Влияние аутоантител к тиреоидным гормонам на зависимые от тиреоидного статуса физиологические функции у крыс

Цвиркун, Дарья Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние аутоантител к тиреоидным гормонам на зависимые от тиреоидного статуса физиологические функции у крыс
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние аутоантител к тиреоидным гормонам на зависимые от тиреоидного статуса физиологические функции у крыс"

на правах рукописи

ЦВИРКУН ДАРЬЯ ВИКТОРОВНА

ВЛИЯНИЕ АУТОАНТИТЕЛ К ТИРЕОИДНЫМ ГОРМОНАМ НА ЗАВИСИМЫЕ ОТ ТИРЕОИДНОГО СТАТУСА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ

ФУНКЦИИ У КРЫС

03 00 13 - "Физиология"

АВТОРЬФЬРА Г диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2007

003058374

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных биологического факультета МГУ им М В Ломоносова (заведующий кафедрой - профессор А А Каменский)

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ

кандидат биологических наук А А Мартьянов

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ академик РАМН И П Ашмарин

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ доктор биологических наук Р А Данилова кандидат биологических наук И Ю Шамакина

Ведущее учреждение Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им П К Анохина РАМН

Защита диссертации состоится «21» мая 2007 года в 15-30 на заседании диссертационного совета Д 501 001 93 биологического факультета Московского государственного университета им MB Ломоносова по адресу 119991 ГСП-1 Москва, Ленинские горы, МГУ им MB Ломоносова, биологический факультет

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета Московского государственного университета им МВ Ломоносова

Автореферат разослан «20» апреля 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Б А Умарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы В клинической практике давно известны различные заболевания, связанные с появлением антител к собственным антигенам организма Значительную часть работ, посвященных изучению таких заболеваний, составляют исследования аутоиммунных заболеваний щитовидной железы, связанных с образованием антител (AT) к различным ее компонентам - к тироглобулину, пероксидазе щитовидной железы, рецептору тиреотропина Еще с 60-х годов 20 века известно, что наряду с перечисленными появляются AT, связывающие тиреоидные гормоны - тироксин и трииодтиронин (Sakata et al, 1985) К настоящему времени наличие аугоантител к тиреоидным юрмонам описано при ряде тиреоидных патологий, сопровождающихся как гипер-, так и гипотиреозом (Staeheli et al, 1975, Ikekubo et al, 1978, Sakata et al, 1985, Nakamura, 1993, Ogawa, 1994 et al, Ruggen et al, 2002) Кроме roi о, антитиреоидные AT нередко обнаруживаются и у здоровых людей (Isozaki et al , 1985, Sakata et al, 1994) и при аутоиммунных заболеваниях нетиреоидного характера ревматоидном артрите (Ruggeri et al, 2002), синдроме Сьегрена (Sakata et al, 1987, Ozgen et al, 2001, Ruggen et al, 2002), системной красной волчанке (Sakata et al, 1987, El-Shenf et al, 2004) Вместе с тем, роль А Г к тиреоидным гормонам до настоящего времени остается не изученной

В эксперименте на животных образование антител к собственным антигенам организма индуцируют методом активной иммунизации, который позволяет вызвать иммунный ответ не только к макромолекулам, но и к низкомолекулярным соединениям, для чего их ковалентно присоединяют к чужеродным белкам, имеющим большую молекулярную массу (Erlanger, 1973, Ковалев, Полевая, 1982) С помощью иммунизации можно моделировать аутоиммунные заболевания, что важно для изучения их патогенеза Кроме того, в последнее время аутоантигела рассматриваются не только как патологический фактор, но и как регуляторные молекулы, а метод активной иммунизации - как способ глубокого, направленного и длительного воздействия на физиологический статус организма (Ашмарин и Гомазков, 1989, Ashmarin et al , 1990, Полетаев. 2002)

В предыдущих работах нашей группы было показано, что активная иммунизация крыс ковалентным конъюгатом Тз с белком-носителем приводит к обраюванию анти-Т3-ауюантител и к изменениям, которые можно

охарактеризовать как умеренный гипертиреоз (Мартьянов и др , 1998, Волкова и др, 2000)

Цель работы Целью настоящей работы являлось дальнейшее изучение регуляторной или патологической роли аутоантител к тиреоидным гормонам и физиологических изменений, происходящих в организме животных после иммунизации к гормонам щитовидной железы трииодтиронину (Т3) и тироксину (Т4), к т иролиберину (ТРГ), а также сочетанной иммунизации к Т3 и тироглобулину (ТГ)

Задачи исследования

1 Изучить влияние иммунизации к Т3 на физиологический статус организма крысы

2 Оценить влияние иммунизации к Т3 на состояние крыс с экспериментальным гипотиреозом

3 Оценить влияние иммунизации к Т4 на ряд физиологических показателей и сравнить его с изменениями, происходящими после иммунизации к Т3

4 Оценить влияние иммунизации к ТРГ на некоторые физиологически показатели и сравнить его с изменениями, происходящими после иммунизации к Т3

5 Оценить влияние иммунизации к ТГ и сочетанной иммунизации к Т3 и ТГ на некоторые физиологически показатели, сравнить его с изменениями, происходящими после иммунизации к Т3

Научная новизна Проведена комплексная оценка состояния организма крысы после индукции антителогенеза к Т3, Т4, ТРГ и сочетанной иммунизации к Г3 с ТГ АТ как к Т3 и Т4, так и к ТРГ оказывают стимулирующее (гипертиреоидное) влияние, 1ем самым подтверждено принципиальное положение о регуляторной роли А1 к гормонам при отсутствии в их действии выраженного патологического компонента В целом роль АТ можно охарактеризовать как депонирующую и буферно-стабилизирующую Высказано предпопожение о том, что конъюгат является не только индуктором антителогенеза, но и временным депо и источником гормона

Теоретическое и практическое значение Стимулирующее влияние АТ к гормонам щитовидной железы и ТРГ вносит существенный вклад в понимание аутоиммунных процессов Аугоантитела к малым регуляторным молекулам следует рассматривать, наряду с транспортными белками, как фактор накопления гормонов в кровотоке с возможностью последующей диссоциации комплексов и реализации гормональной функции В перспективе

длительное направленное воздействие с помощью антител на ту или иную гормональную функцию может найти практическое применение (в ветеринарии и медицине)

Основные положения, пыносимыс на защиту

1 Иммунизация крыс к Т3 и Т4 приводит к образованию аутоантител к гормонам и последующему сдвигу тиреоидного статуса в сторону умеренного гипертиреоза

2 Образующиеся после иммунизации антитела к Т3 и Т4 не вызывают явной патологии щитовидной железы у крыс, а, вероятно, выступают в роли стабилизирующего фактора, способного депонировать тиреоидные гормоны

3 Сочетанная иммунизация к Т3 и тироглобулину оказывает более выраженное действие по сравнению с иммунизацией отдельно к Т3, что свидетельствует о возможном участии ТГ в образовании антигормональных антител

4 Иммунизация крыс к тиролиберину приводит к существенному повышению уровня свободного Т4 в крови, то есть образующиеся антитела оказывают стимулирующее действие на всю гормональную ось

Апробация материалов диссертации По основным результатам диссертационной работы были сделаны доклады на Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», посвященной 240-летию ММА им И М Сеченова (Москва, 1998), Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2000», Секция «Биология» (Москва, 2000), II Российском Конгрессе по патофизиологии «Патофизиология органов и систем Типовые физиологические процессы (Экспериментальные и клинические аспекты)» (Москва, 2000), XVIII съезде физиологического общества им И П Павлова (Казань, 2001), VI Всероссийском симпозиуме и школе-семинаре молодых ученых и учителей «Растущий организм адаптация к физической и умственной нагрузке» (Казань, 2002), III Российском Конгрессе по патофизиопогии «Дизрегуляционная патология органов и систем (экспериментальная и клиническая патофизиология)» (Москва, 2004), XIX съезде физиологического общества им И П Павлова (Екатеринбург, 2004)

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из следующих разделов введения, обзора литературы, методики, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы Основной материал

изложен на 165 страницах машинописного текста, содержит 37 рисунков Библиография включает 202 источника

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Эксперименты выполнены на белых беспородных крысах Животных содержали в условиях вивария - при естественном освещении и с постоянным доступом к воде и пище В каждой клетке содержали крыс из опытной и контрольной групп Всего проведено 9 серий экспериментов

Синтез конъюгатов гормонов с белками проводили согласно методике Егорова с соавторами (1991) Конъюгат Т3 с белком-носителем - бычьим сывороточным альбумином (БСА) синтезировали с помощью 1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимида (КДИ, «Sigma», США) Реагенты брали в следующем молярном соотношении белок КДИ Т3=1 200 40 Навеску БСА растворяли в воде из расчета 5 мг/мл, Т3 («Sigma», США) растворяли в диметилсульфоксиде из расчета 20 объемных процентов от раствора белка (2мг/200мкл) К раствору белка добавляли Т3 и приблизительно треть навески КДИ при постоянном перемешивании Инкубировали в течение 30 мин при постоянном перемешивании и комнатной температуре Остатки КДИ в 0 5мл воды добавляли в реакционную смесь, после чего перемешивали 3 часа при комнатной температуре в темноте и оставляли на сутки при +4°С Затем конъюгат диализовапи против 0 9% NaCl Соотношение гормон белок в конъюгате составляло 5 1 моль По такой же схеме синтезировали Т4-БСА, а также конъюгаты Т3 и Т4 с крысиным сывороточным альбумином (КСА) Для получения конъюгатов Т3-БСА с разным молярным соотношением гормон белок применяли модифицированную методику, в которой изменяли пропорции реагентов и режим инкубации реакционной смеси Конъюгат тиролиберина (ТРГ, «Sigma», США) с БСА синтезировали с помощью КДИ, мотярное соотношении реагентов белок КДИ гормон="1 1000 100 (Мартьянов, 1992)

Спсктрофотометрический анализ для определения концентрации белка в растворе конъюгата и соотношения гормон белок проводили на спектрофотометре (Shimadzu, Япония) в диапазоне 200-400нм, основываясь на калибровочных графиках для БСА и Т3 и значениях максимумов поглощения белка при 280нм, а Т3 и Т4 - при ЗООнм

Иммунизацию животных проводили конъюгатами Т3, Т4 и ТРГ с БСА, а также бычьим ТГ («Sigma», США) Иммуногены смешивали с полным

адьювантом Фрейнда («Sigma», США или «MP Biomedicals», США) в соотношении 1 1 При первичной иммунизации вводили бООмкг конъюгата на килограмм массы тела (по белку) подкожно в четыре точки спины животного в объеме 200мкл эмульсии При поддерживающей иммунизации (через 1 месяц) -ЗООмкг/кг в том же объеме В некоторых случаях проводили вторую поддерживающую иммунизацию - в той же дозе через две недели после первой Крысам контрольной группы вводили раствор БСА с адьювантом (соотношение 1 1), в те же сроки и в тех же дозах

Для получения сыворотки кровь у крыс брали в разные сроки после окончания цикла иммунизации от двух недель до нескольких месяцев после последнего введения иммуногена Кровь после взятия помещали на +37°С (30— 40 мин), а затем на +4°С (1 0-1 5 часа), после чего центрифугировали 10 мин при 5000 об /мин Сыворотки хранили при -20°С

С помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) определяли наличие антител к Тч, Т4 и ТГ в сыворотках крови крыс, а также их специфичность Содержание антител характеризовали величиной титра -максимального разведения, при котором реакция антиген-антитело (АГ-АТ) для сывороток крыс опышой группы превышала контрольные значения в два раза Анализ проводили на стандартных 96-луночных микропланшетах по следующей схеме

1 Сорбция антигена В качестве антигена, сорбированного в лунках планшета, использовали конъюгаты Т3-КСА, Т4-КСА или ТГ в 50мМ фосфатно-солевом буфере (ФСБ, рН7 2-7 4) Инкубировали ночь при +4°С

2 Специфическая реакция АГ-АТ В лунки микропланшета вносили ряд разведений сыворотки крови в ФСБ с Tween 80 и инкубировали 60 мин при +37°С

3 Реакцию иммунных комплексов с антивидовыми анти-1цО-аптителами, меченными пероксидазой хрена («Sigma», США или Предприятия по производству бакпрепаратов НИИЭМ им Н Ф Гамалеи, Москва, Россия), проводили в ФСБ с Tween 80 при +37°С, 60 мин

4 Цветную ферментативную реакцию проводили при комнатной температуре (30 мин) с раствором хромогена - 0 7мМ АБТС (2,2'-азино-бис-(3-эшлбензтиазолин-6-сульфоновая кислота) двуаммонийная соль, «МР Biomedicals», США,) и 2 8мМ Н202 в Na-ацетатном буфере (ЗОмМ, рН4 5) Оптическую плотность при 405нм измеряли на планшетном фотометре (Multiskan EX, Финляндия)

Дня определения специфичности антител проводили конкурентный ИФА по сходной схеме В качестве конкурирующих гаптенов использовали Тз, Т4, фенилаланин и тирозин в концентрациях от 10"4 до 10"'° моль

Определение содержания свободного Т4 в сыворотке крови проводили с помощью иммуноферментных тест-наборов фирмы «Иммунотех» согласно стандартной методике фирмы производителя Определение проводили совместно с сотрудником кафедры химической энзимологии химического факультета МГУ М А Рябининой

Гистологический анализ щитовидной железы Через 5 и 30 суток после последнего введения антигена у крыс под наркозом (нембутал 40 мг/кг) выделяли щитовидную железу Ткань фиксировали в растворе Карнуа (12-18 часов, +4°С), затем отмывали и обезвоживали путем последовательной инкубации в 70%, 96% и абсолютном этиловом спирте (1, 1 и 3 часа соответственно, +4°С) Для достижения эффекта просветления препараты инкубировали в хлороформе (40 мин, +4°С) Далее материал инкубировали в смеси хлороформа с парафином (соотношение 1 1,8-12 часов, +37°С), а затем в чистом парафине (3 часа, +60°С), после чего ткани заливали в блоки с расплавленным парафином, содержащим 3-5% пчелиного воска Срезы толщиной 5 мкм (микротом М1-57, Россия) помещали на предметные стекла и депарафинизировали по стандартной методике Депарафинизированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином и заключали в канадский бальзам под покровное стекло

Функциональное состояние щитовидных желез определяли по плотности фолликулов на срезах (3 среза от каждой крысы, увеличение Х45), средней площади фолликулов (50 фолликулов на каждом срезе, по 3 среза от крысы, увеличение Х90), высоте фолликулярного эпителия (7 клеток из одного фолликула, 40-50 фолликулов для каждого животного, увеличение Х90)

За ростом и развитием животных следили с помощью взвешивания на протяжении всего эксперимента не реже, чем один-два раза в неделю

Регистрацию ЭКГ и расчет частоты сердечных сокращений (ЧСС) проводили с помощью подкожных электродов на оригинальной установке ЧСС у бодрствующих свободноподвижных крыс измеряли по следующей схеме в первый день делали фоновую запись ЧСС в «домашней» клетке - 60 мин, потом крысу пересаживали в новую камеру для адаптации к условиям второго экспериментального дня и регистрировали ЭКГ в течение 4 часов Во второй экспериментальный день делали часовую фоновую запись в «домашней»

клетке, а затем - 4 часа в камере, где поддерживалась температура 4-6°С Элекфоды вживляли под иембуталовым наркозом (45 мг/кг) не позднее, чем за 2 суток до проведения опьпа Перед записью ЭКГ крыс адаптировали к условиям эксперимента не менее 30 мин При регистрации ЭКГ в наркозе операцию вживления электродов проводили под эфирным наркозом за 2 суток до опыта, а сам опьп - под иембуталовым наркозом (40 мг/кг), запись начинали через 15 мин после введения наркоза, продолжительность записи 60 мин

Для определения содержания глюкозы брали кровь (150 мкл) у бодрствующих свободноподвижных крыс перед помещением в новые (термонейтральные или холодные) условия и сразу после опыта Для этого за двое суток до эксперимента животным, кроме электродов для регистрации ЭКГ, вживляли катетер в бедренную артерию Концентрацию глюкозы в крови определяли ортотолуидиновым методом (реактивы фирмы ООО «ЭКОлаб», Россия)

Измерение температуры тела. Длительную регистрацию ректальной температуры и температуры кожи хвоста проводили с помощью медно-константановых термопар на оригинальной установке в Институте Химической физики им акад Н Н Семенова РАН под руководством д б н Т1 Емельяновой Запись в комфортных и холодных окружающих условиях продолжалась 2 5 часа, в жарких - 3 часа

Чувствительность к острой кислородной недостаточности оценивали в условиях гипобарической гипоксии Для этого крысу помещали в стеклянный сосуд, из которого насосом откачивали воздух при его ограниченном поступлении извне В сосуде создавались условия эквивалентные высоте 11 тыс метров над уровнем моря, что соответствует содержанию 5 % 02 во вдыхаемом воздухе Регистрировали время потери позы в условиях гипоксии (Тпп) и время до первого атонального вдоха крысы (Тж), затем крысу извлекали и отмечали время восстановления позы (Твп)

Выделение митохондрий из гомогенатов печени крыс проводили по стандартной методике Все манипуляции проводили на льду при +4°С Количество белка в пробе митохондрий определяли по методу с бицинхониновой кислотой (натриевая соль бицинхониновой кислоты в смеси с ионами меди (Си1+) в соотношении 50 1, Smith, 1985) Для построения калибровочной кривой использовали белковый стандарт БСА - 1мг/мл («Sigma», США) Оптическую плотность при 562нм измеряли на спектрофотометре (Hitachi, Япония)

Содержание цитохромов ccl и ааЗ определяли на двухлучевом спектрофотометре «Аминко DW-2000» (США) по характрным пикам поглощения - ccl при 550/554нм, ааЗ при 605/620нм Поглощение суспензии митохондрий измеряли в диапазоне длин волн 500-650нм, ширина щели 2нм, скорость 1нм/сек, концентрация белка 0 7 мг/мл, длина оптического пути 1 см Содержание цитохромов в пробе рассчитывали по методике Muraoka с соавторами (1972) и нормировали на 1 мг белка

Кальциевую емкость митохондрий определяли как количество (в напомолях) СаС12, необходимое для необратимого снижения мембранного потенциала митохондрий, энергизованных 5 мМ сукцинатом калия в присутствии 2 цМ ротенона Мембранный потенциал определяли по распределению сафронина О по методу Akerman (1976) Контроль полноты разобщения митохондрий кальцием проводили добавлением 1 р.М FCCP (carbonyl cyanide 4-(trifluoro-methoxy)phenylhydrazone, «Sigma», США) Концентрацию кальция в растворе СаСЬ определяли титрованием хелатора кальция EG ГА (Ethylene glycol-bis((3-aminoethyl ether) N,N,N',N'-tetraacetic acid, «Sigma», США) в присутствии мурексида Кд комплекса EGTA с кальцием принимали равной 10°М

Для оценки рефлекторной деятельности спинпого мозга крыс проводили регистрацию М-ответа и Н-рефлекса в мышцах стопы при раздражении большеберцового нерва (n tibialis) в подколенной области (Gozanu et al, 1998) под эфирным наркозом Электромиограмму регистрировали игольчатыми серебряными электродами Раздражение большеберцового нерва проводили прямоугольными импульсами длительностью 0 5 мс с частотой 1 Гц Для контроля рефлекторной природы ответа в завершение опыта перерезали большебсрцовый нерв проксимальнее стимулирующих электродов и убеждались в том, что М-ответ сохранился, а Н-рефлекс - пропал Данные обрабатывали с помощью компьютерной программы MiniAnalysis

Масса сердца н щитовидной железы. В конце каждой серии экспериментов у крыс в состоянии глубокого наркоза (нембутал 50мг/кт) аккуратно вырезали щитовидную железу (вместе с участком трахеи) и сердце Opianbi промывали в 0 9% NaCl, подсушивали фильтровальной бумагой и взвешивали Данные пересчитывали на 100 г веса животного

Моделирование гипотиреоза. Гипотиреоз у крыс вызывали тиреостатиком мерказолилом («Акрихин», Россия), который давали животным в питьевой воде первые 2 недели - 0 02%-й раствор, а далее - 0 01%

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием непараметрических критериев Манна-Уитни (и-тест) и Вилкоксона, параметрического [-теста В тексте и таблицах данные представлены как среднее ± ошибка среднего

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние иммунизации к Т3 на состояние организма крысы

Содержание антител к Т3 в сыворотке крови определяли для оценки эффективности иммунизации У самцов титр антител варьировал в пределах 1/1000 до 1/128000, что отражает не только индивидуальную чувствительность животных, но и динамику антителогенеза - титр антител был максимальным через 2-3 недели после последнего введения иммуногена АТ к Т3 выявлялись и через 280 дней, хотя их титр был значительно ниже - около 1/50 У самок титр ан гител был практически таким же, как и у самцов Оценка специфичности А Г показала, что антитела могут связывать не только Тз, но и тироксин (в меньшей степени) и практически не взаимодействуют с Ь-тирозином и фенилаланином Таким образом, иммунизация крыс конъюгатом Т3-БСА приводит к образованию специфических антител к Т3, причем их содержание сохраняется на достаточно высоком уровне в течение нескольких недель и даже месяцев

Содержание свободного Т4 в сыворотке кровн контрольных животных (самцы) колебалось в пределах от 24 6±1 1 до 34 7±1 3 пмоль/л У крыс, иммунизированных к Т3, уровень свТ4 был в среднем в 2 раза выше, чем в контроле У самок, иммунизированных к Тз, выраженность эффекта даже несколько больше (Рис 1) Таким образом, иммунизация крыс к Т3 приводит к значительному увеличению содержания свТ(, которое сохраняется длительное время, а наблюдаемые в разные периоды после иммунизации колебания содержания гормона, вероятно, отражают развитие иммунного ответа Кроме того, известно, что содержание общего Т3 у иммунизированных Т3-БСА крыс в 3 раза выше, чем в контроле, но его значительная часть (около 80%) связана с ант телами (Мартьянов и др , 1998)

Масса щитовидной железы. Несмотря на циркуляцию в кровотоке А Г к Т3 и значительное изменение уровня свТ4 изменений массы щитовидной

железы не наблюдали. Такой результат свидетельствует об отсутствии патологического влияния анти гормональных AT на состояние железы.

По результатам гистологического исследования секреторная активность щитовидной железы возрастала (Табл.!) как через 5, так и через 30 дней после окончания цикла иммунизации, о чем свидетельствуют увеличение плотности фолликулов и высоты фолликулярного эпителия, а также уменьшение средней площади фолликулов (Хэм и Кормак, 1983). В целом такое, на первый взгляд, парадоксальное повышение секреторной активности Железы при ее неизменной массе и высоком содержании гормона в крови находит подтверждение и в работах других авторов, которые иммунизировали животных к Т+ и Т) (Joseph et al., 1987) и к другому низкомолекулярному гормону - тестостерону, который имеет сходство с тиреридными гормонами по особенностям транспорта в кровотоке и механизмам действия на клетки-ми шеии (Nieschlag et al„ 1973; Wickings and Nieschlag, 1978; Auclair et al,, 1995).

□ БСА

■ ТЗ-БСА-самцы

11 дней 15 дней 17-18 дней 35-38 дней 36-40 дней 42-53 дня

Дни после окончания цикла иммунизации

Рисунок 1. Содержание свободного Т| в сыворотке крови крыс. По оси абсцисс - дни после окончания цикла иммунизация; по оси ординат - процент от среднего значения в контроле. * - р<0.05 по сравнению с группой БСА

Рост и развитие животных оценивали в 8 сериях 'экспериментов по приросту массы тела. Иммунизация крыс к Тз не влияла на интенсивность роста животных, а наблюдавшиеся кратковременные (до 1.5 недель) незначительные изменения массы тела, скорее всего, связаны с высвобождением молекул Тз из вводимого крнъюгата.

Таблица 1 Результаты гистологического исследования щитовидных желез крыс, иммунизированных к Т3 (* - р<0 05 по сравнению с БСА)

5 дней после окончания цикла иммунизации 30 дней после окончания цикла иммунизации

БСА п=3 Тз-БСА п=5 БСА п=4 Тз-БСА п—6

Плотность фолликулов 136 5±9 9 203 8±23 7* 106.7+7 6 211 5±19 9*

Средняя площадь фолликула, мкм2 57 8±4 2 31 6±5 6* 54 3±4 4 35 2+2 2*

Высота фолл эпителия, мкм 7 7±0 4 10 4±0 6* 7 6±0 3 10 8+0 3*

Частоту сердечных сокращений (ЧСС) изучали у бодрых свободноподвижных животных и в состоянии наркоза. В состоянии наркоза через 5 недель после окончания цикла иммунизации частота сердцебиений у иммунизированных к Тз крыс была достоверно выше, чем в контроле средняя ЧСС за 60 мин регистрации в группе БСА - 265 9±8 8 уд/мин, в группе Т3-БСА -309 4±9 7 уд/мин (р=0 01)

В другой серии экспериментов исследовали влияние иммунизации на ЧСС через 8 и более недель после окончания цикла иммунизации ЧСС у иммунизированных к Т3 крыс в привычных условиях не отличалась от контрольных значений ни в первый, ни во второй экспериментальные дни (Рис 2А,Б) После помещения животных в новые экспериментальные условия (1 день) происходило небольшое повышение сердечного ритма как в контрольной, так и в опытной группах, однако более выраженное повышение ЧСС наблюдали у крыс группы Т3-БСА в течение всех 4-х часов регистрации - в среднем на 26 уд/мин по сравнению с 10 уд/мин в контроле После помещения в холодные условия (4°С, 2 день) происходило значительное повышение ЧСС у животных как в контрольной, так и в опытной группах - в среднем на 127 и 136 уд/мин соответственно, то есть ЧСС в группе Т3-иммунизированных крыс была выше, чем в контроле

Содержание глюкозы в крови животных двух групп не различалось ни до, ни после помещения в новые экспериментальные условия (фоновый уровень в контроле - 89 0±2 4 мг%, в группе Т3-БСА - 87 1±2 8 мг%). А помещение на 4 часа на холод приводило к снижению содержания глюкозы в группе БСА приблизительно на 4% (р=0 04), а в группе Т3-БСА на 5% (р=0 07) по сравнению с исходным уровнем

В целом можно заключить, что иммунизация к Тз приводит к некоторому увеличению ЧСС у крыс, как в состоянии наркоза, так и у бодрствующих животных, то есть изменения носят гипертиреоидный характер А отсутствие выраженной разницы в реакции на холодовой стресс у крыс контрольной и опытной групп является положительным моментом, поскольку иммунизация не оказывает патологического действия на работу сердца и содержание глюкозы в крови, несмотря на значительное увеличение активности щитовидной железы и содержания свТ4

1 день

"а >.

о ■у

550 500 450 400 350 300 250

- БСА, п=7 -ТЗ-БСА, п=7

_1_1__1-1_I-1-1-1_1_I .L. I_I-1-1_I_» I I

30 60 20 50 80 110 140 170 200 230 Время от начала записи, мин

2 день

о"

■у

550 г

500

450

400

350

300

250

-бса п-7 -тз бса, п=7

30 60 20 50 80 110 140 170 200 230 Время от начала записи, мин

Рисунок 2 Динамика ЧСС у крыс А - в «домашней» клетке (60 мин) и при помещении в новые термонейтральные условия (240 мин), Б - в «домашней» клетке (60 мин) и при помещении в холодные условия (+4°С, 240 мин)

Температура тела (Рис 3) В комфортных термонейтральных условиях (25-27°С) ректальная температура (Тр) у иммунизированных Т3-БСА самцов не отличалась от контроля, а температура кожи хвоста (Ткх) была значительно выше, чем в контроле, то есть у крыс опытной группы происходит увеличение теплопродукции, которое не носит драматического характера и полностью компенсируется усилением теплоотдачи В холодных условиях (4-6°С) достоверных различий по Тр между животными двух групп не было, хотя Ткх снижалась несколько быстрее в течение первых 50 минут у крыс группы Т\-БСА В условиях умеренной жары (30-3 ГС) у крыс опытной группы повышается Тр и Ткх Такая реакция на тепло может быть связана как с повышенной теплопродукцией у животных группы Т3-БСА, которую в данных условиях не способна скомпенсировать увеличенная теплоотдача, так и с дополнительным действием иммобилизации

Масса сердца. У крыс, иммунизированных к Т3, относительная масса всего сердца и ею отделов не отличалась от контрольных значений, что является положительным признаком и свидетельствует об отсутствии патологического действия иммунизации, поскольку из литературных данных известно, что введение Т3 или Т4 крысам приводит к существенному увеличению относительной массы сердца по сравнению с эутиреоидным контролем, в то время как медикаментозный гипотиреоз приводит, напротив, к ее снижению (McAllister et al, 1995, Foley et al , 2001, Soukup et al, 2001)

Чувствительность к гипобарической гипоксии изучали спустя 3 недели после цикла иммунизации для оценки интенсивности дыхания у животных По времени до первого атональною вдоха (Тж) животных делили на подгруппы - низкоустойчивых (Тж<5 мин), среднеустойчивых (5-25мин) и высокоустоичивых (Тж>25 мин) В группе БСА были только низко- и среднеустойчивые крысы (44% и 56% соответственно) В группе 13-БСА низкоустойчивых и среднеустойчивых животных было поровну, то есть наблюдали некоторое повышение чувствительности к гипоксии, высокоусгойчивых крыс в этой группе также не было По показателям времени потери и восстановления позы животные двух групп существенно не отличались

Содержание цитохромов ccl и ааЗ в митохондриях печени и кальциевую емкость митохондрий определяли для оценки влияния иммунизации к Тч на состояние митохондрий (минимум 13 недель после окончания цикла иммунизации) Результаты представлены в Табл 2 У

иммунизированных к Тз крыс содержание цитохромов сс1 и ааЗ было таким же как в контроле, но при эгом наблюдалось значительное снижение кальциевой емкости митохондрий - в среднем на 48% Полученные данные хорошо согласуются с описанной выше повышенной чувствительностью к острой гипоксии иммунизированных к Т3 крыс, поскольку общая потребность организма в кислороде во многом зависит от дыхания митохондрий

Температура в камере 26 - 27°С

Г) 39

го

е- 38

5 37

р- 20

О 39

го

о.

е- 38

та

о.

£ 37

<и

О 25 50 75 100 125 150 Время от начала записи, мин

Температура в камере 4 - 6°С

25 50 75 100 125 150

Время от начала записи мин

Температура в камере 30 - 31°С

¡5 20

О 20 40 60 ео 100 120 140 160 180 Время от начала записи, мин

- БСА, п=7 -Т-БСА, п=7

0 25 50 75 100 125 150 Время от начала записи мин

25 50 75 100 125 150 Время от начала записи, мин

О 20 40 60 80 100 120 140 160 180 Время от начала записи мин

Рисунок 3 Ректальная температура (А ) и температуры кожи хвоста (Б ) у крыс при разных температурных условиях окружающей среды

Рефлекторную деятельность спинного мозга изучали приблизительно через 9 месяцев после последней иммунизации Иммунизация к Т3 не приводила к явному изменению рефлекторного ответа.

Обобщая все описанные в этой части работы данные можно заключить, что появление антител, активация работы щитовидной железы и значительное увеличение уровня свТ4 в результате иммунизации к Тз не сопровождается нарушениями ростовых процессов, рабо1ы сердца и терморегуляции в комфортных температурных условиях Некоторое увеличение частоты сердцебиений, чувствительности к гипоксии и чувствительности митохондрий к кальцию говорят в пользу мягкого гипертиреоидного действия иммунизации

Таблица 2 Содержание цитохромов сс1 и ааЗ и кальциевая емкость митохондрий (* - р<0 05 по сравнению с группой БСА)

Группа Цитохром сс1, мкмоль/мг белка Цитохром ааЗ, мкмоль/мг белка Кальциевая емкость, нмоль Са2+/мг белка

БСА, п=4 0 08±0 02 0 03±0 00 86 8±6 9

Тз-БСА, п=4 0 09±0 01 0 03±0 00 45 3+2 2*

Т4-БСА, п=4 0 20±0 5* 0 05±0 02 25 2±7 7*

Влияние иммунизации к Т3 на состояние крыс с экспериментальным Iипотиреозом

Уровень антител к Т3. Иммунизацию самцов крыс, получавших с пшьевой водой мерказолил, проводили конъюгатами Тз-БСА с разным соотношением гормон белок Титр АТ к Т3 был тем выше, чем больше трииодтиронина было связано с белком и составлял в группе Т3-БСА(5 1 )/гипотиреоз 1/1700-1/4500, Т3-БСА(8 1)/гипотиреоз - 1/1000-1/25120, Г,-БСА/гипотиреоз(13 1) - 1/3800-1/48000

Содержание свободною Т4 в сыворотке крови. Прием мерказолила приводил к существенному снижению содержания св'Г4 в крови у крыс - почти в 2 раза (Табл 3), то есть у животных развивался значительный гипотиреоз Иммунизация к Т3 на фоне гипотиреоза приводила к увеличению содержания свТ4 до уровня значительно превышающего нормальные величины и характерного для иммунизированных эутиреоидных крыс

Масса щитовидной железы у крыс контрольной группы (мерказолил+БСА в качестве иммуногена) была значительно увеличена по сравнению с нормотиреоидным контролем (вода+БСА) Иммунизация к Т3 на фоне гипотиреоза пе приводила к существенным изменениям массы щитовидной железы относительно гипотиреоидного контроля

Таблица 3 Содержание свТ4 в сыворотке крови крыс (в пмоль/л, ** - р<0 001 по отношению к соответствующей группе БСА, ## - р<0 001 отличие между двумя контрольными группами)

БСА Т3-БСА БСА/гипотиреоз Т3-БСА/гипотиреоз

38 5±3 4 67.1±4 7** 20 9±2 8## 78 1±4 2**

Рост и развитие. Экспериментальный гипотиреоз приводил к стабилизации массы тела животных практически на одном уровне (Рис 4) Иммунизация к Т3 на этом фоне стимулировала рост крыс Стимуляция начиналась практически сразу после введения Т3-БСА и продолжалась 10-15 недели Более выраженным действием обладал конъюгат, в котором содержание гормона было наибольшим Можно предположить, что такое временное ускорение темпов роста с последующей стабилизацией массы тела на новом уровне связано с постепенным высвобождением Т3 из введенного конъюгата, который играет роль не только иммуногена, но и временного депо и источника гормона

Чувствительность к гипоксии. Напомним, что в нормотиреоидных группах по Тж крысы разделились на две подгруппы — низко- и среднеустойчивых В группе БСА/гипотиреоз распределение животных было иным - большинство составили высокоустойчивые животные, которых не было среди нормотиреоидных крыс, - 73% (Тж>25 мин), низкоустойчивых было 18% и только 9% группы составляли среднеустойчивые крысы Иммунизация к Т3 существенным образом изменила картину, в группе Т3-БСА/гипотиреоз, как и в нормотиреоидном контроле преобладали среднеустойчивые крысы (64%), высокоустойчивых было 27%, низкоустойчивых - 9% от всей группы По показателям времени потери и восстановления позы животные существенно не различались Таким образом, при гипотиреозе у животных значительно повышается устойчивость к острой кислородной недостаточности, что обусловлено снижением уровня обмена веществ и тканевого дыхания Иммунизация к Т? на этом фоне как бы переводит животных из разряда высокоустойчивых в разряд среднеустойчивых, что характерно для нормотиреоидного контроля

В целом можно заключить, что иммунизация к Т3 на фоне экспериментального гипотиреоза оказывает мя1Кое антигипотиреоидное действие, что может быть обусловлено двумя причинами слабой активацией железы, поскольку на фоне значительного тиреостатического действия

мерказолила она и не может быть сильной и тем, что АТ препятствуют инактивации гормона в крови и выведению его из организма

Рисунок 4 Динамика массы тела у гипотиреоидных крыс до и после иммунизации По оси абсцисс - даты, по оси ординат - масса тела Стрелками отмечено введение иммуногена

Влияние других иммуногенов на состояние организма крысы:

Т4-БСА

Уровень антител к Т4 спустя 6-7 недель после окончания цикла иммунизации у крыс группы Т4-БСА был ниже, чем у животных той же экспериментальной серии, но иммунизированных к Тз, и составил 1/1000- 1/4000

Содержание свободного Т4 в сыворотке крови у иммунизированных к Т( крыс было увеличено еще более существенно, чем в группе Т3-ЬСА, - в среднем в 3 раза относительно контрольной БСА группы Большее увеличение свТ4 по сравнению с группой Т3-БСА может быть связано как с выходом Т4 из конъюгата, так и с разным временем полужизни Т4 и Т3 в крови

Масса щитовидной железы, несмотря на более существенный сдвиг содержания свТ4 в крови животных, не изменилась, что не удивительно, поскольку иммунизация к физиологически более активному Т3 также не имела выраженного зобогенного действия

Частота сердечных сокращений в состоянии наркоза через 10-15 месяца после окончания цикла иммунизации у крыс группы Т4-БСА, в отличие от Тч-ЬСА, практически не изменялась Отмечалась лишь тенденция к повышению ЧСС- в группе БСА (п=5) она составляла 265 9±8 8, а в группе Т4-БСА (п=4) - 281 4±7 7 уд/мин (р=0 175)

Масса сердца у крыс группы Т4-БСА также не отличалась от контроля Температуру тела у животных, иммунизированных к Т4, измеряли через 7 недель после окончания цикла иммунизации (Рис 5) Тр в комфортных термонейтральных условиях у эгих крыс была достоверно выше контрольных значений на протяжении всей трехчасовой записи, а Ткх не отличалась от контроля Такое действие можно объяснить более значительным по сравнению с группой Т3-БСА увеличением содержания свТ4 в крови, который не только имеет собственное действие на процессы обмена веществ и термогенез, но и является источником физиологически более активного Т3

Содержание цитохромов сс1 и ааЗ в митохондриях печени и кальциевая емкость митохондрий. Результаты представлены в Табл 2 У крыс, иммунизированных к Т4, в отличие от группы Т3-БСА, значительно увеличивалось содержание сс1 Содержание ааЗ было одинаковым во всех экспериментальных группах Кальциевая емкость митохондрий у животных, иммунизированных к Т4, снижалась еще более существенно, чем в группе Т3-БСА, - в среднем на 71% по сравнению с контролем

Обобщая результаты этого раздела и сравнивая их с полученными при иммунизации к Т3, можно заключить, что направленность изменений физиологических показателей полностью совпадает у животных обеих групп и имеет гипертиреоидный характер Некоторое различие в выраженности эффектов иммунизации к Т4 и к Т; может быть связано как с разной степенью их физиологической активности, так и с разницей в чувствительности тканей к ним

ТРГ-БСА

Содержание свободного Т4 в сыворотке крови при иммунизации крыс к тиролиберину увеличивалось, хотя и в меньшей степени, чем после иммунизации к Т3 и Т4, (Табл 3) Отнести это повышение к прямому действию выщепляющегося из конъюгата ТРГ на уровень тиреотропного гормона, а, следовательно, и на свГ4 нельзя, поскольку ТРГ является короткоживущим пептидом, а измерение содержания свТ4 проводили через 5 недель после

окончания цикла иммунизации Этот факт, возможно, наиболее важен в настоящем исследовании, поскольку подтверждает гипотезу о стимулирующем действии образующихся после иммунизации АТ и их модулирующем влиянии на активность гормона Такое заключение представляется правомерным, поскольку уровень свободного тироксина в крови лишь опосредовано связан и с вводимым коньки агом, и с антителами к ТРГ Значительных изменений в терморегуляции у крыс группы ТРГ-БСА, содержании цитохромов сс1 и ааЗ и чувствительности митохондрий к кальцию выявлено не было

Рисунок 5 Температура тела у самцов крыс в термонейтральных условиях окружающей среды (группа Т4-БСА, 25-27°С)

Таблица 3 Содержание свободного тироксина в сыворотке крови (пмоль/л, * - р<0 05, - р<0 001 по сравнению с группой БСА)

БСА ТРГ-БСА Тз-БСА

Самцы 34 2±1 3 38 1±1 0* 77 7±6 1**

Самки 29 6±1 7 39 6±1 8* 81 4±6 7**

ТГ и Т,-БСА+ТГ

Уровень антител. У животных, иммунизированных смесью Тз-БСА с ТГ, антитела образуются к обоим антигенам, титр антител к ТГ составляет 1/330001/128000, а анти-Т з А1 - 1/8000-1/48500 Надо отметить, что титр АТ к Г3 был выше, чем у животных той же экспериментальной серии, но иммунизированных просто Т3-БСА (1/4600-1/31000) Через 280 дней после завершения цикла иммунизации такая картина сохранялась, но уровень антител значительно понизился - анти-ТГ-антитела выявлялись на уровне 1/10001/6000, анти-Т3-антитела - 1/50-1/300 Таким образом, можно заключить, что

совместное введение I3-БС А с 1Г усиливает иммунный ответ на гормон по сравнению с иммунизацией только Т3-БСА Это согласуется с литературными данными о появлении AT к тиреоидным гормонам в крови иммунизированных к ТГ животных, что может свидетельствовать о том, что AT к тиреоидным гормонам образуются в результате развития иммунного ответа на ТГ или его фрагменты, содержащие гормон-продуцирующие сайты (Sakata et al, 1985, Savin et al, 1990, Erregragui et al, 1996) Введение крысам в качестве иммуногена бычьего ТГ также индуцирует образование специфических AT

Рост и развитие. Сочетанное введение тироглобулина с Т3-БСА приводило к значительному замедлению темпов роста крыс, что, возможно, свидетельствует о более жестком воздействии сочетанной иммунизации Введение бычьего ТГ не влияло на ростовые процессы

Частоту сердечных сокращений измеряли у крыс в комфортных температурных условиях и на холоду (8 недель от последнего введения иммуногена) В группе ТГ наблюдалась сходная с Т3-БСА картина как в привычных условиях, так и при помещении в новые термонейтральные или холодные условия Отличий от контроля по уровню глюкозы в крови ни в привычных, ни в новых термонейтральных условиях в этой группе не было У крыс, иммунизированных смесью Т3-БСА с ТГ, наблюдались более выраженные изменения в отличие от Т3-БСА и ТГ групп У них ЧСС даже в «домашней» клетке была выше по сравнению с контролем (Рис 6А,Б) При помещении в новые условия сердечный ритм у этих крыс изменился в такой же степени, как и в группе Т3-БСА ЧСС была значительно выше, чем в контроле на протяжении всех 4-х часов регистрации При помещении крыс группы Т3-БСА+ТГ в холодные условия ЧСС возросла на 117 уд/мин по сравнению с фоном, то есть в меньшей степени, чем у контроля (БСА - на 127 уд/мин) В целом же частота сердцебиений у крыс Т3-БСА+ТГ, по прежнему, оставалась на более высоком уровне, чем в группе БСА Меньшее увеличение ЧСС при помещении на холод у животных группы Т3-БСА+ТГ по сравнению с контролем можно считать положительным моментом, поскольку это свидетельствует о том, что система находится в равновесии, но просто на новом уровне ЧСС, то есть подтверждает отсутствие выраженного патологического действия иммунизации У животных группы Т3-БСА+ТГ во второй экспериментальный день в «домашней» клетке уровень глюкозы был достоверно ниже по сравнению с контролем, чего не наблюдали в первый день После помещения крыс этой опытной группы на 4 часа в холодные условия у

них наблюдали достоверное по сравнению с контролем и с фоном снижение уровня глюкозы в крови, что указывает на более интенсивный обмен веществ, то есть более выраженный, чем в случае Т3-БСА гипертиреоз

1 день

о о

550 500 450 400 350 300 250

-БСДп=7 -ТГ,п=7

-ТЗ БСА+ТГ п—6

_!_1_I_I_1_I_I_I_I_' 1 I_I_1-1—I_1_I_I_I_I_I_I_1 III III

О 30 60 20 50 80 110 140 170 200 230

Воемя от начала записи, мин

2 день

се

о -у

550 500 450 400 350 300 250

- БСА, п=7 -ТГ п-7

-ТЗ-БСА+ТГ, п—6

0 30 60 20 50 80 110 140 170 200 230 Время от начала записи, мин

Рисунок 6 Динамика ЧСС у крыс А - в «домашней» клетке (60 мин) и при помещении новые термонейтральные условия (240 мин), Б - в «домашней» клетке (60 мин) и при помещении в холодные условия (+4°С, 240 мин)

Масса сердца и щитовидной железы. У крыс группы ТГ даже через 9 месяцев после последней иммунизации относительная масса левого желудочка и всего сердца была значительно увеличена по сравнению с контролем В I р> ппе Тз-БСА+ТГ, также как у ТГБСА крыс, никаких отличий от контрольных

значений по этому показателю не было Щитовидная железа не отличалась по массе от контроля и между животными опытных групп

Изучение рефлекторной деятельности спинного мозга через 9 месяцев после последней иммунизации показало, что в обеих описываемых в этом разделе опытных группах латентный период М-ответа практически не отличался от контрольных значений Сходную картину наблюдали и с Н-рефлексом в группе ТГ У крыс, которым вводили Т3-БСА в сочетании с тироглобулином, латентный период Н-рефлекса был достоверно меньше по сравнению с контролем, то есть рефлекторный ответ на электрический стимул развивался быстрее, чем у крыс других экспериментальных групп, что характерно для гипергиреоза

Обобщая результаты, описанные в этой части работы можно заключить, что иммунизация к ТГ не оказывает серьезного влияния на изученные показатели, в то время как совместное введение ТГ с Т3-БСА приводит к существенному изменению этих показателей в сторону гипертиреоза, причем это действие выражено в большей степени, чем при иммунизации к Т3 отдельно

ВЫВОДЫ

1 Иммунизация крыс к гормону щитовидной железы трииодтиронину путем подкожного введения ковалентного конъюгата Т3-БСА в смеси с полным адьювантом Фрейнда приводит к развитию двухфазного эффекта у крыс наблюдаются признаки гипертиреоза, обусловленные, выходом гормона из конъюгата (первая фаза), а затем развиваются продолжительные (недели, месяцы) изменения, связанные с образованием аутоантител к Т3 (вторая фаза)

2 Изучение физиологических параметров после иммунизации к Т3 показало следующее значительно возрастает содержание свТ4, масса тела и ее прирост не меняется, ЧСС повышается, температура тела в термонейтральных условиях не меняется за счет усиления теплоотдачи, изменений содержания цитохромов сс1 и ааЗ в митохондриях не происходит, но существенно повышается чувствительность митохондрий к кальцию, масса сердца и щитовидной железы практически не меняется

3 Иммунизация крыс к Т3 на фоне гипотиреоза, вызванного тиреостатиком мерказолилом, приводит к улучшению состояния животных

4 Иммунизация крыс к гормону щитовидной железы тироксину приводит к появлению в крови анти-Т4-антител и к изменениям той же направленности, что и после иммунизации к 13, а по таким показателям, как содержание свТ4, температура гела и кальциевая емкость митохондрий влияние иммунизации к тироксину более выражено

5 Иммунизация к тиролиберину вызывает увеличение содержания свободного тироксина в сыворотке крови крыс

6 Совместное введение тироглобулина и Тз-БСА в качестве комплексного иммуногсна приводит к образованию антител к ТГ и Т3 и вызывает более выраженные физиоло1 ические изменения, чем введение обоих иммуногенов по отдельности

7 Иммунизация к шреоидным гормонам, тиролиберину и к Т3 в сочетании с тироглобулином не оказывает патологического действия, а индуцирует образование антител, играющих регуляторную роль В эксперименте на животных появление такого рода антител приводит к формированию нового гормонального статуса с признаками умеренного гипертиреоза Роль аутоантител при этом можно охарактеризовать как буферно-депонирующую

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Волкова Н В , Васильева Т В , Цвиркун Д В , Обухова М Ф , Мартьянов А А Увеличение секреторной активности щитовидной железы у крыс после иммунизации трийодтиронин-альбуминовым конъюгатом //Вестн Моек Ун-та сер 16, Биология -2000-N3 -С 10-13

2 Плотников Е Ю , Высоких М Ю, Цвиркун Д В , Казаченко А В , Кирпатовский В И , Зоров Д Б Митохондриальная регуляция продукции активных форм кислорода и азота в клетках почки крысы при ишемии/реперфузии //ДАН Биохим , Биофиз , Мол Биол -2005 -Т 400,N5 -С 1-4

3 Волкова Н В , Цвиркун Д В , Васильева Т В , Мартьянов А А Увеличение секреторной активности щитовидной железы у крыс после иммунизации к трийодтиронину //'В со «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Материалы Конференции молодых ученых России с международным участием, посвященной 240-летию ММА им И М Сеченова) -М ,1998 -С 402-403

4 Мартьянов А А , Волкова Н В , Цвиркун Д В , Обухова М Ф , Вакулина О П, Емельянова Т Г, Васильева Т В Иммунизация крыс

трийодтиронином, конъюгированным с чужеродным белком, приводит к умеренному гипертиреозу //В еб XVII Съезд физиологов России Тезисы докладов -Ростов-на-Дону, 1998 -С 372-373

5 Цвиркун Д В, Волкова Н В Иммунизация к трийодтиронину облегчает экспериментальный гипотиреоз у крыс //В сб Материалы Международной конф студентов и аспирантов по фундаментальным наукам«Ломоносов-2000»,Секция«Биология» -М МГУ,2000 -Вып 4 -С 78-79

6 Мартьянов А А , Волкова Н В , Цвиркун Д В , Обухова М Ф Аутоантитела к трийодтиронину вызывают у крыс умеренный гипертиреоз и оказывают нормализующее действие при тиретоксикозе и гипотиреозе //В сб Тезисы докладов Л Российского Конгресса по патофизиологии «Патофизиология органов и систем Типовые физиологические процессы» -М ,2000 -С 166

7 Мартьянов А А , Цвиркун Д В , Волкова Н В , Обухова М Ф Изменения тиреоидного статуса организма крысы после иммунизации трииодтиронин-альбуминовым конъюгатом //В сб XVIII Съезд Физиологического общества им И П Павлова Тезисы докладов -Казань,2001 -С 383

8 Цвиркун Д В , Мартьянов А А Возрастные особенности аутоиммунной регуляции тиреоидного статуса и чувствительности к фармакологическим воздействиям у крыс//В сб Тезисы VI Всероссийского симпозиума и школы семинара молодых ученых и учителей «Растущий организм адаптация к физической и умственной нагрузке» -Казань,2002 -С 173-174

9 Цвиркун Д В, Мартьянов А А Влияние иммунизации крыс к трийодтиронину на физиологический статус организма // XIX Съезд Физиологического общества им И П Павлова, Екатеринбург 2004г Тезисы докладов Росс физиол ж им И М Сеченова -2004 -Т 90,N8 -Ч 2 -С 102

10 Мартьянов А А, Цвиркун Д В Влияние иммунизации крыс к трийодтиронину на гормональный и физиологический статус организма //В сб Гезисы докладов III Российского Конгресса по патофизиологии «Дизрегуляционная патология органов и систем» -М ,2004 -С 104-105

Автор выражает благодарность: Марии Федоровне Обуховой (НИИ Нормальной физиологии им П К Анохина РАМН), Татьяне Георгиевне Емельяновой (НИИ Химической физики им Н Н Семенова РАН), Марше Александровне Рябининой (Кафедра химической энзичологии, Химический факультет

МГУ им МБ Ломоносова), Михаилу Юрьевичу Высоких (НИИ Физико-химической биоюгии им А Н Бечозерского)

Подписано в печать 17 04 2007 Формат 60x88 1/16 Объем 1 75 п л Тираж 100 экз Заказ № 648 Отпечатано в ООО «Соцветие красок» 119992 г Москва, Ленинские горы, д 1 Главное здание МГУ, к А-102

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Цвиркун, Дарья Викторовна

Список сокращений.

1. Введение.

2. Обзор литературы.

3. Методы.

Синтез конъюгатов гормонов с белками.

Спектрофотометрический анализ конъюгатов.

Иммунизация животных.

Получение сыворотки крови.

Иммуноферментный анализ.

Определение содержания свободного тироксина в сыворотке крови.

Гистологический анализ щитовидной железы.

Наблюдение за ростом и развитием животных.

Измерение частоты сердечных сокращений.

Измерение температуры тела.

Определение содержания глюкозы в сыворотке крови.

Оценка чувствительности к острой кислородной недостаточности.

Выделение митохондрий из печени крыс и определение их кальциевой емкости и содержания цитохромов ccl и ааЗ.

Оценка рефлекторной деятельности спинного мозга - М-Н ответ.

Масса сердца и щитовидной железы.

Моделирование гипотиреоза.

Статистическая обработка результатов.

4 . Результаты.

Влияние иммунизации к Т3 на состояние организма крысы.

Уровень антител.

Содержание свободного тироксина в сыворотке крови.

Масса щитовидной железы.

Секреторная активность щитовидной железы.

Рост и развитие.

Частота сердечных сокращений.

Температура тела.

Содержание глюкозы в сыворотке крови.

Масса сердца.

Чувствительность к гипоксии.

Содержание цитохромов ccl и ааЗ в митохондриях и кальциевая емкость митохондрий печени.

М-Н ответ.

4.2. Иммунизация Т3-БСА на фоне гипотиреоза.

Уровень антител.

Содержание свободного тироксина в сыворотке крови.

Масса щитовидной железы.

Рост и развитие.

Чувствительность к гипоксии.

Влияние других иммуногенов на состояние организма крысы.

Влияние иммунизации Т4-БСА на состояние

4.3.1. организма крысы.

Уровень антител.

Содержание свободного тироксина в сыворотке крови.

Масса щитовидной железы.

Частота сердечных сокращений.

Масса сердца.

Температура тела.

Содержание цитохромов ccl и ааЗ в митохондриях и кальциевая емкость митохондрий печени.

4.3.2. Влияние иммунизации ТРГ-БСА на состояние

4.3.2. организма, крысы.

Содержание свободного тироксина в сыворотке крови.

Температура тела.

Содержание цитохромов ccl и ааЗ в митохондриях и кальциевая емкость митохондрий печени.

Влияние иммунизации ТГ и Т3~БСА+ТГ на состояние

4.3.3. организма крысы.

Уровень антител.

Рост и развитие.

Частота сердечных сокращений.

Содержание глюкозы в сыворотке крови.

Масса сердца и щитовидной железы.

М-Н ответ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние аутоантител к тиреоидным гормонам на зависимые от тиреоидного статуса физиологические функции у крыс"

клинической практике с давно известны в крови различные антител к заболевания, собственным посвященных исследования связанные антигенам изучению появлением организма. таких Больщую долю работ, заболеваний, составляют железы, ее аутоиммунных заболеваний антител щитовидной к сопровождающихся образованием различным элементам к тироглобулину, пероксидазе щитовидной железы, к рецептору тиреотропного гормона. Кроме того, в бО-х годах Primachandra с соавторами обнаружили антитела, связывающие тиреоидные гормоны и у морских свинок, иммунизированных таких антител у тироглобулином, пациентов с показали наличие тиреоидитом Хащимото (цит. по Sakata et al, 1985). К настоящему времени наличие аутоантител к гормонам щитовидной железы описано при ряде тиреоидных патологий, сопровождающихся гипер- и гипотиреозом: тиреоидите Хащимото (Staeheli al., et al., 1975; Ikekubo et al., 1978; Sakata et 1985; Ruggeri et al., 2002), болезни Грейвса (Sakata et al, 1985; Nakamura, 1993; Ogawa, 1994 et al; Ruggeri et al., 2002). Кроме у того, здоровых 1994) и но антитиреоидные людей при как антитела et нередко 1985; обнаруживаются Sakata et (Isozaki различных правило al., al., заболеваниях связанных с нетиреоидного развитием характера, аутоиммунных процессов: ревматоидном артрите (Ruggeri et al., 2002), синдроме Сьегрена (Sakata et al., 1987; Ozgen et al., 2001; Ruggeri et al., 2002), системной красной волчанке (Sakata et al., 1987; El-Sherif et al., 2004). Вместе с тем, роль антител к тиреоидным гормонам до настоящего времени остается не изученной. В эксперименте на животных организма Этот образование индуцируют позволяет антител с к собственным активной антигенам помощью вызывать иммунизации. метод иммунный белкам, ответ не только к макромолекулам (различным нуклеиновым но и кислотам, полисахаридам, соединениям, в гликопротеидам), к низкомолекулярным том числе и таким, которые выполняют регуляторные функции в организме основан (Erlanger, на 1973; Ковалев, Полевая, 1982). животным против белком, ковалентных вызывается большую Метод введении молекул, конъюгатов иммунный регуляторных ответ, с которых имеющим чужеродным молекулярную различные массу. С помощью иммунизации можно моделировать аутоиммунные щитовидной заболевания, железы в том числе McGregor, и заболевания 1994), что (Weetman немаловажно для изучения патогенеза этих заболеваний. Кроме того, в последнее время антитела не к собственным как антигенам организма рассматриваются только патологический активной и фактор, но и как регуляторные молекулы, иммунизации как способ глубокого, а метод направленного длительного воздействия на физиологический статус организма (Ашмарин и Гомазков, 1989; Ashmarin et al., 1990; Полетаев, 2002). антител Высказывается к даже предположение, антигенам при что появление и собственным антител организма антиидиотипических отражает не развитие на каких-либо аутоиммунного а нарущениях процесса, скорее агрессивного направленного углубление патологии, носит компенсаторно-репаративный характер (Полетаев, 2003). В предыдущих работах нашей активная иммунизация с крыс группы было показано, что ковалентным приводит к конъюгатом образованию можно и трииодтиронина белком-носителем и к анти-Тз-аутоантител охарактеризовать как изменениям, которые умеренный гипертиреоз (Мартьянов др., 1998; Волкова и др., 2000). Целью возможной данной работы или является дальнейшее роли в изучение антител и регуляторной патологической происходяших физиологических изменений, организме экспериментальных животных после иммунизации к гормонам {Т4), к щитовидной железы трииодтиронину Тз и тироглобулину (ТГ). (Тз) и тироксину тиролиберину (ТРГ), а также после сочетанной иммунизации к Обзор литерафуры 1. Общая характеристика тиреоидных гормонов Тиреоидные трииодтиронин гормональном гормоны (Тз) балансе тироксин важное и (Т4) место и в 3,5,3общем занимают организма оказывают регулирующее влияние на основные его функции рост, развитие и обмен веществ (Гинецинский, Лебединский, 1956; Розен, 1994). Тз и Т4 вырабатываются щитовидной железой (glandula thyroidea). Структурной единицей железы является фолликул замкнутый пузырек, стенка которого выстлана однослойным секреторным эпителием. Именно фолликулы осуществляют синтез и секрецию тиреоидных гормонов. Полость фолликула заполнена жидкой протеино-мукополисахаридной массой коллоидом. белок Основным компонентом коллоида является специфический тироглобулин (ТГ). В молекуле тироглобулина содержатся остатки L-тирозина, которые являются предшественниками Т4 и Тз. Иодирование остатков L-тирозина происходит в составе тироглобулина, сначала образуется 3-моноиодтирозин, а затем 3,5-дииодтирозин. катализирует одного реакцию Фермент конденсации с тиреоидная двух пероксидаза или дииодтирозинов в дииодтирозина моноиодтирозином, (Т4) результате 3,3,5как образуется трииодтиронин иодирование тироглобулина поверхности 3,3,5,5-тетраиодтиронин (Тз) тирозина в Реакция происходит или конденсации в составе на также молекулы апикальной является полости фолликулов тиреоцитов, поскольку пероксидаза мембраносвязанным белком. В щитовидной железе синтезируется и изомер не Тз 3,3,5-трииодтиронин гормональной (реверсивный Тз), который обладает активностью (Гагельганс, 1972; Щитовидная железа..., 1998; Кавок, 2006) Тироксин содержит 3/4 всего иода крови, Тз находится в циркуляции в значительно меньшем количестве (Гагельганс, Van Doorn, 1984). T3, несмотря на малое количество в крови, является основным физиологически активным гормоном и преимущественным лигандом тиреоидных рецепторов, Т4 рассматривается в основном как прогормон. 2. Транспорт тиреоидных гормонов в крови Тиреоидные гормоны циркулируют в крови в виде комплексов с транспортными белками. Выделяют три основных типа этих белков: глобулином а-глобулин, (ТСГ), (ТСПА) белки не называемый тироксинсвязывающим преальбумин Связывая или тироксинсвязывающии и альбумин. только транстиретин транспортные гормоны собственно обеспечивают транспорт гормонов в крови, но и с одной стороны выполняют «запасающую» функцию, создавая резерв гормонов, который может мобилизоваться при изменении потребностей организма, а с другой могут влиять на захват гормонов тканями, а так же замедлять скорость деградации гормонов (Mendel Richard, 1990; Schreiber, 2002; Смирнов, 2006). Белки имеют разное сродство к тиреоидным гормонам. У человека преобладает связывание гормонов щитовидной железы с ТСГ, а ТСПА имеет меньшее сродство к ним. Альбумин связывает Т4 и Тз, как и многие другие, в том числе и гидрофобные вещества, но с низким сродством. Количество же этих белков в крови имеет обратную зависимость больше всего альбумина, дальше идет транстиретин и самая низкая концентрация у ТСГ. Связь Тз с транспортными белками крови более слабая и Т4 может вытеснять трииодтиронин из комплексов (Sakata et al., 1985; Розен, 1994; Hulbert, 2000). Незначительная часть гормонов циркулирует в свободном активную белками равновесия которые виде (около 0,1%) и составляет фонда. состоянии и физиологически Связанный подвижного с часть Т гормонального находится в крови со свободным тироксином в трииодтиронином, могут диффундировать клетки (Гагельганс, 1972; Yamamoto, 1976; Nunez, 1988; Гончаров, 1995) Проникновение тиреоидных гормонов в клетку является лимитирующим фактором для реализации их действия. Долгое время считалось, что тиреоидные гормоны проникают в клетку исключительно путем пассивной диффузии, поскольку являются липофильными работы, мембране молекулами. Однако о в 70-х в годах появились свидетельствующие белков, наличии плазматической тиреоидные специфически связывающих гормоны (Неппетапп, 2001 review). Транспорт тиреоидных гормонов в разных органах и тканях отличается по и специфичности зависимости изучен В к Тз, от Т4 и гТз, а также Так и по в насыщаемости гепатоцитах зависимый градиента Na". хорощо транспорт. энерго-, температуротканей Na"- клетках других обнаружены сходные с гепатоцитами системы транспорта Тз, но зависимость специфического Транспорт меньшей категории тканях: Т4 в транспорта клетках от ионов тканей 2001 натрия организма варьирует. изучен в других степени. (Неппетапп, review). Выделяют в две транспортеров тиреоидных гормонов и разных транспортеры органических 2001 того, анионов транспортеры 2002; аминокислот Friesema, (Неппетапп, 2003). Кроме review; Pizzagalli, что обнаружено, некоторые представители например МСТ8 семейства транспортеров монокарбоксилов, (monocarboxylate transporter 8) у человека и крыс могут транспортировать и иодтиронины Т4, Тз, гТз и Тг (Friesema, 2003). Наряду происходит с транспортом их тиреоидных из гормонов (Ribeiro в клетку et al., также экспорт клетки 1996; Неппетапп, 2001). Наличие такого транспорта показано в кардиоцитах, гепатоцитах, астроцитах и фибробластах крысы (Ribeiro et ai., 1996). Экспорт тиреоидных гормонов рассматривается как механизм, который может контролировать внутриклеточное содержание тиреоидных гормонов, в первую очередь Тз, и таким образом изменять их доступность для ядерных рецепторов, а следовательно и степень реализации их действия (Ribeiro на et транскрипцию al., 1996). тироидчувствительных тиреоидных генов. из Транспорт гормонов клеток ингибируется верапамилом и возможно осуществляется с участием (MDR, белков множественной лекарственной устойчивости и в multidrug resistance-associated proteins) частности гликопротеин, однонаправлено Р-гликопротеина, обнаруженный переносить в представляющего ряде тканей из и собой способный во субстраты цитоплазмы внеклеточную среду 1996) (Mitchell et al., 2005; Ribeiro et al., 3. Роль деиодиназ в синтезе тиреоидных гормонов В организме Тз образуется тремя основными путями: 1 синтез de novo из тироглобулина в щитовидной железе и секреция в кровь; 2 деиодирование внешнего кольца Т4 в 5положении специфическими иодтиронин монодеиодиназами в щитовидной железе; 3 5-деиодирование Т4 в периферических тканях (Chanoine, 1993). Известно три типа монодеиодиназ D-I, D-II и D-III. D-I и D-II катализируют преимущественно 5-деиодирование, то есть участвуют в образовании Тз (Bates, 1999; Bianco, 2002). Измерение гомогенатах активности тканей монодеиодиназ всего тела крыс обоих типов в что показало, приблизительно 50% образующегося Тз происходит при помощи DII, а остальное за счет D-1-пути деиодирование (Nguyen, 1998) D-III кольца к в структуре образованию (Bates, катализирует тироксина и внутреннего что трииодтиронина, приводит неактивных метаболитов 1999; Bianco 2002). В печени, почках гТЗ и 3,З-дииодтиронина и и кишечнике на крыс в всей период жизни эмбрионального развития протяжении экспрессируется в основном D-I фермент, D-II нет вообще, а D-III появляется (Bates, только 1999; на ранних стадиях В эмбрионального бурой жировой самой этих развития ткани Marassi, 2007). только D-II и никогда D-III также D-I и D-III. В гипофизе и не обнаруживается, причем в в щитовидной тканях железе экспрессируются периоде D-II, раннем а у лишь неонатальном взрослых небольшую гонадах D-II составляет 50% активности, и составляет крыс значительно снижается часть. В коре на всех стадиях головного мозга, мозжечке, коже, цикла, а также в жизненного плаценте обнаруживаются все три типа ферментов. Интересным оказалось то, что в яичниках активность D-III является преобладающей как у новорожденных крысят, так и у взрослых животных. Однако даже когда 5-активность ферментов этих тканей достигает максимума, количество образующегося в них Тз сушественно ниже, чем то, которое образуется в печени, почках и щитовидной железе (Bates, 1999). Для период различных органов и тканей и характерен собственный дифференцировки количество трииодтиронина, необходимое для координации Тз-зависимых процессов развития может сильно различаться. регуляция Поэтому необходима дифференцированная образования Тз на органном и клеточном уровне. Такая регуляция содержания трииодтиронина в различных периферических коэкспрессии тканях, D-I вероятно, и D-II является с D-III Так, в и в результатом разного деиодиназ этих уровня активности монодеиодиназ. преобладает ранних в большинстве тканей экспрессия или D-III на период после как в внутриутробного рождения, активность а развития сроках то очень время затем происходит (D-I и и спад, D-II) 5-ферментов тканях низка эмбриональных возрастает после рождения. Исключение составляет только кожа здесь активность D-I и D-II велика в конце внутриутробного периода, а после рождения она заметно снижается, в то время как активность D-III существенно Существуют гипофизе как возрастает, затем падает и у взрослых возрастные, фермента по так и половые различия в D-I ниже у с чем у самцов крыс в животных становиться в несколько раз ниже (Bates, 1999). активности деиодиназ. В печени, почках, щитовидной железе и активность препубертатныи активность животных, полового самок существенных период и сравнению выще, половозрелыми половозрелых и гипофиза после всех во животными. У самок, напротив, в препубертатныи период D-I в печени а в почках тканях не щитовидной дейодиназной происходит. Ранее, в В железы изменений активности целом других созревания исследованных тканях активность D-I выще у самцов, чем у (Marassi, 2007). работе авторов (Соггёа da Costa, 2001) были получены иные результаты активность фермента D-I в печени существенно выше у самок крыс, чем у самцов и снижается с возрастом у животных обоих полов. Активность фермента в тканях щитовидной железы одинаковая у крыс обоих полов, несмотря на то, что уровень D-I РНК в щитовидной железе у самок был выще, чем у самцов, и с возрастом не изменяется (Соггёа da Costa, 2001). Однако следует что отметить, что Соггёа da Costa разных с соавторами авторов не проводили исследование на взрослых и старых животных, так возможно приведенные данные противоречат друг другу. В эксперименте на крысах было показано, что 50 65% от общего Тз образуется в щитовидной железе, в основном за счет деиодирования D-I. (Chanoine, 1993; Nguyen, животным и 1998), причем большая часть трииодтиронина получается при работе фермента Тиреоидэктомированным терапию проводили образом заместительную тироксином таким поддерживали нормальный уровень Т в крови, однако уровень Тз в сыворотке крови так и не восстановился и был снижен

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Цвиркун, Дарья Викторовна

6. Выводы

1. Иммунизация крыс к гормону щитовидной железы трииодтиронину путем подкожного введения ковалентного конъюгата Т3-БСА в смеси с полным адьювантом Фрейнда приводит к развитию двухфазного эффекта: у крыс наблюдаются признаки гипертиреоза, обусловленные, выходом гормона из конъюгата (первая фаза), а затем развиваются продолжительные (недели, месяцы) изменения, связанные с образованием аутоантител к Т3 (вторая фаза).

2. Изучение физиологических параметров после иммунизации к Т3 показало следующее: значительно возрастает содержание свТ4; масса тела и ее прирост не меняется; ЧСС повышается; температура тела в термонейтральных условиях не меняется за счет усиления теплоотдачи; изменений содержания цитохромов ccl и ааЗ в митохондриях не происходит, но существенно повышается чувствительность митохондрий к кальцию; масса сердца и щитовидной железы практически не меняется.

3. Иммунизация крыс к Т3 на фоне гипотиреоза, вызванного тиреостатиком мерказолилом, приводит к улучшению состояния животных.

4. Иммунизация крыс к гормону щитовидной железы тироксину приводит к появлению в крови анти-Т4-антител и к изменениям той же направленности, что и после иммунизации к Т3/ а по таким показателям, как содержание свТ4, температура тела и кальциевая емкость митохондрий влияние иммунизации к тироксину более выражено.

5. Иммунизация к тиролиберину вызывает увеличение содержания свободного тироксина в сыворотке крови крыс.

6. Совместное введение тироглобулина и Т3-БСА в качестве комплексного иммуногена приводит к образованию антител к ТГ и Т3 и вызывает более выраженные физиологические изменения, чем введение обоих иммуногенов по отдельности.

7. Иммунизация к тиреоидным гормонам, тиролиберину и к Т3 в сочетании с тироглобулином не оказывает патологического действия, а индуцирует образование антител, играющих регуляторную роль. В эксперименте на животных появление такого рода антител приводит к формированию нового гормонального статуса с признаками умеренного гипертиреоза. Роль аутоантител при этом можно охарактеризовать как буферно-депонирующую.

Благодарность

Автор выражает благодарность людям, без которых работа не смогла бы состояться:

Марии Федоровне Обуховой (НИИ нормальной физиологии им. П.К. Анохина РАМН)

Татьяне Георгиевне Емельяновой (НИИ химической физики им. Н.Н. Семенова РАН)

Марине Александровне Рябининой (Кафедра химической энзимологии, Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова)

Михаилу Юрьевичу Высоких (НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского)

5. Заключение

Обобщая полученные в работе результаты можно заключить, что иммунизация крыс ковалентным конъюгатом Т3-БСА приводит к образованию аутоантител к тиреоидным гормонам и последующему сдвигу тиреоидного статуса, причем по ряду исследованных показателей этот сдвиг имеет гипертиреоидную направленность. Иммунизация к Т3 приводит к активации работы щитовидной железы и значительному увеличению уровня свободного тироксина, однако не вызывает у животных каких-либо выраженных нарушений ростовых процессов, дыхания, работы сердца и системы терморегуляции, а изменения перечисленных показателей отражают умеренный характер тироидстимулирующего действия иммунизации, что, по нашему мнению, свидетельствует об отсутствии патологической роли у образующихся анти-Т3-антител и доказывает принципиальную возможность регуляторного действия аутоантител.

Иммунизация к Т3 на фоне гипотиреоза, вызванного тиреостатиком мерказолилом, хотя и не приводит к «выздоровлению» животных, но тем не менее оказывает некоторое нормализующее влияние на ростовые процессы и обмен веществ у животных. Хотя надо повторить, что действие иммунизации на эти два показателя имеет, скорее всего, разную природу - первое главным образом связано с выходом гормона из конъюгата в процессе его разрушения, а второе, как мы считаем, является следствием образования антител к Т3 и отражает их влияние на работу щитовидной железы и на уровень гормонов в крови.

Сравнение следствий иммунизации к Т3 с изменениями, происходящими при иммунизации к другим тиреоидным регуляторам и соединениям - Т4, ТРГ, ТГ и Т3 в сочетании с ТГ выявило следующее. Иммунизация к тироксину вызывает изменения той же направленности, что и иммунизация к трииодтиронину, причем по таким показателям как содержание свободного Т4, температура тела и кальциевая емкость митохондрий ее действие даже более выражено. То же можно сказать и об иммунизации смесью конъюгата Т3-БСА с ТГ. Сочетанное введение этих двух соединений оказывало значительное влияние на рост животных, чего не наблюдали при иммунизации к тиреоидным гормонам (ни к Т3, ни к Т4), частоту сердечных сокращений и рефлекторную активность спинного мозга, в то время как введение гетерологичного ТГ в отдельности не имело такого действия. То есть, появление тироглобулина в крови, которое может иметь место при заболеваниях или травмах щитовидной железы, может способствовать образованию антигормональных антител, что подтверждается как литературными, так и нашими данными о том, что при сочетанном введении Т3-БСА с ТГ титр антигормональных антител был существенно выше, чем после иммунизации отдельно Т3-БСА.

Один из самых интересных, на наш взгляд, результатов мы получили в серии экспериментов, в которой крыс иммунизировали к тиролиберину. У животных этой группы так же как и у иммунизированных к Т3 и Т4 крыс происходило существенное повышение уровня свободного Т4, хотя и в меньшей степени. То есть, образующиеся после иммунизации антитела к либерину гипоталамуса оказывают стимулирующее действие на всю гормональную ось, модулируя регуляторную деятельность гормона-мишени. Такой вывод представляется правомерным, поскольку уровень свободного тироксина в крови лишь опосредовано связан с вводимым конъюгатом, а кроме того, тиролиберин является относительно короткоживущим пептидом и, маловероятно, что выщепление его из состава конъюгата может приводить к стимуляции работы щитовидной железы в течение столь длительного времени (5.5 недель).

Таким образом, можно заключить, что аутоантитела к тиреоидным гормонам выполняют регуляторную роль. Тиреоидные гормоны в организме существуют в разных формах (минимум в трех - Т4, Т3 и Т2) и между всеми этими формами существует равновесие, в поддержании которого немаловажную роль играют транспортные белки. Уже общепризнано, что транспортные белки, кроме переноса гормонов в крови, могут снижать метаболический клиренс гормонов, модулируя, таким образом, их активность, и создают значительный пул «запасного» гормона, который может при необходимости мобилизоваться. Появление нового участника в «команде» транспортных белков, коим можно считать аутоантитела, вероятно, приводит к смещению равновесия в системе, образованной связанными с белками и свободными физиологически активными гормонами, и к установлению этого равновесия на новом умеренно гипертиреоидном уровне.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Цвиркун, Дарья Викторовна, Москва

1. Ашмарин И.П., Гомазков О. А. Длительное изменение физиологического и биохимического статуса организма посредством иммунизации эндогенными регуляторами.// Изв. АН СССР, сер. Биология.-1989.-N1.-С.11-18

2. Барашков В.А., Фомин В.Н. Адаптивные реакции организма на мышечные нагрузки и холод при гипо- и гипертиреозе.// Физиология человека.-1994.-Т.20,N5.-С.76-8О

3. Божко А.П., Городецкая И.В. Повышение устойчивости организма к комбинированному воздействию иммобилизации и холода тиреоидными гормонами.// Научн. доклады Высш. школы. Биол. науки.-1991.-N5.-С.80-86

4. Божко А.П., Городецкая И.В. Значение тиреоидных гормонов в реализации защитных эффектов холодовой адаптации.// Патол. физиол. эксп. терапия.-1994.-N4.-С.29-32

5. Ветшев П.С., Мельниченко Г.А., Кузнецов Н.С., Чилингариди К.Е., Ванушко В.Э. Заболевания щитовидной железы.// М. : АО "Медицинская газета".-1996.-160с.

6. Волкова Н.В. Изучение влияния иммунизации к трийодтиронину на физиологические показатели крыс с нормальными измененным тиреоидным статусом.// Дисс. канд. биол.наук.-Москва.-1999.-93с.

7. Волкова Н.В., Васильева Т.В., Цвиркун Д.В., Обухова М.Ф., Мартьянов А. А. Увеличение секреторной активности щитовидной железы у крыс после иммунизации трииодтиронин-альбуминовым конъю гатом.// Вестн. Моск. Ун-та, сер. 16, Биология.-2000.-N3.-С.10-13

8. Гагельганс А.И., Гайдина Г.А., Гольбер Л.М., Кандрор В. И., Мирахмедов А.К., Салахова Н.С., Туракулов Я.Х. Тиреоидные гормоны. Биосинтез, физиологические эффекты имеханизмы действия.// Ташкент: ФАН.-1972.-332с.

9. Гинецинский А.Г., Лебединский А. В. Курс нормальной физиологии.// М.: МЕДГИЗ.-1956.-536с.

10. Голья Ф. Биологическое действие 3,5-дииодтиронина (Т2).// Биохимия.-2005.-Т.70,Вып.2.-С.203-213

11. Гончаров Н.П. Гормональный анализ в диагностике заболеваний щитовидной железы (лекция).// Пробл. эндокр.-1995.-Т.41,N3.-С.31-35

12. Городецкая И.В. Значение тиреоидного статуса в реализации протекторных кардиальных эффектов адаптации к теплу крыс.// Физиол. ж. им. И.М.Сеченова.-2000.-Т.86,N1.-С.46-54

13. Ибрагим М.Д., Базарова Э.Н., Кандрор В.И., Бобровская Т. А., Кушлинский Н.Е. Послеоперационный гипотиреоз.// Советская медицина.-1986.-N1.-С.78-81

14. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии. Основные методики экспериментально-эндокринологических исследований.// Изд-во МГУ.-1968.

15. Кавок Н.С. Структура и регуляция ферментов тиреоидного гормонопоэза.// Укр. биохим. журн.-2006.-Т.78,N1.-С.5-19

16. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям.// М.: Наука.-1982.-342с.

17. Кандрор В.И., Арсланов С.Н., Завадский П.С. О состоянии инсулярного аппарата при экспериментальном тиреотоксикозе.// Пробл. эндокр.-1980.-Т.26,N2.-С.66-70

18. Кандрор В.И., Доан-Хак X., Крюкова И.В., Гольбер Л.М. Механизмы гормональной регуляции гликемии в динамике тиреотоксикоза.// Пробл. эндокр.-1985.-Т.31,N5.-С.41-45

19. Коц Я.М. Организация произвольного движения.// М.: Наука.-1975.-248с.

20. Мартьянов А. А. Физиологические следствия иммунизации крыс ковалентным конъюгатом тиролиберина с белками-носителями.// Дисс. канд. биол. наук.-Москва.-1992.-152с.

21. Мартьянов А.А., Емельянова Т.Г., Обухова М.Ф., Волкова Н.В., Рябинина М.А., Вакулина О.П., Сахаров И.Ю., Ашмарин И.П. Физиологические эффекты активной иммунизации крыс трийодтиронином.// Бюлл. эксп. биол. мед.-1998.-Т.126,N11.-С.497-501

22. Машковский М.Д. Лекарственные средства.// М. : Медицина.-1993.-4.1.-736с.

23. Никитина В.Н., Бабенко Н.А. Тиреоидные гормоны и липидный обмен.// Физиол. ж. им. И.М.Сеченова.-1989.-Т.35,N3.-С.91-98

24. Певный С.А., Соболев В. И. О роли гормонов щитовидной железы и мозгового слоя надпочечников в реакциях терморегуляции.// Физиол. ж. им. И.М.Сеченова.-1973.-Т.5 9,N4.-С. 600-605

25. Полетаев А.Б., Алферова В.В., Абросимова А.А., Комиссарова И.А., Соколов М.А., Гусев Е.И. Естественные нейротропные аутоантитела и патология нервной системы.// Нейроиммунология.-2003.-N3.-С.11-17

26. Полетаев А.Б. Иммунологический гомункулус (иммункулус) в норме и при патологии.// Биохимия.-2002.-Т.67,Вып.5.-С.721-731

27. Рафибеков Д.С., Калинин А.П. Аутоиммунный тиреоидит.// Бишкек.-1996.-42с.

28. Розен В.Б. Основы эндокринологии.// Изд-во Моск. Ун-та.-1994-384с.

29. Руководство к практическим занятиям по физиологии человека и животных.// Изд-во Моск. Ун-та.-2004.-С.187-191

30. Руководство по клинической эндокринологии. Под ред. Старковой Н.Т.// Изд-во "Питер Пресс".-1996.-С.115.

31. Селятицкая В.Г., Пальчикова И.А., Одинцов С.В., Физиологическое состояние щитовидной железы у крыс, получавших повышенное количество иода с питьевой водой.// Пробл. эндокр.1994.-Т.40,Вып.6.-С.50-53

32. Серебров В.Ю., Васильев Н.В., Удинцев Н.А. Влияние иммунизации на функциональное состояние щитовидной железы и поглощения тироксина органами крыс.// Бюлл. эксп. биол. мед.-1982.-Т.93,N2.-С.46-48

33. Скулачев В.П. Энергетика биологических мембран.// М.: Наука.-1989.-564с.

34. Смирнов А.Н. Элементы эндокринной регуляции.// М. : ГЭОТАР-Медиа.-2006.-352с.

35. Соболев В.И., Лапенко Н.Т. Природа гиперметаболизма и тахикардии при адаптации к холоду и экспериментальном гипертиреозе.// Физиол. журн.-1990.-Т.36,N4.-С.22-28

36. Соболев В.И., Мерхелевич Л.Г., Махсудов М.С. Влияние экспериментального гипер- и атиреоза на температурную зависимость некоторых физиологических реакций.// Физиол. ж. им. И.М.Сеченова.-1995.-Т.81,N2.-С.76-82

37. Сорокина Л.В. Влияние экспериментального гипертиреоза на терморегуляционную активность двигательных единиц скелетных мышц крыс.// Физиол. ж. им. И.М.Сеченова.-1995.-Т.81,N3.-С.8589

38. Туракулов Я.Х. Обмен иода и тиреоидные гормоны.// Ташкент: Изд-во АН УССР.-1959.-100с.

39. Хэм А., Кормак Д. Гистология.// М.: Мир.-1983.-Т.5.-29бс.

40. Щитовидная железа. Фундаментальные аспекты. Под ред. Кубарко А.И. и Yamashita S.// Минск-Нагасаки.-1998.-368с.

41. Akerman К.Е.О., Wikstrom M.K.F. Safranine as a probe of the mitochondrial membrane potential.// FEBS Lett.-1976.-Vol.68(2).-P.191-197

42. Angley M.T., Sansom L.N., Smeaton T.C., Stupans I. The effects of cyclophosphamide on the pharmacokinetics of triiodothyronine in the male rats.// J. Pharm. Pharmacol.-1996.-Vol.48(4).-P.386-389

43. Aston R., Cowden W., Ada G.L. Antibody-mediated enhancement of hormone activity.// Mol. Immunol.-1989.-Vol.26(5).-P.435-446

44. Bajoria R., Oteng-Ntim E., Peek M.J., Fisk N.M. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of TRH during pregnancy.// Obstet. Gynecol.-1997.-Vol.90.-P.176-182

45. Ball S.G., Sokolov J., Chin W.W. 3,5-Diiodo-L-thyronine (T2) has selective thyromimetic effects in vivo and in vitro.// J. Mol. Endocrinol.-1997.-Vol.19.-P.137-147

46. Barker S.B., Klitgaard H.M. Metabolism of tissues excised from thyroxine-injected rats.// Am. J. Physiol.-1952.-Vol.170.-P.81-86

47. Bates J.M., Germain D.L. St., Galton V.A. Expression profiles of the three iodothyronine deiodinases, Dl, D2, and D3, in the developing rat.// Endocrinology.-1999.-Vol.140(2).-P.844-851

48. Benvenga S., Trimarchi F., Robbins J. Cerculating thyroid hormone autoantibodies.// J. Endocrinol. Invest.-1987.-Vol.10.-P.605-619

49. Benvenga S., Bartolone L., Squadrito S., Trimarchi F. Thyroid hormone autoantibodies elicited by diagnostic fine needle biopsy.// J. Clin. Endocrinol. Metab.-1997.-Vol.82(12).-P.4217-4223

50. Bianco A.C., Salvatore D., Gereben В., Berry M.J., Larsen P.R. Biochemistry, cellular and molecular biology, and physiological roles of the iodothyronine selenodeiodinases.// Endocrine Rev.-2002.-Vol.23.-P.38-89

51. Bulos В., Shukla S., Sacktor B. Effect of thyroid hormone on respiratory control of liver mitochondria from adult and senescent rats.// Arch. Biochem. Biophys.-1972.-Vol.151.-P.387-390

52. Carter W.J., Benjamin W.S.W., Faas F.H. Effect of experimental hyperthyroidism on protein turnover in skeletal and cardiac muscle as measured by 14C.tyrosine infusion.// Biochem. J.-1982.-Vol.204.-P.69-74

53. Chan S., Kilby M.D. Thyroid hormone and central nervous system development.// J. Endocrinol.-2000.-Vol.165.-P.1-8

54. Chanoine J.-P., Safran M., Farwell A.P., Dubord S., Alex S., Stone S., Arthur J.R., Braverman L.E., Leonard J.L. Effects of selenium deficiency on thyroid hormone economy in rats.// Endocrinology.-1992.-Vol.131.-P.1787-17 92

55. Chanoine J.-P., Braverman L.E., Farwell A.P., Safran M., Alex S., Dubord S., Leonard J.L. The thyroid gland is a major source of circulating Т(з) in the rat.// J. Clin. Invest.-1993.-Vol.91(6).-P.2709-2713

56. Chistiakov D.A. Immunogenetics of Hashimoto's thyroiditis.// J. Autoimmune Dis.-2005.-Vol.2(1).-P.1-21

57. Cole J.C., Rodgers R.J. An ethological analysis of the effects of chlordiazepoxide and bretazenil (Ro 16-6028) in the murine elevated plus-maze.// Behav. Pharm.-1993.-Vol.4.-P.573-580

58. Copping S., Byfield P.G.H. The role of thyroid hormone autoantibodies in serum transport.// Acta Endocrinologica (Copenh.).-1989.-Vol.121.-P.551-559

59. Correa da Costa V.M., Moreira D.G., Rosenthal D. Thyroid function and aging: gender-related differences.// J. Endocrinol.-2001.-Vol.171.-P.193-198

60. Costin G., Kaplan S.A., Ling S.M. The Achilles reflex time in thyroid disorders.// J. Pediatric.-1970.-Vol.76(2).-P.277-282

61. Craig E.E., Chesley A., Hood D.A. Thyroid hormone modifies mitochondrial phenotype by increasing protein import without altering degradation.// Am. J. Physiol.-1998.-Vol.275.-P.C1508-C1515

62. Croteau W., Davey J.C., Galton V.A., Germain D.L.St. Cloning of the mammalian type II iodothyronine deiodinase a selenoprotein differentially expressed and regulated in human and rat brain and other tissues.// J. Clin. Invest.-1996.-Vol.98.-P.405-417

63. Danzi S., Klein I. Posttranscriptional regulation of myosin heavy chain expression in the heart by triiodothyronine.// Am. J. Physiol.-2005.-Vol.288.-P.H455-H460

64. Davis P.J., Davis F.B. Nongenomic actions of thyroid hormone on the heart.// Thyroid.-2002.-Vol.12(6).-P.459-466

65. De Lange P., Lanni A., Beneduce L., Moreno M., Lombardi A., Silvestri E., Goglia F. Uncoupling protein-3 is a molecular determinant for the regulation of resting metabolic rate by thyroid hormone.// Endocrinology.-2001.-Vol.142(8).-P.3414-3420

66. Denereaz N., Lemarchand-Beraud T. Sever but not mild alterations of thyroid function modulate the density of thyroid-stimulating hormone receptors in the rat thyroid gland.// Endocrinology.-1995.-Vol.136(4).-P.1694-1700

67. Despres N., Grant A.M. Antibody interference in thyroid assays: a potential for clinical misinformation.// Clin. Chem.-1998.-Vol.44(3).-P.4 40-454

68. Dowling A.L.S., Martz G.U., Leonard J.L., Zoeller R.T. Acute changes in maternal thyroid hormone induce rapid and transient changes in gene expression in fetal rat brain.// J. Neurosci.-2000.-Vol.20(6).-P.2255-2265

69. Drabkin D.L. Cytochrome с metabolism and liver regeneration. Influence of thyroid gland and thyroxine.// J. Biol. Chem.-1950.-Vol.182(1).-P.335-34 9

70. Druetta L., Bornet H., Sassolas G., Rousset B. Identification of thyroid hormone residues on serum thyroglobulin: a clue to the source of circulating thyroglobulin in thyroid disease.// Eur. J. Endocrinol.-1999 .-Vol.140.-P.457-467

71. Dudley S.C., Baumgarten C.M. Bursting of cardiac sodium channels after acute exposure to 3,5,3'-triiodo-L-thyronine.// Circ. Res.-1993.-Vol.7 3.-P.301-313

72. Duntas L.H., Nguyen T.T., Keck F.S., Nelson D.K., DiStefano J.J. Changes in metabolism of TRH in euthyroid sick syndrom.// Eur. J. Endocrinol.-1999.-Vol.141.-P.337-341

73. Duyff R.F., Van den Bosch J., Laman M., Potter van Loon B.-J., Linssen W.H.J.P. Neuromuscular findings in thyroid dysfunction: a prospective clinical and electrodiagnosticstudy.// J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry.-2000.-Vol.68.-P.750-755

74. El-Sherif W.T., Gendi S.S., Ashmawy M.M., Ahmed H.M., Salama M.M. Thyroid disorders and autoantibodies in systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis patients.// Egypt J/ Immunol.-2004.-Vol.11(2).-P.81-90

75. Enriquez J.A., Fernandez-Silva P., Garrido-Perez N., Lopez-Perez M.J., Perez-Martos A., Montoya J. Direct regulation of mitochondrial RNA synthesis by thyroid hormone.// Mol. Cell. Biol.-1999.-Vol.19(1).-P.657-670

76. Erlanger B.F. Principles and methods for the preparation of drug protein conjugates for immunological studies.// Pharmacol. Rev.-1973.-Vol.25(2).-P.271-280

77. Erregragui K., Cheillan F., Defoort J.P., Prato S., Fert V. Autoantibodies to thyroid hormones: the role of thyroglobulin.// Clin. Exp. Immunol.-1996.-Vol.105(1).-P.14 0147

78. Evans I.M., Pickard M.R., Sinha A.K., Leonard A.J., Sampson D.C., Ekins R.P. Influence of maternal hyperthyroidism in the rat on the expression of neuronal and astrocytic cytoskeletal proteins in fetal brain.// J. Endocrinol.-2002.-Vol.175.-P.597-604

79. Everts M.E., Verhoeven F.A., Bezstarosti K., Moerings E.P.C.M., Hennemann G., Visser T.J., Lamers J.M.J. Uptake of thyroid hormones in neonatal rat cardiac myocytes.// Endocrinology.-1996.-Vol.137.-P.4235-4242

80. Farwell A.P. Thyroid hormone action in the brain.// In: Proceeding of 25th Congress of International Society of Psychoendocrinology, Seattle, USA, 1994.-P.34

81. Fazio S., Palmieri E.A., Lombardi G., Biondi B. Effects of thyroid hormone on the cardiovascular system.// Recent Prog. Horm. Res.-2004.-Vol.59.-P31-50

82. Fisher D.A. Physiological variations in thyroid hormones: physiological and pathophysiological considerations.// Clin. Chem.-1996.-Vol.42(1).-P.135-139

83. Fisher D.A. The importance of early management in optimizing IQ in infants with congenital hypothyroidism.// J. Pediatr.-2000.-Vol.136(3).-P.273-274

84. Foley C.M., McAllister R.M., Hasser E.M. Thyroid status influences baroreflex function and autonomic contributions to arterial pressure and heart rate.// Am. J. Physiol.-2001.-Vol.280.-P.H2061-H2068

85. Friesema E.C., Ganguly S., Abdalla A., Manning Fox J.E., Halestrap A.P., Visser T.J. Identification of monocarboxylate transporter 8 as a specific thyroid hormone transporter.// J. Biol. Chem.-2003.-Vol.278(41).-P.40128-40135

86. Erlanger E. Principles and methods for the preparation of drug protein conjugates for immunological studies.//Pharmacol. Rev. 1973.- V.25, N2.- P.271-280.

87. Gozariu M., Roth V., Keime F., Le Bars D., Wilier J.-C. An electrophysiological investigation into the monosynaptic Pi-reflex in the rat.// Brain Res.-1998.-Vol.782(1-2).-P.343-347

88. Griffiths E.C., Rothwell N.J., Stock M.J. Thermogenic effects of thyrotrophin-releasing hormone and its analogues in the rat.// Experientia.-1988.-Vol.44(1).-P.40-42

89. Hennemann G., Docter R., Friesema E.C.H., De Jong M., Krenning E.P., Visser T.J. Plasma membrane transport of thyroid hormones and its role in thyroid hormone metabolism and bioavailability.// Endocrine Rev.-2001.-Vol.22(4).-P.451-476

90. Hermann G.E., Barnes M.J., Rogers R.C. Leptin and thyrotropin-releasing hormone: cooperative action in the hindbrain to activate brown adipose thermpgenesis.// Brain Res.-2006.-Vol.1117.-P.118-124

91. Horrum M.A., Tobin R.B., Ecklund R.E. Thyroxine-induced changes in rat liver mitochondrial cytochromes.// Mol. Cell. Endocrinol.-1985.-Vol.41.-P.163-169

92. Horrum M.A., Tobin R.B., Ecklund R.E. Effects of 3,3',5-triiodo-L-thyronine (l-t3) and t3 analogues on mitochondrial function.// Biochem. Mol. Biol. Int.-1995.-Vol.36(4).-P.913-921

93. Hu L.W., Liberti E.A., Barreto-Chaves M.L.M. Myocardial ultrastructure in cardiac hypertrophy induced by thyroid hormone an acute study in rats.// Virchows Arch.-2005.-Vol.446.-P.265-269

94. Huang X.C., Saigusa Т., Iriki M. Comparison of TRH and its analog (NS-3) in thermoregulatory and cardiovascular effects.// Peptides.-1992.-Vol.13.-P.305-311

95. Hulbert A.J. Thyroid hormones and their effects: a new perspective.// Biol. Rev.-2000.-Vol.75.-P.519-631

96. Humbert J.Т., Bergad P.L., Masha 0., Stolz A.M., Kaul S., Berry S.A. Growth hormone action in hypothyroid infant rats.// Pediatr. Res.-2000.-Vol.47(2).-P.250-255

97. Ikekubo K., Konishi J., Endo K., Nakajima K., Okuno Т., Kasagi K., Mori Т., Nagata I., Torizuka K. Anti-thyroxine and anti-trriodothyronine antibodies in three cases of Hashimotos thyroiditis.// Acta Endocrinol. (Copenh.)-1978.-Vol.89(3).-P.557-566

98. Iversen E. Pharmacokinetics of thyrotrophin-releasing hormone in patients in different thyroid states.// J. Endocrinol.-Vol.128(1).-P.153-159

99. Iwahara K., Tanabe C., Nishiyama K., Ohashi H., Maekawa M. Falsely high serum free triiodothyronine and free thyroxine concentrations attributable to anti-diiodothyronine and anti-triiodothyronine antibodies.// Clin. Chem.-2005.-Vol.51(6).-P.1071-1072

100. Jacobs S.C.J.M., Bar P.R., Bootsma A.L. Effect of hypothyroidism on satellite cells and postnatal fiber development in the soleus muscle of rat.// Cell Tissue Res.-1996.-Vol.286.-P.137-144

101. Jansky L. Humoral thermogenesis and its role in maintaining energy balance.// Physiol. Rev.-1995.-Vol.75(2).-P.237-259

102. John R., Henley R., Shankland D. Concentration of free thyroxin and free triiodothyronine in serum of patients withthyroxin- and triiodothyronine-binding autoantibodies.// Clin. Chem.-1990.-Vol.36(3).-P.470-473

103. Johansson C., Gothe S., Forrest D., Vennstrom В., Thoren P. Cardiovascular phenotype and temperature control in mice lacking thyroid hormone receptor-(3 or both al and (3.// Am. J. Physiol.-1999.-Vol.216.-P.H2006-H2012

104. Joseph L.J., Desai K.B., Patel M.C., Mehta M.N., Ganatra R.D. Thyroid function and thyrotropin levels in rabbits immunized to produce antibodies against thyroid hormones.// Nucl. Med. Biol.-1987.-Vol.14(5).-P.511-514

105. Justo R., Boada J., Frontera M., Oliver J., Bermudez J., Gianotti M. Gender dimorphism in rat liver mitochondrial oxidative metabolism and biogenesis.// Am. J. Physiol.-2005 . -Vol.289.-P.C372-C378

106. Kahaly G.J., Dillmann W.H. Thyroid hormone action in the heart.// Endocrine Rev.-2005.-Vol.26(5).-P.704-728

107. Kaplan M.M., Utiger R.D. Iodothyronine metabolism in liver and kidney homogenates from hyper- and hypothyroid rats.// Endocrinology.-1978.-Vol.103(1).-P.156-161

108. Kenessey A., Ojamaa K. Thyroid hormone stimulates protein synthesis in the cardiomyocyte by activating the Akt-mTOR and p70s6K pathways.// J. Biol. Chem.-2006.-Vol.281(30).-P.20666-20672

109. Kivirikko K.I., Laitinen 0., Aer J., Halme J. Metabolism of collagen in experimental hyper- and hypothyroidism in the rat.// Endocrinology.-1967.-Vol.80(6).-P.1051-1061

110. Klein I., Ojamaa K. Thyroid hormone and the cardiovascular system.// N. Engl. J. Med.-2001.-Vol.344(7).-P.501-509

111. Lanni A., Moreno M., Lombardi A., Goglia F. Calorigenic effect of diiodothyronines.// J. Physiol.-1996.-Vol.494(3).-P.831-837

112. Lanni A., Moreno M., Lombardi A., Goglia F. 3,5-Diiodo-L-thyronine and 3,5,3'-triiodo-L-thyronine both improve the cold tolerance of hypothyroid rats, but possibly via different mechanisms.// Pflugers. Arch.-Eur. J. Physiol.-1998.-Vol.436.-P.407-414

113. Lanni A., Moreno M., Lombardi A., Goglia F. Thyroid hormone and uncoupling proteins.// FEBS Lett.-2003.-Vol.543.-P.5-10

114. Lazar M.A. Editorial: when is a thyroid hormone receptor not a thyroid hormone receptor?// Endocrinology.-1996.-Vol.137(10).-P.4071-4072

115. Lazar M.A., Hodin R.A., Cardona G., Chin VI.VI. Gene expression from the c-erbAa/Rev-ErbAa genomic locus.// J. Biol. Chem.-1990.-Vol.265.-P.12859-128 63

116. Lenzen S. Dose-response studies on the inhibitory effect of thyroid hormones on insulin secretion in the rat.// Metabolism.-1978.-Vol.27(1).-P.81-88

117. Lisboa P.C., Oliveira K.J., Cabanelas A., Ortega-Carvalho T.M., Pazos-Moura C.C. Acute cold exposure, leptin, andsomatostatin analog (octreotide) modulate thyroid 5'-deiodinase activity.// Am. J. Physiol.-2002.-Vol.284.-P.E1172-E1176

118. Lombardi A., Lanni A., Moreno M., Brand M.D., Goglia F. Effect of 3,5-di-iodo-L-thyronine on the mitochondrial energy-transduction apparatus.// Biochem. J.-1998.-Vol.330.-P.521-526

119. Lombardi A., Beneduce L., Moreno M., Diano S., Colantuoni V., Ursini M.V., Lanni A., Goglia F. 3,5-Diiodo-L-thyronine regulates glucose-6-phosphate dehydrogenase activity in the rat.// Endocrinology.-2000.-Vol.141(5).-P.1729-1734

120. Luciakova K., Nelson B.D. Trascript levels for nuclear-encoded mammalian mitochondrial respiratory-chain components are regulated by thyroid hormone in an uncoordinated fashion.// Eur. J. Biochem.-1992.-Vol.207.-P.247-251

121. Marcil M., Bourduas K., Ascah A., Burelle Y. Exercise training induces respiratory substrate-specific decrease in Ca2+-induced permeability transition pore opening in heart mitochondria.// Am. J. Physiol.-2006.-Vol.290.-P.H1549-H1557

122. Margarity M., Valcana Т. Effect of cold exposure on thyroid hormone metabolism and nuclear binding in rat brain.// Neurochem. Res.-1999.-Vol.24(3).-P423-42 6

123. McAllister R.M., Sansone J.C., Laughlin M.H. Effects of hyperthyroidism on muscle blood flow during exercise in rats.// Am. J. Physiol.-1995.-Vol.268.-P.H330-H335

124. McAllister R.M., Grossenburg V.D., Delp M.D., Laughlin M.H. Effects of hyperthyroidism on vascular contractile and relaxation responses.// Am. J. Physiol.-1998.-Vol.274.-P.E946-E953

125. Mendel C.M., Richard A.W. Thyroxine uptake by perfused rat liver. No evidence for facilitation by five different thyroxine-binding proteins.// J. Clin. Invest.-1990.-Vol.86.-P.1840-1847

126. Mitchell A.M., Tom M., Mortimer R.H. Thyroid hormone export from cells: contribution of P-glycoprotein.// J. Endocrinol.-2005.-Vol.185(1).-P.93-98

127. Moreno M., Lanni A., Lombardi A., Goglia F. How the thyroid controls metabolism in the rat: different roles for triiodothyronine and diiodothyronines.// J. Physiol.-1997.-Vol.505 (2).-P.529-538

128. Moreno M., Lombardi A., Beneduce L., Silvestri E., Pinna G., Goglia F., Lanni A. Are the effect of T3 on resting metabolic rate in euthyroid rats entirely caused by T3 itself?// Endocrinology.-2002.-Vol.143(2).-P.504-510

129. Morte В., Manzano J., Scanlan Т., Vennstrom В., Bernal J. Deletion of the thyroid hormone receptor al prevents the structural alterations of the cerebellum induced by hypothyroidism.// PNAS.-2002.-Vol.99(6).-P.3985-3989

130. Muller M.J., Seitz H.J. Interrelation between thyroid state and the effect of glucagons on gluconeogenesis inperfused rat livers.// Biochem. Pharm.-1987.-Vol.36(10).-P.1623-1627

131. Muller E.E., Locatelli V., Cocchi D. Neuroendocrine control of growth hormone secretion.// Physiol. Rev.-1999.-Vol.79.-P.511-607

132. Munro D.S. Autoimmunity and thyroid gland.// Proc. Royal. Soc. Med.-1977.-Vol.70(12) .-P.855-857

133. Murakami M., Araki 0., Hosoi Y., Kamiya Y., Morimura Т., Ogiwara Т., Mizuma H., Mori M. Expression and regulation of type II iodothyronine deiodinase in human thyroid gland.// Endocrinology.-2001.-Vol.142(7).-P.2961-2967

134. Muraoka S., Takahashi K., Okada M. New sensitive method for the spectral analysis of respiratory chain components in mitochondria.// Biochem. Biophys. Acta.-1972.-Vol.2 67.-P.2 91299

135. Muscat G.E.O., Downes M., Dowhan D.H. Regulation of vertebrate muscle differentiation by thyroid hormone: the role of the myoD gene family.// Bio. Assays.-1995.-Vol.17.-P.211-218

136. Nakamura S., Hattori J., Ogawa Т., Sakata S. Thyroid hormone autoantibodies in patients with untreated Graves4 disease: with special reference to age.// Endocr. J.-1993.-Vol.40(3).-P.337-342

137. Nayer de P. Thyroid hormone action at the cellular level.// Hormone Res.-1987.-Vol.26.-P.48-57

138. Nieschlag E., Usadel K.-H., Schwedes U., Kley H.K., Schoffling K., Kruskemper H.L. Alterations in testicular morphology and function in rabbits following active immunization with testosterone.// Endocrinology.-1973. -Vol.92(4).-P.1142-1147

139. Nishiki K., Erecinska M., Wilson D.F., Cooper S.

140. Evaluation of oxidative phosphorylation in hearts from euthyroid, hypothyroid, and hyperthyroid rats.// Am. J. Physiol.-1978.-Vol.235(5).-P.C212-C219

141. Nunez J. Mechanism of action of thyroid hormone.// In: Hormones and their Actions, P.l. Eds.: Cooke B.A., King R.J.В., Van der Molen H.J.-1988.-Elsevier Science Publishers.-P.61-80

142. Ogawa Т., Sakata S., Nakamura S., Takuno H., Matsui I., Sarui H., Yasuda K. Thyroid hormone autoantibodies in patients with Graves' disease: effect of anti-thyroid drug treatment.// Clin. Chim. Acta.-1994.-Vol.228(2).-P.113-122

143. Okosieme O.E., Parkes А.В., Premawardhana L.D., Evans C., Lazarus J.H. Thyroglobulin: current aspects of its role in autoimmune thyroid disease and thyroid cancer.// Minerva Med.-2003.-Vol.94 (5).-P.19-30

144. Osman F., Franklyn J.A., Daykin J., Chowdhary S., Holder R.L., Sheppard M.C., Gammage M.D. Heart rate variability and turbulence in hyperthyroidism befor, during, and after treatment.// Am. J. Cardiol.-2004.-Vol.94.-P.465-469

145. Park K.W., Dai H.B., Ojamaa K., Lowenstein E., Klein I., Sellke F. The direct vasomotor effect of thyroid hormones on rat skeletal muscle resistance arteries.// Anesth. Analg.-1997.-Vol.85.-P.734-738

146. Pizzagalli F., Hagenbuch В., Stieger В., Klenk U., Folkers G., Meier P.J. Identification of a novel human organic anion transporting polypeptide as a high affinity thyroxin transporter.// Mol. Endocrinol.-2002.-Vol.16 (10).-P.2283-2296

147. Ribeiro R.C.J., Cavalieri R.R., Lomri N., Rahmaoui C.M., Baxter J.D., Scharschmidt B.F. Thyroid hormone export regulates cellular hormone content and response.// J. Biol. Chem.-1996.-Vol.271(2 9).-P.17147-17151

148. Queiroz M.S., Shao Y., Berkich D.A., Lanoue K.F., Ismail-Beigi F. Thyroid hormone regulation of cardiac bioenergetics: role of intracellular creatine.// Am. J. Physiol.-2002.-Vol.283.-P.H2527-H2533

149. Robbins J., Rail J.E., Rawson R.W. An unusual instans of thyroxin-binding by human serum gamma globulin.// J. Clin. Endocrinol. Metab.-1956.-Vol.16.-P.573-579

150. Sakata S., Komaki Т., Nakamura S., Suzuki S., Torigai K., Kojima M., Miura K. A case of systemic lupus erythematosus (SLE) and Sjogren's syndrome associated with anti-T3 autoantibodies.// Endocrinol. Jpn.-1987.-Vol.34(4).-P.497-503

151. Sakata S., Matsuda M., Ogawa Т., Takuno H., Matsui I., Sarui H., Yasuda K. Prevalence of thyroid hormone autoantibodies in healthy subjects.// Clin. Endocrinol.-1994 .-Vol.41(3).-P.365-370

152. Sakata S., Nakamura S., Miura K. Autoantibodies against thyroid hormones or iodothyronine.// Ann. Int. Med.-1985.-Vol.103 (4) .-P.579-589

153. Sapin R., Gasser F., Boehn A., Rondeau M. Spuriously high concentration of serum free thyroxine due to anti-triiodothyronine antibodies.// Clin. Chem.-1995.-Vol.41(1).-P. 117-118

154. Savin S., Sofronic L., Sinadinovic J. Occurrence of antithyroxine antibodies in rabbits immunized with iodine-poor human thyroglobulin.// Exp. Clin. Endocrinol.-1990.-Vol.95(3).-375-383

155. Schmidt B.M.W., Martin N., Georgens A.C., Tillmann H-C., Feuring M., Christ M., Wehling M. Nongenomic cardiovascular effect of triiodothyronine in euthyroid male volunteers.// J. Clin. Endocrinol. Metab.-2002.-Vol.87.-P.1681-1686

156. Schreiber G. The evolutionary and integrative roles if transthyretin in thyroid hormone homeostasis.// J. Endocrinol.-2002.-Vol.175.-P.61-73

157. Short K.R., Nygren J., Barazzoni R., Levine J., Nair K.S. T3 increase mitochondrial ATP production in oxidative muscle despite increase expression of UCP2 and -3.// Am. J. Physiol.-2001.-Vol.280.-P.E761-E769

158. Short K.R., Nygren J., Nair K.S. Effect of T3-induced hyperthyroidism on mitochondrial and cytoplasmic protein synthesis rates in oxidative and glycolytic tissues in rats.// Am. J. Physiol.-2007.-Vol.292.-P.E642-E647

159. Silva J.E. The thermogenic effect of thyroid hormone and its clinical implications.// Ann. Intern. Med.-2003.-Vol.139.-P.205-213

160. Silva J.E. Thermogenic mechanisms and their hormonal regulation.// Physiol. Rev.-2006.-Vol.86.-P.435-464

161. Short K.R., Nygren J., Barazzoni R., Levine J., Nair K.S. T3 increases mitochondrial ATP production in oxidative muscle despite increased expression of UCP2 and -3.// Am. J. Physiol.-2001.-Vol.280.-E7 61-E7 69

162. Smith P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T., Mallia A.K., Gartner F.H., Provenzano M.D., Fujimoto E.K., Goeke N.M., Olson B.J., Klenk D.C. Measurement of protein using bicinchoninic acid.// Anal. Biochem.-1985.-Vol.150 (1).-P.76-85

163. Smolenski R.T., Jacoub M.H., Seymour A.-M.L. Hyperthyroidism increases adenosine transport and metabolism in the rat heart.// Mol. Cell. Biochem.-1995.-Vol.143.-P.143-149

164. Soukup Т., Zacharova G., Smerdu V., Jirmanova I. Body, heart, thyroid gland and skeletal muscle weight changes inrats with altered thyroid status.// Physiol. Res.-2001.-Vol.50.-P.619-626

165. Staeheli V., Vallotton M.B., Burger A. Detection of human anti-thyroxine and anti-triiodothyronine antibodies in different thyroid conditions.// J. Clin. Endocrinol. Metab.-1975.-Vol.41(4).-P.669-675

166. Sun Z.-Q., Ojamaa K., Coetzee W.A., Artman M., Klein I. Effects of thyroid hormone on action potential and repolarizing currents in rat ventricular myocytes.// Am. J. Physiol.-2000.-Vol.278.-P.E302-E307

167. Tachibana Т., Takahashi H., Oikawa D., Denbow D.M., Furuse M. Thyrotropin-releasing hormone increase heat production without the involvement of corticotropin-releasing factor in neonatal chicks.// Pharm. Biochem. Behav.-2006.-Vol.83.-P.528-532

168. Tapia G., Cornejo P., Fernandez V., Videla L.A. Protein oxidation in thyroid hormone-induced liver oxidative stress: relation to lipid peroxidation.// Toxicol. Lett.-1999.-Vol.106.-P.209-214

169. Taruoura D., Higueret P., Garcin H., Higueret D. Effects of a synthetic retinoid, etretinate (RO 10-9359), on the peripheral metabolism of thyroid hormones in rats.// Food Chem. Toxicol.-1991.-Vol.29(9).-P.595-599

170. Tata J.R. Membrane phospholipid synthesis and the action of hormones.// Nature.-1967.-Vol.213(5076).-P.566-569

171. Tata J.R., Ernster L., Lindberg 0., Arrhenius E., Pedersen S., Hedman R. The action of thyroid hormones at the cell level.// Biochem. J.-1963.-Vol.86.-P.408-428

172. Tektonidou M.G., Anapliotou M., Vlachoyiannopoulos P., Moutsopoulos H.M. Presence of systemic autoimmune disorders inpatients with autoimmune thyroid diseases.// Ann. Rheum. Dis.-2004.-Vol.63.-P.1159-1161

173. Tokmakjian S., Haines D.S.M., Edmonds M.W. Interference in assay of free triiodothyronine by triiodothyronine-binding antibodies.// Clin. Chem.-1991.-Vol.37(12).-P.2150

174. Van Doom J., van der Heide D., Roelfsema F. The contribution of local thyroxine monodeiodination to intracellular 3,5,3'-triiodothyronine in several tissues of hyperthyroid rats at isotopic equilibrium.// Endocrinology.-1984.-Vol.115.-P.174-181

175. Venditti P., De Rosa R., Di Meo S. Effect of thyroid state on susceptibility to oxidants and swelling of mitochondria from rat tissues.// Free Rad. Biol. Med.-2003.-Vol.35 (5).-P.485-494

176. Wagner R.L., Huber B.R., Shiau A.K., Kelly A., Lima S.T.C., Scanlan T.S., Apriletti J.W., Baxter J.D., West B.L., Fletterick R.J. Hormone selectivity in thyroid hormone receptors.// Mol. Endocrinol.-2001.-Vol.15 (3).-P.398-410

177. Weetman A.P., McGregor A.M. Autoimmune thyroid disease: further developments in our understanding.// Endocrine Rev.-1994.-Vol.15 (6).-P.788-830

178. Wicking E.J., Nieschlag E. The effects of active immunization with testosteron on pituitary-gonadal feedback in the male Rhesus monkey (Macaca mulatta).// Biol. Reprod.-1978.-Vol.18.-P.602-607

179. Winder W.W., Heninger R.W. Effect of exercise on degradation of thyroxine in the rat.// Am. J. Physiol.-1973.-Vol.224(3).-P.572-575

180. Yamamoto Т., Doi K., Miyai K., Kumahara Y. The influence of thyroxine on the serum free triiodothyronine concentration.// Clin. Chim. Acta.-197 6.-Vol.67.-P.223-230

181. Yen P. Physiological and molecular basis of thyroid hormone action.// Physiol. Rev.-2001.-Vol.81.-P.1097-1142

182. Young D.W., Haines D.M., Kemppainen R.J. The relationship between autoantibodies to triiodothyronine (T3) and thyroglobulin (Tg) in the dog.// Autoimmunity.-1991.-Vol.9(1).-P.41-46

183. Zhou Q., Li S., Li X., Wang W., Wang Z Comparability of five analytical systems for the determination of triiodothyronine, thyroxine and thyroid-stimulating hormone.// Clin. Chem. Lab. Med.-2006.-Vol.44(11).-P.1363-1366

184. Zoratti M., Szabo I. The mitochondrial permeability transition.// Biochim. Biophys. Acta.-1995.-Vol.1241.-P.139-176

Информация о работе

Цвиркун, Дарья Викторовна
кандидата биологических наук
Москва, 2007
ВАК 03.00.13

Диссертация

Влияние аутоантител к тиреоидным гормонам на зависимые от тиреоидного статуса физиологические функции у крыс - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы