Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние полого голодания на протеолиз, всасывание и развитие сенсибилизации к белковым антигенам (экспериментальные исследования)

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние полого голодания на протеолиз, всасывание и развитие сенсибилизации к белковым антигенам (экспериментальные исследования)"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

институт питания

ч

На празах рукописи УДК 612. 353 577.158 616-05. 3

Михайлов Леонид Александрович

ВЛИЯНИЕ голюго ГОЛОДАНИЯ НА ПРОТЕОЛИЗ, ВСАСЫВАНИЕ И РАЗБИТИЕ СЕШИБИЛИЗАЩШ К БЕЛКОВЫЦ АНТИГЕНАЦ. ( экспериментальные исследования)

03.00.04. Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

иэсква-1002

Работа выполнена в Интитуте питания Российской Академии медицинских наук

Научный руководитель:

член-корр. А1Ш, профессор Шатеркиков ЬА.|

Научный консультант:

доктор биологических наук Назо ЕК

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Гапларов Ц.Ы.

член-корр. АШ, доктор медицинских наук, профессор Коровкин Б.®.

Бедувая организация - Российский Государственный Медицинский Университет

Задата состоится " ^В" МЛ^ИЬ 1992 года в " " часов на заседании специализированного совета Д 001.02.01. при Институте питания РАЫН ( 109240, Москва, Устьинский проезд, 2/14)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института питания РАШ

Автореферат разослан

" '1Ц" Х<аЛ 1992 Г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Жминченко ЕМ.

ОВШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность работи.

В пастояюэе время отмечается значительней рост аллергических оаболеваяиЛ. Вследствие различия илшшют-патогенетнчссгаа вариантов развития аллергической патологии и индивидуальних особенностей тз-чеии? заболевания для успешного их лечения и профилактики используется шодгоидуалыше коыпдэкепио программу, вшвчавдие как недока-(янтозшк, так и немедикаментозны» методы, при этой Со ль спя роль отводится патогенетически обоснованной . диетотерапии / Адо А. Д. ,1978, Чучагаш Л. Г. ,1985, Федосеев Г. В., 1988, ОдатЛ IX К., 1991/.

Для коррекции алиментарных аллергических решсцнй традиционно йриченяются элиминациошпго диеты, устраняйте нз рациона питания причинно-эначнмк ¡шщ'-вие аллергены, а такжэ шщевш пепузстг.а, визи-гапдю •.пере1фвстиш реакцш с аиш / Чучашш Л. Г. ,1080, Самсонов ¡1. А., 1981,Горячкина Л. Л. ,1001/. Пленение режимов поллого голода-П'-и псзвохлот существенно погасить о^йстншюсть лечения ряда аллергических заболовашш / Кокосоз Л. Л , Сопит С. Г., 1981/. Изиэ-иешш обмена веществ при полном голодании подробно изучены и эксперименте и па добровольцах, 8Пйчнтзл>но г/еньЕо известно сЗ особенностях -метаболизма- восстапопитошюго периода /Покровский А. А., 1969, . Са]Ш1 йЕ. ,1970, Sta.nlу IX и др., 1982/. Исследования, про-вэдо.шшэ "в Институте питания РА151:: других научных учреждениях, по~ газали,;. что . при проведении разгругочно-диетической терапии у Оодь-Т1« аллерготесгагп! заболеваниями наОдлдается лодохггелыгал дшимика ыняшко-биохшичеасн?, кшуиолн'ячзаих л Сушаиюнадыиа по.тааге-".ей /Тс^15гпег а ,1905, Кокосов Л. II, 1905. Сзясояоп 11 Л.. 1890 /.

Имеющиеся немногочисленные данные о состоянии процессов пищеварения и всасывания при полном голодании свидетельствуют об изменении барьерной функции желудочно-кишечного тракта . Учитывая роль повышенного всасывания нерасщепленных белков в формировании гиперчувствительности и значение процессов пищеварения в инактивации белковых антигенов, нами проведено комплексное экспериментальное исследование, целью которого являлось: изучение влияния различных сроков полного голодания на протеолиз, всасывание и развитие сенсибилизации к модельному пищевому белку.

Выполненная диссертационная работа является составной частью исследований по экспериментальной разработке методов коррекции алиментарных аллергических состояний, проводимых на протяжении ряда лет в лаборатории физиологии и биохимии пищеварения Института питания РАШ.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие основные задачи исследования:

Ба экспериментальной модели пидевой анафилаксии:

1) Установить взаимосвязь между всасыванием белковых антигенов и развитием сенсибилизации к модельному пищевому белку,

2) Оценить влияние полного голодания на состояние защитных барьеров желудочно-кишечного тракта (на активность протеолитических ферментов полостного и пристеночного пищеварения и проницаемость килечной стенки для нерастепленных белков ).

3) Изучить влияние различных сроков полного голодания на развитие сенсибилизации при пероральном введении модельного пищевого белка.

Научная новизна.

Получиха свое экспериментальное подтверждение гипотеза о взаимосвязи потаенного всасывания нерасиепленных белков и увеличение

риска развития состояния гиперчувстэительности к ним В опытах на животных (беспородных морских свинках) установлено, что индивидуаль-ида различия у животных в проницаемости барьера желудочно-кишечного траста для макромолекул куриного овальбумина определяют степень тя-яести анафилактической реакции.

Впервые получены данные о прямой зависимости между увеличением проницаемости барьера ¡келудочно-кисечного тракта для нерасцепленных белко* и длительностью полного голодания.

В результате проведенного исследован/л впервые установлено влияние различных сроков полного голодания на процессы сенсибилиза-щш и анафилаксии.

Основные положения диссертационной работы. Еыносимие на зад?1-

ту:

1. При пероральном поступлении пищевого белка увеличение вса-сиванил белковых антигенов из хелудэчио-кисечного тракта во внутреннюю среду организме. ыохет приводить к развитию состояния гилор-чувствителыюсти.

2. В условиях полного голодания наблюдается повышение всасывания белсовых маггрсшлекул из «елудочпо-кншчного тракта ю виутрен-нш среду организма.

3. Рсмшы полного голодания влияют на развитие процессов сенсибилизации в организме.

Практическая значимость работы.

Подтверждение существования причинно-следственных отпопеций гзгду'тпшпепкш всвсшаккэы белковых антигенов пнэд к риском раз-. вития сенскбилизащи 'организм, представляет интерес для гастроэнтерологической и анлергологической практики. Повьсэнное всасывание перассеплэгашх белков иоггэт рассхатризаться как показание для екдй- , чения в комплекс лечебных керопрсттг-я,. эязгагэтерапии и-. гипоаллер-

генных элиминационных диет.

Увеличение в период голодания проницаемости барьера желудоч-но-кипечного тракта для белковых макроькшлсул, сохраняющих свои антигенные (и сенсибилизирушие) свойства, следует учитывать при разработке диет дгя восстановительного питания после релишв полного голодания, при применении голодания с диагностической целью (выяв-лешш оОлигатних аллергенов при нищзвой аллерпш), а также при проведении диетической терапии у больных, находящихся в условиях вынужденного голодания.

Полученные экспериментальные данные о гипосенсибшдаирупщзм аффекте (снижение уровня антител к шодзвому белку-сенсибилизатору и ослабление тяжести проявления анафилаксии) полного голодания могут бить использованы в клиничеасой практике как патогенетическое обоснование назначения разгрузочно-диетической терапии при лечении и профилактике аллергических состояний. Однако, назначение коротгац курсов голодания в период проникновения аллергена по внутреннюю среду организма может привести к неспецифической стимуляции образование реапшовых антител.

Целесообразно использовать результаты данного исследования в лекционных курсах по разгрузочно-диетической терапии.

Апробация работы. .

Материалы диссертации доложены на Всесоюзном симпозиуме с международна участием "Иммунодефицит и аллергия", г.' Шсква 2-4 декабря 1066 г ; I Всесоюзном симпозиуме "визиологичоские механизм« голода и васыдания", г. Тбилиси, 25-27 сентября 1967 г.; XVI республиканской конференции молодых медиков Грузии, посвященной 70-лети» Великой Октябрьской революции, г. Бакуриоии 3-8 апреля 1087 г.; Швсо&еном сове каши "Раагруэочно-диетическая терапия больных с за-Оодоваяюша «олудочно-кишочного тракта, типовой и лекарственной ал-

лергией", г. Ужгород, 1988 г.

Структура диссертации и ее объем. Диссертация состоит из "Введения" и четырех глав: 1-обзор литературы, П-материалы и методы исследования, Ш-резуль-татн и их обсуждение, IV-заключение. Диссертация содержит выводы, приложения, список использованной литературы ( всего!.1",! ^источников, из них на русском и . Д 7 на иностранных язисах). Общий объем

НО страниц, в том числе таблиц, ^ рисунков. Перечень сокращений Анти-ОВА - антитела к куриному овальбумину

Анти-ОВА сыворотка - сыворотка, содержащая антитела к куриному

овальбумину БСА - бычий сывороточный альбумтш 1г Б - ишупоглобулш! класса 6 КРИА - конкурентный радиоиммуноанализ ОВЛ - куриный овалъбумлн

125,1-0ЕЛ' - [суриный овальбушн, качений подои-125

ПЭГ-бООО -' полнэтиленглпколъ со средней шле]?улярной массой 6000

дальтон

САЧ - сыворотный альбумин человек ТХУ - трихлоруксусная ккслота П - прокеималмшй отдел тонкой гашки Л - дисталышй отдел топкой юшки

. ....... ' ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ;

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ. ' Объект исследования.

В экспериментах были использованы беспородные морские свин-1ш-самцн массой 300—4С0 г, содердавниесз па стандартном рационе гк-

- б -

вария Института питания, свободной от куриного яичного белка и коровьего молока, доступ к воде животным не ограничивали. Животных лишали пищи в течение контролируемых временных интервалов (24-96 часов) , помещая их в клетки с решетчатым днищэм. Регулярно фиксировали потерю массы тела . К пятому дню голодания морские свинки с первоначальной массой тела около 400 г теряли до 25Х своего веса (График!), при атом в течение первых двух суток наблюдали увеличение скорости потери массы тела, а в последующие двое суток снижение скорости потери массы тела (График 2).

'Ъни голоЪрнил

Зна ума логические исследования.

Забор биологического материала для определения активности тркпспка проводка следугсим образом: после декапитации животных под гексиналовым наркозом проводили лапаротомию, навлекали тонкую гаоэф, раздолялх на проксимальный и дистальный отделы и промывали

5.0 ил 0,01 U фосфатного буфера (рН-7,2). В полученных с швах определяли активность трипсина jio методу Эрлангера в модификации а А. Шзтерникова С Шатерников а А., 1969) и обиую протеолитическуп активность по методу Аясена в модификации И. а Гмошинского С Гмоеинс-кий IL Е , Uaao а К., 1982], а в гомогенатах слизистой тонкой rainai активность пептидаэ (диглицилглицинтрштептидазы.глзщил-Ь-лейцкнди-пептидази и глицил-01.-метиониндипептидазы) по методу предложенному А. М. Угревым [ Уголев А. )1 и др., 1969).

Оценка проницаемости узлудочно-килечного тракта морских свинок для куриного овальбумина.

Еивотным внутрижелудочно через зонд вводили по 300 мг ОБА в 3,0 мл физиологического раствора и через 3 часа забирали кровь из нижней полой вены под гексеналовьм наркозом.

Концентрацию всосавшегося нерассзпленного ОВД (и обпего уровня антител к этому белку) определяли, используя два варианта КРИА, в основе которых полояэиь. соответственно принцип осаадения иммунных комплексов сульфатом аммония CRothbortc R. ¡I et al, 1QS73 и ГОГ-6000 СГиоишский ILE, 1085). Чувствительность определеши составляла 10 нг 0RV

. Гипериммунныэ антисыворотки против ОНА получали внутрикожной иммунизацией кроликов этими болкаии в неполном адъюванте Срейнда (Difco, США) согласно [Lapresle й , ColdstoinJ.. 1969). Шчение ОВД изотопом 126-J осуществляли на кафедре радиохимии химического факультета МГУ путем окислительного йодирования с хлорамином Т по иэтоду CJeson S. et al, 18781. lie чанный изотопом белок очищали гель-фильтрацией па микроколонках с сефадексом 6-25 (Pharaacia, Евеция) и ватой с помодьи аффинной хроматографии на сефароз« 4В (Pharaaoia, Швеция) ганъпгировшгаой с шкоспецифическиии антителами к ОБА ила БСЛ ( получении! иммунизацией кроликов с последуичей

очисткой антисывороток).

Воспроизведение экспериментальной модели пищевой анафилаксии. Шрских свинок сенсибилизировали энтерально с использованием в качестве модельного антигена (аллергена) куриного овальбумина (препарат пятикратно перекристаллизованный, производства Олайненского НПО "Биохимреактив"). Стандартная схема сенсибилизации была следующей: животным через зонд внутрижелудочно вводили по 3.0 мл раствора ОВД (растворитель физиологический раствор, концентрация белка 30 мг/мл) в течение трех дней. Еивотные контрольной группы были "ложно сенсибилизированы", получая в те же сроки через зонд внутрижелудоч-но по 3.0 мл физиологического раствора

.Анафилаксию вызывали внутрисердечным введением разрепаюодзй дозы ОВД ( 5 иг белка в 0.5 мл физиологического раствора) через 14 или 21 день после сенсибилизации. Тяжесть проявлений реакции анафилаксии оценивали по уровню летальности; по числу судорожных проявлений и по величине анафилактического индекса. Два последних параметра оценивали по четырехбальной шкале СШатерников В. А. и др., 1982).

Определение концентрации IgG-антител к куриному овальбумину в сыворотке крови.

Принцип определения IgG-антител основан на избирательном свя-аывании иммуноглобулинов этого класса с протеином А из Staphylococcus aureus С Езепчук Ю. Е, 1977]. В стандартном определении 100 мкд исследуемой (или контрольной) сыворотки инкубировали в течение 16 «асов при температуре 2-8 гр.С с 100 мкл 10~*Z раствора 12S-J-03A в 0,01 U фосфатво-солевом буфере (рН-7,4 , 0.15М NaCl), содерхаоем 0,1 X раствор САЧ (Reanal, Венгрия). Обаоа радиоактивность вносимого 125-J-0BA составляет около 1000 МВк. to окончании инкубации смесь пропускали через микроколонку с протеин-А-сефарозой

6 В (Р!тагтас1а, Швеция), объемом 200 мкл, уравновесенную 0.1 М фосфатным буфером (рН-7,2). Затем рромывали колонки 5 мл этого же буфера и элшровали иммунные комплекса- (1ев - 125-,1-ОВА) 2 мл 0,1 Ц-глицин-НС1 буфера (рН-3,0). Радиоактивность элшта определяли, используя гамма-спектрометр МЮ-бОЗ (ЧССР). Концентрацию 1е(3-анти-тел в элгате находили по стандартной кривой и выражали в 1е концентрат«! антител (нг/мл). в качестве страндарта при получении ка-либрово""ой кр!П)ой использовали кроличьи 1ев-антитела к ОВД. Неспецифическая сорбция 125-]-ОВД при инкубации с сывороткой интактных животных составляла ие более 0,05 X от ютличестна наносимого на ыикрогаэлонку.

Примечание:

Все реактивы для приготовления буферных растворов, растворов !шслот, щелочей, органические растворители были квалификации "ХЧ" ми "ЧДА".

Статистическая обрсЗотка результатов измерений.

Достоверность выявляемых различий оценивали с шнкжью ^1срите-эия Стьвдента , а также непаракзтрического и-теста Цанна-Уитни. Для зцетш достоверности различия долевых по!сазателей использовал критерий углового преобразования Сипера. Соответствие распределения зпыгшлс лапша нормальному проверяли с псмоифа критерия Хи-газадрат.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ЮС ОБСУЖДЕНИЕ

влияние повышенного всасывания белковых антигенов на сенскбили-ацип морсгопс свинок и развитие £ ига реакции анафилаксии.

Как видно на рпсушга 1 повышение дозы внутрияелудочно вводимо-о белка на два порядка приводит к 3&-кратяо1<у узеличению его вса-ывания (учитывая средние значения). Статистическая недостоверность

Концентрация куриного а0а/Г05ул/ина 6 сыборотке xpoâu морских сбс/нох через 7ри часа после nepopaobnozo ббед&нид различных &ОЪ Этого S&7KQ

о то±&а

* L •

IООО

ж

600

400

200-

80

60

40

20-

L

55*20

О о

о о Ü_2_!_

5~5а±.

L

. о

О о

50

О о

10 кг

Ж Р <0,05

Юйкг

Í000 нг

о

Рис. i

различий во всасывании ОВЛ при сравнении доз 300 мг/кг и 3000 иг/кг является следствием значительного разброса определяемых значений. Тем пе менее, совершенно очевидна тенденция к увеличению всасывания.

У другой группы животных такой же массы било определено содер-жаниз 1св-антитод к ОВЛ в сыворотке крови при тех же вводимых внут-рилглудочио дозах ОЕА: первоначальное увеличение вводимой дозы в 10 раз приводило к статистически недостоверному увелмению гуморально-'го ¡плаунного ответа Последующее десятикратное увеличение дозы вело к интенсифш'лц:га процесса антителообразования. достоверно повышая его.

Такш образон, установлено, что увеличение дезы Енутрижелудоч-но вводимого ОВД от 30 мг/кг до 3C00 иг/кг (в расчете на вес животного) conponorjt&sTcn повелением всасывания этого С елка и увеличением образования антител класса IgS. Иззестно, что у líopcrarx свинок сла^ялагаические антит?ла относятся к классу IgC» (подклассам G1, 63 и GD -[Полис Дк., 1982). Следовательно, у морских свинок сенсибили-аировапих ОЗА, пони наблюдаться аазпсимссть rnxzy величиной зсасы-Еппия перассплзшгого ОВЛ, образованна;.! к не;.у IsG-антител и проявлением реакции анафилаксии на повторное введение этого болка.

■ Это подтверждается данными р влияши индивидуальных различий го Есао1:сап;ш Селгасьсс макромолекул (модельных гавдвых Седсов ОЕА и ПСА) у г-шотаих одной популяции (бослсродаа морских свинок) на Ьаэвитио у них реакции анафилаксии.

В паръой сорил екепэрггкктов оцешзали возможность использования БСА. для тестирования уровня проницаемости барьера яелудечно-ки-еэчиого трактэ для к:акрсюлекул гак показателя парупэпия проницаемости при развитии реакции анафилаксии с причинно значимым антигеном

ОВД. Для этого группа из 38 животных получала внутрижелудочно БОА (доза 1000 иг/кг массы тела), после чего через 3 часа оценивали всасывание нерасщепленного белка. Спустя 2 недели животных сенсибилизировали однократным внутрияелудочным введением ОБА (доза 300 мг/кг). На 21 день сенсибилизации у животных определяли уровни циркулирующих антител к ОВД и вызывали реакцию анафилаксии внутрисердечным введением ОБА в дозе 5 мг. Было установлено, что у морских свинок, давших впоследствии смертельную реакцию анафилаксии на ОБА, концентрация всосавшегося ВСА в крови составила 900*300 иг/мл, а у животных, не проявивших смертельной реакции и судорожного синдрома,- 4501140 нг/мл (Р>0,05 по критерию Мана-Уитни). Среди животных с высоким уровнем всасывания БСА (в среднем 1300 нг/мл) смертность от анафилаксии составила 50 X, а среди животных со слабым всасыванием антигена в желудочно-кишечном тракте ( в среднем 100 нг/мл ) - 29 X (Р>0,05 , по критерию Сиоера). Достоверной корреляции мевду уровнем всасывания ВСА и гуморальным иммунным ответом на перорально вводимый второй антиген (ОВД) выявлено не было, независимо от того, оценивали ли уровень IpG-антител к ОБА или сумму всех антител к ОВД. Анализ данных показал, что имеется высокая положительная корреляция между результатами определения общего уровня антител к ОВД и IgG-антител к этому белку (R-+0,692;Р<0,001).• Вээтому в следующей серии экспериментов определяли только общий уровень антител к ОВД.

Целью второй серии экспериментов было установить, как влияет уровень всосавоегося ОВД на сенсибилизацию и последующее развитие анафилактической реакции у морских свинок: группа численностью 66 животных получала однократно внутрижелудочно дозу 300 мг/кг ОВД; чореи 3 часа а сыворотке периферической крови определяли уровни циркухиругшзго ОВД, через 21 день определяли ответ антител к ОВА и вызывали реакцию анафилаксии.

Всйсыбание куриного оЗольВумина и гуноральн&и иммунный omSem к нему у мерсхиг сбинок с различной- степенью грлхести /жащо* (анасри/токтиьеслгого еме></>) но бну/гуресерРемоз 63еРвни& этого

* Группа Я uSoTJMbtx Всасыбание ОЗД Концен/прлци* OHrrHj-rr*eA ryoruS OB4 6

<. ÙHCpmMôM&û и/бх 22 ЖОП/О*** Woo'Soo*

2. синЭрсы гG 5/0* fsor ¡500 teoo r

3. Выраженной реакции кету 3S IST)'SS UDO* ZOO

Sjfai/?"*™* с ¿руг?*** Af'S , /><¿>0f+¿>¿&/ /*э лр*лт*ерчло

с tpynr>c<5 A/KS сос^пс^врмо /p<o/CS *рс/тро*б //awo Sb/wct.

7д5лЛ

\Га5*.2.

Влияние уробнл бсасыбаиил куриного обалъаунина у морских сЬинок на последующий гуморальный иинунныи omíern и £ыход В смертельную оленрилакСс/Ю.

ir-% Группа tiudo XuiowtíK CM (*Y~) JC**</A4ryC>aLfu? 4НП/Г** om

( Спл Söm ¿cacvSoHue 37 О r /РО 2/COtSOo'

г 22 .r m t. tcoo 20CO iiVO

3 tonbwe* J /ООО 6/00 '/200 rt*

lí p>o.cr' P>0,DSr

docmoSeptott** pet/wwt групп •л Y, p*eteof* P< с,о/ c

Как следует . из данных таблиц 1 и 2 , у животных проявивших впоследствии смертельную анафилаксию и судорожный синдром, наблюдаются достоверно более высокие уровни всасывания ОБА и концентрации антител к этому белку. С ростом проницаемости желудочно-кишечного тракта для молекул ОВА закономерно увеличивается вероятность летальности от анафилактического дока к показатели юшцентраций антител к ОВА в крови . Установлена таюга достоверная положительная корреляция между уровнем всасывания ОВЛ у животных и последующи гуморальным ответом (R-+0,412 , Р<0,01).

Таким образом, показано, что у морской свинки количе ю всосавшегося пищевого антигена (ОВА) действительно влияет на вероятность последующего развития состояния гиперчувствительности к этому белку, определяемого по тяазсти реакции анафилаксии. Уровень антител к ОВА у животных также является объективным критерием состояния сенсибилизации, так ка>; он значительно повшен у етвстких, проявивших смертельный и тяжелый еоки. Поэтому существенным подставляется тот факт, что всасывание ОВД достоверно-коррелирует, с образованней у нему антител . Полученный результат согласуется с предположениями о том, что повышенную проницаемость барьера яелудочно-киаэчмого тракта' для макромолекул следует рассматривать как фактор, повышавший риск развития пи ей вой сенсибилизации [Walker V. A., 1079].

Влияние полного голодания на активность протеолитичаскнх tfog^ ментов и BcacbmaitHO KZPil!l£EP. £ топкой кжгчг 'маратаге

свинок.

Как видно из рисунка 2 , после 48-часового полного голодания у игеотных наблюдали увеличение активности всех изучадыих пеягидаз и правый сдвиг проксишдистального градиента диглихщлглищштргаептида-еы и глицил-DL-мет иошшдипептидазы. Активность трипсина достоверно не ив менялась. Ори двухсуточном доедздуадем питании (по сравлолш с

пептидЬлнае txnwS&ocm!)

(Л

♦

1

I 5 31

I h

l«

ъ

1

'I

га

- ! M S4

№ tU-U

làiil Ш

H; i

4 îi*

лик

M

I *t

контрольной группой) наблюдали снижение активности диглицилглицинт-рипептидазы и гллцил-ОЬ-ыетиотшдипептидази в проксимальном отделе и увеличение в дистальном отделе тонкого кишечника, правый сдвиг прок-симодистального градиента; повышение активности глицил-Ь-лейцинди-пептидазы в обоих отделах тонкого кияечника. • Активность трипсина достоверно не изменялась.

Пэсле 72-часового полного голодания ( рисунок 3 ) у животных наблюдали снижение активности диглицилглицинтрипептвдазы и гли-цил-ои-метиониндипептидазы в проксимальном отделе и глицид-и-лей-циндипептидазы в обоих отделах тонкого кишечника, прг й сдвиг прокскмодистального градиета у диглнцидгдициитрипептидазы н гли-пил-ОЬ-метнониндипептидазы. Активность трипсина не изменялась. При последующем трехсуточном питании наблюдали правый сдвиг проксиыо-дистального градиента у детлицилглидннтрипептидазы и повыконие активности глид!1л-Ь-лейЦ!шдипептидазы. Активность тршеи:?. достоверно не изменялась.

Согласно данным,представленным на -рисунках 4 и 5 , посла 06-часового голодания у животных отмечали увеличение актшюсти и правый сдвиг проксимодистолыюго градиента всех изучаешх пепти-даз и'достоверное снижение активности трипсина. При чзтырехсуточном последующем питании откачали увеличение активности «¡а'лздигазщшх-рппептидази, глицил-ОЬ-ыатиониндииоптидази н сниишю акшшосги глицил-Ь-лейциндипептвдаза Как видно из рисунка 5 , аетивность трипсина' после 96 часового голодания была 1сонтролышх оначо-ний. После восьмисуточнаго послодукщзго ииташш у этой группы животных наблюдали повышешю активности дщ-лкицглицшггрипептидази в обошс отделах тонкого ишвчника, гдицил-Ь-лейцшдатептидази и гли-цил-1Х.-мотиошшдипептидааи в дистальном отделе, правый сдвиг прокскмодистального градиента у' всех изучаемых ферментов. Активность

-п-

?

!

Q CS

•г Ifs.

V ff.

■S

Iii

5 S i»

■s.

О í>

i| III

JIM

1 vi «

If

» Щ

'à » I

11 t

1 IIй

; ; *

скти&коспц, mpona/x) fe* еЗ)

Ч А л.

- 18 -

трипсина восстанавливалась до контрольных значений.

Повышенная активность ферментов полостного и пристеночного пищеварения после двухсуточного голодания, свидетельствует об актива-щш пищеварительных процессов в желудочно-кишечном тршсге в начальные сроки голодания. Неоднозначные изменения активности протеодити-ческих ферментов в период длительного голодания (72-96 часов) могут быть обусловлены изменениями метаболизма, связанными с процессами адаптации к условиям эндогенного питания.

После четырехсуточного голодания, повышение активности ферментов пристеночного пищеварения, сопровождающееся персрасп. .елениеи проксимо-дистального градиента, и значительное снижение активности трипсина, длительно сЬхранявдэесе при последующем питании, свидетельствует о существен'ш изменениях пидеваритедьно-траиспортних процессов в тонком кишечнике.

Последнее обстоятельство указывает на возможное сшаазиие активности протеолитических ферментов желудочно-кишечного тракта в условиях длительного полного голодания и последующего питания, что может повлиять на состояние защитных барьеров шшрваритвлышго тракта по отношению к антигенным (потенциально аллергенным) высокомолекулярным компонентам пищи. Это подтверждается данными о проницаемости тонкой юшки морских свинок для куриного овальбумина при различных сроках голодания.

На рисунке б представлены результаты исследований по 'влиянию 48 часового и 08 часового голодания на всасывание ОВД при внутрюэ-лудочном зондовом введении этого белка морским свинкам.- Как видно из рисунка, при голодании животных в течение' 48 часов наблюдалась тенденция к увеличению всасывания OSA. Ера 25 часах голодания различия иежду опытной и контрольной группой были статистически достоверными (Р с 0,01) по данный' обоих использованных критериев. Сред-

Влияние раьличных. срокоб г&юсЬния мо Ьсасыбоиие куриного обольЯ/мина у ¿хрсхих сбинО*

Ас 6

нив.величины всасывания ОВД повызались с увеличением времени голодания практически линейно (коэффициент корреляции г-+0,997, Р<0,001). Следует принять во внимание, что наблюдаемый эффект не иожет быть объяснен простым увеличением вводимой дозы антигена в расчете на единицу массы тела , так как применяемые нами сроки голодания приводили к потере животными не более 15 X (48 часов) или 20 X (9В часов) массы тела.

Влияние полного голодания на сенсибилизацию и проявления пиде-юй анафилаксии £ морских свинок. •

Влияние различных сроков полного голодания на гуморальный иммунный ответ к внутрижелудочно вводимому модельному белковому ал-1вргену-0ВЛ исследовали в трех сериях экспериментов с различными ¡хемами сенсибилизации (таблица 3).

Частота детальных ucxodoè (X) при. различных режимах . голодания и сенсибилизации ssqac&ux.. сбииок

зкспе-риывн-hnoi J/.' груааы tyuc/w легпа/ibMù/k- UCKD?O6

.Время голодания Селси&или-гация S'a id-stach" и J . трехкратно CexcuSuAusR-t¡up. Po. гею. Ра нс/я [¿¡некратно.. Ccucu5sj/M!.e-¿/«. aceta . wio&ajfttfi s9uOKpñnvn>

Т M ¿ -/<"> я

а. . M /о. ooofn/um ¿-/<70%

i л...... . п е-УоК

• tf êô

ï — ZOOO

..ш ti 3 ООО Ul/#4 i

2.' й 36

..w. 1 •»т 1 /SOOfl/шч if-/00% ■1 '•

í W: . î'ooc ni/Vf e-^ox

Л J 96

-i. /¿"ООЛуЬ^ /00%

Иринечаииё; <шс/ю мачехи* с^иидк 3 teanobú уоуме . cccrr.a6¿»A*o xuSorrwbtx

Ш 5

В первой cepiffl экспериментов животных сенсибилизировали в течение трех дней ( по 100 мг ОВА в день),- затем разделили на четыре группы и содержали в условиях полного голодания: первую группу - 24 часа, вторую - 48 часов, третью - 72 часа и четвертую группу - 06 часов, после чего переводили сенсибилизированных лошотных на обще-виварний режим питания, на котором находились и животные контрольной пятой группы. Через двадцать один день после начала сенсибилизации у животных производили забор крови и определяли в ней IgG-антитела к OR4, а затем оценивали реакцию ан'афилшссин, внутривенно вводя ОВД . У ташотных первой и второй групп концентращш lgG-анти-тел к ОБА были достоверно высе аналогичного значения в контрольной группе.

фи увеличении срогав голодания до 72 и <35 часов концентрация IeG-шшггел к ОБА в cimopoTico 1фови сенсибилизированных тавотных резко снижалась и становилась достоверно нике тонтролышх значешй.

В второй серии экспериментов сенсибилизация животных-ОВА была одно1сратной (100 мг ОБА), затем одна группа кивотных (группа Кб) голодала в течение 48 часов, а вторая (группа N7) - 96 часов. Перевод па общрвиварный режим, забор крови и внутривенное разрешение DBA проводились метода)«), описанным выше. Концентрация IgG-антител s ОВА у животных, находившихся на двухсуточном полном голодании, 5ыла достоверно выл» , а у животных, находившихся на четырехсуточ-юм полном голодании достоверно гашэ, чем у животных контрольной -pynmj (группа N8). *

В третьей серии окспериментов полное голодание предшествовало :енсибилизацшЕ первую опытную группу животных (группа N9) содерга-ш 48 часов в режиме полного голодания, вторую опытную группу группа N10) - 9S часов, животных однократно сенсибилизировали и герев 21 день после сенсибилизации определяли IgG-антитела к ОВА, а

также оценивали- анафилактическую реакцию на ОВД. Концентрация lgG-антител к ОВЛ в сыворотке крови на 21 день после введения ОВД при 96 часовом голодании била существенно ниже , а при кратковременном голодании (48 часов) выие, чем у контрольных животных (группа НИ).

Гипосенсибилизирухяее действие длительного полного голодания подтверждается данными о влиянии голодания на тяжесть проявления реакции анафилаксии у сенсибилизированных ОВД морских свинок. Как видно из таблицы '3 , лишение ж!1ВОтных пищи на 72-96 часов до и после пероралыюго введения Велка г:р1Ш0дИл0 к снижению уровня Л' льности от анафилаксии. При этом полное голодание в течение 24-48 часов но влияло на частоту летальных исходов. Полученные результаты согласуется, как с данными экспериментальных исследований о гипосенсибшш-' зирующйи действии длительного г олодания, так и с клиническими наблюдениями при использовании разгрузочно-диетической терапии в лечении и профилактике аллергических заболеваний различного геиева С Кокосов Л.IL. 1978, Горынь Ы.А., 1079). •

Выводы:

С использованием экспериданталыгой шдели.пороральной сенсибилизация (на морских свилглх) модельным гшадавыы белком (ютший овальбушн) пшеазана роль повышенного всасывания белговых антигенов в развитии состояния птерчувствите,Ш10сти, а тают. влияние различных сроков голодания на про'шща&л^егь Аиаддочио-кточиого траста для нерасщрпленных белков и развитно процессов соясибшшзадии и анафилаксии. ; . . :, - •.

1. Кол'.пшстео пероралыю вводашого белка влияет на взличину всасывания белковых антигенов ц развитие состояния гиаерчувстск-тодьности К НИМ. . >,.' } ,

2. ШЕШюнное всасывание нераецэпленных белив ira яэлудоч-

но-кишечного тракта во внутреннюю среду организма приводит к увеличению концентрации антител в сыворотке крови к перорально вводимому Селку и усилению тяжести проявления анафилаксии.

3. При знтеральном введении белка в условиях полного голодания всасывание нерасшепленных белков из желудочно-кишечного тракта во внутреннюю среду организма увеличивается и зависит от длительности голодания.

4. Агаивиость протеолитичесгак . ферментов желудочно-кишечного тршста (трипсин, пептвдазы) в условиях полного голодания достоверно меняется и зависит от его продолжительности.

5. При возобновлении питания после полного голодания восстановление нормальных значений активности протеолитических ферментов (трипсин, пептидазы) не происходит в сроки равные продолжительности голодания и зависит от длительности его проведения.

6. Длительное полное голодание приводит к уменьшению концентрации антител к перорально вводному белку и снижению летальности от. анафилактического шока.

7. Кратковременное полное голодание приводит к увеличению.концентрации антител к перорально вводимому белку и не снижает летальности от анафилактического тока.

Работы, опубликованные по теме диссертации.

1. Влияние алиментарного голодания на всасывание куриного овальбумина у взрослых морских свинок (в соавторстве с Маэо а К., Гмошинским И. Е , йзтерниковым а Л.). - Бюллетень этопериментальной биологии н медицины, 1985 г., т.- Ж1Х, Н б, с. 656-657. ■

2. Влияние полного голодания на процессы экспериментальной пищевой сенсибилизации и анафилаксии. ( в соавторстве с Казаковой О. XI и Кондрашовым С. Ю.) //Иммунодефициты и аллергия: Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума с международным участием. / Под редакцией

- 24 -

P. R Петрова.- И.Г 1986.- С. 263.

3. Адаптащи протеолитических систем в условиях полного голодания у морских свинок ( в соавторстве со Смирновым К. Е и Самеико-вой Е Ф.) //Сиаио погические механизш голода и насыщения: Труды 1 Всесоюзного симпозиума. - Тбилиси,-.1087. - С. 222-230.

4. О физиологических механизмах разгрузочно-днетической терапии. //XVI республиканская научная конференция молодых педиков Грузии, посвш^ншая 70-леипа Великой Октябрьсюэй революции: Штеркалы докладов. - Тбилиси, 1987, - С. 82.

6. Опт применения" равгруаочио-диетической терапии в гаченкл больных липовой аллергиой ( в соавторство с Григории О. II и Поповой ИП.). //Разгрувочно-диетическая терапия больных с еаболевания-1Л1 лилудочно-киЕвчного тракта, шщэвой и лекарственной аллергией: Тезисы научно-методичасюис рекошндаций Всесоюзного совещания. - Ужгород, 19S8. - С. la

6. О физиологических иеханизыах разгрузочло-дкетичоской терапии и оценке бееопасностн ее проведения. - //Раогрувачно-диитичаскаи терипг,я болыш с саболевашшш ¡йзлудочно-гакочного трамга, пидоой и лекарственной аллергией: Тезисы иаучно-штодичешаи рекомендаций Всесоюзного совещания. - Угтород, 108Й. - С. 27. . '

7. Влияние ловпташгого всасывания пнщзвш: Солдата антигенов из кишечника на развитие сенлйши&ады у i;o¡>om;x cbí'üíúí; ( и соавторстве с Гйэшшскиы И. Е и Шео Е It) //Вопросы питания, - 1990. -К 1. - С. 62-55. ' -

8. Immunological and radloinmunolosioal studies in food allersry. (Соавторш Hlkolov II., Shaternlkov V.Tcdorov D., Цзго V., 1,'arokko I., Stoinov S., Dontchov II., Borov B., Drumtchova M . Q'.ashl r»ky I.) // Allorg. Immunol.- 1007. - v. - за - S. 35-43.

__ПоВп. ¿ nc.ij. 5. jy- 32 n

fотлпринт тип. "Иоскоагма пачаикк." 3au. iúlZ Trp.