Ускоренные методы биотестирования кормов, продуктов животного происхождения и объектов окружающей среды

Самохин, Иван Вячеславович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Ускоренные методы биотестирования кормов, продуктов животного происхождения и объектов окружающей среды
ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Ускоренные методы биотестирования кормов, продуктов животного происхождения и объектов окружающей среды"

На\1ращх рукописи

0050034оо

САМОХИН ИВАН ВЯЧЕСЛАВОВИЧ

Ускоренные методы биотестирования кормов, продуктов животного происхождения и объектов окружающей среды

06.02.05 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно - санитарная экспертиза

- 1 ДЕК 2011

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Москва-2011

005003458

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийс, научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВС] Россельхозакадемии).

Научный руководитель: доктор ветеринарных на;

професс

Долгов Виктор Андреев;

(гну вниивсг:

Официальные оппоненты: доктор биологических на;

професс

Светличкин Вячеслав Владимиров!

(ГНУВНИИВСГЭ

доктор ветеринарных на;

професс

Белоусов Василий Иванович

(ФГУ ЦНМВЛ МСХ Р

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина (ФГОУ ВПО МГАВМиБ).

Защита диссертации состоится <</!_» Г 2011 г. в ■и часов

заседании диссертационного совета Д 0(М.008.0Г при ГНУ Всероссийск научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены экологии (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийскс научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены экологии (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии).

Автореферат размещён на сайте ВАК : http://vak.ed.gov.ru «К» МоЛД^А 2011 г.

Автореферат разослан « ¡4» . 2011 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Крутько Н.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

В настоящее время актуальной проблемой является загрязнение кормов, продуктов животноводства и объектов окружающей среды различными ксенобиотиками естественного и антропогенного происхождения, количество которых может достигать десятков и сотен тысяч (Патин С.А., 1981; Трахтенберг И.М. с соавт., 1987; Филенко О.Ф., 1999, и др.). Многие загрязняющие вещества, попадая в окружающую среду, могут претерпевать в ней различные превращения, усиливая при этом своё токсическое действие.

Даже если бы было возможно определить содержание всех ксенобиотиков в объекте исследования, такая информация была бы недостаточна для каких-либо прогнозов, так как токсикометрические параметры установлены лишь для незначительной части этих веществ. Кроме того, результат комбинированного действия двух и более токсичных веществ, имеющихся в исследуемом образце в небольших количествах, предсказать достаточно сложно. Соединения, нетоксичные при изолированном действии, могут вызывать значительный патологический эффект при комбинированном влиянии. Поэтому для оценки токсичности природных вод, промышленных сбросов, почвы, продуктов, кормов и прочих объектов окружающей среды, а также новых химических веществ и внутренних сред организма человека и животных используют тесты на различных живых организмах. Предоставляя мало информации о природе поллютанта, биотестирование дает возможность с большой степенью достоверности определить степень интегральной токсичности объекта исследования (Игнатьев А.Д., 1978; Долгов В.А., 1992; Лавина С.А., 2002; Виноходов Д.О., 2003; Пожаров A.B. и др., 2003).

позволит расширить область применения данного вида анализа и усилить контроль за их ветеринарно-санитарным и экологическим благополучием. Исследования в данном направлении являются актуальными и имеют как теоретическое, так и практическое значение.

Цель и задачи исследований.

Целью исследований являлось совершенствование существующих и разработка новых ускоренных методов биотестирования кормов, продуктов животного происхождения и объектов окружающей среды.

В задачи исследований входило:

• изучить чувствительность инфузорий Тетрахимена пириформис к некоторым ксенобиотикам и влияние на неё компонентов среды;

• усовершенствовать методы биотестирования с использованием прибора «Биотестер»;

• разработать комбинированный метод оценки токсичности с помощью инфузорий тетрахимен;

• определить методические подходы к биотестированию различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля с применением прибора «БиоЛаТ - 3» ;

• изучить возможность использования биологических тест - систем для оценки токсичности объектов окружающей среды;

• разработать методические рекомендации и пособие по ускоренной биотестовой оценке качества и безопасности различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля.

Научная новизна.

комбинированный метод оценки токсичности продуктов, кормов и объектов окружающей среды с помощью инфузорий тетрахимен, заключающийся в комплексном применении различных способов пробоподготовки испытуемых образцов, что дало возможность повысить чувствительность анализа. Определены методические подходы к биотестированию объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля с применением прибора «БиоЛаТ-3», позволяющего автоматизировать ход исследований. Показана возможность использования биологических тест-систем, включающих в себя различные биотесты, для оценки токсичности объектов окружающей среды с целью повышения информативности анализа.

Практическая ценность.

На основании результатов исследований разработаны:

• Методические рекомендации «Автоматизированный метод оценки токсичности продуктов животного происхождения, кормов и объектов окружающей среды на инфузориях Paramecium caudatum и Tetrahymena pyriformis» (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 23.09.2009.);

• «Методические рекомендации по ускоренному определению токсичности продуктов, кормов и объектов окружающей среды» (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 25.09.2009.) ;

• «Методическое пособие по биотестовой оценке качества и безопасности различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля» (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 19.10.2010.).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Изучение чувствительности инфузорий тетрахимен к различным ксенобиотикам.

2. Совершенствование и разработка методов биотестирования кормов, продуктов и других объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля.

3. Применение биологических тест-систем для оценки токсичности объектов окружающей среды.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на :

• Международной конференции, посвященной 80 - летию Самарской НИВС Россельхозакадемии (г. Самара, 2009 г.);

• VI Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (г. Москва, 2010 г);

• расширенном совещании сотрудников ГНУ ВНИИВСГЭ (2011 г.).

Публикации.

Результаты исследований отражены в 4 научных статьях в том числе 1 статья - в издании, рекомендованном ВАК.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и состоит из введения, литературного обзора, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Список литературы включает 241 источник, в том числе 71 работу зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована II таблицами и 10 рисунками, содержит 3 приложения.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1.Магериалы и методы исследований.

Работа выполнена в период с 2007 по 2011 г.г. в лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы мяса, рыбы и других пищевых продуктов ГНУ ВНИИВСГЭ.

Материалом для исследований служили образцы различных кормов животного и растительного происхождения (комбикорма для сельскохозяйственных животных и птицы, корма для непродуктивных животных, кормовые добавки и др.), продуктов животноводства и птицеводства (мясо, мясопродукты, молочные продукты), рыбы и

рыбопродуктов, объектов окружающей среды (вода, почва, материалы), органических отходов животноводческих и птицеводческих предприятий (навоз, помёт). Всего было исследовано около 600 образцов. При изучении чувствительности инфузорий тетрахимен к различным токсикантам использовали химически чистые соединения (соли металлов, пестициды, фенол, микотоксины и др.).

Определение токсичности исследуемых проб проводили в соответствии с «Методическими указаниями по использованию инфузорий Tetrahymena pyriformis в качестве тест-культуры в приборе « Биотестер - 2» (Утв. ДВ МСХ РФ 16.10.2000, № 13 - 7 - 2/2157.), «Методическими указаниями по ускоренному определению токсичности продуктов животноводства и кормов» (Утв. ДВ МСХ РФ 16.10.2000., № 13 - 7 -2/2156.), ГОСТ Р 52337-2005 «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности». Биотестирование на бактериях Е. coli и дафниях Magna Str. проводили согласно «Методических рекомендаций по применению методов биотестирования при оценки качества воды в системах хозяйственно - питьевого водоснабжения» (MP № ЦОС IIB Р 005 -95). Относительную биологическую ценность продуктов и кормов определяли в соответствии с «Методическими рекомендациями для использования экспресс - метода биологической оценки продуктов и кормов» (Утв. ВАСХНИЛ. М., 1990).

В работе использовали приборы «Биотестер - 2» и «Биотестер - Н», предназначенные для регистрации поведенческой реакции инфузорий, а также прибор «БиоЛаТ - 3», дающий возможность автоматизированного учёта ростовой реакции простейших и обработки результатов анализа.

Полученные результаты исследований обработаны статистически с помощью стандартных компьютерных программ.

2. Результаты исследований 2.1. Изучение чувствительности инфузорий тетрахимен к некоторым ксенобиотикам, имеющим ветсринарно — санитарное и экологическое значение.

Мы изучали влияние на ростовую и поведенческую реакцию инфузорий Тетрахимена пириформис различных ксенобиотиков естественного и антропогенного происхождения, имеющих ветеринарно -санитарное и экологическое значение - солей металлов, в том числе тяжёлых, пестицидов, микотоксинов, фармпрепаратов и др. Определяли минимальные действующие концентрации данных веществ, вызывающие статистически достоверное снижение изучаемых гест - функций.

Результаты анализа приведены в таблице 1.

Таблица 1

Чувствительность инфузорий тетрахимен к различным ксенобиотикам.

Исследуемые вещества Минимальные ингибирующие концентрации, мг/мл

Ростовая реакция Поведенческая реакция

1 2 3

Кадмия сульфат 0,001 0,001

Свинца ацетат 0,9 0,005

Ртути йодид 0,0002 0,00001

Кобальта хлорид 0,0025 0,00001

Цинка сульфат 0,03 0,0001

Меди сульфат 0,4 0,0003

Хлорофос 0,6 1,0

ДДВФ 0,002 0,15

Циодрин 0,0005 0,10

СПАВ 0,005 0,005

Пенициллин 1,0 1,0

Стрептомицин 0,4 0,2

Продолжение таблицы 1

1 2 3

Фенол 0,1 од

Резорцин 0,02 0,0001

Салициловая кислота 0,045 0,001

Т- 2 токсин 0,00002 0,00045

Зеараленон 0,001 0,001

Диацетоксисцирпенол 0,00001 0,0001

Веррукарин 0,00001 0,00002

Пеницилловая кислота 0,002 0,0005

Из представленных в таблице 1 данных видно, что чувствительность тетрахимен к различным веществам неодинакова, как и чувствительность изученных нами тест-функций - ростовой и поведенческой реакций. С ветеринарно - санитарной и экологической точки зрения большое значение имеет высокая чувствительность тетрахимен (в особенности их поведенческой реакции) к солям тяжёлых металлов, а именно к соединениям свинца, ртути, цинка, меди. В этом случае поведенческая реакция инфузорий была на 1-3 порядка чувствительней, чем ростовая. В то же время в отношении сульфата кадмия чувствительность поведенческой и ростовой реакций была практически одинаковой.

Высокой является чувствительность тетрахимен и к некоторым изученным нами пестицидам (ДДВФ, циодрин), хотя в этом случае более показательной является ростовая реакция. Она примерно на порядок чувствительнее и в отношении Т - 2 токсина и диацетоксисцирпенола ; к другим микотоксинам чувствительность этих тест - функций примерно одинакова.

Сравнительно невысокой является чувствительность тетрахимен к антибиотикам, что неудивительно, поскольку тетрахимены и в этом

отношении стоят ближе к высшим организмам, чем к бактериям, что подтверждено и другими авторами (Долгов В.А., 1992).

Небезынтересно отметить, что поведенческая реакция является наиболее чувствительной к веществам и соединениям, оказывающим раздражающее действие на хеморецепторы клетки (резорцин, салициловая кислота, соли некоторых металлов и др.), что позволяет определять концентрации этих ксенобиотиков, не приводящие к гибели тест - организмов, часто на уровне их МДУ. В то же время, если вещество не обладает подобным действием на клеточную оболочку инфузорий (например, пестициды, некоторые микотоксины), то хемотаксис тетрахимен может не проявляться даже при летальных концентрациях данных соединений.

При изучении влияния свойств среды (биосистемы) на проявление токсического действия ксенобиотиков в качестве модельных токсикантов нами использованы соли тяжёлых металлов - сульфат цинка, йодид кадмия и ацетат свинца, которые вносились в питательную среду в концентрациях, вызывающих минимальное (1Смин) и 50 % - ное (Ю50) ингибирующее воздействие на ростовую реакцию тетрахимен. Исследовали проявление токсического эффекта данных солей в водной среде, а также в средах, содержащих белки животного (мясо) и преимущественно растительного (комбикорм) происхождения.

Результаты исследований приведены в таблице 2.

Таблица 2.

Среднее количество клеток в поле зрения.

Среды Контроль Цинка сульфат Кадмия йодид Свинца ацетат

Юмин 1С50 Юмин 1Сзо 1Смин 1С50

Вода 1,2 0,8 0,5 0,7 0,6 0,7 0,4

Вода + мясо 28,4 12,4 4,2 10,2 3,0 8,0 1,2

Вода + комбикорм 22,1 11,8 4,3 11,1 2,9 7,6 2,0

Из представленных в таблице 2 данных видно, что состав среды, в которой находятся токсиканты, существенно влияет на проявление их токсических свойств, значительно снижая последние. Рост инфузорий в среде, содержащей животные и растительные белки, при одном и том же содержании токсических веществ был в несколько раз выше, чем на безбелковой среде. Эта закономерность проявляется как при использовании минимальных, так и 50 % - ных ингибирующих концентраций.

Снижение токсичности солей тяжёлых металлов можно объяснить связыванием их с молекулами белка (его активными группами, прежде всего сульфгидрильными) и происходящей при этом их частичной детоксикацией. В нашем случае не выявлено заметных различий в детоксикационном эффекте белков мяса и смеси растительных белков, составляющих преимущественную часть комбинированных кормов.

Наиболее показательно снижение токсичности ксенобиотиков в белковой среде проявляется при изучении их концентраций, близких к летальным для тест - организма. Нами установлено, что наличие в среде белка значительно снижает токсическое действие ксенобиотиков на инфузорий. Так, летальная концентрация сульфата кадмия в пептонной среде превышала таковую в водной среде в 5 раз, сульфата меди - в 24 раза, йодида ртути - в 5 раз, сульфата цинка - в 20 раз, нитрита натрия - в 1,5 раза, ацетата свинца - почти в 10 раз, карбоната таллия - в 14 раз, пикриновой кислоты - более чем в 2 раза.

Говоря о чувствительности инфузорий тетрахимен к различным токсическим веществам, небезынтересно было сравнить чувствительность методов определения токсичности на инфузориях, а также высших животных (мышах, кроликах), использование которых предусмотрено существующими нормативными документами.

Объектом исследований служили образцы комбикормов для сельскохозяйственных животных и птицы. Поскольку при проведении токсикологических испытаний кормов процент выявления токсичных

образцов сравнительно мал, в наших опытах мы использовали лишь те образцы, которые были отобраны в течение определённого времени в Испытательной лаборатории ВНИИВСГЭ и являлись токсичными для инфузорий. Их сравнительная оценка на других тест - объектах (мыши, кролики) давала возможность сопоставления результатов анализа и определения степени чувствительности различных организмов.

Полученные нами данные показывают, что из исследованных 16 образцов комбикормов, токсичных для инфузорий, для мышей токсичными оказались 12, т.е. 75,0 %, для кроликов (с учётом слаботоксичного образца) -7 (43,8 %). Количество токсичных образцов, выявленных на кроликах с помощью кожной пробы, было гораздо меньше (на 31,7 %), чем на мышах, хотя данная проба является одной из основных при оценке токсичности кормов. Она основана на дермонекротическом действии токсичных веществ, главным образом микогенного происхождения, в то время как другие токсиканты (в том числе и ряд микотоксинов) таким действием не обладают. Таким образом, использование биотестирования при оценки токсичности кормов позволяет с наименьшими затратами времени и средств обнаруживать более высокий процент токсичных образцов, что очень важно при проведении скрининговых и мониторинговых исследований.

2.2. Модификация метода определения токсичности и биологической ценности с помощью прибора « Биотестер ».

Прибор «Биотестер» позволяет регистрировать поведенческую (хемотаксическую) реакцию инфузорий. С целью расширения его функциональных возможностей нами проведена модификация данного метода, позволяющая определять выживаемость и изменение ростовой (генеративной) тест - функции тетрахимен как при определении токсичности исследуемых объектов, так и при изучении биологической ценности продуктов и кормов.

Определение токсичности.

Принцип метода заключается в предварительной инкубации исследуемых продуктов, кормов или других объектов в водной среде с инфузориями в течение 3-х часов во флаконах из - под антибиотиков, последующем переносе содержимого в фотометрические кюветы, наслаивании дистиллированной воды и фотометрировании на приборе «Биотестер - 2» или «Биотестер - Н». При этом в верхнюю часть кюветы, содержащую дистиллированную воду, выходят выжившие в исследуемой среде инфузории. Если исследуемый объект оказался нетоксичным, то все инфузории выходят в верхнюю часть кюветы; достоверное снижение их выхода или его отсутствие свидетельствует о той или иной степени токсичности продукта.

Такой методический подход позволяет облегчить труд исследователя, повысить производительность анализа (при большом количестве проб), а главное - сделать его более объективным, с количественным значением результатов измерений и возможностью их статистической обработки.

В таблице 3 приведены результаты оценки токсичности проб фуражного зерна, комбикормов для сельскохозяйственной птицы и свиней, речной воды, почвы и сырьевой целлюлозы, проведённой общепринятым методом (визуальная оценка выживаемости инфузорий под микроскопом) и модифицированным (определение величины хемотаксической реакции).

Таблица 3.

Результаты анализа токсичности различных объектов общепринятым и модифицированным методами.

N Исследуемый объект Общепринятый Модифицированный

п/п метод метод (усл. ед.)

1 2 3 4

1. Зерно фуражное не токсично 125+4

2. Зерно фуражное не токсично 120+7

3. Зерно фуражное не токсично 100 + 6

4. Зерно фуражное слаботоксично 92 + 8

Продолжение таблицы 3

1 2 3 —4

5. Комбикорм для птиц не токсичен 129 + 4

6. Комбикорм для птиц токсичен 0

7. Комбикорм для птиц слаботоксичен 85+10

8. Комбикорм для птиц слаботоксичен 81+7

9. Комбикорм для птиц не токсичен 126 + 8

10. Комбикорм для птиц не токсичен 98 + 6

И. Комбикорм для птиц токсичен 0

12. Комбикорм для птиц слаботоксичен 75 + 10

13. Комбикорм для свиней слаботоксичен 78 + 8

14. Комбикорм для свиней токсичен 0

15. Комбикорм для свиней не токсичен 131+5

16. Вода речная слаботоксична 90 + 8

17. Вода речная не токсична 102 + 4

18. Вода речная не токсична 116 + 8

19. Почва не токсична 123 + 6

20. Почва слаботоксична 75+9

21. Почва слаботоксична 81+6

22. Целлюлоза сырьевая токсична 0

23. Контроль 122 + 6

Из представленных в таблице данных видно, что в целом результаты анализов, полученных общепринятым и модифицированным методами, сопоставимы и практически совпадают. В то же время интересно отметить тот факт, что три исследуемые пробы (зерно фуражное, комбикорм для птиц и речная вода, соответственно номера 3,10 и 17), которые определялись при

визуальном контроле под микроскопом, как нетоксичные, при анализе с помощью приборного метода обнаруживали хотя и небольшое, но статистически достоверное снижение хемотакси ческой реакции -соответственно на 18,0 % ; 19,7 % и 16,4 %. Это свидетельствует о неблагоприятном воздействии исследуемых образцов на инфузорий, что выражается в снижении их активности и, по видимому, в гибели единичных клеток, что при микроскопировании обнаружить не всегда возможно.

Исходя из полученных нами данных, это наблюдается при ингибировании хемотаксиса на 16,4 - 19,7 %. При более сильном ингибировании (на 24,6 — 38,5%) слабая степень токсичности может быть обнаружена уже при визуальном контроле под микроскопом.

Таким образом, применение приборной регистрации результатов токсикологического анализа на инфузориях тетрахименах позволяет повысить его объективность и информативность, что имеет непосредственное практическое значение. Предложенный нами метод позволяет также облегчить труд оператора и при массовом анализе повысить его производительность.

Определение относительной биологической ценности (ОБЦ).

При определении относительной биологической ценности продуктов и кормов первую часть анализа (до фиксации клеток) проводят так, как описано в «Методических рекомендациях для использования экспресс -метода биологической оценки продуктов и кормов» (М., 1990). Спустя 4 суток содержимое флаконов с выросшими инфузориями переносят в фотометрические кюветы и сверху наслаивают по 2,0 мл дистиллированной воды. Через 30 минут измеряют концентрацию клеток в верхней части кюветы на приборе «Биотестер» и соотносят полученные значения с таковыми при фотометрии контрольного образца, которые принимают за 100%. Нами проведена биологическая оценка различных продуктов и кормов с использованием как общепринятого, так и модифицированного методов. Результаты анализа представлены в таблице 4.

Таблица 4

Результаты определения ОБЦ различных продуктов и кормов общепринятым и модифицированным методами.

N п/п Исследуемые продукты Общепринятый метод Модифицированный метод

Количество инфузорий в 1 мл среды х 104 ОБЦ, в % к казеину Величина тест -реакции, усл. ед. ОБЦ, в % к казеину

1. Мясо кур 41,07+1,25 120,1 311 ± 10 121,5

2. Говядина 45,28 + 0,64 132,4 335 ±8 130,9

3. Свинина 48,05 + 0,81 140,5 361 ±9 141,0

4. Колбаса варёная 27,50 ± 0,35 80,4 208 + 8 81,2

5. Творог 39,43 + 1,05 115,3 292+ 12 114,1

6. Молоко пастеризованное 44,49 + 0,95 130,1 329+ 10 128,5

7. Треска 35,02 + 0,65 102,4 266 + 9 103,9

8. Комбикорм для цыплят-бройлеров 26,12 + 1,10 76,4 199+11 77,7

9. Соевая мука 27,80 + 0,65 81,3 206+ 10 80,5

10. Пшеница 20,62 + 0,85 60,3 150 + 6 58,6

11. Овёс 27,08 + 1,10 79,2 207 ±7 80,9

12. Просо 13,89 + 0,64 40,6 107 + 7 41,8

13. Сечка кукурузная кормовая 16,59 + 0,70 48,5 128 ±5 50,0

14. Глютен кукурузный 25,41+0,90 74,3 186 + 8 72,7

15. ЗЦМ для телят 37,48 ±1,05 109,6 287 ±9 112,1

16. Казеин (контроль) 34,20+ 1,10 100,0 256 ±9 100,0

Как видно из приведённых в таблице данных, результаты анализа, полученные с помощью модифицированного (приборного) метода, практически полностью совпадают с данными, полученными общепринятым методом (коэффициент корреляции равен 0,9). Если же учесть значительную экономию времени, а также снижение затрат сил исследователя на проведение анализа (визуальный подсчёт клеток под микроскопом является достаточно утомительным), то практическое применение модифицированного метода является более продуктивным, в особенности при большом количестве исследуемых проб.

2.3. Разработка комбинированного метода оценки токсичности.

При определении токсичности продуктов, кормов и других объектов окружающей среды (почва, различные материалы) используется, как правило, водная среда, в которую вносят исследуемые объекты, или анализируются их водные экстракты. В то же время не все токсиканты являются водорастворимыми (например, некоторые микотоксины, пестициды и др.), и если исследуемые продукты подвергаются лишь водной экстракции, то существует вероятность их необнаружения.

В связи с этим нами предложен методический подход, заключающийся в одновременном комбинированном использовании как нативного продукта в водной среде, так и экстрактов, полученных с помощью органических растворителей, позволяющих экстрагировать токсиканты, не растворимые в воде.

На первом этапе исследований испытуемый продукт, корм или другой объект вносится во флаконы из - под антибиотиков, содержащие 2 мл дистиллированной воды, туда же добавляется культура инфузорий тетрахимен и в течение 3-х часов определяется их выживаемость, на основании чего делается заключение о степени токсичности исследуемого образца. Второй этап исследований, который осуществляется параллельно с первым, состоит в том, что анализируемые пробы подвергаются экстракции ацетоном, 0,1 мл экстракта вносят во флаконы из - под антибиотиков,

выпаривают до полного исчезновения запаха ацетона, приливают 2,0 мл дистиллированной воды и выдерживают на кипящей водяной бане в течение 15 мин., после чего тестируют на инфузориях тетрахименах.

Результаты проведённых нами исследований различных кормов, продуктов и объектов окружающей среды (полимерных материалов, почвы) общепринятым и комбинированным методами представлены в таблице 5.

Таблица 5.

Результаты анализа токсичности кормов, продуктов и объектов окружающей среды.

Исследуемые Количество проб

объекты Общепринятый Комбинированный

метод метод

1 2 3

Фуражное зерно и комбикорма

- исследовано проб 143 143

- обнаружено: слаботоксичных 18 29

токсичных 4 5

Мясокостная мука

- исследовано проб 24 24

- обнаружено: слаботоксичных 9 11

токсичных 3 3

Мясо (говядина, мясо птицы)

- исследовано проб 26 26

- обнаружено: слаботоксичных 1 1

токсичных - -

Кормовые дрожжи

- исследовано проб 18 18

- обнаружено: слаботоксичных 5 7

токсичных 3 3

Продолжение таблицы 5

1 2 3

Полимерные материалы

- исследовано проб 12 12

- обнаружено: слаботоксичных 5 7

токсичных 2 3

Почва

- исследовано проб 38 38

- обнаружено: слаботоксичных 12 21

токсичных 4 5

Из представленных в таблице данных видно, что при использовании комбинированного метода, включающего в себя исследование как нативных продуктов в водной среде, так и ацетоновых экстрактов проб, практически во всех случаях чувствительность и информативность биотестового анализа заметно повышается, что находит отражение в увеличении числа обнаруживаемых слаботоксичных и токсичных проб. Это происходит при испытании образцов фуражного зерна и комбикормов, мясокостной муки, кормовых дрожжей, полимерных материалов и почвы. В отношении мяса оба метода показали одинаковую чувствительность, что объясняется исследованием сырья, полученного от убоя клинически здоровых животных.

В среднем количество обнаруживаемых слаботоксичных проб при использовании комбинированного метода возрастало на 22-75 % , токсичных - на 25-50 %. На наш взгляд, применение данного методического подхода может быть целесообразно при исследовании продуктов и кормов растительного происхождения, которые могут содержать продукты жизнедеятельности плесневых грибов (микотоксины), а также пестициды; при оценке токсичности почвы, в которую попадают различные ксенобиотики как естественного, так и антропогенного происхождения

(пестициды, гербициды, нефтепродукты и др.), а также полимерных материалов.

2.4. Определение методических подходов к биотестированию различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля с помощью прибора «БиоЛаТ- 3».

Создание автоматизированных методов биотестирования является перспективным современным направлением исследований, поскольку данные методы облегчают труд оператора и повышают его производительность. Из последних разработок заслуживает внимания автоматизированная биотехническая система оценки безопасности пищевых продуктов и кормов (Черемных Е.Г., 2004), на основе которой был создан прибор «БиоЛаТ-3», позволяющий проводить определение токсичности проб с одновременным использованием двух видов инфузорий (парамеций и тетрахимен) и регистрацией как выживаемости этих биотестов, так и ростовой реакции (у тетрахимен), что существенно повышает информативность анализа.

Прибор предназначен для подсчёта подвижных частиц (инфузорий) с размерами от 0,02 х 0,02 до 1,0 х 1,1 мм. Он представляет собой электронно -механическое устройство, работой которого управляет компьютерная программа AutoCiliata ХР, и подключается к компьютеру с помощью стандартного кабеля интерфейса USB. Ввод видеосигнала осуществляется по интерфейсу USB 2.0.

Программа работает под управлением Windows ХР с использованием DirectX 9.О. Она позволяет вводить и обрабатывать изображение лунки с инфузориями через заданные промежутки времени в течение экспозиции их в пробах. Исследование может осуществляться в 3-х режимах: экспрессный (до 3 часов), краткосрочный ( 8-24 часа) и длительный ( более 24 часов).

Разработанные, в том числе и с нашим участием, методические подходы к проведению биотестового анализа позволяют проводить ускоренную оценку токсичности самого широкого круга объектов - продуктов животного

происхождения (мясо и мясопродукты, молоко и молочные продукты, яйца, рыба и рыбопродукты), кормов для сельскохозяйственных и непродуктивных животных (зерно фуражное и продукты его переработки, комбикорма, мясокостная и рыбная мука, жмыхи , шроты, кормовые дрожжи и др.), объектов окружающей среды (природные и сточные воды, почва, полимерные и строительные материалы, воздух, органические отходы сельскохозяйственных предприятий). Кроме того, прибор «БиоЛаТ-3» можно использовать для подсчёта выросших клеток тетрахимен при определении относительной биологической ценности продуктов и кормов.

Оценка токсичиости вышеуказанных объектов осуществляется с помощью метода, состоящего из одного, двух и трех последовательных этапов:

- на первом этапе оценивают выживаемость в течение 3-х часов инфузорий Paramecium caudatum в водных экстрактах и водных растворах ацетоновых экстрактов исследуемых объектов;

- на втором этапе производят анализ прироста инфузорий Tetrahymena pyriformis в пробах исследуемых объектов в течение 8-24 часов;

- при необходимости на третьем этапе продолжают экспозицию инфузорий Tetrahymena pyriformis в пробах исследуемых объектов до 2-3 суток (при отсутствии выраженного загрязнения среды посторонней микрофлорой).

При определении относительной биологической ценности продуктов и кормов с помощью прибора «БиоЛаТ - 3» первую часть анализа (до фиксации клеток инфузорий) проводят так, как описано в соответствующих методических рекомендациях.

После окончания 4 - суточной инкубации тетрахимен во флаконах с исследуемым продуктом их содержимое переносят в пробирки (диаметром 1,3 - 1,4 см и высотой 5-6 см), сверху наслаивают дистиллированную воду. Спустя 30 минут по 0,5 мл взвеси клеток из верхнего слоя переносят в

лунки планшета. Затем производят автоматический подсчёт количества выросших клеток в контрольных и опытных пробах и рассчитывают показатель относительной биологической ценности (ОБЦ).

Такой методический подход наиболее удобен при большом количестве исследуемых проб, так как существенно облегчает работу исследователя и повышает объективность анализа.

2.S. Изучение возможности использования биологических тест -систем для оценки токсичности объектов окружающей среды.

Одним из перспективных путей повышения информативности биотестирования является использование в анализе нескольких тест -организмов. Считается (Трахтенберг И.М. и др., 1987; Кабиров P.P. и др., 1997), что наличие в тест - системе представителей нескольких видов даёт больше оснований для переноса полученных данных на высших животных.

В наших исследованиях мы изучали возможность применения биологических тест - систем при биотестировании объектов окружающей среды (воды, почвы), а также при оценке токсичности органических отходов животноводства (навоза, помёта).

При биотестировании объектов окружающей среды (воды, почвы) мы использовали трёхкомпонентную тест - систему, состоящую из бактерий Е. coli, инфузорий Tetrahymena pyriformis и дафний Magna Str.

При исследовании 20 проб воды и 12 проб почвы в районе с интенсивной промышленной и сельскохозяйственной деятельностью установлено, что при использовании тест - системы количество токсичных и слаботоксичных проб воды увеличилось по сравнению с применением отдельных тест - организмов (бактерий, инфузорий и дафний) соответственно на 75,0 %, 16.7 % и 40,0 %. При биотестировании почвы это увеличение составило соответственно 80,0 %, 50,0 % и 28,6 % . Наиболее информативными биотестами, как видно из приведённых данных, являлись инфузории и дафнии.

Биотестовая система использовалась нами также при оценке токсичности органических отходов животноводческих и птицеводческих предприятий. В этом случае тест - система включала в себя инфузорий Тетрахимена пириформис и бактерий Е. coli, которые в наибольшей степени подходят к биотестированшо данных объектов. Кроме водной вытяжки из отходов нами предложено также использовать их ацетоновые экстракты, что повышает информативность биотестирования и позволяет исследовать отходы при минимально допустимом разведении.

Если при обычном микроскопяровании проб можно использовать мутные экстракты, то при применении прибора «БиоЛаТ-3» исследуемые экстракты должны быть прозрачными, что достигается их фильтрацией или центрифугированием.

Исследование различных видов органических отходов животноводческих и птицеводческих предприятий, благополучных в ветеринарно - санитарном отношении (свежего и перепревшего птичьего помёта, навоза крупного рогатого скота, свиней и лошадей) с использованием данной тест - системы и разработанных нами методических подходов, проведённые совместно с лабораторией зоогигиены и охраны окружающей среды от загрязнения отходами животноводства ГНУ ВНИИВСГЭ (зав. лабораторией профессор Тюрин В.Г.), показали, что как водные, так и ацетоновые вытяжки из навоза и помёта благополучных в ветеринарно - санитарном отношении сельскохозяйственных предприятий не оказывали отрицательного влияния на показатели жизнедеятельности инфузорий (выживаемость, подвижность, характер движения, генеративную и хемотаксическую реакции, морфологию клеток). При биотестировании на бактериях Е. coli не обнаружено подавления окислительной активности фермента дегидрогеназы, что свидетельствует об отсутствии токсичности исследуемых проб и подтверждает полученные ранее данные других исследователей (Лопата Ф.Ф., 2002, и др.).

ВЫВОДЫ.

1. Установлено, что инфузории тетрахимены проявляют высокую чувствительность к различным ксенобиотикам естественного и антропогенного происхождения, имеющим ветеринарно - санитарное и экологическое значение (солям тяжёлых металлов, пестицидам, микотоксинам и др.). Для повышения информативности анализа необходимо регистрировать в комплексе все основные тест - функции простейших - их выживаемость, ростовую и поведенческую реакции, чувствительность которых к различным токсическим веществам не всегда одинакова.

2. Показано, что чувствительность тетрахимен к ряду токсикантов существенно зависит от компонентов среды (главным образом, белковых), которые могут значительно (в 2-24 раза) снижать проявление токсического эффекта испытуемого вещества, что необходимо учитывать при исследовании объектов сложного химического состава (продуктов, кормов и др.) и разработке методов их анализа.

3. Усовершенствованы методы биотестирования с использованием прибора «Биотестер», что позволило расширить его функциональные возможности и определять не только хемотаксис инфузорий, но и их ростовую реакцию. Предложенные методические подходы дают возможность применять данный прибор как для оценки токсичности различных объектов, так и для определения биологической ценности продуктов и кормов.

4. Разработан комбинированный метод определения токсичности с помощью инфузорий тетрахимен, заключающийся в одновременном тестировании нативных продуктов в водной среде и их ацетоновых экстрактов. При этом чувствительность анализа и его информативность повышается в среднем на 25 - 60 % в зависимости от исследуемого субстрата.

5. Определены методические подходы к биотестированию различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля с помощью прибора «БиоЛаТ - 3», позволяющего автоматизировать ход исследований.

Показана возможность его применения при оценке токсичности кормов, продовольственного сырья животного происхождения и объектов окружающей среды (воды, почвы, органических отходов животноводческих предприятий и др.), а также при определении биологической ценности продуктов и кормов.

6. Изучено использование биологических тест - систем, состоящих из различных тест - организмов (бактерий, инфузорий и дафний), для оценки токсичности объектов окружающей среды (воды, почвы) и органических отходов животноводческих и птицеводческих предприятий (навоза, помёта), что позволило повысить информативность анализа и его объективность.

7. Показана возможность практического применения усовершенствованных и разработанных нами ускоренных методов биотестирования при оценке безопасности самых различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля - продовольственного сырья животного и растительного происхождения, рыбы, кормов и кормовых добавок для сельскохозяйственных и непродуктивных животных, объектов окружающей среды (воды, почвы, материалов, органических отходов сельскохозяйственных предприятий).

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.

Для практического применения могут быть рекомендованы разработанные нами в соавторстве следующие методические рекомендации и пособие:

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

1. Самохин И.В, Применение биотестирования для оценки безопасности объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля/ Долгов В .А., Лавина С.А., Черемных Е.Г., Самохин И.В. // Материалы Международной конференции, посвященной 80 - летаю Самарской НИВС Россельхозакадемии. - Самара, 2009. - С. 127-128.

2. Самохин И.В. Биотестирование органических отходов животноводческих и птицеводческих предприятий/ Долгов В.А., Тюрин

B.Г., Лавина С.А., Самохин И.В. // Материалы Международной конференции, посвященной 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии. - Самара, 2009. - С. 124-125.

3. Самохин И.В., Применение биотестирования для оценки безопасности объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля/ Долгов В.А., Лавина С.А., Самохин И.В. // Международный ветеринарный конгресс по птицеводству. - Москва, 2010,- С. 22-23.

4. Самохин И.В. Автоматизированный метод биотестирования продуктов животного происхождения, кормов и других объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля/ Долгов В.А., Лавина

C.А., Арно Т.С., Самохин И.В., Черемных Е.Г. // «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». - 2010. - №2(4). - С. 14 - 17.

ВНИИВСГЭ, 2011., г. Москва, Звенигородское ш„ д., 5, Заказ 394/1, тираж 80 экз.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Самохин, Иван Вячеславович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Ветеринарно - санитарное и экологическое значение биотестирования кормов, продуктов животноводства и объектов окружающей среды.

1.2. Характеристика тест - организмов, используемых при биотестировании.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследований.

2.1.1. Материалы исследований.

2.1.2. Методы исследований.

2.1.2.1. Метод оценки токсичности, основанный на регистрации поведенческой ( хемотаксической ) реакции тетрахимен.

2.1.2.2. Методы оценки токсичности, основанные на определении выживаемости инфузорий и их ростовой ( генеративной ) реакции.

2.1.2.3. Методы оценки токсичности с использованием бактерий

E.coli и дафний.

2.1.2.4. Метод определения относительной биологической ценности продуктов и кормов.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Изучение чувствительности инфузорий тетрахимен к некоторым ксенобиотикам, имеющим ветеринарно - санитарное и экологическое значение.

2.2.2. Модификация метода определения токсичности и биологической ценности с помощью прибора «Биотестер».

2.2.3. Разработка комбинированного метода оценки токсичности.

2.2.4. Определение методических подходов к биотестированию различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля с помощью прибора «БиоЛаТ - 3».

2.2.5. Изучение возможности использования биологических тест - систем для оценки токсичности объектов окружающей среды.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Ускоренные методы биотестирования кормов, продуктов животного происхождения и объектов окружающей среды"

Актуальность темы.

В настоящее время большое значение приобретают проблемы, связанные с экологическим благополучием объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля (животноводческих объектов, воздуха, воды, почвы, кормов, строительных и полимерных материалов, продукции животноводства). Одним из основных показателей безопасности является их безвредность (отсутствие токсичности) для организма животных и человека. Изменения биосферы из-за широкомасштабных промышленных и сельскохозяйственных производств, накопление отходов оказывают негативные воздействия на все живые организмы, в том числе и на самого человека. Стремительно меняющаяся среда нашей жизни становится все более искусственной. В реальной ситуации на живые организмы оказывает влияние комплекс физических, химических и биологических факторов, совместное действие которых, в зависимости от природы, интенсивности и порядка воздействия агентов, обусловливает принципиально разные типы ответной реакции организма. Многие загрязняющие вещества, попадая в окружающую среду, могут претерпевать в ней различные превращения, усиливая при этом свое токсичное действие [95, 127, 160, 162, 214]. Поэтому результирующий отклик биологической системы на комбинированное воздействие экотоксикантов нельзя предвидеть, исходя только из информации о результатах физико-химического анализа или эффектах их раздельного действия. По этой причине наиболее востребованными оказались методы интегральной оценки качества экосистемы и отдельных ее компонентов (воды, почвы, воздуха), в том числе и биотестирование [4, 29, 48, 49, 52, 55,73].

Одним из важных направлений прикладной биотехнологии является разработка эффективных биологических методов оценки состояния разнообразных объектов внешней среды, загрязнение которых токсичными веществами в настоящее время приобрело комплексный характер. Даже если бы было возможно определить содержание всех ксенобиотиков в объекте исследования, такая информация была бы недостаточна для каких-либо прогнозов, так как токсикометрические параметры установлены лишь для незначительной части этих веществ. Кроме того, результат комбинированного действия двух и более токсичных веществ, имеющихся в исследуемом образце в небольших количествах, предсказать достаточно сложно. Соединения, нетоксичные при изолированном действии, могут вызывать значительный патологический эффект при комбинированном влиянии. Поэтому для оценки токсичности природных вод, промышленных сбросов, почвы, кормов и прочих объектов окружающей среды, а также новых химических веществ и внутренних сред организма человека и животных используют тесты на различных живых организмах. Предоставляя мало информации о природе поллютанта, биотестирование дает возможность с большой степенью достоверности определить степень интегральной токсичности объекта исследования [48, 50, 51, 73, 80, 175].

Совершенствование существующих и разработка новых ускоренных методов биотестирования кормов, продуктов животноводства и различных объектов окружающей среды (воды, почвы, воздуха, полимерных и строительных материалов, органических животноводческих отходов и др.) позволит расширить область применения данного вида анализа и усилить контроль за их ветеринарно - санитарным и экологическим благополучием. Исследования в данном направлении являются актуальными и имеют как теоретическое, так и практическое значение.

Цель и задачи исследований.

В задачи исследований входило:

• усовершенствовать методы биотестирования с использованием прибора « Биотестер »;

• разработать комбинированный метод оценки токсичности с помощью инфузорий тетрахимен;

• определить методические подходы к биотестированию различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля с применением прибора « БиоЛаТ - 3 » ; изучить возможность использования биологических тест - систем для оценки токсичности объектов окружающей среды;

Научная новизна.

Изучена чувствительность инфузорий Тетрахимена пириформис к некоторым ксенобиотикам, имеющим ветеринарно - санитарное и экологическое значение, а также влияние на неё компонентов среды. Усовершенствованы методы определения токсичности и биологической ценности с использованием прибора «Биотестер», что позволило расширить его функциональные возможности и информативность анализа. Разработан комбинированный метод оценки токсичности продуктов, кормов и объектов окружающей среды с помощью инфузорий тетрахимен, заключающийся в комплексном применении различных способов пробоподготовки испытуемых образцов, что дало возможность повысить чувствительность анализа. Определены методические подходы к биотестированию объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля с применением прибора «БиоЛаТ-3», позволяющего автоматизировать ход исследований. Показана возможность использования биологических тест - систем, включающих в себя различные биотесты, для оценки токсичности объектов окружающей среды с целью повышения информативности анализа.

Практическая ценность.

На основании результатов исследований разработаны:

• Методические рекомендации « Автоматизированный метод оценки токсичности продуктов животного происхождения, кормов и объектов окружающей среды на инфузориях Paramecium caudatum и Tetrahymena pyriformis », разделы 1,5 ( Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 23.09.2009.);

• « Методические рекомендации по ускоренному определению токсичности продуктов, кормов и объектов окружающей среды », разделы 1,4 (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 25.09.2009.);

• «Методическое пособие по биотестовой оценке качества и безопасности различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля», разделы 1,4,5 (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 19.10.2010.).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Изучение чувствительности инфузорий тетрахимен к различным ксенобиотикам.

3. Применение биологических тест - систем для оценки токсичности объектов окружающей среды.

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Самохин, Иван Вячеславович

выводы

5. Определены методические подходы к биотестированию различных * объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля с помощью прибора «БиоЛаТ - 3», позволяющего автоматизировать ход исследований. Показана возможность его применения при оценке токсичности кормов, продовольственного сырья животного происхождения и объектов окружающей среды (воды, почвы, органических отходов животноводческих предприятий и др.), а также при определении биологической ценности продуктов и кормов.

7. Показана возможность практического применения усовершенствованных и разработанных нами ускоренных методов биотестирования при оценке безопасности самых различных объектов ветеринарно - санитарного и экологического контроля -продовольственного сырья животного и растительного происхождения, рыбы, кормов и кормовых добавок для сельскохозяйственных и непродуктивных животных, объектов окружающей среды (воды, почвы, материалов, органических отходов сельскохозяйственных предприятий).

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Самохин, Иван Вячеславович, Москва

1. Абильманова К.С., Ирпенина Л.Б., Турахонов Т.М. Экспериментальный метод определения токсичности фенолов // Аналитическая химия объектов окружающей среды, Тез. докл. СПБ- Сочи, 1991.Ч.З.-С. 205.

2. Андрющинин О.П., Олексиф И.Т. Токсинорезистентность планктонных инфузорий // Материалы Всесоюз. конф. по водной токсикологии. Одесса. 1988. - С. 97.

3. Айвазова JI.E., Соколова А., Ткаченко В.Н. Исследование токсичности сточных вод йодосбросного производства // Биотестирование природных и сточных вод. М. 1981. - С. 51-57.

4. Айвазова JI.E., Гроздов А.О., Старцева А.И., Никоненко Е.М. Оценка токсичности грунтов методом биотестирования // Физиология и токсикология гидробионтов: Сб. науч. тр. Ярославль.- 1988.-С. 127-132.

5. Айвазова JI.E., Гроздов А.О., Соколова С.А. и др. Метод биотестирования водных сред с использованием инфузорий. // Методы биотестирования вод. Черноголовка. 1988. - С. 37 - 42.

6. Альтернативные методы исследований (экспресс методы) для токсико - гигиенической оценки материалов, изделий и объектов окружающей среды (методическое пособие ). М., 1999.

7. Ахутин В.М., Пожаров A.B., Попечителев Е.П. Биотестовое измерение параметров среды как основа оценки антропоэкологической ситуации // В кн.: Антропоэкологическая оценка и формирование оптимальной городской среды. JL: Изд-во АН СССР, 1988. - С. 59 -62.

8. Багдасарьян Г.А., Гениатуллин K.B. Использование микроорганизмовв контроле загрязнения окружающей среды // Гигиена и санитария.-1981. -№11.-С. 11-13.

9. Басс М.Г., Худяков П.Г., Шелегедин В.Н. Метод биотестирования сточных вод на основе бактерий Е. coli. // Биотехнология. 1993. -№7.-С. 36-40.

10. Баум X., Харатьян С.Г. Микробиологические методы определения качества белка // Известия АН СССР, сер.: Биология. 1975. - №4 -С. 533 -540.

11. Билай В.И., Курбацкая З.А. Микробиологические биотесты обнаружения микотоксинов в пищевых продуктах // Оценка загрязненности пищевых продуктов микотоксинами. М. 1985. - С. 286-296.

12. Биоиндикация загрязнителей наземных экосистем / Под ред. Шуберта Р. / М. : «Мир». 1988. - С. 350.

13. Бойкова Э.Е. Применение простейших в токсикологических исследованиях // Экспериментальная водная токсикология. Вып.15. -Рига: Зинатне. 1991.-С. 155-164.

14. Болдырева Н. М. Оценка качества природных и сточных вод по биологическим показателям // Комплексный глобальный мониторинг состояния биосферы: 3-й Международный симпозиум, Ташкент; Тезисы докладов. М.: 1985. - С. 106-107.

15. Боровков A.B. Хлорелла удобный биотест при поиске микотоксинов. // Микотоксины. : Тез. док. Оренбург. - 1977. - С. 68-69.

16. Брагинский Л.П. Пестициды и жизни водоёмов. Киев. - 1972.

17. Брагинский Л.П. Методологические аспекты токсикологического биотестирования на Daphnia magna Str. и других ветвистоусыхракообразных (критический обзор) // Гидробиологический журнал.-2000.-т.36 .- №5.- С.50 71.

18. Бресткина М.Д., Данильченко О.П., Тушмалова H.A. Hydra attenuata в качестве тест объекта при оценке загрязнения сточных и природных вод // Методы биотестирования и биоиндикации природных вод. J1. - 1987. - С. 71 - 76.

19. Бурковский И.В. Экология свободноживущих инфузорий. М.: МГУ, 1984.

20. Варфоломеев С.Д. Биосенсоры // Соросовский Образовательный Журнал. 1997. - № 1. - С. 45.

21. Васильева Г.А. Исследования по экологии ветвистоусых в связи с выращиванием их как живого корма для рыб // Труды Моск. технол. ин-та рыбной пром. 1959. - т. 10. - С. 88 - 138.

22. Веротченко М.А., Хохлов Н.Ф., Метёлкин А.Н. Взаимосвязь между уровнями загрязнения тяжелыми металлами почв и кормовых растений. Материалы 4 научной конференции с международным участием. Великий Новгород. 2003.- С. 189-192.

23. Виноходов Д. О. Токсикологические исследования кормов с использованием инфузорий. СПб: АВН. - 1995. - 80 с.

24. Виноходов Д. О. Математическое моделирование кинетики роста культуры инфузории Colpoda steinii в периодических условиях // Архив ветеринарных наук. 1998. - Т. 1(48). - С. 121-134.

25. Виноходов Д. О. Виноходов В.О. Colpoda steinii как тест -организм. // Инфузории в биотестировании: Тезисы докладов Международной заочной научно-практической конференции. -СПб. 1998.-С. 85 - 87.

26. Виноходов Д. О. Методические рекомендации по определению токсичности продуктов животноводства и кормов (микробиологическийэкспресс-метод) // Ветеринария в птицеводстве. 2003 - №5 - 6. - С. 49 -54.

27. Виноходов Д.О. Научные основы биотестирования с использованием инфузорий // Автореф. дис. доктора биол. наук: Санкт Петербург - 2007.

28. Виноходов Д. О., Виноходов В. О. Способ определения токсичности объектов внешней среды // Патент № 2039825 Российской

29. Федерации, МКИ6 С 12 О 1/02, G 01 N 33/18. М.: НПО "Поиск" Роспатента. - 1995. - 6 с.

30. Виноходов Д. О., Виноходов В. О., Гинак А. И. Биотестирование как метод научного исследования // Инфузории в биотестировании: Тезисы докладов Международной заочной научно-практической конференции. СПб. - 1998. - С. 40 - 43.

31. Виноходов Д. О., Виноходов В. О., Гинак А. И., Ананченко И. В. Зависимость "концентрация время" в острых опытах // Инфузории в биотестировании: Тезисы докладов Международной заочной научно-практической конференции. - СПб. - 1998. - С. 73 - 78.

32. Виноходов Д. О., Виноходов В. О., Гинак А. И., Земляникина Т. А. Использование инфузорий в исследованиях внутренних сред высших организмов // Архив ветеринарных наук. 1999. - Т. 1(48), ч. 3. - С. 551-577.

33. Виноходов Д.О., Пожаров A.B. Методологические особенности токсикологических тестов с инфузориями // Изв. СПбГЭТУ «ЛЭТИ». Сер. Биотехнические системы в медицине и экологии. -2006. Вып. 3-С. 60-67.

34. Воблая Л.С., Ковальчук Л.С. Экологические последствия загрязнения окружающей среды в животноводстве и меры борьбы с ними // Охрана природной среды: Экономический аспект. Донецк. 1982. -С. 36-42.

35. Воробьёва J1.C. Распространение афлатоксин образующих грибов в сырье и комбикормах // Сб. н. тр. / ВНИИ комбикорм пром - сти. 1985.-Вып. 27.-С 16-18.

36. Гениатуллин К.В. Способ распознавания загрязнителей водной среды на основе моделирования реакций гидробионтов // Гидробиологический журнал. 1989, - т. 25. - №5. - С. 80-83.

37. Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест. МУ 2.1.7.730-99.- 1999.-23 с.

38. Гиль Т.А., Балаян А.Э., Стом Д.И. Метод биотестирования по гашению люминесценции святящихся бактерий // Методы биотестирования вод: Сб. статей. Черноголовка. 1988. - С. 15-17.

39. Глухова М.Н., Фролова С.М., Субботина Г.М. Микробиологическое определение токсических веществ в природных водах // Аналитическая химия объектов окружающей среды: Тез. докл. СПб -Сочи.-1991.-ч.З.-С. 199.

40. Голубкова Э.Г., Москалева Н.В., Виссарионова Н.И, Овсянникова И.В.Сравнительное изучение резистентности парамеций и дафний к некоторым препаратам // Материалы Всесоюз. конф. по водной токсикологии. Одесса. 1988. - С. 110 - 111.

41. Горошко О.Г. Использование инфузорий Tetrahymena pyriformis в токсикологических исследованиях // Бюллетень ВИЭВ. 1987. -том 61.-С. 76-78.

42. ГОСТ ОКСТУ0017 "Вода. Определение токсичности на инфузориях" (1990).

43. ГОСТ 2936-91. Мука кормовая из рыбы, морских млекопитающих, ракообразных и беспозвоночных. Метод определения токсичности.

44. ГОСТ 13496.7-97. Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения токсичности.

45. ГОСТ Р 52337-2005. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности.

46. Дахновский В.И., Зайченко А.М. Сравнительное изучение антибиотической активности некоторых микотоксинов // Тез. докл. симп. по микотоксикологии (химия, биосинтез, определения, действие на организм). Оренбург. 1977. - С. 32 - 33.

47. Дедков, Ю.М., Котляр Е.Г. Биотестирование в системе обобщенных показателей качества воды // Материалы VI Международного конгресса "Вода: экология и технология. -2004." часть I. Москва. - 2004. - С. 263.

48. Догель В.А. Зоология беспозвоночных. М., 1981. - 606 с.

49. Долгов В.А. Методические аспекты и практическое применение ускоренной биологической оценки кормов, продуктов животноводства и других объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля: Автореф. дисс. докт. вет. наук .- М., 1992.

50. Долгов В.А. Сравнительная оценка параметров токсичности различных веществ для инфузорий тетрахимена пириформис и белых крыс // Сб. науч. трудов ВНИИВСГЭ «Проблемы ветеринарной санитарии и экологии». 1996. том 100. - С. 127 -129.

51. Долгов В.А. Лавина А., Фролова И.А. Проблемы повышения информативности биотестового анализа // Тез. докл. Межд.научной конф. «Проблемы санитарии, гигиены и экологии (дезинфекция, дезинсекция, дератизация), М. 1999. - С. 173 - 174.

52. Долгов В.А., Пермякова Н.В., Кодухова И.В. Ветеринарно-санитарное и экологическое значение биотестирования объектов окружающей среды // Тез. докл. научной конф. «Гигиена, ветеринария и экология животноводства». Чебоксары. - 1994. - С. 118.

53. Долгов В.А., Тюрин В.Г., Лопата Ф.Ф. Токсико биологическая оценка птичьего помёта // Матер. XVI конф. ВИАП « Достижения в современном птицеводстве: исследования и инновации»., Сергиев Посад. - 2009. - С. 361.

54. Егорова Е.И., Белолипецкая В.И. Биотестирование и биоиндикация окружающей среды: Уч. пособие. — Обнинск: ИАТЭ, 2000. — 80с.

55. Еськов А.П., Каюмов Р.И. Лужецкий A.C. и др. Метод токсикологической оценки полимерных материалов // Гигиена и санитария 1985, - №1. - С. 62 - 65.

56. Жандарева М.В. Влияние хлорфенолов на физиологические показатели парамеции туфельки // Физиология и токсикология гидробионтов: Сб. н. тр., Ярославль. - 1988. - С. 141 - 146.

57. Жмур Н.С. Методика определения токсичности воды и водных вытяжек из почв, осадков сточных вод, отходов по смертности и изменению плодовитости дафний. М.: АКВАРОС, 2001. - 48 с.

58. Завгородний A.B. Биотехническая система для контроля популяции микроорганизмов // Изв. СПбГЭТУ «ЛЭТИ». Сер. Биотехнические системы в медицине и экологии. 2008. - Вып. 2. - С. 55 - 61.

59. Завгородний A.B.,. Захаров И.С. Биотестовые аппаратурные средства и методы контроля локомоций инфузорий // Изв. Южного федерального ун-та: Технические науки. 2008. - № 5 (82). - С. 205 - 209.

60. Захарков С.П. Использование замедленной флуоресценции фитопланктона и перифитона для биотестирования // Тез. докл. 3 Всес. конф. по мор.биол. Севастополь, 18-20 окт. 1988 г. Киев, 1988.-С. 159- 160.

61. Захаров И.С. Математические модели локомоций микроорганизмов, используемые для создания биотестовой аппаратуры // Изв. Южного федерального ун-та: Технические науки. 2008. - №5 (82). - С. 202 -205.

62. Захаров И.С., Ваганов A.B. Измерение концентрации подвижных микроорганизмов в макро- и микрообъемах // Научное приборостроение. 2005. - Т. 14. - № 3. - С. 93 - 96.

63. Захаров И.С., Ковалевская A.C., Казанцева А.Г. Аппаратурно -регистрируемые характеристики и математическая модель гальванотаксического сигнала // Изв. СПбГЭТУ «ЛЭТИ». Сер. Биотехнические системы в медицине и экологии. 2006. -Вып. 1. -С. 52-57.

64. Захаров И.С., Пожаров A.B., Голядкин C.B., Ковалевская A.C. Биотехническая биотестовая система с использованием реакции гальванотаксиса // Изв. СПбГЭТУ «ЛЭТИ». Сер. Биотехнические системы в медицине и экологии 2005 - Вып. 1. - С. 44 - 48.

65. Захаров И.С., Пожаров А.В., Папутская Н.И., Лепяхов А.Ю. Биотестовый измерительно-вычислительный комплекс // Медицинская техника. 1995. - № 1. - С. 32 - 36.

66. Золотарёва Н.И., Якунина М.А., Карандашов В.К. Комплексный анализ вод с использованием биотестов и спектральных методов // Аналитическая химия объектов окружающей среды: Тез. докл. конф. СПБ Сочи. - 1991. - ч.З. - С. 213 - 214.

67. Золотов Ю.А. Тест-методы // Журн. аналит. химии. 1994. - Т. 49. -№ 2. - С. 149.

68. Игнатьев А.Д., Шаблий В.Я., Использование инфузорий Тетрахимена пириформис как тест объекта при биологическом исследовании в сельском хозяйстве // М. - 1978. - С. 52.

69. Игнатьев А.Д., Исаев М.И., Долгов В.А., Шаблий В.Я., Нелюбин

70. B.П. Модификация метода биологической оценки пищевых продуктов с помощью реснитчатой инфузории Те^аЬушепа рупйэпшз // Вопросы питания., 1980. №1. - С. 70 - 71.

71. Ильин М. Н. Аквариумное рыбоводство. Изд-во МГУ, 1965.

72. Исидоров В.А. Введение в химическую экотоксикологию.- СПб: Химиздат. 1999.- 144 с.

73. Кабиров Р.Р., Сагитова А.Р., Суханова Н.В. Разработка и использование многокомпонентной тест системы для оценки токсичности почвенного покрова городской территории // Экология. - 1997. - № 6. - С. 408 - 411.

74. Казаченок Е. Н., Виноходов Д. О. Влияние органических растворителей на чувствительность инфузорий к тяжелым металлам // Инфузории в биотестировании. Тезисы докладов Международной заочной научно-практической конференции. -СПб. 1998. - С. 229 - 232.

75. Карпович Т.А., Колупаев Б.И., Бейм А. М. Метод биотестирования на основе регистрации дыхательной и сердечной активности рыб // Методы биотестирования вод: Сб. статей. Черноголовка. 1988.1. C. 60 -65.

76. Карте Ф., Еахадир М., Клайп В., Лай Я.П., Палар Г., Шойнер П., « Экологическая химия ». М., «Мир», 1997. 396 с.

77. Керис Дж.-мл. Мифы, затрудняющие использование инфузорий при экотоксикологическом тестировании //Инфузории в биотестировании. Международная заочная научно-практическая конференция. СПб. - 1998. - С. 10 - 19.

78. Козлов Г., Просеков А.Ю., Афанасьев О.Ю. Сравнительная оценка относительной биологической ценности сывороточных гелей при помощи тест организма Те^аЬушепа рупЯоггшБ // Хранение и переработка сельхозсырья.- 2004.- №4.- С. 42-43.

79. Количественный химический анализ вод. Методика выполнения измерений массовой концентрации фосфат ионов в пробах природных и очищенных сточных вод фотометрическим методом восстановлением аскорбиновой кислотой. ПНД Ф 14.1:2.112-97.

80. Комарницкая Н.П., Курманов И.А., Иванов В.Г. Методика определения микотоксинов в фуражном зерне // Ветеринария. -1990. -№10-С. 57.

81. Коромыслов Г.Ф., Валихова О.И. Методы биологической оценки безвредности и токсичности микробиологического белка в кормлении лабораторных животных // Бюлл. ВИЭВ. 1983(84). -Вып. 52.-С. 10-13.

82. Крайнюкова А.Н. Биотестирование в охране вод от загрязнения // Методы биотестирования вод: Сб. статей. Черноголовка. 1988. -С. 4- 14.

83. Красовский Г.Н., Егорова H.A. Методические ошибки при использовании биотестирования в гигиенических исследованиях.-Гигиена и санитария. № 1. - С. 63 - 66.

84. Кремер Ю.Н. Биохимия белкового обмена.-Рига, 1965.

85. Курбацкая З.А. Биологические методы обнаружения микотоксинов в пищевых продуктах и кормах // Оценка загрязненности пищевых продуктов микотоксинами. М. - 1985. - С. 262 - 278.

86. Курманов И.А., Таланов Г.А. К методике определения токсичности фуражного зерна // Ветеринария. 1975. - №4. - С. 94 - 95.

87. Лавина С.А. Биотесты на основе ферментных систем для оценки токсического действия ксенобиотиков на объекты ветеринарно -санитарного и экологического контроля. Автореф. дисс. доктора биол. наук. М. 2002.- 17с.

88. Лисичкин Г.В. Химическое модифицирование поверхности минеральных веществ // Соросовский Образовательный Журнал. -1996. -№ 4. С. 52.

89. Лопата Ф.Ф. Ветеринарно санитарное состояние навоза различных видов сельскохозяйственных животных. // Автореф. дисс. кандидата вет. наук. М., 2008.

90. Макрушин A.B. Биологический анализ качества вод. Л.: 1974.

91. Международный стандарт ИСО 11268-1 «Определение загрязнения по острой летальной токсичности у земляных червей».

92. Международный стандарт ИСО 11268-2 «Определение загрязнения по подавлению репродуктивности у земляных червей».

93. Международный стандарт ИСО 11268-3 «Определение загрязнения по острой летальной токсичности у земляных червей в полевых условиях».

94. Методика определения токсичности воды по смертности и изменению плотности дафний. ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.5 2000.

95. Методика определения токсичности проб воды экспресс методом на приборе «Биотестер». НИИ гигиены и профпатологии МЗ СССР. Л. - 1991.

96. Методические рекомендации по биологической оценке продуктов животноводства и кормов с использованием тест организма Тетрахимена пириформис. М., 1977.

97. Методические рекомендации по использованию инфузорий Тетрахимена пириформис для токсико биологической оценки сельскохозяйственной продукции. Киев, 1988.

98. Методические рекомендации для использования экспресс метода биологической оценки продуктов и кормов. Утв. ВАСХНИЛ. М., 1990.

99. Методические рекомендации «Использование инфузорий (Тетрахимена пириформис) в качестве тест культуры в приборе « Биотестер - 2» (экспресс - метод)». Утв. Гос. лечебно -оздоровительным объединением. М., 1991.

100. Методические рекомендации по применению методов биотестирования при оценки качества воды в системах хозяйственно питьевого водоснабжения. МР № ЦОС ПВ Р 005 -95.

101. Методические рекомендации по определению ферментативной активности в культурах клеток Tetrahymena pyriformis при проведении биотестирования. Утв. Отделением вет. медицины РАСХН. М., 2002.

102. Методические рекомендации по применению биотестов для оценки токсичности продуктов животноводства. Утв. Отделением вет. медицины РАСХН. М., 2004.

103. Методические рекомендации по проведению автоматизированного биотестирования безопасности кормов на инфузориях Paramecium caudatum с помощью устройства БиоЛаТ. Утв. Отделением вет. медицины РАСХН. М., 2005.

104. Автоматизированный метод определения токсичности продуктов животноводства, кормов и объектов окружающей среды (методические рекомендации). Утв. Отделением вет. медицины РАСХН. М., 2006.

105. Методическое руководство по биотестированию воды РД 118-0290.- М., Госкомитет по охране природы. - 1991.- 48 с.

106. Методические указания и методические основы биотестирования и определения генетической опасности отходов, поступающих в окружающую среду. РД 64 085 - 89.

107. Методические указания по установлению эколого рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. М.: ВНИРО, 1998.

108. Методические указания по ускоренному определению токсичности продуктов животноводства и кормов. Утв. ДВ МСХ РФ 16.10.2000., № 13-7-2/2156.

109. Методические указания по использованию инфузорий Tetrahymena pyriformis в качестве тест культуры в приборе « Биотестер - 2 ». Утв. ДВ МСХРФ 16.10.2000, № 13-7-2/2157.

110. Методические указания по определению токсичности продуктов переработки кукурузы (глютена, глютенового корма, зародыша, сечки). Утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ 15.07.2002, № 13-5-02/0525.

111. Методы биотестирования вод. Сб. статей. Черноголовка. - 1988.

112. Мичукова М.В., Канарский A.B. Области использования культуры Daphnia magna Str. I // Вестник Казанского технологического университета. — Казань: КГТУ, 2007. № 3-4. - С. 106 - 123.

113. Мичукова М.В., Канарский A.B., Канарская З.А. Биотестирование сточных вод пищевого производства на Daphnia magna Str. I // Хранение и переработка сельхозсырья. 2006. - № 1. - С. 15 - 16.

114. Набока М.В. Об использовании биотестирования в гигиенической оценке качества воды // Гигиена и санитария. 1993. - № 6. - С. 75 -76.

115. Одум Ю. Основы экологии. М.: Мир, 1986. - 376 с.

116. Орлов A.B. Разработка и модификация приборных методов определения безопасности объектов ветеринарно санитарного контроля. Автореф. дисс. кандидата биологических наук. М., 2001,22 с.

117. Остроумов С.А., Борисова Е.В., Ленова Л.И., Максимов В.Н. Воздействие сульфанола на культуру водоросли Dunaliella asymmetrica и проростки Fagopyrum esculentum II Гидробиол. журнал. 1990. - Т. 26. - № 2. - С.96 - 98.

118. Остроумов С.А., Головко А.Э. Биотестирование токсичности поверхностно-активного вещества (сульфанола) с использованиемпроростков риса как тест объекта // Гидробиол. Журнал. - 1992. -Т. 28.-№3,- С. 72- 75.

119. Остроумов С.А., Семыкина H.A. Реагирование проростков макрофитов на загрязнение водной среды высокомолекулярными ПАВ // Экология. 1991. - № 4. - С. 83 - 85.

120. Патин С.А. Биотестирование как метод изучения и предотвращения загрязнения водоемов // Биотестирование природных и сточных вод. М.: Наука. - 1981. - С. 7 - 16.

121. Перечень рыбохозяйственных нормативов: предельно допустимых концентраций (ПДК) и ориентировочно безопасных уровней воздействия (ОБУВ) вредных веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. ВНИРО, М. 1999.

122. Пермякова О.В., Фёдорова JI.B. Токсичность сточных вод как аспект комплексной оценки загрязненности окружающей среды (на примере г. Волгограда) // Экологическая оценка и картографирование. 2004. -№ 3. - С. 106-112.

123. Пижл В. Значение дождевых червей как биоиндикаторов загрязнения почвы пестицидами // Экология. 1989. - № 5. - С. 86-88.

124. Пожаров A.B., Ваганов A.B., Захаров И.С. Проблемы построения оптической модели взвеси инфузорий в сыворотке крови // Изв. СПбГЭТУ «ЛЭТИ». Сер. Биотехнические системы в медицине и экологии. 2006. - Вып. 3. - С. 45 - 49.

125. Пожаров A.B., Захаров И.С., Ивакина A.B. Принцип биотестовой оценки качества бытовых фильтров воды // Гигиена и санитария. -1998.-№4.-С. 46-50.

126. Пожаров A.B., Захаров И.С., Папутская Н.И. О некоторых практических возможностях биотестовой аппаратуры // Рациональное использование природных ресурсов и охрана окружающей среды. Л.: ЛПИ, 1989. - С. 15 - 19.

127. Пожаров A.B. , Попечителев Е.П. Возможности биотестирования при контроле промышленных загрязнений // Экологическая химия. 1996. - Т. 5. - № 3. - С. 217 - 222.

128. Пожаров A.B., Шелемотов С.А. Использование экспресс-биотестирования для оценки антропоэкологической ситуации // Экология. 1992. - № 2. - С. 94 - 95.

129. Пожаров A.B., Шелемотов С.А. Экспресс-биотестирование при оценке качества материалов // Дефектоскопия. 1992. - № 4. - С. 88-90.

130. Потапова H.A., Королевская Т.В. Метод биотестирования загрязнённых вод с помощью культур водных микроорганизмов // Методы биотестирования вод: Сб. статей. Черноголовка. 1988. -С. 17-18.

131. Приказ Министерства природных ресурсов РФ от 15 июня 2001 г. №511« Об утверждении критериев отнесения опасных отходов к классу опасности для окружающей природной среды».

132. Прохорова И.М. Растительные тест-системы для оценки мутагенов / Ярославль: ЯрГУ. - 1988. — 13 с.

133. Пущаева Т.Я. Биология Daphnia magna Str. и продукция ее популяции в озере Бугаево (Красноярский край) // Гидробиологический журнал. 1976.- т. XII.- №1. - С. 105 - 108.

134. Розанцев Э.Г., Черемных Е.Г., Кузнецова Л.С. Автоматизированный биотест // Экология и промышленность России.-2001.-№12.- С. 34 -36.

135. Розанцев Э.Г., Черемных Е.Г., Пуховский A.B. Биотестирование в оценке безопасности. // Партнеры и конкуренты. 2003. -№ 7. - С. 45 -48.

136. Санитарные правила по определению класса опасности токсичных отходов производства и потребления. СП. 2.1.7.1386 03.

137. Спесивцева H.A., Очкина И.И. Способ быстрого определения токсичности грибов. Авт. свид. № 130160 // Бюлл. инф. 1960. - № 4.

138. Спиров A.B., Пушной Г.В. Использование олигохет в качестве тест -объектов в системах скрининга тератогенов среды // Всес. совещ. Эколого-генетический мониторинг состояния окружающей среды. Караганда, 1990. - С. 112.

139. Строганов Н. С. Современные проблемы водной токсикологии.-Вестн. МГУ, серия биол., почвовед., 1960. - № 2.

140. Таланов Г.А., Коржевенко Г.Н., Метелёв В.В. Проблемы водной токсикологии и охрана гидробионтов от токсикозов // Проблемызащиты растений от вредителей, болезней и сорняков. М. 1979. -С. 216-221.

141. Таланов Г.А., Хмелевский Б.Н. Санитария кормов. М.: Агропромиздат. 1991.

142. Тинсли И. Поведение химических загрязнителей в окружающей среде. М., «Мир», 1982. 281с.

143. Трахтенберг И.М., Тимофеевская J1.A., Квятковская И.Я. Методы изучения хронического действия химических и биологических загрязнителей. Рига: Зинатне. - 1987.

144. Трунова О.Н. Действия химических загрязнителей из группы тяжёлых металлов на жизнеспособность и фагоцитирующую активность некоторых простейших // Труды Саратовского зоовет. института. 1969. -Т.16- С. 191 195.

145. Туманов A.A., Фролова С.И., Глухова М.Н. Метод определения органического оловосодержащего соединения в воде // Методы биотестирования вод: Сб. ст., Черноголовка. 1988. - С. 77 - 80.

146. Ульянова И.П., Семакова Л.В. и др. Применение биотестирования для оценки токсичности городских сточных вод //Материалы V Всесоюз. конф. по водной токсикологии. Одесса. 1988. - С. 205 -207.

147. Ускоренное гигиеническое регламентирование экзогенных химических веществ в торфяной почве. Инструкция 2.1.7.-11-12-205-2003: МЗРБМИНСК. 2003.

148. Ушеренко Н.И., Красильникова C.B. Тест методы для определения экологической безопасности промышленных стоков // Экол. и анал. химия: Матер, краткосрочн. семин.; О-во "Знание" РСФСР, Ленингр. дом научн. - техн. проп. - Л., 1991. - С. 48 - 49.

149. Федеральный закон «Об отходах производства и потребления» №89 ФЗ от 24 июня 1998г., статья 14 (Собрание законодательства Российской Федерации, 1998, № 26, ст. 3009.).

150. Филенко О.Ф. Водная токсикология // МГУ Черноголовка. - 1988.

151. Филенко О.Ф. Традиционное и новое в эколого рыбохозяйственном нормировании // Токсикологический вестник. - 1993. - № 3.

152. Филенко О.Ф., Дмитриева А.Г. Биотестирование как способ контроля токсичности загрязняемой водной среды // Приборы и системы управления. 1999. - № 1.

153. Фомин Г.С., Фомин А.Г. Почва. Контроль качества и экологической безопасности по международным стандартам // Справочник. М: 2001.

154. Фролова И.А. Аппаратный метод биотестирования объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля // Тез. докл. конф. «Научное обеспечения развития ветеринарной медицины в Северо-Восточном регионе России», Н. Новгород. 1999. - С. 116117.

155. Фролова Н.В. Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного и животного происхождения и методы их снижения // Автореф. дисс. канд. биол. наук. г Брянск. -2007.

156. Харатьян С.Г. Определение относительной питательной ценности (гидролизуемости и усвояемости) белков микробиологическим методом с тест организмом Тетрахимена пириформис //

157. Прикладная биохимия и микробиология. 1973. Т. 9. - №3. - С. 370 -374.

158. Хенель X., Баум Ф., Харатьян С.Г. Микробиологические методы определения качества белка // Известия АН СССР, сер Биология. -1975. -№4.-С. 533 -540.

159. Худобина O.A., Сафонова И.Л. Проблемы контроля токсичности химических продуктов в США // Химическая промышленность за рубежом. 1976.-Вып. 5.-С. 27-31.

160. Циприян В.И., Коршун М.М., Дацюк Д.Е. Экотоксикологическая оценка качества почвы // Гигиена и санитария. 1993. - № 1. -С. 25-28.

161. Черемных Е.Г. Автоматизированная биотехническая система оценки безопасности пищевых продуктов и кормов: Автореф. дисс. канд. техн. наук. М., 2004. - 23 с.

162. Чернышева В.М. Влияние монурона на плодовитость рыб (на примере гуппи Lebistes reticulatus).- Сб. «Цветение воды». - Киев. - 1968.

163. Шашкина Л.Ф., Иванова В.М., Любимов Б.И. Современное состояние проблемы испытания лекарственных препаратов на концерогенность. // Фармакология и токсикология. 1985. - №3. -С. 107-113.

164. Штина Э.А. Водоросли как экологические индикаторы. // Микробиологический журнал. 1990. - Т. 26. - №5. - С. 93 - 94.

165. Щёткина Т.Н, Лыков И.Н. Возможность использования автоматизированной биотехнической системы для оценки токсичности пищевых продуктов // Сб. науч. трудов КГПУ им. Циолковского К.Э., Книга седьмая. 2006. С. 40 - 45.

166. Этлин С.Н., Лахонина Г.М., Ирлина И.С. Ускоренная оценка химических веществ с помощью тест-объекта инфузории //

167. Актуальные проблемы медицинской токсикологии ЭССР. Матер, научно-практической конф. Таллинн. - 1989. - С. 16-18.

168. Aberi J. Н., Mckinly W.P. Zebra fish eggs and larvae as aflatoxin bioassay test organisms // J. Assoc. of Anal. Chem. 1968. - V. 51. -№7. - P. 902 - 904.

169. Anderson M.E., Williams H.H. Microbiological evaluation of protein quality. 1. A colorimetric method for the determination of the growth of Tetrahymena geleii W. in protein suspensions // J. Nutrition. -1951.-V. 44. -№2.-P. 335-343.

170. Apostol Simona. Metoda testelor acute de toxicitate pe protozoare si utilizarea ei in igiena // Igiena (RSR). 1971. - V. 20. - №6. - P. 353 -361.

171. Apostol Simona. Metoda testelor cronice de toxicitate pe protozoare // Stud. Si cerc. boil. Ser. Zool. 1972. -V. 24. - №3. - P. 215 - 223.

172. Arora Asha, Cupta A.B. The effect of copper sulphate of formation of sporation dises in Oscillatoria sp. // Arch. Hydrobiol. 1983. - V. 96. -№2.-P. 261 -266.

173. Banu S. Schanmugasundaram E.R.B. Antimicrobial activity of mycotoxin sterigmatocyctin produced by Aspergillus versicolor // Curr. Sci. (India).- 1985.-V. 54. № 19. -P. 1000 - 1001.

174. Baudhuin P. et al Nonmitochondrial oxidising particles (microbodies) in rat liver and kidney and in Tetrahymena pyriformis // Biochem. and biophys. res. communication. 1965 - V. 20.- № 1 - P. 53-59.

175. Berk S.G. Reversal of phenol and naphthalene hemoattraction // Bull. Env. Contam. Toxicol.- 1980. Vol. 44. - P. 181-184.

176. Blum J.J., Connett R.J. Analisis of metabolism in Tetrahymena // Environmentae physiology. 1972. - V. 2. - №1. - P. 59 - 66.

177. Blum J.J., Wexler J.P. Effect of clorifibrate in Tetrahymena // Molec. pharmacology. 1968,-V. 4.-P. 155 - 161.

178. Bovie E.C. Effects of certain chemical pollutants on small aquatic animals. U.S. NTIS PB, rep. 1975., №241336, ref. // Chem. abstracts. 1975.-V.83.-№127007.

179. Brizzi G., Blum J.J. Effect of growth cohditions on serotonic content of Tetrahymena pyriformis // J. protozoology. 1970. - V. 17. - №4. -P.553 -555.

180. Cherry D.S., Cairns J. Jr. Biological monitoring. Part 5: Preforence and avoidance studies // Water. Res. 1982.-.-V.16.- № 3. - P. 263 - 301.

181. Cole R.G. Mycotoxins: Production, Isolation, Separation and Purification, Amsterdam.-1984.-P.45-58.

182. Corliss J.O. The literature on Tetrahymena: its lystory, growth and recent trends // J. protozoology. 1954. - V. 1. - P. 156- 159.

183. Corliss J.O. The literature on Tetrahymena pyriformis: 1954 through 1956//J. Protozoology. - 1957. - V.4. - suppl. l.-P .15.

184. Dewey V.C., Parks J.F.E., Kidder G.W. Growth responses of Tetrahymena to changes in the basal media // Arch. Biochem. 1950. -№29.-P. 281.

185. Ecological Effects Test Guidelines. POOTS 850.6200. Earthworm Subchronic Toxicity Test. EPA 712-C-96-167, April 1996.

186. Elliott A.M. A quater century exploring Tetrahymena // J. protozoology. 1959. - V. 6. - №1. - P. 1 - 7.

187. Elliott A.M., ed. Biology os Tetrahymena. N.Y., 1970.

188. Elliott A.M., Clammons G.L. An ultrastructural study of ingestion and digestion in Tetrahymena pyriformis // J. protozool. 1965. - V. 13. -№2.-P. 311-323.

189. Epstein S.S., Saporoschetz L.B., Hunter S.H. Toxiciti of antioxidants to Tetrahymena pyriformis // J. protozool. 1967. - V. 149. - №2. - P. 238 -244.

190. Fernell W.R., Rosen G.D. Microbiological evaluation of protein quality with Tetrahymena pyriformis W. // Brit. J. of Nutr. 1956. - V. 10. - № 2.-P. 143- 156.

191. Frankel J. Morphogenesis and division in chains of Tetrahymena pyriformis GL // J. protozsoology. 1964. - V. 11. - № 4. - P. 514 -516.

192. Giattina J.D., Garton R.R. A review of preference avoidance responses of fishes to aquatis contaminants // Residue Rew. 1983. - V. 87. - P. 43-90.

193. Hegedus M. Determination of the protein value by a microbiological method // Elelmiszervizgalati Kozlam. 1971. - ovf. 17. - № 5. - 6. - P. 247-253.

194. Hill D.L. The biochemistry and physiology of Tetrahymena // N.Y. Acad. Press, 1972.

195. Hogg J. F., Elliott A.M. Comporative amino acid metabolism of Tetrahymena pyriformis geleii // J. Biol. Chemistry. 1951. - V. 192. -P. 131 - 139.

196. Howard R., Wragg J. Effect of carbohydrate on synthesis of proteins by Tetrahymena pyriformis // Bacteriol. proceed. 1961.- V. 61. - P. 176

197. Howard R., Wragg J.B. Effect of type of carbohydrates on growth and protein synthesys by Tetrahymena // J. protozoology. 1962. - V. 9. -№2.-P. 214-222.

198. Huve J.-L. Un detecteur original de pollution: la truite // Recherche. -1981.-P. 108-110.

199. Jarvis B., Chapman W.B., Williams AP. Isolation and Identification. Method for Food Poisoning Organisms. London. - 1982. - P. 367 -392.

200. Justel K. Fischtest sichert Wasserqualitat // Umwelt. 1987. - № 7-8. -S. 396-398.

201. Kidder G.W., Dewey V.C. Studies on the biochemistry of Tetrahymena. XII. Pyridoxine, pyridoxal, pyridoxamin // Arch, of Biochem.- 1949.-V. 21 -№1.-P. 58-65.

202. Kidder G.W., Dewey V.C. The biochemistry of ciliates in pure culture // Biochemistry and phisiology of protozoa. N.Y. Acad. Press, 1951. -V.l.-P. 324-400.

203. Kidder G.W., Dewey V.C., Parks J.R.E. Studies on the inorganic reguirements of Tetrahymena // Phisiol. zoology. 1951. - V. 24. - P. 69.

204. Kolkwitz R., Marsson M. Ökologie der pflanzlichen Saprobien. Berichte der deutschen botanischen Geselschaft, 1908, 26a, 26.

205. Kopperman H.L., Corlson R.M., Corle R. Aqueous chlorination and osonation studies // Chem. Biol. Interact. - 1974. - V.9. - №4. - P.245 -251.

206. Mee L.D. Monitoring the implementation of the precautionary principle in the Black Sea // Alternative bioassay techniques suitable for monitoring toxicity in the Black Sea region. Istanbul, 1995. - P. 2 -15.

207. Nelson D.L., Kung C. Behavior of Paramecium: chemical, physiological and genetics studies // in: Hazelbauer G.L. (ed) Receptors and recognition. Series B. Vol.5. Taxis and behavior. New York: Halsted Press-Wiley, 1978. — P. 75 - 100.

208. Norikazu M., Tomonori K. and Miho T. Use of Paramecium species in bioassays for environmental risk management: Determination of IC50 values for water pollutants // Journal of Health Science. 2007. - No 49(6).-P. 429-435.

209. Nutritional Evaluation of protein Foods // Edited by P.L. Pellett and V.R. Yong. The United Nat. Univ. -Tokyo, 1980.

210. Rasmussen L. On the role of food vacuole formation in the uptace of dissolved nutrients by Tetrahymena // Exptl. Cell. Res. 1973. - V. 82. -P. 192- 196.

211. Reynolds H., Wragg J.B. Effect of type of carbohydrate on growth and nitrogen utilization in cultures of Tetrahymena pyriformis // Bacteriol. proceed. 1960 - V. 60. -№40. - P. A39.

212. Rickard K., Elson Ch. Studies on riboflavin deficiency in Tetrahymena pyriformis // J. Nutrition 1972. - V. 104. - №9. - P. 1209 - 1215.

213. Scherbaum O. The division index and multiplication in a mass cultures on Tetrahymena pyriformis folloving inocution // J. protozoology. -1957. V. 49. - №4. - P. 257 - 259.

214. Shultz T.W. Ecotoxicology and environmental physiology: Biological effect of contaminants on bivalve molluscs // Inst. Mar. Environ. Res. (Plymouth). 1985. - P. 86 - 103.

215. Schultz T.W., Dument J.N. Cytotoxicity of synthetic fuel products on Tetrahymena pyriformis. I. Phenol // J. Protozoology. 1977. - V. 24. -P. 164- 172.

216. Shimura J., Suzuki K., Nitsuka M. An automated analysis of water quality using a computer-assisted scanning densitometer // Anal. Biochem. 1989. - № 1. - P. 72 - 77.

217. Shug A.L., Elson Ch., Shrago E. Effect of iron on growth, cytochromes, hlycogen and fatty acids of Tetrahymena pyriformis // J. Nutrition -1969. V. 99. - №3. - P. 379 - 386.

218. Standard methods for Examination of Water and Wastewater // 19th Edition 1995.- American Public Health Association.- Toxicity (8000).

219. G. Sterba. Aquarien Kunde, Bd. 1, 2. Urania - verlag, Jena, 1955.

220. Stott J.A., Smith H. Microbiologicol assay of protein quality with Tetrahymena pyriformis W. 3. A Simplified assay procedura // Brit. J. Nutr. 1963.-V. 17. - № 2. - P. 227-233.

221. Stott J.A., Smith H. Microbiological assay of protein quality with Tetrahymena pyriformis W.4. Measurement of available lusine, methionine, arginine and histidine // Brit. J. Nutr. 1966. - V. 20. - № 4.-P. 663 -668.

222. Svensmark B., Larsen J. Determination of the labile species of zinc by anodic stripping staircase voltametry, with special reference to correlation with the toxicity to tetrahymena // Talanta (G.B.). 1988. -Vol. 35.-P. 953.

223. Tebo L.B. Effluent monitoring: historical perspective. Environ. Hasart. Asses. Effluents // Proc. pellston Environ. Workshop Cody Wyo, 22 -27 Aug. 1982.- 1986. -№ 4. -P. 13-31.

224. Thrasher J., Adams J.F. The effect of mercuru compounols on the generation time and cell division in Tetrahymena pyriformis // Environmental Research. 1973. - V. 5. - № 4. - P. 443 - 450.

225. Tivari R.P., Bhalla T.C., Mehanism of action of aflatoxin Bi //1. Biosci. -1986.-V. 10.-№1.-P. 145-151.

226. Ujwala G., Shanti N., and Prakash V. Toxic effects of monocrotophos on Paramecium caudatum // African J. Biotechnol. 2003. - Vol. 6 (19).-P. 2245-2250.

227. Vinochodov D., Vinochodov V. Preparation for toxicological estimation of poultry fodder // International conference "Biotechnology St.Petersburg 94". St.Petersburg, Russia, September 21-23, 1994: Program and abstracts. SPb, 1994. - P. 97 - 98.

228. Viswanatha T., Liener J.E. Utilisation of native and denatured proteins by Tetrahymena pyriformis // Arch, biochem. biophys. 1955. - V. 56. -№ l.-P. 229.

229. Vullierment B. Improvement of the mass and Energy Balances in the tannius // Jndusty Jalca. 1980. - V. 75. - P. 233 - 275.

230. WHO World Health Organization monographs on selected medicinal plants // World Health Organization. — Geneva: 1999. — T. 1.jL

231. Wikes R.W.H. Water quality protection with fish monitor // Proc. 7 Int. Water Conf. Pittsburgh, 1989. - P. 39 - 48.

232. Yamagnechi N., Wada O., Ono T. et al. Detection of heavy metal toxicity by Tetrahymena pyriformis culture media // Industrial health. -1973.-V. 11.-№ l.-P. 27-31.

233. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК1. РАСХН)1. УТВЕРЖДАЮ

234. N . Академик-секретарь Отделения4 ,^теринарной медицины РАСХНf \ ^ ' академик РАСХН* ' ' A.M. Смирновnt&T" Je-LyvrK. 2009 г.1. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИпо ускоренному определению токсичности продуктов, кормов и объектов окружающей среды1. Москва 2009

235. Методические рекомендации разработаны МГУПБ (Кальницкая О.И., Смирнова И.Р., Михалев A.B.), ВНИИВСГЭ (Долгов В.А., Лавина С.А., Тюрин В.Г., Самохин И.В., Андреев Р.Ю.), РУДН (Никитченко В.Е., Никитченко Д.В.).

236. Методические рекомендации предназначены для научно-исследовательских учреждений и лабораторий, занимающихся вопросами оценки качества и безопасности продуктов животноводства, кормов и других объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля.

237. Методические рекомендации одобрены на заседании Ученого совета ветеринарно-санитарного факультета МГУПБ 03.07.20Q9 г., протокол №9и секции «Ветеринарно-санитарная экспертиза» Отделения ветеринарной медицины РАСХН 15.06.2009 г., протокол № .

238. Рецензент -заслуженный ветеринарный врач РФ, главный ветеринарный врач ЗАО «Микояновский мясокомбинат» канд. тех. наук Яцюта A.JI.

239. Ответственный за выпуск заведующая сектором Отделения ветеринарной медицины, кандидат биологических наук Бабышова J1.B.

240. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии1. УТВЕРЖДАЮ-л ик-секретарь Отделенияfep^^pHOH медицины РАСХН ЧЙ ¥4 академик РАСХН1. А М Смирнов 2009 г

241. АВТОМАТИЗИРОВАННЫЙ МЕТОД ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ ПРОДУКТОВ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, КОРМОВ И ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ НА ИНФУЗОРИЯХ PARAMECIUM CAUDATUM И TETRAHYMENA PYRIFORMISметодические рекомендации)1. Москва 2009

242. Методические рекомендации предназначены для научно-исследовательских учреждений и лабораторий, занимающихся вопросами оценки качества и безопасности продуктов животноводства, кормов и других объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля.

243. Методические рекомендации одобрены на совместном заседании секции «Ветеринарно-санитарная экспертиза» Отделения ветеринарной медицины РАСХН и Ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ «¿¿о> ет.Ш^йклЬ 2009 г., протокол № 0■

244. Рецензент профессор Дорожкин В.И.

245. Ответственный за выпуск заведующая сектором Отделения ветеринарной медицины РАСХН, кандидат биологических наук Бабышова Л.В.

246. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии1. ТГЖг^1. УТВЕРЖДАЮ

247. Академик-секретарь Отделенияветеринарной медицины РАСХНxVакадемик^ РАСХН1. А.М.Смирнов 2010 г.

248. МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ ПО БИОТЕСТОВОЙ ОЦЕНКЕ КАЧЕСТВА И БЕЗОПАСНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ ОБЪЕКТОВ ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОГО И ЭКОЛОГИЧЕСКОГО1. КОНТРОЛЯ1. Москва-2010

249. Методическое пособие разработано д.в.н., проф. Долговым В.А., д.б.н. Лавиной С.А., к.б.н. Арно Т.С., к.б.и. Семеновой Е.А., к.б.н. Островской A.B., Самохиным И.В. (ГНУ ВНИИВСГЭ), к.т.н., Черепных Е.Г. (МГУПБ).

250. Методическое пособие предназначено для научно-исследовательских учреждений и лабораторий, занимающихся вопросами оценки качества и безопасности продуктов животноводства, кормов и других объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля.

251. Методическое пособие одобрено на совместном заседании секции «Ветеринарно-санитарная экспертиза» Отделения ветеринарной медицины РАСХН и Ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ « U » <H<X,&^JU 2010 г.

252. Рецензент профессор Дорожкин В. И.

253. Ответственный за выпуск заведующая сектором Отделения ветеринарной медицины РАСХН, кандидат биологических наук Бабышова Л.В.

Информация о работе

Самохин, Иван Вячеславович
кандидата ветеринарных наук
Москва, 2011
ВАК 06.02.05

Диссертация

Ускоренные методы биотестирования кормов, продуктов животного происхождения и объектов окружающей среды - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы