Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние эндогенных тканевых метаболитов на рост и обмен веществ у животных

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние эндогенных тканевых метаболитов на рост и обмен веществ у животных"

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА

На правах рукописи ДЕГТЯРЕВ Игорь Владимирович

УДК 636.32/38 :591, 132,: 577.15

ВЛИЯНИЕ ЭНДОГЕННЫХ ТКАНЕВЫХ МЕТАБОЛИТОВ НА ТОСТ И ОБМЕН ВЕЩЕСТВ У ЖИВОТНЫХ

Специальность 03.00.13 — физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 1992

Работа выполнена на кафедре физиологии и биохимии сельскохозяйственных животных Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева.

Научный руководитель — член-корреспондент ВАСХНИЛ, доктор биологических наук, профессор Георгиевский В. И.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Вракин В. Ф., доктор биологических наук, профессор Медведев И. К.

Ведущее предприятие — Всесоюзный научно-исследовательский институт животноводства (ВИЖ).

Защита диссертации состоится «/3» . . .

1992 г. в «¡Ц » часов на заседании специализированного совета Д 120-35-06 Московской сельскохозяйственной академии им. К- А. Тимирязева.

Адрес: 127550, Москва И-550, Тимирязевская ул., д. 49. Ученый совет ТСХА.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ ТСХА.

Автореферат разослан » .^Сг/).*|ГГЧ- . .1992 г.

Ученый секретарь специализ1

Т. М. Подколзина

K'tnpr ■

¿ih-4- . " ■ ■

OríS.'i i '

I. ОЩШ ХАРАКТЕР® "ША. РАЕСШ I.I. Актуальность теми. В решение проблема увеличения производства продуктов животноводства и повышения их качества важная роль принадлежит зспользиэашш новых технологий, • базирующихся па использовании научных достижений. Существенным фактором повышения предук- ; тявиости кивотных и поддержания удовлетворительного состояния пх здоровья, особояло в условиях нестабильной кормовой базы, является применение различных биологически' активных веществ и еттгуляторов, позволяющее увеличить товарность цротзводетт бел раемтрэдая кормовой .. бази я стада.

Биостимуляторы позволяют направленно влиять на обменные процессы в оргатизмз и тем сашм способствовать ускоро/ш> роста, улучшению воспроизводства поголовья, швншнта степени но пользования питательных веществ кормов, естественной резистентности г продуктивности животных. Причинениз биологически активных препаратов особенно эфгТек-tííbho в условиях крупного промгалинного кивоп-шв детва, когда существенно ызняются условия обитания кивотных я возникают стрессовые си. туапди. Поиок надежных я безвредных дет ташотнык и потребителей ;.:я-. са и шлока биологически активных вэвдетв, расти-фовка механизма их влияния на организм, определение оггашальгшх дозировок и способов применения без нарушения технологии содержания скота - одна из актуальных проблем современной физиология.

В .связи с этим в последние годы вналшле ученых голвяэлагот биогенные стимуляторы эндогенного происхождения и, преяде всего, препараты - естественные метаболита тканевого об№на(Богомолэц А.А.,1942; Беленький Н.Г.,1988; Георгиевский В.И., Муравьев Ü.H. з др.,1986, 1983, 1989; Калаинпк И.А.,1979,,В83; Мозгов U.E., 1984,1985; Филатов В .П., 1950; Шамберзв Ю.Н., 1971,1985,1988; Щедрин З.Л.,1986 и др.)

Диссертационная работа выполнена в соответствии с пшюм Hí!P ТОХА по теш: 02,02.01.ДЦа-3"Разработка методов очистки л щшги.Гякл^ди,

- г -

изучение структуры, физиологическое тестирование и продуктивный э!>-$е:ст тканевых биогенных стимуляторов". ■"•/." ■''■.■•

1.2. Цель я задачи доследовании. Целью работы являлось .дальней-'. шае изучение.продуктивного влияния тканевого биогенного стимулягора-йюстила-2 и механизма, его действия .на организм животных; соверланот-вование ¡.ютодикя получения и использования препарата,разработанной ранее на тТедрз ¡Тдалолоии и (кояшш аавотных Московской сельскохозяйственной академии им, К.Л. Тящрязева(аБт.свцд.^ 1394518,1986 ' и 3Ü735SS/I4, П-68), ' ; • v.

В соответствии о этил были поставлены .следующие задачи: .

- усоБетэнствовать способ-содержания животных-доноров и.метод, осработки тканей с целью повышения конечного выхода активных эвдо-гокшх ыагас$сштов; ' ' . •• •. .-

- тестировать гфепарат на лабораторных'животных,с одновременным определением оптимальных доз; • •

1 - ивучить ростстшулирующее действие' препарата; . '

- определять свойства (Зисотила-2 при тогс.гческом воздействии ка-, оргаадзм,¡¡иботннх;' ■■ ' ' .■•'■:'"'

- выяснить елияииэ препарата ва работоспособность животных; .

- изучить влияние биостяяа-2 на ойшк водрств у грызунов и квач-?' них животных, а так® некоторые .стороны механизма его действия на организм;' . ' ■ .- ,' .• _.

- испытать бностил-2 яа растущих ягнятах В хозяйственных условиях.

1,3; Научная новизна. Впервые был получен и испытан, в качестве/

ростстимулируадехо препарата оригинальный эндогенный анаболик из " тканей животных', предварительно подвергнутых одновременным гипотарш-ческим и алишктарным стрессовым воздействиям.-Расшифрованы'накоторые стороны ф1зяо)югнчос;:ого ьвханизла aro влияния на обмен веществ, реаистеншость и •работоспособность организма. '

1,4, Практическая дойность. снэтэниа рабств состоит в возможности применения в качества стимулятора роста очищенного препарата из ткв-

ней стрессировадных животных. Установлена оптимальная лоза йлостила Г...2 мг. на I 1er массы растущего животного. Разработала технология его применения,

1.5. Апробация работы. Материалы диссертация долоданы:

1. На Всесоюзной коя;Т<эроиции по ^изяалогап продуктаглык яввоодк (Тарту. ISS9).

2. Яа конференция молоди ученых;- СГОХА,1Лосява, i?90 г.),

3. Ma кояйоренцип молодых ученьпе и специалистов (ТСХА.ГЛзскт, 1991 г.).

По тэт,19 диссертации опубликовало 2 работ.

1.6. Объем работн. Диссертация состоит из внодевяя, обзора литературы, материалов :ï катодов лсс/юдова<гии, результатов ягсладова-ний и их обсуздекия, зшикяотм, шподов,- гредлояеняй;

Диссертация изложена яа 125 страницах мииношсяого текста, содержит 22 таблицы. Список литературы включаяг 313 гта:гшногачяй, в том число 58 на шостраяных языках.

2. ССБ5Ш1СТВШАН1В ¡ВТОШИ 1ЖШ1,И ПРЕПАРАТА УСЛОвЖ 1РО?Д7!?М1ф1 ОЖТА

2.1. Технологяя лабораторного гота!зводсгза дтцогэчного тдаяово-го препарата. Для получения л очистка тканевого препарата, пригодного для дарэятералыгого введения жгвотным, бшст щм^знены моди'Ха-гшроватньгв яа'/и мэтодакч яодготевм доноров я ввделеняя из тканей фязяологячоски актдвяых вощеотв (ЙАВ), которые в общем гоше изложены в оригинальной работа (Георет-звсшй.З.И. я др. ,1938).

Яизиояоютвскя активный препарат с ростота1у4ярувииш сюЗстваш бал шлучвя из туше в яягоишх, подвергнутых в конце зтк алишятар-яоку, гяпотэрмггчеокому оорэссаи л предубо^яому яяркозу.

Для экспериенгальных ¡1 лролзводствеяншс целей препарат изготовлен в сбогвотствет со слэдуикрй пржщагыачьноИ схемой:

_ Ii. ..

А. Подготовка ¡лтоткых-доноров Б. Получение препарата SAB

1. Убой КЙВ01'1ШХ

2. Гомогенизаций тканей

3. Освобождение витякяи от липвдов, белков, нуклеиновых кислот и полисахаридов.

Осазсдзнке биологически активных веществ из растворов.

5. Перевод биологически активных веществ в устойчивую форму -пороиок.

6. Ампулировелме препарата.

7. Стандартизация препарата - определение состава и активности. В связи с тем, что активные метаболиты в теле образуются в '.каких

и при обычном решите содержания кивотньи, но в меньшей степени, чек в вкогреыальшх условиях, нами был отработан рекии'питания, теапэрг-lypji обитания и убоя крис-доноров, при которых ФАВ образуются з мак-сииальноы згаличоотъо. •

Зколериыектщ-лно установлено, что наилучший гехнологический эффект обеспечивало хорошее саратовое до риленив, затем голодание (без ограничения поараблзки воды) до потери массц зела на ЗС$ от исходного уровня ц последующее охлаждение наркотизированных ягавотнях в специальной термокамере - 15.... - 18°С.

Фара приготавливали, из яунек крыс Oes ,трубчатых косней а челвсае'Л, "■хани нзмельчали с поыошм иясорубки и гомогенизатора, ц заливали ра-сгьором 0,1 е KCl. ймгракцив производили в холодильнике. Плотную чао-ъ из oi'v-cii удаляли центрифугированием при 55ÜO об/мивД5 нал. Осы-док обрабатывая погзорко. Еадосодочяув жнд*оо$ь оемзбоадали от бол-

нуклоашиас кислот и лолкоахаридов 20??-гш раствором КОН до pH« , « 5,25, Осадок отделили цеяяряфугированиеи.

Биологичеоги-э вскоотва as кадоовдочаой аедчости гидежши при pH а а 10,Ъ кугзх' нра&игшая 15^-ного р&огпера ашкака. ВкпаишаЁ гвлаобраз-

шШ осадок 'Ш о помощью кислого ацетона очицали от амлиака и избытка влаги и центрифугировали. Осадок диске рттров? ли и пятикратном объеме спирта-рзктификата.

. После очистки порошок в ацетоне растирали в ступке, вксуиивали в вакуумном сушильном юкафу и запаивали в ашулн.

Выход'препарата биосглл-2 составляет ополо 0,3^ от зеоа гошгвнизи-роважюи ткани.

Испытанный гпдорошдай зиабо.тлк л своем соотедо оод-зг.г.ал: 2,0 .... 5,0 поды, 95,0...58,0/3 сухого взцества, 3 2оп ч/еле - неорга-

нически веществ. В раочсге на сухое яецесгзо в т/шарат-з содерзагся ($) - пептиды. - 3,0.-.10,0; полаамиш - С,5.п.;),7; сЕоб->длнв анкяо-вполоях - 67 ,4...77,0; адеяопич - 0,3...1,5; с<Ичру1®»ш глпггоза -- .20,0...50,0 км , •яа-,>тча5 - 30.0-40,0 заз; ипооззояйнгм ю

Тагсяк образом, оргогптюе 'зссузгао - 2 на 1-5,о пргдстаэ-

лено пептидами я а^итпсгогаик. В процент« с? ашншкглот па долю рлугзгвномй тдож иряход^гоя 24,0, астрогзяовоЯ - II,Т, ля-' агагз - 9,5, штвоииьа - 6,7. ^.пклллпгюш - 2,1. плргзаяа - 1,5, гкс-г-адяна - 1,1, арг;ш:.ча - 5,6, лейедша - 8,1, к.чяейцша - 3,1, диете- ' ина - 1,'+, греолина - 3,0, «врала - 3,6, вгиктз - 2,8, шяияга - 5,4, гляцяна - 5,9, «мояяролина - 5Д (дванае полу-7-¿.Г. <&г:ряог!.я).

•3 бпост иле -2 не обнаружена белки, пуклэкксч'о кяозохи, лпгг';ш, белковые и свободпыэ горшни, лростаглаялвм'. "го аютлкку наосом ЯЗЛЯШСЯ НКЗКЗ!ЮЛ5ИуК'Яр?ЫО зецз-лзэ.

Первичная бяологичсстсая акцизноегь лрепвравл зпр-здзждоь ча ггест-обгектах! изолкроваинои о е ряда, кишечнике), катке, длбораторякх згигот-;шх (г.о силе я часгогс сокрагтзигзй).

2.2. Методияа я условия. опкгов. Изучение зягснвд препарата на обмен вепеезв и рос™ яивоеных приездено л соответствия со ¿хомой (тэблЛ),

Таблица I

Схема исследования физиологических свойств биостила-2

К№ • 1Лол-во] животные Г

овд- I групп -кид , 1к0д.Б0 ■ 1 тов » 1 , |Б группе|

1

Изучаемая функция "I \

• .. , - |

Показ атели

I.

5.

6,

ь-

Мши • Крисы

10 " 10

30 Мшш 10 крысы ю.

2 Кролики 6

5 Шши • < 10

б, Ишя

Крысы

2 Крысы

г, овцы,-.,

I , ОВЦЦ :

10

10

Ю

8' 3

Актив кость и дозировка Динамика живой ' препарата и его компо- массы и-обмена вентоз веде ста

Стимулирующее действие препарага на рост организма .

Стимулирующее действие на синтез белка и роот клеток

Снятие анаболического эффекта оз.фюсюа ; при ингибировашш биосинтеза белка,ДНХ,РНК :

ОДэбилизадиг защитных сид.при, инъекциях- . бйооиша .

Допинговый аффект при введения биостила

Влияние препарата на пищеварение-и обмек веще см.

Динамика живой иассы

Гешглобинооб-разованиа к-вритропоаз

Прирост кивой маосы

Выживаемость животных при. интоксикации нитритами •->.

Динамическая и стати:.: чзская работоспособном!

Потребление кор--ш,переваримость и испошзование .. питательных веществ.Тканевые ■ метаболиты,горко-ш.. Нлинико-гем&зо логические. пона-.эателк.Прироот,-адюй массы.

3

Все исследования на животных проведены по методике, обеспечивающей сбор информации при соблюдении принципа, действия изучаемого фактора, в качестве единственного различия. Формирование подопытных групп животных осуществлялось'.йз генетически однотипных; одногнездовых' пометов- кистей, крыс, кроликов и овец романовской породы. Животных со- ' держали в'клетках и станках в условиях -вивария и Капинской овцефер-кн ВНШИЗ С использованием типовых рационов-кормления и"свободного доступа к воде.

''Животным испытуемой группы раствор биоотила вводили: грызунам -подкожно, жвачным - внутришпечно, в основном итз расчета I...2 мг на I кг айвой массы, контрольной группе вводили физраствор в адекватных дозах.

■ 0 физиологическом состоянии яизотннх зудили по клиническим признакам, поедаемоози кормов и изменениям живой массы.

Ростстимулирувдее действие биостила было определено предварительно на растущих шшах по менгрупповой разнице в среднесуточном приросте массы' тела.

Стимулирующее действие препарата на синтез белка и рос? клеток изучалось в опыте на 12 кроликах с искусственной постгеморрагической анемией, вызванной однократным кровопусканием. Сразу после отбора крови, кроликам опытной группи вводили бяостил в физрастворе, контрольной -физиологический раствор. Об интенсивности синтеза белка и образовании клеток судили по групповой разнице в восстановлении уровня гемоглобина и эритроцитов в крови через каждые три дня, до установления исходного фона.

Для подавления белоксинтезируявдй функции и частичной расаифров.чп механизма действия биостила в, опытах на юсах были применены инъекции ингибиторов синтеза белка, ДНК и РНК - циклогешшпда, оксииочевшш, акяиноиицина Д, подавляющих в организме соответственно процессы транскрипции, репликации и трансляции.

Доза тканевого препарата 0,1 иг всем животным, актиномицина Д - , 0,1 мкг, цикиогексимида - ОД иг я оксимочевшш - 0,1 мг на I мышь соответствующая иопкгуешк групп. О депрессии биосинтеза оудяли по межгрупповой разнице в приросте пассы еивотных.

Мобилизация защитных сил при введении тканевого препарата была выявлена в опытах на иыаах специально отравленных нитритом натрия. Через 5-6 часов после введения биостила нивоткым инъецировали нитрит натрия 200 мкг/г (ЛДз0) и 300 мкг/г пассы (JIÄjqq) . Подсчет внниваих иышей определяли за каждый чао. • ■■' ; ' :

Допинговый аффект от применения биостила был установлен на кры-оах г,-, показателям статической (по времени удержания на шесте) и динамической (при беге на третбана) работоспособности по Шилову A.A., ' Маркину A.C.,197?.

Изучение влияния на роот vi обиен веществ, инъекций эндогенного анаболика, •полученного от-грызунов-доноров, была.проведено на уолодняке сельскохозяйственных животных и, в частности, на ягнятах романовской порода в условияг летне-стойлового содержания. Опыты по изучению пере-■ вэ^ииости питательных веществ проведена по методике• ВШ, анализ кормов и акскрёнентов - обцаприняшии методами зооанализа. ' ■

' Содержание гемоглобина определяли по методу Сади, эритроцитов и -. лейкоцитов - по Горяеву, гематокригное число - по Тодорову (1961); СОЭ - микрометодом по Панченкову (1972), белок - биуретотой реакцией по Кеньяйковой (1973), траяоаыиназнув активность - по прописи Насхи-ной (1965), альбумшш, глобулины - по Лукичевой и др.(1978), липопро-5еидц - по Буитейну в прописи Дедвина (1987), оахар - по Саиодхи. Горлов роста и лролактин определяли радиоиымушшм методом в лаборатории Бвдокринологии ВНШРГЯа.

Аминокислотный состав определен хроыаюграфическим иегодом на ав-юматическои анализаторе в биохимической лаборатории ЮТ. Цифровые данные подвергнуты бжшотрической обработке да. прописи МеркурьевоЁ (1970).

.. g _

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБШДШЕ

3.1. Влияние биоотила-2 и ого когстонэнтов на рост лабораторпых жтаоутах. Сведения о влиянии инъекций биостила на скорость роста неполовозрелых шией в зависимости от дозы препарата приведены в табл.2. ' • ■ ... Таблица 2

Тестирование ростстииулпрующего действия бкостгаа-?. на мню ах

Группы .¡Доза

Живая масса, М+т

Прироот массы

животных, п=Ю ¡препа- -|рата,мГ| исходная j ! через 10 1 дней - |за декаду,г j в Г»

I.Контроль 0 11,8+0,8 18,3+0,9 6,5 Г00,0

2.Опытная 0,01 . 11,8+0,6 18,7+0,9 6,9 106,2

3. -' " - 0,10 II, 7+0,7 19,3+1,2- 7,6 116,9

А. -" - 0,20 11,8+0,5 19,2+1,0 7,4 . 113,8

Анализ динамики роста нивотных свидетех'ьстпуот о той, что биостил з. дозе 10 мкг на I голову обладает заметной биологической активностью. С увеличением дозы препарата до 100 ьпкг счниулирующий эффект от экстракта из тканей стрессированкых пивотннх достигает максимума и превн-яазг контрольный, показатель на 16,97». Далхнсииоз увеличение дозы препарата до 0,20 мг такие стимулировало скорость роста шшей, но среднесуточный прирост был несколько ниже, чем у'-шиотявх третьей группы. Приведенные цифровые данные указывают на то, что Препарат в дозе 0,010,20 иг вызывает заметное ускорение роста. Однако наивысший прирост означен у молодых 'мышей при дозе 0,1 мг/голову.

При парентеральном одно- и многократном введении препарата с интервалом от 5 до 30 дней у шией не отпечено отказа от дичи, енгйения подвижности, учащечпя дыхания^ нарушения эластичности кожного покрова, кровоизлияний на слизистых оболочках и других признаков, характерных• для .огравлелия и'аллергии. Это указывает па то, что технология получения бкостила-2.исключает возможность'попадания в препарат внеокомоле-

кулярных соединений - потендиалыих антигенов (белков, фосфопротеидов липопротеидов и др.). ■*".'

С целью выяснения активных компонентов в препарате из ткакейстрес-сировашшх к квотных было произведено выделение фракций биостила-2 и испытание их на растущих мышах.' Компоненты инъецировались в дозах 0,1 иг/голову (табл.З).- "" • ■ ■

Таблица 3

Ростстшулирующее влияние фракций тканевого"" " " . препарата у мыйей, п=Ю, М^т, -

i'py tina, ииье цируемыи препарат - 0,1 мг ! -, Масса яивотных^г- ,.- j .'ЦрирО-Ст - .массы

Исходная i через 10 дней { j после введения} за дека-ДУ.г ! .Вк ¡ контролю

1-Контроль (физраствор) 10,5+0,4 '" '14,9+1,1 • 4,4 ■ 100,0

П-Биоиил-2 ' 10,5±0,7 • 15,7+0,9 ; ■ 5,2 . 118,2

Ш-Пептидная фракция 15,5+0;9 5,1 115,9

1У-Беспепгидная . фракцш Ю,5±0,б 15,2+1,2 4,7 106,8

У-Пептидная фракция : обработанная ферментом 15,2+1,0 4,8 109,1

Кал видно из даншх табл.3} инъекции пептидной фракции биостила-2 " оказывают почти равнозначный ростстимулирующий эффект, .что и введение целого препарата. Фракция, свободная от полипептидов, обладает-сравнительно слабой активностью. Кивая масса у мышей при эхоы увеличилась по сравнению с контролем лишь на 6,8$. Гидролиз (вероятно, частичный) г.олипептидов в препарате , с помощью пепсина значительно снижает его ростсшшузшруваде свойства. '■•.'" ' ■

Остановленный в нашем опыте роотстимулирующий аффект от инфекций биостила-2 подтверждает результаты ранее выполненных исследований (Георгиевский Б.И. и др.,1986). Однако' при этом отмечены значительные

индивидуальные особенности ответной реакции яивогных на введение препарата в зависимости от условий эксперимента.

Представляло определенный интерес' провести сравнительное изучение действия биосгила-2 с известяшш стимуляторами типа спермина, г.периш-дина и аденозина, которые обнаруживаются в экстрактах тканей как л свободном состоянии, так и в соединении с пептидами. Препараты вводили парентерально в дозе 0,1 иг/голову (табл.4).

• . Таблица 4

Ростстшаулирующее влияние биостида-2 и его компонентов на ышаей (М+т )

' Группы,иньецируе-i • ши препарат,п=1в{- '1 Масса животных, г j Прирост ыассц

исходная ¡через 1U дней I {после введения) за декаду, г I ^ К 1СОН- j тролю

1. Контроль 12,4^,6 21,9+0,1 9,5 : 100,0

П. Биостил-2 12,4+0,6 23,6+1,1 11,2 117,9

Ш. Аденозия 12,440,6 22,8+1,5 10,4 109,5

1У. Спермидин 12,4+0,5 22,5+1,1 10,1 106,3

У. Спермин 12,5+0,В . 22,4±1,3 5,9 104,2

Введение биостила и официальных препаратов в дозе 0,1 ыг на I шыь обеспечивало роете тииулирутвдее действие. В данном опыте при инъекции раствора биостила-2 у иыией получено увеличение прироста на 17,9$, а -аденозина - на 9,5$. При парэнтералъноу введении в тех яе дйзах раствора сперцидина иаюгнве в сравнении о контролем имели прирост больше на 6,5$, а спершна - лшь на 4,2$.

Полученные материалы дают основание считать, что ростстимулируюций эффект изучаеыого препарата обусловлен наличиец в нем прекде всего специфических пептидов. Не исключено влияние и других веществ типа аденозина и опермидина, хотя их концентрация в биостиле-2 невелика.

3.2. Стииулируоцсе действпо бкооткла-2 на синтез гемоглобина

и процесс эритропозза. В опьтте на кроликах с экспериментальной постгеморрагической анемией установлено, что внутримышечное введение био-стила-а в дозе I иг/мг живой массы оказывает благотворное влияние на скорость юсстановления уровня гемоглобина и эритроцитов в крови, ускоряет процесс восстановления уровня содержания гемоглобина и эритроцитов в периферической крови. Так, в крови кроликов массовая доля гемоглобина составляла 135+2,2 г/л, число эритроцитов - А.5+3,3, после кровопускания и введения биостила - 103+7 и 33+2,2; на 5-е сутки -122+6,5 и 4-1+32; на 10-е сутки - 134+4,0 и 45+2,2, .тогда кап у кроликов в контрольной группе на 5-е сутки было 107+6,2; 37+2,3; на 10-е сутки - 125+4,4- и 39+2,5 соответственно. У кроликов, которым вводили биостил-2, эритропоэз и синтез гекоглобина происходил достоверно интенсивнее и при стабильном геыатокритном числе. Это свидетельствует о том, что биоотил-2 сгинулирует синтез хрокопротеидов и образование клеток трофической ткани.

3.3. Влияние ингибиторов биосинтеза на анаболический эффект биостила-2. В опытах с использованием ингибиторов клеточного синтеза убедительно показано, что анаболическое действие биостила-2 ими подавляется. Особенно эффективен в этом отношении депрессор РНК - актино-иицин Д.

Полученные данные свидетельствуют о том, что ростстиыулирувдее действие бкостила-2 определяется усилением синтеза РЖ, ДНК и белка в организме и осуществляется, видимо, на уровне транскрипции, трансляции и репликации. Можно предположить, что отдельные компоненты эндогенного анаболика в той или иной степени нивелируют действие ингибиторов, т.к. воздействуют иа разные механизмы биосинтеза.

3.4. Способность биоотила-2 к мобилизации защитных сил организма. Экспериментально установлено, что при однократном введении иы-иам раствора нитрата натрия в дозе б кг/голову половина подопытных

животных погибает в течение полутора часов. Предварительное введение за б часов до ^нтоксикации биостила-2 приводило к гибели только 30$, аденозииа - аивотных; осталыше выздоравливали. Антитоксическое ■дейотвие спермина по тесту выживаемости не проявилось, хотя гибель отравленных шлпек наступала позже, чей в контроле.

3.5. Влияние биостила-2 на работоспособность животных. При одно-, разовоН инъекции экстракта из тканей строссированных животных отмечены допинговый эффект и стиыулкруищее дейстгие на кинетику ¡пышечкой «ястеш.

Продолжительность бега на третбане у крыс контрольной группы снизилось в среднем с 15,7 до 15,0 мин. через сутки; до 12,6 - на 2-е сутки и 11,5 на'3-й сутки. В то не время в опытной группе продолжительность бега повысилась с 15,5 до 22,6; 18,8; 26,7 мин.-, соответственно.

Работоспособность интактных животных на третий день упала на 26,7%, . а обработанных биостшюн-2 достоверно возросла на 72,2 при Р< 0,05,хотя при этом отпечены значительные индивидуальные вариации в ответной реакции на препарат.

Под влиянием инзекциЦ биосгила повышается выносливость. Ток, в процессе е*;вдневной нагрузки (удержание на шесте) статическая работоспособность крыс контрольных групп постепенно снижалась и к шестому дню уменьшилась на а работоспособность опытной группы за это время

возросла на 16$; фактически выносливость под влиянием препарата возрас-• тала на 75$. . . . ' '

Установлено, что препарат обладает ярко выраженным инотропным действием на сердце.

3.6. Влияние-биостила-2 на использование корма'грызунами. При содержании крыс на стандартном гранулированном комбикорме и поении вволю лодкояное введение Оиостила-2 (I мг/кг живой массы) оказывает определенное влияние на скорость поедания корма и степень использования питательных веществ. •

- и -

Среднесуточное потребление сухих веществ корма крысами опытной группы достигало 12,10, а в контроле - 11,82, или на 5,2$ больше; коэффициенты переваримости сухого вещества составили 77,7 и 75,4%, протеина - 71,БЗВ - 91,9 и 88,1 соответственно. В переваримости кира и клетчатки мекгруппозых различий не установлено.

Большее потребление корна и лучшее использование углеводистой части рациона у животных, обработанных биостилом-2, существенно отразились на отлояении гликогена в печени и ¡дшечной ткани.

Гликогена в печени крыс опытной группы содержалось 936,7+102,6, в контроле - 667,5+78,7, в ишцах соответстхенно - 101,0+3,8 и 88,7+ 3,2 мг^, при достоверной разнице между группами (Б< 0,01 и Р<0,05). Уровень глюкозы в крови крнс при этом бил одинаковым - 5,9+0,3 мколь, 3.7 Влияние биоотила-2 на обмен вег.еств и скорость- роста ягнят. При парэнтеральнои введении биостила-2 (из ткалей-грызунов-доноров) в дозе 1...2 кг/кг массы у ягнят не выявлено стресс-реакции или отклонений в клинических показателях, о чем свидетельствуют данные табл.5.

После введения препарата пульс, дыхание и сокращение рубца у баранчиков были ритмичными и по частоте соответсвозали клинической норме. Не отмечено сдвигов в работе сердца, дыхательной системы и моторике желудка-животных.

Судя по ректальной температуре, можно считать, что инъецирование препарата существенно не изменяет скорость окислительных процессов и величину теплопотеръ в организме ягнят, не оказывает влияния на содержание в крови лейкоцитов.'»Тем не менее, отпечена тенденция к увеличению в периферической крови числа аритроцмов и концентрации гекогло-бина, хотя эти показатели и на вторые сутки посла введения были в пределах физиологической нормы для донного вида животных. Скорость оседания эритроцитов в крови ягнят после инъекции оставалась стабильной --1,3... 1,6 мм в час. Клиническое состояние подопытных животных свидетельствует о том, что у них не проявляется признаки, характерные

для стресса, аллергии, анафилаксии и других болезненных синдромов. Вместе с тем,.биостил-2 в дозе 1...2 ыг на кг дивой масса вызывает определенные изменения в обиенз веществ и скорости роста у молодняка.

Таблица 5

Влияние инъекций биостила-2 на нлииико-физиологические параметры у ягнят, п=6

Показатели 1 . 1 Время исследования

|до введения ¡(контроль) I через | 2 часа 1 через { 48 часов

Частота пул!са в ыин. 85 86 : 85

Частота дыхания з мин. 16,2 15,4 16,3

Частота руминации в 2 мин. г О 5 5

Температура тела °С 39,4 39,5 39,5

Лейкоциты, 109/д 7,0+0,3 7,2+0,2 7,1+0,4

Эритроциты, 10^/л 8,2+0,3 8,4+0,3 8,5+0,2

Гемоглобин, г/л 96+4,0 98+4,2 98+4,5

Гематокрит, % 31 32 - 32

СОЭ, мм/чао .1,5 . 1,6 ' 1,3

3.8. Биохимические изменения в крови. Установлено, что при парентеральной введении биостила-2 в крови овец существенно изменяется уровень содержания общих липидов. Спустя три недели после инъекции препарата, в крови ягнят увеличилась концентрация общих липидов на 63 а через 6 недель .произошло достоверное (Т<0,01) снижение их до 260 Инъекция биостила-2 оказывает залетное влияние на уровень липонротеидоз в кровяном русле. Через две недели их концентрация по

сравнению с контролем достоверно снизилась на 35,97», а в конце опыта

1

• на 53$ (Р<0,01). Принимая во внимание однотипность кормления нодопит-лых животных, мояно считать, что при введении биостила-2 происходит активная мобилизация ж^роя из кровяного русла и отложение их в энерге-

тическнх депо.

Концентрация сахара в крови баранчиков под действием биостила-2 существенно повысилась лишь в конце опита (табл.6).

Таблица 6

Влияние инъекций биостила-2 на уровень белков и сахара в сыворотке у баранчиков, И+ш

Показ атель * Чере? 2 недели ! " ( Через 3 педели

j опь'тная j контроль i опытная \ контроль

Сахар, ит% 62,9+1,6 60,9+3,2 63 ,8+2,9 53,4+2,9

Обций белок, г/л 61,1+2,8 61,9+1,6 67 ,6+1,6 68,9+1,8

Альбумины, г/л 31,3+1,0 35,4+1,3 33 ,9+1,3 37,7+1,9

Глобулины, Г/Л- 29,8+2,9 2.6,2+1,1 33 ,7+1,5 51,3+2,6

Значительных изменении в концентрации общего белка в сгьаротке прл

обработке кивотлих бшспд01.:~2 в слыте не установлено, хот» через 3

недели послс позорной якьекдак препарата несколько больпе повысился

/

уровень,глобулярных белков у баранчиков испытуемой группы.

Результаты изучения ферлзнгативной активности крозн у барвнчяков приведены в табл.7.

Таблица/?

Влияние инъекций биостила-2 на ^рапсаминазную активность ирози у баранчиков (единиц Ihm )

Фер-i Группа UÜHTj

1

!-

Бреця взятия кропи после инъекции ьедёШ 15 недоли после нов-!

|торного введения |

Ь недель /

1575§Ш5ТсГ

0,515+0,05 0,236+0,03 0,205+0,02

Опытная ACT Контрольная

Опытная -АЛТ Контрольная

0,672+0,08 0,622+0,04 0,232+0,01 0,If!3+0,02

0,668+0,01 0,503Т0,03 0,225+0,02 0,207+Ö,Go

Через две .недели после.обработки биостилом-2'у баранов в крови активность глюгамикоаспарагияоБой трацоанинази (КФ.2.6.?Л) была на .'

12,7/$, а в конце опыта на 24,7$ вшае, чем в контрольной группе. Установлена такие тенденция к увеличению активности глнтамикоатгашшо-вой трансаминазы (КФ.2.6.2.2.) в крови -./фанов опытной группы,особенно после повторного введения им биостила-2, когда меагрунповое различие было существенным при Р<0,05. При введении биостшш-2, судя по ферментативной активности, в крови овец более оживленно происходит процесс реконструкции аминокислотного состава, т.е. изучаемый препарат оказывает влияние на процесс ресиятеза аминокислот.

Для уточнения механизма действия биостила-2 на обмен веществ и скорость роста у мивотных, определенный интерес представляли некоторые гипофиэарные гормоны с хорошо изученной функцией и, в частности -соматотропин (ГР) и пролактин (ПРЛ).

В налих опытах показано, что подкожные инъекции биостила-2 приводят к определенным изменениям гормонального статуса. Через 15 дней после введения препарата содержание гормона роста в сыворотке крови у ¡животных било на 6, а спустя 35 дней - на 5$ вкие, чем-в контроле.

Отпеченные нами некоторые генгрупловыь различия в активности горюна роста позволяют сделать вывод, что биостил-2 иокет реализовать :вою функцию за счет усиления образования ишсрета в гипофизе и выделения в повышенных количествах гормона в кровяное русло.

Инъекции биостила-2 оказали влияние на содержание гкпофизарного гормона пролактипа в сыворотке крови неполовозрелых ярок. Через 15 ¡уток после введения препарата установлено значительное (на 33?0 до-¡товерное снинение- массовой дели пролактипа у ярочек. Повышение ис-содного уровни лактотропного гормойа'в крови отмечено лшь месяц спу-¡тн после инъекции.

Гормональная активность кроли аивотиых является динамичным пока-ютелеа (Георгиевский В.К., Медведев Й.К. и др.). Следует заметить, ют отмеченные в аглих оштах сдвиги в гормональной ахяривиасги в иро-!И у кпготннх не превышали высокие (ГР) и низкие (ПРЛ) продели фкчио-

логической нормы.

3.9. Влияние биоотила-2 на использование питательных веществ и прирост иив'ои насоы у ягнят. При включении в рацион 3 кг зеленой массы из злаково-бобовой травосмеси и 350 г комбикорма удалось обеспечить питательными веществами подопытных ягнят обеих групп в соответствии с нормами БАЙШИЛ (Калашников А.П., Клейменов Н.й. к др.,1985).

В период физиологического опыта в рационе бараны получали 1195,0 г сухих веществ, 1,15 кг кормовых единиц, 183,0 г сырого протеина, 306,0 сырой клетчатки, 66,0 г аира, 7,8 г кальция, 6,0 г фосфора, 9,9'иг меди, 37,3 цинка, 0,4-5 кобальта, 0,4 йода и 75,0 иг каротина.

В условиях одинакового кормления фактическая поедаеыость травы и комбикорма у баранчиков подопытных групп была различной. В средней, нквохные контрольной группа съедали около 2,5 кг травы и 295 г комбикорма, а опытной - больше на 11,5 и 6,1% соответственно. У.животных испытуемой группы коэффициенты переваримости протеина в. среднем равнялись 71,2, клетчатки - 78,2, безазотистых экстрактивных веществ - 80,4, зольных - 37,6, и были соответственно на 2,7; 2,7; 0,9; 3,3$ выше, чем в контроле. Б результате переваримость сухих веществ рациона была на 13$ выше у животных, обработанных препаратом.

За 35 дней опыта при одинаковом доступе к корцу и двухкратном инъецировании препарата ягняиа' опытноЬ группы, в сравнении с контрольной имели в среднем на 1,1 небольшую живую массу.

Б опытной группе у ягнят среднесуточный прирост массы составил 229 г, а в контроле лишь 197 г. Мекгрупповая разница оказалась 16% и была достоверной при Р< 0,05. Затраты корковых единиц на I кг прироста в 1-й группе составили - 5,1, ■ во второй - 4,5 кг кормовых единиц, а с учетом фактической поедаемости - 4,9 и 4,1 соответственно.

Введение биостила-2 в период полового созревания также ускоряет рост баранов, хотя среднесуточная разница приращения массы в условиях вивария составила всего 8,3$.

ВЫВОДЫ

I. В тканях млекопитающих животных, подвергнутым стрессовым воздействиям, пбразуются органический метаболиты существенно изменяющие обмен веществ и сохраняющие свою активность в постморталь-ном периоде. Эти вещества обнаруживаются в тканях в количествах достаточных для их выделения в виде комплексного препарата. Методика получения препарата биостил-2 нами усовершенствована.

2Биологическая активность вытякек тканей стрессированных животных сохраняется после удаления из них полимерных молекул белков,, нуклеиновых кислот, полисахаридов,, липидов и др. Биостил-2 содержит низкомолекулярные продукты и не обладает' антигенными свойствами. •,■.■"■..

.*:„ 3. . Препарат обладает 'выраженной биологической активностью при внутримышечном введении его раствора реципиентам. Оптимальная доза - I...2 мг/кг живой массы.

■ 4. Биостил-2, получаемый при полифакторном стрессировании животных, обладает анаболическим и тонизирующим овойствами. Его инъекциис интервалом 15...30 суток-ускоряют рост молодняка жзачлых И лабораторных яивотных'на 10... 1В%.. Этот эффект в определенной мере обусловлен'повышением поедаемости кормов и переваримости пита-■¡гельных вецеств.

' 5. Эндогенный анаболик благотворно влияет на течение энергетического обмена, повышает уровень энергетических резервов организма. Он обладает инотропшш и допинговым действием, усиливая ' физическую работоспособное»;

6. Однократная инъекция препарата стимулирует аритропоэз. Б опытах с искусственно вызванной постгеморрагической анемией'у кроликов отыечено ускорение образования гемоглобина и эритроцитов.

7. Бкостил-2 не токсичен и безвреден даае ъ количествах во много раз превышающих рекомендуемую дозу. Он повышает у животных толерантность к нитриту натрия и обладает четким антитоксический действием.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. С целью увеличения выхода анаболического и тонизирующего препарата из тканей зивотшх предлагается сочетать предубойную голодную выдеряку с гипотермией. Экстракцию производить из гомо-гената всей тулки аивогного-донора (кроме костей).

2.' Для стимуляции роста молодняка и повьшенкя работоспособности еивотшх рекомендуется вводить раствор бпостила внутришиечно с Jims риалом в 15...30 суток из расчета I...2 иг препарата на кг яквоы массы."

'3. Необходим продолжить работу по изучению биологической активности отдельных компонентов препарата и-изысканию путей его пролонгированного д&йсгвия при введении в организм.

Материалы диссертации опубликованы в следуацих работах: I. Георгиевский Б.И., Муравьев И,Н., Воинова O.A., Костин E.H., Смирнов В.Г., Дегтярев И.В. Дцаптогепноэ действие тканевых биогенных регуляторов физиологических функций// Мат.Всео- конф. Тарту. 1989, Часть I, C.IS-20.-

2. Дегтярев И.В. Тканевый стимулятор роста ягвят.// Информационный листок ВЙЗа. Дубровины. 1992.