Токсокароз собак

Михин, Александр Германович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Токсокароз собак
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Токсокароз собак"

На правах рукописи

Михин Александр Германович

ТОКСОКАРОЗ СОБАК (ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ИММУНОДИАГНОСТИКА, ПАТОМОРФОЛОГИЯ, ЛЕЧЕНИЕ)

03.00.19 - паразитология

16 00.02 - патология, онкология, морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Н. Новгород - 2004

Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии животных, в клинике и лаборатории паразитологии ФГОУ ВПО "Костромская государственная сельскохозяйственная академия".

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор МД. Новак

заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор ветеринарных наук, профессор Э.Ф. Ложкин

Ведущая организация: ФГОУ ВПО "Воронежский Государственный агроуниверситет им. К.Д. Глинки"

Защита диссертации состоится "17" июня 2004 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.220.047.02 в ФГОУ ВПО "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (603107, Н. Новгород, проспект Гагарина, 97).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии. Автореферат разослан " 13" мая 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ, д. вет. н., профессор, Э.Х. Даугалиева

д. мед. н., профессор В.П. Смирнов

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Токсокароз широко распространен среди собак во многих странах мира (P.M. Schantz, 1989).

В крупных городах наблюдается непрерывный рост численности плотоядных. Инвазированные животные контаминируют окружающую среду яйцами токсокар. Яйца и личинки гельминтов проникают в организм специфических и неспецифических хозяев алиментарно, при каннибализме, трансплацентарно и трансмаммарно.

В различных регионах России токсокароз регистрируется у 10-76 % собак (Ф.Л. Радун, 1973, С.Д. Клочков, 1995, Ю.Э. Мысливец и др., 1998, АЯ. Лысенко и др., 1999, А.Н. Шинкаренко, 1999, Т.Г. Козырева, 1999,

A.Н.Воличев, 2000, СИ. Калюжный, 2000, Н.В. Есаулова, М.Ш. Акбаев, 2001,

B.Б. Игнатьева, 2001, И.М. Зубарева, 2001, А.В. Жабров, 2002, Н.С. Беспалова, 2003).

Щенки от 2 до 30 дней заражены токсокарами на 100 %. Высокая напряженность эпизоотического процесса является следствием пожизненного носительства личинок Тохосага canis и трансплацентарной передачей их во второй половине беременности (Л.Е. Верета, О.Г. Малышкова, 1984).

Токсокароз - зооноз. Зараженные собаки представляют эпидемическую опасность. Патологические изменения в тканях людей, вызванные личинками токсокар, известны под названием синдрома «larva migrans» (Г.А. Котельников, 1984, Ю.А. Березанцев, В.В. Кривенко, 1986).

Установлено, что личинки токсокар при миграции проникают в капилляры легких, затем в большой круг кровообращения, центральную нервную систему, обусловливая патологические процессы в головном мозге (К.И. Скрябин, А.М. Петров; 1964).

В Болгарии зарегистрировано 723 больных с мигрирующими личинками токсокар. Описан случай менингита, индуцированный Тохосага canis (Jeleva R. et al., 1998).

Известны две формы токсокароза человека: висцеральный и глазной. Заболевание протекает с рецидивами и длительными ремиссиями (Л.С. Ходасевич и др., 1998).

В России и за рубежом для сероэпидемиологического обследования на токсокароз предложен иммуноферментный метод и другие иммунодиагностические тесты. Антитела к личинкам токсокар обнаруживают в сыворотках крови людей при помощи тест систем для ИФА «Тиаскар» (НПО «Вектор бест», г. Новосибирск).

До настоящего времени недостаточно изучены особенности эпизоотологии, патогенез ларвального токсокароза собак, патоморфологические изменения в тканях, продолжительность персистенции и сохранения инвазионных свойств личинок токсокар у взрослых плотоядных.

За рубежом с 60-70 годов прошлого столетия применяются.различные иммунологические тесты для диагности ок роза.

В отечественной ветеринарной т эффективные

методы иммунодиагностики «larva migrans» при токсокарозе плотоядных.

В качестве источника антигена для иммунодиагностики ларвалъного токсокароза можно использовать взрослые особи Тохосага canis (C.C. Huntley et al., 1963, ЕД. Jeska, 1967, R.F. Collins et al., 1975), личинки второй и третьей стадий (J.N. Annen et а1.,Л975), экскреторно-секреторные продукты личинок (D.H. Savigny, 1975, К. Matsumura el al., 1983).

В работах отечественных и иностранных исследователей подчеркивается трудность, длительность и невысокая эффективность лечения синдрома «larva migrans» у человека и животных (Н. Тумальская, 1997, S. Coman et al., 2000). _

Актуальным для ветеринарной практики является научное обоснование комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе, включающих диагностические исследования и дегельминтизации собак перед наступлением беременности.

Цель я задачи исследований. Изучить особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме, патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами животных, разработать диагностические препараты из антигенов личиночных стадий Тохосага canis и адаптировать их для реакций непрямой гемагтлютинации и латексагглюти нации.

Задачи:

1. Изучить распространение, сезонную динамику и возрастные аспекты эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме, Костромском и Красносельском районах.

2. Разработать параметры культивирования яиц и получения экскреторно-секреторных, соматических антигенов из личинок Тохосага canis.

3. Определить специфичность и активность антигенных иммунореагентов из личинок Т. canis, установить чувствительность, информативность РНГА и динамику антител при экспериментальном токсокарозе собак.

4. Изучить гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак в различные периоды инвазии после дегельминтизации фебантелом и альбендазолом.

5. Выяснить патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак.

Научная новизна работы. Впервые изучено распространение токсокароза среди собак в г. Костроме. Установлены сезонная динамика, возрастные аспекты эпизоотологии токсокароза, уровень зараженности в городских и сельских условиях, гематологический статус и патоморфологические изменения в органах собак, экспериментально зараженных Тохосага canis. Определены специфичность, активность иммунореагентов из личинок Тохосага canis и чувствительность, информативность РНГА при экспериментальном токсокарозе собак. При помощи реакции непрямой гемагглютинации с экскреторно-секреторными и соматическими личиночными антигенами токсокар изучен иммунный ответ в различные периоды болезни.

Выяснены гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак с пятикратной дегельминтизацией фебантелом 10 %

гранулятом и альбендазолом 99,7 %. Разработана рациональная схема диагностических исследований и дегельминтизаций собак перед наступлением беременности, как этап оздоровительных мероприятий при токсокарозе.

Практическая значимость. Результаты изучения эпизоотологии токсокароза собак, разработанные параметры культивирования яиц Тохосага canis и получения экскреторно-секреторных, соматических антигенов личинок токсокар являются основой для усовершенствования диагностики и профилактики болезни.

Разработанные иммунореагенты рекомендуется использовать в изготовлении диалюстикумов для реакций непрямой гемагтлютинации и латексагглютинации. РНГА следует применять для обнаружения у собак до наступления беременности антител к личинкам Тохосага canis, мигрирующим и инкапсулированным в тканях.

Результаты испытания фебантела 10 % гранулята и альбендазола 99,7 % с целью профилактики токсокароза рекомендованы для включения в схему комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при паразитарных болезнях собак в питомниках служебного собаководства и в кинологических Центрах.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме.

2. Разработка параметров культивирования яиц Тохосага canis и получения экскреторно-секреторных, соматических личиночных антигенов токсокар с последующим использованием их в иммунодиагностических тестах (РНГЛ, РЛА).

3. Специфичность и активность иммунорсагентов для диагностики экспериментального токсокароза собак в реакциях непрямой гемагглютинации и латекса1 глютинации, информативность методов.

4. Гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак в различные периоды инвазии и после дегельминтизации фебантелом и альбендазолом.

5. Патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак.

Пути реализации. Результаты исследований можно включить в схему научно-обоснованных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе плотоядных и в учебно-методическую литературу для ветеринарных специалистов и студентов факультетов ветеринарной медицины вузов.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на следующих конференциях:

1. Международная конференция молодых ученых «Молодая наука — XXI веку». - Иваново. - 2001 г.

2. Межвузовские научно-практические конференции «Актуальные проблемы науки в АПК». - Кострома. - 2002,2004.

3. Научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва. - 2004.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ. В них изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.

Внедрение. Результаты исследований в 2001-2003 годах с положительным эффектом апробированы в кинологическом Центре УВД Костромской области. В соавторстве подготовлены и утверждены научно-техническим советом факультета ветеринарной медицины и зоотехнии, ученым советом ФГОУ ВПО «Костромская государственная сельскохозяйственная академия» наставление и технические условия на набор для диагностики токсокароза собак в реакции непрямой гемагглютинации (2004 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 119 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора и списка литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, 4 главы, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения. Библиографический список представлен 179 источниками, из них отечественных — 60, иностранных - 119. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 22 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Исследования выполнены в 2000 - 2003 г.г. на кафедре анатомии и физиолопт животных, в лаборатории паразитологии, клинике ФГОУ В110 Костромская ГСХА, кинологическом Центре УВД Костромской области. Фекалии собак исследовали методом Фюллсборна, а субстрат после культивирования яиц токсокар - по Берману. Интенсивность инвазии определяли при помощи счетной камеры Мигачевой и Котельникова.

Всего исследовано 576 собак в возрасте от 1 мес. до 8-12 лет из различных административных районов г. Костромы и из населенных пунктов Костромского и Красносельского районов. Проведено 3 эксперимента на 40 беспородных щенках 1,5-3 мес.

После заражения собак яйцами Тохосага сашз изучали гематологические показатели: определяли СОЭ (с помощью аппарата Панченкова), содержание гемоглобина (по Сали), количество эритроцитов, лейкоцитов и лейкоцитарную формулу (в камере Горяева). Сыворотки крови и молозива от лактирующих собак (после сбраживания) исследовали на наличие антител к Т.сашз в реакциях непрямой гемагглютинации и латексагтлютинации.

Животных для проведения экспериментов подбирали по принципу аналогов. От всех подопытных собак брали патологический материал для гистологического исследования.

Получение и культивирование яиц Toxocara canis, приготовление антигенов для иммунодиапюстических методов.

Половозрелых токсокар выделяли из фекалий спонтанно зараженных щенков 2-3 месячного возраста, предварительно обработанных препаратом «вормин» (мебендазол) в дозе 20 мг/кг по ДВ. Нематод собирали через 24 часа после дегельминтизации, отмывали физиологическим раствором и разделяли по полу.

Самок вскрывали и выделяли матки с целью последующего получения яиц токсокар.

Матки (2/3 конечного участка) половозрелых самок токсокар измельчали в ступке, гомогенат смешивали в чашках Петри с промытыми, просушенными в термостате древесными опилками и оставляли при комнатной температуре (23-25°С). Субстрат, содержащий яйца нематод, периодически увлажняли дистиллированной водой. Еженедельно проводили микроскопические исследования. Завершение формирования личинок наблюдалось на 25-30 дни. Инвазионность яиц определяли путем биопробы на щенках 2 мес.

Фекалии от спонтанно зараженных токсокарами щенков измельчали, заливали водопроводной водой и отстаивали в течение суток. Образовавшийся осадок разводили водопроводной водой и вновь отстаивали до полного просветления. После центрифугирования осадок разводили в небольшом количестве физиологического раствора, смешивали с мелким песком и осуществляли культивирование. Личинки полностью формировались к 4-5 месяцу.

Для получения личинок Toxocara canis субстраты, содержащие инвазионные яйца помещали в марлевые мешочки, которые погружали в стакан-с фосфатно-солевым буферным раствором (рН=7,4) и инкубировали в термостате. Затем надосадочную жидкость аккуратно сливали, а осадок микроскопировали с целью обнаружения личинок токсокар. Обнаруженных личинок помещали в чистые флаконы.

Экскреторно-секреторные антигены Т. canis получали после культивирования личинок второй стадии в фосфатио-солевом буферном растворе. Белок, растворенный в ФСБ, выделяли методом высаливания с использованием насыщенного раствора сульфата аммония и последующим диализом. Все манипуляции выполнялись на холоде для предотвращения денатурации белка. Полученный после диализа и центрифугирования экскреторно-секреторный антиген личинок токсокар помещали в чистые флаконы и хранили в морозильной камере при -18°С до использования.

Соматические антигены личинок токсокар получали разрушением их в ступке с мелким стеклом при добавлении фосфатно-солевого буферного раствора рН—7,2-7,4. После центрифугирования гомогената надосадочную жидкость собирали и осуществляли выделение белковых фракций по вышеописанной методике.

Антиген из кутикулы половозрелых токсокар получали следующим образом: кутикулярный мешок отделяли, промывали физиологическим раствором и измельчали в ступке с мелким стеклом при добавлении фосфатно-

солевого буферного раствора рН=7,2-7,4. Гомогенат центрифугировали, надосадочную жидкость собирали, помещали во флаконы и хранили при -18° до использования.

Постановку иммунодиагностических тестов - реакций непрямой гемагтлютинации (РИГА) и латексагглютинации (РЛЛ) проводили по общепринятым методикам. Эритроциты барана формалинизировали по Вайнбаху.

Иатологоанатомические, патоморфологические исследования выполняли в соответствии с методами, используемыми в отечественной ветеринарной лабораторной практике. Подопытных животных вскрывали и брали для патоморфологических исследований кусочки легких, печени и тонкого отдела кишечника (фиксация в 10 % растворе нейтрального формалина).

Цифровые результаты исследований обработаны статистически по П.Ф. Рокицкому (1973) и Н.А. Плохинскому (1978) с использованием программы Microsoft Excel.

2.2. Особенности эпизоотического процесса при токсокарозе в городской и сельской популяциях собак

В период 2000-2003 г.г. при копроовоскопическом исследовании яйца Toxocara canis обнаружены у собак городской (г. Кострома) и сельской популяций (населенные пункты Костромского и Красносельского районов). Показатели экстенсивности инвазии составили от 2± 1,2 до 30±5,2 %.

Уровень зараженности плотоядных городской популяции варьировал в разные годы: 2000 г. - 4,5±2,2 %, 2001 г. - 1,7±1,2 %, 2002 г. - 6,5±3,6 %, 2003 г. - 9,8±4,2 %, сельской - 16,7±6,2 %, 2,8±1,8 %, 29,9±5,2 % и 21,2±3,6 % соответственно. За четырехлетний период отмечено значительное увеличение интенсивности эпизоотического процесса при токсокарозе собак как в городской с 1,7±1,2 до 9,8±4,2 %, так и в сельской популяции с 2,8± 1,8 до 29,9±5,2 % (рис. 1). Такая динамика связана с возрастанием численности популяции бездомных плотоядных в городе и сельской местности.

Установлено существенное различие инвазированности токсокарами собак в г. Костроме и в населенных пунктах, близко расположенных к городу. В среднем за 2000-2003 гг. среди городских собак токсокароз зарегистрирован в 5,6±1,3 % случаев, у сельских - 17,6±2,3 %.

Более высокие показатели зараженности собак сельской популяции объясняются содержанием их без привязи, свободным перемещением и частыми контактами с бездомными животными. Собак городской популяции регулярно обрабатывают антгельминтными препаратами, а бездомных отлавливают и содержат в условиях специальных пунктов, гостиниц с проведением лечебно-профилактических мероприятий.

Рис. 1. Периодическая динамика эпизоотического процесса при токсокарозе собак в городе Костроме и сельской местности (населенные пункты Костромского и Красносельского районов)

23. Сезонная динамика токсокароза собак

Результаты исследований показали, что зараженность животных половозрелыми токсокарами в зимний, весенний, летний и осенний периоды года существенно различается. Сезонная динамика эпизоотического процесса при токсокарозе собак имеет закономерный характер. В летние месяцы экстенсивность инвазии достигает максимальных значений - 22,0±3,2 %. Осенью отмечается значительное снижение зараженности до 3,8± 1,7 %. В зимний период показатели инвазированности стабилизируются на уровне минимальных - 3,4±1,6 %. Весной наблюдается следующий подъем уровня инвазии до 15,8±2,9 % (табл. 1, рис. 2).

Повышение экстенсивности инвазии в весенние и летние месяцы обусловлено увеличением численности молодых собак (1-6 мес.), которые являются основными носителями половозрелых юксокар. Кроме того, большое значение в развитии инвазионных яиц Т. canis имеют благоприятные условия окружающей среды.

Таблица 1

Сезонная динамика зараженности собак Toxocara canis_

Сезон года Исследовано Заражено ЭИ, %

Зима 118 4 3,4±1,6

Весна 158 25 15,8±2,9

Лето 168 37 22,0±3,2

Осень 132 5 3,8±1,7

Рис. 2. Сезонная динамика эпизоотического процесса при токсокарозе собак.

2.4. Показатели зараженности токсокарами собак разного возраста

Копроовоскопические исследования позволили обнаружить яйца Т. сашз у 21±7,1, 25±12,2, 33±5,3 и 41±5,8 % собак в возрасте от одного до пяти месяцев, у 6±3,2 и 8±2,3 % - 5-12 мес. и у 7±2,7 % - 1-2 лет. Животные старше трех лет оказались не инвазированы половозрелыми токсокарами.

Установлено повышение уровня зараженности токсокарами собак от одного до 5 мес. с 21±7,1 % в 2000 г. до 41±5,8 % в 2003 г. Достаточно высокие показатели экстенсивности инвазии - 7,7±2,3 % среди животных 5-12 мес.

За четырехлетний период токсокароз у собак в возрастной группе 1-2 года отмечен только в 2000 году - 7±2,7 % (рис. 3).

2000 г. 2001 г. 2002 г. 2003 г.

Рис. 3. Динамика зараженности токсокарами собак различных возрастных

групп в 2000 - 2003 гг.

При помощи счетной камеры Мигачевой и Котельникова установлена более высокая интенсивность инвазии токсокарами молодых собак. У щенков в возрасте до 5 мес. интенсивность инвазии составляет 3300-3600 яиц Тохосага canis в 1 г фекалий, у собак 1-2 лет- 60-120 яиц (табл. 2).

Таблица 2

Средние показатели интенсивности инвазии при токсокарозе собак различных возрастных групп в г. Костроме

Полученные результаты свидетельствуют о формировании у взрослых собак при токсокарозе напряженного нестерильного иммунитета, основанного на клеточных и гуморальных факторах, первоначально индуцируемых экскреторно-секреторными антигенами личинок Тохосага canis. Личинки третьей стадии в большом количестве присутствуют в различных тканях многократно зараженных животных в возрасте одного года и старше.

Причиной имагинального токсокароза взрослых собак является снижение иммунного статуса во второй половине беременности.

Высокий уровень зараженности токсокарами щенков в возрасте от одного до пяти месяцев необходимо рассматривать как следствие трансплацентарной передачи возбудителя и онтогенетически не сформировавшегося иммунитета. У молодых собак отсутствует приобретенный специфический иммунитет.

Постепенное накопление и персистенция личинок Тохосага canis в тканях молодых собак, наряду с их физиологической зрелостью и сформировавшимся иммунным статусом, способствует элиминации половозрелых гельминтов из кишечника.

2.5. Симптомы, гематологические показатели и патоморфологические изменения при экспериментальном токсокарозе собак

Опыты выполнены на щенках 2,5-3 месячного возраста. Животных заразили различными дозами (от 150 до 900) инвазионных яиц Т. canis (схема опыта №1 в гл. «Материалы и методы исследований).

Основные симптомы токсокароза.

В первые три дня после заражения у животных каких-либо симптомов, свойственных для токсокароза не наблюдали. На четвертый день повысился аппетит, а к 15-17 дн. отмечена анорексия. С 13 дня опыта проявлялись беспокойство, угнетение, анемичность слизистых оболочек, тусклый и взъерошенный шерстный покров, учащение пульса, дыхания, ослабление тонов сердца, частый сухой кашель, болезненная реакция при пальпации грудной клетки и брюшной стенки в области печени, диарея, в двух случаях -нарушение координации движения. Зараженные щенки заметно отставали в росте и развитии от контрольных. К 28 дню опыта живая масса подопытных животных уменьшилась в среднем в 2,1 раза по сравнению с контролем и

составила 2150 г (в контрольной группе в среднем - 4600 г). Начиная с 23 дня инвазии, у двух щенков отмечены парез задних конечностей неадекватные ответные реакции на раздражители, анорексия. К 48 дню после заражения погибли все животные подопытной группы.

Гематологические показатели.

Изменения состава крови зарегистрированы на 14 день инвазии. Установлено уменьшение количества эритроцитов на 12,7 % (3,93±0,88х1012/л), снижение концентрации гемоглобина на 28,7 % (57±1,05 г/л) и увеличение числа лейкоцитов на 35,2 % (16,9*0,95х109/л) по сравнению с такими же показателями у контрольных животных. Выявлено значительное уменьшение количества сегментоядерных нейтрофилов до 25,3+1,13 %, увеличение числа палочкоядерных нейтрофилов - 2,6+1,13 %, эозинофилов - 17,6+0,40 %, моноцитов - 2,6+0,58 % и лимфоцитов - 51,9+1,01 %.

На 25 и 37 дни после заражения наблюдалось уменьшение количества эритроцитов с 3,5+0,2х1012/л (24,2 %) до 2,8+1,1х1012/л (44,5 %), снижение концентрации гемоглобина до 47 % (45+0,9 г/л), увеличение числа лейкоцитов на 94,6 % (23,3+1,0х109/л) по сравнению с аналогичными показателями у контрольных животных. У подопытных животных зарегистрированы лейкоцитоз и лимфоцитоз: палочкоядерные нейтрофилы - 3+0,60 %, сегментоядерные - 20,3+0,75 %, эозинофилы - 17,4+0,71 %, моноциты - 2,3 + 1,17 %, лимфоциты 57+1,00 %.

Патоморфологические изменения в тканях собак, экспериментально зараженных инвазионными яйцами Т. canis.

В отдельных участках легочной ткани выражена пролиферация клеток соединительной ткани и утолщение межальвеолярных перегородок, капилляры в них кровенаполнены, диапедезы, инфильтрация эозинофилами и лимфоидными клетками. Вокруг сосудов - разрыхление соединительной ткани с эозинофилами между коллагеновыми волокнами и фибробластами. В ряде случаев межальвеолярные перегородки разрушены. В местах локализации личинок токсокар - участки некроза с эозинофилами. Бронхи расширены, их слизистая набухшая, складчатая. В просвете бронхов скопление погибших эпителиальных клеток и эритроцитов. Лимфоциты и плазматические клетки равномерно распределены по всей ткани легких, но максимальное их количество в перибронхиальной и периваскулярной ткани.

