организация: Институт озероведения РАН

Защита состоится_1995 г. в _часов на заседании специализированного совета Д.053.05.91 по присуждению ученой степени кандидата биологических наук Московского Государственного университета им. М.В. Ломоносова по адресу: 119899, Воробьевы горы, МГУ, Биологический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ.

Автореферат разослан_1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Ежегодно синтезируются и поступают в окружающую среду сотни новых веществ, не имеющих аналогов в природе. Эти соединениня - ксенобиотики не вступают ни в пластический , ни в энергетический обмен, а подвергаются в окружающих нас физических и биологических системах перераспределению, разложению и превращениям. Часто наблюдается избирательное накопление их в различных физических средах и, что особенно ваяно, в различных тканях растений и животных, где концентрация мутагенных и канцерогенных ксенобиотиков становится намного выше, чем в почве, воде и воздухе. Аккумуляция и передача ксенобиотиков по пищевым цепям еще больше усложняет проблему, поскольку увеличение концентрации от звена к звену может составлять несколько порядков.

Одной из характерных особенностей канцерогенных и мутагенных соединений, является то, что они могут проявлять биологический эффект в очень низких концентрациях. Это особенно затрудняет их химико-аналитическое определение в биологических тканях, С другой стороны, химическими методами не возможно определить, обладает ли то или иное вещество канцерогенными и мутагенными свойствами. В связи с этим биологическое тестирование и биоиндикация канцерогенных и мутагенных соединений приобретает все большее значение (Абилев С.К., 1986).

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучить накопление генотоксических соединений различными компонентами мо-

дифицированных экосистем. Исследовать зависимость характера накопления мутагенных и канцерогенных соединений от уровня активности пероксидазы в растениях и системы цитохрома Р-450 в тканях животных. Изучить возможность•использования активности пероксидазы водных растений в качестве тест-ситемы, определяющей степень загрязнения среды ксенобиотиками. Оценить степень загрязнения мутагенными соединениями некоторых морских и пресноводных экосистем, а также районы Алтйского края, подвергавшиеся действию ядерных испытаний на Семипалатинском полигоне.

В связи с этим в задачи иследования входило:

1. Изучить с помощью теста Эймса сальмонелла/микросомы накопление мутагенных соединений в различных компонентах модифицированных экосистем - воде.донном грунте, водорослях, а также почве, наземных растениях и животных.

2. Оценить способности организмов осуществлять метаболизм ксенобиотиков с помощь® активации молекулярных форм кислорода ферментативными системами: пероксидаза водорослей и ферменты нонооксигеназного окисления печени рыб и рыбоядных птиц).

3. Изучить сравнительную динамику накопления мутагенных ксенобиотиков и активности пероксидазы водорослей в условиях лабораторного эксперимента.

4. Исследовать степень накопления различными растениями нитратов как возможных предшественников нитрозаминов, меющих канцерогенные свойства.-

5. Оценить возможные корреляции между накоплением различ-

ных ксенобиотиков компонентами среды и заболеваемостью местного населения в Алтайском крае.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное исследование накопления мутагенных соединений в водных и наземных биогеоценозах ряда районов Алтайского края. Воронежского водохранилища и морской экосистемы острова Хурнойя (северная Норвегия). Проведено сравнительное исследование уровня накопления мутагенных соединений, выявляемых в тесте Эймса, растениями и животными в зависимости от активности ферментов детоксикации: пероксидаза водорослей и система цитохрома Р-450. Практическая значимость: Предложенные тест-системы использованы для оценки загрязнений водных и наземных экосистем мутагеными ксенобиотиками. Результаты этих экспериментов были соотнесены с показателями здоровья местного населения районов Алтайского края.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Международном симпозиуме "Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов", Воронеж, ВГУ, 29 мая - 1 июня 1995 года; У Международной конференции "Проблемы экологии" (Чтения памяти профессора М. М. Кожова), Иркутск, 23-28 октября 1995 года; Международной конференции "Фундаментальные и прикладные проблемы охраны окружающей среды", Томск, 12-16 сентября 1995 года; заселении кафедры физиологии растений 1 ноября 1995 года и заседании кафедры гидробиологии ноября 1995 года Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В.Ломоносова.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 4 научные работы, в том числе - 1 статья в академическом печати, и 1 статья принята в печать.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего _ наименований. Работа изложена на _ страницах машинописного текста, включая _

таблиц и _ рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Для исследования генотоксического загрязнения Воронежского водохранилища весной 1992 и осенью 1993 годов в пяти точках среднего участка водохранилища отбирали пробы воды, донного грунта и водорослей (Chara sp.)

На острове Хурноя в Норвегии летом 1994 года отбирали пробы воды, водорослей: Porphyra umbílícaUs, Fucus vesicu-losus, Fucus disticus, Laminaria sacharina; моллюсков: Tes-tudinalia tesselata, Nucella lapiUus, Llítorina optusata, Mytilus edut-ts; бокоплавов: Gammarus ocearvícus, полихет: Po-tíheta sp. , а также треска Gadus morhua L.. мойва Mallotus vilíotus MuXXer. В качестве конечного звена пищевой цепи исследовались мьшцы и печень взрослых моевок Rissa tridacti-

la L. и птенцов в норме и после инъекции ксенобиотиков.

Для решения поставленных задач были проведены три экспедиции по районам Алтайского края: в Рубцовский (Р) и Угловс-кий (У) районы, подвергавшиеся воздействию последствий испытаний ядерного оружия на Семипалатинском полигоне (июнь, ноябрь 1993 г., июнь 1994 г.), в Славгородский (С).и Немецкий (Н) районы с высокоразвитым промышленным и сельскохозяйственным производствами (июль, ноябрь 1993 г.) и в условно контрольный Тюменцевский район (Т) (июнь 1994 г.), расположенный вне следа прохождения радиоактивного облака.

В ходе экспедиций 1993 года были собраны образцы почвы и высших наземных растений (Barbarea vulgaris R.Br.), воды, донного грунта и водорослей (Claáofora sp.) из водоемов, а также пищевые продукты: картофель и питьевая вода. В 1994 году были отобраны вода, донный грунт и водоросли (Claáofora sp.) из естественных водоемов, почва и высшие растения, произрастающие на них: культурные - картофель (Solanum tuberosum I.), пшеница (Triticum sativum L.) и дикорастущие - вей-ник (Calamagrostis epigeios L.), сурепка (Barbarea vulgaris J?.Бг.), а также представители травоядных насекомых из сем. Прямокрылых (Ortóptera). Всего исследовали в Алтайском крае исследовался 121 образец; каждый экстракт тестировали в трех повторностях в каждом варианте опыта.

Экстракцию аккумулированных в образцах ксенобиотиков осуществляли смесью гексан+ацетон способом описанным ранее ( Kotelevtsev S.V., L.I. Stepanova, V.N. Glazer, 1994). Подготовленные таким образом экстракты проб исследовали на наличие в них генотоксичности в тесте Эймса сальмонелла/микросо-

мы, который позволяет обнаружить активность прямых мутагенов (-МА), а также и промутагенных соединений, проявляющих свое действие только после метаболических превращений в ферментной системе цитохрома Р-450 печени (Фонштейн Л. И. и др. 1977; Ames, 1973; Ames 1975). Активность прямых и промутагенных соединений выявляли на штаммах сальмонеллы ТА 98 и ТА 100, учитывающих, соответственно, мутации типа сдвига рамки считывания и замены оснований (Ames et al., 1975; Фонштейн Л.М., 1977 ).

Активность пероксидазы водорослей определяли спектрофото-метрически методом, описанным ранее (Гавриленко, 1975) в природных (а) и лабораторных (б) условиях: а) водоросли, собранные на Воронежском водохранилище, сразу гомогенизировали и измеряли пероксидазную активность в супернатанте, сравнивая ее с активностью пероксидазы водорослей того же вида, выращенных в аквариуме; б) постановку модельного эксперимента осуществляли в сентябре 1993 года. Харовые водоросли из Воронежского водохранилища помещали в аквариумы с отстоянной водой и содержали при естественном освещении. Через 10 дней вносили спиртовой раствор 2-ацетиламинофлуорена из расчета 1, 10 и 50 мг на литр. Для измерения активности пероксидазы пробы отбирали через 1, 3, 5, 7, 10, 15 и 20 суток. Параллельно фиксировали пробы водорослей с целью определения ' способности исследуемых растений аккумулировать 2-ацетиламинофлуорен в динамике эксперимента.

Выделение микросомной фракции из печени рыб и определение уровеня содержания цитохрома р-450 и активности ферментов конъюгации определяли по методу описаннорму ранее (Котелев-

цев и др. 1986). С целью изучения активности ферментов де-токсикации (цитохром Р-450) птицам вводили метилхолантрен (МХ) и ДЦТ. В тесте Эймса исследовались пробы мышц и печени контрольных птиц, а также чаек после индукции.

Концентрацию нитратов измеряли способом , описанным ранее (Разумова и др., 1978 ).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Аккумуляция генотоксических соединений некоторыми компонентами водного биогеоценоза и пероксидазная активность водорослей Воронежского водохранилища.

Весной 1992 и осенью 1993 годов в средней части Воронежского водохранилища отбирали пробы воды, донного грунта и водорослей рода Chara. Экстракты исследовали в тесте Эймса, а в вытяжке водорослей измеряли активность пероксидазы. В результате исследования обнаружено, что в образцах проб Воронежского водохранилища накапливаются как прямые, так и про-мутагенные генотоксические соединения, вызывающие мутации только одного тестерного итамма сальмонеллы - ТА 98. Наиболее часто мутагенный эффект с выраженной сезонностью обнаруживается в пробах нижней части водохранилища в районе ТЭЦ-1 (Рис. 1). В этой же части была наиболее низкой активность пероксидазы водорослей.

По сравнению с пробами воды и донных отложений в нашем исследовании, водоросли чаще накапливают прямые и промута-генные ксенобиотики. Следовательно, водные растения являются

мутагены[%) " 70-

Р+У

индекс здоровья Щ 50

С+Н Районы

I.' ,1 - проу.утагены:, Ц

■ индекс здоровья.

Т

прямые,

Рис. 5. Частота встречаемости мутагенного эффекта в экстрактах компонентов экосистем районов Алтайского края, регистрируемая в тесте Эймса на штамме ТА38

исследовании, водоросли чаще накапливают прямые и промута-генные ксенобиотики. Следовательно, водные растения являются не только продуцентами водных экосистем, но и первичными аккумуляторами ксенобиотиков и, в частности, мутагенных соединений. Это дает возможность выделить харовые водоросли в качестве индикаторного организма для Воронежского водохранилища.

Известно, что накопление ксенобиотиков растениями влияет на активность пероксидазы. Для проверки этого утверждения был проведен лабораторный эксперимент по изучению сравнительной динамики накопления мутагенных ксенобиотиков и ак-

Е

Дни

Рис. 2. Изменение активности перохсидазы е процессе накопления 2-ААФ. ■ - контроль, 4- - 1 мг/л, Ж - 10 мг/л, □ -*50 мг/л.

Дна

Рис, Э, Накопление 2-ААФ водорослями, регистрируемое в тесте Эймса на штаммах ТА98 и ТА100. • - контроль,+ -1 мг/л, ^ - 10 мг/л, □ - 50 мг/л

тивности пероксидазы у харовых водорослей, отобранных в Воронежском водохранилище.

Харовые водоросли из Воронежского водохранилища помещали в аквариумы. После 10-дневной акклиматизациям в воду вносили раствор стандартного промутагены 2-ацетиламинофлуорена в трех концентрациях: 1, 10 и 50 мг/л. Далее в течении 20 дней отбирались пробы дя исследования в тесте Эймса и исследовалась активность пероксидазы.

Получены следующие результаты:

1) активность пероксидазы в период с 7 по 20 день плавно падает с примерно одинаковой скоростью во всех вариантах опыта (рис. 2);

2) скорость падения активности в первые 7 дней заметно различается в зависимости от концентрации 2-ацетиламинофлуорена.

Накопление 2-АФ водорослями регистрировалось в тесте Эймса и имело характер экспоненциального роста (Рис.3).

Сравнивая изменение активности пероксидазы водорослей со скоростью накопления 2-АФ можно отметить, что эти величины обратно пропорциональны, т. е. падение активности пероксидазы сопровождается увеличением накопления промутагена.

Накопление мутагенных соединений в морских экосистемах и активность ферментов детоксикации рыб и рыбояднрых птиц.

Результаты исследования аккумуляции генотоксических соединений в различных компонентах биогеоценозов острова Хурноя

показано на рис. 4. В начальных звеньях пищевой цепи не происходит регистрируемого в тесте Эймса накопления генотокси-ческих соединений. Предположительно ксенобиотики накапливаются в данных организмах в количестве недостаточном для регистрации в используемой тест-системе, однако в пищевых цепях происходит их концентрирование. В рыбе (треска и мойва)

Аккумуляция генотоксических соединений существенно выше. Количество мутагенных экстрактов от общего числа исследованных достигает 22 55.

В контрольной группе взрослых птиц наблюдается максимальное среди исследованных групп организмов накопление мутагенов. В мышцах взрослых моевок генотоксические соединения обнаружены в 43 процентах изученных экстрактов. Мышцы птенцов накапливают существенно меньшие количества генотоксических соединеий. Из пяти исследованных образцов лишь один выявил слабый прямой мутагенный эффект. Яйца моевок занимают промежуточное положёние по степени аккумуляции ксенобиотиков между взрослыми птицами и птенцами.

Накопление мутагенных соединний в тканях рыб и животных связано с активностью системы их детоксикации и метаболической активации. В микромсомах печени рыб эта система менее активна, чем в микросомах печени моевок.Анализ активности цитохрома Р-450 и ферментов конъюгации в печени моевок в норме и после индукции цитохрома Р-450, а также исследование в тесте Зймса экстрактов шшц этих же моевок, показали, что инъекция 3-МХ - индуктора моноксигеназ - приводит к увеличению активности ферментов детоксикации и метаболической акти-

, % 50

40 30

20 10

0

НЗПЦ рыба моевки птенцы яйца

Рис. 4. Частота встречаемости мутагенного эффекта в экстрактах компонентов морских экосистем о. Хурнойя, регистрируемая в тесте Эймса на штаммах ТА98 +- ТА 100

вации. при этом уровень содержания как прямых мутагенов, так и промутагенов снижается.

Мутагенные ксенобиотики в районах Алтайского края, пострадавших от последствий испытаний ядерного оружия на Семипалатинском полигоне.

В ряде районов Алтайского края регистриуется нарущения в

хромосомном аппарате клеток крови людей. Эта генетическая нестабильность может быть связана как с дейстивем мутагенных ксенобиотиков, так и с последствием неаземных ядерных испытаний на Семипалатинском полигоне в 1949-1966 г.(Шевченко В.А., 1995)

Проведенное в тесте Эймса сальмонелла/микросомы на двух тестерных штаммах ТА 98 и ТА 100 исследование генотоксичнос-ти выявило в образцах почвы, донных отложениях, наземных растений (сурепка), водорослей (кладофора), картофеля, воды из прудов и питьевой воды, отобранных в районах Алтайского края, присутствие прямых и промутагенных ксенобиотиков.

В пробах в наибольшем количестве присутствуют прямые мутагены, проявляющиеся в тесте Эймса на штамме ТА- 98. Этот тип мутагенов можно считать наиболее показательным для оценки генотоксического состояния среды исследуемых районов. Распределение промутагенов и прямых мутагенов в образцах по исследуемым районам неравномерное, зависит от их экономического развития. Максимальная частота обнаружения мутагенов приходится на северные районы Алтайского края (Рис.4). Наибольшими аккумуляторами прямой и общей генотоксичности среди исследованных образцов являются почва, донные отложения водоемов и картофель.

Накопление нитратов наземными растениями исследованных районов Алтайского края.

Штамм сальмонеллы ТА 100 в тесте Эймса способен регистри-

ровать мутагенный эффект, вызываемый действием нитрозоаш-нов, однако в тесте Зймса ни прямой, ни промутагенной активности исследуемых проб обнаружить не удалось. Это, вероятно, связано с тем, что штамм сальмонеллы ТА 100 способен регистрировать мутагенность нитрозосоединений, которые образуются из нитратов в пищеварительной системе млекопитающих. Ферментные системы бактерий не способны осуществить данное превращение.

При исследовании потенциометрическим методом экстрактов наземных растений, в двух из четырех точках исследования содержание нитратов в картофеле превышает нормы ПДК (250 мг/кг сырой массы). Это, наряду с другими факторами, может влиять на состояние здоровья населения.

Оценка способности аккумуляции генотоксических соединений компонентами биогеоценозов Алтайского края в отношении к показателям состояния здоровья местного населения.

Для удобства интерпретации экспериментальных данных и для оценки степени накопления мутагенных ксенобиотиков различными компонентами биогеоценозов районов Алтайского края экспериментальные данные, полученные на наиболее информативном штамме ТА 98, можно представить в виде частоты встречаемости мутагенных эффектов (%) среди исследованных образцов данного региона (Рис. 5.). Для этого изученные районы по отношению к условно контрольному Тюменцевскому (Т) объединили по избранным характеристикам: Угловский и Рубцовский (У+Р), подвер-

гавшиеся воздействию последствий испытаний ядерного оружия на Семипалатинском полигоне; Славгородский и Немецкий (С+Н) - районы, находящиеся вне следа прохождения радиоактивного облака.

С целью решения поставленной задачи о вкладе мутагенных компонентов биогеоценозов в показатели состояния здоровья населения Алтайского края было проведено сравнение индекса здоровья (ИЗ) местного населения с фоновым содержанием гено-токсических соединений в исследуемых районах.

Прямые мутагенные ксенобиотики накапливаются в изученных компонентах биогеоценозов Алтайского края чаще, чем промута-генные, а наибольшая частота их встречаемости приходится на Немецкий и Славгородский районы (С+Н). С другой стороны в этом регионе по сравнению с Угловским и Рубцовским районами (Р+У) заметно снижено содержание промутагенов в пробах, что косвенно свидетельствует о разных источниках мутагенных соединений. На этом фоне Тшенцевский район характеризуется сниженным содержанием прямых и промутагенных соединений. Наиболее благополучная обстановка, исходя из показателя индекса здоровья, складывается в Славгородском, Немецком и Тюмен-цевском районах, Однако в образцах, взятых из Славгородского и Немецкого районов, аккумулируется наибольшее количество прямых мутагенных соединений. В го же время, в Угловском и Рубцовском районах, где накопление прямых генотоксических ксенобиотиков в исследованных образцах ниже, состояние здоровья местного населения значительно хуже.

Таким образом, неблагополучную медицинскую обстановку в

%

70 60' 50 40 Э0 20-1 10 О

1 2

Точки отбора проб ШИ - прямые [ '

I - промутагены

Рис. 1. Частота встречаемости мутагенного эффекта в экстрахтах проб из Воронежского водохранилища в тесте Эймса на штаммах ТА98 и ТА 100.

этих районах нельзя объяснить присутствием в окружающей среде ксенобиотиков, вызывающих генные мутации. Это подтверждает предположение о том,. что состояние здоровьтя населения в этих районах может быть связано с последствиями испытаний ядерного оружия на Семипалатинском полигоне в период с 1949 по 1965 гг.

ВЫВОДЫ.

1. В харовых водорослях, отобранных в различных районах Воронежского водохранилища, регистририруется накопление прямых и промутагенных соединений в тесге Эймса на штамме сальмонеллы ТА 98. При этом частота регистрации мутагенного эффекта в образцах водорослей значительно выше, чем в воде или донных отложениях и зависит от района отбора проб, что позволяет использовать харовые водоросли водохранилища в качестве тест-объекта при анализе загрязнения водохранилища мутагенными ксенобиотиками.

2. Уровень активности пероксидазы харовых водорослей в Воронежском водохранилище обратно пропорционален накоплению ими мутагенных соединений. Эта закономерность подтверждается опытами in vitro, что позволяет использовать перокисидазу харовых водорослей в качестве экспресс-индикатора загрязнения водоема ксенобиотиками.

3. Накопление прямых и промутагенных соединений, регистрируемых в гесте Эймса, в морских экосистемах происходит в пищевых цепях от водорослей до рыбоядных птиц и зависит от активности ферментов детоксикации и метаболической активации в тканях животных.

4. Проведенное в тесте Эймса сальмонелла/микросомы на

двух тесгерных штаммах ТА 98 и ТА 100 исследование геноток-сичности выявило в образцах почвы, донных отложениях, наземных растений, водорослей, воды из прудов, отобранных в районах Алтайского края, присутствие прямых и промутагенных ксенобиотиков, что, однако не коррелировало с индексом здоровья населения исследованных районов Алтайского края.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Иванова Е.Ю., Степанова Л.И., Глазер В.М., Котелев-цев C.B. Мутагенные ксенобиотики в различных компонентах биогеоценозов пяти районов Алтайского края. "Токсикологический вестник", 1995, W 6, стр. 12 - 18.

2. Иванова Е.Ю., Степанова Л.И., Образцов В.В., Коте-левцев C.B. Мембраносвязанные белки плаценты и детоксикация ксенобиотиков у рожениц районов Алтайского края, подвергшихся действию испытаний ядерного оружия. Международный симпозиум "Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов", Воронеж, ВГУ, 29 мая - 1 июня 1995 года. Тез. докл., с.58-60.

3. Иванова Е.Ю., Л.И. Степанова. Накопление генотокси-ческих соединений и пероксидазная активность водорослей в Воронежском водохранилище. Y Международная конференция "Проблемы экологии" (Чтения памяти профессора M. М. Кожова), Иркутск, 23-28 октября 1995 года. Тез. докл., с. 132-133.

4. Иванова Е.Ю., Степанова Л.И. Анализ мутагенных и канцерогенных соединений в экосистемах Алтайского края. Международная конференция "Фундаментальные и прикладные проблемы охраны окружающей среды", Томск, 12-16 сентября 1995 года, Тез. докл. т. 2, с. 233.

5. Принята в печать в журнал "Бюллетень экспериментальной биологии и медицины" статья: .Ю.Иванова, Л.И.Степанова, В.М.Глазер, С.В.Котелевцев "Мутагеннбые ксенобиотики в районых Алтайского края, подвергавшихся действию испытаний ядерного оружия".

Заказ ЗС5 от II.И.95 г. Тир. 100 экз. Формат 50 I 90 1/16. Объем I п.л. Офсетная лаборатория ЗТУ.