Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Видовой состав возбудителей альтернариоза пасленовых культур на территории России

ВАК РФ 03.02.12, Микология

Автореферат диссертации по теме "Видовой состав возбудителей альтернариоза пасленовых культур на территории России"

На правах рукописи

Орина Александра Станиславовна

ВИДОВОЙ СОСТАВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ АЛЬТЕРНАРИОЗА ПАСЛЕНОВЫХ КУЛЬТУР НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ

Шифр и наименование специальности: 03.02.12 - Микология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 6 июн 2011

Са нкт-Петербург 2011

4850661

4850661

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЗР Россельхо-закадемии)

Научный руководитель:

академик РАСХН, доктор биологических наук, профессор Левитин Марк Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Коваленко Александр Елисеевич

доктор биологических наук, доцент Власов Дмитрий Юрьевич

Ведущая организация:

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Защита состоится «30» июня 2011 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006.015.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений по адресу: 196608, Санкт-Петербург, Пушкин, шоссе Подбельского, дом 3, факс (812)470-51-10, e-mail: vizrspb@mail333.corn, web-сайт: vizrspb.narod.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института защиты растений.

Автореферат разослан «25» мая 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Представители рода Alternaría широко распространены в природе и встречаются на разнообразных субстратах. Многие виды являются возбудителями заболеваний растений, в т.ч. важных сельскохозяйственных культур из семейства пасленовых: картофеля, томата, баклажана, перца и табака. Альтернариоз поражает листья, стебли, клубни и плоды и обладает высокой вредоносностью. Потери урожая картофеля составляют 10-50% (Дорожкин и др., 1973; Воловик, Литун, 1975; Иванюк и др., 2003), потери урожая томатов могут достигать 78%-90% (Сайчук, 1989; Grogan et al., 1975; Rotem, 1994; Chaerani, Voorrips, 2006).

В систематике и номенклатуре рода Alternaría существует множество проблем. В отечественной литературе долгое время поддерживалось и встречается до сих пор мнение о существовании двух самостоятельных заболеваний: альтернариоза и макроспориоза, вызываемых Alternaría solani Sorauer и Macrosporium solani Ellis et Martin соответственно (Горденко, Абросимова, 1971; Дорожкин и др. 1973; Анненков, 1987), хотя эти видовые эпитеты были признаны синонимами в середине XX века (Neergaard, 1945; Ellis, 1971). Кроме того, в работах прикладного характера, связанных с Alternaría, часто можно обнаружить результаты неточной идентификации: исследователи определяют вид возбудителя на основе малоинформативных культуральных и морфологических признаков или оценивая только симптомы заболевания. Такое положение порождает заблуждения о реальном видовом составе возбудителей, их специализации и распространенности.

В последние годы была проведена таксономическая ревизия рода Alternaría и было описано много новых видов, в т.ч. встречающихся на пасленовых. В настоящий момент систематики считают, что с картофелем и томатом консортивно связаны 14 видов Alternaría (Simmons, 1999, 2000, 2007). Известно, что разные виды Alternaría могут существенно отличаться по физиологическим, экологическим свойствам и хозяйственному значению. Однако в России анализ видового состава возбудителей альтернариоза пасленовых с учетом современных таксономических концепций почти не проводился.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - инвентаризация видового состава возбудителей альтернариоза пасленовых культур в России и анализ разнообразия видов Alternaría по комплексу морфологических признаков, патогенности и молекулярным маркерам.

В задачи исследований входило:

1. Описание микро- и макроморфологии изолятов Alternaría.

2. Определение видового состава грибов рода Alternaría, ассоциированных с культурными растениями семейства пасленовых.

3. Усовершенствование диагностики возбудителей альтернариоза с использованием молекулярно-генетических методов. Подбор ДНК-маркеров для идентификации разных видов Alternaría.

4. Молекулярно-генетический анализ видового и внутривидового разнообразия крупноспоровых видов Alternaría, доминирующих на картофеле и томатах.

5. Оценка патогенности и специализации доминирующих видов-возбудителей альтернариоза пасленовых культур.

Научная новизна. Впервые в России на обширном материале различного географического происхождения и согласно современным представлениям о систематике рода проведена идентификация видов Alternaría, ассоциированных с пасленовыми культурами. Установлены границы ареалов видов на территории России. Из шести обнаруженных видов два идентифицированы в России впервые: A. arborescens E.G.Simmons и A. tomatophila E.G.Simmons.

Впервые проведен детальный анализ разнообразия крупноспоровых видов Alternaría на картофеле и томате по комплексу морфологических признаков, агрессивности и молекулярным маркерам.

Впервые изучена роль мелкоспоровых видов Alternaría в развитии заболевания. Установлено, кто при совместном заражении с патогенным видом Alternaría мелкоспоровые виды значительно усиливают развитие некрозов.

Практическая значимость. Создана коллекция штаммов Alternaría с пасленовых культур различного происхождения (467 штаммов). Сконструирована пара праймеров AslR/AslF для идентификации комплекса видов 'A. solaní'. Усовершенствован метод молекулярной диагностики альтернариоза пасленовых культур, который позволяет в 90% случаев обнаружить и идентифицировать возбудителей альтернариоза непосредственно в растительной ткани.

Апробация работы. Результаты исследований обсуждались на ежегодных методических комиссиях ГНУ ВИЗР Россельхозакадемии по аттестации аспирантов (Санкт-Петербург, 2008-2011), а также были представлены на конференциях: Конференция профессорско-преподавательского состава Санкт-Петербургского государственного Аграрного Университета «Обеспечение развития АПК в условиях реформирования» (Санкт-Петербург, 2009); V Международная конференция «Изучение грибов в биогеоценозах» (Пермь, 2009); Всероссийская научно-практическая конференция «Современные иммунологические исследования, их роль в создании новых сортов и интенсификации растениеводства» (Голицино, 2009); IV Региональная молодежная экологическая конференция «Экологическая школа в Петергофе -

наукограде Российской Федерации»: «Биоразнообразие и биоиндикация в естественных и трансформированных экосистемах Северозападного региона» (Санкт-Петербург, 2009); Научная конференция аспирантов и молодых ученых "Генетика и селекция" (Санкт-Петербург, 2010); Второй Междисциплинарный микологический форум (Москва, 2010); Всероссийская научная конференция «Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в агропромышленном комплексе России» (Москва, 2010).

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ: проекты № 07-04-00096 и № 09-04-13753-офи_ц; Правительства Санкт-Петербурга (комитета по науке и высшей школе): ПСП № 10506; фонда ООО "Технологии. Внедрение. Наука": проект № 12650.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ, из них 3 в изданиях, рекомендуемых ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов, списка литературы, 3 приложений, содержит 23 таблицы, 11 рисунков. Список библиографических источников включает 206 наименования, в том числе 159 на иностранных языках.

Место проведения работы. Научно-исследовательская работа проводилась в лаборатории микологии и фитопатологии ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института защиты растений (ВИЗР) в 2008-2011 гг.

Автор выражает искреннюю благодарность доктору Э. Симмонсу (США) за предоставленные штаммы, доктору биологических наук Н. В. Мироненко за помощь в проведении молекулярно-генетических исследований, кандидату биологических наук Ф. Б. Ганнибалу за общую методическую поддержку.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В главе приведены сведения о современном состоянии исследований по таксономии грибов рода Alternaría, встречающихся на пасленовых культурах. Представлены данные по распространенности отдельных видов, их патогенности и внутривидовому разнообразию.

Обобщена существующая информация по проблеме молекулярной диагностики альтернариоза и о подходах к изучение ■ взаимоотношений в па-топ (стеме Alternaría spp. ~ пасленовые культуры.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Материалом исследований являлись 293 образца листьев и плодов пасленовых растений (картофель, томат, перец, баклажан и декоративные культуры) с симптомами альтернариоза, собранных в 22 регионах России, в Белоруссии и Украине в 2008-2010 гг., а также штаммы грибов рода Alternaría из коллекции Э. Симмонса (США) и из коллекции лаборатории микологии и фитопатологии ВИЗР.

2.1 Изоляция грибов в чистую культуру. Для оценки зараженности растений и выделения чистых культур возбудителей было проанализировано по 5-7 отрезков листьев из каждого образца пасленовых с симптомами альтернариоза. Изоляцию грибов осуществляли во влажных камерах, помещая туда поверхностно-стерилизованный материал.

2.2 Идентификация и исследование макро- и микроморфологии изолятов. Для анализа микроморфологии изоляты культивировали на картофельно-морковном агаре (КМА) и агаризованной среде V4 (Михайлова и др., 2002) под люминесцентными лампами с соблюдением режима 16 часов «день» - 8 часов «ночь». Для описания культураль-ных свойств изоляты выращивали в темноте на среде Чапека и на среде YES с дрожжевым экстрактом и сахарозой (Samson et al., 2000). Идентификацию проводили по определителю Э. Симмонса (Simmons, 2007).

2.3 Молекулярно-генетические методы. Для получения мицелия колонии грибов выращивали на среде Чапека. Экстракцию ДНК из воздушного мицелия проводили с использованием экстрагирующего буфера, содержащего цетилтриметиламмония бромид (Ausubel et al, 2002).

Для выделения ДНК грибов из пораженных растительных тканей применяли тот же метод с добавлением в буфер поливинилпирроли-дона (Cubero et al., 1999).

Специфичные к комплексу видов 'A. solani' праймеры были сконструированы на основе 10 секвенированных нуклеотидных последовательностей гена глицероальдегид-3-фосфатдегидрогеназы (gpd), размещенных в базе данных Генбанка (ÑCBI-GenBank, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/). Дизайн ПЦР-праймеров осуществляли с использованием online программы Primer3 (Rozen, Skaletsky, 1998). Специфичность разработанных праймеров была определена с использованием ДНК 68 изолятов разных видов Alternaría и представителей родственных родов.

Для идентификации видового состава возбудителей альтернариоза в растительной ткани проводили ПЦР с видоспецифичными прайме-рами AAF2/AAR3 для комплекса видов 'A. alternata' (Konstantinova et al., 2002), Ain3F/Ain4R для комплекса видов 'A. infectoria' (Gannibal,

Yli-Mattila, 2007) и разработанной нами парой праймеров AslR/AslF для комплекса видов 'A. solani'.

Уточнение таксономии и определение внутривидового разнообразия комплекса видов 'А. solani' проводили методами UP-PCR праймерами L45, 15/19, AS4 и ASlöinv (Булат и др., 1995; Lübeck et al., 1999; Bulat et al., 2000) и RAPD-PCR с праймером AlO.

Разделение смеси ПЦР продуктов проводили методом горизонтального электрофореза в 1% или 1,5% агарозном геле, окрашенном бромидом этидия. Все эксперименты проводили в двух повторностях. Результаты анализа записывали в виде бинарных матриц.

2.4 Оценка агрессивности видов Alternaria. Для получения иноку-люма изоляты Alternaria выращивали на среде V4 под эритемными лампами. Затем для формирования спороношения у изолятов комплекса 'A. solani' стерильным скальпелем удаляли с колоний воздушный мицелий и чашки с колониями помещали в холодильник на 2 суток.

Определение патогенности и агрессивности проводили в лабораторных условиях на листовых дисках диаметром 10 мм. Для заражения брали листья среднего яруса томата сорта «Балтийский» и картофеля сорта «Невский». Для смачивания фильтровальной бумаги, уложенной на дно влажных камер, использовали воду для дисков томата и 4 шМ раствор 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д) для дисков картофеля (Bussey, Stevenson, 1991). На листовые диски с механическими повреждениям и без повреждений наносили каплю инокулюма с концентрациями 5х103 конидий/мл для изолятов видов комплекса 'A. solani' и от 1*102 до 1*105 конидий/мл для изолятов мелкоспоровых видов. Затем инкубировали в климатостате с соблюдением следующего режима: 16 ч. +24°С с освещением и 8 ч. 18°С без освещения. Оценку результатов проводили через 5 сут. после инокуляции.

2.5 Обработка и анализ данных. Статистическую обработку результатов осуществляли с использованием программ MS Excel 2005 и Sta-tistica 6.0. Кластерный анализ проводили методом невзвешенного попарного арифметического среднего (UPGMA). Для построения дендро-грамм использовали программу Treecon 3.1Ь.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 3. БИОРАЗНООБРАЗИЕ И РАСПРОСТРАНЕНИЕ ГРИБОВ РОДА ALTERNARIA НА ПАСЛЕНОВЫХ КУЛЬТУРАХ НА ТЕРРИТОРИИ

РОССИИ

3.1 Разнообразие мелкоспоровых видов Alternaría по микро- и мак-роморфологическим признакам.

На пасленовых культурах нами выявлены 4 мелкоспоровых вида Alternaría: A. tenuissíma, A. arborescens, A. alternata, и A. infectoria. Вид A. arborescens впервые обнаружен нами на пасленовых культурах в России.

Виды A. alternata, A. tenuissíma и A. arborescens составляют комплекс видов 'A. alternata'. Под комплексом видов у Alternaría понимают группу видов, имеющих сходные культуральные признаки, образующих близкие по форме, строению и размеру споры и отличающиеся только габитусом формирования цепочек конидий (Simmons, 2007). Так, вид A. tenuissíma образует простые длинные цепочки конидий без ветвлений, вид A. alternata формирует компактные «кустики» из цепочек конидий с множеством боковых веточек на коротких конидиенос-цах. Вид A. arborescens является «промежуточной» формой и образует «деревце» из нескольких, ветвящихся у основания, цепочек конидий (рис. 1).

Вид A. infectoria существенно отличается от представителей комплекса 'A. alternata', поскольку формирует разветвленные цепочки из конидии с длинными апикальными вторичными конидиеносцами.

A. tenuissíma A. arborescens A. alternata A. infectoria

Рис.1. Микроморфология мелкоспоровых видов Alternaría.

Детальный анализ микроморфологических параметров изолятов комплекса видов 'A. alternata' позволил соотнести видовую принадлежность с конкретными числовыми параметрами (рис.2). Цепочки конидий изолятов A. arborescens образуют больше ветвлений, что выражается в высокой доле конидю! с апикальным вторичным конидиенос-цем с двумя локусами. Для изолятов A. tenuissíma характерна небольшая степень ветвления, в основном за счет вторичных боковых

конидиеносцев. Хотя изоляты видов А. 1епш&81та и А. агЬогевсепз образуют две обособленные группы, пределы варьирования микроморфологических параметров перекрываются, что указывает на близкое родство этих видов и наличие переходных форм.

A. alternata

arborescens

A. tenuissima

-1,0% 0,0% 1,0% 2,0% 3,0% 4,0% Доля спор с боковым вторичным конидиеносцем

Рис. 2. Распределение изолятов мелкоспоровых видов комплекса 'A. alternata' в зависимости от двух микроморфологических параметров.

3.2 Разнообразие крупноспоровых видов Alternaría по микро- и макроморфологическим признакам.

Анализ культуральных признаков изолятов видов комплекса 'А. solani', которые включали типовые штаммы видов A. solani и A. toma-tophila, не выявил очевидных различий между изолятами. В стандартных условиях все изоляты образовывали колонии диаметром 45-50 мм, темно-серого цвета в центре, переходящего в светло-оливковый, с бархатистой поверхностью, ровным краем, иногда с сегментированием, с радиальными кругами.

Изоляты показывали широкие пределы колебания размеров спор: длина корпуса в диапазоне 58-107 мкм, длина апикального выроста в диапазоне 98-194 мкм; доля спор с разветвленным апикальным выростам составляла от 0% до 50%. Широкое и непрерывное варьирование микроморфологических признаков не позволило разделить исследованные изоляты на дискретные группы.

3.3 Распространение видов Alternaría на пасленовых культурах на территории России.

Во всех проанализированных образцах пасленовых культур были выявлены мелкоспоровые виды Alternaría, причем большая часть изолятов относилась к видам A. tenuissima и A. arborescens. Виды же А. alternata и A. infectoria встречались редко (рис. 3). В среднем за 3 года,

встречаемость вида А. Сепигзвгта составила 55%, А. агЪогезсепз - 30%, 'А. зо1ат' — 12%, остальные виды (А. аиетаШ и 'А. т?ес1огга') - 3%.

другие пасленовые

5% 7% 2% 14% Зо/о 1%

картофель томат

55%

Л. tenuissima Г 1 A. arborescens

\ A, altérnala ШШЖ'A. infectoria'ШШШ 'A. sotaní'

Рис. 3. Соотношение видов Alternaría на пасленовых культурах в образцах 2008-2010 годов.

Соотношение двух самых распространенных видов A. tenuissima и A. arborescens сильно отличалось в образцах, собранных в разных регионах и с разных растений-хозяев, причем в некоторых случаях А. arborescens по численности преобладал над A. tenuissima. Таким образом, встречаемость вида A. arborescens, впервые найденного нами на пасленовых культурах на территории России, не зависит от климатических условий зоны и специализации, поэтому вид A. arborescens наравне с видом A. tenuissima можно считать широко распространенным неспециализированным возбудителем альтернариоза пасленовых культур.

Крупноспоровые виды комплекса 'A. solani' встречались только в 20% образцов, а доля изолятов этих видов составила 7% на картофеле и 14% на томатах. Очевидно, что крупноспоровые виды комплекса 'А. solani' имеют ограниченную зону распространения (центр Европейской части России, Северный Кавказ, юг Западной Сибири, Прибайкалье и Приморье), что обусловлено узкой специализацией и значительной чувствительностью к климатическим условиям.

Глава 4. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ И АНАЛИЗ ВИДОВОГО РАЗНООБРАЗИЯ И ГРИБОВ РОДА ALTERNARIA

4.1 Молекулярная идентификация видов Alternaría в пораженных растительных тканях.

Сконструирована пара праймеров AslR/AslF, которая амшшфици-ровала ДНК изолятов комплекса LA. solani , а также штаммов других

крупноспоровых видов Alternaría, приуроченных к поражению растений других семейств. Следовательно, праймеры обладают частичной групповой специфичностью к крупноспоровым видам. Праймеры не амплифицировали ДНК штаммов мелкоспоровых видов Alternaría, поэтому могут быть использованы для идентификации комплекса видов 'A. solani' на картофеле и томате.

Результаты идентификации видового состава возбудителей альтер-нариоза в пораженных растительных тканях с помощью ПЦР со специфичными праймерами на 82% совпадали с результатами определения видов-возбудителей в тех же образцах традиционным методом во влажных камерах. Причем, молекулярный метод позволил обнаружить и идентифицировать возбудителей альтернариоза в 90% случаев. Таким образом, молекулярный метод с использованием специфичных праймеров позволяют быстро и с высокой достоверностью идентифицировать видовой состав возбудителей альтернариоза.

ДНК мелкоспоровых видов комплекса 'A. alternata' присутствовала во всех образцах, тогда как ДНК видов комплекса 'A. solani' встречалась только в части образцов, что согласуется с полученными нами ранее результатами об ограниченной зоне распространения видов комплекса 'A. solani'.

4.2 Дифференциация изолятов комплекса видов 'A. solani' по молекулярным маркерам.

По молекулярным маркерам изоляты крупноспоровых видов комплекса 'A. solani' разделились на 2 больших кластера и, в общей сложности, относились к 18 гаплотипам. Группировка изолятов по кластерам не зависела от географического происхождения.

На рис. 4 сопоставлено генетическое сходство изолятов, выделенных с разных растений-хозяев. Один из кластеров полностью составляют изоляты, выделенные с томата. Другой кластер представлен преимущественно изолятами с картофеля, но также включает несколько «томатных» изолятов. Эти изоляты выделены из томатов открытого грунта, выращиваемых в непосредственной близости от картофеля. В отсутствии строгой специализации изолятов к определенному хозяину, вероятно, эти изоляты являются «картофельными», а заражение ими томатов — это результат территориальной близости «картофельной» популяции.

Распределение на кладограмме типовых штаммов также коррелировало с субстратным происхождением. Штамм вида A. solani оказался в «картофельном» кластере, а штаммы вида A. tomatophila распределились соответственно в «томатный» кластер. Можно предположить, что эти два кластера представляют разные виды: «томатный» кластер представлен видом A. tomatophila, «картофельный» - видом A. solani. Так как «томатный» кластер представлен только изолятами с томата,

а «картофельный» включает изоляты с разных растений-хозяев, возможно, вид А. ^таго-ркИа обладает более узкой специализацией, чем А. зоЫпг. Генетическое различие между видами невелико и составляет 30%. Возможно, вид А. £ота£ор/ггкг является более «молодым» и появился в результате специализации отдельных клонов из популяций А. sola.ni к паразитированию на томате.

Таким образом, мы впервые показали присутствие на территории России нового вида-возбудителя альтернариоза томатов - А. £ота1о-■ph.Ua.

Генетическое сходство

0 10%

картофель

A. s oían i

A. tomatophila

A. dauci

(внешняя группа)

растение-хозяин:

картофель

томат

Рис. 4. Дендрограмма сходства крупноспоровых изолятов Alternaría, выделенных с разных растений-хозяев, построенная на основе данных UP-PCR и RAPD-PCR. Стрелками отмечены эталонные штаммы.

4.3 Сравнительный анализ результатов морфологического и молекулярного исследования изолятов комплекса видов 'А. 8о1апг\

Анализ размера конидий изолятов А. зо1ат и А. tomatoph.Ha, идентифицированных с помощью молекулярно-генетических методов, позволил уточнить описания видов и провести условную границу между | морфологическими параметрами видов (рис. 5).

X

с (3

210,0

190,0

170.0

X

d X 150,0

X

а: 130,0

га

о 110,0

О

Л 90,0

01

70,0

сР

A. tomatophila

43-

■~сг

__ __ — — "18" в^Л__._О—

■ | Я

A. sotaní

50,0 60,0 70,0 80,0 90,0 100,0 110,0 Длина корпуса конидии мкм

Рис. 5. Морфологические параметры изолятов А. зЫатл и А. ЬотсЛорЬИа, идентифицированных с помощью молекулярно-генетических методов.

Изоляты обоих видов образуют конидии с близкой длиной корпуса, однако конидии вида А. ЬотаЛсркИа имеют более длинные апикальные выросты. Тем не менее, диапазоны варьирования морфологических параметров видов А. во1ат и А. Ьотаго-рНйа перекрываются, поэтому для надежной идентификации изолятов комплекса 'А. $о1апг' целесообразно использовать молекулярно-генетические методы.

Глава 5. ПАТОГЕННОСТЬ ВИДОВ ALTERNARIA ПО ОТНОШЕНИЮ К КАРТОФЕЛЮ И ТОМАТУ

5.1 Патогенность крупноспоровых видов Alternaría.

Все исследованные изоляты видов A. solani и A. tom.atophüa оказались патогенными по отношению к картофелю и томату и значительно отличались по агрессивности. Зона некроза после заражения варьировала от 2% До 41% от общей площади листовых дисков (табл. 1).

По отношению к картофелю наиболее полиморфными по агрессивности оказались изоляты A. solani. По отношению к томату наибольшее разнообразие по этому признаку демонстрировали изоляты А. tomatophila. Средние показатели площади некроза, вызываемые изо-лятами A. solani при заражении картофеля и при заражении томата,

не имели статистически достоверных различий. Средняя площадь некроза, вызываемая изолятами вида А. tomatoph.Ua, при заражении томата и при заражении картофеля статистически достоверно отличались - изоляты вида А. готаХотрНИа в среднем в 2 раза агрессивнее по отношению к томату, чем к картофелю.

Таблица 1. Агрессивность изолятов крупноспоровых видов АЫстапа по от-

ношению к пасленовым культурам

Виды Площадь некроза листовых дисков, %

Картофель Томат

Средняя Пределы варьирования Средняя Пределы варьирования

A. solani 11,0+0,3 1,7-21,7 11,2±0,4 1,5-20,0

A. tomatophila 6,9±0,2 1,9-5-15,8 13,1±0,5 2,8-41,0

Таким образом, изоляты вида A. solani агрессивны по отношению к картофелю и томатам в равной степени, тогда как изоляты A. tomato-phila значительно агрессивнее по отношению к своему хозяину (томату) и характеризуются более узкой специализацией.

5.2 Патогенность мелкоспоровых видов Alternaría.

При заражении механически поврежденных и неповрежденных листовых дисков томатов инокулюмом изолятов видов A. tenuissima, А. arborescens, A. infectoria и A. alternata в разных концентрациях на 5 сутки видимых симптомов инфицирования не наблюдалось. Таким образом, мелкоспоровые виды, которые чаще всего выделяются из пораженных листьев и плодов пасленовых, сами по себе не являются патогенными.

Для выяснения роли мелкоспоровых видов Alternaría в развитии комплексной инфекции было проведено совместное заражение листовых дисков томата смешанным инокулюмом наиболее распространенного мелкоспорового вида A. tenuissima и патогенного вида A. solani.

Таблица 2. Агрессивность изолятов A. solani и A. tenuissima при совмест-

ном заражении

Концентрации инокулюма A. tenuissima, конидий/мл Площадь некроза листовых дисков (%) при разной концентрации инокулюма А. воЫт (конидий/мл)

0 5х102 Г'Ю3 5*Ю3

0 0 0,6+0,1 3,4+0,6 9,0±1,6

1'102 0 2,0±0,4 6,9+1,2 19,5+3,5

1 < 10:! 0 2,4+0,4 7,3+1,3 20,1 ±3,6

1>104 0 2,0±0,4 10,1 + 1,8 20,3+3,6

1 <105 0 2,1±0,4 9,1 + 1,6 23,3±4,2

Использование инокулюма вида A. tenuissima. даже в малой концентрации на фоне присутствия конидий A. solani увеличивало интенсивность поражения в среднем в 2,5 раза (табл. 2). Увеличение инфекционной нагрузки A. tenuissima на фоне той же концентрации A. solani не вызывало увеличение интенсивности поражения.

Механическое повреждение растительных тканей значительно влияло на интенсивность поражения видами Alternaría и увеличивало площадь некроза в 3 раза (рис. 6). Включение в инокулюм помимо конидий A. solani конидий A. tenuissima увеличивало площадь поражения в среднем в 2 раза, причем интенсивность поражения не зависела от инфекционной нагрузки A. tenuissima. При этом на поверхности листовых дисков формировалось интенсивное спороношение А. tenuissima.

а5 40,0 i 31,2 ___ 33'2

| 30,0 Í 20,0 1 10,0 I 0,0

О 1*ю2 1*103 1*104 1х105

Концентрация суспензии конидий A. tenuissima, конидий/мл

Беч механического поврежедния листового диска ВШЖ С повреждением

Рис. 6. Влияние концентрации инокулюма A. tenuissima на развитие некрозов листовых дисков томатов при совместном заражении с A. solani (lxlO3 конидий/мл).

Таким образом, факультативный паразит A. tenuissima при совместном заражении с A. solani значительно усиливал поражение листьев. Вероятно, вид A. tenuissima не способен самостоятельно преодолевать защитные барьеры растения и проникать в здоровые ткани даже при наличии механических повреждений. Однако на фоне других патогенов он быстро развивается в качестве вторичного патогена и формирует спороношение. Этот факт в совокупности с нетребовательностью A. tenuissima к условиям окружающей среды объясняет значительное распространение этого и, вероятно, других мелкоспоровых видов Alternaria на пасленовых культурах.

выводы

1. На пасленовых культурах выявлено 6 видов рода Alternaría: 4 мелкоспоровых вида A. tenuissima, A. arborescens, A. alternata и А. infectaría и 2 крупноспоровых вида A. solani и A. tomatophila. Виды А. arborescens и A. tomatophila идентифицированы нами впервые в России.

2. Установлено, что наиболее распространенными видами являются A. tenuissima и A. arborescens, которые встречались на пасленовых культурах повсеместно и составляли 85% среди всех изученных нами изолятов Alternaría. Крупноспоровые виды A. solani и А. tomatophila встречались только в 20% образцов. Доля изолятов этих видов составила 7% на картофеле и 14% на томате. Виды A. alternata и A. infectoria являлись редкими.

3. Морфологический анализ показал, что мелкоспоровые виды имеют сходные признаки и отличаются только габитусом спороноше-ния. Крупноспоровые виды различаются по размеру спор, но диапазоны варьирования этого признака перекрываются, что не позволяет разделить изоляты на дискретные группы традиционными микологическими методами.

4. Сконструирована пара праймеров AslR/AslF, которая может быть использована для идентификации видов комплекса 'A. solani', паразитирующих на картофеле и томате.

5. Усовершенствован метод диагностики видового состава возбудителей альтернариоза, который заключается в выделении ДНК патогена непосредственно из растительной ткани с использованием поли-винилпирролидона и проведении ПЦР с праймерами, специфичными к комплексам видов 'A. alternata', 'A. infectoria' и 'A. solani'.

6. По молекулярным маркерам изоляты комплекса 'A. solani' были разделены на 2 кластера, один из которых представлял вид А. soláni, а другой - вид A. tomatophila. Нами высказывается гипотеза о происхождении вида A. tomatophila путем отбора из популяций A. solani отдельных клонов - специализированных патогенов томата.

7. Изоляты A. solani агрессивны в отношении картофеля и томата в равной степени. Изоляты A. tomatophila патогены для обеих культур, однако более агрессивны в отношении своего хозяина — томата. Мелкоспоровые виды Alternaría являются факультативными паразитами, и не способны самостоятельно заражать картофель и томат.

8. Вид A. tenuissima при совместном заражении с A. solani усиливает развитие некрозов на листовых дисках томата в среднем в два раза и образует интенсивное спороношеппе на поверхности пораженной ткани. Подобный синергизм может объяснить широкое распространение мелкоспоровых видов на пасленовых культурах.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Ганнибал Ф.Б., Орина А.С., Левитин М.М. Альтернариозы сельскохозяйственных культур на территории России // Защита и карантин растений. - М. - 2010. - Вып. 5. - С. 30-32.

2. Орина А.С., Ганнибал Ф.Б. Внутривидовой полиморфизм фитопа-тогенного гриба Alternaría solani по морфологическим и молекулярным маркерам // Иммунопатология, аллергология, инфектология. — М. - 2010. - № 1. - С. 10.

3. Орина А.С., Ганнибал Ф.Б., Левитин М.М. Видовое разнообразие, биологические особенности и география грибов рода Alternaría, ассоциированных с растениями семейства Solanaceae // Микология и фитопатология. - СПб. - 2010. - Т. 44. - Вып.2. - С.150-159.

4. Орина А.С. Разнообразие грибов рода Alternaría - патогенов картофеля в Ленинградской области // Сборник материалов IV региональной молодежной экологической конференции "Биоразнообразие и биоиндикация в естественных и трансформированных экосистемах СевероЗападного региона", 26-27 ноября 2009 г. - СПб. - 2009. - С. 86-89.

5. Орина А.С., Ганнибал Ф.Б. Видовое разнообразие грибов рода Alternaría на пасленовых культурах // Материалы конференции профессорско-преподавательского состава «Научное обеспечение развития АПК в условиях реформирования». - СП Б: СПбГАУ. - 2009. -С. 42-44.

6. Орина А.С., Ганнибал Ф.Б. Видовой состав грибов рода Alternaría на пасленовых культурах в России // Сборник материалов V международной конференции «Изучение грибов в биогеоценозах», 7-13 сентября 2009. - Пермь: ПГПУ. - 2009. - С.178-182.

7. Орина А.С., Ганнибал Ф.Б. Проблемы идентификации возбудителей альтернариоза пасленовых // Материалы Всероссийской научно-производственной конференции "Современные иммунологические исследования, их роль в создании новых сортов и интенсификации растениеводства", 18 ноября 2009 г., ВНИИФ. - Большие Вяземы. - 2009. - С. 200-203.

8. Орина А.С., Ганнибал Ф.Б. Видовой состав и патогенность возбудителей альтернариоза пасленовых культур // Материалы научной конференции аспирантов и молодых ученых "Генетика и селекция", 15 -16 марта 2010 г., ВИР им. Н.И. Вавилова. - СПб. - 2010. - С. 156-162.

9. Левитин М.М., Ганнибал Ф.Б., Баранова О.А., Гасич Е.Л., Миро-ненко Н.В., Орина А.С., Прокофьев П.С., Хлопунова Л.Б. Биоразнообразие грибов рода Alternaría и устойчивость сельскохозяйственных культур к альтернариозам (09-04-13753) // Материалы Всероссийской научной конференции «Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в агропромышленном комплексе России». - М.: РАСХН. - 2010. - С. 29-34.

10. Левитин М.М., Ганнибал Ф.Б., Гасич Е.Л., Баранова О.А., Орина А.С. Использование закономерностей иммуногенеза при разработке методов оценки устойчивости растений к альтернариозу // Материалы Международной научной конференции «Значение научного наследия академика ВАСХНИЛ и Россельхозакадемии М.С.Дунина в современных работах ученых». - М. - 2011. - Т.4, 4.1. - С.39-43.

Alexandra Orina

SPECIES COMPOSITION CAUSING EARLY BLIGHT OF SOLANACEOUS CROPS IN RUSSIA

Abstract of Ph.D. thesis. Scientific supervisor - Prof. Dr. Mark Levitin

Early blight is a widespread economically important disease of solana-ceous crops, caused by Alternaría fungi. In recent years the taxonomic revision of this fungal genus has been carried out and many new Alternaría species were described on plants of family Solanaceae. However precise detection of Alternaría species composition on solanaceous hosts in Russia hasn't yet been performed.

The aims of this study were the inventory of species composition causing early blight of solanaceous crops in Russia and assessment of diversity of Alternaría species on morphological characteristics, aggressiveness and molecular markers.

Almost 300 samples of solanaceous crops with early blight symptoms were collected in 2008-2010 in 22 regions of Russia. Six Alternaría species were revealed: four small-spored species A. tenuissima, A. arborescens, A. alternata, A. infectoria and two large-spored species A. solani and A. tomatophila. Species A. arborescens and A. tomatophila were identified for the first time in Russia.

Morphological analysis showed that small-spored species differ only in sporulation habit. Characteristics of large-spored isolates varied widely that didn't allow to divide them into discrete groups using traditional mycological methods.

Prevailing species A. tenuissima and A. arborescens occurred ubiquitously and amounted to 85% of studied isolates. Large-spored species A. solani and A. tomatophila were found only in 20% of samples and their rate was'7% on potato and 14% on tomato. About 3% of isolates belonged to A. alternata and A. infectoria.

PCR primers AslR/AslF have been designed to be used for detection of A. solar / and A. tomatophila in infected potato and tomato leaves.

Using molecular methods such as UP-PCR and RAPD-PCR large-spored isolates were divided into two clusters one of which included A. solani isolates and another one consisted of A. tomatophila isolates. We

suggest a hypothesis that A. tomatophila was descended from individual clones of A. solani by specialization to parasitism on tomato.

Evaluation of pathogenicity showed that A. solani isolates were equally aggressive for potato as well as for tomato. A. tomatophila isolates pathogenic for both crops were more aggressive to tomato. Small-spored Alternaría species are facultative parasites and aren't able to infect potato and tomato alone under normal conditions.

It was found that A. tenuissima when coinfect with A. solani can increase size of necroses on tomato leaf discs as twice as necroses induced by A. solani alone. Coinfection is accompanied by intensive sporulation of A. tenuissima. Such synergism can explain wide distribution of small-spored Alternaría species on solanaceous crops.

Ilay-inoe tcuimiic. Rl/.O-iiciaib hhhobaumohhwh LU-;HTI> jAiiu-i ri)i IMCTHI mm

JlimeimiH I IJl/(№ 69-253. I liuimcano k nciam 12 Man 2011 i „ Tup. 100 >k i.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Орина, Александра Станиславовна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Альтернариоз пасленовых культур

1.2 Современное представление о видовом составе грибов рода Alternarían^ пасленовых культурах

1.2.1 Таксономия рода Alternaría

1.2.2 Молекулярная идентификация видов Alternaría

1.2.3 Виды Alternaría — патогены пасленовых культур

1.2.4 Внутривидовое разнообразие видов Alternaría, ассоциированных с пасленовыми культурами

1.3 Патогенные свойства Alternaría spp.

1.3.1 Методы изучения взаимоотношений в патосистеме Alternaría spp. - паслёновые культуры

1.3.2 Патогенность возбудителей альтернариоза

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Изоляция грибов в чистую культуру

2.2 Идентификация и исследование макро- и микроморфологии изолятов

2.2.1 Исследование морфологических признаков

2.2.2 Оценка влияния условий культивирования на микроморфологические признаки изолятов мелкоспоровых видов

2.1.3 Коллекция чистых культур

2.3 Молекулярно-генетические методы

2.3.1 Выделение ДНК из мицелия грибов

2.3.2 Выделение ДНК из гербарного материала

2.3.3 Разработка праймеров, специфичных для комплекса видов

А. solanV

2.3.4 ПЦР с видоспецифичными праймерами

2.3.5 ПЦР с универсальными праймерами (UP-PCR)

2.3.6 ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК (RAPD-PCR)

2.3.7 Визуализация результатов амплификации

2.4 Оценка патогенности изолятов Alternaría

2.4.1 Условия эксперимента

2.4.2 Получение инокулюма и стимуляция спороношения

2.4.3 Усовершенствование лабораторной методики оценки агрессивности крупноспоровых видов Alternaría

2.4.4 Оценка агрессивности видов Alternaría при совместном заражении

2.5 Статистические методы

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 3. БИОРАЗНООБРАЗИЕ И РАСПРОСТРАНЕНИЕ ГРИБОВ РОДА ALTERNARIA НА ПАСЛЕНОВЫХ КУЛЬТУРАХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ

3.1 Разнообразие мелкоспоровых видов Alternaría по микро- и макроморфологическим признакам

3.1.1 Анализ морфологических признаков изолятов мелкоспоровых видов Alternaría

3.1.2 Влияние условий культивирования на морфологические признаки изолятов мелкоспоровых видов Alternaría

3.2 Разнообразие крупноспоровых видов Alternaría по микро- и макроморфологическим признакам

3.3 Распространение видов Alternaría на пасленовых культурах на территории России

3.3.1 Распространение видов Alternaría на картофеле

3.3.2 Распространение видов Alternaría на томате

3.3.3 Распространение видов Alternaría на перце

3.3.4 Распространение видов Alternaría на баклажане

3.3.5 Распространение видов Alternaría на декоративных пасленовых

3.3.6 Анализ видового состава возбудителей альтернариоза пасленовых культур

3.3.7 Создание коллекции чистых культур рода Alternaría

Глава 4. МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИДОВОГО И ВНУТРИВИДОВОГО РАЗНООБРАЗИЯ ГРИБОВ РОДА ALTERNARIA, РАСПРОСТРАНЕННЫХ НА ПАСЛЕНОВЫХ КУЛЬТУРАХ

4.1 Молекулярная идентификация видов Alternaría в пораженных растительных тканях

4.1.1 Разработка праймеров, специфичных к комплексу видов 'А. solanV

4.1.2 Молекулярная идентификация видов Alternaría в пораженных растительных тканях

4.2 Дифференциация изолятов комплекса видов 'A. solanV по молекулярным маркерам

4.3 Сравнительный анализ результатов морфологического и молекулярного исследования изолятов комплекса видов *А. solanV

Глава 5. ПАТОГЕННОСТЬ ВИДОВ ALTERNARIA ПО ОТНОШЕНИЮ

К КАРТОФЕЛЮ И ТОМАТУ

5.1 Патогенность крупноспоровых видов Alternaría

5.1.1 Усовершенствование лабораторной методики оценки патогенности крупноспоровых видов Alternaría

5.1.2 Оценка патогенности видов A. solani и A. tomatophila

5.2 Патогенность мелкоспоровых видов Alternaría 82 ВЫВОДЫ 86 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 88 ПРИЛОЖЕНИЕ 1 106 ПРИЛОЖЕНИЕ 2 121 ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Видовой состав возбудителей альтернариоза пасленовых культур на территории России"

Актуальность темы. Представители рода Alternaría широко распространены в природе и встречаются на разнообразных субстратах. Многие виды являются возбудителями заболеваний растений, в т.ч. важных сельскохозяйственных культур из семейства пасленовых: картофеля, томата, баклажана, перца и табака. Альтернариоз поражает листья, стебли, клубни и плоды и обладает высокой вредоносностью. Потери урожая картофеля составляют 10-50% (Дорожкин и др., 1973; Воловик, Литун, 1975; Иванюк и др., 2003), потери урожая томатов могут достигать 78%-90% (Сайчук, 1989; Grogan et al., 1975; Rotem, 1994; Chaerani, Voorrips, 2006).

В систематике и номенклатуре рода Alternaría существует множество проблем. В отечественной литературе долгое время поддерживалось и встречается до сих пор мнение о существовании двух самостоятельных заболеваний: альтернариоза и макроспориоза, вызываемых Alternaría solani Sorauer и Macrosporium solani Ellis et Martin соответственно (Горденко, Абросимова, 1971; Дорожкин и др. 1973; Анненков, 1987; Абдильдаев, 2003), хотя эти видовые эпитеты были признаны синонимами в середине XX века (Neergaard, 1945; Ellis, 1971). Кроме того, в работах прикладного характера, связанных с Alternaría, часто можно обнаружить результаты неточной идентификации: исследователи определяют вид возбудителя на основе малоинформативных культуральных и морфологических признаков или оценивая только симптомы заболевания. Такое положение порождает заблуждения о реальном видовом составе возбудителей, их специализации и распространенности.

В последние годы была проведена таксономическая ревизия рода Alternaría и было описано много новых видов, в т.ч. встречающихся на пасленовых. В настоящий момент систематики считают, что с картофелем и томатом консортивно связаны 14 видов Alternaría (Simmons, 1999, 2000, 2007). Известно, что разные виды Alternaría могут существенно отличаться по физиологическим, экологическим свойствам и хозяйственному значению.

Однако в России анализ видового состава возбудителей альтернариоза пасленовых с учетом современных таксономических концепций почти не проводился.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы инвентаризация видового состава возбудителей альтернариоза пасленовых культур в России и анализ разнообразия видов Alternaría по комплексу морфологических признаков, патогенности и молекулярным маркерам.

В задачи исследований входило:

1. Описание микро- и макроморфологии изолятов Alternaría.

2. Определение видового состава грибов рода Alternaría, ассоциированных с культурными растениями семейства пасленовых.

3. Усовершенствование диагностики возбудителей альтернариоза с использованием молекулярно-генетических методов. Подбор ДНК-маркеров для идентификации разных видов Alternaría.

4. Молекулярно-генетический анализ видового и внутривидового разнообразия крупноспоровых видов Alternaría, доминирующих на картофеле и томатах.

5. Оценка патогенности и специализации доминирующих видов-возбудителей альтернариоза пасленовых культур.

Научная новизна. Впервые в России на обширном материале различного географического происхождения и согласно современным представлениям о систематике рода проведена идентификация видов Alternaría, ассоциированных с пасленовыми культурами. Установлены границы ареалов видов на территории России. Из шести обнаруженных видов два идентифицированы в России впервые: A. arborescens E.G.Simmons и A. tomatophila E.G.Simmons.

Впервые проведен детальный анализ разнообразия крупноспоровых видов Alternaría на картофеле и томате по комплексу морфологических признаков, агрессивности и молекулярным маркерам.

Впервые изучена роль мелкоспоровых видов Alternaría в развитии заболевания. Установлено, что при совместном заражении с патогенным видом Alternaría мелкоспоровые виды значительно усиливают развитие некрозов.

Практическая значимость. Создана коллекция штаммов Alternaría с пасленовых культур различного происхождения (467 штаммов). Сконструирована пара праймеров AslR/AslF для идентификации комплекса видов ÍA. solanV. Усовершенствован метод молекулярной диагностики альтернариоза пасленовых культур, который позволяет в 90% случаев обнаружить и идентифицировать возбудителей альтернариоза непосредственно в растительной ткани.

Апробация работы. Результаты исследований обсуждались на ежегодных методических комиссиях ГНУ ВИЗР Россельхозакадемии по аттестации аспирантов (Санкт-Петербург, 2008-2011), а также были представлены на конференциях: Конференция профессорско-преподавательского состава Санкт-Петербургского государственного Аграрного Университета «Обеспечение развития АПК в условиях реформирования» (Санкт-Петербург, 2009); V Международная конференция «Изучение грибов в биогеоценозах» (Пермь, 2009); Всероссийская научно-практическая конференция «Современные иммунологические исследования, их роль в создании новых сортов и интенсификации растениеводства» (Голицино, 2009); IV Региональная молодежная экологическая конференция «Экологическая школа в Петергофе — наукограде Российской Федерации»: «Биоразнообразие и биоиндикация в естественных и трансформированных экосистемах Северо-западного региона» (Санкт-Петербург, 2009); Научная конференция аспирантов и молодых ученых "Генетика и селекция" (Санкт-Петербург, 2010); Второй Междисциплинарный микологический форум (Москва, 2010); Всероссийская научная конференция «Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в агропромышленном комплексе России» (Москва, 2010).

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ: проекты № 0704-00096 и № 09-04-13753-офиц; Правительства Санкт-Петербурга (комитета по науке и высшей школе): ПСП № 10506; фонда ООО "Технологии. Внедрение. Наука": проект № 12650.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ, из них 3 в изданиях, рекомендуемых ВАК.

Место проведения работы. Научно-исследовательская работа проводилась в лаборатории микологии и фитопатологии ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института защиты растений (ВИЗР) в 2008-2011 гг.

Заключение Диссертация по теме "Микология", Орина, Александра Станиславовна

ВЫВОДЫ

1. На пасленовых культурах выявлено 6 видов рода Alternaría: 4 мелкоспоровых вида A. tenuissima, A. arborescens, A. alternata и A. infectoria и 2 крупноспоровых вида A. solani и A. tomatophila. Виды A. arborescens и А. tomatophila идентифицированы нами впервые в России.

2. Установлено, что наиболее распространенными видами являются A. tenuissima и A. arborescens, которые встречались на пасленовых культурах повсеместно и составляли 85% среди всех изученных нами изолятов Alternaría. Крупноспоровые виды A. solani и A. tomatophila встречались только в 20% образцов. Доля изолятов этих видов составила 7% на картофеле и 14% на томате. Виды A. alternata и A. infectoria являлись редкими.

3. Морфологический анализ показал, что мелкоспоровые виды имеют сходные признаки и отличаются только габитусом спороношения. Крупноспоровые виды различаются по размеру спор, но диапазоны варьирования этого признака перекрываются, что не позволяет разделить изоляты на дискретные группы традиционными микологическими методами.

4. Сконструирована пара праймеров AslR/AslF, которая может быть использована для идентификации видов комплекса "A. solanV, паразитирующих на картофеле и томате.

5. Усовершенствован метод диагностики видового состава возбудителей альтернариоза, который заключается в выделении ДНК патогена непосредственно из растительной ткани с использованием поливинилпирролидона и проведении ПЦР с праймерами, специфичными к комплексам видов lA. alternata', lA. infectoria' и 'A. solanV.

6. По молекулярным маркерам изоляты комплекса 'A. solani' были разделены на 2 кластера, один из которых представлял вид A. solani, а другой - вид A. tomatophila. Нами высказывается гипотеза о происхождении вида А. tomatophila путем отбора из популяций A. solani отдельных клонов -специализированных патогенов томата.

7. Изоляты A. solani агрессивны в отношении картофеля и томата в равной степени. Изоляты A. tomatophila патогенны для обеих культур, однако более агрессивны в отношении своего хозяина - томата. Мелкоспоровые виды Alternaría являются факультативными паразитами и не способны самостоятельно заражать картофель и томат.

8. Вид A. tenuissima при совместном заражении с A. solani усиливает развитие некрозов на листовых дисках томата в среднем в два раза и образует интенсивное спороношение на поверхности пораженной ткани. Подобный синергизм может объяснить широкое распространение мелкоспоровых видов на пасленовых культурах.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Орина, Александра Станиславовна, Санкт-Петербург

1. Абдильдаев, B.C. Способ определения гриба Macrosporium solani / B.C. Абдильдаев // Защита и карантин растений. — 2003. — № 7. С.31.

2. Аврова, А.О. Методы отбора форм томата, устойчивых к Alternaría solani (Ell. Et Mart.) Jones et Gront., в культуре in vitro / А.О. Аврова, C.JI. Тютерев, О.Г. Козырева, T.A. Евстигнеева // Фитопатология. 1993. - Т. 27, № 6. - С. 52-56.

3. Анненков, Б.Г. Внутривидовая неоднородность Приамурской популяции возбудителя макроспориоза картофеля / Б.Г. Анненков // Сибирский вестник сельскохозяйственных наук. — 1987. — № 2. — С. 19-20.

4. Анненков, Б.Г. Макроспориоз картофеля в Хабаровском крае / Б.Г. Анненков // Иммунитет сельскохозяйственных растений к болезням и вредителям. 1975. - С. 315321.

5. Асал, У.М. Специализация на причинителя на картофите листни пятна на доматине / У.М. Асал // Растительная Защита. 1975. - Т. 23, № 6. - С. 38-39.

6. Афонин, А.Н. (2008) Агроэкологический атлас России и сопредельных государств: сельскохозяйственные растения, их вредители, болезни и сорняки Интернет-версия 2.0. / А.Н. Афонин, С.Л. Грин, Н.И. Дзюбенко, А.Н. Фролов / http://www.agroatlas.rvi/.

7. Бордукова, М.И. О поражении клубней альтернариозом / М.И. Бордукова // Защита растений. 1971. -№ 2. - С. 47-48

8. Букасов, С.М. Селекция и семеноводство картофеля / С.М. Букасов, А.Я. Камераз. — М.: Колос, 1972.-359с.

9. Воловик, A.C. Грибные болезни картофеля / A.C. Воловик // Распространение вредителей и болезней сельскохозяйственных культур из РСФСР в 1970 и прогноз их проявления в 1971.-М.: Наука, 1971.-С. 168-174.

10. Воловик, А.С. Вредоносность заболеваний картофеля / А.С. Воловик, Б.П. Литун // Защита растений. 1975. - № 7. - С. 4-6.

11. Горденко, В.И. К изучению макроспориоза вредоносного заболевания картофеля и томатов / В.И. Горденко, Э.И. Абросимова // Научные труды Северо-Западного института сельского хозяйства. - 1971. - № 20. - С. 206-210.

12. Горденко, В.И. Специализация грибов рода Macrosporium sp. / В.И. Горденко // Микология и фитопатология. 1970. - Т.4, №4. - С.297-300.

13. Грушевой, С.Е. Сельскохозяйственная фитопатология / С.Е. Грушевой. — М.: «Колос», 1965.-447с.

14. Дараков, О.Б. Новое спороношение Alternaría solani Sor. / О.Б. Дараков // Микология и фитопатология. 1996. - Т. 30, № 4. — С. 36-38.

15. Дмитриева, Е.П. Разработка методов оценки устойчивости картофеля к альтернариозу и характеристика картофеля по этому признаку: автореф. дис. . канд. с.-х. наук / Дмитриева Екатерина Петровна. М.: НИИКХ, 1988. - 21с.

16. Дорожкин, Н.А. Культуральные особенности и агрессивность изолятов Macrosporium solani Ell. et Mart. / Н.А. Дорожкин, З.И. Ремнева, В.Г. Иванюк // Биологические науки. 1975. - № 7. - С. 100-104.

17. Дорожкин, Н.А. Фитоалексины и устойчивость томатов в ранней сухой пятнистости / Н.А. Дорожкин, В.Г. Иванюк // Известия АН БССР. 1976. - № 4. - С. 8485.

18. Дорожкин, Н.А. Методы оценки томатов на устойчивость к ранней сухой пятнистости / Н.А. Дорожкин, В.Г. Иванюк // Овощеводство. Межведомственный тематический сборник. 1978. - № 4. - С. 149-153.

19. Дорожкин, Н.А. Возбудители ранней сухой пятнистости картофеля и их специализация на других видах сем. Solanaceae I Н.А. Дорожкин, З.И. Ремнева, В.Г. Иванюк//Ботаника. 1973.-№ 15.-С. 160-167.

20. Иванюк, В.Г. Сравнение эффективности методов оценки картофеля на устойчивость к ранней сухой пятнистости на естественном и искусственном инфекционном фоне / В.Г. Иванюк // Сельскохозяйственная биология. 1986. - № 9. — С. 85-88.

21. Иванюк, В.Г. Внутривидовая изменчивость возбудителя макроспориоза пасленовых культур и ее практическое значение / В.Г. Иванюк // Изменчивость фитопатогенных микроорганизмов. М.: Колос, 1983. — С. 208-214.

22. Иванюк, В.Г. Защита картофеля от болезней, вредителей и сорняков / В.Г. Иванюк, С.А. Банадысев, Г.К. Журомский. Мн.: РУП «Белорусский НИИ картофелеводства», 2003. -550с.

23. Иванюк, В.Г. Фитопатологическая ситуация на картофеле в Беларуси и пути ее улучшения / В.Г. Иванюк, И.И. Бусько, Г.К. Журомский, М.И. Березовский, В.А. Денисенко, В.П. Бакай, Д.И. Ягнешко // Картофелеводство. 2000. - № 10. - С. 163-171.

24. Иванюк, В.Г. Сравнительная характеристика рас Macrosporium solani Ell. et Mart., дифференцированных на картофеле и томатах / В.Г. Иванюк // Ботаника. 1979. - № 21. -С. 139-144.

25. Иванюк, В.Г. Сравнение эффективности методов оценки картофеля на устойчивость к ранней сухой пятнистости на естественном и искусственном инфекционном фоне / В.Г. Иванюк // Сельскохозяйственная биология. 1986. -№ 9. - С. 85-88.

26. Иванюк, В.Г. Структура популяции Alternaria solani (Ell. et Mart.) Jones et Grant — возбудителя альтернариоза картофеля и ее динамика в условиях Белоруссии / В.Г. Иванюк, А.Н. Палилова // Микология и фитопатология. 1996. — Т. 30, № 3. - С. 66-74.

27. Иванюк, В.Г. Фитосанитарное состояние картофеля в Белоруссии и пути его улучшения / В.Г. Иванюк, Г.К. Журомский // Картофелеводство. — 2007. Т. 12. - С. 389402.

28. Кваснюк, Н.Я. Интенсивность споруляции и патогенность изолятов Alternaria solani (Ell. et Mart.) Sor. / Н.Я. Кваснюк II Микология и фитопатология. 1985. - Т. 19, № 2.-С. 148-150.

29. Киселев, Е.П. Методика ускоренной оценки картофеля на устойчивость к макроспориозу способом конидиального заражения отдельных листьев / Е.П. Киселев, Б.Г. Анненков // Сибирский вестник с.-х. наук. 1985. - № 3. - С. 45-48.

30. Коняева, Н.М. Возбудители грибных болезней картофеля / Н.М. Коняева, Е.В. Золотарева, Г.А. Куликова, Г.И. Локтина // Возбудители болезней сельскохозяйственных растений Дальнего Востока. М.: Наука, 1980. - С. 265-268.

31. Кулемов, А.В. Макроспориоз томата и разработка мер борьбы с ним в условиях левобережной лесостепи УССР: автореф. дис. . канд. с.-х. наук / А.В. Кулемов. Киев, 1989.-24с.

32. Левкина, Л.М. Род Alternaría Nees / Л.М. Левкина // Новое в систематике и номенклатуре грибов / под ред. Ю.Т. Дьякова, Ю.В. Сергеева. — М.: Национальная академия микологии; Медицина для всех. 2003. - 496с.

33. Михайлова, Л. А. Взаимодействие штаммов Bipolaris sorokiniana и образцов пшеницы / Л.А. Михайлова, С.Г. Гоголева, Е.И. Гультяева // Микология и фитопатология.- 2002. Т. 36, № 2. - С. 63-66.

34. Нелен, Е.С. К биологии гриба Macrosporium solani Eli. et Mart. возбудителя макроспориоза картофеля в Приморском крае / Е.С. Нелен // Сообщения Дальневосточного филиала им. В.Л. Комарова СО АН СССР. — Владивосток, 1959. - № 11.- С. 69-77.

35. Нелен, Е.С. Болезни картофеля и овощных культур в Приморском крае и меры борьбы с ними / Е.С. Нелеп, Л.Н. Васильева. Владивосток: Приморское книжное изд-во, 1958.-87с.

36. Осницкая, Е.А. Болезни овощных культур / Е.А. Осницкая // Распространение вредителей и болезней сельскохозяйственных культур из РСФСР в 1965 и прогноз их проявления в 1966.-М., 1966.-С. 163-170.

37. Петровская, Н.Н. Иммунологическая характеристика образцов томата в условиях предгорной зоны Кавказа / Н.Н. Петровская, Т.В. Столпникова // Научно-техническая бюллетень ВИР. 1992. - Т. 228. - С. 22-26.

38. Пидопличко И.Г. Грибы-паразиты культурных растений. В 2-х т. Т.2 Грибы несовершенные / И.Г. Пидопличко. Киев: «Наукова думка», 1977. - 299с.

39. Поликсенова, В.Д. Видовой состав грибов рода Alternaría, развивающихся на плодах томата (.Lycopersicon esculentum Mili.) / В.Д. Поликсенова, М.Н. Федорович // Ботаника. 2008. -№ 36. - С. 272-279.

40. Рог-Кустов, А.К. Анализ новых гибридных комбинаций картофеля на устойчивость к альтернариозу / А.К. Рог-Кустов // Фитопатологическая обстановка, самозащита и химзащита с.-х. растений в Приамурье. Хабаровск, 2003. - С. 95-100.

41. Сайчук, А.И. Оценка вредоносности Alternaría solani на исходном селекционном материале томата / А.И. Сайчук // Селекция, агротехника и орошение овощных культур. — Кишинев: «Штиинца», 1989. 143с.

42. Саламатова, Е.В. Вредоносность ранней сухой пятнистости картофеля на Камчатке / Е.В. Саламатова // Актуальные вопросы защиты растений от болезней и сорняков на Дальнем Востоке. Научно-техническая бюллетень. 1986. — № 5. - С. 21-26.

43. Шнейдер, Ю.И. Методические указания по оценке селекционного материала картофеля на устойчивость к фитофторозу, ризоктониозу, бактериальным болезням и механическим повреждениям / Ю.И. Шнейдер, И.М. Яшина, С.А. Ерохина. Москва: ВАСХНИЛ, 1980.-52с.

44. Ягнешко, Д.И. Альтернариоз картофеля / Д.И. Ягнешко // Ахова раслш. 2000. - № 3.-С. 21-22.

45. Adachi, Y. Relationship between genetic polymorphisms and fungicide resistance within Alternaría alternata / Y. Adachi, H. Watanabe, T. Tsuge // Phytopathology. 1996. - Vol. 86, № 11.-P. 1248-1254.

46. Akamatsu, H. Molecular biological studies on the pathogenicity of Alternaría alternata tomato pathotype / H. Akamatsu // General plant pathology. 2004. - Vol. 70. - P. 389/

47. Akimitsu, K. Molecular, ecological and evolutionary approaches to understanding Alternaría disease of citrus / K. Akimitsu, T.L. Peever, L.W. Timmer // Molecular plant pathology. 2003. - Vol. 4. - P. 435-446.

48. Andersen. B. Secondary metabolite profile of Alternaría dauci, A. porri, A. solani and A. tomatophila / B. Andersen, A. Dongo, B. Pryor // Mycological research. 2008. - Vol. 112. - P. 241-250.

49. Andersen. B. Differentiation of Alternaría infectoria and Alternaría alternata bases on morphology, metabolite profiles and cultural characteristics / B. Andersen, U. Thrane // Canadian journal of microbiology. 1996. - Vol. 42. - P. 685-689.

50. Andersen, B. Chemical and morphological segregation of Alternaría alternata, A. gaisen and A. longipes / B. Andersen, E. Krager, R.G. Roberts // Mycological research. 2001. - Vol. 105, №3,-P. 291-299.

51. Andersen, B. Chemical and morphological segregation of Alternaría arborescens, A. infectoria and A. tenuissima species-group / B. Andersen, E. Kroger, R.G. Roberts // Mycological research. 2002. - Vol. 106, № 2. - P. 170-182.

52. Aradhya, M.K. Genetic variability in the pistachio late blight fungus Alternaría alternata / M.K. Aradhya, H.M. Chan, D.E. Parfitt // Mycological research. 2001. - Vol. 105. - P. 300306.

53. Aragaki, M. Radiation and temperature interaction on the sporulation of Alternaría tomato / M. Aragaki // Phytopathology. 1961. - Vol. 51. - P. 803-804.

54. Aragaki, M. Relation of radiation and temperature to the sporulation of Alternaría tomato and other fungi / M. Aragaki // Phytopathology. 1964. - Vol. 54. - P. 565-569.

55. Ausubel, F.M. Short protocols in molecular biology. 5th edition / F.M. Ausubel, R. Brent, R.E. Kingston. New York: John Wiley & Sons, Inc., 2002.

56. Barclay, G.M. Effects of differential rates of nitrogen and phosphorous on early blight in potatoes / G.M. Barclay, H.J. Murphy, F.E. Manzer, F.E. Hutchinson // American potato journal. -1973.-Vol. 50.-P. 42-48.

57. Barksdale, T.H. A study of the inheritance of tomato early blight resistance / T.H. Barksdale, A.K. Stoner // Plant disease reporter. 1977. - Vol. 61. - P. 63-65.

58. Bliffeld, M. Genetic engineering of wheat for increased resistance to powdery mildew disease / M. Bliffeld, J. Mundy, I. Potrykus, J. Futterer// Theoretical and applied genetics. -1999. Vol. 98. - P. 1079-1086.

59. Bonde, R. Physiological strains of Alternaria solani / R. Bonde // Phytopathology. -1929.-Vol. 19.-P. 533-548.

60. Bose, T.K. Vegetable crops. Vol. 1. / T.K. Bose, J. Kabir, T.K. Maithy, V.A. Parthasarthy, M.G. Som. Kolkata: Naya prokash, 2002. - 668p.

61. Boyette, C.D. Evaluation of Alternaría crassa for biological control of Jimsonweed: host range and virulence / C.D. Boyette // Plant science. 1986. - Vol. 45, № 3. - P. 223-228.

62. Broggio, M. In vitro infection systems for potato early blight: Alternaría solani / M. Broggio, A. Ranucci // Rivista di agricoltura subtropicale e tropicale: Instituto agronomico per L'oltremare. 1990. -№ 3. - P. 355-366.

63. Bussey, M. A leaf disk assay for detecting resistance to early blight caused by Alternaría solani in juvenile potato plants / M. Bussey, W. Stevenson // Plant disease. 1991. - Vol. 75, №. 4.-P. 385-390.

64. Caligari, P.D.S. Methods and strategies for detecting S. tuberosum dihaploids in interspecific crosses with S. Phureja / P.D.S. Caligari, W. Powell, K. Liddell, M.J. de Maine, G.E.L. Swan // Annals of applied biology. 1988. - Vol. 112. - P. 323-328.

65. Castro, M.E.A. Variabilidade patogénica de Alternaría solani agente causal da pinta- . preta do tomateiro / M.E.A. Castro, L. Zambolim, G.M. Chaves, C.D. Cruz, K. Matsuoka // Summa phytopathologies 2000. - Vol. 26, № 1. - P. 24-28.

66. Chaerani, R. Assessment of early blight (Alternaría solani) resistance in tomato using a droplet inoculation method / R. Chaerani, R. Groenwold, P. Stam, R.E. Voorrips // General plant pathology. 2007. - Vol. 73. - P. 96-103.

67. Chaerani, R. Tomato early blight {Alternaría solani): the pathogen, genetics, and breeding for resistance / R. Chaerani, R. E. Voorrips // General plant pathology. 2006. - Vol. 72.-P. 335-347.

68. Cheng, Y.-J. An efficient protocol for genomic DNA extraction from Citrus species / Y.-J. Cheng, W.-W. Guo, H.-L. Yi, X.M. Pang, X.X. Deng // Plant molecular biology reporter. -2003.-Vol. 21, №6.-P. 177a-177g.

69. Christ, B J. Effect of disease assessment method on ranking potato cultivars for resistance to early blight / B.J. Christ // Plant disease. 1991. - Vol. 75. - P. 353-356.

70. Christ, B.J. Inheritance of resistance to early blight disease in a diploid potato population / B.J. Christ, K.G. Haynes // Plant breeding. 2001. - Vol. 120. - P. 169-172.

71. Demir, S. Reactions of different potato cultivars against to early blight disease / S. Demir, R. Levent // Journal turkish phytopathology. 2002. - Vol. 31, № 2. - P. 97-103.

72. Douglas, D.R. Effect of Ulocladium consortiale, a nonpathogen, on the severity of tuber blight caused by Alternaría solani / D.R. Douglas // American potato journal. 1973. - Vol. 50. -P. 353-356.

73. Droby, S. Pathogenicity oí Alternaría altérnala on potato in Israel / S. Droby, A. Dinoor, D. Prusky, R. Barkai-Golan // Phytopathology. 1984. - Vol. 74. - P. 537-542.

74. Ellis, M.B. Dematiaceos hyphomycetes / M.B. Ellis. Kew: commonwealth Mycological. Institute, 1971.-608 p.

75. Ellis, M.B. Alternaría solani 475 set 48 / Ellis M.B., Gibson I.A.S. // in CMI description of pathogenic fungi and bacteria. Kew Surrey England: Commonwealth mycological institute, 1975.-475p.

76. Ellis, M.B. More dematiaceous hyphomycetes / M. B. Ellis. — Kew, Surrey, UK: CAB International Mycological Institute. — 1976. 507p.

77. Fageria, N.K. Soil acidity affects availability of nitrogen, phosphorus and potassium / N.K. Fageria // Better crops international. 1994. - Vol. 10. - P. 8-9.

78. Foolad, M.R. Comparison between field, greenhouse, and detached-leaflet evaluations of tomato germplasm for early blight resistance / M.R. Foolad, N. Ntahimpera, B.J. Christ, G.Y. Lin // Plant disease. 2000. - Vol. 84. - P. 967-972.

79. Fritz, M. Arbuscular mycorrhiza reduces susceptibility of tomato to Alternaría solani / M. Fritz, I. Jakobsen, M.F. Lyngkjaer, H. Thordal-Christensen, J. Pons-Kühnemann // Mycorrhiza. 2006. - Vol. 16. - P. 413 - 419.

80. Gannibal, Ph.B. Morphological and UP-PCR analyses and design of a PCR assay for differentiation of Alternaría infectoria species-group / Ph.B. Gannibal, T. Yli-Mattila // Микология и фитопатология. 2007. - Т. 41, № 4. - С. 313-322.

81. Grogan, R.G. A stem canker disease of tomato caused by Alternarla alternata f. sp. lycopersici / R.G. Grogan, K.A. Kimble, I. Misaghi // Phytopathology. 1975. - Vol. 65. - P. 880-886.

82. Guillemette, T. Conventional and real-time PCR-based assay for detecting pathogenic Alternaría brassicae in cruciferous seed / T. Guillemette, B. Iacomi-Vasilescu, P. Simoneau // Plant disease. 2004. - Vol. 88, № 5. - P. 490-496.

83. Halfon-Meiri, A. Internal mold caused in sweet pepper by Alternaría alternata; fungal ingress / A. Halfon-Meiri, I. Rylski // Phytopathology. 1983. - Vol. 73, № 1. - P. 67-70.

84. Hansen, M.E. Automated and unbiased classification of chemical profiles from fungi using high performance liquid chromatography / M. E. Hansen, B. Andersen, J. Smedsgaard // Journal of microbiological methods. 2005. - Vol. 61. - P. 295-304.

85. Hao, Q. Type-1 ribosome-inactivating protein from iris (Iris hollandica var. Professor Blaauw) binds specific genomic DNA fragments / Q. Hao, W.J. Peumans, E.J.M. van Damme // Biochemical journal. 2001. - Vol. 357. - P. 875-880.

86. Hao, Q. Iris bulds express type 1 and type 2 ribosome-inactivating proteins with unusual properties / Q. Hao, E.J.M. van Damme, B. Hause, A. Barre, Y. Chen, P. Rouge', W.J. Peumans //Plantphysiology.-2001b.-Vol. 125.-P. 866-876.

87. Hawksworth, D.L. Fungal genera in urgent need of taxonomic work / D.L. Hawksworth // ' Microbiological sciences. 1986. - Vol. 3. - P. 58.

88. Henning, R.G. Evidence of existence of physiological races of Alternaría solani / R.G. Henning, L.J. Alexander // Phytopathology. 1952. - Vol. 42. - P. 467.

89. Higgins, В. B. The diseases of pepper / В. B. Higgins // Georgia agricultural experiment station research bulletin. 1923. - Vol. 141. - P. 48-75.

90. Jansky, S.H. Multiple disease resistance in interspecific hybrids of potato / S.H. Jansky, D.I. Rouse // Plant disease. 2008. - Vol. 87, № 3. - P. 266-272.

91. Johnson, R.D. A polymerase chain reaction-based method to specifically detect Alternaría alternata apple pathotype (A. malí), the causal agent of Alternaría blotch of apple /

92. R.D. Johnson, L J. Johnson, K. Kohmoto, H. Otani, C.R. Lane, M. Kodama // Phytopathoogy. -2000. Vol. 90, № 9. - P. 973-976.

93. Joly P. Le genre Alternaría / Joly P. Paris, 1964. - 250p.

94. Kusaba M. Nuclear ribosomal DNA variation and pathogenic specialization in Alternaría fungi known to produce host-specific toxins / M. Kusaba, T. Tsuge // Applied and Environmental Microbiology. 1994. - Vol. 60, № 9. - P. 3055-3062.

95. Kang, J.-C. Phylogenetic analysis of Alternaría spp., associated with apple core rot and citrus black rot in South Africa / J.-C. Kang, P.W. Crous, G.R.A. Mchau, M. Serdani, S.-M. Song // Mycological research. 2002. - Vol. 106. - P. 1151-1162.

96. Kapsa J. Early blight {Alternaría spp.) in potato crops in Poland and results of chemical protection / J. Kapsa // Journal of plant protection research. 2003. — Vol. 44, № 3. - P. 231238.

97. Kusaba, M. Phylogeny oí Alternaría fungi known to produce host-specific toxins on the basis of variation in internal transcribed spacers of ribosomal DNA / M. Kusaba, T. Tsuge// Current genetics. 1995. - Vol. 28. - P. 491-498.

98. Kusaba, M. Mitochondrial DNA variation in host-specific toxin producing pathogens in the genus Alternaría / M. Kusaba, T. Tsuge // Annals of the phytopathological society of Japan. 1997. - Vol. 63, № 6. - P. 463-469.

99. Maierco, M. Combining ability estimates for early blight resistance in tomato / M. Maierco, T.J. Ng, T.H. Barksdale // Journal of the American society for horticultural science. — 1989.-Vol. 114.-P. 118-121.

100. Martin, F.W. Sources of resistance to early blight, A. solani and transfer to tomato / F.W. Martin, P. Hepperly // Journal of agriculture of the university of Puerto Rico. 1987. - Vol. 71. -P. 85-95.

101. Mathur, R.L. Internal moulds of chili caused by Alternaría tenuis Auct. / R.L. Mathur, J.P. Agnihotri // Indian phytopathology. 1961. - Vol.14. - P.104-105.

102. McAlpine, D. Australian fungi / D. McAlpine // Agricultural gazette of New South Wales. 1896. - Vol. 7. -P. 304.

103. McKay, G.J. Molecular characterization of Alternaría linicola and its detection in linseed / G.J. McKay, A.E. Brown, A.J. Bjourson, P.C. Mercer // European journal of plant pathology. — 1999.-Vol. 105, №1.-P. 15-166.

104. Morris, P.F. Genetic diversity of Alternaría alternata isolated from tomato in California assessed using RAPDs / P.F. Morris, M.S. Connolly, D.A. Clair // Mycological research. 2000. - Vol. 104, № 3. - P. 286-292.

105. Nachmias, A. Disease assessment of early blight in zones potatoes in semi-arid / A. Nachmias, D.S. Caligari, Z. Ben-Tullila, L. Livescu // Potato Research. 1990. - Vol. 33. - P. 441-448.

106. Nash, A.F. Tomato early blight resistance in breeding line derived from Lycopersicom hirsutum P.I. 126445 / A.F. Nash, R.G. Gardner // Plant disease. 1988. - Vol. 72. -P. 206-209.

107. Neergaard, P. Danish species of Alternaría and Stemphtlium. Taxonomy, parasitism, economical signification / P. Neergaard. Copenhagen: Munksgaard, Oxford university press, 1945.-560p.

108. Nishimura, S. Host-specific toxins from Alternaría alternata: problems and prospects / S.Nishimura // Proceedings of the Japan academy. 1980. - Vol. 56. -P. 362-366.

109. Nishimura, S. Host-specific toxins and chemical structures from Alternaría species / S. Nishimura, K. Kohmoto // Annual Review Phytopathology. 1983. - Vol. 21. - P. 87-116.

110. Norse, D. Fungal populations of tobacco leaves and their effect on the growth of Alt. longípes / D. Norse // Transaction of British mycological society. 1972. — Vol. 59, № 2. - P. 261-271.

111. Peever, T. L. Molecular systematics of citrus-associated Alternaría species / T. L. Peever, G. Su, L. Carpenter-Boggs, L. W. Timmer // Mycologia. 2004. - Vol. 96, № 1. - P. 119-134.

112. Pellegrini, M.G. In vitro analysis of defence mechanism in the system Solanum tuberosum Alternaría alternata / M.G. Pellegrini, A.R. Garbuglia, S. Guerrazzi // Phytopathology. - 1990. - Vol. 130, № 2. - P. 134-146.

113. Pelletier, J.R. Characterization or resistance to early blight in three potato cultivars: incubation period, lesion expansion rate, and spore production / J.R. Pelletier, W.E. Fry // Phytopathology. 1989. - Vol. 79. - P. 511-517.

114. Pelletier, J.R. Characterization or resistance to early blight in three potato cultivars: receptivity / J.R. Pelletier, W.E. Fry // Phytopathology. 1990. - Vol. 80. - P. 361-366.

115. Petrunak, D. M. Isozyme variability in Alternaría solani and A. alternata / D. M. Petrunak, B. J. Christ // Phytopathology. 1992. - Vol. 82, № 12. - P. 1343-1347.

116. Peumans, W.J. Ribo some-inactivating proteins from plans: more RNA N-glycosidases? / W.J. Peumans, E.J.M. van Damme // FASEB journal. 2001. - Vol. 15. - P. 1493-1506.

117. Porebski, S. Modification of a CTAB DNA extraction protocol for plants containing high polysaccharide and polyphenol components / S. Porebski, L.G. Bailey, B.R. Baum // Plant molecular biology reporter. 1997. - Vol. 15, № 1. - P. 8-15.

118. Pound, G.S. Effect of air temperature on incidence and development of the early blight disease of tomato / G.S. Pound // Phytopathology. 1951. - Vol. 41. - P. 127-135.

119. Prasad, B. Inducing sporulation in Alternaría solani 1. Effect of water treatment / B. Prasad, B.L. Dutt, B.B. Nagaich // Mycopathologia et mycologia applicata. 1973. - Vol. 49. -P. 141-146.

120. Pryor, B.M. Morphological, pathogenic and molecular characterization of Alternaría isolates associated with Alternaría late blight of pistachio / B.M. Pryor, T.J. Michailides // Phytopathology. 2001. - Vol. 92, № 4. - P. 406-416.

121. Pucci, A. Una grave alternariosis sobre Pimiento y Berenjena en la repablica Argentina / A. Pucci // Review of applies mycology. 1948. - Vol. 27 . - P. 458.

122. Raja, P. First report of Alternaría lenuissima causing leaf spot and fruit rot on eggplant (Solanum tuberosum) in India / P. Raja, A.V. Reddy, S. Allam // Plant pathology. 2006. - Vol. 55.-P. 579.

123. Ramsay, G.B. Effect of ultraviolet radiation upon sporulation in Macrosporium and Fusarium / G.B. Ramsay, A.A. Bailey // Botanical gazette. 1930. - Vol. 89. - P. 113-136.

124. Rangasmani, G. Alernaria melongenae causing leafspot and fruit scab of eggplant and fruit rot of chili / G. Rangasmani, C.N. Sambandan // Mycology. 1960. — Vol. 52, № 3. — P. 517-520.

125. Rao, E.S. Genetics of rate limiting disease reaction to Alternaría solani in tomato / E.S. Rao, A.D. Munshi, P. Sinha, Rajkumar // Euphytica. 2008. - Vol. 159. - P. 123-134.

126. Rao, P. H. V. Fungal succession on Sorghum seed harvested at different stages of maturity / P. H. V. Rao, P. Giridhar, S. M. Reddy // Indian phytopathology. 2000. - Vol. 53, № l.-P. 102—104.

127. Roberts, R.G. RAPD fragment pattern analysis and morphological segregation and small-spored Alternaría species and species groups / R.G. Roberts, S.T. Reymond, B. Andersen // Mycological research.-2000.-Vol. 104.-P. 151-160.

128. Rodrigues, M.A.D. Components or resistance to early blight in four potato cultivars: effect of leaf position / M.A.D. Rodrigues S.H., Brommonschenkel, K. Matsuoka, E.S.G. Mizubuti // Phytopathology. 2006. - Vol. 1554. - P. 230-235.

129. Rotem, J. The genus Alternaría / J. Rotem. Israel: APS Press, 1994. - 326p. Rotem, J. Variability in Alternaría porri f.sp. solani / J. Rotem // Israel journal of botany. -1966.-Vol.15.-P.48-57.

130. Rotem, J. Dew a principal moisture factor enabling early blight epidemics in a semiarid region of Israel / J. Rotem, I. Reichert // Plant disease reports. - 1964. - Vol. 48. - P. 211-215.

131. Rozen, S. Primer3 / S. Rozen, H.J. Skaletsky // http://www-genome.wi.mit.edu/genome software/other/primer3.html. — 1998.

132. Samson, R.A. Introduction to food- and airborne fungi. 6 edition / R.A. Samson, E.S. Hoekstra, J.C. Frisvad, O. Filtenborg. — Utrecht: Centraalbureau voor schimmelcultures, 2000. -389p.

133. Sávulescu, P. Alternaría capsici-annuim Savul. & Sandu / P. Sávulescu, J. Ana // Review of applied mycology. 1949. - Vol. 27. - P. 458.

134. Scheuermann, K.K. Selecao de marcadores RAPD para estudo de diversidade genetica de Alternaría solaní / K.K. Scheuermann, B.A.S. Falleiro, A. Reis, S.H. Brommonschenkel, E.S.G. Mizubuti // Fitopatología brasileira. 2004. - Vol. 29. - P. 29-30.

135. Scott, K.J. Biotrophic parasites in culture. Growth of biotrophic parasites in axenic culture / K.J. Scott // in Encyclopedia of plant physiology / R. Heitefuss, P.H Williams. -N.Y.:Springer Verlag, 1976. P. 719-742.

136. Serdani, M. Characterization of Alternaría species-groups associated with core rot of apples in South Africa / M. Serdani, J.-Ch. Kang, B. Andersen, P. W. Crous // Mycological Research. -2002. Vol. 106, № 5. - P. 561-569.

137. Shahin, E.A. An efficient technique for inducing profuse sporulation of Alternaría species / E.A. Shahin, J.F. Shepard // Phytopathology. 1979. - Vol. 69. - P. 618-620.

138. Sharma, A.D. DNA isolation from dry and fresh of polysaccharide-rich plants / A.D. Sharma, P.K. Gill, P. Singh // Plant molecular biology reporter. 2002. - Vol. 20, № 12. - P. 415a-415f.

139. Sherf, A.F. Vegetable diseases and their control / A.F. Sherf, A.A. MacNab. New York: Wiley, 1986.-728p.

140. Simmons, E.G. Alternaría themes and variations (224-286) / E.G. Simmons // Mycotaxon. 2000.-Vol. 75.-P. 1-115.

141. Simmons, E.G. Alternaría: an Identification Manual / E.G. Simmons. Utrecht: CBS, 2007.-775 p.

142. Simmons, E.G. Typification of Alternaría, Stemphylium and Ulocladium / E.G. Simmons // Mycologia. 1967. - Vol. 59. - P. 67-92.

143. Simmons, E.G. Alternaría chronology and catalogue raisonné. Part I: 1796-1871 / E. G. Simmons // Mycotaxon. 1995a. - Vol. 55. - P. 1-53.

144. Simmons, E.G. Alternaría taxonomy: current status, viewpoint, challenge / E. G. Simmons // Alternaría. Biology, plant diseases and metabolites / J. Chelkowski, A. Visconti. — Amsterdam: Elsevier, 1992. P. 1-36.

145. Simmons, E.G. Alternaría themes and variations (106-111) / E. G. Simmons // Mycotaxon. 1994. - Vol. 50. - P. 409-427.

146. Simmons, E.G. Alternaría themes and variations (112-144) / E. G. Simmons // Mycotaxon.-1995.-Vol. 55.-P. 155-163.

147. Simmons, E.G. Alternaría themes and variations (236-243). Host-specific toxin producers / E. G. Simmons // Mycotaxon. 1999. - Vol. 83. - P. 127-145.

148. Simmons, E.G. Alternaría themes and variations (63-72) / E. G. Simmons // Mycotaxon. 1993.-Vol. 48-P. 91-107.

149. Simmons, E.G. Alternaría themes and variations (73) / E. G. Simmons, R. G. Roberts // Mycotaxon. 1993. - Vol. 58. - P. 109-140.

150. Singh, B.M. Inducing sporulation in different strains of A. solaní. II. Effect of ultraviolet light / B.M. Singh // Mycopathologia et mycologia applicata. 1967. - Vol. 32. - P. 163-171.

151. Singht, M. In vitro evaluation of fungicides against Alternaría alternata (Fr.) Keisseler the causal agent of alernaria leaf spot and fruit rot of brinjal (Solanum melongena) / M. Singht, T.N. Shukla// Pesticides. 1985. - Vol.19, №8. - P.72-76.

152. Sreekaniah, K.R. Avirulent strain of Alternaría alternata causing leaf and fruit spot of chili / K.R. Sreekaniah, R. Nagaraja, T.N. Ramachandra // Indian phytopathology. 1973. - Vol. 26, №3.-P. 600-603.

153. Tanaka, A. Reporter gene analysis of AKT3-1 and AKT3-2 expression during conidial germination of the Japanese pear pathotype of Alternaría alternata / A. Tanaka, T. Tsuge // Journal general plant pathology. 2001. - Vol. 67. - P. 15-22.

154. Tanton, T.W. The effect of different cultural practices upon the major disease of dark fire-cured tobacco in Malawi / T.W. Tanton, J.B. Abington // PANS. 1979. - Vol. 25, № 2. -P. 158-162.

155. Thirthamolappa, H. Genetics of resistance to early blight (Alternaría solaní Sorauer) in tomato (Lycopersicon esculentum L.) / H. Thirthamolappa, C. Lohithaswa // Euphytica. — 2000. -Vol. 113.-P. 187-193.

156. Thomma, B.P.H.J. Alternaría spp.: from general saprophyte to specific parasite / B.P.H.J. Thomma // Molecular plant pathology. 2003. -Vol. 4. - P. 225-236.

157. Tisdale, W.B. Brown spot of tobacco caused by Alternaría longípes (E. & E.) / W.B. Tisdale , N. Wadkins, R.F. Comb // Phytopathology. 1931. - V. 21. - P. 641-660.

158. Unamuno, L. M. Mycological notes. VI. Some new or unfamiliar species of the Spanish mycoflora / L. M. Unamuno // Boletín de la real sociedad Española de historia natural. 1933. -Vol. 33, №6. -P. 221-235.

159. Vloutoglou T. Evaluation of tomato cultivars and hybrids for resistance to Alternaría solani infection / T. Vloutoglou // Annals of applied biology. 1999. - № 20. - P. 48-49.

160. Walker, J.C. Diseases of crucifers. Diseases of vegetable crops / J.C. Walker. — New York, London: McGraw Hill Book Co., 1952. P. 150-152.

161. Weir, T.L. RAPD-PCR analysis of genetic variation among isolates of Alternaría solani and Alternaría alternata from potato and tomato / T.L. Weir, D.R. Huff, B.J. Christ, C.P. Romaine // Mycology. 1998. - Vol. 90, № 5. - P. 813-821.

162. Wiltshire, S. P. The foundation species of Alternaría and Macrosporium / S. P. Wiltshire // Transactions of British mycological society. 1933. - Vol. 18. - P. 135-160.

163. Wulff, E.G. Protocol for DNA extraction from potato tubes / E.G. Wulff, S. Torres, G. Vigil // Plant molecular biology reporter. 2002. - Vol. 20, № 6. - P. 187a-187e.

164. Zhang, T.Y. Alternaría / T.Y. Zhang // Flora Fungorum Sinicorum. V. 16. Beijing: Science Press, 2003. - 216 p.

165. Zimmer, R.C. Interaction of light and temperature on sporulation of the carrot foliage pathogen Alternaria dauci / R.C. Zimmer, W.E. McKeen // Phytopathology. 1969. - Vol. 59. -P. 743-749.