Обнаруженные в тканях изменения являются основанием для патоморфологического диагноза: гиперемия, гранулематозный альвеолит, эмфизема, периваскулиты и перибронхит.

Междольковые и центральные вены печени кровенаполнены. В некоторых дольках гепатоциты сдавлены, их цитоплазма гомогенная, интенсивно окрашена, ядра большей частью сохранены, иногда заметны их контуры. В некоторых участках ткани - скопления гистиоцитов, плазмоцитов с единичными эозинофилами среди них. Имеются отдельные клеточные гранулемы с преобладанием эозинофилов и некрозом в центре, возможно, с личинками Т. canis. Вокруг некротических участков формируются соединительнотканные капсулы, содержащие фибробласты, коллагеновые

волокна. Отмечено небольшое количество эозинофильно-плазмоцитарных инфильтратов и лимфоэкстравазатов в междольковой соединительной ткани. Соединительнотканные перегородки незначительно утолщены.

Патоморфологический диагноз: гиперемия, очаговая пролиферация ткани печени гистиоцитами и лимфоидными клетками, лимфоэкстравазаты, в паренхиме печени некробиотические очаги, окруженные

соединительнотканными капсулами, незначительное уплотнение междольковой соединительной ткани, выраженная реакция со стороны макрофагально-ретикулярной системы.

Исследования гистологических препаратов тонкого отдела кишечника показали, что сосуды слизистого и подслизистого слоя расширены, кровенаполнеиы. Покровный эпителий и эпителий крипт местами некротизирован и десквамирован. Соедшштельно-тканная основа слизистой оболочки обильно инфильтрирована клеточными элементами (нейтрофильными лейкоцитами, эозинофилами и фибробластами). Подслизистый слой разрыхлен в результате скопления отечной жидкости. Отмечена пролиферация клеток соединительной ткани вокруг сосудов.

Патоморфологический диагноз: гиперимия, атрофия ворсинок, некробиоз покровного эпителия тонкого отдела кишечника, инфильтрация слизистой оболочки кишечника лейкоцитами и клетками соединительной ткани, отек подслизистого слоя, гранулематозный периваскулит.

У контрольных животных, свободных от гельминтов, при патологоанатомическом и патоморфологическом исследовании на 48 день опыта изменений, свойственных для миграции личинок токсокар, не обнаружено.

Аналогичные опыты на спонтанно зараженных токсокарами щенках при инокуляции от 500 до 2500 яиц Т. canis позволили установить характерные для токсокароза патоморфологические изменения в органах и констатировать отсутствие напряженного нестерильного иммунитета. Следует учитывать, что у собак до 6-8 мес. не сформирован конституционный иммунитет.

2.6. Иммунодиагностика токсокароза собак. Разработка, иммунореагентов для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), латексагглютигции (РЛА) и использование их в диагностике токсокароза

Получение эритроцитарных антигенных диагностикумов для РНГА, компоненты РЛА, а также постановка и параметры оценки реакций подробно описаны в главе диссертации «Материалы и методы исследований».

На основе экскреторно-секреторных и соматических антигенов личинок второй стадии Toxocara canis разработаны иммунореагенты для серологических методов диагностики - реакций непрямой гемагглютинации (РНГА) и латексагглютинации (РЛА). Изучение специфичности полученных диагностических препаратов Toxocara canis в опытах с гетерологичными иммунными сыворотками против Ascaris suum и Toxascaris leonina показало положительные перекрестные результаты РЛА и РНГА в титрах 1:4 - 1:20

соответственно. Таким образом, диагностический титр при исследовании на токсокароз в РЛА составляет 1:10, а в РНГА - 1:40.

При использовании сывороток крови зараженных токсокарами щенков в гомологичной системе установлены положительные результаты РЛЛ и РНГА с экскреторно-секреторным и соматическим антигенами личинок второй стадии Тохосага canis: реакция латексагглютинации - 1:40 и 1:20, реакция непрямой гемагглютинации 1:160 - 1:2560 и 1:80 -1:640 соответственно.

Максимальные уровни антител к Тохосага canis в сыворотках крови подопытных щенков (дозы заражения от 150 до 2500 яиц гельминтов) установлены на 25 и 37 дни инвазии. РЛА оказалась менее чувствительной, чем РНГА. В реакции непрямой гемагглютинации экскреторно-секреторный личиночный антиген Т. canis показал более высокие параметры специфичности и чувствительности по сравнению с соматическим антигеном.

Результаты изучения специфичности, чувствительности РНГА и РЛА при токсокарозе собак по принятой схеме позволили определить высокую диагностическую эффективность методов.

Материалом для экспериментальных исследований служили сыворотки крови щенков, экспериментально и спонтанно зараженных токсокарами. При апробации также использованы положительные и отрицательные контрольные диагностические образцы из набора для ИФА «Тиаскар», разработанного НПО «Вектор-Бест» г. Новосибирск.

На' основании тестирования сывороток крови от 40 спонтанно и экспериментально зараженных Т. canis щенков, а также скрининга трех серий собственных диагностических препаратов установлена высокая специфичность и активность экскреторно-секреторных и соматических личиночных антигенов токсокар. Кутикулярный антиген, полученный из имагинальных форм Тохосага canis, показал в РНГА и РЛЛ неспецифический результат.

Сохранение активности нативных антигенных препаратов из личинок Т. canis и эритроцитарных диагностикумов имеет большое значение в лабораторной практике. Материал для приготовления диагностикумов (первично обработанные, отмытые центрифугированием антигены) сохраняли в замороженном виде в пластиковых контейнерах (по 5, 10 мл) при - 18°С. При этом снижения активности антигенов не наблюдалось течение 15 месяцев (срок наблюдения). Эритроцитарные антигенные диагностикумы, сохраняемые при температуре +4-6°С, показывали одинаковую чувствительность РНГА в течение 12 мес. с момента изготовления.

Определение чувствительности, информативности реакций непрямой гемагглютинации и латексагглютинации при токсокарозе собак проводили на основании сопоставления результатов серологического и

гельминтоовоскопического исследований 5 щенных сук 3-5 лет (срок беременности — 35-45 дней). При помощи РНГА и РЛА антитела к Т. canis обнаружены у всех тестируемых животных (максимальные титры - 1:320 и 1:16 соответственно), методом Фюллсборна яйца токсокар не выявлены. У собак старше 3 лет половозрелые особи токсокар, как правило, не развиваются, а присутствуют только мигрирующие или инкапсулированные личинки.

С целью объективного представления об эффективности диагностики токсокароза собак в РНГА и РЛА проведено сопоставление показателей серологического и копроовоскопического тестирования 10 щенков 21-25 дневного возраста, рожденных от 2 из 5 серопозитивных на токсокароз собак.

При исследовании сывороток крови от щенков во всех случаях получены положительные результаты на токсокароз в реакциях непрямой гемагглютинации (1:40-1:640) и латексагглютинации (1:20-1:40). Методом Фюллеборна яйца Тохосага canis (2500-3600 в 1 г фекалий) обнаружены у всех щенков из двух пометов от серопозитивных на токсокароз собак.

Высокие титры антител к Тохосага canis у щенных сук и трансплацентарная передача возбудителя связаны с влиянием циркулирующих в кровеносном русле гормонов - эстрогенов, которые способствуют разрушению соединительнотканных капсул, освобождению и активной миграции личинок токсокар.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой чувствительности и информативности РНГА и РЛА при токсокарозе собак. Чувствительность применяемых методов диагностики составляет 100 %.

Изучение динамики антител к Т. canis в РНГА при экспериментальном заражении 6 щенков 2,5-3 мес. инвазионными яйцами токсокар (от 150 до 900) показало повышение уровня специфических антител на 14, 25 и 37 дни инвазии до 1:320, 1:2560 и 1:640 соответственно. В последующие дни после заражения титры антител к Т. canis у подопытных животных оставались на уровне 1:3201:640. Постановку РНГА проводили с эритроцитарными диагностикумами, приготовленными на основе экскреторно-секреторных и соматических, антигенов личинок Т. canis. Отмечена неодинаковая чувствительность РНГА при использовании различных антигенов. Тестирование сыпороток крови подопытных животных позволило установить более высокую чувствительность РНГА с экскреторно-секреторными антигенами по сравнению с соматическими (титры антител на 1-2 разведения выше). Аналогичные результаты получены в опыте на щенках двукратно зараженных токсокарами (суперинвазия).

При исследовании в РНГА молочной сыворотки от кормящей суки пронаблюдали динамику антител к Т. canis за трехнедельный период. Молочную сыворотку исследовали на 7, 14 и 21 дни лактации. В РНГА использовали эритроцитарные диагностикумы на основе соматических (САг) и экскреторно-секреторных (ЭСАг) антигенов личинок Т. canis. В первом случае с САг на 7, 14 и 21 дни опыта получены положительные результаты в титрах 1:160, во втором с ЭСАг- 1:40-1:80.

2.7. Изучение влияния антгельминтных препаратов фебантела и альбендазола на собак, спонтанно и экспериментально зараженных токсокарами

Проведены опыты по изучению параметров крови и динамики титров антител к Тохосага canis у спонтанно и экспериментально зараженных токсокарами собак с последующей дегельминтизацией фебантелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 % в дозах по 15 мг/кг пятикратно с

интервалом 3-5 дней. На основе принципа аналогов сформировано 5 групп собак 1,5-2 месячного возраста по пять в каждой (схема опыта №3 приведена в гл. диссертации «Материалы и методы исследований»).

После заражения щенков инвазионными яйцами Т. саш8 в дозах от 35 до 70 (с двумя последующими дегельминтизациями) на 7 день опыта установлено незначительное уменьшение количества эритроцитов с 3,83±0,59х1012/л до 3,49 ±1,15х1012/л, увеличение количества лейкоцитов с 16,78±0,01х109/л до 18,15 ±1,11 х109/л и уменьшение содержания гемоглобина в среднем на 3±0,17 г/л.

На 14 день опыта (после трех дегельминтизаций) у животных отмечено увеличение количества эритроцитов в среднем на 8,6 % (0,315±0,01х1012/л), повышение концентрации гемоглобина на 2,1 % (1,85±0,08 г/л) и уменьшение количества лейкоцитов на 8,4 % (1,49±0,17х109/л) по сравнению с гематологическими показателями у щенков после второй дегельминтизации.

По завершении цикла дегельминтизаций (5 с интервалом 3-5 дней) на 21 день опыта в группах щенков, обработанных альбендазолом, количество эритроцитов увеличилось на 7,9 % (4,10±1,07х1012/л) и 11,7 % (4,32±1,23 х1012/л), число лейкоцитов уменьшилось на 28,4 % (15,45±1,41х10%) и 28,1 % (15,58±1,22х109/л), содержание гемоглобина возросло на 2,1 и 5,5 %.

В группах животных, дегельминтизированных фебантелом, на 21 день опыта установлено повышение уровня эритроцитов на 10,4 % (4,23±1,23х1012/л) и 11,8 %, (4,16±1,22 х1012/л), снижение количества лейкоцитов на 16,4 % (143 ±1,41х109/л) и 16,5 % (14,16±1,23х109/л), увеличение содержания гемоглобина на 6,3 % и 3 % по сравнению с гематологическими параметрами до дегельминтизации.

