Взаимодействие возбудителей острых гнойных инфекций in vitro и in vivo с факторами естественной резистентности организма животных

Шибаева, Мария Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Взаимодействие возбудителей острых гнойных инфекций in vitro и in vivo с факторами естественной резистентности организма животных
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Взаимодействие возбудителей острых гнойных инфекций in vitro и in vivo с факторами естественной резистентности организма животных"

ШИБАЕВА МАРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ОСТРЫХ ГНОЙНЫХ ИНФЕКЦИЙ IN VITRO И IN VIVO С ФАКТОРАМИ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ

03.02.03 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саратов-2010

1 8 ФЕВ 2910

003491963

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный технический

университет»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Тихомирова Елена Ивановна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Васильев Дмитрий Аркадьевич

доктор медицинских наук, профессор Елисеев Юрий Юрьевич

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Оренбургский государственный университет»

) У*^

Защита состоится «25» февраля 2010 г. в / / часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 при ФГОУ ВПО «Саратовский государственный агарный университет имени Н.И. Вавилова» по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335.

Автореферат диссертации разослан ъЛ^ьс/Л 2010 г. и размещен на сайте университета www.sgau.ru.

Отзывы на автореферат направлять по адресу: 4100012, г. Саратов, Театральная пл., 1, ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», ученому секретарю диссертационного совета.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор ^ Карпунина Л.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Изучение биологических особенностей возбудителей инфекционных заболевший человека и животных остается важнейшим аспектом современной прикладной микробиологии (Пюхлер, Хаккер, 2005; Vogt, Mahan, 1998). Принципиально важными представляются сведения о некоторых видах стафилококков и энтеробактерий, потенциально опасных или условных патогенов, вызывающих острые гнойные процессы в организме человека и животных, что определяет непреходящий интерес к этим микроорганизмам со стороны широкого круга микробиологов (Ляшешсо, 1995; Бондаренко, 1997; Дерябин, 2000; Roth, James, 1998). Актуальность этой проблемы обусловлена также формированием устойчивости этих бактерий к широкому спектру антибиотиков и совершенствованием способности к существованию и развитию во внутренней среде макроорганизма (Обгольц, 1992; Бухарин, Дерябин, 1997; Тихомирова, 2005; McManus, 1997).

Известно, что в иммунном ответе на ряд инфекционных агентов огромную роль шрают начальные этапы инфекционного процесса, связанные с фагоцитарной активностью и формированием острой фазы воспалительной реакции, опосредованной синтезом провоспалительных цитокинов (Маянский, Пикуза, 1993; Сегшашвили, 2003; Фрейдлин, 2006; Agace, 1993). Традиционно неблагоприятное течение гнойно-воспалительного заболевания связывается со снижением уровня факторов естественной резистентности, нередко зависящих от способности возбудителя к их инактивации (Бухарин, Дерябин, 1996; Ефименко, 1999).

Развитие инфекционного процесса, особенно на начальных его этапах, во многом определяется активацией цитокиновой сети, для управления которой необходимо знание особенностей изменения цитокинового баланса при разных способах внедрения патогена в организм. Однако, сравнительные данные по индукции цитокинов при разных путях проникновения стафилококков и энтеробактерий в макроорганизм, а также воздействие провоспалительных цитокинов ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови практически не описаны.

Вышеизложенное определило цель й задачи данного исследования.

Цель работы: изучить активность механизмов фагоцитоза и индукцию цитокинов in vitro и in vivo при разных способах введения стафилококков и энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями.

Задачи исследования:

1. Определить основные свойства стафилококков, выделенных в монокультуре и в ассоциациях от животных с острыми гнойными инфекциями.

2. Изучить в условиях in vitro особенности фагоцитоза выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями стафилококков: Staphylococcus aureus 18, S. hyicus 12, S. epidermidis 6, S. saprophytics 5, перитонеальными макрофагами белых мышей, активность механизмов кислородзависимого и кислородяезависимого киллинга и индукцию основных провоспалительных цитокинов; продукцию оксида азота спленоци-тами белых мышей.

3. Провести подкожное, внутримышечное и внутрибрюшинное заражение белых мышей стафилококками, выделенными от животных с острыми гнойными инфекциями: S. aureus 18, S. hyicus 12, S. epidermidis 6, S. saprophytics 5, и определить содержание основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови; оценить активность некоторых ферментов белкового, углеводного и липидного обменов при моделировании стафилококковой инфекции.

4. Изучить в условиях in vitro особенности фагоцитоза энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями: Escherichia coli 34, Serratia sp. 3, Citrobacter sp. 1A, Enterobacter agglomérons 6, перитонеальными макрофагами белых мышей и индукцию основных провоспалительных цитокинов.

5. Провести подкожное и внутрибрюшинное заражение белых мышей энтеробактериями, выделенными от животных с острыми гнойными инфекциями: К coli 34, Serratia sp. 3, Citrobacter sp. 1 A, E. agglomérons б, и определить содержание основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови.

6. Оценить действие ex tempore in vivo супернатанта среды культивирования перитонеальных макрофагов, фагоцитирующих S. aureus 18, и стандартных препаратов ИЛ-1а и ФНО-а на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс методом спекл-микроскопии.

Научная новизна. Установлено, что среди стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, в монокультуре чаще всего встречались S. aureus и S. hyicus, реже - 5. epidermidis и S. saprophytics; ассоциации были представлены преимущественно S. aureus и S. saprophytics.

Выявлено, что процесс фагоцитоза S. saprophytics 5 и Е. coli 34 в перитонеальных макрофагах белых мышей in vitro завершался к 24 часам; фагоцитоз других исследуемых бактерий носил частичный или незавершенный характер. Показано достоверное увеличение активности ферментов кислородеависимого и кислороднезави-симого киллинга, активных форм кислорода в перитонеальных макрофагах и синтеза оксида азота спленоцитами мышей в процессе фагоцитоза S. aureus 18 в системе in vitro.

Впервые проведена оценка влияния стафилококков и энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, на содержание основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови лабораторных белых мышей при разных способах их заражения. Выявлено, что при внутрибрюшинном введении бактерий резко возрастает содержание основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови мышей через 6-24 часа, особенно при введении S. aureus 18 и Е. coli 34. При подкожном и внутримышечном введении этих бактерий изменения концентрации цитокинов были достоверными, но менее выраженными.

При моделировании стафилококковой инфекции выявлены изменения метаболической активности организма экспериментальных животных, свидетельствующие о большей эффективности защитных реакций в случае введения S. saprophytics 5 и менее скомпенсированном характере патологических изменений в случае заражения S. aureus 18.

Впервые методом спекл-микроскопии показано ex tempore in vivo усиление скорости кровотока в сосудах брыжейки белых крыс при нанесении супернатанта среды культивирования перитонеальных макрофагов, фагоцитирующих бактерии S. aureus 18, и стандартных препаратов ИЛ-1а и ФНО-а.

Практическая значимость работы. Полученные результаты имеют значение для расширения представлений о начальных этапах воспалительной реакции, вызванной возбудителями гнойных инфекций животных при разных путях их внедрения в макроорганизм. Содержащиеся в диссертационной работе данные могут бьггь использованы для дальнейших разработок в области изучения взаимодействия макро- и микроорганизмов. Показана возможность применения метода спекл-микроскопии для оценки действия различных цитокинов ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови в исследовательской и диагностической медико-биологической практике.

Материалы диссертационного исследования используются при чтении лекций общих и специальных курсов студентам кафедры микробиологии и физиологии растений Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского и кафедры экологии Саратовского государственного технического университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Из выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями стафилококков и энтеробактерий наиболее активно фагоцитируются в условиях in vitro перито-неальными макрофагами белых мышей S. saprophytics 5 и К coli 34. В процессе фагоцитоза S. aureus 18 происходит достоверное увеличение активности ферментов ки-слородзависимого и кислороднезависимого киллинга, образования активных форм кислорода в перитонеальных макрофагах и синтеза оксида азота спленоцитами мышей.

2. При моделировании инфекции изменения цитокинового статуса организма экспериментальных животных зависят от способа заражения: внугрибрюшшшое введение бактерий вызывает резкое увеличение содержания основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови мышей через 6-24 часа, особенно при заражении S. aureus 18 и £ coli 34. При подкожном и внутримышечном введении изменения концентрации цитокинов достоверные, но менее выраженные.

3. Метод спекл-микроскопии позволяет оценить действие цитокинов и цитокин-содержащего материала ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови в сосудах брыжейки белых крыс.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на: Восьмой Общероссийской научной конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2007); Международном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем в норме и патологии» (Санкт-Петербург, 2007); Заочной конференции Российской Академии Естествознания «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (Москва 2007); Международной школе для студентов и молодых учёных по оптике, лазерной физике и биофизике Saratov Fall Meeting (Саратов, СГУ им. Чернышевского, 2007); Четвертой международной конференции «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» (Санкт-Петербург, 2008); Х-XII Всероссийских Форумах с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006-2009).

Работа выполнена в рамках НИР Государственного научного учреждения Саратовская научно-исследовательская ветеринарная станция Россельхозакадемии «Изучение влияния ассоциаций условно-патогенных микроорганизмов на возникновение заболеваний животных»; частично поддержана грантом № 45434 в рамках ведомственной научной программы «Развитие научного потенциала высшей школы» (2006); а также в рамках НИР Федерального агентства по образованию № 1.4.09. «Исследование взаимодействия оптического излучения с биологическими тканями и разработка когерентно-оптических и спектральных методов медицинской диагностики и фототерапии» (2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 5 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, восьми глав, включающих обзор литературы, описания материалов и методов, изложения полученных результатов и их обсуждения, а также заключения, выводов и списка использованных литературных источников. Работа изложена на 142 страницах, иллюстрирована 16 рисунками и содержит 16 таблиц. Список использованных литературных источников включает 248 наименований, в том числе 136 зарубежных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Материалы и методы

В работе проанализировано ¿74 штамма бактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями в бактериологической лаборатории ГНУ Саратовская НИВС Россельхозакадемии. Для экспериментальных исследований были отобраны следующие бактерии: S. aureus 18, S. hyicus 12, S. epidermidis 6, S. saprophytics 5, E. coli 34, Serratia sp. 3, Citrobacter sp. 1A и E. agglomerans 6. Изучение основных морфологических, культуральньк, биохимических и тинкториальных свойств выделенных микроорганизмов, определение их чувствительности к антибиотикам проводили по общепринятым в микробиологии методам (Методические указания по..., 2004; Колычев, Госманов, 2006).

В работе использовали 340 лабораторных мышей и крыс, содержащихся на стандартном рационе вивария.

В качестве фагоцитирующих клеток при моделировании процесса фагоцитоза in vitro были использовали перитонеальные макрофаги (ПМФ) и спленоциты белых мышей - самцов, возрастом 2-3 месяца, весом 18 — 20 г. ПМФ выделяли из перито-неального экссудата, а спленоциты - из селезенок по общепринятым методикам (Кондратьева, Воробьева, Буракова, 2001). ПМФ культивировали в среде 199 с 0,5 % гидролизала лактальбумина. При моделировании процесса фагоцитоза in vitro использовали суточные культуры микроорганизмов, выращенные на оптимальных питательных средах, из которых готовили взвеси в физиологическом растворе по стандартам мутности № 5 (ГИСК им. J1.A. Тарасевича). Бактерии вносили в среду с ПМФ в соотношении 1:50 и инкубировали при 37°С в течение 1, 3,6,12,24 и 48 часов, после чего готовили фиксированные и окрашенные препараты монослоя фагоцитирующих макрофагов (Рудик, Тихомирова, 2006). Фагоцитарную активность определяли путем оценки фагоцитарных индексов (ФИ) и индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ) (Васильева, Пустовалов, Дорошенко, 1987).

Кислороднезависимые механизмы киллинга бактерий изучали постановкой цитохимических анализов на определение в перитонеальных макрофагах: кислой фос-фатазы методом азосочетания Бернсгона (Бернстон, 1965); щелочной фосфатазы по методу Каплоу (1955); катионных белков по методу Шубича (1974). Кислородзависи-мые механизмы киллинга изучали определением миелопероксидазы методом Грэхе-ма-Кнолля (Саидов, Пинегин, 1991); образование активных форм кислорода регистрировали в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) (Долгушин, Бухарин, 2001). На основе результатов исследования рассчитывали средний цитохимический коэффициент с использованием полуколичественного метода оценки по Ас-тальди-Верга (Astaldi, Verga, 1957). Продукцию оксида азота спленоцитами в процессе фагоцитоза бактерий определяли методом Грисса по накоплению в инкубационной среде ионов NOr (Grees, Wagner, Glogowsky, 1982).

Содержание основных провоспалительных цитокинов определяли в супернатан-те среды культивирования фагоцитов с бактериями через 1, 3, 6, 12, 24 и 48 часов процесса фагоцитоза методом иммуноферментного анализа с тест-системами на основе моноклональных антител к ИЛ-1, ФНО-а, ИЛ-6, ИФ- а и ИЛ-8 (наборы реактивов "цигокиновый тест" АО "Иммунодиагностика" г. Санкт-Петербург и тест-системы «ИФА-БЕСТ», производства ЗАО «Вектор-БЕСТ», г. Новосибирск).

Заражение беспородных белых мышей-самцов массой 18 - 20 г проводили введением по 0,2 мл взвеси с концентрацией 5х107 м.к./мл подкожно, внутрибрюшинно или внутримышечно суточных культур выделенных стафилококков; подкожно и внутрибрюшинно - энтеробактерий. Контрольным мышам аналогично вводили по 0,2 мл физиологического раствора. Содержание основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови определяли через 1, 3, 6,12 и 24 часа после заражения.

Для биохимических исследований лабораторных мышей заражали подкожно суточными культурами S. aureus 18 и S. saprophyticus 5 (по 0,2 мл взвеси с концентрацией 5х107 м.к./мл). Сыворотку крови забирали по стандартной методике через двое суток после заражения (Кондратьева, Воробьева, Буракова, 2001). Показатели белкового, углеводного, липидного обменов, активность некоторых ферментов, а также содержание кальция и железа в сыворотке определяли на полуавтоматическом биохимическом анализаторе BS 3000 Р.

Исследования микроциркуляции крови в брыжейке белых крыс проводили в Научной бактериологической лаборатории научно-исследовательской части Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского. В опытах использовали беспородных белых крыс двух-, трёхмесячного возраста массой 180-200 г, которых усыпляли введением нембутала (из расчёта 0,5 мг на 1 г массы тела), проводили лапа-ротомию по средней линии (1-1,5 см) и извлекали петлю тонкого кишечника с брыжейкой. Наблюдения изменений кровотока проводили при помощи установки для спекл-микроскопирования, представляющей собой микроскоп «Биолам» с дополнительным источником когерентного излучения (длина волны 633 нм, мощность ~1 мВт). Луч He-Nc лазера (X = 633 нм) фокусировался в пятно небольшого радиуса (Wo=l,5 цм) на исследуемом сосуде брыжейки, образующиеся при этом спекл-поля, регистрировались фотодетектором. Цитокины (или цитокинсодержащий материал) наносили на петлю брыжейки и немедленно регистрировали исходящий сигнал спекл-микроскопа, который затем переводился в цифровой формат, записывался в wav-файл и обрабатывался при помощи оригинального алгоритма для прикладного пакета программ MathCAD 2001 (Ульянова, Ганилова, Ульянов, 2007).

Для статистической обработки экспериментальных данных использовали непараметрические критерии Уилкоксона-Манна-Уитни и параметрический t-критерий Стьюдента. Достоверными считали различия при вероятности ошибки Р<0,05 (Ашма-

рин, Васильев, Амбросов, 1974). Расчёт результатов осуществляли с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel 2003 (for Windows XP).

Изучение биологических свойств стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями

На первом этапе был проанализирован видовой состав стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями (маститами, пиодермиями, раневыми инфекциями) в монокультуре и в ассоциации, а также изучены их морфологические, тинкториальные. культуральные и биохимические свойства, определена чувствительность к антибиотикам. Показано, что чаще всего из патологического материала в монокультуре выделялись S. aitreus и 51. hyieus (28,4% и 27,1% случаев соответственно), реже - S. epidermidis (9.8%) и S. saprophyticus (2,2%) (табл. 1 ).

Таблица I - Видовой состав стафилококков - возбудителей острых гнойных инфекций

животных

Виды стафилококков Выделено в монокультуре Выделено в ассоциации

Абс. % Абс. %

■S. aureus 78 28,4 21 7,6

S. epidermidis 27 9,8 9 3,3

S. hyicus 67 27,1 18 6,5

S. saprophyticus 6 2,2 36 13,1

S. ientus - - 12 4.4

Всего: 178 65 96 35

Итого: 274

В 17,4% случаев возбудитель (S. aureus, S. hyicus или S. epidermidis) выделялся в ассоциации с другими видами стафилококков. Чаще всего (6,2%) ассоциации были представлены S. aureus и S. saprophyticus.

По морфологическим свойствам все выделенные стафилококки были типичными грамположительными аспорогенными неподвижными кокками с характерным для каждого вида расположением клеток в мазках. При изучении культуральных свойств установлено, что бактерии S. aureus. S. hyicus и S. saprophyticus образовывали более крупные колонии, в отличие от 5 epidermidis и S. lerttus. которые характеризовались малыми размерами колоний. Визуально определяемый каротиноидный пигмент образовывали более 90% штаммов S. aureus, большинство (30 из 36) штаммов S. sapro-

рИуйсш, выделенных в ассоциации с другими бактериями, и 2 из 6 штаммов яарго-ркуйст, выделенных в монокультуре.

Показано, что выделенные штаммы стафилококков обладали характерными видовыми биохимическими свойствами (табл. 2).

Таблица 2 - Культуральные и биохимические свойства стафилококков, выделенных _ от животных с острыми гнойными инфекциями______

Характеристики Вид

S. aureus S. epidermidis S. hyicus S. saprophytics S. lerttus

Образование кароти-ноидного пигмента + - - - d

Рост в анаэробных условиях + + + " (+) (±)

Рост в аэробных условиях + + + + (+)

Плазмокоагулаза + - d - -

Оксид аза - - - - +

Уреаза d + d + -

Восстановление нитратов + + + - +

Устойчивость к новобиоцину - - - + +

Устойчивость к полимиксину + + + - -

Продукция кислот в аэробных условиях из Трегалозы + - + + +

Маннитола + - - d +

Маннозы + + - (+)

Ксилозы - - - (±)

Арабинозы - - - - d

Мальтозы + + - + d

Лактозы + d + d d

Сахарозы + + + + +

Рафинозы - - - - +

Примечание: + - 90% и более штаммов положительны; - - 90% и более штаммов отрица-

тельны; d - 11-89% штаммов положительны, скобки указывают на замедленную реакцию.

Гемолитической активностью обладали 94,9% штаммов S. aureus и 19,4% штаммов S. epidermidis. Штаммы S. lerttus, выделенные в ассоциации с другими стафилококками - возбудителями острых гнойных инфекций у животных, отличались наличием оксидазной активности и способностью к утилизации рафинозы.

Показана чувствительность выделенных штаммов стафилококков к антибиотикам из перечня рекомендуемых к использованию в медицинской и ветеринарной практике (Методические указания по..., 2004). Отмечено, что штаммы S. sapro-

phyticus, выделенные в ассоциации, и большинство штаммов S. aureus, обладали устойчивостью к бензилпенициллину и тетрациклину.

В дальнейших экспериментальных исследованиях использовали штаммы стафилококков: S. aureus 18, S. hyicus 12, S. epidermidis 6 и S. saprophyticus 5, обладающих типичными свойствами и ферментативной активностью.

Особенности фагоцитоза in vitro стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, и индукции основных провоспалительных

цитокинов

В условиях in vitro была изучена активность процесса фагоцитоза перитонеаль-ными макрофагами белых мышей выделенных штаммов стафилококков — возбудителей острых гнойных инфекций животных. Сравнительный анализ полученных результатов показал, что наиболее активными были макрофаги через 6,12, 24 часа процесса фагоцитоза бактериальных клеток S. saprophyticus 5. В процессе фагоцитоза S. epidermidis 6 и S. aureus 18 наибольшая фагоцитарная активность ПМФ отмечена к 12 часам инкубации. При фагоцитозе всех изучаемых стафилококков через 48 часов происходило достоверное снижение числа активных макрофагов (табл. 3).

Таблица 3 - Активность перитонеальных макрофагов при фагоцитозе стафилококков

Штаммы стафилококков Число активных ПМФ (M±m) в %

1 час 3 часа 6 часов 12 часов 24 часа 48 часов

5. saprophyticus 5 42,3±0,8 54,2±0,5 66,2±0,9 74,3±1,2 72,8±0,7 60,4±0,9

S. hyicus 12 33,7±0,9 57,5±0,5 60,0±0,8 66,4±1,1 63,7±0,6 52,3±0,5

S-. epidermidis 6 32,6±0,6 46,5±0,5 52,4±0,6 56,7±0,75 Sl,0±0,9 42,4±0,5

S. aureus 18 28,3±0,4 40,7±0,6 50,6±0,9 54,0±0,8 48,1±0,6 40,5±0,б

На основе подученных фагоцитарных индексов были рассчитаны индексы завершенности фагоцитоза бактериальных клеток макрофагами мышей. Завершенный фагоцитоз отмечен только в отношении S. saprophyticus 5 (ИЗФ>1), фагоцитоз других стафилококков был частичным или незавершенным.

При определении активности кислороднезависимых механизмов киллинга S. aureus 18, показано увеличение через 1-3 часа фагоцитоза в макрофагах активности кислой фосфатазы и содержания катионных белков в 1,5 раза; к 6 часам - двукратное увеличение активности щелочной фосфатазы (рис. 1).

При изучении кислородзависимых механизмов киллинга S. aureus 18 установлено достоверное увеличение активности миелопероксидазы уже через 1 час

инкубирования макрофагов с бактериями. Наибольшая активность фермента отмечена к 6 часам фагоцитоза.

Образование активных форм кислорода (АФК) регистрировали в НСТ-тесте при моделировании фагоцитоза перитонеальными макрофагами микробных клеток S. aureus 18 и 5. saprophytics 5.

Время фагоцитоза, ч

I—ш— Кислая фосфатаза —а—Щглочная фосфатаза —эк— Катиоииыс белки |

Рис. 1. Активность ферментов кислороднезависимого киллинга: кислой и щелочной фосфатаз и содержание кагионных белков в процессе фагоцитоза перитонеальными макрофагами мышей микробных клеток S. aureus 18

Установлено, что содержание АФК в ПМФ было в 1,4 раза выше при индуцированном бактериями S. aureus 18 варианте НСТ-теста, чем при спонтанном. Незначительное увеличение содержания АФК отмечено при индуцированном бактериями S. saprophytics 5 варианте НСТ-теста.

Показано также достоверное увеличение содержания оксида азота в среде культивирования мышиных спленоцитов, фагоцитирующих бактерии S. aureus 18, и недостоверное — при фагоцитозе S. saprophytics 5, по сравнению с контрольными значениями (спленоциты без бактерий).

При оценке динамики содержания провоспалительных цитокинов в супернатан-те среды культивирования перитонеальных макрофагов мышей с бактериями S. aureus 18 было отмечено резкое увеличение в 5-6 раз концентраций ИЛ-1 и ФНО-а соответственно через 6 часов. При фагоцитозе бактерий S. hyicus 12 и S. epidermidis 6 происходило достоверное увеличение в динамике ИЛ-6; а при фагоцитозе S. saprophytics 5 и S. epidermidis 6 - ИЛ-1 в 2-3 раза соответственно.

Оценка цитокииового статуса организма экспериментальных животных при разпых способах заражения стафилококками и метаболического статуса при стафилококковой инфекции

На следующем этапе работы нами было проведено изучение цитокииового статуса белых мышей при подкожном, внутримышечном и внутрибрюшинном введении стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями. Показано, что подкожное введете бактерий S. aureus 18, S. hyicus 12 и S. epidermidis 6 сопровождалось повышением в 3 раза через 6 часов содержания в сыворотке крови ИЛ-1а и ФНО-а. Через 24 часа изменения цитокииового баланса были неоднотипными: отмечено превышение в 5 раз содержания ИЛ-1а и ФНО-а по сравнению с контролем при заражении aureus 18 и снижение концентрации этих цитокшюв по сравнению с показателями через 6 часов после заражения S. hyicus 12 и 5. epidermidis 6. При введении S. saprophytics 5 концентрации ИЛ-6 и ФНО-а увеличивались незначительно через 1 и 6 ч после заражения и снижались до исходного уровня к 24 часам; содержание ИЛ-1а было достоверно ниже по сравнению с данными индукции другими стафилококками, при этом все же превышая контрольные значения (рис. 2). Выявлена однотипная динамика увеличения в сыворотке крови содержания провоспалительных цитокинов к 6 часам после внутримышечного введения исследуемых стафилококков, наиболее достоверные отличия установлены через 24 часа после введения S. aureus 18. Внутрибрюшинное введение белым мышам бактерий этого штамма сопровождалось одновременным увеличением содержания ИЛ-la и ФНО-а, превышающим контрольные значения в 6 и 12 раз соответственно к 6 часам; в 10 и 18 раз - к 24 часам. Такая гиперпродукция основных провоспалительных цитокинов приводила к развитию у этих животных к 24 ч клинической картины эндотоксического шока. При введении S. hyicus 12 содержание этих цитокинов было достоверно выше контрольных значений через 1, 6, и 24 ч. Введение S. epidermidis 6 и S. saprophytics 5 сопровождалось незначительным увеличением содержания цитокинов.

Исследование биохимических показателей сыворотки крови мышей (табл. 4), зараженных S. aures 18 или S. saprophytics 5, показало, что концентрация общего белка повышалась в обоих случаях, причем за счет глобулиновой фракции. Можно предположить, что повышение концентрации глобулинов произошло не столько за счет у-глобулинов, сколько благодаря образованию белков острой фазы.

íOtnjont, 1 í 24

Часы

(aWVIaoOHO-aeWl-sj

В Г

Рис. 2. Содержание цитокинов в сыворотке крови мышей при подкожном введении S. aureus 18 (A), S. hyicus 12 (Б), S. epidermidis 6 (В) и S. saprophytics 5 (Г)

Таблица 4 - Биохимические показатели сыворотки крови мышей при подкожном _____введении 5. aureus 18 и S. saprophyticus 5__

Показатель Контроль Г1рн введении S. saprophyticus 5 При введении S. aureus 18

АЛТ, мкмоль/минл 104.4±7.3 57,8±4.2 76.8±5,3

ACT, мкмоль/мин л 240, Ш1 206,0±П 2J9,4±13 I

КК. мкмоль/мин-л 1284,3±96 3517,8±107 3959,4±207

ЛДГ, мкмоль/мин-л 1910,8±80 2449,4±145 3401,6±195

ЩФ, мкмоль/мин л 410.5Ü5 372,8±13 428.4±21 |

КФ, мкмоль/мин л 21.2±1,1 24,6±1.3 40,5±2,6 I

Общий белок, г/л 52,8±2,3 60,5±3,8 57,5±3,1

Альбумин, г/л 39,2±1.4 40,5±2,8 39,8±3,2

Глобулин, г/л 13,6±0,5 20,0±0,7 17,7±0,9

Мочевина, ммоль/л 6,2±0,1 7,1±0,15 5.9±0.09

Глюкоза, ммоль/л 9.4±0.2 9,7±0,24 8,1±0,17

Мочевая кислота, мкмоль/л 178.5±5_4 143,4±4,2 215,4± 1,2 i

Коэффициент де Ритиса 2,3 3,6 2,9 - "1

Сравнение активности аланинаминотрансферазы (АЛТ). аслартатаминотрансфе-разы (ACT), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и креатинкиназы (КК). а также коэффициента де Ритиса в сыворотке крови мышей, зараженных S. saprophyticus 5 и S. aureus 18.

контроль 1 6

Часы

¡ВИЛ-а оФНО-а ВИЛ 6

|вИП-1о ОФНОчз & ИП-61

указывает на то, что соотношение центральной и периферической зон метаболизма в энергетическом обмене смещается в сторону катаболических процессов. У мышей, зараженных S. saprophyticus 5, это смещение более выраженное, что свидетельствует о большей эффективности защитных реакций организма в данном случае. Соотношение в сыворотке крови подопытных групп мышей белка и мочевины (см. табл. 4), а также концентрация глюкозы и мочевой кислоты отражали менее скомпенсированный характер патологических изменений в случае заражения S. aureus 18.

Особенности фагоцитоза in vitro энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, и индукции основных провоспалительиых

цитокинов

При изучении индукции цитокинов и характера фагоцитоза перитонеальными макрофагами мышей энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, выявлены следующие различия: наиболее активным оказался фагоцитоз бактерий Е coli 34 к 24 часам процесса по сравнению с фагоцитозом других энтеробактерий. Интенсивность фагоцитоза К agglomerans 6, Serratia sp. 3, Citrobacter sp. 1A имела сходную динамику во времени: увеличение числа активных ПМФ в 2,5 - 3 раза к 24 часам и снижение к 48 часам на фоне активной индукции ИЛ-1а и ФНО-а уже к 6 часам процесса (табл. 5). Завершенный фагоцитоз отмечен только в отношении Е. coli (ИЗФ>1) и сопровождался достоверным увеличением содержания ИЛ-1а и ФНО-а к 24 часам, фагоцитоз других культур был незавершенным.

Таблица 5 - Активность перихонеальных макрофагов при фагоцитозе энтеробактерий

Штаммы энтеробактерий Число активных ПМФ (M ± m) в %

1 час 3 часа 6 часов 12 часов 24 часа 48 часов

Serratia sp.Z 22,0 ±0,4 28,2 ±0,5 38,4 ±0,4 42,7 ±0,5 51,1 ±0,5 48,3 ±0,4

Citrobacter sp. 1A 25,5 ±0,5 32,4 ±0,4 38,2 ±0,5 46,1 ±0,5 48,6 ±0,6 42,4 ±0,5

E. agglomerans 6 18,1 ±0,3 28,2 ±0,5 363 ±03 39,5 ± ОД 42,0 ±0,2 34,2 ±0,5

E. coli 34 24,4 ±0,5 42,3 ± 0,8 58,5 ±0,9 643 ±1,2 68,5 ±0,6 48,7 ±0,6

Оценка цитокинового статуса организма экспериментальных животных при разных способах заражения энтеробактериями

На следующем этапе оценивали цитокиновый статус экспериментальных животных при внутрибрюшинном и подкожном введении энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями. При внутрибрюшинном введении

мышам бактерий Е coli 34 отмечено увеличение в 6 - 8 раз содержания в сыворотке крови ИЛ-1а через 6-12 часов (табл. 6). В эти же часы зарегистрирована гиперпродукция ФНО-а, содержание которого в 18 раз превышало исходный уровень.

Таблица 6 - Содержание цитокинов в сыворотке крови мышей после внутрибрюшшшого _ ._ введения энтеробактерий_

Штаммы бактерий Цитокины Содержание цитокинов в пг/мл (Mim)

к 1 3 6 12 24

Е. coli 34 ИЛ-la 54±2 62±6 140±12 360±26 380±24 420±28

ФНО-а 10±1 22±3 34±3 160±10 18Ш2 12ОЫ0

ИЛ-6 12±1 18±2 46±4 80±8 llOilO 90±6

Citrobacter sp. 1А ИЛ-la 54±4 70±6 160±11 280±16 320±20 300±24

ФНО-а 10±1 26±3 48±5 56±4 42±4 60± 5

ИЛ-6 12±2 20±2 52±4 80±7 78±6 58±5

E. agglomerans 6 ИЛ-la 54±2 58±4 98±6 220±12 290±18 180±14

ФНО-а 10±1 25±3 28±3 62±4 70±6 48±3

ИЛ-6 12±1 24±2 36±3 76±6 60±4 58±4

Serratia sp. 3 ШЫа 52±2 64±6 98±8 128±10 260±14 190±18

ФНО-а ia±i 18±2 28±2 44±3 80±2 58±4

ИЛ-6 12±1 18±3 32±3 76±6 92±8 68±5

Введение Serratia sp. 3 и Citrobacter sp. 1А сопровождалось однотипным увеличением концентраций ИЛ-1а, ФНО-а и ИЛ-6, содержание которых в сыворотке крови в 3-5 раз превышало контрольные значения через 12 и 24 часа. При заражении мышей бактериями Е. agglomerans 6 отмечено динамичное возрастание к 24 часам содержания ИЛ-la, ИЛ-6 и ИФ-а; концентрация ФНО-а увеличивалась к 6 часам и снижалась к 24, оставаясь при этом выше исходных значений. Отмечено также появление ИЛ-8 в небольших концентрациях через 12 и 24 ч после заражения.

При подкожном введении К coli 34, Serratia sp. 3, Citrobacter sp. 1A и К agglomerans 6 отмечена однотипная динамика увеличения в сыворотке крови мышей содержания ИЛ-la и ФНО-а к 12 часам; содержание ИЛ-6 и ИФ-а достоверно превышало контроль через 12 и 24 часа после заражения животных.

Оценка действия цитокинов и цитокинсодержащего материала ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс методом спекл-микроскопии

Было проведено сравнение влияния ИЛ-la, ФНО-а и цитокинсодержащего материала (супернатант среды культивирования ПМФ через 6 часов процесса фагоцитоза бактерий S. aureus 18) на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс методом спекл-микроскопии. Установлено, что в целом действие ИЛ-la и ФНО-а на микро-

циркуляцию крови в брыжейке кишечника экспериментальных животных было однотипным: происходило немедленное усиление скорости кровотока в сосудах в 1,5 и 1,3 раза соответственно (рис. 3).

° контроль * 1 минута —2 минута -3 минута 4 минута 5 минута

Рис. 3. Влияние ИЛ-1а на микроциркуляцию крови в сосудах брыжейки белых крыс

При нанесении цитокинсодержащего материала регистрировалось увеличение скорости кровотока в 2,3 раза, такое превышение влияния чистых препаратов ИЛ-1 а и ФНО-а может быть объяснено кумулятивным эффектом действия всех находящихся в супернатанте провоспалительных цитокинов (рис. 4).

Рис. 4. Влияние цитокинсодержащего материала на микроциркуляцию крови в сосудах брыжейки белых крыс

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить особенности взаимодействия возбудителей острых гнойных инфекций - стафилококков и энтеро-бактерий — in vitro и in vivo с факторами естественной резистентности организма экспериментальных животных. Полученные данные могут быть использованы для дальнейших теоретических разработок в области изучения взаимодействия макро- и микроорганизмов. Показана возможность применения метода спекл-микроскопии для оценки микроциркуляции крови в исследовательской и диагностической медико-биологической практике.

ВЫВОДЫ

1. От животных с острыми гнойными инфекциями стафилокковой этиологии наиболее часто в монокультуре выделялись S. aureus и S. hyicus (28,4 и 27,1% случаев соответственно), реже - S. epidermidis (9,8%) и S. saprophytics (2,2%). Ассоциации преимущественно были представлены S. aureus и S. saprophytics.

2. Отмечено, что в условиях in vitro фагоцитоз бактерий S. saprophytics 5 и Е. coli 34 в перитонеальных макрофагах белых мышей завершался к 24 часам; для других стафилококков и энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, он был частичным или незавершенным.

3. Фагоцитоз бактерий S. aureus 18 сопровождался увеличением в перитонеальных макрофагах мышей активности кислой фосфатазы и содержания катионных белков в 1,5 раза; активности щелочной фосфатазы и миелопероксидазы в 2 раза. Содержание активных форм кислорода в перитонеальных макрофагах и продукция оксида азота спленоцитами мышей повышались в 1,4 раза При фагоцитозе бактерий S. saprophytics 5 изменение этих показателей было незначительным.

4. После подкожного или внутримышечного введения стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, отмечена однотипная динамика увеличения в сыворотке крови мышей содержания провоспалительных цигокинов IiJI-la, ФНО-а и ИЛ-6 к 24 часам; после внутрибрюшинного заражения - резкое увеличение в 10-18 раз концентрации ИЛ-1а и ФНО-а к 24 часам.

S. saprophytics 5 и менее скомпенсированном характере патологических изменений в случае заражения S. aureus 18.

6. Установлено, что при подкожном введении мышам энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными "инфекциями, происходило незначительное увеличение содержания провоспалительных цитокинов в сыворотке крови и повышение их концентрации в 3-5 раз - при внутрибрюшинном заражении.

7. Методом спекл-микроскопии показано действие цитокинов и цитокинсодер-жащего материала ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс: ИЛ-la и ФНО-a вызывают немедленное усиление скорости кровотока в сосудах в 1,5 и 1,3 раза соответственно; нанесение супернатанта среды культивирования перитонеальных макрофагов, фагоцитирующих S. aureus 18, усиливает скорость кровотока в 2,3 раза

Список работ, опубликованных по теме диссертации

(* - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ)

1. *Шибаева, М.А. Индукция провоспалительных цитокинов клиническими штаммами стафилококков при моделировании инфекционного процесса на лабораторных животных /М.А. Шибаева, Т.В. Водянова, Ю.Ю Елисеев, Е.И Тихомирова //Медицинская иммунология. - 2006. - Т. 8, № 2-3. — С. 127-128.

2. Шибаева, М.А. Показатели цитокинового статуса лабораторных животных при моделировании инфекционного процесса возбудителями внутрибольничных инфекций /М.А. Шибаева, Т.В. Водянова, Ю.Ю Елисеев, Е.И Тихомирова //Успехи современного естествознания. - 2006. - № 6. - С. 69-70.

3. *Шибаева, М.А. Оценка цитокинового статуса организма экспериментальных животных при моделировании инфекционного процесса возбудителями внутри-больничных инфекций / М.А. Шибаева, Т.В. Водянова, Ю.Ю Елисеев, Н.В. Емельянова // Медицинская иммунология. - 2007. - Т. 9, № 2/3. - С. 126-127.

4. Шибаева, М.А. Влияние токсина Escherichia coli на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс /М.А. Шибаева, Д.В. Подшибякин, С.С. Ульянов, О.В. Ульянова, Е.И. Тихомирова //Фундаментальные исследования. - 2007. - №12. - С. 266-267.

5. "Шибаева, М.А. Оценка действия цитокинов in vivo на микроциркуляцию крови методом спекл-микроскопии / М.А. Шибаева, Д.В. Подшибякин, С.С. Ульянов,

О.В. Ульянова, Е.И. Тихомирова // Российский иммунологический журнал. - 2008. -№2 (11).-С. 138.

6. Шибаева, М.А. Изменения цитокинового сгатуса организма экспериментальных животных при разных способах инфицирования клиническими штаммами бактерий /М.А. Шибаева, Е.И. Тихомирова, Н.В. Емельянова, М.Н. Чернова//Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: материалы IV междунар. конф., - СПб, 2008. - С. 171-172.

7. Шибаева, М.А. Использование метода спекл-микроскопии для оценхи действия токсинпродуцирующих штаммов кишечной палочки на микроциркуляцию крови /М.А. Шибаева, Д.В. Подшибякин, Е.И. Тихомирова, С.С. Ульянов, О.В. Ульянова //Известия Саратовского университета. - 2008. — Т.8, №2. - С. 73-76.

8. Shibaeva, М.А. The affect oí Escherichia coli toxins on blood microcirculation in ventral mesentery of white rats /М.А Shibaeva, S.S. Ulyanov, O.V. Ulianova, E.I. Tikhomi-rova //European Journal of Natural History. - 2009. - Ks 1. - P. 62-65.

9. *Шибаева, M.A. Использование метода спекл-микроскопии для оценки влияния биопрепаратов на микроциркуляцию крови /О.В. Ульянова, С.С. Ульянов, Д.В. Подшибякин, М.А. Шибаева, Е.И. Тихомирова //Естественные и технические науки. - 2009. - №6. - С. 40-46.

10. * Шибаева, М.А. Определение индукции цитокинов in vivo при разных способах введения стафилококков и энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями /М.А. Шибаева, В.Н. Ласкавый, Е.И. Тихомирова //Естественные и технические науки. — 2010. - № 1. - С. 37-42.

Выражаю искреннюю благодарность доктору физико-математических наук, профессору Ульянову Сергею Сергеевичу и кандидату медицинских наук, доценту Ульяновой Онеге Владимировне за предоставленную возможность проведения совместных исследований по спекл-микроскопии в Научной бактериологической лаборатории НИЧ СГУ им Н.Г. Чернышевского.

Подписано в печать 21.01.2010 Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100. Заказ 033/2010

Типография ОООп «Орион» 410031, г, Саратов, ул. Московская, 62 тел.: (8452) 23-60-18

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шибаева, Мария Александровна

Список условных сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Понятие инфекция.

1.2. Современные представления о начальных этапах воспаления.

1.2.1. Роль процесса фагоцитоза в развитии воспалительной реакции.

1.2.2. Фагоциты макроорганизма и их рецепторный аппарат.

1.2.3. Этапы процесса фагоцитоза бактерий.

1.3. Цитокины и их основные свойства.

1.3.1. Основные провоспалительные цитокины.

1.3.2. Участие регуляторных цитокинов в воспалительной реакции.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследований.

2.2.1. Микробиологические методы исследований.

2.2.2. Выделение перитонеальных макрофагов и спленоцитов мышей.

2.2.3. Моделирование процесса фагоцитоза in vitro и определение индекса завершенности.

2.2.4. Оценка механизмов киллинга бактерий.

2.2.5. Заражение экспериментальных животных.

2.2.6. Биохимические методы исследования сыворотки крови.

2.2.7. Методы определения цитокинов.

2.2.8. Метод спекл-микроскопии.

2.2.9. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Изучение биологических свойств стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями.

3.1. Характеристика бактерий рода Staphylococcus.

3.2. Изучение биологических особенностей стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями в монокультуре и в ассоциации.

3.3. Оценка чувствительности выделенных стафилококков к антибиотикам.

Глава 4. Особенности фагоцитоза in vitro стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, и индукции основных провоспалительных цитокинов.

4.1. Изучение особенностей процесса фагоцитоза стафилококков in vitro в перитонеальных макрофагах мышей.

4.2. Оценка цитокиновой активности перитонеальных макрофагов in vitro при фагоцитозе стафилококков.

Глава 5. Оценка цитокинового статуса организма экспериментальных животных при разных способах заражения стафилококками и метаболического статуса при стафилококковой инфекции.

5.1. Оценка цитокинового статуса организма экспериментальных животных при разных способах заражения стафилококками, выделенными от животных с острыми гнойными инфекциями.

5.2. Оценка метаболического статуса организма экспериментальных животных при моделировании стафилококковой инфекции.

Глава 6. Особенности фагоцитоза in vitro энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, и индукции основных провоспалительных цитокинов.

6.1. Характеристика бактерий семейства Enterobacteriaceae.

6.2. Изучение особенностей процесса фагоцитоза энтеробактерий in vitro в перитонеальных макрофагах мышей.

6.3. Оценка цитокиновой активности перитонеальных макрофагов in vitro при фагоцитозе энтеробактерий.

Глава 7. Оценка цитокинового статуса организма экспериментальных животных при разных способах заражения энтеробактериями.

Глава 8. Оценка действия цитокинов и цитокинсодержащего материала ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс методом спекл-микроскопии.

8.1. Использование метода спекл-микроскопии в медико-биологических и экологических исследованиях.

8.2. Действие провоспалительных цитокинов и цитокинсодержащего материала на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Взаимодействие возбудителей острых гнойных инфекций in vitro и in vivo с факторами естественной резистентности организма животных"

Актуальность темы. Изучение биологических особенностей возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных остается важнейшим аспектом современной прикладной микробиологии (Пюхлер, Хаккер, 2005; Vogt, Mahan, 1998). Принципиально важными представляются сведения о некоторых видах стафилококков и энтеробактерий, потенциально опасных или условных патогенов, вызывающих острые гнойные процессы в организме человека и животных, что определяет непреходящий интерес к этим микроорганизмам со стороны широкого круга микробиологов (Ляшенко, 1995; Бондаренко, 1997; Дерябин, 2000; Roth, James, 1998). Актуальность этой проблемы обусловлена также формированием устойчивости этих бактерий к широкому спектру антибиотиков и совершенствованием способности к существованию и развитию во внутренней среде макроорганизма (Обгольц, 1992; Бухарин, Дерябин, 1997; Тихомирова, 2005; McManus, 1997).

Известно, что в иммунном ответе на ряд инфекционных агентов огромную роль играют начальные этапы инфекционного процесса, связанные с фагоцитарной активностью и формированием острой фазы воспалительной реакции, опосредованной синтезом провоспалительных цитокинов (Маянский, Пикуза, 1993; Сепиашвили, 2003; Фрейдлин, 2006; Agace, 1993). Традиционно неблагоприятное течение гнойно-воспалительного заболевания связывается со снижением уровня факторов естественной резистентности, нередко зависящих от способности возбудителя к их инактивации (Бухарин, Дерябин, 1996; Ефименко, 1999).

Вышеизложенное определило цель и задачи данного исследования.

Задачи исследования:

2. Изучить в условиях in vitro особенности фагоцитоза выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями стафилококков: Staphylococcus aureus 18, S. hyicus 12, S. epidermidis 6, S. saprophyticus 5, перитонеальными макрофагами белых мышей, активность механизмов кислородзависимого и кислороднезависимого киллинга и индукцию основных провоспалительных цитокинов; продукцию оксида азота спленоцитами белых мышей.

3. Провести подкожное, внутримышечное и внутрибрюшинное заражение белых мышей стафилококками, выделенными от животных с острыми гнойными инфекциями: S. aureus 18, S. hyicus 12, S. epidermidis 6, S. saprophyticus 5, и определить содержание основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови; оценить активность некоторых ферментов белкового, углеводного и липидного обменов при моделировании стафилококковой инфекции.

4. Изучить в условиях in vitro особенности фагоцитоза энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями: Escherichia coli 34, Serratia sp. 3, Citrobacter sp. 1A, Enterobacter agglomerans 6, перитонеальными макрофагами белых мышей и индукцию основных провоспалительных цитокинов.

5. Провести подкожное и внутрибрюшинное заражение белых мышей энтеробактериями, выделенными от животных с острыми гнойными инфекциями: Е. coli 34, Serratia sp. 3, Citrobacter sp. 1A, E. agglomerans 6, и определить содержание основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови.

Научная новизна. Установлено, что среди стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, в монокультуре чаще всего встречались S. aureus и S. hyicus, реже — S. epidermidis и S. saprophytics; ассоциации были представлены преимущественно S. aureus и S. saprophytics.

Выявлено, что процесс фагоцитоза S. saprophytics 5 и Е. coli 34 в перитонеальных макрофагах белых мышей in vitro завершался к 24 часам; фагоцитоз других исследуемых бактерий носил частичный или незавершенный характер. Показано достоверное увеличение активности ферментов кислородзависимого и кислороднезависимого киллинга, активных форм кислорода в перитонеальных макрофагах и синтеза оксида азота спленоцитами мышей в процессе фагоцитоза S. aureus 18 в системе in vitro.

При моделировании стафилококковой инфекции выявлены изменения метаболической активности организма экспериментальных животных, свидетельствующие о большей эффективности защитных реакций в случае введения S. saprophyticus 5 и менее скомпенсированном характере патологических изменений в случае заражения S. aureus 18.

Практическая значимость работы. Полученные результаты имеют значение для расширения представлений о начальных этапах воспалительной реакции, вызванной возбудителями гнойных инфекций животных при разных путях их внедрения в макроорганизм. Содержащиеся в диссертационной работе данные могут быть использованы для дальнейших разработок в области изучения взаимодействия макро- и микроорганизмов. Показана возможность применения метода спекл-микроскопии для оценки действия различных цитокинов ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови в исследовательской и диагностической медико-биологической практике.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Из выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями стафилококков и энтеробактерий наиболее активно фагоцитируются в условиях in vitro перитонеальными макрофагами белых мышей S. saprophyticus 5 и Е. coli 34. В процессе фагоцитоза S. aureus 18 происходит достоверное увеличение активности ферментов кислородзависимого и кислороднезависимого киллинга, образования активных форм кислорода в перитонеальных макрофагах и синтеза оксида азота спленоцитами мышей.

2. При моделировании инфекции изменения цитокинового статуса организма экспериментальных животных зависят от способа заражения: внутрибрюшинное введение бактерий вызывает резкое увеличение содержания основных провоспалительных цитокинов в сыворотке крови мышей через 6-24 часа, особенно при заражении S. aureus 18 и Е. coli 34. При подкожном и внутримышечном введении изменения концентрации цитокинов достоверные, но менее выраженные.

3. Метод спекл-микроскопии позволяет оценить действие цитокинов и цитокинсодержащего материала ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови в сосудах брыжейки белых крыс.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на: Восьмой Общероссийской научной конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2007); Международном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем в норме и патологии» (Санкт-Петербург, 2007); Заочной конференции Российской Академии Естествознания «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (Москва 2007); Международной школе для студентов и молодых учёных по оптике, лазерной физике и биофизике Saratov Fall Meeting (Саратов, СГУ им. Чернышевского, 2007); Четвертой международной конференции «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» (Санкт-Петербург, 2008); X-XII Всероссийских Форумах с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006-2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 5 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Шибаева, Мария Александровна

выводы

1. От животных с острыми гнойными инфекциями стафилокковой этиологии наиболее часто в монокультуре выделялись S. aureus и S. hyicus (28,4 и 27,1% случаев соответственно), реже - S. epidermidis (9,8%) и S. saprophyticus (2,2%). Ассоциации преимущественно были представлены S. aureus и S. saprophyticus.

2. Отмечено, что в условиях in vitro фагоцитоз бактерий S. saprophyticus 5 и Е. coli 34 в перитонеальных макрофагах белых мышей завершался к 24 часам; для других стафилококков и энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, он был частичным или незавершенным.

3. Фагоцитоз бактерий S. aureus 18 сопровождался увеличением в перитонеальных макрофагах мышей активности кислой фосфатазы и содержания катионных белков в 1,5 раза; активности щелочной фосфатазы и миелопероксидазы в 2 раза. Содержание активных форм кислорода в перитонеальных макрофагах и продукция оксида азота спленоцитами мышей повышались в 1,4 раза. При фагоцитозе бактерий S. saprophyticus 5 изменение этих показателей было незначительным.

4. После подкожного или внутримышечного введения стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, отмечена однотипная динамика увеличения в сыворотке крови мышей содержания провоспалительных цитокинов ИЛ-1а, ФНО-а и ИЛ-6 к 24 часам; после внутрибрюшинного заражения - резкое увеличение в 10-18 раз концентрации ИЛ-1а и ФНО-а к 24 часам.

5. Выявлены изменения метаболической активности организма экспериментальных животных при моделировании стафилококковой инфекции, свидетельствующие о большей эффективности защитных реакций в случае введения S. saprophyticus 5 и менее скомпенсированном характере патологических изменений в случае заражения S. aureus 18.

6. Установлено, что при подкожном введении мышам энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, происходило незначительное увеличение содержания провоспалительных цитокинов в сыворотке крови и повышение их концентрации в 3-5 раз — при внутрибрюшинном заражении.

7. Методом спекл-микроскопии показано действие цитокинов и цитокинсодержащего материала ex tempore in vivo на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс: ИЛ-1а и ФНО-а вызывают немедленное усиление скорости кровотока в сосудах в 1,5 и 1,3 раза соответственно; нанесение супернатанта среды культивирования перитонеальных макрофагов, фагоцитирующих S. aureus 18, усиливает скорость кровотока в 2,3 раза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вопросы взаимодействия инфекционных агентов с факторами естественной резистентности макроорганизма являются актуальными в области теоретической и прикладной микробиологии на протяжении многих лет (Чеснокова, Михайлов, 2004). В тоже время решение этих вопросов лежит и в области интересов классической иммунологии (Фрейдлин, 2006). Инфекция -одно из наиболее значимых для медицинской и ветеринарной практики и наиболее изучаемое явление, наносящее человеческому социуму во все времена огромный ущерб (Литвицкий, 2002; Vogt, Mahan, 1998).

Наряду с изучением действия классических возбудителей, обладающих целым арсеналом факторов патогенности, важными представляются сведения о некоторых видах стафилококков и энтеробактерий, относимых к так называемым «условно-патогенным микроорганизмам», вызывающих острые гнойные процессы в организме человека и животных, что определяет непреходящий интерес к этим микроорганизмам со стороны широкого круга микробиологов (Ляшенко, 1995; Бондаренко, 1997; Дерябин, 2000; Roth, James, 1998).

Закончится ли столкновение подобных инфекционных агентов с организмом развитием болезни, зависит от степени патогенности микроорганизма, то есть от наличия у него различных адаптаций к существованию и развитию во внутренней среде, а также от исходного состояния макроорганизма с его реактивностью и резистентностью (Петровская, 1967; Обгольц, 1992; Бухарин, Дерябин, 1997; Тихомирова, 2005; McManus, 1997). Известно, что на начальных этапах взаимодействия с возбудителем особо важную роль играют неспецифические защитные реакции в месте его внедрения, связанные с формированием острой фазы воспалительной реакции и фагоцитарной активности, опосредованной синтезом провоспалительных цитокинов (Маянский, Пикуза, 1993; Сепиашвили, 2003;

Фрейдлин, 2006; Agace, 1993). Однако, сравнительные данные по индукции синтеза цитокинов при разных путях проникновения стафилококков и энтеробактерий в макроорганизм, а также воздействие этих цитокинов ех tempore in vivo на микроциркуляцию крови практически не описаны.

Актуальность изложенных выше проблем определила цель нашего диссертационного исследования - изучить активность механизмов фагоцитоза и индукцию цитокинов in vitro и in vivo при разных способах введения стафилококков и энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями.

На первом этапе нами были изучены основные характеристики стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями в монокультуре и в ассоциациях. Установлено, что наиболее часто в монокультуре выделялись S. aureus и S. hyicus (28,4% и 27,1% случаев соответственно), в меньшем количестве случаев - S. epidermidis (9,8%) и S. saprophyticus (2,2%). Ассоциации чаще всего были представлены S. aureus и S. saprophyticus, а также S. hyicus и S. saprophyticus.

При изучении культуральных свойств показано, что визуально определяемый каротиноидный пигмент образовывали более 90% штаммов S. aureus, большинство (30 из 36) штаммов S. saprophyticus, выделенных в ассоциации с другими бактериями, и 2 из 6 штаммов S. saprophyticus, выделенных в монокультуре. Установлено, что выделенные штаммы стафилококков обладали характерными видовыми биохимическими свойствами.

Показана чувствительность выделенных стафилококков к антибиотикам из перечня рекомендуемых к использованию в медицинской и ветеринарной практике (Методические указания., 2004). Отмечено, что штаммы S. saprophyticus, выделенные в ассоциации, и большинство штаммов S. aureus, обладали устойчивостью к бензилпенициллину и тетрациклину.

Далее была изучена активность процесса фагоцитоза in vitro макрофагами мышей бактериальных клеток стафилококков, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями. Сравнительный анализ полученных результатов показал, что наиболее активными были перитонеальные макрофаги через 6, 12, 24 часа процесса фагоцитоза S. saprophytics 5. Наибольшая фагоцитарная активность макрофагов в отношении S. epidermidis 6 и S. aureus 18 отмечена к 12 часам инкубации. При фагоцитозе всех изучаемых стафилококков через 48 часов наблюдения происходило достоверное снижение числа активных макрофагов, причем процесс завершался только в отношении S. saprophytics 5 (ИЗФ>1), фагоцитоз других стафилококков был частичным или незавершенным.

Изучение механизмов киллинга в перитонеальных макрофагах и спленоцитах мышей показало, что фагоцитоз S. aureus 18 сопровождается увеличением в фагоцитирующих клетках активности кислой фосфатазы и содержания катионных белков в 1,5 раза; активности щелочной фосфатазы и миелопероксидазы - в 2 раза; содержания активных форм кислорода - 1,4 раза. Продукция оксида азота спленоцитами мышей достоверно повышалась при фагоцитозе S. aureus 18 и незначительно - при фагоцитозе S. saprophytics 5.

При оценке индукции цитокинов в динамике фагоцитоза бактериальных клеток S. aureus 18 было отмечено резкое увеличение в 5-6 раз концентраций ИЛ- 1а и ФНО-а соответственно в среде культивирования перитонеальных макрофагов через 6 часов. При фагоцитозе бактерий S. hyicus 12 и S. epidermidis 6 происходило динамичное и достоверное увеличение содержания ИЛ-6; а в среде культивирования макрофагов с S. saprophytics 5 и S. epidermidis 6 в 2-3 раза соответственно повышалось содержание ИЛ-1а.

Известно, что результаты, полученные при моделировании реакций в системе in vitro, не всегда соответствуют таковым в системе in vivo, поскольку внутри организма большое значение имеет взаимное влияние клеток. В этой связи представляло интерес оценить цитокиновый статус экспериментальных животных при разных путях заражения изучаемыми нами стафилококкокками. Показано, что подкожное введение S. aureus 18, S. hyicus 12 и S. epidermidis 6 сопровождалось повышением содержания в 3-5 раз в сыворотке крови ИЛ—1а, ИФ-а и ФНО-а через 6 и 24 часа. При введении S. saprophyticus 5 концентрации ИЛ-6 и ФНО-а увеличивались незначительно через 1 и 6 ч и снижались до исходного уровня к 24 часам. Содержание ИЛ-1 а в сыворотке крови мышей, зараженных S. saprophyticus 5, было достоверно ниже концентрации в крови мышей других опытных групп, при этом все же превышая контрольные значения.

Выявлена однотипная динамика увеличения в 3-5 раз в сыворотке крови мышей содержания провоспалительных цитокинов через 6-24 часа после внутримышечного введения стафилокков. Отмечено одновременное увеличение содержания ИЛ-1а и ФНО-а, превышающее контрольные значения в 10 и 18 раз соответственно через 24 часа после внутрибрюшинного заражения мышей S. aureus 18. Такая гиперпродукция основных провоспалительных цитокинов приводила к развитию у этих животных к 24 ч клинической картины эндотоксического шока. Сопоставление этих данных с результатами, полученными при изучении индукции цитокинов в условиях in vitro, выявило их прямую корреляцию: однотипное резкое возрастание содержания этих провоспалительных цитокинов.

При внутрибрюшинном введении мышам S. hyicus 12 концентрации определяемых цитокинов в сыворотке крови были достоверно выше контрольных значений через 1, 6, и 24 ч. Введение S. epidermidis 6 и S. saprophyticus 5 сопровождалось незначительным увеличением содержания цитокинов.

На следующем этапе нами было проведено исследование биохимических показателей крови мышей через двое суток после подкожного заражения S. aureus 18 или S. saprophyticus 5. Было установлено, что концентрация общего белка в крови повышалась в обоих случаях, причем за счет глобулиновой фракции; концентрация альбумина практически не изменялась. Это позволило предположить, что повышение концентрации глобулинов произошло не столько за счет у-глобулинов, сколько благодаря образованию белков острой фазы, особенно в случае заражения S. aureus 18. Активность кислой и щелочной фосфатаз достоверно увеличивалась только при моделировании инфекции введением S. saprophyticus 5, что говорит об активации преимущественно процессов кислороднезависимого киллинга.

Сравнение активности AJIT, ACT, ЛДГ и КК, а также коэффициента де Ритиса в сыворотке крови опытных групп мышей, указывает на более выраженное смещение метаболизма в сторону катаболических процессов при заражении S. saprophyticus 5, что свидетельствует о большей эффективности защитных реакций организма в данном случае. Соотношение в сыворотке крови подопытных групп мышей белка и мочевины, а также концентрация глюкозы и мочевой кислоты отражали менее скомпенсированный характер патологических изменений в случае заражения S. aureus 18.

На следующем этапе нами было проведено изучение активности процесса фагоцитоза in vitro микробных клеток энтеробактерий, выделенных от животных с острыми гнойными инфекциями, а также индукции основных провоспалительных цитокинов. Выявлено, что наиболее активным и завершенным (ИЗФ>1) оказался фагоцитоз бактерий Е. coli 34 к 24 часам эксперимента, сопровождающийся достоверным увеличением содержания ИЛ-1а и ФНО-а к 24 процесса. Фагоцитоз других энтеробактерий был незавершенным.

Интенсивность фагоцитоза в перитонеальных макрофагах бактериальных клеток Е. agglomerans 6, Serratia sp. 3, Citrobacter sp. 1A имела сходную динамику во времени: увеличение в 2,5-3 раза к 24 часам и снижение к 48 часам на фоне активной индукции ИЛ-1а и ФНО-а уже к 6 часам процесса.

Далее были выявлены различия в показателях цитокинового статуса экспериментальных животных при внутрибрюшинном и подкожном введении энтеробактерий. При подкожном введении Е. coli 34, Serratia sp.3, Citrobacter sp. 1А и E. agglomerans 6 отмечена однотипная динамика увеличения в сыворотке крови мышей содержания ИЛ-1а и ФНО-а к 12 часам; содержание ИЛ-6 и ИФ-а достоверно превышало контроль через 12 и 24 часа после заражения животных.

При внутрибрюшинном введении мышам бактерий Е. coli 34 отмечено увеличение в 6-8 раз концентрации ИЛ-1 а в интервале 6-12 часов. В эти же часы зарегистрирована гиперпродукция ФНО-а, содержание которого в сыворотке крови в 18 раз превышало исходный уровень. Внутрибрюшинное введение бактерий Serratia sp. 3 и Citrobacter sp. 1А сопровождалось однотипным увеличением концентрации в сыворотке крови ИЛ-1а, ФНО-а и ИЛ-6, в 3-5 раз превышающим контрольные значения через 12 и 24 часа.

При заражении животных микробными клетками Е. agglomerans 6 отмечено динамичное возрастание к 24 часам содержания ИЛ-1а, ИЛ-6 и ИФ-а; концентрация ФНО-а увеличивалась к 6 часам и снижалась к 24, оставаясь при этом выше исходных значений. Отмечено также появление ИЛ-8 в небольших концентрациях через 12 и 24 часа после заражения.

Анализ полученных результатов показал, что внутрибрюшинное введение изучаемых бактерий вызывало наиболее выраженное увеличение в сыворотке крови экспериментальных животных основных провоспалительных цитокинов. В этой связи представляло интерес оценить местные эффекты их воздействия на гемодинамические параметры в системе абдоминальных капилляров. Для этого было проведено сравнение влияния чистых препаратов ИЛ-1а и ФНО-а в минимальных определяемых концентрациях и цитокинсодержащего материала (супернатант среды культивирования ПМФ через 6 часов процесса фагоцитоза бактерий S. aureus 18) на микроциркуляцию крови в брыжейке белых крыс методом спекл-микроскопии. Установлено, что действие ИЛ-1а и ФНО-а было однотипным: происходило немедленное усиление скорости кровотока в сосудах в 1,5 и 1,3 раза соответственно. При нанесении цитокинсодержащего материала зарегистрировано увеличение скорости кровотока в 2,3 раза, что может быть объяснено кумулятивным эффектом действия всех находящихся в супернатанте цитокинов.

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить особенности взаимодействия возбудителей острых гнойных инфекций животных — стафилококков и энтеробактерий - in vitro и in vivo с факторами естественной резистентности организма экспериментальных животных. Полученные данные могут быть использованы для дальнейших теоретических разработок в области изучения взаимодействия макро- и микроорганизмов; при разработке методических подходов к цитокиновой терапии гнойно-воспалительных заболеваний животных, вызванных стафилококками и энтеробактериями. Показана возможность применения метода спекл-микроскопии для оценки микроциркуляции крови в исследовательской и диагностической медико-биологической практике.

116

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шибаева, Мария Александровна, Саратов

1. Алимова, Е.К. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний / Е.К. Алимова, А.Т. Авацатурьян, Л.В. Жаров. М: Медицина, 1975. - 275 с.

2. Ариненко, Р.Ю. Интерфероновый статус — новый критерий оценки состояния больного и выбора тактики лечения / Р.Ю. Ариненко // Иммунология. 2001. - №3. - С. 43-45.

3. Арнхольд, Ю. Свойства, функции и секреция миелопероксидазы человека / Ю. Арнхольд // Биохимия. 2004. - Т. 69, №1. - С. 8 - 15.

4. Ашмарин, И.П. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов / И.П. Ашмарин, Н.Н. Васильев, В.А. Амбросов. Л.: Ленинград, ун-т, 1974. — 76 с.

5. Бабаянц, А. А. Антитоксическое действие лейкоцитарного интерферона в опытах in vitro / А.А. Бабаянц, Г.Г. Карганова // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1984. - №11. - С. 834 -836.

6. Бажора, Ю.И. Упрощенный метод НСТ-теста / Ю.И. Бажора, В.Н. Тимошевский, П.З. Протченко // Лабораторное дело. 1981. - № 4. -С. 198-200.

7. Белобородова, Н.В. Гомеостаз малых молекул микробного происхождения и его роль во взаимоотношениях микроорганизмов с хозяином / Н.В. Белобородова, Г.А. Осипов // Вестник РАМН. 1999. -№7.-С. 20-25.

8. Биохимические методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. А.А. Покровского. М.: Медицина, 1969. - 651 с

9. Блинов, В.А. Основы клинической биохимии человека и животных / В.А. Блинов, И.И. Калюжный. Саратов: Приволж. кн. изд-во, 1996. -248 с.

10. Бондаренко, В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно-патогенных бактериях / В.М. Бондаренко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 1997. №4. - С. 20 — 26.

11. Бондаренко, В.М. Проблема патогенности клебсиелл / В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская, Н.И. Нестерова. Ульяновск, 1996. - 87 с.

12. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов. М.: ООО «Мед. информ. агентство», 2002. -736 с.

13. Васильева, Г.И. Оценка вирулентности штаммов чумного микроба по индексу завершенности фагоцитоза / Г.И. Васильева, В.Л. Пустовалов, Е.П. Дорошенко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1987.-№6.-С. 117-118.

14. Ветеринарная микробиология и иммунология. / Под. ред. Н.А. Радчука. М.: Агропромиздат, 1991. - 383 с.

15. Влияние препарата интерферона а/3 и g-типов на функциональную активность макрофагов при экспериментальной стафилококковой инфекции / Н.Е. Вихоть [и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1989. - №4. - С. 57 - 60.

16. Вядро, М.М. Цитокины и их роль в патогенезе и терапии инфекций / М.М. Вядро // Антибиотики и химиотерапия. 1990. - Т. 35, №9. - С. 12 -14.

17. Галактионов, В.Г. Иммунология: Учеб. для студ. вузов / В.Г. Галактионов. М.: Издательский центр «Академия», 2004. - 528 с.

18. Галанжа, Е.И. Микролимфодинамика в норме и патологии. Оптические методы исследования: дисс. на соиск. уч. степени докт. мед. наук / Е.И. Галанжа. Саратов: изд. СГУ, 2004.

19. Гасанова, З.М. Профилактика стафилококковых инфекций / З.М. Гасанова. Махачкала: Даг. кн. изд-во, 1977. - 57 с.

20. Гордиенко, С.М. Сравнительная оценка результатов восстановления нитросинего тетразолия при микроскопическом и спектро-фотометрическом вариантах метода с различными солями тетразолия / С.М. Гордиенко // Лабораторное дело. 1983. - №2. - С. 21 - 24.

21. Давыдовский, И.В. Учение об инфекции / И.В. Давыдовский. М.: Медицина, 1956. - 260 с.

22. Дерябин, Д.Г. Стафилококки: экология и патогенность / Д.Г. Дерябин. Екатеринбург: УрО РАН, 2000. - 238 с.

23. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. Екатеринбург: УрО РАН, 2001. - 284 с.

24. Ефименко, Н.А. Инфекция в хирургии. Фармакотерапия и профилактика / Н.А. Ефименко. Смоленск, 1999. - 296 с.

25. Зайчик, А.Ш. Общая патофизиология / А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов. — СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2001. 624 с.

26. Иванов, Н.Р. Бактериологическая диагностика и профилактика стафилококковых заболеваний / Н.Р. Иванов, Л.М. Скитева. — Саратов: Изд-во СМГУ, 1971. 72 с.

27. Иммуноферментный анализ / под.ред. Т. Hiro, J. Lenhoff. Пер. с англ. -М.: Мир, 1990.-444 с.

28. Исследование системы крови в клинической практике / Под ред. Г.И. Козинца, В.А. Макарова. М.: Триада-Х, 1997. - 480 с.

29. Камышников, B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: В 2-х т. / B.C. Камышников. — Минск: Беларусь, 2000. Т. 1. - 495 с.

30. Касьшов, К.Т. Иммунологическая толерантность в патогенезе «злостного» носительства патогенных стафилококков / К.Т. Касымов // Лабораторное дело. 1981. - №5 - С. 300-304.

31. Кетлинский, С.А. Получение и свойства интерлейкина-1 из моноцитов крови человека / С.А. Кетлинский, В.Г. Конусова, А.С. Симбирцев // Бюллетень экспериментальной биологии. 1988. -№11. - С. 581 - 583.

32. Кетлинский, С.А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / С.А. Кетлинский // Иммунология. 2002. -Т. 23, № 2. - С.77 - 79

33. Кетлинский, С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета / С.А. Кетлинский, М.Н. Калинина // Иммунология. 1995. - №3. - С. 30 - 35.

34. Кетлинский, С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев, А.А. Воробьев. СПб.: Гиппократ, 1992. -255 с.

35. Киричук, В.Ф. Физиология и патофизиология белой крови / В.Ф. Киричук, Н.П. Чеснокова, Т.А. Невважай. Саратов: СГМУ, 1994. - С. 113-115.

36. Климов, А.Н. Липопротеиды, дислипопротеидемии и атеросклероз / А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева, М.: Медицина, 1984. - 164 с.

37. Климов, А.Н. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения / А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева. СПб: Питер Ком., 1999. - 512 с.

38. Князькин, И.В. Экспериментальное изучение роли цитокинов семейства ИЛ-1 в защите от патогенов / И.В. Князькин, В.Е. Бокованов // Медицинская иммунология. 2004. - Т. 6, № 3-5. - С. 233-234.

39. Ковальчук, JI.В. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция / Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская // Иммунология. 1995. - № 1. - С. 4 -7.

40. Ковальчук, Л.В. Комплекс естественных иммунопептидов в лечении раневого процесса / Л.В Ковальчук, М.В. Хореева, Т.П. Иванюшко // В кн.: I съезд иммунологов России: Тез. докл. Новосибирск, 1992. - 220 с.

41. Ковальчук, Л.В. Роль оксида азота в иммунопатогенезе стафилококковых инфекций / Л.В. Ковальчук, З.Ф. Хараева // Иммунология. 2003. - Т. 24, №3. - С. 186 - 188.

42. Ковальчук, Л.В. Учение о воспалении в свете новых данных: развитие идей И.И. Мечникова / Л.В. Ковальчук // Микробиология. 2008. - №5. — С. 10-15.

43. Козлов, В.А. Интерлейкин-1: роль в иммунитете / В.А. Козлов, Н.Ю. Громыхина // Иммунология. 1987. - №4. - С. 24 - 30.

44. Колычев, Н.М. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: КолосС., 2006. -432 с.

45. Комаров, Ф.И. Биохимические исследования в клинике / Ф.И. Комаров, Б.Ф. Коровкин, В.В. Меньшиков. Элиста: АПП Джангар., 1999.-250 с.

46. Кондратьева, И.А. Практикум по иммунологии: Учебное пособие / И.А. Кондратьева, И.В. Воробьёва, О.В. Буракова. М.: МГУ, 2001. - 224 с.

47. Коротяев, А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Спб.: СпецЛит, 2002. - 351 с.

48. Кубанова, А.А. Уровень сывороточного фактора некроза опухоли а при различных дерматозах / А.А. Кубанова // Иммунология. 1998. - № 2.-С. 47-49.

49. Лазорева, Д.М. Стимуляторы иммунитета / Д.М. Лазорева, Е.К. Алехин. М.: Медицина, 1985. - 255 с.

50. Логинов, А.С. Иммунная система и болезни органов пищеварения / А.С. Логинов, Т.М. Царегородцева, М.М. Зотина. М.: Медицина, 1986. -256 с.

51. Лысикова, М.В. Механизмы воспалительной реакции и воздействие на них с помощью протеолитических энзимов / М.В. Лысикова, М.П. Вальд, З.А. Масиновски // Цитокины и воспаление. 2004. - Т. 3, № 3. - С. 48 -53.

52. Ляшенко, И.Э. Факторы персистенции Е. coli.: автореф. дис. . канд. мед. наук / И.Э. Ляшенко. Оренбург, 1995. - 25 с.

53. Мазинг, Ю.А. Оценка надежности лизосомально-катионного теста для лабораторной диагностики / Ю.А. Мазинг, И.Я. Старосельская //Лабораторное дело. 1981. - № 10. - С. 582 - 584.

54. Мазуров, Д.В. Оценка внутриклеточного киллинга стафилококка фагоцитами периферической крови с помощью проточной цитометрии Д.В. Мазуров, С.В. Дамбаева, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - №2. -С. 57-59.

55. Мазуров, Д.В. Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии / Д.В. Мазуров, К.Ф. Хамидуллина, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. -№1. - С. 57-61.

56. Мастериак, Т.Б. Адьювантные свойства и влияние иммуномодуляторов на активность 5нуклеотидазы макрофагов / Т.Б. Мастериак // Иммунология. 1994. - №4. - С. 23 - 26.

57. Маянский, А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.И. Пикуза. Казань: Магариф, 1993.- 122 с.

58. Медицинская микробиология (вопросы, ответы, схемы) / Под ред. Акад. РАМН О.В. Бухарина. М.: Медицина, 2004. - 356 с.

59. Мельников, Н.И. Возбудители гнойных заболеваний и их ассоциации / Н.И. Мельников. М.: Медгиз, 1962. - 115 с.

60. Методические рекомендации по определению чувствительности к антибиотическим препаратам / МУК 4.2.1980-04 Минздрава России, 2004.

61. Мечников, И.И. Невосприимчивость в инфекционных болезнях / И.И. Мечников. М.: Мед. лит., 1953. - 698 с.

62. Нагоев, Б.С. Значение теста восстановления нитросинего тетразолия для изучения функциональной активности лейкоцитов / Б.С. Нагоев // Лабораторное дело. 1983. - №8. - С. 7 - 11.

63. Назаренко, Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун. М.: Медицина. - 2002. — 544 с.

64. Обгольц, А.А. Механизмы персистирования бактерий / А.А. Обгольц // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1992. - №4. -С. 70-72.

65. Определитель бактерий Берджи / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стенли. М.: Мир, 1997. - 368 с.

66. Паркер, Ч.В. Медиаторы: высвобождение и функции / Ч.В. Паркер // Иммунол. 1989. - Т. 3. - С. 185 - 206.

67. Петров, Р.В. Интерлейкинзависимые иммунодефицита человека / Р.В. Петров // Иммунология. 1987. - № 4. - С. 20 - 24.

68. Петровская, В.Г. Проблема патогенности бактерий / В.Г. Петровская. — М.: Мир, 1967.-215 с.

69. Покровский, В.И. Медицинская микробиология, иммунология, вирусология. Учебник для студентов фарм. ВУЗов / В.И. Покровский. — М.: Медицина, 2002. 768 с.

70. Потапнев, М.П. В-лимфоциты. Цитокинобразующая функция / М.П. Потапнев // Иммунология. 1994. - №4. - С.4 - 8.

71. Пюхлер, С. В кн. Современная микробиология: прокариоты. Прикладная микробиология / С. Пюхлер, Д. Хакер. М.: Мир, 2005. — С. 318-358.

72. Ройт, А. Иммунология: Пер. с англ. / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000.-592 с.

73. Роль тимуса в регуляции синтеза цитокинов клетками костного мозга при стрессе / И.В. Богдашин и др. // Иммунология. 1991. - №5. - С. 30 -32.

74. Рудик, Д.В. Методы изучения процесса фагоцитоза и функционально-метаболического состояния фагоцитирующих клеток: учеб.-метод. пособие для студ. вузов / Д.В. Рудик, Е.И. Тихомирова. Саратов: Изд-во Сар. ун-та.-2006. - 112 с.

75. Саидов, М.З. Спектрофотометрический способ определения активности миелопероксидазы в фагоцитирующих клетках / М.З. Саидов, Б.В. Пинегин // Лабораторное дело. 1991. - №3. - С. 56 - 60.

76. Саникидзе, Т.В. Роль свободных радикалов азота и кислорода в патогенезе ЛПС-индуцированной эндотоксемии / Т.В. Саникидзе, Н.Г. Тхилава, М.Б. Папави // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006. - Т. 141, №2. -С. 172- 176.

77. Сахно, Л.В. Роль оксида азота в процессе активации Т-лимфоцитов человека, идуцированных бактериальными суперантигенами /Л.В. Сахно, О.Ю. Леплина, М.Н. Норкин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000. - Т. 130, №10. - С. 402 - 406.

78. Сепиашвили, Р.И. Основы физиологии иммунной системы / Р.И. Сепиашвили. М.: Медицина, 2003. - 240 с.

79. Симбирцев, А.С. Биология семейства интерлейкина-1 человека / А.С. Симбирцев // Иммунология. 1998. - №3. - С. 9 - 17.

80. Симбирцев, А.С. Интерлейкин-8 и другие хемокины / А.С. Симбирцев // Иммунология. 1999. - №4. - С. 9 - 13.

81. Симбирцев, А.С. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма / А.С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. - 2002. —1. Т.1,№1.С. 9- 16.

82. Симбирцев, А.С. Цитокины: классификация и биологические функции / А.С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. — 2004. Т. 3, № 2— С. 1622.

83. Скрининговый тест клеточной миграции из микрокультур in vitro / А.П. Суслов и др. // Иммунология. 1989. - №2. - С. 73 - 77.

84. Терновская, JI.H. Стафилококковое носительство. Методические рекомендации МЗ РСФСР / JI.H. Терновская. Свердловск, 1983. - 16 с.

85. Тихомирова, Е.И. Эколого-иммунологические аспекты резистентности при инфекции и иммунизации (экспериментальные исследования на моделях лабораторных и диких грызунов): дис. док. биол. наук / Е.И. Тихомирова. Саратов, 2005. - 420 с.

86. Тотолян, А.А. Клетки иммунной системы / А.А. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб.: Наука, 2000. - 231 с.

87. Ульянов, С.С. Динамика спеклов и эффект Доплера / С.С. Ульянов // Соросовский образовательный журнал. 2001. - Т. 7, № 10. - С. 1-7.

88. Ульянова, О.В. Использование спекл-микроскопии при тестировании токсичности бактериальных препаратов / О.В. Ульянова, Ю.А. Ганилова, С.С. Ульянов // Вестник Саратовского госагроуниверситета. 2007. - №2. -С. 18-20.

89. Участие сиалосвязывающих макрофагальных лектинов в фагоцитозе апоптотических телец / Е.М. Рапопорт и др. // Биохимия. 2005. - Т. 3, №70.-С. 406-415.

90. Федосов, И.В. Особенности проявления эффекта Допплера при дифракции сфокусированного когерентного излучения в рассеивающем потоке / И.В. Федосов, С.С. Ульянов // Оптика и спектроскопия. 2001 — Т. 91, №2.-С. 325-329.

91. Формирование квазирегулярной интерференционной картины в спекл-модулированном лазерном пучке, отраженном от прозрачного оптически неоднородного слоя / В.П. Рябухо и др. // Журнал технической физики. 2002. - Т. 72, № 4. - С. 72 - 75.

92. Франсон, М. Оптика спеклов / М. Франсон. М.: Наука, 1980. - 171 с.

93. Фрейдлин, И.С. Иммунная система и ее дефекты / И.С. Фрейдлин. -СПб.: Полисан, 1998.- 167 с.

94. Фрейдлин, И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляторной сети / И.С. Фрейдлин // Иммунология. 1995. - №3. — С. 44 -48.

95. Фрейдлин, И.С. Система мононуклеарных фагоцитов / И.С. Фрейдлин. -М.: Медицина, 1984. 272 с.

96. Фрейдлин, И.С. Современные представления о фагоцитарной теории / И.С. Фрейдлин // Микробиология. 2006. - № 5. - С. 4 - 10.

97. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. М.: Медицина, 2000. - 432 с.

98. Хаитов, P.M. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 1995.-№4.-С. 3-8.

99. Хейфец, JT.Б. Разделение форменных элементов крови человека в градиенте плотности фиколл-верографии / Л.Б. Хейфец, В.А. Абалакина // Лабораторное дело. 1973. - № 10. - С. 579 - 581.

100. Цитокины и аллергия, опосредованная IgE / Н.В. Медуницын и др. // Иммунология. 1993. - № 5. - С.11 - 18.

101. Чернух, A.M. Микроциркуляция / A.M. Чернух, П.М. Александров, В.В. Алексеев. М.: Медицина, 1984. - 432 с.

102. Чеснокова, Н.П. Воспаление / Н.П. Чеснокова, А.В. Михайлов. -Саратов: СГМУ, 2004. 165 с.

103. Чеснокова, Н.П. Механизмы развития иммунного ответа в норме и патологии / Н.П. Чеснокова, В.В. Моррисон. Саратов: СГМУ, 1998. -60 с.

104. Шубич, М.Г. Выявление катионного белка в цитоплазме лейкоцитов с помощью брофенолового синего / М.Г. Шубич // Цитология. 1974. - Т. 16, № 10.-С. 1321 - 1322.

105. Шубич, М.Г. О специфичности цитохимического выявления кислой фосфатазы в нейтрофильных лейкоцитах / М.Г. Шубич, И.В. Нестерова // Лабораторное дело. 1980. -№3. - С. 150 - 154.

106. Энциклопедия клинических лабораторных тестов / Под ред. Н.У. Тица. М.: Лабинформ, 1997. - 510 с.

107. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. М.: Медицина, 2000. - 608 с.

108. Ярилин, А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Иммунология. 1997. - № 5. - С. 7-14.

109. A major 50-kDa human B-cell factor-2 induces both. Tac antigen expression and proliferation by several types of lymphocytes / M. Kawano et al. // Cell. Immunol. 1988. - V. 111, №2. - P. 273 - 286.

110. Aarden, L.A. Reviset nomenclature for anyigen nonspetific T-cell proliferation and helper factors / L.A. Aarden, T.U. Brunner, I.C. Cerottini // Immunology. - 1987.-V. 17, №10.-P. 1411 - 1416.

111. Agace, W. Selective cytokine production by epithelial cells following to Escherichia coli / W. Agace // Immunjlogy. 1993. - V. 61, № 2. - P. 602 -609.

112. Aggarwal, B. Cytokines: from clone to clinic / B. Aggarwal, E. Pocsik // Immunology. 1992. - V. 292. - P. 335 - 345.

113. Antitumor activity of murine tumor necrosis factor against heterotransplanted murine tumors and heterotransplanted humor tumors in nude mice / K. Haranaka et al. // International Journal Cancer. 1984. - V. 34, №1.-263-267.

114. Arco, A. Modelli sperimentali per lo studio degli effetti indotti dalla tossina staphylococcia A e В su cheratinociti umani in coltura / A. Arco, M. Faure, Y. Piemont // Italian Anatatomy and Embriology. 1991. - V. 96, №3. - P. 185 -189.

115. Assmann, G. Relation of high-density lipoprotein cholesterol and triglycerides to incidence of atherosclerotic coronary artery disease (the PROCAM experience) / G. Assmann, H. Schulte // Cardiology. 1992. - V. 70.-P. 733-737.

116. Astaldi, G. The glycogen content of the cells of lymphatic leukemia / G. Astaldi, L. Verga // Acta Haematology. 1957. - V. 17, №3. - P. 129 - 135.

117. Autocrine growth of T-cell independent of interleukin-2: identification of interleukin-4 as an autocrine growth factor for a cloned antigen-specific helper T-cell / T. Kupper et al. // Immunology. 1987. - V. 138, № 12. - P. 280 -287.

118. Bablock, W.A. General Regression Procedure for Method Transformation / W.A. Bablock // Clinical Chemistry Clinical Biochemistry. 1988. - V. 26. -P. 783 - 790.

119. Bach, F.H. Lymphocyte reactivity in vitro. II. Soluble reconstituting factor permitting response of purified lymphocyte / F.H. Bach // Immunology. -1970.-V. 1.- P. 219-227.

120. Bacterial adherence to nasal mucosal cells / Aly R. et al. // Infectional Immunology. 1977.-V. 17.-P. 446-452.

121. Baron, S. The interferons: mechanisms of action and clinical applications / S. Baron, S. Tyring // Immunology. 1991. - V. 2. - P. 175 - 184.

122. B-cell stimulatory factor-l/interleukin-4 mRNA is expressed by normal and transformed mast cells / M.A. Brown et al. // Cell. 1987. - V. 50, № 5. - P. 809-818.

123. B-cell-stimulatory factor 2 (p2-mterferon) functions as a second signal for interleukin-2 production by nature murine T-cells / R.D. Garman et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1987. - V. 84, №21. -P. 7629-7633.

124. Benjamini, E. Immunology, a short course / E. Benjamini, G. Sunshine, S. Leskowitz. New York: WILEYLISS, 1996. - 451 p.

125. Billian, A. Interferon-y in autoimmunity / A. Billian // Cytokine Grouth Factor. 1996. - V. 7.-P. 25 - 34

126. Bona, C. Textbook of immunology, second ed / C. Bona, F. Bonilla. -Amsterdam: Harwood Acad. Publ., 1996. 406 p.

127. Bone marrow stromal cell regulation of B-lymphopoiesis. 1. The role of macrophages, IL-1 and IL-4 on pro-B-cell maturation / A.J. King et al. // Immunology. 1988. - V. 141, № 6. - P. 2016 - 2017.

128. Butler, A.R. The Jaff reaction: Identification of the colored species / A.R. Butler // Immunology. 1976. - V. 59. - P. 227 - 232.

129. Callard, R. The cytokine. Facts book / R. Callard, A. Gearing. London: Academic Press, 1994. - P. 21 - 22.

130. Cannon, J.G. Physiological mechanism contributing to increased interleukin-1 secretion / J.G. Cannon, W.J. Evans, V.A. Hughes // J. Physiology. 1986.-V. 61, №5.-P. 1869- 1874.

131. Carswell, E.A. An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumors / E.A. Carswell, L.J. Old, R.L. Kassel // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1985. - V. 72, №9. - P. 3666 - 3670.

132. Cavaillon, J.-M. The role of serum in-interleukin-1 produktion by human monocytes activates by endotoxins and their polysaccharide moieties / J.-M. Cavaillon, N. Haeffber-Cavaillon // Immunology. 1985. - V. 10. - P. 35 -40.

133. Cessi, D. Prophylaxis of Escherichia coli infection in fowls with emulsified vaccines / D. Cessi // Clinical Veterinary. 1979. - V. 102. - P. 270 - 278.

134. Chemoprevenyion with phytochemicals targeting inducible nitric oxide syntase // ed. Yoshikawa T. Karger. 2009. - V. 61. - P. 193 - 203.

135. Christner, R.B. Role of staphylokinase in the acquisition of plasmin (ogen)-dependet enzymatic activity by staphylococci / R.B. Christner, M.D. Boyle // Infection.-1996.-V. 173, №1 P. 104-112.

136. Comparison of tests designed to identify Staphylococcus aureus thermostable nuclease / O.G. Brakstad et al. // Acta Pathologica, Microbiologica et Immunologica Scandinavica. — 1995. V. 103, №3. - P. 219-224.

137. Cuturi, M.C. Independent regulation of tumor necrosis factor and lymphotoxin production by human periphepal blood lymphocytes / M.C. Cuturi, M. Murphy // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1987. - V. 87, №6. - P. 7581 - 7594.

138. Defensins: antimicrobial and cytotoxic peptides of mammalian cells / R.I. Lehrer et al. // Annual Review of Immunology. 1993. - V. 11. - P. 105 -128.

139. Dendritic cells: from ontogenetic orphans to myelomonocytic descendants / J.H. Peters et al. // Immunology today. 1996. - V. 17. - P. 273 - 278.

140. Evaluation of flow volume in a capillary using dynamic laser speckles based on the photon con-elation / Aizu Y. et al. // Optical Communication. — 1990.-V. 80.-P. 1-6.

141. Expression of interleukin-1 alpha and beta genes by human blood polymorphonuclear leukocytes / P. Lord et al. // Immunology. 1991. - P. 112-121.

142. Folin, O. On the determination of creatinine and creatine in blood and tissues / O. Folin // Biology and Chemistry. 1914. -V. 17. - P. 475-481.

143. Fontana, A. Biological and biochemical characterization of an interleukin 1-like factor from rat C6 glioma cells / A. Fontana, K. McAdam, F. Kristensen // European Journal of Immunology. 1983. - V. 13. - P.685 - 689.

144. Gol-Winkler, R. Parakrine action of transforming growth factors / R. Gol-Winkler // Clinical Endocrinology. 1986. - V. 15. - P. 99 - 115.

145. Grabstein, K. Purification to homogeneity of B-cell stimulating factor / K. Grabstein, J. Eisenman // Immunology today. 1986. - V. 163, № 6. - P. 1405 -1414.

146. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation / M.R. Glick et al. // Clinical Chemistry. 1986. - V. 32.1. P. 470-474.

147. Grawford, R.M. B-cell stimulatory factor-1 (interleukin-4) activates macrophages for increased tumoricidal activity and exspression of la antigens / R.M. Grawford, D.S. Finbloom // Immunology. 1987. -№ 1. - P. 135 - 141.

148. Grees, L.S. Analysis of nitrate, nitrite and (15N) nitrate in biological fluids / L.S. Grees, D.A. Wagner, J. Glogowsky // Analytical Biochemistry. 1982. -№8. - P. 126-131.

149. Hanson, D. Demonstration of interleukin 1 activity in apparently homogeneous specimens of the pi 5 form of rabbit endogenous pyrogen / D. Hanson, P. Murphy // Immunology. 1984. - V. 45. - P. 483 - 490.

150. Harding, C.V. Interaction of bacteria with antigen presenting cells: influences of antigen presentation and antibacterial immunity / C.V. Harding, L. Ramachandra // Current Opinion in Immunology. — 2003. V. 15, №1. — P. 112-119.

151. Hedges, S.R. Urinary infection: microbiology, pathogenesis and host response / S.R. Hedges, C. Svanborg // Current Opinion in Immunology. -1995, № 8.-P. 39-42.

152. Henderson, B. Bacterial Modulines: a Novel Class of Virulence Factors which cause Host Tissue Pathology by Inducing Citokine / B. Henderson, S. Poole, M. Wilson // Clinical Chemistry. 1996. - V. 60. - P. 316 - 341.

153. Hirano, T. Purification to homogeneity and characterization of human B-cell differentiation factor (BCDF or BSFP.2) / T. Hirano, T. Taga // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1985. - V. 82, №16. - P. 5490 -5494.

154. Hogan, M.N. Lipid A-associated proteins provide an alternative "second-signal" in the activaion of recombinant interferon-g-primed, C3H/HeJ macrophages to a fully tumoricidal state / M.N. Hogan, S.N. Vogel // Immunology. 1987.-№ 139.-P. 3697 - 3702.

155. Hogg, N. Structure and function of adhesion receptors in leukocyte trafficking / N. Hogg, C. Berlin // Immunology Today. 1994. - V. 16. - P. 327-330.

156. Human recombinant IL-4 induces activated B-lymphocytes to produce IgG and IgM / T. Defrance et al. // Immunology. 1988. - V. 141, № 6. - P. 2000 -2005.

157. Human T-cell activation deficiencies / A. Arnaiz-Villena et al. // Immunology Today.- 1992.-V. 13. P. 184 - 189.

158. Identification and characterization of surface proteins from Staphilococcus saprophyticus / S. Gatermann et al. // Microbiology. 1993. - V. 278. - P. 258-274.

159. Identification of a T-cell-derived B-cell growth factor distinct from interleukin-2 / M. Howard et al. // Experimental Medicine. 1982. - V. 155, №3.-P. 914-923.

160. Interleukin-6 and the acute phase response / P.C. Heinrich et al. // J. Biochemistry. 1990. - № 4 - P. 34-37.

161. Interleukin-6 secretion from rat Leydig cells in culture / F.R. Boockfor et al. // Endocrinology. 1994. -№ 5. - P. 134-136.

162. Jaffe, M. Uber den Niederschlag welchen Pikrinsaure in normalen Harn erzeugt und uber eine neue Reaktion des Kreatinins / M. Jaffe // Chemie. -1886.-V. 10.-P. 391-400.

163. Jelinek, D.F. Inhibitory influence of IL-4 of human B-cell responsiveness / D.F. Jelinek, P.E. Lipsky // Immunology. 1988. - № 1. - P. 164 - 173.

164. Juiius, M. Distinct roles for CD4 and CD8 as co-receptors in antigen receptor signalling / M. Juiius, C. Maroun // Immunology Today. 1993. - V. 14.-P. 177- 182.

165. Kaplow, L.A. histochemical procedure for localizing an evacuating leukocyte alkaline phosphates activity in Smears of blood marrow / L.A. Kaplow//Blood.- 1955.-V. 10, №10.-P. 1023- 1029.

166. Kloos, W.E. Natural populations of the genus Staphylococcus / W.E. Kloos // Immunology. 1980. - V. 34. - P. 559 ~ 592.

167. Kobayashi, M. The human LT system. 12. Purification and functional studies of LT and «TNF-Нке» LT form a continious T-cell line / M. Kobayashi,

168. J.M. Plunkett // Current Opinion in immunology. 1986. - V. 137, №6. - P. 1885- 1892

169. Kohase, M. Induktion of p2~interferon by tumor necrosis factor: a homeostatic mechanism in the control of cell proliferation / M. Kohase, P. Henriksen-De Stefano // Cell. 1986. - V. 45, №5. - P. 659 - 666.

170. Krieser, R.J. Engulfiment mechanism of apoptotics cells / R.J. Krieser, K. White // Immunology. 2002. - №14. - P. 726 - 734.

171. Kronheim, S.R. Human interleukin-1. Purification to homogeneity / S.R. Kronheim, C.J. March // Experimential Medicine. 1985. - V. 161, № 3. - P. 490 - 502.

172. Laboratory diagnostics of acute myocardial infarction/ Ed. by W. Stein. -Darmstadt, 1988.-73 p.

173. Lanzavecchia A. Mechanisms of antigen uptake for presentation // Current Opinion in immunology / A. Lanzavecchia. 1996. - P. 348 - 354.

174. Long, J.P. The production of fatty acid modifying enzyme (FAME) and lipase by various staphylococcal species / J.P. Long, J. Hart // J. Med. Microbiology. 1992. - V. 37, №4. - P. 232-234.

175. Lymphokine regulation of imflammatory processes: interleukin-4 stimulates fibroblast proliferation / J.G. Monroe et al. // Clinical Immunology Immunopathology. 1988. - V. 49, № 2. - P. 292 - 298.

176. Manthey, C.L. Interactions of lipopolysaccharide with macrophages / C.L. Manthey, S.N. Vogel // Immunology. 1994. № 1-P. 63 - 81.

177. Marshall, E.K. Urea: its distribution, in and. elimination from the animal body / E.K. Marshall // Biological chemistry. 1914. - V. 18. - P. 53 - 80.

178. McManus, M.C. Mechanisms of resistance to antimicrobial agents / M.C. McManus // Experimential Medicine. 1997. - V. 8, №12. - P. 120-133.

179. Morgan, D.A. Selective in vitro growth of T-lymphocytes from normal human bone narravs / D.A. Morgan, F.W. Rustetti // Sciens. 1987. - V. 193, №4257.-P. 1007-1008.

180. Mossman, T. Cytokine secretion phenotypes of TH cells: how manysubsets, how much regulation? / T. Mossman // Immunology. 1991. -№1 — P. 9-15.

181. Naiton, Y. Interleukin-6 stimulates the secretion of adrenocorticotropic hormone in conscious, freely-moving rats / Y. Naiton, J. Fukata // Sciens. -1988.-V. 165, №3457.-P. 1059-1063.

182. Neely, J.L. Staphylococcus aureus: a continuing problem / J.L. Neely // Immunology. 1994. -№6. - P. 238-241.

183. Neutrophil activating factor induces polimorphonuclear leucocyte adherence to endothelial cells and to subendothelial matrix proteins / H.J. Carveth et al. // Biochemistry and Biophysiology. 1989. - V. 162, №1. - P. 387-393.

184. Newman, D.J. Renal Function and nitrogen metabolites. In: Tietz Textbook of Clinical Chemistry / D.J. Newman, C.P. Price. Philadelphia: W.B. Saunders Company. - 1999. - 1204 p.

185. Noma, J. Cloning of cDNA encoding the murine IgGl induction factor by a novel strategy using SP6 promoter / J. Noma, P. Sideras, T. Naito // Nature. -1986. V. 319, № 60. - P. 640 - 646.

186. Oppercheim, J.J. Relationship between interleukin-8, tumor necrosis factor and a neutrophil attracting peptide / J.J. Oppercheim, K. Matsushima // Agents and Action. 1989. - V. 26, №1/2. - P. 134 - 140.

187. Panton, P.N. Staphylococcal infections and antitoxin treatment / P.N. Panton. NewYork: Lancet, 1980 - 80 p.

188. Passing, H.A. New Biometrical Procedure for Testing the Equality of Measurements from two Different Analytical Methods / H.A. Passing, W. Bablock // Clinical Chemistry Clinical Biochemistry. 1983. - V. 21. - P. 709 -720.

189. Paul, W.E. Pleiotropy and redundancy: T cell-derived lymphokines in the immune response / W.E. Paul // Cell. 1989. - V. 54. - P. 521 - 524.

190. Peine, J. Staphylococcal infections / J. Peine. Chicago: Year-book, 1958. - 180 p.

191. Pennika, D. Human tumor necrosis factor: precursor, structure, expression and homology to lymphotoxin / D. Pennika, G. Nedwin // Nature. 1984. - V. 312, №5996.-P. 724-729.

192. Peschel, C. Effects of B-cell stimulatory factor-1 / interleukin-4 of hemopoietic progenitor cells / C. Peschel, W.E. Paul, J. Ohara // Blood. 1987. -V. 70, № l.-p. 252-263.

193. Peters, G. Infectionen durch Staphylokokken. Der Mensch als Infectionsquelle fur S. aureus und kougulasenegatine Staphylokokken / G. Peters // Medicine. 1991. - V. 109, №22. - 437 - 440.

194. Poupart, P. B-cell growth modulating and differentiating activity of recombinant human 26-kd protein (BSF-2, HuIFN-(32, HPGF) / P. Poupart, P. Vandenabeele //Nature. 1987.- V. 6, №5.-P. 1219- 1224.

195. Powrie, F. Cytokine regulation of T cell function: potential for therapeutic intervention / F. Powrie, R. Coffman // Immunology Today. 1993. — V. 14. — P. 270-275.

196. Price, C.P. Analytical reviews in clinical biochemistry: The measure-ment of urate / C.P. Price, D.R. James // Clinical Biochemistry. 1988. - V. 25. - P. 484-498.

197. Production of hybridoma growth factor by human monocytes / L.A. Aarden et al. // European Journal of Immunology. 1987. - V. 17, №10. - P. 1411 -1416.

198. Purification and characterization of cytokie-induced neutrophil chemotractant produced by epitelioid cell line of normal rat kidney (NRK-52-E) / A. Walz et al. // Medicine. 1987. - V. 149, №1. - P. 755 -761.

199. Ramires, J.A. The choice of empirical antibiotic therapy for nosocomial pneumonia / J.A. Ramires // Immunology Today. 1994. - V. 6, № 2. - P. 47 -50.

200. Rappolee, D.A. Would macrophages express TGF-a and other growth factor in vivo: analysis by mRNA phenotyping / D.A. Rappolee, D. Mark // Science. 1988. - V. 241. - P. 708 - 712.

201. Recombinant tumor necrosis factor: its effect and its synergism with interferon on variety of normal and transformed human cell lines / L. Fransen et al. // European Journal of Cancer and Clinical Oncology. 1988. - V. 141, №10.-P. 3398-3404.

202. Retzlaff, C. Bacterial heat shock proteins directly induce cytokine mRNA and interleukin-1 secretion in macrophage cultures / C. Retzlaff, Y. Yamamoto // Immunology. 1994. - № 62. - P. 689 - 693

203. Rietschel, E.T. Bacterial endotoxin: molecular relationships of structure to activity and function / E.T. Rietschel, T. Kirikae // Immunology. 1994. - №8. -P. 217-225

204. Rifai, N. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Tietz Textbook of Clinical Chemistry / N. Rifai, J.J. Bachorik, P.S. Albers. Philadelphia: W.B. Saunders Company. - 1999. - P. 809 - 861.

205. Romagnani, S. T cells, cytokines, and IgE regulation in allergic disease / S. Romagnani // Progress in allergy and clinical immunology. 1994. - V. 3. - P. 5-13.

206. Rosenbach, F.J. Microorganism en bei den Wund-Infections-Krankheiten des Menschen / F.J. Rosenbach. Wiesbaden, 1984. - 211 p.

207. Roth, R.R. Microbial ecology of the skin / R.R. Roth, W.D. James // Microbiology. 1998. - V. 42. - P. 441 - 464.

208. Ruddle, N. Lyphotoxin redux / N. Ruddle // Immunology todey. 1985. -V. 6, №5.-P. 156- 159.

209. Sacurai, A. Tumor necrosis factor and lysosomal enzymes of macrophages and macrophage-like cell line / A. Sacurai, D. Satomi // Cancer, Immunology, Immunotherapy. 1985. - V. 20, №1. - P. 5-10.

210. Sauder, D.N. Langerhans cell production of interleukin-1 / D.N. Sauder, C.A. Dinarello, V.B. Morhenn // Immunology. 1984. - V. 82. - P. 605 - 607.

211. Schaefer, E.J. Overview of the diagnosis and treatment of lipid dis-orders. In: Handbook of lipoprotein testing / E.J. Schaefer, J. McNamara. -Washington: AACC press. 1997. - 448 p.

212. Schroeder, Т. M. Purification and partial biochemical characterization of human monocyte-derived neutrophil-activating peptide that lancks interleukin-1 activity / Т. M. Schroeder, U. Mrowietz // Immunology. 1987. - № 6, №11. P. 474 —483.

213. Scleifer, K.H. Taxonomy of coagulase-negative staphylococci / K.H. Scleifer. Stockholm: Almqvist and Wiksell International, 1986. - 125 p.

214. Smith, H. The revival of interest in mechanisms of bacterial pathogenicity / H. Smith // Immunology todey. 1995. - V. 70, № 2. - P. 277 -316.

215. Smith, R.S. The cytokine theory of headache / R.S. Smith // Medicine Hypotheses. 1992. - V. 39. - P. 168 - 174.

216. Sone, S. Prodyction of tumor cytolitic factor (S) by activated human alveolar macrophages and its action / S. Sone, K. Tachibana // Cancer Research. 1984. - V. 44, №1. - P. 646 - 651

217. Spenser, K. Analytical reviews in clinical biochemistry: The estimation of creatinine / K. Spenser // Clinical Biochemistry. 1986. - V. 23. - P. 1 - 25

218. Structure determination of a human lymphocyte derived neutrophil activating peptide / H. Gregory et al. // Immunology. 1988. - №2. - P. 82 -90.

219. Talke, H. Enzymatische Harnstoffbestimmung im Blut und Serum im optischen Test nach Warburg / H. Talke, G.E. Schubert // Science. 1965. - V. 43.-P. 174- 175.

220. Taylor, P.R. Macrophage receptors and immunorecognition / P.R. Taylor, L. Martinez-Pomares, M. Stacey // Immunology. 2005. - № 23. - P. 101 -144.

221. The applications of speckle interferometry for the monitoring of blood and lymph flow in microvessels / S.S. Ulyanov et al. // Lasers in Medical Sciences. 1997.-V. 12.-P. 31 -41.

222. The effects of cytokines and adherent cells on the interleukin-4-mediated induction of la antigens on resting B-cells / R. Oliver et al. // Cell Immunology. 1987. - V. 106. - P. 428 - 436.

223. The role of platelet-activating factor in platelet-aggregation / M. Chignard et al. // Nature. 1979. - V. 279. - P. 749 - 751.

224. Thomas, L. Alanine aminotrasferase (ALT), Aspartate aminotrasferase (AST). In: Clinical laboratory Diagnostics / L. Thomas. ~ Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft. 1998. - 565 p.

225. Thomson, A. The Cytokine Handbook / A. Thomson. London: Academic Press, 1992.-418 p.

226. Thumm, G. Studies on prolysostaphin processing and characterization of the lysostaphin immunity factor of Staphylococcus simulans biovar staphylolyticus / G. Thumm, F. Gotz // Microbiology. 1997. - V. 23, № 6. -P. 1251 - 1265.

227. Tietz, N.W. Clinical Guide to Laboratory Tests / N.W. Tietz. -Philadelphia: W.B. Saunders Company. 1995. - 629 p.

228. Tietz, N.W. Fundamentals of clinical chemistry / N.W Tietz. -Philadelphia: W.B. Saunders Company. 1987. - 761 p.

229. Tomasi, T. The discovery of secretory IgA and the mucosal immune system / T. Tomasi // Immunology Today. 1992. - V. 13. - P. 416 - 421.

230. Tosato, G. Monocyte-derived human B-cell growth factor identified as interferon^ (BSF-2, IL-6) / G. Tosato, K.B. Seamon, // Science. 1988. - V. 239, №4839.-P. 502-504.

231. Toveu, H.G. Genes for IL-6 tumor necrosis factor, and 1L-1 are expressed at high levels in the organs of normal individuals / H.G. Toveu, J. Content, J. Cresser // Immunology. 1988. -№ 9. - P. 106 -110.

232. Ulyanov, S.S. High-resolution speckle-microscopy: study of the spatial structure of a bioflow / S.S. Ulyanov // Physiological Measurement. 2001. -V. 22.-P. 1-10.

233. Ulyanov, S.S. New type of manifestation of the Doppler effect: an applications to blood and lymph flow measurements / S.S. Ulyanov // Optical Engineering. -1995. V. 34. - P. 2850 - 2855.

234. Ulyanov, S.S. Principles of high-resolution speckle microscopy: analysis of bioflows / S.S. Ulyanov // Proceedings of the International Society for Optical Emgineering. 2002. - V. 46. P. 374 - 380.

235. Uyttenhove, C. T-cell growth and differentiation induced by interleukin-HP1AL-6, the murine hybridoma/plasmacytoma growth factor / C. Uyttenhove, P.C. Coulie // Experimental Medicine. 1988. - V. 167, №4. - P. 1417 - 1427.

236. Van Shick, J. cDNA cloning jf murine interleukin-l-HPl: homologi with human interleukin-6 / J. Van Shick, S. Cauphas, // European Journal of Immunology.-1988.-V. 18, №2.-P. 193-197.

237. Vijaranakul, U. Cloning and nucleotide sequencing of a Staphylococcusiaureus gene encoding a branched-chain-amino-acid transporter / U. Vijaranakul, A. Xiong, K. Lockwood // European Journal of Immunology. -1998. V. 64, № 2. - P. 763 - 767.

238. Vogt, P.K. Bacterial infections; Close encounters at the host pathogen interface / P.K. Vogt, M.J. Mahan // Current Topics Microbiology and Immunology. 1998. - V. 22. - P. 123 - 129.

239. Von Eiff, C. A site-directed Staphylococcus aureus hemB mutant is a small-colony variant which persists intracellularly / C. Von Eiff, C. Heilmann // Bacteriology. 1997. - V. 179, №15. - P. 4706-4712.

240. Westwick, T. Novel neutrophil-stimulating peptide / T. Westwick, S.W. Li, R.D. Camp // Immunology Todey. 1989. - V. 10, №5. - P. 146 - 147.

241. Widmer, M. B. Regulation of cytolytik T-lymphocyte generation by B-cell stimulatory factor / M.B. Widmer, K.H. Grabstein // Nature. 1987. - V. 326, №6115.-P. 795-798.

242. Wood, А.С. Staphylococcal enterotoxin В toxicity in BALB/c mice: effect on T-cells, plasma cytokine levels and biochemical markers / A.C. Wood, I. Tood // Immunology Todey. 1995. - V. 11, №2. - P. 91 - 97.

Информация о работе

Шибаева, Мария Александровна
кандидата биологических наук
Саратов, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Взаимодействие возбудителей острых гнойных инфекций in vitro и in vivo с факторами естественной резистентности организма животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Взаимодействие возбудителей острых гнойных инфекций in vitro и in vivo с факторами естественной резистентности организма животных - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы