Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Адаптивные особенности доминантных паразитарных комплексов на представителях порядка Liliales L.

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Адаптивные особенности доминантных паразитарных комплексов на представителях порядка Liliales L."

сЯ-ЗМяр

На правах рукописи

Байкалова Ольга Сергеевна

АДАПТИВНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ДОМИНАНТНЫХ ПАРАЗИТАРНЫХ КОМПЛЕКСОВ НА ПРЕДСТАВИТЕЛЯХ ПОРЯДКА LILIAL.ES Ь

Специальность: 06.01.11. - зашита растений

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2001

Работа выполнена в отдеае защиты растений Главного ботанического сада имени Н В Цицина РАН

Научный руководите чь

Кандидат биологических наук, старшин научный сотрудник ГЬС РАН М А Кетдыш

Официальные оппоненты

Доктор сельскохозяйственных наук, профессор Ю И Помазков Кандидат биологических наук В П Князева

Ведущая организация Институт Паразитологии РАН

Защита состоится йО ¿¿ш5а/гл> 2002Г

В. <<3 (асов на заседании диссертационного совета Д 220 043 04 В Московской сельскохозяйственной академии им К А Тимирязева по адресу 127550 Тимирязевская улица, д 49

С лис. *ртаци аакомиться в ЦНБ МСХА им К А Тимирязева

Автореф-

О&гисс^ш.

2001!

Ученый секретарь диссертационного совета профессор

В В Исаичев

■ ' > ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЮТЫ ■ •

Актуальность исследований. На современном этапе - отечественная отрасль5 промышленного цветоводства находится; на стадии становления, и осуществляемая в широких масштабах интродукция из-за рубежа новых видов и сортов цветочных и декоративных растений, обмен и перемещение ' посадочного материала внутри нашей страны способствуют распространению болезней,"среди которых-'вирусные 1 занимают наибольший-удельный вес. Вирусные болезни вызывают - потерю декоративных качеств," ухудшают физиологическое состояние растений и,, в конечном итоге,' причиняют: значительный- экономический'' ущерб (Malter,'-1996), в частности, при выращивании, вегетативно размножаемых цветочных" культур,-.-у которых постоянным источником инфекции является посадочный материал (луковицы,' клубнелуковицы). Отрицательное < влияние вирусов' на репродуктивную способность растений приводит к' фенотипическому изменениюv признаков сорта, снижению урожая на 40-70% и вырождению восприимчивых к вирусам сортов (Митрофанова, 1992). ;

• Несмотря на то, что вопросы, связанные с вирусными заболеваниями разработаны для отдельных культур, и имеется известный прогресс в "этой области, актуальность этой проблемы не только сохраняется, но и возрастает. Причём она приобретает особое значение в ботанических садах, где сосредоточен' богатейший генофонд разнообразных растений. Взаимообмен' растительным материалом и' пополнение коллекционных фондов: придают им ещё большую значимость: "* • * • °"v-"' ' ' ^ 1 '

* Состав патологических комплексов н структур популяций возбудителей' вирусных'заболеваний, их изменчивость' представляют один из важнейших факторов предопределяющих стратегию защиты от этой группы патогенов. ; : Указанные обстоятельства обусловливают необходимость интенсификации исследований в этой области.' ' >. . ..

' Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось изучение адаптивных особенностей доминантных паразитарных' комплексов в экосистемах Lilíalés . на' культурах Tulipa, Lilium и Allium и разработка стратегии защиты этих культур в условиях искусственных биоценозов. В ходе работы решали следующие задачи: ■■'''' ■"' '' •• •

□ выявление доминантных паразитарных комплексов в условиях различных! экосистем; ' ' -■ " ! •' 4 " ''' ' 1 •" 1 ■

а уточнение фауны векторов и выявление спектра дополнительных (новых)

видов в экосистемах Liliales; " -' - : " '

о изучение адаптивных изменений трофических связей'- основных переносчиков; • v.-rv , « • - ■ ... .

□ изучение уровня устойчивости' к паразитарным комплексам в коллекциях ■ Tulipa и Lilium; ' ' • ' --- •■ "• " - •-"■

□ разработка биологического обоснования стратсгйИ"противовирусной защиты-

ПТ irnunr)flrí*tlLIV lí 11 fKí» I.-11И ¡í mimaPMLlV nftLAirrnn —III , \ J ,

от комплексных инфекций изучаемых объектов.

НЛУЧ 'ЛЯ [ .-' 3/,. ¡отек, f.'ocK. гсл.с.:с.<сз с.ч^лсмии

Инс. N2 чУ/

Научная новизна работы В биоценозах декоративных луковичных культур выявлены паразитарные комплексы, доминирующей компонентой которых являются вирусы

Постановка вопроса и объекты исследований оригинальны Ранее системных исследований паразитарных комплексов с участием вирусов в жосистемах Liliales не проводилось

Впервые выявлен уровень распространения специализированных вирусов на культурах Tuhpa, Lilium и Allium, изучено фенотипическое проявление вирусного поражения, в том числе в динамике его развития и комплексе с другими вредителями

Всего выявлено 25 возбудителей из различных таксонов Впервые на изучаемых луковичных культурах выявлен уровень распространения специализированных и видовой состав несвойственных вирусов Среди несвойственных для изучаемых культур вирусов впервые диагносцированы на тюльпанах и лилиях - Barlev veilow dwarf virus (BYDV, eupvc жечтои карликовости ячменя), Potato virus Y (PVY. Y вирус картофеля), Tomato aspermy virus (AsTK eupvc аспермии томатов), Marcissus mosatc virus (NMV. eupvc мозаики нарцисса). Carnation moitié virus (CrnMK eupvc крапчатости гвоздики), Prune dwarf virus (PDV, eupvc карликовости айвы), Apple mosaïc virus (ApMV, eupvc мозаики яблони). Cherry leaf roil virus (CLRV, вирус скручивания чистъев черешни). Prunus necrottc rmgspot virus (PNRSV, вирус некротическои кольцевой пятнистости косточковых), на лилиях также выявлены Potato virus S (PVS, S eupvc картофеля), Apple chloroUc leaf spot virus (ApCLSV, вирус хлоротическои пятнистости листьев яблони) и Stem groovmg virus fSGV, eupvc борозОчатости древесины) Plum pox virus (PPV, вирус шарки сливы), на тюльпанах Alfatfa mosaïc virus (АШК вирус мозаики люцерны) на луках — Tultp breaktng virus (TBV, вирус пестролепестности тюльпана), ММV, CrnMV, AsTV

Установлено, что в составе паразитарных комплексов исследуемых культур число компонентов вирусного комплекса колеблется от моноинфекции до пяти и более вирусов

На тюльпанах методом ПЦР и иммуноблоттинга впервые идентифицирован вирус, серологически родственный Shallot virus X (ShVX, X eupvc шалота), что свидетельствует о расширении круга растений-хозяев аллексивнрусов, который, кроме известных ранее видов родов Allium (сем Allmceae) и Narcissus (сем Amarylhdaceae), включает также тюльпаны (сем Liliaceae) Впервые методом ПЦР на тюльпанах и лилиях идентифицированы вирусы родов поти- и карла-, а также клостеро- и трихо-, не выявляемые ранее на этих культурах

Показано, что 10 видов тлей вместе с переносимыми ими вирусами являются компонентами патобиоценоза на коллекциях Tuhpa и Lilium Выявлена адаптация 3-х видов тлей Aphis fabae Scop, Macrosiphum euphorbme (Thom ) и Myzus persicae Sulz к культуре тюльпанов

Установлена возможность распространения TBV двумя новыми видами тлей M.cerasi (F.) и Dysaphis sorbi (Kalt.).

i На ■ лилиях впервые , зарегистрированы нематоды векторы .вирусов LongidoruselongatusиTrichodorusspp. ¡ . - : ; . 'т. ■„

Наименее поражаемыми ТВVоказались сорта тюльпанов садовых классов^ Кауфмана, Фостера и Грейга. В,группах Триумф и Дарвиновские гибриды выделены сорта относительно устойчивые к TBV. ■ . .,.,„. .>

Показано, что полевой ^ устойчивостью , к .тлям, обладают сорта. групп Лилиецветные, Дарвиновские гибриды, тюльпаны Кауфмана, Фостера и Грейга, наиболее восприимчивы - сорта группы Триумф. В контролируемых условиях (при искусственной подсадке), сортов, устойчивых к тлям-переносчикам не выявлено. ... ■ i .: , . •

Практическая значимость работы. . В результате комплексных, вирусологических исследований получены данные, по¡¡ видовому, составу доминирующих и прогнозируемых паразитарных комплексов, на растениях родов Tulipa, Lilium и Allium, по динамике устойчивости к ним этих культур, а также.выявлены факторы, ограничивающие их вредоносность в экосистемах' Лилейных. ■ Проведена ¡.оценка . фитосанитарного состояния 504 сортов тюльпанов. Установленный уровень устойчивости к вирусам.и переносчикам, отдельных групп и сортов тюльпанов служит основой для рекомендаций по их экспонированию в коллекции и при озеленении. Полученные данные .являются обоснованием для г разработки, и - .-усовершенствования . - комплекса профилактических мероприятий в создании системы интегрированной защиты изучаемых культур. - :,.*, . . -

.. Апробация работы.. Основные .положения диссертационной работы обсуждались на заседаниях отдела Защиты, растений при годовых отчётах и докладывались на. научной конференции • молодых учёных и специалистов. МСХА им. . К.А.. Тимирязева . в июне -2000г., на I молодёжной научной конференции "Биотехнология . в растениеводстве,, животноводстве. . и. ветеринарии" в марте 2001, были представлены в. форме тезисов на III Международной конференции "Цветоводство:— сегодня, и завтра" в. июне 1998г., на : научной • конференции V Достижения, и перспективы в области тропического земледелия и животноводства", в 2000г., на ¡II Международной научной конференции,"Биотехнология«в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии" в октябре 2000г. .,, . - ,

, Публикации. Основные результаты исследований опубликованы в 7 печатных работах. 1 статья находится в печати......... ....

, . Объём и содержание работы. Диссертация состоит из введения, 16 глав, выводов списка литературы и приложения. Работа изложена на 204 страницах машинописного текста и включает 45 таблиц, иллюстрирована 14 рисунками. Список используемой литературы включает 268 наименований, в том числе 129 иностранных авторов. , s . •, , ,

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Обзор литературы по теме. В обзоре литературы рассмотрены и обсуждены основные публикации, характеризующие состояние изученности вирусных заболеваний Tulipa, Lilium и Allium и особенностей их циркуляции Рассмотрены современные методы исследований вирусов и основные приемы интегрированной противовирусной зашиты

Условия, материалы и методы исследовании.

Работа проводилась в отделе Защиты растений Главного Ботанического Сада имени Н В Цицина Российской Академии Наук в течение 1998-2001 гг

Основными объектами исследований являлись биоценозы декоративных луковичных культур, растения порядка Líbales семейства Lihaceae родов Tulipa и Lilium и семейства Alhaceae рода Allium Полевую заражённость оценивали по стандартной методике (Волощук, Теплоухова, 1986)

В диагностике и идентификации вирусов, поражающих луковичные культуры^ использовали визуальную оценку зараженности, биологические тесты, иммуноферментный анализ (ELISA) (Бобкова, Чирков, 1983, Одинец, 1986); методы иммуноблоттинга (Vishmchenko et al, 1993), -»лекгронной микроскопии (Brandes, 1959) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Henson, French, 1993)

Биологическое тестирование выполняли по типовым для изучаемых групп вирусов методикам В качестве инфекционного материала использовали тистья Tulipa L., Lilium L и Allium L, травянистых растений-индикаторов с признаками заболеваний

Видовой состав тзей в фнгоценоэах культур определяли методом желтых чашек М Срике (Möencke, 1951) Параллельно вели наблюдения за особенностями развития бескрылых форм на изучаемых культурах Периодичностью учетов - 3-5 суток Определение тлей проведено к б и старшим научным сотрудником ГБС М А Келдыш

Полевую устойчивость к вирусам определяли в коллекционных насаждениях кульгур на естественном инфекционном фоне Устойчивость видов и сортов Líbales к переносчикам и векторный перенос оценивали по стандартной схеме (Келдыш, Помазков, 1979)

Растительные экстракты, полученные из свежих или замороженных листьев исследуемых сортов, анализировали серологически методом ИФА

Для проведения ИФА использовали микроплаты Cooke М29, АР ('Dynatech", Швейцария) Вирусы в растительных жстрактах определяли в соответствии с "сэндвич"-вариангом ИФА Для постановки серологических реакций использовали сыворотки, полученные из института Микробиологии РАИ, НИИ картофельного хозяйства и из учреждений Германии, Голландии, США

Оптическую плотность продукта окисления оценивали на вертикальном адсорбшюметре фирмы "Dynatech" модель HR-700 Microplate Reader" (Швейцария)

Вирусные препараты получали методомдифференциального центрифугирования и ультрацентрифугирования; в градиенте плотности сахарозы на центрифуге TL-100 Beckman. . ; : . . — -

Электрофорез белков в полиакриламидном геле и., иммуноблотинг проводили в соответствии • с протоколом,, используемым в качестве стандартного (Вишниченко с соавт., 1996; Vishnichenko et al., 1993). В работе использовали антисыворотку против рекомбинантного капсйдного белка Sh VX (Shallot virus X, ,Х вирус шалота) (As 37), предоставленную сотрудниками лабораторией молекулярной вирусологии НИИ с. х. биотехнологии. . ...•■.-,»•,.

■ : При иммуноэлектронной микроскопии использовали процедуру "декорирования" в модификации Вишниченко, Стельмащук, Завриева (1996).

'. Морфологическое состояние вирионов контролировали в. электронном микроскопе ЕМ-301 (Philips) в очищенных препаратах и прямым методом -(Проценко, 1966; Brandes, 1959). " " ' ".-J" -.^'"'л V/-:

'Тотальную РНК выделяли из 100 мг. растительногоматериала, с использованием метода фенольной депротеинизации или набора Rneasy Plant Mini Kit (QIAGEN, Германия). Реакцию обратной транскрипции проводили с использованием: рассеянной затравки и обратной транскриптазы вируса лейкоза мышей, лишенной активности РНКазы Н, в соответствии со следующим протоколом: 5 мкл тотальной РНК смешивали с 5 мкл рассеянной затравки (концентрация 20 рМ/мкл), смесь инкубировали при 65°С в течение 5 минут и затем охлаждали во льду. К смеси добавляли 10 мкл 5-кратного буфера для обратной транскрипции, 5 мкл 100 мМ дитиотреитола, 5 мкл смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов (10 мМ), 50 ед. обратной транскриптазы и 19 мкл воды,. инкубировали при 40°С в, течение 1,5 ч, после чего, обратную транскриптазу инактивировали прогревом при 92°С в течение 5 мин.

Тестирование растений методом полимеразной цепной - реакции проводили с использованием праймеров, сконструированных в лаборатории молекулярной вирусологии НИИ . с.-х. биотехнологии. Продукты; ПЦР-амплификации анализировали посредством электрофоретического разделения в 1%-ном агарозном геле.. .............

. Нематод . из почвенных образцов выделяли вороночным методом (Метлицкий с соавт., 1975) и методом Флегга (Flegg, 1967) на базе Института паразитологии РАН. (Образцы почвы под каждой культурой отбирали из 10 точек по диагонали участка, после чего образцы тщательно перемешивали и брали усреднённую пробу весом 1 кг. Определение нематод проведено д.б.н.

сотрудником Института паразитологии РАН Н.Д. Романенко. ; -

, , , , РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ • ;

; Анализ фсвотиоического проявления вирусов на культурах Tulipa, • - is-- Liliurn и Allium

В результате обследований насаждений! Tulipa,, Lihum и Allium зарегистрированы различные внешние признаки проявлення вирусных заболеваний

На тюльпанах наблюдали пестролепестность, крапчатость, штриховатость, полосчатость и кольцевую пятнистость листьев, различные типы деформаций, вызванные неравномерным ростом ткани листовых пластин, измельчение и деформацию цветков, подавление роста и развития растений Установлено, что больные растения отличаются от здоровых высотой, размерами листьев и цветков (табл 1)

Таблица 1

Садовые характеристики здоровых и больных растений тюльпана

Признак Здоровые растения (А) Больные растения (Б) Ь/А, %

Высота бутона*, см 6,0 4,5 75

Высота растения**, см 46,5 27,6 59

Ширина листьев*,см 4,5 4,0 89

Диаметр пуковицы*, см 4,0 2,6 65

Scariet

*) усредненные данные для 5 здоровых и 5 больных растений сорта Elegans'

**) усредненные данные для 5 образцов здоровых и 5 образцов больных растений сорта 'Ad Rem*

У зараженных вирусами растений тюльпана также значительно измельчаются луковицы, уменьшается высота бутона (на 25%) и растений (более чем на 40%)

Основными симптомами, наблюдаемыми на лилиях, являются крапчатость листьев, особенно на сортах из 6 группы (трубчатые и орлеанские гибриды), деформация листьев и цветков, отставание в росте, укорачивание междоузлий (карликовость), отмирание точки роста и отсутствие бутонов В условиях теппицы наблюдалось преждевременное усыхание нижних листьев, хлороз и деформация листьев с последующим усыханием

На видах и< разновидностях рода Allium отмечены хлороз и усыхание тистьев, жетгая крапчатость

Учеты пораженности свидетельствуют о стабильном присутствии вирусной инфекции, а также выраженной тенденции ее распространения и увеличения степени поражения.

Из данных рис. I следует, что вирусологическая ситуация в коллекционных насаждениях тюльпанов за период с 1986г претерпела значительные изменения^ Сорта тюльпанов, в которых было поражено 100% растений, в 1986г составляли лишь незначительную долю - 3,6% от всей коллекции Основную массу представляли сорта, у которых симптомы вирусной инфекции отсутствовали или были поражены единичные растения К

1997г более половины.. обследованных сортов . тюльпанов оказались поражёнными на 100% (Келдыш с соавт., 2001). В 2000г сорта, пораженные на 100%, составляют лишь 37% от всей ко^екции, что связано с выбраковкой сортов, не соответствующих требованиям , стандарта . в связи с ярким проявлением симптомов вирусной инфекции.1 - . > ,

80 В 60

8 40 * 20

ЙГ

1986

1997 2000 Гады учёта

2001

а до ю% □ 10-50% а более 50% И ¡00% "

. . Рис. 1. Степень поражения сортов тюльпанов по годам

Однако, по-прежнему, сорта, пораженные,в пределах от 10 до 50%, представляют 1/3 коллекции. В 2001 г, отмечена тенденция к уменьшению количества сортов, пораженных более чем на 50% и со 100%-ным поражением.., . , Динамику развития симптомов вирусного поражения на тюльпанах по. годам представлена в табл.¡2. • ...... • • •

Таблица 2

Год учёта Обследовано сортов, шт./% V Процентное соотношение сортов со следующими симптомами, шт./%

Вге Мо , - - Б» • Яквр

1996 467/100 172/36,8 270/57,8 178/38 2/0,4 • 53/11,3 19/4

1999 175/100 68/38 40/22,8 75/42,8 16/9 36/20,5 11/6

2001 305/100 > 80/26 42/13,7 100/32,7 21/6,8 14/21,8 23/7,5

Из табл. 2 видно, что независимо от наличия в сортах растений с пестролепестными цветками (Вге), наблюдается увеличение , степени поражения всего растения. Если в 1996г.крапчатость и штриховатость листьев (Мо) наблюдались более чем у половины представленных в коллекции сортов (57,8%), то в 1999 г данный признак отмечен только у 22,8% сортов коллекции,..

и наиболее часто фиксировались растения с полосчатостями (Str) В 19992001 гг отмечена тенденция увеличения процентной доли сортов с деформированными (Dis) и отстающими в росте растениями (Stu) Также к 1999г заметно возросло число сортов, на растениях которых наблюдался кольцевой узор (Ri Sp)

Таблица 3

Трансформация симптомов вирусных поражений в коллекции Tulipa L

: № Í Сорт Тип симптомов

1996 1999 ! 2000 2001

1 'Miscodeed' Wh-Gr Mo. Ru Le Wh-Y Mo j Y Str -

-> 'Golden Apeldoom' Y-Gr Mo Y Mo—»Ri Sp, j Y-Gr Str Y Str

3 Texas Gold' Wh-Gr. Mo, 1 Wh-Gr Mo; D- Wh-Str j Gr Str, Dis Le j Gr Mo. Str Chi, Wh-Gr Str, Ri Sp

4 j 'Daydream1 ¡ Wh-Gr Mo і Y-Gr Mo; D- ; Y-Gr Str Gr Str 1 Bre. Wh-Gr Sp

5 ! 'Inzell' і Wh-Gr Mo, 1 1 Y-Gr Str Chi, D V, ! Chi, D V Wh Mo 1 Chi, D V, Y-Gr Str

Таким образом, в динамике наблюдается трансформация признаков проявления вирусов Пестролепестпость цветков может проявляться лишь на третий или четвёртый год (с 'Daydream') На примере таких сортов как 'Golden Apeldoom' и 'Miscodeed' видно, что к 4-му году выращивания растения не соответствуют требованиям стандарта и подлежат выбраковке (табл 3) Нами установлено, что диагностическим критерием пестролепестности у бело- и желтоцветковых сортов являются "листовые" симптомы, которые проявляются наиболее ярко (с 'Inzell', с 'Miscodeed')

В условиях выгонки нами нивелирование внешних признаков проявления вирусов

Таблица 4

Распространение вирусных болезней в культуре лилий

Период изучения

j_1997_

lIML

Количество сортов (шт у/о от общего числа сортов Обследова- [_% пораженных растений в сорте

но сортов > до 10% I 10-50% > 50%

45/100

40/88,9

5/11,1

87/100

1/1,1

23/26

8/9

100%

36/41 I

На коллекции лилий отмечена сходная с коллекцией тюльпанов ситуация по динамике распространения вирусного поражения в сортах (табл 4)

Если в 1997г не было отмечено ни одного сорта, пораженного на сто процентов, то в 2001 г они составили 41% от числа всех сортов в коллекции

Комплексная инфекция на тюльпанах

Проблема смешанных инфекций представляется нам наиболее сложной и многоплановой по сравнению с другими случаями вирусных поражений.

Пораженность тюльпанов вирусами и другими патогенами представлена в табл. 5.

Таблица 5

Всего • Количество сортов поражённых патогенами

■ . - сортов, шт. <Е| 3.Ö я ' Є ' 5 О : О. <Л >> . х та => -є Sclerotinia bulborum (Rchm) Sacc. : Botrytis tulipae (Lib.) • Lind. СЛ 'S s, І : ^ ■= .3 g CS u. ' о • > =2 о "5 S* CO '-V. u vi

с ё о ss Tj '—-О rj •Ы "§ є 3 'І 3 u- - « 3 ■ •e Си :siS « -XI- O- £ • - .8 il 's0-

Сорта, , 36 . . 23 5 .... - 5>:J 1 - , T ■

пораженные . " . * ' . ' Г r"

вирусами на 100% -

Сорта,. . 21..,: . 16 6 .2 : 2 , 2 . vr 1 1

поражённые

вирусами - , '

частично

Сорта без явных 8 .5 ' 1 1 . •2 2 2 1

симптомов V' і ■ і

Итого: . | 65 44 12 8 5 - 11 3 2

На фоне активного поражения вирусной: инфекцией развиваются патогены грибной природы, вредоносность : которых увеличивается пропорционально степени поражения растений вирусами. Выяснилось, что из 65 сортов, у-л которых выявлено присутствие , патогенов грибной < и" бактериальной природы, 36, что составляет 55% от общего числа" исследуемых; сортов,"поражены вирусной инфекцией на 100%. ;

Мониторинг распространения вирусов

Серологическое тестирование растений, в том числе бессимтомных, ряда сортов методом ИФА свидетельствует о высокой частоте встречаемости вирусов в коллекционных фондах изучаемых культур. •

На основании данных табл 6 можно сделать вывод о том, что наиболее часто выявляемыми вирусами на представителях порядка Liltales являются * на тюльпанах - ТО И (36%), CMV. 77«К (14%) и.-ШК(12,8%), S на лилиях — CMV (71,4%), 7ВН(20,5%), /ШК(12,5%), S на луках —TBV и TMV (33%)

Таблица 6

Оценка распространенности некоторых вирусов на представителях порядка Lthales (ИФА)

Культура

Tulipa Lifium

Allium (ВИДЫ1

Всего сортов, шт /%

78/100 112/100

18/100

Количество сортов (urr /%), в которых обнаружены вирусы

TBV

28/36 23/20,5

6/33

CMV

10/12 8 80/71 ;4 1/5,5

TMV

5/6,4_

6/5,3

6/33

TRV I AMV

8/10,3 і 10/1

2,8~¡~"l

_і

1RSV ,

11/14

і 14/12,5 ;

Согласно данным серологического анализа в коллекциях луковичных культур наряду со специализированными для них вирусами, такими как ТВ У, СМУ, АМУ, выявлен ряд неспецифических возбудителей (табл 7)

Таблица 7

Оценка распространенности вирусов, несвойственных для исследуемых

Вирусы Всего протестировано сортов, шт / кол-во сортов, где вирус обнаружен, шт / %

Tulipa Lihum Alhum

NMV 73/4/5 106/19/18 J 8/7/39

CrnMV 64/4/6 [86/13/15 18/7/39

AsTV 78/11/14 112/7/6 3 18/8/44

BYDV 37/9/24 31/8/26 HI*

fpVY~ 37/7/19 31/14/45 нт

PVS 11-1- 17/5/29 н т

PDV 31/4/13 32/4/12,5 6/-/-

PPV нт 6/1/17 н т

ApMV 31/1/3,2 32/6/18,7 6/-/-

ApCLSV к т 32/2/6 6/-/-

CLRV 31/2/6,4 ' 32/1/3 6/-/-

PNRSV 31/1/3,2 33/6/18 16/-/-

SGV нт 32/2/6 6/-;- 1

A1MV 11/1/9 17/-/- н т 1 1

*) не тестированы

■. Среди последних на тюльпанах наиболее часто диагностировались BYDV (24%) PVY (19%), на лилиях преобладающими являлись картофельные вирусы PVY (45%), PVS (29%) и BYDV (26%). Инфицирование декоративных луковичных культур такими вирусами как PVY, PVS, AsTM и BYDV нами выявлено впервые. На лилиях также обнаружены такие нехарактерные для этой культуры вирусы как NMV (Narcissus mosaic'virus, вирус мозаики нарцисса), выявленный в 18% тестированных образцов, и CrnMV (15%). На тюльпанах NMV и CrnMV"также присутствуют, но фиксируются - реже (5 - и 6% соответственно).---'" - . ''v:: - - ' ív: i • ''• ••'•■'•• :

:. 'Следует также отметить; что на луках, из неспецифических для данной культуры вирусов, впервые выявлены NMV- и CrnMV с достаточно высокой частотой встречаемости (39%), а также AsTM (44%). На этом основании мы можем отнести AsTM, NMV и CrnMV к числу доминирующих на растениях коллекции А1Ншп. *■ ■•' ; i Í . : - . ^ f s

'!. Серологический скрининг методом ИФА растительных образцов исследуемых культур свидетельствует о'преобладании смешанной вирусной инфекции на представителях родов Tulipa, Lilium и Allium (рис. ' 2). У тюльпанов, например,'число компонентов вирусного комплекса колеблется по сортам от моноинфекции ('Zeen v. d. Mark','Jessica', 'Golden Oxford', 'Maria's Dream') до 5 (с.-'Beauty of Oxford'), 6 (c. 'Dooglas Beaded)'(Байкалова, 2000). Среди лилий также отмечены сорта, инфицированные пятью и более вирусами ('Pagoda Bells', 'Bright Star", 'Bright Cloud', 'Царизма', 'Примесь Трояна' и другие).

70

ео

50 40 30 ;20 10 - о

OS

Нмоноинфекция

□ комплекс возб-лей

Tulipa ' Lilium

Allium

Рис. 2. Характер инфицирования вирусами представителей порядка - ! - ' Liliales (по данным ИФА) 1 • ' j

> Особенно ярко преобладание комплексной инфекциии наблюдается у растений рода Allium. Среди наиболее поражённых можно отметить виды луков: A. odorum Ь.'и A. nutans L., которые оказались инфицированными 4 и 5 вирусами соответственно. ! . . > , .

На основе биологических тестов основными выявленными нами вирусами являлись- на тюльпанах ТВ У, ЫМУ, СгпМУ и СМ У, на лилиях СМ У и ТМУ

Неканонические связи в составе вирусных комплексов, поражающих декоративные луковичные культуры

Целью настоящего исследования • был скрининг ранее неидентифицированных вирусов на представителях сем [лЬасеае, Методами иммуноблога и полимеразной цепной реакции, (ПЦР) с использованием вырожденных праймеров, подобранных к консервативным доменам геномов* аллексивирусов, нуклеотидные последовательности которых в настоящее время депонированы в банке,генов, была проведена идентификация вирусов серологически родственных 8ИУХ\п рода АНехь

Таблица 8

Анализ видов и сортов Liliaceae на присутствие Аллексивирусов

Виды / сорта 1 Реакция в 1 иммуноблоте Реакция в ПЦР

Род Tulipa

1 'White Swallow' I *-/+*

2 'Inzell' I + /- +

3 'Moonstruck' 1 + / +

4 'Orange Favorite' i + /+■

5 "Goldstandard' ■ 't " "" i + /- ч-

6 'Albino* 1 1 + / + -

Тюльпаны (8 сортов) 1 + /+- 11 Т *

Тюльпаны (13 сортов) I -

Род Lihum

Лилии (29 сортов) 1 -

*) растит экстракт / очищенный препарат, н т — не тестировали

Как следует из данных, представленных в табл 8, во всех 29 исследованных сортах лилий антиген, серологически родственный капсидиому белку S/гУХ, отсутствовал Искомый ангиген присутствовал в растительных ~>кстрактах 14-ти из 27-ми исследованных сортов тюльпанов, однако, интенсивность сигнала в иммуноблоте в этих случаях была относитечьно слабее, чем в контроле Методом ПЦР исследовали как сорта тюльпанов, в которых присутствовал антиген, серологически родственный капещшому белку ShИХ ('White Swallow', 'Moonstruck1, 'Orange Favorite'), так и сорта, в которых такой антиген обнаружен не был ('Inzell', 'Gold Standard') Наличие продуктов специфической амплификации наблюдали при ПЦР-анализе растений тюльпанов, в экстрактах которых присутствовал антиген,

серологически родственный капсидному белку ShVX, а также - при ПЦР-аиализе отдельных сортов тюльпанов, в которых такой антиген отсутствовал

Таким образом, совокупность результатов, полученных в настоящей работе, и опубликованных ранее (Вишниченко с соавт, 1999), позволяет еде тать вывод о том, что спектр растений-хозяев аллексивирусов, кроме известных видов, принадлежащих к роду Allium (сем Alliaceae), включает также тюльпаны (сем, Liliaceae). Обнаруженные в растениях тюльпанов алленсивирусы в серологических тестах слабо взаимодействовали с ангисывороткой против- рекомбинантного капсидного белка ShVX, что дает основание предположить существование новых, ранее неизвестных представителей группы аллексивирусов

Тестировшме растений Tulipa. Lilium и Allium методом ПЦР

Методом полимеразной цепной реакции были протестированы образцы 21 сорта тюльпанов, 8 сортов лилий и 4 видов луков с использованием универсальных праймеров, предназначенных для идентификации вирусов, принадлежащих к четырем родам Poty-, Carla- и Potexviruseb, а также праймеров для обнаружения TMV Отдельно нами были проанализированы только тюльпаны на заражённость вирусами из родов Nepo-, Clostero- и Tnchovimses

При помощи ПЦР нам удалось выявить поражение тюльпана сорта 'White Swallow* потивирусамн Карлавирусы обнаружены в четырех сортах лилий ('Wattle Bird', 'Atlantic'. 'Richard Latty', 'Рябинка') Наиболее вероятно, что положительная реакция на универсальные праймеры к вирусам родов поти- и карлавирусов обусловлена присутствием PVY и LSV соответственно Данное предположение подкреплено результатами визуальной диагностики на основе симптомов, зарегистрированных на указанных сортах тюльпанов и лилий и результатами ИФА

В образцах сорта 'Albino* обнаружены нематодопереносимые непо- и тобра- вирусы, что можно трактовать как наличие в растениях A M У, TRSV, TomRSV, SLRS, RR У, CLRV и TRV соответственно Вывод подкрепляется резучьтатами ИФА и данными MA Келдыш (1996) Образцы растений 3 и 5 сортов Tulipa проявили положительную реакцию на клостеровирусы и гриховирусы соответственно, ранее не выявляемые в культуре

При тестировании растешш лилий с нестролепестными цветками погнвирусы выявлены не были ни методом ИФА, ни ПЦР, что свидетельствует о том, что в данных образцах пестролепестностъ цветков лилий индуцируется иным фактором

Отсюда счедует вывод, что новые натосвязи представляют уже типичное явление в искусственных экосистемах И велика вероятность того, что обнаруженные вирусы, по-видимому, не отражают потенциального спектра вирусного заражения, и, следовательно, в условиях сложных экосистем

возможно его насыщение за счет, как уже известных для луковичных культур-вирусов,так и неспецифических. -'• ¡ . j, , ;

: Таким образом,* мы можем: сделать вывод о поражении тюльпанов неканоническими для этой культуры вирусами, что подтверждается как ИФА,-так и высокочувствительным методом Г1ЦР. < . > ; .

Тли в фитоценозах декоративных луковичных растений

В экосистемах тюльпанов и лилий нами выявлено 22 вида тлей. . ;

Данные,- полученные ' на основании результатов отлова тлей с использованием жёлтых чашек Мёрике, свидетельствуют о" наличии в составе" сборов тлей, приуроченных к различным как сельскохозяйственным и декоративным культурам, так и дикорастущим растениям, наряду с видами, характерными для цветочных растений (D. tulipae, М. rosae) и являются переносчиками многих -вирусов, поражающйх: широкий * круг различных растений, в числе которых представители семейства Liliaceae. - *•«'

* Данные по корреляции распространения таких видов тлей • как Aphis craccivora Koch., A. fabae Scop.4, Aulacorthum sol ал i (Kalt.), Brachycaudus helichrysi (Kalt.), Macrosiphum avenae Т., M. euphorbiae (Thorn.), M. rosae (L.), Myzus cerasi F.', : Myzus persicae" Sulz. и Rhopalosiphum padi (L.) и'вирусов свидетельствуют о том, что они являются активными компонентами патобиоценоза на коллекциях Tulipa й Lilium." - : •" ' ^ - ,

! " Из полученных' дшшых по' - обследованию * растений тюльпанов в открытом грунте на присутствие колониальных' форм' тлей, мы можем констатировать факт произошедшей адаптации тлей Aphis 'fabae Scop., Macrosiphum euphorbiae (Thorn.) и Myzus persicae Sulz к культуре тюльпанов. <

• ' " '■■ .'• >. • < - Таблица 10

.. >'' Изучение роли тлей в передаче ТВ V

Вил переносчика * " ■ Источник инфекции Инкубацион. период, (дни) Эффект-сть передачи, (%) Контрольное . тестирование ;

Культура . Сорт - .

M.persicae . Sulz. Tulipa , "New Desing' .13 . 46 .. + г

•Silentia' • 43.

Lilium ' 'Bright Cloud - 15 ■ 18 + -

M.cerasi (F.) [>БогЬГ(КаЇЇ) Tulipa Tulipa v.і 'White Dream . 18 . .., .,12

'Court Lady' 20 • ■ : 19 ; +. :.■

Тли Aphis fabae. Rhopalomyzus lonicera, Myzus persicae, Aphis tomenthosi, Macrosiphum rosae способны питаться на сортах тюльпанов и лилий в течение периода, достаточного для передачи неперсистентных вирусов

Показана возможность передачи ТВ V двумя новыми видами Myzus cerasi (F ) и Dysapbis sorbí (Kalt.), наряду с известным переносчиком М persicae Sulz. Эффективность передачи неспециализированными видами тлей составила 1020% Результаты экспериментов по изучению роли тлей в распространении ТВ У на тюльпанах представлены в табл ! 0

Таким образом, занимая в структуре афидофауны луковичных значитепьнос место, они могут играть определённую роль в передаче инфекции ТВ У При этом для вида М cerasi (F ) была показана способность к передаче ТВ У из основного хозяина как крылатыми, так и бескрылыми стадиями

Нематоды — компоненты патобноценоза луковичных культур

С целью изучения функциональной роли нематод на луковичных культурах были проведены работы по выделению их из сборных почвенных образцов на каждой культуре

Наибольшим количеством видов на всех трёх культурах представлены свободноживущие нематоды, а на лилиях и луках вторыми, по числу выявленных видов, являются фктопаразига (табл 11)

Таблица 11

Видовое разнообразие нематод по выявленным эколого-трофическим

группам на растениях родов Tulipa. Lilum Allium

Эколого-трофическая Количество видов, шт на 100 г почвы

группа нематод Тюльпаны Лилии Луки

Свободноживущие 10 13 10

Хищники 2 з з

Фито паразиты 3 10 11

Микогельминты 3 5 4

Сапробионты 5 7 8

Итого 23 38 36.

На тюльпанах группа фитопаразитов представлена экгопаразитическими перфораторами Paratylendius ьрр (70%) Среди фитопаразитов на луках наиболее распространены жгопаразишческие перфораторы Paratylenchus spp (39%) и Rotylenchus robustus (5,7%), стеблевой эндопаразит Ditylenchus spp (2,8%), три вида рода Pratylenchus (Р crenatus, Р penetrans, Р pratensis), которые составляют вредоносную группу корневых эндопаразитов На лилиях паразитофауна представлена Tylenchorhynchus spp (33%), Heiicotylenchus spp (13%), R robustus (13%), Rotylenchus spp (6,6%), Ditylenchus spp (4,4%) Кроме

того, на лилиях выявлены векторы вирусов Longidorus elongatus и Trichodorus

spp.,: способные переносить AMV,RRVi TBSV, TRV. .Í - ¡ . - •„. , .<-' ____

Несмотря на то, что при серологическом скрининге образцов растений тюльпанов были выявлены ■ нематодопереносимые вирусы, - такие. как AMV, р^ж^ЛШС- JXK ФУР* выявленных : нематод на культуре.? Tulipa отсутствуют 4--'. иемаггоды — векторы. Таким образом, мы можем сделать вывод о том,,что не всегда наблюдается корреляция между .распространением - вирусов и их нематод-переносчиков. ^

Роль устойчивости в регуляции состояния популяций вирусов и - векторов-; ' : f. ... * i

Установлено, что между поражаемостью отдельных сортов в пределах каждого садового класса существуют значительные различия.. Среди наименее поражаемых садовых классов можно выделить тюльпаны Кауфмана, Фостера и Грейга; 91,5% сортов4 которых, в среднем,'не проявили признаков поражения

гак • • . : .:.'. • - г » , - ■

Наименее поражаемыми комплексом вирусов оказались тюльпаны групп Кауфмана, Дарвиновские гибриды и Триумф, у которых было зафиксировано относительно небольшое число сортов поражённых в ' сильной степени. Имунных сортов к комплексной инфекции- нами - не выявлено, ' но в перечисленных выше садовых классах отмечены высокоустойчивые и среднеустойчивые сорта, среди которых можно выделить следующие: из группы Триумф 'lie de France', 'Peer GyntY'Garden Party', 'Abu Hasan1, 'High Noon', 'Kees Nelis'; из ; группы Дарвиновские гибриды ■ 'My Lady', 'Pink Impression', 'Helena Rubinstein', 'Ad Rem', 'Lefeber's Memory', 'Lefeber's Favorite', 'Elisabeth Ardeen', 'Dawnglow'; из группы тюльпаны Кауфмана 'Stresa', 'Shakes

peare', 'Corona', 'Ancilla'. - ......

- Наименее устойчивы Зелёноцветковые, Попугайные, Махровые Ранние и Махровые Поздние тюльпаны. В этих классах преобладают сорта сочень низким уровнем устойчивости. 'V > ■ •■

Наибольшее число растений, заселённых тлями, выявлено' в группе Триумф. Следует отметить, что на сортах групп Лилиецветные, Дарвиновские гибриды, тюльпаны Кауфмана, Фостера и Грейга нами не обнаруживались ни единичные особи тлей, ни их колоний. Что позволяет считать сорта перечисленных' групп устойчивыми к-тлям ; в полевых' условиях. В контролируемых условиях, при искусственной подсадке, сортов, устойчивых к тлям-переносчикам не выявлено.

J '.<:•> ■..' . ... ;

Основные паразитарные комплексы на луковичных культурах н обоснование мер зашиты

В условиях биоценозов вредные организмы различной этиологии находятся в постоянном взаимодействии и взаимовлиянии друг на друга и на поражаемые растения

Недооценка адаптивных реакций и механизмов регуляции паразитарных комплексов приводит к обострешпо фитосашггарной обстановки и ухудшению состояния агроландшафтов

В биоценозах декоративных луковичных культур нами выявлены паразитарные комплексы (табл 12), доминирующей компонентой которых являются вирусы

При тгом доля несвойственных патологических ассоциаций вирусов и их переносчиков, которые формируются в биоценозах изучаемых луковичных культур, занимает значительное место (до 45%)

Таблица 12

Выявленные и прогнозируемые ассоциации вредных организмов в биоценозах

луковичных культур

тура

со специфическими вирусами с несвойственными вирусами

TBV, CMV. -Aphis fabae PVY, AIMV - Aphis fabae, Macrosiphum euphorbiae

TBV, CMV, -Macrosiphum euphorbiae BYDV - Macrosiphum avenae, Rhopalosiphum padi

TBV, CMV -Myzus persicae AsTV, AIMV - Myzus persicae

TBV - Myzus cerasi*. Dvsaphis sorbí AIMV - A craccivora

AMV - X coxi, X 1 ShVX - Aceña tulipae diveracaudatum. I Longidams і caespiticola, Longvdotus elonsatus і

CMV-Aulacorthum PVY, AsTV, NMV -Aulacorthum solani

Сопутствующие вредные организмы

Tulipa

Rhizoctoma

tuliparum**.

Fus ал urn oxysporum,

Typhula ishikanensib

Paratylenchus spp

1л1шт

ТВУ, СМ V-., Мугиэ регеюае, АрЫ§_|аЬае,

МасгощЬиШ

еирЬогЫае

РУУ, А1МУ - АвЫУаЬае, МаскюрЪит еирИогЫае РУБ. А1МУ - Мудк регасае _

РУБ - АиЦсоПЬшп 8о1аш В УОУ - МаскшрЬит ауепае. НИора^фЬит

вай!

АМУ - Ьоппускюи elongatus, X. сохи 2С . , «Йуегасаиёашт. , ~ > . . 1опрс1оги5 сае8рН1со1а ТИУ - ТпсЬоёогш 8рр.

Войут еШрйса

Ту1епсЬогЬупсЬиз врр., НеНсоТукпсЬив врр., Яо1у1епсНи8 эрр., Я. гоЬиэШБ, . р^епсЬиэ эрр. ;

РРУ - А. сгасс!УОга. ЫМУ - Аи1асойКит 8о1аги

АШит; -

ТМУ

; регеюае

N1^. ОпМУ • Аи1асог&шп Бо1ат СгпМУ

ТВУ - Ар(ш ГаЬае. -Масгоз1рЬит еирЬогЬ|ае. Муд^ регеюае.

Риссииа а11п,

Регопо$рога

ёевШгсЮг

РапйукпсЬиз Брр., Я. гоЬивШв, О^епсЬив Брр., РгаГукпсЬиз сгепа1ш, Р. репеггапв, Р. рга1еп515

*) выделены прогнозируемые компоненты ассоциаций ;

**) данные по грибным патогенам - на основании отчёта ОЗР ГБС, 2000

.Таким образом, при разработке системы защиты луковичных культур от вирусов, необходимо; учитывать особенности развития всех компонентов паразитарного комплекса с учётом специфических условий агролацдшафтов и ботанических садов. • ' • .

Вирусы являются неотъемлемыми членами любой экосистемы и в этой связи, по-видимому, невозможно . существование во. времени < абсолютно здоровых растений, содержание в коллекциях "безвирусных" линий, клонов и форм растений. Оптимальная стратегия противовирусной защиты в современных условиях ориентируется на формирование * агроценозов, в которых возможно регулирование плотности вредных организмов и включает . следующие основные этапы: ' " ~ '."... / ■

^ Контроль состава паразитарных комплексов на основе квалифицированной оценки экологической и фитосанитарной обстановки (состав вирусов, их переносчиков, сопутствующих вредных организмов, состояние их ; популяции, биолого-экологические свойства растений-хозяев и уровень взаимодействия между ними, прогноз новых патологических связей).

✓ регулярное ф mocdi штарное тестирование на присутствие объектов

эпифитотийного типа. У Удаление из коллекций и экспозиции восприимчивых видов и сортов, перевод ценного материала в генные банки Оздоровление отдельных сортов, представляющих ценность для генофонда. ■S Внедрение системы оздоровления при производстве посадочного и семенного материала (тестирование, тсрмо- (химио-) терапия, культура меристем)

■S Проведение профилактических мероприятий, предотвращающих распространение вирусной инфекции.

• соблюдение карантинных требований

" тщательная выбраковка больных и ослабленных растений в течение вегетационного периода с учетом особенностей симптоматики вирусов на луковичных культурах

• биологический и химический контроль переносчиков, резерваторов вирусной инфекции и кормовых растений для тлей

■ введение севооборотов с ежегодной сменой участка для тюльпанов и, как минимум, I раз в три года для лилий и туков При исключешш га севооборота на тюльпанах растений - резерваторов переносчиков вирусов (горчица и другие) Некоторые сорные растения (горчица, пырей ползучий, мятлик однолетний) являются хозяевами грибов -переносчиков вирусов, что также необходимо учитывать В зависимости от этого пороги вредоносности надо соответственно корректировать Введение устойчивых сортов и видов, а также экземпляров с латентной реакцией

s Профилактика грибных, бактериальных заболеваний и других вредных организмов

Суммируя изложенное, можно заключить, что правильный выбор комплекса экономически эффективных мероприятий в интегрированной защите растений требует тщательного анализа системы вирус-переносчик-хозяин Знание "стратегии выживания" вирусов и сопряжённых вредных организмов, имеющих для данной культуры наибольшее значение, является для этого важнейшей предпосылкой

ВЫВОДЫ

1 В результате обследований насаждений: Tulipa, Lilium и Allium отмечены различные внешние признаки проявления вирусных заболеваний На основании комплексного вирусологического анализа выявлено стабильное присутствие вирусных патогенов, а также тенденция их распространения и увеличения степени поражения растений, что свидетельствует о накоплении инфекционного потенциала

2: В биоценозах декоративных луковичных культур выявлены паразитарные комплексы, доминирующей компонентой которых

> являются вирусы,1 в том числе и: несвойственные для изучаемых культур.. • } . -■'■'> - ■ .! -• ... -' .-.¡г,;

3. Всего нами обследовано 504 сорта тюльпанов. За истекший период из

• - коллекции было отбраковано 234 сорта,.преимущественно в связи с

поражением вирусной инфекцией. _ м;

4. На фоне активного поражения вирусами развиваются патогены

- грибной :, природы,", .вредоносность ^.-которых увеличивается-пропорциально степени поражения растений вирусами. Из 65 сортов тюльпанов с признаками грибной патологии на 36 зарегистрировано

- 100%-ное . поражение вирусами. :На тюльпанах .наиболее часто

' • выявлялись^ Rhizoctonia tuliparunv> Fusarium oxysporum и Typhula

ishikariensis. ' • . ' ; » ,

5. Данные серологических анализов- свидетельствуют о . широком распространении = вирусов, < передаваемых • ■ тлями: и нематодами. Наиболее часто выявляемыми' вирусами являются:'на тюльпанах —

' га К (36%), CMV и 77iSK(14%), /ШК(12,8%); на лилиях - CMV (71%), ГОК (20,5%), AMV (12,5%); на луках - TMV (33%). В условиях вы гоночной оранжереи на тюльпанах превалирует гак

6. Среди неспецифических возбудителей на тюльпанах наиболее часто

- диагностировались 5ТОК (24%), РКУ (19%) и AsTV (14%); на лилиях преобладающими являлись картофельные вирусы /'{/У (45%), PVS (29%) иBYDV (26%). Инфицирование декоративных луковичных культур такими вирусами как NMV, CrnMV, AsTV, PVY, PVS и BYDV нами' выявлено - впервые.' На коллекции Allium доминирующими являются неспецифические для этой культуры вирусы AsTV (44%), NMV и CrnMV (39%), TBV (33%). На растениях рода Tulipa впервые идентифицирован новый вирус, серологически'родственный 57» принадлежащий к роду аллексивирусов. ' "■■ 1 • '

7. Серологический скрининг методом ИФА растительных образцов исследуемых культур свидетельствует о преобладании комплексной вирусной инфекции на представителях родов Tulipa, Lilium и Allium. У тюльпанов число компонентов колеблется по сортам от моноинфекции (с. 'Zeen v d. Mark') до 6 (с. "Douglas Beader'). В коллекции лилий также отмечены сорта, инфицированные пятью и более вирусами'('Pagoda Beils', 'Bright Star1, 'Bright Cloud', 'Чаризма', 'Примесь • Трояна' и др.)." Среди наиболее поражённых видов луков

* можно отметить А.' odorum L. (лук душистый) и Allium nutans L. (лук слизун), в которых выявлено ; 4 - 5 вирусных компонентов соответственно: "- i . . с -■ >': > •. - •

8: Методом ПЦР на тюльпанах и лилиях идентифицированы вирусы из родов поти-, карла-, клостеро- и трихо-.

9. В * экосистемах тюльпанов и лилий выявлено 22 вида тлей, приуроченных к различным дикорастущим, сельскохозяйственным и декоративным растениям, 10 из них вместе с переносимыми ими вирусами являются компонентами патобиоценоза на коллекциях Tulipa и Lilium

10 Выявлен факт адаптации тлей Aphis fabae, Macrosiphum euphorbiae и Myzus persicae к культуре, тюльпанов, как к источнику дополнительного питания в процессе развития.

11 Тли Acyrtosiphon caraganae, A fabae, Aphis tomenthosi, Macrosiphum rosae, M. persicae, Rhopalomyzus lonicera, колонизирующие многолетние растения, входящие в состав биоценоза, способны питаться на сортах тюльпанов и лилий в течение периода, достаточного для передачи неперсистентных вирусов

12 Показана возможность передачи ТВ У двумя новыми видами тлей Myzus cerasi, Dysaphis sorbí Эффект передачи составил 12 - 43%

13 При изучении видового состава нематод выявлено, что наибольшим количеством видов на всех трёх культурах представлены свободноживущие нематоды На лилиях и луках вторыми по численности являются фитопаразиты. Векторы вирусов Longidorus elongatus и Tnchodorus spp выявлены только на лилиях. На тюльпанах не выявлено корреляции между распространением вирусов и нематод векторов

14 При фитосанитарной оценке состояния тюльпанов выявлено, что наименее поражаемыми ТВ У являются сорта тюльпанов садовых классов Кауфмана, Фостера и Грейга В группах Триумф и Дарвиновские гибриды выделены сорта относительно устойчивые к ТВУ

15 Менее поражаемыми комплексом вирусов оказались сорта тюльпанов из групп Кауфмана, Дарвиновские гибриды и Триумф Имунных сортов к комплексной инфекции нами не выявлено, но в перечисленных выше классах отмечены высокоустойчивые и среднеустойчивые сорта.

16 Полевой устойчивостью к тлям обладают сорта групп Лилиецветные, Дарвиновские гибриды, тюльпаны Кауфмана, Фостера и Грейга Наиболее восприимчивыми оказались сорта группы Триумф В контролируемых условиях, при искусственной подсадке, сортов, устойчивых к тлям, не выявлено

ОПУБЛИКОВАННЫЕ РАБОТЫ

1 Арушанова ЕС, Тимохина ЕТ, Байкалова ОС Фитосатггарное состояние коллекционных посадок Narcissus L и перспективы его оптимизации // Тез докл III Международной конференции "Цветоводство - сегодня и завтра" - М, 1998 - С 26-27

2. Байкалова О.С.,; ■ Арушанова Е.Си; Депрессивные факторы - при. возделывании ' Тюльпанов ^// 'Мат. : науч. коиф.; "Достижения и перспективы в области тропического земледелия и животноводства".

- М.: РУДН, 2000. - С. 65-66. - л- ь : . ,л ■-,>'■

3. Байкалова О.С. Изучение паразитарных комплексов - с участием вирусов на тюльпанах "// Труды научи, конф-ции молодых учёных и специалистов ТСХА..r- М.: ТСХА, 2000. Рукопись объёмом 7с.. депонирована в 4.3 выпуске электронного издания БД "Агрос" № 032900034 в НТЦ "Информрегистр" за2000г. > <'• : -

4. Вишниченко В.К.,; Байкалова О.С., Келдыш М.А:; Завриев С.К. : Диагностика и идентификация Аллексивирусов : методом

полимеразной цепной реакции // Мат. II Международной научной конференции "Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии". - М., 2000.'-С. 54-55. ■ . - .... г i

5. Келдыш - М.А:, Байкалова О.С., Чсрвякова О.Н., Арушанова Е.С.

- Внимание, опасность: комплексная инфекция // Цветоводство. — 2001.: -№3.-С, 18-19......' • .

6.' Байкалова О.С. • Обнаружение - Аллексивирусов в составе ■ вирусных комплексов, -поражающих декоративные луковичные культуры в коллекционных насаждениях Главного Ботанического'Сада РАН //

- Тез.' докл. I Молодёжной научной конференции "Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии". - М., 2001. — С. 17-

■•. Jg. •< .. ^ ..:■ . - - '.и ,, ^ л- -.■:■-, . , . ,

7. Келдыш М.А., Байкалова О.С., Червякова О.Н., Арушанова Е.С. О некоторых факторах, ограничивающих" выращивание" некоторых цветочных культур (Liliales, brídales) //Бюллетень ГБС. - 2001. - Вып. 182.-С. 147-154.

Объем f.£n л

Зак S93

Тираж S О экз

AHO «Издатечъство МСХА» 127550 Москва, ут Тимирязевская, 44

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Байкалова, Ольга Сергеевна

I. Введение.

II. Состояние вопроса и задачи исследований.

2.1. Биологические особенности растений родов Tulipa L., Lilium L. и Allium L.

2.2. Распространение и вредоносность вирусных заболеваний декоративных цветочных культур.

2.3. Биоэкологическая характеристика основных вирусов, поражающих тюльпаны, лилии и луки.

2.3.1. Вирусные болезни, поражающие тюльпаны.

2.3.2. Вирусные болезни, идентифицированные на лилиях.

2.3.3. Вирусные болезни луков.

2.4. Современные методы исследований вирусов.

2.4.1. Иммуноферментный анализ.

2.4.2. Иммуноблоттинг.

2.4.3. Полимеразная цепная реакция.

2.5. Особенности циркуляции вирусов.

2.5.1. Растения-резерваторы вирусов, поражающих декоративные луковичные культуры.

2.5.2. Распространение вирусов от больных растений к здоровым.

2.6. Система интегрированной защиты луковичных культур от вирусов.

2.7. Цели и задачи исследований.

III. Экспериментальная часть.

3.1. Условия, материалы и методы исследований.

3.2. Видовой состав и уровень распространения вирусных заболеваний в коллекциях луковичных культур.

3.2.1. Анализ фенотипического проявления вирусов на культурах Tulipa L., Шиш L. и Allium L.

3.3. Комплексная инфекция на тюльпанах.

3.4. Мониторинг распространения вирусов методом ИФА.

3.5. Диагностика вирусов методом биологического титрования.

3.6. Неканонические связи в составе вирусных комплексов, поражающих декоративные луковичные культуры.

3.6.1. Тестирование растений Tulipa L., Lilium L. и Allium L. методом ПЦР.

3.7. Тли в фитоценозах декоративных луковичных растений.

3.7.1. Изучение роли тлей в распространении вирусов декоративных луковичных культур.

3.8. Нематоды - компоненты патобиоценоза луковичных культур.

3.9. Роль устойчивости в регуляции состояния популяций вирусов и векторов.

IV. Основные паразитарные комплексы на луковичных культурах и обоснование мер защиты.

V. Выводы.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Адаптивные особенности доминантных паразитарных комплексов на представителях порядка Liliales L."

В мире доход от продажи декоративных растений составляет около 50 миллиардов долларов, из них 12 приходиться на Западную Европу и 6 - на США и Японию. В Европе лидерами являются Нидерланды (50% мировой продукции цветоводства), а также Дания, Бельгия, Германия, Италия, Израиль (Ьалузоп, 1996). Возрастающий спрос на цветочную продукцию привёл к ускорению темпов развития промышленного цветоводства в нашей стране. В связи с чем, в настоящее время отмечаются тенденции возрастания внимания к качеству цветоводческой продукции, а также мерам по обеспечению её фитосанитарной безопасности.

Среди декоративных многолетников луковичные культуры занимают одно из ведущих мест и с каждым годом приобретают все большую популярность. Это определяется не только их замечательными декоративными свойствами и незаменимостью при создании красочных ландшафтов в ранне-весенний период, но и тем, что они относятся к категории важнейших выгоночных культур, позволяющих обеспечивать снабжение населения цветами в зимнее время (Былов, Зайцева, 1990).

Популярность тюльпанов во всём мире неизменно высока, их разнообразие и широкий диапазон использования (озеленение, срезка, выгонка) может удовлетворить самый изысканный вкус (Широкова, 1976; Трушин, 1993). В условиях открытого грунта высокорослые тюльпаны используют для срезки цветов, средне- и низкорослые очень широко применяют для оформления садов, парков, рабаток. В закрытом грунте их обычно выращивают для получения ранней цветочной продукции - выгонка на срезку или в горшках (Братухина, 1997). Раннее цветение, разнообразие окрасок, изящная форма и высокая декоративность цветка, а также сравнительная неприхотливость в культуре сделали тюльпан любимейшей культурой многих цветоводов (Викулин, 1999). 5

Лилия по своим декоративным качествам: разнообразию форм, размеров и окраски цветков, является ценным цветочным растением, пригодным не только для выращивания в насаждениях, но и для производства щеточной продукции в условиях открытого и защищенного грунта, а также выгонкой (Иванова, 1993).

Промышленная основа цветоводства имеет свою специфику, которая подразумевает широкую интродукцию посадочного материала, его вегетативное размножение и монокультуру, что способствует интенсивному развитию болезней и расширению их ареала. Как известно, интродукция растений влечёт за собой распространение фитопатогенных организмов, которые в новых районах обитания нередко оказываются более агрессивными, чем у себя на родине (Синадский, 1987). Например, интенсивное внедрение луковичных и клубнелуковичных растений в культуру нашей страны началось сравнительно недавно. Но состав патогенной флоры претерпевает значительные изменения. Так, за продвижением луковичных и клубнелуковичных культур неизбежно следуют такие заболевания, как серая гниль тюльпана и лилии, коричневая сердцевинная гниль гладиолусов, вирусная пестролепестность тюльпана и др. (Синадский, 1987).

Сдерживающим фактором в развитии промышленного цветоводства являются инфекционные болезни, среди которых вирусные занимают наибольший удельный вес (Митрофанова, 1992). Вирусные болезни вызывают потерю декоративных качеств, ухудшение физиологического состояния растений и, в конечном итоге, причиняют значительный экономический ущерб (Malter, 1996), особенно выращиванию вегетативно размножаемых цветочных культур, у которых постоянным источником инфекции является заражённый посадочный материал (луковицы, клубнелуковицы). При поражении вирусной инфекцией резко ухудшается состояние посадочного материала, что влечёт за собой уменьшение 6 количества и качества получаемого цветосреза (Волощук, 1984). Отрицательное влияние вирусов на репродуктивную способность растений приводит к фенотипическому изменению признаков сорта, снижению урожая на 40-70% и вырождению восприимчивых к вирусам сортов (Митрофанова, 1992).

Особенностью вирусных болезней растений является гетерогенность вирусных популяций, представленных различными вирусами и их штаммами с разнообразными биологическими свойствами (Рыбалко, 19846).

Интенсификация процессов производства усиливает вредоносность вирусных болезней и особенно смешанных вирусных инфекций.

Выявление этиологии заболеваний и видового состава возбудителей требует арсенала средств вирусологического анализа и применения быстрых и высокочувствительных методов. Для последующей защиты культур важно правильно поставить диагноз, выявить не только явное, но и скрытое вирусоносительство.

Отечественная отрасль промышленного цветоводства находится на этапе становления, и, осуществляемая в широких масштабах интродукция из-за рубежа новых видов и сортов цветочных и декоративных растений, обмен и перемещение посадочного материала внутри нашей страны, способствуют распространению болезней в новые географические районы, особенно, если имеет место хроническая бессимптомная вирусная инфекция, распознать и идентифицировать которую часто очень трудно (Козицкий, 1975).

Целью работ по противовирусной защите растений является не только выявление причин заболевания, но и поиск путей их предупреждения. Основные аспекты этих исследований касаются 4-х главных направлений: молекулярной биологии вирусов, механизмов резистентности и передачи с помощью переносчиков, а также детекции вирусов, изучения их свойств и вариаций (Harrison, 1991). 7

П. СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Байкалова, Ольга Сергеевна

V. выводы

1. В результате обследований насаждений Tulipa, Lilium и Allium отмечены различные внешние признаки проявления вирусных заболеваний. На основании комплексного вирусологического анализа выявлено стабильное присутствие вирусных патогенов;, а также тенденция их распространения и увеличения степени поражения растений, что свидетельствует о накоплении инфекционного потенциала.

2. В биоценозах декоративных луковичных культур выявлены паразитарные комплексы, доминирующей компонентой которых являются вирусы, в том числе и несвойственные для изучаемых культур.

3. Всего нами обследовано 504 сорта тюльпанов. За истекший период из коллекции было отбраковано 234 сорта, преимущественно в связи с поражением вирусной инфекцией.

4. На фоне активного поражения вирусной инфекцией развиваются патогены грибной природы, вредоносность которых увеличивается пропорциально степени поражения растений вирусами. Из 65 сортов тюльпанов с признаками грибной патологии на 36 зарегистрировано 100%-ное поражение вирусами. На тюльпанах наиболее часто выявлялись Rhizoctonia tuliparum, Fusarium oxysporum и Typhula ishikariensis.

5. Данные серологических анализов свидетельствуют о широком распространении вирусов, передаваемых тлями и нематодами. Наиболее часто выявляемыми вирусами являются: на тюльпанах -TBV (36%), CMV и TRSV (14%), AMV (12,8%); на лилиях - CMV (71%), TBV (20,5%), AMV (12,5%); на луках - TMV (33%). В условиях выгоночной оранжереи на тюльпанах превалирует TBV.

175

6. Среди неспецифических возбудителей на тюльпанах наиболее часто идентифицировались BYDV (24%), PVY (19%) и AsTV (14%); на лилиях преобладающими являлись картофельные вирусы PVY (45%), PVS (29%) и BYDV (26%). Инфицирование декоративных луковичных культур такими вирусами как NMV, CrnMV, AsTV, PVY, PVS и BYDV нами выявлено впервые. На коллекции Allium доминирующими являются неспецифические для этой культуры вирусы AsTV (44%), NMV и CrnMV (39%), TBV(33%). На растениях рода Tulipa впервые идентифицирован новый вирус, серологически родственный ShVX, принадлежащий к роду аллексивирусов.

7. Серологический скрининг методом ИФА растительных образцов исследуемых культур свидетельствует о преобладании комплексной вирусной инфекции на представителях родов Tulipa, Lilium и Allium. У тюльпанов число компонентов колеблется по сортам от моноинфекции (с. 'Zeen v. d. Mark') до 6 (с. 'Douglas Beader'). В коллекции лилий также отмечены сорта, инфицированные пятью и более вирусами ("Pagoda Bells', 'Bright Star', 'Bright Cloud', 'Чаризма', 'Примесь Трояна' и др.). Среди наиболее поражённых видов луков можно отметить Allium nutans L. (лук слизун).

8. Методом ПЦР на тюльпанах и лилиях с идентифицированы вирусы из родов поти-, карла-, клостеро- и трихо-.

9. В экосистемах тюльпанов и лилий выявлено 22 вида тлей, приуроченных к различным дикорастущим, сельскохозяйственным и декоративным растениям, наряду с видами, характерными для цветочных культур, 10 из них вместе с переносимыми ими вирусами являются компонентами патобиоценоза на коллекциях Tulipa и Lilium.

176

Ю.Выявлен факт адаптации тлей Aphis fabae, Macrosiphum euphorbiae и Myzus persicae к культуре тюльпанов, как к источнику дополнительного питания в процессе своего развития.

11. Тли Acyrtosiphon caraganae, Aphis fabae, Aphis tomenthosi, Macrosiphum rosae, Myzus persicae, Rhopalomyzus lonicera, колонизирующие многолетние растения, входящие в состав биоценоза, способны питаться на сортах тюльпанов и лилий в течение периода, достаточного для передачи неперсистентных вирусов.

12.Показана возможность передачи TBV двумя новыми видами тлей М. cerasi, D. sorbí. Эффект передачи составил 12 - 43%.

13.При изучении видового состава нематод выявлено, что наибольшим количеством видов на всех трёх культурах представлены свободноживущие нематоды. На лилиях и луках вторыми по численности являются фитопаразиты. Векторы вирусов Longidorus elongatus и Trichodorus spp. выявлены только на лилиях. На тюльпанах не выявлено корреляции между распространением вирусов и нематод векторов.

14.Проведена оценка фитосанитарного состояния тюльпанов. Выявлено, что наименее поражаемыми TBV являются сорта тюльпанов садовых классов Кауфмана, Фостера и Грейга. В группах Триумф и Дарвиновские гибриды выделены сорта относительно устойчивые к ТВ V.

15.Менее поражаемыми комплексом вирусов оказались сорта тюльпанов из групп Кауфмана, Дарвиновские гибриды и Триумф. Имунных сортов к комплексной инфекции нами не выявлено, но в перечисленных выше классах отмечены высокоустойчивые и среднеустойчивые сорта.

177

16.Полевой устойчивостью к тлям обладают сорта групп Лилиецветные, Дарвиновские гибриды, тюльпаны Кауфмана, Фостера и Грейга. Наиболее восприимчивыми оказались сорта группы Триумф. В контролируемых условиях, при искусственной подсадке, сортов, устойчивых к тлям переносчикам не выявлено.

178

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Байкалова, Ольга Сергеевна, Москва

1. Арушанова Е.С. Вирусные болезни нарцисса (Narcissus L.) и меры борьбы сними: Дис. . канд. биол. наук: 06.01.11. -М., 1999. 150с,

2. Арушанова Е.С., Тимохина Е.Т., Байкалова О.С. Фитосанитарное состояние коллекционных посадок Narcissus L. и перспективы его оптимизации // Тез. докл. III Международной конф-ции "Цветоводство -сегодня и завтра". М., 1998. - С. 26-27.

3. Аршава Н.В., Конарева Т.Н., Черёмушкина Н.П., Завриев С.К. Идентификация компонентов вирусного комплекса, персистирующего в культурных растениях рода Allium // Сельскохозяйственная биология. -1996.-№5.-С. 105-111.

4. Бабоша A.B., Трофимец Л.Н., Ладыгина М.Е. Ингибирование серологических реакций фитовирусов белками и его количественная оценка иммуноферментным анализом // Физиология растений. 1990. -Т. 37.-Вып. 6.-С. 1154-1161.

5. Багатурия В.Я. К вопросу о повышении устойчивости тюльпанов к вирусным заболеваниям // Защита декоративных растений от вредителей, болезней и сорняков. Киев. - 1977. - С. 3-5.

6. Байкалова О.С., Арушанова Е.С. Депрессивные факторы при возделывании тюльпанов // Мат-лы научя. конф-ции "Достижения и перспективы в области тропического земледелия и животноводства". -М.: РУДН, 2000. С. 65.179

7. Баранов В.Д., Устименко Г.В. Мир культурных растений / Справочник. -М.: Мысль, 1994. С. 231-235,

8. Блинцов А.Н., Дзанггиев Б.Б., Бобкова А.Ф., Изумрудов В.А., Зезин А.Б. академик Атабеков И.Г. Новый метод иммуноанализа растительных вирусов, основанный на использовании интерполиэлектролитных реакций // Доклады АН. -1995, Т. 345. - № 2. - С. 263-267.

9. Ю.Бобкова А.Ф., Чирков С.Н. Применение ИФА для диагностики вирусных заболеваний растений // Сельскохозяйственная биология. 1983. - № 5. -С. 32-36.

10. Бобкова А.Ф., Нацвлишвили Н.М., Сорокина Н.В., Егоров А.М., Атабеков И.Г. Диагностика Х-вируса картофеля в растениях и клубнях с помощью иммуноферментного анализа (ELISA-теста) // Сельскохозяйственная биология. 1983. - № 7. - С. 115-118.

11. Бобкова А.Ф. и др. Методические рекомендации по применению иммуноферментного анализа для диагностики вирусов картофеля. М.: МГУ, 1985.-20с.

12. Бобырь А.Д. Итоги и перспективы применения антибиотиков и других ингибиторов в борьбе с вирусными болезнями овощных культур // Тез. докл. к Всесоюзн. семинару-совещ. по вирусным болезням овощных культур. М., 1974. - С. 36-38.

13. Бойко А.Л. Экология вирусов растений. Киев: Наукова думка, 1990. -166с.

14. Бочанцева З.П. Тюльпаны. Морфология, цитология и биология. -Ташкент, 1962.-408с.

15. Братухина Е.В. Биолого-хозяйственные особенности сортов и гибридов тюльпанов: Автореф. дис. канд. биол. наук: 06.01.04. Краснодар, 1997. - 19с.180

16. Буга C.B. Интродукция растений и фауна дендрофильных тлей Белоруссии // Миграция патогенных организмов при интродукции растений. -1987. С. 87-89.

17. Былов В.Н., Зайцева E.H. Выгонка цветочных луковичных растений. -М.: Наука, 1990.-240с.

18. Вайшер Б., Браун Д.Д.Ф. Знакомство с нематодами: Общая нематология. София-Москва: Pensofî, 2001. - 206с.

19. Вартапетян А.Б. Полимеразная цепная реакция // Молекулярная биология. М.: Наука. -1991. - Т. 25. - Вып. 4 - С. 926-936.

20. Васильева Т.Я., Можаева К.А. Свойства штамма ВТМ, выделенного из растений рода Allium. // Штаммы вирусов растений. Владивосток, 1977. -Т. 46.-Вып. 149.-С. 75-77.

21. Васильев О., Васильев Л. Пёстрая чума // Приусадебное хозяйство. -1998.-№4.-С. 86-87.

22. Викулин Ю. О вирусных болезнях тюльпанов // Цветоводство. 1999. -№ 3. - С. 36.

23. Вишниченко В.К., Арушанова Е.С., Келдыш М.А., Калошин A.A., Завриев С.К. Серологически родственный X вирусу шалота (ХВШ) гибкий нитевидный вирус в растениях, не принадлежащих к роду Allium // Доклады РАСХН. -1992.-№2,- С. 23-25.

24. Вишниченко В.К., Байкалова О.С., Келдыш М.А., Завриев С.К. Диагностика и идентификация аллексивирусов методом полимеразной цепной реакции // Тез. докл. II Международной научной конференции181

25. Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии". -М., 2000.-С. 54-55.

26. Вишниченко В.К., Стельмащук В .Я., Завриев С.К. Исследование морфологической гетерогенности частиц Х-вируса шалота в условиях моновирусной инфекции // Молекулярная биология. 1996. - Т. 30. - С. 959-968.

27. Власов Ю.И., Ларина Э.И. Сельскохозяйственная вирусология. М.: Колос, 1982.-239с.

28. Власов Ю.И., Макутенайте М.К. Декоративные растения резерваторы вирусов // Защита растений. -1971. - № 11. - С. 43.

29. Власов Ю.И., Паршин В.Г. Изменение путей и условий циркуляции фитопатогенных вирусов в различных зонах СССР // Вирусологические исследования на Дальнем Востоке / Тр. биол.-почв. ин-та ДВНЦ. 1975. -Т. 28 (131).-С. 102-104.

30. Власов Ю.И., Теплоухова Т.Н., Ларина Э.И, Власов Д.Ю. Методические указания по векторной передаче вирусов, поражающих сельскохозяйственные культуры. Л., 1990. - 97с.

31. Власов Ю.И., Теплоухова Т.Н. Трансмиссивность вирусных инфекций растений с позиции биоценологии // Тез, докл. III Всесоюзн. съезда паразитоценологов. Киев, 1991. - С. 31.

32. Волощук Л.Ф. Устойчивость тюльпанов к фитопатогенным вирусам // Генетические основы селекции сельскохозяйственных растений и животных / Тез. докл. республ. конф. Кишинёв: "Щтииница", 1984. - С. 99.

33. Волощук Л.Ф. Вирусные болезни гвоздик и тюльпанов в Молдове и обоснование мер борьбы с ними: Автореферат дис. канд. с.-х. наук: 06.01.11. Л: Пушкин, 1985. - 18с.182

34. Волощук Л.Ф., Теплоухова Т.Н. Главнейшие вирусные болезни цветочных культур // Методические указания по проведению обследований и идентификации возбудителей. Л.: Пушкин, 1986. 34с.

35. Выхристова Г.И., Копылов С.С. Культивирование меристем тюльпанов и нарциссов для получения безвирусного посадочного материала // Науч. тр. ВНИИ цветоводства и горного садоводства. 1987. - Вып. 34. - С. 7182.

36. Герасимов С.О. Каталог коллекций отдела Декоративных растений ГБС. -М.: "Алее", 2000.-172с.

37. Гиббс А., Харрисон Б. Основы вирусологии растений. М.: Мир, 1978. -430с.

38. Горленко С.В., Савенкова Н.С. Влияние микроэлементов на степень проявления вируса пестролепестности тюльпанов // Ботаника: Исследования. 1988. - Вып. 26. - С. 82-83.

39. Дамброзе И., Деревянкин П. Особенности динамики лёта тлей, переносчиков вирусов луковичных культур в Краснодарском крае, Подмосковье и Латвии // Вирусы растений и насекомых / Труды ЛСХА. -1985.-Вып. 226.-80с.

40. Данилевская О.Н. Тюльпаны. Л.: Лениздат, 1961. - 102с.

41. Дьяконов К.П. Переносчики вирусов картофеля на юге Дальнего Востока // Вирусные болезни картофеля. М.: Наука, 1966. - 212с.

42. Дьяконов К.П. Современные тенденции в изучении переносчиков энтомофильных вирусов растений Дальнего Востока // Сб. научн. тр.: Фитовирусы Дальнего Востока. Владивосток: Дальнаука, 1993. - С. 517.

43. ДьяченкоА.Д. Луковичные цветочно-декоративные растения открытого грунта / Справочник. Киев: Наукова Думка, 1990. - 319с.

44. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высш. шк., 1991. - 228с.183

45. Жуковский П.М. Ботаника. М.: Колос, 1982. - С. 501-504.

46. Иванова H.A. Болезни лилий и оценка генофонда коллекции с целью поиска источников устойчивости // Оптимизация защиты с.-х. культур от вредителей и болезней. С.-Пб., 1993. - С. 87-89.

47. Игнаш Я.Р. Сравнительная характеристика некоторых представителей группы вируса огуречной мозаики 1, изолированных в Латвийской ССР // Штаммы вирусов растений / Тр. биолого-почв, ин-та. 1977. - Т. 46 (149).-С. 193-197.

48. Интродукция растений природной флоры СССР. / Скворцов А.К., Трулевич Н.В., Алфёрова З.Р. и др. М.: Наука, 1979. - С. 217-219.

49. Казакова A.A., Жуковский П.М., Коровина О.Н. Лук // Культурная флора СССР.-Л.: Колос, 1978, -Т.10.-С.264.

50. Келдыш М.А. Израстание малины инфекционное заболевание // Биологические науки. -1967. -№ 7. - С. 111-117.

51. Келдыш М.А. Болезни цветочных культур // Болезни и вредители растений-шггродуценгов / Синадский Ю.В., Козаржевская Э.Ф., Мухина Л.Н., Келдыш М.А. и др. М., 1990. - С. 17-52.184

52. Келдыш М.А. Трансформация статуса вирусных инфекций // Мат-лы научн. конф-ции, посвящ. 100-летию со дня открытия вирусов Д.И. Ивановским. 1992. - С. 86-87.

53. Келдыш М.А. Особенности распространения неповирусов в антропогенных экосистемах // Бюллетень ГБС. 1994. - Вып. 169. - С. 132-136.

54. Келдыш М.А. Особенности мониторинга вирусов в условиях стрессовых воздействий // Тез. докл. конф-ции "Защита растений в условиях реформирования агропромышленного комплекса: экономика, эффективность, экологичность". С-Пб., 1995. - С. 53-54.

55. Келдыш М.А. Вирусные болезни растений в Главном Ботаническом Саду им. Н.В. Цицина РАН (видовой состав, эпифитотиология, меры борьбы) //Бюллетень ГБС.-1996.-Вып. 173.-С. 170-180.

56. Келдыш М.А., Байкалова О.С., Червякова О.Н., Арушанова Е.С. Внимание, опасность: комплексная инфекция // Цветоводство. 2001. -№3.-С. 18-19.

57. Келдыш М.А., Байкалова О.С., Червякова О.Н., Арушанова Е.С. О некоторых факторах, ограничивающих выращивание некоторых цветочных культур (Liliales, Iridales) // Бюллетень ГБС. 2001. - Вып. 182.-С. 147-154.

58. Келдыш М.А., Васильева И.В., Червякова О.Н., Помазков Ю.И. Значение вирусов в сохранении генофонда цветочных культур // Тез. докл. III Международной конф-ции "Цветоводство сегодня и завтра". - М., 1998. -С. 129-132.

59. Келдыш М.А., Помазков Ю.И., Кузнецова A.A. Распространение тлями вируса огуречной мозаики на многолетних растениях // Плодоводство и ягодоводство Нечернозёмной полосы. М., 1978. - Т. 11. - С. 165-169.185

60. Келдыш М.А., Помазков Ю,И. Устойчивость плодовых и ягодных растений к тлям-переносчикам // Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы. М.: НИЗИСНП, 1979. - С. 118-122.

61. Келдыш М.А., Помазков Ю.И. Методические указания по выявлению и идентификации вирусов и микоплазм, поражающих плодовые и ягодные культуры. М., 1980. - 25с.

62. Келдыш М.А., Помазков Ю.И. Вирусные и микоплазменные болезни древесных растений. М. : Наука, 1985. -132с.

63. Келдыш М.А., Помазков Ю.И. Особенности формирования видового состава вирусов в искусственных экосистемах // Бюллетень ГБС. 1986. -Вып. 139.-С. 71-76.

64. Келдыш М.А., Помазков Ю.И. Трансформация экологического статуса вирусов при взаимодействии с интродуцентами // Тез. докл. Междунар. конф-ции "Проблемы интродукции растений и отдалённой гибридизации". -М., 1998. С. 79-81.

65. Келдыш М.А., Помазков Ю.И., Червякова О.Н. Нематоды-переносчики как фактор адаптивной изменчивости вирусов // Тез. докл. Международного симпозиума нематологов. С.-Пб., 1995. - С. 41.

66. Келдыш М.А., Помазков Ю.И., Червякова О.Н. Направление адаптаций и развития новых патосистем "вирус переносчик - хозяин" // Сб. ст.: Взаимоотношения паразита и хозяина. - Ин-т паразитологии РАН, 1999. -С. 31-39.

67. Кирюшин В.И. Концепция адаптивно-ландшафтного земледелия. -Пущино, 1993. 62с.

68. Козицкий Ю.Н. Вирусные болезни промышленных цветочных культур. -М.: Колос, 1975. Вып. 17-18. - 80с.

69. Корнеева И Т. Материалы к диагностике вирусной пестролепестности тюльпанов и мозаики георгин в садово-парковом строительстве: Автореф. дис. кавд. биол. наук: 06.01.11. -М., 1967. 18с.

70. Костин В.Д. Вирусные болезни дикорастущих растений Дальнего Востока // Проблемы фитовирусологии на Дальнем Востоке. -Владивосток: Дадьнаука, 1996. С. 74-87.

71. Крылов A.B., Ларина Э.И., Артюкова Е.В. Кадастр вирусов растений. -Владивосток, 1987. 50с.

72. Макутенайте М.К. Вирусные болезни декоративных растений в Литовской ССР и их экономическое значение // Вирусные болезни растений. Киев: Наукова думка, 1974а. - Вып. 41. - С. 80-82.

73. Макутенайте М.К. Декоративные растения как резерваторы вирусов, поражающих овощные культуры // Тез. докл. к Всесоюзн. семинару-совещ. по вирусным болезням овощных культур. -М., 19746. С. 16-18.

74. Макутенайте-Навалинскене М.К. Вирусные и миколазменные болезни цветочных растений. Вильньюс: Мокслас, 1981. - 70с.187

75. Малиновский В.И. Рост растений и метаболизм фигогормонов при вирусном поражении // Вирусные болезни растений / Под. ред. Рейфмана В.Г. и др. Владивосток: ДВНЦ АН СССР. - 1981. -Вып. 10-11. - С. 3-20.

76. Метлицкий 0.3. и др. Методические указания по выявлению и учёту паразитических нематод ягодных культур. М.: Колос, 1976. - 39с.

77. Митрофанова О.В. Вирусные болезни промышленных цветочных культур и биотехнологические приёмы их оздоровления: Автореф. дис. докт. с.-х. наук: 06.01.11. С.-Пб., 1992. - 72с.

78. Молдован М.Я. Вирусные болезни табака и меры борьбы с ними. Киев: Штииница, 1979. -228с.

79. Мэтьюз Вирусы растений. М.: Мир, 1973. - 600с.

80. Навалинскене М.К., Яцкявичене Э.А., Самуйгене М.А. Использование метода электронной микроскопии для идентификации вирусов, поражающих фрезии, ирисы, тюльпаны // Ультраструктура растений. -К, 1988.-Ч. 2.-С. 88-89.

81. Навалинскене М., Самуйгене М., Яцкявичене Э. Результаты идентификации вирусов, поражающих тюльпаны // Вю1о§уа. 1994. - № 4.-С. 48-55.

82. Павленко В.В. Система интегрированной защиты декоративных интродуцированных растений от вируса огуречной мозаики // Интродукция и экспериментальная экология растений. Днепропетровск, 1983.-С. 155-158.

83. Парамонов A.A. Основы фитогельминтологии. М.: Наука, 1964. - Т. 2. -446с.

84. Петерсон Л., Игнат Я., Путнаэргле А. Вирусные болезни тюльпанов в Латв. СССР // Труды ЛСХА. 1974. - Вып. 82. - С. 42-52.

85. Петроченко А.Н. Методологические вопросы паразитологии // Мат-лы X конфер. Украинск. Общ Паразитологов. Одесса, 1986. - Ч. 2. - С. 111.

86. Помазков Ю.И., Келдыш М.А. Особенности взаимодействия компонентов в системе вирус переносчик - растение // Плодоводство и189ягодоводство Нечернозёмной полосы. М.: НИЗИСНП, 1978. - Т. 11. -С. 152-164.

87. Помазков Ю.И., Келдыш М.А. Методические указания оценке устойчивости плодовых и ягодных культур к вирусным и микоплазменным болезням. -М., 1979. 17с.

88. Прозоровский С.В. // Вестник АМН СССР. -1985. №3. - С. 3-9.

89. Простяков А.П., Бобкова А.Ф. // ЖВХО. 1982. - № 4. - Т. 27. - С. 463467.

90. Проценко А.Е. Морфология и классификация фитопатогенных вирусов. М.: Наука, 1966. - 187с.

91. Путнаэргле А.А. Некоторые свойства вируса некроза табака -возбудителя болезни 'Augusta1 тюльпанов // Вирусные болезни растений и насекомых (Труды ЛСХА). Елгава, 1976. - Вып. 100. - С. 32-38.

92. Путнаэргле А.А., Путнаэрглис Э.А. Результаты передачи вируса пестролепестности тюльпанов во время хранения луковиц // Тез. докл. Научно-производств. конф. Защита растений в республиках Прибалтики и Белоруссии. Вильнюс, 1981. -Ч. 2. - С. 124-125.

93. Развязкина Г.М. Вирусные заболевания злаков. Новосибирск, 1975. -291с.

94. Романенко Н.Д. Фитогельминты вирусоносители семейства Longidoridae. - М.: Наука, 1993. - 284с.

95. Романенко Н.Д., Рябченко Н.Ф., Субботин С.А. и др. Основные достижения в изучении комплекса фигопаразитов (нематоды вирусы -грибы - бактерии) и проблемы их биоконтроля в фитоценозах России //190

96. Материалы Всерос. Симпоз. "Роль российской школы гельминтологов в развитии паразитологии". ~М., 1998. С. 198-209.

97. Рыбалко А.Е. Вирусы цветочных растений и меры борьбы с ними: Обзорная информация (Озеленение населённых мест, ИСНН 0135-6445). М.: ЦБНТИ Минжилкомхоза РСФСР, 1984а. - Вып. 2 (41). - С. 43.

98. Рыбалко А.Е. Об оздоровлении растений от вирусных заболеваний методами культуры тканей (на примере цветочных растений) // Сельскохозяйственная биология. 19846. - № 4. - С. 80-81.

99. Рыбалко А.Е. Профилактика вирусных болезней цветочных // Защита растений. 1985. - № 2. - С. 32-33.

100. Рыбалко А.Е. Оздоровление и клональное микроразмножение цветочно-декоратиных растений: Обзорная информация. М.: ЦБНТИ Минжилкомхоза РСФСР. - 1987. - Вып. 3(51). - 47с.

101. Рыбалко А.Е. Биологические свойства вирусов вегетативно размножающихся цветочных растений, картофеля. Ресурсосберегающая технология оздоровления: Дис. докт. биол. наук: 06.01.11. -М., 1998. -39с.

102. Савенкова Н.С. Важнейшие вирусные болезни тюльпана в БССР: Автореф. дис. канд. биол. наук: 06.01.11. Самохваловичи Минской обл., 1987. - 18с.

103. Селочник И.Н. Болезни тюльпанов и меры борьбы с ними // Защита растений от вредителей и болезней. 1972. - Т. 1. - С. 66-77.

104. Силина З.М. Современный ассортимент тюльпанов и история его формирования // Интродукция растений и зелёное строительство. 1970. -Вып. 10. - С. 99-130.

105. Синадский Ю.В. О динамике численности вредных и патогенных организмов, новых вредителях и болезнях, появившихся в ГБС АН СССР (1975-1985 гг.) // Миграция патогенных организмов при интродукции растений. Алма-Ата: Апатиты, 1987. - С. 5-8.191

106. Скворцов А.К., Трулевич Н.В., Алфёрова З.Р. Интродукция растений природной флоры СССР. М.: Наука, 1979. - 431 с.

107. СкрипчинскиЙ В.В. Эволюция онтогенеза растений. М., 1977. - 86с.

108. Смирнов Ю.В. Использование инсектицидов в борьбе с тлями -переносчиками вируса мозаики сои // Вирусологические исследования на Дальнем Востоке. Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1975. - С. 151-154.

109. Смит К. Вирусные болезни растений. М.: Иностр. лиг, 1960. - С.484-487.

110. Сыртанова Г.А. Исследование эндогенных регуляторов в связи с покоем и ростом тюльпанов: Автореф, дис.канд. биол. наук: 05.00.12. -Алма-Ата, 1975.-28с.

111. Тахтаджян А.Л. Систематика и филогения цветковых растений. М.: Наука, 1966. - С. 535-602.

112. Терентьев П.В., Ростова Н.С. Практикум по биометрии. Л.: изд-во ЛГУ, 1977. - 152с.

113. Ткаченко О.Б. Биологические особенности борьбы со склероциальными гнилями тюльпанов: Дис. канд. биол. наук: 06.01.11. -М., 1983.-169с.

114. Трушин В. Тюльпаны с апреля по июнь // Цветоводство. 1993. - №2. -С. 27-29.

115. Фомина К.И., Лебедева Е.Г. S- и М- вирусы картофеля и их переносчики в Приморском крае // Вирусологические исследования на Дальнем Востоке / Тр. биол.-почв. ин-та ДВНЦ. 1975, - Т. 28 (131). - С. 132-136.

116. Хромова Л.Г. Некоторые свойства вируса некроза табака -возбудителя болезни Augusta тюльпанов // Итоги интродукции растений. Ростов на Дону, 1989. С. 39-42.192

117. Черкасский Е.С., Корнеева И.Т. Адаптация вируса мозаики георгин к цинии и получение антисывороток для серологической диагностики // Доклады Акад. Наук СССР. -1965. Т. 165. - № 3. - С. 696-698.

118. Шапошников Г.Х. Подотряд Aphidinea Тли // Определитель насекомых европейской части СССР. - M.-JL: Наука, 1964. - Т. 1. - С. 489-616.

119. Шиповская Е. Символ чистоты // Цветоводство. 1998. - № 3. - С. 35.

120. Широкова А.В. Тюльпаны Казахстана и их биологические особенности / Физиология роста тюльпана. Алма-Ата, 1976. - С. 5-26.

121. Шкляев В. Пёстрая чума // Приусадебное хозяйство. 1998. - № 4. -С. 88.

122. Шмыгля В.А. Вирусные и микоплазменные болезни растений // Методические указания по диагностике и изучению. М.: ТСХА, 1978. -53с.

123. Шпаар Д., Кеглер X. Экологическая "стратегия выживания" фитопатогенных вирусов и интегрированная борьба с ними // Сб. научн. тр. Защита растений. Минск: "Асобны Дах", 1998. - Вып. XXI. - С. 2740.

124. Adlerz W.C. Spring aphid flights and incidence of watermelon mosaic 1 and 2 in Florida // Phytopathology, 1974. Vol. 64. - P. 350-352.

125. Asjes С J. Tulip vienal streak, a disorder probably caused by tobacco ringspot virus // Netherlands Journal of Plant Pathology. 1972. - Vol. 78. -№1. -P. 19-28.

126. Asjes C.J. Soil-borne virus diseases in ornamental bulbous crops and their control in the Netherlands // Agric. Environm. 1974. - № 1. - P. 303-315.193

127. Asjes C J. Control of the spread of tulip breaking virus in tulips vith mineral oil // Netherlands Journal of Plant Pathology. 1975. - Vol. 81. - P. 64-70.

128. Asjes C.J. Arabis mosaic virus in tulip // Netherlands Journal of Plant Pathology. 1976. - Vol. 82. - № 5. - P. 187-189.

129. Asjes C.J. Verspreiding van het tulpenmozaiekvirus in tulpen (Spreading of tulip breaking virus in tulips) // Bloembollencultuur. 1981. - Vol. 91(46). -P. 1230-1232.

130. Asjes C.J., Segers L.C. Diagnosis of virus diseases and identification of virus in bulbous crops // Annual Report of the Bulb Research Centre. 1981. -P. 101 (abstract).

131. Asjes C.J., Segers L.C. Diagnosis of virus diseases and identification of virus in bulbous crops // Annual Report of the Bulb Research Centre. 1984. -P. 123 (abstract).

132. Bar Joseph M., Gamsey S.M., Gonsalves D. et al. The use of enzirne-linked immunosorbent assay for detection of citrus tristeza virus // Phytopathology. -1979. Vol. 69. - № 2. - P. 190-194.

133. Barbara D.J. Detecting prunus necrotic ringspot virus in rosaceous hosts by enzime-linked immunosorbent assay // Acta phytopath. Acad. Sci. Hung. -1980. Vol. 15. - № 2. - P. 329-334.

134. Barg E., Vetten H.J., Lesemann D.E. Serologiche Identifizierung und Charakterisierung bisher unbekannter viren in Allium // Mitt. Biol. Bundesanst. Landund. Forstwirt. -Dahlem, 1994. -№301.-P. 26-29.

135. Blackman R.L., Eastor V.F. Aphids on the World's Crops // John Wiley & Sons An Identification Guide. Chichester, 1984. - 466p.194

136. Blake M.R., Wilson C.R. Significance of secondary infections with lily symptomless carlavirus to cut-flower production of Lilium // Annals Applied Biology. 1996. - Vol. 129. 1. - P. 39-45.

137. Bos L. Ecology and control of virus-induced diseases of plants: a critical synopsis // Adv. Appl. Biol. -1983. Vol. 7. - P. 105-173.

138. Brandes J. & Wetter C. Classification of elongated plant viruses on the basis of particle morphology // Virology. -1959. № 3. - P. 99-115.

139. Brierley P., Doolittle S.P. Some effects of strains of cucumber virus 1 in lily and tulip // Phytopathology. 1940. - Vol. 30. - № 2. - P. 171-174.

140. Brierley P. & McKay M.B. Experiments with aphids as vectors of tulip breaking // Phytopathology. -1938. Vol. 28. - P. 123-129.

141. Brierley P. & Smith F.F. Study on lily virus diseases: the mottle group // Phytopathology. 1944a. - Vol. 34. - P. 718-746.

142. Brierley P., Smith F.F. Studies on lily virus diseases: the necrotic fleck complex in Lilium longiflorum // Phytopathology. 19446. - Vol. 34. - P. 529-555.

143. Brierley P., Smith F.F. Studies on lily virus diseases: The mottle group // Phytopathology. 1944. - Vol. 34. - P. 718-746.

144. Brown D.J.F., Ploeg A.T., Trudgill D.L. Specifity of the transmission of nematode-transmitted viruses // Med. Fac. Landborw. Rjis. Univ. Gent. -1989. Vol. 54. - № 36. - P. 1105-1113.

145. Brown D.J.F., Robertson W.M., Trudgill D.L. Transmission of viruses by plant nematodes // Annual Review of Phytopathology. 1995. - Vol. 33. - P. 223-249.

146. Brudgmon G.H., Walker J.C. Gladiolus as a virus reservoir // Phytopathology. 1952. - Vol. 42. - P. 65-70.

147. Brunt A. A. The occurrence of cucumber mosaic virus on four nematode-transmitted viruses in British narcissus crops // Plant Pathology. 1966. - Vol. 15.-№4.-P. 157-160.195

148. Brunt A.A., Jenkins J.E.E. Arabis mosaic virus infecting tulips // Plant Pathology 1970. - Vol. 19. - № 2. - P. 100.

149. Büttner C. Ausbreiten von Pflanzenviren in geschlossenen Bewässerungssystemen // Taspo. 1994. - № 4. - S. 20-22.

150. Clark M. F., Adams A.M. Characteristics of the microplate method of enzyme linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses // Journal of General Virology. 1977. - Vol. 34. - № 2. - P. 475-483.

151. Classified List and International Register of Tulip Names // The Royal General Bulbgrowers' Society. Holland: Harlem, 1969. - 188p.

152. Cohen J., Gera A., Loebenstein G. // Phytoparasitica. 1996. - Vol. 24. -№4.-P. 327.

153. Cremer C., Schenk P.K. Notched leaf in Gladiolus spp., caused by viruses of the tobacco rattle virus group // Netherlands Journal of Plant Pathology -1967.-Vol. 73.-P. 33-48.

154. Daybell H., Der Anfang vom Ende Fur Die Blattlaus // Erwerbsobstbau. -1988. Bd. 30. - № 8. - S. 227-228.

155. Dekker E.L., Derks A.F.L.M., Asjes C.J., Lemmers M.E.C.,Bol J.F., Langeveld S.A. Characterization of potyviruses from tulip and lily which cause flower-breaking // Journal of General Virology. 1993. - Vol. 74. - P. 881-887.

156. Deng T.-C., Zettler F.M. Incidence of three aphid-transmitted Lilium viruses // Phytopathology. 1995. - Vol. 85. - № 10. - P. 1137.

157. Derks A.F.L.M., Asjes C.J. Lily symptomless virus in tulip // Netherlands Journal of Plant Pathology. 1975. - Vol. 81. - № 1. - P. 14-21.

158. Derks A.F.L.M., Vink-vaii den Abeele J.L. & van Schadewijk A.R. Purification of tulip breaking virus and production of antisera for use in ELISA // Netherlands Journal of Plant Pathology. 1982. - Vol. 88. - P. 8798.

159. Descriptions of Plant Viruses. -1970. № 16. - P. 61-64.196

160. Dobrov E.N., Bobkova A.F., Goldstein MI. et al. // Journal of virology methods. -1991. Vol. 32. - P. 317-326.

161. Donald G., Gordon D.T. Virus and viruslike disease of maize in the United States //Wooster. Ohio, 1981. -VI. - 210p.

162. Eastor V.F. Worldwide importance of aphids as virus vectors // Harris K.F., Maramorosch K. Aphids as Virus Vectors. New York, 1977. - P. 3-62.

163. Erlich H.A. // PCR Technology. "N.Y.Snjckton Press", 1989.

164. Flegg J.J.M. Extraction of Xiphinema and Longidorus species from soil by a modification of Cobb's decantings and silving Technique // Annual Applied Biology. 1967. - Vol. 60. - P. 429-437.

165. Flegg C.L., Clark M.F. The detection of apple chlorotic leafspot virus by a modified procedure of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) // Annual Applied Biology. -1979. Vol. 91. - № 1. - P. 61-65.

166. Fritzsche R., Karl E., Lehman W. Tierische Vectoren pflanzenpathogenez Viren.-Vena, 1972.-215p.

167. Hamilton R.J., Nichols C. Serological methods for detection of pea seed-borne mosaic in leave and seeds of Pisum sativum // Phytopathology. 1978. - Vol. 68. - № 5. - P. 539-545.

168. Hammond J. & Chastagner G.A. Natural infection of tulips with turnip mosaic virus and another potyvirus isolate, distinct from tulip breaking virus in the USA. // Acta Horticultural -1988. Vol. 234. - P. 235-242.

169. Hammond J. & Chastagner G.A. Field transmission of tulip breaking virus and serologically related potyviruses in tulip // Plant Desease. 1989. - Vol. 73.-№10. -P. 331-336.

170. Harrison B.D. Plant viruses // Annual report / Scot. Crop Res. Inst. 1991. -P. 75-77.

171. Heinze K. Die Schädlinge Krankheiten und Schädigungen unserer Hackfrüchte.-Berlin, 1953.197

172. Henson J.M., French R. The polumerase chain reaction and plant disease diagnosis // Annual review of phytopathology. 1993. - Vol. 31. - P. 81-109.

173. Hsu H.T., Kim J.Y., Lawson R.H. Purification of Lily symptomless carlavirus and detection of the virus in lilies // Plant Disease. 1995. - Vol. 79.-№9.-P. 912-917.

174. Gaboijanyi R. Examination of tobacco necrosis virus on test plants, isolated from the tulip // Acta agron. Acad. Scient. Hung. 1969. - Vol. 18. -P. 85-91.

175. Gas Gilbert Effecte des gels polyacrylamide utilise comme supporte en culture in vitro de tissue végétaux et de cellules. Etude particulière de leur mode d'action // Thes. doct. scien. natur. univ. Paul Sebatier. Toulouse, 1980.-№213.-P. 111.

176. Géra A., Gokkes M., Cohen J. The current status of the ornamentals industry in Israel // Phytoparasitica. 1996. - Vol. 24. - № 4. - P. 324-325.

177. Gibson R.W. The ability of different pyrethroids to control spread of potato virus Y by aphids // 10th Int. Congr. Plant Prot. Brigthon. 1983. - Vol. 3. - P. 20-24.

178. Ishii M. Observation on the spread of papaya ringspot virus in Havay // Plant Dis. Rep. 1972. - Vol. 56. -P. 331-333.

179. Iwaki M., Komuro Y. Viruses isolated from narcissus species in Japan. HI. Cucumber mosaic virus, tobacco rattle and broad bean wilt virus // Ann. Phytopathology Soc. Japan. 1971. - Vol. 37. - № 2. - P. 108-116.

180. Jafarpour B., Shepherd R.J., Grogan R.G. Serological detection of bean common mosaic and lettuce mosaic viruses in seed // Phytopathology. 1979. - Vol. 69. - № 12. - P. 1125-1129.

181. Janse J.D. New methods of diagnosis in plant pathology perspectives and pitfalls // Bulletin OEPP. -1995. - Vol. 25. - № 1-2. - P. 5-17.

182. Kaminska M. Virus infection of lilies in Poland // Phytopathologia polonica. 1996. - № 11. - P. 51-58.198

183. Kassanis B. A necrotic disease of forced tulips caused by tobacco necrosis virus // Annals Applied Biology. 1949. - Vol. 36. - № 1. - P. 14-17.

184. Kassanis B., Macfarlane J. Interaction of virus strain fungal isolate and host species in the transmission of tobacco necrosis virus // Virology. 1965. -Vol. 26.-P. 603-612.

185. Kavata D., Abo O. Lilium longiflorum infection by the cucumber mosaic virus strain and its peculiarities // Bull. Hortic. Res. Sta. 1965. - № 5. - P. 193-206.

186. Kegler G., Kegler H. Beiträge zur der vektorlosen Übertragung pflanzenpathogener Viren // Arch. Phytopathol, Pflanzenschutz. 1981. - № 17.-S. 307-323.

187. Kegler H., Kleinhempel H., Stanarius A. Evidence of infections plant viruses after passage through the rodents alimentary tract // Arch. Phytopathol. Pflanzenschutz. -1984. № 20. - S. 189-193.

188. Keldish M., Pomazkov Y., Arushanova E. Vectors as epidemiological factors in widening the host range for viruses of fruit trees and small fruit crops // Acta Horticulturae. 1997. - № 472. - P. 147-152.

189. Kim J.-Y., Han Y.-H., Soh H.-S., Lee S.-J. Occurrence of lily viruses and damages of viral diseases in oriental lilies // J. Crop. Protec. 1998. - Vol. 40. -№2.-P. 58-65.

190. Koenig R. Plant viruses in rivers and lakes // Adv. Virus Res. 1986. -Vol. 31.-S. 321-333.

191. Krayev V.G. Recent modification in plant virus classification // III International Conference Abstracts "Bioresourses and viruses". Kyiv, 2001 -P. 83.

192. Lamberti F., Taylor C.E., Seinhorst J.W., eds. Nematode Vectors of Plant Viruses. New York: Plenum, 1975. 460p.

193. Lange L. Augustasyge hos Tulipaner // Tidsskr. Planteavl. 1976. - Vol. 80.-№2.-P. 153-169.199

194. Langeveld S.A., Dore J.-M., Memelink J., Derks A.F.L.M., van der Vlugt C.I.M., Asjes C.J. Identification of potyviruses using the polymerase chain reaction with degenerate primers // Journal of General Virology. 1991. -Vol. 72. -P. 1531-1541.

195. Lawson R.H. Economic importance of and trends in ornamental horticulture // Phytoparasitica. 1996. - Vol. 24. - №4. - P. 351-352.

196. Leclant F. Les invertébrés vecteurs d'agents phytopathogénes // Phytoma -Défense des culture. -1988. № 396. - P. 6-8.

197. Lilien-Kipnis H., Cohen J. Production of virus-free lily bulbs // Phytoparasitica. 1994. - Vol. 22. - № 1. - P. 59.

198. Lister R.M. Application of the enzyme linked immunosorbent assay for detecting viruses in soybean seed and plants // Phytopathology. 1978. - Vol. 68.-№10.-P. 1393- 1400.

199. Lister R.M., Allen W.R., Consalves D. et al. Detection of tomato ringspot virus in apple and peach by ELISA // Acta Phytopath. Acad. Sci. Hung. -1980. Vol. 15. - No 1. -P. 47-55.

200. Maeda T., Inouye N. & Mittsuhata K. A distinctive strain of tulip breaking virus isolated from lilies in Japan // Nogaku Kenkyu. 1984. - Vol. 60. - P. 135-146.

201. Malter A.J. The dynamic of the market for ornamentals: Implications for virus researches // Phytoparasitica. 1996. - Vol. 24. - № 4. - P. 322.

202. McKenny Huges A.W. Aphides as vectors of "breaking" virus in tulips // Ann. Appl. Biol. -1931. Vol. 18. - P. 16-29.

203. McKenny Huges A.W. Aphides as vectors of "breaking" virus in tulips // Ann. Appl. Biol. -1934. Vol. 21.-P. 112-119.

204. McWhorter F.P. The antithetic virus theory of tulip breaking // Annals of Applied Biology. 1938. - Vol. 25. - P. 245-270.200

205. Möericke V. Eine Farbfalle Zur Kontrolle des Fluges von Blattlausen insbesondere der Pfirsichlaus (Mysodes persocae). Machrbl. Dtsh. Pflschd. -Braunschweig, 1951.

206. Morkä V., Cech M., PozdSna J., Break J. Tulip necrosis caused by tobacco mosaic virus // Phytopathologische Zeitschrift. 1973. - Vol. 76. - P. 46-56.

207. Mowat W.P. Augusta disease in tulip a reassessment // Annals Applied Biology. 1970. - Vol. 66. - P. 17-28.

208. Mowat W.P. Stabilization, culture and some properties of tulip halo necrosis virus // Annals Applied Biology. 1971. - Vol. 69. - № 2. - P. 147155.

209. Mowat W.P. A necrotic disease of tulip caused by Tomato bushy stunt virus // Plant Pathology. -1972. Vol. 21. - № 4. - P. 171-174.

210. Mowat W.P. Pathology and properties of tulip virus X, a new potexvirus // Annals Applied Biology.-1982.-Vol. 101. 1. -P. 51-63.

211. Mowat W.P. Tulip chlorotic blotch virus, a second potyvirus causing tulip flower break // Annals of Applied Biology. 1985. - Vol. 106. - № 1. - P. 6573.

212. Mrozik H., Eskola P., Linn B. et al. Discovery of novel avermectins with unprecedented insecticidal activity // Experientia. 1989. - Vol. 4. - № 4. - P. 315-316.

213. Müller H.K., Unger K. Über die Bedeutung der Zusammenhänge zwischen Witterung und Blattlausflug für die Probleme des Kartoffelabbaus // Forsch, und Forschr. 1955. - № 29.

214. Oldfield G. N. // Annual Review Entomology. -1970. Vol 15. - P. 343.

215. Paquio O.R., Kuhn C. W. Aphid transmission of peanut mottle virus // Phytopathology. 1976. - Vol. 66. - P. 473-476.

216. Pares R.D., Gunn L.V., Cresswell G.C. Tomato mosaic virus infection in recirculating nutrient solution // Journal of Phytopathology. 1992. - Vol. 135 -S. 192-198.

217. Perrin R.M. PP 321 a pyrethroid for the control of plant virus vectors // Drit. Crop Prot. Conf.: Pest and Diseases. - Brighton, 1986. - Vol. 3. - P. 989996.

218. Ploeg A.T., Brown D.J.F., Robinson D.J. The association between species of Trichodorus and Paratpichodorus vector nematodes and serotypes of tobacco rattle tobravirus // Annual Applied Biology. 1990. - Vol. 121. - P. 619-630.

219. Putnam M.L. Evaluation of selected methods of plant disease diagnosis // Crop Protection -1995. Vol. 14. - № 6. - P. 517-525.

220. Raccah B., Singer S. Monitoring and control of non-persistent virus epidemics // Phytoparasitica, -1993. Vol. 21. -J6 2.-P. 126.

221. Radwan Mostafa M., Wilson H.R., Duncan G.H. Diffraction studies of tulip virus X particles // Journal of General Virology. 1981. - Vol. 56. - № 2. -P. 297-302.

222. Romanenko N.D. Nematodes of the family Longidoridae (Nematoda, Dorylaimida) as vectors of the NEPO-viruses in the former USSR // Russian Journal Nematology. 1996. - Vol. 4. - № 1. - P. 94.

223. Romanenko N.D. Studies of regularity of the nepoviruses epiphitoties forming in natural ecosystems and agrocenosises // Russian Journal Nematology. 1998. - Vol. 6. - № 1. - P. 75-76.202

224. Romanow L.R., van Eijk J.P., Eikelboom W. Investigating resistance in tulip to tulip breaking virus and to its transmission // Acta Hortyculturae. -1986.-Vol. 177.-P. 235-239.

225. Rosner A., Stein A. Detection of viruses in corm and bulbs // Phytoparasitica. 1994. - Vol. 22. - № 1. - P. 58.

226. Saco N., Matsuo K., Nochaka F. The detection of watermelon mosaic and cucumber mosaic virus in cucurbitae plants by ELISA // Ann. Phytopath. Soc. Japan. 1980. - Vol. 46. - P. 647-655.

227. Slogteren D.H.M. Necrosis in the bulb scales on sensitive tulip varieties caused by cucumber mosaic virus // Meded. Rijksfac. Landbouww. Gent. -1966. Vol. 31. - Ne 3. ^ p. 986-994.

228. Slogteren van D.H.M., Asjes C.I. Virus diseases in tulips the daffodil and tulip gear book // Landbounw. 1970. № 35.

229. Spaar D. Wirtschaftliche und epidemiologische Bedeutung der Virusreisistenz // Kegler H., Friedt W., Resistenz von Kultyrpflanzen gegen pflanzenpatogene Viren Gustav Fisher Verlag. Jena, Stuttgart, New York, 1993.-S. 35-54.

230. Spiegel Sara Therapy and virus detection in the production of vegetatively propagated plant material // Phytoparasitica. 1994 - Vol. 22. - № 1. - P. 58.

231. Szirmal I. A new variations of the roof virus of seedlings // MTA Agr. Tud. Ostzt. Kooll. 1972. № 1.

232. Stone O.M. Acta hortyculture. -1980. Vol. 110. - P. 59.

233. Straatnof Th.P., Eikelboom W., Peters D., van Tuyl Jaap M. Screening for tulip breaking virus resistance in seeding populations of Tulipa // Phytoparasitica. -1996. Vol. 24. - № 4. - P. 350.203

234. Sutton J., Garrett R.G. The epidemiology and control of tulip breaking virus in Victoria//Aust. J. Agric. Res. 1978. - Vol. 29. - P. 555-563.

235. Tamada T., Harrison B.D. Application of enzyme-linked immunosorbents assay to the detection of potato leafroll viruses in potato tubers // Plant Disease. -1980. Vol. 96. -№ 1. - P. 67-78.

236. Taylor C.E., Robertson W.M. Acquisition, retention and transmission of viruses by nematodes // Nematodes vectors of plant viruses. Lond.; N.Y., 1975.-P. 253-276.

237. Teakle D.S. Transmission of tobacco necrosis virus by a fungus Olpidium brassicae //Virology. -1962. Vol. 18. - № 2. - P. 224-231.

238. Tomlinson J.A., Faithfull E.M, Flewett T.N., Beards G. Isolation of infective of tomato bushy stunt virus after passage through the humans alimentary tract //Nature. -1982. № 300. - P. 637-638.

239. Tsumuki H., Kanehisa K., Kawada K. Leaf surface wax as a possible resistance factor of barley to cereal aphids // Appl. Entomol. And Zool. -1989. Vol. 24. - № 3. - P. 295-301.

240. Tsuneyoshi T., Sumi S. // Phytopathology. 1996. - Vol. 86. - P. 253 -259.

241. Van Eijk J.P. Componenten bij de veredeling op resistentie tegen mozaiekvirus in tulp (Components of resistance to tulip breaking virus in tulips) // Bedrijfsontotwikkeling. -1984. Vol. 15. - P. 81-82.

242. Van Slogteren E. & De Bruyn Ouboter M.P. Onderzoekngen over virusziekten in bloembolgewassen. H. Tulpen I // Mededelingen van Landbouwhoogeschool Wageningen. -1941. Vol. 45. - P. 1-54.

243. Viruses of plant (Descriptions and lists from the VIDE database) / Brunt A. A., Crabtree K., Dailwitz M.J., Gibbs A.J., Watson L. 1996.

244. Vishnichenko V.K., Konareva T.N., Zavriev S.K. A new filamentous virus in shallot // Plant Pathology. 1993. - Vol. 42. - P. 121-126.204

245. Yamaguchi A., Kikumoto T., Matsui C. Electron microscopy of elongated particles associated with tulip mosaic // Virology 1963. - Vol. 20. - № 1. ~ P. 143-146.

246. Yamaguchi A. Susceptibility of Darwin hybrid tulips to tulip breaking virus // Phytopathology. 1968. - Vol. 58. - P. 878-879.

247. Yamashita K., Sakai J., Hanada K. // Annal. Phutopathol. Soc. Japan. -1996. Vol. 62. - P. 483 - 489.

248. Ус посветление жилок Уп - некроз жилок ТО - белый1. Условные обозначения2