Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Значение клинико-биохимических показателей в прогнозе течения диабетической ретинопатии и экспериментальное обоснование применения ликопина для их коррекции

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Значение клинико-биохимических показателей в прогнозе течения диабетической ретинопатии и экспериментальное обоснование применения ликопина для их коррекции"

На правах рукописи ГРИГОРЬЕВ Андрей Владимирович

ЗНАЧЕНИЕ КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В ПРОГНОЗЕ ТЕЧЕНИЯ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ РЕТИНОПАТИИ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ЛИКОПИНА ДЛЯ ИХ КОРРЕКЦИИ.

03.00.04 - биохимия

Автореферат

на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2005

Работа выполнена в Московском научно-исследовательском институте глазных болезней им. Гельмгольца

Научные руководители доктор биологических наук, профессор

Н.Б. Чеснокова кандидат медицинских наук, А.М. Олферьев

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор

А.А.Терентьев

доктор медицинских наук, профессор Г.С.Полунин

Ведущая организация Российская медицинская академия

последипломного образования.

Защита состоится 2005 г. в 1^4 часов на заседании

диссертационного совета Д 208.072.01 в ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет МЗ РФ» по адресу: 117997, г.Москва, ул. Островитянова, дом 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ Минздрава России Автореферат разослан ФЗ_2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук профессор П.Х. Джанашия

¿seSdL

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

В последние годы практически во всех странах отмечается неуклонный рост заболеваемости сахарным диабетом (СД). Как причина смерти сахарный диабет занимает третье место после болезней сердечно-сосудистой системы и онкологических заболеваний. По данным ВОЗ в мире насчитывается более 150 млн. больных, страдающих этим недугом [Балаболкин М.И., 2000.]. Эпидемиологические исследования, проведенные в Москве и по России, показывают, что количество больных СД в России составляет около 6 - 8 млн. [Дедов И.И., 1998]. Диабетическая ретинопатия (ДР) до сих пор остается основной причиной развития слепоты при СД обоих типов. У 15,2% пациентов слепота развивается вследствие прогрессирования ДР, около 5-10% больных СД через 20 лет теряют зрение [Kador Р.F., 2002].

Основными методами предупреждения слепоты, развивающейся вследствие ДР, являются максимально стабильная компенсация углеводного обмена у больных СД и своевременная лазеркоагуляция сетчатки [Дедов И.И., 1998; Ефимов A.C., 1994]. Лазеркоагуляция сетчатки остается единственно эффективным способом лечения ДР, что подтверждено рядом исследований [ ETDRS report , 1991]. Этот метод эффективен в плане предотвращения дальнейшего ухудшения зрения, но не приводит к его улучшению. При далеко зашедшей ДР эффективным может

быть лишь хирургическое вмешательство на стекловидном

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА f С.Петербург

змдрк

теле - витрэктомия, но, следует отметить, что потенциальный риск осложнений при витрэктомии достаточно высок [Кацнельсон Л.А., 1990]. До сих пор имеются значительные проблемы в достижении нормального уровня глюкозы в крови вследствие узости терапевтических возможностей. Эффективное торможение прогрессирования СД с помощью интенсивной инсулинотерапии дается высокой ценой риска возникновения гипогликемии. Кроме того, даже при интенсивной терапии лишь у 5% пациентов достигается нормальный уровень гликозилированного гемоглобина. Таким образом, практически во всех случаях СД невозможно предотвратить развитие диабетических осложнений, даже если доступны противогликемические методы лечения.

В 1990г. Сент-Винсентская декларация определила задачей современной диабетологии снижение частоты всех осложнений диабета с помощью социальных программ и обязательного регулярного скрининга ранних осложнений и своевременного их лечения для всех категорий больных СД. Поэтому разработка методов поддержания зрительных функций у больных СД на ранних стадиях ретинопатии, а также работа по прогнозированию и профилактике развития осложнений ДР является актуальной. В дополнение к оптимизации основных методов лечения СД (противогликемической терапии) проблема предотвращения диабетических осложнений остается ключевой в разработке методов прогнозирования течения заболевания и улучшения качества жизни больных СД как с применением медикаментозных, так и немедикаментозных средств.

Цель работы: исследовать взаимосвязь между развитием проявлений диабетической ретинопатии,

приводящих к снижению зрения, и характером изменения клинико-биохимических показателей крови, и экспериментально изучить целесообразность применения антиоксиданта ликопина для коррекции метаболических нарушений, участвующих в развитии ДР.

Задачи исследования:

1. Изучить у больных пролиферативной диабетической ретинопатией взаимосвязь между характером изменения клинико-биохимических показателей крови и наличием проявлений диабетической ретинопатии, ведущих к снижению зрения (гемофтальм и "твердые" экссудаты в сетчатке).

2. Изучить метаболические изменения в крови и слезной жидкости и состояние микрососудов глаза на ранних стадиях моделирования диабета у кроликов аплоксаном.

3. Оценить влияние ликопин-содержащего препарата на состояние микрососудов глаза и биохимические показатели крови и слезной жидкости у кроликов на ранних стадиях экспериментального аллоксанового диабета.

4. Изучить распределение ликопина в липопротеидах плазмы крови человека при его пероральном поступлении в организм.

Научная новизна. Показано наличие корреляционной связи между проявлениями СД (гемофтальм, "твердые" экссудаты), ведущими к потере зрения, и характером изменения в крови больных показателей липидного обмена и протеиназно-ингибиторного баланса. На ранних стадиях моделирования диабета у кроликов аплоксаном выявлено, что на фоне нарушения состояния микрососудов глаза происходят следующие изменения: в крови и слезной жидкости -активности протеолитических ферментов и основных их плазменных ингибиторов, активности ангиотензин-превращающего фермента (АПФ); в сыворотке крови -липидных показателей. Установлено нормализующее

влияние на состояние микрососудов глаза кроликов и на исследуемые биохимические показатели диеты, обогащенной ликопином.

Практическая значимость. На основе полученных результатов определены некоторые клинико-биохимические критерии оценки риска снижения зрительных функций при

сд.

Сформулированы рекомендации по включению в комплексную терапию СД препаратов, содержащих ликопин. Результаты экспериментального исследования показали, что при приеме ликопина на ранних стадиях СД снижается интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ), нормализуются показатели липидного обмена, протеиназно-ингибиторный баланс в крови и слёзной жидкости, снижается в крови активность АПФ и улучшается состояние капиллярной сети конъюнктивы.

Положения диссертационной работы, выносимые на защиту.

1.Для больных с пролиферативной диабетической ретинопатией, при наличии гемофтальма и "твердых" экссудатов в сетчатке, является характерным значительное возрастание в крови трипсиноподобной активности, а при гемофтальме - увеличение уровня а2-макроглобулина в сочетании с гиперлипидемией Мб или IV типа.

2. У кроликов на ранних стадиях моделирования диабета изменения метаболических процессов приводят в крови: к усилению процессов перекисного окисления липидов, увеличению активности трипсиноподобных ферментов и ангиотензин-превращающего фермента, сопровождающиеся постепенным увеличением антипротеолитической активности, увеличению содержания

общего холестерина и триглицеридов; а в слезной жидкости - к увеличению концентрации глюкозы, активности трипсиноподобных ферментов и ангиотензин-превращающего фермента.

3. Под влиянием диеты, обогащенной ликопином, у кроликов с экспериментальным аплоксановым диабетом выявлено снижение выраженности микроангиопатий в перилимбальной зоне глаза, уменьшение интенсивности перекисного окисления липидов на фоне значительного усиления антиокислительной активности крови; нормализация показателей липидного обмена и некоторых показателей протеиназно-ингибиторного баланса в крови и слезной жидкости, уменьшение активности ангиотензин-пре-вращающего фермента в крови.

4. Определено, что при пероральном поступлении в организм ликопин в крови связывается в основном с липопротеидами низкой плотности. Это приводит к изменениям в системе транспорта липидов крови и, очевидно, к выявленному снижению уровня холестерина.

5. Результаты работы указывают на целесообразность включения препаратов, содержащих каротиноид ликопин, в комплексную терапию больных сахарным диабетом для поддержания зрительных функций.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на международных конгрессах - XI congress of the European Science of Ophthalmology в 1997г., Будапешт и XXVII International Congress of Ophthalmology в 1998г., Амстердам; международной конференции "Биокатализ" в 2000г., Москва; VII Национальном конгрессе "Человек и лекарство" в 2000 г.,

Москва; Национальной научно-практической конференции "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека" в 2001 г., Смоленск; VII Международном медицинском конгрессе студентов и молодых ученых в 2003, Тернополь; III Всероссийском диабетологическом конгрессе в 2004, Москва.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на межотделенческой конференции отделения патофизиологии и биохимии, отделения патологии сетчатки и зрительного нерва, отдела травмы органа зрения, отдела патологии глаз у детей, отдела офтальмоонкологии и радиологии от 27.09.2004.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы.

Работа содержит 7 таблиц и 15 рисунков. Список использованной литературы включает 187 источников, из них 49 отечественных и 138 иностранных авторов.

Материалы и методы исследования.

Исследования проводились как на клиническом материале, так и у экспериментальных животных.

Обследовано 59 больных СД I типа с пролиферативной диабетической ретинопатией (ПДР) в возрасте от 19 до 67 лет, из них 37 женщин и 22 мужчины. Средний возраст больных составил 40,7оЗ,9 года. Длительность течения диабета в среднем составила 14,7оЗ,9 года. Обследование проводили

на базе отдела патологии сетчатки МНИИ глазных болезней им. Гельмгольца совместно с научным сотрудником отдела к.м.н. Г.А.Давыдовой.

Для определения способности ликопина связываться с ЛП плазмы крови и оказывать гиполипидемическое действие, при поступлении в организм человека перорально в виде нутриента, была сформирована группа добровольцев в количестве 15 человек. Испытуемые с согласия этического комитета ГУ ГНИЦ ПМ МЗ РФ на протяжении 4-х недель ежедневно принимали по 150 мг ликопина (по 2 капсулы "Томатола" 3 раза в день). Все добровольцы были информированы о характеристиках препарата "Томатол", о возможных эффектах его воздействия, и дали письменное согласие на участие в исследовании. Всем добровольцам рекомендовалось не изменять свой обычный образ жизни и питания. Контроль за состоянием их здоровья осуществлялся врачами ГУ ГНИЦ ПМ.

Моделирование диабетической ретинопатии было проведено на 35 кроликах самцах породы шиншилла весом 2,5-3,0 кг. Кролики были разделены на контрольную группу, на группу с аллоксан-индуцированным диабетом и на группу кроликов с таким же диабетом, получавших с кормом в качестве «лечебного» препарата "Томатол" (доза по содержанию ликопина 10 мг/кг веса) в течение 2-х месяцев. Продолжительность эксперимента составила 3 месяца. Аллоксановый диабет воспроизводили у кроликов после 48 часов голодания путем внутривенного введения 5% раствора аллоксана (Sigma, США) в фосфатном буфере (рН 5-5,2) в дозе 130-150 мг аллоксана на 1 кг веса. Развитие экспериментального диабета наступало через 24-30 ч. после введения аллоксана и характеризовалось стойкой

гипергликимией до 27,7о55,4 ммоль/л, глюкозурией, полиурией.

Биохимические исследования крови и слезной жидкости.

Для выделения отдельных подклассов липопротеидов использовали методы препаративного

ультрацентрифугирования в солевых растворах разной плотности при использовании препаративной ультрацентрифуги с ротором 40,3 ("Beckman" L-65, Германия). Определение концентрации ликопина проводились в лаборатории НПФ ИНВЕСТ (Москва). Содержание ликопина определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на проточном UV-VIS детекторе ВТ-8200, "BIOTRONIK", с использованием программы "Winpeak" (Капитанов А.Б., 1994).

Как у больных, так и у экспериментальных животных в сыворотке крови, взятой натощак, определяли концентрацию глюкозы стандартным глюкозооксидазным методом с помощью диагностических наборов фирмы "Human" (Германия) на автоанализаторе "Airone-200" (Crony, Италия).

Для определения уровня глюкозы в слезной жидкости (СЖ) кроликов применяли адаптированный нами для слезы глюкозооксидазный метод с использованием анализатора «FP-9» (Labsystems, Финляндия).

Гликозилированный гемоглобин в крови определяли по стандартной методике с помощью набора реактивов "Био-ЛА-Тест. Гликозилированный гемоглобин" (LACHEMA, Чехия) на анализаторе "Reflotron IY".

Содержание общего холестерина (ХС) в сыворотке крови определяли на автоанализаторе "Airone-200" (Cronix, Италия) ферментным методом с помощью комбинированных диагностических наборов фирмы "Human" (Германия).

Содержание триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови определяли на этом же автоанализаторе ферментным методом с помощью комбинированных диагностических наборов фирмы "Human". Содержание ХС ЛВП в сыворотке крови определяли, так же как общего ХС, в супернатанте, после осаждения из сыворотки ЛНП и ЛОНП смесью 1,1 тМ » фосфовольфрамата-№ и 45,0 mM MgCl2 (конечная

концентрация) [Assman G.,1983], Содержание ХС ЛНП в * сыворотке крови определяли по Фридвальду [Friedwald W.,

1972].

Об интенсивности процессов ПОЛ судили по накоплению в сыворотке крови малонового диапьдегида (МДА), определяемого модифицированным тестом с тиобарбитуровой кислотой (Андреева Л.И., 1988).

Измерение проводили на спектрофотометре UV 160А (SHIMADZU, Япония). Определение антиокислительной активности (АОА) сыворотки крови проводили путем измерения кинетики люминолактивированной

хемилюминисценции (ХЛ) в модельной системе гемоглобин -пероксид водорода - люминол ( Гулидова О.М. и соавт., 1999). Измерение динамики ХП проводили на хемилюминометре "Биотокс-7" ("Энергия", Москва), совместимом с персональным компьютером.

Для измерения активности протеолитических ферментов и антипротеиназ использовали методы, основанные на определении количества образовавшегося в ходе ферментативной реакции с соответствующим субстратом ' продукта реакции. О содержании продукта реакции судили по

оптической плотности проб после инкубации исследуемого образца с соответствующим субстратом, для измерений использовали спектрофотометр UV 160А (SHIMADZU, Япония).

Активность ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) в элюате СЖ и сыворотке крови определяли по гидролизу специфического синтетического субстрата - N-бензилоксикарбонил-Ь-фенилаланил-Ьгистидил-Ьлейцин ("Serva", Германия), совместно с сотрудниками кафедры химической энзимологии, химического факультета МГУ им.М.В.Ломоносова к.х.н. O.A. Кост и к.х.н. И.И. Никольской, по методу (Кост O.A., 1996).

Для определения концентрации белка в сыворотке крови и слёзной жидкости использовали метод Лоури.

Стандартизация и контроль качества клинико-биохимических исследований соответствовали требованиям ФСВОК.

Статистическая обработка результатов.

Статистическая обработка результатов проводилась с использованием статистического пакета программ "XL" и "Statistica for Windows". Результаты представлены в виде средних величин М со стандартным отклонением SD. Достоверность различий, с уровнем значимости не менее 95%, оценивали с использованием t-критерия Стьюдента и t-критерия Вилкоксона.

Результаты исследования и их обсуждение.

Исследования кпинико-биохимических параметров у больных пролиферативной диабетической ретинопатией.

Изучение крови показало, что большинство больных ПДР, у которых произошло кровоизлияние в стекловидное тело, имели повышенный уровень ТГ в крови. Более детальное исследование липидных показателей крови выявило, что наибольшее количество больных ПДР, осложненной гемофтальмом, обнаруживалось среди больных, чьи показатели липопротеидного спектра крови

соответствовали II б и IV типу гиперлипидемии. Наши исследования показали, что гемофтальм наиболее часто встречается среди больных ПДР, у которых активность трипсиноподобных протеиназ повышена в 2-3 раза (Рис. 1а), уровень а2-МГ значительно увеличен (Рис. 16), а активность с*1-АТ не превышала норму.

60%

40%-

; 20%

<5 5-10 >10 <5 5-10 >10 трипсиноподобная активность нмоль/мин х мл

80%

60%

§ 40%-

£ ф

СО

С

■ 'Твердые" экссудаты

□ Гемофтальм

б)

61%

27%

27%

20%-

0%

<120

>120

Активность а2-мг нмоль/мин х мл

Рис.1. Наличие гемофтальма и "твердых" экссудатов и активность трипсиноподобных протеаз (а) и а2-макроглобулина (б) в крови у обследованных больных ПДР

У больных с повышенной активностью а-|-АТ гемофтальм отмечался значительно реже, т.е. повышение активности ои-АТ следует расценивать как компенсаторную реакцию, направленную на снижение протеолитической активности.

Нами впервые установлено, что наиболее часто как твердые экссудаты, так и гемофтальм встречались у больных СД с гиперлипидемией Пб и IV типа (Рис.2).

80% ч

75%

т

70%-

64%

■ "Твердые" экссудаты

□ Гемофтальм

60%-

о 50%-н

X

ф

§ 40%-

01 с

гг зо%-

20%-'

ю%-

о%

Тип гиперлипидемии

Рис.2. Наличие гемофтальма и "твердых" экссудатов при различных типах гиперлипидемий у обследованных больных ПДР

Увеличение активности трипсиноподобных ферментов и уровня о^-МГ, при неизмененной по сравнению с нормой активностью 0,-АТ, в сочетании с гиперлипидемией Мб и IV типа в значительной мере может увеличивать риск развития у больных СД гемофтальма.

При увеличении протеолитической активности в крови выше 10 нмоль/мл почти вдвое увеличивалось число случаев появления гемофтальма, в то же время уровень протеолитической активности в крови практически не оказывал влияния на частоту формирования "твердых" экссудатов.

Таблица 1 .Показатели протеиназно-ингибиторного баланса и частота появления "твердых" экссудатов и гемофтальма при различных типах гиперлипидемий у больных ПДР.

Группы больных Тип глп а,-АТ нмоль/ мл1 мин а2- МГ нмоль/мл1 мин ТА нмоль/мл1 мин Кол-во больных с "твердыми" экссудатами % Кол-во больных с гемо- фтальмом %

I нет 497о30 120о7,0 8,0о0,8 9 29

II тип Па 528033 109о9,0 6,7о0,4 22 5

III тип Нб 412о42 145о19,0 10,1о2,0* 50 75

IV тип 1У 406о47 104о8,0 12,4о0,5** 64 55

» - отличие по сравнению с I группой достоверно (р<0,05); ** - отличие по сравнению с I группой (р<0,01) и по сравнению с II группой (р <0,001) достоверно.

Из приведенных данных следует (Табл. 1), что появление твердых экссудатов в сетчатке больных ПДР зависит от типа нарушения липидного обмена, причем наиболее часто твердые экссудаты встречаются при ГЛП II б, IV типа. Частота появления гемофтальма увеличивается при повышении ТА.

Экспериментальные исследования.

В эксперименте нами показано что, на ранних стадиях (до 3 месяцев) моделирования диабета у кроликов аллокса-ном отмечались характерные для СД микроангиопатии в конъюктиве глаза, а также биохимические изменения в крови и слезной жидкости.

В группе животных без лечения выявлено заметное снижение АОА на 13% через 1 месяц и на 28% через 2 месяца после введения аллоксана. При этом нами был определен неуклонный рост АОА в фуппе животных на фоне лечения ли-копинсодержащим препаратом на 70% после 1-го месяца ле-

чения и на 95% после 2-х месяцев лечения по отношению к контрольной группе (Рис.3).

Развитие СД сопровождалось накоплением продуктов ПОЛ в сыворотке крови. На сроках до 2-х месяцев после введения аллоксана концентрация МДА в крови кроликов увеличилась в три раза относительно контроля.

У группы животных, получавших с кормом ликопин-содержащий препарат, нами определен аналогичный рост концентрации МДА на сроках лечения до 1-го мес. и значительное - на 60% - ее снижение после приема препарата в течение 2-х месяцев, что свидетельствует о процессе подавления ПОЛ ликопином.

200-/"

195,

I-

z

о ^

ь о

100

§ 100-

50

fZl

I Кролики с диабетом, получавшие ликопин

] Кролики с диабетом, не получавшие ликопин

60

91

дни

Рис.3. Уровень антиокислительной активности крови кроликов с экспериментальным диабетом, при приеме ликопина per os.

Таким образом, нами было подтверждено антиоксидант-ное действие ликопина на модели диабета, вызванной аллок-саном - мощным индуктором свободно-радикальных процессов.

#

□ Кролики с диабетом, получавшие ликопин

□ Кролики с диабетом, н« получавшие

■ Кролики с диабетом, получавшие ликопин

□ Кролики с диабетом, не получавшие ликопин

дни

~ дни

* - различие в значениях содержания общего холестерина в крови кроликов при развитии аллоксанового диабета статистически достоверны (р<0,01)

Рис.4. Содержание триглицеридов (а) и общего холестерина (б) в крови кроликов при экспериментальном диабете, в % от контроля

В крови и СЖ экспериментальных животных нами было выявлено увеличение ТА и активности АПФ, сопровождавшееся постепенным увеличением антипротеолитической активности. В крови также отмечалось типичное для СД увеличение содержания общего ХС и ТГ (Рис.4а,б)

Добавление в корм животным ликопин-содержащего препарата "Томатол" снижало интенсивность процессов ПОЛ, значительно усиливало АОА, нормализовало показатели ли-попротеидного спектра крови и протеиназно-ингибиторного баланса в крови и слезной жидкости, а также уменьшало вы-

раженность микроангиопатий в конъюнктиве. Нами впервые было показано, что прием ликопина приводит к снижению ак тивности АПФ крови (Рис.5).

'-значение активности АПФ при развитии экспериментального диабета статистически достоверно (р<0,05) отличается от уровня нормы, "-различия в значениях активности АПФ при развитии аллоксанового диабета на фоне ликопин-содержащей диеты статистически достоверны (р<00,05)

Рис.5. Изменение активности ангиотензин-превращающего фермента в крови кроликов при экспериментальном диабете.

На данном этапе исследований трудно объяснить этот, обнаруженный нами, факт. Однако не исключено, что этот эффект ликопина мог быть опосредован его антиоксидантным действием не только на окисляемые липидные компоненты крови, но и на мембранные структуры эндотелия, ответственные за эллюацию АПФ. Однако, такое снижение активности АПФ могло быть связано и с ликопин-опосредованным снижением трипсиноподобной активности крови, влияющей на переход АПФ из мембраносвязанного состояния в гемоциркуля-торное русло.

Исследования биохимических параметров у добровольцев.

Нами было проведено изучение воздействия перораль-ного приема ликопина на ряд клинико-диагностических показателей добровольцев, а также его распределение в липопро-теидах плазмы крови человека.

Как следует из результатов, представленных в таблице 2, выбранная нами группа добровольцев характеризовалась средним уровнем ликопина в крови близким к средней его величине для случайной выборки москвичей (373.5о0.27 нМ) и довольно высоким уровнем ТБК-активных продуктов. Двухнедельный пероральный прием Томатола увеличивал концентрацию ликопина в сыворотке крови почти вдвое и снижал концентрацию ТБК-активных продуктов на 20%, но не приводил к достоверным изменениям липопротеидного спектра крови добровольцев. Не было выявлено существенных изменений и в активности печеночных трансаминаз в крови.

Таблица 2. Средние значения концентрации ликопина и основных биохимических показателей сыворотки крови добровольцев при 4-х недельном приеме "Томатола" (МоБ.О., * - р < 0,05).

Исследуемые показатели Сроки лечения (недели)

0 2 4

Количество испытуемых (п) 15 13 15

Ликопин (нМ) 395.40199.7 749.7о379.8* 816.2о419.1*

Общий XC (мМ) 7.15о1.08 7.06О1.04 6.3100.84

ТГ (мМ) 1.34о0.50 1.60о0.72 1.6300.78

ХС ЛНП (мМ) 5.17о1.06 4.91о1.01 4.17о0.81

XC ЛВП (мМ) 1.37о0.20 1.42о0.21 1.36о0.19

хс лнп/хс ЛВП 3.84о0.98 3.46О0.65 3.09О0.54

АЛТ (М.Е) 25.308.6 24.9о8.3 21.809.2

ACT (М.Е) 27.706.1 25.9о8.1 27.3о8.7

ГТТ (М.Е) 21.107.8 19.0о8.3 18.4о8.2

ТБК-АП (мкМ) 9.7о4.3 7.803.2 5.1о3.0*

У 7 человек из этой группы в отдельных фракциях сывороточных липопротеидов (ЛОНП, ЛНП, ЛВП), выделенных методом препаративного ультрацентрифугирования, определяли концентрацию ликопина, апопротеинов и липидов (Таблица 3).

Таблица 3. Средние концентрации ликопина и основных биохимических показателей сыворотки крови 7 добровольцев при 2-х недельном приеме "Томатола" (МоЭ.О., * - р < 0,05).

Исследуемые показатели Сроки лечения (недели)

0 2

Количество 7 7

Ликопин (нМ) 145.9о95.4 538.1о293.3*

ТБК-АП (мкМ) 13.404.8 7.403.7*

Ano А1 (мкМ) 45.4о5.5 44.305.7

Ano В (мкМ) 2.26о0.92 2.26о1.03

Лик/АлоА1 0.003о0.002 0.012о0.007

Лик/Ало В 0.07о0.05 0.30О0.27

Как следует из представленных в таблице 3 результатов, исходное содержание ликопина в крови этих добровольцев было довольно низким, всего 145.9о95.4 нМ. В то же время концентрация ТБК-АП была достаточно высокой. Молярное соотношение ликопина к Апо-В для них составило 0.07о0.05, а после двухнедельной терапии томатолом возрастало в 5 раз до - 0.30о0.27.

Измерение содержания ликопина в отдельных фракциях липопротеидов, полученных в результате препаративного ультрацентрифугирования нативной сыворотки, показало, что около 50% ликопина взаимодействует с белками плазмы крови, в основном с альбумином. Его средняя концентрация во фракции ЛНП была почти в 2.5 раза ниже, чем во фракции ЛВП и составляла соответственно 46.5о9.9 и 116.2о50.3 нМ. Двухнедельный прием "Томатола" приводил к более чем 9-ти кратному увеличению концентрации ликопина во фракции ЛНП, тогда как его концентрация во фракции ЛВП достигала лишь 157.9о92.4 нМ. Таким образом, нам удалось доказать, что ликопин, при пероральном поступлении в организм, в крови связывается в основном с ЛНП.

Безусловно, что адсорбция ликопина липопротеидами во многом обусловлена его тропностью к ХС и гидрофобным участкам жирных кислот ТГ. В связи с тем, что таковых по массе больше в ЛНП, чем в ЛВП, то понятна причина, по которой ликопин связывается в основном с этими частицами. Меньшая адсорбция липофильных антиоксидантов ЛВП вероятно обусловлена их лучшей защищенностью от воздействия продуктов ПОЛ, во-первых, из-за содержания меньшего количества жирных кислот на единицу объема и, во-вторых, благодаря наличию прооксаназной активности.

Четырехнедельный прием "Томатола" приводил к достоверному снижению общего ХС на 11%, за счет снижения уровня ХС ЛНП на 17.3%, и к уменьшению соотношения ХС ЛНП к ХС ЛВП на 18%. Достоверных изменений в концентрации ХС ЛВП не наблюдалось. Концентрация ликопина в крови достигала 816.2о108.3 нМ, и 78,4% его содержалось в ЛНП, а 19,6% - во фракции ЛВП. Принимая во внимание тот факт, что добровольцы существенно не изменяли своего режима питания и не принимали иных гиполипидемических препаратов, накопление ликопина во фракции ЛНП может служить объяснением антиатерогенного действия этого каротиноида, связанного с значительными изменениями в системе транспорта и межтканевого обмена липидов крови.

ВЫВОДЫ

1. На ранних стадиях экспериментального аллоксанового диабета (до 3-х месяцев) развиваются, характерные для сахарного диабета капиллярные микроангиопатии в перилим-бальной зоне. В крови происходит: а) усиление процессов пе-рекисного окисления липидов со снижением антиокислительной активности, б) увеличение активности трипсиноподобных ферментов и ангиотензин-превращающего фермента, сопровождающееся постепенным увеличением антипротеолитиче-ской активности, в) увеличение содержания общего холестерина и триглицеридов. В слезной жидкости увеличивается концентрация глюкозы, активность трипсиноподобных ферментов и ангиотензин-превращающего фермента.

2. При экспериментальном аллоксановом диабете под влиянием диеты, обогащенной ликопином, отмечено снижение выраженности микроангиопатий в перилимбальной зоне глаза; уменьшение интенсивности перекисного окисления липидов на фоне значительного усиления антиокислительной активности крови; нормализация показателей липидного обмена и некоторых показателей протеиназно-ингибиторного баланса в крови и слезной жидкости; уменьшение активности ангиотен-зин-превращающего фермента в крови.

3. У больных с пролиферативной диабетической ретинопатией при наличии в сетчатке гемофтальма и "твердых" экссудатов в крови значительно возрастает трипсиноподобная активность, а при гемофтальме уровень аг-макроглобулина, в сочетании с гиперлипидемией Иб и IV типа.

4. Ликопин при пероральном поступлении в организм в крови связывается преимущественно с липопротеидами низкой плотности и приводит к значительным изменениям в системе

транспорта и межтканевого обмена липидов крови, что сопровождается достоверным снижением уровня общего холестерина.

5. Полученные данные указывают на целесообразность включения препаратов, содержащих каротиноид ликопин, в комплексную терапию больных сахарным диабетом для поддержания зрительных функций.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется включение в клинико-биохимическое обследование больных СД определение трипсиноподобной активности и основных плазменных ингибиторов протеолиза в сочетании с определением типа гиперлипидемий для прогноза неблагоприятного развития ДР.

2. В качестве средства для профилактики метаболических нарушений при СД, ведущих к развитию ДР и соответственно снижению зрения, рекомендуется прием каретиноида ликопи-на.

?

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. А.Олферьев, А.Григорьев, О.Мелькина, И.Озерова, М.Олферьев, А.Пименов, И.Чудакова, А.Капитанов. Опыт применения "Томатола", как нового и перспективного гиполипидемического средства. // Научно-практической конференции "Актуальные проблемы профилактики неинфекционых заболеваний", 1997, тезисы докладов, с. 178.

2. Grigoriev A.V., Nesterova О.А., Olferiev A.M., Pimenov A.M., Chesnokova N.B., Kapitanov A.B., Perova N.V. Effect of "Tomatol" on human serum lipoproteins. // Abstract. XI international symposium on atherosclerosis, Paris, 1997, p.206.

3. Grigoryev A.V., Kuznetsova T.P., Davydova H.A., Chesnockova N.B., Katsnelson L.A. Lipid metabolism and proteinase-inhibitor balance in patients with proliferative diabetic retinopathy (PDR). II Abstract. XI congress of the European Sience of Ophthalmology, Budapest, 1997.

4. Grigoryev A.V., Kuznetsova T.P., Davydova H.A., Chesnokova N.B., Katsnelson L.A. Hiperlipoproteinemia types, proteinase-inhibitor balance and retinal hard exudate in patients with proliferative diabetic retinopathy. II Abstract. XXVII International Congress of Ophthalmology, Amsterdam, 1998, p. 188.

5. Чеснокова Н.Б., Кузнецова Т.П., Давыдова Г.А., Григорьев А.В. Показатели протеиназно-ингибиторного баланса крови и гиперлипо-протеидемии у больных пролиферативной диабетической ретинопатией при наличии твердых экссудатов в сетчатке. II Вестник офтальмологии, 1999, №1, с. 14-16.

6. Чеснокова Н.Б., Кузнецова Т.П., Давыдова Н.Г, Григорьев А.В. Показатели протеиназно-ингибиторного баланса крови и гиперлипо-протеидемии у больных пролиферативной диабетической ретинопатией с кровоизлияниями в стекловидное тело. // Вестник офтальмологии, 1999, №6, с. 29-32.

7. Чеснокова Н.Б., Григорьев А.В., Кузнецова Т.П., Давыдова Н.Г., Олферьев А.М., Кост О.А., Никольская И.И., Капитанов А.Б. Экспериментальное обоснование использования ликопин-содержащего препарата "Томатол" в комплексном лечении диабетической ретинопатии. // Вестник офтальмологии, 2000, №5, с. 31-34.

8. Григорьев А.В., Давыдова Н.Г., Олферьев A.M., Кост О.А., Никольская И.И., Капитанов А.Б., Чеснокова Н.Б. Экспериментальное обоснование применения ликопин-содержащего препарата "Томатол" при диабете. IIVII Национальный конгресс "Человек и лекарство", Москва, 2000 г., тезисы докладов, с. 192.

9. Григорьев А.В., Давыдова Г.А., Чеснокова Н.Б. Клинико-биохимические параметры крови у больных пролиферативной диабетической ретинопатией и обоснование метода их коррекции. // VII

Съезд офтальмологов России, Москва, 2000 г., тезисы докладов, часть 1, с. 429-430.

10. Grigoryev A.V., Kuznetsova Т.Р., Davydova H.A., Kost O.A., Ni-kol'skaya I.I., Chesnockova N.B. Investigation of angithensine-converting enzyme, trypsinlike activity, main plasma antiproteinases in patients with diabetic retinopathy and in diabetic rabbits. // Abstract. International conference "Biocatalysis", Moscow, 2000, p.81.

11. Чеснокова H.Б., Григорьев A.B., Кузнецова Т.П., Давыдова Н.Г., Олферьев A.M., Кост O.A., Никольская И.И., Капитанов А.Б. Экспериментальное обоснование применения антиоксиданта ликопина при сахарном диабете.// Сб. тезисов национальной научно-практической конференции с международным участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека". Россия, Смоленск, 19-22 сентября, 2001, с. 189-91.

12. Чеснокова Н.Б., Григорьев A.B., Павленко Т.А., Никольская И.И., Кост O.A., Казанская Н.Ф. Локальная ренин-ангиотензиновая система глаза, роль в офтальмопатологии. // "Вестник РАМН", 2003, №9, С.29-32.

13. Григорьев A.B., Кост O.A., Никольская И.И., Чеснокова Н.Б. Активность ангиотензин-превращающего фермента в сыворотке крови и слезной жидкости у кроликов с экспериментальным диабетом и влияние на ее уровень ликопин-содержащей диеты. // Материалы VII Международного медицинского конгресса студентов и молодых ученых, Тернополь, 2003, с.198.

14. Григорьев A.B., Кост O.A., Никольская И.И., Давыдова Н.Г., Чеснокова Н.Б. Изменение активности ангиотензин-превращающего фермента в сыворотке крови и слёзной жидкости у кроликов при экспериментальном диабете под влиянием каротиноида ликопина. // Тезисы докладов. Ill Всероссийский диабетологический конгресс, Москва, 2004, с.434.

1. Чеснокова Н.Б., Кузнецова Т.П., Давыдова Г.А., Григорьев A.B. Показатели липидного обмена и протеиназно-ингибиторного баланса у больных пролиферативной диабетической ретинопатией, использование в прогнозе и терапии. Пособие для врачей. // Москва, 2000,10 с.

РНБ Русский фонд

200,5-4 45452

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Григорьев, Андрей Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Основные патогенетические звенья развития диабетических микроангиопатий.

1.1.2.Нарушение углеводного обмена при сахарном диабете.

1.1.3. Нарушение липид-транспортной системы крови.

1.1.4. Протеолитические ферменты при сахарном диабете.

1.1.5. Ренин-ангиотензиновая система и её роль в развитии диабетической ретинопатии.

1.2. Каротиноид ликопин - свойства и функции.

Экспериментальные модели сахарного диабета, используемые для изучения ретинопатии.

I.4.Диагностика и лечение диабетической ретинопатии.

ГЛАВАМ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

II.1. Общая характеристика обследованных больных

П.2. Общая характеристика экспериментального материала Н.З.Общая характеристика использованных методов.

11.3.1. Методы забора материала для исследований.

11.3.2. Препаративное ультрацентрифугирование плазмы крови для выделения липопротеидов различных классо.

11.3.3. Экспериментальные модели и биохимические тесты.

Моделирование аллоксанового диабета у кроликов.

Определение содержания глюкозы в сыворотке крови.

Определение содержания глюкозы в слёзной жидкости кроликов глкжозооксидазным методом.

Определение содержания гликозилированного гемоглобина в крови пациетов с пролиферативной диабетической ретинопатией.

Определение липидного состава сыворотки крови пациентов с диабетической ретинопатией и кроликов с экспериментальным аллоксановым диабетом.

Определение концентрации ТБК-активных продуктов в сыворотке крови.

Определение антиокислительной активности сыворотки крови.

Методы измерения трипсиноподобной, антитриптической активности и уровня а2- макроглобулина в сыворотке крови и слезной жидкости пациентов с диабетической ретинопатией и кроликов.

Определение активности ангиотензин-превращающего фермента в слёзной жидкости и сыворотке крови кроликов.

Определение концентрации белка в сыворотке крови и слёзной жидкости.

Определение концентрации ликопина в липопротеидах сыворотки крови.

Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА III. ИЗУЧЕНИЕ КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У БОЛЬНЫХ И КРОЛИКОВ С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ДИАБЕТОМ. (РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ).

III. 1.Связь показателей липидного и белкового обмена у группы больных пролиферативной диабетической ретинопатией. II 1.1.1 Общая группа

III.1.2. Показатели протеиназно-ингибиторного баланса крови и типы гиперлипопротеидемий при кровоизлияниях в стекловидное тело.64 ИИ.З.Показатели протеиназно-ингибиторного баланса крови и ги-перлипопротеидемии при наличии "твердых" экссудатов в сетчатке.

III.2.Исследование биохимических показателей крови и слезной жидкости кроликов, и состояния микрососудистого русла перилимбальной зоны и сетчатки в динамике развития экспериментального диабета и на фоне применения ликопин-содержащего препарата.

111.2.1. Состояние микрососудов перилимбальной зоны и сетчатки.

Ш.2.2. Глюкоза в сыворотке крови и слезной жидкости.

Ш.2.3.Показатели протеиназно-ингибиторного баланса в сыворотке крови и слезной жидкости.

Ш.2.4.Показатели окислительной и антиокислительной активности крови.

Ш.2.5.Активность ангиотензин-превращающего фермента в крови и слезной жидкости.

Ш.2.6.Показатели липид-транспортной системы крови.

Ш.З.Изучение распределения ликопина в липопротеидах плазмы крови человека.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Значение клинико-биохимических показателей в прогнозе течения диабетической ретинопатии и экспериментальное обоснование применения ликопина для их коррекции"

В последние годы практически во всех странах отмечается неуклонный рост заболеваемости сахарным диабетом. Как причина смерти сахарный диабет (СД) занимает третье место после болезней сердечно-сосудистой системы и онкологических заболеваний. По данным ВОЗ в настоящее время в мире насчитывается более 150 млн. больных, страдающих этим недугом. Распространенность СД в промыш-ленно-развитых странах составляет 4-5%, и ежегодно число больных увеличивается на 5-7%, а каждые 10-15 лет удваивается [5]. В России в течение последних лет зарегистрировано более 2 млн. больных, и ежегодный прирост за последние 5 лет составляет 5%. Эпидемиологические исследования, проведенные в Москве и по России в 90-ч годах XX века, показывают, что истинное количество больных СД в России составляет около 6-8 млн. [13,14,36, 37].

Диабет характеризуется нарушением обменных процессов, приводящих к макро- и микроангиопатиям, которые в конечном итоге являются непосредственной причиной развития тяжелых осложнений и смерти [44]. Диабетическая ретинопатия (ДР) является одной из наиболее частых и прогностически неблагоприятных проявлений диабетических микроангиопатий [17, 18, 22, 34]. Диабетическая ретинопатия до сих пор остается основной причиной развития слепоты не только при инсулинзависимом СД (ИЗСД, СД I типа), но также и при инсулин-независимом СД (ИНСД, СД II типа). Эпидемиологические исследования свидетельствуют, что ДР развивается у 50-98% пациентов, страдающих СД более 15 лет [5, 57, 58, 62]. У 15,2% больных СД слепота развивается вследствие прогрессирования ДР, и около 5-10% больных СД через 20 лет полностью теряют зрение [57, 62].

Основными методами -профилактики слепоты, развивающейся вследствие ДР, являются максимально стабильная компенсация углеводного обмена у больных СД и своевременная лазеркоагуляция сетчатки [13, 14]. Лазеркоагуляция сетчатки остается и сегодня единственно эффективным способом лечения ДР, что подтверждено рядом б исследований [85, 86]. Этот, хирургический по своей сути, метод эффективен в плане предотвращения дальнейшего ухудшения зрения, но не приводит к его улучшению. При далеко зашедшей ДР эффективным может быть лишь хирургическое вмешательство на стекловидном теле - витрэктомия. Но следует отметить, что потенциальный риск осложнений при витрэктомии (отслойка сетчатки, катаракта, не-оваскулярная глаукома, кровоизлияния и послеоперационные инфекционные осложнения) достаточно высок [81, 82, 137]. По результатам проспективных исследований было установлено, что достижение нормального уровня глюкозы в крови при СД и предотвращение развития ДР осложнено с одной стороны ограниченностью терапевтического выбора, а с другой - индивидуальными (психо-эмоциональными) особенностями больных. Хороший контроль прогрессирования СД с помощью интенсивной инсулинотерапии дается высокой ценой с возрастанием риска возникновения гипогликемии. Даже при интенсивной терапии лишь у 5% пациентов достигается нормальный уровень глико-зилированного гемоглобина, что является необходимым условием эффективной профилактики диабетических осложнений. Таким образом, практически во всех случаях лечения СД в настоящее время невозможно предотвратить развитие диабетических осложнений, а ДР остается основной причиной развития слепоты [5, 13, 58].

В 1990г. Сент-Винсентская декларация определила задачей современной диабетологии снижение частоты всех осложнений диабета с помощью социальных программ и обязательного регулярного скрининга для выявления ранних осложнений и своевременного их лечения для всех больных СД [183]. Поэтому разработка методов поддержания зрительных функций у больных СД на ранних стадиях ретинопатии, а также работа по прогнозированию и профилактике развития осложнений ДР являются актуальными задачами современной офтальмологии. В дополнение к оптимизации основной противо-гликемическоой терапии, проблема предотвращения диабетических осложнений остается ключевой в разработке методов по улучшению прогноза и качества жизни больных диабетом. 7

Гипергликемия при сахарном диабете является ведущим фактором, обуславливающим изменения в различных метаболических системах, и приводящим к развитию функциональных и структурных изменений в сосудах, в том числе в микрососудах сетчатки. Развитие ишемии сетчатки в первую очередь связывают с накоплением внутриклеточного сорбитола, но и другие обменные нарушения, в том числе в структуре липопротеидов крови, усугубляют поражения сетчатки при СД [18, 138, 134].

Вопрос о том, можно ли только путем хорошего гликемического контроля задержать развитие диабетической ретинопатии остается дискутабельным. Многолетние проспективные исследования, проводимые в различных странах по контролю за лечением больших групп больных СД, не дают однозначного ответа на этот вопрос [117, 118, 119], с одной стороны по причине неясности его патогенеза, а с другой из-за присутствия значительного числа сочетанных осложнений и сопутствующих заболеваний. Одну из ведущих ролей в патогенезе ДР играют процессы активации свободно-радикального окисления, приводящие к структурным и функциональным нарушениям клеточных мембран и мембраноподобных структур [30]. Поэтому, представляется весьма важным изучение процессов торможения развития ПОЛ при СД и повреждения мембран эндотелия сосудов сетчатки с помощью жирорастворимых антиоксидантов, способных встраиваться в мембраны форменных элементов крови, эндотелия и липопротеидов. Безусловно, к таковым относятся токоферолы и каратиноиды. Среди последних, ликопин характеризуется высокой антиокислительной активностью, не токсичностью и выраженным гиполипидемическим эффектом [23, 24, 40].

Цель работы: исследовать взаимосвязь между развитием проявлений диабетической ретинопатии, приводящих к снижению зрения, и характером изменения клинико-биохимических показателей крови, и экспериментально изучить целесообразность применения антиоксидантов для коррекции метаболических нарушений, участвующих в развитии ДР.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить у больных пролиферативной диабетической ретинопатией взаимосвязь между характером изменения клинико-биохимических показателей крови и наличием проявлений диабетической ретинопатии, ведущих к снижению зрения (гемофтальм и "твердые" экссудаты в сетчатке).

2. На ранних стадиях экспериментального аллоксанового диабета у кроликов изучить метаболические изменения в крови и слезной жидкости и состояние микрососудов глаза.

3. Оценить влияние ликопина на состояние микрососудов глаза и биохимические показатели крови и слезной жидкости у кроликов на ранних стадиях экспериментального аллоксанового диабета.

4. Изучить влияние ликопина на липопротеиды плазмы крови человека при его пероральном поступлении в организм.

Научная новизна. Показано существование корреляции между проявлениями СД (гемофтальм, "твердые" экссудаты), ведущими к потере зрения, и характером изменения в крови показателей липидного обмена и протеиназно-ингибиторного баланса. На ранних стадиях экспериментального аллоксанового диабета у кроликов выявлено, что на фоне нарушения состояния микрососудов глаза происходит изменение активности протеолитических ферментов и основных плазменных ингибиторов протеаз, активности ангиотензин-превращающего фермента в крови и слезной жидкости, а так же показателей липид-транспортной системы крови. Установлено нормализующее влияние на состояние микрососудов глаза и на исследуемые биохимические показатели диеты, обогащенной ликопином.

Практическая значимость. Сопоставление характера изменений клинико-биохимических показателей крови и слезной жидкости с клиническими проявлениями диабетической ретинопатии позволили определить круг клинико-биохимические критериев для оценки риска снижения зрительных функций при СД.

На основании изучения на модели аллоксанового диабета у кроликов метаболических изменений в крови и слезной жидкости, состояния микрососудов глаза и влияния на них препарата, содержащего ли-копин, сформулированы рекомендации по включению в комплексную терапию СД препаратов, содержащих ликопин. Результаты экспериментального исследования показали, что при приеме ликопина на ранних стадиях СД снижается интенсивность ПОЛ, нормализуются показатели липидного обмена, протеиназно-ингибиторный баланс в крови и слёзной жидкости, снижается в крови активность АПФ и улучшается состояние капиллярной сети конъюнктивы.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Григорьев, Андрей Владимирович

выводы

1. На ранних стадиях экспериментального аллоксанового диабета (до 3-х месяцев) развиваются, характерные для сахарного диабета капиллярные микроангиопатии в перилимбальной зоне. В крови происходит: а) усиление процессов перекисного окисления липидов со снижением антиокислительной активности, б) увеличение активности трипсиноподобных ферментов и ангиотензин-превращающего фермента, сопровождающееся постепенным увеличением антипротеолитической активности, в) увеличение содержания общего холестерина и триглицеридов. В слезной жидкости увеличивается концентрация глюкозы, активность трипсиноподобных ферментов и ангиотензин-превращающего фермента.

2. При экспериментальном аллоксановом диабете под влиянием диеты, обогащенной ликопином, отмечено снижение выраженности микроангиопатий в перилимбальной зоне глаза; уменьшение интенсивности перекисного окисления липидов на фоне значительного усиления антиокислительной активности крови; нормализация показателей липидного обмена и некоторых показателей протеиназно-ингибиторного баланса в крови и слезной жидкости; уменьшение активности ангиотензин-превращающего фермента в крови.

3. У больных с пролиферативной диабетической ретинопатией при наличии в сетчатке гемофтальма и "твердых" экссудатов в крови значительно возрастает трипсиноподобная активность, а при гемофтальме уровень а2-макроглобулина, в сочетании с гиперлипидемией Пб и IV типа.

4. Ликопин при пероральном поступлении в организм в крови связывается преимущественно с липопротеидами низкой плотности и приводит к значительным изменениям в системе транспорта и межтканевого обмена липидов крови, что сопровождается достоверным снижением уровня общего холестерина.

5. Полученные данные указывают на целесообразность включения препаратов, содержащих каротиноид ликопин, в комплексную терапию больных сахарным диабетом для поддержания зрительных функций.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется включение в клинико-биохимическое обследование больных СД определение трипсиноподобной активности и основных плазменных ингибиторов протеолиза в сочетании с определением типа гиперлипидемий для прогноза неблагоприятного развития ДР.

2. В качестве средства для профилактики метаболических нарушений при СД, ведущих к развитию ДР и соответственно снижению зрения, рекомендуется прием каротиноида ликопина.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Григорьев, Андрей Владимирович, Москва

1. Александровский А .Я. // Молекулярные механизмы развития диабетических осложнений. // Биохимия. 1998. -Т.63. - вып.11. -С.1470-1479.

2. Андреева Л.И., Кожемякин, Кишкун A.A. // Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобаобитуровой кислотой. //Лабораторное дело. -1988.-№11,- С.41-43.

3. Аронов Д.М. // Лечение и профилактика атеросклероза. // Москва. Издательство "Триада-Х", 2000. С.412.

4. Астахов Ю.С., Шадричев Ф.Е., Лисочкина А.Б. // Проблемы диагностики и лечения диабетической ретинопатии. // Ученые записки. 1997. - Т.4. - №1. - С. 74-81

5. Балаболкин М.И. Диабетология. М.: Медицина, 2000, С.434-435.

6. Баранов Б.Б. Экспериментальный диабет. Роль в клинической диабетологии. Л.: Наука, 1983.

7. Бобырев В.Н. // Свободнорадикальное окисление в патогенезе заболеваний, сопряженных со старением. // Патофизиология. -1989-№5-С. 90-94.

8. Бобырев В.Н., Почерняева В.Ф., Думенко И.Л., Бобырева Л.Н. // Свободнорадикальные процессы в патогенезе аллоксанового диабета.// Проблемы эндокринологии. 1992. -т.38. - №6. - С.55-57.

9. Ю.Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. // Свободные радикалы в живых системах. // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. Москва -1991 -Т. 29 С.249.

10. Гулидова О.М., Любицкий О.Б., Клебанов Г.И., Чеснокова Н.Б.

11. Измерение антиокислительной активности слезной жидкости при экспериментальной ожоговой болезни глаз. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999. -Т. 128. -№11. -С.571-574.

12. Гуревич B.C., Шаталина Л.В. с соавт. // Роль холестерина в активации перекисного окисления липидов в тромбоцитах. // Биохимия. 1992. - Т.57. - вып.2. - С.267-275.

13. Досон Р., Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс. Справочник биохимика. М: Мир,1991, С. 196.

14. Елисеева Ю.Е., Орехович В.Н., Павлихина Л.В. Биохимия.1976.Т.41,№3,С.506-512.

15. Ефимов A.C. // Некоторые аспекты патогенетической терапии диабетических ангиопатий. // Клиническая медицина. 1994. - №1,-С.20-23.

16. Ефимов A.C. Диабетические ангиопатии. М.: Медицина, 1989. - С.288.

17. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньщикова Е.Б. // Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. // МАИК "Интерпериодика" 2001 - С. 246.

18. Капитанов А.Б., Пименов A.M. // Каротиноиды как антиокси-дантные модуляторы клеточного метаболизма. // Успехи современ101ной биологии. 1996 - Т. 116 - Вып. 2 - С. 179 - 193.

19. Кацнельсон Л.А., Фарофонова Т.И., Бунин А .Я. Сосудистые заболевания глаза. М., 1990.

20. Клебанов Г.И., Капитанов А.Б., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Жамбалова Б.А., Любицкий О.Б., Нестерова O.A., Васильева О.В., Попов И.Н., Левин Г., Владимиров Ю.А. // Антиоксидантные свойства ликопина // Биол. мембраны. 1998. Т. 15., № 2, С. 227-237.

21. Клебанов Г.И., Олферьев A.M., Ильина М.В., Капитанов А.Б., Кисанова H.H. // Томатол новая пищевая добавка антиоксидантного действия. // Medica altera. -2001. - май - С. 13-15.

22. Княжев В.А., Суханов Б.П., Тутельян В.А. // Правильное питание. Биодобавки, которые вам необходимы. // ГЭОТАР Медицина, Москва, -1998- С. 204.

23. Князева Л.И. Внутрисосудистые и внесосудистые показатели нарушения микроциркуляции у больных сахарным диабетом. Автореферат канд. дис. М.: 1983.

24. Комаров Ф.И., Нестеров А.П., Бровкина А.Ф. Патология органа зрения при общих заболеваниях. М., 1982.

25. Кост O.A., Чеснокова Н.Б., Кузнецова Т.П. // // Вопросы медицинской химии. 1996. - Т.2. - №2. - С. 130-134.

26. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М. -1980. С.224-226.

27. Кубатиев A.A., Андреев C.B. // Перекиси липидов и тромбоз. Бюлл. Эксперим. Биол. и мед. 1979 - № 5 - С. 414-17.

28. Кухарчук В.В. // Атеросклероз. Актуальные вопросы профилактики и лечения. // Кардиовскулярная терапия и профилактика. 2003. Т.2, № 3, С.80-85.

29. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. В.В.Меньшикова. M.: 1987.-С.230-234.

30. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза.1. Магариф. Казань.

31. Нестеров А.П. // Роль местных факторов в патогенезе диабетической ретинопатии. // Вестник офтальмологии. 1994. -№4. - С.7-9

32. Нестерова O.A. Антиоксидантные и гиполипидемические свойства ликопина // Диссертация на соискание ученой степени к.б.н., Москва, 1997

33. Оганов Р.Г., Сидоренко Б.А., Грацианский H.A., Перова Н.В., Лякишев A.A. Клиническое значение гиперхолистеринемии и ее коррекция. Кардиология 1991, т.12., С.95-112.

34. Орехович В.Н., Локшина П.А, Елесеева O.E., Павлихина Л.В. //Роль протеолитических ферментов в регуляции физиологических процессов// Вестник АМН СССР.-1984.-№8.-С.З-11.

35. Панченко Е.П., Добровольский А.Б. // Тромбозы в кардиологии. Ме103ханизмы развития и возможности терапии. Москва, 1999.

36. Соколов Е.И. Сахарный диабет и атеросклероз. // Москва, "Наука", -1996.

37. Соколова Е., Шамарин В., Джибладзе Д., Перова Н., Берзак Н., Олферьев А., Тимофеева С., Кукушкин С. // Сочетание окклюзирующего поражения сонных артерий, коронарной болезни и нарушений липидного обмена. // Кардиология. 1999 - Т. 39,- № 10

38. С.15есШкин Ю.А., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б. // Вопросы медицинской химии. 1990.-Т.36. - №3. - С.87-93.

39. Хегай М.Д., Зайчик С.Е. // Перекисное окисление липидов и гликозилирование белков в аорте кроликов с аллоксановым диабетом при инсулинокоррекции // Патолог. Физиология и эксперим. Терапия. 1995. -№4. - С.6-7.

40. Шашкина М.Я., Шашкин П.Н., Сергеев А.В. // Биодоступность каротиноидов. // Вопр. Мед. Химии. 1999. - Т.45. - вып.2. -С. 105115.

41. Шевченко О.П., А.О. Шевченко. // Статины ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы. //Реафарм. Москва. 2003. С. 112.

42. Шерстнев М.П., Сергиенко В.И. // Хемилюминесценция эритроцитов, насыщенных холестерином, в присутствии перекиси водорода. // Биофизика. 1982. - №2. - С.335-336.

43. Abbate S.L., Brimzel J.D., // Pathophisiology of hyperlipidemia in diabetus mellitus. //J. Cardiol. Pharm., 1990. -V. 16-P. S1-S7.

44. Akadi Y., Kador P.F., Kawabara T. // Aldose reductase localization in human retinal mural cells. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1983. -N24. -Pr1516-19.

45. Akadi Y., Terubayashi H., Millen J., Kador P.F. //Aldose reductase localization in dog retinal mural cells. // Curr. Eye Res. 1986. - N5. -P.833-86.

46. Assman G., Schriewer H., Schmitz G., Hagele E-O. // Quantification of high-density lipoprotein cholestrol by precipitation with phosphotungstic acid MgCl2- //Clin. Chem. 1983. - Vol.29. - N12. - P. 2026-2030.

47. Baynes J.W. // Role of oxidative stress in development of complications in diabetes mellitus // Diabetes. 1991. - Vol.40. P.405-12.

48. Berger H. // Diabetes and its complications may be caused by inadequate circulation. A new concept. // Med. Hypoth. 1993. - Vol.40. - N5. - P. 259-61.

49. Bobak M., Hense H.W., Kark J. An ecological stady of determinants of coronary heart disease rates: a comparison of Czech, Bavarian and Israeli men. Int.J. Epidimiol. 1999; 28(3).P. 437-444.,

50. Brandt C.R., Pumfery A.M., Micaeles B., Bindley C.D., et al.// Renin105mRNA is synthesised locally in rat ocular tissues.// Current Eye Reserche -1994.-Vol. 13. P.755-763.

51. Brasil-Vita J., Anderson J.A., Hulem C.D.// ACE activity in ocular fluids.// Investgative Ophtalmology Visual Science//-1981.-Vol.20.1. P.2555-2557.

52. Brinchmann-Hansen O., Dahl-Jorgensen K., Sandvik L., Hanssen K.F. // Blood glucose concentrations and progression of diabetic retinopathy: the seven year results of the Oslo study. // BMJ. 1992. -Vol. 304. (6818)-P. 19-22.

53. Britton G. // Carotenoids in chloroplast pigment-protein complex. // In: Pigment-protein comlex in plastids: syntesis and assembly. (Eds.: Sundqvist C., Ryberg M.) Acad. Press, San Diego, - 1993- P. 447-484.

54. Brownlee M., Cerami A. // The biochemistry of the complications of diabetes mellitus //Annu Rev Biochem. 1981 - 50 - P.385-432.

55. Brownlee M., Cerami A., Vlassara H. // Advanced glucosylation end prodacts in tissue and the biochemical basis of diabetic complication // New Engl. J. Med. 1988.- N318. - P.1315-21.

56. Brownlee M., Vlassara H., Cerami A., // Nonenzymatic glycosylation reduces the susceptibility of fibrin to degradation by plasmin.// Diabetes. 1983. - Vol.32. - N 7. - P.680-4.

57. Bucolo G., David H. // Quantitative determination of serum triglycerides by the use of enzymes. //1973, 19, p. 476-482.

58. Bunn HF, Gabbay KH, Gallop PM. // The glycosylation of hemoglobin: relevance to diabetes mellitus. // Science. 1978. - Vol.7. -N200.-P.21-7.

59. Cantrell,-A; McGarvey,-D-J; Truscott,-T-G; Rancan,-F; Bohm,-F // Singlet oxygen quenching by dietary carotenoids in a model membrane environment. //Arch-Biochem-Biophys. 2003-Apr 1; 412(1): 47-54

60. Carmo A., Lopes C., Santos M., et al. // Nitric oxyde synthase activity and L-arginine metabolism in the retina from streptozotocineinduced diabetic rats. // Gen. Pharmacol. 1998. - Vol.30. - N3.-P.319-24.

61. Carrell R.W., Owen M.C. // Plakalbumin, alpha 1-antitrypsin, antithrombin and the mechanism of inflammatory thrombosis. // Nature. -1985.-N317.-P.730-32.

62. Ceriello A., Giugliano D., Quatraro A. //Acute hyperglycemia induces nitrotyrosine formation and apoptosis in perfused heart from rat. // Diabetes. 2002. - N.4. - P. 1076-82.

63. Cerielo A., Quararo A., Giulgliano D. // Metabolic control may influence the increased speroxide anione generation in diabetic serum. // Diabet. Med. 1991. - Vol.8. - P.265-66.

64. Clinton S.K., Emenhiser C., Erdman J.W.Jr. // Cis-trans isomers, carotinoids, and retinol in the humane prostate. // Cancer epidemiol. Biomarkers prev. -1996 . Vol.5. - N10. - P.823-833.

65. Conn P.F., Schalh W., Truscott T.G. // The singlet oxigen and carotenoids interaction. // J. Photochem. Photobiol. Part B. Biology. -1991-Vol.11 -N.1-P. 41-47.i

66. Costa A., Igual I., Bedini J., Quinto L., Conget I. // Uric acid concentration in subjects at risk of type 2 diabetes mellitus: relationship to components of the metabolic syndrome // Metabolism. 2002. - Vol. 51. -N. 3 - P. 372-375.

67. Danser A.H.J., Dorpel M.A., Franken A.A.M. et al. // Renin, prorenin and immunoreactive renin in vitreous fluid from eyes with and without diabetic retinopathy // Journal Clinical Endocrinology Metabolisme.-1989.-Vol.68.-P. 160-166.

68. Deinum J., Derkx F.H., Danser A.H., Schalekamp M.A. // Identification and quantification of renin and prorenin in the bovine eye. // Endocrinology. 1990. - Vol.126. - P.1673-1682

69. Diabetes Control and Complication Trial. // The relationship of glicemic exposure to risk of development and progression of retinopathy in the diabetes control and complication trial. // Diabetes. 1995. - N44. - P.968-83.

70. Diabetic rethinopathy vitrectomy study research group early vitrectomy for severe vitreous hemorrage in diabetic rethinopathy. // Diabetic rethinopathy vitrectomy study report №5 // Arch. Ophthalmol.1990.-№108.-P.958.

71. Ditzel J. // Functional microangiopathy in diabetes mellitus. // Diabetes. 1968. - Vol. 17. - P.388-97.

72. Dvornik D., Simrad-Duquesne N., Krami N. // Polyol accumulation in galactosemia and diabetics rats. Control by an aldose reductase inhibitor. //Science. 1973. - Vol.182. - P.1146-47.

73. Early Treatment Diabetic Retinopathy Study Research Group. // Early Treatment Diabetic Retinopathy Study Research design and baseline patient caracteristics. ETDRS report №7 // Ophthalmology.1991. N.98. - P.741-56.

74. Ehlers M.R.W., Riodan J.F. // Angiotensin-converting enzyme: new concepts concerning its biological role. // Biochemistry. 1989. - Vol.28.1081. P.5311-5318.

75. Engerman R.L., Kern T.S. // Experimental Diabetic retinopathy in dogs. // Arch. Ophthal. 1965. - Vol. - N3. - P.209-11.

76. Erdos E.G. // Kinins, the long march a personal view. // Cardiovasc Res. -2002. - Vol.54. - N3. - P485-91.

77. Fang.L., Pajkovic. N., Wang. Y., Gu. C., van-Breemen. R. B. // Quantitative analysis of lycopene isomers in human plasma using highperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Anal-Chem.,- 2003 V. 15; N. 75(4), 812-817.

78. Ferrari-Dileo G., Ryan J.W., Rockwood E.J. //Angiotensin converting enzyme in bovine? Feline and human ocular tissues // Investgative Ophtalmology Visual Science.-1988.-Vol.29.-P.876-881

79. Ford,-E-S; Mokdad,-A-H; Giles,-W-H; Brown,-D-W. // The metabolic syndrome and antioxidant concentrations: findings from the Third National Health and Nutrition Examination Survey.// Diabetes. 2003 Sep; 52(9): 2346-52.

80. Friedwald W.T., Levy R.I., Fredrickson D.S. // Estimation of the concentration of low density lipoprotein cholesterol in plasma without use preparative ultracentrifuge. // Clinical Chemistry. 1972. - Vol.18. -P.499.

81. Frusciante,-L; Barone,-A; Carputo,-D; Ercolano,-M-R; della-Rocca,-F; Esposito,-S. // Evaluation and use of plant biodiversity for food and pharmaceuticals.// Fitoterapia. 2000 Aug; 71 Suppl 1: S66-72

82. Fuhrman B, Oiknine J, Aviram M. // Iron induces lipid peroxidation in cultured macrophages, increases their ability to oxidatively modify LDL, and affects their secretory properties.// Atherosclerosis. 1994. -Vol.111.-N1.-P.65-78.

83. Gabbay K.H. // Glycosylated hemoglobin and diabetes mellitus. // Med. Clin. North. Am. 1982. - Vol.66. - N6. -P. 1309-15.

84. Garcia Trade L.J., de la Calle H., Alava I., Navarro J.L., Creight109

85. J., Gafney L.J. // Diabetus mellitus as an hypercoagulable state: its relationship with fibrin fragments and vascular damage. // Thromb. Res. -1987-Vol. 47,-P. 533-540.

86. Gavioli R., Spisani S., Traniello S. // Dual mechanism in induction of human neutrophil cytotoxicity: activation of protein kinase C and elevation in intracellular calcium. // Clin. Exp. Immunol. 1990. - Vol.80.- N2. P.247-51.

87. Goel A.K., Jabbour N.M.// Vitreous levels of angeotensin II in patients with diabetic retinopathy // Investgative Ophtalmology Visual Science.-1991 .-Vol.32.-P. 1027.

88. Goldstein J.L., Basu S.K., Brown M.S. // Receptor-mediated endocytosis of low density lipoprotein in cultured cells. // Meth. Enzymol. -1983-Vol. 98-P. 241-260.

89. Green D.A., Lattimer S.A., Sima A.A. // Sorbitol, phosphoinositides and sodium-potassium-ATPase in the pathogenesis of diabetic complications // N. Eng. J. Med. 1987. - Vol. 316. - P.599-606.

90. Grigoryev A.V., Nesterova O.A., Olferiev A.M., PimenovA.M., Chesnokova N.B., Perova N.V. // Effect of "Tomatol" on human serum lipoprotein. // Abstr. Of the XI Intern. Symp. Of Atherosclerosis, Paris. -1997.-P.206.

91. Guenther E., Schmid S., Hewing B.,// Two-fold effect of angiotensin II on voltage-dependent calcium currents in rat retinal ganglion cells // Brain Reserch.-1996.-N29.-Vol.718.-P. 112-116.

92. Heber,-D; Lu,-Q-Y. // Overview of mechanisms of action of lycopene. // Exp-Biol-Med-(Maywood). -2002- Nov; 227(10): 920-3

93. Higgins PJ, Garlick RL, Bunn HF. // Glycosylated hemoglobin in human and animal red cells. Role of glucose permeability. // Diabetes. -1982. -Vol.31. -N9. P.743-8.

94. Hohman T.C., Nishimura C., Robinson W.G. // Aldose reductase and poliol in cultured pericytes of human retinal capillaries. // Exp. Eye res. 1989. - N49. - P.55-60.

95. Hohman T.C., Nishimura C., Robinson W.G. //Aldose reductase in cultured human and canine retinal capillary pericytes. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1986. - N40. - P.439-44.

96. Idem. The pathogenic role of nonenzymatic glycosilation in diabetic complication. In: Crabble M.J.C., ed. Diabetic complications: scintific and clinical aspects. London: Churchill Livingstone. 1987. P.94-139.

97. Juklies B., Eckstein A., Jacobi P., Kohler K. // The renin-angiotensin system a possible neuromodulator in the humam retina. // Germany journal Ophthalmology. 1995.-Vol.4. - P. 144-150.

98. Kador P.F., Akadi Y., Takahashi Y., Wyman // Prevention of retinal vessel changes associated with dibetic retinopathy in galactose-fed dogs by aldose redutase inhibitors //Arch. Ophthalmol. 1990 - Vol.108.1. P.1301-09.

99. Kennedy L., Mehl T.D., Elder E., // Nonenzymatic glycosylation of serum and plasma proteins. // Diabetes 1982. - V.31. - P.52-56.

100. Kern TS, Engerman RL. // Vascular lesions in diabetes are distributed non-uniformly within the retina.// Exp. Eye res. 1995. - Vol. 60. - N5. P.545-9.

101. Klein R. // Hyperglycemia and microvascular and macrovascular disease in diabetes. // Diabetes Care. 1995. - Vol.18. - N2. - p.258-68.

102. Klein R., Klein BEK, Moss S.E. // The Wisconsin Epidemiologic Study of Diabetic retinopathy. XIV. Ten year incidence and progression of diabetic retinopathy//Arch. Ophthalmol. 1994. - N112. - P.1217-28.

103. Klein R., Klein BEK, Moss S.E., et al. //The relationship of hyperglycemia to long-tem incidence and progression of diabetic retinopathy//Arch. Intern. Med. 1994. - N154. - P.2169-78.

104. Kortlandt W., Benschop C., van Rijn H.J., Erkelens D.W. // Glycated low density lipoprotein catabolism is increased in rabbits with alloxan-induced diabetes mellitus. // Diabetologia. 1992. - Vol.35. - N3. - P.202-7.

105. Krinsky N.I. // Antioxidant function of carotenoids. // Free Rad. Biol. And Med. 1989-V.7, N.6, P. 617-635.

106. Krisky N.I. // Actions of carotcarotinoids in biological systems. // Ann. Rev. Nutr. 1993. - Vol.13. - p.561-87.

107. Kulkarni P.S., Hamid H., Barati M. //Angiotensin ll-induced constrictions are masked by bovine retinal vessels. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. .-1999.-V.40. N3. - P.721-8.

108. Lindren F.T. In: "Analysis of lipids and lipoproteins", ed. by E.G.Perkins. Champaign, Amer. Oil Chemisists Soc. - 1975. - P. 204224.

109. Lip P.L., Jones A.F., Price N. // Do intraocular angiotensin II levels, plasma factors and endothelial dysfunction contribute to proliferative diabetic retinopathy//Acta Ophthalmology Scand/-1998.-Vol.76.-N5.1. P.533-536.

110. Livny,-0; Kaplan,-I; Reifen,-R; Polak-Charcon,-S; Madar,-Z; Schwartz,-B. // Lycopene inhibits proliferation and enhances gap-junction communication of KB-1 human oral tumor cells. // J-Nutr. -2002- Dec; 132(12): 3754-9

111. Lopes-Virella M.F., Klein R.L., VirellaG. // Modification of lipoproteins in diabetes. // Diabetes/Metabolism reviews. 1996. -Vol.12.-N1.-P.69-90.

112. Lorenzi M., Cagliero E., Markey B. // Interaction of human endothelial cells with elevated glucose concentrations and native and glucosylated LDL. // Diabetologia. 1984. - N26. - P.218-222.

113. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. //J. Biol. Chem., -1951 -N. 193-P. 265-75.

114. Lyons T.J. // Glycoation and oxidation. A roleof pathogenesis of atherosclerosis. //Amr. J. Cardiol. 1993. - V.77. - P. 1326-31.

115. McLeod D. // Entry site neovascularisation after diabetic vitrectomy // BJO. -2000. Vol.84. - N38. - P.810-81.

116. Minhthy L. Nguyen, J.Schwartz // Lycopene: Chemical and biological properties // Foodtechnology. 1999. - Vol.53. - N2. - P.38-43.

117. Moss S.E., Klein R., Klein BEK. //The 14-year incidence of vision loss in a diabetic population // Ophthalmology. 1998. - N105. - P.998-1003.

118. Naeser P., Brolin S.E., Eriksson U.F. // Sorbitol metabolism in retina studied in vitro. // Graefs Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 1989. -N227.-P. 180-183.

119. Nakamura H., Hamaguchi K., Ono J. // The endocrine pancreas of alloxan-diabetic rats: microangiopathy as revealed by electron microscopy.// Diabetes Res Clin Pract. // Diab. Res. Clin. Pract. 1989. -Sep 18. -N7(3). -P. 169-79.

120. Nesto R.CHD: A major burden diabetes. Acta Diabetol. 2001; 38 (1).P.S3-S8.

121. Nilsson,-S-E; Sundelin,-S-P; Wihlmark,-U; Brunk,-U-T // Aging of cultured retinal pigment epithelial cells: oxidative reactions, lipofuscin formation and blue light damage. // Doc-Ophthalmol. 2003 Jan; 106(1): 136

122. Olson J.A. // Overview. Carotenoids and vitamin A. // Lipid-Soluble Antioxidants: Biochemistry and Clinical Application. Basel. Birkhauser Verlag.-1992- P. 178-192.

123. Ottlecz A., Bensaoula T., Eichberg J. // ACE activity in retinas of streptozotocin-induced and Zucker diabetic rats. // Investigative Ophthalmology Visual Science.- 1996.-Vol.37.-N11.-P.2157-2164.

124. Palozza P., Krinsky N.I. // Antioxidant effects of carotinoids in vivo and in vitro // Methods in Enzymology. N.Y., Acad. Press. 1992 - Vol. 213-P. 403-420.

125. Pecsvarady Z., Fisher T.C., Darwin C.H., Fabok A., Maqueda T.S., Saad M.F., Meiselman H.J. // Decreased polymorphonuclear leukocyte deformability in NIDDM. // Diabetes Care. 1994. - Vol.17. - N1. - P.57-63.

126. Pinzani P., Petruzzi E., Orlando C. // Serum antioxidant capacity in healthy and diabetic subjects. // J. biolumin. Chemilumin. 1990. -Vol.13.-P.321-25.

127. Pirags V., Assert R., Haupt K., Schatz H., Pfeiffer A. // Activation of human platelet protein kinase C-beta 2 in vivo in response to acute hyperglycemia. // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. 1996. - N104.1. P.431-440.

128. Pirags V., Assert R., Pfeiffer A. // Regulation of protein kinase C by short term hyperglycaemia in human platelets in vivo and in vitro. // Diabetologia. -2001. Vol.44. - N2. - P. 188-95.

129. Porte D.J., Schwartz M.W. // Diabetes complications: why isglucose potentially toxic. // Science. 1996. - Vol.272. - P.699-700.

130. Rand LI, Krolewski AS, Aielo LM, et al. // Multiple factors in the prediction of risk of proliferative diabetic retinopathy // New Engl. J. Med. -1985. -N313. -P.1433-8.

131. Rao K.M., Hatchell D.L., Cohen H.J., De La Paz M.A. // Alterations in stimulus-induced integrin expression in peripheral blood neutrophils of patients with diabetic retinopathy. //Am. J. Med. Sei. 1997. - Vol.313. N3. - P.131-7.

132. Rao,-A-V; Balachandran,-B. // Role of oxidative stress and antioxidants in neurodegenerative diseases. // Nutr-Neurosci. -2002 -Oct; 5(5): 291-309

133. Re R.N. // Cellular biology of the renin-angiotensin systems. // Arch.Intern.Med. -1984. Vol.144. - P.2037-2041.

134. Roeschlau P., Berndt E., Gruber W. // Enzymatische bestimmung des gesamtcholestrines in serum. // Z. Scand. Klin. Chem. 1974. - N12. -P. 226-231.

135. Romanchik E.J., Morel D.W., Harrison EH. // Distributions of carotenoids and alphatocopherol among lipoproteins do not change when human plasms is incubated in vitro. // J. Nutr. -1995- V. 125 N. 10. -P.2610-2617.

136. Sato A, Tamura R, Shirai T. // Diabetes mellitus with intractable bacterial infections. // Nippon Rinsho. 1994. - Vol.52. - N2. - P.389-94.

137. Sies,-H; Stahl,-W // Non-nutritive bioactive constituents of plants: lycopene, lutein and zeaxanthin. //: Int-J-Vitam-Nutr-Res. 2003 Mar; 73(2): 95-100.

138. Simmons D. A., Winegrad A.I. // Elevated extracellular glucose inhibits an adenosine-(Na+,K+)-ATPase regulatory system in rabbit aortic wall. // Diabetologia. 1991. - N34. - P. 157-63.

139. Sims T.J., Rasmussen L.M., Oxlund H., Bailey A.J. // The role of glycation cross-links in diabetic vascular stiffening // Diabetologia. -1996.-Vol.39.-P.946-51.

140. Sinnhuber R.O., Yu T.C. // 2-Thiobarbituric acid method for the mesurment of rancidity in fishery products // Food Tech. 1958. -Vol.24. -N.7-P.659-661.

141. Skeggs L.T., Dorer F.E., Kahn J.R. In: Biochemical Regulation of blood pressure. Ed. By Soffer R.L., Wiley, New York.-1981.-P.4-38.

142. Skeggs L.T., Dorer F.E., Kahn J.R.//The biochemistry of the renin-angiotensin system. //Adv. Exp. Med. Biol. 1980. - N130. - P.1-27.

143. Solomon L.R., Cohen K. // Erythrocyte 02 transport and metabolism and effects of vitamin B6 therapy in type II diabetes mellitus. // Diabetes. 1989. - Vol.38. - N7. - P.881-6.

144. Sosula L. // Capillar radius and wall thickness. // Microvasc. Res. -1974. Vol. 7. - N2. - P.274-276.

145. Stahl,-W; Sies,-H. // Carotenoids and protection against solar UV radiation. // Skin-Pharmacol-Appl-Skin-Physiol. 2002 Sep-Oct; 15(5): 2916

146. Stehouwer C.D.A., Schaper N.C. //The pathogenesis of vascular complications of diabetes mellitus: one voice or many? // Eur. J.Clin.1171.vest. -1996- N26. P.535-543.

147. Stevens V.J., Vlassara H., Abati A., Cerami A. // Nonenzymatic glycosylate of hemoglobin. //J. Biol. Chem. 1977. - Vol.10. - N252. -P.2998-3002.

148. Stevens V.J.,Roazer C.A., Monnier U.M. // Diabetic cataract formation, potential role of glycosylation of lens crystallins. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1978. - N75. - P.2918-22.

149. Takayama K., Nakano M., Zinner K., Vidigal C.C., Duran N., Shimizu Y., Cilento G. // Generation of electronic energy in the myoglobin-catalyzed oxidation of acetoacetateto methylglyoxal. //Arch. Biochem. Biophys. -1976. Vol.176. - N2. - P.663-70.

150. Velmurugan,-B; Bhuvaneswari,-V; Nagini,-S. // Antiperoxidative effects of lycopene during N-methyl-N.-nitro-N-nitrosoguanidine-induced gastric carcinogenesis. // Fitoterapia. -2002- Dec; 73(7-8): 604-11

151. Wallow I.H.L., Pumfery A.M., Brandt C.R., et al.// Ocular renin angiotensin: PCR and in situ hybridisation show renin synthesis in rat eye.// Investigative Ophthalmology Visual Science, 1994.-Vol.35-P.1787.

152. Weinreb R.N., Sandman R.,Ryder M.I., Friberg T.R. //Angiotensin converting enzyme activity in human aqueous humor. // Archive Ophthalmology.-1985.-Vol. 103.-P. 34-36.

153. Weisburger,-J-H. // Lycopene and tomato products in health118promotion.// Exp-Biol-Med-(Maywood). 2002 Nov; 227(10): 924-7

154. WHO/IDF Europe. // Diabetes care and research in Europe: the St. Vinsent Declaration. // Diabetic medicine. 1990. - №7. - C.360.

155. Wu,-K; Schwartz,-S-J; Platz.-E-A; Clinton,-S-K; Erdman,-J-W Jr; Ferruzzi,-M-G; Willett,-W-C; Giovannucci,-E-L/ // Variations in plasma lycopene and specific isomers over time in a cohort of U.S. men. // J-Nutr. 2003 Jun; 133(6): 1930-6

156. Zielgler R. In " Carotinoids in humen health". Eds. L.M.Ganfield, N.I.Krinsky. N.Y.: N.Y.Acad. Aci., 1993.-Vol.691. P. 110.