Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитофизиологические и цитогенетические проявления естественного старения семян в зависимости от генотипа и условий хранения генофонда сельскохозяйственных культур

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Цитофизиологические и цитогенетические проявления естественного старения семян в зависимости от генотипа и условий хранения генофонда сельскохозяйственных культур"

ХАРЬКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ТОЛСТОПЛЕТ ЕЛЕНА ВИТАЛЬЕВНА

ЦИТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ II ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ЕСТЕСТВЕННОГО СТАРЕНИЯ СЕМЯН В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ГЕНОТИПА И УСЛОВИЙ ХРАНЕНИЯ ГЕНОФОНДА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР

031)0.15. - Генетика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидат биологических на)К

Харьков - 1994

Диссертация является рукописью

Диссертация выполнена в отделе генетики НИИ биологии Харьковского государственного университета.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:'

доктор биологических наук, профессор Н.Г.Шестопалова.

доктор биологических наук, Цыбулько Владимир Сергеевич (Институт Растениеводства им. В.Я.Юрьева УЛАН, г. Харьков)

кандидат биологических наук Кириченко Ольга Ивановна (Украинский НИИ Лесного хозяйства и агромелиорации, г. Харьков)

Харьковский государственный Аграрный университет

Защита состоится

1994 г. в

/7

«Й)

на заседании специализированного совета К 053.06.07 Харьковского государственного университета (310077, пл. Свободы, 4, аудитирад^ ' ЛГ ).

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Харьковского госуннверситсга.

Автореферат разослан

■3/ ■■ /Р

¡994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

Л.В.Некрасова

ОЫЦАЯ ХЛРАкШ'ИС"П1КА 1'ЛЬиГЫ

Актуальность проблемы. Проблема 1снофонда биолч! пчс-еких обьекюв >азных уровней организации как в целом мире, так и в Украине приобрела пратешческое значение, полому совершенствование надежности систем ■-охранения генетических ресурсов яиаиеюя одной из важных задач :овременной генетики.

Подъем интереса к проблеме сгимулировал исследования (енофондон, :оздание современных генетических банков, в том числе и поддерживаемых «етодами биотехнологии (Vik, 1986). Большинство исследовании посвящено трфологнческим и физиолого-бцохныическим изменениям семян в процессе ранения, для изучения которого часто используются мотели ускоренного тарения (Орлоиа H.H., 1975; Murin, 1988).

Клеточные и молекудярно-генетические механизмы старения изучались н сновном на клетках и тканях жлтотых и человека, включая молельные истемы in vitro. Большой экхперпментальныц материал представлен в статьях, бзорах и монографиях Нагорного А.В.(1947), Нанюииша БФ., Вердышева '.Д. (1977), Никитина A.B. (19S2), Фролькиса ВН. (1992), Мазина А.Л. (1993).

Цитологически]! ii генетический аспекты естественною старения семян в роцессе их хранения в государственных банках генов изучена крайне едостаточно. Не изучено проявление старения на уровне систем Зразовательных критических зародышевых тканей - меристем, от сооояция теток которых зависит степень повреждения и восстановления всего зстптелыюго организма, реализация диетической программы развития, (активные и продукционные снособцосш paeieuu».

Подобные исследования имеют большое не только теоретческое, но и 1учно-практнческое значение а связи с совершенствованием количественных качественных показателей опенки жизнеспособности семян п выявлением пималышх условии для долюпременного их хранения.

Цели. И задачи _цссйедЦ83ЦШ!-- Целью района явилось комилскенре пофизио >о!ическне и нишгенегическое исследование популяции ¡piiciewai riecKiix клегок npopoeiKou образцов семян и зависимое!и oi ловнй хранения кчюфонца и генотипов обьекаов. Для досшжеиия пели сеерташопной раГкны были поекзвлены следующие з;№лч»г.

1. П|Следовазь ишешку и уровень мшотическои активности ijiciok рнеиой мерисгемы iipop')CiKoij "eiapnx' семян в зшисимост щ условий анения I енофонда.

2. Я ) инь линамшу и уровень tcicciHeiinoio Mjiaieneia, вызванною ф -нием семтн, иа ят.пи- пк (см '.¡inoi. рас ц-tinii, в том мнете и

ч

подвергшихся влиянию радиационного загрязнения в связи с аварией на Чернобыльской АЭС.

3. Изучить цитологические и цитогенетические проявления естественного старения гибридных гетсрозпсиых семян в сравнении с их исходными формами.

4. Исследовать изменения некоторых ядрышковых показателей в клетках проростков "старых" семян.

Научная новизна работы. В диссертационной работе показано снижение митотнчсского потенциала "старых" семян на уровне систем меристематических клеток проростков и увеличения меры их гетерогенносп по цитофизиологическим и цитогенетическим показателям. Показано, чте глубина и динамика изменений названных показателей зависит от условий сроков хранения генофонда н генотипа объектов.

Новыми являются данные о динамике мутационного процесса в перио; начального роста проростков "старых" семян, сформированных в условия: Чернобыльского региона.

Впервые установлены различия в проявлении на клеточном уровн естественного старения гибридных гетерозисных семян и их исходных фор» гибридов озимой ржи.

Выявлены изменения доли клеток с различным количеством ядрышек вызванные старением семян различных генотипов и условий хранения, чт косвенно отражает изменения активности полигенных систе? ядрышкообразующих хромосом.

На защиту выносятся результаты экспериментальных исследований автор по изучению клеточных механизмов естественного старения семян зависимости от условий сохранения генофонда и генотипа объектов.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследовани ■ изменения кинетики и уровня митотического потенциала, уровь онтогенетических и некоторых ядрышковых показателей углубляк представления о клеточных механизмах старения семян, . снижения i жизнеспособности и возможностях длительного сохранения генофонда.

Получены новые данные о проявлении. старения у семян линий • гибридов, свидетельствуютщие о генетической обусловленности изменен1 структурно-функционального состояния клеток и их органоидов в процес хранения.

Результаты исследований позволяют предположить, что при хранеш семян происходят негативные, изменения процессов, лежащих в осно регуляции клеточной пролиферации* спонтанного мутагенеза и активное ядрышковых геномов.

Полученные в работе данные .свидетельствуют о том, чю С1еиень негативных изменений семян, вызванных старением, зависит от условии их сохранения. Поэтому, такие цитологические показатели, как задержка вступления клеток в первые митозы при прорастании "старых" семян и ндрышковые индексы в клетках меристемы проростков могут служить дополнительными тестами для оценки состояния образцов семян, хранящихся в банках генов и выбора оптимальных режимов для более длительного поддержания их жизнеспособности.

Апробации работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на 8 съезде Украинского ботанического общества (Ивано-Франковск, 1987), на 5 Всесоюзной межуниверситетской конференции "Биология клетки" (Тбилиси, 1987), на научной конференции молодых ученых (Одесса, 1988), на 6 съезде УОГиС (Полтава, 1992).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, трех глав экспериментальной части,, выводов, списка литературы, содержащего 183 наименования. Работа изложена на 131 стр. машинописного текста (без цитированной литературы), включает 28 рисунков и 32 таблицы.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В работе использовались образцы семян из генофонда Международен) института генетических ресурсов РАСХН им. Н.И.Вавилова (бывший ВИР) и института Растениеводства им. В.Я.Юрьева (бывший ИИ И растениеводства, селекции и генетики.)

Изучались семена 9-ти генотипов - сорт гороха Улздовский, сорта озимой ржи "Вятка" и Харьковская-78, 2 гетерозисных гибрида озимой ржи и 4 их исходных формы.

В работе было 22 варианта - хранение семян гороха в условиях лаборатории и специализированного хранилища в следующих упаковках -герметически закрытой стеклянной таре, полиэтиленовых и бумажных пакетах; «ранение в условиях лаборатории всех вышеназванных форм озимой ржи. Контролем служили свежеубранные семена тех же сортов.

Использовались образцы разных сроков хранения от 2 до 22 лет, сохранивших всхожесть от 60 до 27%. Горох Ргапп 8а1мип Ь. был избран как практически важная культура и модельный объект цтя цитологии. Изучение озимой ржи - Бесак сегеа!е I.. представляло интерес в связи с тем, что она относится к микробпотикам и, поэтому, является удобной моделью для

изучения естественною старения, является облнгатным перекрестником и сохранение ее 1енегн'ческих ресурсов вызывает особые трудности, а также перспективами использования и необходимостью изучения проявления у данной культуры гетерозиса.

Основное внимание было уделено изучению системам образовательных . критических тканей проростков - меристемам зародышевых корешков. 13 качестве интегральных показателей, отражающих активность систем клеток и клеточных популяций, определялись кинетика и уровень пролиферативной активности клеток, уровень спонтанного, вызванного старением, мутагенеза хромосом (частоту клеток с хромосомными аберрациями и микроядрами), некоторые ядрышковые показатели, косвенно свидетельствующие об активности кластеров рибосомных генов (Паушева 3.П..1972).

Учет избранных показателей проводился в начальный период роста проростков, в течение первых мнтотическпх циклов, когда происходит дерепрессня генома и активация многочисленных генов прорастающих семян, а также гетерозис проявляется в наиболее чистом виде.

Статистическую обработку проводили по методу Фишера-Стьюдента).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Митотическая активность зародышевой меристемы проростков семян хранившихся в условиях лаборатории и хранилища. Динамика и уровш! митотической активности (МА) клеток проростков семян гороха, хранившихся в условиях лаборатории представлены на рис. I. Проростки вариантов "старые' семена вступали в первые мнгозы с задержкой на 6 часов, тогда как г конрольнои варианте они наблюдались уже на 34 час роста. Отличие оп свежеубранных семян проявлялось в кинетике делений и уровне митотическш индексов (МИ). При изучении МА "старых" семян озимой ржи наблюдалас1 закономерность, выявленная на "старых" семенах гороха. Клетки проростког "старых" семян ржи значительно позже вступали в первые митозы и задержка е сравнении с контролем составила 12 часов. Уровень МА был ниже, чем I контроле в 1,5 раза.

Проростки семян, которые хранились в хранилище в той же упаковке имели более высокие значения МИ. Семена варианта "бумага" был; жизнеспособными, но их МА ниже, чем у проростков из вариантов "стекло" г "полиэтилен". В период прорастания семян из бумажных пакето! лабораторного хранения делящиеся клетки не обнаружены.

Различия между режимами хранения четко выражены при сравненш максимальных, суммарных и средних значений МА за первые 14 часов рост;

Митотичсская активность клеток проростков семян гороха, хранившихся в разных упаковках

(хранение семян в лаборатории). *

МИ,%

Рис.1

(рис.2). Проростки семян всех вариантов упаковок имели более высокую МЛ при хранении в. условиях хранилища. Проростки семян варианта "стекло" и "полиэтилен" имели близкие значения. Негативные изменения в семенах при длительном хранении в меньшей степени выражены в проростках семян варианта "стекло", хранившихся в условиях хранилища, что позволяет считать эти условия наиболее благоприятными для хранена генофонда.

Цитологическая гетерогенность проростков "старых" семян. Важным показателем, характеризующим партию семян, является их однородность. В результате старения семян увеличивается мера гетерогенности их проростков по митотическим индексам. Для ее изучения проростки разделили на 3 класса: 1 класс - МИ меньше 3%, 2 класс - от 3 до 6% и 3 класс - больше 696. Проростки семян контрольной партии отличались от семян варианта "стекло" лабораторного хранения высоким уровнем МА. Больше половины их (51%) имели МИ от 3 до 6% и 43% - больше 6% (рис.За). Проростки семян вариантов "стекло" и "полиэтилен" более чем в 1,0 раз превышали контроль по .количеству проростков с МИ < 3% и в два раза уступали свежеубранным семенам по среднему и максимальному значениям МИ. Результаты изучения МИ проростков 3-х вариантов хранения .семян в хранилище показаны на рис.Зб. 58% проростков семян варианта "стекло" имели МИ > 6%, что в два раза превышало количество проростков из класса с минимальным его значением. Сходное распределение проростков по классам отмечено и у семян варианта "полиэтилен". Для семян варианта "бумага" было выявлено близкое количество проростков трех классов (34%, 25% и 40%).

Структурно-функциональное состояние ядрышек. Активность генов рРНК в интерфазном ядре можно косвенно оценить по изменению числа, формы, размера и структуры ядрышек. У гороха и озимой ржи кластеры генов рРНК локализованы в двух ядрышкообразующих хромосомах. В результате учета Доли ядер с двумя ядрышками и вакуолизированных ядрышек выявлена тенденция к снижению этого показателя в популяции меристематических клеток "старых" семян всех вариантов опытов по сравнению с контролем.

Влияние генотипа объектов на процесс стареНия семян. Объектами исследовашш были семена гибридов озимой ржи с разной степенью проявления гетерозиса (по урожайности) и их исходные формы. Семена хранили в бумажных пакетах в условиях лаборатории в течение 5 лет. Контролем служили свежеубранные семена. Высокогетерозисный (ВГ) гибрид (24x617) в контрольном варианте превосходит исходные родительские формы и слпбогетерозисный (СГ) гибрид (30x1046) по доле проростков с высоким митотическим потенциалом.

Митотическая активность за первые 14 масон роста проростков семян гороха, хранившихся в условиях лаборатории н хранилища.

Максимальный МИ, %

и

12 С

10 Р1

8 *

в I

« * * | Ч

2 } к Р.: >

а 1#к£ Ё№

Стекло Полиэтилен Бумага

Суммарный МИ, %

Стекло Полиэтилен Бумага Средний МИ, %

Стекло Полиэтилен Бумага

□Лаборатория ВХранилище а

Рис. 2

.70 60 50 40 30 20 10 0

Гетерогенность проростков семян гороха по митотической активности. Условия лабораторного храпения.

70 60 50 40 30 20 10 0

еЬ.

<3% 3-6% >6% Контроль

<3% 3-6% >6% Стекло

Рис ЗА

3-6% >6% Полиэтилен

Гетерогенность проростков партий семян гороха по митотической активности. Хранение в условиях хранилища.

80 70 60 50 40 30 20 10 0

<3% 3-6% >6% Стекло

80 70 60 50 40 30 20 10 0

<3% 3-6% >6% Полиэтилен

<3% 3-6% >6% Бумага

Рис. ЗБ

• В процессе прорастания, семян псех изучаемых форм наблюдалась значительная задержка вступления клеюк о первые митозы. В сравнении с контролем в клетках проростков "старых" семян митозы зарегистрированы на 22-26 часов позже, т.е па 48-52 часа после замачивания семян.

По показателям снижения количества жизнеспособных семян при старении более существенные негативные изменения происходят у гибридов по сравнению с их исходными формами (рнс.4а, рис,46). Так, всхожесть семян ВГ гибрида 24x617 снизилась с 94% до 24%, а линия 617 с 70% до 26%. У СГ гибрида 30x1046 количество жизнеспособных семян снизилось с 96% до 32%, что на 6% меньше, чем у В Г,

Соотношение показателей снижения количества жизнеспособных семян СГ и его исходных форм такое же. Семена линии Л.30 снизили всхожесть с 80% в . контороле до 32% и линия Л.1046 с 75% до 13,5%.

Изменилось соотношение количества проростков по МИ. При прорастании свежеубранных семян ВГ гибрида 24x617 58% проростков имели МИ более 6%. В процессе старения семян количество проростков этого класса снизилось больше, чем в 4 раза. У СГ гибрида 30x1046 в контроле этот класс был представлен близким по значению количеством проростков. Таким образом, более существенное снижение количества семян с высоким митотическим потенциалом происходит у ВГ гибрида. У исходных форм количество проростков с высокими значениями МИ снизилась почти в 3 раза. .,

Онтогенетические проявлении старения семян озимой ржи гибридов и их Исходных Форм зависело от степени гетерозисности объектов. В проростках семян ВГ гибрида 24x617 бьио наименьшее количество аберрантных клеток -1% (рис.5). У СГ гибрида 30x1046 этот показатель составлял 2%. Все исходные формы как первого, так и второго гибрида превышали свои гибриды по частоте клеток с хромосомными абберациями в 2-6 раз. Меньший уровень мутирования у гибридов, по видимому, связан с более активными процессами восстановления.

Известно, что одним из проявлений ответной реакции на облучение является ускоренное старение. Представляет интерес проследить динамику мутационного процесса 'в клетках проростков семян, сформированных в Чернобыльском регионе. Исследования озимой ржи после годичного хранения показали, что по мере роста проростков происходило снижение доли клеток с кромосомными аберрациями.

Частота аберрантных ано-телофаз в период появления первых митозов (1-3 фиксация, 22-26 час начального роста) составляла ,15%. К 32-34 ч (6 -7 {шксашш) этот показатель снизился почти до уровня спонтанного мутагенеза ;Р>0,95). Микроядра (МЯ) были обнаружены на 26-28 час роста (4-5

Всхожесть ссшш контроля и "старых" семян гибридов и исходных форм ■ озимой ржи и распределение проростков по классам МИ (%)

Гибрид 24*617

Линия 24

Линия 617

мо >о >о 70 60 <0 40 30 20 10 . О

Кош-

Стар

вз-6% а>6%

100

м

80

70

60

50

40

30

20

10

0

г"'

Конг

. Стар

чоо 90 80 70 60 и

40

30 20 10 о

Конт

Стар

КЭ% В 3-6% □ >6% И<3% 03-6% О >6%

Рис. 4А

Гибрид 30*1046

Линия 30

Линия 1046

Рис. 4Б

Частота клеток с хромосомными аберрациями в корневой меристеме исходных форм и гибридов семян озимой ржи при естественном старении

Аберрантные % Аио-Телофазы

Р>0,999

14

11 —1

«

8 1

8 р>о,д 5

4 г: ■

2 ! рп

0 1 У/1

Р1 24*617

Л. 24

Л.617

Р^95 р>о,05-

Р1 30*1046

Я)*;!

х- . '

Л.30 Л.1046

□ Первичный

корень 0 Вторичный корень

а

Рис. 5.

¡фиксации), что свидетельствовало о наступлении второго митишчсскою цикла. Частота клеток с МЯ составляла 0,4%, а к 34-му часу (7 фиксация) снизилась до 0,17% (Р>0,95). Таким образом, в клетках проростков части "старых", сохранившихся жизнеспособными (50,5%), с относительно высоким митотическпм потенциалом семян происходили процессы естественного репонулшшонною восстановленни. Несмотря на неизбежные негативные изменения в клетках зародыша семян в процессе старения, активность систем защиты сохранилась, что привело к почти полному устранению аберрантных клеток в популяции.

ВЫВОДЫ

1. Существенные но показателям, характеризующим митотический потенциал, различия между свежеубранными и "старыми" семенами касаются времени начала первых митозов при прорастании секши и уровни-^ митотических индексов.

Для "старых" семян гороха и озимой ржи характерна задержка первых митозов (на 6-24 час.), снижение среднего показателя мнтотической активности.

2. Глубина и динамика изменений названных показателей зависит от условий (технологий) хранения генофонда и генотипа объектов. Негативные изменения процессов клеточной пролиферации в меньшей степени выражены в проростках семян, хранившихся в специальном хранилище, в герметически закрытой стеклянной таре, что позволяет считать эти условия наиболее оптимальными по сравнению с другими, названными выше.

3. В процессе старения семян возрастает индивидуальная изменчивость кл~ток и проростков, что приводит.к увеличению меры их гетерогенности. Варьирование значений митотических индексов (МИ) колеблется от 0 до 6-7% и более, а дом проростков с высокими МИ снижается, особенно при про] астании семян, хранившихся в лаборатории, в бумажных пакетах. Индивидуальная изменчивость наблюдается и по частоте клеток с мутациями хромосом.

4. Несмотря на неизбежные негативные изменения, происходящие в процессе старения семян, защитные системы клеток продолжают функционировать, что подтверждается снижением частоты клеток с хромосомными аберрациями в меристеме проростков.

5. В контрольном варианте (свежеубранные семена) ВГ гибрид озимой ржи 24/617 превосходит исходные формы и СГ гибрид 30x 1046 по доле проростков (а, следовательно, и семян) с высоким митотическпм потенциалом.

6. II« показателям снижения количества жизнеспособных семян, а также семян и проростков с высоким митотичес .им потенциалом," более сушес1венные негагивные изменения, характерные для процессов старения, происходят в зародышевых тканях гибридов, по сравнению с исходными формами, у ВГ гибрида по сравнению со СГ гибридом.

7. О варианте "старые" семена гетерозис у озимом ржи проявляется по показателю частоты клеток с хромосомными аберрациями. Этот показатель в 2-6 раз ниже в меристеме проростков гибридов, по сравнению с исходными формами, что, по-тшимому, связано с активными процессами восстановления.

8. Для всех вариантов опытов выявлены однотипные тенденции к снижению доли клеток с двумя ядрьшжамн, наиболее полно соответствующих генетической конституции объектов и косвенно отражающих изменение структурно-функционального состояния ядрышковых организаторов.

9. Снижение митотического потенциала семян, доли ядер с двумя ядрышками, увеличение частоты клеток с хромосомными мутациями в меристеме проростков являются общими критериями проявления старения на клеточном уровне. Изменения в относительно оптимальных условиях (хранилище, герметически закрытая стеклянная тара) и неблагоприятных (лаборатория, бумажные пакеты) условиях хранения семян имеют сходный характер, но различаются по степени проявления. Данные цитологических., исследований позволяют предположить, что при хранении семян происходят негативные изменения процессов, лежащих в основе регуляции клеточной пролиферации, спонтанного мутагенеза и активности ядрышковых геномов,

10. Различия, выявленные между изучаемыми формами показывают, что темпы и глубина изменений клеток зародышевых тканей при старении семян в значительной мере зависят от генотипа.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИЙ

1. Шестопалова Н.Г., БаеваТ.И., Орлова О.В., Винокурова Л.В., Головина Л.Н., 'Голстоплет Е.В. Цитологические исследования сельхоз. растений в связи с гибридизацией и продуктивностью Тезисы 5-го съезда генетиков . и селекционеров Украины. Клев, 1986 г.

2. Толстоплет Е.В. Цитологические исследования семян :ельскохозяйственных культур в связи с режимами и сроками их фанения.Физические, химические и математические методы в современной жологии. Тез. докл. республиканской школы-семинара мол. учен, и спец. Сншинев, 21-22 мая , 1987 г.

3. Толстоплет Е.В., Баркова И.Н. Интенсивность размножения клеток корневой меристемы проростков семян с различной жизнеспособностью. 8 съезд Укр. ботанич. общества. Тез. докл. Ивано-Франковск, май 1987 г. Киев, Наук, думка, 1987. 1 стр.

. 4. Шестопалова Н.Г., Баева Т.И., Орлова О.В., Толстоплет Е.В. Связь активности пролиферативных процессов на ранних этапах онтогенеза с конечной продуктивностью сельхоз. растений. Молекулярные и функциональные механизмы онтогенеза. Всесоюзный симпозиум. Тез. докл. 27-29 октября 1987 года. Харьков, 1987.

5. Толстоплет Е.В. Изучение пролиферативнои активности и состояния ядрышек в клетках растений в связи со старением семян. 5-я Всесоюзная межуниверситетская конференция "Биология клетки". 16-21 ноября 1987 г., г.Тбилиси. Труды, ч. 1. Тбилиси, 1987.

6. Толстоплет Е.В. Изменение митотического и ядрышкового индексов при старении семян. Материалы науч. конф. мол. , ученых Одесского госуниверситета. Серия "Биология" 22-23 сентября 1988 года, Одесса. ГАСНТИ 34.19.01.

7. Орлова О.В., Толстоплет Е.В., Шестопалова Н.Г. Изучение ядрышек в связи с митотическим потенциалом и продуктивностью растений. Вестник Харьковского университета №313. Проблемы физиологии и биохимии, онтогенеза и физиологической генетики. Харьков, Из-во при ХГУ "Виша школа", 1988 г.

8. Шестопалова Н.Г., Толстоплет Е.В., Баева Т.Н. Изменение митотического потенциала и состояние ядрышек клеток зародышей Ь процессе старения семян. S-й Всесоюзный съезд геронтологов и гериатров. 22-25 ноября 1988 г., г. Тбилиси. Тез. и рефераты докладов, ч 2. Киев, 1988.

9. Толстоплет Е.В. Цитологические исследования генофонда гороха в процессе его хранения. 6-й съезд Украинского общества генетиков и селекционеров. Полтава. Тез. докл. Киев, 1992 г.

10. Е.В.Толсто/глет. Изменение числа ядрышек в ядрах клеток меристемы проростков "старых" семян в зависимости от условий хранения генофонда. Симпозиум "Биологические механизмы старения", 12-14 мая 1994 г. Харьков. Тез. докладов. Харьков, ¡994.

11. Е.В.Толстоплег, Н.Г.Шестопалова. Динамика мутационного процееса в клетках проростков "стареющих" семян. Симпозиум "Биологические механизмы старения", 12-14 мая 1994 г. Харьков. Тез. докладов. Харьков, 1994.

12. Т.И.Баева, Н.Г.Шестопалова, Е.В.Толстоплет. Изменение структурно-функциональною состояния клеток зародышевой меристемы семян с разнык