Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ВЛИЯНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ И СРЕДОВЫХ ФАКТОРОВ НА КАРНОТИН И РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ХРОМОСОМНЫХ АНОМАЛИЙ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "ВЛИЯНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ И СРЕДОВЫХ ФАКТОРОВ НА КАРНОТИН И РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ХРОМОСОМНЫХ АНОМАЛИЙ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ"

А-3 ШЭ.

На правах рукописи

С|цщ»кя1: 06.02.01 - Рае ведение, селекция, генетика

и воспроизводство сельсноховяйотвеиных животных

А»ТО>Е«ЕРДТ

. диссертации на оонскаине ученой степени ' доктора Ошюгичвски* иаук ; , ■

Хувровнш - 10Я?

Cutrenw -jC"M>Mt¿ftt&jß * >1сес es

Работа выполнена а отделе биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института животноводства

Научим» коисультэдты:

доктор биологических наук, профессор О.К.СМИРНОВ доктор биологических наук Н.с.марзанов

1. Доктор биологических наук- А.Г. НАРИШЙ

2. Доктор сельскохозяйственных наук,

профессор , ■ Д.В. КАРЛИКОВ ■

,3. Доктор сельскохозяйственных наук A.B. НАКАЙ

Всероссийский научно-исследовательский институт \ .

племенного дела ■"',■ v

: Запита состоится п\Чп икЖЯ 1987 г. в Ю часов . :

на'заседании диссертационного совета Д 080.16.01 "л при Всероссийском научно-исследовательском институте жквотноводййа

ü 142012. Московская о0ласть, Подол|)Окий ■ ;* район, п.Дубровицы

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института

-Лгтореферат разослан " в „" 1097" г.. ■ ^v-V.v' ;

■ ,?ный секретарь \ | - • ■.'■ ■ ■

диссертационного совета,; ' '.. :

кандидат сельсноховяйствекнык наук - Ю.И. Краков

1. сбцая характеристика работы

1.1.Лктуажностъ проблемы, в настоящее время достигнуты значительные успехи в изучении наследственного аппарата человека, лабораторных несельскохозяйственных животных. Вместе с тем существует ряд проблем, решение которых требует углубленного изучения хромосомного аппарата.. .

Введение в практику животноводства современных методов воспроизводства ведет к возрастанию влияния ограниченного числа производителей на генофонд стада. , При этом существенно повышается риск распространения в популяциях наследственных дефектов, связанных с хромосомными аномалиями. В ряде стран существуют национальные программы по цитоге-иетическому мониторингу в животноводстве (СиБЬауггоп I.,1634; Рорезси Р.,1086). Подобные исследования в России малочислены и выполнены глав-, кым образом только на крупном рогатом скоте (Яковлев А.Ф.,1985; 1ига-чев А. И., 1937 и др.}. ■ - . .

Одним из перспективных направлений в изучении уровня генетического риска является и анализ связи между спонтанной хромосомной,изменчивостью в~ соматических клетках и репродуктивными качествами животных. ,

С проблемой онтогенетического контроля в животноводстве связан вопрос ' об оценке генетического риска и причинах возникновения различных аномалий хромосомного набора у животных. В.этом плане представляет интерес изучение последствий 'антропогенного.воздействия на хромосомный, аппарат, в том числе как в результате техногенного загризненкя окружавшей: среды, так и при использовании биотехнаиогйческих методов воздействия на геном. . ' -/. . .

Среди техногенных - факторов наибольшую опасность представляет радиационное загрязнение окружающей среды (Бочков Н,П. - и др. ;1в8Э>. В связи с чем очевидна необходимость углубленного изучения воздействия ионизирующей радиации на хромосомный аппарат животных. Необходимость цитогеиетических исследований в биотехнологии продиктована тем, что попытки, направленного воздействия на геном животных:путем^интродукции экзогенных конструкций часто приводят к различным негативным, последствиям,. включал появление иисерционнык мутаций (СозЬагЛ 1п1,Р.е.а. ,1989; .Вге!п , 1ЭЭЗ) . \ Важну» информацию в этом плане .может дать' изучение' хромосомного - набора трансгенных животных а также анализ природных ре^, портерных систем, -прр^^иу состояние. гекЫй

у животных.ре^иентй^Д^Г^^!^

Моей, л »адемин

к--, К. А. (^ир-

Инв.

•* 1.2.Цаль н задачи. Целью исследования является изучение различных' факторов генетической и паратипической природы, способствующих появлению и распространению различных хромосомных аберрация в популяциях основных .видов сельскохозяйственных животных для ' разработки методов оценки генетического риска и мер профилактики возникновения и распространения хромосомной патологии у животных.

Исходя из изложенного в задачи исследования входит:

1.Изучить распространение хромосомной патологии в различных породах и популяциях основных видов сельскохозяйственных животных.-

2.Изучить результаты радиационного воздействия на хромосомный ал- ' парат животных и их динамику в зависимости от дозы и времени, прошедшего с момента облучения.

3.Изучить особенности кариотипа трансгенных животных.

Л 4.Изучить возможность оценки генетического риска на основании данных о состоянии кариотипа животных.

Научная новизна. Впервые в нашей стране осуществлено цитоге-нетическое обследование производителей в ряде пород свиней и крупного рогатого скота, используемых на племпредприятиях' и в племенных заводах и; проведен сравнительный анализ распространения вариантов хромосомных аномалий у животных разных видов и пород.

'' . 5 модельных экспериментах на свиньях изучены последствия воздействия ионизирующей радиации на хромосомный аппарат и репродуктивные качества животных/" Впервые иссдедована'временная динамика радиационные повреждений хромосом в соматических клетках у свиней. Показано, что фенотипический эффект реципрокных транслокаций зависит от летаяьного действия иесбалансир9ваннсй транслокации и презиготического отбора.

Исследовано влияние различных экзогенных конструкций на хромосом-• ныйалпарат трансгенных животных. Установлено существование риска возникновения хромосомных аномалий у первичных трансгенов в результате интеграции чужеродной ДНК в геном. Новым направлением является изучение ■, активности генов рибосомной РНК у трансгенных животных в качестве теста,-характеризующего'активность собственных генов реципиента.'

. "В результате сравнительного анализа генных карт отмечено существование значительного сходства в организации хромосомных наборов у видов животных, принадлежащих: «'разным родам,'

1.4.Практнческаяэкачмыость. На ¿сновании проведенных: йсследова-; ний сформулированы принципы профилактики 'хромосомной патологии .у сель- . ' скохозяйственных животНыхи работы с животными,' входящими в группы ге-

иетического риска. Результаты исследований могут быть использовали, как . при проведении селекционно-генетической работы, так и при разработке оптимальных вариантов получения и размножения трансгенных животных.

' 1.5.Апробация работы. Материалы диссертации Доложены на конференциях, симпозиумах, ученых Советах: ежегодные отчеты ВИЖ - 1981-1909 гг.; 1-я Всесоюзная конференция по цитогенетике сельскохозяйственных , животных. Звенигород, 1985 г.; П-я Всесоюзная конференция по цитогенетике сельскохозяйственных животных, Ленинград-Пушкин, 1988 г.; Ш-я . Всесоюзная конференция по сельскохозяйственной радиологии, ОбНинск, 1090 г.; iv-я Всесоюзная конференция по экологической генетике растений, животных и человека, Кишинев, .1991 г.; Международный симпозиум "Молекулярная генетика и биотехнология в оценке геномов сельскохозяйственных животных",С.-П.-Пушкин, 1994 г.; IV-я конференция Российской Федерации " Ноше направления биотехнологии", Пушино, 1994 г.; 11-я. Международная конференция "Актуальные проблемы биотехнологии в животноводстве", Боровск, 1995 г.: И-я Международная конференция "Молеку-.„ лярко-генетические маркеры животных", Киев, 199G г.; 1-я Российско-Ук- -раннская конференция "Проблемы сохранения редких пород домашних живот--, ных и близкородственных лиши видов", Пушино, 1996 г.; Международная конференция, посвященная памяти акад. A.A. Баева, Москва, 1996 г. ;

1.6. Структура диссертации. Работа изложена на £42. страницах маши-' нописи, содержит 56 таблицы и Д5 рисункоз. Состоит из [¡ведения, обзора

' литературы, результатов собственных исследований и обсуждения, выводов и практических предложений.' Обзор литературы содержит 406 источников, в том числе £52 иностранных. .. л ' . . .* .

1.7.Пубдюоцня результатов мссав*озаннй. Основные результаты исследований, выполненных по теме диссертации опубликованы в 38 научных' работах и 1 авторском свидетельстве. Наиболее полно содержание диосер^-

■ тации отражает 21 работа, цитированная в автореферате.' , _ v . ..' 1.0. Основные полатекня, вююскмме на ззадггу. tía основании проведенных исследований показана роль генетических: (видовая,, породная;'.и • линейная принадлежность животных) и антропогенных (радиационное ваг-*., рягнение, действие отбора и генетическая трансформация) факторов.'в возникновении и распространении различных вариантов хромосомных анома-^. лнй. На основании собственных исследований и анализа литературных.дан-V ных показана неравном селекционная значимость различных вариантов хрот,; »■мосомных аномалий. Исходя из чего сформулированы - основные принципы 1 профилактики негативного действия хромосомных аномалий.:';. > ,• •.'^V-; ■

2. штерна* н истоды нащ^овалий

Кссыьдоъйнмя ъыполйены в'период с 1976 по 1990 гг. в отделе б«о- . технологии ВНКа, племпредприятиях и племенных хозяйствах российской ' Федерации и опх ВИЖа."Клеиово-чегодаево" по следующей схеме (рис.1).

ткческих факторов в возникновении к распространении хромосомных аномалий у сельскохоояйственных животных, проводили онтогенетические иссле-

дования животных пяти видов: свиньи, крупный рогатый скот, овцы, снежный баран и кролики. Изучали влияние генетических: видовая, породная и линейная принадлежность" животных, индивидуальные различия; и антропогенных факторов: радиационное и . биотехнологическое • воздействие; на . возникновение и распространение хромосомных патологических изменений. '

Для этого онтогенетически было обследовано £20 хряков-производителей и ремонтник хряков пяти пород: крупная белая, . крупная черная/ ландрас, дюрок и уржумская(ГГО"Константиново", племсовхоэ "Гибридный". ГПЗ им. Цветкова, ГШ "иухинский"). Одновременно исследовали 79 свиноматок и ! £3 новорожденных поросенка уржумской породы в норме и с патологией развития, также*изучено распространение робертсоновской транслокации 1/29 и Других аномалий у 109 быков- производителей и ремонтных бычков симментальской и калмыцкой пород (ГШ "Волгоградское" и '•Оренбургское", племсовхоз им. Калинина и опх КЮШМС).

Патогенетически обследовано б2 овцы породы финский ландрас в опх "Кленово-Чегодаево" ВИЖа.: На овцах породы финский ландрас, камчатском снежном баране'и их гибридах проведено изучение кариотипических особенностей близкородственных, видов рода Ovis с целью выяснения возможных механизмов сжижения жизнеспособности гибридов первого поколения.

Роль породных и'индивидуальных различий в формировании соматической гетеропдондии изучали на свиньях пород крупная белая, уржумская и ландрас. fia свиньях уржумской породы также изучали связь спонтанных нарушений хромосомного набора в соматических клетках с репродуктивными качествами живйтных. Оценку этой связи проводили по многоплодии животных, имевших разный уровень гетерошюидии. Анализ проводили на основе изучения корреляционной связи этих показателей «'результатов экспериментального отборами подбора животных с высоким;и низким уровнем гете-роплоидни.; ■ ..

"■V Последствия радиационного воздействия на хромосомный аппарат определяли кз 65 ремонтных хрячках пород крупная белая ' и ландрас. Для этого животных в воэразте 11 мес. разделили на пять групп, из них четыре1 группы хрячков подвергали тотальному воздействию гамма-излучения в дозах 100, 200, 300 и 400 Р, пятая группа сдужила контролем. Облучение проводили во БНИИСХР на установке "Панорама". / Перед облучением все животные были обследованы онтогенетически: изучали состав кариотипа, частоту количественных и структурных измене-1 ний в хромосомном наборе клеток костного мозга. После облучения животных всех подопытных групп снова исследовали через 30, СО, 120. ISO и

360 дней. Контрольных животных исследовали на 30 и 120 день, опыта.

Анализ последствий радиационных повреждений хромосом ка репродуктивную функцию свиней изучали в модельном опыте"с использованием сына карнологически маркированного хряка Радия 19. подученного ранее в отделе генетики ВИЖа от осеменения свиноматок спермой, облученной в дозе 600 Р. Спермой сына этого хряка, . унаследовавшего от отца рецнпрокную тракслокацию 6q+;13q-', было осеменено 12 свиноматок, предварительно оцененных по многоплодию по двум первым опоросам. Изучали многоплодие свиноматок' после .осеменения их спермой карнологически маркированного хряка, кариотип потомства после рождения и ка 10 день эмбрионального развития,'

Анализ последствий интеграции в Геном различных акзогенных конструкций! WAp/tiGH, RH®, ß-интерферона человека и mMT I/bGHatt выполняли на свиньях крупной белой породы и кроликах. У трансгенных животных изучали следующие показатели: наличие конституциональных аномалий, частота спонтанных изменений кариотипа в соматических клетках (структурные аберрации и гетеропдошшя: анеуплоидия и полиплоидия), мозаи-wsu. У трансгенных и контрольных свиней изучали также морфологические особенности . и число активных я'дрышкообраэуших районов (ЯСР) на мета-фазных хромосомах лимфоцитов крови. ;

• . Обработку и приготовление препаратов хромосом проводили по общепринятым методикам (Мак Грегор Г.,. Варли Дж,,.1986). В зависимости от поставленной задачи окраску препадатов проводили монохромно красителем Гиыэа, G-методом с трилсинизацией, AgNOs, Н-методом и Кумасси бриллиантовым синим по ранее рекомендйоьанньы прописям (Степанова ВЖ, 1S81; Графодатский A.C., Раджабли С.И., 1038).. ..'■■ V

Цитогенетический анализ проводили в соответствии с рекомендациями Бочиова 11.П. и др. (1837).: При изучении, спонтанной и йндуиированной-иамекчивости хромосом в соматических клетках исследовали не менее 30 ,клеток для определения частоты.аноуплоидии и структурных ' аберраций. Частоту полиплоидии устанавливали не менее чем по 300 клеткам. -Анализ препаратов хромосом проводили на микроскопе N1con'при увеличении 100х. Препараты фотографировали на пленку Никрат-SOO или Шкрат-300, •

Статистическую обработку данных выполняли по алгоритмам,! описан; ным Пдохинским H. A. (1061) , Меркурьевой Б. К. (1Q70); а также по разра-' ботанным нами программам на персональном • компьютере IBM PC с использо^ ванием языка BASIC и системы управления базами данных dBASE III plus.

з. результаты косхЕдовлнмй н аыагадвшБ

■ •

3. Ц.Сравккгохккая характеристика кармотиглв к кх вариабельности.

В результате исследований выполненных в последние годы показано, . что для организации геномов различных видов животных характерен определен* ный консерватизме Графодатский A.C. и др..1087; Захаров И.А. и др^ 1696).В связи чем встает вопрос о методах оценки генетических расстояний между видами. '

В качестве меры различия нами предложено использовать критерий, основанный на'расчете величины условной энтропии Ко«о) или На(а). Для расчета использовали два уравнения ti,2), полученные преобразованием .формул коэффициентов информационной связи, описанных Елисеевой И.И. и Рукавишниковым В.О. (1377): 51-Щ*1Ы+Ныл)]/Ш(в>+И(ы1 . Ell. 52?СНа(ы+Нь(а)]/Н[аЬ) С2Ь При расчете энтропийной меры расстояний мы использовали три подхода; расчет энтропии по числу хромосом, по числу групп сцепления и числу генов (табл.1).

1. Рекомймнантшю геметкчмжнв расстояния между тремя вкжшм

шюкояитамода

Варианты расчета Сравниваемые виды

крупный рогатый скот-человек крупный рогатый скот-мышь. МЫШЬ-" * человек

Па числу-хромосом 0,133^ 0*230 v 0,133*"* * J.268 0.403 ' 0.268 . - 0.2S1 0,446 . 0,231

По числу групп сцепления 0,185 . 0.311 : 0.185 0,359 \ " 0,625 0,36» 0,364 0.634 0,364

По числу генов ООО . 0,300 0,460 , 0,300 0.312 0,475 . 0,312

.' Варианты расчета: " - Sf» " - Sai "" .- Sm

При анализе.данных табл. 1 отмечался Факт расхождения в оценках рассеяния при использовании в качестве критерия меры й! и S2. Очевидно. {что симметризированное значение расстояния S должно соответствовать среднему значении расстояний, - найденных' по Н<*(Р).и He (a) (S,,). Этому критерию соответствовало значение Si, a S2 дает смещенную оценку расстояний между видами. Таким образом, критерий основанный на оценке S2 не'пригоден для расчета межвидовых расстояний.

- а -

На основании проведенного анализа выявлены существенные видовые различия в характере объединения реперных генов в группах сцепления. Наибольшие различия были отмечены между кариотнпами мыши и человека, наименьшие между геномами человека и крупного рогатого скота . Выявлено наличие общих групп сцепления у человека и крупного рогатого скота, каждая из которых соответствует нескольким независимым группам генов у мыши. Уровень энтропии для этих групп был минимален. -

• Необходимо отметить, что в.силу ограниченного числа генов, для которых известна хромосомная локализация, генетические расстояния характеризуют видовые различия организации определенного генного пула. Причем, если величина этого.пула достаточна, полученные характеристики можно.экстраполировать на весь геном. Иллюстрацией этого положения являются величины генетических расстояний между исследованньыи видами и. свиньей (табл. 2). . -

. 2. РекомОинантнив генетичесюю расстояния метду домашней ежнкьвй и миохоршм вндамк млекопигамцнх'

Крупный рогатый скот : Свинья Шшь '■' Человек'

Крупный рогатый скот — ■ 0,084", 0,152"* 0,134""" "0,035 • 0.133 .0,120 0,061 . 0,109 . .0,097 '

Свинья ооо мми 0.037 .0,160 -0,132

Мшь ■ —■. 0,119 0,172. 0,154

Варианты расчета: * - о учетом числа хромосом; "" - с учетом числа групп сцепления; ~ с учетом числа генов _ .. Расчет генетических дистанций выполнен нами на основании данных о хромосомной локализации 38 общих для эгих видов генов. Из приведенных данных видно," что наиболее,близкими, как и в предыдущих'вариантах расчета, были, два вида - крупный рогатый скот и человек, свинья же.оказалась наиболее- изолированным ' видом. Одновременно мы' отметили тот; факт,что абсолютные значения генетических .расстояний между крупным ро-' гатым скотом, мышыо и Человеком при:использовании в качестве. реперов меньшего числа генов.снижались,' . Это обусловлено тем, что число хромо-

* " » • - ♦ *

comí маркированных ЗЗгенами составляло около трети от их . общего числа. , Вместе о тем, исподьвованные нами ранее 135 реперных генов характеризовали хромосомы всех анализированных видов.

Определенную информацию о xapàwrepe эволюции кариотипов дает изучение особенностей спонтанных хромосомных перестроек у млекопитающих. Наиболее удобным объектом в этом плане является свинья, у которой известно большое число вариантов структурных перестроек. С учетом индуцированных мутаций у данного вида выявлено 122 точки разрыва хромосом, что позволяет провести их статистический анализ.

- Корреляционный анализ был проведен в двух вариантах. В первом случае в качестве. независимой переменной рассматривали длину хромосом во втором длину хромосомного плеча. При анализе связей частоты хромо* сомных разрывов.о плотность» и длиной хромосом было установлено, что частота разрывов положительно коррелирует с длинной хромосомы и плотностью разрывов (табл. 3). , : v . , 3. Коэффициенты коррелятом между частотой разрывов хромосом свмнеЯ, иг длиной и плотность»

Анализируемые признаки . : Корреляции '-," .

Парные, г.. .. Частные

Длина хромосош-частота разрывов . длина хромосомы-плотность разрывов . Частота разрывов-плот-■ кость разрывов : 0,652+0, ITS"* 0,822+0,134**"* о,18в+й,2зг: * 0,891+0,113""V 0,040+0,085"" -0,809+0,147" ° 1'-' ' - - -

р<0.01; - р<о,оог .,'■. - • • .'•. ••• ;' Ч-;

- При случайном 'распределен этот показатель .не

должен коррелировать с длиной хромосош и.частотой разрывов. Фактически же оказалось выполнено лишь одна условие.'. Известно' также, • что ; в случае взаимодействия нескольких факторов парные коэффициенты корреляции дают смещенную оценку связи. ; Пситому ддя: выяснения взаимодействия этих трех переменных мы рассчитали частные; коэффициенты корреляции. Результаты этого анализа показали, • что при постоянном значенииплотности корреляция между частотой разрывов и длиной хромосом сохраняется на-высоком уровне. Точно также сохраняется близкая К единице , связь между частотой и плотностью разрывов, .хотя при,случайном характереих '.распределения она дагжна нивелироваться. Аналогичная картина ; имела место и при расчете коэффициентов корреляции, когда в качестве незави-

симой переменной браки длин/ плеча хромосомы (табл.4). '

4. КоэЗДягмвкты корреляции ывлпу частотой разрывав плеч хромосом свиней, хх дяиноЯ и вжтюстьи .

Анализируемые признаки Корреляции

Парные Частные

Длина плеча - частота разрывов длина плеча- плотность разрывов . частота разрывов-плот-ность разрывов .0,623+0,138**** 0,314+0,164"? -0.207+0,169 0,631+0; 184""? 0,605+0,216*? -0,457+0,222*'

- р<0,05, "*> - р<0,01, *"?? - р<0,001 Результаты статистического анализа свидетельствует о неслучайном распределении разрывов хромосом свиней. Отсюда можно предположить, что; число горячих точек зависит ке только от размера, но и от особенностей химического состава хромосом. Поэтому эволюционные преобразования ка-риотипа нельзя рассматривать как чисто случайный процесс/ На вакоко-мерный характер кариотипических изменений.указывает и тот факт, что у крупного рогатого скота в перестройки типа робертсоноаасого слияния различные хромосомы вовлекаются с неодинаковой частотой. . Исходя из изложенного, становится понятным существование значительного консерватизма в расположении генов у представителей различных видов мленопита*' юдих. Очевидно, перестройки хромосом могут происходить лишь в опрел«? ленных еонах, во всяком случае вероятность их возникновения в других точках значительно реже, поэтому при рекомбинации генетического материала блоки хромосом-, лежащие вне горячих точек сохраняются практически кем«иеннши, что обеспечивает консерватизм соответствующих групп сцепления.: .' .■";■' . . ■ •

3.2.. Рвгультзтм цктогвкетического ¡обследования племенных жкяотких , на носительство хромосомных аномалий * 3.2.1. Цнхагвавдчерко» сбакщшаыие свиней различных пород, в

тайл. б приведены- результаты онтогенетического обследования хряков' этих пород, .Из данных табл. 5 видно, что ни у одного из £20 обследованных хряков не было обнаружено конституциональных аномалий, - связан-^ ных с изменением морфологии и числа хромосом. - Кариотип у подавляющего числа этих животных соответствовал видовой норме. Только у двух хряков: Гранат 8305 (крупная черная порода) и Лютер 1867 (дюрок) в клег-

Б. Цнтогекеткческая характеристика хряка» различных пород ■'- .

Порода Хозяйство Кол-во жив-х Наличие конституциональных хромосомных аномалий

Крупная белдя ГШ "Константинове" - 25 нет

э/х"Кленово-Чегодаево" 29 нет

по породе 54 ■ кет •;. .

Ландраа ГШ им.Цвег-кова 25 нет

э/х"Кленово-Чегодаево , 34 . нет

по породе 63 нет .-.";..

Дсрок П/с'ТиСридный" 31 нет ;■

Крупная черная П/с'Тибридный" 18 • нет ■•...

Уржумская ГГО"Мухинский" 69 ; ■ кет-.

Всего: £20 ' ; ■нет' .*■ " ,

ках периферической белой крови были обнаружены клоны с ' изменениями. в . морфологии хромосом. В первом случае каон.содержал измененный гомолог хромосомы 6. Аномалия состояла в увеличении примерно на 20 ¡С размера этого гомолога за счет длинного плеча.; Во втором, случае в аномальном * клоне отсутствовал один т гомологов 12 пары, но находилась дополни^ . тельная крупная метацектрическая хромосома, не имеющая гомолога а хро-'ыосомном наборе свиней. Частота клонов,о измененными хромосомами соо- д ] тавляла около 30 X. ' . . ':. ■: ;; .

Наличие наркологически измененных кленов не оказало существенного ■ . влияния на воспроизводительные качества хряков. Многоплодие покрытых -'; ими свиноматок составило соответственно "9,6+0,40 и 0,3+0,62, при сред-. ■ нем многоплодии сверстниц по породам 10,4+0,13 и 8,4+0,13. 1 Л* ■ /..

, В уржумской породе нами помимо хряков было проведено цитогенетк- е . ческое обследование 5 групп животных: основные свиноматки, ремонтные . свинки, поросята бёз патологии развития, новорожденные с врожденным искривлением конечностей и недоразвитые поросята; имевшие массу тела '"при рождении менее 900 г. Ни в одной из этих группкоастотуциональках

аномалий кариотипа также не Ото, обнаружено.' Таким образом результаты наших исследований позволят считать обследованные стада свободными от генетической патологии, обусловленной конституциональными аномалиями хромосом. Необходимо отметить , что среди отечественных свиней.к настоящему времени описан лишь один■случай -реципрокной транслокации (Астахова Н. А. ■ игр. 1938). ХОтя в популяциях других стран ; как свидетельствуют литературные данные, эта патология встречается относительно часто среди свиней с различными нарушениями воспроизводительной' функции (Зиз1ау£зоп I. (1086). ' -

Встает вопрос о причинах отсутствия хромосомных аномалий конституционального типа в обследованных нами стадах свиней и о крайне редкой встречаемости этого вида генетической патологии в отечественных популяциях. Причина этого явление заключается в еледушем. Многоплодие свиней, несмотря на низкую наследуемость этого признака, является фак-- тором, в вначитедьной степени определяющим конечную продуктивность свиньи. В отечественной селекции этот признак относился к числу основных и играл важную роль при комплексной оценке животных. В то же время селекция в большинстве стран Старого и Нового света ориентировалась на создание мясной свиньи практически без учета репродуктивных качеств) Подтверждением чему служат приводимые Грудевым Л. II. (1976) и Теренть-евой А.С.(1970) данные о динамике многоплодия свиней в СССР и .за рубежом. В связи со сказанным представляет также изучение распространения* хромосомной патологии у других видов животных. _

3.2.2. Цктогонаткчоскэе обследование крупного рогатого -скота разливших рород.Б отечественной литературе имеются многочисленные сведения о распространенности в ряде разводимых в стране пород крупного рогатого скота робертсоновской транслокации 1/29 №11/29). Поэтому представляет интерес анализ встречаемости ее в стадах и породах, необследованных - ранее. Наш . интерес к подобным исследованиям продиктован еце и тем, что в отличие от свиноводства в скотоводстве практикуются, главным образом, неселекционные методы регулирования репродуктивных качеств. * ^

. При обследовании быков симментальской породы под контроль были взяты зоны,. в которых ранее иитогенетическое обследование быков не производили. Быки калмыцкой породы били исследованы впервые (табл.6).■ В результате проведенного цитогенетнческого обследования установлено, что из 109 быков 92 имели нормальный кариотип, у 5 выявлена роОертсо-новская тралслокация 1/29 в гетерозиготном состоянии и у 2 - химеризм

по половым хромосомам. Гомозиготных особей по 171 1/29 не обнаружено. 6.. Цитагеквтччоская характеристика бшов различных порох

.Порода Хозяйство ■Кол-во■ жив-х Наличие конституционась-ных- хромосомных аномалий

Симментальская ГПГР'Волгог-радское" 52 4 { И, 1/29,69,Х¥ )

ГШГ'Оренбур-гское'' 18 1 ( 1/29,89.« ) 1 ( 60, ХУ/ХХ )

Всего по порохе: 70 5 ( И. 1/29,Б9,ХУ ) . 1 < бо, хк/хх 5

Калмыцкая опх книиыс 18 нет ■'

П/с им. Калинина 21 . 1 .( 60. ХШХ )

Всего по породе; 39 1 ( 60, ХУ/ХХ )

Частота химерных быков среди исследованных нами животных симментальской и калмыцкой порок находилась примерно на одном уровне и составляла соответственно 1,4 и 2,2 X . Носители робертсоновской трансло-кашн били обнаружены только среди быков симментальской породы. Частота данной аномалии по стадам одбмпредп£иятий составила в "Волгоградо-.КОЦ"- 7,71, а "Оренбургском"- 5,6 X; Средняя частота И. 1/29 у быков . симментальской породы' по обоим племяредприятиям равна 7,1 X . . - Анализ родословных показал, что все быки-носители робертсоновской транслокации 1/29' происходили из племенных хозяйств Украины'и принадлежали к четырем линиям..Необходимо отметить, что в родословных 4 из б быков встречался родоначальник линии - Сигнал 4863 ЦС-239.

Таким образом, исходя из результатов наших исследований,. очевидна необходимость обязательного обследования племенных быков в первую очередь,' происходящих из этой линии, разумеется, под цитогенетическим контролем должны находиться племенные животные иа всех линий, в которых зарегистрировано появление хромосомных аномалий. Но полученные данные указывают на то,' что для линии Сигнала 4863 ЦС-239 характерна повышенная степень риска появления рранслокации 1/29, в первую очередь это касается хозяйств; : находящихся в гоне деятельности Волгоградского и Оренбургского племпредприятий. Калмыцкая порода, очевидно, свободна от робертсоновских транслокаций, но в связи с тем, что численность популяции невелика, необходимо осуществление цитогенетического контроля

о целью предотвращения распространения хромосомных аномалий, могущих возникнуть de novo, или интродуцированкых в породу извне.

3.2.3.Цмтоген9тическое исследование овец и кх гибридов со смежным -бараном (Ovis nlvlcola nlvlcola). Кариотип домашних овец, разводимых па территории СНГ, изучен в значительно меньшей степени чем "кариотипы свиней я крупного рогатого скота. В связи с чем нами было проведено Онтогенетическое обследование овец породы финский ланд рас.

Ни у одного из обследованных животных не было выявлено конституциональных аномалий хромосомного набора. Кариотип всех подопытных овец соответствовал видовой норме, В кариотипе присутствовали три пары крупных метацентрических хромосом, 23 пары акроцентрических аутосом и половые хромосомы: XX у самок и ХУ у самцов. Х-хромосома * это крупный гкроцейтрик,. близкий .по размерам к аутосомам первых пар. Y-хромосома .-самый мелкий метацентрический элемент набора.

.;, В 1085 году в БИХе били начаты работы по гибридизации домашней овцы й.. камчатского снежного барана. В огоТКленово-Чегодаево" впервые ■ Сыли получены гибриды Fi от осеменения овцематок породы финский дакд-рас спермой камчатского снежного барана (табл.7). Всего родилось 7 vV 7. Цктагеиешческая характермстжа смежного барана, ломааней • овцы н их псбртщю первого поколения , .

. ■ '* Показатели - ' " »'w ' ...Vi ■ ' - '? Исходные ВИДЫ у Гибриды Fi

Снежный * баран (сьмец). Домашняя овца • (самка) Самка Самец

. Изучено метафаз ,-. 12' • ; 5о . 16 10

•-ЧЧ Л 2N . . 52 .'■* .64 63 . БЗ :

■ NFA :■ ее ; .68 ■ 68 ' 68 -

Состав кариотипа:* ■■ Аутосомы (число):. Дкроцентрики Метацентрики ... 50 ' 42. . 8 * . 62 .5; 48 61 44 . 7 . 61 * .44 " • 7 ..'

Половые.хромосомы: оостав XY . ■■:. .XX - хх ' XY

Морфология:'*.; X .. ■ .. ■ . •'." ■ * • У •• с.;..."*...-..;. . А*. ■ М • •А • * м ;

*) А ^акроцёнтрик j, метацектрик % -r'-'-'-v ,vV.*J.

. -»-

разнополых ягнят. ;Все животные пали в возрасте 3-6 дней. От павших животных были получены препараты хромосом путем кратковременной инкубации клеток костного мовга.' Одновременно исследовали хромосомный набор их матерей и самца снежного барана из Московского зоопарка.

Кариотип снежного барана отличался по числу аутосом и их морфологическому составу. Диплоидное число у него было равно 62, в том числе 4 пары крупных метацентрических хромосом, 21 пара акроцентрических хромосом. ЛТоловые хромосомы, по морфологии были сходны с гоносомаыи домашней овцы. - ''.'•*'■'

У гибридов первого поколения диплоидное число равнялось 63. В от' личие от домашней овцы присутствовал дополнительный метацентрик, ко не хватало двух акроцентрических хромосом среднего размера. Непарный метацентрик был привнесен в их кариотип гаметой отца. Поскольку половые хромосомы домашней овцы и снежного барана морфологически сходны, а число плеч аутосом - НЗД равны, то,, очевидно,.численное различие хромосом связано с центрическим слиянием двух негомологичных акроцентрических хромосом по робертсоновскому типу.

Исходя из изложенного, можно предположить, что одной из причин нежизнеспособности гибридов первого поколения между домашними овцами и камчатским снежным бараном явились различия в хромосомном наборе исходных видов. Это указывает на то, .что оСявательнш элементом при работе по межвидовой гибридизации является еналие кариологических особенностей используемых видов.

" . 3.2.4. Уровень спонтанной изменчивости у различных пород свиной. Анализ спонтанной изменчивости кариотипа мы изучали на свиньях уржумской породы.- Для сравнительного анализа были также обследованы свиньи ,крупной белой породы и ландрас. На первом этапе исследований мы провели анализ'спонтанных аномалий в возрастном аспекте (табл..3,9).

8. Возрастная жарактеристжа спонтанной изменчивости кармотнпа соматических плеток у хряков уржумской породы

Возрастные " • группы . Анеуплоидия Полиплоидия

гипоплоиды гиперплоиды Всего -

Взрослые(л-9) (12-14 мес.) 6,90+0,74 ' 0,67+0,33 7,77+1,22 2.61+0,72

Молодняк (4-6 мес.) (п-36) 10.32+0,92 2,83+0,50 13,16+1.03 2,18+0,14

Данные табл. 8 свидетельствуют, что наиболее высокий уровень еде-уплоидни набдщался у хрячков в возрасте 4- Ь месяцев. Частота полиплоидии с возрастом не меняется. Аналогичная картина отмечена н у свиноматок ( табл.- 0). *

' 0. Возрастная карегсмрнстям споятанасЯ юдеичюостн каряотмш • сомгхжесяих кяеток у шпак уржумской порода

Воерастные группы Анеупловдия Полиплоидия

1*кпоплоиды Гиперплоиды Всего

Взрослые(п-12) (12-14 меа.) 7,43+0,97 1,71+0,42 9.14+1,16 1,65+0.48

Молодняк (4-6 мес.) . (П-65) 0,69+0,67 3.04+0,39 12,63+0.76 2,27+0,11

.л/.. Сопоставление данных табл. 8 и О показало отсутствие различий по частоте анеуплоидии и полиплоидии у хряков и маток. Анализ данных этих таблиц свидетельствует о том. что основным типом аномалий кариоткпа в ' соматических клетках свиней является гипоплоидия.. Гкперплокдвя и по-^ липлоидия встречается в несколько, раз реже.. Необходимо отметить5, что 1 возрастная динамика различных вариантов анеуплоидии у самцов и самок сходна. ■ ■ ••. ■ ~ !-- : ■: . • • ' ■ '

'ками был проведен анализ породных различи^ уровня спонтанной изменчивости у свиней. ■ Для. этого была сопоставлена частота появления клеток о разлшчныыичисловъгми изменениями.хромосомного набора* у ре-, 'мовтныхлрячков пород уржумслай, крупная белая и ланд рас (табл. 10).

Вородоа» характеристика спонтаиноА домеичивосш кариоткпа ооиатячвсяк* кяегяж у.

Породы • . . .; Анеуплондия Полиплоидия

гипсшоиды гиперплоиды ; Всего. -

Уржумская , Гп-Зб). 10,32+0,02 2,83+0,60. 13,15+1,03 2,18+0,14

Крупная белая . (п«20) . •. 4.45+0,70 0.61+0,26 '' ' { „ ' ' ' 5,06+0,79 0,67+0.11 >.

те:-,:' 6,04+0,76 •0,63+0,25 .6,67+0,87 0,61+0,09;.

Свиньи уржумской породы характеризовались более высокой частотой нарушений кариотипа и достоверно отличались по частоте анеуплоидии и полиплоидии от свиней крупной белой породы и от ландрасов (р<0,01). Между свиньями крупной белой породы и ландрасами достоверных различий по этим показателям не обнаружено. Очевидно, частота нарушений кариотипа, обусловленных нарушением нормальной сегрегации хромосом, в определенной степени детерминирована генетически. 8 пользу этого говорит тот факт..что на уровень соматической полиплоидии высокое влияние оказывают индивидуальные особенности животных. Результаты наших исследований, выполненных на свиньях уржумской породы совместно о Завада А.К. (1991), свидетельствуют, что частота полиплоидии в клетках костного , мозга контролируется одним главным геном'. -

3.2. В. Связь спонтаинсД нзиенчмвостн с многоплодием у сзкней. При изучении связи соматической гетеропЛоидии с репродуктивными особенностями свиней нами была проведена серия экспериментов на свиньях уржумской породы. В первом эксперименте изучали связь различных вариантов хромосомных . нарушений . в соматических клетках с многоплодием свинома- ' ток. Оказалось, что между многоплодием свиноматок и частотой различных количественных нарушений существует отрицательная связь. Наиболее четко эта связь прослеживалась между многоплодием и пшоплоидией г—0,61 (р<0,01) и всем комплексе« числовых вариаций кариотипа: совокупный коэффициент равен 0,72 (р<0<05). Сходная картина была отмечена .при анализе связи гетероплоидии у хряков с многоплодием покрытых ими свиноматок: коэффициенты корреляции были равны -0,77 и 0,88 (р<0,01).

Во втором эксперименте изучали влияние уровня'суммарной гетероп-, ^ лоидии у кряков, и возможность подбора родительских пар по этому пока. гателю с цель» повышения многоплодия свиней (Табл.11). <

Данные о многоплодии свиноматок, покрытых хряками, имевшими разный уровень, суммарной гетероплоидии, приведены в табл. 11. В эксперименте было использовано 9 хряков. В среднем 10,2 1 клеток костного мозга' у этих животных несли те или иныэ нарушения в хромосомном набо-. ре. Частота гетероплоидных клеток у хряков колебалась от 6,6 до 18,IX. , С увеличением частоты соматической гетероплохдии у хряков, как это видно .из данных табл.* 11,. происходило снижение многоплодия покрытых ими свийоматок. . Анализ данных показал, что статистически достоверные' ■ различия имеют место между 1 и 3 группами (р<0,05).. Наиболее четко эта зависимость прослеживалась у первородящихсвиноматок. Некоторое уменьшение различий при анализе данных.по всем/покрытым маткам,ч вероятно,"

обусловлено действием выбраковки после опороса иалоплодных животных. Можно предположить, что величина многоплодия зависит не только от частоты спонтанных нарушений в хромосомном аппарате хряков, но и от уров-11. изменение многоплодия маток а зависниости от частоты соматической готорогиюидмм у покрывших ИХ хряков

Показатели Группы

1 2 3

Частота гетероплоидии у хря-. ков (X) Менее 8 ■ 8-13 более 13 '

Число хряков 3 3 3

Опоросилось свиноматок 201 ■ 76 ■ 83

в т.ч. первородящих 43 34 24

Многоплодие: по всем 10,82+0,17 10,56+0,20 10,24+0,28

по первородящим 10,09+0,35 9.74+0,47 8,63+0,54

ня этого показателя у обоих партнеров. Подтверждением этому служат данные, подученные при анализе влияния сочетаемости по уровню соматической гетероплоидии (табл. 12). ■ 12. Зависимость многоплодия от частоты соматической ' гвторопдоидаи у хряков и свиноматок

Группы Число пар Суммарная частота гетероплоидии у родителей (X) - Многоплодие

1 . , 4 Менее 16 12,00+0,88

2 3. 15-18 10,33+1.76

3 6 . Более 18 . - 6,60+0,68

С увеличением суммарной частота гетероплоидии у родителей снижа- -лось число поросят на помет. Достоверные различия отмечены между 1-3 и . 2-3 группами (соответственно р<0,01 и р<0,05 ). Наблюдаемые нами различия в уровне многоплодия у животных о разной частотой соматической гетероплоидии , исходя из предположения о параллелизме нарушений хромосомного наббра в соматических и генеративных клетках, связаны по на-'"

шему мнению с различный уровнем эмбриональных потерь. .Однако ломимо ; рассматриваемых факторов, очевидно, что на величину многоплодия су, оественное влияние оказывает потенциальное многоплодие свиноматок. Из: вестно, что уровень овуляции - у свиней варьирует в широких пределах, поэтому использование на разных матках хряков, имеющих сходную частоту ретероплоидии может приводить к разным результатам. Для проверки этого предположения было отобрано 6 хряков-производителей, имевших низкий уровень соматической гетероплоидии (10Х и менее), и спаривали их со 167 свиноматками, оцененными по,2-3 опоросам. Исходя из данных о многоплодии свиноматок, всех животных разделили на 4 группы (табл. 13).

13. Завнснкосте аффекта использования хряков с низким уровней гетероииювдкя от шюгошвдвя покриш ими свюмшагок

Исходное многоплодие свиноматок П Прибавка к многоплодию Достоверность прибавки

6,00-7,99 \ а 2,44+0,71 р<0,01

8,00-9,99 . 24 1,96*0,65 р<0,01

10,00-11,93 .53 0,86+0,29 р<0,001

12 И более 77 #0,40+0,26 р>0,05 -

Из приведенных данных следует,- что хотя достоверное повышение многоплодия при использовании хряков," иЦеввгик низкий уровень гетероплоидии, наблюдается во всех группах, кроме наиболее многоплодкых свиноматок (12 поросят и более). Результаты этих исследований позволяют предположить, что существуют общие причины, приводящие к возникновению спонтанных нарушений хромосомного аппарата клеток различных тканей, очевидно в процессе их деления.. . -

3.3. Действие антропогенных факторов на хромосомный набор животных 3.3.1. Зависниост» доза-эффект.' Последствия радиационного воздействия на хромосомный'аппарат изучали в экспериментах, проведенных на тотально облученных хряках. Перед постановкой на опыт животные были цитогенетически тестированы с целью .. проверки' на наличие спонтанных конституциональных аномалий и оценки уровня спонтанной мутабильности.

В результате анализа препаратов у облученных животных был выявлен широкий спектр хромосомных аномалий.структурные нарушения были прес-тавлены главным образом хроматидными разрывами и пробелами, -реже встречались изохроматидкые разрывы и обменные перестройки типа дицент-

' риков ' и транслокаций. Значительная часть клеток содержала несколько типов аберраций, поэтому для оценки степени радиационного поражения в качестве основных критериев использовали суммарную частоту аберрантных клеток и среднее число аберраций на клетку. Данные о влиянии различных доз на частоту появления аберрантных клеток приведены в табл.14.' в связи с отсутствием породных различий материалы.по крупной белой породе н ландрасам здесь и далее объединены. - '

Как видно из табл. 14, частота аберрантных клеток в контроле по /всем периодам опыта находилась на одном уровне и была б несколько раз ниже, чем у облученных животных (р<0,001).-На начальном этапе исследования четко прослеживалась вависимость медду числом пораженных клеток и дозой радиации, полученной животными. На 30 день опыта в зависимости 14. Частота клеток со структурным аберрациями у жрякоэ, подвергнутых йейстши» раэкик доз ганма-радмацни, по периодам ■ опита

День опыта Группы опыта

1 2 3 4 5

Контроль Доза (Р) ! л

100 200 300 400

30 3,33 +0,00 . 29.05 +5.18 40,33 +3,04. 49,00 +4,00 55,90

60 ... . 20.42 +3,11 32,33 +4,19 35,45 +2,86 31,33 ±2,34

120 3,33 1В.ЗЗ +2,54 19,63 +2,-86 17,27 ±1.17 ' 19,44 +1,36

160 11 8,33 +0,89 13,33 +1,57 11,67 ±1,51 11,79 ±1.75

360 ' »1 8,00 +2,49 10,00 +1,63 12,00 .+1,70 10,67 ±1.94

от доэы радиации, полученной животными, доля клеток с аберрациями хромосом превосходила контрольный уровень в 7-17 раз.• Однако при этом наблюдался нелинейный характер зависимости доза - эффект. Максимальные различия имели место между контролем и животными, облученными в дозе ' 400 Р (62,6 X; р<0,001). Наибольшее увеличение доли пораженных клеток (на 26,7 X:' р<0,001) происходило при увеличении дозы от 0 до 100 Р. При дальнейшем же росте доаы частота аберрантных клеток изменялась в .меньшей степени: 11,3.X (р<0,05) - между группами животных, облученных

в дозах 100 и £00 Р; 6,7 X между 3 и 4 группами опыта и 6.9 X между'4 и 5 группами. На 60 день опыта разница в частоте аберрантных клеток .между группами уменьшалась, но сохранялись достоверные различия между Z И 3, £-4, 2-5 группами (р<0,01). К 120 дню эксперимента частота аберрантных клеток а опытных группах была практически на одном уровне к превосходила величину этого показателя у контрольных животных в 6-7 . раз (рс0,001). В течении 8 последующих месяцев частота аберрантных клеток снизилась в сравнении со 120 днем только в два раза.

При изучении уровня радиационных повреждений в качестве критерия : их оценки также используют число структурных аберраций на клетку. При анализе различий между группами по числу аберраций на клетку наблюдали картину. Ьналогичную обнаруженной при изучении динамики частоты аберрантных клеток (рис.2).

Таким образом; полученные нами данные свидетельствуют о том, что зависимость доза-эффект имеет место лксь на ранних стадиях после облучения. В более поздние сроки в результате частичной репарации хромосомных повреждений, элиминаций пораженных клеток или иных изменений структуры клеточной популяции происходит кх нивелировка в группах облученных животных. В связи с чем представляет интерес изучение времен; ной динамики радиационных повреждений..;

; : 3.3.2. Временная динамжа радащмоюгах повреждений. С целью они- . - сания' зависимости между дозой . и долей пораженных клеток может быть принята, в рамках определенных ограничений следующая - модель: . dy/dx-«4y), где Ф(у)- f(N-y),; отсюда имеем: Y-M(l-e~kdx) 131. Данная модель в принципе могла бы быть применена, в несколько номененном виде, и для описания зависимости числа аберраций. .Однако и этой случае . встает вопроо об определении числа единичных мишеней в клетке, что весьма проблематично. Поэтому мы фактически ограничились анализом данной модели применительно к числу аберрантных клеток, полагая в дальнейшем; что между этим показателем и числом аберраций на клетку су' дествует статистическая связь. Действительно, в уравнении £31.при N-I, Y-p, где р - доля аберрантных клеток, ; тогда доля непораженных клеток будет Из распределения Пуассона р- m"/ (n 1 ет) следует: q-e"*"

или kdx-m. Отсюда, в первом приближении, можно принять, что эависи-мость числа аберраций на клерку от дозы описывается линейным ураваени-;. ем: Y-kx-141; • ' . .. ' \ , . •;-•.'•'

: ■•.*■(*■ Ядя характеристики временной динамики доли аберрантных'клеток, Л. решая соответствующее дифференциальное уравнение, получаем следующее

Рис.2 Уровень радиационных повреждений у облученных хряков

выражение: Y(t)-Ce~bt (51. Полагая, C-Y(oi и поставив в уравнение 151 значение У из. уравнения 131, при N-1, получим уравнение: Ytt>-(l-e"kdx)e~bt CSi Очевидно, что данное уравнение является аналогом уравнения Г.Блера(19е4): Dm-Dtf+it-f)e"bt] £7J.

Из уравнений б и 7 следует, что с течением времени доля пораженных клеток, а следовательно, • и число аберраций иа клетку уменьшается по экспоненте. Единственные различия состоят в том, что при значении t, стремящемся к бесконечности пределом уравнения С является О, а для уравнения 7 этот предел равен DC, т.е. пропорционален начальной дозе. Полагается также, что скорость восстановления - b пропорциональна величине поражения. Разумеется данные уравнения не позволяют учесть все факторы: предполагается, что популяция лимфоцитов однородна по возрасту и стабильна во времени; но они позволяют дать общую картину динамики радиационных поражений в клеточной популяции.

На рис.з приведены данные о временной динамике радиационных поражений (частоты аберрантных клеток и числа аберраций на клетку) в группах опыта. Эти данные согласуются с представлением об экспоненциальном законе убывания радиационных повреждений со временем. Отмечается также определенная зависимость скорости элиминации аберрантных клеток и восстановления хромосомных повреждений от дозы(табл.15,15). . .': . >.

15.' Средняя скорость влюапацин абвррантнкж клеток у животных, подвергнутых действии разнмх доз гамма-радиации, по периодам omits j

Период , Группы опыта

1. : . 2 i: '3 ;

Контроль Доза (Р. '. v.; ; .г :

> 100, <*гоо: 300 . . . 4оо :

30-60 0 ■•;■•-; .01176 .00737 v .01078 " .01929

60-120 . 0 .. .00179 . .00831 , .01193 .00821

30-120 . о ■ .00611 .00800 .01168 " .01190

120-360 0', .00345 .00231 .00161 .00243 ..

." эо-зео 0; ' .00390 .00422 .00426 .00601 .

В период от 30 ДО 120 дня опыта наблюдали прямую зависимость между , дозой и средней скоростью элиминации аберрантных клеток' а также fмежду дозой и средней вероятностью элиминации хромосомных Перестроек».

— мо еоо в мо х - дом облучения —' ' " <оо * о к

Рис.3'Временная дивеагака радиационных повреждений у облученных хряков . . ■

У

18. Средняя - вероятность элиминации жромостваид аберраций у noothux, подвергнутых действии разных доа гамыа-радиацнм, по периодам опыта

Период - • Группы опыта

1 . ' £ 3 4 6

Контроль Доза (Р . - ■-

100 200 300 400

30-60 0 .01555 .01660 .01420 .02110

60-120 0 .01516 .01846 .01472 .01292

30-120 0 .00863 .01185 .01455 .01565

120-360 ; 0 .00160 .00322 .00080 .00219 .

30-360 0 .00352 .00553 .00457 .00588

После 120 дня опыта характер зависимости между дозой и параметрами» описывающими интенсивность репаративных процессов изменяется. Отмечено также, что со временем интенсивность восстановительных процессов снижается. очевидно, что характер временной динамики зависит не только от процессов, происходящих в популяции зрелых лимфоцитов,' но и от степени поражения клеток гемопоэтической ткани, уровня репаративных процессов в этой ткани, скорости обновления клеточных популяций и наследования различных-аберраций. » |

* - При анализе временной динамики радиационных поражений каш отмечено, что;, начиная со 180 дня с момента облучения, наблюдается выход уровня хромосомных изменений на плато. Интересно, ' исходя из данных о скорости восстановительных процессов также следует ожидать относительной стабилизации уровня аберрантных клеток в районе 160-210 дня. Хотя имевшиеся, экспериментальные данные не позволяют вадать в аналитическом виде закономерность изменения скорости восстановительных процессов от *дозы и времени, hto, основываясь на эмпирических ее значениях, проведи ориентировочный расчет времени, необходимого для снижения радиационных повреждений до фонового уровня. - Оказалось, что минимальное время, необходимое для этого составляет порядка £-3 лет с момента облучения. По литературным данным продолжительность жизни лимфоцитов колеблется от 630 до 1660 дней (Norman А. е.а.,|0бб), что может быть одной из причин длительного сохранения хромосомных аномалий в клеточной популяции.

3.3.3. Уровень соматической гвтероплошрш у Облученных свжноЛ. В связи с тем, что при научении спонтанной соматической гетероплоидии нами была отмечена достоверная связь этого показателя с многоплодием свиней представляет интерес анализ уровня соматической гетероплоидии у облученных свиней. Частота гиперплоидии у подопытных животных изменялась от О до 4 X. Доля гипошгоидкых клеток находилась в интервале от ' 9,33 до 27,33 X.. В контроле в зависимости от возраста доля гкпер- и гипоплондньк клеток составляла оответственно 1,67-3,33 и 14,58-11,ИХ. •Таким образом определенной зависимости встречаемости вариантов анеуп-

-.лондии от дозы и времени, проиедшего с момента облучения не обнаружено. Не было выявлено какой-либо определенной зависимости между иссле-дуемши факторами и уровнем полиплоидии. Результаты нааих исследований . указывает на то, что, в качестве критерия при оценке уровня радиационных повреждений хромосомного аппарата могут служить лишь показатели, характеризующие структурные изменения хромосом. Причем использование . их для .биологической дозиметрии возможно лишь на относительно ранних стадиях. Частота же количественных нарушений,' очевидно, в большей степени зависит от особенностей гемеостаза и при радиационном поражении изменяется неадекватно дозе..

3.3.4. Вхившм раднацнташст повреждения хромосом на рвпрожукт*»-ика качества евннай. В результате облучения спермы ионизирующей радиацией (Коновалов М. А. ,1686) быд получен плодовитый кариологически ма!>-кированный хряк Н 19,. который был использован нами в модельных экспе1 риыентах по изучению последбтвий радиационного повреждения хромосом.

;. ; При использовании в случке с нормальными свиноматками сына этого . хряка, Унаследовавшего от отца транслокацию было . отмечено

снижение многоплодия свиноматок в среднем на 40Х в. сравнении с контролем. Ияогоплодие 11 покрытых: этим хрякам свиноматок составило 7,4+р.БЗ против 12,4+0.17 по двум предыдущим опросам. При штогенетическом обс-' ледовании81 потомка этого хряка было обнаружено два варианта кариоти-па: нормальный й аналогичный кариотипу отца, содержащий транслокацию Случаев несбалансированной транслокации типа частичной три-оомии/шносомии' (38;бч+, , ЗЭ}1Эч-) У поросят'зарегистрировано не было. Очевидно, & данном случае имела место гибель эмбрионов с несбалансиро-'. ванным. хромосомным набором. ^Частота транслокации 6ч+:13ч- у потомков ■ -30.9 X, а в первом' поколении была £5.3 х или 17 из 67 поросят. Слу-:чаев • яесбаАанстаюааягюй трайслокации у потомков также не обнаружено^ а многоплодие маток.покрытия хряком 10, снизилось с 12.4 до 9.4 -

поросенка. 5 средней многоплодие свиноматок, покрытых хряками, имевшими в своём кариотипе транслокацию 6q+;13q-, составило 8,2 поросенка.

С целью выяснения . причин ранней гибели зародышей было, проведено цитогенетичесгам обследование lOсуточных эмбрионов. Количество эмбрионов на 10 сутки составило 53,4 X от числа желтых тел. Доля амбрионов' о нормальным кариотипоы составила 62,1 X от~числа исследованных, а 37,9 X эмбрионов ииели кариотип 33,6q+;i3q-. Случаев несбалансированной транслокации у эмбрионов на 10 сутки развития обнаружено не было. Эти результаты свидетельствуют о том, что у зигот е кариотипами 38;6q+ И 38;13q- происходит остановка развития на ранних стадиях дробления и гибель их к 72 часу развития. Но наблюдаемое снижение шгогоплодия в эксперименте оказалось ниже, теоретически ожидаемого 50 X. Достоверно ниже теоретической оказалась и доля потомков о аномальным кариотшюм (р<0,05). Необходимо отметить, что подобное явление отмечено и для известных случаев споктаккых транслокаций у свиней (В.Н.Степанова, 1984). Исходя из чего можно предположить, что существуют механизмы преэиготической селекции, которые приводят либо к гибели части гамет, несущих сбалансированную транслокацию, либо препятствуют их участи» в оплодотворении. . .

Сравнение ожидаемого многоплодия и частоты рождения поросят со сбалансированной транслокацией по полученный экспериментальный данным подтвердило существование преэкготического отбора, направленного против аберрантных гамет.. При,отсутствии ррезиготического отбора среднее многоплодие' подопытных свиноматок должно сыть равно БОХ от исходного уровня или 6,2 поросенка, : в том числе 60Х потомков должны нести сбалансированную транслокацгао. Фактически получено 8,2 поросенка на опорос, а частота' носителей транслокации равна 28,4Х. Эти величины близки к теоретически ожидаемым при БОХ уровне презигртического отбора, направленного против аберрантных гамет-(р>0,05). .

Исходя из наложенного:можно утверждать, что степень фенотипич^с-кого аффекта у животных, несущих хромосомные' перестройки, исключая те случаи когда перестройка связана с цутациями, приводящими к грубым анатомическим и физиологическим дефектам,. .определяется влиянием двух факторов: детальным действием несбалансированных перестроек и лрезиго-тическим отборш. Возможно, что вдесь действуют регуляторные механизмы, связанные с контролем мейоза,',лнбо же аберрантные гаметы в силу физиологических кяи генетических причин падкость» или частично утрачивают способность к оплодотворенда. Не исключено, что определенную роль

в.процессе блокировки-активации этих механизмов играет генетическое окружение! . Л. , ■•■■.-

1 3.3.8.(ЫпотнетмчестВ анализ последствий интеграции чумерокнш

геноа я геном сальскохоэяАственимх ямватних : 3.3.5.1.Ци1щ«нехжес<да^ кролтов. в.

ходе этих исследований ш провели цитогенетическое исследование ин-такттк кроликов. кроликов, полученных после микроинъекций гена гормона роста быка с одновременной обработкой рестриктаааыи и трансгенного .самца К\28,в геном которого был встроен геа иМП/ЬЗНаи. . ' Кариотнп коптроль ных кроликов соответствовал видовой норме и содержал 22 пари хромосом. У кроликов подученных после микроИнъекцни чужеродного гена при одновременной-обработке рестриктазами также не было выявлено конституциональных аномалий кариотипа., Однако при цитогенетц-ческон обследовании трансгенного кролика Н 23 в клетках различных органов было выявлено два клока клеток, различающихся по числу хромосом. Патогенетическая характеристика тканей трансгенного кролика Н £3 представлена в тайл. 17. : .

17.; Онтогенетическая оценка кролика ш

■'/Ткань;'.' . Исследовано клеток ' -

Всего из них клеток о числом хромосом:

<44 :: 44 .45 - >45

Костный мовг. £5 2 .: з • . • 20 .,;

Лимфоциты • 40- ' 6-; : Ю 25

Фибробласта : 70. - Б 35 - 30-

! V-

; / Частота; клеток, несущих дополнительную хромосому у кролика 28/ колебалась в пределах от43.до 60 X.' Максимальное ихчисло обнаружено а костиом мозге, а минимальное в фибробластах капсулы почки. Для выяснения природыдобавочной хромосомы мы провели дифференциальное' тфажи-^ие препаратов хромосом по Гимза. В результате исследования установлено, что характер! О- исчерчённости хромосом траясгенного кролика совпадает с втаотоА'харагсгертстккой, при этом не было выявлено каких-либо структурных перестроек хромосом. Анализ дифференциальной исчерченности хромосом показалчто формирование шгбна,- содержащего измененный кари-

отип, во. всех исследованных тканях связано с наличием дополнительной мелкой метзцещрической хромосомы, характерным признаком которой является наличие в длинном плече крупного в-позитивного блока. Такой же. блок характерен и .для хрлюсомы 6. '

-.Полученные данные свидетельствуют о том, что клон с измененным числом хромосом, очевидно, возник на ранних стадиях развития организма. Очевидно, что клон с моносомией по б хромосоме оказался нежизнеспособным, так как доля гипоплоидных клеток не превышала 13 X, причем гипоплоидкя не была связана'с утерей конкретной хромосомы. Трксомия по б хромосоме, по всей видимости, не является летальной. В литературе отсутствуют сведения о частичной или полной трисомии у трансгенных животных, однако установленный нами факт в совокупности с данными о дестабилизирующем действии экзогенных конструкций на кариотип указывают на необходимость изучения последствий трансгеноза на хромосомном уровне* - • * • " . . .•

З.е.г.Цктогенетаческая характермотнка траютотшх свиавЛ, При шь

тогенетичесном обследовании трансгенных свиней нами было проведено изучение состояния хромосомного набора у животных, содержащих в своем геноме „ различные экзогенные конструкции. Модальное число хромосом у всех обследованных животных соответствовало видовой норме. Ни у.одного из обследованных животных не было обнаружено каких-либо конституцией налькых аномалий кариотипа..

В результате изучения спонтанной изменчивости хромосом показано, что уровень соматической гегероплоидки у трансгенных животных находился в пределах физиологической нормы. Частота гипоплендных клеток изменялась в группах опыта от 14,0 до 22,Б X, а у иетрансгенных сибсов к свиней из стада экспериментального хозяйства ВИЕа "Кленово-Чегодаево" она была равна соответственно 14,1 и 20,9 х. Доля гилерплоидов в группах подопытных свиней колебалась от О до 2,5 X, в контрольных группах этот показатель равен 1,6 и з,е X, Уровень соматической полиплоидии в опыте составлял от о до 0,8 X' и' также не превышал достоверно значения этого показателя в контроле, структурные аберрации были представлены г.роматвдными к иасхроматидными разрывами. Повышенный, уровень структурных, аномалий был отмечен у двух животных трансгенных по УАР/ЬбН.- Частота клеток с аномалиям» составляла у них порядка 6 X; Однако эта величина не превышает достоверно среднее по породе. ■. . ■

Таким образом анализ состояния. кариотипа у трансгенных свиней позволяет говорить о том, что у данных животных не обнаружено грубых

нарушений кариотипа. Возможно, негативные явления, связанные о интеграцией чужеродных генов, проявляются главным образом у первичных трансгенов. Элиминации их в последующих поколениях способствует искусственный и естественный отбор. Однако это не дает полной гарантии * того, что потомство трансгенных животных не унаследует от предка какие-либо негативные качества, порожденные интродукцией чужеродного гена. Учитывая тот факт, что количество трансгенных животных, несущих "гены интереса" ограничено, степень риска распространения наследственной патологии косегрэгирушей с данными генами сохраняется на достаточно высоком уровне. 8 связи с чем очевидна необходимость всестороннего генетического изучения трансгенных животных и их потомков, включая анализ состояния их хромосомного аппарата.

З.б.Э.Лиалдо ядривкових организаторов (ПОР) у трансгеянмх саояюа. У обследованных свиней число т.е. активных ЯОР варьировало от О до 4,' Отмечено существование морфологических различий ЯОР как между хромосомами 6 и 10, так и между гомологичными хромосомами.; При анализе морфологических особенностей этих структур выявлено два основных варианта: в первом случае ЯОР локализуются на сестринских- хроматидах в -проксимальном районе в виде парных образований, во втором они сливаются в единый блок, расположенный в районе'вторичной перетяжки.

В ходе* исследования было отмечено также существование индивидуального. полиморфизма по числу активных ЯОР на клетку. Доля влияния ин^" дивидуадьности по этому признаку составила 0,7 Др<0,01). Увеличение числа активных ЯОР на клетку происходило за счет активации кластеров рРНК на хрсшооые 8, не было зарегистрировано 1$и одного случая выявления активных ЯОР на хромосоме ii&. В табл. 18 приведены данные о частоте встречаемости клеток, несущих активные ЯЗР на 8 хромосоме.

В среднем у контрольных животных 11,28+5,01 х несли активные ШР-8, тогда как у животных, трансгенных по генам соматотропкого каскада частота их составила £3,02+3,68 . 2( р<0,06). ' Соответственно и среднее' число.ЯСР на клетку составило 1,07+0.06 к 2,14+0,04 (p<0,0ö). Очевидно, этот показателе в определенной степени свидетельствует о ' различиях в интенсивности' обмена веществ.. В связи о изложенным представляется возможным использовать окраску ЯОР ааотнокисльы серебром для тонки состояния генов,, контролирующих- синтез рРНК, в качестве теста при изучении модифицирующего влияния генов соматотропкого каскада на активность собственных генетических структур реципиента.

18. Частота клеток с различит числом атмвииж ЯОР в группах обследованных омнвЯ

Группы Среднее число ЯОР на клетку Доля клеток с активными ЯОР-8

Контроль:

1 хозяйство 1,83±0,03 7,41+4,12

2 сибсы и полускбсы , 2.02+0,07 13,94+7.34

Трансгенные;

1 RHGH ' 2,16+0,06 • 23.24+3,08

2 WAP/hGH , 1,93+0,04 10.17+3.05

3 RHGH и WAP/hGH 2,18+0.10 33,19+12,64

После мккроинъек-ции гена в-интер-ферона 1,03+0,05 ' 7,84+0.27-

в т.ч. N за 1,80^0,06 . 7,66+2,37

Потомки хряка 38 ' 2,06+0,01. 16,61+3,09

. 1

ВЫВОДЫ

1. Разработан статистический метод оценки степени ьидовых рагли-, чий в организации генетического аппарата; основанный на сравнения гей-, ных карт.. В организации наследственного материала шаотшх равных Bit-дов существует определенный консерватизм, проявляющийся наличием стабиль кух групп сцепления генов, что свявано с неслучайной локализацией разрывов хромосом в "горячих" точках. Анализ генных карт ряда видов животных показал возможность'использования данных о хромосомной локализации генов для оценки кариотипических различий, что может быть использовано при изучении кариотипической эволюции и анализе филогенеей.

2. Частота встречаемости хромосомных транслокаций у животных зависит от видовой, псродной к линейной принадлежности. В популяциях симментальской породы частота встречаемости робертсоновской транслокации 1/29 составляла ст 6,5 до 7,7 процента. У быков калмыцкой породы не. выявлены носители этой аномалии.: Наиболее часто транслокация г 1/29 встречалась в линии, быка Сигнала 4863 НС-239 симментальской породы. ,

Отечественные популяции свиней свободны ох носительства различных вариантов транслокаций. Различия между этими видами/очевидно, свяваны о разными подходами к проблеме регуляции воспроизводства практикуемыми в свиноводстве н скотоводстве. При обследовании овец породы финский ландрас не обнаружено случаев конституциональных перестроек кариотипа.

3. Кариотип камчатского снежного барана- (Ovis nivlcola nivlcola) в отличие от домашней овцы (Ovis arles) содержит 26 пар хромосом. Различия в кариотипах этих видов свяваны с наличием у камчатского снежного барана дополнительной метацентричесной хромосомы, возникшей в результате центрического слияния двух акроцентрических хромосом среднего размера. Показано, что межвидовые кариотипические различия могут приводить к снижению жизнеспособности гибридов первого поколения.

4. В опытах с использованием потомка наркологически маркированного хряка-радиомутанта, показано, что снижение многоплодия свиней в случае реципрокной транс локации вызвано ранней гибелью эмбрионов. не^ суших несбалансированные варианты тракслокацин. Степень фенотилическо-го проявления хромосомных перестроек типа реципрокных транслокаций у свиней зависит от . летального действия несбалансированных вариантов транслокаций и уровня през«готического отбора,.- направленного против: аберрантных гамет."

5. 6 результате нарушения нормальной сегрегации хромосом в сома-..: тических клетках возникают , различные варианты с измененным числом хр^г мосом: анеуплоидия и полиплоидия. Установлена отрицательная связь между частотой спонтанных нарушений кариотипа в'соматических ^детках р уровнем репродуктивной функции у свиней. Показана1 возможность регуляции многоплодия, свиней на основании . их отбора и подбора по уровню спонтанных нарушений в кариотипе соматических клеток. ' . ' -' '

.."*'_ 6. Решшрокыые и робертсомовские транслокации обладают неодинаковой адаптивной значимость» и имеют разную фенотипическую выраженность. Профилактикахромосоыной патологии должна строиться с учетом степени генетического риска,: связанного с характером хромосомных перестроек и комплексной оценкой племенной и продуктивной ценности.животного. ;

7. тотальное облучение свиней в дозах от 100 до 400 Р приводило к появлению в лимфоцитах широкого.спектра структурных перестроек хромосом: пробелы, разрывы хроматидного и изохроматидного типа и обменные аберрации», частота которых пропорциональна дозе.- Скорость элиминации индуцированных радиацией аберраций зависело от дозы и времени прошедшего со времени облучения. Время репарации составляет около 2 лет. .

е. ЦитогекетическиЛ анализ кролика - первичного трансгена по -*. конструкции гЫТ-l/bGHatl показал во всех исследованных тканях наличие -клона клеток, несущего дополнительную хромосому б пары, что возможно связано с дестабилизирующим действием экзогенной конструкции. '

е. На основании анализа ядрышкоорганизующнх районов усвиней, ' траясгекных по генам сонатотропного каскада (ГШ! и VAP/tiGH), отмечено достоверное увеличение числа активных кластеров генов рРНК на 8 кромо- ■ I соме. * ;

10. Взаимодействие экзогенных конструкций с геномом реципиента ; имеет ряд проявлений: генетическая трансформация, инсерционный мутаге-нев, структурные и количественные нарушение кариотипа, модификация активности собственных генов организма .и различные их сочетания, что снижает предсказуемость фенотипимеекого ответа при трансгеневе.

у ПРАКТИЧЕСКИЕ ВРЕДЖОШМ •

. 1. В соответствии с законом Российской Федерации "О племенном жи- * вотноводсгве" наряду с - иммуногекетическим тестированием кеобходкио проводить онтогенетическое обследование быков-производителей на носи-тельотво робертсоновских транслокаций в породах, являющихся резервата- ' ми хромосомных аномалий, а при импорте свиней европейских пород на но- • сительство реципрокных транслокаций, Импорт семени указанных видов -скота должен сопровождаться цитогенвти^еским паспортом.

' 2. Проводить обязательный цитогенетический контроль испольвуемых производителей для профилактики распространения'различных хромосомных аномалий в стадах, находящихся в зонах радиационного загрязнения.

3, При проведении работ по трансгенезу в качестве тёст-систеш использовать цитогенетический анализ для диагностики хромосомных мутаций и цитохимическую оценку активности генов рибооомкой РНК, участвую- .* now в синтезе белка. ' ■..

список опубшпшнпк работ по teje диссертации _

1. Кленовицкий n.U. Связь соматической гетероплондии хромосом с плодовитостью свиней // Бюлл. науч. работ ВИЖ.- 1082.- В.65.- С.19-21.

2. Кленовицкий П.М. спонтанная изменчивость хромосом плодовитость свиней // Сб.' науч. труд. ВИЖ.-, 1986.- В.78.- С. 10-11.

СМирнов О.К., Гольдман И.Л1. Живалев И.К., Кленовицкий П.М. и др. Методические рекомендации по цитогенетическому исследованию сельс-

нехозяйственных животных;- Дубровины.- 1Ö86.- Бб с. , .

' 4. Смирнов O.K., Живалев И.К., КленовицкиЙ П.М. и др. Кариотипи-; ческое исследование азиатского снежного барана, домашней ■ овца и их гибридов // Валл. иауч. работ ВИЖ. -1806.- В.87.- С.16-20.

Б. . Джапаридзе С.Т., Гольдман И.Л., Коновалов М.А., КленовицкиЙ П.М. и др. О цитогенетических причинах нарушения воспроизводительных способностей свиней //.Сельскохозяйственная биология.- 1088.- N 4,-С.127-120. ,

в. Смирнов O.K.,' КленовицкиЙ П.М. Джапаридзе СЛ. и др. Цитогене- . , тическое обследование свиней различных пород // Мат. п-й Всес. конф. по цитогенет. с.-х. ж-Х.- Л.- 1989.- С.68-71.

7. Смирнов O.K., КленовицкиЙ П.М.,Завада А.К. и др. Роль генети-. ческих факторов в формировании полтйгоидии у свиней // Маг. И-й Всес.

.конф. ПО цитогенет. о,- х. ж-х.- Л.-1989.-С.72-73.

8. Смирнов O.K.^ КленовицкиЙ n.M., Кобндэе И.Г.Нэменчивость кари, отипахряков, подвергнутых гаммаоблучения // Tee. докл.' Itl-й Всес.

конф. по с.-х. радиологии- Обнинск.- ВКИИСХР.- 1090.-. С.120-121.

9. КленовицкиЙ П.М., Завада А.Н. Генетический контроль уровня со- . 1 ыатической полиплоидии у свиней // Тез. докл. IV-Й Всес. конф. по эколог. генет. рэст., х-х и чел,- Кишинев.-"Штиинца".- 1991.- С.128.

10. Илюшина И.А., Коновалов М.А.,' КленовицкиЙ П.М. Распространение робертсоновской транслокации 1/29 в стадах крупного рогатого скота . // Тез; докл. 1У-й Всес. конф. по эколог, генет. раст., ж-х и чел. -*К|ягинев.-"Штш!НЦэ".- 1991.- С.265.

11. Горяев Г.Д., Смирнов O.K., КленовицкиЙ П.М. и др. Результаты цнтогенетического обследования быков производителей калмыцкой породы//

- Об, науч. труд. КГУ.- Элиста.- 1991.- С.32-34.

, .*; , 12.Гольдман И.Л, Эрнст Л.К., Гоголевский П.А., КленовицкиЙ П.М и . др. Исследование экспрессии гена гормона роста крупного рогатого скота ' у кролика, трансгенного по генной конструкции гМТ1/ bGHatt, содержащей : MAR (Matrix Attao hment Region), элемент // Доклады РАСХН - 1993.- N1.

- С. 68-71. • •

13. КленовицкиЙ П.М., Сергеев Н.И. ,/Завада А.Н.- и др. о случаях нестабильности кариотипа трансгенных животных.// Молекулярная генетика к биотехнология в оценке геномов сельскохозяйственных животных.' Материалы симпозиума.-. С.-П.-Пушкин.- 1984^-0,23.

: 14. КленовншФй П.М., Цветкова т.Г. , Гоголевский П.А. Дифференци-; альнаяокраска н анализ кариотипа домашнего кролика V/. Молекулярная генетика и биотехнология в оценке геномов сельскохозяйственных живот--4ных.-Материалы симпозиума,- С.-П,-1№«ин.-' 1994.- С.84-85. /. .■'■'. * 1б. Джапаридэе С.Т.;Кленавицкий П.М.; Кобндэе И. Г. Анализ последствий радиационного. воздействия на хромосомный аппарат свиней // ^ Билл..науч. работ ВИЖ.-В.. 109.-1994,- С.84-88. ' -

16. Кленовицкий П.М.,Ыиталлштова M.U., ЦветковаТ.Г. Анализ дифференциальной структуры хромосом у кролика, травсгенного по гену irMTl/bGHatt // Билл. науч. работ ВИЯ,- B.109.-19Ö4.- С.80-83.

17. Кленовицкий n.M., Завала А.Н., ЖивалевИ.К. и др. Ядрышкооб-разующие . районы у - трансгенных свиней (шТ-l/hGRF) // Генноинженерные с.-х. животные. Об. науч. труд..- В.1.- M.- 1905,- С.64-68.

18. Марзанов Н.С., Кленовицкий n.M. Сравнительный анализ некото-.. рых генных карт // П-я международная конференция "Молекулярно - генетические маркеры животных". Тез. докл.- Киев.- 1996,- С.16-17.

19. Завала А.Н.. Кленовицкий n.M., Захаров В.М. Хромосомные аберрации у свиней // П-я международная конференция "Молекулярно генетические маркеры животных". Тез. докл.- Киев,- 1096,- С.82.

. £0, Кленовицкий П.М., Завала А.Н., ХСивалев И.К. и др. Полиморфизм ядрышкообразувдих районов.(ЯОР) у свиней // П-я международная конференция "Молекулярно -..генетические маркеры животных". Tea. докл. - Киев. - 1096,- С. 83-64.

21. йивадев И.К., Кленовицкий П.М., Шайдуллин И.Н. Патогенетическая характеристика Ovis arles, Ovis nlvlcola ntvlcola и их гибридизация Fl // Первая Российско-Украинская конференция "Проблемы сохранения редких пород домашних животных и бливкородственных диких видов". Тез. ДОКЛ.- ПуЩИНО.- 1996.- С.10-20.

Тиг.ГНИИ НПО "Луч". г.Полольск.Моск.'обж. 3«к.»б6.Тч».80вк8.2уо*.и.л..

t

' Г