Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Аденилатциклаза печени крыс рвннего онтогенеза при действии ионизирующей радиации

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ушакова, Татьяна Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. Актуальность темы.

2. Цель и задачи исследования.

3. Научная новизна работы

4. Теоретическая и практическая ценность работы . 7 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА АДШМТЦИКЛАЗЫ (Ац)

1.1. Локализация аденилатциклазной системы в клетке

1.2. Каталитическая единица Ац комплекса (с )

1.3. Рецелторная единица Ац комплекса (R ).II

1.4. Регуляторная единица Ац комплекса ( N -белок)

1.5. Регуляция Ац липидами.

1.6. Роль цитоплазматических факторов в регуляции Ац

1.7. К механизму гормональной регуляции Ац.

Глава 2. РАЗВИТИЕ Ац КОМПЛЕКСА.

Глава 3. ВЛИЯНИЕ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА Ац СИСТЕМУ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Условия облучения.

2. Выделение мембранной фракции печени крысы

3. Выделение плазматических мембран

4. Выделение митохондрий.

5. Выделение цитоплазматических факторов.

6. Определение активности Ац

7. Определение активности цАМФ фосфодиэстеразы (цАМФ ФДЭ).

8. Определение активности Ме2+АТФ-азы

9. Определение активности б^нуклеотидазы

10. Определение ^-адренергических рецепторов

11. Определение белка

12. Определение концентрации растворов Mgci2 и СаС

13. Радиометрические измерения

14. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава I. АКТИВНОСТЬ АДЕНШ1АТ1ЩКЛАЗЫ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ

В ОНТОГЕНЕЗЕ.

1.1. Исследование активности Ац печени крысы в норме

1.2. Исследование Ац печени крысы при действии ионизирующего излучения

Глава 2. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМА АКТИВАЦИИ Ац ПЕЧЕНИ ПЛОДА

КРЫСЫ ПРИ ДЕЙСТВИИ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ

2.1. Непрямое действие Jf-облучения на активность

Ац печени плода крысы

2.2. Вклад митохондриальной фракции в радиационном изменении активности Ац

2.3. Вклад цитоплазматических факторов в радиационном изменении активности Ац.

Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ПОВРЕЖДАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ВЫСОКИХ ДОЗ

ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА АКТИВНОСТЬ Ац ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ МЕМБРАН ПЕЧЕНИ КРЫСЫ РАННЕГО ОНТОГЕНЕЗА

3.1. Состояние Ац комплекса при облучении изолированных плазматических мембран в высоких дозах

3.2. К вопросу о возможных механизмах угнетения гормон-стимулированной активности Ац при действии высоких доз ионизирующего излучения в условиях in vitro

Введение Диссертация по биологии, на тему "Аденилатциклаза печени крыс рвннего онтогенеза при действии ионизирующей радиации"

I. Актуальность теш. В развитии и формировании радиационного эффекта в клетке немалую роль отводят нарушению свойств ее мембран. В настоящее время в литературе обсуждается вопрос о степени и характере повреждения мембран при действии ионизирующего излучения (Кузин A.M., Павловская Т.Е., 1973; Волкова М.С. с соавт., 1979; Дурлакова Е.Б., Шишкина Л.Н., 1983; Павловская Т.Е. с соавт., 1983).

Первостепенное значение приобретает исследование влияния ионизирующего излучения на регуляторные свойства биомембран, на изменение активности мембраносвязанных ферментов, в первую очередь. С конца 60-х, начала 70-х годов пристальное внимание привлечено к аденилатциклазе /АТФ-пирофосфат-лиаза (циклизующая), КФ 4.6.1.1./ - интегральному белковому комплексу плазматических мембран. Благодаря этому ферменту плазматическая мембрана воспринимает внешний сигнал и трансформирует его в клетку в виде универсального регулятора многих биохимических процессов - циклического 3,' 5'-аденозинмонофосфата - цАМФ.

Согласно структурно-метаболической теории A.M.Бузина, нарушение метаболизма играет важную роль в проявлении радиобиологического эффекта (Кузин A.M., 1970; Кузин A.M., 1976). Это объясняет повышенный интерес к проблеме циклических нуклеотидов при действии ионизирующего излучения. Многочисленными исследованиями показаны изменения в уровне цАМФ в разных тканях при радиационном воздействии. Выясняются причины этих изменений, в связи с чем исследуют состояние ферментов метаболизма цАМФ - аденилатциклазы и фосфодиэстеразы (3,' б'-цАМФ-фосфогидролаза, КФ 3.1.4).

Основные данные по радиационной модификации системы цАМФ, опубликованные в литературе, получены на тканях зрелого организма (Соболев А.С. с соавт., 1975; Животова Н.И., 1976; Соболев А.С. с соавт.,1977; Макеева В.Ф. с соавт., 1978; Орехов А.Н., 1978; Горанов И. с соавт., 1978; Кудряшов Ю.Б., 1980; Соболев А.С., 1981; Soltysiak-Pawloczuk, Bitny-Szlachto , 1976; Tine et al., 1976; Trocha , Gatravas , 1980; Catravas et al. ,1981; Hunt , Dal ton ,1981; So"bolev et al,I983).

В связи с высокой радиочувствительностью организма в стадии эмбриогенеза большую значимость приобретает исследование радиационного воздействия на систему цАМФ. Известно, что цАМФ принимает участие в морфологической и энзиматической дифференциров-ке, в регуляции клеточной пролиферации (Федоров Н.А., 1975; Greengard , 1969; Prasad et al. ,1972; Boynton , V/hitfield ,1983) - процессов, поражаемых при действии ионизирующего излучения. В литературе имеются немногочисленные данные о системе цАМФ развивающейся ткани В норме (Parent et al. ,1980; Pittman et al. , 1980; Ludford et al. ,1983). В центре внимания этих исследований ставится вопрос о формировании в онтогенезе Ац комплекса. В Советском Союзе такого рода исследования проводятся в Институте эволюционной физиологии и биохимии им.И.М.Сеченова АН СССР (Перцева М.Н., 1982; Кузнецова Л.А. с соавт., 1984). Однако в литературе отсутствуют сведения о радиационной модификации Ац системы развивающейся ткани. Все сказанное делает настоящее исследование актуальным.

Работа выполнялась в соответствии с плановой тематикой Института: "Механизмы действия ионизирующих излучений на биологические объекты различных уровней организации. Комбинированные воздействия. Защита и восстановление биологических объектов" № Гос.регистрации 80065874.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Ушакова, Татьяна Евгеньевна

ВЫВОДЫ

1. Впервые получены данные о действии ионизирующего излучения на Ад печени крысы раннего онтогенеза. Обнаружено явление активации Ац печени 20-суточного плода крысы при облучении в условиях in vivo и in vitro в дозах, близких к 2,5 Гр.

2. Показано, что эффект активации является результатом непрямого действия облучения при участии внутриклеточных регуляторов митохондриальной и цитоплазматической фракций, что находится в соответствии с высокой реактивностью Ац комплекса в данный срок развития.

3. На изолированных и очищенных в градиенте плотности сахарозы плазматических мембранах печени плода крысы показано инги-бирующее действие высоких доз радиации (100-1000 Гр) на активность Ац в базальном и стимулированных состояниях, при этом особенно угнеталась изопротеренолстимулированная активность Ац.

4. При исследовании причин радиационных нарушений гормональной регуляции Ац обнаружено, что облучение в высоких дозах плазматических мембран вызывает снижение концентрации f> -адренерги-ческих рецепторов, нарушение в функционировании каталитического и регуляторного компонентов Ац комплекса, а также изменения в его липидном микроокружении.

5. Сравнение эффектов радиационного воздействия на Ац эмбриональной и взрослой печени крыс при облучении как в малых, так и в больших дозах позволяет говорить о большей реактивности Ац раннего периода развития в ответ на облучение.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Печень является органом, начинающим рано функционировать в эмбриогенезе. Это соответствует раннему формированию в ней Ац комплекса. Как показано в наших экспериментах, к 20 суткам эмбриогенеза функционирует каталитическая единица Ац, выявленная по определению активности фермента в отсутствие экзогенного стимулятора. В этот же период эмбриональной стадии развития Ац способна отвечать и на гормональное воздействие, что позволяет считать Ац комплекс полностью сформировавшимся.

При исследовании базальной и стимулированной активности Ац в онтогенезе (20-суточный плод, I-, 6-, 30-суточные крысы) показано изменение активности фермента. Базальная активность, увеличиваясь к первым суткам после рождения, остается повышенной в течение 6 дней, а затем снижается до уровня ниже эмбрионального. Аналогичным образом, но с более резким снижением к 30 суткам, меняется катахоламинстимулированная активность. Эффект катехоламинов в стимуляции Ац печени раннего онтогенетического развития выражен значительно более сильно по сравнению с ответом Ац печени 30-суточных крыс.

Помимо катехоламинов в регуляции Ац принимают участие цито-плазматические факторы, известные в литературе для печени взрослого организма. Мы обнаружили наличие факторов, активирующих Ац, в печени позднего эмбриогенеза. Как и цитоплазматические факторы взрослой печени, они являются термостабильными. Сравнение действия факторов, выделенных из эмбриональной и взрослой печени, на активность Ац позволяет говорить об их онтогенетических различиях в регуляции фермента.

С учетом возрастных изменений в Ац комплексе и его регуляции можно было ожидать, что Ац печени исследуемых групп животных по-разному будет реагировать на радиационное воздействие. Действительно, при облучении мембранной фракции в дозах I - 10 Гр базальная активность фермента остается неизменной у 6- и 30-су-точных крыс. Однако действие облучения в тех же дозах вызывает увеличение базальной активности Ац мембран, выделенных из эмбриональной печени. Заметный стимулирующий эффект в активности Ац проявляется через I час после воздействия дозы I Гр и становится более выраженным при облучении мембран в дозе 2,5 Гр. Базальная активность Ац в этом случае составляет 142$ от активности фермента контрольных мембран. Еще более выражено стимулирующее действие дозы 2,5 Гр на базальную активность Ац при облучении плодов in utero (через I час после облучения активность составляет 227$ от контроля).

Тот факт, что активность Ац не изменялась при облучении в указанных дозах очищенных в градиенте плотности сахарозы плазматических мембран, свидетельствует о том, что облучение в этих дозах не вызывает структурных изменений в организации Ац комплекса. По-видимому, стимулирующее действие облучения на активность Ац эмбриональной печени крысы можно объяснить высокой реактивностью системы к индуцированным радиацией биологически активным веществам. В норме мы показали присутствие активаторов Ац в митохондриальной и цитоплазматической фракциях. Обнаружено, что облучение вызывает увеличение стимулирующего действия как митохондриальной, так и цитоплазматической фракций на активность

Ац по сравнению с действием факторов из контрольных животных. То обстоятельство, что стимулирующий эффект базальной активности при облучении плода in utero развивается во времени, позволяет полагать, что именно накопление активаторов Ад, присутствующих в цитозоле и митохондриях, ответственно за его выражение.

Необходимо заметить, что в литературе опубликованы данные о стимулирующем действии облучения мышей в дозах 0,5-4 Гр на активность Ац селезенки (Горанов И. с соавт., 1978; Soitysiak-Pawioczuk , Bitny-Sziachto, 1976). Обращает на себя внимание сходное проявление радиационного влияния на Ац радиочувствительной селезенки и развивающейся печени. И в том, и в другом случае стимулирующее действие облучения на активность Ац развивается во времени и в первые часы после облучения in vivo в близких дозах (2,5 Гр - печень, 2 Гр - селезенка) достигает двукратного превышения контрольной активности фермента. Цитируемые авторы (Soltysiak-Pawloczuk , Bitny-Szlachto , 1976) не исследовали механизм стимулирующего действия облучения на активность Ац селезенки, но высказывали предположение о вторичном эффекте активации. Возможно, что за увеличение активности Ац селезенки также ответственны клеточные регуляторы фермента, участие которых рассмотрено нами при исследовании стимулирующего действия облучения на Ац развивающейся печени.

Итак, функционирование Ац печени крысы раннего онтогенеза модифицируется при облучении в относительно невысоких дозах. Модификация является следствием радиационных изменений регуляции Ац.

Облучение в высоких дозах (100-1000 Гр) плазматических мембран печени крысы плодного периода развития повреждает Ац комплекс, что проявляется в снижении базальной, фторстимулированной и изо-протеренолстимулированной активности Ац. Последняя угнетается в большей степени. Мы попытались выяснить механизм нарушения главной физиологической функции Ац - угнетения ответа на гормональный сигнал.

По современным представлениям при использовании в качестве субстрата Mg2+-AT3> каталитический и регуляторный компоненты комплекса функционально тесно взаимосвязаны. Кроме того, исследования самого последнего времени свидетельствуют о большой сложности N -белка, состоящего из нескольких субъединиц (Uorthrup et al. , 1983(а,в); Houslay , 1984). Поэтому при определении базальной и фторстимулированной активности Ац трудно выявить степень повреждения отдельно каждого из этих белков, однако можно сказать, что облучение мембран приводит к нарушениям в их функционировании.

Мы оценили состояние ^-адренорецепторов, ответственных за связывание катехоламинов. Обнаружено, что при облучении мембран концентрация участков связывания снижается без изменения Кдисс

Немаловажным фактором для выражения активности Ац является липидное микроокружение. Определение температурной зависимости и изопротеренолстимулированной активности Ац, выраженной в координатах Аррениуса, показало изменение состояния липидов при облучении мембран в высоких дозах. Эти изменения касаются именно специфического липидного микроокружения Ац, которое определяют, в основном, фосфолипиды. Об этом свидетельствует и то, что активность других мембраносвязанных ферментов (5-нуклеотидазы и цАМФ ФДЭ), регуляция которых осуществляется, по литературным данным, иным липидным окружением, не изменяется при облучении плазматических мембран в дозах 100-1000 Гр.

Таким образом, облучение в высоких дозах плазматических мембран печени крысы раннего онтогенеза приводит к нарушениям всех компонентов Ац комплекса и его липидного окружения. Сравнение с результатами исследований влияния облучения в высоких дозах плазматических мембран печени взрослых крыс (Tine e-t al. , 1976) позволяет говорить о большей поражаемости Ац комплекса развивающейся печени.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ушакова, Татьяна Евгеньевна, Пущино

1. Еурлакова Е.Б. Роль липидов мембран в клеточном метаболизме.-Информ.бюлл. Радиобиология, 1975, 18, 86-92.

2. Еурлакова Е.Б., Шишкина Л.Н. Репарация клеточных мембран и ее значение в лучевом поражении. В кн.: Проблемы природной и модифицированной радиочувствительности. М., Наука, 1983, 279 с.

3. Волкова М.С., Слободская В.П., Кашникова Л.Н., Тонгур A.M. Радиационная чувствительность некоторых ферментов изолированных ядерных мембран тимуса телят.- йнформ.бюлл. Радиобиология, 1979, 22, 37-38.

4. Животова Н.И. Активность фосфодиэстеразы 3', 5^-циклоАМФ в некоторых тканях животных при действии ионизирующей радиации, ряда модифицирующих агентов и нервных дистрофиях.-Автореф.Дис.канд. биол.наук Пущино, 1976.

5. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии. Основные методики экспериментально-эндокринологических исследований. М.,Изд-во Моск. университета, 1968, 275 с.

6. Кудряшов Ю.Б. Вступительное слово на симпозиуме по радиобиологии циклических нуклеотидов. Материалы симпозиума. М., Наука, 1980, с.5-7.

7. Кузин A.M. Структурно-метаболическая гипотеза в радиобиологии. М.:Наука, 1970, 200 с.

8. Кузин A.M., Павловская Т.Е. Действие ионизирующего излучения на клеточные мембраны.-М., Атомиздат, 1973, 112 с.

9. Кузин A.M. Основные принципы структурно-метаболической теории в радиобиологии.-Радиобиология, 1976, 16, 2, 163-170.

10. Кузин A.M., Копылов В.А. Радиотоксины. М.:Наука, 1983,174 с.

11. Кузнецова Л.А., Перцева М.Н., Тюрин В.А., Горбунов Н.В. Сопрягающий компонент катехоламинчувствительной аденилатциклазной системы в эмбриональной мембране.-Биологические мембраны, 1984, I, 10, 1025-1033.

12. Макеева В.Ф., Комолова Г.С., Троицкая Е.Н., Егоров И.А. Содержание з',5^цАМФ в тканях крыс при адаптации к гипоксии и действии ^-облучения.-Докл.АН СССР, 1978, 242, 6, 1436-1437.

13. Мид Дж. Свободнорадикалъные механизмы повреждения липидов и их значение для клеточных мембран.-В кн.:Свободные радикалы в биологии. М.:Мир, 1979, I, 68 с.

14. Мочалина А.С. Радиационно-химические изменения фосфолипидов на молекулярном и субклеточных уровнях.-Информ.бюлл.Радиобиология, 1979, 22, 17-20.

15. Мочалина А.С., Климова Т.П. Радиационно-химические изменения фосфатидилхолина.-Радиобиология, 1977, Г7, 5, 7II-7I5.

16. Орехов А.Н. О влиянии ионизирующей радиации на систему цАМФ.-Дис. канд.биол.наук Пущино, 1978, 127 с.

17. Павловская Т.Е., Волкова М.С., Тонгур A.M. Сравнительное изучение действия излучения на свободные и связанные фосфолипиды (фосфолипидные комплексы) и ядерные мембраны.-Информ.бюлл.Радиобиология, 1975, 18, 98-101.

18. Павловская Т.Е., Тонгур A.M., Волкова М.С. Молекулярные основы радиационного поражения мембран.-Информ.бюлл.Радиобиология, 1983, 27, 32-34.

19. Перфильева Е.А., Хропов Ю.В., Хачатрян Л., Буларгина Т.В. Баранова Л.А., Гуляев Н.Н., Либинзон Р.Е., Северин Е.С. Аденилат-циклаза из сердца кролика: исследование субстратсвязывающего участка.-Биохимия, 1981, 46, 8, I4II-I4I9.

20. Перцева М.Н. Развитие в онтогенезе гормонореактивности ферментных систем обмена и функции циклических нуклеотидов.-Успехи соврем.биол., 1978, 86, 2(5), I77-I9I.

21. Перцева М.Н. Мембранный комплекс гормонорецептор-аденилат-циклаза и его функциональное формирование в онтогенезе.-Успехи соврем.биол., 1982, 93, 3, 382-396.

22. Перцева М.Н., Желудкова З.П. 0 причинах отсутствия влияния адреналина на гликолиз и гликогенолиз в эмбриональных мышцах.-Докл. АН СССР, 1969, 189, 5, II57-II60.

23. Перцева М.Н., Кузнецова Л.А. 0 причинах нереактивности к катехоламинам эмбриональных скелетных мышц.-Докл.АН СССР, 1976, 230, 4, 985-988.

24. Северин Е.С., Ткачук В.А., Гуляев Н.Н. Взаимодействие адено1. itзин-3,5-циклофосфата с аденозин-3,5-циклофосфатзависимой протеин-циклазой и фосфодиэстеразой.-Биохимия, 1976, jtf, 2, 384-387.

25. Скулачев В.П. Соотношение окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи.-М. :Изд-во Академии Наук СССР, 1962, 156 с.

26. Соболев А. С. Система циклических нуклеотидов (цАМФ и цГШ) при лучевом поражении и химической радиопрофилактике животных.-Дис. докт.биол.наук Ленинград, 1982.

27. Соболев А.С,, Орехов А.Н., Чирков Ю.Ю., Кудряшов Ю.Б. Действие радиопрофилактических препаратов на уровень циклического аденозин-з',5-монофосфата (цАМФ), активность аденилатциклазы и фосфодиэстеразы цАМФ.-Докл.АН СССР, 1975, 224, 3, 713-716.

28. Соболев А.С., Орехов А.Н., Чирков Ю.Ю., Тертов В.В., Кудря- 1 шов Ю.Б. О влиянии ионизирующей радиации на активность аденилатциклазы, фосфодиэстеразы цАМФ и уровень цАМФ в печени мышей.-Докл.АН СССР, 1974, 232, 6, 1445-1447.

29. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М., Медицина, 1975, 295 с.

30. Федоров Н.А. Циклические пуриновые нуклеотиды 3',5-АМФ и/3,5-ГМФ как факторы регуляции пролиферации и дифференцировки гемо-поэтических клеток.-Успехи соврем.биол., 1975, 79, 2, 225-240.

31. Шварценбах Г., Флашка Г. Комплексонометрическое титрование. М., Химия, 1970, 360 с.

32. Abramowitz J., Iyengar R., Birnbaumer L. On the mode of action of catecholamines on the turkey Erythrocyte Adenylyl Cyclase. J.Biol.Chem., 1980, 255, 17, 8259-8265.

33. Ahlers J., Giinther Т., Peter H. Phospholipid composition of plasma membranes and kinetic properties of membrane bound nucleotidase from marine bacteria.-Int.J.Biochem. 1978, 9, 8, 573-578.

34. Anthony D., Houslay W., Hauslay M.D. 5'-nucleotidase is activated upon cholesterol depletion of liver plasma membranes. FEBS Lett., 1983, 157, 1, 70-74.

35. Asami K., Furino G. Inhibition by X-rays of isoproterenol -induced increase in с AMP content in parotid gland is not dueto direct action on the plasma membranes. Int.J.Radiat.Biol., 1981, 39, 6, 665-669.

36. Atlas D., Levitzki A. Fluorescent visualization of ^-adrenergic receptor on cell surface. FEBS Lett., 1978, 85., 1, 158-162.

37. Atlas D., Volsky D.J., Levitzku A. Lateral mobility of ^-receptor involved in adenylate cyclase activation. Biochim. Biophys.Acta, 1980, 597, 1, 64-69.

38. Awad А.В., Zepp E.A. Alteration of rat adipose "tissue lipolytic response to norepinephrine by dietary fatty acid manipulation. Biochem.Biophys.Res.Oommun., 1979» 86, 1, 138-144

39. Baba A., Tsukamoto T., Matsuda T., Swata H. Possible regulation of membrane associated cyclic AMP phosphodiesterase in rat cerebral cortex by lipids. - Experientia, 1978, 34, 9, 1139-1140.

40. Bakardjieva A., Galla II.J., Helmreigh E.J.M. Modulation of the j^-receptor adenylate cyclase interactions in cultured chang, liver cells by phospholipid enrichment. Biochemistry, 1979, 18., 14, 3016-3023.

41. Bar H.-P., Hahn P. Development of rat liver adenyl-cycla-se. Canad.J.Biochem., 1971, 49, 1, 85-89.

42. Beckner S.K., Blecher M., Horner Y/.H. Characteristics of cholera toxin (CT) catalyzed and endogenous ADP-rybosylation of RL-PR-C Hepatocytes. - Fed.Proc., 1980, 39, 6, 2107.

43. Birnbaum M.J., Fain J.1T. Activation of protein kinase and glycogen phosphorylase in isolated rat liver cells by glucagon and catecholamines. J.Biol.Chem., 1977, 252, 2, 528-535.

44. Bitensky M.W., Russell V., Robertson W. Evidence for separate epinephrine and glucagon responsive adenyl cyclase systems in rat liver.-Biochem.Biophys. Res.Commun, 1968, 21» 5» 706-712.

45. Bitensky M.W., Russell V., Blanco M. Independent variation of glucagon and epinephrine responsive components of hepatic adenyl cyclase as a function of age, sex and steroid hormones.-Endocrinology 1970, 86, 1, 154-159.

46. Bolcoch G.M., Katada Т., Northup J.K., Ui M., Gilman A. G. Purification and properties of the inhibitory guanine nucleotide -binding regulatory component of adenylate cyclase.-J.Biol.Chem. 1984, 2£9, 6, 3560-3567.

47. Boland R., Martonosi A. Developmental changes in the composition and function of sarcoplasmic reticulum. J.Biol.Chem. 1974, 249, 2, 612-623.

48. Boynton A.L., Whitfield J,P. The role of cycle AMP in cell proliferation: a critical assessment of the evidence.— Adv. Cyclic nucleotide Res., 1983, 15, 193-293.

49. Burns D.L., Moss J., Vaughan M. Release of guanyl nucleotides from the regylatory subunit of adenylate cyclase.-J.Biol. Chem. 1983, 258,2, 1116-1120.

50. Butcher F.R., Potter V.R. Control of the adenosine 3f5'-monophosphate-adenyl cyclase system in the liver of developing rats.-Cancer Res. 1972, 32, 10, 2141-2147.

51. Canot M.G., Srinivasan Y., Pitha J., & Kocioleck K. & Lefkowitz R.J. Affinity Chromatography of the |>-adrenargeticreceptor. J.Biol.Chem., 1979, 254, 8, 2923-2937.

52. Cassel D., Selinger Z. Mechanism of cholera toxin action: covalent modification of the guanul nucleotide binding protein of the adenylate cyclase system. - Proc.Hat1.Acad.Sci.USA, 1978, 75, 6, 2669-2673.

53. Cassel D., Selinger Z. Gatecholamine-stimulated GTPaza activity in turkey erythrocyte membranes. Biochem.Biophys. Acta, 1976, 452, 2, 538-551.

54. Cassel D., Selinger Z. Mechanism of adenylate cyclase activation through the ^-adrenergic receptor: catecholamine-indu-ced displacement of bound GDP by GTP. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1978, 75, 9, 4155-4159.

55. Catravas G.H., Wright S.J.Jr., Trocha P.J., Takenaga J. -Radiation effects on cycle AMP, cyclic GMP and Amino Acid Levels in the CSF of the primate. Radiat.Res. 1981, 87, 1, 198-203.

56. Chen P.M., Roeske XI.R,, Yamamura H. G. The development of J3-adrenergetic and muscarinic cholinergic receptors in the fetal mouse heart. Fed.Proc., 1978, 37, 3, 525.

57. Cheng H., Farguhar M.G. Presence of adenylate cyclase activity in Golgi and other fractions from rat liver. I Biochemical determination. J.Cell.Biol., 1976, 70, 3, 660-670.

58. Cheung W.J., Chiang M.-H. Adenyl cyclase. The extent of reversibility of the reaction.-Biochem.Biophys.Res.Commun.,1971, 42, 4, 868-873.

59. Christoffersen Т., Morland J., Osnes J.-В., Elgjo K. Hepatic adenyl cyclase: alterations in hormone response during treatment with a chemical carcinogen.-Biochim.Biophys.Acta,1972, 2^9, 2, 363-366.

60. Citri Y., Schramm M. Resolution, reconstitution and kinetics of the primary action of a hormone receptor. Nature 1980, 287, 5780, 297-300.

61. Cote Т.Е., Chen Т.О., Kebabian J.W. Guanosine triphosphate: an endogenous compound in the rabbit cerebral cortex which couples the beta-adrenergetic receptor to adenylate cyclase.-Brain res. 1980, 181, 1, 127-138.

62. Crawford A., Macneil S., Amirrasooli H., Tomlinson S. Properties of a factor in cytosol that enhances hormone stimulated adenylate cyclase activity. Biochem.J. 1980, 188, 2, 401-407.

63. Cuatrecasas P. Commentary insulin receptor, cell membranes and hormone action.-Biochem.Pharmacol. 1974, 2Д, 17, 2353-2361.

64. De Lean A., Rouleau D., Lefkowitz R.J. Activation of adenylate cyclase by beta-adrenergic receptors: investigation ofrate limiting steps by simultaneous assay of high affinity agonist binding and GDP release.-Life Sci., 1983, 22* 10> 943-954.

65. Dipple G., Houslay M.D. The activity of glucagon-stinru-lated adenylate cyclase from rat liver plasma membranes is modulated by the fluidity of its lipid envieronment•-Biochem.J• 1978, 174, 1, 179-190.

66. Dipple G., Houslay M.D. The temperature dependence of adenylate cyclase activity solubilised using various lubrol detergents.-Biochem.Biophys.Res.Commun. 1979, 90, 2, 663-666.

67. Doberska C.A., Martin B.R. Activation of rat liver plasma membrane factor.-FEBS Lett., 1977, 82, 2, 273-277.

68. Downs R.W., Spiegil A.M., Singer M., Reen S., Aurbach G.D. Fluoride stimulation of adenylate cyclase is dependent on the guanine nucleotide regulatory protein.-J.Biol.Chem., 1980, 255, 3, 949-954.

69. Evans W.H., Gurd J.M. Properties of a 5'-nucleotidase purified from mouse liver plasma membranes.-Biochem.J., 1973» 133, 1, 189-199.

70. Farfel Z., Kaslow H.R., Bourne H.R. A regulatory component of adenylate cyclase is located on the inner surface of human erythrocyte membranes.-Biochem.Biophys.Res.Commun., 1979, 90, 4, 1237-1241.

71. Pranson R.C., Pang D.C., Weglicki W.B. Modulation of li-politic activity in isolated canine cardiac sarcolemma by isoproterenol and propranolol.-Biochem.Biophys.Res.Commun. 1979, 90, 3, 956-962.

72. Frei E., Zahler P. Phospholipase A2 from sheep erythrocytemembranes.-Ca2+ dependence and localization. Biochem.Biophys. Acta, 1979, 550, 3, 450-463.

73. Gill D.M., Meren P. ADP-ribosylation of membrane protein catalyzed by cholera, toxin: basis of the activation of adenylate cyclase. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1978, 75, 7, 3050-3054.

74. Gilman A.G. A protein binding assay for adenosine 3'5f-cyclic monophosphate. Proc.ITatl.Acad.Sci.USA, 1970, 67, 1, 305-312.

75. Gilman A.G. A protein and dual control of adenylate cyclase. Cell, 1984, J36, 3, 577-579.de Наёп C. Adenylate cyclase. A new kinetic analysis of the effect of hormones and fluoride ion. J.Biol.Chem., 1974, 299, 9, 2756-2762.

76. Haga Т., Haga K., Gilman A.G. Hydrodynamic properties of the ^-adrenergic receptor and adenylate cyclase from wild tipe and variant S49 Lymphoma cells. J.Biol.Chem., 1977, 252, 6, 5776-5782.

77. Hanski E., Rimon G., Livitzki A. Adenylate cyclase activation by the ^-adrenergic receptor as a diffusion controlled process. Biochemistry, 1979, 18, 5, 846-853.

78. Hanski E., Sternweis P.C., Northup J.K., Dromerick A.W., Gilman A.G. The regulatory component of adenylate cyclase. Purification and properties of the turkey erythrocyte protein. - J.Biol.Chem., 1981, 256, 24, 12911-12919.

79. Harden Т.К., V/olfe B.B., Sporn J.R., Perkins J.P., Molinoff P.B. Ontogeny of /^-adrenergic receptor in rat cerebral cortex. - Brain Res., 1977, 125, 1, 99-108.

80. Helmreich E.J.M., Bakardjieva A. Hormonally stimulated adenylate ' cyclase: a membranous multicomponent system. Biosystem3,-1081980, 123-4, 295-304.

81. Hilderbrandt J.D., Codina J., Risinger R., Birnbaumer L. Identification of a ^-subunit associated with the adenylyl cyclase regulatory proteins N and N.-J.Biol.Chem., 1984,s x259, 4, 2039-2042.

82. Hirata F., Axelrod J. Phospholipid metylation and biological signal transmission.-Science, 1980, 209, 4461, 1082-1090.

83. Hommes P.A., Beere A. The development of adenyl cyclase in rat liver, kidney, brain and skeletal muscle.-Biochem.Biophys. Acta, 1971, 227, 2, 296-300.

84. Houslay M.D., Hesketh T.R., Smith G.A., Warren G.B., Metcalfe J.C. The lipid environmemt of the glucagon receptor regulates adenylate cyclase activity,-Biochim.Biophys.Acta, 1976, 436, 2, 495-504.

85. Houslay M.D., Metcalfe J.C., Waffen G.B., Hesketh Т.К., Smith G.A. The glicagon receptor of rat liver plasma membrane can couple to adenylate cyclase without activating it.-Biochim. Biophys.Acta, 1976, 436, 2, 489-494.

86. Houslay M.D., Palmer K.W. Changes in the form of Arrhenins Plots of the activity of glucagon-stimulated adenylate cyclase and other hamster liver prasma-membrane enzymes occurring on hibernation.-Biochem.J., 1978, 174, 3, 909-919.

87. Houslay M.D., Cordon L.M. The Activity of Adenylate cyclaseis regulated by the nature of its lipid environment. Cur.Top. Membranes Transp., 1983, 18, 180-231.

88. Houslay M.D. A family of guanine nucleotide regulatory proteins. Trends Biochem.Sci., 1984, 2, 2, 39-40.

89. Hunt W.A., Dalton Т.К. Synthesis and degradation of cyclic nucleotides in brain after a high dose of ionizing radiation. -Radiat.Res., 1981, 8£, 3, 604-608.

90. Katada Т., Bokoch G.M., Northup J.K., Ui M., Gilman A.G.

91. The inhibitory guanine nucleotide-binding regulatory component of adenylate cyclase. Properties and function of the purified protein.-J.Biol.Chem., 1984, 259, 6, 3568-3578.

92. Klainer L.M., Chi Y.-M., Preidberg S.L., Rail T.W., Sutherland E.-W. Adenyl cyclase.IV.The effects of neurohormones on the formation of adenosine 3'5'-phosphate by preparation from brain and other tissues.-The J.Biol.Chem., 1962, 237, 4, 1239-1243.

93. Kent R.S., De Lean A., Lefkowitz R.J. A Quantitative analysis of beta-adrenergic receptor interactions: resolution of high and low affinity states of the receptor by computer modeling of ligand binding data.-Mol.Pharmacol., 1979, 17, 1, 14-23.

94. KOteles G.J. New acpects of cellmembrane radiobiology and their impact on radiation protection.-Atomic Energy review, 1979, 17, 1, 3-30.

95. Macneil S., Crawford A., Amirrasooli H., Johnson S., Pollock A., Ollis C., Tomlinson S. Stimulation of hormone-responsive adenylate cyclase activity by a factmr present in the cell cytosol.-Biochem.J., 1980, 188, 2, 393-400.

96. Maguire M.E,, Arsdale P.M., Gilman A.G. An agonist-specific effect of guanine nucleotides in binding to the beta-adrenergic receptor.-Mol.Pharmacol., 1976, J2, 2, 335-339.

97. Marc J.-C., Junien J.L., Rocquet G., Michel R. Effects of thyroid hormones and ^-irradiation on adenyl cyclase in rat liver plasma membrane.-Comptes Rendus des Seances de la Societe de Biologic et de ses filiales, 1971, 165, 6, 1257-1262.

98. Menon K.M.J., Giese S., Jaffe R.B. Hormone-and fluoride-sensitive adenylate cyclase in human fetal tissues.-Biochim. Biophys.Acta, 1973, J304, 1, 203-209.

99. Murad P., Chi G.-M., Rail T.W., Sutherland E.W. Adenyl cyclase.III. The effect of catecholamines and chloline esters on the formation of adenosine 3'5'-phosphate by preparation from cardiac muscle and liver.-J.Biol.Chem., 1962, 237, 4, 12331238.

100. Nakamura Т., Tomomura A., Noda C., Smimoji M., Schinara A.H. Acquisition of a ^-adrnergic response by adult rat he-pat ocytes during primary culture.-J.Biol.Chem., 1983, 258, 15, 9283-9289.

101. Uijjar M.S., Chandray A.W.Y.A.U., Chaudhary K.C. Partial purification and properties of the cytoplasmic factors modulating adenylase cyclase activity in rat lung plasma membranes. -Biochim. Biophys. Acta, 1981, 677, 1, 153-159.

102. Uorthup J.K., Sternweis P.O., Smigel M.D., Sghleifer L.S., Ross E.M., Gilman A.G. Purification of the regulatory component of adenylate cyclase.-Proc.Nal.Acad.Sci.USA, 1980, 7J, 11, 6516-6520.

103. Uorliup J.K., Smigel M.D., Sternweis P.O., Gilman A.G., The subunits of the stimullatory regulatory component of adenylate cyclase. Resolution of the activated 4"500-dalton(c£) subunit.-J. Biol. Chem., 1983, 258, 18, 11369-11404.

104. Northup J.K., Sternweis P.O., Gilman A.G. The subunits of the stimulatory regullatory component of adenylate cyclase. Resolution, Activity and properties of the 35000-dalton (P) subunit.-J.Biol.Chem., 1983, 258, 18, 11361-11368.

105. Orly J., Schramm M. Coupling of catecholamine receptor from one cell with adenylate cyclase from another cell by cell fusion.-Proc.lTatl. Acad.Sci.USA, 1976, 73, 12, 4410-4414.

106. Parent J.В., Tallman J.P., Heuneberry R.C., Fishman P.H. Appearance of £-adrenergic receptors and catecholamine-res-ponsive adenylate cyclase activity during fusion of avian embryonic muscle cells.-J.Biol.Chem., 1980, 255, 6, 7782-7786.

107. Pecker P., Hanoune J. Activation of epinephrine-sensitiveadenylate cyclase in rat liver by cytosolic protein-nucleotide complex.-J.Biol.Chem., 1977, 252, 8, 2784-2786.

108. Pecker P., Hanoune J. Uncoupled ^-adrenergic receptors and adenylate cyclase can be recoupled by a GTP-dependent cytoso-lic factor.-PEBS Lett., 1977, 83, 1, 93-98.

109. Perkins J.P. Adenyl Cyclase,-in: Adv.Cyclic Nucleotide Res. N.Y. "Raven Press", 1977, 3, 1-64.

110. Pike L.J., Lefkowitz R.J. Agonist-specific alterations in receptor binding affinity associated with solubilization of turkey erythrocyte membrane beta adrenergic receptors.-Mol. Pharmacol., 1978, t^ 2, 370-375.

111. Pittman R.N., Minneman K.P., Molinoff P.B. Ontogeny ofand Д-adrenergic receptors in rat cerebellum and cerebral cortex.-Brain.Res., 1980, 188, 2, 357-368.

112. Pfeuffer T. GTP-binding proteins in membranes and the control of adenylate cyclase activity.-J.Biol,Chem., 1977, 252, 20, 7224-7234.

113. Pfeuffer T. Guanine nucleotide-controlled interactions between components of adenylate cyclase.-PEBS Lett., 1979, 101, 1, 85-89.

114. Pfeuffer Т., Gaugler B, Metzgel H. Isolation of homologous and heterologous complexes between catalytic and regulatory components of adenylate cyclase by forskolin-sepharose.-PEBS Lett., 1983, 164, 1, 154-160.

115. Pohl S.L., Birnbaumer L., Rodbell H. The glucagon-sensitive adenylate cyclase system in plasma membranes of rat liver. I Properties.-J.Biol.Chem., 1971, 246, 6, 1849-1856.

116. Rail T.W., Sutherland E.W. Adenyl cyclase.II The enzymatically catalyzed formation of adenosine 3'5'-phosphate and inorganic pyrophosphate from adenosine triphosphate.-J.Biol. Chem., 1962, 237, 4, 1228-1232.

117. Ray Т.К. A modified method for the isolation of the plasma membrane from rat liver.-Biochim.Biophys.Acta, 1970, 196, 1, 1-9.

118. Reddy N.B., Oliver K.L., Engel W.K. Developmental patterns of adenylate cyclase (Ac) and P-adrenergic receptor ( AR) in rat skeletal muscle.-Fed.Proc., 1979, 38, 3, 843.

119. Rimon N., Hancki E., Brans S., Levitski A. Mode of coupling between hormone receptors and adenylate cyclase elucidated by modulation of membrane fluidity.-Nature, 1978, 276, 5686, 394-396.

120. Robinson G.A., Bitcher R.W., Sutherland E.W. Adenyl cyclase as an adrenergic receptor.-Ann.N.Y.,Acad.Sci., 1977, 139, 3, 703-723.

121. Rodbell M., Birnbaumer L., Pohl S.L. Adenyl cyclase in fat cells. Ill Stimulation by secretin and the effects of trypsin on,the receptors for lipolytic hormones.-J.Biol.Chem., 1970, 245, 4, 718-722.

122. Rodbell M., Birnbaumer L,, Pohl S.L., Krans H.M.J. The glucagon-sensitive adenyl cyclase system in plasma membranes of rat liver.-J,Biol.Chem., 1971, 246, 6, 1877-1882.

123. Rodbell M. The role of hormone receptors and gtp-regulatory proteins in membrane transduction.-Nature, 1980, 284, 5751, 17-22.

124. Ross E.M., Gilman A.G. Resolution of some components of adenylate cyclase necessory for catalitic activity.-J.Biol.

125. Chem., 1977, 252, 20, 6966-6969.

126. Ross Б.М., Howlett A.C., Ferguson K.M., Gilman A.G. Re-constitution of hormone-sensitive adenylate cyclase activity with resolved components of the enzyme. J.Biol.Chem., 1978, 253, 18, 6401-6412.

127. Ross Е.Ш., Gilman A.G. Biochemical properties of hormone sensitive adenylate cyclase.- Ann.Rev.Biochem., 1980, 49» 533-564.

128. Ross Е.Ш., Pedersen S.E., Florio V.A. Hormone-sensitive adenylate cyclase. Identity, function and regulation of the protein components. Curr.Top.Membranes Transp., 1983, 18, 109-142.

129. Sahyoun N., be Vine III H., Stenbuck P., Cuatrecasas P. Cytosolic activator of adenylate cyclase: reconstitution, characterization and mechanism of action. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1983, 80, 12, 3646-3650.

130. Sanders R.B., Thompson W.J., Robinson G.A. Epinephrine-and glucagon-stimulated cardiac adenylyl cyclase activity. Regulation by endogenous factors. Biochim.Biophys.Acta, 1977, 498, 1, 10-20.

131. Schimmer B.P., Ueda K., Sato G.H. Site of action of adrenocorticotropic hormone (ACTH) in adrenal cell cultures. -Biochem.Biophys.Res.Commun., 1968, Д2, 5, 806-810.

132. Schneider W.C. Intracellular distribution of enzymes. II The oxidation of octanoil acid by rat liver fraction. J.Biol. Chem. 1948, 176, 1, 259-266.

133. Sicard R.E., Aprille J.R. Adenylate cyclase and cyclic nucleotide phosphodiesterases in the developing rat liver. Biochim.Biophys. Acta, 1977, 500, 2, 235-245.

134. Soltysiak-Pawluczuk D., Bitny-Szlachto S. Effects of ionizing radiation and cysteamine (MEA) on activity of mouse ^ spleen adenyl cyclase.-Int.J.Radiat.Biol., 1976, 29, 6, 549-553.

135. Sobolev A.S., Rosenkranz A.A., Kazarov A.R. A study of mecanisms of post-irradiation changes in adenylate-cyclase activity.-Int.J.Radiat.Biol., 1983, 44» 1» 31-39.

136. Stadel J.M., De Lean A., Lefkowitz R.J. A high affinity agonist ^-adrenergic receptor complex is an intermediate for catecholamine stimulation of adenylate cyclase in turkey and frog erythrocyte membranes,-J.Biol.Chem., 1980, 255, 4, 1436-" 1441.

137. Stadel J.M., Lefkowitz R.J. The ^-adrenergic receptor: ligand binding studies illuminate the mechanism of receptor-ade-nylate cyclase coupling.-Curr.Top.Membranes Transp. 1981, 18, 49-66.

138. Sutherland E.W., Rail T.W., Menon T. Adenyl cyclase.I Distribution, preparation and properties.-I.Biol.Chem., 1962, 237, 4, 1220-1227.

139. Sternweis P.C., Gilman A.G. Reconstitution of catecholamine-sensitive adenylate cyclase. Reconstitution of the uncoupled variand of the S49 Limphoma cell.-J.Biol.Chem., 1979, 254, 9,3333-3340.

140. Sternweis P.O., Gilman A.G.Aluminium: a requirement for activation of the regulatory component of adenylate cyclase by fluoride. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1982, 79, 16, 4888-4891.

141. Tine J., Kergonon J.P., Rocquet G. Effects de 1'irradiationОgamma sur les systemes de production et de degradation du 2 messager hormonal. Ann. d'Endocrinology, 1976, 2Z> 2, 121122.

142. Tolkovsky A.M., Levitzki A. Mode of coupling between the ^-adrenergic receptor and adenylate cyclase in turkey erythrocytes. -Biochem., 1978, 17, 18, 3795-3810.

143. Tovey K.C., Oldham K.G., Whelan J.A.M. A simple direct assay for cyclic AMP in plasma and other biological samples using an improved competitive protein binding technique, Clin. Chim.Acta, 1974, 56, 3, 221-234.

144. Trocha P.J., Catravas G.N. Variations in cyclic nucleotide levels and lysosomal enzyme activities in the irradiated rat. -Radiat.Res., 1980, 83, 3, 658-667.

145. Wallach D.F.H. Radiation effects on biomembranes. In: Biomembranes N.Y., L. : Plenum press, 1975, 5.» 213-249.

146. Weiland G.A., Minneman K.P., Molinoff P. Thermodynamics of agonist and antagonist interactions with mammalian ^-adrenergic receptor. Mol.Pharmacol., 1980, 18, 3, 341-347.

147. Weiss B., Greenberg L., Cantor E. Age-related alterations in the development of adrenergic denervation supersensitivity. -Fed.Proc., 1979, J38, 5, 1915-1921.

148. Whetton A.D., Gordon L.M., Houslay M.D. Adenylate cyclase in inhibited upon depletion of plasma membrane cholesterol. -Biochem.J., 1983, 212, 2, 331-338.

149. Widnell С.С., Unkeless J.C. Partial purification of a lipoprotein with 5'-nucleotidase activity from membranes of rat liver cells.Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1968, 61.,3, 105©-1057.

150. Williams L.T., Mullikin D., Lefkowitz R.J. Magnesium dependence of agonist binding to adenylate cyclase.-coupled hormone receptors.-J.Biol.Chem., 1978, 253, 9, 2984-2989.