Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Всасывание белков в тонком кишечнике в постнатальном онтогенезе у крыс

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Всасывание белков в тонком кишечнике в постнатальном онтогенезе у крыс"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ ЭВОЛЮЦИОННОЙ ФИЗИОЛОГИИ И БИОХИМИИ им. И.М. СЕЧЕНОВА

На правах рукописи

БУРМАКИН

Михаил Викторович

003055770

ВСАСЫВАНИЕ БЕЖОВ В ТОНКОМ КИШЕЧНИКЕ В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ У КРЫС

03.00.13 - Физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2007

003055770

Работа выполнена в лаборатории физиологии почки и водно-солевого обмена Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН

Научный руководитель

Академик РАН Ю.В. Наточин

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор А.В. Смирнов доктор медицинских наук, профессор А.Н. Шеповальников

Ведущее учреждение

Санкт-Петербургский государственный университет

на заседании диссертационного совета Д 002.127.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук в Институте эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН по адресу: Санкт-Петербург, пр. Тореза, 44

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН

Защита состоится « /3 » ФС ./З-Ц 2007 г. в / / часов

Ученый секретарь диссертационно доктор биологических наук

М.Н. Маслова

Общая характеристика работы.

Актуальность проблемы. Согласно существующим представлениям белки в желудочно-кишечном тракте гидролизуются пептидазами в процессе пищеварения до аминокислот, ди- и трипептидов, которые при участии переносчиков абсорбируются клетками тонкой кишки в кровь (Adibi, 1997; Daniel, 2004). Считается, что нерасщепленные белки способны всасываться только при некоторых патологических состояниях, таких как шок, сепсис, панкреатическая недостаточность, воспалительные заболевания кишечника, аллергические заболевания (Fourrier, 1997; Knippels, Penninks, 2002; Bannon, 2004). Известно, что возможно всасывание иитактных белков в желудочно-кишечном тракте на ранних стадиях постнатального развития млекопитающих (Зуфаров и др., 1974; Henning, 1987; Bendayan et al., 1994; Mostov, 1994). В то же время имеются данные, которые свидетельствуют о всасывании белков и у взрослых млекопитающих (Мазо и др., 1989; Dickenson et al., 1999). Недавно было показано, что ионапептид аргинин-вазопреесин, введенный в изолированную по методу 'Гири-Велла петлю тонкой кишки крыс, всасывается без гидролиза с сохранением антидиуретической активности (Наточин и др., 2003). Остается неясной судьба пептидов и белков, которые абсорбируются в кишке и поступают во внутреннюю среду организма в нерасщепленном виде. В связи с этим возникают следующие вопросы: способны ли клетки тонкой кишки у животных на начальных этапах онтогенеза всасывать непищевые чужеродные белки и сохраняется ли эта способность у взрослых особей, в каком органе происходит дальнейший метаболизм белков, и функционируют ли эти механизмы у млекопитающих и амфибий. Ответу на эти вопросы посвящено данное экспериментальное исследование.

Цель исследования. Цель работы заключалась в изучении возможности всасывания в тонкой кишке у крыс и лягушек нерасщепленного белка на примере зеленого (GFP) и желтого флюоресцентных белков (YFP), а также в выяснении роли почек в дальнейшей их утилизации на различных этапах постнатального онтогенеза.

Задачи исследования.

1) Разработка метода исследования метаболизма GFP и YFP в организме у крыс и лягушек после введения этих белков в просвет тонкой кишки.

2) Изучение всасывания GFP и YFP в кишке у крыс в различные периоды постнатального онтогенеза и у взрослых лягушек.

3) Исследование накопления GFP и YFP в почке и печени после их введения в кишечник у лягушек и у крыс.

4) Исследование всасывания GFP в тонкой кишке у крыс с развивающейся почечной недостаточностью (после удаления 5/6 почек) и аккумуляции GFP в оставшейся почке.

Научная новизна Разработан новый метод для исследования всасывания и накопления в организме поступившего во внутреннюю среду нерасщепленного чужеродного белка на примере флюоресцентных белков. Впервые показано, что GFP и YFP послс их введения зондом в желудок крыс или лягушек или непосредственно в тонкую кишку всасываются энтероцитами, а затем аккумулируются в эпителиальных клетках проксимальных канальцев нефрона. Установлено, что в раннем постнатальном онтогенезе у крыс всасывание флюоресцентных белков в кишке происходит интенсивнее, чем у взрослых животных. У частично нефрэктомированных крыс всасывание чужеродных белков и их накопление в почке снижено по сравнению с контролем. Основные положения, выносимые на защиту.

1) GFP и YFP могут всасываться в тонкой кишке у крыс и лягушек нерасщепленными.

2) Всасывание GFP и YFP в энтероцитах происходит интенсивнее у крыс в ранние периоды постнатального онтогенеза, чем у взрослых животных.

3) Исследованные белки после их введения крысам и лягушкам зондом в желудок или в тонкую кишку накапливаются в эпителиальных клетках проксимального канальца почки, но не обнаруживается в клетках печени.

4) У крыс через 2 месяца после удаления 5/6 почек снижается накопление

OFP в клетках проксимального отдела исфроиа.

Научно-практическое значение работы. Результаты диссертации используются в курсах лекций по физиологии, читаемых па медицинском факультете Санкт-Петербургского государственного университета.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Всероссийской конференции молодых исследователей "Физиология и медицина" (Санкт-Петербург, 2005), 1 съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005), Х111 международном совещании и VI школе по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликована статья в отечественном реферируемом журнале и тезисы 3-х докладов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 153 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов исследования, 5 глав результатов исследования, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 259 источников. Диссертация иллюстрирована 4 таблицами и 29 рисунками.

Материалы и методы исследования

Исследование выполнено на крысах (530 животных) и лягушках (60 особей). В опытах на крысах использованы взрослые самки линии Вистар и крысята в возрасте 5, 12 и 25 дней, а также крысы-самцы с частичной нефрэктомией. До экспериментов все животные содержались в стандартных условиях. В экспериментах были использованы самцы лягушек Rana temporaria, опыты на лягушках проводили в мае, животные содержались в холодильной камере при температуре +5°С.

В экспериментах in vivo ненаркотизированным крысам зондом в желудок вводили GFP (0,034, 0,34, 3,4, 6,8 мкг/мл), YFP (0,00365, 0,0365, 0,365, 3,65, 7,3 мкг/мл) из расчёта 100 мкл на 150 г массы животного на 0.01 М PBS-буфере (рН 7,3). В других опытах крыс наркотизировали путем внутрибрюшинной инъекции раствора 0,75 % нембутала и 0,37 % хлоралозы из расчета 0,5 мл на 100 г массы

животного. Этим крысам вскрывали брюшную полость по средней линии живота, затем разрезали стенку пищевода в нижней его части и через разрез вводили зонд из полиэтилена, через который вливали растворы GFP и YFP или флюоресцеин (8 мкг/мл) в аналогичных количествах.

Через различные интервалы времени (каждые 3 мин до 33 мин, а также через 60, 120, 180, 240 и 300 мим) после введения белков перорально или непосредственно в кишку, крыс декагштировали. Затем разрезали брюшную стенку по средней линии живота и выделяли для фиксации отрезок тонкой кишки длиной 2 см на расстоянии 20 см от двенадцатиперстной кишки, отрезок толстой кишки длиной 2 см на расстоянии 1-2 см от слепой кишки, а также фрагмент коркового вещества почки или фрагмент печени. В контрольных опытах животным вводили по 100 мкл на 150 г веса фосфатного буфера (PBS) без белков.

В опытах in vitro крыс декапитировали, и выделяли такой же, как описано выше, участок гонкой кишки. После этого на дистальную часть каждого из отрезков кишки накладывали лигатуру, а в просвет кишки вводили раствор GFP и YFP в тех же количествах, что и в опытах in vivo. Изолированные отрезки кишки помещали в раствор Рингера для теплокровных (37°С). Далее через каждые 3 минуты после начала инкубации фрагменты кишки фиксировали для морфологических исследований.

Лягушкам in vivo вводили через рот в желудок резиновый зонд и вливали 100 мкл раствора GFP на 150 г массы животного в концентрации 0,34 мкг/мл на 0.01 М PBS-буфере (pH 7,3). Через каждые 3 мин до 33 мин, а также через 120 и 300 мин после введения GFP лягушек обездвиживали, после чего разрезали брюшную стенку по средней линии живота и выделяли участок тонкой кишки или фрагмент почки для морфологических исследований.

Кусочки ткани фиксировали, замораживали и готовили из них гистологические срезы в криостате Leica СМ1510 (Leica, Германия). Препараты изучали в флюоресцентном микроскопе TSC SL (Leica, Германия) с конфокальной

приставкой DM R (Leica, Германия), используя набор фильтров BP 450-490 и LP 515. На полученных имиджах с помощью компьютерной программы Image Tool III измеряли интенсивность флюоресценции клеток эпителия тонкой кишки и проксимального сегмента нефрона. Значение интенсивности выражали в условных единицах, которые рассчитывали как соотношение флюоресцирующих точек (пикселей) в пределах данного участка к несветящимся (шкала от 0 до 256). Сопоставляли интенсивность флюоресценции на равных по площади участках эпителия в разных вариантах опытов.

Данные обрабатывали статистически и представляли в виде M ± т. Дня сравнения и оценки достоверности различий использован г-тест Стьюдента. Использовали компьютерную программу Microsoft Excel Microsoft Office 2000.

Результаты исследования

Исследование слизистой оболочки тонкой кишки и эпителия почки крыс после введения зеленого и желтого флюоресцентных белков в кишку. Для того, чтобы исключить возможность токсического воздействия маркерных белков на ткани кишки и почки, были проведены предварительные эксперименты, в которых GFP и YFP применяли в различных концентрациях, а именно: 0,034, 0.34, 3,4, 6.8 мкг/мл - для GFP; 0,00365, 0.0365, 0,365, 3,65, 7,3 мкг/мл -- для YFP. Было установлено, что после введения в кишку крысы этих белков в концентрации 0,034 мкг/мл для GFP и 0,00365 мкг/мл для YFP. флюоресценции, отличающейся от фоновой, в эитероцитах не выявлялось. При использовании белков в концентрации от 3,4 мкг/мл для GFP и от 0,365 мкг/мл для YFP обнаружено увеличение количества бокаловидных клеток в эпителии кишки, и повышена вакуолизация в эпителиальных клетках проксимального канальца нефрона, что считается проявлением реакции эпителия на неблагоприятное неспецифическое воздействие (Блюгер и др., 1970; Вайсброг, 1972). Дня дальнейшей работы были использованы концентрации 0,34 мкг/мл для GFP и 0,0365 мкг/мл для YFP при этом сохранялась

целостность структур клеток эпителия и определялась специфическая флюоресценция.

Всасывание ОРР и УРР в тонкой кишке. После введения в просвет кишки 150 мкл на 100 г массы животного вРР и УРР специфическая флюоресценция клеток кишечного эпителия у крыс всех возрастных групп выявлялась уже через 3 мин. У взрослых крыс увеличение интенсивности свечения характеризовалось наличием максимума флюоресценции на 21 мин после введения маркерных белков в кишку (вРР - 18,7 + 2,3 усл. ед.; УРР - 33,7 ± 5,2 усл. ед.) с последующим понижением интенсивности свечения эпителиального слоя тонкой кишки (рис. 1). У 25-дневных крыс после введения ОРР и УРР в кишку интенсивность свечения энтероцитов оказалась такой же, как у взрослых крыс (рис. 1). В опытах на 12-дневных крысятах специфическая флюоресценция вРР и УРР, выявляемая через 3 мин, была несколько выше ее средних значений у взрослых и 25-пятидневных крыс (р<0,001). Максимум флюоресценции у 12-дневных крысят приходился на 15 мин после введения белка и равнялся 59 + 6,8 усл. ед. для вРР и 58,8 + 6,3 усл. ед. для УРР. У 5-дневных крысят максимум флюоресценции наблюдался еще раньше — уже на 9 мин после введения флюоресцентных белков, составив 90,0 + 10,5 усл. ед. для вРР и 94,0 + 10,9 усл. ед. для УРР. Значения максимумов у крыс всех возрастных групп достоверно отличались друг от друга (р<0,001). Следовательно, чем меньше возраст крысы, тем быстрее и активнее происходит всасывание белка в кишке.

Распределение Флюоресценции в энтероцитах после введения вРР и УРР в просвет кишки. Флюоресценция цитоплазмы эпителиальных клеток тонкой кишки была диффузной и выявлялась в случае ОРР в виде зеленого свечения, а для УРР в виде желтого свечения, как это видно рис. 2. Наиболее интенсивная флюоресценция наблюдалась в энтероцитах у пятидневных крысят. Во всех вариантах экспериментов флюоресценция отсутствовала в области межклеточных контактов. Интенсивность свечения маркерных белков в апикальной области цитоплазмы энтероцитов во всех вариантах была примерно в 1,5 раза больше, чем в базальной.

120

0) 100

С

>ч 60

£

и о 60

I

а

s и 40

о

н X 20

X

0

—♦— Взрослые

-25 дней

-к-12 дней 5 дней

Б

Время, мин.

Рис. I. Зависимость интенсивности флюоресценции клеток эпителиального слоя верхней трети ворсинки тонкой кишки от времени после введения GFP (А) и YFP (Б) в кишку у крыс разного возраста.

Абсцисса - время после введения GFP или YFP (100 мкл на I50 г массы животного), мин. Ордината - интенсивность флюоресценции в условных единицах. Достоверность отличий по отношению к взрослым крысам: * - р<0,001; ** - р<0,01.

Рис. 2. Флюоресценция Энтероцитов на максимуме эффекта после введения в просвет тонкой кишки раствора ОРР взрослым крысам (А) и крысятам в возрасте 25 (Б), 12 (В) и 5 дней (Г).

Условные обозначений мк - межклеточный контакт, ц - цитоплазма, щк -щеточная кайма, я - ядро [Время после введения вЬТ: 21 мин (А, Б), 15 мин (В), 9 мин (Г). Масштабная линейка на всех имиджах равна 10 мкм.

Флюоресценция после введения белка не была обнаружена в бокаловидных клетках эпителия кишки. В качестве контроля в этих экспериментах исследовали флюоресценцию в эпителии тонкой кишки без введения маркерных белков, в этом случае обнаруживалось только слабое неспецифическое свечение. В опытах с введением этих белков в просвет кишки специфической флюоресценции в клетках эпителия толстой кишки обнаружено не было.

Всасывание зеленого флюоресцентного белка в тонкой кишке лягушки. В опытах на лягушках показано, что специфическая флюоресценция вИР в эпителии тонкой кишки появлялась, как и у крыс, через 3 мин после его введения в просвет кишки. Максимальное свечение ОРР в энгероцитах наблюдалось через 15 мин после введения маркерного белка в кишку (29,0 + 3,6 усл. ед.). К 33 мин интенсивность свечения в клетках эпителия тонкой кишки лягушки снижалась до уровня контрольных значений.

Динамика интенсивности свечения ОРР в клетках кишечного эпителия лягушек была сходна с таковой у 12-дневных крысят (рис. 3).

Время, мин.

Рис. 3. Интенсивность флюоресценции эпителиального слоя верхней трети ворсинки энтероцитов тонкой кишки в зависимости от времени после введения GFP у лягушек. Абсписса - время (100 мкл на 150 г массы животного), мин. Ордината -интенсивность флюоресценции в условных единицах.

Однако максимум флюоресценции у лягу шек достоверно ниже (р<0,001), чем у 12-дневных крысят. Флюоресценция после введения GFP в просвет кишки в энтероцитах тонкой кишки лягушек имела диффузный характер, как и у крыс. В экспериментах без введения GFP флюоресценция представлена в виде фонового свечения (рис. 3).

Всасывание зеленого флюоресцентного белка в тонкой кишке крыс после частичной нефрэктомии. Крысам через 2 месяца после удаления левой почки и 2/3 другой вводили 100 мкл раствора GFP на 150 г массы животного. В этих опытах величина флюоресценции эпителия тонкой кишки через 20 мин после введения составляла 17.4 + 2.2 усл. ед„ что достоверно не отличалось от значений флюоресценции у контрольных крыс - 18.7 + 2.3 усл. ед. Флюоресценция в энтероцитах у крыс с частичной нефрэктомией носила диффузный характер.

Накопление зеленого и желтого Флюоресцентных белков в проксимальных канальцах почки после их всасывания в желудочно-кишечном тракте крыс. Для выяснения путей метаболизма всосавшихся в кишке белков были исследованы ткани печени и почки. У исследованных животных не обнаружено флюоресценции в клетках печени после введения маркерных белков зондом в желудок или непосредственно в кишку.

После введения наркотизированным животным в кишку или ненаркотизированным животным пероралыю зондом растворов GFP или YFP наблюдалась специфическая флюоресценция клеток проксимального отдела нефрона у крыс всех исследованных возрастных групп, а также у лягушек (рис. 4). В тоже время свечения не наблюдалось в клетках дистальных канальцев почки. В клетках канальцев мозгового вещества почки крыс специфической флюоресценции GFP и YFP также не обнаружено.

У крысят разного возраста и взрослых крыс наблюдалась сходная динамика накопления флюоресцентных белков в клетках эпителия проксимальных канальцев. Специфическая флюоресценция в эпителии проксимальных канальцев у крыс всех

Рис. 4 флюоресценция клеток эпителия мозгового и коркового вещества почки после введении 100 мкл раствора ОЕР на 150 I массы тела в просвет тонкой кишки. Условные обозначения: мв - мозговое вещество, кй ■■ корковое вещество, дк дн стальным канадец, кл -■ клубочек, нк - проксимальный каналец. Масштабная линейка равна 100 мкм.

возрастньЙ групп была обнаружена через 20 мин после введения маркерных белков, до этого времени (через 10 и 15 мин посте введения белков) специфическая флюоресценция не выявлялась. Через 2 ч величина флюоресценции возрастала (рис. 5).

Когда в опытах на взрослы* крысах время после введения маркерных белков было увеличено до 5 ч. то было установлено, что флюоресценция продолжала увеличиваться [/ достигала наибольших значений, сдежэвив 74.2 + 8.3 уел. ед. для О! Р и 88,3 + 9.6 усл. ед, для УРР. Наименьшие значения пикон интенсивности флюоресценции были «(регистрированы у взрослых крыс (50.41 5.9 усл. ел. для

60 -

ct

О

t; 50-u

¡5 40 -о о

ш 30 -s

0

1 20 -

X S

10 -о -

0 20 40 60 80 100 120 140

Время, мин.

Рис. 5. Интенсивность флюоресценции клеток эпителия проксимального канальца почки в зависимости от времени после введения зондом (наружный диамегр не более 1 мм) в желудок GFP у крыс в различные периоды постнатального онтогенеза.

Абсцисса - время после введения GFP (100 мкл на 150 г массы животного), мин. Ордината - интенсивность флюоресценции в условных единицах. Достоверность отличий от взрослых крыс: * - р<0,001.

вРР и 61,7 + 6,4 усл. ед. для УРР), а наибольшие - у 5- дневных крысят (58,1 ± 6,5 усл. ед. для ОРР и 72,5 + 7,7 уел ед. для УРР). Эти данные достоверно отличаются друг от друга (р<0,001). Таким образом, чем меньше возраст животного, тем интенсивнее происходит накопление флюоресцентных белков в клетках эпителия проксимальных канальцев нефрона.

Характер распределения маркерных белков в клетках проксимального канальца. Распределение флюоресценции в цитоплазме клеток проксимального канальца нефрона почки было неравномерным. У крыс всех возрастных групп интенсивная флюоресценция была распределена в этих клетках в виде образований

—*— Взрослые -«-25 дней -*-12дней

-*-5 дней *

округлой формы размером 0,5-2,0 мкм и с характерным зеленым свечением в случае с GFP и желтым после введения YFP (рис. 6). Через 20 мин после введения белка в кишку эти структуры были локализованы преимущественно в апикальной области цитоплазмы, через 2 ч они выявлялись во всей цитоплазме. У взрослых крыс через 2 ч после введения маркерных белков в кишку на полученных имиджах визуализировались единичные флюоресцирующие гранулы. В эпителиальных клетках проксимального канальца 12-дневных крысят количество гранул со специфической флюоресценцией было больше, чем у взрослых и 25-дневных крыс, и они выявлялись по всей площади цитоплазмы, достигая диаметра 1-1,5 мкм. У 5-дневных крыс через 2 ч после введения GFP и YFP в кишку флюоресцирующие гранулы также были распределены по всей цитоплазме. Единичные гранулы достигают размера до 2 мкм, более крупные гранулы, по-видимому, являлись результатом слияния мелких гранул и характеризовались более интенсивным свечением. В экспериментах с введением раствора PBS без флюоресцентных белков специфического свечения в клетках эпителия проксимального канальца нефрона выявлено не было ни в одном из вариантов опытов.

Накопление зеленого флюоресцентного белка в клетках эпителия проксимальных канальцев почки после его всасывания в желудочно-кишечном тракте у лягушек. Динамика накопления GFP у лягушек в проксимальных канальцах почки такая же, как и у крыс. Флюоресценция клеток эпителия проксимального канальца выявляется через 20 мин после введения GFP в желудок, а пик флюоресценции наблюдается через 5 ч (117,6+10,3 усл. ед.). Таким образом, скорость увеличения интенсивности свечения GFP в клетках проксимального канальца почки лягушек и крыс различных возрастных групп близка, но интенсивность свечения GFP через 5 ч после его введения у лягушек выше. Характер распределения GFP в клетках эпителия проксимального канальца нефрона был аналогичен распределению этого белка у крыс. Через 5 ч после перорапьного введения GFP в цитоплазме эпителиальных клеток обнаруживались флюоресцирующие гранулы, размером 1,5-

2 мкм (рис. 7А). При вводе НИН раствора РВЙ бе'; С11' наблюдалось ¡ишь слабое фоновое свечение (рис, 7Ь).

Рис 6 Флюоресценция в клетках эпителия проксимальною канальца почки через 2 ч введения после введения в просвет тонкой кишки раствора ОКР у взрослых крыс (А). 25-дневных крысят (В), 12-дневных крысят (В), 5-дневных крысят (Г).

Условные обозначения; пк - проксимальный каналец, при - просвет канальца, я -ядро. Масштабная линейка на вес\ имиджах ривн;| 10 мкм

Рис. 7. Флюоресценция ез клетках проксимального канальца почки лягушек через 5 ч после введения в желудочно-кишечный тракт раствора GFP (А) или в контрольных Экспериментах (Б) in vivo. Условные обозначения - см рис. 6. Масштабная пинейка на всех имиджах равна 10 .««и.

Накопление зеленого флюоресцентного белка в проксимальных канальцах почки после его всасывания в желудочно-кишечном тракте у крыс с частичной нефрзктомней. Накопление GFP в клетках проксимальных канальцев у крыс с частичной нефрэктомией было ниже, чем у контрольных крыс. Характер распределения QFP в клетках эпителия проксимального канальца у крыс с частичной нефрэктомией аналогичен описанному выше распределению этого белка у неопернрованных крыс (рис.8).

Накопление флюоресцеинз н проксимальных канальцах почки после его всасывания в желудочно-кишечном тракте. После введения 100 мкл флюоресцеина на 150 г массы животного в просвет тонкой кишки взрослых крыс оценивали характер его накопления. Интенсивное свечение обнаруживалось в клетках проксимального канальца, оно характеризовалось диффузным распределением по

О 100 200 300 400

Время, мин.

Рис 8 Динамика флюоресценция клеток эпителия проксималькот каиалыа почки после введений (Н:Р и желудочно-кишечный тракт крыс с частичной нефрэетомией. Абсцисса - время, мин Ордината -- интенсивность флюоресценции в условных единицах: А - частичная нефржгомия, ■ - контроль; п=!00 Достоверность отличил от крыс с частичной нсфрэктомией: 8 - р<0>№1

Рис. 9. Флюоресценция клеток эпителиального слоя проксимального кана.тьна почки после введения в просвет гонкой кишки флюоресценна (Л) или раствора GFP (Ь) у ВЗрОСШлх крыс Эксперименты ш vivo, время после введения флюоресцеина к í "г! Г* 2 часа.

Условные обозначения: пк - проксимальный каналец, прк просвет канальца, и -ядро. Масштабная линейка на всех имиджа* равна 10 чкм

цитоплазме (рис. 9А), в отличие от распределения маркерных белков, после введения которых флюоресценция была представлена в виде образований округлой формы (рис. 9Б).

Заключение

Задача работы заключалась в выяснении судьбы чужеродного белка, всосавшегося в кишке. В настоящее время не разработаны методы изучения всасывания нерасщепленных белков и полипептидов, ист данных для суждения о том, сколь широко распространено это явление в животном мире. Мы исследовати возможность всасывания в тонкой кишке флюоресцентного белка, который обладает флюоресценцией только при сохранении интактной структуры молекулы. Речь идет, в частности, о GFP, у которого только молекулы с сохраненной третичной структурой обладают флюоресценцией (Tsien, 1998). Для решения физиологической задачи - всасывания в кишке и аккумуляции в почке такого белка нами был использован высокочувствительный метод - конфокальная лазерная флюоресцентная микроскопия. Были использованы белки - GFP и YFP.

Была установлена флюоресценция в энтероцитах после введения в просвет кишки GFP и YFP, что свидетельствует о всасывании этих маркерных белков через люминальную мембрану в тонкой кишке. Полученные данные о всасывании флюоресцентных белков у крысят разного возраста согласуются с известными фактами всасывания пищевых белков материнского молока у млекопитающих в раннем онтогенезе (Ogra et al., 1977; Walker, 1986). Полученные результаты свидетельствуют о том, что всасываться в кишечнике млекопитающих могут не только белки, являющиеся обычными компонентами пищи, но и чужеродные белки, такие как GFP и YFP.

Продемонстрирована возможность всасывания флюоресцентных белков в гонкой кишке лягушек в экспериментах in vivo. Динамика всасывания флюоресцентных белков п эпителии тонкого кишечника у лягушек подобна динамике накопления этих белков у двенадцатидневных крысят.

Для решения вопроса о дальнейшей судьбе всосавшихся в кишке белков были исследованы клетки печени и проксимального канальца нефрона. ОРР и УГР не были обнаружены в клетках печени после их перорального введения крысам, но было отмечено их накопление в эпителиальных клетках проксимального канальца нефрона. Можно предположить, что всасываемые флюоресцентные белки поступают в портальный кровоток, но не извлекаются клетками печени и с током крови поступают в почки, фильтруются в ее клубочках, затем реабсорбируются клетками проксимального канальца, которые обеспечивают поступление в клетки профильтровавшихся белков для их последующего гидролиза.

Исследование флюоресценции эпителия проксимального канальца нефрона лягушек и крыс после введения маркерных белков в тонкую кишку свидетельствует о том, что аккумуляция белков, прошедших через эпителиальный барьер кишки без гидролиза и поступивших в кровь, происходит в почке как млекопитающих, так и лягушек. Накопление флюоресцентных белков клетками проксимального канальца нефрона у крыс с частичной нефрэктомией ниже, чем у контрольных животных.

Полученные данные дают основания считать, что наряду с классической схемой гидролиза пептидов и белков до аминокислот в кишечнике и их использования для построения эндогенных белков, существует еще один путь метаболизма белков. Начальным этапом этого пути является частичное всасывание белков в тонкой кишке в нерасщепленном виде и поступление чужеродного белка в кровь. Можно полагать, что после всасывания в кишке белок, поступивший в кровь, фильтруется в почечных клубочках и реабсорбируется из канальцевой жидкости клетками проксимальных канальцев нефрона.

Выводы

1. Разработан метод исследования всасывания флюоресцентных белков в тонкой кишке после введения белков зондом в желудок или непосредственно в тонкую кишку с помощью конфокальной флюоресцентной микроскопии.

2. У крыс показано всасывание в нерасшепленном виде зеленого или желтого флюоресцентных белков, флюоресценция в энтероцитах распределяется в цитоплазме диффузно, свечение выше в апикальной области цитоплазмы по сравнению с базалыюй. Зеленый и желтый флюоресцентные белки не абсорбируются клетками толстой кишки и не обнаруживаются в клетках печени.

3. Динамика всасывания у крыс характеризуется появлением флюоресценции в энтероцитах через 3 мин после введения белков в кишку, флюоресценция нарастает до максимума с последующим снижением через 20-30 мин до фоновых значений.

4. У крыс скорость всасывания маркерных белков и максимум флюоресценции в энтероцитах снижаются с возрастом животных.

5. После всасывания в тонкой кишке крыс и лягушек флюоресцентные белки поступают с током крови в ночки и накапливаются в эпителиальных клетках проксимального канальца нефрона в виде флюоресцирующих округлых образований диаметром 0.5-2.0 мкм.

6. У лягушек, как и у крыс, показано всасывание флюоресцентных белков в энтероцитах и их аккумуляция в эпителиальных клетках проксимального канальца почки. Величина и динамика свечения зеленого флюоресцентного белка в энтероцитах у лягушек сходны с таковыми у двенадцатидневных крысят, максимум флюоресценции в эпителиальных клетках проксимального канальца нефрона выше, чем у крыс.

7. У крыс с развивающейся почечной недостаточностью (через 2 мес после частичной пефрэктомии) снижена аккумуляция зеленого флюоресцентного белка в эпителии проксимального канальца.

8. Сделано заключение, что зеленый и желтый флюоресцентные белки могут абсорбироваться в энтероцитах без гидролиза, а после их всасывания в кровь реабсорбироваться и аккумулироваться: в эпителиальных клетках проксимальных канальцев нефрона, что свидетельствует о важной роли

почки в утилизации чужеродных белков. Этот путь поступившего в желудочно-кишечный тракт белка впервые показан у крыс в различные периоды постнатального онтогенеза, крыс с компенсаторной гипертрофией почки, а также у лягушек.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

I. Статья в реферируемом журнале:

1. Бурмакин М.В., Селиверстова Е.В., Наточин Ю.В. '"Накопление желтого флюоресцентного белка в почке после его всасывания в кишечнике у крыс". Росс, физиол. журн. им И.М. Сеченова, 2005, т. 91, N. 10, с. 1195-1204.

II. Тезисы докладов:

1. Бурмакин М.В., Селиверстова Е.В. "Иммунофлюоресцентный анализ распределения GFP в эпителии тонкого кишечника у крыс". Вестник-молодых ученых. Серия "Физиология и медицина". Сборник материалов Всероссийской конференции молодых исследователей, 14-16 апреля 2005 года, Санкт-Петербург, "Физиология и медицина", с. 17.

2. Бурмакин М.В., Селиверстова Е.В., Наточин Ю.В. "Накопление флюоресцентных белков GFP и YFP в почке после их всасывания в тонком кишечнике крыс". Научные труды 1 съезда физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005 г.), т. 2, с. 90-91.

3. Бурмакин М.В., Селиверстова Е.В. "Накопление в почке зеленого и желтого флюоресцентных белков после их всасывания в кишечнике крыс в постнатальном онтогенезе". XIII международное совещание и VI школа по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006 г.), с.39.

Тиражирование и брошюровка выполнены в учреждении «Университетские телекоммуникации» 197101, Санкт-Петербург, Саблинская ул., 14 Тел. (812) 233 4669

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бурмакин, Михаил Викторович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 - ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 I Мсасыизннс белков н продуктов нх пиролиза 9 и желудочно-кишечном тракте

12. Реабоорбцш белков и продуктов их гнлрошод в почке 2Я и. Метаболизм белков в организме млекопитающих в онтогенезе

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Объекты исследования

2-2. Методы исследования

ГЛАВА 3, РЕЗУЛЬТАТЫ

3.]. Исследование слизистой оболочки тонной кншкн н эпителия 55 почки крыс после в веления зеленого и желтого флюоресцентных белков в кишку

32, Всасывание зеленого н желтого флюоресцентных бел ков 64 в тонкой кишке

3,3. Накопление зеленого п желтого флюоресцытI их белков 8 1 в проксимальных каналыдех почки после нх всасывания в желудочно-кишечном тракте

3-4. Накопление флюоресценнп о проксимальных канальнлх пучки 99 после «о ккыншм в желудочно-кишечном тракте

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ т выводы 1|

Введение Диссертация по биологии, на тему "Всасывание белков в тонком кишечнике в постнатальном онтогенезе у крыс"

Ак1уа.1м1с1сн> проблемы. Согласно существующим представлениям белки * жслулочн о- юно е чноы тракте ГНДролюуются пвпндазами в Процессе пншенрекик до аминокислот. ли- н финептндои. которые прн участии переносчиков абсорбируются клетками тонкой кишки в крои1> <Л<Д»Ь1997; Г);Ш1е1. 2004), Считается, что нераешепленние белки способны всасываться юш при некоторых патологических состоящих, таких как шок, сслснв, панкреатическая недостаточность» воспалительные шболенаиия кишечника, аллергические заболевания (Гоитсг. 1997; Кл1рре]$, Репшпк.н, 2002; Цкппоп. 2004). Известно. что возможно нсасы ванне интакттгмх белков и желудочно-кишечном тракте на ранних стадиях поотшталыюго раямпм млекопитающих (Зуфаров н др., 1974; Нсшнп&, 1987: Ветхую с( а1„ 1994; Мскйоу. 1994), В то же нрс.11 имеются данные, которые свидетельствуют о всасывании белков и у из рослых млекопитающих {Мюо и др. 1989: Искепяоп е1 а!., 1999). Наивно было покатано, что нонапепгнл яргнинн-мэопресош, введенный и и но.тированную по методу Тнрн-Велла петлю тонкой кишки крыс, КАСывастсН без гидролиза с сохранением аитндиуретнчсской активности Шлшчин и др. 2003). Остается неясной судьба пептидов и белков, которые абсорбируются п Кишке и поступают во внутреннюю среду вцшпш и нерлешенленном аиле. В связи с этим возникают следующие »опросы: способны ли КЛС1Ы1 тонкой КИШКИ у животных на начальных этапах онтогенеза всасилат». непищевые чужеродные белки и сохраняется ли эта способность у взрослых особей, в каком органе происходит дальнейший метаболизм белкой, и фуишмшрупт ли эти механизмы у млекопитающих и амфибий, Ответу на эти встречи посвящено данное экспериментальное исследование.

Цел l исследования* Цель работы заключалась в изучении возможности всасывания в гонкой кишке у крыс и лягушек нсрасшеплснного белка нл примере клс1юю (GFP) и желтого флюоресцентных белков (YFP), л также » выяснении роли почек в дальнейшей нх утилизации на различных этапах поста гальното онтогенеза.

1) Разработка метода НСМЦПИШМ метаболизма GFP и YFP а организме у крыс и ляп.тек после введения этих белков а просвет тонкой кишки,

2) Изучение всасывдлн* GFP и YFP в кишке у крыс н рюлнчнис периоды постнатального онтогенеза и у взрослых лягушек.

3) Цссдедомине накоплен!и GFP н VFP и почке и печени после нх аиеления и кишечнику лягушек н у крыс.

4) Исследование исасмгания GFP » гонкой кишке у крыс с развивающейся почечной недостаточностью (после удаления 5'6 почек) и аккумуляции GFP в оставшейся почке,

Научная новизна. Разработан новый »плод дли исследования вСйеЫМЮМ и накопления и организме поступившего по внутреннюю среду нерасщсиленнот чужеродного белы на примере флюоресцентных белков. Впервые цоканию, что CFP и YI-P после нх введенн* юндо« t желудок крыс шш дягутиек или непосредственно а тонкую кишку ясаеымюте* нггсроингамн. а пнем аккумулируются в эпителиальных клетках проксимальных кчнальиев нефрони Установлено, что в раннем постнаталыюм онтогенезе у крыс всасывание флюорссценгных белков в кишке происходит интенсивнее. чем у взрослых животных. У частично нефрэктомиромнных крыс яеасымние чужеродных белков и их накопление в почке снижено по сравнению е контролем. Оси im и мс положение, выносимые на защиту.

1) GFP н YFP могут всосышпъс* в тонкой кишке у крыс н лягушек нераещеплеинымн.

2) Всасывание GFP н YFP в иггероцитах происходит интенсивнее у крыс в ранние периоды поегнаталыюго онтогенеза, чем j взрослых жи потных.

3) Исследованные белки после кх введения крысам H лягушкам зондом в желудок или о тонкую кишку накапливаются в лгнтелннльных шестках проксимального канальца почки, но не обнаруживается в к.тегках печени

4) У крыс через 2 меелиа после удаления 516 почек снижается накопление G IP в клетках проксимального отдел* нсфронц

H ay< m о- и ряхти ч «ское мачеине работы. Результаты диссертации используются в курсах лекций tío физиологии, читаемых ни медицинском факультете Сан Пе гербу р гс ко го государственного университета.

Апрабмцнй работы- Материалы диссертации доложены на Всероссийской конференции молоды* исследователей "Физиология и медицина" (Санкт-Петербург. 2005), I съезде физиологов СНГ (Сочи. Дагомыс, 2005), XIII международном совещании и VI школе по ЭВОЛЮЦИОННОЙ физиологии (Саихт-Петербург. 2006).

Публикации- По теме диссертации опубликована статья в отечественном реферируемом журнале и тезисы 3-х докладов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Бурмакин, Михаил Викторович

выводы

1. Разработан метод исследования всасывания флюоресцентных белков в тонкой кишке после введения белков зондом в желудок или непосредственно в тонкую кишку с помощью конфокальной флюоресцентной микроскопии

2. У крыс показано всасывание в нсрасшепленном виде зеленого или жел ioi о флюоресцентных белков, флюоресценция в зитероцитах распределяется в цитоплазме диффузно, свечение выше в апикальной области цитоплазмы по сравнению с батальной. Зеленый и желтый флюоресцентные белки не абсорбируются клетками толстой кишки и не обнаруживаются в клетках печени.

3. Динамика нсасывання у крыс характеризуется появлением флюоресценции в штероцзггах через 3 мии после введения белков в кишку, флюоресценция нарастает до максимума с последующим снижением через 20-30 мин до фоновых значений.

А. У крыс скорость всасывания маркерных белков н максимум флюоресценции в знтероцнтах снижаются с возрастом животных

5, После всасывания в тонкой кишке крыс и лягушек флюоресцентные белки поступают с током крови а почки и накапливаются в зпитслиальных клетках проксимального канальца иефрона а виде флюоресцирующих округлых образований диаметром 0.5-2.0 мкм.

6. У /ил ушек. как и у крыс, показано всасывание флюоресцентных белков а энтероцотлх и их аккумуляция в эпителиальных клетках проксимально! с» канальца ночки Величина и динамика свечения зеленого флюоресцентного белка в энтсрошгтах у лягушек сходни с таковыми у лвеиадиатидневных крысят, максимум флюоресценции и >ннтслиадьиых клетках проксимальною канальца иефрона выше, чем у крыс.

7. У крыс с развивающейся почечной недостаточностью (через 2 мес после частичной нефрэктомнн) снижена аккумуляция зеленого флюоресцентного белка в мнтелин проксимального канальца.

8. Сделано заключение, что зеленый и желтый флюоресцетггные белки могут абсорбироваться в знтероцитах 6« гидролиза, л после их иеаеывания в кровь рсабсорбироваться н аккумулироваться а эпителиальных метках проксимальных канальце« иефрона, что свидетельствует о важной роли ночки в утилизации чужеродных белков. Этот путь поступившего в желулочно- кишечный тракт белка впервые покязаи у крыс л различные периоды носпниального онтогенеза. крыс с компенсаторной гипертрофией почки, а также у лягушек

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бурмакин, Михаил Викторович, Санкт-Петербург

1. Блюгср А.Ф. Типы реакций знтерокпта при поражениях гяикиигералиюй системы. В hj.: Физиологи« » апология тонкой кишки. Матер, Всесоюш. конфер, гастроэнтерологов. Рига, 1970, - С, 4-7.

2. Брсслер D.M., Ниточки Ю.В. У пиление диуретиками секреции флюоресиеииа в проксимальном канальце ночки лягушки (прижизненное исследование метолом контактной микроскопии) » Бюлл. зксперим. бнол мед. 1973. - Т. 75- - N. 6. - С. 67-69,

3. Ввшкр Л. Физиология почек. 1 tep. с англ СПб,; Питер. 2000. 256 с.

4. ГннецинскиЙ Л.Г, Физиологические механизмы полно-солевого равновесна. М. - Л-: Наука, 1964. - 428 с.

5. Груздков A.A. Современные представления о переносе веществ через эпителиальный слой тонкой кишки // Филиал, жури, им. И,М. Сеченова. -1993. Т. 79.-N.6.-C. 19-32.

6. Длоута Г-, Кршечек И., Наточнн Ю- Онтогенез почки. J1.: Наука. 1981 -184 с.

7. Зааарзкн Л.А., Харазова АД Основы обшей цитологии, Л,; Изд-во Ленингр, ун-та, 1982. - 239 с.

8. Зуфаров К А Новые данные о пншеварнтелыю-всасывателшых функцияч кишкн и почки у новорожденных. Ташкент: Мсднннна УзССР.178.-32C,

9. Зуфароа К.А. Новые данные о пнщевирвтедьно-всасывательных функциях кишки н почки у новорожденных. Ташкент: Медицина УзССР, 1987. -226 е.

10. Зуфаров К.А. Гошмахер В М , Хндоятов Б.А. Цнтофункпнональные особенности почки. Ташкент: Медицина УэССР, 1974.-247 с

11. Игнатова М.С., Всльтшцся Ю.Е, Детская нефрологи«. Л.: Медицина, 1989.-456 с,

12. Лаврова li.A., Нзточнн Ю-В. Секреция органических кислот н оснований пачкой морских костистых рыб Н Архив анат., гнет., эмбрион. -1985.-Т. 88 -К. I--C 89-94.

13. Лондон E.C-, Кочнем ИЛ. Форма всасывания белка нз пнше&арнтелыюго тракта и дальнейшая судьба продуктов ккыинп // Арх, биол. наук. 1935. Т. 37, - N. L-C. 3-26.

14. Мало В.К. Гмошниский И.В. Нарушенная проницаемость кишечного барьера для макромолекул у детей раннего возраста " Вопр. лстск. диетол. -2003.-Т. L-N. L-С.75-78.

15. Мазо П.К., Морозов H.A., Ширина Л.Н. Всасывание белковых макромолекул в желудочно-кишечном тракте взрослых млекопитающих " Успехи физиол. наук. 19S9. -Т. 20, - N, 3, - С, 65-85

16. Малсев Г.В., Гннцбург А.Л, Методы флюоресцентной детекции и их применение в микробиологам H M саек генст,, ынкробяол. и вирусы, 2004. - N, 3, - С, 30-40,

17. Мосолов В.В. 11ратсолитнчсекие ферменты, М: Наука, 1971. - 414 с.

18. Наточнн Ю.В. Пруцкова Н.П,, Шахматова FH, Груздков A.A., Громова J1-B. Исследование возможности всасывания ннтактных нанолептидов в изолированной тонкой кишке крыс in vivo// ДАН 2003, -Т 388, N. 4,-С. 558-651.

19. Павлов И.П. Лскнин о работе пищеварительных желез. Новое изд. просмотр, авт. -М.:Лриродя»3917, -231 с.

20. Рябов С И. Семиотика и диагностика болезней почек. Л.: Медицина, 1974. -257 с.

21. Рябое С,И. Наточин Ю-В. Фуипцкншыш нефрологан, СПб.: Лань, 1997, 304 с.

22. Тимофеева Н.М., Иезуитова Н.Н, Громова Л-В- Современные представления о всасывании моносахаридов, аминокислот н пептидов в тонкой кишке млекопитающих ft Усп, физиол. наук. 2000, - Т. 31. - N, 4. -С. 24-37.

23. Уголев A.M. Физиология и патолопм пристеночного (контактного} пищеварения. Лл Наука, 1967.-472 с.

24. Уголев А,М Эволюция пищеварения к принципы эволюции функций. 'Элементы современного функционализма, Л.: Наука, 1985, - 544 е,

25. Уголев A.M. Естественные технологии биологических систем Л.; Наука, 1987, -165 с.

26. Физиология водно-солевого обмена н почки У Отв. ред. Ю.В. Наточии СПб.: Наука, 1993,-576 с.

27. Физиология всасывания, В сер.: Руководство но физиологии / Отв. ред. A.M. Уголев. Л.: Наука, 1977, - 668 с,

28. Финкснштейк ЯД. Афферентные н центральные механизмы регуляции водовыделнтелыюй и натрнйурегнчесхой функции почек. В кн.: Физиология почек. -Л~ Наука. 1972. С. 190-206.

29. Фундаментальная н клиническая физиология; учебник / Ред. Качкий AJ". Каменский А А- М.: Академия. 2004. - 1072 с.

30. Чиж АС Протеинурня: Клиническое значение и патогенез. Минск: Вышэ&шая игл. 1983. - 308 с.

31. Шейман ДА, Патофизиология почки; Пф. с англ, М. - СПб.: "Издательство БИНОМ". - 2001. - 248 с.

32. Abel JJ. Rovntree I.О. Turner В В. On the removal of the diffusible substances from the circular blood//L Pharmacol. Exptl. Titer. 1913-1914. Vol. 5 -P. 275-316

33. Abdcrhaldcn F. Symhcsc der Ccllbaustctne / Berlin. 1912. Ссылха из кн. Физиология всасывания. В сер.: Руководство по физиологии / Отв. ред. A.M. Уголсв, - Л.; Наука. 1977. - 668 с.

34. Adibi S.A. Clearance of dipeptidcs from plasma: role of kidney and intestine It Cibe Found. Symp. 1977, -N. 50. - P. 265-285.

35. Adibi S.A, Intestinal oligopeptide transporter: from hypothesis In cloning tt News Physiol. Sei. 19%. - Vol. 11 -P. 133-137.

36. Adibi SA. Renal assimilation of oligopeptides: physiological mechanisms and metabolic importance И Am. J, Physiol, Endocrinol. Mctab. 1997. - Vol, 272. - N. 5 - P. E723-E736.

37. Adibi Fogel M.R-. Agrawal R.M. Comparison of free amino aeid and dipeplide absorption in ihc jejunum of sprue patients U Gnstroenicrol 1974. -Vol. 67. - N. 4. - P. 586-591.

38. Adibi SA,. Kr/ysifc BA. Effect of nephrectomy and cnlcreclomy on pbstlU clearance of intravcnously administered dipeptides in rats H Clin- Sei. Mol. Med. -1977 Vol. 52,-p. 205-2(3.

39. Alpers D.H. Digestion and absorplion of carbohydnUes and protein» U Physiology of ihc gastrointcstinal tract / Ed. L.R. Johnson, N.-Y Raven Press -1987. - Vol. 2. - P. 1469-14*7.

40. Anioss M. Ricver J., Guillemin R, Release of goiiHdoiropins by oral admimsUation of synlhclic LRF or a (ripeptidc fragment of LRF U i. Clin. Endoerinol. MeUjb. 1972. - Vol. 35. - P. 175-177.

41. Ascoli M, Über den Mechanismus der Albuminurie durch Fireiwesa // Med. Wochcnäehr 1902. Bd. 49 - H. 11. - S. 39M01.

42. Asplund J.M., Gnimmcr R.H. Philips P.H. Absorption of eotosiral gamma-globulins and insulin by Ihc newborn pig // J. Animat Set. 1962 Vol. 21, P 412-413.

43. Axclsson I . Jakobsaon 1., Lindbcrg T. M acromo leeular absorption rn preterm and term infante // Acta Pedjatr. Seand. I9R9. - Vol- 78. - N. 4. - P. 532537.

44. Barajón G-A- Whal maltes a food protcin an ftllergco? // Curr Allergy Aahrna Rep, 2004. - Vol. 4. - N. t. - P. 43-46.

45. Barac G., Ni/et A., Renson J Absorption ct aclion sur la malricilc intestina le du Valj-octopcptide It Compl. Rend, Seanccs Soe, Biol. FÍI 1961. - Vol. 155. -N. 4. - P. 934-938.

46. Hcrgcr<wi M. Dobord L-, Huisser C Membrane permeability as a cause of transport defects in experimental Fanconi syndrome A new hyptxesix // J- Clin. Invest. 1976. - Vol. 57- - P. 1181-1189

47. Bergeron M . Vadeboncocur M. Antiluminal transport of 3-jixgimne and I-tcucine following microinjection in peritubular capillaries of the rat it Nephron. 1971, Vol, 8 - P. 355-366,

48. Bim ft. Vorum H„ Vetroust PJ„ Mocstnip S,K. Chrislensen FJ. Receptor-associated protein is important for normal processing of megalin in kidney proximal tubules Hi. Am. Sqc. Nephrol. 2000. - Vol. 11. - N. 2. - P. 191-202.

49. Bjerke T.r Nielsen R-, Sheikh MX, Christcnscn EJ. Stepwise degradation of NT tn pars convolute and recta of rabbit proximal tubules: evidence or axial heterogeneity //Am. J Physiol. 1993, - Vol. 264, - N. I. P. E45-E53,

50. Bockman D.E., Cooper M D. Pinocytosis by epithelium assotiatcd with lymphoid t'olbcules in the burse of Fabricius, appendix and Pcyer's pathes, An electron microscopic study // Am. J, Anal. 1973, - Vol. 136 - N. 4. - P. 455-478.

51. Bockman D.E. Winbom W,B, Light and electron microscopy of intestinal ferritin absorption. Observation* in sensitized and non sensitized hamsters (Mesocricclus auratus) //Anal. Rec, 1966. - Vol. 155. - N. 4. - P, 603-622.

52. Bokman S.H., Waid W.W. Renaturalion of Aequo rea gree-fluorescent protein // Bioehcm. Biophys. Res. Commun. 198. - Vol. 31, - N. 4 - P. 1372-I3S0.

53. Borges E.L-, de Fatima Leite M„ Barbosa A J. Alvcs J.B, Route of jejunal mucosa absorption of trypsin demonstrated by immunofluorescence ,'V Histochcm. J. 2002. - VoJ. 34. - N. 11*12. - P 525-528.

54. Bowers C.Y.T Schatly A.V.„ Lnzmann F., Boler J„ Fotkers K. Porcine thyrotropin releasing hormone is (pyro)glu-his-pro(Nli2) tf Endocrinol 1970.

55. Vol 86, N. 5. - P 1143-1153.

56. Cawagna M,< Shayakul C., Trotti D. Sacchi V.F., Harvey W,R„ 1 lediger M-A- Molecular characteristics of mammalian and insect amino acid transporters: implications for amino acid homeostasis //J, Exp. Biol. 1997 - Vol, 200, - N. 2. - P, 269-286

57. Chatelet F„ Brianti E., Roneo P. Roland J„ Verrousl P- Ultraslruelural localization by monoclonal antibodies of brush border antigen» expressed by gtomenili. I. Renal distribution H Am. J. Pathol. 1986 - Vol, 122 - N. 3, - P 500-511.

58. Christcnsen E.I, Pathophysiology of prolein and vitamin handling in proximal tubttle // Nephrol. Dial, Transpl 2002, Vol. 17. - Ruppl. 9- - P. 5758,

59. Christeitten ILL. Bim H. Mega!in and eubilin: synergistic endoeyiic receptors in renal proximal tubule tt Am. J- Physiol. Renal Physiol. 2001. - Vol, 280.-P.F562-F573,

60. ChristenKn E.L, Gburek J. Protein rcabsorptiom in renal proximal tubule-function and dysfunction in kidney pathophysiology II Pediulr Nephrol 2004, -Vol. 19, -N. 7.-P. 714-721

61. C'hrislensen E,I„ Gltcfluum J . Moestrup S.K. Renal tubule gp330 is a calcium binding receptor for endoeytic uptake of protein II J. Histochem. Cytochem. 1992. - Vol. 40. - P, 1481-1490.

62. Christensen HJ. Коху так» R., Dautrv-Varsat A. Cuhilin mediated, megalin assisted accumulation оГtransferring in proximal tubule // J, Am. Soc, Nephrol. -2000, -Vol. 11. -P. 49 A,

63. Christensen Е Ц Mosfcaug J.O,+ Vorum H. Evidence for ait essential role of megalinc in iranscpilhelial transport of retinal H J. Am. Soc. Nephrol 1999. Vol.10 P, 685*695.

64. Christensen EX. Nielsen S., Moestfup S,K. Bone C-. Maunsbaeh A.B. de Herr E., Roneo P. Hammond T.G., Verrousi P. Segmental distribution of the cndocytosis receptor gp330 in renal proximal tubules // Eur, J, Cell, Biol 1995.1. Vol, 66. P 349*364.

65. Christensen LI. Verroust P.J. Megalin and cubilin, role in proximal tubule and during development // Pediatr. Nephrol. 2Q02. - Vol. 17. - N. 2. - P. 993999.

66. Christensen E,l„ Willnow Т.Е. Essential role of megalin in renal proximal lubule for vitamin homeostasis U J. Am. Soc. Nephrol. 1999. - Vol. 10. P. 2224-2236.

67. Cohnhcim O. Die Umwandlung des Eiweiss durch die Darmwand ft Hoppc-Seyier's Z. Physiol. Chem. -1901.- Bd, 33. S. 451^65,

68. Corlney M.A-. Sawin LL, Weiss D.D. Renal tubular protein absorption in the ran Hi. Clm. Invest. 1970. Vol. 49. - P. 1-4.

69. Craft II.,, Geddes D„ llyle C.W., Wise I J., Mattcws D.M. Absorption and malabsorption of glycine and glycine peptides in man // Gut. 1968. - Vol. 9. - N. 4. - P 425-437

70. Crumcri A., Whitihorn E.A., Tate E„ Stemmer W P.C. Improved green fluoresccnl protein by molecular evolution using DNA shuffling // Nature Biotcenol, 1996. - Vol, 14. -N. 7, - P. 315-319.

71. Cui S,. Verroust P.J., Mocstrup S.K., Christensen E.I. Megalin"'gp330 mediates uptake of albumin in renal proximal tubule // Am. J. Physiol. 1996. -Vol. 271,-P. F90Ö-F907.

72. Danforth E-, Moore R O Intestinal absorption of insulin in the rat 11 Endocrinol, 1959. Vol, 65.-N. l.-P. 11S-123.

73. Daniel H. Molecular and tnte^ative physiology of intestinal peptide transport li Annu. Rev. Physiol. 2004, - Vol, 66, - P. 361-384.

74. Daniel H., Boll M.„ Wenzel U. Physiological importance and characteristics of peptide liamport in intestinal epithelial celts // V-lh Intent. Svmp, on digestive physiology in pigs. Bad Doberman: EAAP Publ. 1994. - VoL l.-P. 1-7.

75. Daniel H . Elerget M. Cellular and molecular mechanisms of renal peptide transport //Am, J. Physiol. Renal Ptry^tol- 1997. - Vol- 273.- P. FI-F8.

76. Daniel H . Rubio-Aliaga I- An update on renal peptide transporters // Am. i, Physiol Renal. Physiol, 2003, - Vol. 2Ä4. - P. F855-F892.

77. Dickenson B.L. Badiuukgan KL., Wu I., Ahouse J.C . Zhu X. Si mister N.E. lïlumberg R.S. Lencer W.l. Bidirectional FcRn-dependent IgG transport in apolarized human intestinal epithelial cell line II J. Clin. Invest. 1999. - Vol. 104. N,7.-P. 903-9II,

78. Ericbson R tl . Kim Y.S. Digestion and absorption of dietary protein " Annu. Rev Med.: Sdcc. top. Clin. Sei, 1990- - Vol. 41. - P- 133-139.

79. Farquhar M.G , Saito A., Kerjasehki D. Orlando RA. The Hcymann nephritis antigenic complex: megalin (gp330) and RAP U J. Am. Soc. Nephrol. -1995. Vol. 6. - P. 35-47.

80. Fei YJ. Kanai Y, Nussbetger S. Gonapathy V., Lelbach F.H. Romero M l . Singh S.K., Boron W I' . Hcdiger M A. Fxpression cloning of a mammalian proton-coupled oligopeptide transporter U Nature 1994. - Vol. 368. - P. 563-566.

81. Fisher R.B, Absortnion of protein tt Proc, Nutr. Soc. 1967. - Vol- 26. - N. I.-P. 23-27,

82. Fitzgerald J. F., Kollmeier PK., Adamsons R.J Butt K.M. 1 lochman R.A., Dennis C. Effect of hypertonic solutions on intestinal mucosal integrity il Surg. Forum. 1968. - VoL 19. - P. 297-299

83. Founricr E. Allergy (o cow's milk H Allerg. Immunol. {Paris). 1997. Vol, 29. P. 25-27,

84. Freeman HJ., Sleisengcr MH , Kirn Y.S. Human protein digestion and absorption: Normal mechanisms and protein-energy metabolism tt Ctb. Gasttoenlcrol 1983. - Vol, 12. -N. 2. - P. 357-378.

85. Fricdrtch M, Die intestinal Phase der Peptidabsorption // Nshrung. 1982, -M, 26. S, 887*901

86. Fyfe J .Cm Giger U„ Hall C.A„ Jczyk P.F., Klumpp S.A.t Levine J.S. Patterson 1)1 Inherited selective intestinal cobalamin malabsorption and cobalamin deficiency in dogs // Pediatr Res. 1991 Vol, 29. -N. 1. - P. 24-31.

87. Gartbter M.L G- Absorption of intact proteins and peptide» H In; Physiology of the Gastrointestinal Tract, New York: Raven, 1994. P. l?95-tS20.

88. Gasley-Smilh J.R. The passage of ferritin into jejunal epithelial cells // Experientia 1967. - Vol 23. - N. 5, - P. 370.

89. Gburek J., Bim H„ Verrouat PJ., Goj B„ Jaeobsen C„ Moestrup Willnow T.E„ Qirisiensen E.l. Renal uptake of myoglobin is mediated by the endocytic receptors mcgahn and cubilin //Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2003. -Vol. 285. - N. 3. - P. F451-F458.

90. Gefcle M. Renal tubule albumin transport H Annu Rev. Physiol. 2005. -Vol. 67.-P.573-594,

91. Ghitesco L., Bendayan M. Transendolhelial transport of scrum albumin: a quantitative inimunocytochcmical study /¡J. CclL Biol. 1992, Vol, 117. - N. 4.1. P. 745-755.

92. Govaerts A,. Dehme R, Influence of intensity of mascuiar exertion on diuresis, albumin and cilindruria // Brüx,-med 1940, Vol, 20, P. 361 -365.

93. Graney D.O. The uptake of ferritin by ileal absorptive cells in suckling rats// Am. J. Anal 1968. Vol- 123- - P 227-229.

94. Greger R. Sodium transport in the kidney ff Am. J. Med. Sei 200«, Vol, 319 N. 1,-P. 51-62.

95. Griesbeek O,, Baird C.S,. Campbell R.E,. Zacharias D A, Tsien R.Y. Reducing the environmenlnl sensitivity of yellow fluorescent protein: mechanism and applications. // J. Biol Chem. 2001. - Vol. 276. - N. 31. P. 291SS-29194,

96. Grimble G.K, The significance of peptides in clinical nutrition it Anna. Rev Nulr. 1994. - Vol. 14, - P. 419-M7.

97. Groneberg D.A., Döring F. Eynott P,R., Fischer A. Daniel H. Intestinal peptide transport: ex vivo uptake studies and localization of peptide eiUTicr PEPT1 // Am. J, Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2001. - Vol, 281. - N. 3. - P G697-G704.

98. Groneberg D.A,. Nickolaus M . Springer J., Döring F , Daniel R Fischer A. Localization of the peptide transporter PEPT2 in the lung: implications tor pulmonary oligopeptide uptake U Am. J, Pathol 2001, Vol. 158. - N. 2. - P. 707-714,

99. HaJbday R. The absorption of antibodies from immune sera by the gut of «he young rat I) Proc. Roy- Soc. (L.) Biol. Sri, 1955. - Vol. 143. - N. 912. P. 408413.

100. Hiumnad SM, Banh J.L., Knaak C-. Argravcs W,S. Megalin acts in concert vvith cubilin io mediate endocytosis of high density lipoprotein» // J. Biol. Chem. 2000, Vol. 275. N. 16. - P. 12003-12008

101. Hcktoen L., Kanal P.M . Dragged! i.-R. A study of pfotein absorption from the digestive tract by the precipitin test (with especial reference to ihyroglobulin} tt JAMA 1925, Vol 84. - N. 2. - РЛ14.

102. Hilpen h, Nykjacr A„ Jacofecn C., Wiilokai G. Nelsen R„ Moesmip S.K. Holler li,. Luft F.C., Christensen ILL Mcgalin antagonizes activation of the parathyroid hormone receptor H 1. Biol. Chem, 1999. - Vol. 274. - N. 9. - P. 5620*5625,

103. Hirst ВЛ Dietary regulation of intestinal nutrient carriers // Proe, Nutr, Soc, 1993. - Vol 52 . - N. 2. - P. 315-324.

104. Jakoi F-.R., Camhjer J, Saslow S. Transcpithelial transpon of maternal antibody: purification of IgG receptor from ocwbom rat intestinc // J. Immunol. -1985, VoL 35.-N.5.-P, 3360-3364

105. Joehims K. Kaup F.J., Drommcr W, Immunoeleelron microscópica! demonstration of the absorptíon of eotostral IgG bv smul I intestinal cntcíoeytes in ncwbom rats // Res. Vet. Set. 1994. - VoL 57. - N. 2. - P. 146-151.

106. Jowph B. Bhargava K.K., Tronco G.G„ Kumaran V., Palestra C.J. Gupta S. RcgTiEation of hepatobiliary transpon activity and ndalavaaive identifica« ion ofcytokine-depcndent liver inflammation Hi. Nticl. Med, 2005, - Vol, 46.-N- I- -P. 146-152.

107. Kalsura T„ Imii K l Intestinal absorption of drugs mediated by drug transporters mechanism and regulation // Drug Mctab. Pharmacokin 2003. - Vol. 18.-N, L-P. 1-15.

108. Kelly WJV. Passage of insulin through the wall of the gastro-imesiinale tract of the infam mouse H Nature. I960. - Vol. 186. - N. 4729. - P, 971,

109. Kcrjaschki Farquhar M.G. The pathogenic antigen of Heymaim nephritis is a membrane glycoprotein of the renal proximal tubule brush border U Prot Natl Acad.Sei. USA, I9S2,- Vol. 79,-N, 18.-P.5557-5561

110. Kidron M., Bar-On H., Beny E.M„ Ziv E, The absorption of insulin from various regions of the rai intestine H Life Sei. -1982. Vol. 31 - N, 25. - P. 28372841.

111. Kilbcrg M.S., Stevens B,R„ Novak D A Recent advances in mammalian amino acid transport // Arntu. Rev. Nutr. 1993. - Vol. 13,-P. 137-165.

112. Kim Y,S. Intestinal mucosal hydrolysis of proteins and peptides ! Peptide transport and hydrolysis. Ciba Found. Symp, 50. Amsterdam etc. 1977. - P. 151171,

113. Kmppcls I M ,. Penninks All. Assessment of protein uttergemciiy studies in brown nanny rats // Ann. N,-Y. Acad- Sei. 2002. - Vol. 964. - P. 151-161.

114. Kowalczuk S, Brocr A. Muruunger M-. Ticöe N. Klingel K., Broer S. Molecular cloning of the mouse IMINO system; an Na'- and C!-dependent proline transporter It Bioelwm, J, 2005, - Vol. 386. - N. 15. - P 417-422,

115. Kozynki R.» Fyfe J. Kristiansen M. The intrinsic factor-vitamin B|j receptor, cubilin. is a high-affinity' apolipoprotein A-l receptor facilitating endoevtosis of high-density lipoprotein U Nat, Med- 1999. - Vol. 5. - N. 6. - P. 656-661.

116. Mackenzie N.M. Fe-reccptor mediated transport of immunoglobulin across the intestinal epithelium of the neonatal rodent // Immunol. Today 1984 Vol. 5. - P. 354-366.

117. Mackenzie N.M. Inhibitor of receptor-mediated endocytosis IgG by cmterocytcs isolated from neonatal rat jejunum II Cell, Biol Int Rep 1985. - Vol. 9. - N, 10.-P. 923-937.

118. Masuda O- Nakamura Y Takano T. Antihypertensive peptides are present in aorta after oral administration of sour milk containing these peptides to spontaneously hypertensive nits // J. Nutr. 1996, - Vol. 126, - N. 12. - P. 30633068.

119. Matthews D.M. Absorption and Malabsorption von Erweip-Vcrdauungs-Produkten H Klin Wschr. 1969. - Bd. 47. -H. 8. - S. 397-414.

120. Matthews D M. Intestinal absorption of peptides II Physiol. Rev 1975, Vol. 55- -N. 4- P 537-608,

121. Matthews D.M. Protein absotplkin; development and present state of the subject / N.-Y.: Wi ley-Liss. 1991. 322 p.

122. Matz M V., Lukyanov K.A , Lukyanov SA. Family of iho grvcn fluOfGSCCftf proicin: joumey o the end of üic ninbow U Btocssays. 2002. - Vol. 24. - P. 953= 959.

123. Maunsbach A B, Cciiular mectoinwms of tubufar proiein transpon <t tnt Rcv, Physiol. 1976. - VoL 1I- -P 145-167,

124. Mciscl II., Hockclmann W. Bioacüve peptides cncryptcd in milJt prolcins proteolytic adivoiion and ihropbo-fundional properties U Antonie Vúii Lccuwcnhock. 1999, - VoL 76. - N. 1-4. - P. 207-215.

125. Miyamoto Y t Ganapathy V„ Barias A,. Neuben K . Banb A. Lcibach F.H. Role of dipeptidyl peptidase IV in uptakc of pe pude nfrrogen from p-easomorphin rn rabbit «nal BBMV // Am. J. Physiol. 1987. - VoL 252.- N, 4. - p, F670-677.

126. MiyawikJ A. Tíien R.Y. Moniloring protein conformations and inleractioru by fluoresccnce resonante energy iransfer bctween muíants of grecn fluoreseent protein /1 Methods Enzynwl. 2000 - Vol. 327.- P. 472-500.

127. Moestrup S.K., Bim H., Fisher P.B. Megalin-mediated endocytosis of transcobalamine-vitamin-Bii complexos suggcsts a role of the receptor in vitamin-B,: homeostasis 1/ Proc, Nati, Aead. Sci. USA. 1996. - VoL 93. - N. 16, P. 8612-8617.

128. Mocslnip S.K.H Cui S,. Vorum H-. BRgO|Énl C, Bjem SEf Noms K. Gliemann J, Christcnsen £J. Evidence thai epithelial glycoprotein 330/megalin mediales uptake of potybasic drugs H J, Clin, Invest. 1995, - Vol. 96. - N. 3. - P 14041413.

129. Mocstnip S.K., Scbousboe J. Jacobsen C. ß2-glycoprotein-! (opohpoprotein H) and ß2-gJycoprütein-I-phosphohpid complex harbor a recognition site for the endncytic receptor mcgalin tt J. Clin. Invest. 1998. - Vol. 102. - N, 5. - P. 902909.

130. Morise IT. Shimomura O., Johnson F.H-. Winant J- Intermolccular energy transfer in the bioluminescent system of Aequorea // Bioebem, 1974, - Vol. 13. -N, 12. - P 2656-2662.

131. Mostov K G, Transepithcliat transport of immunoglobulins // Annu Rev Immunol 1994. - Vol. 12. - P. 63-84.

132. Nielsen R. Endocyiosis in renal proximal tubules, Experimental electron microscopical studies of protetn absorption and membrane traffic in isolated, in vitro perfused proximal tubules // J. Dan, Med. Bull. 1994. - Vol. 41, - N. 3. P 243-263.

133. Nielsen R-, Sorcnscn B.S. Birn H. Christenscn E.I. Ncxo E- Transcellular transport of vitamin B(12) in LLC-PK1 renal proximal tubule cells H J- Am. Soc, Nephrol, 2001, - Vol 12.-N. 6, -P. 1099-1106.

134. Nishihato T , Rvtting J H . Kamada A. Higuchi T. Enhanced intestinal obsorption of insulin in rats in the presence of sodium 5-meihoxy-saIicicytaic It Diabcts. 1981. - Vol .30,-N, 12--P. 1065-106?,

135. Niwa H., Inouye S, Hirano T, Matsuno Kojima S. Chemical nature of the light emitter of the Aequorea green fluorescem protein U Prac. Nali. Acad, Sei. USA. 1996. - Vol. 93. -N. 24, - P. 13617-13622.

136. Nykjir A-, Dragun D-. Walthcr D. An endocytic pathway essential for renal uptake and activation of Ihc Steroid 25-iOH) vitamin D3 // Cell. 1999. - Vol- 96. - N. 4. - P. 507-515.

137. Ogibara H., Sailo H. Shin B.C., Terado T„ Takenoshiia S. Nagarnaehi Y„ Imu K . Taluiia K Immwno-localimion ot' H/pcptide cotninspoTter in rai digestive trad // Bioehem Biophys. Res. Commtin 1996. - Vol 220. - R 3. - P 848-852

138. Ogra S.S., Weintraub D,. Ogra P.L Immunologic aspcets of human colostrum and milk i! J Immunol. 1977, - Vol, 119. - N. 1. - P. 245-248.

139. O'Kanc R.L., Vina J.R., Simpson I., Hawkins RA. Na+-dcpcndenl neutral amino acid transporters A. ASC, and N of the blood-brain barrier: mechanisms for neutral amino acid removal II Am. J. Physiol. Endocrinol. Melab. 2004 Vol-287 N. 4. - P. E622-E629.

140. Orlando R.A., Rader Aulhcr F,. Ywiudci H-. Posncr B.I., Bergeron J J-Farquhar M.G. Mcgaltn is an cndocyiic receptor for insulin H J. Am. Soc. Nephrol. 1998. - Vol. 9- - N. 10,-P. 1759-1766.

141. OrmO M., Cubitt A.B., Kaflio K., Gross L.A., Tsien R.Y., Remington S.J. Crystal structure of the Aequorea victoria green fluorescent protein (I Science -1996. Vol. 273. - R 6. - P 1392-1395,

142. Palacin M-, Haevez R.T Bertran I., Zor/ano A, Molecular biology of mammalian plasma membrane amino acid transporters U Physiol, Rev. 1998. -Vol, 78, N4,-P. 969-1054.

143. Pierce A.Em, Risdall P.C., Shaw II Absorption of orally administrated insulin by the new-bom calf// J. Physiol. 1964. - Vol. 171,- N. I. - P. 203-215.

144. Plait S. Digestion in infancy // Federal. Proc. 1961- - Vol. 20, -R 1, - P. 188-195.

145. Prasher D C, Eckenrode V.K., Ward WW. Prendergast F G-. Cormier M J. primary' structure of the AequOK* vicloria green-fluorescent protein // Gene. 1992. Vol. Ill -N. 2. P 229-233.

146. Ramsmoorthy S„ Liu W„ Ma Y.Y., Yang-Feng TX Ganapalhy V Lcihach I El. Proton'peptide cotrunsportcr fPEPT2) From human kidney: functional characterization and chromosomal localization ti Biochim. Biophvs. Acta. 1995. -Vol, 1240.-N. E-P, 1-4.

147. Reíd 1i G., llynn G.C. Chramophore formation in jpcen fluorescent protein ft Biochcm. 199?. - Vol. 36. - P. 6786*6791.

148. Rizzulo R, Brini De Giorgi F., Rossi R„ Hcim R„Tsien R.Y. Pozzan T. Double labelling of subcellular structures with organelle-iargcted GFP mutants in vivo tt Curr- Biol. 1996. - Vol, 6. - N. 2. - P. 183-188

149. Robcm P,R.t Burney J.D. Blach K.W., Zaloga G.P. Effect of chain length an absorption of biologically active peptides peptides from the gastrointestinal liact ft Digestion. 1999. - Vol. 60. - N. 4. - P. 332-327,

150. Roberts P R., Zaloga G.P. Dietary bioactive peptides it New Horifc 1994. -Vol, 2. - N. 2. - P. 237-243,

151. Roberts P R. Zaloga G.P. Cardiovascular cfleets of camosine H Biochcm 2000. Vol. 65. - N. 7, - P. 856-861.

152. Rubio-AI¿H$a I. Boll Daniel H. Cloning and characterization ofthe gene encoding the nwuse peptide transponer PEPT2 // Biochem. Biophys. Res. Comtmin, 2000 - Vol, 276, - N. 2. - P. 734-741.

153. Rucklidgc GJ,. Riddoch G.L, Williams L.M., Robins S.P Auloradiografic studies of the renal clearance of circulating type collagen fragments in the fill // Coll. Relat. Res 1988. - VoL 8. - N, 4. - P. 339-348.

154. SatTran M., Franco-Saenz R. Kong A,. Papshadjopoulos D., S?oka F. A model for the study of the oral administration of peptide hormones /1 Can. J. Riochem. -1979 Vol, 57, - N. 6. -P, 548-553.

155. Sahall D„ Mullie/ K„ Chaielet F Duputs R-, Rooco P,. Vcrrous* P. Characterization oi' a 2S0-kD protein restricted to ihe coated pits of the renal brush border and ihe epithelial cells of the yolk // J, Exp. Med- 1988. - VoL 167. -P. 213-218.

156. Sahali D. Mulliez N„ Chatelct F., Ckaddle D. Sabourin J.C-, Roux C. Ronco P„ VcntKist P, Competitive inununochemistry and ontogetiily of two closely related coated pits proteins It Am. J. Pathol. 1993. - VoL 142. - N. 5. - P. 1654-1667.

157. Saito A. Pitfromonaco S-, Loo A.K., Farquhur M.G, Complete eloning and sequencing of rat gp330rmegalin". a distinctive member of the tow density lipoprotein receptor gene family H Proc. Nail. Acad Sci. USA. 1994. - Vol, 91, -N. 21.- P. 9725-9729.

158. Saito H-, Inui K. ¡peptide transporters in apical and basolateraJ membranes of Ihe human intestinal cell line Caco-2 1/ Am. L Physiol. Gastrointcst- Liver Physiol. 1993, Vol, 265. -N. 2. - P. G289-G294.

159. Saiio H., Okuda M.r Terada T Sasaki S . Inui K. Cloning and charactcri/ation of a rat H "peptide cotransporlcr mediating absorption of bctii-Lactam antibiotics in the intestine and kidney U J, Pharmacol. Exp. Ther. 1995, Vol, 275.-N. J, - P 1631-£637.

160. Saito H. Terada T., Okuda M., Sasaki Inui K. Molecular cloning and tissue distribution of rat peptide transporter PEPT2 // Biochem, Biophys, Acta. -1996, Vol, 1280. -N. 2.-P. 173-177.

161. SakaLn K. Yamashita T., Maeda M , Moriyama Y . Shimada S., Tohyamu M. Cloning of a lymphatic peptide/histidme transporter tt Biochem. J. 2001. -Vol-356.-Pi. I.-P. 53-60.

162. Sawada K., Terada T., Saito H., Inui K.I. Distinct transport characteristics of basolatcral peptide transporters between MDCK and Caeo-2 cells II Pdagers, Arch, 2001.-Vol. 443,-N. I.-P. 31-37.

163. Schlagheck T.G., Webb K.E, Characterization of peptides from the gastrointestinal tract of calves // Fed. Proc, = 1984 Vol. 43. - P, 671-677.

164. Schwegler j.S- Hcppelmann B. Mildenberger S. Silbernagl S, Receptor-mediated endocyiosis of albumin in cultured opossum kidney cells: a model for proximal tubular protein «absorption // Pflugers Arch- 1991. - Vol. 418. - N. 4. -P. 383-392.

165. Seal C.J. Parker D.S. Isolation and characterization of circulating low molecular weight peptides in steer, sheep and rat portal and pcriphcrial Wood U

166. Comp. Blechern Phystol, B, Bioihem. MoL Biol. 199. - Vol. 99. N. 3 I' 679-685.

167. Seeüiaram В., Chrislensen t.,. Moestrup S.K., Hammofld T.G. Verrousl PJ. Identification of rat yolk »c target proicin of terajogcnie iffiibodiei, gp280. as iiHrinsie faetor-cobalamin receptor Hl. Clin. Invest. 1997. - Vol. 99. - N. 10. P 2317-2322.

168. Sharpe SJ. Gamble G D. Sharpe D.N Cholesterol-Iowering and blood pressure effects of nnmunc milk U Am. J. Clin. Nuif. 1994. - Vol. 59. - N. 4. - P 929-934.

169. Shen H-. Smith D.E., Yang Т., Huang Y.G., Sehnermann J B„ Brosius F-C-III. Localization of PEPTI and РЁРТ2 proton-coupled Oligopeptide transponer mRNA wtd protein in rat ktdney tt Am. J. Physiol Renal Physrol, I9W. - Vol. 276. - N. i. - P F658-F665.

170. Shimomura Ö. Johnson l H., Saiga Y. Fxtraction. purifiealion and praperties of acquorin. a bioluminesccnt protein front the luminous hydromed usan. Aequorea ,71 Cell. Comp. Physich 1962, - Vol, 59, - P. 223-239.

171. Silbemag. M Physiologie und Pathophysiologie der renalen AminosäurenResorption // Pädiatrie und Pfidologic. 1981. - Bd t6. - S. 9-22,

172. Smith H.W. Lectures on the kidney, University of Kansas: Kansas Lawrence, 1943, - 134 p.

173. Smith J.L.* Arcaga C, Heymsfield S.B. Increased ureagencsis and impaired nitrogen use during infusion of a synthetic amino acid formula: a controlled trial // N. Engl. J- Med- 1982, - Vol. 306, - N. 17. - P, 1013-1018

174. Sousa M M., Norden A.G.W., Jacobscn C, Willnow T.E, Christensen EX, Thakker R.V., Verroust P.J., Moestrup S.K., Saraiva M.J, Evidence for the role of megalin in renal uptake of transthyretin tt J. Btol. Chem. 2000, Vol, 275, - N, 49,-P 38176-38181

175. Slacey G., Koh S., Granger C, Becker J.M. Peptide transport in plants tt Trends Plant Sei, 2002, - Vol, 7. - N. 6, - P, 257-263.

176. Staub J J. Girard J Muller-Brand J., Noelpp B„ Wcmer-Zodrow L Blunting of TSH response after repeated oral administration of TRH in normal and hypothyroid subjects tt J. Cltn, Endocrinol, Metab, 1978, - Vol. 46. - N, 2. - P. 260-266,

177. Steel A., Nussberger S„ Romero M^., Boron W.F., Boyd C.A., Itedigcr M.A Stoichiometry and pH dependence of the rabbit proton-dependent oligopeptide transporter PepTI tt J, Physiol. 1997. - Vol. 498. - Pi 3. - P. 563569.

178. Stevens B.R Amino acid transport in intestine tt Mammalian amino acid transport: mechanisms t Eds. D. Haussinger. M.S. Kildbcrg N.-Y Plenum Press. 1991.-P. 117-142.

179. Suropáo B.EL, Maaek T. Kinetics, competition. and selectivity of tubular absorption Of proteins// Am. J, Physiol. 1982, - Vol, 243. - N,4, - P. F379-F392.

180. Taylor W.H. Biochemistry of pepsi nes H Alinientaiy canal Biol-, Digestion, rumenal. Physiology (Handbook of physiology). 1968. Sect. 6, Vol. 5. - P. 2567-25S7.

181. Tclcmo E. Westrom B.R., Karisson 8 W, Proteolytic activity as a regulator of the transmission of orally fed protein from the gut to the blood scrum in the sucking rat // Biol. Neonate, 1982, - Vol. 41. -N, I.- P. 85-92.

182. Tenida Т., Sauada К. Ito Т., Saito К. Hashimoto Y. Inui К, Funcional expression of novel peptide transporter in renal baso Lateral membranes it Am. J, Physiol. Renal Physiol 200Ü. - Vol. 279- - P. F851-FB57.

183. Thamotharan M. Lombardo Y.B., Bawani S.Z., Adibi S.A. An aclive mechanism for completion of final stage of protein degradation in the liver, lysosomal transport of dipeptides UI, Biol. Chemistry 1997. - Vol. 272. - N. IB. -P 11786-11790.

184. Tom D, Digestibilion des proteins en fonction de la tai I i des fracnions pfoteiquis // Med. Nutr, 1991. - Vol 27. -N. 3.- P. 129-132.

185. Tucn R.Y. The green fluorescent protein H Annu Rev Biochem. 1998. -Vol. 67. - P. 509-544.

186. Uhlenhuth PI Neuer Beitrag /um spec ¡flehen Nachweis van Eivcwcbs auf biologischen Wege II Deutsch. Med. Woehenschr, 1900, - Bd. 26 - S. 734.

187. Van Aubel R.A., Mascreeuw R., Rüssel F.G, Molecular pharmacology of renal organic anion transporters // Am. J. Physiol. Renal, Physiol 2QOO, Vol. 279. - N, 2- - P. F216-F232,

188. Van De Poll M.C., Socters P.B., Deutz N.&, Fearon K.C., Dejong CIL Renal metabolism of amino acids: its rote in interorgan amino acid exchange // Am. J. Clin. Nutr. 2Q04. - Vol- 79. - N. 1 - P. 185-197.

189. Van Slyke D.D., Meyer G.M. The amino acid nitrogen of the blood, Preliminary experiments on protein assimilation //J. Biol. C'hcm 1912. - Vol. 12. P. 399-410.

190. Verroust PJ. Christensen Ei. Megalin and cubilin the story of two multipurpose receptors unfolds // Nephrol. Dial. Transpl. - 2002, - Vol. 17. - N. II.-?. 1867-1871.

191. Viertzc E-. Kantor O., Kausz M , Ncmeth J, Arimura A , Gonda P. Koves K. Compnlive study on the appearance of various bioaetive peptides in ibrcgut derivales during the ontogenesis H1. Physiol. Paris. 2001. - Vol. 95. - N. 1-6. -P. 99-103.

192. Walker WA Allergen absorption in the intestine. Implication to food allergy1 in infants // J. Allergy Clin. Immunol. 1986. - VoL 78. - N. 5. - P. 10031009.

193. Warshaw A.L., Walker W.A., Isselbaebw K J. Protein uptake by the intestine, evidence for absorption of tnlacl macromoleculcs H Gastroenterol. -1974. VoL 66. - N. 5. - P 987-992

194. Weaver 1.T., Gonella PA., Israel EJ., Walker WA. Uptake and transport of epithelial growth factor by the small intestine epithelium of the fetal rat II Gastroenterol 1990 - Vol.98 -N. 4, - P 828-937

195. Webb ICE- lr J R., Dirien?» D.B., Matthews J.C. Recent development in gastrointestinal absorption and tissue utilization or peptides: a review // J. Dairy Set -1993. VoL 76. - N. L - P. 35 N361.

196. Westrom B.R., Svendsen J., Ohitson B.G., Taggesson G. Karisson B.W Intestinal transmission of macromolecules (BSA and PITC-labelled dexrrans) in the neonatal pig it Biol, Neonate. 1984. - Vol. 46.-N, L- P. 20-26.

197. Wheeler S. Mcgiiui BJ., Lucas M.L., Morrison J.D. Absorption of biologically active peptide hormones from the small intestine of rat II Acta Physiol. Scand 2002. - Vol. 176. - N. 3. - P. 203-213,

198. Wiedemann in Elke C., Sptndler Funke W. Craks in the P-can: fluorescent protein from Anemonia sulcata (Anthozoa, ActinanaJ H Bioehem -2000. VoL 97. - N. 26. - P. 14091-14096.

199. Willnow Hilpert J., Armstrong SA,, Rohlmann A„ Hammer R.E-. Bums D.K., Herz J. Defcctivc t'orebrain devctoprocnl in mite laeking gp330'megalin II Proc- Natl. Acad- Sei. USA. 1996. - Vol. 93. - N. 16 P, 84608464.

200. Wilson S.J. Vi'I/er M. Absorption of undigested protein in human begins // Am, J. Diseas, Children. 1935, - Vol. 50 - N. L- P. 49-54,

201. Wiscman G, Absorption of amtna acid II In: Handbook of physiol, -Washington. ¡968 - Vol. 3. - sect 6, - P- 1277-1307.

202. Wiscman G, Site« of dipephde hydroliscs in relation lo sites of histidine and glusocc activc transpoTt in hamster intestine ff J. Physiol, {L.) 1983. - Vol. 342. -P. 421-435.

203. Xu D, Kozyraki R, Newman T.C., Fyfc J,C, Саки с evidenee of an iKcessory activity required speeifieally for cubilin brush-border expression and intriiBic factor-cobttlamm absorption // Blood I999, - Vol. 94. - P. 3604-3606.

204. Yamashila 1. Shimada S., Guo W„ Sato К, Kohmura Y. . Hayakawa T-, Takagi T . Tohyama M. Cloning and functional expression of a brain peptidclustidine transportcr // J, Bial. Chem 1997. - Vol. 272. - N. 15. P 10205-102 IL

205. Yang F Mo« L.G„ Phillips G.N. The moleeutar stmeture of green tluorewcnl protein ff Nal. Biotechnol. 1996. - Vol. 14. - N. 10. - P. 1246-1251,

206. Yolfcen R H., Losonsky (LA. Vondcrfeeht S . Leister F-. Wee S B. Antibody to human nrtavin» in coWs milk //N. Engl. J. Med I9B5 Vol. 312, N. 10. -P, 605-610.

207. Young Jj\. Frccdman В S. Renal transport of ammoacids Clin, Chem, 1971,-Vol, 17,-P.245-266,

208. Zaccolo M. lise of Chimeric Fluorescent Proteins and Fluorescence Resonance Energy Transfer to Monitor Cellular Responses H Circulation Res. 2004 Vol 94, N. 7. - P. 866-873.

209. Zaloga G.P . Siddiqui R A. Biologically active dietary peptides '■' Mini-Rev Med. Chem. 2004. - Vol. 4. - P. 815 -821,

210. Zaloga G.P, Ward KA. Prielipp R.C. F.lTeci of enteral diets on whole body and gut grottih in unstressed rats H JPEN J. Parente*. EmeraL Nuir, 1991 Vol 5. N. I . - P. 42-47.

211. Zhou X., Ihamotilaran M. Gangopadhyav A . SerdikolT С- Adibi S.A. Characterization of an oligopeptide transporter in renal lysosomes ff Biochem. Biophys. Acta. 2000, - Vol. 1466. - N. I -2. - P. 372-378,

212. Ziv E. Bendayan M. Intestinal absorption of peptides through the cntcrocytes II Mictdsc. Res. Tech. 2000. - Vol. 49. - N. 4. - P. 346-352.