Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние, биохимический состав крови поросят и функциональное состояние печени крыс

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние, биохимический состав крови поросят и функциональное состояние печени крыс"

ФГБОУ ВПО «БЕЛГОРОДСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ В. Я. ГОРИНА»

На правах рукописи

005049461

ХАРЧЕНКО ЮРИИ АЛЕКСЕЕВИЧ

ВЛИЯНИЕ БИОФЛАВОНОИДНОГО КОМПЛЕКСА ЛИСТВЕННИЦЫ НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ, БИОХИМИЧЕСКИИ СОСТАВ КРОВИ ПОРОСЯТ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ

КРЫС

03.03.01 - физиология АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

7 ФЕВ 2013

Белгород-2013

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном

образовательном учреждении высшего профессионального образования

«Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я.Горина»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

доктор биологических наук, профессор ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я.Горина», заведующий кафедрой морфологии и физиологии.

доктор биологических наук, профессор ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина», кафедра физиологии животных.

Ведущая организация - ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится 20 февраля 2013 года в «13» часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 при ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина» по адресу: 308503, Белгородская область, Белгородский район, пос. Майский, ул. Вавилова, д. 1. Тел/факс 8(4722)-39-22-62

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я.Горина»

Автореферат разослан «18» января 2013 г.

Резничеико Людмила Васильевна

Официальные оппоненты:

Горшков Григорий Иванович,

Максимов Владимир Ильич,

Учёный секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Флавоноиды как антиоксиданты играют важную роль в предупреждении нарушений структуры и функции печени при различных патологических состояниях, ускорении регенерации и восстановлении функциональной активности гепатоцитов (Гордиенко А.Д., 1990; Накусов Т.Т., 2009). Непосредственное антиоксидантное действие флавоноидов реализуется за счет наличия в их структуре слабых фенольных гидроксильных групп, легко отдающих свой атом водорода при взаимодействии со свободными радикалами. Сами они превращаются в малоактивные феноксильные радикалы (Накусов Т.Т., 2009).

Являясь малотоксичными соединениями, флавоноиды обладают также, капилляропротекторными, желчегонными, гепатозащитными, кардиопротек-торными, протнвоатеросклеротическими, противовоспалительными, антимикробными, противовирусными и другими видами фармакологических свойств (Saija А., 1995, Колхир В.К., 2002, Абидуева Е.Ю., 2005).

В патогенезе нарушений функций печени важную роль играет увеличение уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ). В условиях нормы в крови и тканях определяется низкий уровень ПОЛ. Повышение уровня перекисного окисления липидов, а так же содержания высокоактивных форм молекул кислорода приводит к оксидативному стрессу, при котором «нарушаются» клеточные мембраны и патологически изменяются функции клеток, в том числе и гепатоцитов (Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И., 1985; Signal Р.К. et al., 1988; Барабой В.А. и др., 1992).

В этой связи представляются актуальными исследования по расширению спектра и поиска лекарственных препаратов, уже применяющихся в качестве антиоксидантных и гепатопротекторных средств, а также выявлению перспективных сырьевых источников для получения фитопрепаратов с высокой биологической активностью, положительно влияющих на функциональное состояние организма.

Исходя из этого, нами совместно с учёными-химиками ЗАО «Петро-хим» был изучен побочный продукт, получаемый при производстве дигидро-кверцетина, который получил название биофлавоноидный комплекс лиственницы.

Учитывая перспективность его применения в свиноводстве, как биологически-активного вещества, стимулирующего рост поросят, нормализующего обмен веществ и функцию печени, нами проведены комплексные его исследования.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы состояла в изучении влияния биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние, естественную резистентность, интерьерные и продуктивные показатели поросят, с тем, чтобы предложить этот комплекс в качестве биологически активной добавки к корму для свиней.

Для достижения цели на разрешение были поставлены следующие задачи:

• определить безвредность биофлавоноидного комплекса лиственницы на лабораторных животных;

• изучить его влияние на морфологический состав и биохимические показатели крови, естественную резистентность и интенсивность роста поросят-молочников и поросят-отъёмышей;

• установить и экономически обосновать оптимальные дозы биофлавоноидного комплекса лиственницы, при которых увеличиваются приросты поросят и повышается их сохранность;

• выявить возможные изменения физико-химических показателей мяса поросят, получавших биофлавоноидную добавку к корму;

• определить в модельных опытах влияние биофлавоноидного комплекса на функциональное состояние печени крыс;

• экономически обосновать возможность использования биофлавоноидной добавки в рационах свиней.

Научная новизна работы.

Установлено, что биофлавоноидный комплекс лиственницы малоток-снчен для лабораторных животных и поросят. Применяемый в качестве добавки к корму, он положительно влияет на морфологические и биохимические показатели крови, повышает естественную резистентность и сохранность поросят.

Определены оптимальные дозы биофлавоноидной добавки, при которых стимулируется рост поросят без увеличения затрат корма на приросты и повышается сохранность животных.

Биофлавоноидный комплекс улучшает функциональное состояние печени белых крыс и повышает её антитоксическую функцию. Практическая значимость работы.

Предлагается новое средство для улучшения физиологического состояния поросят и нормализации антитоксической функции печени.

Практическое применение биофлавоноидного комплекса лиственницы осуществляется в хозяйствах Белгородской области. Основные положения, выносимые на защиту:

• результаты изучения токсикологических свойств биофлавоноидного комплекса лиственницы;

• обоснование оптимальных доз препарата по влиянию на физиологическое состояние поросят с целью получения высокой сохранности и приростов животных, улучшения качества животноводческой продукции.

• данные по влиянию биофлавоноидного комплекса лиственницы на восстановление функции печени

• эффективность применения биофлавоноидного комплекса лиственницы в свиноводстве и его сравнение с дигидрокверцетином; Апробация и публикации. Результаты исследований были представлены на международных научно-практических конференциях: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (Белгород, 2011), «Актуальные проблемы научного и кадрового обеспе-

5

чения инновационного развития АПК» (Казань, 2012), «Актуальные вопросы и тенденции развития биологии, химии, физики» (Новосибирск, 2012), «Актуальные проблемы современной науки: свежий взгляд и новые подходы» (Йошкор-Ола, 2012) и расширенном заседании кафедры инфекционной и инвазионной патологии Белгородской государственной сельскохозяйственной академии (2012). По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ в сборниках международных конференций, центральных журналах и отдельных изданиях (из них 4 в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Библиографический список включает 145 источников, в том числе -23 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 5 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в 2009-2012 гг. на базе Белгородской государственной сельскохозяйственной академии и Белгородской межобластной ветеринарной лаборатории. Производственные опыты проводились в условиях колхоза им. Фрунзе Белгородского района.

Биофлавоноидный комплекс лиственницы представляет собой сыпучую порошкообразную массу кремового цвета и содержит в своём составе в пересчете на сухое вещество: дигидрокверцетин (5,5%); димеры и тримеры дигидрокверцетина (5%); дигидрокемпферол (5%); эриодиктиол (1,5%); на-рингенин (около1%); остальное - неидентифицированные природные вещества растительной природы.

Препарат выпускает ЗАО «Петрохим» (г. Белгород).

В экспериментальной части работы использовано 96 белых крыс, 36 кроликов, 40 поросят-молочников, 100 поросят-отьёмышей; в научно-

производственных испытаниях - 240 поросят. Схема опыта представлена в табл.1.

Комплексные исследования физиологического состояния поросят проводили с учетом условий их кормления, содержания и эксплуатации. Проводили ежедневный осмотр животных, измеряли массу тела, учитывали результаты гематологических исследований. При этом определяли активность печёночных ферментов в сыворотке крови (аспартатаминотрансферазу, алани-наминотрансферазу, щелочную фосфатазу), билирубин, учитывали результаты патологоанатомического вскрытия и т.д. Биохимические показатели определяли общепринятыми методами при помощи гематологического анализатора «Хитачи».

Для определения факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus (№ 209 Р) по И.В. Нестеровой с соавторами (1996). Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли по И.М. Карпуть (1993), лизоцимную (ЛАСК) - по В.Г. Дорофейчуку (1968).

Токсикологическое исследование биофлавоноидного комплекса лиственницы проводили в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.

Токсический гепатит вызывали внутрибрюшинным введением крысам четырёххлористого углерода на вазелиновом масле в форме 50% эмульсии из расчёта 4 мл/кг массы тела в течение 3-х суток.

В конце периода наблюдения из каждой группы умерщвляли по 6 животных для патоморфологических исследований. Гистологическое исследование печени крыс проводили сразу после убоя. Получали гистосрезы и окрашивали их общепринятыми методами (Саркисов Д. С., Перова Ю. Л., 1996). Анализ гистопрепаратов проведен по компьютерной программе на установке «Видео-Тест-Мастер-Морфология».

Ветеринарно-санитарную оценку мяса поросят, убитых после применения биофлавоноидного комплекса лиственницы, проводили по правилам ве-

теринарно-санитарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мясных продуктов (М., 2001).

Табл. 1 - Схема опытов

Группы Количестве животных Применяемые препараты Доза препарата

Первый опыт Определение токсикологических свойств биофлавоноидного комплекса лиственницы

Второй опыт Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние поросят-молочников и выявление оптимальных доз препарата

1-контрольная 10 Основной рацион (ОР) -

2-опытная 10 ОР+биофлавоноидный комплекс лиственницы 0,5 г/кг

3-опытная 10 ОР+биофлавоноидный комплекс лиственницы 1,0 г/кг

4-опытная 10 ОР+биофлавоноидный комплекс лиственницы 2,0 г/кг

Третий опыт Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние поросят-отьёмышей и выявление оптимальных доз препарата

1-контрольная 20 Основной рацион (ОР) -

2-опытная 20 ОР+дигидрокверцетин 1,0 мг/кг

3-опытная 20 ОР+биофлавоноидный комплекс лиственницы 0,5 г/кг

4-опытная 20 ОР+биофлавоноидный комплекс лиственницы 1,0 г/кг

5-опытная 20 ОР+биофлавоноидный комплекс лиственницы 2,0 г/кг

Четвёртый опыт Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на функциональное состояние печени крыс

1-контрольная 12 Интактные животные -

2-опытная 12 СС1д (4,0 мл/кг массы тела) -

3-опытная 12 СС14 + биофлавоноидный комплекс лиственницы 1,0г/кг

4-опытная 12 ССЦ +дигидрокверцетин 1,0 мг/кг

Производственная проверка на поросятах

1-контрольная 60 Основной рацион (ОР) -

2-опытная 60 ОР+ биофлавоноидный комплекс лиственницы 1,0 г/кг

3-опытная 60 ОР+ дигидрокверцетин 1,0 мг/кг

Полученный в опытах цифровой материал был подвергнут статистической обработке на персональном компьютере по методам вариационной статистики с вычислением аргумента Стьюдента (у. Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при р<0,05 (Лакин Г. Ф., 1973). На основании результатов, полученных в производственных условиях, проводили расчёт экономической эффективности применения препарата (Никитин И. Н., 1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Определение безвредности бнофлавоноидного комплекса лист-

венницы

В экспериментах на белых крысах не удалось выявить острую токсичность биофлавоноидного комплекса и установить конкретную величину ЛД50 из-за того, что рассчитанные по верхней границе дозы оказались больше максимального объёма препарата (25 г/кг массы тела), допустимого для введения в желудок крысы. При этом не отмечалось отклонений в поведении животных, состоянии их кожи и слизистых оболочек. Во внутренних органах не обнаружено каких-либо патоморфологических изменений.

Длительное (в течение 1 месяца) ежедневное применение биофлавоноидного комплекса лиственницы в дозах 0,5, 1,0 и 2,0 г/кг массы тела также не вызывало изменений в общем состоянии животных, их условно-рефлекторной деятельности, морфологическом и биохимическом составе крови.

Установлено, что изучаемый препарат не обладает местнораздражаю-щим и аллергизирующим действием. Следовательно, без каких-либо специальных режимов его можно назначать перорально в рекомендуемых дозах.

2. Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние поросят-молочников и выявление оптимальных

доз препарата

В опыте на 4 группах поросят-молочников 15-суточного возраста, по 10 голов в каждой, изучали три дозы препарата (0,5, 1,0 и 2,0 г/кг массы тела), который добавляли в подкормку животным в течение 10 суток. В резуль-

тате проведенных исследований установлено, что более высокие приросты были достигнуты от доз 1,0 и 2,0 г/кг массы тела - на 19,1 и 19,2% соответственно выше контрольных показателей (р<0,05). Прирост массы тела от дозы 0,5 г/кг превышал контрольные показатели всего лишь на 6,9% (р>0,05).

В морфологическом составе крови не выявлено каких-либо изменений: количество эритроцитов и лейкоцитов находилось в пределах физиологической нормы, а их изменения не имели статистического подтверждения в сравнении с контрольными показателями.

После применения биофлавоноидного комплекса лиственницы в сыворотке крови (табл. 2) отмечалось снижение до физиологических значений активности ферментов переаминирования: при дозе 1,0 г/кг массы тела ала-нинаминотрансфераза уменьшилась на 14,5 %, при дозе 2,0 г/кг - на 13,2% во всех случаях разница с контролем подтвердилась статистически (р< 0,05). Уровень щелочной фосфатазы также достоверно снизился у поросят опытных групп: при дозе 1,0 г/кг - на 6,2% и при дозе 2,0 г/кг - на 9,9% , во всех случаях р<0,01.

Таблица 2 - Биохимические показатели крови поросят-молочников

Показатели Группы

1- контрольная 2-опытная | 3-опытная | 4-опытная

Биофлавоноидный комплекс лиственницы

0,5 г/кг | 1,0 г/кг | 2,0 г/кг

Исходные данные

Гемоглобин, г/л 98,3±1,92 97,1±1,57 98,Ш,83 97,7±1,94

Общий белок, г/л 49,2±1,37 48,4±1,40 49,2±1,63 48,2±1,54

Альбумины, г/л 19,6±0,50 19,2±0,63 19,8±0,55 20,0±0,63

Фосфор, ммоль/л 1,96±0,65 1,84±0,54 1,92±0,69 1,80±0,78

Кальций, ммоль/л 2,86±0,33 2,91 ±0,45 2,87±0,30 2,90±0,21

Витамин Амкмоль/л 0,28±0,05 0,27±0,08 0,29±0,04 0,28±0,06

Щелочная фосфатаза, ед/л- 187,7±2,35 185,2±2,54 190,3±2,37 191,2±2,48

АСТ, ед/л 38,5±1,46 37,8±1,52 36,4±1,63 37,8±1,72

АЛТ, ед/л 49 ,8±1,47 51,7±1,52 50,4±1,47 51,0±1,51

После применения препа рата

Гемоглобин, г/л 99,2±1,48 9 8,9± 1,46 100,1±1,37 100,6±1,53

Общий белок, г/л 51,8±0,76 52,7±0,54 53,9±0,42 53,4±0,63

Альбумины, г/л 21,3±1,55 24,2±1,46 28,7±1,51* 28,0±1,60*

Фосфор, лшоль/л 1,90±0,33 1,86±0,52 1,79±0,44 1,82 ±0,35

Кальций, ммоль/л 2,32±0,40 2,51±0,32 2,46±0,30 2,64±0,35

Витамин А, мкмоль/л 0,32±0,07 0,34±0,08 0,33±0,09 0,34±0,12

Щелочная фосфатаза, ед/л 190,6±2,40 184,8±3,21 178,8±2,51** 171,б±2,39**

ACT, ед/л 40,33±1,62 41,54±1,35 39,22±1,58 41,12±1,27

АЛТ, ед/л 48,21±1,56 44,82±1,77 41,21±1,60* 41,85±1,50*

*р<0,05 **р<0,01;

Отмечалось увеличение альбуминов в сыворотке крови, причём статистически достоверно только у поросят третьей и четвёртой опытных групп (на 34,7 и 31,4%, р< 0,05).

Применение биофлавоноидного комплекса лиственницы (табл. 3) вызывало увеличение фагоцитарной активности нейтрофилов у поросят третьей и четвёртой опытных групп (на 24,2 и 26,6%, и уровня иммуноглобулинов (на 13,5 и 14,9% соответственно), во всех случаях разница с контролем подтвердилась статистически (р<0,05).

Таблица 3 -Показатели естественной резистентности поросят-молочников

Группы

Показатели 1-контрольная 2-опытная 3-опытная 4-опытная

Исходные данные

Бактерицидная активность, % 35,82±1,46 34,76±1,51 34,27±1,60 33,90±1,77

Фагоцитарная активность, % 36,80±1,42 37,15±1,54 38,46±1,79 35,67±1,52

Лизоцимная активность, % 10,12±0,64 11,14±0,55 10,23±0,66 10,52±0,57

Иммуноглобулины, г/л. 10,86±0,53 10,92±0,50 10,15±0,84 11,02±0,33

После применения препарата

Бактерицидная активность, % 36,12±1,47 37,12±1,50 39,32±1,72 38,98±1,56

Фагоцитарная активность, % 36,33±1,67 39,21±1,50 45,73±1,70* 46,01±1,60*

Лизоцимная активность, % 11,03±0,40 11,52±0,44 11,0±0,88 11,44±0,77

Иммуноглобулины, г/л 10,62±0,40 11,07±0,44 12,05±0,34* 12,21±0,47*

*- р<0,05

Таким образом, более эффективной и экономически выгодной следует считать дозу 1,0 г/кг массы тела.

По результатам изучения химического состава мяса следует отметить, что биофлавоноидный комплекс лиственницы не оказал на него отрицательного влияния. Все изучаемые показатели мяса поросят опытных групп не имели статистической разницы с контрольными.

Таким образом, применение биофлавоноидного комплекса лиственницы поросятам-молочникам способствует повышению иммунного статуса животных, при этом оптимизируется обмен веществ, увеличиваются среднесуточные приросты, снижаются затраты корма на единицу продукции, улучшается физиологическое состояние животных.

3. Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние поросят-отьёмышей и определение оптимальных доз препарата

Изучали три дозы (0,5, 1,0 и 2,0 г/кг массы тела) препарата на порося-

тах-отьёмышах 25суточного возраста. При этом сравнивали эффективность действия биофлавоноидного комплекса с дигидрокверцетином (согласно схеме опыта представленного в табл. 1.)

После скармливания максимальных доз биофлавоноидного комплекса лиственницы отмечалось увеличение среднесуточных приростов поросят (на 8,3 и 8,1% выше контрольных показателей).

Введение биофлавоноидного комплекса лиственницы в рацион поросят не вызвало каких-либо существенных изменений в популяции лейкоцитов крови. Однако по биохимическому составу крови были отмечены существенные изменения (табл. 4).

При применении доз 1,0 и 2,0 г/кг отмечалось достоверное снижение активности аланинаминотрасферазы (на 21,1 и 20,2%) и увеличение альбуминов на 27,3 и 22,4% соответственно. После применения дигидрокверцети-на увеличились только альбумины (на 22,5%), во всех случаях р<0,05. Так

как данное повышение было в пределах физиологической нормы для животных, можно считать, что препарат положительно влияет на функцию печени.

Таблица 4 - Биохимические показатели крови поросят-отьёмышей

Показатели Группы

1- контрольная 2-опытная I 3-опытная 4-опытная 5-опытная

дигидрок-верцетин БФК 0,5 г/кг БФК 1,0 г/кг БФК 2,0 г/кг

Исходные данные

Гемоглобин, г/л 98,8±3,72 98,1 ±4,74 97,9±4,43 97,0±4,28 98,2±4,21

Общий белок, г/л 42,4±0,5б 42,5±0,64 43,2±0,54 42,7±0,62 42,7±0,50

Альбумин, г/л 20,3±0,57 21,7±0,70 20,5±0,49 21,1±0,48 20,3±0,46

Кальций, ммоль/л 2,80±0,35 2,71±0,34 2,96±0,37 2,67±0,50 2,90±0,65

Фосфор, ммоль/л 2,42±0,24 2,77±0,26 2,56±0,35 2,30±0,40 2,41±0,33

Витамин Аулшоль/л 0,87±0,18 0,94±0,17 0,83±0,19 0,88±0,20 0,83±0Д4

Магний, ммоль/л 0,81+0,15 0,83±0,1б 0,84±0,15 0,82±0,20 0,85±0,17

Мочевина, ммоль/л 3,66±0,50 3,21±0,48 3,80±0,47 3,77±0,26 3,82±0,42

ACT, ед/л 50,9±2,26 52,1 ±2,32 50,0±2,35 51,3 ±2,35 50,6±2,32

АЛТ, ед/л 57,4±1,77 58,0±1,66 56,9±1,38 57,1 ±1,55 56,7±1,34

В конце экспериментального периода

Гемоглобин, г/л 98,3±2,90 98,5±3,45 99,6±4,24 98,7±3,34 99,3±3,22

Общий белок, г/л 44,4±1,70 4б,1±1,72 45,0±1,78 46,3±1,69 46,1±1,72

Альбумины, г/л 22,7±1,54 27,8±1,57* 26,3±1,46 28,9±1,60* 28,0±1,58*

Кальций, ммоль/л 2,73±0,33 3,36±0,36 3,14±0,44 3,65±0,46 3,65±0,48

Фосфор, ммоль/л 2,25±0,36 1,97±0,32 1,84±0,48 2,01±0,28 1,95±0,20

Витамин Аушюль/л 0,77±0,23 0,90±0,21 0,69±0,34 0,94±0,22 0,95±0,26

Магний, ммоль/л 0.85±0,35 1,23±0,31 1,10±0,46 1,21±0,26 1,23±0,35

Мочевина ммоль/л 4,65±0,31 4,3б±0,41 4,71±0,35 4,27±0,40 4,31 ±0,40

ACT, ед/л 51,8±2,38 49,2±2,24 49,6±2,44 48,1±2,40 48,6±2,40

АЛТ, ед/л 57,9±2,25 52,6±2,16 53,2±2,34 45,7±2,34** 46,2±2,31**

* -р<0,05; **-р<0,01

Таким образом, проведённые исследования показали, что биофлавоно-идный комплекс лиственницы оказал положительное влияние на функциональное состояние печени поросят, что проявилось снижением до физиоло-

гической нормы ферментов переаминирования, и повышением альбуминов в сыворотке крови. Действие дигидрокверцетина было менее эффективным.

В дальнейшем мы изучали влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на общую резистентность организма животных. Было установлено, что применение различных доз препарата вызвало повышение фагоцитарной активности лейкоцитов, причём достоверное только при максимальных дозах (на 17,3 и 17,9% соответственно при р<0,05).

При проведении ветеринарно-санитарной экспертизы мяса поросят, которым в течение 20 суток применяли биофлавоноидный комплекс лиственницы установлено, что мясо животных как контрольной, так и опытных групп, имеет хорошие органолептические показатели, свойственные свежему мясу здоровых поросят.

Таким образом, из всех изучаемых препаратов наиболее эффективным оказался биофлавоноидный комплекс лиственницы, применяемый в максимальных дозах. Он обладает ростостимулирующей способностью и положительно влияет на функциональное состояние печени, повышает фагоцитарную активность нейтрофилов, оптимизирует обмен веществ, способствует снижению затрат корма на единицу продукции. Действие дигидрокверцетин и минимальной дозы биофлавоноидного комплекса лиственницы на организм животных было менее выражено и уступало по всем изучаемым показателям. Следовательно, поросятам-отъёмышам целесообразно применять биофлавоноидный комплекс лиственницы в дозе 1,0 г/кг массы тела.

4. Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на функциональное состояние печени крыс

Для проведения опыта было отобрано 4 группы белых беспородных

крыс-самцов по 12 голов в каждой. Крысам первой группы никаких препаратов не применяли. Животным второй, третьей и четвёртой опытных групп внутрибрюшинно вводили 50% эмульсию четырёххлористого углерода на вазелиновом масле в дозе 4,0 мл/кг массы тела в течение 3-х суток. Кроме того, крысам третьей и четвёртой опытных групп в течение 14 суток до введения четырёххлористого углерода и в период его применения применяли биофла-

воноидный комплекс лиственницы из расчёта 1,0 г/кг и дигидрокверцетин из расчёта 0,1 г/кг массы тела. Изменения биохимического состава крови животных представлены в табл. 5

Таблица 5 - Биохимические показатели крови крыс

Показатели Конрольная группа Опытные группы

1 2 3 4

интактные животные СС14 БФК +СС14 Цигидроквер-цетин +СС14

ACT, ед/л 340,9±6,03 365,2±б,10* 323,02±6,72 349,5±6,2

±к контролю, % - +7,1 -5,2 +2,6

АЛТ, ед/л 94,8±4,52 122,8±4.98** 96,2±4,28 109,8±4,22*

±к контролю, % +29,5 +1,4 +15,8

Альбумин, г/л 31,4±0,76 31,1±0,91 38,1±0,83** 32,4±0,89

±к контролю, % - -0,9 +21,3 +3,1

Общий белок, г/л 60,5±1,2 60,4±0,76 64,8±0,86 62,1±0,9

±к контролю, % - -0,1 +7,1 +2,6

Мочевина, ммоль/л 5,б±0.66 6,7±0,52 6,3±0,78 6,5±0,62

±к контролю, % +19,6 +12,5 +16,1

Креатинин, мкмоль/л 40,2+3,30 44,6±2,1 43,2±2,5 43,7±2,2

±к контролю, % - +10,9 +7,5 +8,7

Билирубин общий, мкмоль/л 2,7±0,54 4,2±0,32 3,0±0,26 3,7±0,35

±к контролю, % - +55,5 +11,1 +37,0

Холестерину« оль/л 1,49±0,15 1,2±0,14 1,3±0,25 1,44+0,17

±к контролю, % - -19,5 -12,8 -3,6

Глюкоза, ммоль/л 6,9±0,4 4,8±0,5* 6,8±0,3 6,3±0,7

±к контролю, % - -30,4 -1,4 -8,7

Щелочная фосфатаза, ед/л 433,6+5,13 457,6±6,37* 431,3±5,73 452,8±6,12*

±к контролю, % - +5,5 +0,5 +4,4

**- р<0,01; *- р<0,05.

Как видно из данных таблицы, интоксикация СС14 характеризовалась повышенным образованием билирубина и ингибированием экскреции внут-рипеченочного звена данного пигмента.

Применение биофлавоноидного комплекса крысам третьей опытной группы сопровождалось уменьшением синдрома цитолиза, что проявилось нормализацией активности ферментов переаминирования и щелочной фос-фатазы в сыворотке крови.

Действие дигидрокверцетина было менее выраженным, что проявлялось повышением активности аланинаминотрансферазы и щелочной фосфа-тазы на 15,8 и 4,4% соответственно по сравнению с интактными животными.

Можно предположить, что в основе механизма действия биофлавоно-идного комплекса лиственницы лежит антинекротическое и мембраностаби-лизирующее воздействие на гепатоциты, возможно, путём активации внут-рипечёночного звена обмена билирубина. Введение подопытным животным биофлавоноидного комплекса на фоне интоксикации четырёххлористым углеродом блокирует гепатотоксическое действие последнего.

При этом отмечаются значительные изменения в печени крыс, подвергавшихся воздействию четыреххлористого углерода (рис. 1). У животных этой группы отмечаются вакуольная, жировая дистрофия, достаточно обширные очаги некроза, обширный периваскулярный и межбалочный инфильтрат, нарушение балочного строения долек.

Рис. 1. Гистоструктура печени животных после применения СС14

При микроскопическом изучении срезов печени крыс третьей опытной группы, которым применяли биофлавоноидный комплекс лиственницы (рис.2), отмечено полное восстановление органа. Признаков жировой дистрофии практически не обнаружено, отсутствуют лимфоидно-гистоцитарные нфильтраты вокруг долек, уменьшилось количество некротизированных клеток, что свидетельствует об эффективном действии препарата.

Гистологическая структура печени крыс после применения дигидрокверцетина (рис.3) свидетельствует о ярко выраженной жировой дистрофии

, ¡05? и.*;

органа. Данные изменения свидетельствуют, что дигидрокверцетин оказывает слабое воздействие на функциональное состояние печени крыс.

Рис.2. Гистоструктура печени животных после применения биофлавоноидного комплекса лиственницы.

■ 1 " ■ ■' • ■

Рис.3. Гистоструктура печени животных после применения дигидрок-верцетина.

Таким образом, применение биофлавоноидного комплекса лиственницы в дозе 1,0 г/кг массы тела на фоне экспериментального токсического гепатита восстанавливает функциональную способность и гистологическую структуру печени крыс.

Производственные испытания, проведенные в свиноводческих хозяйствах Белгородской области, подтвердили экспериментальные данные о высоком гепатотропном действии биофлавоноидного комплекса лиственницы и его положительном влиянии на физиологическое состояние животных.

выводы

1. Биофлавоноидный комплекс лиственницы является малотоксичным биологически активным средством. Он не обладает хронической токсичностью, местнораздражающим и аллергенным действием и согласно классификации ГОСТ 12.1.007-76 его можно отнести к 4 классу токсичности.

2. Оптимальной дозой биофлавоноидного комплекса лиственницы для поросят-молочников и поросят-отьёмышей является 1,0 г/ кг массы тела.

3. Применение биофлавоноидного комплекса поросятам-молочникам в качестве добавки к корму в дозе 1,0 г/кг массы тела способствует увеличению среднесуточных приростов (на 19,1%), снижению до физиологических значений активности аланинаминотрансферазы (на 14,5%) и щелочной фосфатазы (на 6,2%). Увеличивается фагоцитарная активность нейтрофилов (на 24,2%), в сыворотке повышается количество альбуминов (на 34,7%) и содержание иммуноглобулинов (на 13,5%).

4. В опытах на поросятах-отъёмышах биофлавоноидный комплекс, применяемый в дозе 1,0 г/кг массы тела способствует повышению среднесуточных приростов (на 8,3 %), увеличению альбуминов в сыворотке крови (на 22,5%), снижению активности аланинаминотрансферазы (на 21,1%), повышению фагоцитарной активности нейтрофилов (на 17,3%).

5. Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние поросят-отьёмышей выражено больше, чем действие дигидрокверцетина.

6. Биофлавоноидный комплекс лиственницы, применённый белым крысам на фоне гепатита, вызванного четырёххлористым углеродом, восстанавливает антитоксическую функцию печени, нормализует в сыворотке крови активность ферментов переаминирования и щелочной фосфатазы, снижает до физиологических значений содержание билирубина и глюкозы, повышает уровень общего белка.

7. Дигидрокверцетин, применяемый белым крысам на том же фоне, что и биофлавоноидный комплекс лиственницы, оказывает слабое действие на восстановление функционального состояния печени крыс.

8. Экономическая эффективность применения поросятам-отъёмышам биофлавоноидного комплекса лиственницы в дозе 0,5 г/кг массы тела составляет 1,3 руб. на 1 руб. затрат, в дозе 1,0 г/кг - 2,9 руб. и в дозе 2,0 г/кг- 1,6 руб. на 1 руб. затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Биофлавоноидный комплекс лиственницы рекомендуется использовать как добавку к рационам поросят для повышения естественной резистентности, улучшения физиологического состояния организма и нормализации антитоксической функции печени.

Препарат рекомендуется применять с кормом из расчёта 1,0 г/кг массы тела: поросятам-молочникам - начиная с 15-суточного возраста и до отъёма, поросятам-отъёмышам - курсами по 20-25 суток.

Публикации в ведущих рецензируемых изданиях, рекомендованных действующим перечнем ВАК

1. Носков С.Б. Мониторинг биохимического состава крови сельскохозяйственных животных / С.Б. Носков, Л. В. Резниченко, Ю.А. Харчен-ко // Достижения наукн и техники АПК. - 2011. - № 2 - С. 55-57.

2. Харченко Ю.А. Гепатопротекторные свойства биофлавоноидного комплекса лиственницы при экспериментальном токсическом гепатите / Ю.А. Харченко // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана. - Т. 208 - Казань. -2011.-С. 293-298.

3. Харченко Ю.А., Ерёменко C.B., Авдонина О.О. Гепатопротекторные свойства новых препаратов // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - № 1; URL: http://www.science-education.ru/101-5552 (дата обращения: 21.02.2012).

4. Харченко Ю. А. Изучение гепатопротекторных свойств биофлавоноидного комплекса лиственницы/ Ю.А. Харченко, О.О. Авдонина // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана.- Т. 212. - Казань, 2012. - С. 201-206.

Прочие публикации, содержащие основные научные результаты диссертации

5. Харченко Ю. А. Механизм фармакологического действия гепатопро-текторов /Ю. А. Харченко // Материалы XV международной научно-практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». - Белгород, 2011. -с. 97.

6. Харченко Ю. А. Изучение гепатопротекторных свойств новых биофла-воноидных препаратов ПО. А. Харченко // Материалы международной заочной научно-практической конференции «Актуальные вопросы и тенденции развития биологии, химии, физики». - Новосибирск, 2012. -С. 38-43.

7. Харченко Ю. А. Флавоноидные соединения лиственницы / Ю. А. Харченко // Сборник материалов I Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной науки: свежий взгляд и новые подходы», Йошкар-Ола: Коллоквиум, 2012 - с.18 - 19.

Выпущено в авторской редакции Подписано в печать 15.01.13. Печ.л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ № 38 308503 п.Майский Белгородской области Типография БелГСХА им. В.Я. Горина

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Харченко, Юрий Алексеевич

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Биофлавоноиды и их влияние на организм человека и животных.

1.2. Роль печени в организме.

1.3. Механизмы поражения печени ксенобиотиками и их детоксика-ция.

1.4. Общая характеристика препаратов, восстанавливающих функцию печени.

2. Материал и методы исследования.

3. Собственные исследования.

3.1.Определение безвредности биофлавоноидного комплекса лиственницы.

3.2. Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние поросят-молочников. Выявление оптимальных доз препарата.

3.2.1. Интенсивность роста и сохранность.

3.2.2. Морфологические и биохимические показатели крови.

3.2.3. Показатели естественной резистентности.

3.2.4. Физико-химические показатели мяса.

3.3. Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние поросят-отъёмышей. Выявление оптимальных доз препарата.

3.3.1. Интенсивность роста и сохранность.

3.3.2. Морфологические и биохимические показатели крови.

3.3.3. Показатели естественной резистентности.

3.3.4. Физико-химические показатели мяса.

3.4. Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на функциональное состояние печени крыс.

3.4.1. Физиологическое состояние и масса тела.

3.4.2. Биохимические показатели крови.

3.4.3. Гистологические изменения в печени.

3.5. Производственные испытания биофлавоноидного комплекса лиственницы и определение экономической эффективности его использования

4.0бсуяадение результатов исследования.

Выводы.

Практические предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние, биохимический состав крови поросят и функциональное состояние печени крыс"

Актуальность темы. Флавоноиды как антиоксиданты играют важную роль в предупреждении нарушений структуры и функции печени при различных патологических состояниях, ускорении регенерации и восстановлении функциональной активности гепатоцитов (Гордиенко А.Д., 1990; Наку-сов Т.Т., 2009). Являясь малотоксичными соединениями, флавоноиды обладают антиоксидантными, капилляропротекторными, желчегонными, гепато-защитными, кардиопротекторными, противоатеросклеротическими, противовоспалительными, антимикробными, противовирусными и другими видами фармакологических свойств (Saija А., 1995; Колхир В.К., 2002; Абидуева Е.Ю., 2005).

В патогенезе нарушений функций печени важную роль играет увеличение уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ). В условиях нормы в крови и тканях определяется низкий уровень ПОЛ. Повышение уровня перекисного окисления липидов, а также содержания высокоактивных форм молекул кислорода приводит к оксидативному стрессу, при котором разрушаются клеточные мембраны и патологически изменяются функции клеток, в том числе и гепатоцитов (Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И., 1985; Signal Р.К. et al., 1988; Барабой В.А. и др., 1992). Однако уровень ПОЛ зависит не только от уровня свободных радикалов, но и от функции противоперекисной защиты. Во многих исследованиях установлено, что к таким антиоксидантным системам в организме относятся ферменты супероксиддисмутаза, глутатион-пероксидаза, каталаза (Бунятян Н.Д., с соавт., 1997; Виноградова Л.Ф. 1997; Куркин В.А. с соавт., 2003).

Перспективным источником биологически активных соединений с антиоксидантными свойствами считаются некоторые лекарственные растения (Хиля В.П., 2003).

Синтетические и природные антиоксиданты, относясь к различным классам химических соединений, тем не менее, обладают одним общим свойством - способностью тормозить реакции окисления. Но лекарственные средства растительного происхождения имеют ряд преимуществ перед синтетическими аналогами. В химическом отношении структура препаратов природного происхождения крайне близка к структуре метаболитов, вырабатываемых организмом человека, что обусловлено его эволюционной адаптацией и, соответственно, широкой доступностью для воздействия его ферментативных систем. В результате организм способен не только перерабатывать и усваивать биогенные природные соединения, но при этом и эффективно их обезвреживать (МоаНл Я., Баигоп Я. 1993). Это делает безопасными лекарственные препараты на основе растительного сырья.

В настоящее время для восстановления функции печени используются растительные антиоксидантные средства. При этом внимание учёных привлекают как широко известные препараты (производные расторопши пятнистой - силимар, силимарин и др.), так и новые (фенольные соединения), среди которых наиболее активно изучаются фенилпропаноиды и флавоноиды (Дроговоз С.М., 2008; Ва1ашиги§ап в., 2008).

Для повышения естественной резистентности животных используются биологически активные добавки на основе дигидрокверцетина, однако, в связи с их недавним применением в животноводстве, в литературных источниках имеется мало данных об их влиянии на организм, особенно в раннем по-станатальном онтогенезе.

В этой связи представляются актуальными исследования по расширению спектра и поиска лекарственных препаратов, уже применяющихся в качестве антиоксидантных и гепатопротекторных средств, а также выявлению перспективных сырьевых источников для получения фитопрепаратов с высокой фармакологической активностью, положительно влияющих на функциональное состояние печени и физиологическое состояние животных, повышающих их естественную резистентность и продуктивность.

Исходя из этого, нами совместно с учёными-химиками ЗАО «Петро-хим» был изучен побочный продукт, образующийся при производстве дигидрокверцетина, который получил название биофлавоноидный комплекс лиственницы. Он представляет собой сыпучую порошкообразную массу кремового цвета и содержит в своём составе в пересчете на сухое вещество: ди-гидрокверцетин — 8,5%; димеры и тримеры дигидрокверцетина - 5%; дигид-рокемпферол - 5%; эриодиктиол - 1,5%; нарингенин - около 1%; остальное -неидентифицированные природные вещества.

Комплекс обладает биологической активностью, превышающей активность очищенного дигидрокверцетина в 1,2 -1,4 раза.

Учитывая перспективность его применения в свиноводстве как биологически активного вещества, стимулирующего рост поросят, нормализующего обмен веществ и функцию печени, нами проведены комплексные его исследования.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы состояла в изучении влияния биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние, естественную резистентность, интерьерные и продуктивные показатели поросят с тем, чтобы предложить этот комплекс в качестве биологически активной добавки к корму для свиней.

Для достижения цели на разрешение были поставлены следующие задачи:

• определить безвредность биофлавоноидного комплекса лиственницы на лабораторных животных;

• изучить его влияние на морфологический состав и биохимические показатели крови, естественную резистентность и интенсивность роста поросят-молочников и поросят-отъёмышей;

• установить и экономически обосновать оптимальные дозы биофлавоноидного комплекса лиственницы, при которых увеличиваются приросты поросят и повышается их сохранность;

• выявить возможные изменения физико-химических показателей мяса поросят, получавших биофлавоноидную добавку к корму;

• определить в модельных опытах влияние биофлавоноидного комплекса на функциональное состояние печени крыс;

• экономически обосновать возможность использования биофлавоноидной добавки в рационах свиней. Научная новизна работы.

Установлено, что биофлавоноидный комплекс лиственницы малотоксичен для лабораторных животных и поросят. Применяемый в качестве добавки к корму, он положительно влияет на морфологические и биохимические показатели крови, повышает естественную резистентность и сохранность поросят.

Определены оптимальные дозы биофлавоноидной добавки, при которых стимулируется рост поросят без увеличения затрат корма на приросты и повышается сохранность животных.

Биофлавоноидный комплекс улучшает функциональное состояние печени белых крыс и повышает её антитоксическую функцию.

Практическая значимость работы. Предлагается новое средство для улучшения физиологического состояния поросят и нормализации антитоксической функции печени.

Практическое применение биофлавоноидного комплекса лиственницы осуществляется в хозяйствах Белгородской области. Препарат выпускает ЗАО «Петрохим» (г. Белгород).

Основные положения, выносимые на защиту:

• результаты изучения токсикологических свойств биофлавоноидного комплекса лиственницы;

• обоснование оптимальных доз препарата по влиянию на физиологическое состояние поросят с целью получения высокой сохранности и приростов животных, улучшения качества животноводческой продукции;

• данные по влиянию биофлавоноидного комплекса лиственницы по восстановлению функции печени;

• эффективность применения биофлавоноидного комплекса лиственницы в свиноводстве по сравнению с дигидрокверцетином.

Апробация и публикации. Результаты исследований были представлены на международных научно-практических конференциях: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (Белгород, 2011), «Актуальные проблемы научного и кадрового обеспечения инновационного развития АПК» (Казань, 2012), «Актуальные вопросы и тенденции развития биологии, химии, физики» (Новосибирск, 2012), «Актуальные проблемы современной науки: свежий взгляд и новые подходы» (Йошкар-Ола, 2012) и расширенном заседании кафедры инфекционной и инвазионной патологии Белгородской государственной сельскохозяйственной академии (2012). По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ в сборниках международных конференций, центральных журналах и отдельных изданиях (из них 4 в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Библиографический список включает 145 источников, в том числе - 23 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 5 рисунками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Бнофлавононды и их влияние на организм человека и животных

Действующее начало в составе препаратов растительного происхождения чаще всего представлено компонентами таких крупных семейств, как терпеноиды, стероиды, алкалоиды, каротиноиды и флавоноиды (Уминский A.A., 2008).

Флавоноиды являются одной из самых распространённых групп природных соединений. Флавоноиды присущи, в основном, высшим растениям, однако встречаются также в водорослях, грибах и в мохообразных. Представители большинства классов флавоноидов встречаются у папоротникообразных и голосемянных растений, а наиболее часто - у покрытосемянных (Ефимов С.Н., 2004).

Термин «биофлавоноиды» впервые появился в середине прошлого века. В 1936 - 1937 годах лауреат Нобелевской премии венгерский биохимик Альберт Сент-Дьёрди в результате поиска противоцинготных факторов пищи выделил из лимона и красного перца субстанцию, которая способствовала укреплению капилляров и повышала противоцинготную активность аскорбиновой кислоты. Вскоре выяснилось, что в пищевых и лекарственных растениях достаточно часто встречаются вещества, обладающие биологически активным действием. Назвали эти вещества растительного происхождения флавоноидами, или биофлавоноидами. Особое внимание изучению значимости флавоноидов стали уделять в конце XX - начале XXI вв. К настоящему времени в различных растительных источниках обнаружено и описано более 9000 флавоноидных соединений, принадлежащих к восьми основным классам (Федорова Т.Е. и соавт., 2009).

Исследование флавоноидных соединений коры лиственницы было начато в 70-х годах XX века (Пашинина J1.T. и соавт., 1970, 1973; Тюкавкина Н.А и соавт., 1973; Лейман З.А., 1974). В коре лиственницы широко распространены гликозиды и сахарные эфиры оксикоричных кислот. Оксикоричные кислоты занимают особое положение среди растительных фенольных соединений, поскольку они являются биогенетическими предшественниками большинства других фенольных соединений (Бутылкина А.И., 2006).

Флавоноиды представляют собой полифенольные соединения, в структуре которых лежит дифенилпропановый углеродный скелет, т.е. соединения С3-С3-С6 ряда, имеющие в молекуле два бензольных кольца, соединённых друг с другом трёхуглеродным фрагментом (Бриттон Г., 1986; Pietta P.-G., 2000; Burda S, Oleszek W., 2001; Svobodova A., 2003; Nandave M. et al., 2005; Grotewold E., 2006; Сергеева E.O., 2007; Patel J.M, 2008). Большинство из флавоноидов находятся в клетках в виде соединений с сахарами (гликозиды) и органическими кислотами.

Другое название флавоноидов - арилбензо[Ь]пираны. Биогенетеческим предшественником этих соединений является халкон (Семёнов A.A., 2000, Белянин M.JT, 2010). Циклизация халкона ведёт к биосинтезу флаванона, который таким образом является предшественником всех других типов. Они образуются из халкона в результате реакций окисления, восстановления, гидратации, дегидрирования (Семёнов A.A., 2000).

В зависимости от структуры флавоноиды классифицируют: 1) по количеству ОН-групп в молекуле как полифенолы; 2) по количеству ароматических фрагментов как полиядерные фенолы (Бурлев В.А., 2010). Общепринятая классификация флавоноидов предусматривает их деление на классы, исходя из степени окислености центрального трёхуглеродного фрагмента (атомы Сг, Сз и С4). Основными классами флавоноидов являются: флаваны, катехины, лейкоантоцианидины, антоцианидины, флаванононы, флавононо-лы, флавоны, флавонолы.

Флаваны - наиболее восстановленные производные арилбен-зо[Ь]пирана- в природе встречаются редко.

Термин «катехины» происходит от названия тропической акации катеху, из которой эти вещества были впервые выделены. Катехины - бесцветные вещества, находящиеся во многих растительных пищевых продуктах, обладают гепатопротекторным действием, укрепляют стенки кровеносных капилляров, способствуют усвоению аскорбиновой кислоты, участвуют в антиканцерогенной защите (Бутылкина А.И., 2006).

В ряде работ сообщается об обнаружении в коре лиственницы эпиаф-целехина, эпикатехина, галлокатехина (Пашинина Л.Т., 1970; Лейман З.А., 1974).

Лейкоантоцианидины, или флаван-3,4-диолы, встречаются в составе очень многих растений. Это - весьма неустойчивые соединения и в природе функционируют как предшественники конденсированных танидов (Бутылкина А.И., 2006). Попытка обнаружения в коре лиственницы лейкоантоциа-нидинов была безуспешна, вероятнее всего, из-за их высокой реакционной способности, но они являются необходимым звеном в биосинтезе флаван-3-олов.

Антоцианидины образуются из лейкоантоцианидинов путём отщепления молекулы воды и удаления протона окислением. В естественном состоянии антоцианидины находятся в виде гликозидов, которые называются анто-цианинами. Как правило, антоцианины не обладают физиологической активностью. Они обусловливают окраску соков и вин, а также выделяются из плодов и ягод для использования в качестве пищевых красителей.

Из флавоноидов, содержащих кетонную группу, наименее окисленный тип - флаваноны. Эти соединения встречаются в большинстве семейств высших растений. Например, они обычны в древесине лиственницы, сосны и других хвойных. Богатым источником флаванонов служат цитрусовые. В коре лиственницы обнаружен только один представитель флаванонов - нарин-генин (Иванова Н.В., 1999).

Флаванонолы, т.е. 3-гидроксифлаваноны, встречаются в природе редко. Однако некоторые из них находятся в значительных количествах в отдельных видах растений. Так, таксифолин (дигидрокверцетин) - основной флаво-ноидный компонент флавоноидной фракции, извлекаемой из древесины лиственницы (Бабкин В.А., 2008).

Флавоны, как и их 3-гидроксипроизводные (флавонолы), относятся к наиболее распространённым метаболитам растительного мира. Эти вещества можно найти практически в любом виде растений. Среди растительных метаболитов достаточно часто встречаются димерные производные флавона, называемые бифлавоноидами (Семёнов A.A., 2000). В коре лиственницы идентифицирован ряд флавонолов: кемпферол, кверцетин, мирицетин, изо-рамнетин, морин (Иванова С.З., 2002).

Являясь малотоксичными соединениями, флавоноиды обладают анти-оксидантными, капилляропротекторными, желчегонными, гепатозащитными, кардиопротекторными, противоатеросклеротическими, противовоспалительными, антимикробными, противовирусными и другими видами фармакологических свойств (Saija А., 1995; Колхир В.К., 2002; Абидуева Е.Ю., 2005; Носков С.Б., 2011).

Укрепление сосудистой стенки и снижение ломкости капилляров выражено наиболее сильно у гликозидов флавоноидов. Желчегонное действие таюке свойственно флавоноидам и возрастает в ряду флавонолы < флавоны < халконы < флаваноны. Флавонолы в основном оказывают влияние на обезвреживающую функцию печени (Бачинский О.Н., 2005).

Флавоноиды как антиоксиданты играют важную роль в предупреждении нарушений структуры и функции печени при различных патологических состояниях, ускорении регенерации и восстановлении функциональной активности гепатоцитов. Прооксидантный эффект многих гепатотропных ядов в значительной степени определяет патогенез их повреждающего действия на печень, поэтому необходимость использования флавоноидов в качестве гепа-топротекторов не вызывает сомнения (Гордиенко А.Д., 1990).

Флавоноиды способны захватывать свободные радикалы как непосредственно, так и участвовать в восстановлении других антиоксидантов. Непосредственное антиоксидантное действие флавоноидов реализуется за счет наличия в их структуре слабых фенольных гидроксильных групп, легко отдающих свой атом водорода при взаимодействии со свободными радикалами.

Сами они превращаются в малоактивные феноксильные радикалы (Накусов Т.Т., 2009).

Прооксидантные и антиоксидантные свойства флавоноидов во многом зависят от их растворимости, концентрации, соотношения окислителей и восстановителей в среде, наличия металлов переменной валентности, рН среды, соотношения скорости взаимодействия флавоноидов с пероксильными радикалами и скорости взаимодействия радикала с жирнокислотными остатками фосфолипидов и многих других факторов (Сергеева Е.О., 2007).

По степени антиоксидантной активности сравнение ряда флавоноидов в эксперименте позволило расположить их в следующем порядке: мирицетин > кверцетин > рамнетин > морин > диосметин > нарингенин > апигенин > ка-техин > 5,7-диокси-3,4,5-триметоксифлавон > робинин > кемпферол > фла-вон (Hussain S.R., 1987; Furusawa М. et al., 2005).

Из коры лиственницы сибирской выделены и идентифицированы фла-воноидные гликозиды кверцетин-З-О-а-Ь-рамнофуранозид (кверцитрин), кверцетин-З-О-а-Ь-арабинофуранозид (авикуларин) и кверцетин-3-O-a-L-арабинопиранозид (гуаявирин) (Иванова С.З. и соавт., 2011).

В 1973 г. из коры лиственницы сибирской Larix sibirica Л.Т.Пашининой с сотрудниками был выделен биофлавоноид лиственол, уточнённую структуру которого изучили Z.Shen и сотрудники в 1985 г. благодаря использованию более совершенных методов исследования. Авторы назвали изученное вещество лариксинолом (larixinol). Было выяснено, что данное соединение относится к новому классу флавоноидных соединений - спиробифлавоноидов.

К настоящему времени кроме лариксинола из коры лиственницы выделены ещё три спиронофлавоноидных соединения: лариксидинол, ларизинол и трифлариксинол (Федорова Т.Е. и соавт., 2009).

Исследования химического состава полифенольного комплекса коры лиственницы показали, что он является сложной смесью фенольных соединений (Иванова С.З. и соавт., 2002). С помощью хроматографических методов полифенольный комплекс коры лиственницы можно разделить на фракции: I - фенолокислоты и их эфиры; II - мономерные флавоноиды; III - спи-рофлавоноиды; IV - олигомерные и полимерные флавоноидные соединения. Содержание фракций составило: I - 7 - 10%, II - 12 - 15%; III - 35 - 40% и IV - 40 - 45% (Гордиенко И.И. и соавт., 2008).

При проведении исследования в лаборатории фармакологии НИОХ СО РАН (Новосибирск) было выявлено, что полифенольный комплекс коры лиственницы обладает капилляроукрепляющей активностью, превосходящей активность дигидрокверцетина, известного мощного антиоксиданта и капил-ляропротектора, в 1,2 — 1,4 раза. По величине антиоксидантного эффекта сравним или незначительно уступает, а по гепатопротекторному превосходит дигидрокверцетин, при этом его антихолестазные свойства выражены в среднем в 2 раза сильнее (Федорова Т.Е. и соавт, 2009).

Наиболее важная для растения внутренняя часть коры, граничащая с камбием, осуществляющая проведение продуктов ассимиляции, создающая нисходящий ток веществ, участвующая в накоплении веществ, используемых в процессе жизнедеятельности растения - это луб (флоэма). Из луба лиственницы идентифицированы нарингенин, эриодиктиол, дигидрокемпферол, дигидрокверцетин, кемпферол, кверцетин, (+)-катехин, ресвератрол и астринге-нин (Иванова С.З. и соавт., 2011).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Харченко, Юрий Алексеевич

выводы

1. Биофлавоноидный комплекс лиственницы является малотоксичным биологически активным средством. Он не обладает хронической токсичностью, местнораздражающим и аллергенным действием и согласно классификации ГОСТ 12.1.007-76 его можно отнести к 4 классу токсичности.

2. Оптимальной дозой биофлавоноидного комплекса лиственницы для поросят-молочников и поросят-отъёмышей является 1,0 г/ кг массы тела.

3. Применение биофлавоноидного комплекса поросятам-молочникам в качестве добавки к корму в дозе 1,0 г/кг массы тела способствует увеличению среднесуточных приростов (на 19,1%), снижению до физиологических значений активности аланинаминотрансферазы (на 14,5%) и щелочной фосфатазы (на 6,2%). Увеличивается фагоцитарная активность нейтрофилов (на 24,2%), в сыворотке повышается количество альбуминов (на 34,7%) и содержание иммуноглобулинов в сыворотке (на 13,5%).

4. В опытах на поросятах-отъёмышах биофлавоноидный комплекс, применяемый в дозе 1,0 г/кг массы тела, способствует повышению среднесуточных приростов (на 8,3 %), увеличению альбуминов в сыворотке крови (на 22,5%), снижению активности аланинаминотрансферазы (на 21,1%), повышению фагоцитарной активности нейтрофилов (на 17,3%).

5. Влияние биофлавоноидного комплекса лиственницы на физиологическое состояние поросят-отъёмышей было выражено больше, чем действие дигидрокверцетина.

6. Биофлавоноидный комплекс лиственницы, применённый белым крысам на фоне гепатита, вызванного четырёххлористым углеродом, восстанавливает антитоксическую функцию печени, нормализует в сыворотке крови активность ферментов переаминирования и щелочной фосфатазы, снижает до физиологических значений содержание билирубина и глюкозы, повышает уровень общего белка.

7. Дигидрокверцетин, применяемый белым крысам на том же фоне, что и биофлавоноидный комплекс лиственницы, оказывает слабое действие на восстановление функционального состояния печени крыс.

8. Экономическая эффективность применения поросятам-отъёмышам биофлавоноидного комплекса лиственницы в дозе 0,5 г/кг массы тела составляет 1,3 руб. на 1 руб. затрат, в дозе 1,0 г/кг — 2,9 руб. и в дозе 2,0 г/кг- 1,6 руб. на 1 руб. затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Биофлавоноидный комплекс лиственницы рекомендуется использовать как добавку к рационам поросят для повышения естественной резистентности, улучшения физиологического состояния организма и нормализации антитоксической функции печени.

Препарат рекомендуется применять с кормом из расчёта 1,0 г/кг массы тела: поросятам-молочникам - начиная с 15-суточного возраста и до отъёма, поросятам-отъёмышам - курсами по 20-25 суток.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Харченко, Юрий Алексеевич, Белгород

1. Абидуева Е.Ю. Повреждения печени сельскохозяйственных и лабораторных животных и их коррекция лекарственными средствами природного происхождения: Дис. док. биол. наук. Улан-Удэ, 2005.- 316 с.

2. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер. Наука. Ленинград.-1985.- С 230.

3. Альберт А. // Физико-химические основы терапии. М.: Медицина, 1989.

4. Байматов Н.В. Коррекция морфофункциональных нарушений печени в комплексном хирургическом лечении ее токсических поражений (экспериментально-клиническое исследование): Дис. . канд. мед. наук. Уфа, 2007.- 154 с.

5. Бакулин И.Г., Сандлер Ю.Г. Возможности применения гепатопротек-торов в практике врача-терапевта // Consilium Medicum Ukraina, №2, 2010, с. 22 -25.

6. Барабой В.А. Перекисное окисление и стресс. СПб: Наука, 1992. -148 с.

7. Басович О.С. Биологическое окисление и стимуляция антиоксидантной системы организма. Прерывистая нормобарическая гипокситерапия. Доклады Академии проблем гипоксии РФ, т.З, М.: ПАИМС, 1999. -С.40-47.

8. Бачинский О.Н. Исследование кардио- и гепатопротекторного действия дигидрокверцетина и лабазника шестилепестного: Дис. . канд. фам. наук. Москва, 2005.- 138с.

9. Близнецова Г.Н Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при токсическом повреждении печени: Дис. . канд. биол. наук. Воронеж, 2004.- 194 с.

10. Блюгер А.Ф., Карташова O.A. Моделирование патологических процессов в печени. В кн.: Экспериментальная патология печени. Рига: Зи-натне, 1983, с. 7 16.

11. Блюгер А.Ф., Залцмане В.К., Карташова O.A. Ультраструктурная патология печени: Электронно-микроскопический атлас. Рига: Зинатне, 1989.-319 с.

12. Блюгер А.Ф., Майоре А.Я. Исследование основных патологических линий поражения печени в условиях клинической и экспериментальной патологии и подходы к регуляции и купированию этих процессов. //Успехи гепатологии. Рига. - 1982. - Вып. 10. - 12-34.

13. Бриттон Г. Биохимия природных пигментов: Пер. с англ. М.: Мир, 1986.-422с.

14. Бунятян Н. Д., Герасимова О. А, Сахарова Т. С, Яковлева JI. В. Природные антиоксиданты как гепатопротекторы // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1999, Т. 62, № 3. с. 64-67.

15. Бутылкина А.И. Превращения флавоноидов коры пихты и лиственницы в антоцианидиновые соединения: Дис. . канд. хим. наук. Красноярск, 2006.- 103с.

16. Бурлев В.А. Флавоноиды: значение антиоксидантных и антиангиоген-ных свойств в акушерстве и гинекологии (обзор литературы) // Проблемы репродукции, №1, 2010, с. 24 31.

17. Бурлакова Е.Б. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты / Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова // Успехи химии. 1985. -Т. 54,№9.-С. 1540-1588.

18. Бурлакова Е.Б. Роль токоферолов в пероксидном окислении биомембран / Е.Б. Бурлакова, С.А. Крашаков, Н.Г. Храпова // Биол. Мембраны. 1988, № 15(2), 137-167.

19. Валеева И.Х. Фармакологическая коррекция нарушений перекисного окисления липидов, вызываемых ксенобиотиками: Дис. . док. биол. наук. Казань, 2004.- 330 с.

20. Виноградова Л.Ф. Теоретические и экспериментальные и основы анти оксидантов при токсических аллергических поражениях печени Тезисы докл. IV Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». Москва. 1997. С. 200.

21. Виноградова Л.Ф., Мирзоян Ж.А., Харлицкая Е.В., Манякина Н.С. Восстановление экскреторной функции печени антиоксидантами при токсическом гепатите // Вестник РУДН, серия Медицина, 2000, №2, с. 53-55.

22. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1982. 252 с.

23. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал, том 6, № 9, 2000, с. 13 -19.

24. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика, 1987. Т.32, №5, с. 830-844.

25. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и незапрограммированная смерть клетки // Соросовский образовательный журнал, том 6, №9, 2000, с. 2-9.

26. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал, том 6, №9, 2000, с. 13-19.

27. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. Общие механизмы токсического действия / АМН СССР.- Л.: Медицина, 1986.- 280с.

28. Гонский Я.И., Корда М.М., Клищ И.Н. и др. Роль антиоксидантной системы в патогенезе токсического гепатита // Патол. физиол. эксп. тер.- 1996.-№2. -С. 43-45.

29. Гордиенко А.Д. Гепатопротекторный механизм действия флавоноидов // Фармация. 1990, №3, с. 75 - 78.

30. Горд1енко А.Д., Левченко В.В., Яковлева Л.В. Пор1вняльна гепатопро-текторна активнють нового комплексного препарату «Лшофен» 1 есенщале в умовах гострого СС14-гепатиту у щур1в // Вюник фармацп, №2 (54), 2008.-с. 75-77.

31. Гордиенко И.И., Фёдорова Т.Е., Иванова С.З., Бабкин В.А. Влияние экстрагента на компонентный состав фенольного комплекса, извлекаемого из коры лиственницы Гмелина // Химия растительного сырья. 2008. №2. С. 35-38.

32. Додонов Н.С. Влияние флавоноидов на перекисное окисление липидов и активность антиоксидантных систем при токсическом поражении печени: Дис. канд. фарм. наук. Самара, 2007.- 188 с.

33. Дроговоз С. М., Щекина Е. Г., Ушакова А. Современные подходы к терапии заболеваний гепатобилиарной системы / / Провизор. 2008. - № 8.-С. 19-22.

34. Дынжинова Е.А. Фармакологическая активность и фармакотерапевти-ческая эффективность гепатопротекторного растительного средства при остром токсическом гепатите: Дис. . канд. мед. наук. Улан-Удэ, 2007.- 137 с.

35. Егоров В.А., Мошкова Л.В., Куркин В.А., Петрухина И.К. Гепатопро-текторные и иммунотропные лекарственные средства: состояние и перспективы фармацевтического рынка: Монография. Самара: СамГМУ, 2000.- 120 с.

36. Ефимов С.Н. Разработка лекарственного растительного сбора как основы для создания антимутагенного фитосредства: Дис. . канд. фам. наук. Томск 2004. 149 с.

37. Иванова Н.В., Остроухова Л.А., Бабкин В.А., Иванова С.З., Попова O.A. Комплекс мономерных фенольных соединений коры лиственницы // Химия растительного сырья. 1999. №4.- с.5 7.

38. Иванова С.З., Федорова Т.Е., Иванова Н.В., Федоров C.B., Остроухова Л.А., Малков Ю.А., Бабкин В.А. Флавоноидные соединения коры лиственницы сибирской и лиственницы Гмелина // Химия растительного сырья. 2002. №4.- с.5 13.

39. Иванова С.З., Федорова Т.Е., Иванова Н.В., Остроухова JI.A., Малков Ю.А., Бабкин В.А. Фенольные соединения коры лиственницы сибирской // Хвойные бореальной зоны.- 2003.- Вып.1.- С. 123 128.

40. Иванова С.З., Горшков А.Г., Кузьмин A.B., Гордиенко И.И., Бабкин

41. B.А. Фенольные соединения луба лиственницы сибирской и лиственницы Гмелина // Химия растительного сырья. 2011. №2.- с. 107 112.

42. Карачурина JI.T. Биохимические механизмы гепатопротекторного действия тритерпеноидов группы лупана и их фармакологическая активность: Дис. канд. биол. наук. Уфа, 2004.- 152 с.

43. Колхир В.К. Поиск и разработка фитопрепаратов, содержащих тритер-пеноиды и флавоноиды: Автореферат дис. . док. мед. наук. Купавна, 2002.- 71с.

44. Королёва Л.Р. Современные гепатопротекторы // Российский медицинский журнал. 2005. - №2. - с. 35 - 37.

45. Краснокутская З.Е Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита в патогенетических механизмах некоторых заболеваний: Дис. канд. биол. наук. Душанбе, 2003.- 94 с.

46. Кудрявцев А. А., Кудрявцева JL А. Клиническая гематология животных.— М., 1974, 176 с.

47. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соросовский образовательный журнал, 1999, №1, с. 2-7.

48. Куркин В.А., Лебедев A.A., Запесочная Г.Г., Волоцуева A.B., Лебедева Е.А., Булатова М.В. Антиоксидантные свойства флаволигнанов плодов Silybum marianum (L.) Gaertn. // Растительные ресурсы, 2003. -Т. 39, №1.-С 89-93.

49. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Авдеева Е.В., Ежков В.Н. Фенилпропа-ноиды лекарственных растений: Монография. Самара: ООО «Офорт»; ГОУ ВПО «СамГМУ», 2005. - 128 с.

50. Кутепов Д. Е. Оптимизация лечения печеночной недостаточности на основе молекулярной адсорбирующей рециркулирующей системы: Дис. канд. мед. наук. Москва, 2005.- 113 с.

51. Левшин Б.И. Экспериментальная фармакотерапия препаратами селена и тиазоли-дина токсического повреждения печени. // Дисс. докт. мед. наук. Харьков. - 1973. -325 С

52. Лейман З.А. Изучение полифенолов коры лиственницы сибирской: Ав-тореф. дис. . канд. хим. наук. Алма-Ата, 1974.

53. Лужников Е.А. Клиническая токсикология: Учебник. М.: Медицина, 1994.-256 с.

54. Мазуренко О. Гепатотропные препараты: синергия опыта и инноваций // медицинская газета «Здоровье Украины» № 12/1, 2009, с. 47.

55. Мисюрева C.B. Поиск и фармакологическое изучение природных и синтетических флавоноидов, аминосахаров и их производных как потенциальных гепатопротекторов: Дис. . канд. фам. наук. Харьков -Купавна, 2001.- 168с.

56. Мююрьова C.B., Зупанець I.A., Журавель I.O., Ковальов В.М., Хшя В.П. Вивчення гепатопротекторно'1 активное^ флавошв, флавонол1в i флаваношв на модел1 гострого ураження печшки тетрахлорметаном // Вюник фармаци, №3 (39), 2004. с. 66 - 70.

57. Накусов Т.Т. Влияние кверцетина и дигидрокверцетина на свободнора-дикальные процессы в разных тканях крыс, подвергнутых гипоксиче-ской гипоксии: Дис. канд. биол. наук. Ростов-на-Дону, 2009.- 161 с.

58. Николаев С.М., Шантанова JI.H., Мондодоев А .Г., Занданов А.О., Лем-за C.B., Чукаев С.А. Свободнорадикальное окисление и скрининг анти-оксидантов, адаптогенов с использованием биотест-систем // Бюллю-тень ВСЩ СО РАМН, 2010, № 2 (72). с. 196 - 200.

59. Олейник А.Н. Влияние антиоксидантов на перекисное окисление липидовпри комбинированном поражении печени. // Фармакол. и токсикол. 1983. -№3. -С. 39-41.

60. Олейник А.Н. Функционально-биохимическая характеристика острого поражения печени циклофосфаном и его коррекция антиоксидантами. / / Автореф. дисс. канд. мед. наук. Киев. - 1988. - 21 С

61. Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнений кожи (методические указания) № 2102-79. М., 1980, 23 с.

62. Палш 1.Г. Есенщальш фосфолшщи: реали та перспективи застосування // Укр. мед. часопис, 2 (70) III/IV, 2009, с. 43 - 46.

63. Пашинина JI.T., Чумбалов Т.К., Лейман З.А. Катехины коры Larix si-birica // Химия природных соединений. 1970.№4.С. 478.

64. Пашинина Л.Т., Чумбалов Т.К., Лейман З.А. Флавоноиды лиственницы сибирской // Тезисы второго симпозиума по фенольным соединениям / Алма-Ата: Наука. Каз ССР. 1970.- С.44.

65. Пашинина Л.Т., Чумбалов Т.К., Лейман З.А. Лиственол новый фла-воноид коры Larix sibirica // Химия природных соединений. 1973.№4,5.С. 623-629.

66. Подымова С.Д. Болезни печени / С.Д. Подымова. М.: Медицина, 1998.-480 с.

67. Подымова С.Д. Болезни печени.-М.:Медицина. 1993. с. 6-20.

68. Радбиль О.С. Свободные радикалы и заболевания органов пищеварения /О.С. Радбиль // Клин.мед. 1989. - № 3. - С.17-21.

69. Ребров В.Г., Громова O.A. Витамины и микроэлемен ты. М.: Изд-во «Алев-В», 2003.

70. Роль антиоксидантной системы в патогенезе токсического гепатита / Я.И. Гонский, М.М. Корда, И.Н. Клищ и др. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1996. - №2. - 43-45.

71. Равилова Ю.Р. Особенности течения токсического гепатита у крыс при введении биофлавоноидов: Дис. канд. мед. наук. Новосибирск, 2002,108 с.

72. Рыжикова, М.А. Бнофлавоноид-содержащие растения как потенциальные антиоксиданты / М.А. Рыжикова, Д.М. Габитова и др.// Биоантиок-сидант: Тезисы докладов VI конференции. Москва.- 2002. -С501-503.

73. Саноцкий И. В. Методы определения токсичности и опасности химических веществ / И. В. Саноцкий. М.: Медицина, 1970. - 316 с.

74. Свиридов М.М. Свойства и регуляция активности 6-фосфоглюконатдегидрогеназы в условиях оксидативного стресса при токсическом поражении печени крыс: Дис. . канд. биол. наук. Воронеж, 2006.- 150 с.

75. Свиридкина Л.П., Попова А. Г. Влияние антиоксидантов на скорость выведения перекисного окисления из околоклеточного окружения. Тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». Москва. 2006.-С. 278.

76. Северин Е.С., Алейникова Т.Д., Осипов Е.В. Биохимия: Учебник для вузов, М.: ГЭОТАР-Медиа, 2004. 784 с.

77. Сейфулла Р.Д., Борисова И.Г. Проблемы фармакологии антиоксидантов // Фармакология и токсикология 1990. - т.53. - № 6. - С.З - 10.

78. Семёнов А.А. Очерк химии природных соединений. Новосибирск: Наука. Сибирская издательская фирма РАН, 2000. - 664 с.

79. Сергеева Е.О. Влияние флавоноидов на механизмы развития окислительного стресса при токсических поражениях печени: Дис. . канд. фарм. наук. Пятигорск, 2007.- 202с.

80. Скакун Н.П., Олейник А.Н., Блихар Е.И. Комбинированная фармакотерапия заболеваний печени с использованием антиоксидантов. Методические рекомендации. Тернополь. - 1987. -С 16.

81. Скакун Н.П. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе заболеваний печени // Врач. дело. 1987. - № 10. - С. 86-91.

82. Скакун, Н.П. Сравнительная эффективность растительных флавоноид-пых препаратов при остром поражении печени / Н.П. Скакун, И.П. Мо-сейч) // Фармакол. и токсикология. 1991. - № 26. -С.120-123.

83. Симонян Г. А. Ветеринарная гематология / Г. А. Симонян, Ф. Ф. Хи-самутдинов. -М.: Колос, 1995. 256 с.

84. Скакун, Н.П. ^Эффективность антиоксидантов при комбинированном поражении печени четыреххлористым углеродом / Н.П. Скакун, Ф. Ковальчук // Фармакол. и токсикология. 1987. - № 3 . - 97-99.

85. Скворцов В.В. Оптимизация лечения хронических диффузных заболеваний печени с использованием лазеротерапии: Дис. . док. мед. наук. Волгоград, 2005.- 230 с.

86. Сорокина И.В. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободно-радикальному окислению. / И. В. Сорокина, А.П. Крысин, Т.Б. Хлебникова. — Новосибирск: Изд-во РАН. 1997.

87. Тулаганов Р.Т., Набиев А.Н. Гепатозащитное действие минерало-солевого препарата «Гепатин» при экспериментальном тетрахлормета-новом гепатите // Ушверситетська юпшка. 2008. - ТА, №1. - С. 89 — 91.

88. Тюкавкина H.A., Лаптева К.И., Медведева С.А. Фенольные экстрактивные вещества рода Larix // Химия древесины. 1973. №13, С. 317.

89. Уминский A.A., Баканёва В.Ф. Биохимия флавоноидов и их значение в медицине //Химия и технология растительных веществ: Тезисы докладов V Всероссийской научной конференции. Уфа, 2008. -348с. С.59.

90. Уткина Е.А. Зависимость антиоксидантной активности флавоноидов от их физико-химических характеристик в различных системах: Дис. канд. хим. наук. Москва, 2005.- 111 с.

91. Фархутдинов P.P., Загидуллин Ш.З., Абдрашитова Н.Ф., Мирхай-даров А.Р., Тихонов A.B. Биоантиоксиданты и проблемы их применения в клинической практике // Здравоохранение Башкортостана. 1996. - №1- С. 41 -47.

92. Федорова Т.Е., Иванова С.З., Иванова Н.В., Федоров C.B., Остро-ухова JI.A., Бабкин В.А. Лариксидинол новый спиробифлавоноид из коры лиственницы сибирской и лиственницы Гмелина // Химия растительного сырья. 2003. №2.С.5 - 8.

93. Федорова Т.Е., Иванова С.З., Бабкин В.А. Спирофлавоноидные соединения: структура и распространение в природе // Химия растительного сырья. 2009. №4.С.5 13.

94. Хазанов А.И. К вопросу о клиническом значении функциональных проб печени. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатоло-гии, копроктологии. 1998. - Том.VIII. - №5. - С.29 - 34.

95. Харрисон Т.Р. (ред.). Диагностические методы исследования печени. // Внутренние болезни: в 10 кн.: Пер. с англ. М.: Медицина. -1996.-Том.7.-С.188— 191.

96. Хендерсон Дж.М. // Патофизиология органов пищеварения.: Пер. с англ. М. - СПб.: Бином - Невский Диалект. - 1997. - 287с.

97. Хребтовский A.M. Анатомо-функциональная характеристика печеночных лимфатических узлов при токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом и спиртом: Дис. . канд. мед. наук. Москва, 2008.- 243 с.

98. Царева A.A. Антиоксидантная активность фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, при токсическом поражении печени: Дис. канд. мед. наук. Самара, 2007.- 177 с.

99. Шарапов И.В. Влияние производных бестулина на антиоксидант-ный гомеостаз и метаболизм ксенобиотиков в печени при экспериментальной полихимиотерапии: Дис. . канд. мед. наук. Новосибирск, 2009.- 120 с.

100. Шепелев А.П., Корниенко И.В., Шестопалов, A.B., Антипов А.Ю. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных болезней. Вопросы медицинской химии. 2000. - №2. - с. 5459.

101. Шульгин К.К. Регуляция активности глутатионпероксидазы при токсическом поражении печени крыс и действии веществ-протекторов: Дис. канд. биол. наук. Воронеж, 2008.- 173 с.

102. Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н. Источники образования свободных радикалов и их значение в биологических системах в условиях нормы // Современные наукоемкие технологии. -2006. -№ 6-С. 28-34

103. Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н. Молекулярно-клеточные механизмы индукции свободнорадикального окисления в условиях патологии // Современные проблемы науки и образования. -2006. -№ 6 -С. 21-26

104. Чернов В.Н. Перекисное окисление липидов и антиокситантная защита печени в стареющем организме при экспериментальной интоксикации тетрахлорметаном: Дис. канд. мед. наук. Уфа, 2008.- 144 с.

105. Aher V.D., Wahi A., Pawdey A.M., Sonawane A. Antioxidants as immunomodulator: an expanding research avenue // International Journal of Pharmaceutical Research, 2010, Vol 3, Issue 1, p. 8-10.

106. Badria A.F., El-Belbasi H., Sobh M.M., Badria F.A. Parallelism study between biochemical, immunological and histochemical parameters of liverinjury induced by carbon tetrachloride on rats // Journal of American Sience, 2011; 7 (5), p. 581 -591.

107. Balamurugan G., Muthusamy P. Observation of the hepatoprotective and antioxidant activities of Trianthema decandra Linn. (Vallai sharunnai) roots on carbon tetrachloride-treated rats // Bangladesh Journal Pharmacology, 2008; №3: p. 83-89.

108. Berry E.M. The effects of nutriens on lipoprotein susceptibiluti to oxidation //Curr. Opin. 1992/ - Vol, 102. - P. 37-46.

109. Burda S, Oleszek W. Antioxidant and antiradical activities of flavon-oids // Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2001, Vol. 49, Issue 6, p. 2774-2779.

110. Floreani A., Baragiotta A., Martines D. et al. Plasma antioxidant levels in chronic cholestatic liver diseases // Aliment. Pharmacol. Ther. -2000. Vol. 14, N 3. - P.353-358.

111. Furusawa M., Tanaka T., Ito T., Nishikawa A., Yamazaki N., Nakaya K., Matsuura N., Tsuchiya H., Nagayama M. Antioxidant activity of hy-droxyflavonoids // Journal of Heals Science, 2005, Vol. 51, No. 3, p. 376 -378.

112. Carg G., Wilmott J., Znaiden A. Protective role of natural antioxidant // Cosmetics Toiletries. 1997. - Vol. 102. - P. 37-46.

113. Grotewold E., Ed. The Science of Flavonoids, Springer, Ohio, USA, 2006, 274 p.

114. Hussain S.R., Gillard J., Gillard P. Hydroxyl radical scavenging activity of flavonoids. // Phytochemestry, 1987; Vol. 26. P. 2489 - 2491.

115. Lai A. A. S., Murthy P. B., Pillai K. S. Screening of hepatoprotective effect of a herbal mixture against CC14 induced hepatotoxicity in Swiss albino mice // The Journal of Environmental Biology, 2007, № 28 (2). p. 201 -207.

116. Moatti R., Fauron R. La phytotherapie: Therapeutique differente. Paris: Libr. Maloine, 1993. P.245.

117. Nandave M., Ojha S.K., Arya D.S. Protective role of flavonoids in cardiovascular diseases // Natural Product Radians, 2005, Vol. 4 (3), p. 166 -176.

118. Pan X., Hussain F.N., Iqbal J., Feuerman M.H., Hussain M.M. Inhibiting proteasomal degradation of microsomal triglyceride transfer protein prevents CCU-induced steatosis // The journal of biological chemistry, 2007, Vol.282, No. 23, p. 17078 17089.

119. Patel J.M. A Review of Potential Health Benefits of Flavonoids // Lethbridge Undergraduate Research Journal. 2008. Vol. 3, No. 2. (http://www.lurj.org/vol3n2.php).

120. Pietta P.-G. Flavonoids as Antioxidants // Journal of Natural Products, 2000, Vol. 63, No. 7, p. 1035 1042.

121. Saini R., Saini S., Sharma S. Antioxidants accelerates cellular health. International Journal of Green Pharmacy 2010; Vol. 4, Issue 3, P. 212.

122. Saija A., Scalese M., Lanza M., Marzullo D., Bonina F., Castelli F. Flavonoids as antioxidant agents: importange of their interacnion with biomembranes // Free Radical Biology and Medicine, Vol. 19, No. 4, p. 481486, 1995.

123. Signal P.K., Petkau A. et al. Free radicals in health and disease Mol. Cell. Biochem. 1988. Vol. 84. P.121-122.

124. Shen Z., Falshaw C.P., Haslam E., Begley M.J. A Novel Spiro-Biflavonoid from Larix gmelinii // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1985, №16. P. 1135- 1137.

125. Sherlock Sh., Dooley Ja. Diseases of the liver and Biliary System. 10th ed. -1997. -P.716.

126. Shi Lu-E, Zhang Z-L., Xing L-Y., Yang D-D, Guo Y-P., Guo X-F., Zhao L-M., Tang Z-X. Antioxidants extraction by supercritical C02 // Journal of Medicinal Plants Research Vol. 5(3), February, 2011. pp. 300-308.

127. Svobodova A., Psotova J., Walterova D. Natural phenolics in the prevention of uv-induced skin damage. A review // Biomedical papers, 2003, Vol. 147 (2), p. 137 145.