Влияние анксиогенного стресса на аллоксанзависимые изменения гликемии и интенсивность перекисного окисления липидов во внутренних органах

Синицкий, Антон Иванович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние анксиогенного стресса на аллоксанзависимые изменения гликемии и интенсивность перекисного окисления липидов во внутренних органах
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние анксиогенного стресса на аллоксанзависимые изменения гликемии и интенсивность перекисного окисления липидов во внутренних органах"

Синицкий Антон Иванович

ВЛИЯНИЕ АНКСИОГЕННОГО СТРЕССА НА АЛЛОКСАНЗАВИСИМЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ГЛИКЕМИИ И ИНТЕНСИВНОСТЬ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ ВО ВНУТРЕННИХ ОРГАНАХ

05 00 04 — биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

иил72197

Челябинск-2008

003172197

Работа выполнена в Государственном Образовательном Учреждении Высшего Профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации»

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор биологических наук, профессор Цейликман Вадим Эдуардович

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич доктор медицинских наук, профессор Львовская Елена Ивановна

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

ГУ «Научно - исследовательский институт биохимии СО РАМН» (г Новосибирск)

Защита состоится «Я? » 2008 г в часов на заседании

диссертационного совета Д208 117 02 при ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации» (454092 г Челябинск, ул Воровского, 64)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации» (454092, г Челябинск, ул Воровского, 64)

Автореферат разослан « » \XlihР_2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Л В Кривохижина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время отмечен неуклонный рост заболеваемости сахарным диабетом Ожидается, что к 2010 году количество больных на планете может составить около 215 миллионов человек Сахарный диабет характеризуется высоким риском развития осложнений в виде ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда, гипертонической болезни, атеросклероза, нефропатий, гангрены нижних конечностей, которые в конечном итоге приводят к развитию инвалидности и преждевременной смерти [И И Дедов и др, 2003] Поэтому возникла объективная необходимость в расширении исследований, касающихся этиологических и патогенетических факторов, обуславливающих развитие сахарного диабета

Среди механизмов, способствующих развитию инсулинозависимого сахарного диабета (ИЗСД), основное внимание исследователей сфокусировано на аутоиммунном поражении В-клеток островков Лангерганса К сожалению, недостаточно внимания уделяется факторам, провоцирующим развитие эмоционального стресса Между тем, доказана патогенетическая роль стресса в развитии аутоиммунных заболеваний Глюкокортикоиды являются важнейшими регуляторами численности популяции тимоцитов и процесса позитивной и негативной селекции клонов Th-2 лимфоцитов [Sapolsky R et al, 2000] Следовательно, эмоциональные стрессы «повседневной жизни» могут существенно модулировать динамику ИЗСД

Продиабетогенный фактор аллоксан, достаточно часто применяемый для экспериментального моделирования ИЗСД, является индуктором оксидативного стресса [Теппермен Дж, Теппермен X 1989] В настоящее время хорошо изучено влияние аллоксана на уровень перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантных ферментных систем во внутренних органах Кроме того, доказана взаимосвязь между уровнем оксидативного стресса во внутренних органах и гипергликемизирующим действием диабетогенного фактора [Lee Е Y et al, 2007] Но отсутствуют данные о влиянии предварительных стрессорных воздействий анксиогенной направленности на чувствительность к продиабетогенному действию аллоксана Между тем, данный тип стрессорных воздействий характеризуется десенситизацией к глюкокортикоидам, сопровождающейся активацией МАО - Б и усилением ПОЛ во внутренних органах [Волчегорский И А и соавт , 2003] Можно предположить, что стрессогенные изменения чувствительности к глюкокортикоидам, сопряженные с усилением процессов свободно - радикального окисления, отразятся на чувствительности к действию продиабетогенного фактора аллоксана Однако, невозможно а рпоп предсказать, произойдет усугубление или ограничение аллоксан - зависимых изменений уровня гликемии и показателей ПОЛ во внутренних органах

Цель исследования Изучить влияние иммобилизационного стресса, имеющего анксиогенный характер, на аллоксанзависимые изменения уровня гликемии и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными системами внутренних органов

Задачи исследования:

1 Изучить влияние предшествующего анксиогенного стресса на гипергликемизирующий эффект аплоксана

2 Изучить влияние анксиогенного стресса на уровень циркулирующего кортикостерона, чувствительность к глюкокортикоидам и соотношение между уровнем активности МАО-Б и содержанием молекулярных продуктов ПОЛ во внутренних органах

3 Изучить активность глюкокортикоид - метаболизирующей изоформы цитохрома Р450 СУРЗА при введении аллоксана и ее ассоциированность с выраженностью воспалительных изменений в печени

4 Изучить влияние продиабетогенного фактора аллоксана на выраженность поведенческих расстройств, активность церебральной МАО-Б и содержание молекулярных продуктов ПОЛ в головном мозге

5 Изучить влияние предшествующего анксиогенного стресса на панкреотропные эффекты аллоксана

6 Изучить влияние предшествующего анксиогенного стресса на гепатотропные эффекты аллоксана

Научная новизна. Установлено, что действие продиабетогенного фактора аллоксана сопровождается снижением поведенческой активности крыс в "открытом поле" на фоне увеличения церебральной активности МАО-Б Предшествующий анксиогенный стресс усугубляет аллоксан - индуцированный прирост церебральной активности МАО-Б и сопутствующие нарушения поведения крыс, а также потенцирует гипергликемизирующий эффект аллоксана Установлено, что развитие аллоксан - индуцированной гипергликемии сопровождается индукцией изоформы цитохрома Р450 СУРЗА, осуществляющей терминальную биотрансформацию глюкокортикоидов, и лейкоцитарной инфильтрацией печени Обнаружены гомологичные изменения церебральной активности МАО-Б и содержания молекулярных продуктов ПОЛ в головном мозге стрессированных и нестрессированных животных после введения аплоксана Обнаружено, что предварительный анксиогенный стресс ограничивает панкреотоксическое действие аллоксана и усугубляет гепатотоксическое

Теоретическое и практическое значение работы.

Обнаружен панкреонезависимый механизм усугубления предварительным анксиогенным стрессом гипергликемизирующего действия аллоксана

Результаты исследования свидетельствуют о целесообразности включения анксиолитической терапии в схему лечения ИЗСД

Положения, выносимые на защиту:

1 Анксиогенный стресс, характеризующийся сниженной чувствительностью к глюкокортикоидам, усугубляет гипергликемизирующее действие аллоксана и аллоксан - зависимые поведенческие расстройства

2 Угнетение поведенческой активности при введении аллоксана стрессированным животным ассоциируется с ограничением ПОЛ в головном мозге и печени

3 Поведенческая депрессия при повторных стрессорных воздействиях и при введении продиабетогенного фактора аллоксана сопровождается активацией церебральной МАО-Б и повышением содержания молекулярных продуктов ПОЛ в головном мозге

Апробация работы. Основные положения работы изложены и представлены на III конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2003), II Международной конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности (Москва, 2003), объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004), 12th International Congress of Immunology (Montreal,Canada, 2004), межрегиональной научно -практической конференции «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005), III итоговой научно - практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2005)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 5 - в рецензируемых журналах по перечню ВАК Минобразования РФ (Проблемы эндокринологии, №6, 2002, Бюллетень экспериментальной биологии и медицины №1, 2005, Экспериментальная и клиническая фармакология №1, 2005, Российский физиологический журнал им И М Сеченова №4, 2005, Вестник Российской академии медицинских наук, №8, 2005)

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов Библиографический указатель включает 223 источника 120 - на русском языке и 103 - иностранных Работа содержит 10 таблиц, 10 рисунков

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В эксперименте использовано 240 беспородных крыс обоего пола массой 180220г Животных содержали в стандартных пластмассовых клетках при комнатной температуре, при питании натуральным кормом в количестве, соответствующем суточным нормам За 24 часа до опыта животным прекращали подачу пищи при неограниченном доступе к воде Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными [Кополадзе Р А 1998], отраженными в "Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей" (Страсбург, 1985) Эвтаназию грызунов осуществляли цервикальной дислокацией под эфирным наркозом

Моделирование иммобилизационного стресса

Иммобштизационный стресс воспроизводился одночасовыми иммобилизациями, которые осуществлялись путем фиксации животного за конечности на спине с применением для этих целей прямоугольных планшет из фанеры Был использован режим четырехкратной иммобилизации Для этого режима повторных стрессорных воздействий характерно доминирование резистентной стратегии адаптации и наличие поведенческих расстройств тревожно-депрессивного характера [Волчегорский И А 2002]

Через 24 часа после завершения повторных иммобилизаций часть стрессированных животных была подвергнута дополнительным воздействиям (введение продиабетогенного фактора аллоксана)

Моделирование инсулино-зависимого сахарного диабета

Сахарный диабет моделировали путем внутрибрюшинного введения 4% раствора аллоксана тригидрата (La Chema, Чехия) в дозе 200мг/кг животным, лишенным пищи за сутки до постановки эксперимента Контрольным животным вводили эквиобъемное количество хлорида натрия Умерщвление животных проводили через 72 часа после инъекции аллоксана, когда уровень гликемии в 5-6 раз превышал контрольные значения

Методы анализа изучаемых явлений Биохимические методы

В сыворотке крови активность следующих ферментов аспартаттрансаминазы (ACT, КФ 26 11), апанинтрансаминазы (АЛТ, КФ 2 6 12), гамма -глутамилтранспептидазы (ГГТ), определяли на биохимическом анализаторе фирмы "KONE" (Финляндия) В тканях головного мозга, печени и почках определяли активность моноаминоксидазы (МАО, аминкислородоксидоредуктазы (дезаминирующей, флавинсодержащей), К Ф 14 3 4 ) Применяли модифицированный метод Волчегорского И А и др (1991) В гомогенатах органов определяли катапазную активность по методу М А Королюк и соавт (1988) Активность супероксиддисмутазы определяли по методу С Чевари и соавт (1985)

Для оценки монооксигеназных активностей в печени (совместно с профессором С В Сибиряком, дмн ОБ Цейликман и ДА Сысаковым) использовалась субмитохондриальная фракция - 12000g - гомогенаты (S12-фракция), которые адекватно заменяют очищенные микросомы [Pelkonen О et al ,1974] Микросомы получали методом низкоскоростного центрифугирования в присутствии ионов Ca2h [Kamath S, Rubin E, 1972] В супернатанте 812-фракции флюорометрическим методом [Pocl R, Foutus J 1978] определяли 7 -этоксирезоруфин - О - деэтилазную активность ( ЭРОД- активность, CYP1A1 -зависимое монооксигенирование) Для определения СУРЗА-зависимого монооксигенирования осуществляли деметилирование эритромицина [Wrighton S et all, 1985]

Содержание первичных и вторичных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали спектрофотометрически в липидном экстракте исследуемых тканей по методике Волчегорского И А идр (1989,2000) Содержание конечных продуктов перекисного окисления липидов (шиффовы основания) определяли по методике Львовской ЕИ и соавт(1991) Определение уровня продуктов перекисного окисления липидов в ответ на индукцию аскорбиновой кислотой производилось по методике Львовской Е И и соавт (1998)

Кроме того, у крыс всех групп определяли уровень кортикостерона в сыворотке (флюорометрическим микрометодом [Балашов ЮГ, 1990], уровень церулоплазмина (модифицированный метод Ревина [Камышников В С, 2000]), содержание а-токоферола (колориметрический метод с использованием реактива Эмери-Энгель [Колб В Г, Камышников В С,1976], содержание циркулирующих цитокинов (иммуноферментным методом) на планшетном фотометре MultiskanPIus (Labsystems) с использованием коммерческих наборов фирмы BIOSORCE, содержание глюкозы в сыворотке крови (глюкозооксидазным методом с использованием тест-систем «новоглюк»)

Оценка чувствительности к инсулину

С целью оценки чувствительности животных к инсулину использован метод И А Волчегорского и соавт (1993, 2000) Через 24 часа после завершения иммобилизационного стресса, крысам внутривенно вводили инсулин (100 ед/кг массы тела), после чего регистрировали время наступления комы (провисание на горизонтальном стержне)

Тест толерантности к глюкозе

Толерантность к глюкозе оценивали по уровню гликемии через 60 и 120 мин после внутрибрюшинного введения 40% раствора глюкозы в дозе 4 г/кг [Колесник Ю М, Абрамов А В, 1993]

Ненроэтологические методы

Изучались поведенческие реакции животных в актографе "открытое поле" конструкции И А Волчегорского (1993, 1998) Подбор и интерпретацию изучаемых показателей проводили по рекомендациям, изложенным в литературе [Archer J , 1973, Contreras G e a, 1986, Elliot P e a, 1986]

Морфологические методы

Гистологические препараты печени готовили по стандартным методикам (кусочки фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина с последующей проводкой через спирты, заключали в парафин, изготавливали серийные срезы, которые после депарафинирования окрашивали гематоксилином и эозином). Морфометрическое определение абсолютного количества клеток (гепатоцитов, моноцитов/макрофагов, лимфоцитов) проводили на 1 мм2 среза. Объёмное содержание некоторых исследуемых объектов выполнено с применением планиметрического метода точечного счета [Автандилов Г.Г., 1980]. Морфологические исследования выполнены совместно с Егоровым О.Н.

Статистическая обработка результатов

Данные обрабатывались общепринятыми методами вариационной статистики [Лакин Г.Ф., 1990] и выражались в виде среднеарифметической (М) и её стандартной ошибки (ш). О достоверности различий средних величин судили по критерию Стьюдента (1). В тех случаях, когда вероятность попадала в диапазон 0,05 < Р < 0.25, дополнительно применяли критерии непараметрической статистики Вилкоксона-Манна-Уитни (и) [Гублер Е.В., Генкин А.А 1969]. О различиях в распределении судили по критериям Колмогорова-Смирнова (X) и Вальда-Вольфовица (\У\У). Достоверность качественных различий выявляли при помощи точного критерия Фишера (ТКФ). Применялись только односторонние критерии, различия считали значимыми при Р < 0,05. Статистические взаимосвязи изучали при помощи непараметрического корреляционного анализа по Спирмену (гэ) и Кенделлу (гк).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Усугубление предварительными стрессорными воздействиями гипергликемизирующего эффекта аллоксана и поведенческих расстройств.

Анксиогенный стресс сопровождался повышением концентрации глюкозы в крови через 24 часа после завершения последнего стрессорного эпизода (контроль 3,59±0,31 ммоль/л (п=23), стресс 4,11±0,28 (п=24), Р < 0,05 (ТКФ)) и потенцировал гипергликемизирующее действие аллоксана (рисунок 1).

Рисунок 1

Влияние анксиогенного стресса и аллоксанана на уровень глюкозы крови

...................................................................................................................^................ По оси ординат - концентрация глюкозы

(ммоль/л)

* - достоверны отличия от контрольной группы, Р<0,05 и

** - различия достоверны между группами «аллоксан» и «стресс + аллоксан», Р<0,05 и

различия достоверны между группами

Контроль

Аллоксан Стресс+Аллоксан «стресс» И «СТреСС + ЭЛЛОКСан», Р<0,05 X

а Гпкжозэ ммоль/л

Интересно отметить, что анксиогенный стресс вызывал увеличение толерантности крыс к глюкозе (рисунок 2) и уменьшал латентность развития гииогликемической комы при введении инсулина с 149,6±13,64 мин в контрольной группе до 92,2±6,28 мин в опытной ( Р = 0,0028 и, п= 10 в каждой группе) Данный факт отражает нарушение баланса между эффектами контринсулярных гормонов и инсулином в пользу последнего

Рисунок 2

Влияние повторных стрессорных воздействий на толерантность к нагрузке

глюкозой

контроль - -о- - стресс

По оси ординат - концентрация глюкозы (ммоль/л)

По оси абсцисс - время введения глюкозы животным контрольной (сплошная линия) и экспериментальной (пунктирная линия) групп * - достоверны отличия от контроля Р < 0,05 Оценку достоверности различий проводили с помощью критерия Стьюдента и точного критерия Фишера (п = 10 в каждой группе)

Так как повторные иммобилизации сопровождались увеличением содержания кортикостерона на 18,5% (с 21,61±4,3 в контроле (п=8) до 25,61±5,31, в опытной (п=8) группе Р=0,015 WW), мы склонны рассматривать постстрессорное повышение инсулинреактивности как следствие сниженной чувствительности к глюкокортикоидам В условиях анксиогенного стресса сниженная чувствительность к глюкокортикоидам проявлялась в устойчивости вилочковой железы к гипоплазирующему действию пролонгированного глюкокортикоидного препарата триамцинолона ацетонида (кеналога) [Волчегорский И А и соавт , 2003] Интересно отметить, что глюкокортикоид-зависимая инволюция тимуса и селезенки ассоциировалась с приростом церебральной МАО активности Активность фермента в нервной ткани увеличивалась как при введении аллоксана, так и при анксиогенном стрессе Использованный нами метод позволяет определить активность одной из изоформ фермента, МАО-Б Известно, что глюкокортикоиды стимулируют экспрессию МАО-Б в нервной ткани и одновременно проявляют ингибиторный эффект в отношении предшествующих молекул фермента [Carlo Р, Violani Е, De-Rio М et al, 1996] Возможно, выявленное нарастание активности МАО-Б в мозге связано с первоначальным стероидзависимым усилением синтеза фермента и последующим ослаблением МАО-ингибиторного действия кортикостероидов из-за тахифилаксии к ГКГ Не исключено, что увеличение церебральной активности МАО-Б при аллоксановом диабете так же, как при анксиогенном стрессе, отражает снижение чувствительности к глюкокортикоидам Снижение эффективности противовоспалительного действия глюкокортикоидов может быть одним из последствий десенситизации к ним органов - мишеней

Изученный режим иммобилизационного стресса вызывал уменьшение локомоций, груминга и исследовательского поведения крыс в «открытом поле» (таблица 1) Так, на 42 % снизилась горизонтальная двигательная активность при одновременном снижении на 70% числа актов самоочистки животных

Подобные сдвиги расцениваются как результат подавления мотивации изучения незнакомого пространства, а также выполнения гигиенического стереотипа Отмеченные мотивационные нарушения сопровождались увеличением частоты дефекаций, что считается вегетативным эквивалентом тревоги у крыс [Gold Р W et al 1995] Полученные результаты позволяют рассматривать изученный режим четырехкратного иммобилизационного стресса как модель анксиогенных нарушений поведения у человека, которые часто встречаются при хронической патологии, в том числе при сахарном диабете типа 1

Введение животным аллоксана, наоборот, вызывало снижение на 52% ориентировочной реакции, полностью подавляло поведение самоочистки и уменьшало на 60% анксиогенную дефекацию по сравнению с показателями контроля (таблица 1)

Таким образом, аллоксан вызывает расстройства поведения, качественно противоположные последствиям анксиогенного стресса

Введение аллоксана предварительно стрессированным животным усугубило снижение ориентировочной реакции и анксиогенной дефекации Кроме того, у животных группы «стресс + аллоксан» по сравнению с группой «аллоксан» на 73% снижено исследовательское поведение

Предварительные стрессорные воздействия увеличили ориентировочную реакцию по сравнению со II серией контроля, что соответствует данным о сверхбдительности при тревожно-депрессивных расстройствах

Симптоматика поведенческих расстройств при введении аллоксана стрессированным животным отражает тяжесть локального воспалительного процесса, и в данном случае, по-видимому, связана с развитием аллоксан -зависимого инсулита и/или гепатита Наблюдаемые при воспалительной патологии поведенческие расстройства соответствуют симптоматике «sickness behavior» или «поведению болезни»

При этом активность МАО в мозге крыс, получавших аллоксан после стресса, отрицательно коррелировала с двигательной активностью во II серии тестирования (rs = - 0,67, Р < 0,05) Этот факт соответствует данным И А Волчегорского и соавторов (2003) об увеличении активности церебральной МАО как о нейрохимической основе поведенческой депрессии при изученных состояниях

Таблица 1

Влияние повторных эпизодов иммобилизационного стресса и аллоксана на

Показатели Серия Контроль Стресс Аллоксан Стресс + Аллоксан

Локочоция 1 33,296+3,518 (п=27) 19,71+2,39 (п=28) * 30,92±2,7 (п=39) 15,33±2,04 (п =39)

II 18,88+3,19 (п=26) + 8,68+1,31 (п=25) *+ 7,5±1,89 (п=26) *+ 6,23±1,28 (п =26) +

Выглядывания через отверстия I 6,07+0,94 (п=27) 3,14±0,58 (п=28) * 7,51±0,78 (п=39) 2,64±0,37 (п =39)

II 1,62+0,33 (п=2б) + 1,36±0,34 (п=25) + 1,35±0,76 (п=26) + 0,54±0,16 (п =26) *** +

Ориентировочная реакция (вертик стойки) I 7,0+1,13 (п=27) 5 86±0 83 (п=28) 2,62±0,76 (п =39) 4,54±0,68 (п =39)

II 2,04+0,63 (п=26) + 2,2±0,46 (п=25) *+ 0,85±0,33 (п =26) +* 1,42±0,39 (п =26) ** +

Груминг I 3,15+1,36 (п=27) 4,18±1,25 (п=28) * 2±0,58 (п =39) 3,23±0,93 (п =39)

II 0,08+0,08 (п=2б) + 0,16±0,09 (п=25) 0±0 (п =26) + 0,46±0,28 (п =26) ***

Дефекация I 0,5+0,26 (п=16) 0,93±0,27 (п=15) * 0,5±0,26 (п =20) 0,48±0,15 (п=21)

II 1,81+0,39 (п=16) + 1,6±0,29 (п=15) + 0,46±0,22 (п=13) +* 0,36±0,23 (п=14)

Примечание

После исходного тестирования в "открытом поле" (серия I) крыс наркотизировали диэтиловым эфиром и внутрибрюшинно вводили им аллоксана тригидрат (200 мг/кг) или эквиобъемное количество 0,9% №С1, через 72 ч проводили повторное тестирование (серия II)

* - достоверны различия между группами «контроль», «стресс» и «аллоксан» (р<0,05)

** - различия достоверны между группами «аллоксан» и «стресс+аллоксан» (р<0,05) *** - различия достоверны между группами «стресс» и «стресс+аллоксан» (р<0,05) + - достоверны различия между первой и второй сериями тестирования (р<0,05) Критерии г, X, и

2. Влияние анксиогенного стресса и аллоксана на интенсивность перекисного окисления липидов во внутренних органах

Одним из негативных последствий десенситизации к глюкокортикоидам может быть индукция оксидативного стресса в результате ограничения глюкокортикоид -зависимого ингибирования активности МАО-Б Образующаяся в качестве копродукта МАО-реакции Н2Ог обладает способностью угнетать экспрессию гена СОД при одновременном усилении экспрессии гена каталазы [Дубинина Е Е , 2001] Кроме того, в присутствии Ре+2 Н2О2 вступает в реакцию Фентона с продукцией гидроксильного радикала, который в свою очередь атакует фосфолипидный бислой клеточных мембран [Биленко М В , 1989, Зайчик А Ш, Чурилов Л П, 1999]

Через 72 часа после завершения повторных иммобилизаций, в печени наблюдалось увеличение на 6% МАО-активности с одновременным снижением на 19% активности СОД и повышением активности каталазы Среди молекулярных продуктов ПОЛ только уровень гептанофильных кетодиенов и сопряженных триенов не претерпел статистически значимых изменений Содержание остальных молекулярных продуктов ПОЛ оставалось повышенным по сравнению с контролем (таблица 2)

Таблица 2

Влияние дополнительного введения аллоксана на уровень перекисного окисления липидов, активность каталазы, супероксиддисмугазы и моноаминооксидазы в печени крыс после завершения четырехкратных

иммобилизаций.

Показатели Контроль (п =Ю) Стресс (п=9) Аллоксан (п=9) Стресс+ Аллоксан (п =9)

Диеновые конъюгаты (гептановая фаза) 0,44±0,0038 0,506±0,0014 * 0,79±0,0075 * 0,513±0,0024 ** ***

Кетодиены и сопряженные трнены (гептановая фаза) 0,055±0,016 0,078±0,012 0,102±0,006 * 0,099±0,012 ** ***

Диеновые конъюгаты (изопропанольная фаза) 0,495±0,0014 0,556±0,002 * 0,538±0,0053 * 0,45±0,03

Кетодиены н сопряженные триены (нзопропанольная фаза) 0,244±0,001 0,269±0,0026 * 0,245±0,0017 0,298±0,03 #**

МАО (нМ/орган/мин) 221,07±1,21 233,03± 1,84 * 222,51±2,08 233,84±1,07 **

сод (ед/орган/мин) 2,17±0,05 1,76±0,12 * 2,07±0,09 1,603±0,116 **

Каталаза (нМ/орган/сск) 662±4,99 753,53±12,69 * 671,35±15,32 760,65± 10,46 **

Примечание Уровень продуктов ПОЛ выражен в условных еденицах окислительного индекса (отношение оптических плотностей Е232/Е220 для первичных, Е278/ Е220 для вторичных продуктов ПОЛ),* - достоверны отличия от контроля (р<0,05)** - достоверны различия между группами «аллоксан» и «стресс + аллоксан» (р<0,05) *** - достоверны различия между группами «стресс» и «стресс + аллоксан» (р<0,05) Критерии \У\У, X, и

В печени у животных группы «стресс + аллоксан» по сравнению с животными группы «стресс» наблюдалось снижение уровня изопропанол -растворимых диеновых конъюгатов, а также гептанофильных, диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов (таблица 2).

При введении аллоксана в печени наблюдалась активация ПОЛ, несмотря на отсутствие статистически значимых изменений активности МАО и исследованных антиоксидантных ферментов. Этот факт указывает на наличие МАО - независимых механизмов индукции ПОЛ в органе при введении аллоксана. Развитие этого феномена может быть связано с механизмами ограничения эффектов глюкокортикоидов на орган-мишень альтернативными рецепторной десенситизации. К таким механизмам может относиться индукция изоформы цитохрома Р450 СУРЗА, осуществляющей биотрансформацию глюкокортикоидов путём бр -гидроксилирования.

Через 24 часа после завершения повторных стрессорных воздействий отмечено снижение активности изоформы СУРЗА с 0,564±0,04 нмоль/мин/гр ткани в контрольной группе (п=5) до 0,409±0,022 нмоль/мин/гр в группе стресс(п=7), Р = 0,039 и.

Введение аллоксана привело к увеличению активности изоформы СУРЗА. Возможно, что в условиях инсулинового дефицита, индукция СУРЗА является одним из способов ослабить эффект контринсулярных гормонов (рисунок 3).

Рисунок 3

Влияние дополнительного введения аллоксана на активность цитохром Р - 450 - зависимых монооксигеназ в печени стрессированных животных

0.6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

Контроль Аллоксан О ЭРНД - активность

—-

ййи

0,25

0,15

0,1

- ------ ■

* —

Контроль Стресс Аллоксан Стресс + Аллоксан

□ ЭРЭД - активность

Примечание:

На рисунке представлены данные, отражающие активность изоформ СУР1А1(ЭРОД), СУРЗА(ЭРНД), нмоль/мин/грамм ткани.

* - достоверны отличия от контрольной группы, р<0,05 (и)

** - различия достоверны между группами «Аллоксан» и «Стресс + Аллоксан», р<0,05 (X) *** - различия достоверны между группами «Стресс» и «Стресс + Аллоксан», р<0,05 (и)

Кроме того, в группе «Стресс+Аллоксан» по сравнению с группой «Стресс» в 2 раза повысилась интенсивность СУР1А1-зависимого монооксигенирования (Р=0,025 и). Однако наблюдаемой индукции СУР1А1 оказалось недостаточно даже

для того, чтобы достигнуть уровня СУР1А1 -зависимого монооксигенирования, характерного для группы «аллоксан» Как видно из рисунка 3, у животных группы «стресс + аллоксан» ЭРОД - активность снижена на 31% по сравнению с группой «аллоксан» Таким образом, у стрессированных животных в ответ на введение аллоксана, уровень СУР1А1-зависимого монооксигенирования меньше чем у нестрессированных Интересно отметить, что в группе «стресс» сниженному уровню ЭРОД - активности соответствовал повышенный уровень ПОЛ Вполне возможно, что это связано с ролью изоформы СУР1А1 в метаболизации полиненасыщенных жирных кислот Соответственно, снижение активности этой изоформы может сберегать субстраты для липопероксидации

Сопоставляя данные по аллоксан - зависимому усилению активности МАО и аллоксан - зависимой индукции СУРЗА следует отметить наличие дублирующих механизмов ограничения действия глюкокортикоидов как контринсулярных гормонов В этой ситуации возможно развитие провоспалительных изменений в различных внутренних органах

В почках у стрессированных животных также наблюдался дисбаланс между пророоксидантными и антиоксидантными системами, имеющий органоспецифеческий характер В отличие от головного мозга и печени здесь наблюдалось снижение МАО-активности С одной стороны этот факт свидетельствует о МАО - независимой индукции оксидативного стресса С другой стороны, не исключена возможность саморегуляции оксидативного стресса путем инактивации МАО продуктами свободно - радикального окисления Снижение мощности антиоксидантных систем проявлялось в одновременном уменьшении активности СОД и каталазы На этом фоне активация ПОЛ проявлялась в увеличении содержания изо - пропанол растворимых диеновых конъюгатов, а также кетодиенов и сопряженных триенов (таблица 3)

В почках животных группы «аллоксан» наблюдались аналогичные изменения активностей антиоксидантных ферментов и содержания молекулярных продуктов ПОЛ Прежде всего, наблюдалось снижение активности СОД и каталазы Причем сопутствующее снижение МАО-активности не смогло скомпенсировать аплоксан-зависимое угнетение антиоксидантных систем В этой группе активация ПОЛ проявлялась в увеличении содержания гептанофильных диеновых конъюгатов при одновременном увеличении содержания как первичных, так и вторичных изопропанол - растворимых молекулярных продуктов ПОЛ Развитие оксидативного стресса в органе повлекло за собой развитие нефропатии Так, через 72 часа после введения аллоксана в сыворотке крови было повышено содержание креатинина (контроль 63±2,92 мкМ/л (п=22), аллоксан 221,95±34,58 мкМ/л (п=24), Р < 0,05, и)

Таблица 3

Влияние анксиогенного стресса на уровень перекисного окисления липидов, активность моноаминооксидазы, супероксиддисмутазы, каталазы в

Показатели Контроль (п=10) Стресс (п=9) Аллоксан (п=9) Стресс + аллоксан (п=8)

Диеновые конъюгаты (гептановая фаза) 0,506±0,0015 0,509±0,0012 0,510±0,0018 * 0,510±0,0018

Кетодиены и сопряженные триены (гептановая фаза) 0,255±0,0014 0,258±0,0013 0,256±0,0012 0,257±0,0019

Диеновые конъюгаты (нзопропанольная фаза) 0,567±0,0026 0,580±0,0036 * 0,5 86±0,0026 * 0,589±0,0016 ***

Кетодиены и сопряженные триены (нзопропанольная фаза) 0,367±0,0029 0,385±0,0025 * 0,389±0,0011 * 0,388±0,0046

МАО (нмоль/почкн/мин) 0,589±0,008 0,516±0,007 * 0,499±0,0042 * 0,499±0,008

сод (у е а/почки/мин) 1,27±0,015 1,23±0,013 * 1,23±0,012 * 1,23±0,013

Каталаза (нмоль/почки/сек) 270,97±2,89 247,24±1,72 * 240,34±2,41 * 253,77±3,07 ** ***

Примечание Уровень продуктов ПОЛ выражен в условных еденицах окислительного индекса (отношение оптических плотностей Е232/Е220 для первичных, Н278/ Е220 для вторичных продуктов ПОЛ) * - достоверны отличия от контроля (р<0,05), ** - достоверны различия между группами «аллоксан» и «стресс+аллоксан» (р<0,05), *** - достоверны различия между группами «стресс» и «стресс+аллоксан» (р<0,05) Критерии \V\iV, X, и

В головном мозге через 72 часа после завершения воздействий одновременно с увеличением церебральной активности МАО наблюдалось снижение активности СОД Вероятно, наблюдаемый прирост каталазной активности позволяет несколько смягчить вызванный активацией МАО оксидативный стресс Тем не менее, в головном мозге отмечено увеличение количества первичных и вторичных молекулярных продуктов ПОЛ как в гептановой, так и в изопропанольной фазе (таблица 4)

Оксидативный стресс в головном мозге наблюдался и при введении аллоксана Через 72 часа после введения продиабетогенного препарата наблюдалось увеличение активности МАО при одновременном увеличении каталазной активности Наблюдалось увеличение содержания всех категорий молекулярных продуктов ПОЛ, кроме изо - пропанол растворимых диеновых конъюгатов (таблица 4) Введение аллоксана стрессированным животным привело к снижению содержания изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов в головном мозге Одновременно снижалась активность церебральной СОД (таблица 4)

Между тем, как уже ранее упоминалось, введение аллоксана приводило к усилению церебральной МАО активности Поэтому создается впечатление, что продиабетогенный фактор сам по себе вызывал снижение чувствительности к глюкокортикоидам

Таблица 4

Влияние дополнительного введения аллоксана на уровень перекисного

окисления липидов, активность каталазы, супероксиддисмутазы и

моноаминооксидазы в головном мозге крыс после завершения _четырехкратных иммобилизаций.__

Показатели Контроль (п-10) Стресс (п=9) Аллоксан (п=9) Стресс + аллоксан (ч=8)

Диеновые конъюгаты (гептановая фаза) 0,308+0,0015 0,351+0,001 * 0,353+0,0017 * 0,352+0,0024

Кетодиены и сопряженные триены (гептановая фаза) 0,106+0,0011 0,117+0,00067 * 0,118+0,0012 * 0,117+0,0018

Диеновые конъюгаты (изопропанольная фаза) 0,536+0,00056 0,583+0,0014 * 0,552+0,015 0,553+0,018 ***

Кетодиены и сопряженные триены (изопропанольная фаза) 0,216+0,0011 0,257+0,0014 * 0,251+0,004 * 0,254+0,0022

МАО (нмоль/мозг/мин) 7,053+0,056 7,524+0,009 * 7,34+0,054 * 7,518+0,025 **

СОД (у е.а/мозг/мин) 1,394+0,054 1,098+0,073 * 1,351+0,043 0,98+0,068 **

Каталаза (нмоль/мозг/сек) 159,87+1,43 174,66+1,44 * 168,48+3,11 * 176,84+1,72 **

Примечание Уровень продуктов ПОЛ выражен в условных едеиицах окислительного индекса (отношение оптических плотностей Е232/Е220 для первичных, Е278/ Е220 для вторичных продуктов ПОЛ) * - достоверны отличия от контроля (р<0,05), ** - достоверны различия между группами «аллоксан» и «стресс+аллоксан» (р<0,05), *** - достоверны различия между группами «стресс» и «стресс+аллоксан» (р<0,05) Критерии X, и

Вполне возможно, что стрессогенное усиление липопероксидации в нервной ткани является следствием не только активации МАО, но и нарастания уровня циркулирующих ГКГ Неэтерифицированные ацилгидроперекиси, экстрагируемые гептаном, являются цитотоксическими интермедиатами ПОЛ и вполне могут опосредовать цереброповреждающее действие избытка ГКГ, а также вызывать сопутствующие расстройства поведения В случае введения продиабетогенного фактора активация ПОЛ в головном мозге может иметь МАО - зависимый характер, а значит быть связанной с развитием глюкокортикоид - зависимых механизмов

3. Влияние предварительных стрессорных воздействий на панкреотропные и гепатотропные эффекты аллоксана.

Представляется вполне возможным, что способность предварительных стрессорных воздействий усугублять гипергликемизирующее действие аллоксана непосредственно связана с их способностью усугублять провоспалительные эффекты продиабетогенного фактора

К числу предполагаемых провоспалительных эффектов предшествующего анксиогенного стресса можно отнести потенцирование аллоксанового инсулита Поэтому мы посчитали целесообразным исследовать содержание молекулярных продуктов перекисного окисления липидов и гистологические изменения в поджелудочной железе в условиях анксиогенного стресса и при введении продиабетогенного фактора аллоксана

Через 96 часов после завершения иммобилизационного стресса наблюдалось увеличение содержания первичных при снижении конечных изопропанол -растворимых продуктов ПОЛ Введение аллоксана животным привело к накоплению первичных и конечных изопропанол - растворимых продуктов ПОЛ в ткани поджелудочной железы

Содержание молекулярных продуктов ПОЛ в поджелудочной железе крыс, получавших аллоксан после предварительных стрессорных воздействий оставалось на уровне контрольных значений и достоверно отличалось от соответствующих показателей в группе «Аллоксан» Кроме того, в группе «стресс + Аллоксан» по сравнению с группой «Аллоксан» достоверно выше содержание вторичных изопропанол - растворимых продуктов ПОЛ при индукции аскорбиновой кислотой, что свидетельствует о большем антиоксидантном резерве ткани (таблица 5)

Таблица 5

Содержание молекулярных продуктов перекисного окисления липидов в

Показатель Контроль (п=7) Стресс (п=8) Аллоксан (п=10) Стресс+ Аллоксан (ч=6)

Диеновые коныогаты (пзопропанольная фаза) 0,48±0,01 0,523±0,038 * 0,53±0,012 * 0,466±0,02

Кетодиены и сопряженные тр иены (пзопропанольная фаза) 0,272±0,04 0,248±0,01 0,205±0,011 0,22±0,007

Шиффовы основания (пзопропанольная фаза) 0,044±0,007 0,033±0,002 * 0,049±0,01 0,036±0,005 **

Кетодиены и сопряженные триены (пзопропанольная фаза, индукция аскорбиновой кислотой) 0,981 ±0,021 1,026±0,018 0,977±0,01 1,044±0,015 ***

Примечание Уровень продуктов ПОЛ выражен в условных еденицах окислительного индекса (отношение оптических плотностей Е^-^/Егго для первичных, Е278/ Е220 для вторичных продуктов ПОЛ) * - достоверны отличия от контроля (р<0,05), *** - достоверны различия между группами «аллоксан» и «стресс+аллоксан» (р<0,05) , ** - достоверны различия между группами «стресс» и «стресс+аллоксан» (р<0,05) Критерии 'А'М', X, и

Через 24 часа после завершения воздействий были отмечены морфологические признаки хронического воспалительного процесса в панкреатической ткани Это проявилось 4-кратным увеличением содержания моноцитов/макрофагов (с 0,51±0,35 в контроле (п = 10) до 2,03±0,73 на 1мм2 среза в опытной группе (п=10), Р<0,001 \У\¥) и почти 2-кратным приростом числа лимфоцитов во внесосудистом секторе стромы поджелудочной железы (контроль (п = 10) - 2,87±1,02 на 1мм2 среза, опыт (п = 10) - 5,57±1,22, Р<0,05 и) Объемная плотность панкреатической стромы на срезах тоже увеличилась с 3,87 ± 0,84% в контроле (п = 15) до 4,27 ± 0,95% (п = 15, Р < 0,05 \¥\У) Скорее всего, мононуклеарная инфильтрация поджелудочной железы и ее фиброзирование обусловлены повторными стрессогенными эпизодами ишемии, которые развиваются в этом органе при разнородных экстремальных воздействиях Правомерность предположения о стрессорной альтерации поджелудочной железы иллюстрируется приростом объемной плотности некроза на тканевых срезах с 3,07 ± 1,41% в контроле (п = 15) до 4,13 ± 1,95% (п = 15, Р < 0,0Ш) через 24 ч после заключительной иммобилизации

Через 96 часов после завершения четырехкратного иммобилизационного стресса в панкреатической ткани было отмечено двукратное снижение распространенности некроза (в сравнении с контролем) на фоне сохраняющегося прироста объемной плотности стромы и ее лимфоцитарной инфильтрации ( контроль - 5,52±2,13 на мм2, стресс - 5,87±1,39, р<0,05 и, п = 11) На этом сроке соединительная ткань поджелудочной железы содержала лишь единичные моноциты/макрофаги, количество которых не отличалось от контроля

Полученные данные можно рассматривать как проявление постстрессорной "адаптационной стабилизации" и сопутствующего уменьшения воспалительной инфильтрации поджелудочной железы При этом анксиогенный стресс не оказывал существенного влияния на морфологию паренхимы органа, что иллюстрируется отсутствием достоверных изменений числа экзокринных ацинусов и островков Лангерганса

Введение аллоксана животным приводило к развитию тяжелого поражения поджелудочной железы Это проявилось, трехкратным приростом распространенности некроза в панкреатической ткани, мононуклеарной инфильтрацией стромы (контроль 0,35±0,35 на мм2, аллоксан - 1,32±0,5 на мм2) и выраженным фиброзированием поджелудочной железы Одновременно отмечалось снижение количества экзокринных ацинусов на 25,8% и практически двукратное уменьшение числа островков Лангерганса (таблица 6)

Предшествующий анксиогенный стресс вызывал десятикратное уменьшение распространенности аллоксаниндуцированных некрозов поджелудочной железы, снижал мононуклеарную инфильтрацию ее стромы (с 1,32±0,5 на мм2 в группе «аллоксан» до 0,32±0,32 на мм* в группе «стресс+аллоксан») и предотвращал потерю экзокринных ацинусов (таблица 6) Развитие устойчивости данного органа к повреждающему действию аллоксана на фоне исходного стрессорного повреждения соответствует представлениям о резистентности к повторной травме.

Полученные данные иллюстрируют несостоятельность исходной гипотезы об отягощающем влиянии анксиогенного стресса на аллоксановое поражение

поджелудочной железы Возможно, развитию постстрессорного усугубления аллоксан - зависимой гипергликемии причастно стрессорное поражение печени

Таблица 6

Гистологические изменения в поджелудочной железе в условиях анксиогенного стресса и при введении продиабетогенного фактора аллоксана

Показатели Контроль Стресс Аллоксан Стресс + Аллоксан

Островки Лангерганса (на мм среза) 118,81+13,16 (п=П) 122,93+12,74 (п=11) 60,61+10,32 (п=13) * 66,97+13,34 (п=12) **♦

Панкреатические ацинусы (на мм2 среза) 842,64+46,63 (п=П) 842,26+45,61 (п=11) 624,99+32,17 (п=13) * 793,56+100,43 (п=12) ***

Некроз (%) 1,09+0,62 (п=П) 0,55+0,39 (п=11) * 3,38+2,89 (п=13) * 0,33+0,33 (п=12) ** ***

Соединительная ткань (%) 2,91+1,16 (п=11) 4,91+1,02 (п=11) * 6,46+1,38 (п=13) 6,67+1,73 (п=12)

Примечание * - достоверны отличия от контроля, ** - достоверны различия между группами «Стресс» и «Стресс+Аллоксан» (р<0,05), *** - достоверны различия между группами «Аллоксан» и «Стресс+Аллоксан» (р<0,05) Статистическую обработку проводили с использованием Стьюдента, Вилкоксона - Манна - Уитни, Колмогорова - Смирнова, точного критерия Фишера

Введение аллоксана предварительно стрессированным животным привело к увличению активности у - глутамилтранспептидазы в сыворотке крыс группы «стресс+алоксан» в сравнении с группой «аллоксан», снижению содержания общего белка сыворотки крови и увеличению тимоловой пробы (таблица 7)

Таблица 7

Функциональные пробы печени через 96 часов после

Показатель Контроль (п=7) Стресс (п=8) Аллоксан (п=10) Стресс+ Аллоксан (ч=6)

у - глутамилтранспептидаза (нмоль/(с л)) 6,88+1,57 12,34+2,8 13,96+2,19 * 26,29+6,51 *** **

Тимоловая проба (ед ) 7,13+0,29 5,7+0,6 12,7+1,66 * 16,5+0,32 *** **

Общий белок сывортки крови (г/л) 78,91+3,24 81,55+3,39 75,54+3,29 71,33+2,58 ***

АсАТ/АлАТ (Коэффициент ДеРитиса) 3,51+0,49 4,07+0,35 * 2,87+0,35 2,75+0,36 ***

Примечание * - достоверны отличия от контроля (р<0,05) , *** - достоверны различия

между группами «аллоксан» и «стресс+аллоксан» (р<0,05) , ** - достоверны различия группами «стресс» и «стресс+аллоксан» (р<0,05) Критерии \¥\У, X, и

между

Исследованный режим повторных иммобилизаций достоверно уменьшал число внесосудистых моноцитов/макрофагов в ткани печени, но не влиял на количество лимфоцитов и гепатоцитов, а также на распространенность некроза и отека в этом органе (таблица 8) Через 96 ч после заключительной иммобилизации было отмечено более чем двукратное уменьшение объемной плотности стромы на срезах печени

Таблица 8

Влияние анксиогенного стресса и аллоксана на некоторые морфологические характеристики печени крыс

Показатель Контроль (п=9) Стресс (п=8) Аллоксан (п=П) Стресс + Аллоксан (п=11)

Гепатоциты (на мм! среза) 933,68+31,25 984,38+54,18 1237,17+45,51 * 1086,04+40,69

Макрофаги (на мм2 среза) 0,84+0,56 0,48+0,48 * 1,73+0,79 * 2,42+0,77 ** ***

Лимфоциты (на мм2 среза) 8,78+2,12 12,8+2,26 10,34+1,03 16,55+5,27

Соед ткань (%) 2,22+1,18 1+1 * 1,09+0,78 * 3,64+1,47

Отек (%) 4,89+0,89 4,5+1,18 0,73+0,49 * 3,64+1

Некроз (%) 6,22+2,59 4,5+2,97 0,36+0,36 * 0,73+0,73 ** ***

Примечание * - достоверны отличия от контроля (р<0,05) ** - достоверны различия между группами «Стресс» и «Стресс+Аллоксан (р<0,05)***-достоверны различия между группами «Аллоксан» и «Стресс+Аллоксан» (р<0,05) Статистическую обработку проводили с использованием Стьюдента, Вилкоксона - Манна - Уитни, Колмогорова - Смирнова, точного критерия Фишера

По-видимому, отмеченные сдвиги связаны с подавлением адгезии моноцитов к сосудистому эндотелию и их последующей эмиграцией в ткань печени, что нарушает кооперацию макрофагов с фибробластами и обусловливает торможение фибропластических процессов в органе. Подобные сдвиги могут быть следствием стрессогенного усиления секреции глюкокортикоидных гормонов, которые способны ограничивать миграцию циркулирующих моноцитов в ткани и подавлять фиброгенез Через сутки после заключительной иммобилизации было отмечено достоверное снижение активности АЛТ в сыворотке крови и увеличение коэффициента де Ритиса (таблица 7), прирост которого сохранялся в течение четырех дней постстрессорного периода

Через 3 дня после введения аллоксана в печени наблюдалось достоверное снижение распространенности некроза и отека соединительной ткани (таблица 8) Характер этих изменений напоминает эффекты глюкокортикоидных гормонов, которые обладают протекторным, антисклеротическим и анаболическим действием на ткань печени В настоящее время показано, что анаболические эффекты кортикостероидов обусловлены их взаимодействием с апопротеинами Совместное действие ЛПВП и глюкокортикоидов приводит к

функциональным изменениям ядерного аппарата гепатоцитов (активация экспрессии генов) [Панин Л Е и соавт, 1999, 2000, 2002] Не исключено, что инъекция аллоксана приводит к развитию выраженной стресс - реакции и сопутствующему усилению секреции глюкокортикоидов Вместе с тем аллоксан обладает прямым гепатоповреждающим действием Это подтверждается выраженным увеличением активности гепатоспецифичных ферментов в сыворотке крови и более чем двукратным приростом числа внесосудистых моноцитов/макрофагов в ткани печени, что свидетельствует о развитии аллоксанового гепатита

Анксиогенный стресс, предшествовавший введению аллоксана, увеличивал распространенность отека в ткани печени, усиливал ее мононуклеарную инфильтрацию, вызывал снижение числа гепатоцитов и расширение печеночной стромы (таблица 8) В отличие от контрольных животных, у стрессированпых крыс отмечалось достоверное снижение коэффициента де Ритиса и увеличение активности у - глутамилтранспептидазы после инъекции аллоксана, что считается критерием усугубленного поражения печеночной паренхимы

Таким образом, вызванная стрессом десенситизация к глюкокортикоидам усугубляет провоспалительные гепатотропные эффекты аллоксана

ВЫВОДЫ

1 Предшествующий анксиогенный стресс потенцирует гипергликемизирующий эффект аллоксана, усугубляет аллоксаниндуцированный прирост церебральной активности МАО-Б и сопутствующие нарушения поведения крыс

2 Четырехкратная иммобилизация крыс вызывает анксиогенные расстройства поведения, которые сопровождаются увеличением содержания циркулирующего кортикостерона, снижением чувствительности к глюкокортикоидам, увеличением церебральной активности МАО-Б, увеличением содержания молекулярных продуктов ПОЛ в головном мозге, печени и почках

3 Аллоксан потенцирует индукцию изоформы цитохрома Р450 СУРЗА, осуществляющую терминальную биотрансформацию глюкокортикоидов в печени Одновременно с индукцией СУРЗА в печени и в поджелудочной железе наблюдается развитие моноцитарной инфильтрации

4 Продиабетогенный фактор аллоксан вызывает развитие поведенческой депрессии, сопровождающейся активацией МАО-Б в головном мозге с приростом содержания молекулярных продуктов ПОЛ

5 Предшествующий анксиогенный стресс ограничивает вызванный аллоксаном прирост молекулярных продуктов ПОЛ, выраженность некроза и моноцинарной инфильтрации стромы поджелудочной железы

6 Введение аллоксана предварительно стрессированным животным приводит к увеличению активности трансаминаз, у - глутамилтранспептидазы в сыворотке крови и усиливает выраженность отека и некроза в печени

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ НАУЧНЫХ РАБОТ

1 Волчегорский, И А Влияние анксиогенного стресса на чувствительность к глюкокортикоидам, толерантность к глюкозе и устойчивость к действию аллоксана у крыс / И А Волчегорский, В Э Цейликман, С А Шип, А И Синицкий, Н В Бубнов // Проблемы эндокринологии - 2002 - T 48, №6 -С 41 -44

2 Сибиряк, С В Угнетение активности цитохром Р-450 зависимых монооксигеназ печени при стрессорных воздействиях, связанных с ограничением подвижности крыс / С В Сибиряк , Е И Львовская, О Б Цейликман, Н В Бубнов, А И Синицкий, Д А Сысаков // Физиология мышц и мышечной деятельности материалы II международной конференции го физиологии мышц и мышечной деятельности - Москва, 2003 -С 166-167

4 Tseilikman, V Е Stress-Induced Hypersensitization of Thymus to Glucocorticoid Drug / V E Tseilikman, T A Filimonova, S V Sibiryak.DA Kozochkin, AI Sinitskii, D A Sisakov // 12lh International Congress of Immunology - Montreal,Canada, 2004 - P 18-23

5 Цейликман, О Б Активация апоптоза как механизм развития инволюции тимуса при повторных иммобилизациях / С В Сибиряк, В Э Цейликман, Н В Бубнов, А И Синицкий, Д А Сысаков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2005 - №1 - С 38 -40

6 Волчегорский, И А Влияние триамцинолона ацетонида на распределение лейкоцитов в системе крови, мононуклеарную инфильтрацию печени и иммунорективность при стрессорной сенсибилизации к гипоксии у крыс / И А Волчегорский, В Э Цейликман, О Б Цейликман, Н В Бубнов, А И Синицкий //Экспериментальная и клиническая фармакология - 2005 -№1 -С 61-66

7 Цейликман, В Э Влияние повторных редкочередующихся иммобилизаций на устойчивость к гипоксии и на выраженность анксиогенного стресса у крыс / В Э Цейликман, И А Волчегорский, О Б Цейликман, Н В Бубнов, А И Синицкий, Е И Львовская, О Н Блюменталь // Российский физиологический журнал им И М Сеченова - 2005 - №4 - С 394-398

8 Волчегорский, И А Впияние анксиогенного стресса на поражение поджелудочной железы и печени при аллоксановом сахарном диабете / И А Волчегорский, В Э Цейликман, О Б Цейликман, С А Шип, Синицкий А И , Н В Бубнов // Вестник Российской АМН - 2005 - №8 - С 21 - 25

9 Цейликман, В Э Активность цитохром Р-450 зависимых монооксигеназ после введения экзогенного глюкокортикоида у крыс с повышенной стрессорной реактивностью / В Э Цейликман, С В Сибиряк, А Л Маркель, А И Синицкий // Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины материалы межрегиональной научно - практической конференции , посвященной 85-летию самарского государственного медицинского университета Самара —2005 -С 452-454

10 Цейликман, ВЭ Адаптивные и дезадаптивные последствия резистентной и толерантной биохимических стратегий адаптации/ В Э Цейликман, О Б Цейликман, А И Синицкий, Д А Романов, Е А Лавин, И И Григориев, А Б Горностаева // Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины материалы научно - практической конференции с международным участием Астрахань - 2006 - С 25-28

11 Tseilikman, V Е Previous stress episode enhances effect of recombinant IL -1 on hepatic cytochrome P450 -dependent monooxygenases / V E Tseilikman, О В Tseilikman, S V Sibiryak, A1 Smitskii, D A Sisakov, E A Lavin // Chinese Journal of Pathophysiology 5"' international congress of pathophysiology June 28-Julyl, 2006 Belling, China -2006- №22P151

12 Tseilikman, V E Immune and monooxigenase systems interactions under the stress conditions / V E Tseilikman, О В Tseilikman, A I Sinitskii, D A Sisakov, E A Lavin // 16"' European

Congress of immunology, Paris - 2006 - P 443

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АЛТ - аланинтрансаминаза ЭРОД - 7 - этоксирезоруфин -О-деэтилазная активность

ACT-аспартаттрансаминаза ЭРНД- эритромицин-1Ч-деметилазная активность

ГКГ - глюкокортикоидные гормоны CYP - цитохром Р450

ИЗСД-инсулннзависимый сахарный ТКФ -точный критерий Фишера

диабет U - критерий Вилкоксона-Манна-Уитни

МАО - Б - моноаминооксидаза - Б WW - критерий Вальда - Вольфовитца

ПОЛ-перекисное окисление липидов X - кртерий Колмогорова - Смирнова СОД- супероксиддисмутаза

Синицкий Антон Иванович

03 00 04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2008

Подписано в печать 21 04 2008 г Бумага офсетная Отпечатано на ризографе Формат 60x84 1/16 Уел -печ листов 1,5 Уч -издл 1,7 Тираж 100 экз Заказ №

454092, г Челябинск, ул Воровского, 64, ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава»

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Синицкий, Антон Иванович

Список использованных сокращений.

Введение.

Актуальность темы.

Цель исследования.

Задачи исследования.

Научная новизна.

Теоретическое значение.

Практическое значение.

Положения, выносимые на защиту.

Апробация работы.

Публикации.

Объем и структура диссертации.

ГЛАВА 1.

1.1.Основные этапы развития инсулин-зависимого сахарного диабета.

1.2. Особенности эндокринного статуса в условиях ИЗСД.

1.3.Метаболические расстройства и осложнения при ИЗСД.

1.4. Оксидативный стресс при ИЗСД.

1.5. Активация ГГАС и снижение стрессорной реактивности при ИЗСД.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Моделирование изучаемых состояний.

2.2 Методы анализа изучаемых явлений.

ГЛАВА 3. Влияние анксиогенного стресса на устойчивость к действию аллоксана и толерантность к глюкозе.

3.1. Усугубление предварительными стрессорными воздействиями аллоксан-зависимых поведенческих расстройств.4Q

3.2. Дисбаланс между прооксидантными и антиоксидантными системами при анксиогенном стрессе и при действии продиабетогенного фактора.

Обсуждение.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние анксиогенного стресса на аллоксанзависимые изменения гликемии и интенсивность перекисного окисления липидов во внутренних органах"

Актуальность темы

В настоящее время отмечен неуклонный рост заболеваемости сахарным диабетом. Ожидается, что к 2010 году количество больных на планете может составить около 215 миллионов человек. Сахарный диабет характеризуется высоким риском развития осложнений в виде ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда, гипертонической болезни, атеросклероза, нефропатий, гангрены нижних конечностей и.т.д. Перечисленные осложнения в конечном итоге приводят к развитию инвалидности и преждевременной смерти. Поэтому возникла объективная необходимость в расширении исследований касающихся этиологических и патогенетических факторов обуславливающих развитие сахарного диабета.

Среди механизмов, способствующих развитию инсулинозависимого сахарного диабета (ИЗСД), основное внимание исследователей сфокусировано на аутоиммунном поражении В-клеток островков Лангерганса. Среди этиологических факторов, обуславливающих развитие аутоиммунного инсулита, основное внимание уделяется вирусам и токсинам. К сожалению недостаточно внимания уделяется факторам, провоцирующим развитие эмоционального стресса. Между тем, доказана патогенетическая роль стресса в развитии аутоиммунных заболеваний. Глюкокортикоиды являются важнейшими регуляторами численности популяции тимоцитов и процесса позитивной и негативной селекции клонов Th-2 лимфоцитов. Следовательно, эмоциональные стрессы «повседневной жизни» могут существенно модулировать динамику ИЗСД. Кроме того, данные диабетогенные факторы могут вызывать нарушения регуляторных механизмов в пределах гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы (ГГАС) по механизму отрицательной обратной связи и снижать стрессорную реактивность.

Продиабетогенный фактор аллоксан, достаточно часто применяемый для экспериментального моделирования ИЗСД, является индуктором оксидативного стресса. В настоящее время хорошо изучено влияние аллоксана на уровень перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантных ферментных систем во внутренних органах. Кроме того, доказана взаимосвязь между уровнем оксидативного стресса во внутренних органах и гипергликемизирующим действием диабетогенного фактора. Но отсутствуют данные о влиянии предварительных стрессорных воздействий анксиогенной направленности на чувствительность организма к продиабетогенному действию аллоксана. Между тем, данный тип стрессорных воздействий характеризуется десенситизацией к глюкокортикоидам, сопровождающейся активацией МАО - Б и усилением ПОЛ во внутренних органах (Волчегорский И.А. и соавт.,2003). Можно предположить, что стрессогенные изменения чувствительности к глюкокортикоидам, сопряжённые с усилением процессов свободно-радикального окисления отразятся на чувствительности организма к действию продиабетогенного фактора аллоксана. Однако, невозможно a.priori предсказать произойдёт усугубление или ограничение аллоксан-зависимых изменений уровня гликемии и показателей ПОЛ во внутренних органах. Цель исследования

Изучить влияние иммобилизационного стресса, имеющего анксиогенный характер, на аллоксанзависимые изменения уровня гликемии и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными системами внутренних органов.

Задачи исследования

1. Изучить влияние предшествующего анксиогенного стресса на гипергликемизирующий эффект аллоксана.

2. Изучить влияние анксиогенного стресса на уровень циркулирующего кортикостерона, чувствительность к глюкокортикоидам и соотношение между уровнем активности МАО-Б и содержанием молекулярных продуктов ПОЛ во внутренних органах.

3. Изучить активность глюкокортикоид - метаболизирующей изоформы цитохрома Р450 CYP3A при введении аллоксана и ее ассоциированность с выраженностью воспалительных изменений в печени.

4. Изучить влияние продиабетогенного фактора аллоксана на выраженность поведенческих расстройств, активность церебральной МАО-Б и содержание молекулярных продуктов ПОЛ в головном мозге.

5. Изучить влияние предшествующего анксиогенного стресса на панкреотропные эффекты аллоксана.

6. Изучить влияние предшествующего анксиогенного стресса на гепатотропные эффекты аллоксана.

Научная новизна

Установлено, что действие продиабетогенного фактора аллоксана сопровождается снижением поведенческой активности крыс в "открытом поле" на фоне увеличения церебральной активности МАО-Б. Предшествующий анксиогенный стресс усугубляет аллоксан -индуцированный прирост церебральной активности МАО-Б и сопутствующие нарушения поведения крыс, а также потенцирует гипергликемизирующий эффект аллоксана. Установлено, что развитие аллоксан - индуцированной гипергликемии сопровождается индукцией изоформы цитохрома Р450 CYP3A, осуществляющей терминальную биотрансформацию глюкокортикоидов, и лейкоцитарной инфильтрацией печени. Обнаружены гомологичные изменения церебральной активности МАО-Б и содержания молекулярных продуктов ПОЛ в головном мозге стрессированных и нестрессированных животных после введения аллоксана. Обнаружено, что предварительный анксиогенный стресс ограничивает панкреотоксическое действие аллоксана и усугубляет гепатотоксическое. Теоретическое значение

Обнаружен панкреонезависимый механизм усугубления предварительным анксиогенным стрессом гипергликемизирующего действия аллоксана. Практическое значение

Результаты исследования свидетельствуют о целесообразности включения анксиолитической терапии в схему лечения ИЗСД Положения, выносимые на защиту

1. Анксиогенный стресс, характеризующийся сниженной чувствительностью к глюкокортикоидам, усугубляет гипергликемизирующее действие аллоксана и аллоксан -зависимые поведенческие расстройства.

2. Угнетение поведенческой активности при введении аллоксана стрессированным животным ассоциируется с ограничением ПОЛ в головном мозге и печени.

3. Поведенческая депрессия при повторных стрессорных воздействиях и при введении продиабетогенного фактора аллоксана сопровождается активацией церебральной МАО-Б и повышением содержания молекулярных продуктов ПОЛ в головном мозге.

Апробация работы

Основные положения работы изложены и представлены на 12th International Congress of Immunology (Montreal,Canada, 2004), межрегиональной научно - практической конференции «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005), научно - практической конференции с международным участием. «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2006), 5th international congress of pathophysiology, (Beijing, China, 2006.), 16th European Congress of immunology(Paris, 2006) Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 4 -в рецензируемых журналах по перечню ВАК Минобразования РФ (Проблемы эндокринологии, №6, 2002; Бюллетень экспериментальной биологии и медицины №1, 2005;

Экспериментальная и клиническая фармакология №1, 2005; Вестник Российской академии медицинских наук, №8, 2005). Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Библиографический указатель включает 223 источника: 120 - на русском языке и 103 - иностранных. Работа содержит 10 таблиц, 10 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Синицкий, Антон Иванович

ВЫВОДЫ

3 Аллоксан потенцирует индукцию изоформы цитохрома Р450 CYP3A, осуществляющую терминальную биотрансформацию глюкокортикоидов в печени. Одновременно с индукцией CYP3A в печени и в поджелудочной железе наблюдается развитие моноцитарной инфильтрации.

6 Введение аллоксана предварительно стрессированным животным приводит к увеличению активности трансаминаз, у -глутамилтранспептидазы в сыворотке крови и усиливает выраженность отека и некроза в печени.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди эндокринных заболеваний сахарный диабет занимает лидирующее положение по уровню смертности. Причём каждые 10-15 лет происходит удвоение числа больных сахарным диабетом. Это обстоятельство невольно заставляет задуматься над причинами столь неблагоприятной тенденции. Не вызывает сомнений, что накоплению в популяции людей страдающих этим заболеванием способствуют многие издержки цивилизации, в том числе и стрессогенность современного образа жизни. В представленном исследовании получены доказательства усугубляющего эффекта анксиогенного стресса на гипергликемизирующее действие аллоксана.

Использованная модель анксиогенного стресса сама по себе характеризуется гипергликемизирующим действием. Скорее всего этот эффект определяется устойчивой активацией ГГАС и САС. Механизмы длительной активации стресс - реализующих систем сцеплены с развитием анксиогенных расстройств, так как в этой ситуации роль «центрального диспетчера» выполняет основной медиатор тревожности - кортиколиберин. Скорее всего, упомянутая активация стресс - реализующих систем определяется использованием редко чередующихся иммобилизаций, когда удлинение временного интервала между отдельными стрессорными эпизодами препятствует развитию габитуации. В таком случае организм не может адекватно отвечать на последующие стрессорные стимулы. Согласно современным представлениям адекватный ответ в условиях неизбегаемого стрессорного воздействия подразумевает смену адаптационной стратегии, когда неэффективную резистентную адаптационную стратегию сменяет филогенетически более древняя толерантная стратегия или толерантный гипобиоз. В данном случае реализуется пародоксальная ситуация, когда произошла активация базисных механизмов, обуславливающих переход к толерантной стратегии, но подобную активацию невозможно считать эффективной в виду сниженной устойчивости к гипоксической гипоксии. Поэтому резистентная адаптационная стратегия по-прежнему является доминирующей. В целом, использование организмом неадекватной для данной ситуации адаптационной стратегии может послужить причиной патогенеза различных заболеваний, в том числе и сахарного диабета. Известно, что «издержкой» резистентной стратегии адаптации является предрасположенность к заболеваниям стрессорной природы, к которым относятся болезни сердечнососудистой системы. Кроме того, возможно развитие патологии ассоциированной с иммуносупрессией.

При обсуждении роли стресса в развитии сахарного диабета основной акцент приходится на инулинорезистентную форму. Известно, что высокие концентрации глюкокортикоидов способны снижать чувствительность тканей к действию инсулина главным образом за счёт уменьшения числа или эффективности транпортёров глюкозы. Но в тоже время имеются данные о том, что при инсулинозависимом сахарном диабете наряду с гипоинсулинемией имеет место увеличение концентрации глюкагона, соматостатина, кортиколиберина, вазопрессина, кортиколиберина, АКТГ и кортикостероидов. Таким образом, имеется много общего в эндокринологических паттернах при стрессе и ИЗСД. Не исключено, что в условиях ИЗСД увеличение содержания кортикостероидов имеет адаптивный характер, так как направлено на ограничение масштабов инсулита. Но в тоже время, длительное повышение уровня глюкокортикоидов одновременно препятствует реализации метаболических эффектов инсулина, т.е. усугубляет негативные последствия инсулинового дефицита. Вероятно, наблюдаемое при введении продиабетогенного фактора аллоксана снижение чувствительности к глюкокортикоидам имеет компенсаторный характер. Интересно отметить, что у предварительно стрессированных животных введение аллоксана проводилось на фоне сниженной чувствительности к глюкокортикоидам. И, тем не менее, действие контроинсулярных гормонов не только не ограничивалось, но ещё и усугублялось. И это обстоятельство пародоксальным образом никак не отразилось на уровне летальности стрессированных животных. Наши исследования показали, что это может быть связано с протекторным эффектом исследованного режима хронического стресса на поджелудочную железу. Этот феномен можно объяснить характерным для данного режима хронического стресса снижением чувствительности к провоспалительным цитокинам. Ранее было показано, что при редко чередующихся иммобилизациях происходит ограничение уровня IL-1 зависимого нейтрофилёза с одновременным снижением мобилизации костномозговых нейтрофилов. Между тем, известно, что IL-1 оказывает цитотоксическое действие на островковые р-клетки. Механизм цитотоксического действия IL-1 связан как с усилением ПОЛ в островках Лангерганса, так и с увеличением концентрации кальция в цитозоле . По IL-1 зависимому механизму опосредуют своё действие и другие цитокины. Так TNF сам по себе не действует на эндокриноциты поджелудочной железы, однако потенцирует цитотоксические эффекты IL-1. y'NF совместно с IL-1 индуцирует экспрессию молекул HLA II класса на эндотелиальных клетках, а также воздействует на поверхностные рецепторы эндотелиальных клеток. Это способствует адгезии лейкоцитарных клеток и повышению проницаемости капилляров. Сопоставление представленных данных с данными, полученными ранее в нашей лаборатории даёт основание говорить о снижении чувствительности к провоспалительным цитокинам как о составляющей панкреопротекторного действия хронического стресса. Кроме того, снижение чувствительности провоспалительным цитокинам может благоприятно отразиться на транспорте глюкозы в мышечную ткань. Согласно современным представлениям IL-6 является одним ведущих факторов в формировании инсулинорезистентности как при сахарном диабете, так и в случае развития метаболического синдрома. Но в тоже время, феномен десенситизации к провоспалительным цитокинам может быть причастен к усугублению гипергликемизирующего действия аллоксана в условиях хронического стресса. Известно, что цитокины сами по себе обладают гипогликемизирующим действием за счёт стимуляции транспорта глюкозы в инсулинонезависимые ткани.

Несмотря на десенситизацию к провоспалительным цитокинам в условиях хронического стресса усугубляется вызванный введением аллоксана токсический гепатит. В данном случае полученный факт можно объяснить как результат снижения чувствительности печени к действию глюкокортикоидных гормонов.

Следует отметить, что в условиях анксиогенного стресса наблюдалась десенситизация к кортикостероидам, как со стороны иммунной системы, так и со стороны печени. Наиболее ГКГ - чувствительными клетками крови являются мононуклеарные лейкоциты, отличающиеся высокой экспрессией глюкокортикоидных рецепторов ( ГР ) II типа и низкой плотностью ГР III типа, что делает мононуклеары "открытой мишенью" для ГКГ. Наиболее крупным депо внесосудистого пула мононуклеарных лейкоцитов является печень. Функциональное состояние паренхимы этого органа и интенсивность ее мононуклеарной инфильтрации в значительной степени регулируются ГКГ. Эти общеизвестные закономерности позволяют рассматривать взаимосвязанные сдвиги распределения лейкоцитов в системе крови и печени как систему индикаторов чувствительности организма к ГКГ. Не менее информативными маркерами чувствительности к ГКГ является состояние лимфоидных органов, перераспределение лимфоидных клеток в системе крови и выраженность Th 1,-зависимого иммунного ответа. Реакция первичных (центральных) и вторичных (периферических) лимфоидных органов на экзогенные ГКГ при хроническом стрессе существенно зависит от сопутствующих изменений устойчивости к гипоксии. Как уже ранее отмечалось, данный режим повторных стрессорных воздействий характеризовался интолерантностью к острой гипоксической гипоксии. Вероятно, у стрессированных животных также снижена устойчивость печени к ишемизирующим факторам. Это предположение основывается на факте снижения содержания стабильных метаболитов NO в условиях анксиогенного стресса. Кроме того, аллоксан обладает способностью вызывать ишемические расстройства в результате избыточного гликозилирования белков эндотелиоцитов. Известно, что вызванные гипоксией/ишемией нарушения органного кровотока провоцируют развитие альтерации органов. Последнее является триггером для развития асептического воспаления. Следует отметить, что как в случае введения аллоксана, так и в случае анксиогенного стресса наблюдалось увеличение содержания молекулярных продуктов ПОЛ в печени. Высокий уровень липопероксидации был характерен и для группы «стресс + аллоксан». Между тем молекулярные продукты ПОЛ могут выступать в роли хемоаттракгантов для нейтрофилов способствующим их дополнительному поступлению в очаг воспаления. Вполне возможно, что наблюдаемое в печени и в головном мозге усиление ПОЛ обусловлено снижением чувствительности к глюкокортикоидам. Как. уже ранее отмечалось, с десинситизацией к глюкокортикоидам может быть связано постстрессорное усиление МАО активности, сопровождающееся угнетением СОД и увеличением активности каталазы. Полученные сдвиги могут быть связаны со способностью Н202, являющегося копродукгом МАО реакции одновременно усиливать экспрессию гена каталазы и угнетать экспрессию СОД. Подобное свойство иллюстрирует возможность продуктов СРО ограничивать свой уровень за счёт сдерживания радикал - генерирующих ферментов и активацией радикал-нейтрализующих. И хотя СОД является, безусловно, антиоксидантным ферментом, нельзя игнорировать то, что в ходе супероксидисмутазной реакции образуется Н202. Таким образом, в печени стрессированных животных активация каталазы ассоциирована также с активацией ПОЛ. Поэтому стоит обратить внимание на данные, свидетельствующие об инверсии антиоксидантных эффектов данного фермента в прооксидантные. Таким образом, полученные результаты свидетельствую об опосредовании оксидативным стрессом провоспалительных эффектов в печени, реализующихся благодаря десенситизации к глюкокортикоидам.

В свою очередь поступившие в печёночную ткань лейкоцитарные клетки могут за счёт секреции цитокинов ограничить активность цитохром Р450 - зависимых монооксигеназ. Известно, что активация некоторых изоформ цитохрома Р450 (CYP 2Е) сопровождается индукцией оксидативного стресса. Ранее у животных подвергнутых редко чередующимся иммобилизациям через 96 часов после завершения последнего стрессорного эпизода установлено увеличение монооксигеназной активности изоформ CYP1A1 и CYP2B1/2 с одновременным увеличением нейтрофильной инфильтрации. Кроме того, была обнаружена корреляционная зависимость между распространенностью некрозов и уровнем CYP2B1/2 - зависимой БРОД - активности у стрессированных животных. Это позволило предположить, что альтерация, вызванная индукцией различных изоформ цитохрома Р450, может быть одной из причин асептического воспаления в печени. В свою очередь, мигрировавшие в очаг воспаления нейтрофилы выступают как источники цитокинов, являющихся ингибиторами цитохром Р450 -зависимых монооксигеназ. Вероятно, с этим связано угнетение активности изоформы CYP1A1 в группе «стресс + аллоксан». Перспективным направлением для дальнейших исследований может послужить индукция изоформы CYP3A в условиях аллоксан -индуцированного токсического гепатита. Как уже отмечалось, провоспалительные цитокины в условиях in vivo, подавляя активности одних изоформ цитохрома Р450, одновременно вызывают индукцию именно этой изоформы, осуществляющей в печени терминальную биотрансформацию глюкокортикоидов. В этих же исследованиях показано, что индукции CYP3A предшествавало увеличение секреции кортикостерона. В условиях гипергликезимирующего действия аллоксана индукция этой изоформы может быть дополнительным фактором минимизирующим гепатотропные эффекты глюкокортикоидов. Также как и десенситизация к глюкокортикоидам усиление их CYPЗA-зaвиcимoй биотрансформации может смягчить контринсулярные эффекты кортикостероидов в условиях дефицита инсулина.

Повышенная чувствительность к действию химического диабетогена аллоксана может формироваться на основе постстрессорного снижения чувствительности к глюкокортикоидам. В свою очередь, десенситизация к глюкокортикоидам сформировалась во многом в результате чрезмерной активации ГГАС. Пожалуй, самое главное заключается в том, что постстрессорное усугубление гипергликемизирующего действия аллоксана обусловлено гепатотропными эффектами хронического стресса. Анксиогенный стресс сам по себе вызывал определённые печёночные расстройства, о чём свидетельствуют и наблюдаемые нарушения липид -синтезирующей функции печени. Вероятно, снижение содержания молекулярных продуктов ПОЛ в сыворотке крови отражает нарушение синтеза печенью пре бета липопротеидов, а также альфа липопротеидов. Так как несмотря на повышенный уровень IL-6 уровень церулоплазмина снижается через 72 часа после завершения последнего стрессорного эпизода имеется основания предполагать, что десенситизация к провоспалительным цитокинам не ограничивается первыми сутками после завершения стрессирования, а имеет пролонгированный характер. К сожалению, до сих пор неизвестны механизмы постстрессорной десенситизации к провоспалительным цитокинам. Мы считаем, что дальнейшие исследования в этом направлении позволяют понять механизмы гепатотропных и панкреотропных эффектов анксиогенного стресса.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Синицкий, Антон Иванович, Челябинск

1. Абрамов, В.В. Принципы нейроиммунологии в эксперименте и клинике / В.В. Абрамов // Иммунология. 1995. - № 6. - С. 11-15.

2. Автандилов, Г.Г. Введение в количественную патологическую морфометрию / Г.Г. Автандилов М.: Медицина, 1980. - 216 с.

3. Агаджанян, Н.А. Функции организма в условиях гипоксии и гиперкапнии / Н.А. Агаджанян, А.И. Ефимов. М.: Медицина, 1986.-271 с.

4. Акмаев, И.Г. Нейро-иммуно-эндокринология / И.Г. Акмаев // Патология органов и систем. Типовые патологические процессы: материалы 1 Рос. конгр. по патофизиологии. М.: Изд-во РГМУ, 1996.-С. 169.

5. Апьперн, Д.Е. Воспаление (вопросы патогенеза) / Д.Е. Апьперн. -М.: Медгиз, 1959.-268 с.

6. Анохин, П.К. Философские аспекты теории функциональных систем / П.К Анохин // Взаимосвязь философской и медицинской наук: сб. науч. тр. 1 Моск. мед. ин-та. М.,1972. - С.27-46.

7. Арчаков, А.И. Микросомальное окисление / А.И. Арчаков. М.: Наука, 1975.-326 с.

8. Балаболкин, М.И. Сахарный диабет / М.И. Балаболкин. М.: Медицина, 1994. - 383 с.

9. Балашов, Ю.Г. Флюорометрический микрометод определения кортикостероидов: сравнение с другими методами / Ю.Г. Балашов // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. № 12. -С.280-283.

10. Барабой, В.А. Роль перекисного окисления в механизме стресса / В.А. Барабой // Физиол. журн. 1989. - № 5. - С. 85- 97.

11. Перекисное окисление и стресс / В.А Барабой, И.И Брехман, В.Г Голотин и др.; под ред. В.И. Чумакова. СПб.: Наука, 1992. -148 с.

12. Экспериментальный сахарный диабет. Роль в клинической диабетологии / В.Г.Баранов, И.М. Соколоверова, Э.Г. Гаспарян и др.; под ред. В.Г. Баранова. П.: Наука, 1983 - 238 с. Описание начинается с назв. кн., поменять алф.

13. Белова, Л.А. Биохимия процесса воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов / Л.А. Белова // Биохимия. 1997. -Т. 62, № 6. - С. 659-669.

14. Биленко, М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. Молекулярные механизмы, пути предупреждения и лечения / М.В. Биленко. М.: Медицина, 1989. - 368 с.

15. Васильев, Н.В. О связи иммуногенеза с общим адаптационным синдромом / Н.В. Васильев, Т.И. Коляда, Т.Е.Суслов // Системные и клеточные механизмы адаптации к действию повреждающих факторов. Челябинск, 1991. - С. 82-83.

16. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. -М.: Наука, 1972.-252 с.

17. Вовк, С.В. Влияние иммобилизации при блокаде адренорецепторов на микросомальный аппарат нейтрофилов у кроликов / С.В.Вовк, Н.В. Лунина // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. 1994. - Т. 80, № 10. - С. 89-93.

18. Волчегорский, И.А. Модифицированный метод спектрофотометрического определения активности моноаминоксидазы с бензиламином в качестве субстрата / И.А. Волчегорский, Н.А.Скобелева, Р.И. Лифшиц // Вопр. мед. химии.- 1991. Т. 37, Вып. 1. - С. 86-89.

19. Волчегорский, И.А. Неспецифическая регуляция адаптивных процессов при термических ожогах и некоторых другихэкстремальных состояниях: дис. Д-ра мед. наук / И.А.

20. Волчегорский. Челябинск, 1993. - 609 с.

21. Волчегорский, И.А. Гипогликемизирующий эффект стрессорных воздействий и их использование для профилактики сахарного диабета в эксперименте / И.А. Волчегорский, В.Э. Цейликман, О.Л. Колесников и др. // Пробл. эндокринологии. -1995. № 6. -С. 38-42.

22. Волчегорский, И.А. Роль иммунной системы в выборе адаптационной стратегии организма / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников, В.Э. Цейликман. Челябинск, 1998.- 70 с.

23. Волчегорский, И.А. Влияние «когнитивного» и «некогнитивного» воздействий на чувствительность к стрессорным гормонам и выбор адаптационной стратегии / И.А. Волчегорский, О.Л. Колесников, В.Э. Цейликман // Известия РАН. 1999. - № 2. -С.201-210.

24. Волчегорский, И.А. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптационных реакций организма / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников, В.Э. Цейликман.- Челябинск, 2000. -167 с.

25. Гаркави, Л.Х. Адаптационные реакции и резистёнтность организма / Л.Х. Гаркави, Е.Б. Квакина, М.А. Уколова. Ростов н/Д, 1977.-120 с.

26. Голиков, П.П. Рецепторные механизмы глюкокортикоидного эффекта / П.П. Голиков М.: Медицина, 1988. - 284 с.

27. Голиков, П.П. Регуляция функции глюкокортикоидных рецепторов эндогенными и экзогенными факторами / П.П. Голиков // Патология органов и систем. Типовые патологические процессы: материалы 1 Рос. конгр. по патофизиологии. М.: Изд-воРГМУ, 1996.-С. 173.

28. Горизонтов, П.Д. Стресс. Система крови в механизме гомеостаза. Стресс и болезни / П.Д. Горизонтов // Гомеостаз / под ред. П.Д. Горизонтова. М.: Медицина, 1976. - С. 428-458.

29. Горизонтов, П.Д. Стресс и система крови / П.Д. Горизонтов, О.И.Белоусова, М.И. Федотова. М.: Медицина, 1983. - 240 с.

30. Горкин, В.З. Аминоксидазы и их значение в медицине / В.З. Горкин. -М.: Медицина, 1981.-336 с.

31. Горкин, В.З. Система аминоксидаз: современные достижения в исследовании природы, функции и их нарушении / В.З. Горкин, Л.Н. Овчинникова // Вопр. мед. химии. 1993. - № 4. - С. 2-10.

32. Грек, О.Р. Метаболизм ксенобиотиков у крыс с различной устойчивостью к гипоксии / О.Р. Грек, Т.А. Ешкина, В.М. Колпаков и др. // Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция : материалы Всерос. конф. М., 1997. - С. 30-31.

33. Гриневич, В. В. Иерархическая взаимосвязь между органами гипоталамо гипофизарно - адреналовой системы при воспалении / В. В. Гриневич, Е.А. Поскребышева, Н. А. Савелов и др. // Успехи физиол. наук. - 1999. - № 4. - С. 50 - 66.

34. Громыхина, Н.Ю. Эритропоэтин-зависимые механизмы действия регуляторных факторов макрофагального происхождения на кроветворную и иммунную систему /Н.Ю. Громыхина, В.А. Козлов // Иммунология. 1997. - № 3. - С. 1721.

35. Гублер, Е.В. Применение критериев непараметрической статистики для оценки различий двух групп наблюдений в медико-биологических исследованиях / Е.В. Гублер, А.А. Генкин. М.: Медицина, 1969. - 31 с.

36. Гублер, Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавание патологических процессов / Е.В. Гублер. Л.: Медицина, 1978. -296 с.

37. Гусев, Е.Ю. Системное воспаление как типовой патологический процесс / Е.Ю. Гусев, Л.Н.Юрченко // Вестн. Урал. мед. акад. науки. -2004. № 4. - С. 17-20.

38. Гущин, Г.В. Адренергические и холинергические механизмы регуляции функций лимфоидных клеток / Г.В.Гущин // Иммунофизиология / под ред. Е.А. Корневой. СПб.: Наука, 1993.-С. 243-277.

39. Девяткина, Т.А. Фармакологическая активность мексидола при стрессорных воздействиях /Т.А.Девяткина, Р.В. Луценко, Е.М. Важничая // Эксперим. и клинич. фармакология 2003. - № 3. -С. 56-59.

40. Дубинина, Е.Е. Характеристика внеклеточной супероксиддисмутазы / Е.Е.Дубинина // Вопр. мед. химии. -1995.-Т. 41,№ 6.-С.8-11.

41. Дубинина, Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса / Е.Е. Дубиниа // Вопр. мед. химии. -2001. — Т.47, №6.- С. 561-581.

42. Ефимов, А.С. Некоторые итоги и перспективы исследования в диабетологии / А.С. Ефимов // Пробл. эндокринологии. 1988. - № 3. - С. 8-14.

43. Зайчик, А.Ш. Основы общей патологии / А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов. СПб., 1999.-487 с.

44. Иванов, В.В. Перекисное окисление липидов в печени крыс при аллоксановом диабете / В.В.Иванов, И.В. Васенева, Н.А.

45. Уфимцев // Пробл. эндокринологии. 1984. - № 1- С. 70-73.

46. Камышников, B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. / B.C. Камышников. 5-е изд. -Минск, 2000.

47. Карузина, И.И. Самоинактивация цитохрома Р450 в каталитическом цикле / И.И. Г.И. Карузина, А.И. Арчаков // Вестн. РАМН. 1995. - № 2. - С. 17-29.

48. Касаткина, Э.П. Современные тенденции в терапии инсулинзависимой формы сахарного диабета / Э.П. Касаткина // Пробл. эндокринологии. 1986. - № 1. - С. 42-45.

49. Климов, А.Н. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения / А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева. СПб., 1999. - 348 с.

50. Кнолл, Дж. История депренила первого селективного ингибитора моноаминооксидазы типа Б / Дж. Кнолл // Вопр. мед. химии. -1997. - № 6. - С. 482-483.

51. Козлов, В.А. Некоторые аспекты проблемы цитокинов / В.А.Козлов// Цитокины и воспаление. -2002 № 1. - С. 5-8.

52. Колесник, Ю.М. Модификация резистентности к диабетогенным факторам под влиянием хронического стресса и адаптации к периодической гипоксии / Ю.М. Колесник, М.А. Орловский, М.А. Калиниченко и др. // Запорож. мед. журн. -2005. -№3,- С. 21-26.

53. Колесников, O.J1. Влияние неспецифической иммуностимуляции на стресс-реактивность и выбор адаптационной стратегии организма: дис. . д-ра мед. наук / О.Л. Колесников. Челябинск, 1998. -257 с.

54. Колосова, Н.Г. Содержание токоферола и перекисное окисление липидов в тканях крыс Вистар в динамике адаптации к холоду / Н.Г.Колосова, А.Р. Колпаков, Л.Е. Панин // Вопр. мед.химии. 1995. - Т.41, № 6. - С.16-19.

55. Кополадзе, Р.А. Регламентация экспериментов на животных этика, законодательство, альтернативы / Р.А.Кополадзе // Успехи физиол. наук. - 1998 - № 4. - С. 74-93.

56. Королюк, М.А. Метод определения активности каталазы / М.А Королюк, Л.И.Иванова, И.Г. Майорова //Лаб. дело. 1988.-№ 1. - С.16-19.

57. Косицкий, Г. И. Креаторная связь и её значение в организации многоклеточных систем / Г.И. Косицкий, Г.Г. Ревич. -М.: Наука, 1975.-123 с.

58. Кржечковская, В. В. Изоформы цитохрома Р450, метаболизирующие полиненасыщенные жирные кислоты / В.В. Кржечковская, Г.А. Желтухина, В.Е. Небольсин и др. // Успехи соврем, биологии. 2002. - Т. 122, № 4. - С. 390 -400.

59. Кржечковская, В.В. Система цитохрома Р450 в печени и резистентность организма к сенсибилизирующим воздействиям: автореф. дис. . д-ра мед. наук / В.В. Кржечковская. М., 2004. -37 с.

60. Кулинский, В.И. Две адаптационные стратегии в неблагоприятных условиях резистентная и толерантная. Роль гормонов и рецепторов / В.И Кулинский, И.А. Ольховский // Успехи соврем, биологии. - 1992. - № 6. - С. 697-714.

61. Кураева, Т.Л. Иммунопатогенез и иммунотерапия сахарного диабета типа 1 / Т.Л. Кураева // Пробл. эндокринологии. 1991. -Т. 37, № 1. - С. 63-67.

62. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М., 1990. - 352 с.

63. Лесникова, М.П. Сочетанное действие глюкокортикоидных гормонов и интерлейкина 1 на развитие иммунного ответа /М.П. Лесникова, Е.Г.Рыбакина, И.А. Козинец, Э.К. Шхинек // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1990. - № 2. - С. 34- 37.

64. Лукьянова, Л.Д. Кислородзавитсимые процессы в клетке и её функциональное состояние / Л.Д Лукьянова, Б.С. Балмуханов, А.Т. Уголев. М.: Наука, 1982. - 300 с.

65. Лукьянова, Л.Д. Современные проблемы гипоксии / Л.Д. Лукьянова // Вестн. РАМН. 2000. - № 4. - С. 3-12.

66. Ляхович, В.В. Структурные аспекты биохимии монооксигеназ / В.В. Ляхович, И.Б. Цырлов. Новосибирск: Наука, 1978.-231 с.

67. Маянский, Д.Н. Хроническое воспаление / Д.Н. Маянский. -М.: Медицина, 1991.-270 с.

68. Меерсон, Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика / Ф.З. Меерсон. М.: Наука, 1981.-278 с.

69. Меерсон, Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам / Ф.З. Меерсон, М.Г. Пшенникова. М.: Медицина, 1988. -256 с.

70. Меерсон, Ф.З. Концепция долговременной адаптации / Ф.З. Меерсон. М.: Дело, 1993. - 137 с.

71. Меерсон, Ф.З. Развитие суперрезистентности к гипоксической гипоксии под влиянием адаптации к кратковременным стрессорным воздействиям / Ф.З. Меерсон, Т.Г. Миняйленко, В.П. Пожаров // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1993. - № 3. - С. 45-47.

72. Меерсон, Ф.З. Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца / Ф.З. Меерсон, И.Ю. Малышев. М.: Наука, 1993. - 158 с.

73. Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных // Ланималогия. 1993. - № 1. - С. 29.

74. Меньшикова, Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б Меньшикова, Н.С. Зенков // Успехи соврем, биологии. 1997.-Т. 117, №2.-С. 155-172.

75. Новиков, К.Н. Перекисное окисление липидов в гепатоцитах / К.Н.Новиков // Гепатоцит: функционально-метаболические свойства / под ред. Л.Д. Лукьяновой. М.: Наука, 1985. - С. 146170.

76. Ньюсхолм, Э. Регуляция метаболизма / Э. Ньюсхолм, К. Старт. М.: Мир, 1977. - 407 с.

77. Орловский, М.А. Закономерности формирования гипергликемии при экспериментальном сахарном диабете / М.А. Орловский // Патология. 2004. - Т.1, № 1.- С. 52-56.

78. Панин, Л.Е. Биохимические механизмы стресса / Л.Е. Панин. Новосибирск: Наука, 1983. - 232 с.

79. Панин, Л.Е. К механизму контринсулярного эффекта апопротеина В / Л.Е.Панин, Л.С. Останина, А.Р.Колпаков // Вопр. мед. химии. 1995. -Т. 41,№ 6. - С.12-16.

80. Панин, Л.Е. Синтез фрагментов инсулина и изучение их физико химических и иммунологических свойств / Л.Е.Панин, В.Ф.Тузиков, О.Н. Потеряева и др. // Биоорган, химия. - 1997. -Т. 23, № 12. - С.953-960.

81. Панин, Л.Е. Влияние глюкокортикоидов и липопротеинов высокой плотности на активность ядерного аппарата гепатоцитов / Л.Е. Панин, В.Ф. Максимов, И.М. Коростышевская // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1999. - Т. 128, № 12. - С. 650653.

82. Панин, Л.Е. Активация ядрышковой ДНК и биосинтезарибосом в гепатоцитах под влиянием глюкокортикоидов и липопротеинов высокой плотности / Л.Е.Панин, В.Ф.Максимов, И.М. Коростышевская // Цитология. 2000. - Т.42, № 5. - С.461-467.

83. Панин, Л.Е. Влияние тетрагидрокортизола на биосинтез белка в гепатоцитах / Л.Е.Панин, И.Ф. Усынин, А.В.Харьковский // Бюл. Эксперим. биологии и медицины. 2000. - Т. 129, №2,-С.171—173.

84. Панин, Л.Е. Структурно функциональные изменения в гепатоцитах и клетках Купфера при совместном действии глюкокортикоидов и липопротеинов низкой плотности / Л.Е. Панин, В.Ф. Максимов, О.М. Хощенко и др. // Цитология. - 2002Т. 44, № 12,-С. 1149-1155.

85. Панин, Л. Е. Структура сайтов взаимодействия ДНК эукариот с комплексами стероидный гормон аполипопротеин A-I / Л. Е. Панин, О. И. Гимаутдинова, П. А. Кузнецов и др. // Молекуляр. биология - 2007.- Т. 41, № 4. - С. 647-653.

86. Плацер, 3. Процессы переокисления липидов при повреждении и ожирении печени / 3. Плацер, М. Видлакова, Л. Кужела // Чехосл. мед. обозрение. 1970. - Т. 16, № 1. - С. 3041.

87. Подвигина, Т.Т. Закономерности реагирования гипофизарно-адренокортикальной системы на повторные стрессорные повреждения / Т.Т. Подвигина // Успехи физиол. наук. 1998. - Т. 29, № 1. - С. 11 -24.

88. Рыбакина, Е.Г. Интерлейкин 1 и его роль как регуляторного лейкопептида в механизмах развития защитных реакций организма // Иммунофизиология / под ред. Е.А. Корневой. СПб.: Наука, 1993. - С. 592-605.

89. Рыбакина, Е.Г. Трансдукция сигнала интерлейкина -1 в процессах взаимодействия нервной и иммунной систем организма / Е.Г. Рыбакина, Е.А. Корнева // Вестн. РАМН. 2005. -№ 7. - С. 3-9.

90. Сапин, М.Р. Иммунная система, стресс, иммунодефицит / М.Р. Сапин. М., 2000. - 184 с.

91. Селье, Г. Очерки об адаптационном синдроме / Г. Селье. М.: Медгиз, 1960.-254 с.

92. Сергеев, П.В. Механизмы взаимодействия глюкокортикоидов с клетками тимуса / П.В. Сергеев // Иммунофизиология / под ред. Е.А. Корневой. СПб.: Наука, 1993.-С. 510-523.

93. Сергеев, П.В. Рецепторы / П.В. Сергеев, Н.Л. Шимановский. М.: Медицина, 1987. - 397 с.

94. Сибиряк, С.В. Цитокины и микросомальное окисление / С.В. Сибиряк, С.А. Сергеева // Эксперим. и клинич. фармакология. 1998. - № 5. - С. 75-80.

95. Сибиряк, С.В. Цитокины как регуляторы цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. Теоретические и прикладные аспекты

96. С.В. Сибиряк // Цитокины и воспаление. 2003. - № 2. - С .1221.

97. Сибиряк, С.В. Цитохром Р450 и иммунная система / С.В. Сибиряк, В.А. Вахитов, Н.Н. Курчатова. Уфа, 2003. - 176 с.

98. Симбирцев, А.С. Взаимосвязь интерлейкина-1 и глюкокортикоидных гормонов в регуляции иммунного ответа / А.С. Симбирцев, А.Ю. Котов, Н.В. Пигарева II Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1993. - № 6. - С. 183-185.

99. Сквайерс, Р.Ф. Открытие форм моноаминоксидаз А и Б / Р.Ф. Сквайерс // Вопр. мед. химии. 1997. - Т. 43, № 6. - С. 433439.

100. Сосновский, А.С. Перекисное окисление липидов при эмоциональном стрессе у крыс. Корреляция с параметрами свободного поведения / А.С. Сосновский, М.А. Цветкова, И.П. Узунова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1992. -Т. 113, № 1.-С. 19-21.

101. Судаков, К. В. Новые акценты классической концепции стресса / К.В. Судаков // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1997.-Т. 123, № 2.-С. 124-131.

102. Твердохлиб, В.П. Предупреждение атерогенной дислипопротеидемии и повреждений печени при стрессе: автореф. дис. . д-ра мед. наук / В.П. Твердохлиб. М., 1989. -36 с.

103. Теппермен, Дж. Физиология обмена веществ и эндокринной системы / Дж. Теппермен, X. Теппермен. М.: Мир, 1989. - 656 с.

104. Филаретов, А.А. Принципы и механизмы регуляции гипофизарно-адренокортикальной системы / А.А. Филаретов. -Л.: Наука, 1987.-164 с.

105. Хочачка, П. Биохимическая адаптация / П. Хочачка, Дж. Сомеро. М.: Мир, 1988. - 568 с.

106. Чевари, С. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах / С.Чевари, И. Чаба, Й. Секей // Лаб. дело. 1985.-№ 11.-С. 678-681.

107. Цейликман, В.Э. Влияние повторных стрессорных воздействий на чувствительность организма к глюкокортикоидам и инсулину / В.Э. Цейликман, И.А. Волчегорский, О.Л. Колесников и др. // Пробл. эндокринологии. 1995 . - Т.41, № 1. - С. 34-36.

108. Шкурупий, В.А. Ультраструктура клеток печени при стрессе / В.А. Шкурупий. Новосибирск: Наука, 1989. - 143 с.

109. Шорин, Ю.П. Чувствительность животных к диабетогенному действию аллоксана при холодовой адаптации / Ю.П. Шорин, В.Г. Селятицкая, Г.И.Непомнящих и др. // Бюл. эксперим.биологии и медицины. 1984. - № 8. - С. 240-242.

110. Щербаков, В.М. Изоформы цитохрома Р-450 человека / В.М. Щербаков, А.В. Тихонов. М.,1995. - 140 с.

111. Adeghate, Е. L-arginine stimulates insulin secretion from the pancreas of normal and diabetic rats / E. Adeghate, A.S. Ponery, T. El-Sharkawy et al. // Amino Acids. 2001. - Vol. 21, № 2. - P. 205209.

112. Adeghate, E. Mechanism of ghrelin-evoked glucagon secretion from the pancreas of diabetic rats / E. Adeghate, H.Parvez // Neuro Endocrinol. Lett. -2002. Vol. 23, № 5-6. - P. 432-436.

113. Adeghate, E. The effect of diabetes mellitus on the morphology and physiology of monoamine oxidase in the pancreas / H. Parvez // Neurotoxicology. -2004. Vol. 25, № 1-2. - P. 167-173.

114. Aramata, S. Roles and Regulation transcription factor MafA in islet В cells / S. Aramata, S.L. Han, K. Kataoka // Endokrine J. -2007. - Vol. 54, № 5. - P. 659-666.

115. Arnush, M. Potential role of resident islet macrophage activation in the initiation of autoimmune diabetes / M. Arnush, A.L. Scarim, M.R. Heitmeier et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 160, № 6. - P. 2684-2691.

116. Aufan, N. Immunosupreession by glucucorticoids activity trouth induction of IkB synthesis / N. Aufan, J.A. Di Donato, C. Rossette // Science. -1995. Vol. 270. - P. 286-290.

117. Babaya, N. Susceptibility to streptozotocin-induced diabetes is mapped to mouse chromosome 11 / N. Babaya, H. Ikegami, T. Fujisawa et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -.2005. Vol. 328, № 1. - P. 158-164.

118. Baek, H.W. Pharmacokinetics of chlorzoxazone in rats with diabetes: Induction of CYP2E1 on 6-hydroxychlorzoxazone formation / H.W. Baek, S.K. Bae, M.G. Lee // J Pharm. Sci. 2006. - Vol. 95,11.-P. 2452-2462.

119. Bamberger, C.M. The glucocorticoid receptor and RU 486 in man / C.M. Bamberger, G.R. Chrousos // Steroid receptors and antihormones / ed. by G.R. Chrousos. N. Y.: New York Academy of Sciences, 1995. - P. 296 -310.

120. Berkenbosch, F. Corticotropin-realising factor producing neurons in the rat activated by interleukin-1 / F. Berkenbosch, A. Oers, A. Rey. // Science. 1987. - Vol. 238. - P. 524-536.

121. Bjelakovic, G. Glucocorticoids and oxidative stress / G. Bjelakovic, S. Beninati, D. Pavlovic // J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol.-2007.-Vol. 18, № 2. P. 115-127.

122. Carlo, P. Influence of culture conditions on monoamine oxidase A and В activity in rat astrocytes / P.Carlo, M. Del Rio, E. et al. // Cell Biochem. Funct. 1996. - Vol. 14, № 1. - P.19-25.

123. Carlo, P. Monoamine oxidase В expression is selectively regulated by dexamethasone in cultured rat astrocytes / P. Carlo, E. Violani, M. De-Rio et al. // Brain Res. 1996. - Vol. 711. - P. 175183.

124. Carvalho, V.F. Systemic anaphylaxis is prevented in alloxan-diabetic rats by a mechanism dependent on glucocorticoids / V.F. Carvalho, E.O. Barreto, B.L. Diaz// Eur. J. Pharmacol. -2003. Vol. 472, № 3.-P. 221-227.

125. Chan, O. Diabetes and the hypothalamo-pituitary-adrenal (HPA) axis. / O. Chan, K. Inouye, M.C. Riddell // Minerva Endocrinol. 2003. - Vol. 28, № 2. - P. 87-102.

126. Chang, P. Marked differences in the efficacy of post-insult gene therapy with catalase versus glutathione peroxidase / P. Chang, E. Cheng, S. Brooke et al. // Brain Res. 2005. - Vol. 23, № 1063(1). -P. 27-31.

127. Charron, M.J. Implicating PARP and NAD+ depletion in type I diabetes / M.J. Charron, S. Bonner-Weir // Nat. Med. 1999. - Vol. 5, № 3 - P.269-270.

128. Chover-Gonzalez, A.J. An ivestigation of the effects of interleukin—1 p on plasma arginine vasopressin in the rat: role of adrenal steroids / A.J. Chover-Gonzalez, S.L. Lightman, M.S. Harbuz // J. Endocrinol. 1994. - Vol. 142, № 2. - P. 361-366.

129. Contreras, P.C. Stereotyped behavior correlates better than ataxia with phenicyclydine-receptor interaction / P.C. Contreras, K.S. Rice, A.E Jacobson et al. // Eur. J. Pharmacol. 1986. - Vol. 121. -P. 9-18.

130. Dallman, M.F. Glucocorticoids and insulin both modulate caloric intake through actions on the brain. / M.F. Dallman, J.P. Warne, M.T. Foster et al. // J. Physiol. 2007. - Vol. 583, Pt. 2. - P. 431-436.

131. Dallman, M.F. Modulation of stress responses: how we cope with excess glucocorticoids / M.F. Dallman // Exp. Neurol. 2007. -Vol. 206.-P. 179-182.

132. Diabetes mellitus / WHO. Fact sheets. Revised. - 2002 - № 138.—3 p.

133. De Souza, E. Corticotropin-releasing factor and interleukin-1 receptors in the brain-endocrine-immune axis / E. De Souza; ed. by

134. C. River. N. Y.: New York Academy of Sciences, 1993. - P. 28- 35.

135. Eizirik, D.L. Differential sensitivity to beta-cell secretagogues in cultured rat pancreatic islets exposed to human interleukin-1 beta /

136. D.L. Eizirik, S. Sandler, A. Hallberg et al. // Endocrinology. 1989. -Vol. 125.- P.752-759.

137. Elitsur, Y. Neuropeptide Y (NPY) enhances proliferation of human colonic lamina propria lymphocytes / Y. Elitsur, G.D. Luk, M. Colberg et al. // Neuropeptides. 1994. - Vol.26, № 5. - P. 289-295.

138. Ferguson, D. Viral vector-mediated blockade of the endocrine stress-response modulates non-spatial memory / D. Ferguson, S. Lin, S. Rapolsky // Neurosci Lett. -2008. Vol. 437, № 1. - P. 1-4.

139. Flier, J.S. Adipsin: regulation and dysregulation in obesity and other metabolic states / J.S. Flier, B. Lowell, A. Napolitano et al. // Recent. Prog. Horm. Res. 1989. - Vol. 45. - P. 567-580.

140. Fujinaka, Y. Lactogens Promote Beta Cell Survival through JAK2/STAT5 Activation and Bcl-XL Upregulation / Y. Fujinaka, K. Takane, H. Yamashita et al // J. Biol. Chem. 2007. - Vol. 282. - P. 42.

141. Gajdosik, A. Streptozotocin-induced experimental diabetes in male Wistar rats / A. Gajdosik, A. Gajdosikova, M. Stefek et al. // Gen. Physiol. Biophys. 1999. - Vol. 18, Spec - P. 54-62.

142. Galigniana, M. D. Inhibition of glucocorticoid receptor binding by nitric oxide / M.D. Galigniana, G. Piwien-Pilipuk, J. Assreuy // Molec. Pharmacol. 1999. - Vol. 55, № 2. - P. 317 - 323.

143. Ghareeb, D.A. Vanadium improves brain acetylcholinesterase activity on early stage alloxan-diabetic rats / D.A. Ghareeb, H.M. Hussen // Neurosci. Lett. 2008. - Vol. 436, № 1. - P. 44-47.

144. Giannoukakis, N. Targeting autoimmunr diabetes with gene therapy / N. Giannoukakis, W.A. Rudert, P.D. Robbins et al. // Diabetes.— 1999,—Vol. 48, № 11.— P. 2107-2121.

145. Green, E.A. Tumor necrosis factor-alpha and the progression of diabetes in non-obese diabetic mice / E.A. Green, R.A. Flavell // Immunol. Rev. 1999. - Vol.169. - P.11-22.

146. Gu, D. Transgenic mice expressing IFN-gamma in pancreatic beta-cells are resistant to streptozotocin-induced diabetes / D. Gu,

147. M. Arnush, S.P. Sawyer et al. // Am. J. Physiol.— 1995,— Vol. 269, № 6.— P.E1089-E1094.

148. Heunks, L.M. PN. Free radicals in hypoxic rat diaphragm contractility: no role for xanthine oxidase / L.M. Heunks, H.A. Machiels, R. de Abreu et al. // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. -2001.-Vol. 281, № 6.-P. 1402-1412.

149. Hosokawa, M. Differential sensitivity of GLUT1- and GLUT2-expressing beta cells to streptozotocin / M. Hosokawa, W. Dolci, B. Thorens // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - Vol. 289, № 5. — P.1114-1117.

150. Katsnura, G. lnterleukin-1 beta increases prostaglandin E2 in rat astrocyte cultures: modulatory effect of neuropeptides / G.

151. Katsnura, P.E. Gottschall, R.R Dahl // Endocrinology. 1989. - Vol. 124, № 6. - P. 3125-3128.

152. Kawamori, D. Oxidative Stress Induces Nucleo-Cytoplasmic Translocation of Pancreatic Transcription Factor PDX-1 Through Activation of c-Jun NH2-terminal Kinase / D. Kawamori, Y. Kajimoto, H.Kaneto et al. // Diabetes. 2003. - Vol. 52. - P. 2896-2904.

153. Kim, Y.C. Effect of CYP3A1(23) induction on clarithromycin pharmacokinetics in rats with diabetes mellitus. / Y.C. Kim , J.H. Lee,

154. H. Kim et al. // Antimicrob. Agents Chemother 2005. - Vol. 49, №6. P. 2528-2532.

155. Kim, Y.C. Pharmacokinetics of diclofenac in rat model of diabetes mellitus induced by alloxan or steptozotocin / Y.C. Kim, E.Y. Oh , S.H. Kim // Biopharm. Drug Dispos. 2006. - Vol. 27, № 2. - P. 85-92.

156. Kvetnansky, R. Adrenal and urinary catecholamines in rats during adaptation to repeated immobilization stress / R. Kvetnansky, L. Mikulaj // Endocrinol. 1970. - Vol. 87. - P. 738-745.

157. Kvetnansky, R. Elevation of adrenal tyrosine hydroxylase and phenylethanolamine-N-methyl transferase by repeated immobilization of rats / R. Kvetnansky, V.K. Weise, I.J. Kopin // Endocrinology. 1970. - Vol. 87, № 4. - P. 744-749.

158. Lee, E.Y. Blockade of Oxidative Stress by Vitamin С Ameliorates Albuminuria and Renal Sclerosis in Experimental Diabetic Rats / E. Y. Lee, M.Y.Lee, S. W. Hong et al. // Yonsei Med. J. 2007. - Vol. 48, № 5. - P. 847-855.

159. Lee, J.Y. Degradation products of streptozotocin do not induce hyperglycemia in rats / J.Y. Lee, M.J. Kim, C.K. Moon et al. // Biochem. Pharmacol. 1993.- Vol. 46, № 11.- P. 2111 -2113.

160. Lee, T.N. Alloxan is an inhibitor of O-GlcNAc-selective N-acetyl-beta-D-glucosaminidase / T.N. Lee, W.E. Alborn, M.D. Knierman et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. - Vol. 350, № 4.-P. 1038-1943.

161. Lenzen, S. The mechanisms of alloxan- and streptozotocin-induced diabetes / S. Lenzen // Diabetologia. 2008. - Vol. 51, № 2. -P. 216-226.

162. Lightman, A. CRF mRNA in normal and stress conditions / A. Lightman, M. Harbuz, R. Knigt et al. N. Y.: New York Academy of Sciences, 19. - P.421-425.

163. Litman, R.S. Levels of consciousness and ventilatory parameters in young children during sedation with oral midazolam and nitrous oxide / R.S. Litman, R.J. Berkowitz, D.S. Ward // Arch. Pediatr. Adolesc. Med. 1996. - Vol. 150, № 7. - P.671-675.

164. Lyon, M.F. Gene activation in the X-chromosome of the mouse (Mus. musculus L) / M.F. Lyon // Nature. 1961. - Vol.190. - P.372-373.

165. Masutani, M. Poly(ADP-ribose) polymerase gene disruption conferred mice resistant to streptozotocin-induced diabetes / M. Masutani, H. Suzuki, N. Kamada et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1999. Vol. 96. - P. 2301-2304.

166. Minami, M. Immobilization stress induces interleukin-1 beta mRNA in the rat hypothalamus / M. Minami, Y. Kuraishi, T.

167. Yamaguchi et al. // Neurosci. Lett. 1991. - Vol. 123. - P. 254-256.

168. Miranda, M. CR-6 protects glutathione peroxidase activity in experimental diabetes / M. Miranda, M. Muriach, I. Almansa // Free Radic. Biol. Med. 2007. - Vol. 43, № 11. - P. 1494-1498.

169. Nicotra, A. Monoamine oxidase expression during development and aging / A. Nicotra, F. Pierucci, H. Parvez et al. // Neurotoxicology. 2004. - Vol. 25, № 1-2. - P. 155-165.

170. Okabayashi, Y. Increased beta-cell secretory responsiveness to ceruletide and TPA in streptozocin-induced mildly diabetic rats / Y. Okabayashi, M. Otsuki, A. Ohki et al. // Diabetes. 1989. - Vol. 38, № 8.-P. 10420-1047.

171. Owu, D.U. Vitamin С improves basal metabolic rate and lipid profi le in alloxan-induced diabetes mellitus in rats / D.U. Owu, A.B. Antai, К. H. Udofia // J. Biosci. 2006. - Vol. 31, № 5. - P. 575-579.

172. O'Reilly, L.A. Alpha-cell neogenesis in an animal model of IDDM / L.A. O'Reilly, D. Gu, N. Sarvetnick et al. // Diabetes.- 1997-Vol. 46. P.4599-4606.

173. Paik, S.G. Induction of insulin-dependent diabetes by streptozotocin. Inhibition by estrogens and potentiation by androgens / S.G. Paik, M.A. Michelis, Y.T. Kim et al. // Diabetes. 1982. -Vol.31, № 8.-P. 724-729.

174. Paredes, S.D. Altered circadian rhythms of corticosterone, melatonin, and phagocytic activity in response to stress in rats / S.D. Paredes, S. Sanchez, H. Parvez et al. // Neuro Endocrinol. Lett. -2007. Vol. 28, № 4. - P. 489-495.

175. Pavana, P. Antihyperglycemic and antihyperlipidemic effects of Tephrosia purpurea leaf extract in streptozotocin induced diabetic rats / P.Pavana, S.Manoharan, G.L. Renju et al. // J. Environ. Biol. -2007. Vol. 28, № 4. - P. 833-837.

176. Parvez, H. The effects of metopirone and adrenalectomy on the regulation of the enzymes monoamine oxidase and catechol-O-methyl transferase in different brain regions / H. Parvez, S. Parvez // J. Neurochem. 1973.-Vol. 20. - P. 1011-1019.

177. Peschke, E. Melatonin, endocrine pancreas and diabetes / E. Peschke // J. Pineal Res. 2008. - Vol. 44. - P. 26-40.

178. Puah, J.A. Insulinotropic effect of ovarian steroid hormones in streptozotocin diabetic female mice / J.A. Puah, C.J. Bailey // Horm. Metab. Res.-1985.-Vol. 17, № 4. P. 216-218.

179. Rabinovitch, A. An update on cytokines in the pathogenesis ofinsulin-dependent diabetes-mellitus // Diabet Met. 1998. - Vol. 14.- P.129-151.

180. Rajagopal, K. Antihyperglycaemic and antihyperlipidaemic effects of Nymphaea stellata in alloxan-induced diabetic rats / K. Rajagopal, K. Sasikala // Singapore Med. J. 2008. - Vol. 49, № 2. -P. 137-141.

181. Ranshoff, R.M. Cytokines and the CNS / R. Ranshoff, E. Benveniste. Heidelberg: Springer-Verlag, 1996. - 368 p.

182. Sternberg, E.M. Emotions and disease: from balance of humors to balance of molecules / E.M.Sternberg. // Nature Medicine. 1997. -Vol. 3, № 3.-P. 264-267.

183. Raza, H. Modulation of xenobiotic metabolism and oxidative stress in chronic streptozotocin-induced diabetic rats fed with Momordica charantia fruit extract / H. Raza, I. Ahmed, A. John et al. // J. Biochem. Toxicol. -2000. Vol. 14. - P. 131-139.

184. Ribeiro, C. Diabetes evolution in rats after neonatal treatmentwith alloxan / С. Ribeiro, C.A. de Oliveira, E. Luciano et al. // Res. Commun. Mol. Pathol. Pharmacol. 2005. - Vol. 29-46. - P. 117118.

185. Rieusset, J. Suppressor of Cytokine Signaling 3 expression and insuline resistance in skeletal muscule of obese and type 2 of diabet patience / J. Rieusset, K. Bouzakri, E. Chevillote // Diabetes. -2004. Vol. 53, № 9. - P. 2232-2241.

186. Reddy, S. Age-dependent sensitivity to streptozotocin of pancreatic islets isolated from female NOD mice / S. Reddy, S. Sandler//Autoimmunity. 1995. - Vol. 22, № 2. - P.121-126.

187. Sapolsky, R. How do glucocorticoids influence stress responses? Integrating permissive, suppressive,stimulatory, and preparative actions / R. Sapolsky, M. Romero, A. Munck // Endocrine Revies .- 2000. № 1. - P. 55-82.

188. Sheinman, R.I. Role of transcriptional activation of IkB in mediation of immunosupression of glucocorticoids / R.I. Sheinman, P.C. Cogswell, A.K. Lofquist et al. // Science. Vol. 270. - P. 283286.

189. Shepherd, J. Genotoxicity of pancreatic chemical carcinogens to propagable cultured normal pancreatic epithelial cells / J.

190. Shepherd, M.-S. Tsao, W.P. Duguid // Exp. Mol. Pathol. 1990. -Vol. 53, № 3.- P.203-210.

191. Shlagherike, R. Glucocorticoid receptors in rheumatoid arthritis / R. Shlagherike, E. Korney, J. Wollenaupt et al. // Arthrits Rheum. -1992. Vol. 35. - P. 740-744.

192. Shlechte, J. Regulation of glucocorticoid receptor in human lymphocytes / J. Shlechte, B. Ginsberg, B. Sherman // Steroid Biochem. 1984. - Vol. 16. - P. 69-74.

193. Simonsson, E. Potentiated beta-cell response to non-glucose stimuli in insulin-resistant C57BL/6J mice / E. Simonsson, B. Ahreacute // Eur. J. Pharm. 1998. - Vol. 350. - P.243-250.

194. Stevens, R.B. Insulin down-regulates the inducible nitric oxide synthase pathway: nitric oxide as cause and effect of diabetes? / R.B. Stevens, D.E. Sutherland, J.D. Ansite et al. // J. Immunol. 1997. -Vol. 159, № 11,-P. 5329-2335.

195. Toyoda, H. Contribution of T cells to the development of autoimmune diabetes in the NOD mouse model / H. Toyoda, B. Formby // Bioessays 1998.-Vol. 20, № 9.- P.750-757.

196. Turk, J. Biochemical Evidence for Nitric Oxide Formation from Streptozotocin in Isolated Pancreatic Islets / J. Turk, J.A. Corbett, S. Ramanadham et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. -197, № 3.-P.1458-1464.

197. Warne, J.P. Stress, diet and abdominal obesity: Y? / J.P. Warne, M.F. Dallman // Nat. Med. 2007. - Vol. 13, № 7. - P. 781.

198. Wright, J.R. Streptozotocin Dose-Response Curve in Tilapia, a Glucose-Responsive Teleost Fish / J.R. Wright, C. Abraham, B.C. Dickson et al. // Gen. Сотр. Endocrinol 1999. - Vol. 114, № 3. -P.413-440.

199. Yamamoto, H. Streptozotocin and alloxan induce DNA strand breaks and poly(ADP-ribose) synthetase in pancreatic islets / H. Yamamoto, Y. Uchigata, H. Okamoto // Nature. 1981. - Vol. 294. -P. 284-286.

200. Yang, H. Human beta-cells are exceedingly resistant to treptozotocin in vivo / H. Yang, J.R Wright // Endocrinology. 2002. -143, № 7.-P. 2491-2495.

201. Zhang, J. Protective effect of endothelial nitric oxide synthase against induction of chemically-induced diabetes in mice / J. Zhang, S. Kawashima, M. Yokoyama, et al.// Nitric Oxide. 2007. - Vol. 17, № 2.

202. Zhu, X.P. Improvement of glucose tolerance with immunomodulators on type 2 diabetic animals / X.P. Zhu, J. Satoh, G. Muto et al. // Biotherapy. 1996. - Vol. 9, № 4. - P. 189-197.;1. БЛАГОДАРНОСТИ: /

Информация о работе

Синицкий, Антон Иванович
кандидата медицинских наук
Челябинск, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Влияние анксиогенного стресса на аллоксанзависимые изменения гликемии и интенсивность перекисного окисления липидов во внутренних органах - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы