Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние кишечных нематод (параскарид, стронгилят) наактиномицеты пищеварительного канала лошадей

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Влияние кишечных нематод (параскарид, стронгилят) наактиномицеты пищеварительного канала лошадей"

I I и V/ «•■»

х;с1!искл51 академия сельскохозяйственных наук

• российский научно-исследовательский институт

гельминтологии им. к.и.скрябина

На правах рукописи

Ишимбаева Римма Сахиулловна

Влияние кишечных нематод (параскарид, стронгилят) на актином ицеты пищеварительного канала лошадей

Специальность: 03.00.19 - паразитология,

гельминтология

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат дессертадии на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Работа выполнена в Московской государственной акадек теринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скряб] во Всероссийском научно-исследовательском институте лвотноводства.

Научные руководители: доктор ветеринарных наук,

профессор Акбаев М.Ш.; кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник Будников В.А.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор Васильков Г. В. (ВИЭ кандидат ветеринарных наук, Саркисов К.А. (ВГНКИ).

Ведущая организация: Московская государственная акаде;

прикладной биотехнологии.

Защита диссертации состоится 1 .... 1995 г.

. . . часов на заседании диссертационного

г.

совета

020.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институт« льминтологии имени К.И.Скрябина (ВИГИС).

Адрес: 117259, Москва, Б.Черемушкинская ул., 28. диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС.

Автореферат разослан . А^.^.^У^т-т. . . . 1995

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор биологических наук Бережко В.1

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. У лошадей ( Equidae ). зарегистрировано свыше 90 видов гельминтов. Среди них наиболее многочисленную н разнообразную группу составляют нематоды подотрядов Ascaridata и Strongylata, паразитирующие в кишечнике лошадей.

Несмотря на успехи, достигнутые в борьбе с важнейшими инвазиями лошадей, последние до сих пор наносят значительные экономические потери коневодству.

Многие ученые, определяя роль гельминтов в патологии млекопитающих, птиц и других кивотних, отмечают, что она характеризуется рядом факторов: механическим, аллергтес^шч.трофлчсским,токсическим, а также изменением соотнопений подобной и патогенной микрофлоры. ( К.И.Скрябин, 1925; М.И.Кузнецов, 1072; М.Ш.Акбаев, 19S6; А.Г.Воробушков, 1989 и др.).

В последние годы стало и^естно, что наряду >. продев зителя-ыи полезной микрофлоры пищеварительного канала штатных, актино-мицеты ( в иностранной литературе " стрепто;л петы ") являются важнейшими продуцентами витаминов группы В ( В. А. Будников, I960; С.Б. Коган, 1973; С.М. Гзсанова, 1974; 0.И.Русович, 1990 и др.), антибиотических веществ, липидов, ферментов и других малоизученных биологически активных веществ ( П.А.Красклышков, 1965; Л.С. Ксжезина, 1977; O.A. Гзлатекко, 1933).

3 настоящее время очень »/ало работ по изучению микрофлоры желудочно-кишечного тракта лошадей (Alexander F. ,1969; Davies М., 1971,1979,1983; Ike, Nurukl, Imal, Ishii, 1982), вообще отсутствуют данные о влиянии кишечных нематод, паразитирующих у лошадей, на микрофлору, в том числе п на актиномицеты.

Учитывая особенности пищеварения лошади (R.Wolter, 1982), основной синтез и всасывание витаминов группы В в толстом кипеч-нике (Я.И.Слабицкий, Частой, 1982; Coates М., S.Fcrd, 19S7) и склонность жеребят к копрофагии ( вторичный пасса;:с и всасывание витаминов группы В ), изучение данной проблемы является актуальным и сыгран-* большую роль в разработке соответствующей патогенетической терапии килечных нематодозов лошадей.

Кроме того для борьбы с гельминтозами необходимо изыскание новых эффективных препаратов, биологически и экологически безвредных. Поэтому исследование лярвицидных свойств различных культур актиномицетов из пищеварительного канала животных является очень ваюшм для решения данной проблемы.

Цель исследований - изучение количественного состава и свойств актиномицетов пищеварительного канача лосадей при кишечных нематодозах (параскаридозе, стропгилятозах). Для достижения указанной цели мы поставили перед собой задачи изучить:

- количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей б норме и при кишечных нематодозах ( парзскарвдоае, стронгилртозах);

- ко.лэтес1 венный состав актиномицетов по отделам »елукочно-кизгчпогс канала ааражжных паргскаридами и строигиллтами лошадей :

- модешогих*. культуралм^о. аятиФиотичткки. йгт&мчносбра-зующ;е свойства актиномицетов ий1кхари?ел?.ного канала яовйдрй.йн-вазкревашшх к>к:?ч1шмп нематодами (параекаридзми. гтрекгшуттгми).

- влияние- актиномицетов на инвазионные личинки стронгилл:;

- уровень ционокоСаламинз и пепсиногена в крови лоиадсп, ин-вазироЕгишых возбудителями ктаючных немзтодозев;

- эффективность применения антгельминтиксв : ивомека мелкс-гранулированного, валбазена , пиаветрина , двойного пиперазина против параскаридоза и стронгилятозов лошадей.

Научная новизна. Изучены количественный состав и свойства (морфологический, культуральные, антибиотические. витаминообразув-цие) актиномицетов пищеварительного канала лошадей в норме и при кишечных нематодозах (параскаридозе. стрснгилятоэзх).

Установлены сроки и динамика заселения актиномицетами пищеварительного канала новорожденных жеребят в условиях стойло-во-пастбищного содержания.

Получены данные о содержании витамина В:2 и пепсиногена з крови лошадей, зараженных кишечными нематодами.

Изучено влияние биологически активных веществ актиномицетов нз инвазионные личинки стронгилят лошадей.

Изучена эффективность применения ивомека мелкогранулирован-ного, валбазена, пиаветрина и двойного пиперазина при кишечных нематодозах лошадей и влияние антгельминтиков на количественный состав актиномицетов пищеварительного канала.

Практическая.ценность. В целях более глубокого раскрытия патогенеза при килечных нематодозах ( параскаридозе и стронгиляго-зах) нами изучено влияние параскарид и стронгилят на количествен-

ный состав и свойства (синтез циаиокобаламиня, антибиотических, лярвицидных веществ) актиноиицетов пищеварительного канала.

Усовершенствована методика определения количественного уровня актиноиицетов при исследовании содержимого пищеварительного канала лошадей.

На основании экспериментальных и производственных опытов, проведенных по испытанию антгельминтиков даны - рекомендации по применению ивомека мелкогранулированного ( разработка лаборатории арахноэов ВНИИАЭ) в дозе 0,2 г/кг живой массы ( 0,2 иг/кг по ДВ), двойного пиперазина ( высокоочищенного пиперазина гексагидрата) в доге 0,1 г/кг массы тела, пиаветрина. Валбазен (новая препаративная форма альбендазола, содержащая 2,5% действующего вещества) не рекомендуется нами для применения в связи с низкой эффективностью против стронгилятогов лошадей.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертации доложены на научных конференциях профессорстсо-преподавательского состава, научных сотруднисов и аспирантов Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина (1992,1993).

На защиту выносятся следующие вопросы:

1. Результаты изучения количественного состава и свойств актиноиицетов пищеварительного канала лошадей, инвазированных па-раскаридами и стронгилятами.

2. Результаты изучения содержания витамина В12 и пепсино-гена в крови лошадей, зараженных кишечными нематодами.

3. Результаты изучения эффективности применения антгельминтиков (ивомека мелкогранулированного, валбазена, пиаветрина и двойного пиперазина) против параскаридоза и стронгилятозов лошадей.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 169 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, (атериалой и методов, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений. Список литературы содержит 236 источников, из них 78 иностранных. Диссертация шшострировзна 23 таблицами и 21 рисунком.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы 2.1.1. Характеристика опытных животных

Изучение количественного уровня и свойств актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей в норме и при кишечных нематодо-8ах проводили на 6 деребятах и 24 лошадях в возрасте 3-17 лет преимущественно рысистых пород, принадлежащих Московскому конза-воду К 1 (стойлово-пастбищное содержание) и Еиварко МГАВМиВ, в том числе - 5 животных. инвазированных параскаридами и стронгиля-чаш и 15-только строгилятами,контролем служили 4 лоиади. Изучение количественного состава актиномицетов по отделам пищ-;даритель кого канала лозадей осуществляли на мясокомбинате г. Егорьевска при ьскриткл 17 лошадей 3-4 летнего возрастала них 6 животных были инваэированы паргскаридами и стронгилятами, 5- только стронгшштаыи.В контрачьной группе было 6 лсжадей.

Эффективность применения антгельминтиков устанавливали на зараженных нематодами лошадях 3-4 летнего возраста (п-24), принадлежащих конно-спортивной базе "Измайлово" и павильону "Коне-еодс'гво" Всероссийского выставочного центра. Контролем служили 6 кивотйш, аналогичного возраста и условий содержания.

2.1.2. Гельминтологические методы исследований

Для постановки диагноза на кишечные нематодозы лошадей'и определения экстенсивности и интенсивности инвазий испольэовалй следующие методы: гельминтоскопию, гельминтоовокопроскопию по методике Кофоида - Барбера в модификации Фоллеборна (1927), количественные гельиинтоовоскопические исследования стандартизированным методом Оадлеборна в соответствии с методикой Н.В.Демидова. .

Инвазионные личинки стронгилят лошадей получали с помощью метода культивирования личинок стронгилят г.э инвазионной стадии и методики Бермана.

2.1.3. Микробиологические методы исследований

Исследования проводили в лаборатории микробиологии Всероссийского научно-исследовательского института животноводства.

Количественный уровень актиномицетов в содержимом различных отделов пищеварительного канала (желудка, двенадцатиперстной, тощей, слепой, большой и малой ободочной и прямой кишок) изучали с помощью общепринятых методик. Для выделения и подсчета колоний актиномицетов применяли селективные органичесгае среды: овсяный агар(ВНИИА). среду Карвелла. Посевы инкубировали при 28°С в течение 5-6 суток.

Колонии актиномицетов, отличающиеся по форме, размеру, окраске воздушного и субстратного мицелия пересевали в мясопептон-ный бульон с целью получения -.истых культур.

Выделенные культуры актиномицетов идентифицировали до рода с последующим разделением на серии и секции согласно Определители актиномицетов Г.Ф, Гаузе, Т.П. Преображенской, М.А. Свезниковой и др. (1983), а также с учетом Руководства по систематике микроорганизмов Д.Х. Берги (1989).

Морфологические признаки актиномицетов изучали путем выращивания их на минеральном агаре 1 (Гаузе, 1957).Характер споронос-цев определяли у.взрослых культур на 7-14-е сутки роста.

Культуральные свойства актиномицетов (окраска воздушного и субстратного мицелия, наличие растворимых пигментов) изучали согласно методикам Г.Ф. Гаузе, Т.П. Преображенской, М.А. Свепнико-вой. Л.П. Тереховой (1983). Определение цвета проводили на 7, 1-1, 21-е сутки роста культур при 28°С с помощью шкалы цветов A.C. Вондарцева (1854). С этой целью использовали следующие среды: минеральный агар 1 (Гаузе, 1957). овсяный агар (S.Waksman, 1961), органический агар 2 (Гаузе, 1957), глюкозо-нитратный агар СР-1 (Красильников, 1950), пептонно-дрожжевой агар (E.B. Shlrllng, 1966).

Определение конфигурации диаминопимелиновой кислоты (ДАЖ) в клеточной стенке культур актиномицетов проводили методом восходящей тонкослойной хроматографии в целлюлозном, слое (T.Hasega-wa.1983) в модификации И.В. Алферовой, Л.П. Тереховой. Х.Праузер (1989).

- б -

Антибиотические свойства актиномицетов изучали по методикам Н. А. Красильникова (1950, 1958) и Г.Ф. Гаузе (1958.1959).

Способность культур актиномицетов синтезировать витамин В12 определяли при помощи микробиологического чашечного метода, предложенного С.М. Чайковской, Е.М. Дружининой (1957), с использованием витаминозависимого тест-штамыа Escherichia coll 113-3.

Уровень витамина В12 в сыворотке крови лошадей изучали микробиологическим ускоренным индикаторным методом (по Новикову, Фортушному, Шуляк. Генсеровской, 1967).

2.1.4. Гематологические методы исследований

Морфологические показатели крови изучали по общепринятым мег тодикам. Количество эозинофилов в 1 мкл крови определяли по методу Р. Дунгера (1969).

Содержание пепсиногена в плавне крови устанавливали с помощью методики В.Н. Тугодукова (1965).

2.1.5. Изучение лярвицидных свойств актиномицетов

Влияние актиномицетов на инвазионные личинки стронгилят лошадей изучали при использовании экстрактов, летучих веществ актиномицетов и исследования колоний актиномицетов на гельминтофагию. При оценке пользовались тестом паралича личинок (М. Taylor, К. Hunt, 1989).

Полученные в диссертации цифровые материалы обрабатывали статистически по методу Стьюдента с использованием компьютерной программы Selec.

2.2. Результаты исследований

2.2. ^Количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей в норме и при кишечных нематодозах (параскаридозе, стронгилятозах)

Микробиологические исследования содержимого прямой кишки ин-вазированных кишечными нематодами (параскарвдами,. стронгилятами) лошадей показали, . что в зимние месяцы (16.12.92; 4.01; 1.02;

- ? -

.8.02.93) количество актиномицетов в среднем составляло при сла->ой интенсивности инвазий - 83,0 ± 6.9 тыс в 1 г.при средней-41,3 ь 14,8 тыс и при сильной - 14,9 ± 2.1 тыс, тогда как у контрольных животных этот показатель был 80,8 ± 9,8 тыс. Исследования з сезонной динамике выявили также достоверно низкое количество изучаемых микроорганизмов у животных с высокой степенью зараженности: весной (15.04; 22.04.93) соответственно 129,6 ± 8,9 тыс, 59.8 ± 8.6 тыс и 27,4 ± 4,3 тыс против 136,6 ± 10,2 тыс в контроле; летом (16.06; 1.07.93) - 148.0 ± 12.2 тыс. 78,5 ± 4,9 тыс и 32.6 ± 3,3 тыс против 163,2 ±5,2 тыс в контроле; осень» (28.09; 27.10; 4.11; 24.11.92) - 90.6 ± 1,9 тыс. 62,2 ± 15.7 тыс И 20,5 ± 6,2 тыс против 112,7 ± 7.8 тыс в контроле.

Количественный уровень актиномицетов. как у инвазированнкх, так и у свободных от гельминтоз лозадей, в стойловый пери д содержания был и 1,8 - 2.2 раза (Р<0.001) ниже, чем в пастбиютый сезон.

Достоверной разницы между количественным уровнем актиномицетов у животных, инвазироваяных только стронгилятами и при смешанной инвазии параскаридами и стронгилятами не зарегистрировано: в зимнг.е месяцу этот показатель составил соответственно 35,2 ± 3,1 тыс и 36.6 ±2,3 тыс в 1 г содержимого прямой кишки . летом -53,3 ± 4.9 тыс и 49,5 ± 4.6 тыс (результаты по группам средне- и сильноинвазированных животных).

2.2.2. Сезонно-возрастная динамика количества актиномицетов в содержимом прямой кишки жеребят

Изучение количественного уровня актиномицетов в содержимом поямой кишки жеребят в возрастном аспекте показало, что впервкз 'колонии в посевах содержимого прямой кишки были обнаружены у двухсуточных жеребят (март, 1993)- 15,5 ± 1.5 тыс в г. Количество актиномицетг1 достигало максимума в среднем в возрасте 10 суток (1320.0 ± 21,0 тыс). Затем количественный уровень микроорганизмов снижался до 1-2-месячного возраста (72.5 ± 4,2 тыс), стабилизируясь в возрасте 5-6 месяцев (170,2 ± 5,8 тыс) после отъема животных при пастбшшом содержании.

Таким образом, заселение актиномицетами пищеварительного канала жеребят начинается сразу после рождения. В дальнейшем по ые-

ре роста и развития животного происходит изменение количественно го уровня этих микроорганизмов, на который оказывает влияние ха рактер питания и условия содержания животных.

2.2.3. Количественные показатели актиномицетов по отделам пищеварительного канала вдоровых и естественно зараженных кишечными нематодами лошадей

В результате исследования проб, взятых из различных отдело пищеварительного канала лошадей 3-4-летнего возраста, впервые ус тановлен количественный состав актиномицетов в корме и при инва зии параскаридами и стронгилятами: при средней интенсивности ин вазий параскаридами и стронгилятами и при сильной интенсивное! инвазий стронгилятами в 1 г содержимого желудка количество микро организмов в среднем составляло соответственно 15,11 * 0,01 тыс 12,28 ± 1,0? тыс, что достоверно (Р<0.005) ниже контрольных пока зателей (24,33 t 1,71 тыс), двенадцатиперстной - 0.03 ± 0,01 та И 0,04 ± 0.01 тыс против 0,15 ± 0,07 тыс в контроле; тощей - 2,Т ± 0.77 тыс и 2.91 ± 1,01 тыс против 10,65 ± 0.91 тыс в контроле слепой - 28.98 ± 5,12 тыс и 22,87 ± 4.28 тыс против 108,29 ± 8.5 тыс в контроле, большой ободочной - 53,32 4 4.94 тыс и 35,15 : 3,07 тыс против 135,63 ± 6,00 тыс в контроле, малой ободочной ■ 72,30 ± 3.63 тыс и 36.63 ± 2.30 тыс против 113,45 ± 5.03 тыс ] контроле и в прямой кишке - 78,50 ± 4,96 тыс и 32,57 ± 3,31 тьк против 163,20 ± 5,16 тыс в контроле (Р<0.005).

Проведенные нами исследования показали, что несмотря на достоверное различие показателей количественного уровня актиномицетов у зараженных и свободных от ¡шшечных нематод лошадей, распределение данных микроорганизмов по отделам желудочно-кишечного канала имело определенную закономерность: наименьшее количество актиномицетов отмечалось в двенадцатиперстной кишке, начиная с тощей кишки по направлению к толстому кишечнику количество микроорганизмов возрастало, достигая максимума в малой ободочной и прямой кишках.

2.2.4. Характеристика актиномицетов, выделенных из пищеварительного канала инвазированных параскаридами и стронгилятами лошадей

Основные свойства актиномицетов были изучены у 187 изолятов, выделенных из содержимого различных отделов пищеварительного канала лошадей, зараженных параскаридами и стронгилятами (144 культуры) и свободных от данных гельминтов (43 культуры).

2.2.4.1. Морфология и культуральные свойства

Результаты изучения морфологических свойств и химического состава клеточной стенки (наличие LL-ДАПК) позволили нам все 187 культур отнести к семейству Streptomycetaceae. роду Streptornyces (согласно руководству по систематике микроорганизмов Л.Х.Берги, 1939). Большинство культур (165) имели волнистые или прямые спо-ронсюцы, у 22 культур цепочки спор были спиральные.

Исследование культуралыш признаков (окраска воздушного и субстратного мицелия, • наличие растворимых пигментов) показало, что большая часть выделенных культур (п - 113) принадлежала секции Cinereus сериям Achromogenes (¡>31), Chrysomallus (n=32), Chromogenes (ri=32). Aureus (n-8), Vlolaceus (n=10). Менее многочисленную группу составляли культуры секции Helvolo-flavus серии Helvolus (п=57). Остальные'культуры относились к секции Albus с-.-риям Aîbocoloratus (п=5) и Albus (п=4), секции Roseus серии Ruber (п=2) и по одной культуре сериям Lavendulae-roseus, Fradlae и Ro-seovlolaceus; секции Azureus (n*l) и секции Imperfectus (n-1) (согласно Определителю актиномицетов Г.Ф.Гаузе и др.. 1983).

При сравнительной оценке состава актиномицетов, полученных от контрольных и инвазированных животных, выявлены изменения: при слабой интенсивности инвазий доля культур секции Cinereus составляла 442 против 62,82 в контроле, секции Helvolo-flavus 56% против 25.62 в контроле; при средней и сильной степени инвазий доля культур серии Achromogenes была меньше - соответственно 10.32 и 11.42, чем в контроле - 44,42; а культур, вырабатывающих яркие пигменты, больше: серии Chrysomallus - 34.62 и 34.42 против 14.82 в контроле, серии Chromogenes - 37,92 и 31,42 против 25,92 в контроле и серии Aureus - 6,92 и 11,42 против 3,72 в контроле.

90% культур обладали землистым валахом и 10% - валахом и лочной сыворотки.

2.2.4.2. Антибиотические свойства

Изучение антибиотических свойств 181 культуры актиномицет показало Солее выраженную активность у культур, полученных из п щеварительного канала слабоинвазированных кишечными нематода лошадей, и в основном слабую антагонистическую активность п средней и сильной интенсивности инвазий.

Большее количество культур-антагонистов было выделено в о ношении Staphylococcus aureus АТСС-21027 - соответственно 80 58.7% и 75,5% против 70.7% в контроле.Bacillus subtllls АТСС-66 - 80%, 58,7% и 51,1% против 78% в контроле и Saccharomyces сег vlslae 6-381 - 73,3%, 39,1% и 34,6% против 73,1% в контроле, отношении Micrococcus luteus АТСС-9341 ' было эарегистрирова 53,3%. 43.4% и 20.3% актиномицетов-антагонистов против 53,6% контроле. Micrococcus lysodelctlcus - 67.4%, 43,4% и 30,6% прот 46,6% в контроле.

При изучении антагонистической активности против грамотриц тельных бактерий Escherichia coll АТСС - 25922 среди актиномиц тов контрольной группы антагонистов против кишечной палочки выявлено, а при слабой и сильной интенсивности инвазий они со тавили соответственно 4,4% и 6.1% .

Большее число актиномицетов-антагонистов было получено слабоинвазированных лошадей 93,3% ( против 92,7% в контроле ). них сильной антагонистической активностью обладали 68,9% культ ( по сравнению с 58,8% в контроле ) и подавляли рост более пол вины (от 4 до 6) используемых тест-штаммов 64,4% против 51,2% контроле.

При средней и сильной интенсивности инвазий эарегистрирова соответственно 87,0% и 85,7% культур антагонистов, с ярковыраже ным антагонизмом- 52,2% и 53,0% и подавляющих рост более полов ны тест-микроорганизмов 28.3% и 22,4%.

2.2.4.3. ВитаминооОразующие свойства

Результаты исследований витаминообраэущей активности 108 И80ЛЯТ0В актиномицетов позволили установить, что 107 культур, выделенные из пищеварительного канала инвазированных и свободных от -кишечных нематод лошадей синтезировали витамин Biz в количестве от 2.09 до 8,18 нг/мл. 1 культура от сильноинБазированного животного не обладала этим свойством. В среднем количество витамина, синтезируемого актиномицетами от инвазированных животных - 4,92 ± 0.24 при слабой ИИ и 4.86 ±0,1 нг/мл при сильной ИИ, достоверно не отличалось от контрольных показателей - 5,20 ± 0,21 нг/мд.

Исследования взаимосвязи уровня витаминосбразования с морфологией, культуральными и антибиотическими свойствами актиномицетов показали, что уровень биосинтеза В12 не зависит от принадлежности культуры к той или иней секции и серии и от проявления ею антибиотической активности.

2.2.4.4. Лярвицидные свойства

Изучение 22 культур актиномицетов, полученных о? контрольных (10 культур) и инвазированных кишечными нематодами лошадей ( 12 культур ), обладающих различными антибиотическими и вгтаминооб-разугащими свойствами, показало, что при испытании экстрактов актиномицетов ( полученных методом В.А.Будникова, 1965 ) 1 культура ( N 219 Roseas Fradlae ), выделенная от инвазированного животного. проявляла лярвицидную активность: через 24 ч ( Т-37°С ) культивирования инвазионных личинок стронгилят в экстракте культуры большинство ( 80Z ) личинок снижало подвижность по сравнению с контролем.

При испытании летучих веществ (придающих землистый валах) данных культур все личинки стронгилят сохраняли жизнеспособность при температуре 37°С в течение от 0,5 до 48 часов культивирования.

При одновременном культивировании в чашках Петри актиномицетов и личинок стронгилят лошадей не выявлено культур-гельминтофа-гов. личинки свободно передвигались по увлажненной поверхности агара между колониями актиномицетов.

В процессе культивирования яиц параскарид лошадей до инвазионной стадии обнаружено, что яйца Parascarls equorum как серого, так и темно-коричневого цвета достигают инвазионной стадии при комнатной температуре за 6-7 суток, что говорит об их оплодотво-ренности и жизнеспособности.

Микроскопическое исследование строения инвазионных личинок стронгилят лошадей показало, что личинки деляфондий имеют кишечные клетки трапецевидной формы, расположенные в два ряда, личинки альфортий - трехугольные кишечные клетки, также расположенные в два 'ряда и личинки трихонем - расположенные в один ряд за исключением первой пары вытянутые кишечные клетки.

2.2.5. Гематологические исследования л

2.2.5.1. Содержание витамина Biz в сыворотке крови

Результаты определения концентрации витамина Вц> в крови лошадей показало достоверное снижение ее у инвазированных кишечными нематодами (параскаридами, стронгилятами) животных по сравнению с контрольными показателями.

' Количество витамина В12 в сыворотке крови лошадей при слабой, средней и сильной интенсивности инвазий в среднем составило соответственно 2,51 ± 0,20 нг/кл, 1.91 ± 0,14 нг/мл и 1,01 ± 0,11 кг/мл (Р<0,005) по сравнению с 2,96 ± 0,10 нг/мл в контроле.

В стойловый период содержания уровень витамина В12 в сыворотке крови лошадей контрольной и опытных групп оказался ниже -при средней интенсивности инвазий 1,34 ± 0.16 нг/мл, при сильной - 0.94 ± 0,09 нг/мл и в контроле - 2.91 ± 0,17 нг/мл, чем в пастбищный период - соответственно 2,23 ± 0,13 нг/мл. 1,08 t 0,25 нг/мл и 3,01 * 0.12 нг/мл.

Полученные данные позволяют„предположить, что одной из причин изменения концентрации витамина в крови является уменьшение в стойловый период и увеличение в пастбищный сезон количественного уровня вктиномицетов, синтезирующих витамин В12 в пищеварительном тракте животных.

2.2.5.2.Уровень пепсиногена в плазме крови

Нами установлено достоверное снижение содержания пепсиногена в плазме крови инвазированных кишечными нематодами лошадей.

Концентрация пепсиногена в плазме крови лошадей при средней интенсивности инвазий составляла 2.67 ± 0.12 ыг% или в 1.7 раза меньше и при сильной ИИ - 2,27 ± 0,48 мг2 или в 1.9 раза меньше, чем у контрольных животных - 4,41 ± 0.27 mtZ (Р<0.005).

Самый низкий уровень пепсиногена в крови зарегистрирован у животных при смешанной инвазии параскарндами и стронгилятами -2,05 ± 0,23 ит7., тогда как при инвазии только стронгилятами этот показатель составил 2,86 ± 0,09 игХ.

При стойловом и пастбищном содержании животных достоверных изменений в содержанки пепсиногена в плазме крови не отмечено..

2.2.6. Испытание антгельминтикоз против параскаридоза и стронгилятозов лошадей

С целью изыскания новых эффективных антгельминтиков против кишечных нематод (лараскарид, стронгилят) лоэздей и&ш испытаны следующие препаративные формы:

- ивомек мелкогранулированный (разработка лаборатории арах-нозов Всероссийского института арахноэнтомологии г. Тюмень) - Оэ-ловато-серые гранулы без запаха, содержащие 0,1% иверыектина, в наших опытах мы использовали в дозе 0.2 г/кг массы тела животного (0,2 мг/кг по ДВ) per os:

~ двойной пиперазин или пиперазина гексагидрат очищенный (разработан в научно-исследовательской лаборатории АО "Каустик" г. Стерлитамака) белый порошок со слабым запахом. Применяли в дозе 0,1 г/кг однократно per os;

- пиаветрин - порозок белого цвета, содержащий 10 Z пиперазина- гидрохлорида. Применяли per os в дозе 0.1 г/кг массы тела животного;

- ваябазен - 2.5 % суспензия альбендазола модочпо-белого цвета без резкого запаха. Применяли per os в дозе 10 мг/кг по ДВ или 40 мг на 100 кг массы тела животного.

2.2.6.1. Эффективность лечения

Результаты испытания препаратов показали, что ивомек мелког-ранулированный. двойной пиперазин и пиаветрин в указанных дозах были наиболее эффективными антгельминтиками при кишечных немато-дозах лошадей, экстенсэффективность (9Э) которых составила 100 Z.

Препарат валбазен оказался малоэффективным при данных инва-виях - ЭЭ составила 20 X.

Клиническое состояние животных после дегельминтизации находилось в пределах физиологической нормы. Спустя 27 суток после применения квомека мелкогранулированного и пиаветрина физиологическое состояние животных приближалось к норме, о чем свидетельствовали полученные нами морфологические показатели крови , уровень пепсиногена в плазме и содержание витамина Biz в сыворотке крови. До дегельминтизации в крови инвазированных лошадей количество эритроцитов в среднем составило 6,35 ± 0,75х1012/л, лейкоцитов - 12,30 ± 0,30х109/л, эозинофилов - 207.5 ± 4б,2х106/л и гемоглобина - 93,5 ± 8,5 г/л, пепсиногена - 2,87 ± 0,12 мг% и витамина Big - i.91 ±0,15 мкг/л. Через 2? суток после применения препаратов эти показатели составили соответственно: количество эритроцитов -6.95 ± 0,9х1012/л. лейкоцитов 9.25 ± 0,7хЮ9/л,эозинофилов - 102,5' ± 13.8х10б/д, гемоглобина - 123,5 ±13,5 г/д, пеа-сикогена - 4,46 ± 0,27 мг% и витамина Biz ~ 2,72 ± 0,10 мкг/ л (Р<0.01 ).

2.2.6.2. Влияние антгельминтиков на количественный состав актиномицетов Пищеварительного канала лошадей

После применения ивомека мелкогранулированного количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей восстанавливался черев 9 недель(134,9±40,8 тыс в 1 г) по сравнению с 15,8±2,0 тыс до дегельминтизации. При обработке лиаветрином количество актиномицетов в прямой кишке первоначально снижалось с 47,7*3,3 тыс до дегельминтизации до 33,1±4,6 тыс через 2 недели и 19,2±3,1. тыс через 4 недели после применения препарата. Через 2 месяца количественный уровень актиномицетов составлял 99,2±19,2 тыс в 1 г содержимого прямой кишки.

Таким образом, препараты ивермектина оказывают более благоприятное воздействие на актиномицеты пищеварительного канала лошадей по сравнению с пиперазиновыми соединениями.

ВЫВОДЫ

1. Пищеварительный канал жеребят заселяется актиномицетами в первые сутки постнатального периода после приема молозива. Количественный уровень микроорганизмов в содержимом прямой кишки жеребят достигает максимума { 1320,0 ± 21,0 тыс/г ) на 10-е сутки жизни и стабилизируется к 5 - б месячному возрасту после отъема животных ( 170,2 ±5,8 тыс/г ).

2. Количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей в условиях стойлово-пастбищного содержания находится в зависимости от интенсивности инвазий кишечными нематодами (параскаридами, стронгилятами ) и колеблется по сезонам года: при средней и сильной интенсивности инвазий количество актиномицетов достоверно уменьшается и составляет соответственно зимой 41,3±14,8 тыс/г и 14.9±2,1 тыс/г (против 80.8±9,8 тыс /г в контроле ); весной - 69,8±8,б тыс/г и 27.4±4,3 тыс/г (против 136.6 ± 10,2 тыс/г в контроле ); летом - 78,5±4,9 тыс/г и 32,6±3,3 тыс/г ( против 1бЗ,2±5,2 тыс/г в контроле ) и осенью - 62,2 ±15,7 тыс/г и 20,5±5,2 тыс/г (против 112,7±7,8 тыс/г в контроле ); при слабей интенсивности инвазий достоверных изменений не обнаружено.

3. Паразитирование кишечных нематод (параскарид.стронгилят) приводит к уменьшению количественного уровня актиномицетов во всех отделах пищеварительного канала лошадей: при вредней и сильной интенсивности инвазий количество микроорганизмов в содержимом желудка было соответственно в 1,6 и 1,9 рааа(р<0,001) меньше. чем у незараженных животных, в двенадцатиперстной кишке - в 4,0 и 3,4. тощей - в 3,8 и 3,6, слепой - 3,7 и 4,7, большой ободочной - в 2.5 и 3.8. малой ободочной - в 1,5 и 3,1 и прямой кивке - в 2,1 и 5.0 раза меньше, чем у контрольных лошадей (Р<0.001).

4. Характер распределения актиномицетов по отделам пищеварительного канала лошадей подчинен общим закономерностям: наимень-• шее количество микроорганизмов зарегистрировано в тонком, а наибольшее - в толстом отделе кишечника.

5. Культуры актиномицетов (п.- 187), выделенные из содержимого пищеварительного канала зараженных кишечными нематодами и контрольных лошадей, отнесены к семейству Streptomycetaceae. роду Streptomyces. При этом секции Clnereus принадлежали 60,42 от ис -следованных культур, сериям Achromogenes - 27,42, Aureus - 7,12, Chrysomal 1us и Chromogenes по 28.3% и Vlolaceus - 8.82: секции Helvolo-flavus серии Helvolus -. 30,52; секции Albus сериям Albö-coloratus и Albus -.4,82; секции Roseus сериям Ruber, Lavendu-lae-roseus, Roseovlolaceus. Fradlae - 3,22; секциям Azureus и Im- • perfectus по 0.52 от исследованных культур.

6. Установлено, что актиномицеты пищеварительного тракта ва-раженных и свободных от кишечных нематод лошадей обладают антибит отической и витаминообразующей активностью:

- при слабой интенсивности инвазий в:основном возрастает, а при средней и сильной снижается антагонистическая активность актиномицетов по отношению к грамположительным бактериям „(S.aureus соответственно 802, 53,72, 75.52 против 70,72 в контроле; М.lute-us - 53,32, 43,22 и 20,32 против 53.62 в контроле; М. lysodeictl-cus - 67,42, 43,42 и 30,62 против 46,62 в контроле); спорообразу-ющим микроорганизмам (B.subtllls - 802, 58,72 и 512 против 782 в контроле); дрожжеподобным грибам (S.cerevislae '- 73.32 , 39,12 и" 34.62 против 73,12 в контроле).. Актиномицеты, обладающие антибиотической активностью против грамотрицательных бактерий (E.coli) зарегистрированы только при слабой (4,42) и сильной (6,12) интенсивности инвазий;

- все актиномицеты синтезируют витамин В12 в количестве от 2,09 до 8,18 нг/мл. за исключением одной культуры, выделенной от инвазировачного животного, не обладающей витаминообразующей активностью.

7. При испытании лярвицидной активности экстрактов 22 культур актиномицетов пищеварительного канала лошадей обнаружена 1 культура (N 219 секции Roseus серии Fradlae), полученная от инва-эированного животного, культивирование в экстракте которой в течение суток при 37°С снижало активность 802 инвазионных личинок стронгилят лошадей.

8. Установлено, ■ что концентрация витамина Вгг в сыворотке крови лошадей снижается в зависимости от степени инвазии кишечными нематодами: .при.средней - в 1,9 и при сильной- в 2,9 раз

(Р<0,005) по сравнению с 2.96 ± 0.10 нг/мл в контроле, что подтверждает отрицательное влияние параскарид и стронгилят на биосинтез и всасывание витамина в кишечнике.

9. При кишечных нематодозах лошадей уровень пепсиногена в плазме крови уменьшается при средней интенсивности инвазий в 1.7 и при сильной - в 1.9 раза (Р<0,005) по сравнению с контрольнь-ми показателями, что говорит о возникновении патологического 'процесса в желудке.

10. Впервые установлено, что новые антгелькинтики - ивомек ыелкогранулированний в дозе 0.2 г/кг массы тела (0.2 мг/кг по ДВ) и двойней пиперазин в дозе 0.1 г/кг - обладают 1003; зкстенсзффек-тивностыо (ЭЭ) против параскарид и стронгилят лошадей. "33 пиавет-ркна в дозе 0,1 г/кг массы животного составила при данных инвазиях 100%, а валбазена (2.52 ДВ) в дозе 10 мг/кг по ДВ - 20Х.

11. Ивомек оказывает более благоприятное воздействие на як-тиномицетну» флору ккпэчнига: после дегельминтизации ивомеком количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей восстанавливается через 2 месяца, при применении пиаветрина эти показатели не достигает нормы в указанные сроки.

12. С помощью гедьминтоовокопрсскопии проб от инзазкрованннх лозэдей установлено, что яйца РзгаБсаг1з ечиогит серого и коричневого цвета при культивировании в течение 6-7 суток в одинаковой степени развиваются до инвазионной стадии , то есть толготся оплодотворенными и жизнеспособными.

ПРАКТИЧЕСКИЕ 1РШ0ЯШШ

. 1. Для обоснования патогенетической терапии ¡жшеч;шх немато-дозов лошадей .. на основании проведенных исследований и с учетом полученных результатов рекомендуем изучать количественный состав и свойства актиномицетов пищеварительного канала, а также концентрацию витамина В12 и пепсиногена в крови лошадёй.

2. На основании результатов производственных опытов, проведенных по испытанию новых антгельминтиков против параскарвдоза и стронгилятозов лошадей, предлагаем использовать ивомек мелкогра-нулированний, двойной пиперазин и пиаветрин в качестве высокоэф-, Фективных препаратов при данных инвазиях.

3. Для нормализации функций пищеварительного канала зараженных кишечными нематодами лошадей с учетом развития патогенеза рекомендуем наряду с использованием антгельминтиков применять витамин В12, пробиотики и другие продукты микробиального синтеза -биомициновый препарат М-20. биовит. мицелий актиномицетов, а также кормовые антибиотики и ферменты, улучшающие пищеварение.

4. Для определения количественного состава актиномицетов пищеварительного канала лошадей рекомендуем применять наиболее оптимальные селективные органические среды, содержащие овес: ISP-J (Waksman, 1967). овсяный агар (ВНИИА) и среду Карвелла.

5. С целью изучения лярвицвдной активности актиномицетов рекомендуем применять метод культивирования личинок стронгилят в экстрактах культур актиномицетов, полученных по методике В.А.Буд-никова (1965).

6. Результаты исследований по изучению влияния кишечных нематод (параскарид, стронгилят) на количественный состав и свойства (антибиотические, витаминообразующие) актиномицетов пищеварительного канала лошадей использованы при разработке методических указаний для ветеринарных специалистов и слушателей Факультете повышения квалификации "Влияние гельминтов на микрофлору пищеварительного канала животных" (утверждены учебно - методической клинической комиссией МГАЕМиБ 25 марта 1995 года), а также для чтения лекций и проведения лабораторно-практических занятий нг кафедре паразитологии и инвазионных болезней животных МГАВМиБ.

Список работ, опубликованных по т.-ме диссертации

1. Ишимбаева P.C. Морфология и культуральные свойства актиномицетов, выделенных из содержимого прямой кишки лошадей /Сб.науч.тр. МГАВМиБ.- М., 1994. - С.19-25.

2. Ишимбаева P.C. Антибиотические свойства актиномицетов, выделенных из содержимого прямой кадки лошадей / Сб. науч. тр. МГАВМиБ.- М.. 1995.- С.23-29.

Размножено на роталринте в Типографии "РОЕ^С", зшйбЗ, 1ииэкз Мясницкая, 35.