Углеводородокисляющие бактерии и ассимиляционный потенциал морской воды Северного Каспия

Соколова, Вера Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Углеводородокисляющие бактерии и ассимиляционный потенциал морской воды Северного Каспия
ВАК РФ 03.02.08, Экология (по отраслям)

Автореферат диссертации по теме "Углеводородокисляющие бактерии и ассимиляционный потенциал морской воды Северного Каспия"

На правах рукописи

СОКОЛОВА ВЕРА ВЛАДИМИРОВНА Углеводородокисляющие бактерии и ассимиляционный потенциал морской воды Северного Каспия

03.02.08. - Экология (биология)

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 5 (лАР 20¡2

Астрахань - 2012

005013596

Работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории микробиологического мониторинга ФГБОУ ВПО «Астраханский Государственный Технический Университет»

Научный руководитель: Дзержинская Ирина

Станиславовна

доктор биологических наук, профессор кафедры «Гидробиология и общая экология» Астраханского государственного технического университета (г. Астрахань)

Официальные оппоненты: Филенко Олег Федорович

доктор биологических наук, профессор кафедры «Гидробиология»

Биологический факультет

Московского государственного

университета им. М. Ломоносова (г. Москва)

Курочкина Татьяна Федоровна

доктор биологических наук, профессор кафедры «Экология,

природопользование, землеустройство и безопасность жизнедеятельности» Астраханского государственного университета (г. Астрахань)

Ведущая организация: Институт биологии Уфимского Научного

Центра РАН (г. Уфа)

Защита состоится 6 апреля 2012 года в 14 часов на заседании Диссертационного совета_Д.307.001.05 при Астраханском Государственном Техническом Университете по адресу: 414025, г. Астрахань, ул. Татищева, 16

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Астраханского Государственного Технического Университета по адресу: 414025, г. Астрахань, ул. Татищева, 16.

Автореферат разослан «./» Млхргуд. 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета .

кандидат биологических наук, доцент ^Ш/ Э.И. Мелякина

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Ассимиляционный потенциал экосистемы моря - это лимитированная способность нейтрализовать и обезвреживать в определенных пределах вредные выбросы, поступающие в морскую среду в результате хозяйственной деятельности (Гусев, 2002). Эта способность лежит в основе процесса самоочищения, который при современном антропогенном воздействии на морскую среду имеет важное значение.

Нефть и нефтепродукты являются одним из крупномасштабных загрязнителей гидросферы, ежегодное попадание которых в окружающую среду оценивается в десятки миллионов тонн. Однако нефтяные углеводороды являются неотъемлемым природным компонентом морской среды и в процессе эволюции выработался довольно эффективный механизм их деструкции (Миронов, 2002).

Самоочищение морских акваторий - комплексный процесс, протекающий под действием физических, химических и биологических факторов, где трансформация нефти и нефтепродуктов гетеротрофным пикопланктоном, а именно входящими в его состав углеводородокисляющими бактериями, является основным (Миронов, 1973, 2002; Morgan, 1989; Leahy, 1990; Коронелли, 1993; Ильинский, 1979, 2000; Немировская, 2000; Куликова, 2008; Израэль, 1989; Рубцова, 2004). Мощная, разнообразная и подвижная ферментативная система, позволяющая переключаться на потребление с одних на другие источники углерода и энергии, высокая пластичность обменных процессов, быстрая адаптация к изменяющимся условиям позволяет углеводородокисляющим бактериям активно деструктировать нефть и нефтепродукты (Ильинский, 1979; Миронов, 2002; Куликова, 2004).

Особую опасность представляет нефтяное загрязнение в замкнутых водоемах, например, таких как Каспийское море. В Северном Каспии оно складывается из разведки, добычи, транспортировки нефти и нефтепродуктов и речного стока, выносящего такого рода загрязнения в море.

При нефтяном загрязнении опасным является не только нефтяные пятна в морской акватории, но и выбросы их в прибрежную зону, которые негативно влияют на прибрежные сообщества и на состав микроценоза почвы, где повышается общая численность фитопатогенных грибов (Коряжкина, 2009).

При избытке нефтезагрязняющих веществ, естественные процессы самоочищения могут не справляться с нагрузкой, что может привести к нарушению функционирования морских сообществ, вплоть до их гибели (Миронов, 2002).

В связи с этим, особую актуальность приобретают исследования состава и свойств углеводородокисляющих бактерий, создающих ассимиляционный потенциал морской воды Северного Каспия.

Цель исследования. Исследовать углеводородокисляющие бактерии и создаваемый ими ассимиляционный потенциал морской воды в районе лицензионных участков нефтяных компаний ООО «Лукойл» и ООО «Каспийская нефтяная компания» в северной части Каспийского моря.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить численность углеводородокисляющих бактерий в составе гетеротрофного пикопланктона в районе исследований;

2. Оценить ассимиляционный потенциал морской воды по величине микробной деградации и потенциальную окислительную способность углеводородокисляющих бактерий в составе гетеротрофного пикопланктона;

3. Выделить, изучить углеводородокисляющие бактерии морской воды и выявить активных нефтедеструкторов;

4. Определить токсичность активных нефтедеструкторов по биотестированию их суспензий и очищенной ими от нефти морской воды в микроэкосистемах;

5. Исследовать фунгицидную активность и фитотоксичность активных нефтедеструкторов;

6. Идентифицировать активный штамм-нефтедеструктор с хозяйственно-полезными свойствами.

Научная новизна работы. Впервые проведена оценка ассимиляционного потенциала и потенциальной окислительной способности морской воды на фоновой территории в районе лицензионных участков нефтяных компаний ООО «Лукойл» и ООО «Каспийская нефтяная компания» Северного Каспия. Исследованы углеводородокисляющие бактерии в составе гетеротрофного пикопланктона, среди которых выделен и изучен штамм Serratia grimesii, обладающий высокой эмульгирующей активностью, способный к деструкции нефти, моторного масла и парафина.

Положения, выносимые на защиту:

1. Ассимиляционный потенциал морской воды, создаваемый углеводородокисляющими бактериями, в районе исследования составляет 0,025 - 0,045 г ув/м2 в сутки;

2. Выделен и изучен новый штамм Serratia grimesii, способный к деструкции нефтяных углеводородов, нетоксичный по отношению к гидробионтам, обладающий фунгицидной и фитостимулирующей активностями.

Практическая значимость. Расчеты ассимиляционного потенциала по величине микробной деградации нефтяных углеводородов используются КаспНИЦ для разработки экологически обоснованных норм воздействия нефтяных компаний на морскую среду. Предложен новый штамм Serratia grimesii, который может быть использован для активизации процессов деструкции нефти в морской среде и прибрежной зоне.

Результаты исследований являлись частью хоздоговорных работ с ООО «Институт проблем Каспийского моря» «Выполнение микробиологических исследований в районе лицензионного участка ООО «Каспийская нефтяная компания» в 2010 г.».

Апробация работы. Результат исследования были представлены на 13-ой международной Путинской школе-конференции молодых учёных «Биология -наука XXI века» (Пущино, 2009), Всероссийской школе-семинаре для студентов, аспирантов и молодых ученых «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 2009 г), международной научно-практической конференции «Perspektywiczne opracowania sa nauka i tecnhnikami - 2009» (Przemysl, 2009), на всероссийском симпозиуме с международным участием «Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов» (Москва, 2009), Всероссийской научно- практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования. Биологические науки» (Уфа, 2010), на международной конференции «Первые международные Беккеровские чтения» (Волгоград, 2010), 14-ой Пущинской международной школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2010), Международной научной конференции «Инновационные технологии в управлении, образовании, промышленности «АСТИНТЕХ- 2010» (Астрахань, 2010), Международной отраслевой научЕЮЙ конференции профессорско-преподавательского состава АГТУ, посвященной 80-летию основания АГТУ (Астрахань, 2010), 1- ой научно-практической конференции «Новейшие технологии освоения месторождений углеводородного сырья и обеспечение безопасности экосистем Каспийского шельфа» (Астрахань, 2010), V -ой международной конференции «Биология: от молекулы до биосферы» (Харьков, 2010), Международной конференции с элементами научной школы «Экокультура и фигобиотехнологии улучшения качества жизни на Каспии» (Астрахань, 2010), Всероссийском симпозиуме с международным участием «Автотрофные микроорганизмы» (Москва, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 21 научная работа, в том числе 6 статей в рецензируемых научных журналах, входящих в Перечень ВАК.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка литературы и приложений. Материалы диссертации изложены на 160 страницах машинописного текста, иллюстрирована 12 таблицами и 17 рисунками. Список использованной литературы включает 214 источников, из них 47 на иностранных языках.

Автор выражает огромную благодарность и признательность за неоценимую помощь и поддержку научному руководителю доктору биологических наук, профессору Дзержинской И.С., а также доктору биологических наук, профессору Курапову A.A. и кандидату биологических наук Умербаевой Р.И. за помощь в экспедиционных исследованиях, кандидату биологических наук, доценту Куликовой И.Ю. за консультации при проведении лабораторных исследований, а также всем сотрудникам кафедры «Прикладная биология и микробиология» Астраханского Государственного Технического Университета.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования явилась морская вода и гетеротрофный пикопланктон в районе лицензионных участков ООО «Лукойл» и ООО «Каспийская нефтяная компания» Северного Каспия.

Материалом для написания работы послужили экспедиционные исследования в составе экспедиции ООО «НИИ проблем Каспийского моря» и экспериментальные исследования в лаборатории Микробиологического мониторинга Астраханского государственного технического университета 2008-2011 года. Пробы морской воды отбирались в 3-х зонах (мелководной, свале глубин и приглубой зоне) на 12 станциях в двух горизонтах -поверхностном и придонном по общепринятым методам (Родина, 1965; Теппер, 2004; Практикум по микробиологии, 2005). На рисунке 1 представлена схема отбора проб. Станции 1,2,3,4 находятся в мелководной зоне, 5, 6, 7, 8 на свале глубин, 9,10,11,12 в приглубой зоне. Всего было исследовано 124 пробы.

Гидрохимические анализы воды (определение солености, концентрации нефтепродуктов, pH) проводили согласно общепринятым методам (Константинов, 1986; Другов, 2000).

Численность сапротрофных и углеводородокисляющих микроорганизмов выявляли методом предельных разведений и проращиванием их на плотных питательных средах: питательном агаре для сапротрофов и среде Миллса с

добавлением нефти для углеводородокисляющих бактерий(Нетрусов, 2005; Теппрер, 2004; Mills, 1974).

Рисунок 1 -Схема отбора проб Интенсивность минерализации нефтяных остатков рассчитывали по потенциальной способности воды к их окислению (ПОС) по методике Г.Л. Марголиной (Марголина, 1989).

Оценку ассимиляционного потенциала воды (величину бактериальной биодеградации нефтяных углеводородов или «потоки самоочищения») определяли по формуле:

Б= N*K, (1)

где Б - величина бактериальной биодеградации нефтяных углеводородов (мг ув*г"'*сут), N - численность нефтеокисляющих бактерий (кл. *г"'), К -количество углеводородов, окисленных одной бактериальной клеткой, рассчитанное ЗоБеллом (3,76*10"8мг*кл "'*сут) (Рубцова, 2003).

Выделение углеводородокисляющих микроорганизмов, изучение их культуральных, морфологических и физиолого-биохимических свойств, а также получение чистых культур проводили по классическим методам с использованием жидких минеральных сред М9, МКД, среда Чапека, Миллса, в которые добавляли нефть, дизельное топливо и керосин как единственный источник углерода и энергии (Mills et al., 1978; Методы почвенной микробиологии ..., 1991; Практикум по микробиологии, 2005; Тумайкина, 2007; Павлова, 2008; Дзержинская, 2008). Культивирование проводили при температуре 25 - 28 °С для мезофильных и при 6 - 8 °С для психроактивных микроорганизмов на качалке при 190 об/мин в течение 14 суток.

Способность чистых культур усваивать жидкие нелетучие углеводороды производили методом лунок по Егорову (Руководство к практическим занятиям, 1983).

Предварительную идентификацию выделенных микроорганизмов проводили по культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим признакам, используя «Определитель бактерий Берджи» (1997), «Краткий определитель бактерий Берджи» (1980), монографии Скворцовой И.Н «Методы выделения и идентификации бактерий рода Pseudomonas»» (1981) и «Идентификация почвенпых бактерий рода Bacillus» (1983), монографию Нестеренко O.A. «Нокардиоподобные и коринеподобные бактерии» (1985), монографию Рубан Е.Л. «Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas» (1986), а также монографии Смирнова В.В. «Бактерии рода Pseudomonas» (1990) и Логинова О.Н. «Бактерии Pseudomonas и Azotobacter как объекты сельскохозяйственной биотехнологии» (2005).

Литические свойства выделенных изолятов (липолитическую, амилолитическую и протеолитическую активности) определяли согласно общепринятым методам (Егоров, 1995; Практикум по микробиологии, 2005). Эмульгирующую активность выделенных штаммов определяли методом Купера (Соорег, 1987).

Гидрофобно-гидрофильную активность определяли качественно по отталкиванию поверхностями, смоченными бактериальными фильтратами, гидрофобных жидкостей (нефть, масляная краска, подсолнечное масло, окрашенное Суданом) (пат. № Ru 2112033) и количественно по методу разработанному Розенбергом в модификации Серебряковой (Серебрякова, 2002).

Деструктивную активность штаммов по отношению к сырой нефти и моторному маслу изучали на стерильной морской воде с внесением 1% нефти и 2% суспензий исследуемых штаммов. Содержание нефтепродуктов в эксперименте определяли гравиметрическим методом (Другов, 2000, Белоусова, 2002).

Для выявления способности штаммов разлагать парафин использовали агаризованную среду Маккланга с внесением стерильного расплавленного парафина (Теппер, 2004).

Для определения степени токсичности морской воды, загрязненной пефтью, и воды, очищенной от нефти с помощью отобранных наиболее активных штаммов-нефтедеструкторов проводили биотестирование согласно общепринятым методикам (Михеев, 2001; СанПиН 2.1.7.573-96; Приказ МПР РФ от 15 июня 2001 г № 511). В качестве тест-объектов использовали

солоноватоводные рачки Artemia salina и водоросли Scenedesmus quadricauda (Тиф) Breb. При биотестировании воды из микроэкосистем пробы отбирались в момент постановки микроэкосистем, через 5, 15 и 30 суток экспозиции. Тестирование проводилось в наборе разведений 1, 10, 50, 100 %-ной концентрации.

Фунгицидные свойства штаммов исследовались с помощью модификации метода диффузии в агар с использованием лунок (Моисейченко, 1996).

Фитотоксичность и фитостимулирующую активность штаммов определяли с помощью метода на прорастание семян кресс-салата сорта «Весенний» во влажных камерах(Ганнибал, 2007; Методы экспериментальной микологии, 1982).

При определении филогенетического положения наиболее активного штамма-нефтедеструктора проводился анализ секвенсов вариабельных участков 16S рДНК (Edwards et all., 1989).

Статистическую обработку данных химических, микробиологических и токсилогических исследований проводили с помощью программы STATISTICA 6.0, Microsoft Excel Office ХР.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Оценка ассимиляционного потенциала морской воды Северной части Каспийского моря

Изучение численности сапротрофной и углеводородокисляющей части гетеротрофного пикопланктона

При изучении района исследования установлено, что содержание нефтепродуктов составляет от 0,005 до 0,068 г/л. На большей части станций не отмечено превышения ПДК, кроме 3-х станций: ст. 5 в летний период в поверхностном горизонте свала глубин, где концентрация нефтепродуктов составляет 0,057 г/л, то есть превышение ПДК на 0,007 г/л, ст. 10 и ст. 12 в летний период поверхностного горизонта в приглубой зоне концентрация нефтепродуктов составляет 0,052 и 0,068, то есть отмечено превышение ПДК на 0,002 и 0,018 г/л, соответственно.

Таким образом, для исследуемого участка Северного Каспия не отмечено повышенного нефтяного загрязнения.

В процессе самоочищения воды участвует гетеротрофный пикопланктон, который является важным начальным звеном в трофических цепях. Ведущая роль в процессе самоочищения водоемов от нефтяного загрязнения принадлежит бактериальному сообществу, а именно углеводородокисляющей части гетеротрофного пикопланктона (Найдин, 1993; Миронов, 2002).

При изучении сапротрофов и углеводородокисляющих бактерий Северного Каспия установлено, что на численность сапротрофов оказывало влияние изменение температуры и глубины исследуемой акватории. Общая численность сапротрофов в исследуемый период колебалась в пределах от 11,5 тыс. до 50 тыс. кл/мл (таблица 1). Снижение температуры воды (с 25,4-30,3 °С летом до 9,8-17,4 °С зимой и осенью) вызывает снижение численности сапротрофов в 2 и более раз. Увеличение глубины (от поверхностного горизонта к придонному и с мелководных станций к приглубым) также вызывает снижение численности сапротрофов.

Углеводородокисляющие микроорганизмы присутствовали во всех исследуемых пробах воды. Численность углеводородокисляющих микроорганизмов колебалась 12,5 тыс. до 24,5 тыс. кл/мл (таблица 1). Для углеводородокисляющих микроорганизмов четкой зависимости численности от глубины не отмечено. Понижение температуры воды до 11,4-17,4 °С (осенний период) вызывает снижение численности углеводородокисляющих микроорганизмов на 18-38%, а дальнейшее понижение температуры до 9,8-13,9 °С (зимний период) не влияет на численность данной группы микроорганизмов. Полученные данные свидетельствуют о том, что углеводородокисляющие микроорганизмы являются постоянными компонентами микроценоза воды и составляют 4,4 - 11,4 % от численности сапротрофов.

Таблица 1 - Численность сапротрофных н углеводородокисляющих бактерий в составе пикопланктона в исследуемом районе Северного Каспия

Зона исследования Температура воды, °С Сапротрофы, КОЕ/мл* 103 Углеводородокисляющие микроорганизмы

КОЕ/мл* 102 % от сапротрофов

Горизонт

Поверхн остный Придонн ый Поверхн остный Придонн ый Поверхн остный Придонн 1 Поверхн ый 1 остный Придонн ый

Лето

Мелководная 30,3 29,4 50,8+2,2 48,0+2,3 24,1±1,2 24,5±0,6 4,7 5,1

Свал глубин 29,1 27,9 48,6+2,6 44,3+3,6 22,7+0,4 20,4+1,4 4,7 4,6

Приглубая 29,1 25,4 44,2±1,4 43,4±1,8 21,1±1,6 19,0+0,8 4,8 4,4

Осень

Мелководная 11,4 11,5 23,2+1,3 19,8±0,9 18,0+0,6 16,8+0,5 7,8 8,5

Свал глубин 14,1 14,2 22,5+0,9 16,7+1,0 17,5+0,9 12,5+0,1 7,8 7,5

Приглубая 17,4 17,4 19,1±1,2 17,3+0,4 16,5±0,8 14,2±0,3 8,6 8,2

Зима

Мелководная 9,8 10,7 20,3+0,8 14,7±0,4 19,7±0,9 16,7±0,9 9,7 11,4

Свал глубин 11,4 11,4 18,5±1,3 12,7±0,7 18,2±1,7 14,6+0,7 9,8 11,5

Приглубая 13,6 13,9 17,5±0,8 11,5+0,5 15,5±0,5 13,5+0,71 8,9 10,9

Установлено, что с понижением температуры воды процент углеводородокисляющих микроорганизмов от сапротрофных возрастает.

Изучение потенциальной окислительной способности морской воды Потенциальная окислительная способность морской воды (ПОС) показывает активность углеводородокисляющей части гетеротрофного пикопланктона и, следовательно, интенсивность процесса минерализации нефтяных остатков и определяется по изменению концентрации растворенного кислорода в морской воде при внесении в нее нефти. Изучение потенциальной окислительной способности микроценозов морской воды исследуемых зон Северного Каспия показало, что летом и осенью значения потенциальной окислительной способности в поверхностном горизонте выше и составляют от 0,29±0,014 до 3,74±0,2193 мг 02/л*сут, чем в придонном, где показатели от 0,06±0,003 до 2,27±0,118мг 02/л*сут за. Зимой наблюдаемая картина меняется: в мелководной зоне соотношения остается прежним, однако на свале глубин и в приглубой зоне в придонном горизонте значения ПОС выше до 1,28±0,046 мг 02/л*сут, чем в поверхностном, где показатели не превышают 0,65±0,038 мг 02/л*сут.

Важно отметить, что и при изучении величины бактериальной деградации углеводородов, для всех исследуемых зон Северного Каспия осенью отмечено снижение значений ПОС (0,06 - 0,62 мг 02/л в сутки), а зимой показатели не значительно, но повышаются (0,61 - 1,28 мг 02/л в сутки).

По мнению Миронова (2002) активность пикопланктона летом связана с интенсивным развитием автотрофной части, которая также участвует в процессе минерализации нефтяных углеводородов.

Оценка ассимиляционного потенциала морской воды по величине биодеградации нефтяных углеводородов

Оценку ассимиляционного потенциала морской воды определяли по величине бактериальной деградации нефтепродуктов («потоки самоочищения»), которую рассчитывали по численности углеводородокисляющих микроорганизмов морской воды (таблица 2). Установлено, что максимальные значения бактериальной биодеградации нефтяных углеводородов от 0,85 до 0,92 г ув/м3 в сутки наблюдаются в летний период в мелководной зоне в поверхностном и придонном горизонтах, а также в летний период в поверхностном горизонте свала глубин.

Осенью отмечается снижение величины биодеградации во всех исследуемых зонах до 0,47 г ув/м3 в сутки. В зимний период величина биодеградации углеводородов превышает осенние показатели и возрастает до 0,74 г ув/м3 в сутки. Такое распределение показателей биодеградации нефтепродуктов может быть объяснено наличием в морской воде

психроактивной и психрофильной микрофлоры, для которой низкие температуры являются оптимальными для процессов окисления углеводородов, а также подтоком Средне-Каспийских вод в придонный слой приглубой зоны и свала глубин.

Следовательно, во все исследуемые периоды в воде данного участка Северного Каспия протекают процессы самоочищения от углеводородов. Активнее всего данные процессы в мелководной зоне летом.

Таблица 2 - Бактериальная деградация нефтепродуктов (потоки самоочищения, Б, г ув/м3 в сутки) в воде Северного Каспия

Исследуемая зона Северного Каспия Поверхностный горизонт Придонный горизонт

N (кл./мл) * Б (г ув/м3 в 102 сутки) N (кл./мл) Б (г ув/м3 в сутки)

Лето

Мелководная зона 24,1±1,2 0,091 24,5+0,6 0,092

Свал глубин 22,7±0,4 0,085 20,4±1,4 0,077

Приглубая зона 21,1±1,6 0,079 19,(№0,8 0,071

Осень

Мелководная зона 18,0+0,6 0,068 16,8±0,5 0,063

Свал глубин 17,5+0,9 0,067 12,5±0,1 0,047

Приглубая зона 16,5±0,8 0,062 14,2+0,3 0,053

Зима

Мелководная зона 19,7+0,9 0,074 16,7±0,9 0,062

Свал глубин 18,2+1,7 0,068 14,6+0,7 0,054

Приглубая зона 15,5+0,5 0,058 13,5±0,7 0,051

Таким образом, скорость микробной деградации нефтяных углеводородов в пределах исследуемой акватории составляет 0,005-0,009 г ув/м в сутки. При экстраполяции этих значений на весь Северный Каспий можно предположить, что скорость микробной деградации нефтяных углеводородов на Северном Каспии составляет 0,025-0,045 г ув/м2 в сутки. Следовательно, ассимиляционная способность исследуемой акватории может составлять 25-45 тоннам нефтепродуктов на 1 км2 в сутки при определенных условиях, таких как уровень загрязнения, активность микроценоза, температура.

Скрининг морских бактерий, обладающих углеводородокисляющими свойствами

Выделение углеводородокисляющих бактерий, исследование их культуральных, морфологических и физиолого-биохимических свойств

Для выделения углеводородокисляющих микроорганизмов были поставлены 32 накопительные культуры, с использованием минеральных сред (ср. Миллса, М-9, магниево-калиево-дрожжевая среда (МКД), Чапека) с

добавлением нефти, дизельного топлива и керосина (1 % по объему) как единственных источников углерода и энергии и морской воды (1 % по объему).

Обнаружено, что из 32 накопительных культур только в 3-х накопительных культурах (№ 4, 20, 24) отсутствуют признаки готовности накопительных культур, то есть не наблюдается рост углеводородокисляющих микроорганизмов. Также установлено, что присутствие дополнительных источников углерода в среде (дрожжевая вода) повышает устойчивость микроорганизмов по сравнению с развитием на минеральных средах с нефтепродуктами.

Из 29 накопительных культур, в которых отмечен рост микроорганизмов, производился глубинный высев разведений на плотные минеральные среды с нефтепродуктами. Всего выявлено 84 изолята, при этом учитывались только бактериальные штаммы. Установлено, что все изоляты различаются по культурально-морфологическим свойствам.

При периодических пересевах отобраны 43 мезофильных и 5 психроактивных изолята, способных образовывать колонии на минеральных средах с исследуемыми углеводородами в качестве единственного источника углерода и энергии.

При исследовании изолятоа на способность окислять жидкие не летучие углеводороды установлено, что из 48 исследуемых изолятов только 31 чистая культура способна окислять нефть и нефтепродуты, из них 26 мезофильных и 5 психроактивных штаммов.

При изучении культуральных и морфологических свойств выделенных углеводородокисляющих штаммов все полученные на минеральных средах с нефтью и нефтепродуктами колонии мезофильных бактерий были условно разделены на 8 групп, которые были ближе не идентифицированы как представители рода Nocardia, Staphylococcus, Bacillus, Pseudomonas, Micrococcus, Serratia, Arthrobacter, Rhodococcus. Психроактивные бактерии были ближе не идентифицирована как представители рода Bacillus, Micrococcus, Serratia и Arthrobacter.

Изучение углеводородокисляющих свойств

При изучении литических свойств активных штаммов установлено, что липолитической, амилолитической и протеолитической активностями обладают 10 штаммов - Serratia sp. 16, Serratia sp. 18, Bacillus sp.23, Bacillus sp. 34, Bacillus sp.69, Arthrobacter sp 12, Micrococcus sp. 6, Pseudomonas sp.\5, Pseudomonas sp. 17 и Rhodococcus sp. 29, липолитической и амилолитической активностью - 6 изолятов, липолитической и протеолитической - 2, амилолитической и

протеолитической - 1, только одним из исследуемых литических свойств - 11 штаммов.

Для исследования эмульгирующих свойств штаммы были выращены на жидкой среде. В качестве гидрофобной фазы для эмульгирования использовали керосин, бензин и дизельное топливо. Изучение способности бактерий к синтезу естественных поверхностно-активных веществ (ПАВ, биосурфавстантов, биоэмульгаторов), которые снижают поверхностное натяжение и способствуют повышению степени биодеградации, показало, что индекс эмульгирования при смешивании с керосином, бензином и дизельным топливом для всех штаммов различен. Среди исследуемых мезофильных штаммов эмульгирующими свойствами по отношению ко всем исследуемым углеводородам обладают штаммы Nocardia sp. 1, Staphylococcus sp. 2, Bacillus sp. 3, Pseudomonas sp. 4, Serratia sp. 16, Serratia sp. 28 и Rhodococcus sp. 29, индекс эмульгирования для данных штаммов составляет более 30 % по каждому нефтепродукту.

Среди психроактивных штаммов только представитель рода Serratia sp. 62 оказался способен эмульгировать все исследуемые углеводороды. Штамм Micrococcus sp. 61 способен к эмульгации только бензина.

Таким образом, установлено, что у 9 мезофильных и 2 психроактивных штаммов отмечена высокая эмульгирующая активность.

Исследования гидрофилизирующей активности проводились с 11 наиболее активными мезофильными и психроактивными культурами-нефтедеструкторами, отобранными ранее.

В результате исследования гидрофилизирующей активности по отталкиванию различных поверхностей, смоченных бактериальными фильтратами, гидрофобных жидкостей установлено, что 2 штамма Bacillus sp. 3 и Bacillus sp. 22 обладают высокими гидрофилизирующими свойствами и способны вытеснять гидрофобные жидкости с поверхностей различного типа. Остальные бактерии оказались гидрофобны.

При исследовании гидрофобных свойств методом Розенберга в модификации Серебряковой (2002) установлено, что штамма Bacillus sp. 3 и Bacillus sp. 22 обладают гидрофильными клеточными стенками. Для штаммов Pseudomonas sp. 30, Pseudomonas sp. 35, Micrococcus sp. 61 и Serratia sp. 62 характерен средний показатель гидрофобности составляет от 47,6 до 51,2 %. Остальные отобранные штаммы Nocardia sp. 1, Staphylococcus sp. 2, Pseudomonas sp. 4, Serratia sp. 16, Serratia sp. 28, Rhodococcus sp. 29 характеризуются высоким показателем гидрофобности клеточных стенок от 63 до 89,5%.

При исследовании отобранных штаммов на способность к деструкции нефти установлено, что среди мезофильных бактерий максимальная степень деструкции нефти характерна для штамма Serratia sp. 16 и составляет 49,1%. По степени деструкции близкими по исследуемым свойствам оказались штаммы Nocardia sp. 1 степень деструкции составила 44, 2%, Bacillus sp. 3 -45,6%, Serratia sp. 28. - 43%. Степень деструкции в пределах 30-40 % проявляли штаммы Staphylococcus sp. 2 (36,1 %), Pseudomonas sp. 4 (34 %), Rhodococcus sp. 29 (33,8 %) и Pseudomonas sp. 30 (33,5 %) (рисунок 2).

При исследовании психроактивных штаммов установлено, что для них характерна степень деструкции 29,4 % для Micrococcus sp. 61 и 21,9 % для Serratia sp. 62 (рисунок 2).

Отмечено, что наиболее активные микроорганизмы - деструкторы нефти являются также наиболее активными эмульгаторами нефтепродуктов.

Рисунок 2 - Деструкция нефти мезофильными и психроактивными нггаммами-нефтедеструкторами

Таким образом, для дальнейших исследований отобраны мезофильные штаммы, показавшие степень деструкции нефти более 30 %, то есть штаммы Nocardia sp. 1, Staphylococcus sp. 2, Bacillus sp. 3, Pseudomonas sp. 4, Serratia sp. 16, Serratia sp. 28, Rhodococcus sp. 29 и Pseudomonas sp. 30 и психроактивные бактерии Micrococcus sp. 61 и Serratia sp. 62.

Биохимическое разложение основной массы разлитой нефти протекает очень медленно, так как в природе не существует какого-либо определенного вида микроорганизмов, способного разрушить все компоненты нефти. Легче всего протекает микробиологическое разложение парафинов. Установлено, что из исследуемых мезофильных штаммов все бактерии обладают способностью к деструкции парафина. Однако, 2 штамма Staphylococcus sp. 2 и Pseudomonas sp.

30 обладают средней парафинокисляющей активностью, то есть рост бактерий наблюдается вокруг парафиновых пленок, а не на них. Штаммы Nocardia sp. 1, Pseudomonas sp. 3, Bacillus sp. 4, Serratia sp. 16, Serratia sp. 28, Rhodococcus sp. 29 по результатам эксперимента обладают высокой парафинокисляющей активностью, то есть колонии микроорганизмов разрастаются вокруг пленок парафина, покрывая их сплошным слоем. Из исследуемых психроактивных бактерий оба штамма Micrococcus sp. 61 и Serratia sp. 62 обладали высокой психроактивной способностью.

При микробиологическом разрушении нефти окисляются преимущественно парафины нефти, в то время как другие фракции (циклопарафины, ароматические углеводороды, смолы) менее доступны микробным ферментам (Звягинцева, 2001). Моторные масла, присутствующие в двигателях судов, относятся к числу трудноокисляемых фракций нефти, и могут попадать в морскую акваторию при аварийных ситуациях.

В результате исследования деструкции моторного масла мезофильными бактериями установлено, что активным деструктором данного нефтепродукта является штамм Serratia sp. 16, процент деструкции нефтепродукта которого составляет 40,4% относительно контроля. Также активными деструкторами моторного масла являются штаммы Bacillus sp. 3, деструктирующий масло на 33,5%, и Rhodococcus sp. 29, для которого характерна деструкция 27,4 % (рисунок 3).

Рисунок 3 - Деструкция моторного масла активными штаммами-нефтедеструкторами

При исследовании деструкционных свойств психроактивных бактерий также отмечена высокая степень деструкции при низких температурах инкубации - Micrococcus sp. 61 разрушал моторное масло на 14,3%, Serratia sp. 62 на 12,6% относительно контроля (рисунок 3).

Таким образом, среди изученных штаммов обладают всеми литическими, гидрофобными и деструктирующими свойствами мезофильные бактерии Bacillus sp. 3, Serralia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29 и психроактивные штаммы Micrococcus sp. 61 и Serratia sp. 62.

Оценка токсичности нефтедеструкторов и очищенных ими модельных микроэкосистем

При определении токсичности суспензий активных штаммов-нефтедеструкторов на представителях зоопланктона - науплиальных стадиях жаброногого ракообразного Artemia salina L. установлено, что суспензии мезофильных культур Bacillus sp. 3, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29 не оказывают токсического действия на тест-объект. Величина погибших науплиусов артемий в суспензии по отношению к контролю составляет 12,5, 7 и 6,5 % соответственно. Психроактивные штаммы Micrococcus sp. 61 a Serratia sp. 62 оказывают токсическое действие на науплиусов Artemia salina L., величина погибших науплиусов артемий в суспензиях данных составляет 63 и 51 % относительно контроля. Критерием острой летальной токсичности воды является гибель 50% и более науплиусов в опыте по сравнению с контролем за 72 ч эксперимента.

Не токсичными для одноклеточных зеленых протококковых водорослей Scenedesmus quadricauda (Turp) Breb. являются суспензии штаммов Bacillus sp. 4 и Serratia sp. 16, численность клеток водорослей в эксперименте с данными штаммами составляла 69,3 и 84 % по отношению к контролю, такие показатели острой токсичности означают отсутствие токсичности суспензии данных штаммов по отношению к фитопланктону. В эксперименте со штаммом Micrococcus sp. 61 отмечено, что численность клеток водорослей по отношению к контролю составляет 8 %, что свидетельствует о наличие острой токсичности данной суспензии по отношению к фитопланктону.

При нефтяном загрязнении наибольшее значение для самоочищения водоемов имеет биологическая детоксикация нефти. Для изучения способности штаммов к детоксикадии нефти (1% по объему) был поставлен эксперимент с 6 микроэкосистемами на морской воде:

1. с нефтью и суспензией штамма Rhodococcus sp. 29;

2. с нефтью и суспензией штамма Bacillus sp. 4;

3. с нефтью и суспензией штамма Serratia sp. 16;

4. с нефтью и суспензией штаммов Bacillus sp. 4, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29;

5. только с нефтью;

6. без добавок (контроль).

Определение токсичности микроэкосистем на науплиальных стадиях жаброногого ракообразного Artemia salina L. показало, что очищенная вода в микроэкосистемах при добавлении суспензий штаммов менее токсична для тест-объектов по сравнению с микроэкосистемой с нефтью, но без внесения микроорганизмов. Также отмечено, что токсичность морской воды в эксперименте во всех вариантах опыта увеличивается в течение первых 15 суток, при этом токсичность воды без штаммов намного превышала токсичность воды с суспензиями исследуемых бактерий. К 30-м суткам экспозиции токсичность в микроэкосистемах с суспензиями снижалась, а без них возрастала. Важно отметить, что в течение всего периода исследования меньшей токсичностью по отношению к науплиусам артемий обладала вода микроэкосистемы 3 со штаммом Serratia sp. 16. Таким образом, данный штамм активнее всего понижает токсичность загрязненной нефтью воды.

При исследовании токсичности воды микроэкосистем на одноклеточных зеленых водорослях Scenedesmus quadricauda (Тиф.) Breb. отмечено, что все исследуемые пггаммы Bacillus sp. 4, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29 в той или иной степени способны снижать токсичность воды, загрязненной нефтью. Наиболее активно данный процесс протекает в течение первых 15 суток после постановки микроэкосистем.

В результате проведенных исследований токсичности воды из микроэкосистем, загрязненных нефтью, с добавлением суспензий штаммов установлено, что внесение всех исследуемых штаммов снижает токсичность исследуемой воды для выбранных тест-обьектов. Большую активность по снижению токсичности проявил штамм Serratia sp. 16.

Штаммы, не токсичные по отношению к тест-объектам и снижающие токсичность загрязненной нефтью морской воды, были отобраны для исследований фунгицидной активности и фитотохсичности.

Исследование хозяйственно-полезных свойств нефтедеструкторов

При попадании нефти на прибрежные территории в почве происходит изменение микроценоза: снижается общая численность микроорганизмов, но увеличивается общая численность фитопатогенных грибов (Марфенина, 1999; Пархоменко, 2008). Поэтому для уменьшения численности и ослабления активности таких грибов при ремедиации нефтезагрязненных территорий рекомендовано использовать микроорганизмы с фунгицидными свойствами, Фунгицидную активность определяли по отношению к фитопатогенным грибам Fusarium graminearum, F. sporotrichoides и Alternaria предоставленные лабораторией технологии микробных препаратов ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии РАСХН. Отмечено, что меньшую фунгицидную активность по

отношению ко всем исследуемым микромицетам проявляет штамм Rhodococcus sp. 29. Для штамма Serratia sp. 16 характерны более высокие показатели фунгицидной активности: в эксперименте с микромицетом А. tenuissima диаметр зоны ингибирования составляет 13 мм, с F. graminearum - 18 мм и F. sporotrichoides - 15 мм. Наибольшей фунгицидной активностью по отношению ко всем исследуемым грибам-фитопатогеннам обладает штамм Bacillus sp. 4, который вызывает полное подавление роста фитопатогенов в зоне ингибирования, усиленное спороношение, видоизменение мицелия. Диаметр зон ингибировния для F. graminearum составляет 50 мм, для F. sporotrichoides -35 мм и для А. tenuissima -21 мм.

Таким образом, из выделенных бактерий штаммы Serratia sp. 16 и Bacillus sp. 4, которые являются не только активными нефтедеструкторами, но и перспективными фунгицидами, отобраны для дальнейших исследований.

При определении фитотоксичности подсчитывали число проросших семян кресс-салата. Для штамма Bacillus sp. 4 процент всхожести семян составил 98% относительно проросших семян в контроле. Для штамма Serratia sp. 16 отмечено, что всхожесть семян в эксперименте составила 134%, то есть количество проросших семян с данным штаммом выше, чем в контроле на 34%. Таким образом, установлено, что исследуемые штаммы не токсичны для растений.

При исследовании фитостимулирующей активности измеряли общую длину проросших семян кресс-салата. Так, Serratia sp. 16 стимулирует рост кресс-салата на 215,4 %, а штамм Bacillus sp. 4 - на 198,4 % по сравнению с контролем.

Таким образом, в результате проведенных исследований можно сделать вывод, что штаммы Bacillus sp. 4 и Serratia sp. 16 способны к активной стимуляции роста растений.

Идентификация активного нефтедеструктора, обладающего хозяйственно-полезными свойствами

При анализе всех полученных данных по скринингу углеводородокисляющих микроорганизмов установлено, что штамм Serratia sp. 16 обладает всеми изученными литическими и гидрофобными свойствами, эмульгирующей и парафинокисляющей активностью, является активным деструктором нефти и нефтепродуктов, не токсичен по отношению к исследуемым гидробионтам, обладает фунгицидными свойствами по отношению к фитопатогенным грибам и фитостимулирующей активностью. Таким образом, штамм Serratia sp. 16 отобран для дальнейших

филлогеннетических исследований, которые выполнены в ФГУП «ГосНИИГенетика»..

При проведении секвенирования вариабельных участков 16S rDNA штамма Serratia sp. 16 получена нуклеотидная последовательность для исследуемого штамма. Уровень сходства последовательностей 16S рРНК штамма Serratia sp. 16 с видом Serratia grimesii составил 99%.

Выводы

1. Фоновая территория в районе лицензионных участков нефтяных компаний ООО «Лукойл» и ООО «Каспийская нефтяная компания» характеризуется незначительным нефтяным загрязнением от 0,005 до 0,068 г/л углеводородов.

2. Численность углеводородокислякмцих бактерий гетеротрофного пикопланктона составляла от 4,4 до 11,5% от общего количества сапротрофов (от 11*103 до 50,8*103 КОЕ/мл) в зависимости от температуры воды и глубины исследуемого горизонта.

3. Значения ассимиляционного потенциала морской воды по величине бактериальной деградации составляют от 0,47 до 0,92 г углеводородов в сутки в 1 м3 морской воды, а потенциальной окислительной способности от0,06 до 3,74 мг 02/л в сутки в зависимости от сезона года и глубины.

4. Выявлено 84 изолята с углеводородокисляющими свойствами. Наиболее активными штаммами явились Bacillus sp. 3, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29, обладающие липолитической, амилолитической, протеолитической, эмульгирующей активностями (от 32 до 59 %), способностью к деструкции нефти (от 38 до 49,1 %), парафина, моторного масла (от 27,4 до 40,4 %).

5. Биотестирование суспензий активных штаммов, а также очищенной ими морской воды в микроэкосистемах показало, что бактерии Bacillus sp. 3, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29 не токсичны по отношению к исследуемым тест-объектам.

6. Установлено, что штаммы Bacillus sp. 3, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29 обладают фунгицидной активностью, набольшие зоны ингибирования обнаружены у штаммов Bacillus sp. 3 и Serratia sp. 16 (от 13 до 50 мм). Данные штаммы не фитотоксичны и обладают фитостимулирующей активностью (Bacillus sp. 3 стимулирует рост кресс-салата на 198,4 %, Serratia sp. 16 - на 215,4%).

7. Активный штамм-нефтедеструктор, не токсичный по отношению к гидробионтам и обладающий хозяйственно-полезными свойствами генетически идентифицирован как Serratia grimesii.

Список работ по материалам диссертации:

1. Куликова И.Ю., Гриднева В.В. Выделение, селекция и исследование углеводородокисляющих микроорганизмов Каспийского моря /У Бюллетень Московского Общества испытателей природы. Отдел биологический, том 114, выпуск 2, 2009, Приложение 1 «Физиология и генетика микроорганизмов в природных и экспериментальных системах». Москва, 2009. - С. 231-233.

2. Гриднева В.В. Свойства углеводородокисляющих штаммов как перспективных объектов экологической биотехнологии / Биология - наука XXI века: 13-ая международная Путинская школа-конференция молодых учёных, (Пущино, 28 сентября - 2 октября 2009 года). Сборник тезисов. С. 161- 162.

3. Куликова И.Ю., Гриднева В.В. Микробиологический мониторинг Северного Каспия в условиях поиска и разработки морских нефтегазовых месторождений // Защита окружающей среды в нефтегазовом комплексе. -2009. - № 9. - С. 61-65. - Библиогр.: с. 65.

4. Гриднева В.В. Биосурфактанты микроорганизмов Северного Каспия / Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы // сб. тезисов Всерос. шк.-семинара для студ., аспир. и молод, ученых (Белгород, 14-17 октября 2009 г) / под ред. д.х.н. O.E. Лебедевой. - Белгород: Изд-во БелГУ, 2009. - 76 с, С. 1316.

5. Гриднева В.В., Куликова И.Ю. Исследование мезофильного и психрофильного микробного сообщества Северного Каспия, способного к деструкции нефти и нефтепродуктов / "Perspektywiczne opracowania sa nauka i tecnhnikami - 2009" // Materialy v miedzynarodowej naukowi-praktycznej konferencji, 07-15 listopada 2009 roku, Voliume 8. Medycyna. Nauk biologicznych. - Przemysl: Sp.zo.o. "Nauka I studia", 2009. - 80 Str., Str. 48 - 50.

6. Гриднева B.B., Куликова И.Ю. Деструкция нефтяных углеводородов микроорганизмами Северного Каспия в условиях пониженных температур / Альманах современной науки и образования. Тамбов: Грамота, 2009. № 11 (30): в 2-х ч. Ч. 1.С. 116-118. ISSN 1993-5552.

7. Гриднева В.В., Куликова И.Ю. Поиск и изучение микроорганизмов Северного Каспия, способных к деструкции углеводородов / Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов: Всероссийский симпозиум с международ, участием, Москва, МГУ им.

Ломоносова, биолог. Фак., 24-27 декабря 2009 г.: Материалы. - М.: МАКС Пресс, 2009.-216 с. С. 51. ISBN 978-5-317-03065-0.

8. Гриднева В.В. Скрининг углеводородокисляющих микроорганизмов Северного Каспия и изучение их свойств /Актуальные проблемы современной науки и образования. Биологические науки: Материалы Всероссийской научно- практической конференции с международным участием. Т.Н. — Уфа: РИЦ БашГУ, 2010. — с. 335- 339.

9. Гриднева В.В. Изучение нефтедеструктивной активности микрофлоры шельфовых вод Северного Каспия //Первые междунар. Беккеровские чтения. Сборник научн. трудов по материал. Конференции. 27-29 мая 2010. Волгоград. Часть 2. С. 94-96.

10. Гриднева В.В. Деградация нефтяных углеводородов морскими бактериями / Биология - наука XXI века: 14-ая Путинская международ, школа-конференц. молод, ученых (Пущино, 19-23 апреля 2010 г.), С. 239.

11. Гриднева В.В. Выделение и исследование микроорганизмов, обладающих углеводородокисляющими свойствами / Инновационные технологии в управлении, образовании, промышл. «АСТИНТЕХ- 2010»: материал. Международ. Научн. Конф. 11-14 мая 2010 г.-Т . 3, С. 20-21.

12. Гриднева В.В. Микроорганизмы-деструкторы нефтяных углеводородов / Международная отраслевая научная конференция профессорско-преподавательского состава АГТУ, посвященная 80-летию основания АГТУ (54 ППС): тез. докл. в 2 т / под общ. ред. Н.Т. Берберовой, A.B. Котельникова - Астрахань: Изд-во АГТУ, 2010.-Т.1. -296 с.

13. Гриднева В.В. Биодеградация нефтяных углеводородов микроорганизмами Северного Каспия / матер. 1-ой научно-практическ. конференции «Новейшие технологии освоения месторождений углеводородного сырья и обеспечение безопасности экосистем Каспийского шельфа». - Астрахань: Изд-во АГТУ, 2010. - С. 121-124.

14. Гриднева В.В., Куликова И.Ю. Аборигенные углеводородокисляющие микроорганизмы в биоремедиации Северного Каспия от нефтяного загрязнения // Юг России: экология, развитие. - 2010 - №4.-С. 78-80.

15. Курапов A.A., Умербаева Р.И., Гриднева В.В. Микроорганизмы в процессах деструкции нефти в водоемах // Юг России: экология, развитие. - 2010 - №4. - С. 86-88.

16. Гриднева В.В. Активность морской микрофлоры в условиях нефтяного загрязнения // материал. V междунар. конфер. «Биология: от молекулы до биосферы». - Харьков: Оперативная полиграфия, 201- С. 186-187.

17. Соколова B.B. Биодеградация углеводородов нефти микроорганизмами шельфовых вод Северного Каспия // материал, междунар. конфер. с элементами научн. шк. «Экокультура и фитобиотехнологии улучшения качества жизни на Каспии», сост.: В.Н. Пилипенко, A.B. Федотова. - Астрахань: Изд. дом «Астраханский университет», 2010. - С. 291- 294.

18. Соколова В.В. Биоиндикация морских пггаммов-нефтедеструкторов / Всеросс. симпозиум с междунар. участием «Автотрофные микроорганизмы»; ред.: Нетрусов А.И., Колотилова H.H. - М.: МАКС Пресс, 2010. - С. 90.

19. Соколова В.В., Дзержинская И.С. Скрининг мезофильных и психроактивных углеводородокисляющих микроорганизмов шельфовых вод Северного Каспия / Защита окружающей среды в нефтегазовом комплексе. - 2011. - № 4. - С. 38-42.

20. Оценка ассимиляционного потенциала и ассимиляционной емкости Северного Каспия по отношению к нефтяному загрязнению / В. В. Соколова [и др. ] // Защита окружающей среды в нефтегазовом комплексе. -2011.-№10.-С. 40-44.

21. Соколова В.В. Экспериментальная оценка токсичности суспензии нефтеокисляющих бактерий и очищенных ими морских вод / В. В. Соколова, И. С. Дзержинская, А. А. Курапов // Защита окружающей среды в нефтегазовом комплексе. - 2011. - № 10. - С. 55-59.

Подписано в печать 28.02.2012 г. Тираж 100 экз. Заказ № 158. Типография ФГБОУ ВПО «АГТУ», тел. 61-45-23 г. Астрахань, Татищева 16 ж

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Соколова, Вера Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 Обзор литературы.

1.1 Роль пикопланктона в гидросфере.

1.2 Нефть как источник загрязнения акваторий.

1.3 Процессы самоочищения водоемов от нефтяного загрязнения.

1.4 Биодеградация нефти и нефтепродуктов гетеротрофным пикопланктоном в море.

Глава 2 Объекты, материалы и методы исследования.

2.1 Объекты исследований.

2.2 Материалы и методы исследований.

Глава 3 Оценка ассимиляционного потенциала морской воды Северной части Каспийского моря.

3. 1 Изучение численности сапротрофной и углеводородокисляющей части гетеротрофного пикопланктона.

3. 2 Изучение потенциальной окислительной способности морской воды. 51 3.2.1. Определение потенциальной окислительной способности морской воды.

3.2.2 Изучение численности сапротрофного и углеводородокисляющего микроценоза морской воды при определении ПОС.

3.3 Оценка ассимиляционного потенциала морской воды по величине биодеградации нефтяных углеводородов.

Глава 4 Скрининг морских бактерий, обладающих углеводородокисляющими свойствами.

4.1 Выделение углеводородокисляющих бактерий, исследование их культуральных, морфологических и физиолого-биохимических свойств

4. 2 Изучение углеводородокисляющих свойств выделенных бактерий.

4.2.1 Определение литических свойств.

4.2.2 Определение эмульгирующей активности.

4.2.3 Изучение гидрофобно-гидрофильных свойств клеточных стенок

4.2.4 Исследование возможности деструкции нефти, парафина и моторного масла.

4.3 Оценка токсичности нефтедеструкторов и очищенных ими модельных микроэкосистем.

4.3.1 Оценка токсичности суспензий нефтедеструкторов.

4.3.2 Оценка токсичности очищенных модельных микроэкосистем.

4.4 Исследование хозяйственно-полезных свойств нефтедеструкторов

4.4.1 Исследование фунгицидных свойств.

4.4.2 Изучение фитотоксичности и фитостимулирующей активности.

4.5 Идентификация активного нефтедеструктора, обладающего хозяйственно-полезными свойствами.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Углеводородокисляющие бактерии и ассимиляционный потенциал морской воды Северного Каспия"

При нефтяном загрязнении опасными являются не только нефтяные пятна в морской акватории, но и выбросы их в прибрежную зону, которые негативно влияют на прибрежные сообщества и на состав микроценоза почвы, где повышается общая численность фитопатогенных грибов (Коряжкина, 2009).

Цель исследования. Исследовать углеводородокисляющие бактерии и создаваемый ими ассимиляционный потенциал морской воды в северной части Каспийского моря.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

3. Выделить, изучить углеводородокисляющие бактерии морской воды и выявить активных нефтедеструкторов;

5. Исследовать фунгицидную активность и фитотоксичность активных нефтедеструкторов;

6. Идентифицировать активный штамм-нефтедеструктор с хозяйственно-полезными свойствами.

Научная новизна работы. Впервые проведена оценка ассимиляционного потенциала морской воды по величине микробной биодеградации в акватории Северного Каспия. Исследованы углеводородокисляющие бактерии в составе гетеротрофного пикопланктона, среди которых выделен и изучен штамм Serratia grimes ii, обладающий высокой эмульгирующей активностью, способный к деструкции нефти, моторного масла и парафина.

Положения, выносимые на защиту:

1. Ассимиляционный потенциал морской воды, создаваемый углеводородокисляющими бактериями, в районе исследования составляет 0,047-0,092 гУВ/м3 в сутки;

Практическая значимость. Расчеты ассимиляционного потенциала по величине микробной деградации нефтяных углеводородов могут использоваться организациями, которые производят расчет баланса нефтепродуктов и оценку нефтяного загрязнения морских вод при осуществлении государственного и производственного экологического мониторинга на Северном Каспии. Предложен новый штамм Serratia grimesii, который может быть использован для активизации процессов деструкции нефти в морской среде и прибрежной зоне.

Апробация работы. Результат исследования были представлены на 13-ой международной Пущинской школе-конференции молодых учёных «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2009), Всероссийской школе-семинаре для студентов, аспирантов и молодых ученых «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 2009 г), международной научно-практической конференции «Perspektywiczne opracowania sa nauka i tecnhnikami - 2009» (Przemysl, 2009), на всероссийском симпозиуме с международным участием «Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов» (Москва, 2009), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования. Биологические науки» (Уфа, 2010), на международной конференции «Первые международные Беккеровские чтения» (Волгоград, 2010), 14-ой Пущинской международной школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2010), Международной научной конференции «Инновационные технологии в управлении, образовании, промышленности «АСТИНТЕХ- 2010» (Астрахань, 2010), Международной отраслевой научной конференции профессорско-преподавательского состава АГТУ, посвященной 80-летию основания АГТУ (Астрахань, 2010), 1- ой научно-практической конференции «Новейшие технологии освоения месторождений углеводородного сырья и обеспечение безопасности экосистем Каспийского шельфа» (Астрахань, 2010), V -ой международной конференции «Биология: от молекулы до биосферы» (Харьков, 2010), Международной конференции с элементами научной школы «Экокультура и фитобиотехнологии улучшения качества жизни на Каспии» (Астрахань, 2010), Всероссийском симпозиуме с международным участием «Автотрофные микроорганизмы» (Москва, 2010).

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка литературы и приложений. Материалы диссертации изложены на 159 страницах машинописного текста, иллюстрирована 12 таблицами и 17 рисунками. Список использованной литературы включает 216 источников, из них 47 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Экология (по отраслям)", Соколова, Вера Владимировна

Выводы

1. Численность углеводородокисляющих бактерий гетеротрофного пикопланктона составляла от 4,4 до 11,5% от общего количества сапротрофов

3 3 от 11*10 до 50,8*10 КОЕ/мл) в зависимости от температуры воды и глубины исследуемого горизонта.

2. Значения ассимиляционного потенциала морской воды по величине бактериальной деградации составляют от 0,047 до 0,092 г углеводородов в о сутки в 1 м морской воды, а потенциальной окислительной способности от л

0,001 до 0,95 гУВ/м в сутки в зависимости от сезона года и глубины.

3. Выявлено 84 изолята с углеводородокисляющими свойствами. Наиболее активными штаммами явились Bacillus sp. 3, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29, обладающие липолитической, амилолитической, протеолитической, эмульгирующей активностями (от 32 до 59 %), способностью к деструкции нефти (от 38 до 49,1 %), парафина, моторного масла (от 27,4 до 40,4 %).

4. Биотестирование суспензий активных штаммов, а также очищенной ими морской воды в микроэкосистемах показало, что бактерии Bacillus sp. 3, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29 не токсичны по отношению к исследуемым тест-объектам.

5. Установлено, что штаммы Bacillus sp. 3, Serratia sp. 16 и Rhodococcus sp. 29 обладают фунгицидной активностью, набольшие зоны ингибирования обнаружены у штаммов Bacillus sp. 3 и Serratia sp. 16 (от 13 до 50 мм). Данные штаммы не фитотоксичны и обладают фитостимулирующей активностью {Bacillus sp. 3 стимулирует рост кресс-салата на 198,4 %, Serratia sp. 16 - на 215,4%).

6. Активный штамм-нефтедеструктор, не токсичный по отношению к гидробионтам и обладающий хозяйственно-полезными свойствами генетически идентифицирован как Serratia grimesii.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Соколова, Вера Владимировна, Астрахань

1. Акимова Т.А., Хаскин В.В. Основы экоразвития: Учебноепособие. / Т.А. Акимова, В.В. Хаскин. Под редакцией В.И. Видяпина - М.: Изд-во Рос. экон. акад., 1994. - 312 с.

2. Алексеева Т.А., Масаева JIM. Проблемы защиты водной среды от загрязнения нефтью и нефтепродуктами / Т.А. Алексеева, JI.M. Масаева // Защита окружающей среды в нефтегазовом комплексе, 2008, №5, С.21-24.

3. Ананько Г.Г. Устойчивость нефтеокисляющих микроорганизмов к низким температурам / Г.Г. Ананько, В.Г. Пугачев, О.Д. Тотеменина, В.Е. Репин // Биотехнология. 2005. - №5. - С. 63-69.

4. Аникиев В.В. Анализ экологического риска, обусловленного сбросом бурового шлама в морскую среду / В.В. Аникиев, А.К. Амбросимов, Г.В. Моисейченко, H.J1. Петкевич // Междисцип. ин-т экол. пробл. М., 1997. -С. 113-130.

5. Артемов A.B. Современные технологии очистки нефтяных загрязнений / A.B. Артемов // Нефть. Газ. Промышленность. 2004 - № 4. - С. 24-27.

6. Белоиваненко В.И., Миронов О.Г. Скорость диффузии кислорода через поверхность в присутствии нефтяных пленок / В.И. Белоиваненко, О.Г. Миронов // Водные ресурсы. 1979. - № 6. - С. 127 - 131.

7. Белоусова Н.И., Шкидченко А.Н. Деструкция нефтепродуктов различной степени конденсации микроорганизмами при пониженных температурах / Н.И. Белоусова, А.Н. Шкидченко // Прикладная биохимия и микробиология. 2004. - Т. 40. - №3. - С. 312-316.

8. Бенжицкий А.Г. Нефтяные контаминанты в гипонейстали морей и океанов / А.Г. Бежницкий. Киев: Наук. Думка, 1980. - 120 с.

9. Биотестовый анализ интегральный метод оценки качества объектов окружающей среды: учебно-методическое пособие / А.Г. Бубнов и др.; под общ. ред. В.И. Гриневича; ГОУ ВПО Иван. гос. хим.-технол. ун-т. - Иваново, 2007. - 112 с.

10. Божокина Е.С. Термолизинподобные металлопротеазы бактерий и их роль в инвазии эукариотических клеток: автореф. дис. . канд. биол. наук / Божокина Екатерина Сергеевна. С.-Пб., 2008. - 24 с.

11. Бойко Е.В. Химия нефти и топлив: учеб. пособие / Е.В. Бойко. -Ульяновск: УлГТУ, 2007.- 60 с.

12. Брагинский Л.П. Методологические аспекты токсикологического биотестирования на Daphnia Magna Str. и других ветвистоусых ракообразных (критический отбор) / Л.П. Брагинский // Гидробиологический журнал. 2000. - № 5. - С.50 - 57.

13. Волченко H.H. Гидрофобность клеток как критерий отбора бактерий-продуцентов биосурфактантов / H.H. Волченко, С.Г. Карасев, Д.В. Нимченко, Э.В. Карасева//Микробиология. 2007. - Т. 76. - № 1. - С. 126-128.

14. Ворошилова A.A., Диаиова E.B. О бактериальном окислении нефти и ее миграции в природных водоемах/ A.A. Ворошилова, Е.В. Дианова. // Микробиология. 1950. - T. XIX. - Вып. 3. - С. 203-210.

15. Гоготов И.Н. Биосурфактанты: продуценты, свойства и практическое использование / И.Н. Гоготов, C.B. Белоножкин, P.C. Ходаков,

16. A.Н. Шкидченко // Материалы 3-й межд. конф. "Международное сотрудничество в биотехнологии: ожидания и реальность". Пущино: ИЦ "Биоресурсы и экология". 2006. - С. 104-111.

17. Госсен Л.П., Величкина Л.М. Экологические проблемы нефтегазового комплекса (обзор) / Л.П. Госсен, Л.М. Величкина // Нефтехимия 2006. - Т. 46 - № 2 - С. 83-88.

18. ГОСТ 17.1.5.05-85 Охрана природы. Гидросфера. Общие требования к отбору проб поверхностных и морских вод, льда и атмосферных осадков. Введ. 01.07.86. -М.: Изд во стандартов, 1985. -V- 15 с.

19. Готтшалк Г. Метаболизм бактерий / Г. Готтшалк; пер. с англ. Г.П. Мирошниченко, под ред. Е. Н. Кондратьевой. М.: Мир, 1982. - 310 с.

20. Гусев М.В. Функционирование микроорганизмов в водных экосистемах / М.В. Гусев, О.Ю. Сенцова, Т.В. Коронелли, В.В. Ильинский,

21. B.Д. Федоров // Научн. доклады выс. шк. Биологические науки 1977. - № 8.1. C. 110-119.

22. Гусев A.A. Соотношение рентных доходов и платежей в сфере использования биологических ресурсов и биоразнообразия / A.A. Гусев // Экономика природопользования: обзор информации 2002. - №5. - С. 9-21.

23. Давыдова С.Л. Нефть и нефтепродукты в окружающей среде: Учеб. пособ. / С.Л. Давыдова, В.И. Тагасов М.: Изд-во РУДН. - 2004. - 163 с.

24. Давыдова C.J1. Ресурсные и экологические особенности нефтегазового производства: Учеб. пособ. / С.Л. Давыдова, В.И. Тагасов. М.: РУДН, 2007.- 172 с.

25. Державин А.Н. Куринское рыбное хозяйство / А.Н. Державин. -Баку: Изд-во АН АзССР. 1956. - 435 с.

26. Дзержинская И.С. Питательные среды для выделения и культивирования микроорганизмов / И.С. Дзержинская. Астрахань.: Изд-во АГТУ, 2008. - 348 с.

27. Доценко В.В. Геохимия газа. Происхождение нефти и газа: учеб. пособие / В.В. Доценко; под ред. А.Н. Резникова. Ростов-на-Дону: Изд-во Ростовского университета, 2001. - 39 с.

28. Другов Ю. С. Экологическая аналитическая химия / Ю.С. Другов. СПб.: Изд-во Анатолия, 2000. - 432 с.

29. Жмур Н.С. Методика определения токсичности воды и водных вытяжек из почв, осадков сточных вод, отходов по смертности и изменению плодовитоси дафний. 2-е изд., испр. и доп. - М.:АКВАРОС, 2007. - 52 с.

30. Еремеева C.B., Курапов A.A., Мельников С.А. Современное экологическое состояние северной части Каспийского моря в зимне-весенний период / C.B. Еремеева, A.A. Курапов, С.А. Мельников // Вестн. МАНЭБ. -1999.-№ 9.-С. 51-55.

31. Защита водной среды от загрязнения транспортом: Учеб.пособ. / A.B. Короблин, C.B. Виноградов, H.A. Осинова, К.О. Сибряев; Астрахан. гос. техн. ун-т. Астрахань: Изд-во АГТУ, 2006. - 152 с.

32. Защита растений от болезней: учеб. пособие для студ. вузов по агрон. спец. / В. А. Шкаликов, О. О. Белошапкина, Д. Д. Букреев; Ред. В. А. Шкаликов. М. : Колос, 2001. - 246 с.

33. Звягинцева И.С. Деградация нефтяных масел накардиоподобными бактериями / И.С. Звягинцева, Э.Г. Суворцева, М.Н. Поглазова, B.C. Ивойлов, С.С. Беляев // Микробиология. 2001. - Т. 70 - № 3 - С. 321-328.

34. Иванов В.П., Сокольский А.Ф. Научные основы стратегии защиты биологических ресурсов Каспийского моря от нефтяного загрязнения / В.П. Иванов, А.Ф. Сокольский. Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000. - 181 с.

35. Израэль Ю.А. Антропогенная экология океана / Ю.А. Израэль, A.B. Цыбань. JL: Гидрометеоиздат, 1989. - 528 с.

36. Изъюрова А.И. Поведение нефти в водоеме / А.И. Изъюрова // Гигиена и санитария. 1955. - Т. 6. - № 5. - С. 15.

37. Ильинский В.В. Гетеротрофный бактериопланктон: экология и роль в процессах естественного очищения среды от нефтяных загрязнений: автореф. дис. . докт. биол. наук / Ильинский Владимир Викторович. М., 2000. - 53 с.

38. Ильинский В.В. Экология углеводородокисляющих морских бактерий: автореф. дис. . канд. биол. наук / Ильинский Владимир Викторович. М., 1979. - 25 с.

39. Каспийское море. О влиянии экологических изменений на биоразнообразие и биопредуктивность / JI.A. Орлов и др.. Астрахань: ООО «КНЦ «Полиграфком», 2009. - 404 с.

40. Каспийское море: Гидрология и гидрохимии / под ред. Л.Г. Васютинская. М.: Наука, 1986. - 261 с.

41. Касымов А.Г. Экология Каспийского озера / А.Г. Касымов. Баку: Изд-во «Азербайджан», 1994. - 237 с.

42. Кафаров В.В. Моделирование биохимических реакторов / В.В. Кафаров, А.Ю. Винаров, JI.C. Гордеев. М.: Лесная промышленность, 1979. -344 с.

43. Квасников Е.И. Микроорганизмы деструкторы нефти в водных бассейнах / Е.И. Квасников, Т.М. Клюшникова. - Киев: Наук, думка, 1981. -131 с.

44. Киреева H.A., Галимзянова Н.Ф. Влияние загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами на численность и видовой состав микромицетов / H.A. Киреева, Н.Ф. Галимзянова // Почвоведение. -1995. № 2. - С.211-216.

45. Киреева H.A., Водопьянов В.В., Мифтахова A.M. Влияние нефтяного загрязнения на целлюлазную активность почв/ H.A. Киреева, В.В. Водопьянов, A.M. Мифтахова // Почвоведение. 2000. - №6. - С.748-753.

46. Киреева H.A. Снижение фитотоксичности серой лесной почвы при биорекультивации / H.A. Киреева, М.Д. Бакаева, Е.М. Тарасенко // Агрохимия. 2003. - №2. - С.50-55.

47. КНД 211.1.4.047-95. Бютестування морсько'1 води та ст1чно\', яка выводиться в море. Методика. Видання офщшне. К., 1995. - 37 с.

48. Комаров Е.В., Танин П.Г. потенциал капель эмульсии н-алканов и его роль в транспорте субстрата в клетки дрожжей / Е.В. Комаров, П.Г. Ганин // Прикл. биохимия и микробиология. 2004. - Т. 40. - № 3. - С.323 -331.

49. Копытов Ю.П., Миронов О.Г., Цуканов A.B. Влияние некоторых экофакторов на самоочищение морской воды от нефти / Ю.П. Копытов, О.Г. Миронов, A.B. Цуканов // Водные ресурсы. 1982. - № 2. - С. 129 - 136.

50. Копытов Ю.П. Распространение, состав и деструкция липофильных веществ в морской воде. Биологические аспекты загрязнения морской среды. / Ю.П. Копытов. Киев: Наук, думка, 1988. - С. 5 - 52.

51. Коронелли Т.В., Ильинский В.В, Кудрина Е.С. Нефтеокисляющие бактерии финского залива / Т.В. Коронелли, В.В. Ильинский, Е.С. Кудрина // Науч. докл. высш. шк. Биол. науки. 1975. - №2 - С. 107-111.

52. Коряжкина М.Ф., Дзержинская И. С. Полифункциональный комплекс микроорганизмов для повышения эффективности биоремедиации прибрежных нефтезагрязненных территорий // Защита окружающей среды в нефтегазовом комплексе. 2009. - №9. - С. 59-61.

53. Краткий определитель бактерий Берги / под ред. Дж. Хоулта. М.: изд-во «Мир», 1980. - 495 с.

54. Кузнецов А.В. Гигиенические аспекты использования средств новой биотехнологии доочистки нефтесодержащих вод в инфраструктурах судоходства / А.В. Кузнецов // Актуальные проблемы транспортной медицины. № 3 (9). - 2007. - С. 42-46.

55. Куликова И.Ю. Микроорганизмы в процессе самоочищения шельфовых вод Северного Каспия от нефтяного загрязнения: автореф. дис. . канд. Биол. наук / Куликова Ирина Юрьевна. М., 2004. - 24 с.

56. Куликова И.Ю. Углеводородокисляющая активность штамма Phyllobacterium myrsinacearum / И.Ю. Куликова //Электронный научный журнал «Исследовано в России». 2006/ - №3. - С. 1673-1681 http://zhurnal.ape.relarn.ru/articles/2006/179.pdf

57. Куликова И.Ю., Дзержинская И.С. Микробиологические способы ликвидации последствий аварийных разливов нефти в море / И.Ю. Куликова, И.С. Дзержинская // Защита окружающей среды в нефтегазовом комплексе. -2008.-№5.-С. 24-29.

58. Лебедева Е.В., Каневская И.Г., Трилесник Г.И. Влияние нефтехимических загрязнений на микромицеты почвы/ Е.В. Лебедева, И.Г. Каневская, Г.И. Трилесник // Вестник ЛГУ. 1988. -№4. - С.31-35.

59. Лебедева Е.В. Микромицеты почв в окрестностях комбината цветной металлургии на Кольском полуострове / Е.В. Лебедева // Микология и фитопатология. 1993. - Т.27. - №1. - С. 12-17.

60. Лебедева Е.В. Микромицеты индикаторы техногенного загрязнения почв / Е.В. Лебедева // Микология и криптогамная ботаника в России: традиции и современность: Тр. междунар. конф. - СПб.: СПбХФА, 2000.-С.173-176.

61. Ленева H.A. Деградация фенантрена и антрацена бактериями рода Rhodococcus / H.A. Ленева, М.П. Коломыцева, Б.П. Баскунов, Л.А. Головлева // Прикл. биохимия и микробиология. 2009. - Т. 45. - № 2. - С. 188 - 194.

62. Леонов A.B. Биотрансформация нефтяных углеводородов в Каркинитском заливе Черного моря: оценка по результатам математического моделирования / A.B. Леонов, Д.Я. Фащук // Водные ресурсы. 2006. - Т. 33, №3.-С.311-326.

63. Логинов О.Н. Бактерии Pseudomonas и Azotobacter как объекты сельскохозяйственной биотехнологии / О.Н. Логинов; отв. ред. Ф.М. Шакирова. М.: Наука, 2005. - 166 с.

64. Манасбаева А.Б. Роль внеклеточных поверхностно-активных веществ в агрегации и адгезии микроорганизмов: автореф. дис. . д-ра. биолог, наук. / Манасбаева Алия Бариевна Алма-Ата, 1999. -50с.

65. Марвина J1.A. Окисление углеводородов микроорганизмами / JI.A. Марвина // Биология автотрофных микроорганизмов: труды МОИП. М.: МГУ. - 1966. - Т. XXIV - С. 192-200.

66. Марголина Г.Л. Исследование процессов бактериального разрушения нефтяных остатков в водохранилищах / Г.Л. Марголина // Тр. ИБВВ АНСССР. 1974. - Вып. 28 (31). - С. 28-34.

67. Марголина Г.Л. Микробиологические процессы продукции и деструкции в пресных водоемах / Г.Л. Марголина. М.: Наука, 1989. - 120 с.

68. Марфенина O.E. Антропогенные изменения комплексов микроскопических грибов в почвах: автореф. дис. . д-ра. биол. наук. / Марфенина Ольга Евгеньевна М: МГУ, 1999. - 48с.

69. Маячкина Н.В., Чугунова М.В. Особенности биотестирования почв с целью их экотоксикологической оценки / Н.В. Маячкина, М.В. Чугунова // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. -2009. -№ 1. С. 84-93

70. Мелехова О.П. Биологический контроль окружающей среды: биоиндикация и биотестирование: учеб. пособие / О.П. Мелехова, Е.И. Егорова, Т.И. Евстегнеева и др.; отв. ред. О.П. Мелехова. М.: Издательский центр «Академия», 2007. - 288 с.

71. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Под ред.Д.Г. Звягинцева. М.: изд-во МГУ, 1991. - 304 с.

72. Методы экспериментальной микологии: Справочник / под ред. В.И. Билай. Киев: Наук, думка, 1982. - 552 с.

73. Мецлер Д. Биохимия. Химические реакции в живой клетке / Д. Мецлер; под ред. Браунштейна А.Е., Л.М. Гинодмана, Е.С. Северина. М.: Мир, 1980. - Т.1. - С. 228-232.

74. Микробиологические технологии в рекультивации нефтезагрязненных почв и техногенных отходов / Логинов О.Н. и др.. М.: Наука, 2009- 112 с.

75. Микроорганизмы в процессах деструкции и биоремедиации: проблемные лекции : учеб. пособие / И. С. Дзержинская, А. А. Курапов, О. Б. Сопрунова и др. / Астрах, гос. технич. Ун-т, НИИ проблем Каспийского моря. Астрахань : Сорокин Р.В., 2009. - 238 с.

76. Миронов О.Г. К вопросу о смоочищении морской воды от нефтепродуктов / О.Г. Миронов // Гидробиол. журн. 1969. - T. V. - № 4. -С.89-92.

77. Миронов О.Г. Биологические ресурсы моря и нефтяное загрязнение / О.Г. Миронов. М.: Пищ.пром, 1972. - 105 с.

78. Миронов О.Г., Георга-Копулос Л.А. О самоочищении моря от тяжелых нефтяных фракций / О.Г. Миронов, Л.А. Георга-Копулос // Гидробиол. журн. 1981. - Т. 71. - № 1. - С.45-52.

79. Миронов О. Г. Взаимодействие морских организмов с нефтяными углеводородами / О.Г. Миронов. Л.: Гидрометеоиздат, 1985. - 128 с.

80. Миронов О. Г. Биологические проблемы нефтяного загрязнения морей / О.Г. Миронов // Гидробиол. журн. 2000. - 36. - № 1. - С. 82 - 96.

81. Миронов О.Г. Бактериальная трансформация нефтяных углеводородов в прибрежной зоне моря / О.Г. Миронов // Морской экологический журнал. 2002. - № 1. - T. I. - С. 56 - 66.

82. Миронов О. Г., Кирюхина Л.Н., Алемов C.B. Санитарно-биологические аспекты экологии Севастопольских бухт в XX веке / О.Г. Миронов, Л.Н. Кирюхина, C.B. Алемов. Севастополь: ЭКОСИ-Гидрофизика, 2003. - 185 с.

83. Михеев Н.Н. Руководство по определению методом биотестирования токсичности вод, донных отложений, загрязняющих веществ и буровых растворов / НН.Н. Михеев. -М.: РЭФИА, НИА-Природа, 2002. -106 с.

84. Михеева Т.М. Пико- и нанофитопланктон пресноводных экосистем / Т.М. Михеева. Минск: Изд-во БГУ. - 1998. - 196 с.

85. Могилевская И.В., Владимцева И.В. Углеводородокисляющие микроорганизмы для биологической очистки сточных вод и загрязненных почв / И.В. Могилевская, И.В. Владимцева // Современные наукоемкие технологии. 2005. - № 9. - С. 67.

86. Мосевич H.A. Загрязнение рыбохозяйственных водоемов сточными водами и нормирование сброса сточных вод как борьба с их вредным влиянием / H.A. Мосевич / АМН СССР.- М.: Медицина, 1951. 191 с.

87. Муратова Л.Ю., Турковская О.В. Деградация минеральных масел селекционированной микробной ассоциацией / Л.Ю. Муратова, О.В. Турковская // Прикл. биохим. и микробиол. 2001. - Т. 37, № 2. - С. 175-180.

88. Мусихина Е.А. Методологический аспект технологии комплексной оценки экологической емкости территорий / Е.А. Мусихина. -М.: Издательство "АкадемияЕстествознания", 2009. 137 с.

89. Назаров A.B. Микробно-растительное взаимодействие при нефтяном загрязнении дерново-подзолистых почв. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. / Назаров Алексей Владимирович -Пермь. 2000. - 24с.

90. Найдин Д.П. Позднемеловые события на востоке европейской палеобиогеографической области / Д.П. Найдин // Бюл. Моск. о-ва испытателей природы. Отд. Геол. 1993. - Т. 68.- Вып. 3. - С. 33 - 54.

91. Нельсон-Смит А. Нефть и экология моря / А. Нельсон-Смит Нельсон-Смит. М.: Прогресс, 1977. - 302 с.

92. Немировская И.А., Зарецкас С.А. Углеводороды донных осадков Рижского залива / И.А. Немировская, С.А. Зарецкас // Геохимия. 1984. - № 11. - С. 1493 - 1501.

93. Немировская И.А. Углеводороды в океане (снег-лед-вода-взвесь-донные осадки) / И.А. Немировская. М.: Науч. мир, 2004. - 328 с.

94. Нестеренко O.A. Нокардиоподобные и коринеподобные бактерии / O.A. Нестеренко, Е.И. Квасников, Т.М. Ногина. Киев: Наук, думка, 1985. -336 с.

95. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Микробиология / А.И. Нетрусов, И.Б. Котова. М.: Издательский центр "Академия", 2004. - 272 с.

96. Никовская Г.Н., Глоба Л.И. Иммобилизация бактерий в зависимости от гидратации поверхностей клеток и сорбентов / Г.Н. Никовская, Л.И. Глоба // Доклады АН СССР. 1989. - №10. - С. 79-82.

97. Никовская Г.Н., Гордиенко A.C., Глоба Л.И. Гидрофильно-гидрофобные свойства микроорганизмов при различных условиях культивирования//Микробиология. 1989. 58, вып.З. - С.448-451.

98. Новожилова М.И. Количественная характеристика, видовой состав и распространение дрожжевых организмов в Чёрном, Охотском морях и Тихом океане / М.И. Новожилова // Труды Ин-та микробиол. АН СССР. -1955. -№ 4. С. 155.

99. Одум Ю. Экология: в 2-х томах, Т.1 / Ю. Одум. М.: Мир. - 1986. -376 с.

100. Определитель бактерий Берджи: в 2-х т / Под ред. Дж. Хоулта. -М.: Мир, 1997.-800 с.

101. Основы научных исследований в агрономии: учеб. для студентов. / В.Ф. Моисейченко и др.. М.: Колос, 1996. - 336 с.

102. Павленко Н.И., Хенкина Л.М., Бега З.М. Эмульгирующая активность углеводородусваивающих микроорганизмов / Н.И. Павленко, Л.М. Хенкина, З.М. Бега //Микробиологический журнал. 1994. - Т. 56. - №1. - С. 90-91.

103. Пархоменко А.Н., Сопрунова О.Б. Влияние загрязняющих веществ нефтегазового комплекса на структуру и численность микробных сообществ Нижнего Повольжья // Защита окружающей среды в нефтегазовом комплексе. -2008. -№5.-С.42-46.

104. Патин С.А. Экологические проблемы освоения нефтегазовых ресурсов морского шельфа / С.А. Патин. М.: Изд-во ВНИРО, 1997. - 350 с.

105. Патин С.А. Нефть и экология континентального шельфа / С.А. Патин. М.: Изд-во: ВНИРО, 2001. - 247 с.

106. Петрикевич С.Б., Кобзев Е.Н., Шкидченко А.Н. Оценка углеводородокисляющей активности микроорганизмов / С.Б. Петрикевич, Е.Н. Кобзев, А.Н. Шкидченко / Приклад, биохиия и микробиология. 2003. -Т. 39.-№1.-С. 25 - 30.

107. Петров Г.Н. Некоторые физические процессы самоочищения воды от нефти / Г.Н. Петров // Гидробиологический журнал. 1978. - Т. XVI. - №4. -С. 52 - 54.

108. Плешакова E.B. Биодеградация нефтяных углеводородов штаммом Dietzia maris, ее генетические особенности / Е.В. Плешакова // Известия Саратовского университета. Сер. Химия, Биология, Экология. -2007.-Т. 7.-Вып. 1.-С. 54-57.

109. Практикум по микробиологии : учеб. пособие для студ. высш. учеб. Заведений / Нетрусов А.И. и др.; под ред. А.И. Нетрусова. М.: Академия, 2005. - 608 с.

110. Приказ МПР РФ от 15.06.2001 № 511 «Об утверждении Критериев отнесения опасных отходов к классу опасности для окружающей природной среды».

111. Прикладная экобиотехнология: учеб. пособ.: 2 т./ А.Е. Кузнецов и др.. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2010. - 485 с.

112. Пырченкова И. А. Выбор и характеристика активных психротрофных микроорганизмов-деструкторов нефти / И.А. Пырченкова, А.Б. Гафаров, И.Ф. Пунтус, А.Е. Филонов, А.М. Воронин // Прикладная биохимия и микробиология. 2006. - Т. 42. - № 3. - С. 298-305.

113. Резанов И.А. Великие катастрофы в истории Земли / И.А. Резанов. -М.: Наука, 1994.-368 с.

114. Родина А. Г. Методы водной микробиологии. Практ. руководство / А.Г. Родина. М. - Л.: «Наука», 1965.-237 с.

115. Рубан Е.Л. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas / Е.Л. Рубан. М.: Наука, 1986. - 35 с.

116. Рубцова С.И. Оценка бактериального самоочищения вод от нефтяных углеводородов в прибойной зоне акватории Севастополя (Черное море) / С.И. Рубцова // Экология моря. 2003. - Вып. 64. - С.95-98.

117. Руководство к практическим занятиям по микробиологии: практическое пособ. / под ред. Н.С. Егорова. Изд. 2-е. - М.: Изд-во Моск. ун -та, 1983. - 251с.

118. Руководство к практическим занятиям по микробиологии: Учеб. пособ. / под ред. Н.С. Егорова. Изд. 3-е. перераб. и доп.- М.: Изд-во Моск. ун -та, 1995.-224с.

119. Руководство по методам биологического анализа морской воды и донных отложений / Под ред. Цыбань А.В. Л.: Гидрометеоиздат, 1980.-192 с.

120. Руководство по химическому анализу морских вод. РД 52.10.24392. С-Пб.: Гидрометеоиздат, 1993. -263 с.

121. Рябинин А.И. Гидрометеорология и гидрохимия морей. Современное состояние загрязнения вод Черного моря / А.И. Рябинин -Севастополь: Экоси-Гидрофизика, 1996. 230 с.

122. Рябов В.Д. Химия нефти и газа / В.Д. Рябов. М.: Изд-во «Техника», ТУМА ГРУПП, 2004. - 288 с.

123. Салманов М.А. Роль микрофлоры и фитопланктона в продукционных процессах Каспийского моря / М.А. Салманов. М.: Наука, 1987.-216 с.

124. Салманов М.А. Экология и биологическая продуктивность Каспийского моря / М.А. Салманов. Баку: "Исмаил", 1999. - 400 с.

125. СанПиН 2.1.7.573-96 "Гигиенические требования к использованию сточных вод и их осадков для орошения и удобрения".от 31 октября 1996 г. № 46.

126. Сидорова А.В., Морозов Н.В. Биодеградация углеводородов нефти и нефтепродуктов отселектированными углеводородокисляющими микроорганизмами / А.В. Сидорова, Н.В. Морозов // Фундаментальные исследования 2006. - № 11. - С. 74.

127. Скворцова И.Н. Методы выделения и идентификации бактерий рода Pseudomonas / И.Н. Скворцова. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1981. - 77 с.

128. Скворцова И.Н. Идентификация почвенных бактерий рода Bacillus /И.Н. Скворцова. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1983. - 63 с.

129. Скрябин Г.К., Головлева J1.A. Использование микроорганизмов в органическом синтезе / Г.К. Скрябин, JI.A. Головлева. М.: Наука, 1976. -С.335.

130. Смирнов В.В. Бактерии рода Pseudomonas / B.B. Смирнов, Е.А. Киприанова; отв. ред. Б.Е. Айзенман; Ин-т микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного. Киев.: Наук, дукма, 1990. - 246 с.

131. Современная микробиология. Прокариоты: В 2-х томах. Т. 1. Пер. с англ. / Под ред. Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. М.: Мир, 2005. - 656 с.

132. Сокольский А.Ф. Биопродуктивность малых озер / А.Ф. Сокольский. Астрахань: Изд-во БИВЦ «Каспрыба», 1995. - 310 с.

133. Солнцева Н.П. Добыча нефти и геохимия природных ландшафтов / Н.П. Солнцева. М.: Изд-во МГУ - 1998. - 376 с.

134. Сопрунова О.Б. Циано-бактериальные консорциумы в очистке сточных вод / О.Б. Сопрунова // Электр, журнал "Исследовано в России". -2005. № 11. - С.113-20. http:/zhurnal.ape.relarn.ru/articles/2005/o 11.pdf

135. Таусон В.О. К вопросу об усвоении парафина микроорганизмами / В.О. Таусон // Жур-л Русск. Бот. Общ-ва. 1924. - Т.9. - С. 161.

136. Таусон В.О. О бактериальном окислении нефтей / В.О. Таусон // Нефтяное хоз-во. 1928. - № 2. - С .220-238.

137. Таусон В.О. Разрушение микроорганизмами химически устойчивых соединений / В.О. Таусон // Микробиология. 1932. - T.I. - Выл.4.- С.49-83.

138. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии: учеб. пособ. / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева; под ред. В.К. Шильниковой. 5-е изд., перераб. и доп. - М.: Дрофа, 2004. - 256 с.

139. Туров Ю.П., Гузняева М.Ю. Моделирование процесса биодеградации нефти / Ю.П. Туров, М.Ю. Гузняева // Нефтехимия. 2004. - Т. 44.-№ 5.-С. 393-400.

140. Тютюнова Ф.И. Гидрохимия техногенеза / Ф.И. Тютюнова. М.: Наука, 1987.-257 с.

141. Унгер Ф.Г., Андреева JI.H. Фундаментальные аспекты химии нефти. Природа смол и асфальтенов / Ф.Г. Унгер, JT.H. Андреева. -Новосибирск: Наука, 1995. 195 с

142. Федотов A.B., Федотова Т.В. Возможность использовния ассоциации углеводородокисляющих микроорганизмов для ускорения деструкции нефти в почве / A.B. Федотов, Т.В. Федотова // Современные наукоемкие технологии. 2004. - № 2 - С. 116.

143. Цыбань A.B. Бактерионейстон и бактериопланктон шельфовой области Черного моря / A.B. Цыбань -Киев: Наук, думка, 1976. 274 с

144. Шкаликов В. А. Защита растений от болезней / В. А. Шкаликов, О. О. Белошапкин, Д. Д. Букреев и др.; Под ред. В. А. Шкаликова. М.: Колос, 2003. -255 с.

145. Экзерцев В.А. Растительность зоны временного затопления южной части Куйбышевского водохранилища / В.А. Экзерцев // Тр. ин-та биологии вдхр. 1960. - Вып. 3(6). - С. 287-389.

146. Экология: Юридический энциклопедический словарь / Под ред. проф. С.А. Боголюбова. М.: Изд-во Норма, 2001. - 448 с.

147. Экономические проблемы природопользования / Под ред. К. Г. Гофмана, Г. А. Моткина. М.: Наука, 1985. - 140 с.

148. Яскович Г. А., Яковлева Е.П. Изучение гидрофобности поверхности штаммов клеток бактерий / Г.А. Яскович, Е.П. Яковлева // Микробиология. 1996. - 65 - № 4. - С. 565-571.

149. AL-Saleh Е., Drobiova H., Obuekwe С. Predominant culturable crude oil-degrading bacteria in the coast of Kuwait / E. AL-Saleh, H. Drobiova, C. Obuekwe // International Biodeterioration & Biodégradation 2009. - V. 63. -1. 4. -P. 400-406.

150. Atlas R.M., Bartha R. Biodégradation of petroleum in sea water at low temperatures / R.M. Atlas, R. Bartha // Can. J. Microbiol. 1972. - 18. - № 12. -P.1851.

151. Bertrand J.С., Rambeloarisoa E.H., Rontani J.F. et al. Microbial degradation of crude oil in sea water in continuous culture / J.C. Bertrand, E.H. Rambeloarisoa, J.F. Rontani // Biotechnology. Lett. 1983. - Vol. 5. - № 8. - P. 567-572.

152. Bruns К., Dahlmann G.D., Gunkel W. Distribution and activity of petroleum hydrocarbon degrading bacteria in the North and Baltic Seas / K. Bruns,

153. G.D. Dahlmann, W. Gunkel // Deatsche Hydrographische Zeitschrift. 1993. - №6.- P. 359-369.

154. Burd G., Ward O.P. Bacterial degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons on agar plates: The role of biosurfactants / G. Burd, O.P. Ward // Biotechnol. Techn.-1996. Vol. 10. - № 5. - P. 371-374.

155. Cooper D.G., Goldenberg B.G. Surface-active agents from two bacillus species / D.G. Cooper, B.G. Goldenberg // Appl. Environ. Microbial. 1987. - V. 53. -№2.-P. 224-229.

156. Daisuke T. Distribution of oil-degrading bacteria in coastal seawater / T. Daisuke, T. Shunsuke, Y. Yoko, N. Shogo // Environmental Toxicology and Water Quality. 2008. - V. 23. - № 5. - P. 563-569.

157. Desai J.D., Banat I.M. Microbial production of surfactants and their commercial potencial / J.D. Desai, I.M. Banat // Microbiol. Molecular Biol. Rev. -1997.-V. 61.-P. 47-64.

158. Edwards U., Rogall T., Bloeker H., Ende M.D., Boeettge E.C. Isolation and direct complete nucleotide determination of entire genes, characterization of gene coding for 16S ribosomal RNA // Nucleic Acids Research.- 1989.-V.17.-P. 7843-7853.

159. Grimont P.A.D, Grimont F., Irino K. Biochemical characterization of Serratia liquefaciens sensu stricto, Serratia proteamaculans and Serratia grimesii sp. / P.A.D. Grimont, F. Grimont, K. Irino // Curr Microbiol. 1982. - № 7. - P. 69-74.

160. Kalbe C., Marten P., Berg G. (1996). Strains of the genus Serratia as beneficial rhizobacteria of oilseed rape with antifungal properties / C. Kalbe, P. Marten, G. Berg // Microbiological Research. 1996. - V. 151. - P. 433-439.

161. Karanth N.G.K., Deo P.G., Veenanadig N.K. Microbial production of biosurfactants and their importance / N.G.K. Karanth, P.G. Deo, N.K. Veenanadig // Current Science. 1999. - V. 77. - P. 116 -126.

162. Kenneth E.P., Moldovan J.M. The Biomarker Guide: Interpreting Molecular Fossils in Petroleum and Ancient Sediments / E.P. Kenneth, J.M. Moldovan // Prentice Hall Inc., Englewood Cliffs. 1993. - P. 363.

163. Krahn M.M., Stein J.E. Assessing exposure of marine biota and habitats to petroleum compounds / M.M. Krahn, J.E. Stein // Analytical chemistry news and features. 1998. - № 1. - P. 186.

164. Krigswoll S., Senk J., Storr J. Microbial emulsification of crude oil / S. Krigswoll, J. Senk, J. Storr // 5th Eur. Congr. On Biotechnology . Copenhagen, 813 July 1990. Proc. Voll. Copenhagen. 1990. - P.221-224.

165. Leachy J.G., Colwell R.R. Microbial degradation of hydrocarbons in the environment / J.G. Leachy, R.R. Colwell // Microbiol. Rev. 1990. - V. 54. -№3. - P. 305-315.

166. Loosdrecht M. Bacterial adhesion / M. Loosdrecht // Agricaltural Univer.Wageningen. 1990. - P. 111.

167. Marilyn G. Biocontrol of Fusarium sambucinum, dry rot of potato, by Serratia plymuthica / G. Marilyn // Biocontrol Science and Technology. 2008. - V. 18. - P. 1005- 1016.

168. Mills A.L., Breule C., Colwell R.R. Enumeration of petroleum -degrading marine and estuarine microorganisms by the most probable number method / A.L. Mills, C. Breule, R.R. Colwell // Canad. J. Microbiol. 1978. - V. 24. - № 5. - P. 552.

169. Miyoschi M. Die Durchbohrung von Membranen durch Pilzfaden / M. Miyoschi // J. wiss. Bot. 1895. - № 1. - P. 299

170. Moo-Young M. Improve the performance of airlift reactors // Can. J. Chem. End. 1973. - V. 53. - № 1. - P. 113 - 118.

171. Morgan P., Watkinson R.J. Hydrocarbon degradation in soils and methods for soil biotreatment / P. Morgan, R.J. Watkinson // Crit. Rev. Biotechnol. 1989. -V. 8. - P.305-333.

172. Orton J. H. Possible effects on marine organisms of oil discharged at sea / J.H. Orton // Nature, bond. 1925. - № 115. - P.910-911.

173. Piatt T. Photosynthesis of picoplankton in the oligotrophic ocean / T. Piatt, D. V. Subla Rao, B. Irwin // Nature. 1983. Vol. 301. - N 5902. - P. 702-704.

174. Rahn O. Ein Paraffin zersetzender Schimmelpilz / О. Rahn // Zentralbl Bakteriol Parasitenk Infekt. 1906. - № 16. - P. 382-384.

175. Sakalle K., Rajkumar S. Isolation of Crude Oil Degrading Marine Bacteria and Assessment for Biosurfactant Production / K. Sakalle, S. Rajkumar // The Internet Journal of Microbiology. 2009. - V. 7. - № 2. - P. 246.

176. Schlegel G.G. Neurofibromatose Tecklinghausen und Phiiochromocytome / G.G. Schlegel // Schweiz. Med. Wschr. 1960. - V. 96, - PP. 31-39.

177. Soli G., Bens E.M. Bacteria which attack petroleum hydrocarbons in a saline medium / G. Soli, E.M. Bens // Biotechnol. And Bioeng. 1972. - V. 14. - P. 319-330.

178. Sotirova A., Spasova D., Vasileva-Tonkova E., Galabova D. Effects of rhamnolipid-biosurfactant on cell surface of Pseudomonas aeruginosa / A. Sotirova,

179. D. Spasova, E. Vasileva-Tonkova, D. Galabova // Microbiological Research. -2009.-№. 164.-P. 297-303.

180. Sugiura K., Ishihara M., Shimauchi T., Harayama S. Physicochemical properties and biodegradability of crude oil / K. Sugiura, M. Ishihara, T. Shimauchi, S. Harayama // Environ. Sci. and Technol. 1997. - V. 31. - № 1. - P.45-51.

181. Tiehm A. Degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons in the presence of synthetic surfactans / A. Tiehm // Appl. and Environ. Microbiol. 1994. -V. 60. -№ l.-P. 258-263.

182. Zhang Y., Miller R.M. Enhanced octadecane dispersion and biodégradation by a Pseudomonas rhamnolipid surfactant (biosurfactant) / Y. Zhang, R.M. Miller // Appl Environ Microbiol. 1992. - № 58(10). - P. 3276-3282.s)

183. Zhang F, Smith D.L. Genistein accumulation in soybean Glycine max (L.) Merrill. root systems under suboptimal root zone temperature / F. Zhang, D.L. Smith // Journal of Experimental Botany. 1996. - V. 47. - P. 785-792.

184. Zhang F, Smith D.L. Application of genistein to inocula and soil to overcome low spring soil temperature inhibition of soybean nodulation and nitrogen fixation / .F. Zhang, D.L. Smith // Plant and Soil 1. 1997. - V. 92. - P. 141-151.

185. ZoBell C. E., Grant C. W., Haas H. F. Marine microorganisms which oxidize petroleum hydrocarbons / C.E. ZoBell, C.W. Grant, H.F. Haas // Bull. Am. Assoc. Petroleum Geol. 1943 - № 27, P. 1175-1193.

186. ZoBell C. E. Marine microbiology / C.E ZoBell. Waltham, Mass.: Chron. Bot. Press, 1946. - 240 p.

187. ZoBell C. E. Assimilation of hydrocarbons by microorganisms / C.E. ZoBell // Advances in Enzymology. 1950. - V. 10. - P. 443-486.

188. Zo Bell C.E. The occurrence, effects and fate of oil polluting the sea / C.E. Zo Bell // Adv. Wat. Pollut. Res. 1964. - № 3. - P. 85-118.

189. Zo Bell C.E. Microbial degradation of oil: present status, problems and perspectives / C.E. Zo Bell // Microbial Degradation of Oil Pollutants. Center for Wetland Resources. Louisian State University. 1973. - №. 3 - P. 153-162.

Информация о работе

Соколова, Вера Владимировна
кандидата биологических наук
Астрахань, 2012
ВАК 03.02.08

Диссертация

Углеводородокисляющие бактерии и ассимиляционный потенциал морской воды Северного Каспия - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы