Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Травматогенный потенциал импульсных динамических воздействий в условиях модуляции антиоксидантного статуса организма

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Травматогенный потенциал импульсных динамических воздействий в условиях модуляции антиоксидантного статуса организма"

На правах рукописи

| МИЩЕНКО

. Денис Валерьевич

ТРАВМА ТОГЕННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ИМПУЛЬСНЫХ ДИНАМИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЙ В УСЛОВИЯХ МОДУЛЯЦИИ АНТИОКСИДАНТНОГО СТАТУСА

ОРГАНИЗМА

Специальность 03.00.02 - биофизика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

а»

МИЩЕНКО Денис Валерьевич

ТРАВМА ТОГЕННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ИМПУЛЬСНЫХ ДИНАМИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЙ В УСЛОВИЯХ МОДУЛЯЦИИ АНТИОКСИДАНТНОГО СТАТУСА

ОРГАНИЗМА

Специальность 03.00.02 - биофизика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

\

Москва, 2005 г.

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С-ЛегерСург

ам^рк

Работа выполнена в Институте проблем химической физики РАН

Научный руководитель: к.х.н., с.и.с. Богданов Геннадий Николаевич

Официальные оппоненты: д.б.н., профессор Ланкин Вадим Зиновьевич

д.б.н. Ерзинкян Карен Левонович

Ведущая организация: Институт биохимичексой физики РАН

им. Н.М. Эмануэля.

Защита состоится «_» г. в_час.

на заседании Диссертационного Совета Д 002 252 01 в Центре теоретических

проблем физико-химической фармакологии РАН, Москва, ул. Косыгина, 4.

/

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Центра теоретических

проблем физико-химической фармакологии РАН.

/

Автореферат разослан " " 2005 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета

/Ц

д.б.н. Радкевич Людмила Александровна

© Мищенко Д.В., 2005 > Институт проблем химической физики РАН, 2005

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Среди травматогенных факторов различной природы особое место занимает группа импульсных динамических воздействий (ИДВ), вызываемых высокоэнергетическими эффекторами, поражающее действие которых связано с быстрой передачей тканям и органам большого количества механической энергии. Особенности молекулярных механизмов передачи и трансформации кинетической энергии в биологических объектах изучены недостаточно и являются актуальной научно-прикладной проблемой.

Фундаментальную значимость этой проблемы трудно переоценить, если принять во внимание, что к категории поражающих факторов ИДВ наряду с баллистическими ранящими снарядами проникающего и непроникающего типа относятся воздушные ударные волны (ВУВ), интенсивные акустические колебания (ИАК), импульсы лазерного и корпускулярного излучения и т.д. Здесь же следует отметить травматогенный потенциал транспортных средств, инженерных сооружений и технолог ических установок в условиях возможных техногенных катастроф.

Совокупность эффектов повреждающих ИДВ на живые организмы в значительной степени реализуется на уровне биологических мембран и объединяется понятием мембранной патологии и в целом может характеризовать травматогенный потенциал действующего фактора. Применительно к молекулярным механизмам возникновения баротравм при ИДВ весьма актуальной является проблема регуляторной взаимосвязи между антиоксидантным статусом, мембранопротекторным действием антиоксидантов и степенью повреждения организма, хотя ее отдельные аспекты остаются мало изученными.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. С целью установления взаимосвязи между степенью повреждения организма и антиоксидантным статусом при травматогенных импульсных воздействиях были поставлены следующие задачи:

1) на разных морфо-функциональных уровнях организма количественно охарактеризовать эффекты фармакологической коррекции баротравм биоантиоксидантами при действии ВУВ или интенсивных акустических колебаний;

2) изучить влияние синтетических биоантиоксидантов на показатели антиоксидантного статуса крови: активность супероксиддисмутазы, содержание церулоплазмина и трансферрина в крови;

3) охарактеризовать возможную роль N0 при поражающем действии ВУВ и изучить фармакологическое действие нового бифункционального антиоксиданта, содержащего оксиароматический фрагмент и группировку-донор монооксида азота.

4) выявить корреляционные соотношения между показателями травматогенного потенциала воздействия и антиоксидантным статусом организма.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые изучены количественные показатели баротравматических повреждений живых организмов на разных структурно-функциональных уровнях их организации: молекулярном, субклеточном, клеточном, органном и организма в целом.

При действии ВУВ и ИАК охарактеризованы кровоизлияния внутренних органов экспериментальных животных. Полученные данные обобщены в рамках свободнорадикальных механизмов оксидативного стресса, что позволяет использовать рациональные методы лекарственной профилактики баротравматических повреждений с применением биоантиоксидантов.

Установлено, что предварительное введение антиоксидантов снижает травматогенный потенциал ИДВ. Это подтверждено нормализацией функциональной и метаболической активности внутренних органов, торможением свободнорадикальных патогенетических процессов повреждения на уровне мембранного аппарата клеток. Изучено профилактическое действие антиоксидантов оксиароматического ряда и стабильных нитроксильных радикалов. Впервые изучен бинарный антиоксидант нитроксисукцинат 2,4,6-триметил-3-оксипиридина (топирокс), проявляющий свойства антигипоксанта и антиоксиданта.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Прикладной аспект работы связан с открывающимися возможностями использования ингибиторов свободнорадикальных реакций для профилактического применения антиоксидантов при повреждающем действии различных ИДВ.

С учетом приведенных данных о высокой эффективности корригирующего действия бинарного антиоксиданта топирокса при баротравматических повреждениях, можно говорить о перспективности его использования в качестве нового мембранопротектора и средства защиты живых организмов при патогенетических процессах оксидативного стресса. Весьма перспективно применение бинарного антиоксиданта в кардиологии, офтальмологии и терапии сосудистых патологий.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты работы докладывались и обсуждались на конференции "Научные исследования в наукоградах Московской области. Новые материалы и технологии. Инновации XXI века", Черноголовка, 2001; конференции "Свободные радикалы и здоровье человека", Смоленск, 2001; ежегодная молодежная конференция ИБХФ-ВУЗы «Биохимическая физика», Москва, 2002; Всероссийской конференции «Структура и динамика молекулярных систем», Яльчик, 2002 и 2003; Всероссийском симпозиуме молодых ученых по хим.кинетике, Клязьма 2003;

конкурсе научных работ молодых ученых им. Батурина, 2002 и 2003; Международной конференции по химии органических и элементоорганических пероксидов, Москва, 2003; III Съезде биофизиков России, Воронеж, 2004.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста, включает 16 таблиц и 18 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы (Гл.1), описания материалов и методов исследования (Гл.2), собственных исследований (Гл. 3-5) выводов и списка цитируемой литературы включающего 136 источников.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Свободнорадикальный механизм баротравматических повреждений внутренних органов при ИДВ обуславливает пути их коррекции биоантиоксидантами.

2. Выявлена важная роль моноксида азота в компенсаторных механизмах функционирования организма при сублетальных баротравматических повреждениях.

3. Впервые изучен новый биоантиоксидант оксипиридинового ряда (топирокс), содержащий наряду с оксиароматическим фрагментом группировку - донор монооксида азота. Установлена его высокая антигеморрагическая активность, превышающая эффект мексидола.

РЕЗУЛЬ ТА ТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

СИНДРОМ МЕМБРАННОЙ ПАТОЛОГИИ ПРИ ИМПУЛЬСНЫХ

ДИНАМИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ НА ОРГАНИЗМ §1. Интенсивность пероксидного окисления липидов, корригирующая роль антиоксидантов.

Пероксидное окисление липидов характерно для всех клеточных мембран и является физиологически значимым способом модификации фосфолипидного бислоя биологической мембраны. В го же время, ПОЛ выступает в качестве универсального механизма повреждения мембранных структур клетки при различных патологических состояниях, включая действие экстремальных факторов внешней среды.

Предметом данной работы явилось изучение процесса ПОЛ, изменений удельной активности Си. Zn-СОД. содержания церулоплазмина (ЦП) и трансферрина (ТФ) в клетках внутренних органов и крови крыс и кроликов после различных ИДВ и при фармакологической коррекции полученных баротравм антиоксидантами.

Показано, что контузионное действие ВУВ в первые часы после воздействия сопровождается интенсификацией процесса ПОЛ. Это выражается в -50%-ном увеличении содержания малонового диальдегида (конечного продукта ПОЛ) и снижении степени ненасыщенности липидов в клетках головного мозга в среднем на 30%. Применение антиоксиданта

феноксана приводит к значительному снижению содержания продуктов ПОЛ и увеличению содержания двойных связей в липидах мембран.

Изучена коррекция антиоксидантами показателей ПОЛ в гомогенатах мозга и печени крыс при действии интенсивных акустических колебаний. В опытах на крысах было показано, что в первые часы после действия ИАК на фоне кровоизлияний в изучаемых органах наблюдалось увеличение содержания МДА, что свидетельствует об интенсификации процессов ПОЛ.

При использовании феноксана и мексидола достигалось снижение содержания МДА в мозге до уровня нормы. При этом наряду с интенсификацией ПОЛ в тканях головного мозга и печени несколько увеличивается активность растворимой СОД, осуществляющей реакцию дисмутации супероксид-аниона до пероксида водорода. Использование антиоксидантов фенольного и пиридинового ряда приводило к нормализации СОД-активности в тканях печени и головного мозга крыс.

Одновременно с этим в крови на 40-45% увеличивается содержание белков острой фазы ЦП и ТФ, являющихся модуляторами антиоксидантного статуса. Лучший фармакологический эффект был получен при профилактическом использовании мексидола в качестве ингибитора радикальных реакций.

Обобщая полученные результаты, можно сделать вывод, что изучаемый нами синдром мембранной патологии, возникающий при ИДВ, приводит к однонаправленным изменениям интенсивности ПОЛ, активности СОД, содержания ЦП и ТФ. При введении антиоксидантов изученные показатели подвергаются избирательной коррекции и, в конечном счете, восстанавливаются до нормальных значений.

§2. Изменения структуры мембран форменных элементов крови и функциональной активности мембраносвязанных ферментов.

Способность биоантиоксидайтов выступать в качестве мембранопротекторов была изучена методом триплетных зондов в опытах по исследованию структуры биомембран форменных элементов крови после интенсивных акустических воздействий на экспериментальных животных.

Изменения в структуре мембран форменных элементов крови наблюдали по экспоненциальным кривым затухания фосфоресценции триплетного зонда эритрозина и аннигиляционной замедленной флуоресценции зонда пирена (таблица 1).

При изучении влияния ИАК на форменные элементы крови показано, что в первый час после воздействия уменьшается микровязкость полярных областей мембран лейкоцитов, а неполярных - увеличивается. Применение феноксана и ТОП восстанавливает вязкость неполярных сайтов лейкоцитарной мембраны практически до состояния нормы.

Таблица 1.Влияние антиоксидантов на значения времени жизни триплегных зондов, встроенных в мембраны лейкоцитов и эритроцитов крыс при действии ИАК.

Время жизни, х - 10"5с.

Лейкоциты Эритроциты

Эритрозин Пирен Эритрозин Пирен

Норма 2.45+0.07 1.30+0.03 1.70+0.07 0.80+0.03

Опыт 210±0 10 1.50+0.01 2.00+0.10 1.10±00з

действие феноксана 2.85+0 07 1 25+0 07 2.10+0.10 0.90+0 01

действие ТОП 2 35+0 10 1.37+0.05 2.60+0.07 1 00+001

Отмечено, что микровязкость как полярных, так и неполярных областей эритроцитарных мембран после акустического воздействия увеличивается. Применение феноксана и ТОП приводит к уменьшению микровязкости неполярных областей мембран эритроцитов и увеличению полярных.

Вышеперечисленные данные свидетельствуют об интенсификации процессов ПОЛ после акустического воздействия, что в свою очередь сопровождается изменением липидного состава и структуры биомембран. С изменениями микровязкости биологических мембран связана активность мембраносвязанных ферментов. К числу таких ферментов относятся моноаминооксидазы (МАО).

Известно, что МАО являются важнейшими мембраносвязанными ферментами организма, осуществляющими процесс окислительного дезаминирования биогенных аминов. Также известно, что интенсификация ПОЛ ведет к снижению каталитической активности МАО-А и МАО-В, отличающихся субстратной • специфичностью. Изменение каталитических свойств моноаминоксидазы может быть способом выявления окислительного стресса, который ассоциируется с различными патологическими состояниями, нарушающими нейромедиаторные процессы в центральной нервной системе.

Исходя из сказанного, становится понятным интерес к изучению изменения каталитической активности МАО при ИДВ, вызывающих повреждение тканей печени и головного мозга.

Полученные нами данные по влиянию ИДВ на каталитическую активность митохондриальной МАО-А и МАО-B головного мозга крыс и кроликов представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, при действии ИАК значительно снижается активность МАО головного мозга крыс. В результате применения мексидола активность МАО-А праю-ически не отличается от нормы. Феноксан и ТОП несколько повышают активность МАО-А. В случае карнозина активность МАО-А также оставалась ниже нормы. Использование анфена приводило к повышению активности МАО-А выше уровня нормы.

Таблица 2 Изменение каталитической активности МАО-А и МАО-B в митохондриях головного мозга крыс и кроликов при акустическом воздействии

Название опыта Крысы Кролики

Активность МАО-А, М аммиака/мг белка х 10 5 Активность МАО-В, М аммиака/мг белка х105 Активность МАО-А, М аммиака/мг белка хЮ5 Активность МАО-В, М аммиака/мг белка х 10'5

Норма 17 0+0,03 13,0±0,01 17 4+ 0,03 15,6±0,02

Опыт 7,12+ 0,02 9,71 ±0,03 3,75+0,02 8,79±0,03

Феноксан 8 10+0,04 9,11±0,01 10,3+ 0,04 10,72±0,02

Анфен 19 20+ 0,04 8,32±0,01 10.21 ±0,04 18,4±0,02

Мексидол 16 44+0,04 21 ±0,04 14,1 ±0,04 9,20±0,2

Топ 10 32+ 0,01 10,54±0,02 10,0+0,01 13,11 ±0,04

Карнозин 6,04+0,02 7,20±0,01 - -

Из таблицы 2 видно, что после акустического воздействия на кроликов активность МАО также снижается. Все антиоксиданты увеличивали активность моноаминоксидаз головного мозга кроликов. Отмечено, что применение мексидола приближало к уровню нормы активность МАО-А, а ТОП - МАО-В.

Снижение каталитической активности МАО, при акустическом воздействии подтверждает интенсификацию процессов ПОЛ, что сопровождается накоплением МДА. Использование антиоксидантов ведет к нормализации ПОЛ биомембран и активности моноамиоксидаз.

§3. Метаболически активные парамагнитные центры внутренних органов.

Применительно к проблемам воздействия импульсных динамических факторов на организм метод ЭПР позволяет исследовать изменения (снижение или увеличение) метаболической активности органов и тканей, выяснить биохимические механизмы ответных реакций организма на экзогенные воздействия.

В модельных экспериментах на крысах с использованием ударной трубы, генерирующей ВУВ с величиной избыточного давления ДР=40КПа, обнаружено угнетение метаболической активности гепатоцитов и кардиомиоцитов при двукратной активации адренодоксина и других ферментов биосинтеза гормонов надпочечников.

Показано, что в печени крыс после воздействия ВУВ снижается уровень сигнала цитохрома Р-450 (g=2,25) на 16,3%, железо серных центров митохондрий (g=l ,94) на 17% и содержания флаво- и убисемихинонных радикалов на 29%. В клетках миокарда наблюдается снижение концентрации парамагнитных центров цепи переноса электрона в митохондриях (g=2,00) на

20,1%. Все это указывает на снижение метаболической, а значит, и функциональной активности исследуемых органов и свидетельствует о нарушениях системы микросомального окисления в печени и дыхательной цепи митохондрий в гепато- и кардиомиоцитах. Это может привести к образованию активных форм кислорода и их накоплению в тканях. Следует также отметить, что эти эффекты наблюдаются на фоне гиперфункции надпочечников, т.е. при двукратном усилении биосинтеза кортикостероидов, норадреналина и адреналина, что подчеркивает пребывание организма в состоянии стресса.

Введение исследуемым животным феноксана за один час до действия ВУВ приводило к нормализации метаболический активности в клетках печени и в кардиомиоцитах. Также наблюдается снижение до уровня нормы интенсивности сигнала ЭПР цитохрома р-450 и на 56% - адренодоксина, что свидетельствует об уменьшении стрессорной нагрузки на организм ~при действии ВУВ.

Проведены исследования фармакологической коррекции композициями антиоксидантов функционального состояния органов и тканей после интенсивного ИДВ (рисунок 1).

Показано, что через час после действия ИАК в нечени и почках крыс наблюдается значительное снижение

интенсивности сигналов ЭПР окисленной формы цитохрома Р-450, свободнорадикальных форм флаво- и убисемихинонов , а также железосерных центров митохондрий. Такие изменения парамагнитных свойств

изученных внутренних органов

ПОЗВОЛЯЮТ Судить О проявлении феноксан+мексидол, 5 - при предварительном введении ИХ дисфункции. Применение композиции феноксан+топирокс

феноксана приводит к незначительному улучшению изучаемых параметров. Наибольшая нормализация функциональной активности почек крыс после акустического воздействия наблюдалась при использовании композиции препаратов феноксан+топирокс.

При введении композиции феноксан+мексидол отмечена несколько меньшая коррекция функционального состояния почек животных после баротравматического повреждения. Полученные результаты напрямую

1,2 -,

2.003 g-ф актор

Рисунок 1. Изменение интенсивности сигналов ЭПР замороженных образцов печени крыс. 1-е норме, 2 - при действии ИАК, 3 -при предварительном введении феноксана, 4 - при предварительном введении композиции

коррелируют с данными по фармакологической коррекции кровоизлияний в печени и почках животных после действия ИАК.

При изучении функциональной активности кардиомиоцитов после интенсивного акустического воздействия наблюдали аналогичные нарушения. Это также свидетельствует о нарушениях в системе переноса электрона в дыхательной цепи митохондрий сердца.

ИЗБЫТОЧНОЕ КРОВЕНАПОЛНЕНИЕ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ И ВЫЖИВАЕМОСТЬ ЖИВОТНЫХ ПРИ ИМПУЛЬСНЫХ ДИНАМИЧЕСКИХ

ВОЗДЕЙСТВИЯХ

Поражающее действие ударных волн на живые организмы обусловлено резким изменением давления в окружающей среде. Избыточное давление в падающей и отраженной волнах, скорость повышения давления до порогового " значения, удельный импульс и длительность ударной волны играют важную роль в эффектах поражения. Проявление и динамика этих эффектов весьма различны и зависят от физических параметров воздействия.

Для количественного определения степени кровенаполнения в легких после импульсных динамических воздействий и ее коррекции с помощью биоантиоксидантов был использован разработанный нами метод определения кровоизлияний во внутренние органы экспериментальных животных по количеству крови в исследуемых тканях.

Проведено изучение влияния предварительного введения

антиоксидантов на степень кровенаполнения в печени, почках, легких и головном мозге крыс при действии ВУВ с величиной избыточного давления от 25 до 40 КПа, генерируемых с

использованием ударной трубы (рисунок 2).

Отложив полученные точки в полулогарифмических координатах, равные логарифму величины оптической плотности гемолизатов легких крыс в норме, после действия ВУВ и при коррекции баротравмы антиоксидантами относительно величины избыточного давления во фронте ударной волны, мы получили линейные зависимости и наглядно продемонстрировали защитный эффект феноксана (рисунок 2).

♦ опьгг о опыт+феноксан

Рисунок 2. Зависимость степени кровоизлияния в легких от давления во фронте ВУВ и защитное действие биоантиоксиданта (феноксана). опыт - при ударноволновом воздействии, опыт+феноксан -при предварительном введении феноксана.

Из рисунка 2 видно, что воздействием ВУВ с АР=20 КПа на контрольных крыс (без введения антиоксиданта), можно добиться такой же степени кровоизлияний, которые отмечаются у животных с предварительно введенным феноксаном, при действии ударной волны с ДР=30 КПа.

Анализ данных о характере повреждающего действия ИДВ на внутренние органы животных указывает на определенное сходство их поражения, проявляющегося как при действии на них ВУВ малой интенсивности, так и низкочастотных акустических колебаний.

Проведено изучение профилактического влияния антиоксидантов на степень кровенаполнения во внутренних органах крыс при действии ИАК.

Показано, что степень кровенаполнения в легких 1,7

после ИАК составляет 160% от уровня нормы. Все использованные антиоксиданты снижали этот параметр баротравматического повреждения легких.

Предварительное введение антиоксидантов ТОП,

нитроксилы, анфен, карнозин, мексидол приводило к достоверному снижению

избыточного кровенаполнения в легких от 20% до 70%. Использование феноксана полностью нормализовало кровенаполнение в легких крыс после ИДВ (рисунок 3).

В печени уровень кровенаполнения после воздействия ИАК также завышен . и составляет 185% от уровня нормы, хотя по изменению корригирующего эффекта на степень кровенаполнения в легких и печени порядок антиоксидантов выстроился иначе. Использование антиоксиданта мексидола приводило к полной нормализации уровня кровенаполнения в печени крыс после действия ИАК.

В тех же условиях было проведено изучение способности антиоксидантов уменьшать степень повреждений при баротравме почек крыс. Показано увеличение уровня кровенаполнения в почках экспериментальных животных на 179%. В этом случае нормализующего эффекта удалось достигнуть при использовании в качестве антиоксиданта дипептида карнозина.

Рисунок 3. Кровенаполнение в легких крыс после действия ИАК (опыт) и при предварительном введении соответствующего антиоксиданта.

Аналогичные результаты получены при исследовании акустического воздействия на кроликов и коррекции последствий баротравматических повреждений с помощью антиоксидантов.

Таким образом, по фармакологической активности можно выделить феноксан, который нормализует кровенаполнение в легких, мексидол - в печени и карнозин - в почках. Нитроксилы и анфен показали удовлетворительную фармакологическую активность при коррекции кровенаполнения во внутренних органах.

При подрыве зарядов тротила в открытом поле изучали зависимость выживаемости кроликов и содержания динитрозильных комплексов негемового железа в печени пораженных животных от величины избыточного давления во фронте ударной волны (рисунок 4, А, Б).

Рисунок 4. Изменение выживаемости кроликов (А) и содержания нитрозилъных комплексов негемового железа в печени пораженных животных (Б) при баротравматических

повреждениях.

Видно, что для кривых выживаемости кроликов и изменения интенсивности сигнала ЭПР с g-фalcropoм 2,03 в печени критической является точка при 200 КПа, когда начинается гибель животных и спад кривой интенсивности сигнала ЭПР. Эта линия резонансного поглощения в спектре ЭПР обусловлена парамагнитными центрами нитрозильных комплексов негемового железа. Она отсутствует в ткани нормальной печени и проявляется при гипоксии.

Следствием действия ВУВ является образование локальных очагов гипоксии, что сопровождается активацией гликолиза как альтернативного пути биосинтеза АТФ и накоплением в тканях молочной кислоты. При этом в результате закисления среды прочность комплекса N0 с железом снижается, что приводит к высвобождению ионов железа из состава своей транспортной формы. Поэтому, когда орган выходит из состояния гипоксии и кровообращение восстанавливается, его подстерегает реальная опасность окислительного стресса, вследствие генерации супероксид- и гидроксилгадикалов

О 100 200 300 400 500 ¿Р.КПа

0 100 200 300 400 500 АР, КПа

Нарушения в системе кровообращения и связанная с этим гипоксия является сигналом для активации работы нитритредуктазных систем, что приводит к синтезу N0. При гипоксии монооксид азота вступает в реакцию с ионами двухвалентного железа (Ре2+) с образованием нитрозильных комплексов. Это сопровождается увеличением интенсивности сигнала ЭПР g=2,03, что наблюдается при увеличении давления во фронте ударной волны.

При воздействии ВУВ большего давления и усилении вследствие этого генерации супероксидов и монооксида азота превалирующее значение приобретает реакция между N0 и 02"~ с образованием пероксинитрита (0>Ю0~. До определенного предела образование пероксинитрита не представляет опасности для клетки, поскольку повреждающее действие (ЖОО~ меньше, чем токсические эффекты N0 и 02*~ по отдельности. В условиях накопления пероксинитрита монооксид азота стимулирует апоптоз под влиянием белка р53, освобождением цитохрома с и последующей активацией каспаз. Вероятно вследствие этого наблюдается спад кривой выживаемости животных (рис.4, А) на фоне снижения удельного содержания динитрозильных комплексов железа (рисунок 4, Б) при величине избыточного давления во фронте ударной волны, превышающей 200 КПа.

Следствием множественных повреждений внутренних органов после акустических воздействий является снижение выживаемости животных. Полученные результаты представлены на рисунке 5.

Как видно из рисунка 5, в контрольной группе животные погибали в течение первого часа (кривая 1), при предварительном применении индивидуальных антиоксидантов (кривая - 2) к пятому часу после воздействия сохраняли

жизнеспособность -20 % крыс. Применение композиции

феноксана с топироксом увеличивало жизнеспособность крыс на протяжении всего времени наблюдения, а через 5 часов в живых оставалось 50 % животных (кривая - 3). Получен аддитивный эффект действия композиций антиоксидантов при баротравме. Это также может

свидетельствовать даже О раздельного применения феноксана или топиро/ синергизме действия изученных 3-зффект композиции феноксан+топирокс. антиоксидантов в композиции.

I. час

Рисунок 5. Кинетические - кривые выживаемости крыс после акустического воздействия. 1-механоакустическое воздействие, 2-зффект

Таким образом, композиция феноксана с гибридным антиоксидантом топироксом является наиболее эффективной при защите внутренних органов от повреждающего воздействия акустических колебаний.

РОЛЬ МОНООКСИДА АЗОТА В КОРРЕКЦИИ ПРОЦЕССОВ МЕМБРАННОЙ

ПАТОЛОГИИ

Известно, что монооксид азота (N0) участвует в регуляции тонуса кровеносных сосудов как антагонист адренергической системы, регулируя деятельность органов дыхательной системы, желудочно-кишечного тракта и мочеполовой системы. Отмечается влияние N0 на функционирование секреторных тканей и клеток. Недавно стало известно о том, что N0 участвует в регуляции систем внутриклеточной сигнализации.

Наличие неспаренного

электрона придает молекуле N0 способность к рекомбинации с другими свободными радикалами, в частности, с супероксидами, что может приводить к торможению первичных стадий инициирования свободнорадикального ' процесса ПОЛ.

Растворимость монооксида азота в гидрофобной области клеточных мембран предполагает его участие в торможении цепных реакций ПОЛ. Известно, например, что N0 образует с ионами двухвалентного железа нитрозильные комплексы, ингибируя генерацию гидроксильных радикалов.

На рисунке 6 представлена корреляция выживаемости животных и содержания парамагнитных динитрозильных комплексов негемового железа в печени. Видно, что с уменьшением количества нитрозильных комплексов снижается выживаемость. Это подтверждает важную роль монооксида азота при мембранной патологии, вызванной баротравматическими повреждениями.

Обобщение и анализ полученных нами данных позволяют сделать вывод о том, что патогенез баротравматических повреждений внутренних органов на субклеточном уровне протекает по свободнорадикальным механизмам мембранной патологии. Ранее было отмечено, что предварительное введение ингибиторов свободнорадикальных процессов из оксиароматического ряда не всегда давало ожидаемый положительный эффект снижения степени локальных и системных повреждений организма.

20

О 20 40 60 80 100 Выживаемость. %

Рисунок 6. Корреляция выживаемости животных и содержания динитрозильных комплексов негемового железа при баротравматических повреждениях.

пол

сод

выживаемость

На основании приведенных результатов с учетом разнообразных физиологических эффектов монооксида азота (в частности, его противоишемического действия) предложено использовать биоантиоксидант гибридной структуры (топирокс), синтезированный в лаборатории биологически активных соединений ИПХФ РАН. Его азотистое основание представлено липофильным 2,4,6-триметил-З- оксипиридином, а кислотный фрагмент - нитроксиянтарной кислотой. Молекулы топирокса способны тормозить инициирование ПОЛ двумя путями. Оксиароматическая хруппировка нейтрализует пероксидные радикалы. Нитратный фрагмент молекулы при биотрансформации приводит к образованию монооксида азота, который связывается с супероксидрадикалами инициирующими ПОЛ.

Установлено, что введение топирокса за один час до импульсного динамического

воздействия предотвращает

развитие синдрома мембранной патологии у экспериментальных животных: нормализует образование продуктов ПОЛ, снижает до уровня нормы активность СОД, нормализует функциональную активность мембраносвязанных ферментов митохондрий клеток головного мозга, нормализует микровязкость липидного бислоя мембран форменных элементов крови, снижает избыточный уровень кровенаполнения внутренних

органов (рисунок 7). Системные повреждения на молекулярном, клеточном и органном уровнях неизбежно отражаются на степени

выживаемости животных, подвергшихся механоакустическому воздействию. Применение композици феноксана с топирксом увеличивало жизнеспособность крыс на протяжении всего времени наблюдения, а через 5 суток в живых оставалось 100 % животных.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Фундаментальная значимость выполненной работы обусловлена общностью установленных свободнорадикальных механизмов патогенетических процессов травматических повреждений, возникающих под влиянием различных импульсных динамических воздействий. Вследствие этого ингибиторы свободнорадикальных реакций, включая синтетические и природные антиоксиданты, открывают широкие возможности рациональной

—о— норма (правильный шестиугольник) —*—воздействиеИАК (ншраюяьный многоуголднк) —к- эффект топирокса (правильный шестиугол>иик)

Рисунок 7. Обобщенная диаграмма коррекции топироксом мембранной патологии при баротрааме

лекарственной профилактики баротравматических повреждений. При этом проявляется важная роль моноксида азота в компенсаторных механизмах функционирования организма при сублетальных повреждениях. Практически важный результат получен в ходе изучения нового антиоксиданта топирокса, подавляющего различные проявления оксидативного стресса, в частности, превышающего антигеморрагический эффект мексидола.

ВЫВОДЫ

1) Изучены количественные показатели баротравматических повреждений живых организмов, характеризующие травматогенный потенциал действующего фактора на разных морфо-функциональных уровнях: молекулярном, субклеточном, клеточном, органном и организма в целом.

2) Количественно определен уровень избыточного кровенаполнения внутренних органов экспериментальных. животных (легкие, печень, почки, головной мозг) при действии воздушных ударных волн и интенсивных акустических колебаний. Полученные данные обобщены в рамках свободнорадикальных механизмов оксидативного стресса, что позволяет использовать рациональные методы лекарственного лечения баротравматических повреждений с применением биоантиоксидантов.

3) Установлено, что предварительное введение антиоксидантов оксиароматического ряда и стабильных нитроксильных радикалов модулирует травматогенный потенциал ударноволновых и механоакустических воздействий.

- увеличивает выживаемость экспериментальных животных;

- снижает избыточный уровень кровенаполнения внутренних органов;

- ингибирует образование продуктов пероксидного окисления липидов;

- снижает до уровня нормы активность СОД и содержание металлопротеидов (модуляторов антиоксидантного статуса) в плазме крови;

- нормализует функциональную активность мембраносвязанных ферментов митохондрий клеток головного мозга и печени;

- нормализует микровязкозть липидного бислоя мембран форменных элементов крови.

4) Выявлена важная роль моноксида азота в компенсаторных механизмах функционирования организма при сублетальных баротравматических повреждениях.

5) Впервые изучен новый биоантиоксидант оксипиридинового ряда (топирокс), содержащий наряду с оксиароматическим фрагментом группировку - донор монооксида азота. Установлена его высокая антигеморрагическая активность, превышающая эффект мексидола. Выявлены мембранопротекторные свойства, обеспечивающие защиту организма при посттравматических явлениях мембранной патологии.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ИЗЛОЖЕНО В СЛЕДУЮЩИХ

ПУБЛИКАЦИЯХ-.

1. Мищенко ДВ., Котельникова Р.А., Богданов Г.Н Метод триплетных зондов в исследовании микровязкости биологических мембран при механоакустических воздействиях.// Структура и динамика молекулярных систем, 2002г., Сборник статей, Выпуск IX, Т.2, С.25-28 .

2. Мищенко ДВ., Богданов Г.Н, Сипягин AM, Федоров КС. Гемопротеины как маркеры кровоизлияний во внутренних органах.// 2003г., Сборник статей, Выпуск X, Т.2, С. 271-273

3. Мищенко Д.В., Варфоломеев ВН., Богданов Г.Н. Коррекция биоантиоксидантами явлений мембранной патологии при механоакустических воздействиях.// Структура и динамика молекулярных систем, 2003г., Сборник статей, Выпуск X, Т. 2, Стр. 258-262

4. Богданов Г.Н., Мищенко Д. В., Варфоломеев В.Н., Штолько В.Н. Динитрозильные комплексы железа при баротравматических повреждениях внутренних органов в условиях оксидативного стресса // Статья принята к печати редакцией журнала ДАН (2005г.).

5. Д.В. Мищенко, Г.Н. Богданов, В.Н. Варфоломеев, Т.Н. Богатыренко, В.Н. Штолько. Роль липопероксидов в патогенезе' синдрома мембранной патологии //Статья направлена в печать (Журнал Кинетика и катализ).

6. Федоров Б С., Фадеев МА, Сипягин AM., Богданов Г.Н, Мищенко ДВ., Варфоломеев В.Н Положительное решение к заявке на получение патента №2003123066 от 25 июня 2003 г.

7. «Исследования показателей мембранной патологии и механизмов ее формирования при действии на организм акустических колебаний» Отчет по НИР (Рук. темы Богданов Г.Н., исполнитель Мищенко Д.В. и др.)/ ИПХФ РАН. Инв. №2/02 Черноголовка, 2002 г., 245 с.

8. «Исследование новых контрольно-диагностических критериев оценки тяжести боевой травмы и биотехнологических методов лечения» Отчет по НИР (Рук. темы Богданов Г.Н., исполнитель Мищенко Д.В. и др.)/ ИПХФ РАН. Инв. № Черноголовка, 2004 г. 199 с.

9. Мищенко ДВ, Варфоломеев В.Н. Коррекция биоантиоксидантами

- кровоизлияний во внутренних органах при воздействии воздушных ударных

волн. Сборник тезисов конференции "Научные исследования в наукоградах Московской области. Новые материалы и технологии. Инновации XXI века", Черноголовка, 2001 с. 105.

10. Варфоломеев В.Н, Богданов Г.Н, Мищенко ДВ., Лешневский А В. Модуляция функционального состояния клеток при действии акустических колебаний на организм, Сборник тезисов конференции "Свободные радикалы и здоровье человека", Смоленск, 2001 г.

11. ДВ Мищенко, Г.Н Богданов, Р.А Котельникова Изменения структурно-функциональных свойств биологических мембран при механоакустических воздействиях и их коррекция антиоксидантами нового типа. Сборник

тезисов второй ежегодной молодежной конференции ИБХФ-ВУЗы «Биохимическая физика», с 13.

12.Котельникова P.A., Фрог ЕС., Мищенко Д.В., Богданов Г.Н. Котельников А.И. Метод триплетных зондов в исследовании динамики белков», Сборник тезисов IX Всероссийской конференции «Структура и динамика молекулярных систем», Казань-Йошкар-Ола - Уфа - Москва, 2002 г., с. 95.

13. Богданов Г.Н., Мишенко Д. В., Сипягин А.М., Федоров Б. С. Нитроксисукцинат- 2,4,6-триметил-З-оксипиридина - новый биологически активный ингибитор радикальных реакций Сборник тезисов XXI Всероссийского симпозиума молодых ученых по химической кинетике, Клязьма 2003 г.

14. Мищенко ДВ., Богданов Г.Н, Сипягин А.М., Федоров Б. С. Нитроксисукцинаты алкил-оксипиридинов - новый класс биологическ-и активных ингибиторов радикальных реакций Сборник тезисов X Всероссийской конференции «Структура и динамика молекулярных систем», Казань-Йошкар-Ола - Уфа - Москва, 2003 г.

15. Мищенко ДВ., Варфоломеев В. К, Богданов Г.Н. Коррекция биоантиоксидантами явлений мембранной патологии при механоакустических воздействиях. Сборник тезисов X Всероссийской конференции «Структура и динамика молекулярных систем, Казань-Йошкар-Ола - Уфа - Москва, 2003 г..

16. Варфоломеев В.Н., Мищенко ДВ. Гемопротеины как маркеры кровоизлияний во внутренних органах. Сборник тезисов X Всероссийской конференции «Структура и динамика молекулярных систем», Казань-Йошкар-Ола - Уфа - Москва, 2003 г.

11 .Д.В. Мищенко, Г.Н. Богданов, В.Н. Варфоломеев, Т.Н Богатыренко, В.Н. Штолько. Роль липопероксидов в патогенезе синдрома мембранной патологии. Сборник тезисов IX международной конференции по химии органических и элементоорганических пероксидов, Москва 2003 г.

18 .Богданов Г.Н., Мищенко ДВ., Сипягин AM, Федоров КС. Нитроксисукцинат 2,4,6-триметил-З-оксипиридина - новый биологически активный ингибитор радикальных реакций. Сборник тезисов XXI Всероссийского симпозиума молодых ученых по химической кинетике. Клязьма, 2003 г.

19.Мищенко ДВ., Богданов Г.Н, Варфоломеев В.Н., Котельникова P.A., Богатыренко Т.Н., Штолько В.Н. Травматогенный потенциал импульсных динамических воздействий в условиях модуляции антиоксидантного статуса организма. Сборник тезисов III Съезда биофизиков России, Воронеж, 2004, С. 549-550.

20.Богданов Г.Н, Мищенко ДВ. Супероксидные радикалы и монооксид азота в молекулярных механизмах патогенеза и коррекции процессов мембранной патологии. Сборник тезисов III Съезда биофизиков России, Воронеж, 2004, С. 501-502.

МИЩЕНКО Денис Валерьевич

ТРАВМАТОГЕННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ИМПУЛЬСНЫХ ДИНАМИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЙ В УСЛОВИЯХ МОДУЛЯЦИИ АНТИОКСИДАНТНОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА. Автореферат

Сдано в набор 17.03 2005 г. Подписано в печать 17.03.2005 г Формат 60x90 Хб. Бумага офсетная. Печать офсетная

Гарнитура «Тайме». Уел печ. л. 1.Тир. 100. Зак 51. Изд. лиц. № 03894 от 30 января 2001 г. 142432, г Черноголовка, Московская обл , пр-т Н Н Семенова, 5 Отпечатано в типографии ИПХФ РАН

i

i

РНБ Русский фонд

» 2005-4 45427

/-fil х

( ЙШ

's МАЙ2005V * ä

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мищенко, Денис Валерьевич

Введение.

Глава 1. Процессы свободнорадикальной патологии в биологических системах.

§1. Механохимические аспекты травматических повреждений.

§2. Роль антиоксидантов в регуляции процессов пероксидного окисления липидов.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

Глава 3. Синдром мембранной патологии при импульсных динамических воздействиях на организм.

§1. Интенсивность пероксидного окисления липидов, корригирующая роль антиоксидантов.

§2. Изменения структуры мембран форменных элементов крови и функциональной активности мембраносвязанных ферментов.

§3. Метаболически активные парамагнитные центры внутренних органов.

Глава 4. Избыточное кровенаполнение внутренних органов и выживаемость животных при импульсных динамических воздействиях.

Глава 5. Роль монооксида азота в коррекции процессов мембранной патологии.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Травматогенный потенциал импульсных динамических воздействий в условиях модуляции антиоксидантного статуса организма"

Исследование молекулярных механизмов передачи и трансформации кинетической энергии импульсных динамических воздействий (ИДВ) в биологических объектах является актуальной фундаментальной и научно-прикладной проблемой.

Фундаментальную значимость этой проблемы трудно переоценить, если принять во внимание, что к ИДВ относятся разнообразные поражающие факторы боевого оружия, травматогенный потенциал которых связан с быстрой передачей биообъекту большого количества энергии. К их числу наряду с баллистическими ранящими снарядами относятся воздушные ударные волны (ВУВ), интенсивные акустические колебания (ИАК), импульсы лазерного и корпускулярного излучения и.т.д.

Открытие механохимических свободнорадикальных процессов повреждения биоструктур привело к значительному расширению знаний о метаболических изменениях в тканях вокруг пулевого канала и позволило по-новому рассматривать механизмы передачи и трансформации энергии при ВДВ.

Эти механизмы включают элементарные механохимические реакции в конденсированных средах, при которых скорость разрыва химических связей с образованием свободных радикалов возрастает при увеличении приложенной внешней нагрузки.

Сам факт образования свободных радикалов при действии огнестрельных ранящих снарядов впервые установлен с использованием спин-индикаторов и метода ЭПР. Обработка ран антиоксидантами, способными связывать возникающие при огнестрельных ранениях химически активные радикалы, приводит к торможению развития свободнорадикальных процессов поражения биоструктур.

Установлено, что при огнестрельных ранениях и действии ВУВ травматические последствия сопровождаются повреждениями биологических структур по оксидативному типу на разных уровнях их организации. В зависимости от природы действующего фактора количественную оценку тяжести травматических повреждений можно осуществить по размеру зоны вторичного некроза при огнестрельных ранениях, уровню кровенаполнения внутренних органов при баротравме или воздействии акустических колебаний, а также по изменению структуры биомембран и активности мембраносвязанных ферментов, снижению содержания метаболически активных парамагнитных центров, а в ряде случаев и по выживаемости экспериментальных животных.

Совокупность эффектов повреждающего действия ИДВ на живые организмы главным образом реализуется на уровне биологических мембран и объединяется понятием мембранной патологии, а в целом характеризует травматогенный потенциал действующего фактора. Это происходит на фоне интенсификации пероксидного окисления липидов (ПОЛ), снижения активности ферментов антиоксидантной защиты клеток, уменьшения содержания природных антиоксидантов и модуляторов антиоксидантного статуса. Перечисленные здесь показатели мембранной патологии характеризуют антиоксидантный статус в целом, а также позволяют объяснить наблюдаемые в эксперименте мембранопротекторные свойства антиоксидантов и предположить наличие регуляторной взаимосвязи между антиоксидантным статусом и степенью повреждения организма, т.е. травматогенным потенциалом воздействия. Применительно к молекулярным механизмам ИДВ эта проблема является весьма актуальной, хотя ее отдельные аспекты остаются мало изученными.

Для выполнения такого комплекса работ необходимо использование широкого арсенала современных физических методов исследования функционального состояния поврежденных тканей. В первую очередь это относится к методам радиоспектроскопии, позволяющим исследовать первичные метаболические нарушения в тканях и охарактеризовать физикохимическую сущность патологических процессов при баротравматических повреждениях органов и тканей.

С целью установления взаимосвязи между степенью повреждения организма и антиоксидантным статусом при травматогенных импульсных воздействиях были поставлены следующие задачи:

1) на разных морфо-функциональных уровнях организма количественно охарактеризовать эффекты фармакологической коррекции биоантиоксидантами баротравм возникающих при воздействии ВУВ или интенсивных акустических колебаний;

2) изучить влияние синтетических биоантиоксидантов на показатели антиоксидантного статуса крови: активность супероксиддисмутазы, содержание церулоплазмина и трансферрина в крови;

3) охарактеризовать возможную роль N0 при поражающем действии ВУВ и изучить фармакологическое действие нового бифункционального антиоксиданта, содержащего оксиароматический фрагмент и группировку-донор монооксида азота.

4) выявить корреляционные соотношения между показателями травматогенного потенциала воздействия и антиоксидантным статусом организма.

Прикладной аспект этих работ связан с открывающимися возможностями использования ингибиторов свободнорадикальных реакций в качестве лекарственных средств и исследования профилактического

Л применения антиоксидантов при повреждающем действии различных ИДВ.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Мищенко, Денис Валерьевич

выводы

1) Изучены количественные показатели баротравматических повреждений живых организмов, характеризующие травматогенный потенциал действующего фактора на разных морфо-функциональных уровнях: молекулярном, субклеточном, клеточном, органном и организма в целом.

2) Количественно определен уровень избыточного кровенаполнения внутренних органов экспериментальных животных (легкие, печень, почки, головной мозг) при действии воздушных ударных волн и интенсивных акустических колебаний. Полученные данные обобщены в рамках свободнорадикальных механизмов оксидативного стресса, что позволяет использовать рациональные методы лекарственного лечения баротравматических повреждений с применением биоантиоксидантов.

3) Установлено, что предварительное введение антиоксидантов оксиароматического ряда и стабильных нитроксильных радикалов модулирует травматогенный потенциал ударноволновых и механоакустических воздействий.

- увеличивает выживаемость экспериментальных животных;

- снижает избыточный уровень кровенаполнения внутренних органов;

- ингибирует образование продуктов пероксидного окисления липидов;

- понижает содержание металлопротеидов (модуляторов антиоксидантного статуса) в плазме крови;

- повышает до уровня нормы общую железосвязывающую способность крови;

- нормализует микровязкозть липидного бислоя мембран форменных элементов крови.

4) Выявлена важная роль моноксида азота в компенсаторных механизмах функционирования организма при сублетальных баротравматических повреждениях.

5) Впервые изучен новый биоантиоксидант оксипиридинового ряда (топирокс), содержащий наряду с оксиароматическим фрагментом группировку - донор монооксида азота.

Установлена его высокая антигеморрагическая активность, превышающая эффект мексидола.

Выявлены мембранопротекторные свойства, обеспечивающие защиту организма при посттравматических явлениях мембранной патологии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Фундаментальная значимость выполненной работы обусловлена общностью установленных свободнорадикальных механизмов патогенетических процессов травматических повреждений, возникающих под влиянием различных импульсных динамических воздействий. Вследствие этого ингибиторы свободнорадикальных реакций, включая синтетические и природные антиоксиданты, открывают широкие возможности рациональной лекарственной профилактики баротравматических повреждений. При этом проявляется важная роль моноксида азота в компенсаторных механизмах функционирования организма при сублетальных повреждениях. Практически важный результат получен в ходе изучения нового антиоксиданта топирокса, подавляющего различные проявления оксидативного стресса, в частности, превышающего антигеморрагический эффект мексидола.

Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю к.х.н. Богданову Г.Н. за предложенную тему диссертационной работы, помощь в организации экспериментальной работы и в обсуждении полученных результатов, д.б.н. Варфоломееву В.Н. за помощь в освоении методики определения избыточного кровенаполнения и в интерпретации спектров ЭПР, к.ф-м.н. Котельниковой P.A., к.б.н. Богатыренко Т.Н., к.б.н. Штолько В.Н. за помощь в освоении методов исследования явлений мембранной патологии, д.т.н. Федорову Б.С. за предоставление бинарного антиоксиданта, д.б.н., проф. Котельникову А.И. за ценные замечания при подготовке рукописи диссертации.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мищенко, Денис Валерьевич, Черноголовка

1. Шапошников Ю.Г., Богданов Г.Н., Варфоломеев В.Н., Нешев Н.И., Максимова И.А. Огнестрельная рана: физико-химические и медико-биологические аспекты. М.:Наука, 2002. 244 с.

2. Hooker D.R. Physiological effects of air concussion. // Am. J. Phisiol. -1924.- V. 67.-P. 219-224.

3. Clemedson C., Jonsson A. Effect of the frequency contentin complex air shock waves on lung injuries in rabbits. // Aviat. Space Envir.Med. 1976. -V.47. - No 11.-P. 1143-1152.

4. Richmond D.R. Damon E.G., Fletcher E.R. The relationship between selected blast wave parameters and the responce of mammals exposed to air blast. // Ann. N.Y. Acad. Sci 1968. - V. 152. - P. 103-121.

5. Бейкер У., Кокс П., Уэстайн П, Кулеш Дж., Стрелоу Р. Взрывные явления. Оценка и последствия. Т. 2. М.: Мир, 1986. -384 с.

6. Josephson L.H., Tomlinson P. Predicted thoraco-abdomihal responce to complex blast waves. // J.Trauma. 1988 - V. 28. - No 1. - Suppl. - P. 49-55.

7. Phillips Y., Mundie T. Cloth ballistic vestalters responce to blast. // J.Trauma. 1988 - V. 28. - No 1. - Suppl. - P. 149-152.

8. Stuhmiller J.H., Chuong C.J. Computer modelling of thoracic responce to blast.// J.Trauma. 1988 - V. 28. - No 1. - Suppl. - P. 132-139.Davies, 1984;

9. Amerlal T.F., Shearer T.D., Mastrobranaseo B. J. Trauma 1988. - V. 128. -No9.-P. 1335-1352.

10. Кузин М.И. (ред). Раны и раневая инфекция. М.: Медицина, 1990. -476 с.

11. Taube R.R., Matsuda Т., Shoemaker W.C. Changes in red cell mass after trauma measured by double red cell label technique.// Ann.Surg. -1971. V. 174.-No 1.-P. 61-67.12,13,14,15,16,17,18,19,20,21.