На 7 день после заражения у всех подопытных животных наблюдалось увеличение числа эозинофилов в среднем на 13 % по сравнению с показателями до начала опыта. Уровень эозинофилов в два раза превышал таковой у контрольных незараженных животных. Эозинофилия свидетельствует о сенсибилизации тканей инвазированных щенков антигенами личинок токсокар (на 3-7 дни инвазии) и развивающейся замедленной гиперчувствительности. В этот период отмечено незначительное увеличение количества лимфоцитов в среднем на 1,6 % и уменьшение числа сегмептоядерных нейтрофилов на 12,2 % по сравнению с такими же показателями до начала опыта. После трех дегельминтизаций у подопытных животных установлено некоторое уменьшение количества эозинофилов с 16 до 13 % и увеличение числа сегментоядерных нейтрофилов на 27 %.

На 21 день опыта у животных наблюдалось уменьшение количества эозинофилов в среднем на 13 %, при этом увеличилось количество сегментоядерных нейтрофилов на 9 % по сравнению с показателями до дегельминтизаций. Однако изучаемые гематологические параметры существенно отличались от таковых у контрольных незараженных животных: эозинофилов на 51,2 %, лимфоцитов на 42,2 %, палочкоядерных нейтрофилов на 50 % больше, сегментоядерных нейтрофилов на 43,8 % меньше.

Через 21 день после заражения щенков инвазионными яйцами Т. саш8 и проведения полного курса антгельминтной терапии фебантелом и

альбендазолом во всех подопытных группах отмечено восстановление основных гематологических показателей.

Патологические процессы в тканях животных, вызванные миграцией и развитием личинок Т. canis, сопровождаются выраженными изменениями гематологических показателей в основном на 7 день опыта. Установлено уменьшение количества эритроцитов до 3,49±1,15х1012 /л, гемоглобина - 85,7 ±1,13 г/л, сегментоядерных нейтрофилов - 23,12± 1,28 %, увеличение общего числа лейкоцитов - 18,15±1,11х109/л, эозинофилов - 16,73± 1,29 % и лимфоцитов - 54,6±0,75 %.

Пятикратная дегельминтизация с использованием фебантела 10 % гранулята и альбеидазола 99,7 % положительно отражается на гематологических показателях спонтанно и экспериментально зараженных щенков: увеличивается количество эритроцитов на 10,5 %, концентрация' гемоглобина - на 4,2 %, число сегментоядерных нейтрофилов - на 9 %, уменьшается общее количество лейкоцитов и эозинофилов на 12,6 % и 13 %.

Эффективность антгельминтных препаратов при токсокарозе собак

Изучение терапевтических свойств фебантела 10 % гранулята, альбендазола 99,7 % позволило установить, что антгельминтные препараты в дозе 15 мг/кг по ДВ при пятикратной дегельминтизации собак с интервалом 3 и 5 дн. показывают 100 % эффективность против токсокар.

При однократном применении фебантела количество яиц токсокар у подопытных животных уменьшилось в 4,6 раза (интенсивность инвазии на третий день после дегельминтизации составила 780 яиц в 1 г фекалий). В группе животных, обработанных альбендазолом, интенсивность инвазии снизилась в 3,6 раза - до 960.

На пятый день после третьей обработки антгельминтными препаратами в фекалиях животных всех подопытных групп яйца Т. canis не обнаружены. Результаты экспериментальных исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3

Антгельминтная эффективность фебантела 10 % и альбендазола 99,7 % при

экспериментальном токсокарозе собак

№ гр. Название препарата Доза мг/кг Интенсивность инвазии (количество яиц гельминтов в 1 г фекалий)

по ДВ Результаты до (I) и после 1,2,3,4, 5 дегельминтизаций (II)

I II

1 2 3 4 5

1 Фебантел 15 3600 780 120 0 0 0

2 Лльбендазол 15 3480 960 240 0 0 0

3 Контроль - 3540 3480 3600 3480 3480 3480

Примечание: I — контрольные зараженные яйцами токсокар и не обработанные антгельминтными препаратами животные; II -дегельминтизированные трехкратно щенки подопытных групп (1-5).

После завершения цикла дегельминтизаций и эвтаназии провели исследования кишечника щенков опытных и контрольных групп на наличие токсокар. У подопытных животных, дегельминтизированных фебантелом и альбендазолом, гельминты не обнаружены. В тонком отделе кишечника щенков контрольной группы выявлено от 19 до 35 токсокар размерами 1,5-14 см.

Динамика титров антител в реакции непрямой гемагглютинации у собак, экспериментально зараженных инвазионными яйцами Т. сатз и обработанных фебантелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 %

Постановку реакции непрямой гемагглютинации проводили с эритроцитарными диагностикумами, приготовленными на основе экскреторно-секреторного (ЭСАг) и соматического (САг) личиночных антигенов Т. сашз.

До начала опыта при тестировании в РНГА с двумя диагностикумами сывороток крови спонтанно зараженных токсокарами щенков установили положительные результаты в титрах 1:320 - 1:640. После заражения животных инвазионными яйцами токсокар и двух последовательно проведенных дегельминтизаций на 7 день отмечено увеличение титров антител к Т.сашз: в РИГА с САг - 1:320 и 1:640, в РИГА с ЭСАг - 1:1280.

На 14 день опыта после трех дегельминтизаций наблюдалось снижение уровня антител к Т. сашз до 1:160 - 1:320, а на 21 день после пяти дегельминтизаций результаты РИГА с САг оказались слабо положительными или отрицательными.

В реакции непрямой гемагглютинации с экскреторно-секреторным антигеном на 14 и 21 день опыта установлены положительные результаты в титрах 1:640 и 1:320.

Полученные результаты подтверждают возможность и перспективность использования РНГА для диагностики токсокароза собак и контроля эффективности дегельминтизации.

ВЫВОДЫ

1. Токсокароз зарегистрирован в г. Костроме, Костромском и Красносельском районах в среднем у 12± 1,3 % собак. Щенки 1-5 мес. заражены токсокарами на 21±7,1 - 41±5,8 %, собаки до одного года - 6±3,2 -8±2,3 %, 1-3 лет - 7±2,7 %; животные старше 3 лет свободны от имагинальных форм Тохосага сашз.

2. Сезонная динамика токсокароза собак характеризуется повышением интенсивности эпизоотического процесса в летний период. Средний показатель экстенсивности инвазии - 22±3,2 %. Осенью и зимой зараженность токсокарами составляет 3-4±1,7 %.

3. При экспериментальном токсокарозе собак (дозы заражения от 150 до 2500 яиц Т. сашз) установлены следующие патоморфологические изменения в кишечнике, печени, легких: воспаление с выраженной клеточной пролиферацией (эозинофилы, макрофаги, плазмоциты), альтерация и некроз с замещением фибробластами; перибронхит и периваскулиты, очаговая геморрагическая пневмония с участками эмфиземы и некроза; жировая дистрофия печени с очаговым некробиозом; частичная атрофия ворсинок и некробиоз покровного эпителия кишечника, отечность подслизистого слоя.

4. Оптимальные параметры культивирования яиц Toxocara canis: температура - 23-25°С, субстрат - очищенный мелкий песок и древесные опилки, периодически увлажняемые водой. Завершение формирования личинок и проявление активности наблюдается через 25-30 дн. при культивировании яиц, выделенных из матки токсокар, и на 4-5 мес. - при получении их из фекалий собак.

5. Изучение антигенов токсокар в реакциях непрямой гемагглютинации и латексагглютииации позволило установить наиболее оптимальные показатели специфичности, активности экскреторно-секреторных личиночных компонентов (титр антител - 1:2560 с позитивной контрольной сывороткой) и соматических личиночных антигенов (титр антител - 1:640-1:1280). Кутикулярный антиген имагинальных форм Toxocara canis показал в РНГА и РЛА неспецифические результаты.

6. Разработанные иммунореагенты адаптированы для серологических методов диагностики ларвалыюго токсокароза - РНГА и РЛА. Иммунодиагностические тесты следует применять для выявления антител к ларвальным стадиям Т. canis. В опытах на 40 спонтанно и экспериментально зараженных яйцами токсокар собаках подтверждены высокие показатели специфичности и чувствительности РНГА с экскреторно-секреторными и соматическими антигенами личинок второй стадии Т. canis, максимальные титры антител соответственно - 1:2560 и 1:640.

7. Пятикратная (с интервалом 3-5 дн.) дегельминтизация фебентелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 % собак, экспериментально зараженных яйцами токсокар, способствует постепенному восстановлению гематологических показателей. Однако уровень эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов еще длительный период (более 45 дней) остается ниже нормативных показателей на 28 % и более.

8. Экстенсэффективность антгельминтных препаратов фебантела 10 % гранулята и альбендазола 99,7 % при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак (против имагинальных форм Т. canis) составляет 100 %.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработаны параметры культивирования яиц Т. canis и получения экскреторно-секреторных и соматических антигенов из личинок токсокар второй стадии.

Полученные иммунореагенты рекомендуется использовать для сенсибилизации эритроцитов и последующего приготовления диагностикумов для реакции непрямой гемагглютинации.

РНГА следует применять для обнаружения у собак до наступления беременности антител к мигрирующим и инкапсулированным в тканях личинкам Toxocara canis.

При положительных результатах РНГА на токсокароз собак предлагается трех- или пятикратно с интервалом 3-5 дн. дегельминтизировать фебантелом 10% гранулятом или альбендазолом 99,7 % в дозе 15 мг/кг. Эффективность лечения необходимо определять по снижению уровня антител к Т. canis и

серонегативным результатам на токсокароз через 15-30 дней после дегельминтизации.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Михин Л.Г. Распространение и потенциальная эпидемическая опасность токсокароза в городах Костроме и Ярославле// Тезисы докладов международной науч. конф. «Молодая наука - XXI веку». - Иваново, 2001. — С. 39-40.

2. Михин Л.Г., Ложкин Э.Ф. Гельминтозы собак с синдромом «larva migrans»// Материалы межвуз. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы науки в АПК». - Кострома, 2002. - Т. I. - С. 24.

3. Михин А.Г., Новак М.Д., Архипов И.А. Гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак с последующей антгельминтной терапией// Материалы международной науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы науки в АПК». - Кострома, 2004. - Т. II. - С. 129-130.

4. Михин А.Г., Ложкин Э.Ф., Новак М.Д. Распространение, возрастная и сезонная динамика токсокароза собак в г. Костроме// Материалы международной науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы науки в АПК». — Кострома, 2004. - Т. П. - С. 130-131.

5. Михин А.Г. Культивирование личинок Тохосага canis in vitro// Материалы международной науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы науки в АПК». - Кострома, 2004. - Т. II. - С. 132.

6. Новак М.Д. , Михин А.Г., Ложкин Э.Ф. Диагностика экспериментального токсокароза собак в реакции латексагглютинации// Материалы международной науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы науки в АПК». - Кострома, 2004. -Т. И. - С. 134-135.

7. Михин А.Г., Архипов И.А., Новак М.Д. Эффективность антгельминтных препаратов при экспериментальном токсокарозе собак// Материалы докладов науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». — М, 2004.-С. 210-212.

8. Новак М.Д., Михин А.Г. Клинико-гематологические, иммунологические и патоморфологические аспекты экспериментального токсокароза собак// Материалы докладов науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М, 2004. - С. 231-233.

Михин Александр Германович Токсокароз собак (эпизоотология, иммунодиагностика, патоморфология, лечение)

Автореферат

диссертации на соискание ученойхтепени кандидата ветеринарных

наук

Компьютерный набор и верстка В.НЗабелина

Лицензия ЛР № 040284 от 6.05.98г.

Подписано в печать 3 февраля 2004 г. Формат 60/84 1/16. Печать офсетная. Бумага офсетная. Усл. печ.л. - 1,0 Тираж—100 экз.Заказ № 474

Типография НГСХА, 603107, Н.Новгород, пр.Гагарина,97

» - 8 9 1 9

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Михин, Александр Германович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза плотоядных

1.2. Патогенез: гематологические, биохимические и патоморфологические изменения при экспериментальном токсокарозе

1.3. Иммунодиагностика токсокароза. Антигены и способы их получения. Методы диагностики

1.4. Лечение и химиопрофилактика токсокароза плотоядных

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Эпизоотология токсокароза собак в г. Костроме и в ряде населенных пунктов Костромского, Красносельского районов

2.2.1.1. Особенности эпизоотического процесса при токсокарозе в городской и сельской популяциях собак

2.2.1.2. Сезонная динамика токсокароза собак

2.2.1.3. Показатели зараженности токсокарами собак разного возраста

2.2.2. Изучение патогенного действия и патоморфологических изменений в органах при токсокарозе (однократное заражение и суперинвазия)

2.2.2.1. Симптомы, гематологические показатели и патоморфологические изменения при экспериментальном токсокарозе собак

2.2.2.2. Симптомы, гематологические показатели и патоморфологические изменения в тканях собак при суперинвазии Т. canis (дозы от 500 до 2500)

2.2.3. Иммунодиагностика токсокароза собак. Разработка иммунореагентов для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), латексагглютинации (PJIA) и использование их в диагностике токсокароза

2.2.3.1. Получение компонентов для изготовления экскреторно-секреторных, соматических, кутикулярных антигенов Toxocara canis с целью применения в РИГА и РЛА

2.2.3.2. Параметры изготовления экскреторно-секреторного, соматического антигенов из личинок второй стадии Toxocara canis и кутикулярного антигена из половозрелых токсокар

2.2.3.3. Результаты апробации РИГА и РЛА с экскреторно-секреторным, соматическим личиночным и кутикулярным антигенами Toxocara canis

2.2.3.4. Сопоставление результатов серологического и копроовоскопического исследований собак (щенных сук) на токсокароз

2.2.3.5. Динамика антител к Toxocara canis при экспериментальном токсокарозе собак в сыворотке крови и молоке лактирующей суки

2.2.4. Изучение влияния антгельминтных препаратов фебантела и альбендазола на собак, спонтанно и экспериментально зараженных токсокарами

2.2.4.1. Изменение параметров крови собак спонтанно и экспериментально зараженных токсокарами и дегельминтизированных фебантелом и альбендазолом

2.2.4.2. Эффективность антгельминтных препаратов при токсокарозе собак

2.2.4.3. Динамика титров антител в реакции непрямой гемагглютинации у собак, экспериментально зараженных инвазионными яйцами Toxocara canis и дегельминтизированных фебантелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 %

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Токсокароз собак"

Токсокароз широко распространен среди собак во многих странах мира (P.M. Schantz, 1989).

В различных регионах России токсокароз регистрируется у 10-76 % собак (Ф.Л. Радун, 1973, С.Д. Клочков, 1995, Ю.Э. Мысливец и др., 1998, А.Я. Лысенко и др., 1999, А.Н. Шинкаренко, 1999, Т.Г. Козырева, 1999, А.Н.Воличев, 2000, С.И. Калюжный, 2000, Н.В. Есаулова, М.Ш. Акбаев, 2001, В.Б. Игнатьева, 2001, И.М. Зубарева, 2001, А.В. Жабров, 2002, Н.С. Беспалова, 2003).

Щенки от 2 до 30 дней заражены токсокарами на 100 %. Высокая напряженность эпизоотического процесса является следствием пожизненного носительства личинок Toxocara canis и трансплацентарной передачей их во второй половине беременности (Л.Е. Верета, О.Г. Малышкова, 1984).

В Болгарии зарегистрировано 723 больных с мигрирующими личинками токсокар. Описан случай менингита, индуцированный Toxocara canis (R. Jeleva et al., 1998).

Известны две формы токсокароза человека: висцеральный и глазной. Заболевание протекает с рецидивами и длительными ремиссиями (JI.C. Ходасевич и др., 1998).

За рубежом с 60-70 гг. прошлого столетия применяются различные диагностические тесты для выявления ларвального токсокароза.

В отечественной ветеринарной практике отсутствуют эффективные методы иммунодиагностики «larva migrans» при токсокарозе плотоядных.

В качестве источника антигена при иммунодиагностике ларвального токсокароза можно использовать взрослые особи Toxocara canis (С.С. Huntley et al., 1963, E.I. Jeska, 1967, R.F. Collins et al., 1975), личинки второй и третьей стадий (J.N. Annen et al., 1975), экскреторно-секреторные продукты личинок (D.H. Savigny, 1975, К. Matsumura et al., 1983).

Актуальным для ветеринарной практики является научное обоснование комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе собак в питомниках служебного собаководства и в кинологических Центрах, включающих диагностические исследования и дегельминтизации сук перед наступлением беременности.

Цель и задачи исследований. Изучить особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме, патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак, разработать диагностические препараты из антигенов личиночных стадий Toxocara canis и адаптировать их для реакций непрямой гемагглютинаций и латексагглютинации.

Задачи:

2. Разработать параметры культивирования яиц и получения экскреторно-секреторных и соматических антигенов личиночных стадий Toxocara canis.

3. Определить специфичность и активность иммунореагентов из личиночных стадий Т. canis, установить чувствительность, информативность РНГА и динамику антител при экспериментальном токсокарозе собак.

5. Выяснить патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак.

Научная новизна работы. Впервые изучено распространение токсокароза среди собак в г. Костроме. Установлены сезонная динамика, возрастные аспекты эпизоотологии токсокароза, уровень зараженности в городских и сельских условиях, гематологический статус и патоморфологические изменения в органах собак, экспериментально зараженных Toxocara canis. Определены специфичность, активность иммунореагентов из личиночных стадий Toxocara canis и чувствительность, информативность РНГА при экспериментальном токсокарозе собак. При помощи реакции непрямой гемагглютинации с экскреторно-секреторными и соматическими личиночными антигенами токсокар изучен иммунный ответ в различные периоды болезни.

Выяснены гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак с пятикратной дегельминтизацией фебантелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 %. Разработана рациональная схема диагностических исследований и дегельминтизации сук перед наступлением беременности, как этап оздоровительных мероприятий при токсокарозе.

Полученные иммунореагенты рекомендуется использовать в изготовлении диагностикумов для реакции непрямой гемагглютинации. РНГА следует применять для обнаружения у сук до наступления беременности антител к мигрирующим и инкапсулированным в тканях личинкам Тохосага canis.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме;

3. Специфичность и активность иммунореагентов для диагностики экспериментального токсокароза собак в реакциях непрямой гемагглютинации и латексагглютинации, информативность методов;

4. Гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак в различные периоды инвазии и после дегельминтизации фебантелом и альбендазолом;

5. Патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на следующих конференциях:

1. Международная конференция молодых ученых «Молодая наука - XXI веку». - Иваново. — 2001 г.

2. Межвузовские научно-практические конференции «Актуальные проблемы науки в АПК». - Кострома. - 2002, 2004.

3. Научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва. - 2004.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 119 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы и 4 главы, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и списка литературы. Библиографический список представлен 179 источниками, из них отечественных - 60, иностранных — 119. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 22 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Михин, Александр Германович

ВЫВОДЫ

1. Токсокароз зарегистрирован в г. Костроме, Костромском и Красносельском районах в среднем у 12±1,3 % собак. Щенки 1-5 мес. заражены токсокарами на 21±7,1 - 41 ±5,8 %, собаки до одного года - 6±3,2 -8±2,3 %, 1-3 лет - 7±2,7 %; животные старше 3 лет свободны от имагинальных форм Тохосага canis.

3. При экспериментальном токсокарозе собак (дозы заражения от 150 до 2500 яиц, Т. canis) установлены следующие патоморфологические изменения в кишечнике, печени, легких: воспаление с выраженной клеточной пролиферацией (эозинофилы, макрофаги, плазмоциты), альтерация и некроз с замещением фибробластами; перибронхит и периваскулиты, очаговая геморрагическая пневмония с участками эмфиземы и некроза; жировая дистрофия печени с очаговым некробиозом; частичная атрофия ворсинок и некробиоз покровного эпителия кишечника, отечность подслизистого слоя.

5. Изучение антигенов токсокар в реакциях непрямой гемагглютинации и латексагглютинации позволило установить наиболее оптимальные показатели специфичности, активности экскреторно-секреторных личиночных компонентов (титр антител - 1:2560 с позитивной контрольной сывороткой) и соматических личиночных антигенов (титр антител - 1:6401:1280). Кутикулярный антиген имагинальных форм Toxocara canis показал в РНГА и PJLA неспецифические результаты.

6. Разработанные иммунореагенты адаптированы для серологических методов диагностики ларвального токсокароза - РНГА и РЛА. Иммунодиагностические тесты следует применять для выявления антител к ларвальным стадиям Т. canis. В опытах на 40 спонтанно и экспериментально зараженных яйцами токсокар собаках подтверждены высокие показатели специфичности и чувствительности РНГА с экскреторно-секреторными и соматическими антигенами личинок второй стадии Т. canis, максимальные титры антител соответственно - 1:2560 и 1:640.

7. Пятикратная (с интервалом 3-5 дн.) дегельминтизация фебантелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 % собак, экспериментально зараженных яйцами токсокар, способствует постепенному восстановлению гематологических показателей. Однако уровень эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов еще длительный период (более 45 дней) остается ниже нормативных показателей на 28 % и более.

8. Экстенсэффективность антгельминтных препаратов фебантела 10 % грану лята и альбендазол а 99,7 % при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак (против имагинальных форм Т. canis) составляет 100 %.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Михин, Александр Германович, Кострома

1. Архипов И. А. Особенности применения и дозирования антгельминтиков на разных видах животных// Тр. ВИГИС. 2002. - Т. 38. - С. 19-36.

2. Бене Ф. Обзор антгельминтных средств, применяемых у плотоядных// Ветеринар. 1999.- № 5-6. - С. 4-9.

3. Березанцев Ю.А., Кривенко В.В. Эпидемиологические особенности токсокароза человека в условиях Ленинграда// Тезисы докладов 9 съезда Всесоюзного общества гельминтологов. Москва. - 1986. - С. 41-46.

4. Беспалова Н.С. Этиопатогенетическая терапия гельминтозов (на примере токсокароза собак)// Автореф. дис. . д-ра вет. наук. Нижний Новгород. -2003.-53 с.

5. Бондарева В.И., Диков Г.И. Семена тыквы как противоцестодное средство у собак// Ветеринария, 1954, - №4, - С. 23.

6. Борзунов Е.Н. Эпизоотология токсокароза собак городской и сельской популяции в условиях Нижегородской области и усовершенствование мер борьбы с ним// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Иваново.- 2002. - 24 с.

7. Бурей М.Л., Тэлэмбуца Н.Н. Инвазированность собак ассоциацией возбудителей гельминтов// Сб. науч. статей. «Профилактика паразитарных болезней животных». Кишинев. - 1985. - С. 78-80.

8. Верета Л. Е., Малышкова О.Г. Обсемененность почвы яйцами токсокар в детских дошкольных учреждениях Москвы и ее источники// Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1984. — № 1. - С. 19-25.

9. Вибе П.П., Тищенко В.В. Инвазированность собак кишечными гельминтами// Вестник с/х науки. Алма-Ата. - 1970. - № 3. - С. 13-18.

10. Воличев А.Н. Эколого-эпизоотологические аспекты профилактики основных паразитозов домашних плотоядных в условиях мегаполиса Москвы// Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. - 2000. - 20 с.

11. Волков Ф.А., Апалькин В.А., Волков К.Ф. Противопаразитарные средства. Справочник. Новосибирск. - 1996. - 75 с.

12. Гаврилов А.А. Распространение гельминтов собак в ряде областей

13. Казахстана// Тр. Казахского НИВИ. 1973. - Т. 15. - С. 383-388.

14. Галат В.Ф., Бейдик О.А. Ассоциативные болезни собак в г. Киеве// Матер. IV съезда паразитоценологов Украины. 1996. - С. 37-38.

15. Гербильский B.JI. О способности мигрирующих личинок аскарид провоцировать клинические явления при бессимптомной инфекции// В кн.: Работы по гельминтологии. К 75-летию акад. К.И. Скрябина. М. - Изд. АН СССР, 1953.-С. 139-146.

16. Гербильский В. Л., Богданович В.В. Ларвальный аскаридоз как заболевание аллергического характера// Тр. гельминтологической лабор. АН СССР. 1959. - Т. 9. - С. 73-75.

17. Глумнев М.Т. Ягоды голубики, как средство дегельминтизации// Каракуль и звероводство. 1956. - № 1-3. - С. 56-57.

18. Давидянц В. А. Санитарно-гельминтологическая характеристика токсокароза и разработка комплекса мероприятий по профилактике и борьбе с ним (на примере Армянской ССР)// Автореф. дис. . канд. вет. наук. -Ереван. 1984.- 16 с.

19. Давыдов А.С., Смирнов Н.В., Стужина И.М. Гельминтофауна тонкого отдела кишечника собак Куйбышевской области// В кн.: Эпизоотология, профилактика и лечение заразных и незаразных заболеваний с.-х. животных в Куйбышевской области. 1977. - С. 21-23.

20. Даугалиева Э.Х. Иммунитет при гельминтозах// Тр. ВИГИС. 2000. - Т. 36. - С. 27-49.

21. Демидов Н.В. Антгельминтики в ветеринарии. М. - Агропромиздат, 1987.-318 с.

22. Ершов B.C., Наумычева М.И. Аллергия при аскаридозе свиней// Сб. докл. советских ученых к XVII междунар. ветерин. конгрессу. 1963. - С. 95-97.

23. Есаулова Н.В. Гельминтофауна домашних и диких плотоядных в условиях центральной зоны Нечерноземья и усовершенствование мер борьбы с основными гельминтозами// Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. -2002.-17 с.

24. Есаулова Н.В., Акбаева М.Ш. Гельминтофауна собак и кошек в условиях г. Москвы и Московской области// Матер. Х-го междунар. вет. конгресса. -2001.-С. 235-236.

25. Жабров А.В. Гельминтозы собак на урбанизированных территориях Среднего Поволжья (эпизоотология и меры борьбы)// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Нижний Новгород. - 2002. - 21 с.

26. Желева Р.Ц. Сравнительное исследование антигенной структуры Toxocara canis (Werner, 1782) Ascaris suum (Goes, 1782) в реакции иммунодиффузии и иммуноэлектрофорезе// Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1975. - № 3. - С. 239-298.

27. Желева Р.Ц. Сравнительное изучение активности и специфичности антигенов Т. canis и A. suum в реакций непрямой гемагглютинации// Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1*975. - № 4. - С. 455-460.

28. Желева Р.Ц. Оценка эффективности реакции непрямой гемагглютинации с антигеном аскарид и токсокар при диагностике симптомокомплекса «larva migrans» у человека// Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1976 -№2.-С. 160-165.

29. Зубарева И.М. Основные гельминтозы домашних плотоядных в крупных городах (на примере г. Новосибирска)// Автореф. дис. . канд. вет. наук. -Новосибирск. 2001. - 22 с.

30. Зурмийски П. Изучение распространения Toxocara canis среди собак и опыт лечения токсокароза фенбендазолом// Ветер, сб. 1983. Т. 81, № 12. -С. 21-25.

31. Зыкин J1.A., Сутягин B.C., Угрин И.Н. О применении пиперазин -адипината для дегельминтизации плотоядных животных при аскаридозах// Ветеринария. 1964. - № 8. - С. 53.

32. Игнатьева В.Б. Изучение гельминтофауны собак в Башкортостане //Матер, конф. ВОГ "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями". М. - 2001. - С. 101-102.

33. Игнашенкова Г.В. Биохимическое изучение антигеннной структуры

34. T.canis: Дис. канд. биол. наук. М. - 1985. - 174 с.

35. Исмаилов Г. Д. Гельминтофауна собак в Азербайджане, ее эпизоотологическая и эпидемиологическая характеристика// Автореф. дис. . канд. биол. наук. Баку. - 1969. - 20 с.

36. Калюжный С.И. Кишечные паразитозы собак и меры борьбы при микстинвазии (токсокароз + цистоизоспороз) у щенков// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Саратов. - 2000. - 22 с.

37. Карасев Н.Ф., Никулин Т.Г., Янченко А.Е. Гельминты и гельминтозы собак г. Витебска// Труды Ленинградского вет. и-та. 1986. — Вып. 48. - С. 101-104.

38. Клочков С.Д. Основные гельминтозы городской популяции собак, их санитарно-эпидемиологическое значение и меры борьбы с ними// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Саратов. - 1995. - 18 с.

39. Козырева Т.Г. Эколого-эпидемиологические основы профилактики токсокароза в Дальневосточном регионе России// Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. - 1999.- 18 с.

40. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Справочник. - М. - Колос, 1984. - С. 21-35.

41. Лейкина Е.С., Демина Н.А., Матова Е.Е., Зорихина В.И., Зубкова А.С. Исследование по патогенезу и иммунитету при ранней фазе аскаридоза//Тр. ин-та мед. паразит, и троп. мед. им. Е.И. Марциновского. 1959. - С. 470502.

42. Лейкина Е.С. Заболевания человека, вызванные миграцией личинок нематод животных. (Обзор зарубежной литературы). //Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1962. - № 1. - С. 100-104.

43. Лысенко. А. Я., Константинова Т.Н., Авдюхина Т.Н. Токсокароз. Учеб. пособие. М. - 1999. - 40 с.

44. Москалик Р.С., Бакулов К.В. Гельминты и дрожжеподобные грибы у служебных собак г. Кишинева// Паразиты теплокровных животных Молдавии. Кишинев. -1976. - С. 35-40.

45. Мысливец Ю.Э., Цветова Ю.В., Цветова Г.В, Токсокароз в Кузбассе// Новости "Вектор-Бест". 1998. - № 8. - С. 3.

46. Петров A.M., Налетов Н.А. Токсокароз почек лисиц// Тр. Моск. зоопарка. -Т. 4.- 1949.-С. 282-287.

47. Подушкина М.А. Токсаскаридоз собак и голубых песцов разработка профилактических мероприятий// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Уфа. -2000. - 22 с.

48. Полищук В.И. К гельминтофауне тонкого отдела кишечника собак Центрального и Южного Таджикистана// Тр. Таджикского НИИВИ. 1974. -Т. 4.-С. 170-172.

49. Пухов В.И. Опыт комплексных противоглистных мероприятий в ОТФ. -Ростов. 1935.-43 с.

50. Радун Ф.Л. Вопросы эпизоотологии и профилактики токсокароза собак, песцов и серебристо-черных лисиц в условиях Московской области// Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. - 1973. - 18 с.

51. Ратникова И.Н. Иммунобиологические показатели при токсокарозе собак и методы его коррекции// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Нижний Новгород. - 2002. - 20 с.

52. Скрябин К.И., Петров A.M. Основы ветеринарной нематодологии. М. -Колос, 1964.-С. 210-225.

53. Слепнев Н.К. К изучению гельминтофауны собак в некоторых зонах Белоруссии //Тр. Белорус. НИВИ. .1974.- Т. 12. - С. 122-125.

54. Смирнов Г.Г. К вопросу о патологических изменениях при миграции аскаридных личинок в теле хозяина// Изв. АН СССР. Ч. 1.- 1927. - С. 12751298.

55. Смирнов Г.Г., Глазунов М.Ф. Об изменениях крови морской свинки при однократной и повторной аскаридной инвазии// Вестн. микроб., эпид. и параз. Т. 7. - Вып. 1. - 1928. - С. 1-26.

56. Сосипатрова Л.А. Патоморфологические изменения в организме свиней при миграции личинок Ascaris suum, Ascaris lumbricoides и Toxocara canisпри однократном заражении и суперинвазии: Дис. канд. вет. наук.- М. -1968.- 178 с.

57. Суслина М.В. Патоморфологические изменения в некоторых органах животных при ранней стадии аскаридоза// Матер, к науч. конф. ВОГ. 1964. - 4.2. - С. 181-185.

58. Терзийски А. Сравнительные исследования миграции некоторых аскаридат// Изв. Центр, хелминтол. лаб. Бълг. АН. 1972. - Т 15. - С. 199-207.

59. Тумальская Н. Токсакароз человека// Врач. 1997. - № 9. - С. 11-12.

60. Хитенкова Л.П. Антгельминтное действие пиперазина сульфата при токсокарозе и токсаскаридозе пушных зверей// Тр. MB А. 1961. - Т.32. - С. 151-154.

61. Ходасевич Л.С., Леонтьев В.Я., Лодыгина А.С., Монастырев К.Д. Висцеральный токсокароз// Арх. проток. 1998. - Т. 60, №1. - С. 54-55.

62. Шинкаренко А.Н. Гельминтофауна и меры борьбы с основными паразитозами собак в г. Волгограде// Автореф. дис. . канд. вет. наук. -Иваново. 1999. - 19 с.

63. Abou-Elsha A.U., Abdel-Hal A.A. Prevalence of some zoonotic parasites in dog Faecal Deposits in Ismailia City// Assiut. Vet. Med. J. 1995. - V. 33, № 66. -P. 119-126.

64. Aljeboori T.I., Ivey M. H. Stout H. Infections with T.canis baboons. I. Antibody, white-cell and serum-protein responses following infection// Am. J. Trop. Med. Hyg. 1970. - V. 13, № 2. - P. 249-254.

65. Annen J.H., Eckert J., Hess U. Eine einfache methode sur Gewinung von Toxocara canis antigen fur die inderekte immunofluoreszent Technik// Acta trop. -1975.-V. 32, № l.-S. 37-47.

66. Ares-Mazas M.E., Sela-Herez M.C., Arias-Fernandes M.S. Epidemiologica de los enteroparasitismos en perros de Galicia// Rev. Iber. Parasitol. 1987. - V. 47(4). - P. 335-339.

67. Babero B.B. On the migrations of Ascaris laevis Leidy, 1856 in some experimentally infected host// Trans. Am. microsc. Soc. 1960. -V. 79(4). - P.439.442.

68. Babero В.В. Pathology resulting from experimental infections by Ascaris laevis Leidy// Trans. Am. microsc. Soc. — 1959. V. 78(3). — P. 330-335.

69. Baufine-Dicroeq H., Cousineau P., Beauvais В., Lariviere M. Diagnostic par la reaction cT immunofluorescence du syndrome de "Larva viscerale migrans"// Bull. Soc. Pathol. Exot. - 1974. -V. 66 (6). - P. 746-751.

70. Beaver P.C. Larva-migrans. //Exper. parasitol. 1956. -V. 5, 6. - P. 587-621.

71. Bishop B.F., Bruce C.L., Evans N.A., Goudie A.C., Gration K.A., Gibson S.P., Pacey M.S., Perry D.A., Walshe N.D., Witty MJ. Selamectin: a novel broad-spectrum endectocide for dogs and cats// Vet. Parasitol. 2000. - V. 91, № 2. - P. 163-176.

72. Cafasso O.T., Garcia S.H., Prat M.I., Santamaria,B. Canine enteroparasites in sector of Bahia Blanca, Argentina// Parasitologia al Dia. 1996. - V.20, № 3/4. -P. 144-146.

73. Chancovic M., Tabacobic В., Esko S Helminthes of dogs, directly endangering, the Health of humans and domestic animals in some regions of Bosnia Hercegovina// Veterinaria - 1986. - V. 36(2). - P. 153-159.

74. Chiejina S.N., Ekwe Т.О. Canine toxocariasis and the associated environmental contamination of urban areas in eastern Nigeria// Vet. Parasitol. -1986. V.22,№ 1/2.-P. 157-161.

75. Clark J. N., Plue R. E., Wallach D. H., Longhofer S. L. Efficacy of ivermectin and pyrantel pamoate in a chewable formulation against heartworm hookworm and ascarid infection in dogs// Am. J. Vet. Res. 1992. - V. 53. - P. 517-520.

76. Collins R.F., Ivey M.H. Specificity and sensitivity of skin test reactions to extracts of Toxocara canis and Ascaris suum. I. Skin tests done on infected guinea pigs//Am. J. Trop. Med. Hyg. -1975. -V. 24(3). P. 455-459.

77. Collins R.F., Ivey M.H. Specificity and sensitivity of skin test reactions to extracts of T. canis and A. suum. II. Homologous PCA test with sera from infected guinea pigs//Am. J. Trop. Med. Hyg. 1975. -V. 24(3). - P. 460-464.

78. Coman S., Doana V., Milu A. Aspects of the prevalence and treatment of endoparasitic infections in dogs// Revista Romana de Med. Vet. 2000. - V. 10, №4.-P. 407-412.

79. Conde Garcia L., Muro Alvares A., Martin F.S. Epidemiological studies on toxocariasis and visceral larva migrans in zone of western Spain// Annals of Tropical Medicine and Parasitology. 1989. - V. 83, № 6. - P. 615-620.

80. Cotteleer C., Fameree L. Helminthes et protozoaires intestinaux parasites du chien en Belgique Cas particulier des Eucoccidia// Schweiz. Arch. Tierheilk. -1980.-V. 122.-P. 519-526.

81. Cypess R.H., Karol M.M., Zidian J.L., Glickman L.T. Larva-specific antibodies in patients with visceral larva migrans // J. Infect. Diseases. 1977. - V. 135(4).-P. 633-640.

82. Dada B.J.O., Lindsqust W.D. Prevalence of Toxocara spp. in some public grounds and highway areas in Kansas//J. Helmintol. 1979. - V. 53. - P. 145-146.

83. Diconza J.J. Toxocara canis: some characteristics of larvae precipitating antibodies in rat serum// Int. J. Parasitol. 1972. - V. 2, № 4. - P. 471-479.

84. Duguid M.I. Chronic endophthalmitis due to Toxocara// Brit. J. Ophthal. -1961.-V. 45 (11).-P. 705-717.

85. Fernando S.T., Immunological response of rabbits to Toxocara canis infection// Parasitology. 1968. -V. 58. - P. 91-103.

86. Fife Earl H. Advances in methodology for immunodiagnostic of parasitic diseases// Exp. Parasitol. 1971. - V. 30. - P. 132-163.

87. Fok E., Takats C., Smidova В., Kecskementhy S., Karakas M. Prevalence of intestinal helminthoses in dogs and cats// Parasitologia Hungarica. 1988. - V. 21. - P. 53-69.

88. Fribouley-Duret J., Fribouley J., Appriow M., Tissier J.M. Mise en evidence d'anticorps au conrs de la toxocarose experimentale а Г aide d'ur extraitantigenique prepare a parter du parasite adulte// C. r. Soc. biol. 1976. -V. 170, №2. - P. 349-352.

89. Galvin T.J. Experimental Toxocara canis infections in chickens and pigeons// J. Parasitol. 1964. -V. 50(1). - P. 124-127.

90. Georgieva D.A., Ivanov A.I., Prelesov P.N. Studies on the parasitic fauna in stray dogs in the Stara Zagora region// Bulgarian J. Vet. Med. 1999. - V. 2 № 2/3.-P. 121-124.

91. Ghadirian B.E., Viens P., Strykowski H., Dubreuil F. Epidemiology of toxocariasis in the Montreal area Prevalence of Toxocara and other helminth ova in dogs and soil// Canadian J. of Public Health. 1976. - V.67, № 6. - P. 495-498.

92. Gibson Т.Е., Done J.T., Richardson M.D. Toxocara canis infection in the pig//Vet. Res. 1958. - V. 70. - P. 157-158.

93. Gothe R., Reichler I. Artenspektrum und Difllshanfigkeit von Endoparasiten bei Mutterhundinnen und ihren Welpen in Suddentschland// Tierarzlt. Prax. -1990.-V. 18.-P. 61-64.

94. Green A.D., Oldham J.N. Resistance in pigs to artificial infection with Ascaris lumbricoides// Vet. Res. 1964. - V 76, № 25. -P. 671-673.

95. Greve J.H., O'Brien S.E. Prevalence of Intestinal Parasites in Jowa dogs A comparison between 1965-68 and 1988// Jowa State Univer. Vet. - 1988. - V. 51, № l.-P. 24-25.

96. Higashikawa H. Experimental studies on visceral larva migrans// Shikoku acta med. 1961.- V. 17, № 1. - P. 1-20.

97. Hoeppli R. Die durch Ascaris larven bei experimenteller infection im Tierkorper bewirkten anatomischen Veranderungen// Virchows Arch, pathol. Anat. und Physiol. Bd. 1923. -V. 244. - S. 159-182.

98. Hoeppli R., Feng L.C., Id F. Histological reactions in the liver of mice due to larvae of different ascaris species// Peking Natural History Bulletin. 1949. - V. 18(2).-P. 119-132.

99. Hogarth-Scott R.S. Visceral larvae migrans. An immunofluorescent examination of rabbit and human sera for antibodies to the antigens of II-th stagelarvae of Тохосага cati and Toxascaris leonina// Immunology. 1966. - V. 10. - P. 217-223.

100. Huismans H. Uber das solitargranulom bei okularer Тохосага canis infection// Ophthalmologica (Basel). 1977. -V. 174 (1). - S. 10-13.

101. Huntley C.C., Moreland A. Gel diffusion studies with Тохосага and Ascaris extracts// Am. J. Trop. Med. Hyg. 1963. -V. 12. - P. 204-208.

102. Huntley C.C., Costas H.C., Lyerly A. Visceral larvae migrans syndrome: clinical, characteristics// Pediatrics. 1965. - V. 36(4). - P. 523-536.

103. Huntley C.C., Costas H.C. Eosinophilia and a gamma globulinemia// Pediatrics. 1965. -V. 36, № 3(1). - P. 425-428.

104. Jacobs D.E., Metier T.L., Siedek E.M. et al. Efficacy of selamectin against experimentally induced and naturally acquired ascarid (Тохосага canis and Toxascaris leonina) infections in dogs// Vet. Parasitol. 2000. - V. 91, № 3/4. - P. 333-345.

105. Jalayer T. Pathology, hematology and serology of V.L.M. in rabbits// Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 1969. - V. 63(1). - P. 17-21.

106. Jeleva R., Redeva I, Dicov I, Vaterkow P., Ducovnikova Т., Ratehev P., Popova S. First case of toxocaral meningitis in Bulgaria// Mediter. J. Infec. and Parasitol. Dis. 1998. - 13. - № 1. - P. 49-52.

107. Jeska E.L. Antigenic analysis of metazoan parasite Тохосага canis// Amer. J. Trop. Med. Hyg. 1967. - V. 16(3). - P. 315-320.

108. Jeska E.L. Purification and immunochemical analysis of genus specific cuticular antigen of T. canis// J. Parasitol. 1969. - V. 55(5). - P. 465-471.

109. Jung R.C. Pacheko G. Relationship of clinical features to immunologic reactions of visceral larvae migrans// Am. J. Trop. Med. Hyg. 1958. - V. 7, № 2,1. P. 256.

110. Jungmann R., Hiepe Т., Scheffler C. Zur parasitaren intestinal fauna bei Hund und Katze wit einem speziellen Beitrag zur Giardia infection// Mh. Vet. - Med. -1986. -V. 41. - P. 309-311

111. Jurasek K., Results of the Laboratory Examination of parasitoses in the Animals of Mozambique//Folia veter. 1986, 30,1: P. 103-109.

112. Karell I., Peleska M., Uhlikova M., Huber J. Larva migrans lentis// Ophthalmologica (Basel). 1977. -V. 171(1). - P.l 4-19.

113. Katic-Radivojevic S., Popovic J. Fauna crevnih helminata pasa lutalica u baru Jokolnim mestima// Veterinarski glasnik. 1992. - V. 46, № 11-12. - P. 681-685.

114. Kerr K.B. The cellular response in acquired resistance in guinea pigs to an infection with pig Ascaris// Am. J. Hyg. V. 27(1). - 1938. - P. 28-51.

115. Lamina J. Immunodiagnostic durck den Hundespulwurm Toxocara canis (Werner, 1782) hervogerufener larva migrans visceralis infectionen// Dt. Med. Wschr. 1974. -V. 99(20). - S. 1070-1073.

116. Lamina J. Immunological demonstrations of a visceral larvae migrans infection. Results of animal experiments. The microprecipitation test on the living larvae// Zentbl. Bact. Parasit. Kdl. Abt. J. Orig. 1970. -V. 215(3). - P. 386-397.

117. Lapart W., Przyjatkowski Z. Serological and hematological investigation in the course of experimental T.canis infections in laboratory mice//Acad. pol. Sci. Ser. Sci. biol. 1976. - V. 24, № 5. - P. 293-298.

118. Lapier J., Holler C. Le syndrome de "Larva migrans visceral". A propos treize observations cher Tadulte// Presse. med. 1971. - V. 79(48). - P. 21632166.

119. Le Riche P.D. et al. Parasites of dogs in Kabul, Afghanistan// British Vet. J. -1988.-V. 144(4).-P. 370-373.

120. Lee H.F. Effect of superinfection on the behavior of Toxocara canis larvae in mice// J. Parasitol. 1960. - V. 46(5). - P. 583-588.

121. Leitao J.L., Cruz Silva J.A. Four parasitic anthropozoonoses affecting dogs in Portugal: leishmaniasis, toxoplasmosis, echinococcosis and toxocariasis// Anais da

122. Escola Superior de Med. Vet. Lisboa. - 1970. - V. 12. - P. 7-36.

123. Lepogev O., Markovic R. Helminti digestinog trakta pasa sa podrucia valieva// Veterinarski glasnik. 1983. - V. 33, №4. - P. 291-296.

124. Lupasco G., Panaitesco D., Soresco A, Ciplea A. Contributions experimentales Г etude de la larve migrans viscerale (granuloma eosinophil pulmonaire)// Arch. Roum. Path. exp. Microbiol. 1964. - V. 23, № 3. - P.777-782.

125. Maqbool A.S., Raza S.H., Hayat C.S., Shafiq M. Prevalence and chemotherapy of toxocariasis in the dog in Faisalabad (Punjab), Pakistan// Vet. arhiv. 1998. - V. 68, №4. - P. 121-125.

126. Matsumura K., Endo Ryiyi. Evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay for detecting antibodies to Toxocara canis in dogs// Jpn. J. Vet. Sci. 1983.-V. 45(5). - P. 683-685.

127. Mendoza Y.C., Callejas E.R., Hernandez A.A., Lopez J.L. Estudio comparativo des las parasitosis entericas en eas diferentes razas de perros diagnosticados en el Departamento de Parasitologia// Vet. Мех. 1993. - V. 24(4). - P. 335-337.

128. Mitchell J.R. Detection of T.canis antibodies with the fluorescent Antibody Technique// Proc. Soc. exp. biol. med. 1964. - V. 117. - P. 267-269.

129. Mizgajska H., Luty T. Toxocariasis in dogs and contamination of soil with Toxocara spp. eggs in Poznan region// Przeglad Epidemiologiczny. 1998. - V. 52, №4.-P. 441-446.

130. Munnich H. Histochemische Untersuchungen uber die Wirkung von Ascaris Larven auf die Leber der Maus// Naturwissenschaften. - 1958. - V. 45(22). - S.551.552.

131. Olson L.J. Organ distribution of Тохосага canis larvae in normal mice and in mice previously infected with Тохосага, Ascaris or Trichinella// Tex. Rep. Biol. Med. 1962. - V. 20(4). - P. 651-657.

132. Olson L.J. Serology of visceral larvae migrans: in vitro larval precipitin test. //Texas Rep. Biol. Med. 1960. - V. 18(3). P. 473-479.

133. Olson L.J., Gaafar S.M. Absence of prenatal infection with Ascaris lumbricoides in swine// J. Am. Vet. Med. Ass. 1963. - V. 143(2) - P. 1217-1218.

134. Orlandi M., Bottone U. The "immuno adherence reaction test" for the diagnosis of V.L.M. Experimental studies in rabbits infected with microascariasis from Тохосага canis and Ascaris suum larvae// Riv. Parasitol. 1978. - V. 39(2-3).-P. 193-197.

135. O'Sullivan E.N. Epidemiological survey of canine toxocariasis in both the owned strag dog populations of Cork county// Irish Vet. J. 1995. - V. 48, № 7-8. -P. 281-284.

136. Owergaauw P.A. Aspects of Тохосага epidemiology: toxocarosis in dogs and cats// Am. J. Trop. Med. Hyg. 1998. - V. 59, № 3. - P. 233-251.

137. Prunaux O., Guignard A. Helmintoses canines a Tile de la Reunion: bilan des resultats du laboratoire veterinaire departamintal de 1987 a 1990//Revue Med. Vet. 1991. -V. 142 (10). - P. 757-760.

138. Przyjatkowski Z., Lapart W., Starzynsky S. Investigation of intravital diagnosis of Тохосага canis larvae migrans in experimentally infected mice// Bull. Acad. pol. Sci. Ser. biol. 1978. -V. 26(12). - P. 875-880.

139. Rao S.S., Suryanarayana C. Epizootiological studies toxocarosis in dogs// Indian Vet. J. 1996. - V. 73, № 2. - P. 214-216.

140. Richards В., Olson L., Box A. Survey of Galveston children for antibodies to

141. Toxocara canis (Research notes)//J. Parasitol. 1962. -V. 48(3). - P. 501.

142. Robinson R.D., Thompson D.L., Lindo J.F. A survey of intestinal helminthes of well-cared — for dogs in Jamaica, and their potential public health significance// J. Helmintol. 1989. - V. 63. - P. 32-38.

143. Rodriguez Ozorio M., Jllescas-Gomez M. et al. Parasitismo por helmintos en el perro (canis famillaris) L Enla provincia de Grenada// Revista Iberica de parasitologic - 1989. - V. 49 (1). - P. 3-9.

144. Roneus O. Studies on the etiology and pathogenesis of white spots in the liver of pigs// Acta veterin. Scand. 1966. - V. 7(16). - P. 56-59.

145. Ruitenberg E.J., van Knappen F. The enzyme-linked immunosorbent assay and it's application to parasitic infections// J. Infect. Dis. 1977. - V. 136. - P. 267-272.

146. Savigny D.H. In vitro maintenance of T. canis larvae and a simple method for the production of Toxocara ES antigen for use in serodiagnostic test for visceral larvae migrans// J. Parasitol. 1975. - V. 61, № 4. - P. 781-782.

147. Savigny D.H., Tizard I.R. Toxocara larva migrans: the use of larvae secretory antigens in hemagglutination and soluble antigen fluorescent antibody tests// Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 1977. - V. 71, № 6. - P. 501-507.

148. Schaeffler W.F. Experimental infection of sheep with the dog ascarid, Toxocara canis// J. Parasitol. 1960 - V. 46(2). - P. 17.

149. Schaeffler W.F. Visceral larva migrans and related diseases in animals// Illinois Vet. 1960. - V. 3(4). - P. 99-102.

150. Schantz P.M. Toxocara larva migrans now// Am. J. Trop. Med. Hyg. 1989. -V.4.-P. 21-34.

151. Schawalder P. Klinich diagnostich Asperte des Parasitenbefales bein Hund// Schweiz. Arch. Tierheilk. - 1976. -V. 118. P. 249-255.

152. Shastri U.V. Occurrence of parasitic infections in dogs in and around Parbhani City// Indian J. of Animal Health. 1991. - № 6. - P. 1-5.

153. Sinha B. N. The migratory behavior of the larvae of Toxocara canis (Werner, 1782) in white mice// Indian vet. J. 1966. - V. 43(12). - P. 1101-1105.

154. Smith H.V. Quinn R., Bruce R.G., Girdwood R.W.A. A paper radioimmunosorbent test (PRIST) for the detection of larva-specific antibodies to Toxocara canis in human sera// J. of Immunological Methods. 1980. -V. 37. - P. 47-55.

155. Smith M.H.D., Beaver P.C. Persistence and distribution of Toxocara canis larvae in the tissues of children and mice// Pediatrics, Springfield. 1953. - V. 12(5)-P. 491-497.

156. Sprent J. F. A. Visceral larva migrans// Austr. J. Sci. 1963. - V. 25(8). - P. 344-354.

157. Sprent J.F.A. On the migratory behavior of the larvae of various Ascaris species in mice// J. Parasitol. -1951. -V. 37(5). P. 13.

158. Stefancikova A., Dubinsky P. Status and prognosis of the incidence of helminthic zoonoses in Slovakia// Helminthologia. 1995. - V. 32, № 4. - P. 247250.

159. Stevenson P., Jacobs D.E. Toxocara infection in pigs. The use of indirect fluorescent antibody tests and in vitro larval precipitate test detecting specific antibodies// J. Helminth. 1974. - V. 51, №2. - P. 149-154

160. Stroczynska-Sikorska M., Klapec Т., Galinska E. Toxocariasis// Medycyna Ogalna. 1997. - V. 32, № 1. p. 74-79.

161. Surgan M.H., Colgan K.B., Kennett S.I., Paffmann J.V. A survey of canine toxocariasis and toxocaral soil contamination in Essex County, New Jersey// Amer. J. of Public Health. 1980. - V.70, № 11. - P. 1207-1208.

162. Sweatman G.K., Henshall T.C., Manktelov B.W. Experimental observations on parasitic liver white spot in New Zealand sheep// N.Z. vet. J. 1962. -V. 10, № 5.-P. 99-107.

163. Taffs L.F. Immunological studies on experimental infections of pigs with

164. Ascaris suum Goeze, 1782.1. An introductions with a review of the literature and the demonstration of complement fixing antibodies in the serum// J. Helminthol. - 1961. -V. 35. - P. 319-344.

165. Taric I. Aljeboori T.I., Ivey M.N. An improved hemagglutination technique for detecting antibody against Toxocara canis// Am. J. Trop. Med. Hyg. 1970. -V. 13 (2).-P. 244-248.

166. Tiner J.D The migrations, distribution in the brain, and growth of ascarid larvae in rodents// J. Infect. Dis. 1953. V. 92(2). - P. 105-113.

167. Todorov P., Stoyanov D.P. On the diagnosis of larva migrans visceralis (Toxocariasis)// Trudy Nauchno-Issled. Inst. Epidem. Mikrobiolog. 1966. -V. 11.-P. 205-210.

168. Umar A., Rabbani M. S., Mian M. A., Saeed K. Efficacy of levamisole, mebendazole and pyrantel pamoate against natural infection of Toxocara canis in dogs// Pakistan Vet. J. 1986. - V. 6. - P. 127-128.

169. Umedu N., Hogan A. Study of intestinal helmints of dogs in Calabara, Nigeria// Archivo veterinario italiano. 1989. - V. 40. - P. 2.

170. Vadav A.K., Tandon V., Helminths of Public Significance in domestic animals of Meghalava// Indian J. of Animal Health. 1989. -№ 12. - P. 169-172.

171. Valladares В., Gigon H., Lopez Roman R. Estadio epidemiologico del parasitism intestinal del Pervo (canis familiaris), eu La Isla Tenerife// Rev. Iber. Parasitol. - 1985. - V. 40(1). - P. 41-48.

172. Vanparijs O., Hermans L. Helminthes and protozoan parasites in dogs and cats in Belgium// Vet. Parasitol. 1991. - V. 38(1). - P. 67-73.

173. Viens P., Strykowski H., Richards В., Soney S. A modified immunofluorescent antibody technique for the serodiagnosis of Human Toxocaral larva migrans// Canadian J. Publ. Meth. - 1975. - V. 66 (3). - P. 237-240.

174. Visco R.J. Corwin P.M., Selby L,A. Effect of Age and Sex on the Prevalence of Intestinal Parasitism in Dogs// JAVMA. 1977. - V.170, № 8. - P. 835-837.

175. Wiserman R.A., Woodruff A.W. Toxocariasis in Britain revealed by skin sensitivity tests// Brit. Med. J. 1968. -V. 1. - P. 677-678.

176. Woodruff A.W. Toxocariasis as public health problem// Environmental Health. 1976. -V. 84. - P. 29-31.

177. Zendulka M. Zmeny v organismu selat. vyvolane migraci larev Ascaris suum Goeze// Ved. Prace Ustavu vet. Brno. 1960. -№1. - P. 227-273.

178. Zyngier F.R. Ascariasis and Toxocariasis// Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo. -1976. -№4.-P. 251-257.

Информация о работе

Михин, Александр Германович
кандидата ветеринарных наук
Кострома, 2004
ВАК 03.00.19

Диссертация

Токсокароз собак - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Токсокароз собак ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Токсокароз собак"

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Михин, Александр Германович

Введение Диссертация по биологии, на тему "Токсокароз собак"

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Михин, Александр Германович

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Михин, Александр Германович, Кострома

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Токсокароз собак
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология