Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние холестерина на плазматические мембраны опухолевых и нормальных клеток

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Иванова, Лидия Ивановна

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Холестерин биологических мембран

1.1.1. Холестерин как структурный компонент биомембран

1.1.2. Влияние холестерина на активность мембраносвязанных ферментов

1.1.3. Участив холестерина биомембран в регуляции процессов клеточной пролиферации

1.2. Холестерин и канцерогенез

1.2.1. Холестерин плазмы крови и развитие новообразований

1.2.2. Регуляция биосинтеза и распада холестерина в опухолевых клетках

1.2.3. Холестерин плазматических мембран опухолевых клеток

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Сравнительное исследование содержания липидов в нормальных и в опухолевых клетках.

3.2. Встраивание и выведение холестерина из плазматических мембран опухолевых и нормальных клеток с помощью липосом

3.2.1. Характеристика липосом

3.2.2. Изменение липидного состава опухолевых и нормальных клеток при встраивании и выведении холестерина из плазматических мембран

3.3. Изменение микровязкости липидов мембран опухолевых и нормальных клеток при встраивании и выведении холестерина

ЗЛ. Активность На, К-АТФазы и 5'-нуклеотидазы при изменении отношения холестерин/фосфолипиды в опухолевых и нормальных клетках

3.5. Влияние встраивания холестерина в плазматические мембраны клеток гепатомы Зайделя, опухоли яичников и лимфобластного лейкоза L 1210 на их перевиваемость.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние холестерина на плазматические мембраны опухолевых и нормальных клеток"

Актуальность проблемы. Исследование изменений плазматических мембран клеток при канцерогенезе является одной из актуальных задач современной онкологии. Микровязкость липидной фазы плазматической мембраны является существенным фактором регуляции внутриклеточных процессов (Finean et ai, 1978). Трансформация ( Burger, 1973; Van Blitterwizk e.a,1977), рост ( Collard et al., 1977), клеточный цикл ( De Laat et ai,I977) и дифференциация клеток ( Kanasaki et al.,I978; Coulon-Morelec,Buc-Caronf,1981) сопровождаются изменением кидкостноети липидного бислоя плазматических мембран.

Одним из основных структурных компонентов липидного бислоя плазматической мембраны является холестерин ( De Duve, 1971), содержание которого в значительной мере определяет ее микровязкость (Владимиров, Добрецов, 1980).

В последнее десятилетие внимание исследователей привлекает проблема роли холестерина в развитии онкологических заболеваний. Большинство литературных данных свидетельствует о снижении содержания холестерина в плазматической мембране опухолевых клеток при одновременном понижении микровязкости ее липидного бислоя ( Inbar, 1980). Однако эти и9Следования выполнены преимущественно на лейкемических клетках. Результаты же, полученные на других опухолях противоречивы. Ряд авторов обнаружили повышение содержания холестерина в опухолевых клетках ( Phiiippot et ai., 1976; Schmidt-Ullrich et al., 1976), другие - выявили снижение его при канцерогенезе ( lobar, 1980).

Все это делает необходимым более углубленное исследование влияния холестерина на физические свойства фосфолипидного бислоя и активность ферментов плазматических мембран опухолевых клеток.

Цель работы. Целью настоящей работы было сравнительное исследование влияния встраивания и выведения холестерина на микровязкость фосфолипидного бислоя и активность ферментов плазматической мембраны клеток некоторых асцитных опухолей и нормальных клеток, а также выяснение возможного цитостатического действия встраивания холестерина в опухолевые клетки.

Конкретные задачи исследования:

1. Измерить содержание холестерина, фосфолипидов, активности Na, К-АТФазы и 5'-нуклеотидазы в опухолевых и нормальных клетках.

2. Исследовать изменение отношения холестерин/фосфолипиды в опухолевых и нормальных клетках при экспериментальном встраивании и извлечении холестерина.

3. Исследовать микровязкость фосфолипидного бислоя мембран опухолевых и нормальных клеток при изменении молярного отношения холестерин/фосфолипиды.

4. Выяснить взаимосвязь между микровязкостью мембран опухолевых и нормальных клеток и активностью мембраносвязанных ферментов Na, К-АТФазы и 5*-нуклеотидазы.

5. Выяснить влияние встраивания холестерина в клетки гепато-мы Зайделя, лимфобластноиг лейкоза LI2IO и асцитной опухоли яичников на их перевиваемость экспериментальным животным.

Научная новизна и практическая ценность работы. В результате проведенной работы было выявлено снижение молярного отношения холестерин/фосфолипиды в мембранах клеток трех различных типов асцитных опухолей по сравнению с нормальными клетками. Полученные данные свидетельствуют о снижении активности Ыа, К-АТФазы и 5г.нуклеотидазы в расчете на миллиграм фосфолипидов в этих клетках.

Показано, что эффективность встраивания и выведения холестерина из плазматической мембраны опухолевых и нормальных клеток зависит от величины исходного показателя молярного отношения холестерин/фосфолипиды. Наиболее существенное повышение содержания холестерина наблюдалось в опухолевых клетках, для которых были характерны самые низкие исходные значения отношения холестерин/фосфолипиды.

Выявлено, что встраивание холестерина в клетки трех типов асцитных опухолей и двух типов нормальных клеток сопровождается увеличением микровязкости липидов мембран, оцененной с помощью флюоресцентных и спиновых зондов. При выведении холестерина из обогащенных им мембран наблюдалось уменьшение микровязкости фосфолипидного бислоя мембран.

Для опухолевых и нормальных клеток продемонстрирована ре-гуляторвая роль холестерина по отношению к активности ферментов плазматической мембраны Ыа, К-АТФазы и 5'нуклеотидазы. При увеличении микровязкости мембран, вследствие встраивания холестерина, наблюдалось уменьшение активности Na, К-АТФазы и 5*-нуклеотидазы, и наоборот, при снижении микровязкости липид-ной фазы мембран, обогащенных холестерином, после его выведения наблюдалось возрастание активности этих ферментов.

Положение о регуляторной роли холестерина нашло подтверждение в опытах по перевивке опухолевых клеток, в которое было встроено дополнительное количество холестерина. Обогащенные холестерином опухолевые клетки оказались менее инвазивными по сравнению с исходными. В этой части работы продемонстрировано цитостатическое действие холестерина на клетки некоторых ас-дитных опухолей.

Данные о сникении отношения холестерин/фосфолипиды в опухолевых клетках могут быть использованы при разработке новых диагностических подходов в онкологии, а результаты по дитоста-тическому действию холестерина на опухолевые клетки - для разработки новых методов противоопухолевой терапии.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ДСК - дифференциальная сканирующая колориметрия РСА - рентгеноструктурный анализ ЯМР - ядерный магнитный резонанс ЭПР - электронный парамагнитный резонанс ЛУК - ледяная уксусная кислота ВДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота ТХУ - треххлоруксусная кислота АТФ - аденозинтрифосфорная кислота АМФ - аденозинмонофосфорная кислота 5-ns -5-доксилстеариновая кислота

РЭ ~ соотношение интенсивностей флюоресценции эксимеров и мономеров лирена ФХЛ - фосфатидилхолиновые липосомы ХФХЛ - холестерив-фосфатидилинхолиновые липосомы ЛБЕ - липопротеиды высокой плотности' ЛОВЕ - липопротеиды очень высокой плотности ЛНП - липопротеиды низкой плотности ЛОНП - липопротеиды очень низкой плотности Tt — температура фазового перехода фосфолипидов

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Иванова, Лидия Ивановна

ВЫВОДЫ

1. Показано снижение молярного отношения холестерин/фосфолипиды в клетках асцитных опухолей - гепатомы Зайделя, лимфо-бластозного лейкоза LI2I0 и опухоли яичников по сравнению с нормальными лимфоцитами и гепатоцитами.

2. В опухолевых клетках обнаружено снижение активности ферментов плазматической мембраны Na, К-АТФазы и 5'-нуклеотидазы при расчете удельной активности на фосфолипиды.

3. Получены экспериментальные доказательства отсутствия различной локализации холестерина в плазматической мембране опухолевых и нормальных клеток.

Установлено, что как встраивание, так и выведение холестерина из обогащенных опухолевых и нормальных клеток сопровождается изменением микровязкости фосфолипидного бислоя их мембран.

5. Показано, что ферменты плазматической мембраны нормальных и опухолевых клеток Na, К-АТФаза и 5'-нуклеотидаза имеют в механизме каталитического акта диффузионно-лимитируемые стадии, что подтверждается регуляцией их активности изменением микровязкости фосфолипидного бислоя мембран.

6. Показано цитостатическое действие холестерина на клетки гепатомы Зайделя, лимфобластозного лейкоза Ы2Ю и опухоли яичников.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Иванова, Лидия Ивановна, Москва

1. Арчаков А.И., Бородин Е.А. Холестерин биологических мембран и пути его выведения из организма. В кн.: Биомембраны. Рига: "Зинатне", 1981, с.167-184.

2. Бергельсон Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки. М.: Наука,1982.

3. Берлинер Л. (ред.). Спиновые метки: Теория и применение. М.: Мир, 1979.

4. Болдырев А.А., Ко-Чже-Чжун. Влияние холестерина на активность мембранной Na, к -активируемой аденозинтрифосфатазы. Бюлл.эксперим.биол.и мед., 1977, 12, с.672-675.

5. Болдырев А.А., Твердислов В.А. Молекулярная организация и механизм функционирования Na-насоса. Итоги науки и техники. Биофизика. М., 1978, т.10.

6. Бурлакова Е.Б. Влияние липидов мембран на ферментативную активность. В кн.: Липиды: структура, биосинтез, превращения и функции. М.: Наука, 1977, с.16-27.

7. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972.

8. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, 1980.

9. Владимиров Ю.А., Рощулкин Д.И., Потапенко А.Я. и др. Биофизика. М.: Медицина, 1983.

10. Дятловицкая Э.В., Бергельсон Л.Д. Липиды опухолей и их влияние на структуру и функционирование клеточных мембран. -Вестник АМН СССР, 1982, № з, с.42-47.

11. Дятловицкая Э.В, Тимофеева Н.Г., Горькова Н.П., Бергельсон Л.Д. Соотношение холестерина, сфингомиелина и фосфати-дилхолина в клеточных мембранах гепатомы и печени. Биохимия, 1975, т.40, № 6, C.I3I5-I3I9.

12. Епифанова О.И. Гормоны и размножение клеток. М.: Наука, 1965.

13. Епифанова О.И. (ред.). Клеточный цикл. М.: Наука,1973.

14. Епифанова О.И., Терских В.В., Полуновский В.А. Покоящиеся клетки. М.: Наука, 1982.

15. Ивков В.Г., Берестовский Г.Н. Липидный бислой биологических мембран. М.: Наука, 1982.

16. Канаева И.П., Карякин А.В., Аленичева Т.В. и др. Дыхание и окислительное фосфорилирование в изолированных клетках печени. Цитология, 1975, т.17, № 5, с.545-551.

17. Климов А.Н. Липопротеиды плазмы крови. В кн.: Липиды. Структура, биосинтез, превращения и функции. М.: Наука, 1977, с.57-80.

18. Кольтовер В.К. Физические и химические зонды в исследованиях биологических мембран. М., ВИНИТИ, Биофизика, 1979, т.II, с.10-100.

19. Леменовская А.Ф., Коен Я.Н., Переводчикова К.А. и др. Фосфолипидный состав ядерных мембран и ядер печени и гепатомы 27 крыс. Биохимия, 1976,7.4^6 , с.ЮОО-ЮОЗ.

20. Ли B.C.* Халилов Э.М., Сабурова В.И. и др. Яипидный состав и структурно-функциональные свойства мембран эритроцитов разного возраста. Вопросы мед.химии, 1982, № 6, с.66-71.

21. Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.А. и др. Хо-лестериноз. М.: Медицина, 1983.

22. Маневич Е.М., Лакин К.М., Арчаков А.И. и др. Изучение микрогетерогенности мембран эритроцитов с помощью липидспеци-фических флуоресцентных зондов. Влияние холестерина и проста-гландина Ej. Биол.мембраны, 1984, т.1, fe 2, с.145-152.

23. Молотковский Юл.Г., Дмитриев Н.И., Молотковская И.М. и др. Синтез новых флуоресцентно-меченных фосфолипидов и изучение их поведения в модельных мембранах. Биоорган.химия, 1981, т.7, № 4, с.586-600.

24. Розанцев Э.Ф. Стабильные иминоксильные радикалы. М.: Химия, 1970.

25. Федоров Н.А. В кн.: Биологическое и клиническое значение циклических нуклеотидов. М.: Медицина, 1979.

26. Anderson J.C.E., Green С. Enriohment of lymphocytes with cholesterol and its effect on lymphocyte activation. -FEBS Lett., 1975,v?52, p.208-211.

27. Allan D., Crumpton M.J. Isolation and composotion of human thymocyte plasma membrane. Biochim., biophys.Acta, I972,v.274, p.22-27.

28. Amar-Costesec A., Beaufay H.P., Wibo M. et al. Analytical study of microsomes and isolated subcellular membranes from rat liver. II. Preparation and composition of the microsomal fraction. J.Cell.Biol., 1974a,vc6I; p.201-212.

29. Amar-Costesec Wibo M., Thines-Sempoux D. et al.

30. Analytical study of microsomes and isolated subcellular membranes from rat liver. 17. Biochemical, physical and morphological modifications of microsomal components induced by digito-nin, EDТА and pyrophosphate. J.Cell Biol., 1974b, v.62, p. 717-745.

31. Apffel C.A. The endoplasmic reticulum membrane system and malignant neoplasia. Progr.exp.Tumor Res., 1978, v.22, p.317-362.33ч Barclay M., Skipski V.P. Lipoproteins in relation to cancer. Progr.Biochem.Pharm., 1975, v. 10, p.76-tEII.

32. Barenholtz J., Gibben D., Litman B. et al. A simple method for the preparation of homogenous phospholipid vesicles. Biochemistry, 1977, v.16, p.2806-2810.

33. Bartlett G.R. Phosphate assay in column chromatography. J.Biol.Chem., 1959, v.234, p.466-368.

34. Beaufay H., Amar-Constesec A., Feytmans E. et al. Analitical study of microsomes and isolated subcellular membranes from rat liver. I. Biochemical methods. J.Cell Biol. , 1974a, v.6I, p.188-200.

35. Bergelson L.D., Dyatlovitskaya E.V., Torkhovskaya T.I. et al. Phospholipid composition of membranes in the tumor cell. Biochim.Biophys.Acta, 1970, v.210, p.287-298.

36. Berke G., Taur R., lobar M. Changes is fluorescence polarization of a membrane probe during lymphocyte-target cell interaction. J.Immunol., 1978, v.120, p.I378-I384.

37. Beartrand J., Picard J. Fractionnement des membranes plasmiques des cellules d'Hepatome de rajdela. Cellular E. Molecular Biology, 1979, v.25, p.273-279.

38. Bierne O.R., Watson J.A. Comparison of regulation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase in hepatoma cells grown in vivo and in vitro. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1976, v.73, p.2735-2739.

39. Bissel D.M., Alpert IS. The feed back control of hepatic cholesterol synthesis in Ugandan patients with liver disease. Cancer Res., 1972, v.32, p.149-152.

40. Bittman R., Blau L. The phospholipid-cholesterol interaction kinetics of water permeability in liposomes. Biochemistry, 1972, v.II, p.4831-4839.

41. Bittman R., Rottem S. Distribution of cholesterol between the outer and inner halves of the lipid bilayer of Mycoplasma cell membranes. Biochem.Biophys.Res.Commun., 1976, v.7I, p.318-321.

42. Bloj В., Morero R.D., Farias R.N. Membrane fluidity, cholesterol and allosterica transitions of membrane-bound Mg+2-ATPase, (Na +K )—ATPase and acetylcholinesterase from rat erythrocytes. FEBS Lett., 1973, v.38, p.I0I-I05.

43. Bloj В., Zilvensmit D.B. Asymmetry and transposition rates of phosphatidylcholine in rat erythrocyte ghosts. Biochemistry, 1976, v.I5, p.1277-1283.

44. Bloj В., Zilversmit D.B. Camplete exchangeability of cholesterol in phosphatidylGholine/cholesterol vesicles of different degrees of unsaturation. Biochemistry, 1977» v.16,p.3943-3948.

45. BlokM.С., Van Deenen L.L.M., De Gier J. The effect of cholesterol incorporation on the temperature dependence of water permeation through liposomal membranes prepared from phosphatidylcholines. Biochim.Biophys.Acta, 1977 > v.464, p. 509-518.

46. Boldereb A.A. Role of lipid in the functioning of Na, K-ATPase. Studie biophysica, 1981, v.84, p.153-160.

47. Brown M.S., Dana S.E., Goldstein J.L. Regulation of 3-Hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase activity in cultured human fibroblasts. J.Biol.Chem., 1974, v.249, p.789-796.

48. Borck C., Guernsey D. Membrane associated ion transport enzymes in normal and oncogenically transford fibroblasts and epithelial cells. Studia biophysica, 1981, v.84, p.53-54.

49. Borochov H., Shinitzky M. Ventical displacement of membrane proteins mediated by changes in microviscosity. -Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1976, v.73, p.4526-4530.

50. Borochov H., Zahler P., Wilbrandt V/. et al. The effect of phosphatidylcholine to sphingomielin mole ratio on the dynamic properties of sheep erythrocytes membrane. Biochim. Biophys.Acta, 1977, v.470, p.382-388.

51. Bruejkdorfer R.R., Graham J.M. The exchange of cholesterol and phospholipids between cell membranes and lipoproteins. In: Biological membranes. Ed.by D.Chapman, D.F.H.Wal-lach, London, N.Y., Acad.Press, 1976, v.3, p.103-152.

52. Burger M.M. Federation surface changes in transformed cells detecterol by lectins. Fed.Proc., 1973, v.32, p.91-101.

53. Burger M.M. Growth control and cyclic alterations of cyclic AMP in the cell cycle. Nature New Biol., 1972, v.239, p.161-163.

54. Burns C.P., Luttenegger D.G., Dudley D.T. et al. Effect of modification of plasma membrane fatty acid composition on fluidity and methoterexate transport in LI2I0 murine leukemia cells. Cancer Res., 1979, v.39, p.1726-1732.

55. Chen H.W., Heiniger H.-J., Kandutsch. A.A. Relationship between sterol synthesis and DNA synthesis in phytohemagglutinin-stimulated mouse lymphocytes. Proc.NatI.Acad.Sci.USA, 1975, v.72, p.1950-1954.

56. Chen H.W., Heiniger H.-J., Andres Wa.Kandutsch. Alte1. Q C. .ration of Rb inflax and efflux following depletion of membrane sterol in L-cells. J.Biol.Chem., 1978a, v.253, p.3180-3185.

57. Chen H.W., Kandutsch A.A., Heiniger H.-J., Meier H. Elerated sterol synthesis in lymphocytes leukemia cells from two inbred strains of mice. Cancer Res., 1973, v.33, p.2774-2778.

58. Chen H.V/., Kandutsch A.A., Heiniger H.-J. The role of cholesterol in malignancy. Prog.Exp.Tumor Kes., 1978b, v.22, p.275-316.

59. Cheng S., Levy D. The effects of cell proliferation on the lipid composition and fluidity of hepatocyte. Arch.Bio-chem.Biophys., 1979, v.196, p.424-429.

60. Cohen N.S., Ekholm J.E., Luthra M.G. et al. Biochemical characterization of density separated human erythrocytes. Biochim.Biophys.Acta, 1976, v.419, p.229-242.

61. Coleman P.S., Lavietes B.B., Sabine J.R. Membrane cholesterol tumorigenesis and the biochemical phenotype of neoplasia. Critical Reviews in Biochemistry, 1981, v.II, p.341-392.

62. Collard J.G., De-Wildt A., Pomen-Meulemans E.P.M. et al. Increase in fluidity of membrane lipids in lymphocytes, fibroblasts and liver cells stimulated for growth. FEBS Lett.,1977, v.77, p.173-178.

63. Cooper R.A. Influence of increased membrane cholesterol on membrane fluidity and cell function in human red blood cells. J.Supramol.Structure, 1978, v.8, p.413-430.

64. Cooper R.A., Arner E.C., Wiley J. et al. Modification of red cell membrane structure by cholesterol-rich lipid dis-persien. A model for the primary spur cell deffect. J.Clin.1.vest., 1975, v.55, p.II5-I25.

65. Cooper R.A., Leslie M.H., Fishkoft S. et al. Factors influencing the lipid composition and fluidity of red cell membranes in vitro. Production of red cell rosessing more than two cholesterol per phospholipid. Biochemistry, 1978, v.17, p.327-331.

66. Coulon-Morelec M.-J., Buc-Caronf M.-H. Lipid patterns of embryonal carcinoma cell lines and their derivatites: changes with differentiation. Developmental biology, 1981, v.83, p.278-290.

67. Cullis P.R., De Kruyff В., Richards R.E. Factors affecting the motion of the polar headgroup in phospholipid bilayers A 3I-P NMR study of unechicated phosphatidylcholine liposomas. Biochim.Biophys.Acta, 1976, v.426, p.433-446.

68. Darke A., Finer E.G., Flock A.G. et al. Nuclear magnetic resonance study of lecithin-cholesterol interactions. J. Mol.Biol., 1972, v.63, p.265-279.

69. Dawson R.M. On the mechanism of action of phospholipa-se A. Biochem.J., 1963, v.88, p.414-423,

70. De Bernard L. Associations moleculairec entre les lipids. II. Lecithine et cholesterol. Bull.Soc.Chim.Biol., 1958, v.40, p.161-170.

71. De Duve. Tissue fractionation. Past and present. -J.Cell Biol., 197I, v.50, p.20D-55D.

72. De Gier J., Handeraloot J.G., Yan Deenen L.L.M. The role of cholesterol in lipid membranes. Biochim.Biophys. Acta, 1959, v.173, p.143-145.

73. De Gier J., Manderaloot J.G., Van Deenen L.L.M. Lipid composition and permeability of liposomes. Biochim.Biophys. Acta, 1968, v. 150, p.666-675.

74. De Laat S.W., van der Saag P.Т., Shinitzky M. Microvis-cosity modulation during the cell cycle of neuroblastoma cells.- Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1977, v.74, p.4458-4461.

75. De Laat S.W., van der Saag R.T., Elson E.L. et al. -Lateral diffusion of membrane lipids and proteins during the cell cycle of neuroblastoma cells. Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1980, v.77, p.1526-1528.

76. Demel R.A., Bruckdorfer K.R., Van Deenen L.L.M. Structural requirements of sterols for the interaction with the lecithin at the air-water interface. Biochim.Biophys.Acta , 1972a, v.255, p.321-330.

77. Demel R.A., De Kruyff B. The functions of sterols in membranes, Biochim.et Biophys.Acta, 1976, v.457, p.109-132.

78. Demel R.A., Jansen J.W.C.M., van Dijck O.W.M. et al. The preferential interactions of cholesterol with different classes of phospholipids. Biochim.Biophys.Acta, 1977, v.465, p.I-10.

79. Demel R.A., Van Kessel G.W.S.M., Van Deenen L.L.M. The properties of polyunsaturated lecithins in monolayers and lyposomes and the interactions of theese lecithines with cholesterol. Biochim.et Biophys.Acta, 1972b, v.266, p.26-40.

80. De Kruyff В., Demel R.A., Slathom A.J. et al. The effect of the polar headgroup on the lipid-cholesterol interaction a monolayer and differential scanning calorimetry study.- Biochim.Biophys.Acta, 1973, v.307, p.I-I9.

81. De Pont J.J.H.H.M., Van Prooijen-van Eeden A., Bouting S.L. Role of negatively charged phospholipids in highly purified (Na++K+)-ATPase from rabbit kidney outer medulla. Bio-chim.Biophys.Acta, 1978, v.508, p.464-477.

82. Dittmer J.C., Lester R.L. A simple, specific spray for the defection of phospholipids on thinlayer chromatograms. -J.Lipid Res,, 1964, v.5, p.126-133.

83. Dod B.J., Cray G.M. The lipid composition of rat-liver plasma membranes. Biochim.Biophys.Acta, 1968, v.150, p.397-401.

84. Dorling P.R., Le Page R.N. A rapid high yield method for the preparation of liver cell plasma membranes. Biochim. Biophys.Acta, 1973, v.318, p.33-40.

85. Edldin M. Rotational and translational diffusion in membranes. Ann.Rev.Biophys.Bioeng., 1974, v.3, p.179-201.

86. Fiehn W., Seiler D. Alteration of erythrocyte (Na+, K+)-ATPase by replacement of cholesterol by desmosterol in the membrane. Experientia, 1975, v.31, p.773-775.

87. Fisher R.A. Analisis of membrane halves: cholesterol. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1976, v.74, p.173-177.

88. Finean J.В., Coleman R., Mitchell R.H. Membranes and their cellular function. Blockwell Scientific Publications, 1978.

89. Fogelman A.M., Edmond J., Seager J. et al. Abnormal induction of 3-hydro-3-methylglutaryl coenzyme A reductase in leukocytes from subjects with heterozygous familial hypercholesterolemia. J.Biol.Chem., 1975, v.250, p.2045-2055.

90. Folch J., Lees M., Stanley G.H.S. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. J.Biol.Chem., 1957, v.226, p.497-509.

91. Frantz Jr. Cancer among men on cholesterol-lowering diets: Experience from five clinical trials. Lancet, ii, 1971, p.203-206.

92. Frye L.D., Edidin H. Rapid intermixing of cell surface antigens after formation of mouse-human heterokaryons.

93. J.Cell Science, 1970, v.7, p.319-335.

94. Fuchs P., Parola H., Robbins P.W. et al. Fluorescence polarization and viscosities of membrane lipids of 3T3 cells.- Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1975, v.72, p.3351-3354.

95. Galla H.J., Sackmann E. Lateral diffusion in the hydrophobic region of membranes: use of pyrene excimers as optical probles. Biochim.Biophys.Acta, 1974a, v.339, p.I03-II5.

96. Galla H., Sackmann E. Lateral mobility of pyrene in model membranes of phospholipide with different chain length.- Bor Bunsanges Phys.Chem., 1974b, v.78, p.949-953.

97. Ghost D., Williame M.H., Tinoko J. The influence of lecithin structure on their monolayer behavior and interacttions with cholesterol. Biochim.Biophys.Acta, 1973, v.291, p.351-362.

98. Giraud P., Glarat M., Garay. Interactions of cholesterol with the Na pump in red blood cells. Nature, 1977, v.264, p.646-648.

99. Giraud F., Claret M., Bruckdorecr L. et al. The effects of membrane lipid order and cholesterol on the interal and external cationic sites of the Na+, K+ pump in erythrocytes. -Biochim.Biophys.Acta, 1981, v.647, p.249-258.

100. Gitler C. Plasticity of biological membranes. Ann. Rev.Biophys.Bioeng., 1972, v.I, p.51-109.

101. Heiniger H.J. Cholesterol and its biosynthesis in normal and malignant lymphocytes. Cancer Research, 1971, v.4I, p.3792-3794.

102. Heiniger H.-J., Chen H.W., Applegate O.L.Jr. et al. Elevated synthesis of cholesterol in human leukemia cells. -J.Molec.Med., 1976a, v.I, p.I09-II6.

103. Heiniger H.-J., Kandutsch A.A., Chen H.W. Deletion of L-cell sterol depresses endocytosis. Nature, Lond., 1976b, v.263, p.515-517.

104. Hoeven R.P.van, Emmelot P. Studies on plasma membrane. XVIII. Lipid class composition of plasma membranes isolated from rat and mouse liver and hepatoma. J.Membr.Biol., 1972, v.9, p.105-126.

105. Hope M.J., Bruckdorfer V.R., Hart C.A. et al. Membrane cholesterol and cell fusion of hen and guinea pig erythrocytes. Biochem.J., 1977, v.66, p.255-264.

106. Inbar M. Fluidity of membrane lipids: A single cell analysis of mouse normal lymphocytes and malignant lymphoma cells. FEBS Lett., 1976, v.67, p.180-185.

107. Inbar M. In: Biology of the cancer cell. Ed. K.Let-nansky, 1980. Kugler Publications, Amsterdam, p.269-294.

108. Inbar M.L., Ben-Bassat H. Fluidity difference in the surface membrane lipid core of human lymphoblastoid and lymphoma cell lines. Int.J.Cancer, 1976, v.18, p.293-297.

109. Inbar H., Goldman R., Inbar L. et al. Fluidity difference of membrane lipids in normal and leukemic lymphocytesas controlled by serum components. Cancer Res., 1977a, v.37, p.3037-3041.

110. Inbar M., Juli I.L., Raz A. Contact-mediated ohanges in membrane fluidity in normal and transformed mammalian fibroblasts. Exp.Cell Res., 1977b, v.105, p.325-335.

111. Inbar M.L., Shinitzky M. Increase in cholesterol level in the surface membrane of lymphoma cells and its inhibi-ry effect on ascites tumor development. Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1974a, v.7I, p.2I28-2I30.

112. Inbar M.L., Shinitzky M. Cholesterol as a bioregulator In the development inhibition of leukemia. Proc.Natl. Acad.Sci.USA, 1974b, v.71, p.4229-4231.

113. Inone K. Permeability properties of lyposomes prepared from dipalmitoyllecithin, dimyristoyllecithin, egg lecithin, rat liver lecithin and beef brain sphyngomyelin. Biochim. Biophys.Acta, 1974, v.339, p.390-402.

114. Jarnefelt J. Lipid requiremenes of functional membrane structure as indicated by the risvesible inactivation of (Na++K+)-ATPase. Biochim.Biophys.Acta, 1972, v.266, p.91-96.

115. Johannsson A., Smith G.A., Metcalfe J.C. The effect of bilaver thickness on the activity of (Na++K+-ATPase). -Biochim.Biophys.Acta, 1981, v.641, p.416-421.

116. Kabara J.J., Chapman B.B., Borin B.M. Effect of hypercholesteremia drugs on tumor-bearing mice. Proc.Soc.Exp.Biol. Med., 1972, v.139, p.100-104.

117. Kandutsch A.A., Chen H.W. Consequences of blocked sterol synthesis in cultured cells. J.Biol.Chem., 1977, v.252, p.409-415.

118. Kandutsch A.A., Hancock R.L. Regulation of the rate of sterol synthesis and the level of 3-hydroxy-3-methylglu-taryl coenzyme A reductase activity in mouse liver and hepatomas. Cancer Res., 1971, v.31, p.I396-I40I.

119. Kataoka Т., Koprowski H, Lipid and sell fusion in vitro: effect of amphoterican B. Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 1975, v.I49, p.447-451.

120. Kimelberg H.K. Alterations in phospholipid-dependent (Na++K+)—ATPase activity due to lipid fluidity. Effects of cholesterol and Mg2+. Biochim.Biophys.Acta, 1975, v.413, p.143-156.

121. Kimelberg H.K. Influence of lipid phase transitions and cholesterol on protein-}.ipid interactions. Cryobiology, 1978, v. 15, p.222-226.

122. Kimelberg H.K., Papahadjoulos D. Phospholipid requirements for (Na+ and K+)-ATPase activity: head-group specificity and fatty acid fluidity. Biochim.Biophys.Acta, 1972, v.282, p.277-292.

123. Klein R.A. The actection of oxidation in liposomes preparations. Biochim.Biophys.Acta, 1970, v.210, p.485-489.

124. Klein I., Moore L., Pastan I. Effect of liposomes containing cholesterol on adenylate cyclase activity of cultured mammalian fibroblasts. Biochim.Biophys.Acta, 1978, v.506, p.42-53.

125. Koizumi K., Kano-Tanaka K., Shimizu S. et al. Lipidof plasma membranes from rat thymic lymphoid cells. Deficiency of sphingomyelin. - Biochim.Biophys.Acta, 1980, v.619, p.344-352.

126. Kroes J., Ostwald R. Erythrocyte membranes effect of increased cholesterol content on permeability. Biochim. Biophys.Acta, 1971, v.249, p.647-650.

127. Kutchal H., Cooper R.A., Porster R.E. Erythrocyte water permeability. The effects of anesthetic alcohols and alterations in the level of membrane cholesterol. Biochim. Biophjis.Acta, 1980, v.600, p.542-552.

128. Lai C.S., Hopwood L.E., Swartz U.M. Electron spin resonance studies of changes in membrane fluidity of Chinesehamster ovary cells during the cell cycle. Biochim.Biophys. Acta, 1980, v.602, p.117-126.

129. Lane H.A., Mahoney R.J., Watson A.L.M. et al. Increased fluidity of serum lipids and development of spontaneous mammary tumors in C^H mice. Cancer Immunol.Immunother., 1980, v.8, p.284-288.

130. Lange J., D'Alessandro J.S. Characterisation of mechanism for transfer of cholesterol between human erythrocytes and plasma. Biochemistry, 1977, v.16, p.4339-4343.

131. Larnicol N., Jasmin C., Angerу Y. et al. Prognostic values of microviscosity measurement of mononucleated cells isolated from acute lymphatic leukemic patients in remission. J.Natl.Cane.Inst., 1980, v.61, p.2I24-2I29.

132. Lavietes B.B., Potter J.E.R., Coleman P.S. Stimulation of lymphoma cell growth by cholesterol enrichment.

133. J.Cell Biol., 1976, v.70, p.266a.

134. Leoni S., Luly P., Mangiantine M.T., Spagnpolo. Effect of free fatty acids and cholesterol in vitro on liver plasma membrane-bound enzymes. Experientia, 1982, v.38,p.102-104.

135. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.Z. et al. Protein measurement with the folin phenol reagent. J.Biol.Chem.,195I, v.193, p.265-275.

136. Lubin M. Intracellular potassium and macromolecular synthesis in mammalian cells. Nature, 1967, v.213, p.451.

137. Marique D., Nildebrand J. Isolation and characterization of plasma membranes from human leukemic lymphocytes. -Cancer Res., 1973, v.33, p.2761-2767.

138. McGarry J.D., Foster D.W. Ketogenesis and cholesterol synthesis in normal and neoplastic tissues of the rat. J. Biol.Chem., 1969, v.244, p.4251-4256.

139. Mclntoch F.J. The effect of cholesterol on the structure of phosphatidycholino bilayers. Biochim.et Biophys.Acta, 1978,* 513 , p.43-58.

140. Melchior D.L., Steim J.M. Thermotropic transitions in biomembrane. Ammu.Rev.Biophys.Bioeng., 1976, v.5, p.205-238.

141. Montenegro M.R., Strong J.P. The geographic pathology of atherosclerosis in four broad cause of death groups. Lab. Invest., 1968, v.18, p.503-508.

142. Montfoort A., Boefe W.A.M., Griensuen L.J.L.D. van. Changes in the cholesterol and phospholipid content of mouse spleen after. Rauscher leukemia virus infection. Lipids, 1976, v.II, p.798-801.

143. Moore N.F., Barenholz J.L., Wagner R.R. Microviscosi-ty of togavirus membranes studied by fluorescence depobatiza-tion: influence of envelope proteins and the host cell. J. Virol., 1976, v.19, p.126-132.

144. Mbttonen M., Nuntila M. Relationship of coronary heart disease to malignant disease: an autopsy study. Pathology, 1971, v.3, p.279-283.

145. Muszbik L., Szabo R., Fesilsh L. A highly sensitive method for the measurement of ATPase activity. Analytical biochemistry^, 286-288, 1977.

146. Myant N.B. The biology of cholesterol and related steroids. William Heinemann Medical Books Ltd. London, 1981.

147. Mynder E.L., Shigematsu T. Einvornmental factors of cancer of the colon and rectum. Cancer, 1967, v.29, p.1520-1561.

148. Nakagawa Y., Keizo I., Shoshichi N. Transfer of cholesterol liposomal membranes. Biochim.Biophys.Acta, 1979, v.553, p.307-319.

149. Nic J.S., Feng Y.B., Tan M.Q. In situ electrophoresis of cancer cell membrane components (Proceedings of the IX Intern.liq.cryst.conf .) . Mol.Cryst.Liq.Cryst., 1983, v.98, part A, p.317-324.

150. Ohnishi Т., Suzuki Т., Suzuki J. et al. A comparative2+study of plasma membrane Mg -ATPase activities in normal, regenerating and malignant cells. Biochim.Biophys.Acta, 1982, v.684, p.67-,74.

151. Oldfield E., Champman D. Molecular dynamics of cereb-roside-cholesterol and sphingomyelin-cholesterol interactions.- FEBS Lett., 1972, v.21, p.303-306.

152. Papahadjopoulos D. Cholesterol and cell membrane functions a hypothesis concerning the etiology of atherosclerosis.- J.Theor.Biol., 1974, v.43, p.329-337.

153. Papahadjopoulos D., Cowden H., Kimelberg H. Role of cholesterol in membranes effects of phospholipids-protein interactions, membrane permeability and enzymatic activity. -Biochim.Biophys.Acta, 1973, v.330, p.8-26.

154. Papahadjopoulos D., Nir S., Ohki S. Permeability properties of phospholipid membranes. Effect of cholesterol andtemperature. Biochim.et Biophys.Acta, 1972, v.266, p.561583.

155. Pearce M.L., Dayton S. Incidence of cancer in mens on a diet high in polyunsaturated fat. Lancet i, 1971, p.464-467.

156. Petitiou M., Tuy F., Rosenfeld C. et al. Decreased mic-roviscosity of membrane lipids in leukemic cells: two possible mechanisms. Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1978, v.75, p.2306-23I0.

157. Philippot J.R., Cooper A.G., Wallach D.F.H. Regulation of cholesterol biosynthesis by normal and leukemic (L^C) guinea pig lymphocytes. Proc. Nat .Acad. Scl. USA, 1977/, v.74, p.956-960.

158. Porter K., Prescott D., Frey J. Changes in surface morphology of Chinese hamster ovary cells during the cell cycle. J.Cell Biol., 1973, v.57, p.815-836.

159. Raz A., Barzilai R., Spira G., Inbar H. Oncogenicity and immunogenicity associated with virus-like particles and membrane vesicles isolated from ascites fluid of lymphoma-bea-ring mice. Cancer Res., 1978a, v.38, p.2480-2485.

160. Raz A., Collard J.G., Inbar M. Decrease in 5'-nucleotidase activity ih malignant transformed and normal stimulated cells. Cancer Res., 1978b, v.38, p.1258-1262.

161. Restrepo C., Montenerg<>M.R., Soliberg L.H. Atherosclerosis in persons with selected disease. Lab.Invest., 1968,v.18, p.552-559.

162. Rivnay В., Globerson A., Shinitzky M. Viscosity of lymphocyte plasma membrane in aging mice and its possible relation to serum cholesterol. Mechanisms of Ageing and Development, 1979, v.10, p.71-79.

163. Robison G.A., Nahas G.G., Triner L. Cyclic AMP and cell function. Ann.K.J.Acad.Sci., 1971, v.185, p.555-556.

164. Ryser H.J.-P. Uptake of protein by mammalian cells: an underdeveloped area. Science, 1968, v.159, p.390-396.

165. Sabine J.R. Cholesterol. N.Y., Marcel Dekker, 1977.

166. Schulachev 7.P., Sharaf A.A. Effect of cholesterol on the water permeability of thin lipid membranes. Nature, 1967, v.216, p.717-719.

167. Seiler D., Fiehn W. Effect of cholesterol oxidation on Na,SrATPase activity of erythrocytes membrane. Experien-tia, 1976, v.32, p.849-950.

168. Shah D.O., Schulman J.H. Influence of calcium, cholesterol, and unsaturation on lecithin monolayers. J.Lipid Res., 1967, v.8, p.215-226.

169. Shinitzky M., Inbar M. Difference in microviscosity induced by different cholesterol levels in the surface membrane lipid layer of normal lymphocytes and malignant lymphoma cells. J.Mol.Biol., 1974, v.85, p.603-615.

170. Shinitzky M., Inbar M. Microviscosity parameters and protein mobility in biological membranes. Biochim.Biophys. Acta, 1976, v.433, p.133-149.

171. Silvius J.R., McMillen D.A., Saley N.D. et al. Competition betv/een cholesterol and phosphatidylcholine for the hydrophobic surface of sarcoplasmic reticulum calcium (2+) ATPase. Biochemistry, 1984, v.23, p.538-547.

172. Sinensky M., Minneman K.P., Molinoff P.B. Increased membrane acyl chain ordering activates adenylate cycles. The Journal of Biological Chemistry, 1979, v.254, p.9I35-9I4I.

173. Sinha A.K., Shattil S.J., Colman K.B. Cyclic AMP metabolism in cholesterol-rich platelete. J.Biol.Chem., 1977, v.252, p.3310-3314.

174. Siperstein M.D., Pagan V. Deletion of the cholesterol-negative feed back system in liver tumors. Cancer Res., 1964, v.24, p.1108—III5.

175. Siperstein M.D., Gyde A.M., Morris H.P. Loss of feedback control of hydroxymethyl-glytaryl coenzyme A reductase in hepatomas. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1971, v.68, p.315-317.

176. Steinman R.M., Brodie S.E., Coha Z.A. Membrane flow during pinocytosis: a stereologic analysis. J.Cell Biol., 1976, v.68, p.665-687.

177. Toyoshima S., Osawa T. Cholesterol inhibition of the temporary increase of membrane fluidity of lymphocytes induced by mitogenic lectins. Expl.Cell Res., 1976, v.102, p.438-441.

178. Vahouny G.V., Tomes R., Cassidy M.M. et al. Dietary fibers: V. Binding of bile salts phospholipids and cholesterol from mixed micelles by bile acid sequestransts and dietary fibers. Lipids, 1980, v.15, p.I0I2-I0I8.

179. Van Blitterswizk W.J., Emmelot P., Hilkmann H.R.M. et al. Differences in lipid fluidity among isolated plasma membranes of normal and leukemic lymphocytes and membranes exfoliated from thier all surface. Biochim.Biophys.Acta, 1977, v.467, p.309-320.

180. Vanderkooi J.M., Callis J.B. Pyrene. A probe of lateral diffusion in the hydrophobic region of membranes. Biochemistry, 1974, v.13, p.4000-4006.

181. Van Dijck P.W.M., De Kruyff В., Van Deenen L.L.M. et al. The preference of cholesterol for phosphotidylcholine in mixed phosphatidylcholine-phosphatidylethanolamine bilayers. -Biochim.Biophys.Acta, 1976, v.455, p.516-588.

182. Vlodavsky I., Sachs L. Difference in the cellular cholesterol to phospholipid ratio in normal lymphocytes and lymphocytic leukaemic cells. Nature, 1974, r.250, p.67-68.

183. Warren G.B., Houslay M.D., Metcalfe J.C. et al. Cholesterol is excluded from the phospholipid annulus surroundingan active valcium trasport protein. Nature New Biol., 1975, v.255, p.684-687.

184. V/ebster D. The determination of total and ester cholesterol in who}.e blood, serum or plasma. Clin.Chim.Acta, 1962, v.7, p.277-284.

185. Wiley J.S., Cooper R.A. Inhibition of cation cotrans-port by cholesterol enrichment of human red cell membranes. -Biochim.biophys.Acta, 1975, v.413, p.425-431.

186. Wynder E.L., Sligematsu T. Environmental factors of onacer of the colon and rectum. Cancer, 1967, v.29, p.1520-1561.

187. Zs.-Nagy I. The role of membrane structure and function in cellular aging: a review. Mech.Ageing and Develop., 1979, v.9, p.237-246.