Влияние хитабиса на функциональное состояние организма животных при окислительном стрессе

Гулик, Елена Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние хитабиса на функциональное состояние организма животных при окислительном стрессе
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние хитабиса на функциональное состояние организма животных при окислительном стрессе"

На правах рукописи

ГУЛИК ЕЛЕНА СЕРГЕЕВНА

ВЛИЯНИЕ ХИТАБИСА НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ ПРИ ОКИСЛИТЕЛЬНОМ СТРЕССЕ

03.03.01 - физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 7 ИЮК 2010

Томск-2010

004605235

Работа выполнена в отделе физиологии обособленного структурного подразделения «Научно-исследовательский институт биологии и биофизики Томского государственного университета»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Костеша Николай Яковлевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Замощина Татьяна Алексеевна

доктор биологических наук, профессор Ласукова Татьяна Викторовна

Ведущая организация

НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (г. Томск)

Защита состоится «23» июня 2010 г. в 10-00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.267.10 при ГОУ ВПО «Томский государственный университет» по адресу: 634050, г. Томск, пр. Ленина, 36.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ГОУ ВПО «Томский государственный университет» по адресу: г. Томск, пр. Ленина, 34а.

л У

Автореферат разослан « » мая 2010 г.

Ученый сеЕсретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Е.Ю.Просекина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность и постановка проблемы. Одним из самых важных свойств всех биологических систем является адаптация или способность живой системы приспосабливаться к изменениям среды, отвечать общими, неспецифическими реакциями на разнообразные воздействия. Биологический смысл и характер таких реакций заключаются в мобилизации функциональных резервов организма, необходимых для поддержания гомеостаза и обеспечения относительного динамического постоянства живой системы (Гаркави и др., 1999; Даренская, Короткевич, 2001).

В рамках представлений о молекулярных механизмах неспецифических реакций организма сформировалась концепция усиления свободнорадикального окисления при действии на организм неблагоприятных факторов и ответной реакции антиоксидантной системы, принимающей непосредственное участие в молекулярных механизмах формирования неспецифической резистентности организма (Соколовский, 1984). Умеренная активация свободнорадикальных процессов является частью общего адаптационного механизма, направленного на поддержание клеточного гомеостаза (Меерсон, Пшенникова, 1988). Длительный и чрезмерный по интенсивности стресс резко усиливает свободнорадикальное окисление в клетках (Меерсон, 1981; Журавлев, 1982), в дальнейшем вызывая повреждения мембранных структур, нарушение активности антиоксидантов и ряда мембранных ферментов (Каган и др, 1986; Кулинский , 1999; Зенков и др., 2001). Наиболее выраженная активация реакций свободнорадикального окисления наблюдается при действии ионизирующего излучения (Тарусов, 1963; Эмануэль, 2006), при этом нарушается функционирование системы кроветворения и тонкого кишечника (Даренская, 2004). Многие исследователи для создания модели окислительного стресса использовали радиационное воздействие (Эмануэль, 2006; Корягин и др., 2006; Данилин, 2010).

антибактериального действия. В лаборатории радиационной физиологии НИИ биологии и биофизики Томского государственного университета ранее был исследован водный экстракт пихты сибирской - абисиб, установлены его бактерицидные, противовоспалительные, гемо- и иммуностимулирующие свойства (Костеша и др., 2004). Исходя из данных о повышении биологического действия хитозана при использовании его с растительными экстрактами, сделано предположение о повышении биологической активности хитозана при совместном его использовании с абисибом.

Цель исследования: изучить влияние биологически активных веществ из природного сырья растительного (абисиб) и животного (хитозан) происхождения и их комплекса (хитабис) на функциональное состояние организма животных при окислительном стрессе.

Задачи исследования:

1. Оценить антиоксидантную активность хитозана, абисиба , хитабиса в условиях in vitro.

2. Исследовать влияние абисиба, хитозана, хитабиса на антиоксидантную активность плазмы крови и кишечной слизи мышей in vitro и in vivo.

3. Изучить влияние хитабиса и его компонентов на состояние кроветворной системы и надэпителиапьного слизистого слоя тонкого кишечника животных в условиях окислительного стресса.

4. Оценить влияние хитабиса и его компонентов на интегральные показатели жизнедеятельности экспериментальных животных - выживаемость и среднюю продолжительность жизни - при окислительном стрессе, индуцированном рентгеновским излучением в дозе LDgo/зо-

Научная новизна. Впервые установлено, что:

- в условиях in vitro хитозан проявляет наибольшую антиоксидантную активность по сравнению с хитабисом и абисибом;

- применение хитабиса в условиях in vivo достоверно увеличивает антиоксидантную активность кишечной слизи; антиоксидантная активность плазмы крови при этом не изменяется;

- действие хитабиса на систему кроветворения проявляется в выраженном увеличении количества лейкоцитов в периферической крови и клеточности костного мозга экспериментальных крыс после радиационного воздействия;

- хитабис оказывает выраженное защитное действие, оцениваемое по интегральным показателям: выживаемости и средней продолжительности жизни, при окислительном стрессе (рентгеновское облучение).

Практическая значимость. Особенности изменения антиоксидантной активности кишечной слизи и плазмы крови в опытах in vitro и in vivo при действии исследованных веществ могут служить обоснованием использования такого подхода при исследовании других веществ с антиоксидантной активностью. Результаты работы являются основанием перорального применения хитозана, растворенного в абисибе (хитабис), в качестве средства, повышающего неспецифическую резистентность организма. Сочетанное применение препаратов из хитозана и растительных экстрактов может быть

использовано для коррекции системы кроветворения и желудочно-кишечного тракта в условиях окислительного стресса.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Хитабис и его компоненты - хитозан и абисиб - усиливают защитные свойства кишечной слизи за счет увеличения антиоксидантной активности, что способствует повышению резистентности организма.

2. Действие хнтабиса реализуется путем стимуляции системы кроветворения и формирования более устойчивого к разрушению слизистого геля тонкого кишечника, что обусловливает повышение выживаемости и увеличение средней продолжительности жизни облученных животных.

Апробация результатов. Результаты работы были представлены на XIX съезде физиологического общества им. И.П.Павлова (Санкт-Петербург, 2004); V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 2005); международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Казань, 2006); международной научной конференции «Механизмы индивидуальной адаптации» (Томск, 2006); III всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007); научной конференции с международным участием «Нейрогуморальные механизмы регуляции органов пищеварительной системы в норме и при патологии» (Томск, 2007); II съезде физиологов СНГ (Кишинев, 2008), научной конференции с международным участием «Нейрогуморальные механизмы регуляции висцеральных органов и систем в норме и при патологии» (Томск, 2009); международной конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» (Щелково, Московской обл., 2009).

Публикации. Автором опубликовано 11 работ по теме диссертации, из которых 1 статья в рецензируемом научном журнале, рекомендованном ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка используемой литературы. Работа изложена на 115 страницах машинописного текста, включает 13 таблиц и 10 рисунков. Библиографический список включает 242 источника, из них 62 иностранных.

Вклад автора. Работа выполнена в отделе физиологии НИИ биологии и биофизики ТГУ под научным руководством доктора биологических наук, профессора Н.Я.Костеши, которому диссертант выражает глубокую благодарность. Автор выражает благодарность старшему научному сотруднику ОСП НИИББ ТГУ Заевой О.Б. - за содействие в выполнении работы по исследованию антиоксидантной активности; научному сотруднику ОСП НИИББ ТГУ Борило Г.А. и младшему научному сотруднику ОСП НИИББ ТГУ Булатовой У.А. за техническую помощь; д.б.н., профессору ВНИ'ГИ БП (г. Щелково, Московской обл) Албулову А.И. за предоставленный препарат хитозан-гидрохлорид. Все результаты получены автором самостоятельно.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы исследования. Исследования проведены на беспородных белых мышах-самцах массой 18-22 г и крысах-самцах массой 180-220 г. Общая характеристика материала и распределение животных представлены в таблице 1.

Таблица 1

Общая характеристика материала исследований

№ Задача исследования Животные Кол-во

1. Исследование влияния абисиба, хитозана и хитабиса на антиоксидантную активность плазмы крови и кишечной слизи Мыши 60

о Изучение влияние хитабиса и его Мыши Крысы 59 132

компонентов на состояние кроветворной системы экспериментальных животных

3. Исследование влияние хитабиса и его Крысы 104

компонентов на функциональное состояние

НэСС тонкого кишечника облученных крыс

4. Изучение активности абисиба, хитозана, Мыши 22

хитабиса по интегральным показателям: Крысы 145

выживаемости и средней

продолжительности жизни облученных

животных

В экспериментах использовали водный экстракт пихты сибирской - абисиб (производство «НПЦ БИОЭПЛ», г. Томск), низкомолекулярный водорастворимый хитозан-гидрохлорид (ММ 23 кДа), (ВНИИТИ БП, г. Щелково Московской обл.). Хитозан растворяли либо в воде, либо в абисибе (хитабис) в концентрации 0,1% и вводили перорально по 1 мл через желудочный зонд ежедневно экспериментальным крысам в течение 10 дней после облучения. Абисиб крысам вводили по той же схеме. Интактным и облученным мышам препараты добавляли в пищу. Контрольные животные получали воду при той же форме введения препаратов, как и опытные.

Для создания модели активации свободнорадикалыюго окисления и развития окислительного стресса использовали воздействие однократного общего рентгеновского излучения на аппарате РУМ-17. Условия облучения: напряжение 200 кВ, сила тока 15 мА, фильтры 0,5 мм Си + 1 мм А1, фокусное расстояние 60 см. Мышей облучали в дозе 4,5 Гр, крыс - 5,5 и 7,5 Гр.

Методы исследований.

Антиоксидантную активность (АОА) плазмы крови и кишечной слизи определяли методом ингибирования люминолзависимой хемилюминесценции, модифицированным в лаборатории пищеварения отдела физиологии НИИ

биологии и биофизики ТГУ (Krivova et ai., 2003; Заева, 2007). В проведенных исследованиях для хемилюминесцентного метода был использован следующий состав стандартных растворов: 16 мл дистиллированной воды (подогретой до 38°С); 1 мл 1,25 мМ раствора DPPH (дифенилпикрилгидразил) в этаноле; 0,5 мл 0,01Н раствора люминола в фосфатном буфере (рН=8,0) и 0,4 мл 70% перекиси водорода. Источником супероксид аниона является DPPH.

Исследования проводили на хемилюминометре, работающем в режиме счета фотонов, ФЭУ и в программном обеспечении производства «Ангстрем». Камера для кювет, обеспечивающая термостатирование (37°С) и перемешивание, разработана в отделе фотоники молекул Сибирского физико-технического института. Время экспозиции 0,1 секунды. Благодаря высокой чувствительности прибора для определения антиоксидантной активности было достаточно 50 мкл исследуемой пробы.

Измерения проводили трижды, на максимальном плато свечения контрольного образца, которое наблюдалось в течение 90 секунд. Антиоксидантную активность опытной пробы рассчитывали как среднюю величину из трех замеров.

Количественные величины антиоксидантной активности (АОА) выражали в (фотонах/мл)/сек и вычисляли по формуле:

АОА = (J°- J)-n/t

где: J° - количество регистрируемых фотонов контрольной пробы;

J - количество регистрируемых фотонов опытной пробы;

п - разведение пробы;

t - время экспозиции.

Физиологическое состояние интактных животных, получавших разные препараты, оценивали по внешнему виду, поведению и показателям крови.

О состоянии животных после облучения судили по поведению животных, состоянию шерстного покрова, времени возникновения диареи, выживаемости и средней продолжительности жизни животных. Выживаемость оценивали по 30-суточному тесту; среднюю продолжительность жизни (СПЖ) экспериментальных животных рассчитывали по P.A. Бесядовскому и соавт. (1978). Морфологическую картину периферической крови оценивали по общепринятым методикам определения количества эритроцитов, лейкоцитов, содержания гемоглобина (Ронин, Старобинец, 1989) и клеточности костного мозга.

Для определения клеточности костного мозга тщательно выделяли бедренную кость, удаляли эпифизы, канал промывали фиксированным количеством (4 мл) 5%-ого раствора уксусной кислоты. После извлечения клетки костного мозга диспергировали до однородной взвеси при помощи шприца. Подсчет клеток осуществляли в камере Горяева по общепринятой методике и рассчитывали по формуле с учетом разведения:

X = 2 ■ N • 105, где X - общее количество клеток на бедро,

N - количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева.

Функциональную активность кишечника у интактных и облученных крыс оценивали по состоянию надэпителиалыюго слизистого слоя тонкого кишечника. Определение биохимического состава полимеризованных и деградированных гликопротеинов проводили в соответствии с модифицированной методикой Н.А.Кривовой (1994; 2002). Для характеристики состава структурных гликопротеинов рассчитывали суммарную концентрацию всех моносахаров и парциальное содержание отдельных моносахаров в структурных гликопротеинах.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с применением методов вариационной статистики (Лакин, 1980). Достоверность различий между выборками определяли при помощи критерия Манн-Уитни, используя программу «Statistica 6,0».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Антиоксидантная активность хитозана, абисиба, хитабиса в условиях in vitro

Результаты исследования антиоксидантной активности (АОА) препаратов представлены в таблице 2. Хитозан (0,1%-ный и 0,2%-ный водные растворы) и хитабис (0,2%-ный раствор хитозана в абисибе) обладают антиоксидантной активностью. Увеличение концентрации хитозана в 2 раза в реакционной смеси (с 0,1% до 0,2%) увеличивает АОА препарата в 4,5 раза. Абисиб и хитабис (0,1%-ный раствор хитозана в абисибе) антиоксидантной активностью не обладают (табл. 2).

Таблица 2

Антиоксидантная активность хитозана, хитабиса и абисиба_

препарат АОА (DPPH) х 105[(фотонов/мл)/сек]

Хитозан (0,1%) п = 3 0,139 ±0,019

Хитозан (0,2%) п = 4 0,633 ±0,056

Хитабис (0,1% хитозана в абисибе) п = 3 Не обладает

Хитабис (0,2% хитозана в абисибе) п = 4 0,292 ± 0,060

Абисиб п = 3 Не обладает

Результаты проведенного исследования свидетельствуют о высокой акцепторной активности хитозана, что можно объяснить его структурными особенностями. Антиоксидантная активность хитозана главным образом связана с содержанием активных гидроксильных и аминогрупп в его полимерных цепях (Xie et al., 2001; Je and Kim, 2006). Некоторые исследователи полагают, что механизм взаимодействия свободных радикалов и хитозана заключается в том, что гидроксил и супероксид анионные радикалы могут реагировать с активными атомами водорода хитозана, перехватываться с образованием наиболее стабильного макромолекулярного радикала (Je and Kim, 2006). По классификации К.Е.Кругляковой, Л.Н.Шишкиной (1992), хитозан по

механизму действия может быть отнесен к «мусорщикам» (scavenger of free radicals), которые очищают организм от всех свободных радикалов. Снижение АОА хитабиса может быть связано с тем, что выступающий в качестве растворителя водный экстракт пихты сибирской абисиб не обладает АОА.

В модельных опытах in vitro установлено, что АОА плазмы крови возрастает в 1,5-2 раза после добавления хитозана в плазму (0,1% и 0,2% концентрации соответственно). АОА кишечной слизи при добавлении хитозана достоверно снижается. Внесение абксиба и хитабиса снижает АОА плазмы крови и кишечной слизи (табл. 3).

Таблица 3

Антиоксидантная активность комплексов «плазма крови + препарат» и «слизь кишечника + препарат», смешанных в соотношении (1:1) ___

Исследуемый комплекс АОА х 10'[(фотонов/мл)/сек]

Плазма крови + д. Н20 (контроль) п = 10 44,29±3,59

Плазма крови +хитозан (0,1%) п = 10 67,13±2,97 *

Плазма крови +хитозан (0,2%) и = 10 88,47±2,19 *

Плазма крови +хитабис (0,1%) п =9 37,33 ± 1,37**

Плазма крови +хитабис (0,2%) п =9 12,27 ±4,91*/**

Плазма крови +абисиб п = 6 0**

Слизь кишечника + д.Н20 (контроль) п = 10 13,45±1,23

Слизь кишечника +хитозан (0,1%) п = 10 9,90±1,23*

Слизь кишечника +хитозан (0,2%) п = 10 9,17±0,76*

Слизь кишечника +хитабис (0,1%) п =10 4,37 ±0,81*/**

Слизь кишечника +хитабис (0,2%) п =6 1,34 ±0,80*/**

Слизь кишечника +абисиб п = 6 0**

Примечание: * - статистически значимые отличия показателей от соответствующего контроля (р < 0,05);

** - статистически значимые отличия уровня антиоксидантной активности комплексов от вариантов с соответствующей концентрацией хитозана (р < 0,05).

Таким образом, выраженной АОА в условиях in vitro обладает только хитозан; с ростом концентрации хитозана в комплексе достоверно возрастает АОА плазмы крови.

2. Влияние курсового применения хитабиса и его компонентов на антиоксидантную активность плазмы крови и кишечной слизи

В опытах in vivo не выявлено статистически значимых различий АОА плазмы крови между контрольными и опытными группами, получавшими хитозан, абисиб или хитабис в течение 12 и 33 дней. Через 12 дней приема препаратов отмечено достоверное увеличение АОА слизи кишечника в группе

животных, получавшей хитабис по сравнению с контрольной группой и группами, получавшими абисиб и хитозан. АОА слизи кишечника достоверно увеличилась во всех группах через 33 дня приема препаратов: в группе, получавшей абисиб - в 1,8 раза по сравнению с контролем, в группах, получавших хитозан и хитабис - в 2,7 раза и 2,5 раза, соответственно (табл. 4).

Таблицаi

Антиоксидантная активность плазмы крови и слизи кишечника у интактных _мышей, получавших per os хитозан, хитабис и абисиб___|

Группы животных Плазма крови (АОА х 106) Слизь кишечника (АОА х 106)

12 дней 33 дня 12 дней 33 дня

контроль (вода) 109,43±25,64 п = 8 154,38±19,63 п = 7 10,20±1,66 п = 8 8,08±2,1 п = 7

абисиб 108,71 ±31,88 п = 7 124,68±25,44 п = 8 13,13±1,66 п = 8 14,65±1,96* п = 8

хитозан 128,88±20,95 п = 8 147,10±29,22 п = 8 11,13±2,29 п = 7 22,20±1,98* п = 8

хитабис 89,95±29,22 п = 8 170,30±16,18 п = 6 20,34±3,91*/** п = 8 20,30±3,92* п = 6

Примечание: * - статистически значимые отличия показателей о' соответствующего контроля (р < 0,05);

** - статистически значимое отличие уровня антиоксидантной активности в варианте с хитабисом от вариантов с абисибом и хитозаном (р < 0,05).

Таким образом, АОА кишечной слизи возрастает после курсовоп применения абисиба, хитозана, хитабиса, наибольший эффект проявляв хитабис.

3. Влияние абисиба, хитозана, хитабиса на физиологическое состояние

животных

Проведенные исследования показали, что состояние белых мышей-самцов, которым в корм добавляли в течение 12 или 33 дней хитозан, абисиб или хитабис, не отличалось от контрольных животных, они нормально питались и прибавляли в весе. Шерстный покров у всех животных был ровным, чистым. Показатели периферической крови и клеточности костного мозга экспериментальных мышей достоверно не отличались от соответствующих показателей контрольных животных (табл. 5).

Пероральное введение хитабиса интактным крысам в течение 10 и 28 дней также не отражалось на поведении и внешнем виде животных. Не отмечено разницы в массовых индексах ряда органов (селезенка, тимус, надпочечники),

показателях периферической крови, клеточности костного мозга контрольных и опытных животных (табл. 6).

Таблица 5

Показатели периферической крови и клеточности костного мозга мышей после курсового приема хитозана, абисиба, хитабиса _ ______

серия препарат Кол-во эритроцитов, х1012/л Кол-во лейкоцитов, х109/л Содержание гемоглобина, г/л Клеточность костного мозга, х10°/бедро

12дней приема препаратов Вода (контроль) п = 7 6,12 ±0,43 5,42 ± 0,93 142,0±8,1 16,03 ±1,91

Хитозан п = 8 5,61 ±0,44 3,91 ±0,78 135,0±10,8 15,08 ± 1,91

Абисиб п = 7 6,08±0,85 5,76±1,12 128,0±10,8 13,78±0,97

Хитабис п = 8 6,49±0,47 3,91±0,30 147,0±8,5 13,45±1,09

33 дня приема препаратов Вода (контроль) п = 7 6,44 ± 0,49 4,83 ± 0,57 156,0±12,3 15,14 ± 2,51

Хитозан п = 8 7,52 ± 0,63 3,78 ±0,21 168,0±10,8 17,28 ± 1,54

Абисиб п = 8 6,87±0,29 4,27±0,58 155,0±7,3 15,28±1,42

Хитабис п = 6 7,12±1,34 4,14±0,51 172,0±16,0 15,87±2,32

Примечание: р >0,05 во всех группах.

4. Влияние хитабиса и его компонентов на интегральные показатели жизнедеятельности организма при радиационном воздействии

В предварительных исследованиях на мышах было установлено, что большее влияние на интегральные показатели жизнедеятельности организма оказывает введение в рацион питания мышей хитабиса в течение 12 дней после облучения в дозе 4,5 Гр по сравнению с введением его в рацион за 12 дней до облучения. СПЖ составила 83 и 29,4 суток (17,8 суток - в контроле), а выживаемость - 71,4% и 37,5% (28,5% - в контроле) соответственно. В связи с этим эффектом мы сосредоточили дальнейшие исследования на изучении действия хитабиса и его компонентов: абисиба и хитозана при введении после облучения.

Облучение крыс в дозе 7,5 Гр приводило к 90%-ной смертности, СПЖ животных составляла 15,4 суток. Применение водорастворимого хитозана в 2,5 раза повышало выживаемость и увеличивало СПЖ на 6,4 суток по

Таблица 6

Показатели периферической крови, клеточности костного мозга и массовые индексы некоторых органов крыс

после перорального приема хитабиса

Время ! введени Группа животных Кол-во эритроцитов, х10,2/л Кол-во лейкоцитов, х109/л Содержание гемоглобина, г/л Клеточность костного мозга, х106/бедро Массовый индекс, мг органа/г тела

селезенка тимус надпочечники

10 дней Контроль (вода) п = 7 4,8 ± 0,45 7,86 ±1,06 125,0 ±3,7 142,94 ± 5,34 0,507 ± 0,048 0,163 ± 0,026 0,0159 ± 0,0019

Хитабис п = 7 5,15 ± 0,54 6,51 ±0,36 123,2 ± 2,8 152, 43± 13,66 0,531 ± 0,038 0,132 ± 0,048 0,0120 ± 0,0008

28 дней Контроль (вода) п = 7 5,25 ± 0,25 7,10 ± 1,00 132,0 ±2,0 137,63 ± 10,74 0,480 ± 0,035 0,136 ± 0,007 0,0105 ± 0,0002

Хитабис п = 7 5,86 ± 0,30 5,53 ±0,66 128,0 ±2,0 165,20 ±12,88 0,492 ± 0,021 0,128 ± 0,010 0,0099 ± 0,0005

Примечание: р > 0,05 по всем показателям

сравнению с облученным контролем (табл. 7). Не обнаружено выраженного эффекта абисиба при введении его после облучения, что согласуется с данными Н.Я. Костеши (2001) и З.К. Вымятниной и соавт. (2000) о более выраженном профилактическом действии абисиба по сравнению с его применением после облучения. Введение хитабиса после облучения оказывает достоверное защитное действие: выживаемость крыс увеличилась в 3,5 раза, а СПЖ возросла почти в 2 раза по сравнению с облученным контролем (табл. 7).

Таблица 7

Противолучевая эффективность абисиба, хитозана и хитабиса при облучении крыс в дозе 7,5 Гр____________

Вариант Число Число Выживае- Средняя продолжи-

повтор- живот- мость, тельность

ностей ных % жизни, сутки

Облучение 7.5 Гр (контроль) 5 48 9,8 ±7,8 15,4 ±2,3

Облучение +абисиб 4 26 18,8 ±9,4 16,3 ± 3,6

Облучение + 3 33 25,0 ± 2,9 21,8 ±4,5

хитозан

Облучение + хитабис 4 38 34,0± 3,5* 28,4 ±3,1*

Примечании: * - статистически значимые отличия показателей от облученного контроля (р < 0,05).

Действие хитабиса наиболее отчетливо проявлялось в сроки с 8-х по 19-е сутки после облучения, когда наблюдалась наибольшая смертность у животных контрольной группы.

Животные опытных групп объективно выглядели лучше, чем в контрольной. Симптомы желудочно-кишечного синдрома у животных, получавших хитозан и хитабис, были менее выражены, чем в контрольной группе, что может быть связано с большей сохранностью кишечного эпителия за счет сорбционных свойств хитозана (Тарасенко, 1999). Наиболее выраженная противолучевая активность хитабиса возможно связана с влиянием абисиба на изменение динамики распределения и содержания хитозана в крови и различных органах опытных животных. В исследованиях Б.А. Комарова и соавт. (2001) показана тенденция увеличения содержания хитозана в крови (при его пероральном введении в виде настоя сбора лекарственных растений) на 40% по сравнению с контрольным опытом (введение водных подкисленных растворов). Немаловажную роль при введении хитабиса, вероятно, играет стимуляция восстановительных процессов в системе крови, большая сохранность эпителия и структуры надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника у животных после введения абисиба (Костеша и др., 2004).

5. Изменение состояния кроветворной системы облученных животных под воздействием хитабиса и его компонентов

Облучение крыс в дозе 5,5 Гр (контрольная группа) приводило к выраженным и стойким изменениям картины периферической крови. Резкая лейкопения отмечалась во все сроки наблюдения - на 7, 14, 26 сутки после облучения. Наименьшее содержание гемоглобина и эритроцитов отмечено на 14-е сутки после облучения: количество эритроцитов составило 50%, а содержание гемоглобина - 60% от интактного уровня. В этот же срок отмечено максимальное опустошение костного мозга (клеточность костного мозга в 2 раза ниже, чем соответствующие показатели в интактной группе животных) (табл. 8).

Десятидневный прием абисиба, хитозана, хитабиса после облучения способствовал большей сохранности лейкоцитов периферической крови на 7-е и 14-е сутки после воздействия ионизирующего излучения. Наиболее выраженный эффект отмечен у крыс, получавших хитабис. На 14-е сутки после облучения у животных, получавших хитозан и хитабис, клеточность костного мозга была достоверно выше, чем у соответствующего облученного контроля на 22% и 20%, соответственно. В этот же срок отмечено достоверное увеличение содержания гемоглобина в периферической крови крыс, получавших хитозан (на 33% выше значения облученного контроля). На 26-е сутки после облучения у крыс, получавших абисиб, отмечено достоверное увеличение содержания гемоглобина в периферической крови (на 17% выше значения облученного контроля) (табл. 8).

Таким образом, введение хитозана после облучения увеличивает содержание гемоглобина и количество лейкоцитов в периферической крови, клеточность костного мозга опытных животных по сравнению с контрольными на 14-е сутки после воздействия ионизирующего излучения. Абисиб проявляет гемостимулирующее действие в восстановительный период (26-е сутки после облучения). Противолучевая активность комплексного препарата хитабис наиболее выражена по отношению к белому кровяному ростку и является результатом синергизма его отдельных компонентов.

6. Влияние хитабиса и его компонентов на состояние надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника облученных крыс

Пристеночный слой слизи ЖКТ выполняет многие важные функции: защитную (механическое и химическое воздействие), барьерную, пищеварительную, транспортную. Его структурная основа - полимеризованные гликопротеины (Ггг). Также в составе пристеночного слизистого слоя находятся частично или полностью деградированные Гп, потерявшие свои гелеобразующие функции и состоящие из фрагментов гликопротеинов разного размера.

Защитную функцию надэпителиального слизистого слоя (НэСС) косвенно характеризует суммарное содержание моносахаров структурных

Показатели периферической крови и клеточности костного мозга крыс, облученных в дозе 5,5 Гр, после 10-дневного

введения абисиба, хитозана, хигабиса

Время после облучения Группы Количество эритроцитов, х 10 /л Количество лейкоцитов, х 109/л Содержание гемоглобина, г/л Клеточность костного мозга, х 106/бедро

- Интактный контроль п = 10 6,00 ± 0,22 13,19 ±0,86 142,1 ±6,6 108,75±5,16

7 суток Контроль (облучение) п = 8 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п = 8 Облучение + хитабис п = 8 4,49 + 0,04* 3,81 ±0,11*/** 3,07 ±0,21* /** 4,80 + 0,19* 0,95 + 0,06* 1,29 + 0,04* /** 1,20 ±0,03* /** 1,58 + 0,08* /** 144,0 ±9,0 115,6 + 6,0*/** 116,4 ±6,6* /** 152,9 + 7,8 72,40±3,47* 66,96±6,09* 69,56±3,07* 56,16 ±3,07* /**

14 суток Контроль (облучение) п = 8 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п -- 8 Облучение + хитабис п =8 2,96 ±0,28* 2,64 ± 0,20* 3,70 + 0,25* 3,68 ±0,32* 1,36±0,11* 1,99 ±0,27* /** 2,31 ±0,28* /** 2,77 ±0,32* /** 85,5 ± 10,1* 70,8 + 6,1* 114,1 ±4,7*/** 101,4 ±8,4* 58,70±3,10* 60,76±6,33* 82,50 ±2,61*/** 80,72±9,81 * /**

26 суток Контроль (облучение) п = 7 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п = 8 Облучение + хитабис п = 7 4,40 + 0,07* 3,69 ±0,23* /** 3,61 ±0,15*/** 3,38 + 0,09* /** 4,14 + 0,34* 3,28 + 0,48* 3,09 + 0,16* /** 3,78 +0,33* 130,7 ± 1,7 152,5±5,1** 123,7 ± 1,5* 127,7 ±3,6 117,26±1,79 103,96±1,47** 97,86±3,67** 109,66±5,52**

Примечание: * - статистически значимые отличия показателей от интактного контроля (р<0,05);

** - статистически значимые отличия показателей от соответствующего облученного контроля (р<0,05).

гликопротеинов (Гп) (Тарасенко и др., 1991). Резкое снижение концентрации моносахаров при облучении указывает на ослабление защитной функции слизи во все сроки наблюдения у крыс после облучения в дозе 5,5 Гр. В группе животных, получавших хитабис, отмечено достоверное увеличение суммарного содержания моносахаров на 7-е и 14-е сутки после облучения (табл. 9). На 14-е и 26-е сутки после облучен™ в группе крыс, получавших хитозан, отмечено увеличение суммарного содержания моносахаров (табл. 9).

Облучение приводило к увеличению суммы моносахаров внеструктурных (деградированных) Гп, на 7-е сутки их содержание в контрольной группе увеличивалось более чем в 2 раза (табл. 10). Данные факты свидетельствуют о деструктивных процессах, происходящих в облученном организме. При введении препаратов после облучения сумма моносахаров деградированных Гп на 7-е сутки возрастала в меньшей степени (табл. 10). На 14-е и 26-е сутки после облучения наименьшая сумма моносахаров внеструктурных Гп отмечена в контрольной группе животных. Применение препаратов увеличивало их содержание на 14-е и 26-е сутки после воздействия ионизирующего излучения во всех опытных группах за исключением крыс, получавших абисиб (табл. 10). Исследованиями Н.В. Бочкаревой и соавт. (1999) было показано, что деградированные Гп обладают очень высокой неферментативной антиоксидантной активностью. Можно предположить, что в восстановительный период, когда в группах крыс, которые получали после облучения абисиб, хитозан, хитабис, отмечено достоверное увеличение деградированных Гп, последние выполняют защитную аигиоксидантную функцию, особенно актуальную при облучении.

Для характеристики строения олигосахаридных цепочек структурных Гп рассчитывали парциальное содержание отдельных моносахаров. Известно, что основной функцией структурных Гп НэСС является образование слизистого геля, который образуется за счет нековалентных взаимодействий между гликозилированными участками разных молекул Гп (Slomiany et al., 1985; Sellers et al., 1988). Эти взаимодействия осуществляются благодаря терминально расположенными остатками фукозы и нейраминовой кислоты, а также наличием дисульфидных связей (Кривова и др., 2002). По количеству терминально расположенных фукозы и нейраминовой кислоты, по-видимому, можно судить об устойчивости слизистого геля к разрушению.

Облучение контрольных животных приводит к изменению парциального состава углеводных компонентов олигосахаридных цепочек Гп. Суммарное содержание фукозы и нейраминовой кислоты снижается как в облученном контроле, так и при применении абисиба (табл. 11).

Введение хитозана и хитабиса существенно изменяет соотношение углеводных компонентов слизи по сравнению с соответствующими показателями у облученного контроля. На 7-е сутки после облучения у животных, получавших хитозан, суммарное содержание концевых углеводных компонентов составляет 49,9%, что превышает их содержание в интактном контроле, а на 14 и 26 сутки оно значительно снижается (до 24,6% и 22,3%

Состав структурных гликопротеинов пристеночного слизистого слоя тонкого кишечника крыс,

Срок после облучения группа Гексозамины, мкмоль/мл Галактоза, мкмоль/мл Фукоза, мкмоль/мл НеГфаминовая кислота, мкмоль/мл Сумма моносахаров мкмоль/мл

Интактный контроль п = 10 5,31 ±0,81 23,3 ±4,0 18,1 ± 5,3 0,966 ±0,133 47,7 ± 5,2

7 суток Контроль (облучение) п = 8 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п = 8 Облучение + хнтабис п = 8 5,30±0,30 5,6 ±0,21 4.2 ± 0,25*/** 5.3 ±0,21 14,43±1,11* 14,71± 1,49* 8,38 ± 0,97*/** 16,71 ± 1,63* 7,21±1,18* 5,62 ±0,63* 11,41 ±2,07 9,62 = 1,76* 0,999±0,004 0,866 ±0,100 1,099± 0,230 1,265 ±0,110 27,9= 1,16* 26,8 ± 1,46* 25,1 ±2,01* 32,6 = 1,60*/**

] 4 суток Контроль (облучение) п = 8 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п = 8 Облучение + хитабис п = 8 3,75 ±0,21 4,93 ±0,38** 3,07 ±0,15*/** 3,25 ±0,10* 7,05 ± 0,69* 8,49 ± 1,30* 14,21± 2,38* /** 10,66 ± 1,31*/** 2,77 ±0,23* 3,65 ±0,30* 3,93 ±0,26*/** 4,12 ж 0,16*/** 1,216± 0,180 1,485 ± 0,110 1,698 ±0,180* 1,375 ±0,070 14.8 ±0,50* 18.6 ± 1,20*/** 22.9 = 2,20*/** 19,4 ± 1,30*/**

26 суток Контроль (облучение) п = 7 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п = 8 Облучение + хитабис п = 7 3,39 ±0,15* 3,25 ± 0,14* 3,35 ±0,34* 2,71 ±0,27* 8,38 ± 1,17* 9,27 ± 0,94* 43,0 ±3,32*/** 5,00 ±0,34*/** 4,46 ±0,51* 4,03 ±0,31* 12,42 ±0,58** 4,69 ±0,55* 1,399 ±0,100 1,765 ±0,030*/** 0,902 ±0,100** 1,775 ±0,120*/** 17.6 ± 1,10* 18,3 ± 0,80* 59.7 ±3,20** 14,2 ±0,30*

__1________I______

Примечание: * - статистически значимые отличия от интактного контроля (р < 0,05);

- статистически значимые отличия от соответствующего облученного контроля (р < 0,05).

Таблица 10

Содержание углеводных компонентов во внеструктурных гликопротеинах надэпителиального слизистого слоя крыс,

облученных в дозе 5,5 Гр

Срок после облучения группа Гексозамины, мкмоль/мл Галактоза, мкмоль/мл Фукоза мкмоль/мл Нейраминовая кислота, мкмоль/мл Сумма моносахаров, мкмоль/мл

Интакткый контроль п = 10 0,319± 0,036 1,48 ±0,33 0,67 ±0,14 0,126 ±0,026 2,58 ±0,31

7 суток Контроль (облучение) п = 8 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п = 8 Облучение + хитабис п = 8 1,311 ±0,063* 1.234 ±0,180* 1,175 ± 0,121* 1,211 ±0,165* 3,719 ±0,158* 2,792 ±0,247*/** 3,458 ±0,188* 2,775 ±0,259*/** 2,32 ±0,12* 1,57 ±0,25*/** 1,90 ±0,09*/** 0,91 ±0,19** 0,584 ±0,075* 0,474 ± 0,050* 0,668 ±0,065* 0,328 ±0,048*/** 7,93 ±0,14* 6,07 ± 0,24* 7,20 ±0,18* 5,22 ±0,25*/**

14 суток Контроль (облучение) п = 8 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п = 8 Облучение + хитабис п = 8 1,013 ±0,059* 1,365 ±0,067* /** 1,370 ±0,144*/** 1,089 ±0,140* 2,858 ±0,620 2,614 ±0,360 5,345 ± 0,800** 9,343 ± 0,330** 1,22 ±0,10 1,00 ±0,08 4,25 ±0,82** 1,12± 0,21 0,401± 0,045* 0,691 ±0,047*/** 0,556 ±0,036*/** 0,455 ±0,053* 5,49 г 0,58 5,67 ±0,30* 11,52 ±0,78*/** 10,92 ±0,29*/**

26 суток Контроль (облучение) п = 7 Облучение + абисиб п = 8 Облучение + хитозан п = 8 Облучение + хитабис п = 7 1,370 ±0,105* 1,546 ±0,050* 1,587 ±0,105* 1,990 ±0,164*/** 0,844 ± 0,003 4,218± 0,930** 35,48 ±6,130** 3,447± 0,380** I,30 ±0,09 4,22± 0,90 II,31 ±0,96** 2,23 ±0,20** 0,375 ± 0,040* 0,604 ±0,020*/** 0,791± 0,046*/** 0,578 ±0,056*/** 3,89 ± 0,09 10,59 ±0,91*/** 49,17 ± 5,17*/** 8,25 ±0,33*/**

Примечание: * - статистически значимые отличия показателей от интактного контроля (р <0,05);

** - статистически значимые отличия от соответствующего облученного контроля (р <0,05).

соответственно) (табл. 11). Такая динамика, вероятно, связана с тем, что действие хитозана проявлялось только в период введения препарата (10 суток). Этот эффект, вероятно, связан с сорбционными свойствами хитозана и малым его проникновением из желудочно-кишечного тракта в кровоток.

Таблица 11

Содержание углеводных компонентов (%) структурных гликопротеинов надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника у крыс, получавших абисиб, хитозан и хитабис в течение 10 дней после облучения в дозе 5,5 Гр

Гексоз-амины Галактоза Фуко-за Нейрами- новая кислота Сумма фукоза+ нейра- мин. к-та

Интактный контроль 11,0 49,0 38,0 2,0 40,0

Облученный контроль 7 суток 19,0 51,7 25,8 Т,5 29,3

14 суток 25,4 47,7 18,7 8,2 26,9

26 суток 19,3 47,5 25,3 7,9 33,2

Облучение + абисиб 7 суток 21,0 55,0 21,0 3,0 24,0

14 суток 26,6 45,7 19,7 8,0 27,7

26 суток 17,8 50,6 22,0 9,6 31,6

Облучение + хитозан 7 суток 16,7 33,4 45,5 4,4 49,9

14 суток 13,4 62,0 17,2 7,4 24,6

26 суток 5,6 72,0 20,8 1,5 22,3

Облучение + хитабис 7 суток 16,0 51,0 29,0 4,0 33,0

14 суток 16,8 55,0 21,2 7,0 28,2

26 суток 19,0 35,0 "33,0 12,5 45,5

При введении хитабиса суммарное содержание концевых углеводных компонентов во все сроки наблюдения выше, чем соответствующие показатели в облученном контроле, а на 26 сутки превышает соответствующие показатели интактного контроля (табл. 11). Полученные данные свидетельствуют о пролонгированном действии хитабиса, что вероятно связано с сорбционными, гемо- и иммуностимулирующими эффектами хитозана и абисиба, возможным увеличением проникающей способности хитабиса и большей степенью его накопления в различных органах по сравнению с раздельным применением компонентов препарата.

Таким образом, на модели окислительного стресса показана эффективность хитабиса и его компонентов как корректоров функционального состояния критических систем организма при радиационном воздействии.

Совокупность литературных и собственных данных позволяет предположить, что защитное действие хитабиса и его компонентов является проявлением ряда механизмов: один из них - их антиоксидантная активность.

Кроме того, можно говорить о стабилизирующем влиянии хитабиса и его компонентов на определенные звенья гемопоэза и нормализующем воздействии на НэСС тонкого кишечника.

Наиболее выраженная эффективность хитабиса может быть связана с влиянием абисиба на изменение динамики распределения и содержания хитозана в крови и различных органах опытных животных. Гетерогенность комплексного препарата (хитабис) дает синергизм защитного действия - гемо-и иммуностимулирующее действие абисиба усиливается сочетанием с сорбционными свойствами хитозана.

Таким образом, в результате проведенного исследования можно сделать заключение о выраженном защитном действии комплексного препарата хитабис в отношении свободнорадикальных процессов.

ВЫВОДЫ

1. Антиоксидантная активность хитабиса и его компонентов in vitro зависит от концентрации хитозана в реакционной среде и возрастает в ряду абисиб хитабис —► хитозан.

2. Пероралыюе введение хитабиса иктактным мышам в течение 12 дней достоверно увеличивает антиоксидантную активность кишечной слизи по сравнению с контрольной группой и группами, получавшими абисиб и хитозан; при пролонгированном введении абисиба, хитозана, хитабиса в течение 33 дней антиоксидантная активность кишечной слизи достоверно увеличивается во всех группах по сравнению с контрольными животными.

3. Действие хитабиса на систему кроветворения в условиях активации свободнорадикальных процессов, индуцированных ионизирующим излучением, проявляется в смягчении выраженности лейкопении и большей сохранности клеточности костного мозга по сравнению с облученным контролем.

4. Применение хитабиса способствует формированию более устойчивого к разрушению слизистого геля тонкого кишечника в условиях окислительного стресса: увеличивается суммарное содержание терминальных углеводных компонентов - фукозы и нейраминовой кислоты - в структурных гликопротеинах слизи.

5. Применение хитабиса стабилизирует функциональное состояние организма животных, что проявляется при окислительном стрессе, индуцированном рентгеновским излучением, в увеличении выживаемости экспериментальных крыс на 24% и средней продолжительности жизни на 13 суток относительно облученного контроля.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Работа, опубликованная в рецензируемом научном журнале, включенном в Перечень изданий, рекомендованных ВАК:

1.Гулик Е.С., Костеша Н.Я. Противолучевая активность хитозана, растворенного в экстракте пихты сибирской // Радиационная биология. Радиоэкология. - 2004. - Т. 44, вып. 5. - С. 563-565.

Работы, опубликованные в других изданиях:

2. Гулик Е.С., Костеша Н.Я. Противолучевое действие хитабиса // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. Тезисы докладов XIX Съезда физиологического общества им. И.П.Павлова. - СПб: Наука - 2004. -Т. 90,№8.-С. 273.

3. Костеша Н.Я., Гулнк Е.С., Боршто Г.А. Противолучевое действие комплексного препарата хитабис II Вестник Томского государственного университета. Бюллетень оперативной научной информации «Современные исследования в биологии». - 2004. 30. - С. 78-83.

4. Гулик Е.С., Иванова Л.А., Борило Г.А., Костеша Н.Я. Влияние хитабиса на морфологические показатели тонкого кишечника облученных крыс // Бюллетень сибирской медицины. Приложение 1: Тезисы докладов V Сибирского физиологического общества. - 2005.- Т.4.-С. 125-126.

5. Костеша Н.Я., Иванова Л.А., Гулнк Е.С. Влияние хитабиса на структуру тонкого кишечника облученных крыс // Вестник Томского государственного университета. Приложение: Материалы международных, всероссийских, региональных научных конференций, семинаров, симпозиумов, школ, проводимых в ТГУ. - 2006. - № 21. - С. 72-73.

6. Костеша Н.Я., Гулик Е.С., Албулов А.И., Шинкарев С.М., Кузнецов П.А., Банникова Г.А, Авдеева Т.А. Противолучевая активность препаратов хитозана с растительными экстрактами // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы восьмой международной конференции. - Казань. - 2006. - С. 178-181.

7. Гулик Е.С., Борило Г.А., Костеша Н.Я. Состояние надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника облученных крыс, леченных хитозаном // Нейрогуморальные механизмы регуляции органов пищеварительной системы в норме и при патологии. Материалы научной конференции с международным участием. - Томск: СибГМУ. - 2007. - С. 99-102.

8. Гулнк Е.С., Заева О.Б., Борило Г.А., Костеша Н.Я. Антиоксидантная активность хитозана in vitro и in vivo // Сибирский консилиум. Материалы третьей Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов». - Новосибирск. - 2007. - № 7 (62). - С. 182.

9. Костеша Н.Я., Гулик Е.С., Борило Г.А., Заева О.Б. Влияние хитабиса на антиоксидантную активность плазмы крови и кишечной слизи крыс // 2-й съезд физиологов СНГ. - Кишинев: HTJI. - 2008. - С. 161.

10. Гулик Е.С., Костеша НЯ., Борило Г.А. Влияние хитабиса на функциональное состояние тонкого кишечника облученных крыс // Нейрогуморальные механизмы регуляции висцеральных органов и систем в норме и при патологии. Материалы научной конференции с международным участием. - Томск: СибГМУ. - 2009. - С. 58-60.

11. Гулик Е.С., Костеша Н.Я., Борило Г.А., Фролова М.А., Албулов А.И. Влияние хитозана и хитабиса на состояние надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. Материалы международной научно-практической конференции. - Щелково. - 2009. - С. 481-484.

Тираж 100 экз. Отпечатано в ООО «Позитив-НБ» 634050 г. Томск, пр. Ленина 34а

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гулик, Елена Сергеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Неспецифическая резистентность и ее значение для формирования реакций организма на воздействие различных факторов

1.2. Свободнорадикальные процессы в организме животных в норме и при различных патологиях

1.2.1. Свободнорадикальное окисление - основа метаболических процессов в норме

1.2.2. Окислительный стресс

1.2.3. Особенности функциональной активности организма при окислительном стрессе, индуцированном радиационным воздействием

1.3. Физиологические особенности действия биологически активных веществ природного происхождения

1.3.1. Хитозан и особенности его биологического действия

1.3.2. Экстракт пихты сибирской (абисиб) - средство, повышающее резистентность организма

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика материала

2.2. Методы исследований

2.2.1. Определение антиоксидантной активности плазмы крови и кишечной слизи

2.2.2. Характеристика модели окислительного стресса

2.2.3. Оценка физиологического состояния животных

2.2.4. Определение клеточности костного мозга

2.2.5. Методы оценки состояния надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника

2.2.6. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Влияние хитабиса и его компонентов на антиоксидантную активность плазмы крови и слизи тонкой кишки

3.1.1. Антиоксидантная активность хитабиса и его компонентов в условиях in vitro

3.1.2. Антиоксидантная активность плазмы крови и кишечной слизи после курсового приема абисиба, хитозана, хитабиса

3.2. Модификация функционального состояния организма белых мышей и крыс веществами природного происхождения

3.2.1. Влияние абисиба, хитозана, хитабиса на физиологическое состояние животных

3.2.2. Оценка функционального состояния организма животных на модели окислительного стресса 56 3.2.2.1. Влияние хитабиса и его компонентов на интегральные показатели жизнедеятельности организма при радиационном воздействии 56 3.2.2.2 Изменение состояния кроветворной системы облученных животных в условиях применения хитабиса и его компонентов 62 3.2.2.3. Влияние хитабиса и его компонентов на состояние надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника облученных крыс 69 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 84 ВЫВОДЫ 91 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АБИСИБ

ВНИТИ БП

Гп ДНК ЖКТ ММ

НэСС ОЛБ пнжк пол

РАН РНК сд спж

CP СРО

ХИТАБИС DPPH

- водный экстракт пихты сибирской;

- антиоксиданты;

- антиоксидантная активность;

- антиоксидантная защита;

- активные формы кислорода;

- Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности;

- гликопротеины;

- дезоксирибонуклеиновая кислота;

- желудочно-кишечный тракт;

- молекулярная масса;

- ненасыщенные жирные кислоты;

- нуклеиновые кислоты;

- надэпителиальный слизистый слой;

- острая лучевая болезнь;

- полиненасыщенные жирные кислоты;

- перекисное окисление липидов;

- российская академия наук;

- рибонуклеиновая кислота;

- степень деацетилирования;

- средняя продолжительность жизни;

- свободные радикалы;

- свободнорадикальное окисление;

- хитозан, растворенный в абисибе;

- дифенилпикрилгидразил.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние хитабиса на функциональное состояние организма животных при окислительном стрессе"

Актуальность. Одним из самых важных свойств всех биологических систем является адаптация или способность живой системы приспосабливаться к изменениям среды, отвечать общими, неспецифическими реакциями на разнообразные воздействия. Биологический смысл и характер таких реакций заключаются в мобилизации функциональных резервов организма, необходимых для поддержания гомеостаза и обеспечения относительного динамического постоянства живой системы (Гаркави и др., 1999; Даренская, Короткевич, 2001).

В рамках представлений о молекулярных механизмах неспецифических реакций организма сформировалась концепция усиления свободнорадикального окисления при действии на организм неблагоприятных факторов и ответной реакции антиоксидантной системы, принимающей непосредственное участие в молекулярных механизмах формирования неспецифической резистентности организма (Соколовский, 1984). Умеренная активация свободнорадикальных процессов является частью общего адаптационного механизма, направленного на поддержание клеточного гомеостаза (Меерсон, Пшенникова, 1988). Длительный и чрезмерный по интенсивности стресс резко усиливает свободнорадикальное окисление в клетках (Меерсон, 1981; Журавлев, 1982), в дальнейшем вызывая повреждения мембранных структур, нарушение активности антиоксидантов и ряда мембранных ферментов (Каган и др, 1986; Кулинский , 1999; Зенков и др., 2001). Наиболее выраженная активация реакций свободнорадикального окисления наблюдается при действии ионизирующего излучения (Тарусов, 1963; Эмануэль, 2006), при этом нарушается функционирование быстро обновляющихся тканей, в частности системы кроветворения и желудочно-кишечного тракта (Даренская, 2004). Многие исследователи для создания модели окислительного стресса использовали радиационное воздействие (Эмануэль, 2006; Корягин и др., 2006; Данилин, 2010).

В связи с этим вызывает интерес применение веществ с антиоксидантными свойствами, которые повышают устойчивость организма к действию различных неблагоприятных факторов среды. Биологически активные вещества природного происхождения имеют широкий спектр действия, гораздо менее токсичны по сравнению с химическими веществами (Барабой, 1984; Алехина и др., 2003; Овсянникова и др., 2007). В последние годы ведутся интенсивные исследования хитозана (сополимера D-глюкозамина и N-aneTiw-D-глюкозамина), выделенного из панциря крабовых, установлены его сорбционные, детоксицирующие, антимикробные, антиоксидантные свойства (Комаров и др., 2001; Червинец и др., 2001; Xie et al., 2001; Feng et al., 2007; Sun et al., 2007; 2008), обнаружено выраженное противолучевое действие этого препарата при внутривенном введении как до, так и после облучения (Андрианова, 2001). Имеются данные об изменении динамики проникновения хитозана в ткани и органы при его введении в настоях фитосборов (Комаров и др., 2001), что усиливает адсорбционные, хелато- и комплексообразующие свойства хитозана. В лаборатории радиационной физиологии НИИ биологии и биофизики Томского государственного университета ранее был исследован водный экстракт пихты сибирской - абисиб, установлены его бактерицидные, противовоспалительные, гемо- и иммуностимулирующие свойства (Костеша и др., 2004). Исходя из данных о повышении биологического действия хитозана при использовании его с растительными экстрактами, сделано предположение о повышении биологической активности хитозана при совместном его использовании с абисибом.

Задачи исследования:

1. Оценить антиоксидантную активность хитозана, абисиба, хитабиса в условиях in vitro.

3. Изучить влияние хитабиса и его компонентов на состояние кроветворной системы и надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника животных в условиях окислительного стресса.

Научная новизна. Впервые установлено, что:

- хитабис оказывает выраженное защитное действие, оцениваемое по интегральным показателям - выживаемости и средней продолжительности жизни - при окислительном стрессе (рентгеновское облучение).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Хитабис и его компоненты - хитозан и абисиб — усиливают защитные свойства кишечной слизи за счет увеличения антиоксидантной активности, что способствует повышению резистентности организма.

2. Действие хитабиса реализуется путем стимуляции системы кроветворения и формирования более устойчивого к разрушению слизистого геля, что обусловливает повышение выживаемости и увеличение средней продолжительности жизни облученных животных.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Гулик, Елена Сергеевна

выводы

1. Антиоксидантная активность хитабиса и его компонентов in vitro зависит от концентрации хитозана в реакционной среде и возрастает в ряду абисиб —> хитабис —> хитозан.

2. Пероральное введение хитабиса в течение 12 дней достоверно увеличивает антиоксидантную активность кишечной слизи по сравнению с контрольной группой и группами, получавшими абисиб и хитозан; при пролонгированном введении абисиба, хитозана, хитабиса в течение 33 дней антиоксидантная активность кишечной слизи достоверно увеличивается во всех группах по сравнению с контрольными животными.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди множества подходов к повышению резистентности организма в условиях воздействия на него различных факторов окружающей среды особое место отводится оценке системы антиоксидантной защиты организма, противодействующей развитию окислительного стресса. Для коррекции нарушений, связанных с усилением реакций свободнорадикального окисления, широкое применение находят вещества природного происхождения. Преимуществом таких препаратов является возможность перорального применения, низкая токсичность, широта биологической активности. Большое число веществ природного происхождения обладают выраженной антиоксидантной активностью. Среди них хорошо известны фенольные антиоксиданты (эвгенол, пирокатехин, производные галловой кислоты), флавоноиды (рутин, кверцетин), витамин Е (токоферол), коэнзим Q (убихинон), каротиноиды, аскорбиновая кислота (Зенков и др., 2001).

В последние годы интенсивно исследуются свойства хитозана — полимера, получаемого деацетилированием хитина ракообразных. Хитозан обладает сорбционными, детоксицирующими, антимикробными свойствами (Комаров и др., 2001; Червинец и др., 2001а, б). Особый интерес представляют антиоксидантные свойства хитозана и его производных. Многочисленными исследованиями показана высокая антиоксидантная активность хитозана и его производных in vitro (Xie et al., 2001; Jea, Kim, 2006; Feng et al., 2007; Sun et al, 2007; 2008; Chen et al., 2009). Антиоксидантная активность хитозана и его производных главным образом связана с содержанием активных гидроксильных и аминогрупп в полимерных цепях (Xie et al., 2001; Je and Kim, 2006). Кроме того, хитозан и его производные проявляют высокую физиологическую активность при ряде состояний оксидативного стресса: диабете (Yuan et al., 2009), злокачественном росте (Murata et al., 1990; Sato et al., 1996; Московцева, 2006), лучевом поражении (Андрианова, 2001; Nishimura et.al, 2003; Ильин Л.А. и др., 2004; Албулов, 2004). Эффективность действия хитозана в организме при пероральном введении во многом зависит от его доступности гидролитическим ферментам. Необходимо учитывать, что из просвета кишечника в кровь могут попадать только моносахариды. Олигомеры и полимеры практически не всасываются в кровь. Димеры и олигомеры подвергаются ферментативному расщеплению до мономеров в стенке тонкой кишки и только после этого всасываются в кровь. В слизистой кишечника имеется соответствующий фермент, расщепляющий хитиновые олигосахариды (ТМ-ацетил-О-глюкозаминидаза). Существенным ограничением в этом процессе является то, что названные субстраты должны быть прогидролизованы в тонкой кишке, на что уходит не более 4-5 ч. Углеводы, попадающие в толстую кишку (а фактически уже в нижнем отделе тонкой кишки), подвергаются одновременно гидролизу до мономера и ферментации до жирных кислот. В этих отделах кишечника в кровь углеводы уже не попадают. Другими словами, для использования продуктов переработки хитина в качестве источника глюкозамина они должны либо представлять глюкозамин (ацетилглюкозамин), либо - быстро и легко гидролизуемые до ацетилглюкозамина соединения (Максимов, Родоман, 2001). Известно, что хитозан растворяется в разбавленных кислотах (Петрович и др., 2008).

В НИИ биологии и биофизики Томского государственного университета ранее был исследован водный экстракт пихты сибирской - абисиб, установлены его бактерицидные, противовоспалительные, гемо- и иммуностимулирующие свойства. Обнаружено противолучевое действие абисиба, наиболее выраженное при курсовом профилактическом применении (Костеша, 2001). Абисиб имеет кислую реакцию (рН ~ 2,6-4,6), поэтому мы предположили, что растворение хитозана в абисибе (хитабис) должно привести к частичному расщеплению хитозана до мономеров, и, следовательно, должно способствовать лучшему его проникновению в кровь и большей эффективности воздействия на организм.

В нормальных физиологических условиях в организме постоянно образуются свободные радикалы и АФК, которые участвуют в регуляции тонуса сосудов (Rubanyi, 1988), клеточной пролиферации (Allen, Balin, 1989), синтеза простагландинов (Cross, Jones, 1991), в бактерицидном действии фагоцитов (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989), в регуляции метаболических процессов в качестве внутриклеточных мессенджеров (Cross, Jones, 1991; Fliss, Menard, 1992).

В нормальном состоянии функционирования организма скорость реакций пероксидации липидов клеточных мембран и липопротеидов относительно мала, что обусловлено низким уровнем образования радикалов-инициаторов и действием сбалансированной системы антиоксидантной защиты. Однако в процессе возникновения и развития воспалительных заболеваний это равновесие нарушается, резко возрастает продукция радикалов-инициаторов и наблюдается инактивация системы антиоксидантной защиты. Подобные нарушения происходят после облучения организма. Эти изменения неспецифичны для ионизирующих излучений и известны под названием оксидативного стресса (Кудряшов, 2004).

В связи с этим, мы исследовали антиоксидантные свойства хитабиса и его компонентов и особенности их защитного действия в условиях активации свободнорадикальных процессов, индуцированных ионизирующим излучением.

При изучении АОА исследуемых препаратов, установлено, что хитозан в условиях in vitro обладает АОА, которая увеличивается с возрастанием препарата в реакционной смеси. Хитабис обладает меньшей АОА, которая проявляется лишь при больших концентрациях хитозана в абисибе. В условиях in vitro комплекс хитозана с плазмой крови также увеличивает АОА плазмы (увеличение носит дозозависимый характер), но немного снижает АОА кишечной слизи (не зависит от концентрации хитозана в растворе). Комплексы хитабиса и абисиба с плазмой крови и кишечной слизью снижают АОА этих субстратов.

В условиях in vivo (прием абисиба, хитозана и хитабиса с пищей в течение 12 и 33 дней) препараты не изменяют АОА плазмы крови, но достоверно увеличивают АОА слизи кишечника, что может быть связано с отсутствием всасывания этих веществ из ЖКТ в кровоток. Выраженность эффекта зависит от продолжительности введения препаратов. Так хитабис увеличивает в 2 раза АОА слизи уже через 12 дней приема препарата, через 33 дня эффект сохраняется. Хитозан и абисиб увеличивают АОА слизи только через 33 дня приема. Таким образом, в условиях in vitro наибольшей АОА обладает хитозан, тогда как в условиях in vivo наиболее эффективен хитабис.

По-видимому, антиоксидантные свойства хитозана связаны с его антирадикальной активностью, т.е. способностью непосредственно связывать свободные радикалы, образующиеся в организме из молекулярного кислорода, а также при перекисном окислении липидов, в частности гидроксильный (ОН") и пероксильный (ROO') радикалы. В механизме же антиоксидантного действия хитабиса, по-видимому, играет роль как его антирадикальная активность, так и его воздействие на ферментные системы антиоксидантной защиты.

Под действием радиации активируется свободнорадикальное окисление, нарушается деятельность быстро обновляющихся тканей, в частности системы кроветворения и желудочно-кишечного тракта, выработка антиоксидантных факторов этими органами подавляется, и устойчивость экспериментальных животных резко снижается (Оганесян и др., 1990). Поэтому введение веществ, которые могут выступать перехватчиками образующихся под действием ионизирующего излучения радикалов, должно способствовать снижению поражающего действия радиации на ЖКТ, и как следствие - повышать выживаемость облученных животных.

При исследовании влияния хитабиса и его компонентов на интегральные показатели установлено, что облучение крыс в дозе 7,5 Гр приводило к 90%-ной смертности, СПЖ животных составляла 15,4 суток. Абисиб проявляет слабое влияние на эти показатели. Применение водорастворимого хитозана в

2,5 раза повышало выживаемость и увеличивало СПЖ на 6,4 суток по сравнению с облученным контролем, что может быть связано с большей сохранностью кишечного эпителия за счет сорбционных свойств хитозана. Введение хитабиса после облучения оказывает достоверное противолучевое действие: выживаемость крыс увеличилась в 3,5 раза, а СПЖ возросла почти в 2 раза по сравнению с облученным контролем. Таким образом, хитабис оказывает наибольшее радиопротекторное действие, оцениваемое по интегральным показателям.

Исследования физиологических особенностей действия абисиба, хитозана и хитабиса по показателям наиболее радиочувствительных систем организма: кроветворения и желудочно-кишечного тракта на модели окислительного стресса (облучение крыс в дозе 5.5 Гр) показали их эффективность как корректоров функциональных изменений.

Применение хитозана оказывает противолучевое действие, проявляющееся в увеличении содержания гемоглобина, клеточности костного мозга и количества лейкоцитов опытных крыс по сравнению с контрольными животными. Абисиб проявляет гемостимулирующее действие в восстановительный период. Наши данные согласуются с результатами, полученными З.К.Вымятниной и соавт. (2000 а), которые впервые выявили гемостимулирующее действие абисиба у облученных животных. Авторы связывают данный эффект с более интенсивно протекающими процессами регенерации в костном мозге, что в свою очередь связано с более высокой функциональной активностью щитовидной железы, играющей важную роль в постлучевом восстановлении организма. Противолучевая активность комплексного препарата хитабис наиболее выражена по отношению к белому кровяному ростку и является результатом синергизма его отдельных компонентов.

Облучение крыс в дозе 5,5 Гр приводит к морфофункциональным нарушениям состояния тонкого кишечника, что проявляется в увеличении объема отмываемой слизи, снижении суммарного содержания моносахаров в структурных Гп и увеличении суммарного содержания моносахаров в деградированных Гп. Отмечено снижение структурных Гп в общем пуле Гп НэСС, изменение процентного соотношения моносахаров в углеводных цепочках структурных Гп. Данные факты свидетельствуют о деструктивных процессах, происходящих в облученном организме и снижении защитной функции слизи.

Введение хитозана крысам после облучения способствует повышению защитных свойств НэСС тонкого кишечника путем формирования более устойчивого к разрушению слизистого геля тонкого кишечника на 7-е сутки после облучения и увеличения суммарного содержания структурных гликопротеинов в разгар лучевой болезни и в восстановительный период.

Хитозан, обладая высокой сорбционной способностью (Погорельская и др., 2000), может связывать токсины, образующиеся в облученном организме, таким образом, обрывая поражающее действие радиотоксинов на эпителий тонкого кишечника, что препятствует оголению слизистого слоя ЖКТ.

При введении хитабиса облученным крысам формируется более устойчивый к разрушению слизистый гель тонкого кишечника во все сроки наблюдения по сравнению с облученными животными. Кроме того, увеличивается суммарное содержание структурных гликопротеинов. Все это свидетельствует о повышении защитных свойств НэСС тонкого кишечника, т.е. о более раннем восстановлении нарушенных облучением функций ЖКТ после курсового применения хитабиса.

Совокупность литературных и собственных данных позволяет предположить, что противолучевой эффект хитабиса и его компонентов является системным проявлением ряда механизмов. Одним из возможных механизмов защитного действия хитабиса и его компонентов является их антиоксидантная активность. По-видимому, можно говорить об антистрессорном (адаптогенном) действии хитабиса и его компонентов, включающем стабилизирующее влияние на определенные звенья гемопоэза и нормализующее воздействие на НэСС тонкого кишечника.

Наиболее выраженная эффективность хитабиса может быть связана с влиянием абисиба на изменение динамики распределения и содержания хитозана в крови и различных органах опытных животных. Гетерогенность комплексного препарата (хитабис) дает синергизм противолучевого действия -гемо- и иммуностимулирующее действие абисиба усиливается сочетанием с сорбционными свойствами хитозана.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гулик, Елена Сергеевна, Томск

1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные средства. М.: Наука, 1985. 230 с.

2. Айзенман Б.Е. Фитонциды и антибиотики высших растений. Киев: Наукова думка, 1984. 277 с.

3. Албулов А.И. Разработка промышленных технологий производства сорбентов и биологически активных препаратов из гидробионтов для ветеринарии и других отраслей народного хозяйства: Автореф. дис. .д-ра биол. наук. Щелково, 2004. 59 с.

4. Андрианова И.Е. Противолучевые свойства хитозана // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. 6-й междунар. конф. СПб., 2001. С.126-127.

5. Андрианова И.Е., Малинина Т.Г., Глушков В.А., Любимов Ю.И. Люплатекс и его противолучевые свойства // Радиац. биология. Радиоэкология. 2004. Т. 44, №4. С. 412-414.

6. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. СПб.: Наука, 2003. 468 с.

7. Анохин П.К. Теория функциональных систем. М.: Наука, 1980. 460 с.

8. Афанасьев И.Б. Свободные кислородные радикалы и процессы жизнедеятельности // Кислородные радикалы в химии и биологии: Сб. научн. тр. Минск: Наука и техника, 1984. С. 13-29.

9. Баевский P.M. Прогнозирование состояний на грани нормы и патологии. М.: Медицина, 1979. 298 с.

10. Баевский P.M. Принципы исследования степени адаптации организма в условиях длительного космического полета // Нервные и эндокринные механизмы стресса. Кишинев: Штиница, 1980 а. С. 24-30.

11. Баевский P.M. Проблема прогнозирования состояния здоровья организма в процессе его адаптации к различным действиям // Нервные и эндокринные механизмы стресса. Кишинев: Штиница, 1980 б. С. 30-61.

12. Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Наука, 1984. 160 с.

13. Барабой В.А., Орел В.Э., Карнаух И.М. Перекисное окисление и радиация. Киев: Наукова думка, 1991. 256 с.

14. Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г., Кудряшов Ю.Б. Перекисное окисление и стресс. СПб.: Наука, 1992. 148 с.

15. Барабой В.А. Стресс: природа, биологическая роль, механизмы, исходы. Киев: Фитосоциоцентр, 2006. 424 с.

16. Белоусова О.И., Горизонтов П.Д., Федотова М.И. Радиация и система крови. М.: Атомиздат, 1979. 128 с.

17. Бесядовский Р.А., Иванов К.В., Козюра А.К. Справочное руководство для радиобиологов. М.: Атомиздат, 1978. 128 с.

18. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. / Под ред. А.И.Журавлева. М.: Наука, 1982. 240 с.

19. Блажей А., Шутый JI. Фенольные соединения растительного происхождения. М., 1977. 239 с.

20. Блинков А.И. Лекарственные растения в клинике. М., 1983. 63 с.

21. Бонд В., Флиднер Т., Аршамбо Д. Радиационная гибель млекопитающих. Нарушение кинетики клеточных популяций. М.: Атомиздат, 1971. 320 с.

22. Бочкарева Н.В., Кондакова И.В., Коломиец Л.А., Ситожевский А.В., Вусик MB., Хавалкин И.В. Кривова Н.А. Антиоксидантная система при предопухолевых заболеваниях и раке желудка // Российский онколог, журнал. 1999. № 1. С. 14-17.

23. Брехман И.И. Человек и биологически активные вещества. Л.: Наука, 1980. 120 с.

24. Бурлакова Е.Б. Роль антиокислителей в физико-химических процессах размножения клеток // Физико-химические основы саморегуляции в клетках. М.: Наука, 1968. С. 15-25.

25. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты: новые идеи и повторение пройденного // Биоантиоксидант. Тюмень: Изд-во Тюменского гос. университета, 1997. С. 3-4.

26. Бурлакова Е.Б., Алесенко А.В., Молочкина Е.М., Пальмина Н.П., Храпова Н.Г. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте. М.: Наука, 1975.211 с.

27. Бурлакова Е.Б., Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов. Черноголовка, 1992. 56 с.

28. Величковский Б.Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды // Вестник РАМН. 2001. № 6. С. 45-53.

29. Ветра Я.Я., Иванова Л.В., Крейле И.Э. Цитокины // Гематол. и трансфузиология. 2000. Т. 45, № 4. С. 45-49.

30. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал. 2000. Т. 6, № 12. С. 13-19.

31. Владимиров Ю.А. Активированная хемилюминесценция и биолюминесценция как инструмент в медико-биологических исследованиях // Соросовский образовательный журнал. 2001. Т. 7, № 1. С. 16-23.

32. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. 252 с.

33. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И., Козлов А.В., Осипов А.Н., Рощупкии Д.И. Свободные радикалы в живых системах. Итоги науки и техники. Серия Биофизика. М.: ВИНИТИ, 1991. Т. 29. 252 с.

34. Владимирская Е.Б., Румянцев А.Г. Роль ростовых факторов в регуляции кроветворения // Гематол. и трансфузиология. 2000. Т. 45, № 6. С. 4-8.

35. Воскресенский О.Н. Бобырев В.Н. Биоантиоксиданты облигатные факторы питания // Вопр. мед. химии. 1992. № 4. С. 21-26.

36. Вымятнина З.К., Костеша Н.Я., Лопухова В.В., Борило Г.А. Влияние хвойного экстракта Abies sibirica Ledeb. на гемопоэз облученных крыс // Растительные ресурсы. 2000 а. вып. 4. С.83-89.

37. Вымятнина З.К., Лопухова В.В., Борило Г.А., Костеша Н.Я. Влияние хвойного экстракта Abies sibirica Ledeb. на морфофункциональное состояние тонкого кишечника у облученных крыс // Растительные ресурсы. 2000 б. вып. 3. С. 64-69.

38. Гаврилов O.K., Файнштейн Ф.Э., Турбина Н.С. Депрессии кроветворения. М.: Медицина, 1987. 256 с.

39. Гальперин Ю.М., Лазарев П.И., Иванова Т.З., Руденская М.В. О гетерофазном пищеварении в слое наложений на поверхности слизистой оболочки тонкой кишки // Докл. АН СССР. 1982. Т. 264, № 2. С. 504-506.

40. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов-на-Дону: Изд-во Ростовского ун-та, 1990. 222 с.

41. Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии. Томск: Изд-во Томского ун-та, 1989. 369 с.

42. Горизонтов П.Д. Роль системы гипофиз-кора надпочечников в патогенезе экстремальных состояний. К вопросу об изменениях органов кроветворения // Вестник АМН СССР. 1969. № 7. С. 23-34.

43. Горизонтов П.Д. Экстремальные состояния, вызванные внешним ионизирующим излучением //Патологическая физиология экстремальных состояний. М.: Медицина, 1973. с. 120

44. Горизонтов П.Д. Гомеостаз, его механизмы и значение // Гомеостаз. М.: Медицина, 1976 а. С. 5-24.

45. Горизонтов П.Д. Стресс, система крови в механизме гомеостаза. Стресс и болезни //Гомеостаз. М.: Медицина, 1976 б. С. 452^158.

46. Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И. Стресс и система крови. М.: Медицина, 1983. 213 с.

47. Граевская Б.М., Золотарева Н.Н. О механизмах, определяющих течение и исход воздействия ионизирующей радиации на организм // Радиобиология. 1991. Т. 31, № 5. С. 747-753.

48. Груздев Г.П. Проблемы поражения кроветворной ткани при острой лучевой патологии. М.: Медицина, 1968. 140 с.

49. Груздев Г.П. Острый радиационный костномозговой синдром. М.: Медицина, 1988. 144 с.

50. Груздев Г.П., Рождественский Л.М. Органо-тканевые аспекты острого радиационного поражения // Радиационная биология. Итоги науки и техники. М.: ВИНИТИ, 1974. Т. 2. С. 55-101.

51. Гущин В.А. Разветвление фазы Gi митотического цикла крипт толстой кишки морской свинки // Цитология. 1976. Т. 18, № 7. С. 1455-1469.

52. Данилин И.А. Металлотионеины как бномаркеры при действии на организм тяжелых металлов и ионизирующего излучения: Автореф. дис. .д-ра биол. наук. Москва, 2010. 46 с.

53. Даренская Н.Г. Характеристика желудочно-кишечных поражений при радиационных воздействиях // Проблемы поражения желудочно-кишечного тракта при радиационных воздействиях: Тезисы докл. конф. М., 1970. С. 3.

54. Даренская Н.Г. Реакция основных систем организма //Теоретические основы радиационной медицины. М.: Изд. AT, 2004 а. Т.1. С.294-314.

55. Даренская Н.Г. Общие количественные закономерности действия ионизирующего излучения на организм // Теоретические основы радиационной медицины. М.: Изд. AT, 2004 б. Т.1. С. 422-530.

56. Даренская Н.Г., Короткевич А.О. Неспецифическая реактивность организма и принципы формирования индивидуальной резистентности. М.: Воентехиниздат, 2001. 240 с.

57. Дубров А.П. Симметрия биоритмов и реактивности. М.: Медицина, 1987. 176 с.

58. Железная JI.A. Структура и функции гликопротеинов слизи // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1998. Т. VIII, № 1. С. 30-37.

59. Жербин Е.А., Чухловин А.Б. Радиационная гематология. М.: Медицина, 1989. 76 с.

60. Жоголев К. Д., Никитин В.Ю., Буланьков Ю.И. Изучение влияния препаратов хитина и хитозана на течение раневого процесса // Актуальные проблемы гнойно-септических инфекций. СПб., 1996. С. 36-37.

61. Жоголев К.Д., Никитин В.Ю., Цыган В.Н. Егоров В.Н. Разработка и изучение некоторых лекарственных форм препаратов на основе хитозана // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы 6-й междунар. конф. М.: ВНИР, 2001 а. С. 163-167.

62. Жоголев К.Д., Никитин В.Ю., Цыган В.Н. Некоторые аспекты противолучевого действия препаратов хитозана // Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности. СПб, 2001 б.

63. Журавлев А.И. Биоантиокислители и их роль в регуляции окислительных процессов // Физико-химические основы авторегуляции в клетках. М.: Наука, 1968. С. 7-14.

64. Журавлев А.И. Развитие идеи Б.Н.Тарусова о роли цепных процессов в биологии. // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии . М.: Наука, 1982. С. 3-36.

65. Журавлев А.И., Пантюшенко В.Т. Свободнорадикальная биология. М: Московская ветерин. академия , 1989. 60 с.

66. Заева О.Б. Исследование антирадикальной активности плазмы крови и слизи желудочно-кишечного тракта: Автореф. дис. .канд. биол. наук. Томск, 2007. 27 с.

67. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. М.: МАИК «Наука /Интерпериодика», 2001. 343 с.

68. Ильин Л.А., Андрианова И.Е., Глушков В.А., Банникова Г.Е., Варламов В.П. Лечебно-профилактические свойства низкомолекулярного хитозана при экспериментальном лучевом поражении // Радиационная биология. Радиоэкология. 2004. Т. 44, № 5. С. 547-549.

69. Кабиев O.K., Балмуханов С.Б. Природные фенолы перспективный класс противоопухолевых и радиопотенцирующих соединений. М.: Медицина, 1975. 192 с.

70. Каган В.Е., Орлов О.Н., Прилипко Л.Д. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. М.: ВИНИТИ. Сер. Биофизика, 1986. Т. 18. 136 с.

71. Капитанов А.Б., Пименов A.M. Каротиноиды как антиоксидантные модуляторы клеточного метаболизма // Успехи соврем, биологии. 1996. Т. 116, вып. 2. С. 179-193.

72. Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.И. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи соврем, биол. 1993. Т. 113, вып. 4. С. 456—470.

73. Клебанов Г.И., Капитанов А.Б., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Жамбалова Б.А., Любицкий О.Б., Нестерова О.А., Васильева О.В., Попов И.Н., Левин Г., Владимиров Ю.А. Антиоксидантные свойства ликопина // Биол. мембраны. 1998. Т. 15, № 2. С. 227-237.

74. Козлов Ю.П. Свободные радикалы и их роль в нормальных и патологических процессах. М.: МГУ, 1973. 175 с.

75. Козлов Ю.П., Данилов B.C., Каган В.Е. Ситковский М.В. Свободнорадикальное окисление липидов в биологических мембранах. М.: МГУ, 1972. 88 с.

76. Комаров Б.А., Албулов А.И., Трескунов К.А., Погорельская Л.В. Некоторые аспекты фитохитодезтерапии и ее развитие // Практическая фитотерапия. 2000. № 3. С.31-33.

77. Кондратьева Т.М., Сафронова В.Г. О необратимых изменениях элементов крови облученных животных // Восстановительные процессы при радиационных поражениях. М.: Атомиздат, 1964. С. 172-178.

78. Кононенко A.M., Фарафонов Г.В. К вопросу о кинетике клеточной популяции крипт тонкой кишки мышей, облученных рентгеновскими лучами // Арх. анат., гистол. и эмбриол. 1967. Т. 53, № 12. С. 27-32.

79. Кононенко A.M., Фарафонов Г.В. К вопросу об изменении числа эпителиальных клеток на ворсинках тонкой кишки облученных мышей // Радиобиология. 1969. Т. 9, вып. 2. С. 209-212.

80. Коноплянников А.Г. Радиобиология стволовых клеток. М.: Энергоатомиздат, 1984. 120 с.

81. Корягин А.С., Ерофеева Е.А., Якимович Н.О., Александрова Е.А., Смирнова Л.А., Мальков А.В. Анализ антиоксидантных свойств хитозана и его олигомеров // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2006. Т. 142, № 10. С. 444-446.

82. Костеша Н.Я. Некоторые пути повышения резистентности организма при действии ионизирующего излучения: Дис. . д-ра биол. наук. Томск. 2001. 332с.

83. Костеша Н.Я., Даренская Н.Г. Кишечная форма лучевой болезни и роль поражения желудка в ее развитии. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1990. 124 с.

84. Костеша Н.Я., Гулик Е.С., Борило Г.А., Зибарева Л.Н. Биологическая активность светлой фракции экстракта пихты сибирской // Вестник Томского государственного университета. 2007. № 299. С. 204-206.

85. Костеша Н.Я., Лукьяненок П.И., Стрелис А.К. Экстракт пихты сибирской Абисиб и его применение в медицине. Томск: Scientific Technical Translations. Издат. дом «Полдень», 1997. 160 с.

86. Костеша Н.Я., Стрелис А.К., Лукьяненок П.И., Матвеева Л.А., Чердынцева Н.В. Экстракт пихты сибирской Абисиб и его применение в медицине и ветеринарии. Том II. Томск: Scientific Technical Translations. Издат. дом «Полдень», 2004. 140 с.

87. Кочкина З.М., Чирков С.Н. Влияние хитозана на фаговые инфекции // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы 5-й конф. М.: Изд-во ВНИРО, 1999. С. 151-153.

88. Кривова Н.А. Механизмы образования и деградации надэпителиального слизистого слоя пищеварительного тракта: Дис. . д-ра. биол. наук. Томск, 1994. 228 с.

89. Кривова Н.А., Дамбаев Г.Ц., Хитрихеев В.Е. Надэпителиальный слизистый слой желудочно-кишечного тракта и его функциональное значение. Томск: МГП «РАСКО», 2002. 316 с.

90. Кривова Н.А., Заева О.Б., Копылова Т.Н., Светличный В.А. Антиоксидантная защитная функция пищеварительного тракта // Научные труды I Съезда физиологов СНГ. Сочи, Дагомыс, 19-23 сентября 2005. М.: Медицина-Здоровье, 2005. Т. 1. С. 95-96.

91. Круглякова К.Е., Шишкина Л.Н. Общие представления о механизме действия антиоксидантов // Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo: Сб. науч. статей. М.: Наука, 1992. С. 5-8.

92. Крыжановский Г.Н. Введение в общую патофизиологию. М.: РГМГУ, 2000. 71 с.

93. Кудряшов Ю.Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучения). М.: ФИЗМАТЛИТ, 2004. 448 с.

94. Кудряшов Ю.Б., Баренфельд Б.С. Основы радиационной биофизики. М.: МГУ, 1982. 304 с.

95. Кузин A.M. Молекулярная радиобиология клеточного ядра. М.: Атомиздат, 1973. 208 с.

96. Куликов В.Ю., Ермолаева В.В., Колесникова Л.И., Молчанова Л.В., Косованова Л.В. Реакции перекисного окисления липидов в сыворотке крови больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки // Вопр. мед. химии. 1979. Т. 25. вып. 3. С. 289-292.

97. Куликов В.Ю., Ермолаева В.В., Мамонтова Л.В., Косованова Л.В., Ким Л.Б. Реакции перекисного окисления липидов в эритроцитах крови и некоторые системы их регуляции у больных язвенной болезнью // Вопр. мед. химии. 1981. Т. 27. вып. 4. С. 463-465.

98. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соросовский образовательный журнал. 1999. № 1.С. 2-7.

99. Курцин И.Т. Ионизирующая радиация и пищеварение. М.: Медгиз, 1961. 298 с.

100. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш. Школа, 1980. 293 с.

101. Ланкин В.З. Метаболизм липоперекисей в тканях млекопитающих // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М.: Наука, 1981. С. 75—95.

102. Лебедева Г.А. Морфологические изменения кишечника при острейшей форме лучевой болезни, вызванной внешним облучением // Вопросы общей радиобиологии. М.: Атомиздат, 1966. С. 195-201.

103. Лебедева Г.А. Репаративные процессы в слизистой оболочке тонких кишок при местном и общем облучении // Мед. радиол. 1969. Т. 14, № 10. С. 36-42.

104. Лекарственные растения Сибири для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Новосибирск: Наука СО РАН, 1991. 345 с.

105. Лысиков Ю.А., Морозов И.А., Ишкова В.Ю. Надэпителиальный слизистый слой тонкой кишки и его роль в пищеварительном конвейере // Тезисы докл. XV Всесоюзн. съезда ВФО. Л.: Наука, 1987. Т. 1. С. 216-217.

106. Мазурик В.К. Радиационно-химические, молекулярные и биохимические основы биологического действия излучений // Теоретические основы радиационной медицины. М.: Изд. AT, 2004. Т.1. С. 122-188.

107. Мазурик В.К., Михайлов В.Ф. О некоторых молекулярных механизмах основных радиобиологических последствий действия ионизирующих излучений на организм // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39, вып. 1. С. 91-98.

108. Максимов В.И., Родоман В.Е. Хитин как сырье для получения глюкозаминовой добавки к пище // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы 6-й междунар. конф. М.: ВНИРО, 2001. С. 208-212.

109. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука, 1989. 344 с.

110. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. М.: Наука, 1981. 277 с.

111. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М.: Медицина, 1988. 256 с.

112. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З., Бондарь И.А., Труфакин В.А. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания. Новосибирск: АРТА., 2008. 284 с.

113. Миронова Г.Д., Сирота Г.В. Участие пероксидазы и опосредованного цитохромоксидазой действия кислорода в процессах образования АТФ // Биофизика сложных систем и радиационных нарушений. М.: Наука, 1977. С. 228-236.

114. Монастырская Б.И., Свердлов А.Г. Вопросы морфологии нейтронного поражения мышей, крыс и морских свинок // Радиобиология. 1972. Т. 12, вып. 5. С. 694-700.

115. Морозов И.А., Лысиков Ю.А., Питран Б.В., Хвыля С.И. Всасывание и секреция в тонкой кишке: субмикроскопические аспекты. М.: Медицина, 1988. 224 с.

116. Московцева О.М. Влияние янтарной кислоты и ее производных на состояние свободнорадикальных процессов экспериментальных животных: автореф. дис.канд. биол. наук. Н.Новгород. 2006. 23 с.

117. Нариманов А.А., Кузнецова С.М., Мякишева С.Н. Модифицирующее действие софоры японской (Sophora Japonica) и пантокрина при лучевом поражении//Радиобиология. 1990. Т. 30, вып. 2. С. 170-174.

118. Нестерин М.Ф. Влияние рентгеновского облучения на ферментовыделительные процессы в кишечнике // Вестник рентгенол. и радиол. 1957. вып. 4. С. 81-83.

119. Нестерин М.Ф., Смирнов К.В. Нарушение и восстановление деятельности пищеварительной системы при экспериментальной лучевой болезни // Радиобиология. 1962. Т. 2, вып. 6. С. 859-867.

120. Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. Томск, 1989. Т. 2. 219 с.

121. Овсянникова Л.М., Алехина С.М., Бурмистров А.Н. Антиоксидантная терапия нарушений окислительного гомеостаза у потерпевших вследствие аварии на ЧАЭС // Вестник междун. академии проблем человека в авиации и космонавтике. 2007. № 1 С.24.

122. Оганесян А.С., Геворкян Ж.С., Татевосян А.Т., Минасян Г.М. Новые антиоксидантные факторы, секретируемые желудочно-кишечным трактом // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1990. Т. 109, № 4. С. 348-349.

123. Олферьев A.M., Капитанов А.Б., Нестерова О.А., Пименов A.M., Сергиенко В.И. Влияние томатола на развитие экспериментального холестериноза у крыс // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. 1999. № 2. С. 48-52.

124. Паршков Е.М. Морфологические аспекты патогенеза кишечной формы лучевой болезни: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Обнинск. 1980. 36 с.

125. Патент РФ № 2061491 Способ получения средства, повышающего резистентность организма. / Костеша Н.Я. заявлено 04.02.1993; опубл. 10.06.1996, Бюл. № 16. С. 160.

126. Петрович Ю.А., Григорьянц Л.А., Турин А.Н., Гурин Н.А. Хитозан: структура и свойства. Использование в медицине // Стоматология. 2008. № 4//Эл. Ресурс: http://wvm.mediasphera.ru/journals/stomo/detail/491/7463/

127. Пилипчатина О.А., Шарпатый В.А. Свободнорадикальный механизм радиационной деструкции хитозана и проблемы химической противолучевой защиты // Радиационная биология. Радиоэкология. 2007. Т. 47, № 6. С. 717—726.

128. Плотникова Е.Д. Клеточные основы костномозгового синдрома //Радиационное поражение организма. М.: Атомиздат, 1976. Т. 5. С. 10-21.

129. Погорельская Л.В., Турьянов М.Х., Трякина И.Б., Петрова Е.В. Перспектива применения фитохитодезов в инфекционной практике // Практическая фитотерапия. 2000. № 3. С.44-46.

130. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии // Патол. физиол. и экспер. тер. 2000. № 2. С. 24-31; № 3. С. 21-26; №4. С. 21-31.

131. Радиационная медицина. Радиационные поражения человека / Под ред. Л.А.Ильина. М.: AT, 2001. Т. 2. 432 с.

132. Рогозкин В.Д., Андрианова И.Е., Разоренова В.А., Витовская Г.А., Блинов Н.П. Противолучевые свойства дрожжевых полисахаридов // Радиобиология. 1974. Т. 14, вып. 5. С. 773-776.

133. Ронин B.C., Старобинец Г.М. Руководство к практическим занятиям по методам клинических лабораторных исследований. М.: Медицина, 1989. 320 с.

134. Сало В.М. Растения в медицине. М.: Медицина, 1968. 159 с.

135. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М., 1960. 254 с.

136. Селье Г. Концепция стресса, как мы ее представляем в 1976 г. // Новое о гормонах и механизмах их действия. Киев, 1977. С. 27-36.

137. Смирнов К.В. Секреторная и моторная функции тонкого кишечника при острой лучевой болезни: дис. . канд. биол. наук. М., 1961.

138. Смирнов К.В., Шиходыров В.В. Действие ионизирующей радиации на млекопитающих. //Основы радиационной биологии. М.: Наука, 1964. С. 186— 237.

139. Соколовский В.В. Окислительно-восстановительные процессы в биохимическом механизме неспецифической реакции организма на действие экстремальных факторов внешней среды // Антиоксиданты и адаптация. Л.: ЛСГМИ, 1984. С. 3-19.

140. Судаков К.В. Системная интеграция функций человека: новые подходы к диагностике и коррекции стрессорных состояний // Вест. РАМН. 1996. №6. С. 15-25.

141. Судаков К.В. Новые акценты классической концепции стресса // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1997. Т. 123, № 2. С. 124-130.

142. Судаков К.В., Викторов В.А., Юматов Е.А. Новые медицинские технологии оценки состояния человека на основе теории функциональных систем // Вест. РАМН. 1999. №9. С. 19-32.

143. Тарасенко Г.А. Радиопротекторные и антитоксические свойства хитозана из панциря камчатского краба по отношению к Cs и Hg // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы 5-й междунар. конф. СПб., 1999 а. С.197—198.

144. Тарасенко Г.А. Экспериментальное обоснование гипохолестеринемического действия хитозана из панциря камчатского краба // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы 5-й междунар. конф. СПб., 1999 б. С.198-199.

145. Тарасенко JI.M., Петрушенко Т.А., Гребенникова В.Ф. Роль слизистого барьера в патогенезе стрессорных язв желудка // Физиол. журн. 1991. № 6. С. 88-91.

146. Тарусов Б.Н. Основы биологического действия радиоактивных излучений. М.: Медгиз, 1954. 130 с.

147. Тарусов Б.Н. Кинетика первичных окислительных реакций лучевого поражения. // Первичные механизмы биологического действия ионизирующих излучений. М.: Изд-во АН СССР, 1963. С. 68.

148. Телятьев В.В. Полезные растения Центральной Сибири. Иркутск, 1987. 398с.

149. Тесленко А .Я., Воеводина И.Н., Николаева С.В. Использование хитинсодержащих сорбентов для решения экологических задач //

150. Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их использования. М.: ВНИРО, 1992. С. 99-104.

151. Тютерев C.JI. Научные основы индуцированной болезнеустойчивости растений. СПб., 2002. 328 с.

152. Уголев A.M. Физиология и патология пристеночного (контактного) пищеварения. Л.:Наука, 1967. 230 с.

153. Ужанский Я.Г. Физиологические механизмы регенерации крови. М.: 1968. 264 с.

154. Успенский Ю.Н. Влияние ионизирующего излучения на деятельность кишечных желез // Физиол. журн. СССР. 1958. Т. 44. С. 225-230.

155. Федоровский Л.Л. Патофизиологический анализ кишечной формы лучевой болезни // Радиационное поражение организма. М.: Атомиздат, 1976. С.22-39.

156. Федотова М.И., Рождественский Л.М. Оценка поражаемости различных отделов желудочно-кишечного тракта крыс при воздействии радиации // Радиобиология. 1970. Т. 10, вып. 6. С. 882-886.

157. Фомина В.И., Солонина Н.А., Комаров Б.А., Шиповская А.Б. Структурообразование в фитосистемах хитозана // Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения: Матер. 5-й междунар. науч. конф. Черноголовка, 2004. С. 299-304.

158. Хайруллин P.M. kliram@ufanet.ru.

159. Царегородцев Г.И., Алферов В.П. Адаптационные изменения организма в состоянии здоровья и болезни // Вест. АМН СССР. 1976. №4. С. 22-31.

160. Цыган В.Н., Жоголев К.Д., Никитин В.Ю. Хитозан как парафармацевтик // Рынок БАД. 2002. № 2 (4). С. 1-10.

161. Червинец В.М., Бондаренко В.М., Албулов А.И., Комаров Б.А. Антимикробная активность хитозана с разной молекулярной массой // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы 6-й междунар. конф. М.: Изд-во ВНИРО, 2001 а. С. 252-254.

162. Червинец В.М., Смоленская Л.П., Чекесов М.И., Албулов А.И. Опыт лечения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки хитозаном // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы 6-й междунар. конф. М.: Изд-во ВНИРО, 2001 б. С. 255-258.

163. Чертков К.С., Храмченкова С.П., Рогозкин В.Д. Радиозащитные свойства зимозана// Радиобиология. 1973. Т .13, вып. 1. С. 50-55.

164. Чертков К.С., Давыдова С.А., Нестерова Т.А., Звягинцева Т.Н., Елякова Л.А. Эффективность полисахарида транслама как средства раннего лечения острой лучевой болезни // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39, № 5. С. 572577.

165. Чертков И.Л., Дризе Н.И. Принципы организации стволового отдела кроветворной системы // Гематол. и трансфузиология. 2000. Т. 45, № 4. С. 3842.

166. Шевченко И.Н. Антиоксидантная защита облученного организма. Гидробионты Азово-Черноморского бассейна // Проблемы противолучевой защиты: Материалы Всеросс. конф. с междунар. участием. М., 1998.

167. Эмануэль Н.М. Химическая и биологическая кинетика. Избранные труды. Т. 2. М.: Наука. 2006.318с.

168. Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А. Радиобиология человека и животных. М.: Высшая школа, 2004. 549 с.

169. Ярошевский Я.Г. Эндогенные стимуляторы кроветворения (эритропоэтины). М.-Л. '.Медицина, 1963. 102 с.

170. Agarwal S., Rao A.V. Tomato lycopene and low density lipoprotein oxidation74 a human dietary intervention study // Lipids. 1998. V. 33, N 10. P. 981-984.

171. Allen A. Structure of gastrointestinal mucus glycoproteines and the viscosity and gel-formation properties of mucus // Brit. Med. Bull. 1978. V. 34. P. 28-33.

172. Allen A., Bell A., Mantle M., Pearson J.P. The structure and physiology of gastrointestinal mucus // Mucus in Health and Disease. 1982. P. 115-133.

173. Allen R.G., Balin A.K. Oxidative influence of on development and differentiation: An overview of a free radical theory of development // Free Radical Biol. And Med. 1989. V. 6. P. 631-661.

174. Bellavile P. The superoxide-forming enzymatic system of phagocytes // Free Radic. Biol. Med. 1988. Vol. 4, № 2. P. 225-261.

175. Blix G. The determination of Hexosamines According to Elson and Morgan //Acta Chemica Scandinavica. 1948. V. 2. № 5-6, P. 467-473.

176. Bowry V.W., Ingold K.U., Stocker R. Vitamin E in human low-density Epoprotein. When and how antioxidant becomes a pro-oxidant // Biochem.J. 1992. Vol. 288. P. 341-344.

177. Bowry V.W., Ingold K.U. Extraordinaiy kinetic behavior of the a-tocopheroxyl (vitamin E) radical // J. Organization Chem. 1995. Vol. 60. P. 5456-5467.

178. Chen S.K., Tsai M.L., Huang J.R., Chen R.H. In vitro Antioxidant activities of low-molecular-weight polysaccharides with various functional groups // J. Agric. Food Chem. 2009. V. 57, N 7. P. 2699-2704.

179. Clamp J., Brawn P. Studies upon the secretion of gastric mucus from normal subjects // Mucus Health and Disease. 1982. P. 135-138.

180. Clark J.A., Cowden W.B., Hunt N.H. Free radical-induced pathology // Med. Res. Rev. 1985. V. 5. P. 297-332.

181. Cross C.E., Halliwell В., Allen A. Antioxidant protection: a function of tracheobronchial and gastrointestinal mucus // Lancet. 1984. Jun 16 V.l P. 13281330.

182. Cross A.R., Jones O.T.G. Enzymic mechanisms of superoxide production // Biochim et biophys. Acta. 1991. V. 1057. P. 281-298.

183. Davids C.A. Effect of ionizing radiation on the gastric and intestinal epithelia //Int. J. Radiat. Biol. 1973. Vol. 24. № 3. P. 315.

184. Dische Z., Shettles L. A specific color reaction of methylpentoses and spectrophotometric micromethod for their determination // J. of Biol. Chemistry 1948. V. 175. № 2. P. 595-603.

185. Feng Т., Du Y, Li J., Wei Y., Yao P. Antioxidant activity of half N-acetylated water-soluble chitosan in vitro // European Food Research and Technology. 2007. V. 225, N 1. P. 133-138.

186. Fliss H., Menard M. Oxidant-induced mobilization of zinc from metallothionein //Arch. Biochem. and Biophys. 1992. V. 293. P. 195-199.

187. Gad A. Pathophysiology of gastrointestinal mucins // Adv. Physiol. Sci. 1981. V. 29. P. 161-184.

188. Halliwell В., Gutteridge J.M. The importance of free radicals and catalytic metal ions in human diseases // Mol. Aspects Med. 1985. V. 8. P. 89-193.

189. Halliwell B, Zhao K, Whiteman M. The gastrointestinal tract: a major site of antioxidant action // Free Radic Res. 2000. Dec. V. 33, N 6. P. 819-830.

190. Handel D.U., Kittlak W. Vergleichende untersuchung zur metodik der bestimmung des eiwei gebudenen suckers // Z. Med. Labor, Techn. 1963. № 4. S. 163-169.

191. Hirano S., Nagao N. Effects of chitosan, pectic acid, lysozyme, and chitinase on the growth of several phytopathogens // Agricultural and Biological Chemistry. 1989. V. 53. P. 3065-3066.

192. Hiraishi H., Terano A., Ota S., Mutoh H., Sugimoto Т., Harada Т., Razandi M., Ivey K.J. Role for mucous glycoprotein in protecting cultured rat gastric mucosalcells against toxic oxygen metabolites // J. Lab. Clin. Med. 1993. V. 121. N 4. P 570578.

193. Jea J.-Y., Kim S.-K. Reactive oxygen species scavenging activity of aminoderivatized chitosan with different degree of deacetylation // Bioorganic & Medicinal Chemistry. 2006. V. 14. Issue 17. P. 5989-5994.

194. Jervis H.R., Mc Laughlin M.M., Johnson M.C. Effect of neutron-gamma radiation on the morphology of the mucosa of the small intestine of germfree and convetional mice // Radiat. Res. 1971. V. 45, № 3. P. 613-628.

195. Ji X.,.Zhong Z, Chen X., Xing R., Liu S., Wang L., Li P. Preparation of 1,3,5-thiadiazine-2-thione derivatives of chitosan and their potential antioxidant activity in vitro // Bioorganic & Medicinal Chemistiy Letters. 2007.V. 17. Issue 15. P. 42754279.

196. Murata J., Saiki I., Matsuno K. Inhibition of tumor cell arrest in lungs by antimetastatic chitin heparinoid // Jpn. J. Cancer Res. 1990. V. 81, N 5. P. 506-513.

197. Muzzarelli R.A.A. Chitin. Oxford: Pergamon Press. 1977. 309 p.

198. Muzzarelli R.A.A., Jeuniaux C., Gooday G.W. Chitin in nature and technology. New York: Plenum Press. 1986. 420 p.

199. Nijveldt R.J., van Nood E., van Hoorn D.E.C., Boelens P.G., van Norren K., van Leeuwen P.A.M. Flavonoids: a review of probable mechanisms of action and potential applications // Am. J. Clin. Nutr. 2001. V. 74. P. 418-425.

200. Nishimura K., Nishimura S., Nishi N. Immunological activity of chitin and its derivatives // Vaccine. 1984. V. 2, N. 1. P. 93-99.

201. Nishimura K., Nishimura S., Nishi N. Adjuvant activity of chitin derivatives in mice and guinea pigs // Vaccine. 1985. V. 3, N. 5. P. 375-384.

202. Nishimura K., Nishimura S., Seo H. Macrophage activation with multi-porous beads prepared from partially deacetylated chitin // J. Biomed. Mater. Res. 1986. V. 20, N. 9 P. 1359-1372.

203. Nishimura Y., Kim H., Ikota N., Arima H., Bom H., Kim Y., Watanabe Y., Yukawa M., Ozawa T. Radioprotective effect of chitosan in sub-lethally X-ray irradiated mice // J. Radiat. Res.(Tokyo) 2003. № 1. P. 53-58.

204. Oates G., Rossbottom A., Schrager A. The composition of human gastric mucin //Med. Probl. Paediatrics. 1977. V. 19. P. 11-21.

205. Pollycove M., Feinendegen L.E. Molecular biology, epidemiology, and the demise of the linear no-threshold (LNT) hypothesis // C.R.Acad. Sci. III. 1999. Vol. 322, №2-3. P. 197-204.

206. Romanchick J.E., Morel D.W., Harrison E.U. Distributions of carotinoids and alphatocopherol among lipoproteins do not change when human plasms is incubated in vitro//J. Nutr. 1995. V. 125, N 10. P. 2610-2617.

207. Rubanyi C.M. Vascular effects of oxygen-derived free radicals // Free Radical Biol, and Med. 1988. V. 4. P. 107-121.

208. Rubbo H., Darley-Usmar V., Freeman B.A. Nitric oxide regulation of tissue free radical injury // Chem. Res. Toxicol. 1996. Vol. 9, № 5. P. 809-820.

209. Samarth R.M., Kumar A. Radioprotection of Swiss Albino Mice by Plant Extract Mentha piperita (Linn.) // J. Radiat. Res. 2003. V. 44, N. 2. P. 101-109.

210. Saran M., Bors W. Radical reactions in vivo an overview // Radiat. Environ. Biophys. 1990. Vol. 29, № 2. P. 249-262.

211. Sato М., Onishi H., Takahara J. et al. In vivo drug release and antitumor characteristics of water-soluble conjugates of mitomycin С with glycol-chitosan and N-succinyl-chitosan // Biol. Pharm. Bull. 1996. V. 19, N 9. P. 1170-1177.

212. Sellers L.A., Allen A., Morris E.R. Mucus glycoprotein gels. Role of glycoprotein polymeric structure and carbohydrate side-chains in gel-formation // Carbohydr. Res. 1988. V. 178 (15). P. 93-110.

213. Shimoi K., Masuda S., Furugori M., Esaki S., Kinae N. Radioprotective effect of antioxidative flavonoids in X-ray irradiated mice // Oxford Journals Life Sciences & Medicine Carcinogenesis. 1994. V. 15, N 11. P. 2669-2672.

214. Slomiany В., Laszewicz W., Slomiany A. In vitro inhibition of peptic degradation of porcine gastric mucus glycoprotein by sucralfate // Scand. J. Gastroenterol. 1985. V. 20. №7. P. 1191-1196.

215. Sugawara H., Oohisa N., Kobayashi S. Antimicrobial activity of chitosan // Chitin and Chitosan Research. 1997. V. 3, N 2. P. 208-209.

216. Sun Т., Zhou D., Xie J., Mao F. Preparation of chitosan oligomers and antioxidant activity // European Food Research and Technology. 2007. V. 225, N 3-4. P. 451456.

217. Sun Т., Yao Q., Zhou D., Mao F. Antioxidant activity of N-carboxymethyl chitosan oligosaccharides // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 2008. V. 18. Is. 21. P. 5774-5776.

218. Tasman-Jones C. Gastric mucus-physical properties in cytoprotection // Med. J. of Australia. 1985. V. 142, № 4. P. 71-90.

219. Torel J., Gillard J., Gillard P. Antioxidant activity of flavonoids and reactivity with peroxy radical // Phytochemistiy. 1986. V. 25. P. 383-385.

220. Uchida Y., Izume M., Ohtakara A. Preparation of chitosan oligomers with purified chitosanase and its application // In: Skjak-Braek G., Anthonsen Т., Sandford P. (Eds.) Chitin and chitosan. London: Elsevier. 1989. P. 373-382.

221. Ueno K., Yamaguchi Т., Sakairi N., Nishi N., Tokura S. Antimicrobial activity by fractionated chitosan oligomers // In: Domard A., Roberts G.A.F., Varum K.M. (Eds.) Advances in chitin science. Lyon: Jacques Adre. 1997. P. 156-161.

222. Vatistas S., Herdan A., Ellis R.L. The role of the intestinal in acute postirradiation mortality injury // Report of a symb. held at Richmond. Wash. USA. 1966. P. 433443.

223. Warren L. The thiobarbituric acid assay of sialic acid // J. Biol. Chemistry. 1959. V. 234, №8. P. 1971-1975.

224. Xie W., Xu P., Liu Q. Antioxidant activity of water-soluble chitosan derivatives //Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 2001. V. 11, N 13. P. 1699-1701.

225. Yuan W.-P., Liu В., Liu C.-H., Wang X.-J., Zhang M.-S., Meng X.-M., Xia X.-K. Antioxidant activity of chito-oligosaccharides on pancreatic islet cells in streptozotocin-induced diabetes in rats // World J. Gastroenterol. 2009. V. 15, N 11. P. 1339-1345.

226. Zhong Z., Ji X., Xing R., Liu S., Guo Z., Chen X., Li P. The preparation and antioxidant activity of the sulfanilamide derivatives of chitosan and chitosan sulfates //Bioorganic & Medicinal Chemistry. 2007. V. 15. Issue 11. P. 3775-3782.

Информация о работе

Гулик, Елена Сергеевна
кандидата биологических наук
Томск, 2010
ВАК 03.03.01

Диссертация

Влияние хитабиса на функциональное состояние организма животных при окислительном стрессе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы