Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Тестирование племенного крупного рогатого скота по ДНК-маркерам молочной продуктивности

ВАК РФ 06.02.07, Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Тестирование племенного крупного рогатого скота по ДНК-маркерам молочной продуктивности"

На правах рукописи

ЗИННАТОВА ФАРИДА ФАТИХОВНА

ТЕСТИРОВАНИЕ ПЛЕМЕННОГО КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПО ДНК - МАРКЕРАМ МОЛОЧНОЙ ПРОДУКТИВНОСТИ

06.02.07 - Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных

03.01.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

6 М'СН 2013

Казань -2013

005061194

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» и в ГНУ Татарский научно -исследовательский институт сельского хозяйства РАСХН

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Алимов Азат Миргасимович Научный консультант: доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Шакиров Шамиль Касимович

Официальные доктор биологических наук, профессор,

оппоненты: заведующий кафедрой кормления

сельскохозяйственных животных ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» Мухаметгалиев Нурвахит Нургалиевич

кандидат биологических наук, доцент кафедры биохимии Института фундаментальной медицины и биологии ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» Кравцова Ольга Александровна

Ведущее учреждение: Федеральное государственное бюджетное

учреждение «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ)

Защита состоится «2#» июня 2013 года в 14:00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.034.02 при ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» по адресу: 420029, г. Казань, Сибирский тракт, 35; тел./ факс (843)273-97-84

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана»

Автореферат разослан «-23» мая 2013 года и размещен на сайтах Ьйр/Луту.^vak.ed.gov.ru/ и // www.ksavm.senet.ru/

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор '¡Г Гильмутдинов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. В обеспечении продовольственной безопасности страны важное место занимает молочное скотоводство, которая не может быть решена без модернизации генофонда животных. Главной задачей является достижение высокого уровня продуктивности крупного рогатого скота во всех регионах нашей страны (Фисинин В.И. и др., 2013).

Современный уровень селекции животных немыслим без их генетической идентификации, которая широко применяется для контроля происхождения, повышения точности прогноза племенной ценности, а также в маркерной селекции.

Проблема построения совершенной генеалогической и генетической структуры стада крупного рогатого скота связано не только с использованием качественного маточного поголовья, как по продуктивности, экстерьеру, генетическим показателям, но и с использованием препотентных быков -производителей, оцененных как улучшатели значимых селекционных признаков. Скрещивание коров отечественной породы с такими быками -производителями приведет к сужению генетической изменчивости в результате нарастания общей гомозиготности среди маточной части стада, поголовья быков - производителей и ремонтных бычков (Макаров В.Ю. и др., 2007).В таких условиях селекционно- племенная работа должна опираться на научно -обоснованные программы разработанные для каждого племенного стада (Дунин И.М., Прохоренко Д., 1995).

В качестве потенциальных маркеров молочной продуктивности могут рассматриваться следующие гены: ген каппа - казеина - связан с белковомолочностью и технологическими свойствами молока, аллель В ассоциирован с более высоким содержанием/ белка в молоке; ген бета -лактоглобулина (LGB) - отвечает за белковомолочность и показатель биологической ценности молока (StraLkowska N.. 2002; Зиновьева H.A. и др., 2003), вариант LGB0 связан с высоким содержанием в молоке казеиновых белков, высоким процентом жира, а вариант LGBA характеризуется высоким содержанием сывороточных белков; ген пролакшн (PRL) — принимает активное участие в формировании признаков молочной продуктивности (Dybus А., 2002; Alipanah M., 2007); ацилСоА -диацилглицерол - ацилтрансферазой (DGAT1) - является геном связанны с содержанием жира в молоке, наиболее желательным являются генотипы (КК и КА; ген гормона тиреоглобулин (TG5) - ранее рассматривался в качестве функционального и позиционного гена - кандидата мраморности мяса (Thaller G. et.al., 2003), на основании QTL (quantitive traite loci) исследований, проведенных на молочных породах крупного рогатого скота, а также из-за влияния этого гена на жировой метаболизм считают, что ген гормона тиреоглобулин связан с молочной продуктивностью и качественным составом молока.

С учетом актуальности молекулярно - генетических исследований, а также внедрения их в научное обеспечение производства, возникла

практическая значимость разработки, широкой апробации и внедрения комплексной генетической оценки животных на основе ДНК - диагностики. Это позволит увеличить точность оценки племенной ценности животных и ускорить принятие селекционных решений.

Целью исследований явилось - молекулярно - генетическое тестирование племенного крупного рогатого скота отдельных племхозяйств и племпредприятий РТ по ДНК - маркерам хозяйственно - полезных признаков, а также изучение взаимосвязи полиморфизма с молочной продуктивностью.

Для достижения цели поставлены следующие задачи:

1) Провести анализ состояния селекционно - племенной работы в исследуемых хозяйствах РТ;

2) Изыскать ДНК - маркеры, ассоциирующие с молочной продуктивностью крупного рогатого скота и оптимизировать методы ПЦР - ПДРФ анализа (полемеразная цепная реакция и анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов);

3) Провести молекулярно — генетическое тестирование коров и первотелок, быков - производителей по локусам генов каппа-казеина, диацетилглицерин-О-ацетилтрансферазы, бета - лактоглобулина, пролактина, тиреоглобулина, определить аллельные варианты, а также их взаимосвязь с молочной продуктивности коров и родительского индекса быков (РИБ);

4) Определить коэффициент корреляции между основными признаками молочной продуктивности крупного рогатого скота;

5) Изучить встречаемость комплексных генотипов, а также их взаимосвязь с признаками молочной продуктивности коров и РИБ.

Научная новизна работы. Оптимизированы условия проведения ПЦР -ПДРФ анализа для генотипирования крупного рогатого скота по ДНК маркерам молочной продуктивности. Впервые проведен генетический мониторинг ремонтных бычков и быков - производителей различных пород, первотелок и коров татарстанского типа холмогорской породы по генам -маркерам СБИЗ, ЬБВ, РШ1, БОАП, Т05. Изучена взаимосвязь отдельных и комплексных генотипов с молочной продуктивностью, выявлены частоты встречаемости аллельного полиморфизма животных. Отобраны наиболее ценные по комплексу признаков животные с целью расширения генофонда этой популяции в Республике Татарстан, сформированы группы особо ценных животных.

Практическая значимость. Ввиду полигенного характера формирования признаков молочной продуктивности целесообразно проводить молекулярно -генетическое тестирование молочных пород скота по пяти генам СБИЗ, ЬвВ, РКЬ, ВОАТ1 и Тв5. Животные, выявленные как наиболее ценные рекомендуются использовать в дальнейших селекционно — племенных работах

для подбора родительских пар, для получения потомства с наилучшими показателями молочной продуктивности. Результаты исследований использованы при составлении каталога «Генеалогия, племенные качества, ДНК - маркеры продуктивности быков - производителей татарстанского типа, черно - пестрой и мясных пород скота» и внедрены в учебный процесс на кафедре биологической и неорганической химии, а также генетики и селекции сельскохозяйственных животных ФГБОУ ВПО КГАВМ, а также в лаборатории молекулярно - генетических исследований ГНУ ТатНИИСХ РАСХН.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

1) Всероссийской научно - практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика- 2010» (г. Москва, 2010г.);

2) Всероссийской научно - практической конференции молодых ученых посвященнБш памяти Р.Г. Гареева «Научное обеспечение агропромышленного комплекса России» (г Казань, 2010 г.);

3) Всероссийской научно - практической конференции молодых ученых посвященный памяти Р.Г. Гареева «инновационные разработки молодых ученых АПК России» (г. Казань, 2011 г.);

4) II- Международной научно - практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (г.Владикавказ, 2011 г.);

5) Всероссийской агропромышленной выставке «Золотая осень 2011», в конкурсе «За инновационные разработки в области сельскохозяйственной науки» (г. Москва, 2011 г.);

6) Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов "Молодежь. Наука. Будущее: технологии и проекты" (г. Казань, 2012 г.).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе 9 в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК.

Основные положения, выносимые на защиту;

- оптимизированные условия ПЦР - ПДРФ анализа эффективны для оценки полиморфизма генов - маркеров молочной продуктивности крупного рогатого скота;

- выявлены генетические особенности быков - производителей, ремонтных бычков различных пород, коров и первотелок татарстанского типа холмогорской породы по частоте встречаемости аллелей и генотипов генов CSN3, LGB, PRL, DGAT1 и TG5;

- более высокими показателями молочной продуктивности обладают животные с гомозиготными генотипами - CSN3BB, LGBAA, и у животных с аллелями К и В по генам DGAT1 и PRL соответственно;

- наиболее распространенными являются комплексные генотипы у коров и первотелок - CSN3aaDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBab с частотой встречаемости от 7,15 % по 17,00 %, CSNB^DGATl aaTG5ccPRLaaLGBaa с частотой от 8,80 % по 10,40 % и CSN3abDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBab с частотой от 6,60 % по 8,80 %, а среди быков - CSNS^DGATl^TGS^PRL^LGB** частота встречаемости, которого от 6,77'% по 11,76 %, CSN3aaDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBbb с частотой встречаемости от 5,72 % по 18,64%;

- выявлены ассоциации между определенными сочетаниями комплексных генотипов с показателями молочной продуктивности у коров и первотелок и родительским индексом быков.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 170 страницах компьютерного текста (текстовый редактор «Microsoft Word 2007», стиль «Times New Roman», размер шрифта 14 пт, интервал полуторный) и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список использованной литературы (всего 253 источника, в том числе 148 иностранных) и приложения. Диссертация иллюстрирована 28 таблицами и 36 рисунками.

2 Материалы и методы

Экспериментальные исследования проводились в период с 2009 по 2012 гг на кафедре биологической и неорганической химии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», и в лаборатории молекулярно - генетических исследований ГНУ Татарского научно- исследовательского института сельского - хозяйства Россельхозакадемии.

Для проведения исследований и оценки по генам, несущих хозяйственно - полезные признаки, были отобраны племенные коровы и первотелки из: СХПК им. Ленина Атнинского района РТ (п= 52), СХПК им. Вахитова Кукморского района РТ (п= 161); быки - производители и ремонтные бычки из: ГУП ГПП «Элита» Высокогорского района РТ (п=65), Мензелинского п/п РТ (п=9),- Бугульминского п/п РТ (п=20) и других племпредприятий РТ.

Анализ происхождения, продуктивности и долголетия коров был произведен с помощью программного пакета «Селекс 3.1» (АРМ Плинор, Санкт- Петербург).

Молочную продуктивность определяли путем проведения контрольных доек. Анализ качества молока производили на приборе «Лактан 1- 4» в соответствии с инструкциями производителя.

Схема исследовании

ДНК - диагностика полиморфизма генов - кандидатов хозяйственно -_____полезных признаков__

Оптимизация методик анализа полиморфизма генов - кандидатов хозяйственно ________- полезных признаков__

СЭИЗ генотипы: АА АВ ВВ

В1ЛЗ генотипы: АА АВ ВВ

генотипы: АА АВ ВВ

БвАТ генотипы: АА АК КК

ТС генотипы:

сс ТС тт

Выявление аллельных вариантов, оценка частоты встречаемости аллелей и

генотипов

Оценка молочной продуктивности и качественного состава молока

Выявление связей между генотипами исследуемых генов и признаками ____молочной продуктивности коров и РИБ _

Взаимосвязь комплексных генотипов исследуемых генов и признаками ___молочной продуктивности коров и РИБ_

|_Генетические маркеры молочной продуктивности коров_,

Примечание: группа быков - производителей и ремонтных бычков зарубежной селекции - голштины канадской и немецкой селекции

Кровь, полученную утром до кормления из яремной вены животных, вносили в пробирки с 100 мМ ЭДТА до конечной концентрации 10 мМ.

Выделение ДНК. из цельной крови крупного рогатого скота, проводили с использованием набора ДНК - Сорб - В производимый ООО «ДНК-технологии».

Фрагменты ДНК амплифицировали на программируемом термоциклере MyCycler (Bio-Rad, США). Для ПЦР использовали Taq полимеразу (5 ед./мкл) (Fermentas, Латвия) с поставляемым буфером - lOxTag буфер. Все четыре нуклеотида - 10(2,5) mM dNTPs (Fermentas) были добавлены в реакционную смесь в конечной концентрации 0.2 мМ. Праймеры, использованные в работе, были синтезированы фирмой СибЭнзим (г. Новосибирск, Россия). Праймеры использовали в концентрации 1 пМ на мкл реакционной смеси. Матричную ДНК добавляли в количестве 10 - 100 нг на одну реакцию. Опытным путем были разработаны программы проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) для каждого из исследуемых генов, с соответствующими изменениями температурных и временных параметров реакции, что обеспечило оптимальную амплификацию участков генов.

Гидролиз фрагментов ДНК ферментами Acol, Hinfl, НаеШ, Rsal, BstX12 и Taql СибЭнзим (г. Новосибирск, Россия) производили в соответствии с рекомендациями изготовителя. ПЦР смесь с амплифицированными фрагментами составляла % общего объёма реакционной смеси.

Статистическую обработку данных проводили с помощью программного обеспечения Microsoft Excel. Уровень достоверности полученных результатов определяли по критерию Стьюдента.

3 Результаты собственных исследований

■ 3.1 ПЦР - ПДРФ анализ локусов CSN3, LGB, PRL, DGAT1 и TGS крупного рогатого скота

Для проведения ПЦР использовали праймеры (ООО СибЭнзим, Россия): JK3:5 '-ATAGCCAAATATATCCCAATTCAGT-3

JK5:5 '-ПТАТГAATAAGTCCATGAATCTTG -3', (D. Denicourt et al, 1990);

LGB1: 5'-TGTGCTGGACACCGACTACAAAAAG-3',

LGB2:5'-GCTCCCGGTATATGACCACCCTCT-3', (J. Pazdera et al, 1995);

PRL1: 5'-CGAGTCCTrATGAGCTTGATTCTr-3',

PRL2:5'-GCCTTCCAGAAGTC GTTTGTnTC-3', (S. Mitra et al, 1995);

DGAT 1:5'-GCACCATCCTCTTCCTCAAG-3',

DGAT 2: 5'-GGAAGCGCTTTCGGATG-3';

TGI: 5-GGGGATGACTACGAGTATGACTG-3',

TG2: 5'-GTGAAAATCTTGTGGAGGCTGTA- 3';

При проведении ПЦР (30 - 35 циклов) на основании опытных данных установили, что оптимальными являются следующие временные и температурные режимы отжига: CSN3 - 53 секунды при 63°С, LGB - 10 секунд при 60°С, PRL - 60 секунд при 59°С, DGAT1 - 45 секунд при 55°С, TG5 - 60 секунд при 59°С. Амплификаты гена CSN3 расщепляли эндонуклеазой Hinfl, гена LGB - НаеШ, гена PRL - Rsal, гена DGAT1 -Acol, гена TG5 - BstX2I («СибЭнзим-М», Россия), которые обеспечивали появлению специфических фрагментов ПЦР - проб (амплификатов).

3.2 Анализ состояния селекционно - племенной работы в исследуемых хозяйствах РТ

Анализируя состояние селекционно - племенной работы в СХГЖ им. Вахитова установили, что в среднем молочная продуктивность в группе особо ценных животных по хозяйству составила 7466,2 кг молока, продолжительность лактации 400,4 дней, а в СХГЖ им. Ленина -соответственно 6926,1 кг молока и 378,7 дней (таблица 1).

Продолжительность сервис — периода и лактации не соответствовали нормам: сервис период был увеличен и варьировал в обоих племхозяйствах от 128 до 168 дней.

Таблица 1 - Ранжировка коров племенного ядра СХПК им. Вахитова и СХПК им. Ленина

Продуктив ность коров, кг Количество . Продолжительность лактации, дней Средняя продуктивность коров за 305 дней лактации, кг Сервис-период

голов %

....... СХПК им. Вахитова СХПК им. Ленина СХПК им. Вахитова СХПК им. Ленина СХПК им. Вахитова СХПК им. Ленина СХПК им. Вахитова СХПК им. Ленина СХПК им. Вахитова СХПК им. Ленина

9001-10000 16 - 8,8 - 415,7 - 9513,4 - 145,4 -

8001-9000 37 3 20,3 5,8 405,8 403,5 8307,6 8220,0 153,3 165,7

7001-8000 62 8 34,1 15,4 393,3 379,8 7436,2 7270,9 128,1 168,2

6001-7000 63 17 34,6 32,7 400,0 387,6 6568,0 6539,6 133,6 135,7

5500-6000 4 23 2,2 44,1 406,0 401,3 5821,8 5674,0 128,0 152,5

В среднем по стаду 182 52 100 100 400,4 378,7 7466,2 6926,1 137,1 155,5

Удлинение лактационного и сервис периодов было обусловлено многими факторами, такими как отсутствие в хозяйствах послеродовой диспансеризации животных, отсутствие оценки и отбора животных для воспроизводства молочного стада с учетом их продуктивности, что приводило к бесконтрольному воспроизводству низкопродуктивного поголовья. Все это сопровождалось соответственно снижением темпов воспроизводства.

3.3 Оценка полиморфизма локуса гена каппа — казеина у крупного

рогатого скота

При амплификации ДНК лейкоцитов крови крупного рогатого скота с парой праймеров ЛСЗ: 5'-АТАСССАААТАТАТСССААТТСАОТ-3' и Ж5:5'-ТТТАТТА АТААСТСС АТОА АТСТТв-З' были получены специфические

фрагменты гена каппа - казеин размером 350 п.н . После последующего ПДРФ анализа продуктов амплификации в изученных препаратах ДНК исследуемого поголовья крупного рогатого скота выявлено два аллеля гена каша - казеина - А и В и отмечено наличие трех генотипов - С8№АА, С8№АВ и С8ЫЗВВ (рисунок 1).

2б5п.н —>

134132п.н-—► 84 п.н —*

*—1500 п.н. ♦—850 п.н

— 500 п.н. 100 п.н.

Рисунок 1. Электрофореграмма результата ПЦР-ДДРФ гена каппа-казеин крупного рогатого скота с праймерами JK3+JK5 и эндонуклеазным расщеплением ферментом Hin/T

Обозначения: М) ДНК-маркеры 1500-100 Ьр (СнбЭнзим); 1, 2, 7 9) генотип AB (265/134-132/89 bp (Hin/I)); 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12 ) генотип АА (134-132/89 Ьр ОHin/1)) генотипВВ (265/89 Ьр (Hin//));

При изучении полиморфизма гена СБЮ частоты генотипов были одинаковыми во всех группах, исследуемых коров и первотелок. Однако среди группы первотелок СХПК им. Ленина преобладали животные - носители гетерозиготного генотипа С8№дв. Соответственно частота желательного аллеля В в данной группе оказалось (0,32) выше почти в два раза, чем в остальных трех группах (рисунок 2).

jlÜfej «64,3

i ....■•• I уя^т 76,3 1

Г- :";:7.^^■'.;■ ■ jS / f j

1 .' ' '

О 50 100

Количество животных,%

в коровы СХПК им. Ленина

а первотелки СХПК им. Ленина

И коровы СХПК им. Вахитова

в первотелки СХПК им. Вахитова

Рисунок 2. Полиморфизм гена каппа — казеина у коров и первотелок

Частота распределения генотипов гена СвЫЗ у черно — пестрой, татарстанского типа холмогорской породы быков и зарубежной селекции оказалась сходной: преобладали животные с генотипом АА с частотой 53 — 74,6%, а частота генотипа ВВ составила 23,5% у голштино - фризской породы быков.

3.4 Оценка полиморфизма локуса гена бета - лактоглобулина крупного

рогатого скота

В результате амплификации ДНК лейкоцитов крови коров и быков с парой праймеров В1ХхРЗ: 5/-СгТССТТСТОСТСтОАСАСССАСТАСА-3/ и В1ЛЗР4: 5/-САСЮАСАССООСТСССООТАТАТСА-3/ были получены специфические фрагменты гена бета - лактоглобулина размером 262 п.н. После последующего ПДРФ анализа продуктов амплификации ДНК исследуемого поголовья крупного рогатого скота, выявлено два аллеля гена бета - лактоглобулина - А и В и отмечено наличие трех генотипов - ЬОВАД, ЬСВдв и ЬОВвв.

Исследования полиморфизма гена ЬСВ у коров и первотелок 2х племхозяйств показали, что преимущество гомозиготного генотипа ЬОВАА мало выражено, его частота среди исследованных животных варьировала от 14,3% до 25,5%. Необходимо отметить, что в данном поголовье животных преобладал гетерозиготный генотип ЬвВ^ с частотой от 35% до 57%.

Основным генотипом среди изучаемых популяций быков является гетерозиготный ГХтВдв и гомозиготный ЬОВвв генотипы. Частота желательного аллеля В преобладает во всех изучаемых нами породах, а у голштино- фризской породы частоты аллеля А (0,53) и В (0,47) находилось в соотношении 1:1 (рисунокЗ).

в зарубежная селекция

. татарстанский тип холмогорской породы

и черно - пестраи порода

в голштино- фризская порода

Рисунок 3. Полиморфизм гена бета - лактоглобулина у быков -производителей и ремонтных бычков,

3.5 Оценка полиморфизма локуса гена пролактина крупного рогатого

скота

По результатам амплификации ДНК лейкоцитов крови коров и быков с парой праймеров РМЛ: 5'-СОАОТССТТАТОАС}СТТОАТГСТТ-3', и РКЬ2: 5'-ОССТТССАОААОТСОТГГОТПТС-З', были получены специфические фрагменты гена пролактина размером 156 п.н. После последующего ПДРФ анализа продуктов амплификации в изученных препаратах ДНК исследуемого

0 20 40 60

Количество животных^

поголовья крупного рогатого скота выявлено два аллеля гена бета — лактоглобулин - А и В и три генотипа - Р11ЬАА, Р11ЬАЕ и РКЬ .

Частота нежелательного генотипа Р11ЬАА, в изучаемой популяции коров и первотелок варьировала от 35,7% до 89,5%. При этом доля животных, носителей желательного аллеля В, была максимальна в группе первотелок СХПК им. Ленина (0,36) и минимальна (0,07) у первотелок СХПК им. Вахитова (рисунок 4).

Рисунок 4. Полиморфизм гена пролактин у коров и первотелок.

Среди быков преобладали особи - носители генотипа АА по гену пролактин, с частотой от 69,1% до 83,1%. Однако желательный генотип PRLBB среди исследуемых животных отсутствовал, и лишь у одного быка татарстанского типа холмогорской породы регистрировался данный генотип.

3.6 Оценка полиморфизма локуса гена диацилглицерол - О -ацилтрансферазы крупного рогатого скота

При амплификации ДНК лейкоцитов крови крупного рогатого скота с парой DGAT1:5'-GCACCATCCTCTTCCTCAAG-3' и DGAT2:5'-GAAGCGCTTTCGGATG-31, были получены специфические фрагменты гена диацилглицерол - О — ацилтрансферазы размером 411 п.н. После последующего ПДРФ анализа продуктов амплификации в изученных препаратах ДНК исследуемого поголовья крупного рогатого скота, выявлено два аллеля гена каппа — казеина-А и В и отмечено наличие трех генотипов - DGATaa, DGATak и DGAT .

Анализ полиморфизма гена DGAT1 показал, что желательный генотип DGAT1KK отсутствовал среди животных СХПК им. Вахитова. В то же время его частота среди коров и первотелок СХПК им. Ленина варьировала от 5,4% до 14,3%.

Результаты исследования полиморфизма гена DGAT1 у быков показали, что встречаемость генотипа DGAT1aa была наибольшей и варьировала от 11,8% до 76,5%. Однако у популяции черно - пестрой породы быков высокое

распространение имел гетерозиготный генотип DGAT1ak - 87,7% (рисунок 5).

S 7

рз

ИЗ зарубежная селекция

1 .И.фСЮиСКИЙ I ИП

холмогорской ПОРОДЫ ёз черно ■ иеороч порода

в fomumno ■ фризская порода

О 50 100

Количество жиоотных,%

Рисунок 5. Полиморфизм гена БОАН у быков - производителей и ремонтных бычков

3.7 Оценка полиморфизма локуса гена тиреоглобулина крупного

рогатого скота

В результате амплификации ДНК лейкоцитов крови коров и быков с парой праймеров TGI iS'GGGGATGACTACGAGTATGACTG-S' и TG2:5'-GTGAAAATCTTGTGGAGGCTGTA-3' получены специфические фрагменты гена тиреоглобулина размером 548 п.н. После последующего ПДРФ анализа продуктов амплификации в изученных препаратах ДНК исследуемого поголовья крупного рогатого скота, выявлено два аллеля гена тиреоглобулина — С и Т распределенные по трем генотипам - TG5CC, TG5TC и TG5TT.

Установлено преобладание особей с нежелательным генотипом TG5CC, с частотой от 64% до 86%. Животных - носителей желательного гомозиготного генотипа TG17 оказалось очень минимальным от 2,8% до 7,1% (рисунок 6).

Рисунок 6. Полиморфизм гена тиреоглобулина у коров и первотелок.

Аналогичные результаты получены в исследуемых популяциях быков, где количество особей носителей гомозиготного генотипа ТС5 , варьировало от 54,8% до 72,9% ,а среди быков, носителей аллеля Т частота составила от 0,14 до 0,26. Голштино - фризская порода быков характеризовались отсутствием желательного генотипа ТТ.

3.8 Изучение ассоциации полиморфизма генов молочных белков с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного

рогатого скота

По результатам сравнительного анализа, коровы и первотелки СХПК им. Вахитова с гомозиготным генотипом СБЫЗ38 имели наивысшие показатели молочной продуктивности. Коровы СХПК им. Ленина, с гетерозиготным генотипом С81ЧЗАВ' имели максимальный уровень удоя, уступая при этом по жирномолочности и белковомолочности особям, с генотипом СБ№ВВ Среди первотелок, преимущество по удою и выходу белка было у особей гомозиготных по аллелю А. Однако они уступали по жирномолочности животным с гетерозиготным генотипом АВ (таблица 2).

Таблица 2 - Ассоциация генотипов гена С8№ с молочной

продуктивностью коров и первотелок.

Генотип Кол-во Молочная продуктивность

гол. удой, кг жир, % белок,% выход жира, кг выход белка, кг

СХПК им. Вахитова (коровы)

АА 80 6094±101,4 3,77±0,022 3,15±0,010 230,3±4,25 191,7±3,09 '

АВ 22 6103±195,8 3,78±0,040 3,17±0,016 230,5±7,35 193,4*6,1«

ВВ 4 6281±587,2 3,82±0,117 3,23±0,056 241,5±30,00 203,2±20,50

СХПК им. Вахитова (первотелки)

АА 37 4813±87,5 3,66±0,045 3,02±0,012 175,8±3,30 145,3±2,5

АВ 19 4976±170,1 3,65±0,060 3,07±0,034 181,3±6,63 152,9±5,90

ВВ 1 5192 3,83 3,06 198,9 158,9

СХПК им. Ленина (коровы)

АА 29 6402± 124,9 3,97±0,110 3,00±0,025 254,2±8,48 192,6±4,45

АВ 7 6530± 145,5 3,93±0,113 3,01 ±0,029 257,3±9,68 196,9±5,18

ВВ 2 6277±319,7 3,98±0,155 3,03±0,026 251,1±17,71 190,2±9,58

СХПК им. Ленина (первотелки)

АА 5 6471±159,1 3,99±0,124 3,03±0,29 258,7±10,49 196,6±5,68

АВ 9 6413± 136,6 4,04±0,П7 3,01±0,027 258,0±9,05 193,5±4,88

При изучение ассоциации полиморфизма гена р - лактоглобулина с молочной продуктивностью коров и первотелок двух племхозяйств РТ, установили, что основное преимущество по всем молочным показателям характерно для животных с гомозиготным генотипом ЬОВАА за исключением содержания белка в молоке.

При исследовании ассоциации между полиморфизмом гена бета -лактоглобулина с РИБ выявили, что матери быков голштино - фризской породы с генотипом ЬСВАА на фоне относительно низкого содержания белка и жира в молоке обладали наибольшими показателями удоя, выхода жира > и белка. Быки черно - пестрой породы, с генотипом ЬвВАВ имели наивысшие показатели РИБ. Матери быков татарстанского типа холмогорской породы, несущие генотип ЬС5Ввв, оказались наиболее жирномолочными ' и белковомолчнымп, уступая по уровню удоя матерям быков, генотипа ЬОВАД (таблица 3).

Таблица 3 - Ассоциация генотипов гена ЬвВ с родительским индексом быков

Генотип Кол-во РИБ

гол удой, кг жир, % белок, % выход жира, кг выход белка, кг

Голштино - фризкая порода

АА 5 14028±200,0 3,94±0,284 3,22±0,164 563,9±116,85 443,3±41,90

АВ 8 12081±413,3 4,01±0,154 3,16±0,040 485,8±28,87 382,1±14,12

ВВ 4 12466±2328,5 3,84±0,185 3,35±0,075 468,4±71,62 416,6±78,29

Черно - пестрая порода

АА 11 9371±672,6 3,69±0,045 3,12±0,032 344,4±23,19 292,2±21,32

АВ 19 9565±485,9 3,73±0,027 3,12±0,027 356,3±16,57 298,5±16,28

ВВ 29 8534±422,6 3,72±0,045 3,10±0,023 315,0±14,26 263,8±12,95

Татарстанский тип холмогорской породы

АА 4 7763±798,7 3,79±0,057 3,20±0,047 293,7±28,56 248,7±26,78

АВ 18 7050±229,8 3,86±0,029 3,12±0,043 272,0±8,72 219,5±7,41

ВВ 20 7663±221,7 3,87±0,029 3,23±0,029 296,0±8,24 247,4±7,02

Зарубежная селекция (голштины канадской и немецкой селекции)

АА 4 6733±200,0 3,82±0,018 3,09±0,026 257,2±7,48 207,8±5,96

АВ 16 6657±178,9 3,82±0,01б 3,11±0,023 254,4±б,68 206,5±5,27

ВВ 15 6731±193,8 3,82±0,017 3,10±0,023 256,9±7,14 208,2±5,65

3.9 Изучение ассоциации полиморфизма гена молочного гормона пролактина с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота

Исследование ассоциации полиморфизма гена пролактина с показателями молочной продуктивности выявило, что высокую молочную продуктивность имели коровы СХПК им. Вахитова гетерозиготного генотипа РЫ/10, уступая по удою сверстницам с генотипом РЛЬ А. Первотелки в том же хозяйстве с генотипом РКЬАА отличались более высоким удоем и содержанием белка в молоке. Коровы СХПК им. Ленина с генотипом РЯЬВВ, оказались обильномолочными, при относительно низком содержании жира и белка в молоке (таблица 4).

Высокие показатели РИБ наблюдались у быков черно - пестрой породы с гомозиготным генотипом РКЬАА. Матери быков татарстанского типа

холмогорской породы с генотипом Р11ЬВВ на фоне относительно низкого уровня удоя были наиболее белковомолочными и жирномолочными. Среди быков голштино — фризской породы особи с генотипом РЯЬАВ имели лучшие показатели РИБ, за исключением содержания белка в молоке.

Таблица 4 - Ассоциация генотипов гена РКХ. с молочной продуктивностью коров и первотелок__

Генотип Кол-во Молочная продуктивность

гол удой, кг жир, % белок, % выход жира, кг выход белка, кг

СХПК им. Вахитова (коровы)

АА 79 6141±102,4 3,76±0,019 3,15±0,009 231,3±4,08 193,4±3,14

АВ 21 6080±214,5 3,83±0,060 3,17±0,027 233,7±10,01 192,6±6,85

ВВ 6 5688±200,2 3,7б±0,049 3,16±0,018 214,1±8,85 179,4±6,28

СХПК им. Вахитова (первотелки

АА 51 4882±88,7 3,64±0,037 3,04±0,015 177,2±3,35 148,5±2,33

АВ 5 480б±52,7 3,81±0,095 3,02±0,030 183,2±6,02 144,9±1,б5

ВВ 1 4792 4,1 . . 2,99 196,5 144,3

СХПК им. Ленина (коровы)

АА 24 6402± 124,9 3,97±0,110 3,00±0,026 254,2±8,48 192,6±4,45

АВ 12 6408±140,6 3,99±0,114 3,02±0,028 256,4±9,41 193.6±5,09

ВВ ~> 6693±238,2 3,88±0,115 2,91±0,032 261,6±13,97 194,9±7,59

СХПК им. Ленина (первотелки)

АА 6460± 151,2 4,01 ±0,122 3,02±0,030 259,2±10,15 195,4±5,46

АВ 6413± 139,7 4,02±0,118 3,02±0,020. 257,4±9,15 194,1 ±4,96

ВВ 5534 . 3,1 2,9 171,6 160,5

ЗЛО Изучение ассоциации полиморфизма гена молочного гормона днацилглицсрол - О - ацилтрансферазы с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота

При анализе ассоциации полиморфизма гена БОАТ1 с показателями молочной продуктивности установили, высокое содержание жира и белка в молоке коров СХПК им.'Вахитова с генотипом ВОАТ1ак при относительно низком уровне удоя и выхода жира и белка. Коровы и первотелки СХПК им. Ленина, несущие желательный генотип ОСАТ1к , отличались жирномолочностью.

Матери быков голштино - фризской породы генотипа ООАТ1 обладали более высоким уровнем удоя и содержанием жира в молоке. Наилучшие показатели родительского индекса среди быков черно - пестрой породы и татарстанского типа холмогорской породы, наблюдались у животных с генотипами ООАТ1 и ОСАТ1 соответственно. Матери быков зарубежной селекции, несущих генотипы АА и АК, имели высокие показатели молочной продуктивности (таблица 5).

Таблица 5 - Взаимосвязь полиморфизма гена ООАТ1 с родительским индексом быков

Генотип Кол-во РИБ

гол удой, кг жир, % белок, % выход жира, кг выход белка, кг

Голштино — фризская порода

АА 13 -12977±944,9 3,98±0,И0 3,18±0,053 518,8±4б,52 410,5±26,74

АК 3 11737±480,68 3,90±0,510 3,37±0,204 454,8±45,74 394,3±17,24

КК 1 12736 3,7 3,3 471,2 420,3

Черно - пестрая порода

АА 7 8169±874,0 3,69±0,071 3,И±0,0143 299,2±29,26 255,2±28,71

" АК 50 9128±316.4 3,72±0,028 3,11±0,017 338,1±10,83 283,4±10,05

КК 2 93 59± 14,91 3,70±0,0141 3,13±0,106 345,3±38,41 291,7±33,69

Татарстанский тип холмогорской породы

АА 25 7274±204,0 3,8б±0,024 3,16±0,036 280,8±7,85 230,0±7,11

АК 16 7647±278,1 3,83±0,033 3,21 ±0,032 292,9± 10,03 245,0±8,65

КК 1 7063 4,01 3,2 283,2 226,0

Зарубежная селекция (голштины канадской и немецкой селекции)

АА 13 6687±185,6 3,85±0,018 3,09±0,031 257,1±7,03 206,3±5,00

АК 20 6731±193,8 3,82±0,017 3,10±0,023 25б,9±7,14 208,2±5,65

КК . 2 6088±378,4 3,77±0,025 3,06±0,032 229,7± 14,33 185,7±10,49

3.11 Изучение ассоциации полиморфизма гена молочного гормона тиреоглобулина с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота

Изучение ассоциации полиморфизма гена тиреоглобулина с показателями молочной продуктивности и РИБ не выявил достоверной разницы в показателях молочной продуктивности. Необходимо отметать то, что первотелки СХПК им. Ленина несущие гомозиготный генотип Т05п, обладали высоким содержанием жира в молоке, а матери быков черно - пестрой породы, с генотипом Твб^ были обилъномолочными и имели наибольший выход жира и белка при относительно низком содержании жира и белка в молоке. Быки зарубежной селекции, несущие г енотипы ТСБ17, обладали наилучшими показателями РИБ.

3.12 Изучение частоты встречаемости комплексных генотипов СвШ, ВСАТ1, ТС5, РКЦ ЬСВ крупного рогатого скота

Как известно, удой, содержание жира и белка в молоке обусловлены комплексным сочетанием генотипов. В связи с этим, мы изучили частоты встречаемости комплексных сочетаний генотипов генов - СЯЮ, ВОА'П, ТС5, РЫ1, ЬвВ.

Исследованиями 106 коров холмогорской породы СХПК им. Вахитова, выявлено 35 комплексных генотипов, пять из них имели частоту встречаемости более 6%: С8тллООАТ1ллта5ссРВ.1ААШВ*А (10,4%), С8ЮАЛООАТ1АЛТС5ссР1аЛ/4ШВ*в

(17,0%), CSN3AADGA T1AA TG?fcPRLABLGBAB (7,5%), CSN3AADGAT1AATG5CTPRLaaLGBab (8,5%), CSN3ABDGAT1AATG5CCPRLaaLGBab (6,6%).

Среди 57 первотелок холмогорской породы татарстанского типа СХПК им. Вахитова выявлено 21 комплексных генотипов, из них 8 имели частоту встречаемости более 5%. Это генотипы CSN3AADGAТ1алTG5ccPRLaaLGBaa (8,8%), CSN3AADGA T1aaTG5CCPRLaaLGBab (8,8%), CSN3AADGAT1aaTG5CCPRLaaLGBsb (14,0%), CSN3AADGA TkaTG3ccPRIaaLGBab (7,02%), CSN3AADGAT1KATG5CCPRLaaLGBbb (7,02%), CSN3ABDGA T1aaTG5ccPRLaaLGB1a (7,02%), CSN3ABDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBab (8,8%) и CSN3ABDGA T1kaTG5ccPRLaaLGBaa (5,3%).

В результате анализа 38 голов коров холмогорской породы татарстанского типа СХПК им. Ленина установили 21 комплексных генотипов, из них пять имели частоту встречаемости более 7%. Это генотипы CSN3aaDGATJaaTG5ccPRLaaLGBab (7,9%). CSN3AADGATlKATG5ccPRL4ALGBAA (7,9%), CSN3aaDGAT1kaTG5ccPRLaaLGBab (10,5%), CSN3aaDGA T1kaTG5ccPRLaaLGBbb (10,5%), CSN3aaDGAT1kaTG5CCPRLabLGBab (15,9%).

Распределение частоты встречаемости комплексных генотипов у 14 первотелок СХПК им. Ленина, одинакова и равна 7,14%.

Следующим этапом наших исследований явилось изучение частот встречаемости комплексных генотипов генов CSN3, DGAT1, TG5, PRL, LGB среди быков - производителей и ремонтных бычков голштино - фризской, черно - пестрой, татарстанского типа холмогорской породы и быков зарубежной селекции.

Так, среди 17 быков голштино - фризской породы было выявлено сочетание 14 комплексных генотипов с частотой встречаемости более 11,00%: CSN3aaDGAT1kaTG5ccPRLaaLGB-'a (11,76%) и CSN3aaDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBbb (17,65%).

При исследовании 59 быков черно - пестрой породы выявлено сочетание 26 комплексных генотипов, из них пять имели частоту встречаемости более 6%: CSN3aaDGAT1kaTG5ccPRLaaLGBaa (6,77%), CSN3aaDGAТ1каTG5ccPRLAALGBia (8,47%), CSN3aaDGAT1kaTG5ccPRLaaLGBbb (18,64%), CSN3aaDGAT1kaTG5tcPRLaaLGBab (8,47%) и CSN3abDGAT1IL4TG5ccPRLaaLGBbb (10,17%).

Среди 42 быков татарстанского типа холмогорской породы было установлено сочетание 26 комплексных генотипов, из них пять с частотой встречаемости более 7%. К этим генотипам относятся: CSN3aaDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBab (7,14%), CSN3aaDGATJaaTG5ctPRLaaLGBas (7,14%), CSN3aaDGAT1aaTG5ctPRLaaLGBbb (7,14%), CSN3aaDGAT1kaTG5ccPRLaaLGBab (7,14%) и CSN3aaDGA TiKATG5ccPRLabLGBbb (7,14%).

Анализ 35 голов быков зарубежной селекции показал наличие 25 комплексных генотипов и девять из них с частотой более 5%: CSN3aaDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBab (5,72%), CSN3aaDGAT1aaTG5ctPRLaaLGBab (5,72%), CSN3aaDGA Т1аа TG 5 nPRLAAL GBbb (5,72%), CSN3aaDGAT1kaTG5ccPRLaaLGBab (5,72%), CSN3aaDGAT]kaTG5ccPRLaaLGBbb (5,72%), CSN3aaDGATIkaTG5ccPRLabLGBab (5,72%), CSN3A/IDGAT1kaTG5ctPRLabLGBaa (5,72%) и CSN3bbDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBab (5,72%).

3.13 Изучение влияния комплексных генотипов генов CSN3, DGAT1, TG5, PRL, LGB на показатели молочной продуктивности коров и первотелок

Проведенный анализ ассоциации комплексных генотипов с молочной продуктивностью показал, что из большого количества животных лишь несколько обладали высокими показателями. По уровню удоя (9800 кг), выходу жира (421 кг) и белка (294 кг) высокие показатели наблюдались у коров СХПК им. Ленина с сочетанием генотипов CSN3bbDGAT1aaTG5ccPRLabLGBaa, а наибольшим содержанием жира 5,8% и 5,5% в молоке отличались коровы и первотелки СХПК им. Ленина соответственно.

Таблица 6 - Молочная продуктивность коров и первотелок в зависимости от комплексных генотипов генов С5№, РвАТ!, ТР5, РКЬ, ЬОВ

Генотип- Кол- во гол Молочная продуктивность "

удой, кг жир, % белок, % выход жира, кг выход белка, кг

СХПК им. Вахитова (коровы) ¡1

ААААТТААВВ 1 8119 3,75 3,19 304,5 259,0

ААКАСТАААА 2 7448 3,84 3,08 286,0 229,4

ААКАСТААВВ 2 6719±712,7 3,72±0,113 3,08±0,056 249,5±18,91 206,7±18,)5г.

ВВААССАВВВ 2 6553±144,2 3,79±0,032 3,15±0,014 247,9±5,62 206,5±4,56

СХПК им. Вахитова (первотелки)

ААКАССАААВ 4 4952±95,4 3,67±0,064 3,00±0,012 181,6±4,77 148,7±2,92

АВААССАААА 4 4981±134,3 3,63±0,055 3,02±0,017 180,2±4,95 150,8±4,54

ААААСТАААВ 1 5304 3,09 2,94 163,9 155,9

ВВКАССАААА 1 5192 3,83 3,06 198,8 158,8

СХПК им. Ленина (коровы)

АААКСТАААВ 1 7030 5,80 2,80 407,7 196,8

АВАКССААВВ 1 7685 3,60 3,20 276,6 245,9 '

ВВААССАВАА 1 9800 4,10 3,00 421,4 294,0 .

СХПК им. Ленина (первотелки)

АААКССАВАА 1 5992 5,50 3,10 329,6 185,7

ААААССАААВ 1 7373 3,00 2,90 221,2 213,8

3.14 Изучение влияния комплексных генотипов генов СвШ, ОСАТ1,ТС5, РКЦ 1Х5В на показатели родительского индекса быков - производителей и

ремонтных бычков

Проведенный анализ ассоциации комплексных генотипов с показателями родительского индекса быков - производителей и ремонтных бычков выявил заметную разницу по уровню удоя. В среднем максимальный удой (14606 кг) выявлен среди матерей быков голштино - фризской породы, а среднее минимальное значение (6827 кг) этого показателя отмечено среди матерей быков зарубежной селекции. Матери быков голштино - фризской породы характеризовались высоким содержанием жира в молоке (в среднем 4,08%), а также выходом жира (в среднем 605,9 кг) и белка (в среднем 455,4 кг).

4 Выводы

1 .Изучены ДНК - маркеры молочной продуктивности и оптимизированы условия проведения амплификации и анализа полиморфизма генов каппа -казеина, бета - лактоглобулина, пролактина, диацилглицерол - О - ацил трансферазы и тиреоглобулина, которые позволили провести молекулярно -генетическое тестирование разных пород крупного рогатого скота в ассоциации с показателями молочной продуктивности.

2. При амплификации ДНК лейкоцитов крови крупного рогатого скота с парой праймеров (для каппа - казеина - ЖЗ и Ж.5, для бета — лактоглобулина -1ЛЗВ1 и ЬОВ2, для пролактина - РМЛ и РЯЬ2, для диацилглицерол-О-ацилтрансферазы - ООАТ1 и БСАТ2, для тиреоглобулина - Тв51 и ТС52), обнаружены специфические фрагменты (амплификаты) размером соответственного п.н., 265 п.н., 156 п.н., 411 п.н., и 548 п.н. В результате ПДРФ анализа амплификатов получены фрагменты соответствующие наличию трех генотипов по генам: каппа — казеина - СБЮ^- 132,134/84 п.н., СБЫЗ -265/84 п.н., С8№ав - 265/132,134/84 п.н.; бета - лактоглобулина - 1ЛЗВАА -153/109 п.н., ЬвВ00 - 109/79/74 п.н., 1Х5ВАВ - 153/109/79/74 п.н.; пролактина -РКЬАА- 156п.н„ РЯЬВВ- 82/74 п.н., РЯЬАВ - 156/82/74 п.н.; диацилглицерол -О - ацилтрансферазы - ООАТ1АА - 203,208п.н„ ООАТ1кк - 411 п.н., БОАТ1 ^ - 411/ 203, 208 п.н.; тиреоглобулина - ТС5сс - 295/178/75 п.н., ТС5тт - 473/75 п.н., ТС5ст- 473/295/178/75 п.н.

3. Установлено, что наибольшую частоту встречаемости у коров и первотелок по генам каппа - казеина, пролактина, диацилглицерол - О - ацил трансферазы и тиреоглобулина имели животные с нежелательным гомозиготным генотипом. Распределение частот генотипов составило соответственно: С8ЮАА 35,7 - 76,3%; РКЬАА - 63,2 - 89,5%; БвАТ! ^ - 24,3 -85,8%; ТС5СС - 64,3 - 86,0%. Среди быков более распространенными были генотипы: по гену С8ЮАА 53,0 - 74,6%, по гену РЯЬАА 69,1 - 83,1%, по гену ТС5СС 54,8 - 72,9%. По гену бета - лактоглобулина преобладали коровы и первотелки гетерозиготного генотипа ЬОВАВ с частотой встречаемости 35,1 — 57,1%; среди быков гетерозиготный генотип ЬвВАВ и гомозиготный генотип ИХ}Ввв. Среди тестированного поголовья крупного рогатого скота животные с желательными генотипами - С8ЫЗВВ, Р11ЬВВ, БСАТ1КК и ТС5тг не превышало: среди коров и первотелок - 5,3%, 7,2%, 14,3%, и 7,1% соответственно; среди быков - 23,5%, 2,3%, 5,9% и 9,5% соответственно, что обусловлено смещением генетического равновесия в исследуемых племенных стадах крупного рогатого скота в сторону нежелательных аллелей А и С.

5. На основании анализа взаимосвязи полиморфизма по генам каппа — казеина и бета - лактоглобулина с молочной продуктивностью установлено, что более высокие показатели молочной продуктивности характерно для животных, с гомозиготными генотипами: СБИЗ38, ЬОВАА. По гену ООАТ1 и РИЬ преимущественно высокие показатели проявляли животные несущие аллель К и В соответственно. Относительно гена тиреоглобулина не выявлено

существенных различий между генотипами во взаимосвязи их с показателями молочной продуктивности.

6. Анализ корреляции между основными признаками молочной продуктивности крупного рогатого скота показал, что односторонний отбор по уровню удоя или по содержанию жира и белка приводит к увеличению отрицательной связи между этими признаками. Наличие отрицательной связи между уровнем удоя и содержанием жира, белка в молоке затрудняет проведение успешного отбора, направленного на повышение этих признаков.

7. Исследования комплексных генотипов генов CSN3, DGAT1, TG5, PRL и LGB у коров и первотелок показали, что наиболее распространенными являются три сочетания генотипов: CSN3aaDGAT1aaTG5ccPRLaaLGBab с частотой встречаемости от 7,15% по 17,00%, CSN3aaDGAT1aaTG5ccPRLaaLGB*a с частотой от 8,80% по 10,40% и CSN3abDGAТ1ллTG5ccPRLaaLGBab с частотой от 6,60% по 8,80%, а среди быков - CSN3aaDGAT1kaTG5ccPRLaaLGBaa частота встречаемости, которого от 6,77% по 11,76%, CSN3aaDGATIaaTG5ccPRLaaLGBbb с частотой встречаемости от 5,72% по 18,64%.

8. Проведенный анализ влияния комплексных генотипов на молочную продуктивность показал, что из большого количества животных лишь несколько обладали наиболее высокими показателями. По уровню удоя (9800 кг), выходу жира (421 кг) и белка (294 кг) высокие показатели наблюдались у коров с сочетанием генотипов CSN3bbDGAT1aaTG5ccPRL'ibLGBaa, а наибольшим содержанием жира 5,8% и 5,5% в молоке отличались коровы и первотелки с сочетанием генотипов CSN3aaDGAT1akTG5ctLGBaaPRLab и CSN3aaDGAT1akTG5ccLGBabPRLaa соответственно. По родительскому индексу быков отмечена заметная разница по уровню удоя: в среднем максимальный удой (14606 кг) выявлен среди матерей быков голштино - фризской породы. Они характеризовались высоким содержанием жира в молоке (в среднем 4,08%), а также выходом жира (в среднем 605,9 кг) и белка (в среднем 455,4 кг).

5 Предложение производству

Ввиду полигенного характера формирования признаков молочной продуктивности целесообразно проводить молекулярно - генетическое тестирование молочных пород скота по пяти генам CSN3, LGB, PRL, DGAT1 и TG5. Животные, выявленные как наиболее ценные могут быть использованы в дальнейших селекционно — племенных работах при подборе родительских пар, для получения потомства с наилучшими показателями молочной продуктивности. Полученные данные использованы при написании каталога «Генеалогия, племенные качества, ДНК - маркеры продуктивности быков -производителей татарстанского типа, черно - пестрой и мясных пород скота».

Список опубликованных работ по материалам диссертации

1. Племенные ресурсы быков производителей ГУП ГПП «Элита» Республики. Татарстан / LLI.K. Шакиров, С.П. Гынку, Ш.З. Валидов, Ф.Ф. Зиннатова // Всероссийский научно - производственный и публицистический журнал «Нива Татарстана». Казань, 2009. №3- 4. С.45 - 47.

2. Генетический мониторинг быков - производителей ГУП ГПП «Элита» Республики Татарстан / Ш.К. Шакиров, С.П. Гынку, Ш.З. Валидов, Ф.Ф. Зиннатова // Ежемесячный теоретический и научно - практический журнал «Достижение науки и техники АПК». М.: 2009. № 11. С. 45- 48.

3. Зиннатова Ф.Ф., Алимов A.M. Генетическая диагностика быков -производителей и анализ их родительского индекса // Сборник трудов II -всероссийской научно - практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010». М.: 2010. Т.2. С. 103 - 106.

4. Зиннатова Ф.Ф. Генотипирование первотелок по локусу гена каппа -казеин // Всероссийский научно - производственный журнал «Нива Татарстана». Казань. 2010. № 3-4. С. 53 - 55.

5. Зиннатова Ф.Ф., Касимова А.Ш., Шакиров Ш.К. Генотипирование первотёлок по локусу гена каппа - казеина, их молочная продуктивность и качественный состав молока // Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Инновационные разработки молодых ученых АПК России» посвященная памяти Р.Г. Гареева. Казань: Фолианть. 2010. С.377 - 382.

6. Зиннатова Ф.Ф., Шакиров Ш.К., Алимов A.M. Генотипирование первотелок по локусу гена жирномолочности (DGAT1) и их молочная продуктивность // Ученые записки КГАВМ. Казань. 2010. Т. 200. С. 45 - 50.

7. Зиннатова Ф.Ф., Алимов A.M., Зиннатов Ф.Ф. Аллельный полиморфизм гена каппа - казеин (CSN3) у коров холмогорской породы татарстанского типа // Ученые записки КГАВМ. Казань. 2010. Т. 204. С. 9398.

8. Зиннатова Ф.Ф., Шакиров Ш.К. Генотипирование молочного скота // Всероссийский научно - производственный журнал «Нива Татарстана». Казань. 2010. № 5 - 6. С. 47 - 49.

9. Зиннатова Ф.Ф., Алимов A.M., Зиннатов Ф.Ф. Генетический мониторинг и анализ родительского индекса быков - производителей в различных племрепродукторах Республики Татарстан // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. Санкт- Петербург. 2010. №4. С.223 -225.

10. Зиннатова Ф.Ф., Закирова Г.М., Султанов P.P. Полиморфизм гена пролактин у коров татарстанского типа холмогорского // Ученые записки КГАВМ. Казань. 2011. Т. 205. С. 61-64.

11. Зиннатова Ф.Ф. Анализ полиморфизма генов CSN3 и PRL у первотелок холмогорской породы татарстанского типа, а также их молочная продуктивность и качественный состав молока в зависимости от сочетания генов // Ученые записки КГАВМ. Казань. 2011. Т. 206. С. 76 - 81.

12. Зиннатова, Ф.Ф. Анализ родительского индекса ремонтных бычков и ген оптирование их по генам каппа - казеин (CSN3), жирномолочности (DGAT1) и BLAD / Ф.Ф. Зиннатова, A.M. Алимов, Ф.Ф. Зиннатов // Ученые записки КГАВМ. Казань, 2011. Т. 206. С. 81 - 85.

13. Зиннатова Ф.Ф. Взаимосвязь генотипов, комплексных генотипов по генам CSN3, DGAT1, PRL с родительским индексом ремонтных бычков татарстанского типа холмогорской породы И II - международная научно -практическая конференция «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» сборник работ молодых ученых. Владикавказ. 2011. Часть II. С. 386 -390.

14. Зиннатова Ф.Ф., Юльметьева Ю.Р., Шакиров Ш.К. Полиморфизм генов CSN3, LGB, BLAD у быков - производителей и ремонтных бычков племпредприятий Республики Татарстан // Материалы всероссийской научно -практической конференции молодых ученых посвященная памяти Р.Г. Гареева. Казань: Фолианть. 2011. С. 377 - 382.

15. Генеалогия, племенные качества, ДНК - маркеры продуктивности быков - производителей татарстанского типа, черно пестрой и мясных пород скота / Ф.Ф. Зиннатова [и др.]. Казань.: Центр инновационных технологий. 2011.208 с.

16. Зиннатова Ф.Ф., Зиннатов Ф.Ф. Генетический анализ родительского индекса ремонтных - бычков и генотипирование их по генам каппа - казеина (CSN3), жирномолочности (DGAT) И BLAD // Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов "Молодежь. Наука, Будущее: технологии и проекты". Казань. 2012. Т.1. С. 373 -376.

17. Молекулярно — генетическое тестирование быков-производителей по комплексу сочетаний генотипов, коррелирование их генотипов с молочной продуктивностью и качественным составом молока / Ф.Ф. Зиннатова, Ш.К. Шакиров, AM. Алимов, Ф.Ф. Зиннатов // Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов "Молодежь. Наука. Будущее: технологии и проекты". Казань. 2012. Т.1. С. 376 - 380.

18. Зиннатова Ф.Ф., Алимов A.M., Шакиров Ш.К. Взаимосвязь полиморфизма гена бета — лактоглобулин с молочной продуктивностью у коров и коров первотелок // Ученые записки КГАВМ. Казань. 2012. Т.211. С. 206 — 209.

19. Зиннатова Ф.Ф., Шакиров Ш.К., Юльметьева Ю.Р. Влияние породы и генотипа по генам CSN3, DGAT1, PRL, LGB на молочную продуктивность крупного рогатого скота // Вестник РАСХН. М.: 2012. № б. С. 65 - 67.

Формат издания 60&84 И\6, У 1-,0 п.л, тир. 100 экз, заказ А 3:8 Отяечатако в типографии И.П.Чермянииой А.П.

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Зиннатова, Фарида Фатиховна, Казань

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ

УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ КАЗАНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ ИМЕНИ Н..Э. БАУМАНА

04201359803

ТЕСТИРОВАНИЕ ПЛЕМЕННОГО КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПО ДНК - МАРКЕРАМ МОЛОЧНОЙ ПРОДУКТИВНОСТИ

Специальность: 06.02.07 - Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных

На правах рукописи

I

ЗИННАТОВА ФАРИДА ФАТИХОВНА

03.01.04 - Биохимия

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Алимов A.M. Научный консультант: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Шакиров Ш.К.

Казань - 2013

Содержание

Введение......................................!..................................................................................................5

1. Обзор литературы................................................................................................................................................11

1.1 Методы молекулярных маркеров в селекции хозяйственно-полезных признаков у крупного рогатого скота......................................................................................................11

1.2 Микросателлиты................................................................................................................................................14

1.3 Полиморфизм генов молочных белков крупного рогатого скота..........................16

1.4 Полиморфизм гена молочного гормона -пролактина................................................26

1.5 Полиморфизм гена жирномолочности - диацилглицерол-О-ацилтрансферазы и гормона тиреоглобулина....................................................................................29

1.6 Краткое заключение по обзору литературы..............................................................................34

2 Материалы и методы..........................................................................................................................................36

2.1 Материалы................................................................................................................................................................36

2.2 Статистическая обработка полученных данных....................................... 40

3 Результаты собственных исследований..............................................................................................42

3.1 ПЦР-ПДРФ анализ локусов СБЮ, ЬвВ, РИЬ, ЭОАТ1 и Т05 крупного рогатого скота................................................................................................................................................................42

3.2 Анализ состояния селекционно-племенной работы в исследуемых хозяйствах РТ................................................................................................................................................................45

3.3 Оценка полиморфизма гена каппа-казеина у крупного рогатого скота.... 48

3.3.1 Полиморфизм коров и первотелок по гену каппа-казеина....................................49

3.3.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных-бычков по гену каппа-казеина..................................................................................................................................................................51

3.4 Оценка полиморфизма гена бета-лактоглобулину крупного рогатого

скота........................................................................................................................................................................................53

3.4.1 Полиморфизм коров и первотелок по гену бета-лактоглобулина....................54

3.4.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных бычков по гену бета-лактоглобулина........................................................................................................................56

3.5 Оценка полиморфизма гена пролактина крупного рогатого скота....................58

3.5.1 Полиморфизм коров и коров-первотелок по гену пролактин..............................59

3.5.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных бычков по гену пролактина........................................................................................................................................................................61

3.6 Оценка полиморфизма гена диацилглицерин-О-ацилтрансферазы

крупного рогатого скота................................................................................................................................63

3.6.1 Полиморфизм коров и первотелок по гену диацилглицерин-О-ацилтрансферазы..........................................................................................................................................................64

3.6.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных бычков по гену диацилглицерин-О-ацилтрансферазы......................................................................................................66

3.7 Оценка полиморфизма гена тиреоглобулина крупного рогатого скота..........68

3.7.1 Полиморфизм коров и первотелок по гену тиреоглобулин....................................69

3.7.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных бычков по гену тиреоглобулина......................................................................................................................................................70

3.8 Изучение ассоциации полиморфизма генов-молочных белков

с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота................................................................................. 72

3.8.1 Ассоциация полиморфизма гена каппа-казеина с молочной продуктивностью коров и первотелок....................................................... 73

3.8.2 Ассоциация полиморфизма гена каппа-казеина с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков............................. 76

3.8.3 Ассоциация полиморфизма гена бета-лактоглобулина с молочной продуктивностью коров и первотелок...................................................... 79

3.8.4 Ассоциация полиморфизма гена бета-лактоглобулина с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков................................. 82

3.9 Изучение ассоциации полиморфизма гена-молочного гормона пролактина с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота.................................................................... 86

3.9.1 Ассоциация полиморфизма гена пролактина с молочной продуктивностью коров и первотелок....................................................... 86

3.9.2 Ассоциация полиморфизма гена пролактина с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков............................................... 90

3.10 Изучение ассоциации полиморфизма гена-молочного гормона диацилглицерин-О-ацилтрансферазы с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота......................... 92

3.10.1 Ассоциация полиморфизма гена диацилглицерин-О-ацилтрансферазы

с молочной продуктивностью коров и первотелок....................................... 93

3.10.2 Ассоциация полиморфизма гена диацилглицерин-О-ацилтрансферазы

с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков.............. 96

3.11 Изучение ассоциации полиморфизма гена тиреоглобулина с молочной родуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота.. 99 3.11. 1 Ассоциация полиморфизма гена тиреоглобулина с молочной

продуктивностью коров и первотелок....................................................... 100

3.11.2 Ассоциация полиморфизма гена тиреоглобулина с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков.................................. 102

3.12 Корреляция между основными признаками молочной продуктивности крупного рогатого скота................................................................... 105

3.13 Изучение частоты встречаемости комплексных генотипов CSN3,

DGAT1, TG5, PRL, LGB крупного рогатого скота........................................ 110

3.14 Изучение влияния комплексных генотипов генов CSN3, DGAT1, TG5,

PRL, LGB на показатели молочной продуктивности коров и первотелок....... 115

3.15 Изучение влияния комплексных генотипов генов CSN3, DGAT1, TG5, PRL, LGB на показатели родительского индекса быков-производителей и ремонтных бычков............................................................................ 117

4 Обсуждение результатов исследований.............................................. 121

5 Выводы...................................................................................... 132

6 Предложение производству............................................................ 135

7 Список использованной литературы................................................... 136

Приложения.............................................................................. 162

Список сокращений

В/см - вольт на сантиметр

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота.

ед. - единиц

нг - нанограмм

п.н. - пар нуклеотид.

ПДРФ - полиморфизм длины рестрикционных фргаментов (RFLP - Restriction Fragment Length Polymorphism). пМ - пикомоль

ПЦР - полимеразная цепная реакция (PCR - Polymerase Chain Reaction). РИБ - родительский индекс быков, сек. - секунд

СХПК - сельскохозяйственный производственный комплекс РТ - Республика Татарстан

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA -

ethylenediaminetetraacetic acid)

10х ТВЕ буфер - трис - боратный буфер.

А - adenosine (А - аденозин).

bp - base pair (п.о. - пары оснований).

СаС12 - хлорид кальция

CSN3 (кСп) - каппа-казеин.

DGAT1 - диацилглицеролОацилтрансфераза

dNTPs - deoxynucleosidtriphosphates (дНТФ - дезоксинуклеозидтрифосфаты).

et. al. - и другие

G - guanosine (Г - гуанозин).

H2SO4 - серная кислота

LGB- бета - лактоглобулин.

MgCl2 - магний хлорид.

PRL - пролактин

RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) - произвольная амплификация полиморфных локусов ДНК.

SNP - Single Nucleotide Polymorphism (полиморфизм единичных нуклеотидов). SSCP - Single Strand Conformation Polymorphism (конформационный полиморфизм однонитевых фрагментов ДНК). STS - маркеров (от англ. Sequence Tagged Sites). TG5 - тиреоглобулин. PLG - бета - лактоглобулин. С - cytosine (Ц - цитозин). Т - thymidine (Т - тимидин).

Введение

Актуальность. Дальнейшая интенсификация производства молока может быть достигнута путем разведения молочного скота, обладающего нужной наследственностью, способной продуцировать максимальное количество молока желательного состава и качества (Стрекозов, Н.И. и др. 2006).

Важнейшей мерой в повышении и совершенствовании молочного и мясного стада крупного рогатого скота в Республике Татарстан и в Российской Федерации в целом явилось приобретение высокопродуктивных животных из-за рубежа. Однако отсутствие соответствующего контроля здоровья и наследственности импортируемых животных привело к накоплению животных с проблемами наследственного характера, таких как уменьшение генетического многообразия животных и распространение генетических аномалий (Губайдуллин Э. С. и др., 1995).

Проблема построения совершенной генеалогической и генетической структуры стада крупного рогатого скота связана не только с использованием качественного маточного поголовья, как по продуктивности, экстерьеру, генетическим показателям, но и с использованием препотентных быков-производителей, оцененных как улучшатели значимых селекционных признаков. Скрещивание коров отечественной породы с такими быками производителями приведет к сужению генетической изменчивости в результате нарастания общей гомозиготности среди маточной части стада, поголовья быков-производителей и ремонтных бычков (Макаров В.Ю. и др., 2007).

Известно, что наряду с увеличением кормовой базы, совершенствованием технологий кормления, технологий содержания скота, ветеринарного обслуживания животных селекция является мерой, увеличивающей производительность животноводства. Однако методы классической селекции -отбор и подбор не способны полностью удовлетворить запросы животноводов, в то же время селекция, основанная на анализе потомства при помощи методов ДНК технологий, позволяет существенно ускорить селекционно-племенной

процесс. Окончательно происходит отбор наилучших животных с высокими племенными и производственными характеристиками. При этом интенсивность селекции животных по формированию высокопродуктивных стад на основе ДНК-тестирования выше в два и более раза по сравнению с классическими методами отбора (Зеленков П. А. и др., 2009).

Селекционно-племенная работа должна основываться на научно-обоснованные программы, разработанные для каждого племенного стада (Дунин И.М., Прохоренко Д., 1995). Данные программы обуславливают мероприятия по сохранению поголовья, методы разведения, принципы отбора и подбора под генетическим контролем с целью расширения аллельного диапазона и определения маркеров генных комплексов с показателями продуктивности.

На сегодняшний день, как за рубежом, так и в большинстве племенных хозяйств РТ и РФ в целом оценка генов-кандидатов племенных животных является основным критерием в селекционно-племенном процессе. Так, например проверка быков-производителей по потомству и анализ происхождения дает основной материал для совершенствования селекции молочного скота (Яковлев А.Ф. и др., 2007).

Селекция, основанная на ДНК-диагностике позволяет идентифицировать гены напрямую либо косвенно связанные с молочной продуктивностью и генетическими аномалиями. Разработаны методы, которые обеспечивают анализ полиморфизма генов, участвующих в формировании продуктивности животных (Могпбс Б. е1;. а1., 2006). Известно, что генетическое совершенствование молочного стада на 85-90% обусловлено племенной ценностью быков-производителей и ремонтных бычков. На сегодняшний день в связи с широким распространением искусственного осеменения выборка потомства увеличивается: от одного быка-производителя можно получить до 400 тыс. спермодоз (Амерханов Ф.А., 2003). По данным Стрекозова Н. И. (2008) только 39-44% быков-производителей являются улучшателями. Оплодотворение спермой быков-ухудшателей приводит к тиражированию

рецессивных мутаций в потомстве. Таким образом, выявление генетических аномалий и выбраковка животных носителей (в первую очередь производителей), а также преимущественное использование производителей с желательными аллелями генов хозяйственно-полезных признаков является первоочередной задачей селекции на настоящем этапе развития животноводства.

Целью исследований явилось - молекулярно-генетическое тестирование племенного крупного рогатого скота отдельных племхозяйств и племрепредприятий Республики Татарстан по ДНК-маркерам хозяйственно-полезных признаков, а также изучение взаимосвязи полиморфизма с молочной продуктивностью.

Для достижения цели поставлены следующие задачи;

1) анализ состояния селекционно-племенной работы в исследуемых хозяйствах РТ;

2) изыскать ДНК-маркеры, ассоциирующие с молочной продуктивностью крупного рогатого скота и оптимизировать методы ПЦР-ПДРФ анализа;

3) провести молекулярно-генетическое тестирование коров и первотелок, быков-производителей по локусам генов каппа-казеина, диацетилглицерин-О-ацетилтрансферазы, бета-лактоглобулина, пролактина, тиреоглобулина, определить аллельные варианты, а также их взаимосвязь с молочной продуктивностью коров и родительским индексом быков (РИБ);

4) определить коэффициент корреляции между основными признаками молочной продуктивности крупного рогатого скота;

5) изучить встречаемость комплексных генотипов, а также их взаимосвязь с признаками молочной продуктивностью коров и РИБ.

Научная новизна работы. Оптимизированы условия проведения ПЦР-ПДРФ анализа для генотипирования крупного рогатого скота по ДНК маркерам молочной продуктивности. Впервые проведен генетический мониторинг ремонтных бычков и быков-производителей различных пород, первотелок и коров татарстанского типа холмогорской породы по генам-

маркерам CSN3, LGB, PRL, DGAT1, TG5. Изучена взаимосвязь отдельных и комплексных генотипов с молочной продуктивностью, выявлены частоты встречаемости аллельного полиморфизма животных. Отобраны наиболее ценные по комплексу признаков животные с целью расширения генофонда этой популяции в Республике Татарстан, сформированы группы особо ценных животных.

Практическая значимость. Ввиду полигенного характера формирования признаков молочной продуктивности целесообразно проводить молекулярно-генетическое тестирование молочных пород скота по пяти генам CSN3, LGB, PRL, DGAT1 и TG5. Животные, выявленные как наиболее ценные, могут быть использованы в дальнейших селекционно-племенных работах при подборе родительских пар, для получения потомства с наилучшими показателями молочной продуктивности. Результаты исследований использованы при составлении каталога «Генеалогия, племенные качества, ДНК-маркеры продуктивности быков производителей татарстанского типа, черно-пестрой и мясных пород скота» и внедрены в учебный процесс на кафедре биологической и неорганической химии и генетики и селекции сельскохозяйственных животных ФГБОУ ВПО КГАВМ, а также в лаборатории молекулярно-генетических исследований ГНУ ТатНИИСХ Россельхозакадемии.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

- всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010» (г. Москва, 2010).

всероссийской научно-практической конференции молодых ученых посвященной памяти Р.Г. Гареева «Научное обеспечение агропромышленного комплекса России» (г. Казань, 2010);

всероссийской научно-практической конференции молодых ученых посвященной памяти Р.Г. Гареева «Инновационные разработки молодых ученых АПК России» (г. Казань, 2011);

- II - международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (г. Владикавказ, 2011);

- всероссийской агропромышленной выставке «Золотая осень - 2011», в конкурсе «За инновационные разработки в области сельскохозяйственной науки» (г. Москва, 2011);

- международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов "Молодежь. Наука. Будущее: технологии и проекты" (г. Казань, 2012).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе 9 в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК.

Основные положения, выносимые на защиту:

- оптимизированные условия ПЦР-ПДРФ анализа эффективны для оценки полиморфизма генов-маркеров молочной продуктивности крупного рогатого скота;

- выявлены генетические особенности быков-п