Влияние внутриутробной гипоксии на процессы пролиферации и свободнорадикального окисления в миокарде белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза

Крыжановская, Светлана Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние внутриутробной гипоксии на процессы пролиферации и свободнорадикального окисления в миокарде белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Влияние внутриутробной гипоксии на процессы пролиферации и свободнорадикального окисления в миокарде белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза"

На правах рукрписи

Крыжановская Светлана Юрьевна

влияние внутриутробной гипоксии на процессы пролиферации и свободнорадикального окисления в миокарде белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза

03 00 25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

164914

Владивосток - 2008

003164914

Работа выполнена в Центральной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО Дальневосточного государственного медицинского университета Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РОСЗДРАВа Научные руководители

доктор медицинских наук, заслуженный деятель науки РФ,

профессор Тимошин Сергей Серафимович

доктор медицинских наук Сазонова Елена Николаевна

Официальные оппоненты

доктор биологических наук, профессор Вараксин Анатолий Алексеевич доктор медицинских наук, профессор Радивоз Михаил Иванович Ведущая организация

Амурская государственная медицинская академия

специализированного диссертационного совета

Д 208 007 01 при Владивостокском государственном медицинском университете (690950, г Владивосток, пр Острякова, 2)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета (690950, г Владивосток, пр Острякова, 2)

Автореферат разослан »1^2008 г

Ученый секретарь д м н , профессор,

Диссертационного совета Рева Галина Витальевна

Защита состоится

года в

часов на заседании

Актуальность темы Внутриутробная гипоксия (ВУГ) является наиболее распространенной причиной приводящей к нарушению развития плода [Дещекина МФ, 1990, Сенькевич OA и соавт, 2006] Частота встречаемости осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы у новорожденных, перенесших перинатальную гипоксию, составляет, по данным разных авторов, от 40 до 100% [Прахов А В , 1998, Шабалов H П , 1999, Симонова Л В, 2001] О снижении компенсаторных возможностей сердца после перенесенной ВУГ и отсроченной манифестации таких нарушений свидетельствуют клинические и экспериментальные данные [Кельмансон И А , 1999, Li G et al, 2004, Netuka 1 et al , 2006]

В литературе встречаются макроскопические и

ультрамикроскопические описания постгипоксических изменений миокарда плодов и новорожденных [David H, 1984, Задорожная ТД, Давиденко OA, 1988, Murotsuki J, 1997] Однако нами не обнаружены данные о таком важном показателе тканевого гомеостаза, как состояние пролиферации в миокарде млекопитающих, перенесших ВУГ

Период активной пролиферации кардиомиоцитов ограничен ранними этапами онтогенеза [Румянцев П П , 1982] Формирующийся в этот период суммарный геном кардиомиоцитов определяет, в основном, резерв роста сердца у взрослых млекопитающих и, следовательно, его компенсаторные возможности Размер суммарного генома миокарда зависит не только от генетической программы, но и от условий перинатального периода развития [Бродский В Я , 1986, 1995]

Существенным звеном патогенеза постгипоксических нарушений у новорожденных является активизация процессов свободнорадикального окисления [Saugstad О D , 2005] Активные метаболиты кислорода (АКМ) служат не только деструктивными молекулами, но и выполняют функцию мессенджеров, в том числе могут участвовать в регуляции прохождения клетками митотического цикла [Гамалей И А , 2001] Коррекция биогенеза

АКМ играет важную роль в защите миокарда от постгипоксических нарушений [Бокерия Л А и соавт , 2000, Капелько В И , 2004, Маслов Л Н и соавт, 2006] Мы не встретили данных о взаимоотношениях между постгипоксическими структурными изменениями в миокарде новорожденных и биогенезом АКМ

Регуляторные пептиды (РП) участвуют в регуляции биологических функций в норме и в условиях патологии Профилактическое антенатальное введение некоторых РП экспериментальным животным препятствует развитию последствий пренатального гипоксического стресса [Маслова MB и соавт, 2001, Соколова НА и соавт, 2002] В ряде клеточных популяций происходит нормализация показателей пролиферативной активности [Уткина Л И , Тимошин С С , 1991, Лебедько О А и соавт, 1994, Ганьчева Е А и соавт , 1997]

В научно-производственном объединении «Пептос» и лаборатории химии пептидов кардиологического научного центра РАМН был синтезирован ряд РП - синтетических аналогов эндогенных опиоидных пептидов Среди них - седатин (аналог дерморфина) и неопиатный аналог лей-энкефапина (НАЛЭ) На основе этих РП планируется создание фармакологических средств Учитывая антигипоксантные свойства ряда РП, а также способность РП влиять на ранний постнатальный морфогенез миокарда [McLaughlin PJ, 1994, Ventura С et al, 2003], можно предположить эффективность использования пептидных регуляторов для коррекции постгипоксических нарушений структурного гомеостаза миокарда млекопитающих в постнатальном периоде

Цель исследования Изучить характер влияния внутриутробной гипоксии на процессы пролиферации и свободнорадикального окисления в миокарде белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза

Задачи исследования

1 Изучить влияние внутриутробной гипоксии на показатели пролиферации в миокарде новорожденных белых крыс

2 Изучить влияние внутриутробной гипоксии на показатели пролиферации в миокарде белых крыс в позднем молочном периоде

3 Изучить влияние внутриутробной гипоксии на параметры ядрышкового аппарата клеток миокарда белых крыс в раннем постнатальном периоде

4 Оценить состояние свободнорадикального окисления в миокарде и сыворотке крови новорожденных белых крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии

5 Оценить возможность коррекции нарушений, индуцированных внутриутробной гипоксией, у белых крыс с помощью регуляторных пептидов

Научная новизна

1 Впервые проведен комплексный анализ показателей пролиферативной активности миокарда новорожденных млекопитающих, подвергнутых тяжелой ВУГ

2 Впервые продемонстрирована антиоксидантная активность РП седатина и НАЛЭ в сердце и сыворотке крови новорожденных животных, как в норме, так и при окислительном стрессе

3 Впервые показана возможность коррекции постгипоксических изменений у новорожденных млекопитающих с помощью седатина и НАЛЭ

Практическая значимость работы Результаты данной работы могут быть использованы при определении показаний и противопоказаний к использованию лекарственных препаратов, созданных на основе исследуемых пептидов Выявленное в работе позитивное влияние седатина и НАЛЭ на выживаемость животных, подвергнутых ВУГ, может служить

экспериментальным обоснованием перспективности использования фармакологических препаратов на основе этих РП в неонатологии

Основные положения, выносимые на защиту

1 Внутриутробное гипоксическое воздействие индуцирует ряд постнатальных морфогенетических изменений в миокарде, имеющих структурный след, как минимум, до конца молочного периода (до 21 дня жизни у крыс)

2 У животных, перенесших ВУГ, проявления окислительного стресса регистрируются как минимум до конца периода новорожденности

3 Введение седатина или НАЛЭ новорожденным животным, подвергнутым ВУГ, способно препятствовать пролонгированию окислительного стресса и снизить уровень летальности

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на 11 международном русско-японском симпозиуме (Ниигата, 2004), на VIII Краевой конференций молодых ученых и аспирантов, секция медицинские науки (Хабаровск, 2006), на научно-практической конференции с международным участием «Пути реализации приоритетного национального проекта в сфере профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний» (Хабаровск, 2007), на совместном заседании сотрудников центральной научно-исследовательской лаборатории, кафедр патофизиологии, нормальной физиологии, гистологии и эмбриологии, анатомии человека ДВГМУ (2007)

Публикация результатов работы. Основные положения диссертации отражены в 10 печатных работах 5 статьях и 5 тезисах докладов В том числе 3 статьи опубликованы в ведущих рецензируемых научных изданиях

Объем и структура диссертации Диссертация состоит из оглавления, списка сокращений, введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 5 глав собственных исследований, обсуждения, выводов и библиографического указателя

Объем диссертации вктючает 151 страницу машинописного текста, 33 таблицы, 28 рисунков (в том числе 11 микрофотографий) и список литературы (272 источника) Диссертация изложена на русском языке МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Моделирование внутриутробной гипоксии Использовали самок белых крыс 3-4 месячного возраста Животных с 14 по 19 день гестации на 4 часа ежедневно помещали в барокамеру и создавали разрежение, которое соответствует высоте 9000 м над уровнем моря (давление 224 мм рт ст) Потомство подопытных и интактных крыс забивали методом быстрой декапитации на 5, 7 и 21 сутки после рождения Согласно классификации Западнкж ИП (1974) период с 1 по 7 сутки после рождения именуется периодом новорожденности Возраст с 8 по 21 сутки - инфантильный, или поздний молочный период Всего исследовано потомство 63 самок крыс (597 крысят)

Приготовление гистологических препаратов Сердце подопытных животных извлекали сразу после эвтаназии и фиксировали в смеси 70% этанола формалина и ледяной уксусной кислоты в соотношении 20 1 1 в течение суток Для иммуногистохимического исследования использовали в качестве фиксатора 10% раствор формапина на фосфатном буфере Затем препараты промывали в течение суток и обезвоживали в батарее восходящих спиртов Биоптаты заливали в парафин и готовили срезы толщиной 5-6 мкм на микротоме ' Leica"

Изучение процессов пролиферации проводили в субэндокардиальных слоях миокарда с помощью следующих методов На препаратах, окрашенных гематоксилином Лилли-Майера и эозином, подсчитывали число фигур митоза путем просмотра не менее 5000 ядер и вычисляли митотический индекс (МИ) в промилле

Для анализа ДНК-синтетической активности клеток миокарда у новорожденных белых крыс использовали метод авторадиографии

Животным за 1 час до эвтаназии вводили ЬГ-тимидин из расчета 1 мкКюри на 1 г массы (уд активность 84 Кюри/моль) Радиоавтографы готовили по принятой в лаборатории методике Индекс меченых ядер (ИМЯ) определяли путем просмотра 1000 клеток в субэндокардиальных слоях миокарда каждого отдела сердца и выражали в процентах Интенсивность метки (ИМ) рассчитывали как среднее число треков на 50 ядер в каждом отделе миокарда

В желудочковом миокарде 21-суточных животных с помощью иммуногистохимического окрашивания выявляли ядра, экспрессирующие антигены пролиферирующих ядер (PCNA) При данном методе исследования метятся ядра клеток, находящиеся в разных фазах митотического цикла, кроме Go [Toschi L, Bravo R, 1988] Иммуногистохимическое окрашивание проводили по протоколу, рекомендуемому фирмой DAKO (Дания)

Микроскопирование препаратов проводили с помощью микроскопа «Jenalumar», иммерсионного объектива 90х, окуляров 10х

Оценка параметров ядрышкового аппарата кардиомиоцитов позволяет косвенно охарактеризовать белоксинтетические процессы в клетке [Мамаев НН и соавт, 19S9] Окраску препаратов проводили AgN03 по методике, описанной в работах Мамаева НН и соавт (1989) и Коржевского Д Э (1990) С помощью компьютерной морфоцитометрии на комплексном анализаторе изображения "МЕКОС-Ц" определяли среднее число и площадь ядрышек путем просмотра не менее 50 ядер в субэндокардиальных слоях каждого желудочка

Процессы свободнорадикального окисления в миокарде и сыворотке крови новорожденных крыс оценивали методом хемилюминесценции (XMJT) Регистрацию ХМЛ осуществляли на люминесцентном спектрометре LS 50В «PERKIN ELMER» Сигнал стандартизировали с

помощью встроенной программы "Finlab" Спонтанную и индуцированную Fe2+ ХМЛ исследовали по методу Ю А Владимирова (1991) Определяли светосумму за 1 минуту спонтанной XMJ1 (Scn), величина которой коррелирует с интенсивностью свободнорадикальных процессов, максимум быстрой вспышки (HI) индуцированной ХМЛ, свидетельствующий о содержании гидроперекисей липидов, светосумму (SlHlu) за 2 минуты после "быстрой" вспышки, отражающую интенсивность накопления перекисных радикалов

Кинетику ХМЛ, инициированную Н202 в присутствии люминола [Арутюнян А В и соавт, 2000], анализировали по двум параметрам максимуму быстрой вспышки (Н2), указывающему на потенциальную способность исследуемого биос^бстрата к перекисному окислению и светосумме (S2„Ha) за 2 минуты, величина которой зависит от активности антиоксидантной антирадикальной систем защиты

Исследуемые вещества Для оценки корригирующей роли РП были выбраны следующие вещества Седатин - аналог дерморфина [H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH] Особенность структуры седатина - наличие остатка аминокислоты L-аргинин в N-концевом положении Для исследования возможной роли аргинина в реализации эффектов седатина, использовали вещество аналогичной структуры, но не содержащее эту аминокислоту безаргининовый аналог седатина [H-Tyi-D-Ala-Phe-Gly-OH]

В работе использовали также пептид НАЛЭ - неопиатныи аналог лей-энкефапина [H-Phe-D-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-OH] Это вещество не обладает аффинностью к известным опиоидным рецепторам Как и седатин, НАЛЭ содержит остаток аминокислоты L-аргинин в краевом положении, но в отличие от седатина, на С-конце

Растворы РП вводили 5-кратно внутрибрюшинно со 2-го по 6-й день жизни в дозе 100 мкг / кг Контрольные животные получали эквиобъемное количество изотонического раствора хлорида натрия Эвтаназию

проводили в возрасте 7 дней, то есть через одни сутки после последней инъекции, и в возрасте 21 день, то есть через 15 суток после последней инъекции.

Статистическая обработка результатов исследования проведена с использованием t-критерия Сты-одента с применением программы Statistica 5.0. Различия между группами считали достоверными при р < 0.05.

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о выраженном повреждающем влиянии гипоксии на систему «мать-плод». Среди подопытных самок было зарегистрировано 5,4% летальных случаев. В группе интактных самок таких случаев не было.

В 10,7% случаев гипоксическое воздействие привело к мертворожденное™ или гибели всего помета в течение 12 часов после рождения. Летальность потомства подопытных крыс в течение первых трех недель постнатального периода выросла почти в пять раз (на 487%>) в сравнении с контролем (рисунок 1). В отличие от контроля, в подопытной группе летальные случаи регистрировались не только в период новорожденное™, но и на второй и третьей неделях постнатального развития, что может свидетельствовать о недостаточности компенсаторных процессов, наступлении дезадаптации органов и систем.

■ 1 неделя □ 2 неделя НЗ неделя

-!-1

0 10 20 30 40%

Рисунок 1. Влияние внутриутробной гипоксии на летальность белых крыс в течение 21 суток постнатального периода (%).

контроль ВУГ

Масса тела крыс подопытной группы в период новорожденное™ была достоверно ниже контрольных показателей (рисунок 2) К возрасту 10 суток разница массы тела контрольных и подопытных животных нивелировалась Более того, к возрасту 21 суток наметилась тенденция к инверсии соотношения этого показателя Сходную динамику массы тела животных, подвергнутых ВУГ, описывали [Савченков Ю И, Лобынцев КС, 1980, вп^ е1а1, 1999]

Относительная масса сердца белых крыс группы «ВУГ» в возрасте 5 суток оказалась достоверно выше, чем в группе «контроль» (рисунок 2) В дальнейшем этот показатель не отличался от контроля на статистически значимом уровне Абсолютная масса сердца подопытных крыс достоверно не изменялась относительно контрольных показателей во все изученные возрастные периоды (рисунок 2) Следовательно, динамика относительной массы сердца обусловлена динамикои массы тела подопытных животных Наши данные согласуются с результатами, полученными другими авторами [Савченков Ю И , Лобынцев К С , 1980, Ь1 в й а1, 2003]

масса тела масса сердца относительная масса

сердца

В 5 сутки □ 7 сутки ■ 21 сутки

Рисунок 2 Динамика соматометрических показателей белых крыс, подвергнутых ВУГ Примечания 1) данные представпены в % от уровня соответствующей контрольной группы 2) - р < 0,05 по отношению к контролю

Результаты анализа показателей пролиферации в миокарде 5-суточных животных подопытной группы свидетельствуют об увеличении пролиферативной активности клеток миокарда На этом сроке наблюдения достоверно возрастал митотический индекс в субэндокардиальных слоях миокарда желудочков и число ДНК-синтезирующих ядер (таблица 1)

Стимуляция клеточного деления после ВУГ является, по-видимому, компенсаторной реакцией в ответ на увеличение клеточных потерь Гипоксия стимулирует процессы апоптоза в кардиомиоцитах [Наипз1ейег А й а!, 1998, В Шаг РР й а1, 2002]

Таблица 1

Влияние ВУГ на показатели пролиферативной активности и ядрышкового

аппарата клеток миокарда пятисуточных белых крыс

Показатель Контроль(п=10) ВУГ (п=10)

Левый желудочек

МИ%о 4,62 + 0,48 7,61 +0,80'" |

ИМЯ,% 8 89+0,50 10,73+0,42^1

ИМ 28,91+0,99 27,64+0,79

Число ядрышек 3,26+0 27 3,48+0,10

Правый желудочек

МИ,%о 3 24 + 0,35 5,74+0,49-!

ИМЯ,% 7,69+0,34 8,88+0,33* |

ИМ 26,26+0,78 27,63+1,04

Число ядрышек 3,13+0,12 3,56+0,13"!

Примечание р < 0 05 по отношению к контролю

Активизация ядрышкового аппарата клеток миокарда может свидетельствовать об усилении белоксинтетической функции [Мамаев Н Н и соавт, 1989]

Мы сопоставили показатели пролиферации миокарда пятисуточных крыс, подвергнутых ВУГ, в группе самцов и в группе самок Оказалось, что ВУГ-индуцированные изменения митотического индекса и показателей синтеза ДНК более выражены у новорожденных самцов, чем у самок (рис>нок 3) В контрольной группе изучаемые показатели у самцов и самок не отличались На основании полученных данных можно предположить, что повреждающее влияние ВУГ на сердце более значительно у плодов мужского пола

Исследование активности ДНК-синтетических процессов в субэндокардиальных слоях миокарда 7-суточных крыс, подвергнутых ВУГ, не выявило достоверных изменений количества меченных Н'-тимидином ядер (таблица 2) Таким образом в отличие от 5-суточных животных,

250 --

200 --=- \

150---- ---_ —

% 100 --ИГЛ-■ ---1 _

контропя

и I ы -

имя ми имя ми

псвып /кеп\дочек правын желудочек

■ самки □ самцы

_ _*

\ровеш,

I II

Рисунок 3 Изменения показателей пролиферации миокарда пятисуточных белых крыс, подвергнутых ВУГ, в зависимости от пола

Примечания 1) данные представлены в % от уровня соответствующей контрольной группы, 2) * - р < 0 05 по отношению к контролю

у 7-суточных белых крыс подопытной группы отсутствовало достоверное увеличение числа ДНК-синтезирующих ядер При этом отмечалось снижение ИМ в левом желудочке, что косвенно свидетельствует об увеличении продолжительности клеточного цикла

МИ в миокарде 7-суточных белых крыс, подвергнутых ВУГ, несколько превышал контрольные показатели (таблица 2) Это может быть обусловлено большим числом делящихся клеток, хотя нельзя исключить замедление прохождения клетками митоза

Одновременно нарастала активация ядрышкового аппарата По данным морфоцитометрии достоверно увеличивалось число и площадь ядрышек, что расценивается как свидетельство стимуляции синтеза белка в клетке (таблица 2)

Таблица 2

Влияние ВУГ на показатели пролиферативной активности и ядрышкового

аппарата клеток миокарда семисуточных белых крыс

Показатель Контроль(п=10) ВУГ (п=10)

Левый желудочек

МИ,%0 3,82+0,33 4,79+0,27

ИМЯ,% 8,57+0,69 9,08+0,58

ИМ 29,7+0,76 25,4+1,17-1

Число ядрышек 2,29+0,08 2,68+0,15"|

Площадь ядрышек, мкм" 2,68 ^0,24 3,56+0,27"!

Правый желудочек

МИ,%о 4,05+0,45 5,80+0,60-1

ИМЯ,% 8,17+0,69 9,21+0,68

ИМ 28,5+0,94 26,9+0,87

Число ядрышек 2,01+0,10 2,50+0,15" Т

Площадь ядрышек, мкм2 2,55+0,14 3,55+0,26-|

Примечание *- р < 0,05 по отношению к контролю

Активация белоксинтетических процессов, по-видимому, обусловлена ускорением созревания кардиомиоцитов и увеличением их функциональной активности [Румянцев ПП, 1982, Ибрагимова ИФ и соавт , 1997] Такие изменения, в сочетании с увеличением длительности клеточного цикла, могут быть отражением дифференцировки кардиомиоцитов

Анализ состояния миокарда у 21-суточных крыс, перенесших ВУГ, показал, что индекс ядер экспрессирующих РС1ЧА, не отличался достоверно от уровня контроля Однако сохранялось достоверное увеличение показателей ядрышкового аппарата (рисунок 4), что может расцениваться как структурный след ВУГ

Результаты ХМЛ-нсследования свидетельствуют, что ВУГ обуславливает существенное изменение процессов свободнорадикального окисления в сердце и в сыворотке крови новорожденных белых крыс (таблица 3)

левым жегпдочск прлвын жепудочек

Н ИМЯ ■ площадь ядрышек □ число ядрышек

Рисунок 4 Индекс экспрессирующих РС1ЧА ядер и параметры ядрышкового аппарата клеток миокарда 21-суточных крыс, подвергнутых ВУГ Примечания 1) данные представлены в % от уровня соответствующей контрольной группы 2) р < 0 05 но отношению к контролю

Так, произошло увеличение продукции АКМ, в том числе за счет накопления гидроперекисей липидов и перекисных радикалов (возросли показатели Scn, HI, S„Hal) Кроме того, ряд показателей (Н2, S„M2) указывают на снижение устойчивости к перекисному окислению и уменьшение активности антиоксидантной защиты у подопытных животных (таблица 3)

Таблица 3

Влияние ВУГ на показатели хемилюминесценции гомогенатов миокарда и сыворотки крови семисуточных белых крыс

Показатель Контроль (п=16) ВУГ (п=19)

Гомогенаты миокарда

Scn (отн ед) 1,58±0,09 3,04±0,21"Т

Инд ХМЛ (Fe:+) HI (отн ед) 1,39±0,09 2,88±o,i7-t

SHHa 1 (отн ед) 3,42±0,25 7,80+0,53" Т

Инд ХМЛ (люминол-Н^Оз) Н2 (отн ед) 4,72±0,28 14,05±1,24-Т

S„HJI2 (отн ед) 8,01 ±0,63 18,49±l,00-t

Сыворотка крови

Scn (отн ед) 0,31 +_0,02 0,74 + 0,06-t

Инд ХМЛ (Fe2+) Н1 (отн ед) 0,19 +.0,01 0,64 + 0,05-|

S„HJ 1 (отн ед) 0,80 + 0,04 2,23 +0,11 "f

Инд ХМЛ (люминол-Н202) Н2 (отн ед) 1,69 + 0,1 6,06 + 0,52"!

S„M2 (отн ед) 2,34 + 0,20 9,30 + 0,70-t

Примечание " - р < 0,05 по отношению к контролю

Таким образом, у животных, перенесших ВУГ, нами был зарегистрирован выраженный окислительный стресс Изменения показателей ХМЛ были выявлены у 7-суточных крыс, то есть спустя 10 суток после заключительного гипобарического воздействия Это может означать, что повреждающее действие ВУГ не только не заканчивается после прекращения кислородной депривации, а скорее «дает старт» изменениям биогенеза АКМ, которые продолжают разворачиваться еще длительный период

Оценка способности РП корригировать ВУГ-индуцированные нарушения Первоначально мы проверили характер влияния исследуемых РП на животных, развивавшихся в условиях нормального кислородного обеспечения По данным ХМЛ-анализа антиоксидантное действие оказывали аргинин-содержащие пептиды седатин и НАЛЭ (рисунок 5) Поэтому эти пептиды были использованы для оценки корригирующей роти РП у белых крыс, перенесших ВУГ

150 -

Sen HI SI Н2 S2 Sen HI SI H2 S2

миокард сыворотка крови

■ седатин □ аналог седатина И НАЛЭ

Рисунок 5 Показатели ХМЛ гомогенатов миокарда и сыворотки крови новорожденных белых крыс, получавших РП Примечания 1) данные представлены в % от уровня соответствующей контрольной группы 2) * - р < 0,05 по отношению к контролю

Результаты исследования показали, что введение РП крысам, подвергнутым ВУГ, приводило к снижению уровня летальности В группе «ВУГ+НАЛЭ» этот показатель был достоверно ниже, чем в группе «ВУГ+физ раствор» (8% против 30%) В группе «ВУГ+седатин» снижение было недостоверным - до 21 % Вопрос о влиянии аргинин-содержащих РП на летальность животных, подвергнутых гипоксии, требует дальнейшего изучения

Показатели пролиферативной активности и ядрышкового аппарата миокарда изменялись однонаправлено с аналогичными показателями группы «ВУГ», получавшей изотонический раствор хлорида натрия (рисунок 6)

Введение седатина или НАЛЭ новорожденным белым крысам, перенесшим ВУГ, приводило к нивелированию признаков окислительного стресса, регистрируемых с помощью ХМЛ в миокарде и сыворотке крови (рисунок 7)

ИМЯ ИМ число площадь ИМЯ ИМ число площадь

ядрышек ядрышек ядрышек ядрышек

певый женудочек правый желудочек

■ ВУГ □ ВУГ+ седатин 0 ВУГ+ НАЛЭ Рисунок 6 Показатели пролиферативной активности и ядрышкового аппарата клеток миокарда новорожденных белых крыс, подвергнутых ВУГ и получавших РП или изотонический раствор хлорида натрия Примечания 1) данные представлены в % от уровня соответствующей контрольной (интактной) группы, 2) ~ - р < 0,05 по отношению к контролю

Н1 Н2 Я2 Ьс Н1 Н2 Э2

миокард сывороткл крови

■ ВУГ □ ВУГ+седатин Ы ВУГ+НАЛЭ

Рисунок 7 Показатели ХМЛ миокарда и сыворотки крови новорожденных белых крыс, подвергнутых ВУГ и получавших РП или изотонический раствор хлорида натрия Примечания 1) данные представлены в % от уровня контрольной (интактной) гр\ппы 2) * - р < 0 05 по отношению к контролю

Следует отметить, что однонаправленное влияние седатина и НАЛЭ нельзя объяснить с позиций опиоидной активности РП, поскольку НАЛЭ не обладает сродством к известным опиоидным рецепторам По-видимому, важную роль в реализации полученных эффектов играет наличие в формуле пептидов Ь-аргинина в концевом положении Косвенно это предположение подтверждается отсутствием эффектов после введения безаргининового аналога седатина (рисунок 5) Концевое положение Ь-аргинина способствует освобождению этой аминокислоты в результате протеолиза [Исакова О Л и др , 1986] Известно, что в физиологических концентрациях Ь-аргинин, посредством активации синтеза N0, угнетает процессы пероксидации липидов и защищает клетки от окислительного стресса [ЗизсЬек СУ е1 а1, 2003]

выводы

1 Внутриутробное гипоксическое воздействие вызывает компенсаторную стимуляцию пролиферативных процессов в миокарде

новорожденных белых крыс, проявляющуюся увеличением уровня митотической и ДНК-синтетической активности

2 В миокарде новорожденных крыс-самцов изменения показателей пролиферативного статуса, индуцированные внутриутробной гипоксией, более выражены, чем у крыс-самок

3 В миокарде животных, подвергнутых внутриутробной гипоксии, к концу периода новорожденности нормализуются процессы синтеза ДНК, и нарастает активность ядрышкового аппарата клеток миокарда

4 В миокарде белых крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии, повышенная активность ядрышкового аппарата сохраняется, как минимум, до конца молочного периода

5 У крыс, перенесших внутриутробную гипоксию, проявления окислительного стресса в сердце и сыворотке крови сохраняются, как минимум, до конца периода новорожденности, о чем свидетельствуют выраженные изменения показателей хемилюминесценции

6 Пятикратное введение новорожденным белым крысам олигопептидов (седатина или неопиатного аналога лей-энкефалина), содержащих в концевом положении остаток Ь-аргинина, уменьшает выраженность нарушений, индуцированных внутриутробной гипоксией Нормализуется биогенез активных кислородных метаболитов в сердце и сыворотке крови, снижается летальность подопытных животных

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Крыжановская, С Ю Влияние внутриутробной гипоксии на ранний постнатальный морфогенез миокарда белых крыс [Текст] / С Ю Крыжановская, Е Н Сазонова // Актуальные проблемы морфологии сб науч трудов - Красноярск, 2004 - С 146-147

2 Крыжановская, С Ю Некоторые показатели тканевого гомеостаза новорожденных белых крыс, перенесших внутриутробную гипоксию

[Текст] /СЮ Крыжановская, Е Н Сазонова, С С Тимошин // Бюлл эксперим биологии и медицины - 2004 - № 7 - С 29-32

3 Knzhanovskaja, S Yii Influencing mtrauteial hypoxia on some indexes of homeostasis of the myocardium newborn in white rats [Text] / S Yu Knzhanovskaja, E N Sazonova // The Eleventh International Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange - Nugata, 2004 - P 364

4 Крыжановская, С Ю Влияние аналогов дерморфина и лей-энкефалина на биогенез активных кислородных метаболитов в кардиореспираторной системе новорожденных белых крыс [Текст] /СЮ Крыжановская, О Е Гусева, О А Лебедько [и др ] // Дальневосточный медицинский журнал -2006 - № 3 - С 86-88

5 Крыжановская, С Ю Влияние внутриутробной гипоксии на постнатальный морфогенез миокарда белых крыс [Текст] /СЮ Крыжановская // Материалы VII и VIII Краевых конференций молодых ученых и аспирантов Секция медицинские науки - Хабаровск, 2006 - С 47-54

6 Крыжановская, С Ю Корригирующее влияние неопиоидного аналога лей-энкефалина на биогенез активных кислородных метаболитов в кардиореспираторной системе новорожденных крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии [Текст] /СЮ Крыжановская, О Е Гусева, О А Лебедько // Актуальные проблемы морфологии сб науч трудов -Красноярск, 2006 - С 85-87

7 Гусева, О Е Пептидный препарат седатин - корректор нарушений биогенеза активных кислородных метаболитов в кардиореспираторной системе у новорожденных, перенесших перинатальную гипоксию (экспериментальное исследование) [Текст] / О Е Гусева, О А Лебедько, С Ю Крыжановская, С С Тимошин // Актуальные проблемы охраны здоровья женщин и детей на современном этапе сб науч трудов -Хабаровск, 2006 -С 43-49

8 Сазонова, Е Н Влияние опиоидных пептидов на тканевой гомеостаз миокарда новорожденных белых крыс [Текст] / Е Н Сазонова, С Ю Крыжановская, Н В Масленникова, С С Тимошин // Пути реализации приоритетного Национального проекта в сфере профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний тезисы докл науч -практ конф -Хабаровск, 2007 / Дальневосточный медицинский журнал - 2007 - № 2 -С 88

9 Крыжановская, С Ю Влияние внутриутробной гипоксии на тканевой гомеостаз миокарда [Текст] /СЮ Крыжановская, Е Н Сазонова, О А Лебедько, С С Тимошин // Пути реализации приоритетного Национального проекта в сфере профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний тезисы докл науч -практ конф - Хабаровск, 2007 / Дальневосточный медицинский журнал - 2007 - № 2 - С 82

10 Крыжановская, СЮ Влияние синтетических аналогов дерморфина на тканевой гомеостаз миокарда новорожденных белых крыс [Текст] /СЮ Крыжановская, О А Лебедько, Е Н Сазонова, С С Тимошин, Л Е Молоканова // Бюлл эксперим биологии и медицины - 2007 - №10 - С 413-416

Бумага писчая Тираж 100 экз Заказ № <7 Издательский центр ГОУ ВПО ДВГМУ 680000, г Хабаровск, ул Муравьева-Амурского, 35

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Крыжановская, Светлана Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.,.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Особенности онтогенетического становления структурного гомеостаза миокарда.

1.2. Влияние внутриутробной гипоксии на сердечно-сосудистую систему плода и новорожденного.

1.3. Основные механизмы регуляции структурного гомеостаза миокарда на ранних этапах онтогенеза.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние внутриутробной гипоксии на процессы пролиферации и свободнорадикального окисления в миокарде белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза"

Актуальность проблемы

В системе «мать — плод» кислородная недостаточность является одним из основных патологических факторов, опосредующих негативные влияния на развивающийся организм. Синдром кислородного дефицита плода сопровождает большинство осложнений беременности, наблюдается при соматических и инфекционных заболеваниях беременной женщины, при воздействии неблагоприятных внешних факторов [Евсеенко Д.А., Ещенко Ю.В., 2002]. В структуре перинатальной смертности внутриутробная гипоксия и асфиксия в родах занимают первое место (46,6%) [Шарапова О.В., 2003]. Частота встречаемости гипоксии плода составляет в среднем 4-6% [Никольская Л.А., 1999].

Внутриутробная гипоксия (ВУГ) является наиболее распространенной причиной, приводящей к нарушению развития плода [Дещекина М.Ф. и соавт., 1990, Сенькевич О.А. и соавт., 2006].

Сердечно-сосудистая система (ССС) - одна из самых уязвимых для ВУГ. Частота встречаемости постгипоксических осложнений со стороны системы кровообращения у новорожденных составляет более 40% [Симонова JI.B. и соавт., 2001]. По данным Прахова А.В. (1998) ишемия миокарда диагностирована у всех новорожденных, перенесших перинатальную гипоксию. Перинатальные повреждения миокарда гипоксического генеза составляют 43,5% всех кардиопатий детского возраста [Шабалов Н.П., 1999].

Последствия постгипоксических нарушений имеют место не только в перинатальном периоде, но и в более поздние сроки онтогенеза [Кельмансон И.А., 1999, Маслова М.В. и соавт., 2001, Li G et al., 2004]. Альтерация системы кровообращения до рождения является причиной развития сердечно-сосудистой патологии в последующие возрастные периоды [Кельмансон И.А., 1999, Бокерия E.JL, 2001, Малькович Е.П., 2004].

Морфологическому изучению гипоксических повреждений сердца у плодов и новорожденных посвящены исследования David Н. et al. (1984), Задорожной Т.Д., Давиденко О.А. (1988), Murotsuki J et al. (1997), Сидорова А.Г. (2000). Однако авторы в основном приводят макро- и ультромикроскопическое описание миокарда новорожденных, перенесших хроническую внутриутробную гипоксию или гипоксию в родах.

В литературе представлены лишь единичные сведения о состоянии синтеза ДНК в кардиомиоцитах животных под влиянием гипоксии in vitro [Hollenberg М. et al., 1976]. Данные о динамике показателей структурного гомеостаза миокарда in vivo у млекопитающих, перенесших ВУГ, в доступной нам литературе отсутствуют.

Вместе с тем, этот вопрос наряду с фундаментальным имеет существенное прикладное значение.

Период выраженной пролиферативной активности кардиомиоцитов ограничен ранними этапами онтогенеза [Румянцев П.П., 1982]. В это время закладывается резерв дальнейшего роста сердца. При этом «размер генома», или плоидность миокарда, становится важным фактором компенсации функционирования сердца в условиях патологии [Бродский В.Я., 1986, 1995]. По данным Бродского В.Я. (1995), несмотря на то, что время полиплоидизации и пролиферации кардиомиоцитов программируется в онтогенезе, общее число миоцитов и их плоидность зависят от условий роста сердца. Следовательно, неблагоприятные воздействия в перинатальном периоде могут определить компенсаторные возможности сердечно-сосудистой системы в последующие стадии развития [Li G. et al., 2004].

Важным звеном патогенеза постгипоксических повреждений у новорожденных является нарушение соотношения про- и антиоксидантных систем организма [Saugstad O.D., 2005]. Активные кислородные метаболиты (АКМ) являются не только деструктивными молекулами, но и выполняют функцию мессенджеров, в том числе могут участвовать в регуляции прохождения клетками митотического цикла [Гамалей И.А. и соавт., 2001]. Коррекция биогенеза АКМ может играть важную роль в защите миокарда от постгипоксических нарушений [Бокерия JI.A. и соавт., 2000, Капелько В.И., 2004, Маслов JI.H. и соавт., 2006]. Мы не встретили данных о взаимоотношениях между постгипоксическими структурными изменениями в миокарде новорожденных и биогенезом АКМ.

Регуляторные пептиды (РГГ) играют важную роль в регуляции биологических функций в норме и патологии. Известно, что целый ряд РП обладает антигипоксантными свойствами [Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н., 1994]. РП влияют на процессы пролиферации и дифференцировки разных клеточных популяций в раннем постнатальном периоде [Лебедько О.А., Тимошин С.С., 2002, Сазонова Е.Н., 2004, Мельникова Н.П., 2004].

Профилактическое антенатальное введение РП экспериментальным животным препятствует развитию некоторых физиологических и биохимических последствий пренатального гипоксического стресса [Лебедько О.А. и соавт., 1997, Маслова М.В. и соавт., 2001, Соколова Н.А. и соавт., 2002]. В ряде клеточных популяций (эпителиоциты дыхательных путей, тимуса, гепатоциты) происходит нормализация показателей пролиферативной активности [Лебедько О.А. и соавт., 1997, Уткина Л.И., Тимошин С.С.1991, Ганьчева Е.А. и соавт., 1997]. Существуют перспективы использования пептидных биорегуляторов не только для профилактики, но и для своевременной коррекции уже имеющихся нарушений у новорожденных детей, развивавшихся в условиях гипоксии [Евсюкова И.И., 2004].

В настоящее время в научно-производственном объединении «Пептос» и лаборатории химии пептидов кардиологического научного центра РАМН синтезирован ряд пептидных регуляторов — синтетических аналогов i эндогенных опиоидных пептидов. Среди них - седатин (аналог дерморфина) и неопиатный аналог лей-энкефалина. Данные РП обладают широким спектром биологических активностей. На их основе планируется создание фармакологических средств.

Учитывая выраженные антиоксидантные и антигипоксантные свойства ряда РП, а также способность РП влиять на ранний постнатальный морфогенез миокарда, можно предположить эффективность использования пептидных регуляторов для коррекции постгипоксических нарушений структурного гомеостаза миокарда млекопитающих в постнатальном периоде.

Цель исследования. Изучить характер влияния внутриутробной гипоксии на процессы пролиферации и свободнорадикального окисления в миокарде белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза. Задачи исследования:

1. Изучить влияние внутриутробной гипоксии на показатели пролиферации в миокарде новорожденных белых крыс.

2. Изучить влияние внутриутробной гипоксии на показатели пролиферации в миокарде белых крыс в позднем молочном периоде.

3. Изучить влияние внутриутробной гипоксии на параметры ядрышкового аппарата клеток миокарда белых крыс в раннем постнатальном периоде.

4. Оценить состояние свободнорадикального окисления в миокарде и сыворотке крови новорожденных белых крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии.

5. Оценить возможность коррекции нарушений, индуцированных внутриутробной гипоксией, у белых крыс с помощью регуляторных пептидов.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АКМ — активные кислородные метаболиты

ВУГ — внутриутробная гипоксия

ИМ - интенсивность метки

ИМЯ — индекс меченых ядер

МИ — митотический индекс

НАЛЭ - неопиатный аналог лей-энкефалина

ОР - опиоидные рецепторы

РП - регуляторные пептиды

ССС — сердечно-сосудистая система

ХМЛ - хемилюминесценция молекулами, но и выполняют функцию мессенджеров, в том числе могут участвовать в регуляции прохождения клетками митотического цикла [Гамалей И.А. и соавт., 2001]. Коррекция биогенеза АКМ может играть важную роль в защите миокарда от постгипоксических нарушений [Бокерия JI.A. и соавт., 2000, Капелько В.И., 2004, Маслов JI.H. и соавт., 2006]. Мы не встретили данных о взаимоотношениях между постгипоксическими структурными изменениями в миокарде новорожденных и биогенезом АКМ.

Регуляторные пептиды (РП) играют важную роль в регуляции биологических функций в норме и патологии. Известно, что целый ряд РП обладает антигипоксантными свойствами [Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н., 1994]. РП влияют на процессы пролиферации и дифференцировки разных клеточных популяций в раннем постнатальном периоде [Лебедько О.А., Тимошин С.С., 2002, Сазонова Е.Н., 2004, Мельникова Н.П., 2004].

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Крыжановская, Светлана Юрьевна

5. ВЫВОДЫ

1. Внутриутробное гипоксическое воздействие вызывает компенсаторную стимуляцию пролиферативных процессов в миокарде новорожденных белых крыс, проявляющуюся увеличением уровня митотической и ДНК-синтетической активности.

2. В миокарде новорожденных крыс-самцов изменения показателей пролиферативного статуса, индуцированные внутриутробной гипоксией, более выражены, чем у крыс-самок.

3. В миокарде белых крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии, к концу периода новорожденности нормализуются процессы синтеза ДНК, и нарастает активность ядрышкового аппарата клеток миокарда.

4. В миокарде белых крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии, повышенная активность ядрышкового аппарата сохраняется, как минимум, до конца молочного периода.

5. У крыс, перенесших внутриутробную гипоксию, проявления' окислительного стресса в сердце и сыворотке крови сохраняются, как, минимум, до конца периода новорожденности, о чем свидетельствуют выраженные изменения показателей хемилюминесценции.

6. Пятикратное введение новорожденным белым крысам олигопептидов (седатина или неоплатного аналога лей-энкефалина), содержащих в концевом положении остаток L-аргинина, уменьшает выраженность нарушений, индуцированных внутриутробной гипоксией. Нормализуется биогенез активных кислородных метаболитов в сердце и сыворотке крови, снижается летальность подопытных животных.

1.4. Заключение

Общие понятия органо- и морфогенеза на тканевом и органном уровне включают гармоничное взаимодействие между клеточной пролиферацией, клеточной миграцией, дифференцировкой и гибелью, продукцией межклеточного вещества и его резорбцией. Упрощенно процесс развития и риск его нарушений можно представить как сумму нормального окружения (внешних факторов), генной экспрессии и последующего синтеза белков, которые принимают соответствующую стереологическую форму и должны нормально функционировать [Moscoso G., 2002].

Важнейшая роль отводится "внешним факторам". Морфогенез, или продолжающееся ремоделирование, формообразование органов и систем легче поддается коррекции, чем уже сформированный орган. Именно поэтому отрицательные воздействия, так называемых "средовых факторов" в период внутриутробного развития оставляют структурный след во всех органах и системах. Программирующее влияние этих факторов определяется как "альтерация онтогенеза" [Воронцов И.М., 2002]. По-видимому, коррекция таких нарушений будет более эффективна тотчас после воздействия, на фоне активно протекающих процессов морфогенеза.

Гипоксия является наиболее частым повреждающим фактором в период внутриутробного развития, действие которого не только оказывает морфогенетические эффекты, но и изменяет адаптационные возможности потомства на протяжении всей последующей жизни [Соколова Н.А. и соавт., 2002, Mamet et al., 2002, Li G et al., 2003, 2004].

Особенно важными механизмами влияния морфогенетических факторов в период эмбриогенеза являются воздействия на величину фонда неделящихся или крайне редко делящихся клеток (нейронов, овоцитов, кардиомиоцитов), а также стволовых клеток [Рыжавский Б.Я., 1999].

Вовлеченность сердечно-сосудистой системы в адаптационные процессы во все возрастные периоды и жесткая временная динамика становления структурного гомеостаза миокарда в постнатальном периоде определяют актуальность исследования факторов, влияющих на мофрогенез миокарда.

2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 2.1. Характеристика экспериментальных животных

В экспериментах использовали самок беспородных белых крыс, 3-4 месячного возраста. Масса животных колебалась от 200 до 220 граммов. Для исключения реакции на новизну обстановки самок перед началом эксперимента выдерживали 10 дней в стационарных условиях вивария. Питание и питье животные получали ad libidum. Крыс содержали в виварии с естественным освещением при температуре 20-22°С в клетках площадью 0,6 кв.м, не более 4 самок в каждой клетке. За три дня до предполагаемых родов самок помещали в индивидуальные клетки. При подборе самок определялась фаза эстрального цикла. Животных брали в период диэструса. Через сутки к одному самцу подсаживали 4 самки. Наличие беременности определяли по нахождению во влагалищном мазке сперматозоидов и последующему установившемуся периоду межтечки.

Для оценки последствий ВУГ крысят забивали посредством быстрой декапитации на 5, 7 и 21 сутки после рождения. Согласно классификации Западнюк И.П. (1974) период с 1 по 7 сутки после рождения именуется периодом новорожденности. Возраст с 8 по 21 сутки - инфантильный, или поздний молочный период.

В экспериментах с воздействием РП пептиды вводили со 2 по 6 сутки жизни внутрибрюшинно. Одномоментно животным контрольной группы инъецировали изотонический раствор хлорида натрия. Эвтаназию проводили на 7-е сутки, то есть через одни сутки после последней инъекции, и на 21, то есть через 15 суток после последней инъекции.

Исследования проводили в соответствии с «Принципами использования животных от 1978г» [Буреш Я. и соавт., 1991].

2.2. Характеристика объекта исследования

В качестве объекта исследования использовали сердце крыс. Анализ показателей проводили отдельно в каждой камере сердца, основываясь на том, что уровень пролиферативной активности в разных отделах миокарда имеет свою характерную динамику в период раннего постнатального онтогенеза [Румянцев П.П., 1982]. Кроме того, левый и правый желудочек представляют собой самостоятельные компартменты, имеющие разное сегментарное происхождение и отличающиеся своими генетическими программами [Мглинец В. А., 2000]. Имеются данные о дифференцированной экспрессии и функционировании рецепторов к биологически активным веществам в различных доменах развивающегося сердца [Ghyselinck et al., 1998].

Структура миокарда в каждом отделе сердца неоднородна. На светооптическом уровне выделяют субэндокардиальную зону, трабекулярный миокард и субэпикардиально расположенный компактный миокард. Каждая зона миокарда имеет свои особенности кровоснабжения, структуры и развития [Большакова Г.Б., 1980, 1991, Румянцев П.П., 1982, Мельникова Н.П., 2004].

Исследованию подвергали субэндокардиальные слои миокарда, поскольку, число немышечных клеток в этой зоне минимально [Баженова Е.М. и соавт., 2000].

Гистологически в миокарде различают, кроме популяции кардиомиоцитов, стромальные компоненты (соединителная ткань), эндотелиоциты и нервные волокна. Однако, по данным электроннограмм, у новорожденных крыс миокард фактически состоит из кардиомиоцитов и эндотелиоцитов [Большакова Г.Б., 1991]. Проведение дифференцировки кардиомиоцитов и эндотелиоцитов возможно на светооптическом уровне [Румянцев П.П., 1982]. Поэтому полученные нами характеристики могут быть отнесены, главным образом, к популяции субэндокардиально расположенных кардиомиоцитов.

2.3. Характеристика используемых веществ

В данной работе использовали смешанный агонист |д/8 опиоидных рецепторов — седатин [H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH]. Он является аналогом опиоидного пептида - дерморфина. На основе этого вещества создан фармакологический препарат, который проходит доклиническое исследование, поэтому изучение его свойств имеет не только научно-теоретическое, но и прикладное значение.

Особенность структуры седатина - наличие остатка аминоксилоты L-аргинин на N-конце пептида. Для исследования возможной роли аргинина в реализации эффектов препарата, использовали вещество аналогичной структуры, но не содержащее эту аминокислоту: безаргининовый аналог седатина [H-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH].

В работе использовали также гексапептид: H-Phe-D-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-OH. Он, как и даларгин, является аналогом лей-энкефалина, но вместо тирозина содержит в N-концевом положении фенилаланин, благодаря чему не способен связываться с опиоидными рецепторами [Сергеев П.В., Шимановский H.JL, 1987]. Поэтому пептид получил название неопиатный аналог лей-энкефалина - НАЛЭ. Этот пептид, как и седатин, содержит остаток аминокислоты аргинин в краевом положении. Но, в отличие от седатина, L-аргинин находится на С-конце аминокислотной цепи.

Все используемые вещества вводили животным 5-кратно в дозе 100мкг\кг внутрибрюшинно со 2-го по 6-й день жизни. Контрольные животные получали эквиобъемное количество физиологического раствора хлорида натрия. Доза веществ и режим введения были выбраны на основании проводимых ранее в лаборатории экспериментов и с учетом данных литературы.

Поскольку суточный ритм деления клеток формируется уже в раннем постнатальном онтогенезе [Смирнов С.Н. и соавт., 2005], введение препаратов производили в одно и тоже время, в 10 часов утра. Забор материала осуществляли в 10-12 часов.

Седатин и его безаргининовый аналог были синтезированы в научно-производственном объединении «Пептос» (заведующий д.м.н. В.И. Дейгин). НАЛЭ создан в лаборатории синтеза пептидов кардиологического научного центра РАМН (заведующая д.м.н. Ж.Д. Беспалова).

2.4. Моделирование внутриутробной гипоксии

Для решения поставленных задач была использована модель гипоксической гипоксии. Выбор данной модели основывался на следующих фактах. Во-первых, в условиях клиники причиной гипоксии плода чаще всего становятся гипоксические состояния матери, обусловленные экстрагенитальной патологией [Айламазян Э.К., 1997]. Во-вторых, в эксперименте для моделирования гипоксических состояний чаще всего используются методы, связанные с уменьшением парциального давления кислорода во вдыхаемом воздухе [Савченков Ю.И., Лобынцев К-.С. ,1980, Лебедько О.А. и соавт., 1994, Соколова Н.А. и соавт., 2002, Маслова М.В. и соавт., 1999, 2002, 2005].

Следует отметить, что использование модели гипобарической гипоксии неизбежно сопровождается дополнительным стрессорным воздействием. Имеется в виду помещение в барокамеру, шум, изменение освещенности. По данным Ervin М. G. et al. (2000), антенатальное введение глюкортикоидов изменяет реакцию новорожденных на гипоксию. Однако, известно, что большинство патологических факторов, в том числе и стресс, реализуют свое повреждающее действие на систему «мать-плод» именно через гипоксию [Соколова Н.А. и соавт., 2002]. Так, показано, что острое эмоциональное напряжение во второй половине беременности вызывает циркуляторную гипоксию в фето-плацентарном комплексе в течение нескольких часов после прекращения стрессорного воздействия [Герелюк И.П., Масляк С.Н., 1991]. С другой стороны, сама гипоксия является фактором, приводящим к развитию стресс — реакции. Таким образом, влияние ВУГ на развитие плода может реализовываться как через гипоксию, так и по механизмам стресс - реакции [Рыжавский Б.Я., 1999].

По первичному патогенетическому механизму используемая нами модель ВУГ является гипоксической, экзогенной [Новиков B.C. и соавт., 2000], так как связана с недостатком поступления кислорода к плоду. Позже присоединяется циркуляторный механизм, создается метаболический и дыхательный ацидоз [Студеникин М.Я., 1984].

Выбор срока и режима гипоксии основывался на клинических и экспериментальных данных. Гипоксия плода чаще всего диагностируется во второй половине беременности [Студеникин М.Я., 1984]. По мере формирования системы «мать-плод» снижается переносимость беременными гипоксической гипоксии [Корнеев А.А. и соавт., 1990]. У крыс продолжительность беременности составляет 21-23 дня [Западнюк И.П. и соавт., 1974]. Учитывая все выше сказанное, гипоксическое воздействие проводили с 14 по 19 день беременности.

Подъем животных выполняли в барокамере СБК-48 объемом 1,5 куб.м. Разрежение воздуха в камере осуществляли с помощью вакуумного пластинчато-роторного электронасоса марки ВНК-2, контролируя величину разрежения по манометру, проградуированному в мм.рт.ст. (цена деления 20 мм.рт. ст.). Крыс помещали в барокамеру натощак и «поднимали» на высоту 9000 метров над уровнем моря, что соответствовало давлению 224 мм.рт.ст. и насыщению кислорода 42 мм. рт.ст. (при норме 159 мм.рт.ст.). По данным литературы, такая гипоксия может быть расценена как тяжелая [Савченков Ю.И., Лобынцев К.С., 1980, Лебедева И.М., 1978]. Условную высоту подъема» определяли с помощью таблицы соотношения высоты (в метрах) и давления (в мм. рт. ст.).

Поскольку чувствительность крыс к гипоксии изменяется в зависимости от времени суток [Хачатурьян М.Л., Панченко Л.А., 2002], ежесуточную четырехчасовую экспозицию проводили с 9 до 13 часов в течение 6 дней. Компрессию и декомпрессию проводили соответственно по одному часу. Стационарной гипоксии подвергали в течение двух часов. Регуляцию скорости «подъема» и «спуска» осуществляли с помощью механического клапана, ограничивающего поступление воздуха из атмосферы в емкость камеры. Средняя скорость составляла 8-10 мм.рт.ст. в минуту. Скорость «подъема» выбирали с учетом допустимых величин скорости измерения барометрического давления [Лапаев Э.В. и соавт., 1981]. Для поглощения углекислого газа и поддержания постоянной влажности воздуха в барокамеру помещали насыщенный раствор едкого натрия. Температура воздуха в барокамере соответствовала температуре воздуха в лаборатории и составляла в среднем 18-22 градуса Цельсия.

2.5. Приготовление гистологических препаратов

После вскрытия грудной клетки сердце выделяли путем перерезки сосудистого пучка, осушали с помощью фильтровальной бумаги, взвешивали на торсионных весах. Фиксировали в смеси 70% этанола, формалина и ледяной уксусной кислоты в соотношении 20 : 1 : 1 в течение суток. Для иммуногистохимического исследования использовали в качестве фиксатора 10% раствор формалина на фосфатном буфере. Затем препараты промывали в проточной воде в течение суток, последовательно помещали в 40% и 60% этанол на 3 часа, затем в 70%. После этого вдоль длинной оси сердца делали разрез лезвием так, чтобы открылись все 4 камеры сердца -оба предсердия и оба желудочка. Обезвоживание в батарее восходящих спиртов и растворителей, заключение в парафин осуществляли по общепринятой методике. С помощью микротома "Leica" приготовляли срезы толщиной 5-6 мк. Срезы монтировали на обезжиренные предметные стекла.

2.6. Метод авторадиографии

Для оценки ДНК-синтетической активности миокарда новорожденным животным за 1 час до эвтаназии вводили Н3-тимидин в дозе 1 мкКюри на грамм веса (уд.активность 84 Кюри/моль).

Приготовленные препараты (см. 2.5.) депарафинировали в растворителях и батарее спиртов нисходящей концентрации (100%, 96%, 70%). Выдерживали в термостате не менее 24 часов при 37°, покрывали тонким слоем фотоэмульсии с использованием прямоугольной металлической петли [Епифанова О.И. и соавт., 1977]. Для чего фотоэмульсию расплавляли при температуре 42°С в термостате с добавлением пластификатора и дистиллированной воды в соотношении 1:1. Экспонировали при температуре 4-6° в течение 1-4 недель в светонепроницаемом ящике, затем обрабатывали стандартным проявителем для черно-белых фотопленок и фиксировали тиосульфатом натрия. Время экспозиции и проявления подбиралась для каждой партии отдельно. Препараты докрашивали гематоксилином Лилли-Майера и эозином (рисунок 1,2). В большинстве экспериментов использовали фотоэмульсию НИИХИМФОТО. В серии экспериментов с НАЛЭ использовалась фотоэмульсия фирмы «Kodak».

ДНК-синтетическую активность оценивали путем подсчета ИМЯ (%) и ИМ. Мечеными считали ядра, над которыми проецировалось 5 и более треков. Для оценки ИМЯ просматривали не менее 1000 ядер в субэндокардиальной зоне каждого отдела миокарда (левое и правое предсердие, левый и правый желудочек, межжелудочковая перегородка). Для оценки ИМ определяли среднее число треков путем подсчета числа гранул серебра над 50 ядрами в каждом отделе. Микроскопирование л щрш

- V-* \ vv^r г r • и * V - r

Рисунок 1. Миокард 7-суточной белой крысы (слева - субэндокард и ал ьный отдел левого желудочка, справа - миокард левого предсердия). Авторадиография с Н3-тимидином, докраска гематоксилином и эозином. Увеличение 10x10.

Рисунок 2. Миокард 7-суточной белой крысы (субэндокардиальный отдел левого желудочка). Авторадиография с Н -тимидином, докраска гематоксилином и эозином. Увеличение 40x10. проводили с помощью микроскопа «Jenalumar» (Германия), иммерсионного объектива 90х, окуляры 10х.

2.7. Определение митотической активности

На препаратах, окрашенных гематоксилином Лилли-Майера и эозином, подсчитывали число фигур митоза путем просмотра не менее 5000 ядер в субэндокардиапьном отделе желудочкового миокарда и вычисляли МИ в промилле (рисунок 3).

Рисунок 3. Митоз в миокарде 7-суточной белой крысы (слева - профаза, справа - метафаза). Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 100x6.

2.8. Исследование морфометрических показателей ядрышкового аппарата

Срезы монтировали на предметные стекла. Окраску проводили по методике, описанной в работах Мамаева Н.Н. и соавт. (1989) и Д.Э. Коржевского (1990) и адаптированной в нашей лаборатории [Мельникова Н.П., 2004]. После депарафинирования срезы выдерживали в 1% растворе муравьиной кислоты 20 минут, ополаскивали 10 минут дистиллированной водой, затем под покровное стекло наносили смесь 1 части желатины, ' приготовленной на 1% растворе муравьиной кислоты, и 2 частей 50% раствора азотнокислого серебра. Выдерживали в термостате 20 мин. при температуре 37°С, интенсивность реакции оценивали под контролем зрения, после чего промывали в дистиллированной воде. Исследование показателей ядрышкового аппарата проводили на анализаторе изображения "МЕКОС -Ц" в интерактивном режиме. Использовали объектив 40х, окуляры 7х. В полуавтоматическом режиме оценивали количество и площадь сечения ядрышек в 50 клетках субэндокардиальных отделов каждого желудочка. В одной из серий экспериментов подсчет среднего числа ядрышек осуществляли на микроскопе Биолам, объектив 90х, окуляр 7х, путем просмотра не менее 200 ядер в каждом отделе миокарда.

В состав ядрышка входят кислые негистоновые аргентофильные белки, тесно связанные с ядрышкообразующими районами хромосом, и регулирующие сложный многоэтапный процесс синтеза рРНК и образования рибосом [Райхлин Н.Т. и соавт., 2002]. В связи с этим степень экспрессии этих белков может косвенно свидетельствовать о белок-синтетической активности клеток [Мамаев Н.Н. и соавт., 1989].

2.9. Методика иммуногистохимического окрашивания

С помощью иммуногистохимического окрашивания выявляли ядра, экспрессирующие антигены пролиферирующих клеток (PCNA). Эти белки относится к группе циклинов — кислых ядерных белков, которые появляются в клетке после инициации пролиферации и сохраняются 24-48 часов после выхода из нее. Таким образом, при данном методе исследования метятся все ядра, находящиеся в разных фазах митотического цикла, кроме G0 [Toschi L., Bravo R., 1988].

Иммуногистохимическое окрашивание проводили по протоколу, рекомендуемому фирмой DAKO (Дания).

1. Для улучшения адгезии парафиновые срезы толщиной 5 мкм монтировали на стекла, предварительно обработанные в течение 10 минут 0,01% раствором поли-л-лизина (Poly-l-Lysine solution 0,01%, Sigma, USA) и высушенные в термостате при 56°С в течение часа.

2. После стандартной процедуры депарафинирования в толуолах и спиртах срезы для восстановления антигенной структуры подвергали термической обработке в специальном растворе (Target Retrieval Solution, DAKO, Denmark) на водяной бане при температуре 95-97°С в течение 30 минут.

3. Стекла охлаждали при комнатной температуре, промывали 5минут в дистиллированной воде.

4. Обрабатывали в течение 5 минут 3% раствором перекиси водорода для подавления эндогенной пероксидазы, после чего промывали в трех сменах 0,02М фосфатного буфера рН 7,5 при 37°С по 5 минут в каждой.

5. Наносили первичные антитела (DAKO, Denmark), инкубировали в течение 30 минут во влажной камере в термостате при 37°С, промывали в трех сменах 0,02 М буфера рН 7,5 по 5 минут в каждой. В работе использовали разведенные, готовые к применению антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA, clone PC 10).

6. Наносили вторичные, биотинилированные антитела (Biotinylated Anti-Mouse, Anti-Rabbit, Anti-Goat Immunoglobulins, DAKO, Denmark), инкубировали 20 минут во влажной камере при температуре 37°С, промывали в трех сменах 0,02 М фосфатного буфера рН 7,5 по 5 минут в каждой.

7. Наносили стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (Streptavidin Peroxidase Conjugated, DAKO, Denmark), инкубировали 20 минут во влажной камере в термостате при 37°С, промывали в трех сменах 0,02 М фосфатного буфера рН 7,5 по 5 минут в каждой.

8. Наносили 0,1% раствор диаминобензидина с добавлением 3% раствора перекиси водорода (DAB solution, DAKO, Denmark). Интенсивность окрашивания контролировали под микроскопом. После появления коричневого окрашивания срезы промывали в дистиллированной воде 5 минут, докрашивали гематоксилином, заключали в бальзам.

Микроскопирование проводили с помощью микроскопа «Jenalumar», иммерсионного объектива 90х, окуляры 10х. Подсчитывали количество меченых ядер при просмотре не менее 1 ООО ядер в каждом отделе миокарда и выражали в процентах.

2.10. Метод хемилюминесценции (ХМЛ)

Для интегральной оценки процессов свободнорадикального окисления использовали метод хемилюминесценции (ХМЛ). Исследованию подвергали гомогенаты миокарда новорожденных животных и сыворотку крови. Регистрацию ХМЛ осуществляли на люминесцентном спектрометре LS 50В «PERKIN ELMER». Сигнал стандартизировали с помощью встроенной программы "Finlab". Спонтанную и индуцированную

Fe ХМЛ исследовали по методу [Владимиров Ю.А. и соавт., 1991]. Определяли: светосумму за 1 мин. спонтанной ХМЛ (SCII), величина которой коррелирует с интенсивностью свободнорадикальных процессов; максимум быстрой вспышки (HI) индуцированной ХМЛ, свидетельствующий о содержании гидроперекисей липидов; светосумму (81инд) за 2 мин. после "быстрой" вспышки, отражающую интенсивность накопления перекисных радикалов. Кинетику ХМЛ, инициированную Н2О2 в присутствии люминола [Арутюнян А.В. и соавт., 2000], анализировали по двум параметрам: максимуму быстрой вспышки (Н2), указывающему на потенциальную способность исследуемого биосубстрата к перекисному окислению и светосумме (S2muj) за 2 мин., величина которой зависит от активности антиоксидантной антирадикальной систем защиты. Хемилюминесцентное исследование проводили под руководством д.м.н. О.А. Лебедько.

1Я « а а» а мо

-у |

Рисунок 4. Кривая интенсивности Fe~ -индуцированной хемилюминесценции в гомогенате миокарда иоврожденной белой крысы.

2.11. Статистическая обработка данных

Обработку результатов экспериментов проводили с помощью стандартной программы Statistica 5.0. Различия между группами считали достоверными при р < 0,05.

3. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ 3.1. Влияние гипоксии на герминативную функцию самок, летальность и некоторые соматометрические показатели потомства

ВУГ моделировали путем ежедневного гипобарического воздействия на самок крыс во второй половине беременности (14-19 день гестации). Описание и обоснованность модели гипоксии приведены в предыдущей главе. Применяемое гипоксическое воздействие может быть оценено как тяжелое [Савченков Ю.И., Лобынцев К.С., 1980].

Анализировали течение и исход беременности у 37 белых крыс - самок, подвергавшихся гипоксии. Контрольную группу составили 26 интактных самок белых крыс.

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о выраженном повреждающем влиянии гипоксии на систему «мать-плод». Среди подопытных самок было зарегистрировано 2 летальных случая (5,4%). В группе интактных самок таких случаев не было.

Анализ динамики массы тела беременных крыс-самок показал, что до начала гипоксии динамика этого показателя в экспериментальных группах была идентичной. В период проведения гипобарического воздействия прибавка массы тела подопытных самок была достоверно ниже, чем контрольных (рисунок 5).

Потомство самок, подвергнутых гипоксии, имело существенные отклонения от контрольных показателей. В 4 случаях (10,7%) гипоксическое воздействие привело к мертворожденности или гибели всего помета в течение 12 часов после рождения. По данным Савченкова Ю.И. и Лобынцева К.С. (1980) ежедневный «подъём» самок во второй половине беременности выше 8 км приводил к рождению в срок мертвых плодов.

200 Н-1-1-1-1-1-1

14 15 16 17 18 19 день гестации

Рисунок 5. Динамика массы тела подопытных крыс-самок с 14 по 19 день гестации в сравнении с контролем.

Мы регистрировали летальность потомства подопытных крыс в течение первых трех недель постнатального периода. Под влиянием ВУГ этот показатель вырос почти в пять раз в сравнении с контролем (рисунок 6). Анализ динамики уровня летальности в экспериментальных группах в течение срока наблюдения показал следующее. Среди крысят контрольной группы после периода новорожденное™ (с 8 по 21 сутки) летальных случаев не наблюдалось. В группе крысят, подвергавшихся ВУГ, уровень летальности на второй неделе наблюдения вырос вдвое по сравнению с периодом новорожденности. Такое увеличение летальности под влиянием ВУГ на второй неделе постнатального развития связано, по-видимому, с наступлением дезадаптации органов и систем, функционирующих в раннем возрасте с перегрузкой. Данные литературы свидетельствуют, что после перенесенной ВУГ происходит активизация исполнительных элементов функциональной системы снабжения кислородом. Повышается частота дыхания, частота сердечных сокращений, концентрация гемоглобина крови. Это приводит к значительному увеличению количества потребленного кислорода на 1 грамм массы тела в час в течение периода новорожденности у экспериментальных животных. Однако, несмотря на напряженную работу перечисленных систем, начиная со 2-й недели жизни, потребление кислорода стремительно падает и отстает от нормы во все последующие возрастные периоды [Савченков Ю.И., Лобынцев К.С., 1980]. По данным литературы, у детей, перенесших даже легкую перинатальную гипоксию и имеющих высокую оценку по шкале Апгар, в дальнейшем отмечается целый комплекс патологических отклонений [Самсыгина Г.А. и соавт., 1995]. контроль

О 5 10 15 20 25 30 35 1 неделя П2 неделя ШЗ неделя

Рисунок 6. Влияние внутриутробной гипоксии на летальность белых крыс в течение 2! суток постнатального периода (%).

Изменения соматометрических показателей также свидетельствуют о нарушении процессов развития, как в пре- так и в постнатальном периоде. Масса тела крыс подопытной группы в период новорожденности была достоверно ниже, чем в контрольной группе (рисунок 7). Отставание показателя массы тела подопытных крыс от уровня контроля через 1 сутки после рождения составило в среднем 17%. На 5 сутки - 12,5%, на 7 сутки -9,7%. К возрасту 10 суток разница массы тела контрольных и подопытных животных нивелировалась. Более того, намечается тенденция к инверсии соотношения этого показателя. Сходную динамику массы тела животных, подвергнутых ВУГ, описывали авторы [Савченков Ю.И., Лобынцев К.С., 1980, Gross J. et al., 1999, Li G. et al, 2003].

21 возраст, сутки контроль ИВУ Г

Рисунок 7. Динамика массы тела белых крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии, в раннем периоде постнатального онтогенеза. Примечание: * - р<0,05 по отношению к контролю.

В литературе описаны показатели массы жизненно важных органов белых крыс, перенесших ВУГ. Показано, что ВУГ может иметь отдаленные последствия в виде длительного отклонения массы органов от уровня контроля. Савченков Ю.И., Лобынцев К.С. (1980), зарегистрировали снижение массы почек на фоне ВУГ в сравнении с контролем у животных в возрасте 30 суток. Работами сотрудников нашей лаборатории было показано, что ВУГ индуцирует существенные изменения массы другого жизненно важного органа - печени. У новорожденных животных, перенесших ВУГ, произошло достоверное увеличение как абсолютной, так и относительной массы печени. При этом прирост массы органа был обусловлен увеличением объема кроветворных очагов печени на фоне уменьшения количества паренхиматозных элементов [Уткина Л.И., Тимошин С.С., 1991].

Учитывая задачи исследования, мы обратили особое внимание на динамику массы сердца экспериментальных животных. Относительная масса сердца белых крыс группы «ВУГ» в возрасте 5 суток оказалась достоверно выше, чем в группе «контроль» (рисунок В). В дальнейшем этот показатель не отличался от контроля на статистически значимом уровне. Абсолютная масса сердца подопытных крыс достоверно не изменялась относительно контрольных показателей во все изученные возрастные периоды (рисунок 8). возраст, сутки контроль □ ВУГ

200 150 м X

3 юо я s 50 о

Рисунок 8. Динамика массы сердца белых крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии, в раннем периоде постнатального онтогенеза, (вверху - относительной, внизу - абсолютной). Примечание: * - р< 0.05 по отношению к контролю

Следовательно, динамика относительной массы сердца обусловлена динамикой массы тела подопытных животных. Наши данные согласуются с результатами, полученными другими авторами [Савченков Ю.И., Лобынцев К .С., 1980, Li G.etal, 2003]. т

5 7 21 возраст, сутки

Отсутствие существенных изменений массы сердца белых крыс, перенесших ВУГ, не может быть свидетельством нормального состояния структурного гомеостаза органа, поскольку не позволяет исключить перераспределение тканевых компартментов. Участки ишемического повреждения в миокарде плодов и новрожденных замещаются соединительной тканью [Ахабадзе J1.B., 1974, Валькович Э.И., 1986]. Соотношения мышечного и соединительнотканного компонентов миокарда может изменяться после введения некоторых РП новорожденным крысам [Мельникова Н.П., 2004].

На наличие морфофункциональных изменений в миокарде новорожденных, перенесших гипоксию, указывают многочисленные клинические и экспериментальные данные [Валькович Э.И. и соавт., 1986, Gagnon R et al, 1996, Евсюкова И.И., 2004, Гнусаев С.Ф. и соавт., 2005]. Выраженные дистрофические процессы, обнаруженные на ультрамикроскопическом уровне в сократительных кардиомиоцитах новорожденных [David Н. et al., 1984, Заднипряный И.В., 1995], свидетельствуют о том, что дегенеративные процессы продолжают разворачиваться после прекращения гипоксии. Таким образом, нормализация общих соматометрических параметров и массы сердца не означает полной компенсации повреждающего действия ВУГ на сердечнососудистую систему плода, которое может быть зарегистрировано на тканевом и клеточном уровнях.

3.2. Влияние внутриутробной гипоксии на состояние пролиферации и ядрышкового аппарата клеток миокарда белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза

Мы изучали показатели пролиферативной активности и параметры ядрышкового аппарата клеток миокарда подопытных животных. О пролиферативной активности миокарда новорожденных крыс судили по митотическому индексу, а также при помощи авторадиографии с Н -тимидином. У 21-суточных крыс иммуногистохимически оценивали экспрессию антигенов пролиферирующих ядер. Параметры ядрышкового аппарата клеток миокарда изучали на препаратах окрашенных азотнокислым серебром.

3.2.1. Состояние пролиферации и ядрышкового аппарата клеток миокарда пятисуточных белых крыс, подвергнутых внутриутробной гипоксии

Полученные нами у контрольных 5-суточных животных показатели митотической и ДНК-синтетической активности клеток миокарда представлены в таблицах 1 и 2. Уровень показателей соответствует данным литературы: МИ в желудочковом миокарде новрожденных крыс составляет в среднем 3-5%, ИМЯ - 6-9% [Большакова Г.Б., 1980, Румянцев П.П., 1982, Сазонова Е.Н., 2004, Мельникова Н.П., 2004].

Под влиянием ВУГ частота встречаемости фигур митоза в субэндокардиальных слоях желудочкового миокарда у 5-суточных крыс достоверно возросла (таблица 1). МИ в подопытной группе превысил уровень контроля в среднем на 65%. По данным литературы, возрастание количества фигур митоза, как правило, обусловлено большим числом делящихся клеток, хотя нельзя исключить замедление прохождения клетками митоза [Алов И.А., 1972].

При анализе показателей ДНК-синтетической активности в миокарде 5-суточных животных, подвергнутых ВУГ, было выявлено повышение ИМЯ во всех исследуемых зонах миокарда (рисунки 9,10). Эффект был достоверным практически во всех отделах, кроме левого предсердия. Увеличение в среднем составило 15,5% по отношению к контролю (таблица 2). При этом сохранялись стабильные показатели ИМ. Зарегистрированные изменения свидетельствует об увеличении числа ДНК-синтезирующих ядер, без изменения скорости прохождения S-периода.

Однонаправленный характер изменений МИ и ИМЯ свидетельствуют об активации пролиферативных процессов в миокарде.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Крыжановская, Светлана Юрьевна, Владивосток

1. Абрамченко, В. В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. (Оксидативный стресс в акушерстве и его терапия антиоксидантами и антигипоксантами) Текст. / В. В. Абрамченко // СПб.: Издательство «ДЕАН», 2001.-400 с.

2. Айламазян, Э. К. Акушерство Текст. : учеб., пособие для мед. вузов / Э. К. Айламазян // СПб. : Спец. Лит., 1997 С. 352-359.

3. Алекминская, Л. А. Взаимоотношения энкефалинов с симпатоадреналовой системой при острой ишемии миокарда в эксперименте Текст. / Л. А. Алекминская, Б. Д. Кондратьев, В. Д. Слепушкин // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1986. - № 1. - С. 16-18.

4. Алимов, А. В. Характеристика адаптивных реакций у новорожденных с токсико-септическими состояниями, перенесших перинатальную гипоксию Текст. / А. В. Алимов // Педиатрия. 2003. - № 4. - С. 115-118.

5. Алов, И. А. Цитофизиология и патология митоза Текст. / И. А. Алов // М. : Медицина, 1972 264 с.

6. Андреева, А. А. Продукция окиси азота и состояние центральной гемодинамики у новорожденных, здоровых и перенесших гипоксию Текст. / А. А.Андреева, И. ИЕвсюкова, Т. И. Опарина, А. В. Арутюнян // Педиатрия. 2004. - № 1. - С. 18-22.

7. Арутюнян, А. В. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма : метод, рекомендации Текст. / А. В.Арутюнян, Е. Е. Дубинина, Н. Н. Зыбина. СПб., 2000. - 45 с.

8. Ахабадзе, Л. В. Радиоавтографический и цитометрический анализы роста миоцитов и регенерации миокарда крысы Текст. / Л. В. Ахабадзе // Онтогенез. 1974. - Том 5, [Текст] / № 2. - С. 163-171.

9. Баженова, Е. М. Морфология и биомеханика сердца Текст. / Е. М. Баженова, Г. М. Бородина, В. Ю. Лебединский [и др.] // Морфлогия. 2000. - № 3. — С. 17.

10. Балан, П. В. Сравнительный анализ устойчивости к острой гипобарической гипоксии новорожденных и взрослых экспериментальных животных Текст. / П. В. Балан, А. С. Маклакова, Я. В. Куршинская [и др.] // Акушерство и гинекология. 1998. - № 3. - С. 20 - 23.

11. Буреш, Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения Текст. / Я. Буреш, О. Бурешова, Д. Хьюстон ; под ред. А. С. Батуева ; пер. с англ. Е. Н. Живописцевой.- М. : Высшая школа, 1991.- 399 с. : ил.

12. Бережанская, С. Б. Особенности метаболизма биогенных аминов у новорожденных, перенесших перинатальную гипоксию Текст. / С. Б. Бережанская, Е. А. Лукьянова // Рос. вестник перинат. и педиатрии. 2001. -№ 1.- С. 62-63.

13. Бокерия Е.Л. Нарушения ритма сердца у новорожденных детей при гипоксически- ишемической энцефалопатии Текст. / Е. Л. Бокерия // Росс. Вестник перин и педиат. 2001. - Т. 46, № 1. - С. 19-21.

14. Большакова, Г. Б. Спососбность к восстановлению миокарда плодов крыс Текст. / Г. Б. Большакова // Онтогенез. 1990. - Том 21, № 4. - С 409415.

15. Большакова, Г. Б. Межтканевые взаимоотношения в развитии сердца, Текст. / Г. Б. Большакова // М. : Наука, 1991. 72с.

16. Бродский, В. Я. Полиплоидизация сердечных миоцитов как программированное событие онтогенеза Текст. / В. Я. Бродский, Б. М.Кралсон, А. М. Арефьева// Онтогенез. 1986. - Т. 17, №2. - С. 138-145.

17. Бродский, В. Я. Полиплоидия в миокраде. Компенсаторный резерв сердца Текст. / В. Я. Бродский // Бюлл.эксп. биологии и медицины 1995. -№ 5. - С. 454-458.

18. Валькович, Э. И. Изменения миокарда у плодов и новорожденных детей в условиях гипоксии Текст. / Э. И. Валькович, В. В. Молчанова, М. К. Давыдова, Ф. К. Давыдова // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. -1986. -№3. С. 35-39.

19. Вдовенко, С. В. Влияние гипоксии на процессы клеточного деления эпителия роговицы и языка белых крыс Текст. / С. В. Вдовенко, С. С. Тимошин // Бюл. эксп.биол. и медицины. 1983 .- № 1. — С. 86-87.

20. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы в живых системах Текст. / Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. [и др.] // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. 1991. - Т. 29. - С. 25-30

21. Вундер, П. А. Стрессорные реакции и роль пола в их осуществлении Текст. / П. А. Вундер, Е. В. Андронов, Т. А. Андронова // Успехи современной биологии. 1999. - Том 119. № 4. - С. 335-344.

22. Глебов, А. Н. Прооксидантно-антиоксидантное состояние организма при окислительном стрессе в условиях коррекции L-аргинин-ТчЮ-системы Текст. / А. Н. Глебов, В. В. Зинчук // Бюл. эксп. биол. и медицины. 2006. -Том 141,№4. -С. 368-370

23. Гужова, И. В. Шаперон Hsp 70 и перспективы его использования в противоопухолевой терапии Текст. / И. В. Гужова, С. С. Новоселов, Б. А. Маргулис // Цитология. 2005. - Том 47, №3. - С. 187 - 199.

24. Дашичев, В. В. Морфофункциональное состояние сердечно-сосудистой системы у недоношенных с очень низой массой тела в периоде раннейадаптации. Текст. / В. В. Дашичев, С. В. Шорманов, В. Н. Воловенко [и др.] // Педиатрия.- 2003.- № 1.- 27-29.

25. Дещекина, М. Ф. Влияние хронической внутриутробной гипоксии на обмен пуриновых соединений в эритроцитах крови новорожденных в раннем неонатальном периоде Текст. / М. Ф. Дещекина, Р. Т. Тогузов, В. Ф. Демин [и др.] // Педиатрия. 1990. -№ 1. - С.28-32.

26. Доброхотов, В. Н. Влияние адреналина на клеточное размножение в эпителии роговицы крыс разного возраста Текст. / В. Н. Доброхотов, В. С. Валвас //Бюлл.эксперим. биол. и медицины.- 1974. № 4. - С. 102-105.

27. Евсеенко, Д. А. Изменения в фетоплацентарном комплексе при острой и хронической внутриутробной гипоксии Текст. / Д. А. Евсеенко, Ю. В. Ещенко // Педиатрия.- 2002. № 1.- С. 5-9

28. Евсюкова, И. И. Патогенез перинатальной патологии у новорожденных, детей, развивавшихся в условиях хронической гипоксии при плацентарной недостаточности Текст. / И. И. Евсюкова // Журнал акуш. и жен.болезней. -2004. -№2. С. 26-29

29. Епифанова, О. И. Радиоавтография. / О. И. Епифанова, В. В. Терских, А. В. Захаров. М.: Высшая школа, 1977. - 119 с.

30. Ерохина, И. JI. Митотическая активность, плоидность, и ультраструктура кардиомиоцитов эмбрионов и плодов человека Текст. / И. Л. Ерохина, Г. В. Селиванова, Т. Д. Власова [и др.] // Цитология. 2000. - Том 42, № 2. - С. 146-153.

31. Ерохина, И. Л. Вентрикулярные кардиомиоциты плодов человека in vitro: пролиферация и дифференцировка Текст. / И. Л. Ерохина, Е. Г. Семенова, О. И. Емельянова [и др.] // Цитология. 2005. - Том 47, № 3. - С. 200-205.

32. Ескунов, П. Н. Возрастные особенности постреперфузионного восстановления структуры миокарда человека / П. Н. Ескунов, Р. И. Исраилов // Морфология 2002. - № 4. - С. 45-50.

33. Заднипряный, И. В. Морфофункциональная характеристика поводящей системы сердца при гипоксии плода и новорожденного Текст. / И. В. Заднипряный, А. Г. Сидоров, В. Н. Григоренко // Вестник научных исследований.- 1995, №5. С. 4-7

34. Западнюк, И. П. Лабораторные животные / Западнюк И. П. , В. И. Западнюк, Е. А. Захария // Киев : Вища школа, 1974. 304 с.

35. Золоев, Г.К. Функция эндогенной опиоидной системы при гипоксической гипоксии Текст. / Г. К. Золоев // Физиол. журнал им. И.М.Сеченова. 1989. - № 4. - С. 575-577.

36. Золоев, Г. К. Значение мю- и дельта- опиатных рецепторов в реализации действия энкефалинов на течение гипоксической гипоксии Текст. / Г. К. Золоев, Е. С. Аргинтаев, И. В. Боброва [и др.] // Бюлл.эксп.биологии и медицины. -1992. № И. - С. 500-501

37. Ибрагимова, И. Ф. Пролиферация, дифференциация и гибель кардиомиоцитов при воздействии антиоксиданта Текст. / И. Ф. Ибрагимова, Р. К. Данилов, Ш. 3. Загидуллин // Мофология. — 1997. №5. -С. 50-54.

38. Исакова, О. Л. Исследование деградации пептидов в сыворотке крови методом 1 Н-ЯМР Текст. / О. Л. Исакова, Н. Ф. Сепетов, Ж. Д. Беспалова [и др.] // Биоорганическая химия. -1986.- Т. 12, № 1.- С. 106-111

39. Капелько, В. И. Регуляторная роль кислородных радикалов в миокардиальных клетках Текст. / В. И. Капелько // Рос.физиол.журнал им. И.М. Сеченова. 2004. - Том 90, № 6. - С. 681-692

40. Кельмансон, И. А. Отсроченный риск кардиоваскулярной патологии, ассоциированный с малой массой тела при рождении Текст. / И. А. Кельмансон //Росс.вестник перинат и педиатрии. 1999. - № 2. - С. 12-18

41. Козлова, JI. В. Нарушение адаптации сердечно сосудистой системы после перенатальной гипоксии Текст. / JT. В. Козлова, О. А. Короид // Росс, педиатр, журнал. - 1999. - № 3. - С. 11-14.

42. Коган, Е. Патология митоза и апоптоза при опухолевом росте Текст. / Е. Коган, С.Демура, М. Пальцев // Врач. 2001. № 9. - С. 35 -37.

43. Копылова, Г. Н. Кровоснабжение миокарда и нарушения функций сердца при ишемии Текст. / Г. Н. Копылова // Патологическая физиология и биохимия: учебное пособие для вузов. М. : Издательство «Экзамен», 2005.-С. 140-167.

44. Кораблев, А. В. Патология путей микроциркуляции крови при недоношенности Текст. / А. В. Кораблев, Т. Н. Николаева // Очерки по функциональной патоморфологии. М.: Издательство РГМУ, 2002. С. 9093.

45. Коржевский, Д. Э. Метод выявления ядрышек в ядрах клеток разных тканей Текст. / Д. Э. Коржевский // Арх. анат. , гистол. и эмбр. 1990. - Т. 98, № 2. - С. 58-60.

46. Корнеев, А. А. Индивидуальные особенности резистентности беременных животных к острой гипоксической гипоксии Текст. / А. А. Корнеев, Г. А. Шевелева, Н. Н. Зарипова // Акушерство и гинек. 1990. - № 10.-С. 56-58.

47. Корнеев, А. А. О формировании индивидуальной резистентности организма к острой гипоксической гипоксии в процессе онтогенеза Текст. / А. А. Корнеев // Пат. физиология и экспер. терапия. 1991.- №1. - С. 41-44.

48. Кругалюк, Н. Н. Оксид азота как фактор адаптационной защиты при гипоксии Текст. / Н. Н. Кругалюк // Успехи физиол. наук 2002. - Т.ЗЗ, № 4. - С. 65-79

49. Куанышбекова, Г.А. Динамика содержания лактогенных и стрессогенных гормонов в крови у женщин в период беременности Текст. / Г. А. Куанышбекова, С. Г. Нурлыбаева, К. Ж. Сейтжанова [и др.] // Физиология человека. 2006. - № 6. - С. 114- 118.

50. Лапаев, Э. В. О допустимых величинах скорости изменения барометрического давления Текст. / Э. В. Лапаев, Г. И. Тарасенко, В. Н. Чернуха//Военно-медиц. Журнал. 1981- № 1. - С. 50-51.

51. Ласукова, Т. В. Активация р.-опиатных рецепторов и устойчивость кардиомиоцитов к повреждению Текст. / Т. В. Ласукова, Т. Ю. Реброва // Пат.физиол. и эксперимен. терапия. 2001. -№2. - С. 15-17

52. Лебедько, О. А. Влияние пептидного морфогена гидры на постгипоксические нарушения у крысят, подвергнутых пренатальной гипоксии Текст. / О. А. Лебедько, Т. В. Яценко, С. С. Тимошин, А. Ю.

53. Рубина // Бюлл.эксп.биологии и медицины. 1997.- Том 123, № 3. - С. 269272.

54. Лебедько, О. А. Активные кислородные метаболиты как универсальные мессенджеры процессов сигнальной трансдукции Текст. / О. А. Лебедько, С. С. Тимошин // Дальневост. медицин, журнал. 2004. - №4. - С. 95-98

55. Литвиненко, Л. А. Изменения антиоксидантной защиты крови новорожденных детей с различной патологией Текст. / Л. А. Литвиненко, Л. А. Данилова, Н. П. Шабалов // Вопросы мед. химии. 2002 - № 5 - С. 513518

56. Лишманов, Ю. Б. Опиоидные нейропептиды, стресс и адаптационная защита сердца Текст. / Ю. Б. Лишманов, Л. Н. Маслов // Томск : Издательство ТГУ, 1994. 350 с.

57. Лишманов, Ю. Б. Влияние энкефалинов на биосинтез миокардиальных белков при остром холодовом воздействии Текст. / Ю. Б. Лишманов, Ю. Б. Нарыжная, Л. Н. Маслов //Вопросы мед. химии. 1999 - № 3 - С. 227-231.

58. Лукина, Л. И. Опыт работы перинатального кардиологического центра Текст. / Л. И. Лукина, Н. П. Котлукова // Педиатрия. 1994. - №4. - С. 9496

59. Лушников, Е. Ф. Гибель клетки (апоптоз) Текст. / Е. Ф. Лушников, А. Ю. Абросимов // М. : Медицина, 2001. 192 с.

60. Лю, Б. Н. Кислородно-перекисная концепция апоптоза и возможные варианты его механизма Текст. / Б. Н. Лю // Успехи совр.биол. 2001.- Т. 121, №5.-С. 488-501.

61. Лю, Б. Н. Апоптоз и канцерогенез при старении: кислородно-перекисный аспект Текст. / Б. Н. Лю // Успехи геронтологии. 2006.- №18. - С.29-38

62. Малькович, Е. П. Отсроченный рнск кардиоваскулярной патологии у новорожденных с хронической внутриутробной окисиуглеродной итоксикацией : автореф. дис. . к.мед.наук : 14.00*09 7 Е. П. Малькович ; Дальневост. гос. мед. ун-т. Хабаровск, 2004. - 26 с.

63. Малышев, И. И: Восстановительные процессы в миокарде плодов кролика после механической травмы Текст. / И! И; Малышев // Бюлл.эксп.биологии и медицины 1975. - № 11. - С. 111-113.

64. Малышев, И. И. Митотическая активность миокарда- в раннем онтогенезе у кроликов после небольшой механической травмы сердца Текст. / И. И. Малышев // Бюлл.эксп.биологии и медицины. 1984. - № 6.-С.734-736

65. Малышев, Mi. Ю: Долгосрочный кардиопротекторный эффект оксида азота: роль HSP70 Текст. / М. Ю. Малышев, Е. Б. Маленюк, Е. Б. Манухина. [и др.] //Бюлл.эксп.биологии и медицины.- 1998. Т. 125. - №Г. - О. 23-26

66. Мамаев, Н. Н. Метод оценки белоксинтезирующей функции кардиомиоцитов человека Текст. / Н. Н. Мамаев, А. Я. Гудкова, X. К. Аминева// Арх. анат., гистол. и эмбриол.- 1989. Т. XCV1, №5.- С. 69-72.

67. Мамаев, Н: Н. Структура и функция ЯОР хромосом: молекулярные, цитологические, клинические аспекты Текст. / Н. Н. Мамаев, С. Е. Мамаева //Цитология. 1992. № 10. С. 3-12.

68. Марков, X. М. О регуляции деятельности сердца системой L-аргинин -оксид азота Текст. / X. М. Марков, С. А. Надирашвили // Патол. физиол. и эксп. терапия. 2003. - № 1. - С. 9-11.

69. Маслов, JI. Н. Морфофункциональные проявления кардиопротекторного эффекта стимуляции {i-опиатных рецепторов в условиях стресса Текст. / Л. Н. Маслов, Ю. Г. Ревинская, А. И. Рыжов, Н. В. Нарыжная // Патол.физиол и эксп.терапия.- 2001. № 2. - С. 8-12

70. Маслов, JI.H. Центральные эффекты лигандов ORL 1 рецепторов Текст. / JI. Н. Маслов, Ю. Б. Лишманов, Дж. Кало, Л. Ма // Эксп и клинич фармакология. 2003. - Том 66, № 5. - С.' 69-68.

71. Маслов, Л.Н. Регенерация миокарда Текст. / Л. Н. Маслов, В. В. Рябов, С. И. Сазонова // Успехи физиологических наук. 2004. - Т. 35, № 3. - С. 5060.

72. Маслов, Л. Н. Адаптация миокарда к ишемии. Первая фаза ишемического прекондиционирования. Текст. / Л. Н. Маслов, Ю. Б. Лишманов, Н. В. Соленкова // Успехи физиологических наук. — 2006а. — Том 37, №3.-С. 25-41.

73. Маслов, Л. Н. Регенерация миокарда человека Текст. / Л. Н. Маслов, В. В. Рябов, С. И. Сазонова // Патол.физиол и эксп.терапия. 2006в. —№ 4. - С. 28-32.

74. Маслова, М. В. Влияние гептапептида семакс на деятельность сердца крыс при острой гипобарической гипоксии в раннем постнатальном периодеJ

75. Текст. / M. В. Маслова, Я. В. Крушинская, А. С. Маклакова // Бюлл.эксп.биологии и медицины. 1999. - Том 128, № 2. - С. 161-164

76. Маслова, М. В. Биоамины мозга и поведение потомства после антенатальной гипоксии: эффекты пептидных нейромодуляторов Текст. / М. В. Маслова, А. С. Маклакова, А. В. Граф [и др.] // Нейрохимия. 2001. -Т. 18, №3. - С. 212-215.

77. Маслова, М. В. Острая гипоксия в период органогенеза изменяет баланс вегетативной регуляции сердца у беременных самок крыс Текст. / М. В. Маслова, А. В. Граф, А. С. Маклакова [и др.] // Бюлл.эксп.биологии и медицины. 2005. - Том 139, № 2. - С. 147-149.

78. Мглинец, В. А. Образование правого и левого желудочков сердца из вентрикулярной части сердечной трубки в эмбриогенезе Текст. / В. А. Мглинец // Онтогенез. 2000. - № 2. - С. 83-93.

79. Мельникова, Н. П. Участие регуляторных пептидов в морфогенезе миокарда белых крыс : дис. . д-ра мед. наук : 03.00.25 / Н. П. Мельникова ; Дальневосточ. гос. мед. ун-т. Хабаровск, 2004. - 324 с.

80. Мельникова, Н. П. Влияние введения динорфина крысам в период новорожденности на морфогенез миокарда Текст. / Н. П. Мельникова, С. С. Тимошин, В. И. Цыганков [и др.] // Бюлл.эксп.биологии и медицины. -2000. Том 129, № 6. - С. 623-625.

81. Меныцикова, Е. Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты Текст. / Е. Б. Меныцикова, В. 3. Панкин, Н. К. Зенков [и др.] М.: Фирма "Слово", 2006. - 556с.

82. Меньшикова, Л. И. Дисплазии соединительной ткани сердца в генезе кардиоваскулярной патологии у детей Текст. / Л. И. Меньшикова, О. В. Сурова, В. И. Макарова // Вестник Аритмологии. 2000. - № 19. - С. 54-56

83. Моисеев, Д.Б. Проблемы диагностики инфаркта миокарда у новорожденных Текст. / //Анестезиология и реаниматология, 1998, №1, С. 64-67

84. Мураневич, С.А. Только ли через рецепторы оусуществляется модулирующее действие нейропептидов? Текст. / С. А. Мураневич // Физиолог, журнал им. И.М. Сеченова. 1993. - Том 79, № 4. - С. 9-28.

85. Никольская, Л. А. Медико-социальное значение и программа снижения фетоинфантильных потерь Текст. / Л. А. Никольская // Росс, вест, перинат. и педиатрии. 1999. - №5. - С.- 15-18

86. Новиков, В. С. Гипоксия как типовой патологический процесс, его систематизация. Текст. / В. С. Новиков, В. Ю.Шанин, К. Л. Козлов // Гипоксия. Адаптация, патогенез, клиника. / под ред. Ю. Л. Шевченко СПб. : ООО "ЭЛБИ-СПб", 2000. - С. 12-24.

87. Пагава, К. И. Система эенергетического обеспечения и антиоксидантной защиты у новорожденных при острой и хронической гипоксии Текст. / К. И. Пагава, Э. Д. Оболадзе, Е. А. Чикобава, Г. В. Сукоян // Педиатрия. 2003.- № 1. - С.34-38

88. Панченко, Л. Ф. Метаболизм энкефалинов при различных функциональных и патологических состояниях организма Текст. / Л. Ф. Панченко, Н. В. Митюшина, Н. В. Фирстова, М. Т. Генгин // Вопросы медицинской химии. 1999. - № 4. - С. 11-15.

89. Прахов, А. В. Коррекция транзиторной постгипоксической ишемии миокарда у новорожденных Текст. / А. В. Прахов // Педиатрия. 1998. - № 5. - С. 38-42.

90. Пятин, В. Ф. Оксид азота в зоне А5 модулирует реакцию на гипоксию дыхательного центра и артериального давления у крыс Текст. / В. Ф. Пятин, В. С. Татарников // Бюл.эксп. биол. и медицины. 2005. Том 139, № 2. С. 124-127.

91. Рахматуллина, Ф. Ф. Течение экспериментального инфаркта миокарда в условиях угнетения синтеза NO Текст. / Ф. Ф. Рахматуллина, А. Г. Насырова, А. Л. Зефиров // Бюл.эксп. биол. и медицины. 2005. Том 139, № 4. - С. 371-375.

92. Резников, А. Г. Участие эндогенных опиоидов в патогенезе ранних нейроэндокринных проявлений синдрома пренатального стресса Текст. / А. Г. Резников, Н. Д. Носенко, Л. В. Тарасенко // Бюл.эксп. биол. и медицины. -2003.- Т. 135, № 5. С. 497-499

93. Румянцев, П. П. Кардиомиоциты в процессах репродукции, дифференцировки и регенерации. / П. П. Румянцев Л. : «Наука», 1982. — 288 с.

94. Рыжавский, Б.Я. Состояние важнейших систем в эмбриогенезе: отдаленные последствия / Б.Я. Рыжавский. Хабаровск: Издательство Хабаровского краевого центра психического здоровья, 1999. — 203 с.

95. Рыжавский, Б.Я. Актуальные вопросы медицинской эмбриологии : учебное пособие для студентов медицинских вузов / Б.Я. Рыжавский. — Хабаровск : Издат-во Дальневост. гос. мед. ун-та, 2002. — 94 с.

96. Самсыгина, Г. А. Влияние пренатальной гипоксии легкой степени на развитие плода и новороженного Текст. / Г. А. Самсыгина, JL Ю. Неижко, Д. А. Сергеева [и др.] // Педиатрия. 1995. - № 3. - С. 15-18.

97. Савченков, Ю. И. Очерки физиологии и морфологии функциональной системы мать-плод / Ю. И. Савченков, К. С. Лобынцев. — М. : Медицина, 1980.-С.72-105.

98. Сазонова, Е. Н. Влияние эндотелина-1 на синтез ДНК в миокарде белых крыс на раннем этапе постнатального онтогенеза Текст. / Е. Н. Сазонова, О. А.Сазонов, О. А. Лебедько // Бюлл.эксп.биол. и медицины. -2000. Том 130, № 12. - С. 623 - 625.

99. Сазонова, Е.Н. Онтогенетические особенности влияния эндотелина-1 на тканевой гомеостаз различных клеточных популяций Текст. • / Е. Н. Сазонова, О. А.Сазонов, Н. П. Мельникова [и др.] // Бюлл.эксп.биол. и медицины. 2002. - Том 134, № 7. - С. 37-39.

100. Саркисов, Д. С. Очерки по структурным основам гомеостаза Текст. / Д. С. Саркисов. —М : «Медицина», 1977. —351с.

101. Саркисов, Д. С. Общая патология человека : учебник Текст. / Д. С. Саркисов, М. А. Пальцев, Н. К. Хитров. изд. 2-е, перераб. и доп. — М : Медицина, 1997. — 608с. : ил.

102. Сенькевич, О. А. Физическое развитие и состояние здоровья новорожденных малочисленных народов Приамурья / О. А. Сенькевич, З.В. Сиротина, М. Е.Денисова, И. В. Волошенко // Дальневост. мед. журнал. — 2006.-№ 2.-С. 32-34.

103. Серая, И. П. Современные представления о биологической роли оксида азота Текст. / И. П. Серая, Я. Р. Нарциссов // Успехи соврменной биологии. 2002. - Том 122, № 3- - С. 249-256.

104. Сергеев, П. В. Рецепторы физиологически активных веществ Текст. / П. В. Сергеев, Шимановский Н. JI. М. : Медицина, 1987 - 400с.

105. Симонова, JI. В. Постгипоксическая дезадаптация сердечнососудистой'системы у новорожденных детей Текст. / JI. В. Симонова, Н. П. Котлукова, Н. В. Гайдукова [и др.] // Росс. вест, перинат. и педиатрии. — 2001.-№2.-С. 8-13.

106. Стрижаков, А. Н. Задержка развития плода Текст. / А. Н. Стрижаков, Е. Т. Михайленко, А. Т. Бунин, М. В. Медведев Киев, 1988. - 180 с.

107. Студеникин, М. Я. Гипоксия плода и новоржденного Текст. / М. Я. Студеникин. М. : Медицина, 1984. — 222 с.

108. Таточенко, 3. А. Открытый артериальный проток и синдром дыхательных растройств у недоношенных новорожденных Текст. / 3. А. Таточенко, Н. И. Обреимова, О. Б. Эйгенсон // Педиатрия.- 1981,- № 2,-С.31-35.

109. Тимошин, С. С. Роль пептидного морфогена гидры на раннем этапе постнатального онтогенеза крыс Текст. / С. С. Тимошин, Е. Н. Сазонова, О.

110. A. Лебедько, В. В. Кулаева // Бюлл.эксп.биол. и медицины. 1998. - Том 126, № 12.-С. 681-683.

111. Тищенко, О. В. Значение оксида азота в развитии гипертрофии сердца в условиях экспериментальной почечной гипертензии Текст. / О. В. Тищенко, Е. В. Елисеева, П. А. Мотавкин // Цитология. 2002. - Том 44, № 3.- С. 263-269.

112. Трофимов, С. С. Вариабельность последствий воздействия перинатального патогенного фактора у крыс Текст. / С. С. Трофимов, Т. А. Воронина, Р. У. Островская // Успехи совр. биол. 1999. - Том 119, № 3. - С. 285-290.

113. Тюкова, Н. В. Клинико-электрографические осбенности нарушений сердечного ритма у новорожденных с перинатальной гипоксией Текст. / Н.

114. B. Тюкова, Л. И. Меньшикова, В. И. Макарова // Вестник аритмологии. -2000. -№ 19. С. 61-63.

115. Уткина, JI. И. Изменения в печени потомства белых крыс под влиянием внутриутробной хронической гипоксии Текст. /Л. И. Уткина, С.С. Тимошин //Бюлл.эксп.биол. и медицины. 1990. - № 11. - С. 541-543.

116. Федорова, М.В. Диагностика и лечение внутриутробной гипоксии плода / М. В. Федорова. М. : Медицина, 1982. - 205 с.

117. Фролов, В. А. Энерго-информационная роль правого желудочка в информационно-термодинамической системе сердца Текст. / В. А. Фролов, Т. Ю. Моисеева // Патол. физиол. и эксперим. терапия. — 1999. — № 4. — С. 810.

118. Хачатурьян, М. JI. Влияние сезона года на устойчивость крыс к гипоксии Текст. / М. JI. Хачатурьян, JL А. Панченко // Бюлл.эксп.биол. и медицины. 2002. - Том 133, № 3. - С. 348-351.

119. Хлопонин, П. А. Процессы кардиогенеза в зародышевом периоде развития человека. Текст. / П. А. Хлопонин, О. Ю. Патюченко // Морфология. -2003. Том 123, № 1. - С. 50-54.

120. Черкасов, Н. С. Диагностика повреждений миокарда у детей, рожденных путем кесарева сечения. Текст. / Н. С. Черкасов, К. Ж. Енгибарян // Росс.вестник перинат. и педиатрии. Том45, №3. - 2000. - С. 59-61.

121. Шабалов, Н. П. Асфиксия новорожденных Текст. / Н. П. Шабалов, В. А. Любимова, А. Б. Пальчик, В. К. Ярославский. М. : Медицина, 1999. -416 с.

122. Шарапова, О. В. Состояние и перспективы развития акушерской и неонатологической помощи в стране. Текст. / О. В. Шарапова // Педиатрия.- 2003. -№ 1. -С.7-14.

123. Школьникова, М. А. Современная структура сердечно-сосудистых заболеваний у детей, лечение и профилактика. Текст. / М. А. Школьникова, И. В. Леонтьева // Росс, вестник перинат. и педиатрии 1997 № 6. — С. 1420.

124. Эйгенсон, О. Б. Гипоксия миокарда у новорожденных детей Текст. / О. Б. Эйгенсон // Педиатрия. 1990. - №8. - С. 96-98.

125. Яснецов, В. В. Антигипоксические свойства эндорфинов, энкефалинов и их аналогов Текст. / В. В. Яснецов // Бюлл.эксп.биол. и медицины.- 1988.- № 8. С. 174-177.

126. Aberg, F. Distribution and redox state ubiqunones in rat and human tissues Text. / F. Aberg, E. L. Appelkvist, G. Dallner, L. Ernster // Arch. Biochem Biophys.- 1992.-Vol. 47.-P. 191-196.

127. Ambalavanan, N. Hypoxia induced release of peptide growth factors from neonatal porcine pulmonary artery smooth muscle cells Text. / N. Ambalavanan, A. Bulger, J. B. Philips // Biol. Neonate. 1999. - № 76 (5). - P. 311-9.

128. Anversa, P. Myocardial infarction and the myocyte IGF1 autocrine system Text. / P. Anversa, K. Reiss, J. Kajstura, W. Cheng [et al.] // Eur. Heart J. -1995.- V. 16.-P. 37-45.

129. Anversa, P. Ventricular myocytes are not terminally differentiated in the adult mammalian heart Text. / P. Anversa, J. Kajstura // Circ. Res. 1998. - V. 83.№ l.-P. 1-14.

130. Attali, B. Pre- and postnatal development of opiate receptor subtypes in rat spinal cord Text. / B. Attali, D. Say a, Z. Vogel // Dev. Brain Res. 1990. -Vol.53, № l.-P. 97-102.

131. Aurich, J. E. Influence of labor and neonatal hypoxia on sympathoadrenal activation and methionine enkephalin release in calves Text. / J. E. Aurich, I. Dobrinski, A.Petersen [et al.] // Am. J. Veterinary Res. 1993. - 54. - № 8. - P. 1333-1338.

132. Barker, D. J. P. Mothers, babies and health in later life. Text. / D. J. P. Barker Edinburg-London : Chutchill Livingstone, 1998. - 217 p.

133. Basset, J. M. Catecholamines inhibit growth in fetal sheep in the absence of hypoxemia. Text. / J. M. Basset, C. Hanson // Am J Physiol. 1998. - № 6. -P.1536-45

134. Beltrami A. P. Evidence that human cardiac myocytes divide after myocardial infarction Text. / A. P. Beltrami, K. Urbanek, J. Kaistura [et al.] // N. Engl. J. Med. 2001. - V. 344, № 23. - P. 1750-1757.

135. Berdougo, E. Mutation of weak atrium/atrial myosin heavy chain disrupts atrial function and influences ventricular morphogenesis in zebrafish Text. / E. Berdougo, H. Coleman, D. H.Lee [et al.] // Development. 2003. - Vol. 130, № 24.-P. 6121-6129.

136. Bitar, F. F. Modulation of ceramide content and lack of apoptosis in the chronically hypoxic neonatal rat heart. Text. / F. F. Bitar, H. Bitar, E. Sabban [et al.] // Pediatr Res. 2002 - Vol.51, № 2. - P. 144-9.

137. Bugaisky, L. Cellular growth of cardiac muscle after birth. Text. / L. Bugaisky, R. Zak // Text; Repts Biol Med. 1979. - Vol. 39.- P. 123-138.

138. Clark, W.A., Fischman D.A. Рост сердца. Сравнение пролиферации клеток in vitro и in vivo. В кн.: Метаболизм миокарда. М.: Медицина, 1979. -С. 159-171.

139. Claycoumb, W.C. Differentiation, growth and aging of the cardiac muscle cell. Text. / W. C. Claycoumb // Cell. Cardiol. 1979.- Vol. 11. P. 15

140. Colman, A. S. Lack of involvement of mu opioid receptors in dermorphin-induced inhibit of hypoxic and hypercapnic ventilation in rat pups Text. / A. S. Colman, J. H. Miller // Respir Physiol Neurobiol. 2002.- Vol. 131, № 3. - P. 199-212.

141. Crawford, D. Oxidant stress induces the proto-oncogenes c-fos and c-myc in mouse epidermal cells Text. / D. Crawford, I. Zdinden, P. Amstad, P. Cerutti // Oncogen. 1988. - Vol. 3.- P. 27-32.

142. Cullen, J.P. Use of A-192621 to provide evidence for involvement of endothelin-1-mediated cardiomyocyte hypertrophy Text. / J. P. Cullen, D. Bell, E. J. Kelso, B.J. McDermott // Eur. J. Pharmacol. 2001. - Vol. 417, № 3. - P. 157-168.

143. Dallner, G. Regulation of ubiquinone metabolism Text. / G. Dallner, P. J. Sindelar // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 29. - P. 1028-1035.

144. David H. Postnatal development of myocardial cells after oxigen deficiency in utero Text. / H. David, D. Behrisch, O.D. Vivar Flores // Pathol. Res. Pract. -1984. Vol. 179, № 3. - P. 370-376.

145. Deindl, E. Effect of intermittent high altitude hypoxia on gene expression in rat heart and lung Text. / E. Deindl, F. Kolar, E. Neubauer [et al.] // Physiol Res. 2003. - Vol. 52, № 2. - P. 147-57.

146. Devlin, A.M. Vascular smooth muscle cell polyploidy and cardimiocyt hypertrophy due to chronic NOS inhibition in vivo Text. / A.M. Delvin, M. J. Brosnan, D. Graham [et al.] // Am. J. Physiol. 1998. - Jan. - P. 274: H 52-9/

147. Donelly, W. H. Ischemic papillary muscle necrosis in stressed newborn infants Text. / W. H. Donelly, R. L. Bucciarelli [et al.] // J. Pediatr. 1980.-Vol.96, № 2. - P. 295-300.

148. Ela, C. Distinct components of morphine effects on cardiac myocytes are mediated by the kappa and delta opioid receptors Text. / C. Ela, J. Barg, Z. Vogel [et al.] // J Mol Cell Cardiol. 1997. - Vol.29, № 2. - P. 711-720.

149. Ervin, M. G. Antenatal glucocorticoids alter premature newborn lamb neuroendocrine and endocrine responses to hypoxia Text. / M. G. Ervin, J. F. Padbury, D. H. Polk [et al.] // Am J Physiol. 2000. - Vol. 279, № 3. - P. R830-838.

150. Fukai, Т. Extracellular superoxide dismutase and cardiovascular disease Text. / T. Fukai, R.J. Folz, U. Landmesser, D. G. Harrison // Cardiovasc. Res. -2002.-Vol. 55.-P. 239-249.

151. Gagnon, R. Fetal placental embolization in the late-gestation ovine fetus: alteration umbilical blood flow and fetal heart patterns Text. / R. Gagnon, L. Johnston, J. Murotsuki // Am J Obstet Gynecol. 1996. - Vol. 175, № 1. - P. 6372.

152. Genest, S. E. Neonatal maternal separation and sex-specific plasticity of the hypoxic ventilatory response in awake rat Text. / S. E. Genest, R. Gulemetova, S. Laforest [et al.] // J Physiol. 2004. - Vol. 554(Pt 2). - P. 543-57.

153. Ghyselinck, N. B. Contribution of retinoic acid receptor beta isoforms to the formation of the conotruncal septum of the embryonic heart Text. / N. B. Ghyselinck, O. Wenddling, N. Messaddeq [et al.] // Devel. Biol. 1998.- Vol. 198, №2.-P. 303-318.

154. Glickman, N. S. Cardiac development in zebrafish: coordination of form and function Text. / N. S. Glickman, D. Yelon // Cell. Dev. Biol. 2002. - Vol. 13, № 6.-P. 507-513.

155. Golub, M. S. Effect of intrapartum meperedine on behavioral consequences of neonatal oxygen deprivation in rhesus monkey infants Text. / M. S. Golub, J. H. Eisele, J. M. Donald // Dev. Pharmakol. Ther. 1991. - Vol. 16, № 4. - P. 231240.

156. Gourdie, R. G. Development of the cardiac pacemacing and conduction system Text. / R. D. Gourdie, B. S. Harris, J. Bond // Birth. Defects. Res. Part. C. Embryo. Today.- 2003. Vol. 69, №1. - P. 46-57.

157. Gruppuso, P. A. The relationship between differentiation and,proliferation in late gestation fetal rat hepatocytes Text. / P. A. Gruppuso, Т. C. Bienieki, R.A. Faris // Pediatr Res. 1999. - Vol. 46, № 1. - P. 14-19.

158. Gu, H. Dynorphin, naloxone and overflon of norepinephrine during cardiac nerve stimulation in dogs Text. / H. Gu, B. A. Barron, J. F. Gaugl, J. L. Caffrey //Amer. J. Physiol. 1992. - Vol. 263, № 1. - P. H152-H161.

159. Haunstetter, A. Apoptosis. Basic mechanisms and implications for cardiovascular disease. Text. / A. Haunstetter, S. Jzumo // Circ. Res. 1998. -Vol. 82,№ 11.-P. 1111-1129.

160. Hollenberg, M. Effect of oxygen on growth of cultured myocardial cells. Text. / M. Hollenberg // Circulat. Res. 1971. - Vol. 28. - P. 148-157.

161. Hollenberg M. Effect of hypoxia on cardiac growth in neonatal rat. Text. / M. Hoolenberg, N. Honbo, A. J. Samorodin //Amer. J. Physiol. 1976. - Vol. 233.-P. H356-H360.

162. Honbo, N. Effect of hyperoxia on rates of myocardial cell division in newborn rats Text. / N. Honbo, M. Hollenberg // Clin. Res. 1973. - Vol. 21. -P. 223-242.

163. Hunter, C. J. Role of nitric oxide in hypoxic cerebral vasodilatation in the ovine fetus Text. / C. J. Hunter, A. B. Blood, C. R. White [et al.] // J. Physiol. -2003 -№ 1.- P. 625-633.

164. Ibara, S. Histologic observation of ductus arteriosus in premature infants with intrauterine growth retardation Text. / S. Ibara, M. Tokunaga, T. Ikenoue // J Perinatol. 1994. - Vol. 14, № 5. - P. 411-6.

165. Ishii, O. In vitro tissue engineering of a cardiac graft using a degradable scaffold with an extracellular matrix-like topography Text. / O. Ishii, M. Shin,

166. Т. Sueda, J. P. Vacanti // J Thorac Cardiovasc Surg. 2005. - Vol. 130, № 5. - P. 1358-63.

167. Ishiwata, T. Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular mayoarchitecture in normal mouse embryos Text. / T. Ishiwata, M. Nakazawa, W. T. Pu [et al.] // Circ. Res. 2003. - Vol. 93, № 9. p. 857-865.

168. James, T. N. Cardiac conduction system Text. / T. N. James // Am. J. Cardiol. 1977. - Vol. 40,- P. 965-986.

169. Kaistura, J. Telomere shortening is an in vivo marker of myocyte replication and aging Text. / J. Kaistura, B. Pertoldi, A. Leri [et al.] // Am. J. Pathol.-2000.-Vol. 156, №3.-P. 813-819.

170. Kamitomo, M. Cardiac function in fetal sheep during two weeks of hypoxemia Text. / M. Kamitomo, L. D. Longo, R. D.Gilbert // Am J Physiol. -1994. Vol. 266. - P. R1778-85

171. Kohtz, D. S. Growth and partial differentiation of presumptive human cardiac myoblasts in culture Text. / D. S. Kohtz, N. R. Dische, T. Inagami, B. Goldman [et al.] //J. Cell Biol.- 1998. Vol. 108. - P. 1067-1078.

172. Kraczkowski, J. Chronic prenatal hypoxia decreases mu-opioid receptor binding in newborn male rat brain Text. / J. Kraczkowski, A. Czekierdowski, M. Semczuk // Archives of Prenatal Medicine. 1997. - Vol. 3, № 2. - P. 121-123.

173. Komuro, I. Molecular mechanism of cardiac hypertrophy and development Text. /1. Komuro // Jpn.Circ. J.- 2001. Vol. 65, № 5.- P. 353-358.

174. Kugler, J. Effect of chemical sympathectomy on myocardial cell division in the newborn rat Text. / J. Kugler, P. Gillette, S. Graham [et al.] // Pediatr. Res. -1980. Vol. 14.-P. 881-884.

175. Kunz, J. Die Proliferation von Muskelzellen und Bindegewebeszellen der Rattenherzens wahrend des postnatalen Wahstums Text. / J. Kunz, U. Keim, I. Fuhrmann // Exper. Pathol. 1972. - Bd. 6. - S - 270-277.

176. Li, G. Effect of Prenatal Hypoxia on Heat Stress-Mediated Cardioprotection in Adult Rat Heart Text. / G. Li, S. Bae, L. Zhang // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2004. - № 8. - P. 234-237.

177. Li, G. Effect of fetal hypoxia on heart susceptibility to ischemia and reperfusion injury in the adult rat Text. / G. Li, Y. Xiao, J. L. Estrella // J Soc Gynecol Investig. 2003. - Vol. 10, № 5. - P. 265-74

178. Liu, J. Developmental changes of (3)H-labelled mu-opioid receptors in brainstems of intra-uterine growth-restricted rats Text. / J. Liu, C. Dong, L. Cazin [et al.] // Brain Res Dev Brain Res. 2001.- Vol. 126, № 2. - P. 211-5.

179. Liu, H. Role of opioid deltal receptors, mitochondrial К (ATP) channel, and protein kinas С during cardiocyte apoptosis Text. / H. Liu, H. Y. Zhang, В. C. McRherson [et al.] // J. Mol.Cell.Cardiol. 2001. - Vol. 33, № 11. - p. 20072014.

180. Lu, C. Demonstration of direct effect of growth hormone on neonatal cardiomyocytes Text. / C. Lu, G. Swartzbauer, M. A. Sperling, S. U. Devaskar // J. Biol. Chem. 2001. -,Vol. 276, № 25. - P. 22892-22900.

181. Lueder, F.L. Chronic maternal hypoxia retards fetal growth and increases glucose utilization of select fetal tissues in the rat Text. / F. L. Lueder, S. B. Kim, C. A. Buroker [et al.] // Metabolism. 1995. - Vol. 44, № 4. - P. 532-7.

182. Lupu, F. Roles of growth hormone and insulin-like growth factor 1 in mouse postnatal growth Text. / F. Lupu, J. D. Terwilliger, K. Lee [et al.] // Dev Biol.-2001.-Vol. 229, № l.-P. 141-62.

183. Ma, M. C. Oxygen-sensitive Opioid Receptor-regulated Survival and Death Signals Text. / M. С. Ma, H. Qian, F. Ghassemi [et al.] // J. Biol. Chem. -2005. - Vol. 280, № 16. - P. 16208-16218.

184. Maitra, N. Expression of alpha and beta integrins during terminal differentiation of cardiomyocytes Text. / N. Maitra, I. L. Flink, J. J. Bahl, E. Morkin // Cardiovasc. Res. 2000. - Vol. 47, № 4. - P. 715-725.

185. Mamet, J. Long-term prenatal hypoxia alters maturation of adrenal medulla in rat Text. / J. Mamet, J. Peyronnet, J. C. Roux [et al.] // J. of Physiology. -2002. Vol. 543, № 1. - P. 387-395.

186. Martin, H. Morphometric studies of rat myocatdium during early postnatal period Text. / H. Martin, R. Z. Meyer // Mikrosk. Anat. Forsch. 1980.- Vol. 94, №3. - P. 460-466.

187. McDevitt, Т. C. Proliferation of cardiomyocytes derived from human embryonic stem cells is mediated via the IGF/PI 3-kinase/Akt signaling pathway Text. / Т. C. McDevitt, M. A. Laflamme, С. E. Murry // J Mol Cell Cardiol. -2005. -№ 18.-P. 456-459.

188. McLaughlin, P. J. Regulation of DNA synthesis of myocardial and epicardial cells in developing rat heart by Met5.-enkefalin [Text] / P. J. McLaughlin//Am J Physiol. 1996.-Vol. 271, № l.-P. R122-129.

189. McLaughlin, P. J. Exposure to the opioid antagonist naltrexon throughout gestation alters postnatal heart development Text. / P. J. McLaughlin // Biol. Neonate 2002. - Vol. 82, № 3. - P. 207-216.

190. McLaughlin, P. J. Opioid receptor blockade during prenatal life modifies postnatal behavioral development Text. / P. J. McLaughlin, S. W. Tobias, С. M. Lang, J. S. Zagen // Pharmacol. Biochem. Behav. 1997. - Vol. 58, № 4. - P. 1075-1082.

191. McLaughlin, P. J. Identification and characterization of the zeta opioid receptor in developing rat heart Text. / P. J. McLaughlin, Y. Wu // Am. J. Physiol. 1997. - Vol. 272, № 6. - P. R1841-1846

192. McLaughlin, P. J. Opioid gene expression in the developing and adult rat heart Text. / P. J. McLaughlin, Y. Wu//Dev Dyn. 1998. - Vol. 211, № 2. -P. 153-163.

193. Moscoso, G. The biology of foetal development and injury Text. / G. Moscoso // Lupus. 2002. - Vol. 11, № 10. - P. 645-8.

194. Murotsuki, J. Chronic fetal placental embolization and hypoxemia cause hypertension and hypertrophy in fetal sheep Text. / J. Murotsuki, J. R. Challis, V. K. Han [et al.] // Am J Physiol. 1997. - Vol. 272. - P. R201 -7.

195. Oparil S. Myocardial cell hypertrophy or hyperplasia Text. / S. Oparil, S. P. Bishop, F. J. Clubb // Hypertnsion. 1984. - № 6. - P. 38-43.

196. Ostadolova, I. Prenatal hypoxia-ischemia alters expression and activity of nitric oxide synthase in the young brain and causes learning deficits Text. / I. Ostadalova, B. Ostadal, F. Kolar // Brain Res Bull. 1999. - Vol. 49, № 5. - P. 359-365.

197. Perego, P. Apoptosis induced by extracellular glutatione is mediated by HO production and DNA damage Text. / P. Perego, L. Gatti, N. Carenini [et al.] // Int. J. Cancer. 2000. - Vol. 87. - P. 343-348.

198. Pignatti, C. Nitric oxide mediates either proliferation or cell death in cardiomyocytes Text. / C. Pignatti, B. Tantini, C. Stefanelli [et al.] // Amino Acids. 1999. - Vol. 16. - P - 181 -90/

199. Radisic, M. Oxigen gradients correlate with cell denisity and cell viability in engineered cardiac tissue Text. / M. Radisic, J. Malda, E. Epping [et al.] // Biotechnol Bioeng. 2005. - № 3. - P. 678-679.

200. Rafiee, P. Cellular Redistribution of Inducible Hsp70 Protein in the Human and Rabbit Heart in Response to the Stress of Chronic Hypoxia Text. / P. Rafiee, Y. Shi, K. A. Pritchard [et al.] // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278, № 44. - P. 43636-43644.

201. Razeghi, P. Hypoxia-induced switches of myosin haevy chain iso-gene expression in rat heart Text. / P. Razeghi, M. Faadiel Essop, J.M. Huss [et al.] // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003.- Vol. 18. - P. 1024-1027.

202. Renick, S. E. Neuronal control of cardiac and hepatic macromolecule synthesis in the neonatal rat: effects of sympathectomy Text. / S. E. Renick, F. J. Seider, E. G. McCook, T. A. Slotkin // Pediatr. Res. 1997. - Vol. 41'. - P. 359363.

203. Ruijtenbeek, K. Chronic hypoxia stimulates periarterial sympathetic nerve development in chicken embrio Text. / K. Ruijtenbeek, F. A. le Noble, G. M. Jansen [et al.] // Circulation. 2000. - Vol. 102. - P. 2892-7.

204. Sabri, A. Coupling Function of Endogenous оц and Adrenergic Receptors in Mouse Cardiomyoeytes Text. / A. Sabri, E. Рак, S. A. Alcott [et al.] // Circulation Research. - 2000. Vol. 86. - P. 1047

205. Saugstad, O. D. Update on oxygen radical disease in neonatology Text. / O. D. Saugstad // Curr Opin Obstet Gynecol. 2001. - Vol. 13, № 2 - P. 147-153.

206. Saugstad, O. D. Oxidative stress in the newborn—a 30-year perspective Text. / O. D. Saugstad // Biol Neonate. 2005. Vol. 88, № 3. - P. 228-36.

207. Schneider, R. Die Zahl der Kerne in isolierten Zellen des menshlichen Myokards Text. / R. Schneider, P. Pfitzer // Virchows Arch. 1973. - Vol. 12. -P. 238-258.

208. Setzer, E. Papillary muscle necrosis in a neonatal autopsy population. Insidens and associated clinical manifistation Text. / E. Setzer // J. Pediatr. -1980. Vol. 96, № 2,- P. 289-294.

209. Shanmungam, S. Distribution of type 1 angiotensin II receptor subtype messendger RNAs in the rat fetus Text. / S. Shanmungam, C. Monnot, P. Corvol, J. M. Gasc //Hypertension. 1994. - Vol. 23, № 1. - P. 137-141.

210. Sies, H. Oxidative stress: Introductory remarks Text. / H. Sies // Oxidative stress. L.: Acad. Press, 1985. - P. 119-126.

211. Stefano, G. B. Text. Presence of the ji-opiate receptor in endothelial cells: coupling to nitric oxide production and vasodilation / G. B. Stefano, A. Hartman, T.V. Bilfinger // J.Biol. Chem. 1995. - Vol. 270. - P. 30290-30293.

212. Stopfkuchen, H. Einsatz von Katecholaminen im Kindesalter Text. / H. Stopfkuchen // Kl. Pediatr. 1995. - № 2. - P. 27-40.

213. Suschek, С. V. Critical Role of L-Arginine in Endothelial Cell Survival During Oxidative Stress Text. / С. V. Suschek, O. Schnorrn, K. Hemmrich [et al.] // Circulation. 2003. - Vol. 107. - P. 2607-2611.

214. Szeto, H. H. In vivo disposition of dermorphin analog (DALDA) in nonpregnant and pregnant sheep Text. / H. H. Szeto, J. F. Clapp, D. M. Desiderio [et al.] // Pharmacology and Experim. Therap. 1998. - Vol. 1, № 1. - P. 61-65.

215. Tazuke, S. L. Hypoxia stimulates insulin-like growth factor binding protein 1 (IGFBP-1) gene expression in fetal hypoxia Text. / S. L. Tazuke, N. M. Mazure, J. Sugawara [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. Vol. 95, № 17. -P. 10188-10193

216. Tompson, L. P. Effects of chronic hypoxia on fetal coronary respons Text. / L. P. Tompson // High Alt Med Biol. 2003. - Vol. 4, № 2. - P. 215-24.

217. Toschi, L. Chenges incyclin / proliferation cell nuclear antigen distribution during DNA repain synthesis Text. / L. Toschi, R. Bravo // J. Cell. Biol. -1988. -Vol. 107,№5.-P. 1623 1628.

218. Tseng, Y. T. P-Adrenergic receptors regulate cardiomyocyte proliferation during early postnatal life Text. / Y. T. Tseng, R. Kopel, J. T. Stabila [et al.] // The FASEB Journal. -2001. Vol 15.-P. 1921-1926.

219. Valks, D. M. Regulation of Bcl-xL Expression by H202 in Cardiac Myocytes Text. / D. M. Valks, T. J. Kemp, A. Clerk // J. Biol. Chem.- 2003. -Vol. 278, № 28. P. 25542-25547.

220. Vanderburgh, H. H. Mechanical stimulation of organogenic cardiomyocytegrowth in vitro Text. / H. H. Vanderburch, R. Solerssi, J. Shansky [et al.] // Am. J. Physiol. 1996. - Vol. 270, № 5. - P. C1284-1292.

221. Ventura, C. Nuclear Opioid Receptors Activate Opioid Peptide Gene Transcription in Isolated Myocardial Nuclei Text. / C. Ventura, M. Maioli, G. Pintus [et al.] // Biol Chem. 1998. - Vol. 273, № 22. - P. 13383-13386.4

222. Wollert, К. C. Gene transfer of cGMP-dependet protein kinase I enhances the antihypertrophic effects of nitric oxide in cardiomyocytes Text. / К. C. Wollert, B. Fiedler, S. Gambaryan [et al.] // Hypertension. 2002. - Vol. 39, № l.-P. 87-92.

223. Xanthoudakis, S. Redox activation of Fos-Jun DNA binding activiti is mediated by a DNA repair enzyme Text. / S. Xanthoudakis, G. Miao, F. Wang [et al.] // EMBO J. 1992. - Vol. 11. - P. 3323-3335.

224. Xiao, D. Chronic hypoxia and developmental regulation of cytochrome с expression in rats Text. / D. Xiao, C. A. Ducsay, L. Zhang // J Soc Gynecol Jnvestig. 2000. - Vol. 7, № 5. - P. 279-83 .

225. Zaffran, S. Species-specific differences of myosin content in the developing cardiac chamber of fish, birds, and mammals Text. / S. Zaffran, M. Frasch // Anat. Rec. 2002. - Vol. 268, №1. - p. 27-37.

226. Zanetti, E. Involvementie of protein kinase С in yhe adaptive changes of cholinergic neurons to sympathetic denervation in gvinea pig myentetric plexus Text. / E. Zanetti, C. Giaroni, A. Vanti [et al.] // Life Seri. 2003. - Vol. 73, №2.-P. 2641-2654.

227. Zhang, S.Q. Inhibitory effect of antisens oligodeoxynucleotide to p44/p42 МАРК on angiotensin II-induced hypertrophic response in cultured neonatal rat cardiac myocyte Text. / S. Q. Zhang, B. Ding, Z. G. Guo, Y. X. Li // Acta

228. Pharmacol. Sin. 2004. - 2004. - Vol. 25, № l.-P. 41-46.

Информация о работе

Крыжановская, Светлана Юрьевна
кандидата медицинских наук
Владивосток, 2008
ВАК 03.00.25

Диссертация

Влияние внутриутробной гипоксии на процессы пролиферации и свободнорадикального окисления в миокарде белых крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы