Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Агрегация и адренореактивность эритроцитов при физиологически протекающей и осложненной гестозом беременности

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Агрегация и адренореактивность эритроцитов при физиологически протекающей и осложненной гестозом беременности"

иизово183

Трошкина Наталия Александровна

АГРЕГАЦИЯ И АДРЕНОРЕАКТИВНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ ПРОТЕКАЮЩЕЙ И ОСЛОЖНЕННОЙ ГЕСТОЗОМ БЕРЕМЕННОСТИ

03 00 13 - физиология 14 00 01 - акушерство и гинекология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

7 4 МАЙ 2007

Киров 2007

003060183

Работа выполнена на кафедрах акушерства и гинекологии и нормальной физиологии ГОУ ВПО «Кировская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и в Центре патологии гемостаза ФГУ «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Росздрава»

Научные руководители

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Циркин Виктор Иванович Дворянский Сергей Афанасьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Азии Александр Леонидович

кандидат медицинских наук, доцент Осокина Алла Анатольевна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится «28» мая 2007 года в_ ч на заседании

диссертационного совета К208 036 01 при ГОУ ВПО «Кировская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу 610027, г Киров, ул К Маркса, д 112

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Кировской государственной медицинской академии по адресу 610027, г Киров, ул К Маркса, д 137

Автореферат разослан «_» апреля 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук, доцент

Хлыбова Светлана Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Известно (Pribush A et al, 2000, Корнеева H В и др, 2002), что физиологическое течение беременности сопровождается увеличением агрегации эритроцитов (АЭ), а развитие гестоза - еще более выраженным ее подъемом (Сидорова И С, 2003, Heilmann L et al, 2004) Считается, что рост АЭ при беременности, обусловлен изменением состава плазмы, и свойств эритроцитов (Савельева Г M и др , 1986, Heilmann L , 1991, 1994, Gamzu R et al, 2001, Сидельникова В M , Шмаков P Г , 2004) При этом по мнению Gamzu R et al (2002), повышение АЭ при гестозе определяется в большей степени клеточным фактором

Установлено, что катехоламины способны изменять функциональное состояние эритроцитов (Oonishi Т et al, 1997, Гусева ЕВ и др , 1998, Муравьев А В и др , 2005, Тихомирова И А , 2006), воздействуя на их адренорецепторы (АР) В мембране эритроцитов человека выделены подтипы arAP (Sundquist J et al, 1992), а2-АР (Gonzalez О et al, 1998), хотя вопрос о их соотношении остается открытым Обнаружены также Р,-АР (Jahn P et al, 1995), р2-АР (Jahn P et al, 1995, Horga J et al, 2000) и p3-AP (Pamies-Andreu E et al, 2000) Популяция p2-AP является доминирующей (Bree F et al ,1984) Соотношение числа ct|-AP, a2-AP, РгАР, P2-AP и Рз-АР эритроцитов y беременных женщин неизвестно

Данные литературы в отношении влияния адренергических веществ на АЭ противоречивы По мнению одних авторов, адреналин повышает АЭ человека (Минеев В H и др , 1989, Hines et al, 2003, Муравьев А В и др, 2005, Петроченко А С, 2006, Тихомирова И А, 2006), а по данным других исследователей, наоборот, судя по СОЭ, снижает ее у мужчин и небеременных женщин (Минеев ВН, 1993, Геворкян НА, 1995, Гусева ЕВ и др, 1998, Бондарчук В В и др , 2000, 2004, Рабик Ю Д, 2006), а также у беременных женщин и рожениц (Гусева Е В , 1998, Бабин А П , и др , 2006) Установлено, что проагрегантный эффект катехоламинов нивелируется блокаторами а-АР -дигидроэрготамином, коринантином и йохимбином (Зубаиров ДМ и др , 1991, Тихомирова И А , 2006) В тоже время другим авторам не удалось блокировать ницерголином снижение СОЭ, вызванное адреналином у беременных женщин (Бабин А П и др, 2006) Согласно данным одних авторов, обзидан снижает способность адреналина повышать АЭ крысы (Mchedlishvili G et al, 1993) и человека (Минеев В H и др, 1989) Другие иследователи считают, что он не влияет на способность адреналина повышать АЭ (Тихомирова И А , 2006) или снижать СОЭ (Бабин А П и др , 2006) Более того, Козловский В И (1993) обнаружил, что терапия обзиданом больных ИБС приводит у 48,8% пациентов к снижению АЭ, у 28% - к ее увеличению

В соответствие с концепцией (Циркин В И , Дворянский С А , 1997) об Р-адренингибирующем механизме (АРИМ), предполагается, что во время беременности эффективность активации р2-АР должна возрастать не только в миоцитах матки, но и в других клетках организма, в том числе в клетках крови и снижаться при гестозе Доказательства этой гипотезы были получены при исследовании адренореактивности эритроцитов-АРЭ (Гусева ЕВ и др , 1998),

тромбоцитов (Дворянский С А и др , 2004, Хлыбова С В и др , 2005, Яговкина Н В , 2006) и нейтрофилов (Хлыбова С В , 2007) В то же время, оценивая влияние обзидана на осмотическую резистентность эритроцитов, Адамян Л В и др (2006) установили, что при беременности р-АРЭ снижается

Противоречивость данных литературы в отношении влияния адренергических веществ на АЭ и характера изменения АРЭ при беременности, в определенной степени, связана с несовершенством методов их исследования и сложностью применения этих методов в клинической практике В этом аспекте перспективным является применение анализатора агрегации клеток крови НФП «Биола» (Россия) Ранее он был использован Спасовым А А и др , (2000) для исследования АЭ, индуцированной алциановым голубым (АГ) В литературе нами не найдены сведения об использовании этого агрегаметра для оценки АЭ и АРЭ беременных женщин

Все вышеперечисленное позволило нам сформулировать цель и задачи исследования

Цель исследования: Оценить индуцированную алциановым голубым агрегацию эритроцитов и их адренореактивность у небеременных, беременных (III триместр) женщин, в том числе при наличии у них гестоза

Задачи исследования-

1 Модифицировать метод Спасова А А и др (2000) для оценки АГ-индуцированной агрегации эритроцитов и их адренореактивности

2 Оценить АГ-индуцированную агрегацию эритроцитов небеременных и беременных женщин, в том числе с гестозом

3 Изучить в отсутствии алцианового голубого влияние адреналина, неселективного блокатора а-АР (ницерголина) и Р-АР (пропранолола) на агрегацию эритроцитов небеременных и беременных женщин, в том числе с гестозом

4 Исследовать влияние адреналина, ницерголина и пропранолола на АГ-индуцированную агрегацию эритроцитов у небеременных и беременных женщин, в том числе с гестозом

5 Изучить влияние ницерголина и пропранолола на эффект адреналина в условиях АГ-индуцированной агрегации у небеременных и беременных женщин, в том числе с гестозом

Научная новизна. Предложена модификация методики Спасова А А и др (2000) для исследования агрегации и адренореактивности эритроцитов на анализаторе агрегации марки 230 ЬА НФП «Биола» (Россия) с использованием в качестве индуктора агрегации алцианового голубого (АГ) Впервые показано, что АГ в условиях физиологического раствора увеличивает агрегацию эритроцитов у небеременных, здоровых беременных и женщин с гестозом Впервые с использованием модифицированного нами метода Спасова А А и др (2000), установлено, что у женщин с неосложненным течением беременности (III триместр) АГ-индуцированная агрегация эритроцитов выше (в 1,8 раза), чем у небеременных, а у женщин с гестозом легкой и средней степени тяжести выше, чем у здоровых беременных в 1,4 и 1,9 раза соответственно

Впервые показано, что в условиях физиологического раствора и отсутствии АГ адреналин, ницерголин и пропранолол (10"9- 10"6 г/мл) не повышают агрегации эритроцитов небеременных и беременных женщин, в том числе при наличии у них гестоза

Впервые показано, что адреналин (Ю'МО"6 г/мл) дозозависимо снижает АГ-индуцированную агрегацию эритроцитов у всех женщин Степень ее снижения у здоровых беременных и беременных с гестозом легкой степени тяжести такая же, как у небеременных, а у женщин с гестозом средней степени тяжести - ниже, чем у всех остальных Тем самым впервые установлено снижение антиагрегантного действия адреналина при гестозе средней степени тяжести,

Впервые показано, что пропранолол (10"9-10'6 г/мл) дозозависимо снижает АГ-индуцированную АЭ у всех женщин Степень ее снижения у здоровых беременных выше, чем у небеременных, а у женщин с гестозом легкой и средней степени тяжести - выше, чем у здоровых беременных Впервые установлено, что ницерголин (10*9-106 г/мл) дозозависимо снижает АГ-индуцированную АЭ у всех женщин Степень этого снижения под влиянием низких (10~9 и 108 г/мл) концентраций ницерголина одинакова у всех женщин, а под влиянием высоких концентраций (10" и 10 г/мл) - выше у беременных, в том числе с гестозом, чем у небеременных женщин Эти данные позволили предположить наличие двух компонентов в действии адреноблокаторов -адреномиметического (109 и 10 8 г/мл) и мембраностабилизирующего (10"7 и 10~6 г/мл) Они также свидетельствуют о повышении чувствительности эритроцитов у беременных (особенно, у женщин с гестозом) к пропранололу и ницерголину как мембраностабилизирующим факторам

Впервые установлено, что пропранолол не влияет на антиагрегантный эффект адреналина (10 6 г/мл) у небеременных и у женщин с гестозом средней степени тяжести (в концентрациях 10"9-10"6 г/мл), уменьшает - у здоровых беременных (10~9 и 10"8 г/мл) и усиливает - у женщин с гестозом легкой степени тяжести (10"8,10 7 и 10"6 г/мл) Ницерголин не влияет на антиагрегантный эффект адреналина у небеременных женщин (10"9-10 6 г/мл) и уменьшает его у здоровых беременных (10"9 и 10"8 г/мл), у женщин с гестозом легкой (109 г/мл) и средней степени тяжести (10 9,10"8, 10"7 г/мл)

Впервые показано, что антиагрегантный эффект адреналина у всех женщин обусловлен активацией а-АР и р-АР эритроцитов Сформулирована гипотеза, согласно которой, вне беременности эритроциты содержат а-АР (а,-АР, а2-АР) и Рг-АР, при активации которых АЭ снижается, а также ргАР, активация которых повышает АЭ При беременности возрастает популяция а-АР, РгАР и р2-АР, но в целом, эффективность адреналина как антиагреганта не возрастает, так как доля Р,-АР высока При гестозе (особенно его средней степени тяжести) существенно возрастает эффективность активации ргАР, что снижает антиагрегантный эффект адреналина и клинически это проявляется симптомами гиперагрегации

Теоретическая и практическая значимость работы Результаты исследования вносят новые представления о физиологии эритроцитов В частности о роли а-АР и ß-AP в изменении агрегационной способности эритроцитов вне беременности, а также при неосложненной и осложненной гестозом беременности Расширены представления о патогенезе гестоза, в частности о роли ßi-AP в повышении агрегации эритроцитов Дано теоретическое обоснование целесообразности применения ß-адреноблокаторов для профилактики и лечения синдрома гиперагрегации эритроцитов при осложненой гестозом беременности Результаты исследования могут быть использованы в преподавании физиологии, акушерства и гинекологии, фармакологии и других разделов медицины и биологии

Разработанная модификация метода Спасова А А, и др (2000) может быть использована в клинической практике для оценки агрегации эритроцитов и их адренореактивности на агрегометре НФП «Биола» Нормативные параметры, характеризующие АГ-индуцированную агрегацию эритроцитов и их адренореактивность у беременных женщин для диагностики гестоза и оценки эффективности его лечения Метод повышения АЭ в условиях физиологического раствора с помощью алцианового голубого может применяться при изучении агрегационных свойств эритроцитов человека и животных

Положения, выносимые на защиту.

1 Алциановый голубой (АГ) повышает агрегацию эритроцитов, находящихся в физиологическом растворе Степень АГ-индуцированной агрегации эритроцитов (АЭ) у женщин с неосложненной беременностью (III триместр) выше, чем у небеременных, а у женщин с гестозом - выше, чем у женщин с физиологическим течением беременногсти

2 Адреналин снижает АГ-индуцированнную агрегацию АЭ женщин Антиагрегантный эффект адреналина у здоровых беременных и у беременных с гестозом легкой степени тяжести такой же, как у небеременных женщин, а у женщин с гестозом средней степени тяжести он меньше Антиагрегантный эффект адреналина (Ю-6 г/мл) может быть снижен адреноблокаторами при использовании их в низких (10"9 и 108 г/мл) концентрациях Пропранолол блокирует эффект адреналина лишь у здоровых беременных, а ницерголин- у здоровых беременных и у беременных с гестозом, особенно средней степени тяжести

Апробация работы. Результаты работы представлены и обсуждены на V Молодежной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН «Физиология человека и животных от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2006), научно-практической конференции акушеров-гинекологов Кировской области (Киров, 2007), на заседании Кировского отделения физиологического общества имени академика И П Павлова (Киров, 2007), научной-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины» (Киров, 2007), первом региональном научном форуме «Мать и дитя» (Казань, 2007)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 2 - в рецензируемых журналах

Объем и структура. Диссертация изложена на 188 страницах машинописного текста и содержит 11 рисунков и 19 таблиц, состоит из введения, трех глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения), выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который содержит 364 источников из них 141 на иностранных языках

Личное участие автора Автором проведено формирование групп женщин, забор материала, исследование агрегации и адренореактивности эритроцитов, анализ и статистическая обработка данных Автор сделал обобщающие выводы и разработал практические рекомендации

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.

На кафедрах акушерства и гинекологии и нормальной физиологии Кировской ГМА и лаборатории центра патологии гемостаза Кировского НИИГиПК обследовано 213 женщин, из них 50 - небеременных женщин, 61 - с неосложненным течением беременности (в Ш-м триместре), 102 - с гестозом (52 - с легкой степенью, 50 - со средней степенью тяжести) Беременные находились в Кировском областном клиническом перинатальном центре, проходили комплексное обследование с использованием общеклинических и дополнительных методов исследования (УЗИ, кардиотокография, допплерометрия) по стандартным методикам Формирование клинических групп осуществляли по общепринятым критериям, степень тяжести гестоза оценивали по шкале Goecke G , дополненной Савельевой Г M (1996)

Забор венозной крови производили с личного добровольного информируемого согласия обследуемых Исследование агрегации и адренореактивности эритроцитов проводили на двухканальном лазерном анализаторе агрегации клеток крови марки 230-LA НФП «Биола» по методике Спасова А А и др (2000) в нашей модификации (Ивашкина Е П , Трошкина H А , Циркин В И , Дворянский С А , 2006) с использованием в качестве индуктора агрегации алцианового голубого Проведено 2 блока иследований по 5 серий в каждом (серии 1-5) В блоке 1 изучали влияние адренергических веществ на АЭ без применения индуктора агрегации, в блоке 2 - влияние на АГ-индуцированную АЭ у небеременных женщин, здоровых беременных и женщин с гестозом легкой и средней степени тяжести Иследовали влияние адреналина ( 10 06 г/мл, серия 1), пропранолола (Ю'МО-6 г/мл, серия 2), ницерголина (10"9-10"6 г/мл, серия 3), а также адреналина (10~6 г/мл) совместно пропранололом (10"9-106 г/мл, серия 4) или с ницерголином (Ю'МО"6 г/мл, серия 5) Всего проведено 2130 тестирований

Результаты исследования обрабатаны с использованием статистической программы «Biostat» с вычислением среднего арифметического (М), стандартной ошибки среднего (m) и коэффициента Стьюдента (t) с поправкой

Бонферрони, различия между группами считались достоверными при р<0,05 (Гланц С,1999)

Результаты исследования и их обсуждение.

1. Модификация метода Спасова А.А. и др. (2000) для оценки агрегации эритроцитов (АЭ) и их адренореактивностн. Исследование АЭ проводили на агрегометре НФП «Биола» с использованием в качестве индуктора агрегации алцианового голубого («Ferak Berlin», Германия) Калибровку прибора проводили по двум точкам - для суспензии эритроцитов и для 0,9% раствора NaCl (их светопропускание принималось соответственно за 0% и 100%), а средний размер одиночного эритроцита принимался за 1 уел ед Забор венозной крови (самотеком) в объеме 2 мл производили утром натощак при пункции локтевой вены в тефлоновые пробирки с 3,8% раствором цитрата натрия (в соотношении 9 1) К 1 мл цитратной крови добавляли 9 мл 0,9% NaCl и центруфугировали 20 мин (1500 об/мин), надосадочную жидкость удаляли К 1 мл суспензии эритроцитов добавляли 9 мл 0,9% NaCl и вновь центрифугировали Такую процедуру повторяли еще раз, после чего 0,05 мл трехкратно отмытых эритроцитов ресуспендировали в 10 мл 0,9% NaCl для получения их рабочей суспензии По 1 мл этой суспензии вносили в пробирки, содержащие 0,1 мл адреналина (серия 1), пропранолола (серия 2), ницерголина (серия 3) в конечных концентрациях 10"9- 10"6 г/мл для 30 минутной преинкубации при комнатной температуре В серии 4 и 5 после 30-минутной преинкубации с пропранололом или ницерголином (10 9- 10"бг/мл) в пробирки добавляли адреналин (106 г/мл) и продолжали преинкубацию еще 5 минут Контрольная проба инкубировалась при тех же условиях в течение 30 или 35 минут соответственно с 0,1 мл 0,9% NaCl Затем в кюветы вносили по 0,3 мл суспензии преинкубированных эритроцитов и магнитную мешалку (скорость вращения - 1000 об/мин), а через 5 с - по 0,03 мл 2% раствора алцианового голубого (конечная концентрация АГ - 2x10° г/мл) и в течение 7 минут в термостатической ячейке прибора (37°С) оценивали агрегацию эритроцитов Исследования АЭ женщин в отсутствии алцианового голубого проводили по такой же схеме, но без внесения АГ в кювету прибора

Оценку АЭ проводили по 8 показателям 1) максимальное светопропускание (МС), в %, 2) время достижения МС, в с, 3) максимальный наклон кривой МС, в % в 1 мин, 4) время достижения максимального наклона кривой светопропускания, в с, 5) максимальный средний радиус эритроцитарных агрегатов (СРЭА), в уел ед, 6) время достижения максимального СРЭА, в с, 7) максимальный наклон кривой СРЭА, в уел ед в 1 мин , 8) время достижения максимального наклона кривой СРЭА, в с

Таким образом, модификация методики касалась следующих моментов 1) отмывание и инкубацию эритроцитов проводили не раствором Кребса, а физиологическим раствором, 2) увеличили скорость центрифугирования эритроцитов (с 1000 об/мин до 1500 об/мин), 3) увеличили объем вносимых в кювету прибора эритроцитов (с 0,25 мл до 0,3 мл), 4) увеличили скорость вращения мешалки (с 800 до 1000 об/мин), 5) уменьшили вносимый объем

алцианового голубого (с 50 мкл до 30 мкл), 6) сократили интервал внесения АГ после введения мешалки (с 10 с до 5 с) 7) при калибровке прибора за 100% оптической плотности принимали плотность 0,9% раствора NaCl без алцианового голубого (в оригинале - физиологический раствор в присутствии АГ) При оценке степени снижения МС, рассчитывался ее процент от контроля (физ р-р), принятого за 100%

2. Исследование агрегационнои активности эритроцитов без использования алцианового голубого. Установлено, что все показатели, характеризующие АЭ небеременных и беременных женщин, находятся на уровне, близком к нулю (табл 1) Это согласуется с общепринятой точкой зрения о том, что способность к агрегации эритроцитов в условиях физологического раствора минимальна (Chien S, 1973, Ашкинази ИЯ, 1977, Чернух AM и др 1981, 1984) Это обстоятельство вызвало необходимость использовать индуктор агрегации - алциановый голубой (O'Brien, 1962, 1966, Люсов В А и др , 1976), способный значительно снижать поверхностный заряд эритроцитов и тем самым инициировать агрегатообразование (O'Brain et al, 1970, Булегенов К Е и др, 1993)

3 Индуцированная алцнановым голубым (АГ) агрегация эритроцитов без применения адренергическнх средств. Установлено (табл 2) что алциановый голубой повышал агрегацию эритроцитов у всех женщин Это согласуется с данными литературы, полученными при исследовании АГ-индуцированной АЭ в условиях буферных растворов у здоровых людей (Булегенов КЕ, 1993, Осиков и др , 2005, Науменко ЛВ, 2006), больных сахарным диабетом (Ишанхонджаев Т M и др, 1992) и заболеваниями сердечно-сосудистой системы (O'Brain et al, 1966, Люсов В А и др, 1976, Закирова А H , и др , 1996, Спасов А А и др , 2000)

Показано (табл 2), что степень повышения АГ-индуцированной АЭ была различной в группах исследуемых У женщин с физиологическим течением беременности (III триместр, группа 2) показатели МС, СРЭА, максимального наклона кривой МС и СРЭА превышали значения, характерные для небеременных женщин (группа 1), например, для МС - в 1,8 раза Это указывает на более высокую степень АГ-индуцированной АЭ у беременных

У женщин с гестозом легкой степени тяжести (группа 3) показатели, характеризующие АЭ, в том числе МС, СРЭА, максимальный наклон кривых МС и СРЭА, время достижения СРЭА были достоверно выше (в частности, МС - в 1,4 раза), чем у здоровых беременных (табл 2) У женщин с гестозом средней степени тяжести (группа 4) значения МС, СРЭА, максимальный наклон кривых МС и СРЭА превышали значения, характерные для женщин группы 2 и группы 3 (для МС в 1,9 и 1,4 раза соответственно)

Таким образом, при беременности, в том числе осложненной гестозом легкой и, особенно, средней степени тяжести, возрастает АЭ, что согласуется с данными литературы, полученными другими методами (Савельева Г M и др , 1986, Prtbush A et al, 2000, Gamzu R et al, 2001, Корнеева H В и др , 2002,

Таблица 1 Показатели агрегации эритроцитов (М±т) без применения индуктора агрегации алцианового голубого у небеременных женщин (группа 1), женщин с физиологическим течением беременности (группа 2) и женщин с гестозом легкой (группа 3) и средней степени тяжести (группа 4)______

Показатели Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4

п=50 п=61 п=52 11=50

Средний радиус эритроцитарных агрегатов (СРЭА), уел ед 0,980±0,006 1,120±0,047 1,140±0,097 1,140±0,095

Время достижения СРЭА, с 118,920*10,651 122,000*12,489 124,600± 12,342 128,400*12,520

Максимальный наклон кривой СРЭА, уел ед /мин 2,020±0,044 1,980±0,047 2,014±0,070 2,050±0,060

Время достижения максимального наклона кривой СРЭА, с 10,600±0,797 11,240±0,837 10,740±0,714 1 1,500±0 778

Максимальное светопропускание (МС), % 0,000 0,000 0.000 0,000

Время достижения МС, с 0,000 0,000 0,000 0,000

Максимальный наклон кривой МС, %/мин 0,039±0,004 0,042±0,002 0,042±0,004 0,043±0,004

Время достижения максимального наклона кривой МС, с 156,100±10,172 151,600± ] 0,493 158,! 30± 14,630 160,400*15,800

Во всех случаях достоверных различий не выявлено (р>0,1 по критерию Стьюдента с поправкой Бонферрони для множественных сравнении

Таблица 3 Показатели агрегации эритроцитов (М±т) в отсутствии индуктора агрегации АГ при воздействии адреналина, ницерголина и пропранолола на эритроциты небеременных женщин (группа 1), женщин с физиологическим течением беременности (группа 2), и женщин с гестозом легкой (группа 3) и средней степени тяжести (группа 4)_

Вещество Средний радиус эритроцитарных агрегатов, уел ед Максимальное светопропускание %

Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4

п М±т п М±т п М±т п М±т

Контроль (физ р-р) 10 0,990±0,006 14 1,130±0,077 10 1,140*0,085 10 1,140*0,095 0,000 0,000 0,000 0 000

Адреналин, 10у г/мл 10 0,980*0,008 14 1,000±0,048 10 1,130*0,085 10 1,120*0,075 0,000 0,000 0,000 0 000

Контроль (физ р-р) 10 0,980±0,008 14 1,130±0,037 10 1,141*0,057 10 1,146*0,056 0,000 0,000 0,000 0,000

Пропранолол, 10 1 г/мл 10 0,990±0,012 17 1,126*0,098 И 1,138*0,099 10 1,135±0,098 0,000 0,000 0,000 0 000

Контроль (физ р-р) 10 0,980±0,009 17 1,130*0,056 11 1,142±0,023 10 1,142*0,078 0,000 0,000 0,000 0 000

Ницерголин, 109 г/мл 10 0,980*0,009 17 1,120±0,088 11 1,140*0,098 10 1,139±0,098 0 000 0,000 0,000 0 000

Контроль (физ р-р) 10 0,980±0,008 10 1,110±0,100 10 1,139±0,093 10 1,140±0,066 0,000 0,000 0,000 0 000

Пропранолол 10' г/мл и адреналин 106 г/мл 10 0,960±0,009 10 1,020±0,090 10 1,138*0,098 10 1,139±0,098 0,000 0,000 0,000 0 000

Контроль (физ р-р) 10 0,980*0,010 10 1,100±0,090 10 1,139±0, 03 10 1,140±0,095 0,000 0,000 0,000 0,000

Ницерголин 104 г/мл и адреналин 106 г/мл 10 0,970*0,009 10 1,020±0,080 10 1,137*0,095 10 1,139±0,091 0,000 0,000 0,000 0,000

Все различия с контротем и между группами недостоврны (р>0,1)

Макацария АД и др , 2002, НеНтапп Ь ее а!, 2004) Не отвергая представление о роли плазменных факторов в повышении АЭ при беременности и гестозе, мы полагаем, подобно другим исследователям (Савельева ГМ и др, 1986, 1997, Невзоров О Б , 1990, ватги Я е1 а1, 2002), что рост АЭ у здоровых беременных и у женщин с гестозом обусловлен клеточным фактором В частности, это может быть связано с увеличением числа ретикулоцитов, патологических форм эритроцитов, интенсификации ПОЛ в эритроцитах, снижении ЭФПЭ, которые сопутствуют беременности, особенно осложненной гестозом (Новиков С А и др , 1983, Анастасьева Н В и др , 1985, Савельева ГА , 1986, Сидорова И С идр , 1994, 2003, Не11тапп Ь е1 а1, 2004) Известно так же, что ретикулоциты имеют более высокую чувствительность к АГ как индуктору агрегации, чем зрелые эритроциты (НаШЬиЬег Ю е1 а1 ,1977)

Результаты наших исследований позволяют предложить нормативы 8 показателей, характеризующие АГ-индуцированнную АЭ у небеременных и беременных женщин (табл 2) Кроме того, можно использовать модифицированную нами методику для изучения влияния адренергических веществ на агрегацию эритроцитов

Таблица 2

Показатели индуцированной алциановым голубым агрегации эритроцитов (М±т) у небеременных женщин (группа 1), женщин с физиологическим течением беременности (группа 2) и женщин с гестозом легкой (группа 3) и

Показатели Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4

п=50 п=61 п=52 п=50

Срок гестации, нед - 36,1±0,4 35,8±0,3 35,8±0,5

Возраст, лет 26,3±1,3 26,6±0,6 26,5±0,7 26,8±0,8

Средний радиус эритроцитарных агрегатов, уел ед 9,9±0,4 12,5±0,5' 15,5±0,3М го^о^1*2"3

Время достижения максимального радиуса, с 155,5±8,3 138,8±6,6 172,8±8,8' 161,4±8,6

Максимальный наклон кривой СРЭА, уел ед/мин 10,4±0,3 12,4±0,3' 14,5±0,5'-1 16,7±0,61А1

Время достижения максимального наклона кривой СРЭА, с 75,7±6,0 78,3±5,3 78,1±5,1 78,2±6,0

Максимальное светопропускание, % 20,8±0,5 38,1±1,1' 52,0±1,11'1 74,8±2,51"г'*

Время достижения МС, с 314,6±10,7 346,1±11,9 345,1±13,9 346,9±18,9

Максимальный наклон кривой МС, %/мин 9,2±0,5 16,1±0,7' 23,0±0,81"' 27,9±0,81А'1

Время достижения максимального наклона кривой МС, с 146,1±9,0 136,8±7,5 131,4±8,1 130,8±7,5

Стьюдента (Ч) с поправкой Бонферрони для множественных сравнений (Гланц С, 1999)

4. Влияние адренергических веществ на агрегацию эритроцитов. Оно

было изучено в двух вариантах - при отсутствии и при наличии алцианового голубого как индуктора агрегации

4.1 Эффекты адренсргических веществ в отсутствии алцианового голубою Установлено, что адреналин (10"9-10"6 г/мл), пропранолол (10-1 (Г г/мл) и ницерголин (109-10"6 г/мл), а также адреналин (10 6 г/мл) совместно с пропранололом (10'9-10"6 г/мл) или ницерголином (Ю'МО"6 г/мл) не влияли на АЭ во всех четырех группах Частично это отражено в таблице 3, в которой приведены показатели СРЭА и МС при использовании адренергических веществ в концентрации 10 9 г/мл Эти результаты дают основание считать, что адренергические средства (10"9-10б г/мл) в условиях физиологического раствора и отсутствии АГ не повышают АЭ

4 2 Влияние адреналина на индуцированную алциановым голубым агре1ацию эритроцитов. Установлено, что адреналин, судя по МС дозозависимо снижает АГ- индуцированную АЭ у женщин всех четырех групп (рис 1, табл 4) Показано, что антиагрегантный эффект адреналина (109, 108 и 107 г/мл) у здоровых беременных женщин и у женщин с гестозом легкой степени тяжести такой же как у небеременных женщин, а у женщин с гестозом средней степени тяжести он существенно ниже, чем у женщин всех остальных групп (табл 4) Так адреналин в концентрации 10"9 г/мл снижал МС в группах 1, 2, 3 и 4 соответственно до 57,8%, 56,3%, 66,0% и 92,5 % от контрольных значений Это указывает на снижение у беременных с гестозом средней степени тяжести адренореактивности эритроцитов

Рис 1 Показатели АГ- индицированной агрегации эритроцитов под влиянием адреналина (А) в группе 1 (п=10), группе 2 (п=14) и группе 3 (п=10) и группе 4 (п=10) По оси абсцисс -отрицательный десятичный логарифм концентрации, по оси ординат панель А-максимальное светопропускание, %, панель Б - средний радиус эритроцитарных агрегатов

Результаты наших исследований не подтвердили данные, полученные на автоматическом анализаторе агрегации в условиях в трис-НС1-буфере Иханходжаевым Т М и др (1992), согласно которым адреналин не влиял на АГ-индуцированную АЭ здоровых доноров В то же время, они согласуются с сообщениями о снижении под влиянием адреналина СОЭ у мужчин и небеременных женщин (Минеев В Н , 1993, Геворкян Н А , 1995, Гусева Е В , 1998, Бондарчук В В и др, 2000, 2004, Рабик ЮД, 2006), а также у беременных женщин (Гусева Е В , 1998, Бабин А П , и др , 2006)

Мы полагаем, антиагрегантный эффект адреналина обусловлен активацией адренорецепторов Снижение эффективности активации АР у женщин с гестозом средней степени тяжести может быть обусловлен изменением возрастного состава эритроцитов (Новиков С А и др, 1983, Анастасьева НВ и др, 1985, Сидорова И С и др, 1994, НеПшапп Ь ег а!, 2004), деструктивными изменениями мембраны, вследствие активизации ПОЛ (М1кае1уап Ы, 2001, НЬап N е1 а1, 2002), явлениями десенситизации адренорецепторов в условиях длительнотекущей патологии (Стрюк И Р, Длусская И Г , 2003, Сидельникова В М , Шмаков Р Г , 2004, Тихомирова И А , 2006) Результаты исследований, представленные ниже, показывают, что это может быть следствием увеличения эффективности РгАР, при активации которых АЭ возрастает

Таблица 4

Максимальное светопропускание (в % к контролю, М±т) АГ-индуцированной агрегации эритроцитов небеременных женщин (группа 1), здоровых беременных (группа 2), беременных с гестозом легкой (группа 3) и средней

Показатели Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Различия, р<0,05

п=10 п=14 п=10 п=10

Срок гестации, нед - 37,8±0,5 35,4±0,7 36,0±1,2 -

Адреналин, 104 г/мл 57,8±4,0* 56,3±4,1* 66,0±5,2* 92,5±8,3 4-1,2,3

Адреналин, 10 8 г/мл 47,3±4,1* 56,1±4,2* 51,4±4,8* 72,9±5,8* 4-1,3

Адреналин, 10 ' г/мл 41,9±4,0* 42,5±2,8* 50,6±3,8* 57,3±3,6* 4-1,2

Адреналин, 106 г/мл 33,0±3,2* 35,0±2,8* 42,3±3,6* 32,0±2,8* -

Различия, р<0 05 9-7,6 9,8-7,6 9-6 6-7,8

Примечание '-различие с контролем достоверно, 1,2,3- различие с соответствующими группами достоверно (р<0,05) по критерию Стьюдента с поправкой Болферрони (р<0,05)

4.3 Влияние пропранолола на индуцированную алциановым голубым агрегацию эритроцитов. Судя по изменению МС, СРЭА, максимального наклона кривой МС и СРЭА, времени достижения максимального наклона кривой МС и СРЭА, пропранолол (10"9-106 г/мл) снижает АГ-индуцированную АЭ у женщин всех четырех групп (рис 2, табл 5)

При этом снижение АГ- индуцированной АЭ под влиянием пропранолола у здоровых беременных, а также у женщин с гестозом легкой и средней степени тяжести было более выраженным, чем у небеременных (10"9-10"6 г/мл), а у беременных с гестозом легкой степени тяжести - выше, чем у здоровых беременных (10~8, Ю-7 и 10"6 г/мл) Например, снижение МС в концентрации пропранолола 10 8 г/мл в группах 1, 2 ,3 и 4 соответсвенно составило 72,9%, 51,0%, 30,8% и 34,9% от контроля (табл 5) Все это отличает эффект пропранолола от эффекта адреналина в отношении АГ-индуцированной АЭ

Наши результаты согласуются с данными литературы, свидетельствующими о снижение под влиянием обзидана СОЭ у мужчин и небеременных женщин (Минеев В Н , 1993, Геворкян Н А , 1995, Гусева ЕВ и др , 1998, Бабин А П , и др , 2006), значительном ее снижении у беременных женщин и, особенно, у женщин с гестозом (Гусева ЕВ и др , 1998, Бабин А П, и др, 2006) Кроме

того, наши данные частично согласуются с результатами исследования Козловского В И (1993), который, обнаружил, что терапия обзиданом больных ИБС у 48,8% пациентов снижает АЭ, хотя у 28% она вызывает рост АЭ

(П) в группе 1 (п=10), группе 2 (п=17), группе (п=11) и группе 4 (п=10) По оси абсцисс -отрицательный десятичный логарифм концентрации П, по оси ординат панель А-максимальное светопропускание, %, панель Б - средний радиус эритроцитарных агрегатов

Пропранолол как блокатор Р-АР, не должен был влиять на АГ-индуцированную АЭ, но результаты исследования говорят об обратном Это позволяет нам считать, что в отсутствии адреналина пропранолол проявляет Р-адреномиметическое действие В то же время не исключается, что выявленный антиагрегантный эффект пропранолола является неспецифическим, те не связанным с активацией Р-АР, а обусловлен его мембраностабилизирующим и активирующим АОС действием Эти эффекты описаны в литературе (Кукес В Г 1989, 2004, Минков И П 1991, Minkov IP, 1992, Крутецкая 3 И и др , 1994, Мак I Т , et al, 1994, Tymofieiev V V et al, 1997, Adah M et al, 1999)

Таблица 5

Максимальное светопропускание (в % к контролю, М±т) АГ-индуцированной агрегации эритроцитов небеременных женщин (группа 1), здоровых беременных (группа 2), беременных с гестозом легкой (группа 3) и средней

Показатели Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Различия, р<0,05

п=10 п=17 п=11 п=10

Срок гестации, нед 35,5±0,8 36,6±0,7 35,1±0,9 -

Пропранолол, 10 7 г/мл 77,8±7, 51,7±4,9* 35,3±3,4* 38,0±3,4* 1-2,3,4,

Пропранолол, 10 "г/мл 72,9±6,8* 51,0±5,1* 30,8±2,9* 34,9±3,1 * 1-2,3,4,2-3

Пропранолол, 10 ' г/мл 62,0±5,4* 42,1 ±4,0* 20,8±2,0* 30,8±2,6* 1-2,3,4,2-3

Пропранолол, 10 "г/мл 55,7±4,7* 35,7±2,6* 17,2±1,8* 26,7±2,9* 1-2,3,4,2-3

р<0,05 - 9-6 9,8-7,6 9-6

Примечание '-различие с контролем достоверно, 1,2,3- различие с соответствующими I руипами достоверно (р<0,05) по критерию Стьюдента с поправкой Бонферрони (р<0,05)

Считается, что благодаря мембраностабилизирующему действию пропранолол повышает осмотическую (Соминский ВН и др, 1981, Чекман И С и др, 1985, Стрюк и др 2003) и механическую (Окна У, е1 а1, 1991) резистентность эритроцитов

Мы приходим к выводу, что антиагрегантный эффект пропранолола является двухкомпонентым Один компонент обусловлен его р-адреномиметическим влиянием, что характерно для низких концентраций (10~9 г/мл), а второй - неспецифическим, мембраностабилизирующим действием, которое более характерно для высоких (107 и 10"6 г/мл) концентраций пропранолола С этих позиций становится понятным рост антиагрегантного эффекта пропранолола у беременных женщин и женщин с гестозом Так как известно, что при беременности и, особенно, при ее осложнении гестозом возрастает интенсивность ПОЛ в эритроцитах (Шалина РИ и др, 1989, Микаялян Н П и др , 1997, Линева О И и др , 1998, Аккер Л В и др , 2000, М1кае1уап № й а1, 2001, ПЬап N й а1, 2002) С другой стороны можно предположить, что повышение ПОЛ при беременности, особенно при наличии гестоза, само по себе может повышать АГ-индуцированную агрегацию эритроцитов Действительно, данные ряда авторов показывают, что повышение ПОЛ индуцирует процесс агрегатообразования эритроцитов (Ройтман Е В , 2001, Ва5кш1 О е1 а1 2003, Ыеи В Й а!, 2003, Рязанцева НВ и др , 2004, Степовая Е А и др , 2004) и одновременно ведет к появлению патологических форм эритроцитов (НеПшапп Ь , 1994, Шифмана Е М 2002, Сидорова И С, 2003, Впопе5-Оагс1ио 1С й а1, 2003), что также повышает степень агрегации эритроцитов (Чернух А М и др 1981, Левин Г Я и др , 1982, ВегЬг^ С е1 а1, 1989, Рязанцева Н В и др , 2003, Bagch^ Р е1 а1, 2005)

4 4 Влияние ницерголина на индуцированную алциановым голубым агрегацию эритроцитов. Установлено, что ницерголин снижает АГ-индуцированную АЭ у женщин всех четырех групп

Рис 3 Показатели АГ- индуцированной агрегации эритроцитов под влиянием ницерголина (Н) группе 1 (п=10), группе 2 (п=10), группе 3 (п=10) и группе 4 (п=10) По оси абсцисс -отрицательный десятичный логарифм концентрации Н, по оси ординат панель А-максичальное светопропускание, %, панель Б - средний радиус эритроцитарных агрегатов

Это установлено по изменению МС (рис 3, табл 6), СРЭА (рис 3), максимального наклона кривых МС и СРЭА, времени достижения максимального наклона кривых МС и СРЭА Снижение АГ-индуцированной АЭ под влиянием ницерголина у групп 2,3,4 было более выраженным, чем у группы 1, но это установлено достоверно лишь для высоких концентраций 10"7 и 10'6 г/мл (группа 3) и 10"6 г/мл (группы 2 и 4) (табл 6) Так, при действии ницерголина в концентрации 10"6 г/мл МС в группах 1,2,3 и 4 составило соотвественно 58,0%, 39,0%, 34,7% и 32,2% от контроля (табл 6) В низких концентрациях (109 и 10"8 г/мл) ницерголин оказывал одинаковое воздействие на АГ-индуцированную АЭ во всех группах (табл 6) Все это оличает эффект ницерголина от эффекта адреналина и пропранолола в отношении АГ-индуцированной АЭ

Наши результаты согласуются с данными литературы о снижении СОЭ беременных женщин под влиянием блокатора а,-АР празазина в концентрациях 10"'4-10"6 г/мл (Гусева ЕВ , 1998) и ницерголина в концентраиях Ю"10-Ю5 г/мл (Бабин А П и др, 2006) Полагаем, что антиагрегантный эффект ницерголина, как и эффект пропранолола, является двухкомпонентным Один компонент отражает проявление его а-адреномиметического эффекта (низкие концентрации -10"9 и 10"8 г/мл), а второй - неспецифического, мембраностабилизирующего действия (10" и 10"6 г/мл), который ранее описан Рга^Бигоуа Б й а! (1995) и Сопи Т й а1 (1997)

Таблица 6

Максимальное светопропускание (в % к контролю, М±т) АГ-индуцированной агрегации эритроцитов небеременных женщин (группа 1), здоровых беременных (группа 2), беременных с гестозом легкой (группа 3) и средней

Показатели Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Различия, р<0,05

п=10 п=10 п=10 п=10

Срок гестации, нед 36,4±0,9 35,8±0,8 35,3±1,4 -

Ницерголин, 10 4 г/мл 60,1±5,5* 73,8±7,0* 66,2±5,7* 65,9±6,1* -

Ницерголин, 10 8 г/мл 59,4±5,2* 66,9±6,2* 55,9±4,8* 54,9±5,0* -

Ницергочин, 10 ' г/мл 58,9±5,9* 53,6±5,0* 39,0±3,5* 42,1 ±4,0* 1-3

Ницергочин, 10"й г/мл 58,0±5,6* 39,0±3,4* 34,7±2,9* 32,2±3,2* 1-2,3,4

р<0,05 - 6-9,8 9,8-7,6 9-7,6, 8-6

Примечание '-различие с контролем достоверно, 1,2,3- различие с соответствующими группами достоверно (р<0,05) по критерию Стьюдента с поправкой Бонферрони (р<0,05)

В целом, результаты наших исследований позволяют заключить, что при исследовании роли а-АР и (3-АР в процессах агрегации эритроцитов адреноблокаторы следует использовать в низких концентрациях, при которых их мембраностабилизирующий эффект минимален

4.5 Влияние пропранолола на антнагрегантное действие адреналина в условиях индуцированной алциановым голубым агрегации эритроцитов

У небеременных женщин пропранолол (10"9, 10"8, 10"7 и 10"6 г/мл) не влиял на эффект адреналина Так, адреналин (10"6 г/мл) снижал МС до 33,0±3,2% от контроля (в отсутствии пропранолола), а при наличии в среде блокатора (10 9, 10"8, 10"7 и 10~6 г/мл) он в этой же концентрации (те 10"6 г/мл) снижал МС соответственно до 38,0±3,3%, 37,9±3,4%, 38,1±3,9% и 38,1±3,8% от контроля Эти значения не отличались от МС, наблюдаемого при изолированном действии адреналина (10 6 г/мл) (рис 5А)

В тоже время у здоровых беременных женщин пропранолол снижал антиагрегантный эффект адреналина (10 6 г/мл) при его применении в низких (10 9, 108 г/мл) концентрациях и не влиял на него в высоких (10'7 и 10 6 г/мл) концентрациях (рис 5А) Так, адреналин (10 6 г/мл) в отсутствии пропранолола снижал МС до 35,0±2,8% от контроля, а при наличии в среде пропранолола (10" 9, 10~8, 10"7 и 10"6 г/мл) адреналин снижал ее соответственно до 56,0±5,0%, 52,1 ±4,8%, 40,2±4,0% и 36,6±3,5% от контроля

У беременных женщин с гестозом легкой степени тяжести пропранолол в концентрации 10 9 г/мл не влиял на антнагрегантное действие адреналина (Ю-6 г/мл), а в концентрациях 10"8, 10"7 и 10"6 г/мл усиливал его Так, в отсутствии пропранолола адреналин (Ю-6 г/мл) снижал МС до 42,3±3,6% от контроля, а при наличии в среде пропранолола (10 9, 10 8, 10"7 и 10"6 г/мл) адреналин вызывал снижение МС соответственно до 36,1±3,2%, 32,2±2,8%, 22,3±2,1%, и 18,8±1,8% от контроля

У беременных женщин с гестозом средней степени тяжести пропранолол (109 - 10"6 г/мл) не влиял на эффект адреналина (10"6 г/мл) Так, в отсутствии пропранолола адреналин (Ю-6 г/мл) снижал МС до 32,0±2,8% от контроля, а при наличии пропранолола (109, 10"\ 10"7 и 10"6 г/мл) адреналин снижал МС соответственно до 36,1±3,5%, 32,2±3,0%, 30,1±2,5% и 25,8±2,4% от контроля

Таким образом, установлено, что пропранолол в относительно низких концентрациях (10"9 и 10"8 г/мл) препятствует антиагрегантному действию адреналина и это обусловлено блокадой Р-АР В более высоких концентрациях пропранолол оказывает мембраностабилизирующее действие, что не позволяет ему проявить блокирующее действие в отношении антиагрегантного эффекта адреналина По нашему мнению, отсутствие блокирующего эффекта пропранолола у небеременных женщин обусловлено низким содержанием Р-АР или низкой эффективностью их активации, либо высоким сродством Р-АР к адреналину Так как у беременных женщин пропранолол снижает действие адреналина, мы полагаем, что у них вклад Р-АР (скорее всего р2-АР) в антиагрегантный эффект адреналина возрастает При гестозе легкой степени эффективность активации Р-АР (скорее всего Рг-АР) снижена, поэтому пропранолол в концентрации 10"9 г/мл не влияет (как это имело место у здоровых беременных) на эффект адреналина Усиление антиагрегантного действия адреналина под влиянием высоких концентраций пропранолола, вероятно, обусловлено наличием мембраностабилизирующего действия

блокатора. При гестозе средней степени эффективность активации (3-АР (скорее всего (33-АР) снижена, поэтому пропранолол 8 концентрации 10"9 г/мл не снижает эффект адреналина. Не исключено, что в более высоких концентрациях пропранолол смог бы препятствовать этому эффекту, но наличие у него мембраностабилизирующего действия не дает возможность это выявить.

Рис 5. Показатели АГ-тщуцированной алциановым голубым агрегации эритроцитов при инкубации с адреналином и концентрации КРг/мл (А6) м н

последовательной прсинкубацим пропрано.чолом (гганоль А) в концентрациях ГО"9, 10 я, 10'7, 10 г/мл (119, пЩ;П7, по) и адреналином 10''г/мл (А6); последовательной прейнкубакин ницер голи ком (панель Б) в концентрациях 10', 10". Ю"7, 10"* г/мя (Н9, И8. Н7, Н6) и адреналином 1 г/мл (А6) в группе 1,2,3 и 4. По оси абсцисс- крупны сравнения;по оси ординат панели А и Б-МС\ процент к контролю. - -различия с адреналином 10 г/мл достоверны (р<0,05) ___

I ЯА-6 ЕЗПЭ+Ай а ПЗ+АЬ О П7+АЬ □ ~|

-м 'м'.м:и......^ ■ беременные гес*и легкой гестоз средней

ТЛЖВСТН СТ^ПРННтяжести

Результаты наших исследований согласуются с данными ряда авторов (Бабин А.П. и др., 2006; Тихомирова И.А,, 2006) об отсутствии блокирующего действия яропранелола г/мл) на эффекты адреналина в отношении

эритроцитов небеременных женщин, очевидно, это обусловлено его мембраностабилидирующим эффектом,

4.6 Влияние ннцерголина на антиагрегантное действие адреналина в условиях индуцированной алциановым голубым агрегации эритроцитов.

Установлено, что у небеременных женщин ницер голи н (10; - 10"6 г/мл) не влиял на антиагрегантное действие адреналина (10"ь г/мл). Так, адреналин (1 г/мл) в отсутствии нииерголииа снижал !ИС до 33 $±3,2% от контроля, а при наличии нкцерголина Ш"6, Ю" « Ю-" г/ми) адреналин (Ю-6 г/мд) снижал

МС соответственно до 37,8±3,5%, 37,0±3,3%, 31,0±2,6% и 30,1±2,9% от контроля(рис 5Б)

У здоровых беременных женщин ницерголин в низких концентрациях (10"9 и 108 г/мл) снижал антиагрегантное действие адреналина (10 6 г/мл), а в высоких (107 и 10"6 г/мл) - не влиял на него Так, адреналин (106 г/мл) в отсутствии ницерголина снижал МС до 35,0±2,8% от контроля, а при наличии ницерголина (10"9, 10"8, 10 7 и 10"6 г/мл) адреналин снижал МС соответственно до 65,2±5,7%, 62,7±5,3%, 34,2±3,0% и 32,1±3,3% от контроля (рис 5Б)

У женщин с гестозом легкой степени тяжести ницерголин только в концентрации 109 г/мл частично блокировал антиагрегантное действие адреналина (10 6 г/мл) Так, в отсутствии ницерголина адреналин снижал МС до 42,3±3,6% от контроля, а при наличии блокатора (10"9, 10"8, 10"7 и 10'6 г/мл) он снижал МС соответственно до 60,2±4,8%, 49,5±3,1%, 49,1±3,1%, и 41,3±2,9% от контроля (рис 5 Б)

У женщин с гестозом средней степени тяжести ницерголин в концентрациях 10~9, 10"8, 10"7 блокировал антиагрегантный эффект адреналина (10"6 г/мл) Установлено, что в отсутствии ницерголина адреналин снижал МС до 32,0±2,8% от контроля, а при наличии этого блокатора (109, 10~8, 10"7 и 10"6 г/мл) он снижал МС соответственно до 95,1±6,8%, 73,0±6,0%, 60,2±5,5% и 29,1 ±2,4% от контроля

Таким образом, показано, что ницерголин в относительно низких концентрациях (10"9 и 10"8 г/мл) препятствует антиагрегантному действию адреналина, что, вероятно, обусловлено блокадой а-АР В более высоких концентрациях появляется мембраностабилизирующее действие ницерголина, которое не позволяет проявиться блокирующему влиянию в отношении антиагрегантного эффекта адреналина

У небеременных женщин отсутствие блокирующего эффекта ницерголина мы объясняем низким содержанием а-АР, или низкой эффективностью их активации, либо высоким сродством к адреналину При беременности вклад а-АР в антиагрегантный эффект адреналина возрастает, так как блокада а-АР у здоровых беременных женщин препятствует способности адреналина угнетать АЭ При гестозе легкой степени тяжести популяция а-АР сохраняются, так как при блокаде ницерголином антиагрегантное действие адреналина снижается, причем почти в такой же степени, как у здоровых При гестозе средней степени тяжести, вероятно, эффективность активации а-АР такая же, как у здоровых, а РрАР - намного выше, поэтому на фоне блокады а-АР ницерголином наблюдается выраженное уменьшение антиагрегантной способности адреналина В тоже время, очевидно, что и при средней степени тяжести гестоза сохраняются Рз-АР, иначе бы на фоне ницерголина адреналин вызывал бы стимуляцию АГ-индуцированной АЭ

4.7. Обсуждение результатов исследования (рабочая гипотеза)

Результаты исследований позволяют утверждать, что эритроциты небеременных женщин, здоровых беременных женщин и беременных с гестозом легкой и средней степени тяжести содержат а-АР и ß-AP, при активации которых изменяется их агрегационная способность

При активации а-АР (арАР и а2-АР) адреналином происходит снижение агрегации эритроцитов, так как ницероглин в низких концентрациях блокирует антиагрегационный эффект При активации ß-AP (вероятно, ß2-AP) также происходит снижение АЭ, так как пропранолол в низких концентрацях блокирует антиагрегационный эффект адреналина

На основаниии сопоставления результатов исследования влияния адреналина и адреноблокаторов а-АР (ницерголина) и ß-AP (пропранолола), а также влияния этих блокаторов на эффекты адреналина, мы приходим к выводу о том, что популяция ß-AP в эритроцитах неоднородна Она, вероятнее всего, представлена популяцией ßi-AP и ß2-AP, активация которых приводит к разному по направленности эффекту - при активации ß,-AP агрегация эритроцитов возрастает, а при активациии ß2-AP, она снижается Кроме того, сопоставление этих данных также дает основание считать, что эффективность активации различных АР меняется при беременности, а также при ее осложении гестозом

Очевидно, что у небеременных женщин содержание всех видов адренорецепторов относительно невысокое или эффективность их активации снижена, либо они обладают большим сродством к адреналину По этой причине, а также в связи с наличием у адреноблокаторов (пропранолола и ницерголина) выраженного мембранотропного эффекта им не удается заблокировать способность адреналина проявлять антиагрегантное действие

В III триместре неосложненного течения беременности в эритроцитах матери эффективность активации ß2-AP и а-АР выше, чем у небеременных женщин, а эффективность акативации ßi-AP ниже, чем у небеременных, хотя оно остается на достаточном высоком уровне, т к суммарный эффект активации этих рецепторов адреналином такой же, как у небеременных женщин На изменение соотношения различных популяций АР при беременности указывает тот факт, что блокада Р-АР (пропранололом) и а-АР (ницерголином) эритроцитов беременных женщин снижает способность адреналина уменьшать АГ-индуцированную АЭ Результаты наших исследований подтверждают данные литературы (Гусева ЕВ, 1998, Бабин А П и др, 2006) о повышении Р-адренореактивности эритроцитов при физиологически протекающей беременности

У женщин с гестозом легкой степени тяжести при сохранении эффективности активности активации а-АР меняется эффективность активации р-АР, в частности, снижается эффективность активации ß2-AP и возрастает эффективность активации ßpAP Об этом свидетельствует тот факт, что антиагрегантный эффект адреналина при гестозе легкой степени снижается

При гестозе средней степени тяжести, вероятно, также эффективность активации а-АР не меняется, т е она такая же, как у здоровых, а эффективность

активации ßrAP возрастает еще в большей степени, чем при гестозе легкой степени тяжести Об этом свидетельствуют следующие факты 1) существенное снижение у женщин с гестозом средней степени тяжести антиагрегантного влияния адреналина, 2) отсутствие блокирующего действия пропранолола на антиагрегантный эффект адреналина, 3) выраженное блокирующее влияние ницерголина на антиагрегантный эффект адреналина

В целом, наша гипотеза совпадает с представлениями Яговкиной Н В (2006) Она установила увеличение содержания/активности ßpAP и снижении содержания/активности ß2-AP в III триместре физиологически протекающей беременности и при гестозе средней степени тяжести Наша гипотеза согласуется и с точкой зрения Хлыбовой С В (2007), которая установла, что при беременности в нейтрофилах возрастает эффективность активации ß2-AP, а при гестозе повышается эффективность активации ß,-AP С учетом данных литературы и результатов наших исследований, полагаем, что изменение адренореактивности форменных элементов крови у беременных с гестозом влияет на их функциональное состояние и приводит к усилению тромбообразования, ухудшению реологии крови и тканевой перфузии, снижает иммунологическую толерантность матери к плоду С этих позиций рост эффективности активации ßrАР в клетках крови, включая эритроциты, можно рассматривать как причину изменений реологии, микроциркуляции и гемодинамики при гестозе средней степени тяжести

Выводы

1 Метод Спасова А А и др (2000) в нашей модификации позволяет, используя анализатор агрегации НФП «Биола», оценить индуцированную алциановым голубым агрегацию эритроцитов и их адренореактивность у небеременных и беременных женщин

2 Алциановый голубой (АГ) повышает агрегацию эритроцитов, находящихся в физиологическом растворе Степень АГ-индуцированной агрегации эритроцитов (АЭ) у женщин с неосложненной беременностью (III триместр) выше, чем у небеременных, а у женщин с гестозом - выше, чем у здоровых беременных

3 Адреналин, ницерголин и пропранолол (Ю"9- 10"6 г/мл) не усиливают агрегационную способность эритроцитов небеременных, здоровых беременных женщин и беременных с гестозом в условиях физиологического раствора и отсутствии алцианового голубого

4 Адреналин снижает АГ-индуцированнную агрегацию АЭ женщин Антиагрегантный эффект адреналина у здоровых беременных и у беременных с гестозом легкой степени тяжести такой же, как у неберемен'ных женщин, а у женщин с гестозом средней степени тяжести он снижен

5 Антиагрегантный эффект адреналина (10"6 г/мл) может быть уменьшен адреноблокаторами, при их использовании в низких (10"9 и 10~8 г/мл) концентрациях При этом пропранолол блокирует эффект адреналина лишь у здоровых беременных, а ницерголин - у здоровых беременных и у беременных с гестозом, особенно со средней степенью тяжести

6 В высоких концентрациях (10 7 и 10"6 г/мл) адреноблокаторы сами по себе проявляют антиагрегантное действие (особенно выраженое у беременных с гестозом легкой степени тяжести), которое объясняется их мембранстабилизирующим действием

7 Эритроциты содержат а-АР, РгАР и р2-АР, при этом активация а-АР и Рз-АР снижает АГ - индуцированную агрегацуию эритроцитов, а активация рг АР - повышает ее При физиологической беременности возрастает эффективность ' активации всех АР, следствием чего антиагрегантная способность адреналина сохраняется на уровне, характерном для небеременных женщин При гестозе эффективность активации а-АР не меняется, эффективность активации р2-АР снижается, а эффективность активации РгАР возрастает, что ведет к снижению антиагрегантного эффекта адреналина

Практические рекомендации

1 Рекомендуется использовать модифицированный нами метод Спасова А А и соавторов (2000) по определению агрегации эритроцитов на лазерном агрегометре НПФ «Биола» для изучения индуцированной алциановым голубым агрегации эритроцитов и их адренореактивности у беременных женщин с целью оценки степени тяжести гестоза и эффективности его лечения

2 Рекомендуется при разработке вопросов патогенеза, профилактики и лечения гестоза учитывать представления о роли р-АР и а-АР в формировании данной акушерской патологии

3 Патогенетически оправдано (при увеличении Р-адренореактивности эритроцитов) применение р-адреноблокаторов в комплексной терапии гестоза

4 Учитывая, что ницерголин и пропранолол в высоких концентрациях (10"7 и 10"6 г/мл) проявляют неспецифический мембраностабилизирующий эффект, при изучении адренореактивности эритроцитов рекомендуется их использовать в более низких концентрациях (10"9 и 10"8 г/мл), при которых их мембраностабилизирующий эффект минимален

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Трошкина Н А , Ивашкина Е П Влияние пропранолола на агрегацию эритроцитов у небеременных и у женщин с неосложненной и осложненной гестозом беременностью // Физиология человека и животных от эксперемента к клинической практике Тезисы докладов V молодежной научной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН - Сыктывкар, 2006 - С 97-99

2 Бабин А П , Трошкина Н А , Гусева Е В Влияние альфа - и бета-адренергических средств на скорость оседания эритроцитов беременных женщин // Физиология человека и животных от эксперимента к клинической практике: Тезисы докладов V молодежной научной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН - Сыктывкар, 2006 - С 108-110

3 Трошкина Н А , Ивашкина Е П , Циркин В И , Дворянский С А Изменение агрегационных свойств и адренореактивности эритроцитов у беременных с гестозом // Сборник научных работ «Здоровье ребенка - здоровье нации» -2006 - С 42-43

4 Ивашкина Е П , Трошкина Н А , Циркин В И , Дворянский С А Модификация методики А А Спасова и соавт по изучению агрегации эритроцитов на лазерном агрегометре «Биола» // Клиническая лабораторная диагностика -2006 - № 9 - С 53

5 Трошкина Н А , Ивашкина Е П , Циркин В И , Дворянский С А Влияние блокады Р-адренорецепторов на агрегацию эритроцитов у небеременных и беременных (в том числе при наличии гестоза) // Успехи современного естествознания - 2006 -№ 9 -С 90-91

6 Трошкина Н А , Циркин В И , Дворянский С А , Ивашкина Е П Оценка влияния адренергических веществ на агрегацию эритроцитов при физиологически протекающей и осложненной гестозом беременности // Материалы первого регионального научного форума «Мать и дитя» -Казань, 2007 -С 157-158

7 Трошкина Н А , Циркин В И , Дворянский С А , Ивашкина Е П Оценка адренореактивности эритроцитов небеременных и беременных женщин с физиологически протекающей и осложненной гестозом беременностью // Пермский медицинский журнал Приложение «Проблемы репродуктивного здоровья и безопасное материнство» - 2007 -Т XXIV, № 1-2 -С 140-145

8 Трошкина Н А , Циркин В И , Дворянский С А , Ивашкина Е П Оценка адренореактивности эритроцитов по влиянию адренергических веществ на их агрегационную способность при физиологически протекающей и осложненной гестозом беременности // Вопросы трансфузиологии и клинической медицины Материалы научно-практической конференции молодых ученых - Киров КНИИиГП, 2007 - С 130-132

9 Трошкина Н А , Циркин В И , Дворянский С А Эритроцит строение и функции его мембраны (обзор литературы) // Вятский медицинский вестник -2007-№ 1 - С 17-21

10 Трошкина НА, Дворянский С А, Циркин В И, Ивашкина ЕП Применение модифицированного метода Спасова А А и соавт (2000) для оценки агрегации эритроцитов и их адренореактивности Информационное письмо для врачей акушеров-гинекологов - Киров Кировская ГМА, 2007 -16 с

Список сокращений:

АГ - алциановый голубой

АОС-антиоксидантная система

АР - адренорецепторы

АРИМ-адреноингибирующий механизм

АЭ - агрегация эритроцитов

МС- максимальное светопопускание

ПОЛ- перекисное окисление липидов

СОЭ-скорость оседания эритроцитов

СРЭА - средний радиус эритроцитарных агрегатов

Отпечатано в типографии Кировской ГМА г Киров, ул К Маркса, 112 Заказ 393 Тираж 100 экз