Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Взаимодействие иодтиронинов с андрогенами и эстрогенами в регуляции активности ферментов лизосом и пентозофосфатного цикла в мужских добавочныхполовых железах крыс

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Взаимодействие иодтиронинов с андрогенами и эстрогенами в регуляции активности ферментов лизосом и пентозофосфатного цикла в мужских добавочныхполовых железах крыс"

TS OR

« о »«Л? ЬС'О

t о Ï-—

ШНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНШЯ Ч шщицшюнсй ПРСМШЛРЛШССТЙ рф

РЯЗАНСКИЙ ГОСУЯАРСПОТШЙ ВДЩКИСКйЯ

университет имени шдаигл и.п.гшзлсза

Нз правах рукописи Ш 615,517.018.2

ПЛЯХК! Игорь Злад№3!ровкч

53шюд0йте{е иодтирсншов с «щрогенлш и с«зтр0гена!я£ в РЕГУЛЯЦИЯ лкшвнсот:! ío??£HTQB JEÎ3CC 2Í "á пептсвозюсмтнсго щш в мжких дсбдвэчши шюбьк

дагзах кж

03.00.04 - Б::охимия

Авторефер.1г диссертации ка сакскакиз ученой степени кандидата йкмсгическиг изук

?пзэ)зй -

Работа выполнена к а кафздре Сиохиыии Рязанского государственного медицинского университета имени академика И. П .tías лова.

Научные руководители - доктор медицинских наук, академик РАН

В.А.Строев

доктор медицинских наук, профессор В.Г.Макарова

Официальные оппоненты:. кандвдат медицинских наук

А. В. Дмитриев

доктор биологически* наук Ю. А. Соколов

Ведущая организация - Московский медицинский с^ошголйпкесккй институт.

Защита состоится << » 1S96 г. в часов ва

заседании Диссертационного Совета Д 084.67.02. при Рязанском государственном кедицинском'университете имени академика И. FI. Лактоза (г.Рязань, 330000 ,ул.Высоковольтная.,д.9).

С диссертацией иа*ло ознакомиться в библиотеке Рязанского государственного медицинского университета имени академика И.П.Павлова.

Автореферат разослан <<

Ученый секретарь Диссертационного Совета кандидат биологических наук

У> 1936г.

Е.А.РязанОйа

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Вопросы взаимодействия гормонов относятся к числу важнейших проблем биохимии, раскрытие которых прояснит представления о механизме регуляции клеточных процессов и патогенезе ряда заболевании.

Одним из многочисленных осложнений гипергиреоза у мужчин является существенное угнетение сперматогенеза (И.К.Гриценко, 1978; D.Pardon et al.,1978; С. 41 <М et al. ,'Г/'3) по крайней мере, частично обусловленное снижением функциональной активности мужских добавочных полоеых хедез . Исследования показывают, что избыток тиреоидных гормонов в организме значительно снижает массу предстательной железы (ГШ) и семенных пузырьков (СП) (В. В. Алёшин и др. ,1984; V.Zbugkova-K^ri-tova, 1969). С другой стороны, гипотиреоз, также нарувает нормальный рост этих *елез(Ь.Valle et al.,lS85). Однако, мужские добавочные половые железы считаются органами, малочувствительными к действии иодтиронинов. Эти органы содержат крайне ограниченное количество рецепторов к тиреоидным гормонам (V.Felt, 1S80) и нет никаких доказательств, что иодти-ронины способны изменять обмен веществ, например, в предстательной железе или сеиешшх пузырьках путем действия на специфические рецепторы. Таким образом, встает вопрос о природе воздекстия гипертиреога на мужские добавочные половые телеги. Наиболее реадышки посредниками действия гормонов щитовидной железы на мужские добавочные половые келезы считаются андрогекы (Б.В.Алезии и др. ,1984) и эстрогены (А.И.Карпенко и др., 1992), уровень которых в крови коррелирует при гипер-тиреозе с иаруюсчиями половой функции. Тем не менее, деталь-

ныо исследования этой проблемы, равно, как и докагательства участия мужских и женских полоеых гормонов в механизме реГу-ляиии иодтиронинами функциональной активности мужских доба-сочных половых келез в литературе до сих пор отсутствуют.

Цель работы состояла в исследовании взаимодействия иод-тиронииов с мужскими и женскими половыми гормонами в регуляции активности ключевых ферментов пеитоасфосфатного цикла и энзимов лизосом в мужских добавочных половых железах.

Задачи исследования:

1. Выявить влияние иодтиронииов на метаболизм в вент* ральной доле предстательной железы и семейных пузырьках половозрелых крыс путем изучения изменений активности ферментов лизосом и пентозофосфатного цикла в этих органах в условиях различного тиреоидного статуса.

2. Показать роль тестостерона в развитии эффектов иодтиронииов на обмен Ееществ в вентральной доле предстательной железы и семенных пузырьках путем исследования изменений активности ферментов лизосом и шзнгозофосфатного цикла при различном андрогенном и тиреоидном статусе организма.

3. Дать сравнительную оценку действия иодт::рокшов И зстрадиола на активность лизосомальных ферментов и ферментов ::энтоЕофосфагного цикла в вентральной доле предстательной гхелезы и семенных пузырьках.

4. Выявить изменения активности ферментов лизосом и пентоаофосфатногс цикла в вентральной доле предстательной железы и семенных пузырьках при введении антиэстрогена-кЯо» мифенцитрата ""'.тактным животный и на фоне гипертиреоза.

Научная новизна

Впервые показана зависимость активности ферментов пен-

- з -

тозофосфатчсга цикла и дизосом 2 вентральной долг ГОЛ и СП от тирэокдяого статуса организма и, в частности, от гипзрткрео-за. Выявлена ведущая роль сывороточного уровня тестостерона з рзгулящш активности ключевых ферментов пеютзофосфзтного цикла в вентральной доле IES и СП при гипертирсове. Погагано, что влияние кодтирониноа ла астшзносгь ферментов лизосом в добавочных половых аояегах, частично опосредуется воздействием тестостерона н эстрогенов. Получены нсше дзн-нуэ о влиянии антизстрогена-клсм -нцитрата на мзтаболетсс-кухз активность вентральной дол;! ПК и СП, а твюке па акткз-пость фсрмзнтсв лизсеом с этих органак. Расширены представления о взаимодействии андрогенов и лстрсгеиов з регуляция обмена вбдестз в мужских добавочных половых г.елепах. Теоретическая и практическая значимое те Результат исследования углубляет суцестнующяе представления сб эффектах воятароншюв на органы- "кемжлеик", указываю? на су^ственяув роль взаимодействия мужских и женских подовых гарксноз в р?гул?:цда актизаоети ферментных систем чуг.склх добавочных по.гових келез в норме к при гшертиреоге. Полученниэ дашшэ позволяют говорить о гделесообразности вкакгаепия изомпфенцитрата ^ комплексную тераш» нарузенж ¡функциональной активности вентральной доли ПН к СП , гшазан-етх лвОъгтш тиреоэдгазх гормонов.

¿пуобашк о&5отц. Оановииа результаты диссертационной ра£ ли представлены на Всероссийской гяучко-прсктичесиэй конфэрс!Н1т>гл " х-ларпи, иммунитет и пажология внутренних органов" ( Рязань, 1995), объединенной кежкафе дрань ной научной конференций РГМУ iv.cnn акад. п.П. Павлова (1090).

Осиовшз положшия диссертация пзло>.ог.м

в 4 печатных работах.

Структура и объем диссертацки. Диссертация излолазна на '^страницах маяинописного текста, содержит^/ рисунок, 3 9 таблиц и состоит из введения, обзора литературы, описания методоЕ исследования, изложения результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и указателя литературы, включающегоЩ$ источников, из них ¿0 работ отечественных и IШ работ иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проьедены ва 233 нелинейных белых крысах-самцах массой 200-240 г.

Экспериментальный гипертиреоз вызывали подкожный введением I.- тироксина , приготовленного на 20 шИ водном растворе гидроксида натрия в дозе 1 ыг/кг в день, в течение 7 дней. Кастрированным животным Ь-тироксиц вводился в дозе 1 ыг/кг ежедневно, в течение 7 дней, начиная с 7 дня после кастрации. Забой гкпертиреоидных нивотных проводила на 8 сутки. Тиреоидзктомию и гонадэкхошпо проводили по методу, описанному Кирщенблатом (1969) под легким эфирным наркозом. Забой тиреоидэктомированкьве и кастрированных животных осуществляли, соответственно, ва 29 и 15 день псх:де операции. Контрольную группу для этих серий составляли лохнооперированные животные.

Яивотныц в опытных серках вводим следующие ирелараты: тестостерон-, одкожно на 52 спиртовом растворе, б дозе 1 мг/кг однократно, на 7 день после начала введения Ь-тироксина интактным животным, касгр/.роаанныы крысам-в той же дозе

- й ~

«ждяевг», в течения 12 даей, пачшая со 2 дня посге операции; рестрор зстрадиола бензоага s косточковом иасле-внугри-шаечш з дозе 2С0 икг/кг екед»шгко5 в гвченкч 7 рдей при введении препарата интактеим гигйоттдо, титрированным гаы-сзн-в той же дозе ежедневно, s та^акки й, начиная со 2

дня после операции; (шзизфан^игргт-парорально в доез 200 икг/кг и 2 №/>3* ежедневно, в течении 7 дней. При введении всех препаратов проводились еоатветстауяцкс коятрсльвыз серии на растворили.

В опит брали 6-8 животных. Забой провод:^:л декапитацпи под легки» зфириш наркозом. Сыворотку кроки для РИА-определения горшков получали после 10 мин центрифугирования при 3000 об/мим. Еа СП легким ыассаяем удаляли секр~г»\ собирали его з мерные пробирки и доводили его объем до 2 ил либо 0.9Z растьором уяорвда натршг при определении зктгексс-тл fcpt'yi!TC°, либо 10Х трихлорукиусвсй ьу.слотсЪ пр.: опреде-лакии яеличияы секретируеисЛ сеиенкши пузкрьками Фруктозы. Вентральные доги 1Ш и освобожденные от егкрзта егменндо пу-DUjbKH двухкратно промывали 0.9Z раствором хлеркда натрия, измельчали и гомогенизировали на холоду в гомогенизаторе типа Поттвра-Зявехейма с тефло-юшм пестиком, соответственно, 60 и 90 секунд при 1200 об/мин в 0.25 Ы растворе сахарозы, содержал;^ 1мМ ЭДТА и 50 мМ трис-HCl рН 7,4 . Отношение массы счгана к об-ьгч'у орс>ди шделения составляло для вентрэдь-шоу дсйй ГШ - 1:20, а для СП - 1:10. Получешпп; гсшгенат иратрифугкроващ 10 ш при ICOO g и температура 4- С дтл отделения ядер я веразрушопгпге при гомогенизация îo-svok. Для отделекип мжзхондриаяьной фракции, содержащей лнзосомы, супярнатачт 1 подвергался дополнительному цеиг1>и£угированив

- '„ -

ь Ti-u-juaa SO дан при 20 CJO 1,'- После суксгл&чзди'а

2 ссадог: рееуспг-лдирозала в разнес ао обю»,;;/ »сходкой ер<.»д8 зкделенж ргюгвере 0.25 И сахароз ir, оодврллчем С.1Л тритон ::-1С2 . В суаернатаьте 2 onpeswujm нгс-эдь^рнгарусную аэтиз--кость гииэсшалышг. феругдаоь , акгкгагейть г./шкозо-6-фосфат-дргидрогекавы ¿i С-фое>|йг.ьоотнах-д<7Г1Мрогей<ты. В рооуепенда-70 определяли седл^.онтируемуз a-auxa'ocsi» гаэсссмэдмик: 4®Р" кентов. Общую аю-йзькс^ть ферментов лизееом рассчитывали как оуыыу нзседямектяруеыод к седга1э>п:фуеио& активностей фэр-.мэнтои.

Дли определения активности катепсика D в гомогекате у. секрете СП использовал.. мззод М.Anson (1933). Активность кислой ДНК-азы определяли по методу A.A. Покровского с coast. (1986). • Активность гасдой фосфзтьаы оценивали по гидра-лигу ß-глицерофосфата натрия (В.Г.Колб к др. Д2«2). Для определения активности й-глякопедагы использовала метод, спи--•анныи Еарретом и ХИтом (1SS0). Активное r;t г.ожоао-6-сЬэс-фат-детндрогеньии и С-фосфогдяконат-дугкдрогеиази определяли по методу Kornberg (¿90S). Белок определяли шеробиуретовш msходом(Г. А. Кочетов, 19Ш). Для определения количества секре-тирувмой сеченными пузырьками фруктозы использовался метод Rov(l934).

Определение концентрации трииодтиронина, тирокешга и тестостерона в сывороткз крови проводили радиоиммунологическим методом (набору рио-Тз-ПГ, pira-Т4-ПГ, Testo СТ2) в ЦШЛ РГМУ . Результаты исследований обрабатывались методом вариационной статист :и на персональном компьютере PC 286 с использованием пакета программ "Диалог".

РЕЗУЛЬТАТЫ I I СБСЩЕЕЕ

1. Взш&ояейегвае кодтироншюв а агздюгенами 8 рвгуляпик активности ферхэитсз дкзоссм и пентозсфосфатного циюга ■ в мужскзх зсбм отопят поясеьа дсадеззх крж

1^жские яобаво'гкые погадав, .железы не гхишнтся кяасск-даскячя органами-13Ш}НЯ1П1 дхя тирэощных гормонов. Тея из иен?с, иэжду таресндкым статусом оргатгауз к функциональной активностью зтих органов сугэпгвует тес-гая сзяеь. Гтд исследователей (Б.В.Албит и др. ,1034; &.Н.Гладкова я др. ,1932) считают, что воздействие нодтирокиков па обкэн певрстз в МУЖСКИХ'Д0бЗЕСЧ!1ЫХ ПОЛОВЫХ Г£ЛЗВЗХ МСГ.ЙТ быть ОЦОСрбДСЕвИО сывороточным уровней тестостерона,тем ко м&ксэ факта, убедительно подтвержджг'гэ эту гипотезу а литература отсутствуют.

Р^ат>тяты кссюдовачий акглвкэсга ферментов. гиргссм и пектозофос$атпого цяпза, постпвхенные ва сенцах крыс с рзз-тиреоэдныа статусом , покагьшетт, что взаимодействие •гирэсэдшх гормонов с Фэрыентнъшй сгсте«2>и йужегах добавочных половых желаэ имеет елоакыГ? характер. Гипсптреоз, вызванный тирэаидэкгемигх да -пргссдла к достоверном изменея:5ям активности исследуешх ферыептол, а тагае сывороточной кон-дантрздега тестостерона. Эти результата согласуются с даин-ш. татератури (П. А.Карпенко, 1991) и указывают на откссктельпуп нечувствительность полозах ч^сз подолоарелых животных к недостатку иодтирепшюв, -свя^апиэиу с лсотепентэ*, по мере роста «местного, уиеньпокием количества ядерных рецепторов к

- а -

Тз в coM2HHi!Kax(S.Palrnero, 1993). Однако, при введении L-тироксина интактным животным в дозе 1 мг/кг наблюдались отчетливые биологические эффекты. Гипертиреоэ вызывал достовернее снижение сывороточной концентрации тестостерона (с 9.58 нмоль/л в контроле до 3.44 ныоль/л;р<0,01). Активность гдю-козо-б-фосфат-дегидрогеназы в обоих исследуемых органах и 6-фосфоглюконат-дегидрогеназы в вентральной доле предстательной железы снижалась (Табл.1). При гипертиреозе также наблюдаяось снижение веса мужских добавочных половых желез, резкое падение объема секрета семенных пузырьков и уровня секретируемой семенными пузырьками фруктозы. Изменения всех этих параметров при гипертиреозе указывали на угнетение метаболической активности вентральной доли Ш и СП.

Общая активность О-глюкозидази при введении иодтирони-нов снижалась (в вентральной доле Ш - на 64Z, в СП - на 68%), тогда как уменьшение общей активности кислой фосфатазы было достоверным лишь в вентральной доле ПЖ (снижение на 27%). Наблюдаемое, одновременно, увеличение коэффициентов лабильности, как для кислой фосфатазы, так и для 0-глюкози-дазы, по-видимому, указывало на выраженное повышение проницаемости лизосомальных мембран для этих ферментов. Общая активность катепсина D , наоборот увеличивалась (в вентральной доле ЕЖ - на 111%, в СП - на 70%). Характер, изменений общей активности кислой ДНК-азы различался.в зависимости от исследуемого органа. Бели в вентральной доле ПЖ наблюдался аналогичный кагепсину D рост активности (на 872), то в семенных пузырьках о^"<ая активность фермента снижалась (на 432). Такие изменения активности лизосомальных гидролаз при гипертиреозе могут объясняться как относительно независимой регуля-

Таблица 1.Влияние гипертиреоза на активность ферментов лизосом и ®Ц в вентральной доме предстательной железы и семенных пузырьках кнтактных крыс(п-9)

Вентральная доля Ш Семенные пузырьки

контроль ОПЫТ X контроль опыт %

Глюкози-даза Кислая фосфатаза Кислая ДНК-аза Катепсин й Г65-ДГ 8.41±0.41 (0.38) 3.39 ±0.82 (0.22) ?.02±0.27 (0.40) 8.21±0.61 (0.17) 7.20±0.26 3.0540.42 ** (0.53) 2.4б±0.06 ** (0.52) 13.1±1.17 ** (0.39) 17.340.86 ** (0.30) 5.5540.38 36 73 187 21" 77 9.7810.15 (0.33) 3.4040.25 (0.38) 9.31±1.04 (0.23) У.20±0.49 (0.39) 13. ЗЮ. 57 3.1540.26 ***(0.50) 3.3840.18 (0.56) 5.26+0.28 (0.47) '5.640.89 ** (0.36) 8.4340.76 ** 4.12±0.17 32 99 56 170 63

№Г-ДГ 3.0340.12 2.1140.22 ■л 70 4.44Ю. 22 93

Таблица 8.Влияние 1-кратного введения тестостерона на активность ферментов лизосом и 1Щ в вентральной доле предстательной зкелезы я семенных нуанрьках гипертирсоидных крае (п-3)

Вентральная доля 7Т~ Семенные пузырьки

контроль опыт' Ж контроль опыт г

глюкоз и- 3.05Ю.42 12.6+0.73 413 3.1530.26 3.9340.48 283

дава (0.53) ** (0.27) (0.50) ** (0.38)

Кислая 2.4б±0.06 3.2140.24 130 3.33+0.18 4.6340.32 13?

фосфатаза (0.52) ** (0.11) (0.56) *л (0.42)

Кислая 13.141.17 9.8340.85 75 5.26+0.23 7.4240.62 141

ДНК-аза (0.33) л (0.32) (0.47) ** (0.28)

Катепсин 17.340.86 11.8+0.96 68 15.640.89 7.7440.65 50

0 (0.30) ** (0.40) (0.36) ** (0.30)

ГбФ-дг 5.55±0.33 8.4040.64 151 3.4340.78 13.940.04 165

** **

6ФГ-дг 2.11+0.22 2.9б±0.18 * 140 4.1240.17 4.7640.35 115

лримэ-:.: -л - р<0.05;** - Р<0.01-*** - р<0.001;активность выражена в лмсль пара-нитрофенола*10~-(для глюкозидазы), мкг н/орг фосфора*10"Ь'г,ля кислой фосфатаеы) .нмаль 5'ЛЫФ(для кислой ДЧК-р«ч) . ;ь тирозика(для катепсина Б) 15 нмояь НАД® восста-ног.!м лиого( для ферментов 1ВД) в минуту на мг бел.'«; Х-отношение результата опытной серии к контроль ней (контроль -100%); в круглых скоб.«-? >х-коэ$>фшитонт лабильности; ГЩ - пентозофосфатннй цикл; ГбФ-дг - глюкозо- 6-фосфат-дегидрогенаяа; бФР-дг - 6-фосфоглюко-нат-дегидрогеназа,

цией синтеза и процессинга ферментов лизосом, так и возможным изменением клеточного состава при снижении андрогенной стимуляции вентральной доли ГШ и СП.

С целью дальнейшего изучения взаимодействия иодтирони-ков и андрогенов в мужских добавочных половых желез были поставлены эксперименты по введению аздрогенов гипертиреоид-ным животным, введению тиреоидных гормонов кастрированным крысам , а также кастрированным животным на фоне заместительного введения тестостерона.

Однократное введение тестостерона гипертиреоидным животным обращало большинство наблюдаемых в условиях избытка

Рис.1 Изменения активности ферментов лизосом и пент-овофосфатно=-го цикла в веятт льной доле Пй(1) и СП(П) крыс при гипертиреозе и при 1-кратном введении тестостерона гипертиреоидным животным. Примечания:светлые столбцы-контрольная серия;столбцы с сетчатым узором-гипертиреоз;стодбш с вертикальной втриховкой-гипертире-оз+тестостерон; ■ • ^ ^ .

1 - активность в-глюхозидазы; 2 - активность кислой фосфатазы;

3 - активность кислой ДНК-азы; 4 - активность театепсина 0;

5 - активность г локозо-б-фосфат-дегидрогеназы; б -- активность о-фосфоглкдконат-дегидрогенаьы;

- 11 - . иодтиронинов эффек*£>в, «¿То указывает на участив тестостерона в механизме действия избытка ткреоидиых гормонов' на исследуемые ферментные системы а вентральной доле предстательной железы и семенных пузнръкаЛ (Табл.2;Рис.1). Причем, одновременно, снижались коэффициенты лабильности для о-глюкогида-зы и кислой фосфатазы, что указывало на стабилизации лизосо-ьшьных мембран .

Гипертиреоз у орлдектошфованных крыс не вызывал достоверных изменений ' активности исследуемых ферментов, что указывает на потере чувствительности мужских добавочных половых желез к иодтиронйнам яря низком уровне андрогенов в организме тага®' свидете^етвует о . важной роли тестостерона а механивме воздействии тиреойдны* гормонов нз обмен веществ а вентральпой доха П1я СП.

На фоне введения Тестостерона кастрированным животшд» гипертиреоз, не язкеаяя вктивнссть ферментов пентозофосфат-ного цикяа , вызывал достоверное, увеличение общей активности кислой фоефатагы в вентральной доле предстательной железы, а также активности . катейсина 0 в обоих исследуемых орга-нах(Табл.З). Этот результат говорит о существовании неопосредованного уровнем тестостерона в крови механизма воздейс-■ твия гипертиреоза на ферментные системы мужских добавочных половых желез.

Важно отметить, что данные литературы (А.В.Дмитриев, 1984; й.йаЛог! еЬ а1., 1979) и НасТоЯй(его исследования указывают, что посткастрационные изменений активности ферментов пентозофосфатного цикла л ферыентовлйаосоы, в основном совпадают по направленно с изменениями, йбблюдаемйни при гипер-' тиреозе, несмотря на различную степень снижения концентрации

Таблица 3. Влияние кастрации на активность ферментов лиэосом и 1ИЦ в вентральной доле предстательной железы и семенных пушрькех крыс (п-6)

Вентральная доля Ш' Семенные пузырьки

контроль сшит X контроль опыт г

Глюкози- 8.5740.39 0.5840.04 7 9.5340.14 2.1040.16 22

дава (0.39) ***(0.35) (0.29) ***(0.38)

Кислая 3.2610.18 О.85±0.08 26 3.56^0.27 1.2040.08 34

фосфатаза (0.20) ***(0.60) (0.33) ***(0.50)

Кислая б.84±0.23 4.2940.39 63 9.1540.81 5.1740.21 Ьй

МК-аза (0.35) ** (0.36) (0.40) ** (0.39)

Катепсин 8.15±0.44 20. ¡>±0.97 248 9.851:0.44 14.540.63 15Ь

В (0.17) ** (0.44) (0.36) ** (0.37)

ГбФ-дг 6.9440.18 2.01±0.22 29 13.7±0.64 3.5340.32 26

•*** - ***

6ФГ-дг 2.9540.12 0.38+0,04 .12 4.*9Ю.19 0.8040.05 18

*** , ***

Таблица 4.Влияние гипертиреоаа на активность ферментов лизосом и 1КЩ в вентральной доле предстательной железы . и семенных пузырьках орхйдзкто>.;ированйых крыс на фоне заместительного введения тестостерона (п-^

. Вентральная доля Ш Семенные пузырьки

контроль ОПЫТ X контроль •ОПЫТ %

Глюкози- даза Кислая фосфатаза Кислая . ЙЖ-ааа Катепсин Б ГбФ-дг 7.7340.32 (0.29) 2.03±0.04 (0.36) 6.4740,22 (0.51) 10.340.63 (0.30) 13.7±0.62 8.8840.31 "' (0:35) .2.5540.08 * -со.зг) .5-^+0.54 (0.49) 15.240.54 * . (0.33'| 15.540.43 115 1?? 93 = 148 113 6.0540.42 (0.50) 4.5540,07 (0.39) 7.4840.24 (0.40) 9.86±1.02 (О.Й1) 18.440. "/б 6.15±0.33 (0.49) 5.1240.13 (0.43) 5.9540.45 (0.49) 14.4±0.'1>3 А* (0.411 17.9±0.67 102 112 79 97

бФГ-дг 3.80*0.23 4.0710.12 107. 5.81 0.20 6.0240.20 ю-;

примеч.: * - Р<0.05;** - Р<0.01:*** - Р<0.001 ¡активность выражена в шолъ пара-нитрофевола*10 Чдля глюкозидазы), мкг и/орг фссфора*10~А (для юадои фосфатагы)дмодь 5'АМФ(длп кислой ДНК-азы), нмоль тирозинадая катепсина Е» и нмояь НАДФ восста-новленного( для ферментов ТЬЩ) в минуту на мг белка; %-отнокение результата опытной серии к- конгролыюй(контроль-1ТОХ); ь круглых скобках-коэффициент лабильности; БЗД - пентозофоефатинй цикл; ГбФ-дг-- глшозо-6-фосфат'дегкдрогеказа; бФГ-дг - 6-фосфогдюко-нат-дегидрогеназа;

андрогэнсш в крови, (Тёйл.4}. Исключение составляла общая активность кислой ДНК'-авы, которая при кастрации снижалась в обоих исследуемых органа*.

Участие тестостерона в механизме действия тиреоидных гормонов позволяет объяснись наблюдающееся при гипертиреозе снижение активности глвКозо-б^фосфат-дегидрогеназы и 5-фос-фоглзоконат-дегидрогеназы, Кай является общеизвестным, что активность этих ферментов через внутриклеточную концентрацию цАШ> зависит от алдрогенной стимуляции (К.1.. 31пяЬа1, 1971); Связь между ферментами лнзосом и уровнем андрогенов в крови является более сложной. Еоаысжно, что изменения активности лизосомалышх гидролиз при снижении сывороточной концентрации тестостерона.являются результатом активации механизма "программируемой клеточной смерти"^- 1988), а также вызванных этим механизмом нарушений метаболизма в кгетках мужских добавочных пОлоеих желез.

Таким образом, результаты исследований показывают, что (а) введение иодтиронинов снижает активность ферментов пен-тозофосфатного цикла, оказывает разнонаправленное действие на активность ферментов лизосом в мужскйх добавочных половых железах, и (б) часть эффектов гипертиреоза на ферментативные системы мужских добавочных половых желёз ¡опосредована снижением концентрации тестостерона-в крови.

- 14 -

2. Ввааиодействке сти^тенор и эстрогенов в регуляции актавдоегя ферментов яирост я пентсшафосфотнаго цикда в центральной доле ^¿¡статеаьной -жзл&аа к еененка

. ДЯ8МЯ« чу

Как зктературш$, явк и собранные в нзатондаи исследовав» дажа» дает ое«дк»ке дая воэдакновакея вопроса о при' роде сеязи мел®? избытком кодтиронщоз в организме и угнетением еддрорвщрро еттуаа. :

Детального я тчерпдазквдзго ответа sasvot вопрос до сих пер но получено, тем не менее рад Ессдадоватедей главным посредником мекду яодтйроаиизш к аидрогенаш считают женские половце г^рмегш-эстрогеш (А,К. Глддкова и др., 1092). . Известно, чуо прк пшертироозе резко повышается сывороточная ковдектрацйй этих гориов»» «а. счзт увеличения вераферячеекой арокатизадш тестостерона (I.J. Ctarya, 197Б). В сеш очерздь, вошгазнке уровня эстрогенов в мужском орге-няьда ведет к секжйшо секреции гоаадотрошког. гипофшш (D* Agate et al. ,1976), - а такяе вршэму угнетению еннтеаа тестостерона сеиевашсзкА {«.P.feericieok, 1884). Следует такке учитывать, что увелкчештэ концентрации эстрогеиав в сцворот-ке крови вкспердаевгалышх животных способно воздействовать капраиуа вз обмен б«чесгв в «упеках дабаиспиыг г.ог.зтк. г ¿левах черев с2эвд±гачес(же .¡стрэгеия^ pexionto^ (fiJ-.We'riT--£8Гу1йЭ4>._

С цела» выяснения механизмов влкшщя зстрогенов на u>. пев вес^ств в цужских добавочных паковых желеаах бши постав-левы эксперименты по введение» этих гормонов интакткш живот ным, кастрированным к кастрированным иа фоке введет;« тес-

тостерона.

Введение эстрадиол-бенсоата (доза 200 икг/щ') интактным самцам приводило 1С значительному падению уровня тестостерона з крови (с 9.58 толь/л до 0.27 нмоль/л; р<0.01). Активное» всех исследуемых ферментов изменялась в том же направлении, что при гишртиреоЕЭ и, в общем, при орхидэкто!.::п;, ?о есть сн;уса.-?.сь асйшкосхь ферментов пентозофооч&атиога цикла, общая актибность з-глюкозидааы и кислой фосфатазы (Табл.5) . Активность катепеша 0 возрастала, а обшая активность кислой

таблица п.влияние введения эстрадаола на активность ферментоь чшсссм и Гй-Ц в вентральной доле предстательной хелеаы и семенных яугырьках интактных крыс (п=6)

Вентральная Доля Г® Семенные пузырьки

контроль опыт % Контроль 01ШТ <м А

Глюкози- даг.а Кис лап фос"»чтаза Кислая ДНК-а?а Катопсин 0 ГбФ-дг 8.44+0.40 (0.53) 3.52-43.21 (0.22) 7.12+0.30 (0.40) .:-.25+0.С0 (0.17) 7.23+0.27 I.83Ю.14 ** (0.48) 2.64+0.20 * (0.44) II.3Л.06 ** (0.44) 12.3+0.72 ** '(0.28) ч,51±0.39 ткА" 2.11+0.21 22 75 159 150 ез 9.79+0.14 ГО. 33) 3.43+0.24 (0.08) 9.3341.05 (0.33) 9.24+0.46 (0.39) 13.2+0.57 2.57+0.20 ** (0.47) 2.61+0.19 * (0.59) 6.08+0.58 ** (0.54) 14.5+0.92 ** (0.41) 7.43+0.63 А* 4.24*0.34 26 77 65 158 56

рфГ-дг 3.01+0.12 70 4.47+0.21 95

ДНК-азы в вентральной доле ПЯ увеличивалась, тогда как в СП снижалась. Эти результаты подтверждаются более ранними литературными данными. Например, снижение активности ферментов гликолиза и пентоаофосфатного цикла в вентральной Доле ПЖ крыс при лтэрэегрогокеыии обнаруживалось в кссдедоваййИ (С.

- 1С -

Оприь ,1923).

Как в сду^гяг кастрашш, а тагата гйпзртиреоса, таи а при введении высоких доз зстроге&ов наиболее важной причиной сдакенад шшшкэсти ферментов ветгсгофосфатното цикла, изменений ойцек активности лшосояальных ферментов в мужских добавочна половых органах, по-видамоуу, авляегся угнетение андрогеккого статуса организма. Такой вывод подтверждается к тем, что на фоке кастрации и у кастрирсЕгшзах хивотких при ашесгателъном введении тестостерона зстрадиол ке вызывал игшнений активности ферментов пектозофосфатнаго цикяа. Тем не менее среди исследуемых „пизосомалышх ферыектоз у кастрированных крыс эстрадиол достоверно игмекал 0615.-ю активность кислой фосфатазы в вентральной доле Ш (увеличение аетиькос-ти на 25" ; р< 0.05), а у кастрированных крыс при введении тестостерона в обоих органах - увеличивал обму:^ активность катепскна 0 (в вентральной доле Ш - на 762,, а в СО - на 27Х ; р<0.05), снижал активность кислая ДЩ;-«гы (соответственно, на 19 и 18%;р<0.05). В вентральной догэ Ш оСдая активность кислой фоефатазы возрастала на 4£&(р<0.01), а в СИ, наоборот, снижалась на 19£(р<0.05). Эти результаты указывает на существование неолоередовагашх' кокдентрацкей тестостерона в крови механизмов воздействие эстрогене* на ведс. м р

муксккх добавочных половых «главах. . Такак всггедосгь поддерживается к литературными данными. В чигтаоегв^ 1. севинш:-: пузырьках к вентральной доле Ш при введении эстрогенов кастрированным мыиам (Т.Уатапе а!. и-кастрирован-

ным крысам на фоне заместительного введения тестостерона (М. МигакогЬ! еЪ а1.,1992) наблрдалк усиление пролиферзции и т-перплаэиа клеток эпителия, и стромн келев. Наиболее вгрсй'-нш

представляется, что в этих случаях наблюдаемые эффекты являются результатом воздействия эстрогенов на их специфические рецепторы 8 предстательной железе я семенных пузырьках.

Таким образом, полученные данные указывают на способность эстрогенов воздействовать на ферментные системы вентральной доли НЕ а СП как через угнетение андрогенного статуса, так к путем, неопосредованньш концентрацией тестостерона 3 крови.

3. Взаимодействие иодтиронинов и эстрогенов в регуляции активности ферментов лизосом я пентогофосфагяого грома а мудегетх добавочных половых железаа крыс

Соьм&стаое введение иодтиронинов и эстрогенов иятакт-ним крысам ври сравнении гак с серией животных, которым вводили только [.-тироксин, так и при использований в качестве контроля серт с введением одних эстрогенов не приводило к достоверны« изменениям активности ферментов лизосом и пеито-гофосфатного цикла. Необходимо отметить, что снижение сывороточной концентрации тестостерона ври совместней введении тиреоидных гормонов и эстрадиола проявлялось тем не менее гораздо отчетий&ей, чем при одном гипертиреозе (0.51 нмоль/л (при совместно« введении гормонов) против 3.44 нмодь/л ( при гипертиреозе); р<0.С5).

Её выявляло» достоверных изменений активности ферментов и при совместном введении тиреоидных гормонов и эстрогенов на фоне орхидэктшйи (контрольная серия-кастрация+эстра-дио.т), и при введении тестостерона кастрированным живот-

кьа;(конгрольнап серш-кастрация+тестостерон+зстрадкол), тогда как нами ранее было показано, что гипертиреоз при введении кастрированным животным тестостерона достоверно изменяет активность простатической кислой фосфатазы и в обоих исследуемых органах активности катепеика Б.

Учитывая однонаправленность эффектов гипертиреоза и избытка эстрогенов на активность ферментов лизосом и пентозо-

фосфатного цикла в вентральной Пй и СП крыс с различна,; анд-

«

рогенньм статусом и обобщи, полученные в сериях с совместным введением иодтиронинов и эстрогенов данкнз, можно говорить о наличии единого, имеющего определенную степень насыщения, звена в механизме действия избытка иодтиронинов и эстрогенов на обмен веществ в мужских добавочных половых железах.

4. Влияние антизстрогена-кломифенцитрата на активность ' ферментов лизосом и пентозоаосфатного цик-ка в вентральной доле предстательной железы и семенных пузырьках крые в условиях рае-личного ?;.<аи8 тиреоидин* гошзнов в организме

Кломкфенцйтрзт принадлежит к числу соедилешн, нроявла»-щкх антизстрогенш°,.сшйства.' Обладая способностью сш^'-тъ астрогеянуп етж-уляцкы, актиэсгрогены используются при речении рака молочной жеяегы, ановуляторкой дисфункции якчуи-ков. Механизм их действия до конца неизучен, однако кзьест-ео, что, вытесняя эстрогены с кх рецепторов в гипофиз®, ше-тпэстрогены увеличивает секрецию гонадотролтюпСУапДоРзи-сЬ©1е Н. оЪ а1.,1390). Учитывая тот факт, что эстрегевиаз-

.. - 19 -

ция, по крайней мере, частично снижает выработку тестостерона в организме за счет угнетения синтеза и секреции гонадот-ропинов, представляется вполне возможным, что применение антиэстрогенов окажется эффективным в условиях гиперэстрогене-мии, наблюдаемой при гипертиреозе(А, И. Гладкова и др.,1992). Надо отметить,что при высокой концентрации в крови антиэстрогены способны угнетать секрецию гонадотропинов и, соответственно, снижать концентрацию тестостерона в крови, так как обладают некоторой зстрогеиной активностью, поэтому для более полной оценки эффектов препарата использовалось введение кломифе-цитрата в двух различных дозах (200 мкг/кг и 2 мг/кг).

Введение кломифенцитрата в . дозе 2 мг/кг интакгным животным снижало активность ферментов пентозофосфатного цикла, уменьшало общую активность а-глюкозидазы и увеличивало ак-. тивность.катйпсина И, Общая активность кислой ДНК-азы в вентральной доле ШС'повышалась; тогда как в СП ее активность снижалась. На фоне гипертиреова кломифенцитрат в этой же дозе вызывал дальнейшее снидение концентрации тестостерона в сыворотке крови, а также достоверно увеличивал эффекты избытка иодтироИйнов нз активность исследуемых ферментов. Эти результаты указывают йа Эстрогеноподобное действие анпэст-рогенов, в том числе и кломифенцитрата, при-введении их в организм в высоких дозах.

Кломифенцитрат в меньшей дозе (200 мкг/кг) при введении интакгным крысам достоЁёрйб изменял лишь активность глюко-зо-6-фосфат-дегидрогеназы в СЯ (снй*енйе активности на 322; р<0.05). На фоне гипертиреоза (ТабЛ.8) кломифейрифат в этой дозе повышал уровень.тестостерона в крови(о 3.44 нмоль/л до

Таблица 6.Влияние клошфенцитрата (доза 200 юнг/кг) на активность ферментов лизосом и МЦ в мужских добавочных половых келевах гипертиреоидных крыс(г-б)

Вентральная доля Ш Семенные пузырьки 1

контроль опыт Z контроль опыт г

Глюкози- даза Вислая фосфатаза Кислая ДНК-asa Катепсин D ГбФ-дг 3.05t0.42 (0.53) 2.4640.06 (0.52) 13.141.17 (0.38) 17.340.86 (0.30) 5.55+0.за 4.8240.34 ** (0.39) 3,1240.24 * (0.Э6) 9.8340.86 * (0.32) 11.740.88 * (0.27) 6.7840.55 158 127 75 68 122 3.1540.26 (0.50) 3.3840.18 (0.56) 5.2640.28 (0.47) 15.640.89 (0.36) 8.4340.73 7.21±0.54 ** (0.37) 3.5940.21 (0.54) 7.4940.54 * (0.34) 10.640.77 * (0.38) 11.640.83 4.3540.26 229 106 142 68 138

бФГ-дг 2.1140.22 2.5340.19 120 4.12+0.17 106

Б.54 нмоль/л), увеличивал активность глшозо-6-фосфат-дегид-рогеназы, общую активность fl-глюкозидазы в вентральной доле Ш и СП и кислой фосфатазы в вентральной доле Ш,а тагосе снижал общ/и акткэнэсть катепеина D. Активность. кислой ДЕК-азы изменялась в зависимости от органа. В вентральной доле Ш обшдя активность снижалась, а в СП наоборот, увеличивалась.

_. тем самым результаты введения антизстрогена-клоькфе*:-цитрата в дозе 200 мкг/кг косвенно подтверждают предположение об участии эстрогенов в регуляции активности ферментных систем мужских добавочных половых желез при гипертиреозе у половозрелых крыс.

еыводы

1.При экспершэнтальноы гипертиреозе были отмечены снижение концентрации тестостерона в крови половозрелых самцов крыс, уменьшение активности ферментов пентозофосфатного цикла. Активность дизосомальных ферментов в мужских добавочных половых железах при гипертиреозе изменялась в зависимости от фермента разнонаправленным образом. Гипотиреоз, вызванный тиреоидэктоыией, наоборот, не оказывал достоверных эффектов на сывороточнув концентрации андрогенов и активность исследуемых ферментов.

2.Регуляция иодтиронинами активности ферментов лизосом и пентозофосфатного цикла в мужских добавочных половых железах частично опосредована уровнем тестостерона в крови.

3.Установлено, что эстрадная при введении интактньм крысам, сиплая концентрации тестостерона в крови, в мужских добавочных половых железах угнетает активность ферментов пен-тозофоеф-пткого цккяа и вызывает изменения активности ферментов лизосом, однонаправленные с изменениями, наблюдаемыми при Гипертиреозе и орхидэктомии. При кастрации и заместительном введении тестостерона кастрированным животным эстрадная вызывает достоверные изменения активности, ферментов лизосом, но не ферментов пентозофосфатного цикла.

4.Показано участие эстрогенов в механизме.действия гипертиреоза на активность ферментов лизосом в мужских добавочных половых железах крыс.

5.Антиэстрогеный препарат-кломифенцитрат в дозе 2 мгУкг усиливает действие иодтиронинов на активность ферментов пентозофосфатного цикла и лизосом в мужских добавочных половых

- Е2 -

желагах крыс, а в дозе 200 мкг/кг -, наоборот, снижает юс влияние на исследуемые энзимы.

6.Для снижения негативного зффекта гкпертиреоаа на репродуктивную систему мужского организма рекомендуется в практических целях использование кломифенцитрата.

стоСК РАБОТ, СШБШСШШЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 . Шшхик И.В. Функциональное состояние ферментных систем ткани семенных пузырьках при гипертиреове // Аллергия, иммунитет и патология внутренних органов: Тез. докл. Всероссийской научно-практической конференции. - Рязань, 1995. - СЛ53.

2. Пляхин И.В. Изменения активности лиаоеомальных ферментов в семенных пузырьках крыс при введении иодтиронинов. // Вопросы диагностики и коррекции физического состояния организма. - Рязань, 1996.- С.103-106.

3.- Строев Е.А., Кочу ков М.Ю., Пяяхин К.Е. Изменение активности катепсина 0 в ситовидной и предстательной келезах крыс при експериментальк-'!.'. угнетена их функции // Вопросы охрана вдоровья населенна и состояв о^ууодл^й среды. -Рязшш, 1395.- С.141-144.

4. Строев Е. А., Пдяхин К. В. Влкаиие астрадксла на активность ферментов лизосом в добавочных еолпеых железах ор-хидзктомированных крыс на фоне заместительного введения тестостерона // Современные аспекты экспериментальной и клинической фармакотерапии..- Рязань, 1996.- С.65-67.

__Ш.коЬ М 08 Со5)

I Ризмсднвстэтуг. Ропв^кш! Засаа