Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Технология получения препарата Ниацид плюс и его влияние на иммунный статус животных

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Технология получения препарата Ниацид плюс и его влияние на иммунный статус животных"

На правах рукописи

МИРЗАБВА Карина Микаилевна

ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА НИАЦИД ПЛЮС И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА ИММУННЫЙ СТАТУС ЖИВОТНЫХ

03.00.23 - биотехнология 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

- з ДЕК 2009

Москва - 2009

003486877

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: член-корреспондент РАСХН,

Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор биологических наук, профессор Девришов Давудай Абдулсемедович.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Тихонов Игорь Владимирович;

Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Соколов Михаил Николаевич.

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности»

Защита состоится « 2009 г. в « ч. на заседании

диссертационного совета Д 220.042.01 при ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел.(495)377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан «А» 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Паразитозы сельскохозяйственных животных широко распространены во всем мире и наносят значительный экономический ущерб, связанный как со снижением продуктивности, так и ухудшением качества животноводческой продукции. Нередко инвазионные заболевания носят смешанный характер, что вынуждает ветеринарных специалистов применять разные лекарственные средства неоднократно, вызывая стресс у животных.

В последнее время особое внимание ветеринарных специалистов привлекает проблема возникновения резистентных форм возбудителей инвазий к известным препаратам (Echevarria F. А. et al., 1991 Gopal R. M. et al. 1999; Hejmadi M. V. et al. 2000; Hoste H. et al. 2000; Lloyd S. et ai. 2000).

Появление полирезистентных штаммов возбудителей инвазий к антипаразитарным препаратам побуждает специалистов к поиску методов, повышающих эффективность химиотерапии при паразитозах животных и замедляющих развитие толерантности у паразитов.

Одним из перспективных направлений в создании новых антипаразитарных препаратов является разработка комплексных лекарственных средств, представляющих собой композицию двух и более активных веществ, эффективных одновременно против нематод, трематод, клещей и насекомых.

Применение комплексных препаратов позволяет уменьшить курсовую дозу каждого действующего вещества, входящего в состав лекарственного средства, снизить вероятность возникновения побочных реакций организма животного и одновременно повысить эффективность их применения. В то же время, при использовании противопаразитарных препаратов, одновременно содержащих в качестве активного начала субстанции с разным механизмом действия, замедляется возникновение устойчивости паразитов к ним и отбор резистентных форм (Викторов A.B., Дриняев В.А 2002; Бессонов A.C., 2003; Алексеев М.А., 2009).

В связи с выше изложенным, актуальной задачей современной ветеринарной медицины и биотехнологии является создание технологий получения и применения высокоэффективных лечебных средств на основе комбинаций различных противопаразитарных субстанций, например, авермектинов и югазантела.

Цель и задачи работы. Целью работы является разработка технологии получения комплексного противопаразитарного препарата Ниацид плюс, содержащего в качестве действующего вещества (ДВ) натуральные авермектины и клозантел и изучение его влияния на иммунный статус животных.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. разработка оптимальной композиции препарата Ниацид плюс, содержащего в качестве ДВ натуральные авермектины (абамектин) и клозантел;

2. изучение параметров безвредности и стабильности препарата;

3. оптимизация технологических режимов получения препарата Ниацид плюс;

4. оценка влияния Ниацид плюс на основные иммунобиологические показатели организма животных;

5. изучение терапевтической эффективности препарата на сельскохозяйственных животных при смешанных паразитозах.

Научная новизна. Впервые получен комплексный антипаразитарный препарат широкого спектра действия, на основе комбинации натуральных авермектинов В1„ и В1ь (абамектин), клозантела и кунжутного масла, действие которого направлено против круглых и плоских гельминтов, а также эктопаразитов. Компонентный состав действующих веществ Ниацид плюс обеспечивает терапевтический эффект против трематод, нематод, клещей и насекомых в дозе 1 мл на 50 кг массы тела животного.

Практическая значимость работы. Для профилактики и лечения смешанных паразитозов животных предложен новый комплексный препарат.

Экспериментальные данные, полученные в процессе выполнения работы, вошли в нормативно-техническую документацию (Инструкция, Стандарт организации), утвержденные Россельхознадзором РФ.

Апробация работы. Результаты исследований представлены на IV Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 3 - в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, литературный обзор, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы, включающий 168 источников, в том числе 52 иностранных, и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы 12 рисунками и 40 таблицами.

Положения, выносимые на защиту

1. Технология получения Ниацид плюс и компонентный состав препарата.

2. Данные токсикологической и иммунобиологической характеристики препарата.

3. Результаты изучения терапевтической эффективности Ниацид плюс в производственных условиях.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Работа выполнена на приборах и оборудовании кафедры иммунологии ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина» в период с 2006 по 2009 гг.

В качестве подопытных животных использованы беспородные белые мыши, крысы, кролики, овцы, телята, коровы. Исследования на крупном

рогатом скоте и овцах проводились в различных хозяйствах Московской и Рязанской областей, а также Республики Калмыкия.

Хроническую и острую токсичность Ниацид плюс изучали на беспородных белых мышах массой 18-20 г и крысах массой 110-130 г общепринятыми методами.

При оценке действия Ниацид плюс на иммунологические показатели организма животных контролировали такие параметры гомеостаза, как бактерицидная активность сыворотки (способность задерживать рост тест-культуры в жидкой среде), активность лизоцима (способность фермента лизировать тест-культуру Micrococcus lysodekticus) количество Т-и В-лимфоцитов и фагоцитарную активность нейтрофилов.

Гематологические и биохимические параметры крови подопытных животных исследовали общеизвестными методами с применением гемометра Сали, камеры Горяева, биохимических анализаторов ELAN-160 и Stat fax.

Противопаразитарная эффективность препарата оценивалась путем учета количества паразитов, их яиц (методом флотации в насыщенном растворе хлорида натрия) и личинок в фекалиях до и после лечения известными методами гельминтоскопии. Определение клозантела и компонентов абамекгина проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Полученные результаты обрабатывались статистически и сравнивались между собой, а также с соответствующими показателями клинически здоровых животных (Плохинский Н.А., 1969, Г. Катеман, Ф.В. Пийперс, 1989).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Технология получения нового противопаразитарного препарата

Ниацид плюс

Разработка и оптимизация рецептуры препарата. Для составления лекарственной формы препарата Ниацид плюс нами проверено множество вариантов композиций, включавших различные ингредиенты, разрешенные для применения в фармакологии, а именно, пропиленгликоль, масло

кунжутное, Твин-80 и в качестве действующих веществ (ДВ) абамектин и клозантел. В процессе оптимизации состава препарата были изучены разные соотношения ингредиентов и как наиболее оптимальная, выбрана рецептура, содержащая 17% клозатела и 0,65% абамектина, 1,6% Твина - 80 и др. компоненты. При более низких концентрациях действующих веществ в готовой форме препарата наблюдается снижение его биоцидной активности на тест-объектах, а при более высоких концентрациях ДВ ухудшается консистенция готовой лекарственной формы (повышается вязкость, что создает трудности при инъекционном введении), возникают технологические проблемы с растворением компонентов.

Предложенная комбинация натуральных авермектинов (абамектина) и клозантела позволяет расширить спектр действия препарата Ниацид плюс, делая его эффективным против трематод, нематод, клещей и насекомых, а также преодолеть устойчивость резистентных популяций паразитов.

Оптимизация последовательности операций при изготовлении препарата Ниацид плюс. Дня приготовления нового противопаразитарного препарата Ниацид плюс в форме инъекционного раствора нами предложена последовательность технологических операций, которая представлена в виде блок-схемы на рисунке 1.

Рис. 1. Блок- схема технологии изготовления препарата Ниацид плюс

1- спирт изопропиловый, 2 - абамектин, 3- клозантел, 4- кунжутное масло, 5 - Твин-80, 6 - 1,2-пропиленгликоль, 7 - смеситель с мешалкой (1= 40-41°С), 8 - фильтрация через стерилизующий фильтр, 9 - сборник готовой лекарственной формы, 10 -розлив готовой формы препарата, 11-фасовка и упаковка.

В зависимости от объема изготовляемой партии соответствующие количества изопропилового спирта, абамектина, клозантела, кунжутного масла, Твина-80, 1,2-пропиленликоля, последовательно вносят в термостатируемый смеситель с мешалкой. В реакторе поддерживают температуру в пределах 40-41°С для повышения скорости растворения и равномерного распределения ингредиентов. Данная относительно низкая температура выбрана с учетом физических характеристик компонентов, так, например, авермектины при температуре выше 42°С подвергаются разрушению. После полного растворения субстанций раствор выдерживают при постоянном перемешивании в течение 20 - 30 минут и полученный состав в дальнейшем контролируют на химический состав и активность.

Затем готовую лекарственную форму пропускают через стерилизирующий фильтр в сборник и далее по мере необходимости проводят дозированный розлив, фасовку и упаковку препарата.

Преимущество предлагаемой технологии заключается в том, что она может функционировать в непрерывном последовательном режиме и при необходимости возможна масштабированная адаптация ее на любые объемы производства.

Общие свойства и стабильность препарата

Одним из важнейших параметров лекарственных средств, наряду с эффективностью, является их стабильность в течение длительного периода хранения. Органолептические, физико-химические и биологические свойства препарата Ниацид плюс исследовали согласно положений Государственной Фармакопеи XI. Критериями служили такие параметры как: внешний вид, прозрачность, окраска, плотность, токсичность, отсутствие механических включений, а также подлинность и массовая доля ДВ в препарате. Для определения сроков хранения препарата на предварительном этапе исследований был использован метод «ускоренного старения», а для получения более точных результатов экспериментальные образцы препарата были заложены на хранение при комнатной температуре, а также в

холодильник при 4-8°С. Каждые 4 месяца отбирались пробы для определения противопаразитарной эффективности на тест-объектах (олигохеты семейства ТиЬШшёае) и количественного содержания компонентов ДВ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). При этом определяли как общее содержание клозантела и авермектинов в препарате, так и соотношение компонентов В]а и В1б в авермектиновом комплексе.

Полученные результаты показывают, что при хранении Ниацид плюс в комнатных условиях исходные параметры препарата, т.е. концентрации и компонентный состава ДВ остаются без существенных изменений как минимум 2 года. Количество компонентов В1а и В1б находится в пределах 91,0-95,1% и 6,0 - 9,2% соответственно. Как известно, по нормативным требованиям В1а должно быть не менее 80%, а В1е не более 20%.

Аналогичные данные получены также при контроле общего содержания клозантела в препарате - 152-188 г/л, что также соответствует требованиям СТО.

Исследование токсикологических параметров препарата Ниацид плюс

Острая токсичность. Токсичность оценивали на белых беспородных мышах, получавших различные дозы препарата. Показано, что доза препарата по ДВ ниже 20 мг/кг малотоксична для мышей, а при введении препарата в дозе 90 мг/кг наблюдается 100%-ная гибель животных.

Токсикологические явления наблюдались в зависимости от величины вводимой дозы препарата и имели признаки, характерные для аналогичных препаратов: слезовыделение, одышка, нарушение координации движений и смерть.

В результате наблюдений установлено, что 1Л}50 препарата, рассчитанная известным методом (Першин Г.Н., 1950), соответствует 64,063 мг/кг массы тела по ДВ. Среднесмертельная доза препаративной формы составляет 363,3 мг/кг. Из полученных результатов следует, что препарат Ниацид плюс можно отнести к веществам средней токсичности (1П класс, ГОСТ 12,1-007-76).

Хроническая токсичность. Изучение параметров хронической токсичности препарата Ниацид плюс проведено на беспородных белых крысах массой 110-130 г., препарат в дозе примерно 1/1000 от ЛД50 вводили внутрибрюшинно через сутки в течение 30 дней, за животными вели наблюдение и контролировали биохимические и гематологические показатели.

Результаты исследования свидетельствуют о том, что патологических сдвигов по основным гематологическим и биохимическим показателям у крыс при длительном введении относительно малых доз препарата Ниацид плюс, не отмечается. У животных, которым вводили препарат Ниацид плюс, не выявлено также изменений в состоянии внутренних органов.

Действие препарата Ниацид плюс на иммунный статус организма

животных

Влияние препарата на иммунологические показатели лабораторных животных. Введение в организм животных чужеродных веществ вызывает определенные сдвиги в иммунной системе. Поэтому предварительное фармакологическое тестирование новых лекарственных средств дает возможность объективно оценить параметры безвредности и получить исходную информацию для их практического применения.

Влияние препарата Ниацид плюс на иммунную систему лабораторных и животных изучали на беспородных белых мышах и кроликах. В опытах с мышами было использовано 30 животных массой 18-20 г, которых разделили на 2 группы. Первая группа получала препарат в дозе 20 мкл/кг, вторая - контрольная препарат не получала.

Сравнительный анализ данных, полученных при изучении динамики изменения количества Т-лимфоцитов в крови мышей, показал, что препарат Ниацид плюс не оказывает негативного влияния на Т-клеточное звено иммунитета. Незначительное снижение относительного количества

Т-лимфоцитов на 5-15 день опыта с 17,6% до 14,1% нормализуется к 25 суткам.

Относительное количество В-лимфоцитов в крови мышей, получавших препарат, на 2 и 5 сутки опыта составляет 9,9+2,8% и 9,3±2,6% соответственно, те же показатели в контроле равны 10,9±1,9% и 11,6±1,2%. На 20-25 сутки опыта содержание В-клеток в крови контрольных и опытных животных практически не отличалось.

С точки зрения современной биологии, иммунные реакции организмов на действие чужеродных агентов можно рассматривать, как адаптивные процессы, направленные на поддержание гомеостаза в изменившихся условиях. При оценке действия Ниацид плюс на факторы естественной резистентности мышей показано, что бактерицидная активность сыворотки крови и содержание лизоцима находятся в пределах 29,8-42,4% и 496-516 мкг/мл соответственно, а показатели в контроле и опыте достоверно не отличаются. Число нейтрофилов, активно участвующих в фагоцитозе 52-72%, среднее число поглощенных нейтрофилом микробных клеток 1,7-2,0 и процент мертвых (переваренных) клеток 56-70,4 в вариантах опыта примерно одинаковое.

В опытах на кроликах также изучено действие Ниацид плюс в терапевтической и более высоких дозах на основные иммунологические показатели крови животных.

Анализ представленных в таблице 1 данных показывает, что препарат в терапевтической дозе не оказывает отрицательного воздействия на иммунную систему животных. В тоже время, относительное количество нейтрофилов на 14 день возрастало на фоне некоторого снижения количества лимфоцитов, но эти изменения были не столь существенными, т.к. они были обусловлены, в основном, индивидуальной реактивностью организма животных

Таблица 1. Действие Ниацид плюс на показатели естественной __резистентности кроликов_

Исследуемые * показатели Время проведения анализа, сутки

7 14 30

Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт

Бактерицидная активность, % 38,7±2,5 34,4±3,3 36,5±2,3 32,2±2,8 41,3±3,3 38,4±3,23

Содержание лизоцима, мкг/мл 6,9±0,4 6,0±0,3 7,2±0,24 6,3±0,36 7,5±0,42 7,0±0,53

Альбумины, % 59,2±0,6 62,3±0,9 57,8±0,46 60,5±1,2 54,7±0,7 58,3±0,8

Альфа глобулины, % 13,1±0,2 12,6±0,55 11,5±0,62 10,8±0,64 11,9±0,44 12,3±0,63

Бета глобулины, % 10,6±0,5 11,9±0,48 12,0±0,4 9,7±0,34 12,4±0,6 12,8±0,52

Гамма глобулины, % 19,4±0,8 17,9±0,7 16,2±0,5 20,3±0,64 19,7±0,7 20,4±0,6

Лейкоциты, 106/мл 6,28±0,53 7,23±0,72 6,1±0,9 6,2±0,57 6,6±1,1 5,9±0,8

Нейтрофилы, % сегментоядерные 33,2±2,47 34,3±1,34 32,7±2,60 38,1±0,56 35,10±3,1 36,3±3,3

Эозинофилы, % 2,1±0,7 1,7±0,1 1,8±0,2 1,6±0,2 1,8±0,3 1,5±0,26

Лимфоциты, % 50,6±7,05 52,5±8,0 52,4±6,03 48,4±6,6 55,4±7,0 53,9±8,1

Фагоцитоз, % 57,6±3,3 46,5±5,2 50,8±4,7 44,3±3,9 49,2±5,4 51,7±3,8

Число убитых микробов, % 35,8±2,1 26,5±3,2 31,4±2,8 30,7±1,9 28,4±3,7 34,6±4,2

*норма: альбумины - 55,7-65%, альфа глобулины - 8,0-13,0%, бета глобулины - 7,0-13,0%, гамма глобулины - 17,0-23,0%, нейтрофилы сегментоядерные -33-39 , эозинофилы - 1-3, лимфоциты - 48-62.

При введении животным 6-кратной терапевтической дозы Ниацид плюс (0,9 мл/2,50 кг, т.е. 6мл/50 кг) наблюдается существенное снижение переваривающей способности фагоцитов (нейтрофилов) крови и лизоцимной активности по сравнению с контролем на 49-53% и 28-33% соответственно.

Современный комплексный подход к изучению воздействия препаратов на организм животных расширяет и дополняет существующие представления о механизмах исследований новых лекарственных средств. Как известно, существует корреляционная связь между иммунологическими и

биохимическими показателями. Биохимический анализ крови позволяет оценить обмен веществ в организме и работу внутренних органов: почек, печени и др.

При изучении влияния Ниацид плюс на биохимические показатели крови кроликов контролировали: общий белок, глюкозу, общий билирубин, холестерин, мочевину, активности аланинаминотрансферазы (AJIT), аспартатаминотрансферазы (ACT), амилазы и лактатдегидрогеназы.

Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии значимых отклонений от физиологических норм в биохимических показателях крови животных, которым вводили терапевтические дозы препарата.

Иммунологические показатели сельскохозяйственных животных.

Исследования по выявлению действия препарата Ниацид плюс на иммунологические показатели организма сельскохозяйственных животных проводили на овцах и телятах, все подопытные животные были клинически здоровые, что подтверждено лабораторными анализами.

Ниацид плюс применяли овцам (20 голов) в дозе 1 мл на 50 кг массы. На 7,14 и 30 сутки после обработки препаратом у животных брали кровь для определения таких показателей иммунного статуса организма, как содержание Т- и В-клеток, лизоцим, бактерицидная активность сыворотки и циркулирующие иммунные комплексы в крови.

Из представленных на диаграмме (рис.2) данных следует, что после обработки препаратом Ниацид плюс на 7 сутки имеет место достоверное снижение содержания как Т-, так и В-лимфоцитов (р<0,05) в крови овец. На 30 сутки опыта количество лимфоцитов в крови контрольных и подопытных овец практически одинаковое.

В терапевтической дозе препарат Ниацид плюс не оказывает угнетающего действия также на бактерицидную активность, содержание лизоцима в крови животных.

Таким образом, препарат в терапевтической дозе не оказывает отрицательного воздействия на иммунную систему овец.

ге

7 14

Ш Содержание Т-лимфоцитов (Контроль) О Содержание Т-лимфоцитов (Опыт) ■ Содержание В-лимфоцитов (Контроль) 0 Содержание В-лимфоцитов (Опыт)

30

Время опыта, сутки

Рис. 2. Влияние препарата Ниацид плюс на динамику содержания Т- и В-лимфоцитов в крови овец

Влияние препарата Ниацид плюс на основные иммунобиологические показатели телят изучено на животных ООО «Заречное» Касимовского района Рязанской области. В опыте было использовано 8 телят, которые были разделены на контрольную и опытную группу по 4 голов. Препарат вводили в области предплечья согласно наставлению по применению в дозе 1мл на 50 кг массы тела, контрольная группа препарат не получала.

Данные таблицы 2 показывают некоторое снижение содержания Т- и В-лимфоцитов в крови телят на 5-й день после введения препарата, однако на 24 и тем более к 30 суткам опыта количество иммунокомпегентных клеток в опыте не ниже чем в контроле. Это свидетельствует о наличии ответной реакции организма животных на введение препарата, которая носит кратковременный адаптивный характер и через 2-3 недели самопроизвольно приходит в физиологическую норму.

Таблица 2. Действие препарата Ниацид плюс на иммунные показатели __сыворотки крови телят_

Исследуемые* показатели Время анализа показателей, сутки

Опыт Кошроль

Исх. 5 14 30 5 30

Альбумины, % 42,7±2Д 38,ИЗ,9 41,6±3,2 43,4±2,7 36,012,5 40313,4

Альфа глобулины, % 19,8+2,1 18 ßi2J 19,ШЛ 20,013,8 16,8±1,7 19,711,2

Бета глобулины, % 153±0,06 14,410,04 14,910,11 15,4+0,12 15,610,17 15,810,22

Гамма глобулины, % 22,9±1,6 18,612,7 20,313,2 19,414,5 20,314,13 21,813,1

Т-лимфоцигы, % 73,211,5 67311,7 68,4±1Д 72,8±13 74,211,4 73,1±1,1

В-лимфоцига, % 31,50±1,05 27,5±1,12 29,8±1,07 30,7±1,14 28,610,13 31,511,10

Содержание лизоцима, мкг/мл 8,6+13 8,8±1,5 9,4+0,8 9,0±0,7 8,811,2 8,7±1,4

Бактерицидная активность, % 66,5133 69,2±3,5 73,314,1 70,00,6 67312,6 68,513,2

*нормы: альбумины - 30 - 50%, альфа глобулины - 12 - 20%, бета глобулины - 10 - 16%, гамма глобулины - 25 - 30.

При оценке иммунобиологического craiyca животных особенно важным представляется комплексный сравнительный анализ биохимических и иммунологических показателей сыворотки крови.

Таблица 3. Биохимические показатели сыворотки крови телят, _обработанных препаратом Ниацид плюс

Исследуемые * показатели Время анализа показателей, сутки

Опыт Контроль

Исх. 5 14 30 5 30

Общий белок, г/л 58,913,4 62,0±4,1 60,3212,6 59,10+3,8 60,4115,0 61,1014,1

Глюкоза, мМ/л 4,23Ю,36 4,1210,22 4,22 ±0,31 4,32 ±0,40 4,3010,38 4,35Ю,43

Холестерин, мМ/л 2,6Ю,54 2,210,63 2,411,02 2,510,90 2,610,88 2,810,65

Билирубин общий, мкМ/л 11,110,9 12,210,54 13,211,8 11,6±0,8 12,911,2 10,0±0,9

Мочевина, мМ/л 4,0Ю,56 4,210,54 3,910,33 3,8±0,76 3,7±0,63 3,910,45

Креатинин, мкМ/л 70,4±9,6 71,819,2 74,019,7 69,918,9 68,0±8,3 68,8±7,9

Резерв, щел., ОБ% С02 40,910,70 41,910,69 40,610,72 39,4±0,4 3610,58 38,2±0,53

*нормы: общий белок - 60-85 г/л., глюкоза - 3,33 - 5,55 ммоль/л, холестерин -1,3-4,3 ммоль/л, билирубин общий - ОД - 17 мкмольЧ мочевина - 33 - 7,5 ммоль/л, креагашш - 55,8 - 162,4, резеврная щелочность-50 - 62.

Содержание общего белка, глюкозы, мочевины, креатинина, холестерина и др. является индикаторным показателем, связанным с физиолого-биохимическим статусом организма.

Как видно из данных табл. 3, основные биохимические показатели подопытных и контрольных животных находятся в пределах физиологической нормы.

Возможные раздражающие свойства препарата изучены на кроликах и овцах. Установлено, что Ниацид плюс не оказывает раздражающего действия при нанесении на конъюнктиву и не вызывает воспалительных явлений при инъекции под кожу животных, припухлость на месте укола проходит самопроизвольно.

Переносимость препарата Ниацид плюс

При изучении переносимости повышенных доз комплексного препарата Ниацид плюс исследования проводилась на кроликах, овцах и телятах.

Кроликам препарат вводили однократно подкожно в дозе 0,45 и 0,9 мл/2,5 кг массы животного, т.е. на голову, что соответствует 3 и 6мл/50кг. Терапевтическая доза по клозантелу - 5-10 мг/кг, по авермектинам - 200 мкг/кг. Введение животным 3-х терапевтических доз препарата не вызывает существенных отклонений от физиологической нормы, а введение 6 терапевтических доз приводит к изменению некоторых биохимических показателей. Содержание холестерина на 2-е сутки после введения препарата повышается с 2,3±2,0 до 4,9±0,3 ммоль/л и держится на относительно высоком уровне до 24 суток, а коэффициент де Ритиса на 2, 5 и 14 сутки опыта значительно ниже нормы (1,114; 1,145; 1,134 соответственно при норме 1,33), но к 24 суткам после введения препарата метаболизм в печени приходит в норму (К= 1,269).

Терапевтическая эффективность препарата Ниацид плюс при паразитозах животных

Эффективность препарат при смешанных инвазиях крупного рогатого скота. Испытание препарата Ниацид плюс при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) проводили на телятах ГУП им. Чапчаева Республики

Калмыкия. Всего в опыте было использовано 36 голов телят, разделенных на 3 группы. Животным первой группы (15 голов) вводили Ниацид плюс в дозе 1 мл/50 кг, а животным второй группы (15 голов) вводили Ниацид плюс в дозе 3 мл/50 кг. Животные третьей группы (6 голов) служили контролем, и препарат не получали. До постановки опыта лабораторными анализами выявлена 100%-ная инвазированность животных стронгилятами ЖКТ.

Из полученных данных следует, что эффективность препарата против стронгилятозов ЖКТ крупного рогатого скота составляет 93-100%.

Исследования по оценке эффективности Ниацид плюс в сравнении с известными аналогами Баймек, Аверсект-2 и Ниацид проведены на животных, пораженных фасциолезом (19 голов) и сифункулятозом, диктиокаулезом и стронгилятозами (28 голов). По результатам исследований эффективность препаратов Роленол, Ниацид, Баймек, Аверсект 2 и Ниацид плюс против нематод составляет 66,66%, 97,1%, 93,6%, 100% и 100% соответственно, а против фасциол эффективность проявили только Роленол и Ниацид плюс.

Эффективность препарата при смешанных инвазиях овец. В исследованиях по оценке эффективности препарата Ниацид плюс при паразитозах овец показано, что его активность против наиболее значимых возбудителей инвазий колеблется в пределах 91 - 100% (табл. 4).

Таблица 4. Эффективность Ниацид плюс при гельминтозах овец

Гельминты Число животных НИ, ед/г до лечения ИИ, ед'г после лечения Контроль, ИИ, ед/г ИЭ,%

Фасциолы 38 31,8±4,1 0,8±0,07 92,3±6,3 97,37

Диктиокаулюсы 14 58,2±3,2 0 104,6±10,2 100

Гемонхузы 40 76,4±4,7 1,2±0,06 179,6±4,6 97,5

Кооперии 40 102,4±8,7 9,2±0,11 107,0±9,9 91,0

Нематодирусы 20 19,9±4,4 0,5±4,1 93,8±5,3 97,5

Буностомы 40 42,7±5,3 0 160,5±6,4 100

Остертагии 29 23,2±5,1 0,8±0,05 92,7±5,5 96,55

Через 20 суток после однократного введения препарата овцам подопытные животные практически полностью освободились от паразитов, а инвазированность контрольных (не обработанных препаратом) овец динамично росла.

ВЫВОДЫ

1. Разработана технология получения нового противопаразигарного препарата Ниацид плюс, содержащего в качестве действующих веществ, натуральные авермектины В1а и В1б (абамектин) и клозантел. Отработана последовательность операций внесения ингредиентов и температурные режимы технологических операций.

2. Показано, что препарат стабилен при хранении без доступа света при температуре от 0 до 30 С, т.е. сохраняет нативность действующих веществ и противопаразитарную активность в течение 2 лет.

3. Установлено, что Ниацид плюс не оказывает отрицательного воздействия на основные иммунологические и биохимические показатели лабораторных (мыши, крысы, кролики) и сельскохозяйственных (овцы, телята) животных.

4. На 2-5 сутки после применения препарата наблюдается достоверное изменение содержания Т- и В- лимфоцитов в крови животных, но параметры клеточного иммунитета приходят в норму к 25-30 суткам.

5. Ниацид плюс относится к III классу опасности по ГОСТ12.1.007-76, т.к. среднесмертельная доза (ЫЭ5о) готовой лекарственной формы препарата для белых мышей составляет 363,3 мг/кг живой массы

6. Показано, что Ниацид плюс не обладает кумулятивными свойствами, при длительном введении белым крысам в дозе 5000 мкг/кг в течение 35 дней не вызывает интоксикации животных.

7. Ниацид плюс в дозе 1 мл на 50 кг массы тела обладает высокой эффективностью (96 - 100%) против смешанных экто- и эндопаразитов животных (коровы, телята, овцы). Это исключает необходимость применения нескольких лекарственных средств против смешанных инвазий, вызываемых трематодами, нематодами, клещами и насекомыми.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты исследований использованы при разработке нормативно-технических документов на производство и применение препарата Ниацид плюс в ветеринарной практике (Инструкция по применению, СТО).

Предложенный оптимальный состав ингредиентов (действующих веществ и др. компонентов) препарата Ниацид плюс, обеспечивает терапевтический эффект в дозе 1 мл на 50 кг массы тела животного, что снижает объемы вводимых животным доз в несколько раз и резко сокращает объем работ при проведении массовых лечебно-профилактических мероприятий против нематод, трематод, насекомых и клещей одновременно. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ Новый комплексный препарат Ниацид плюс рекомендован для профилактики и лечения смешанных паразитозов, вызываемых круглыми и плоскими гельминтами (нематоды и трематоды), а также эктопаразитами. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кулица М.М. Становление и современное состояние промышленного производства препаратов авермектинового ряда в России / Кулица М.М., Мирзаева K.M., Зиновьев O.A. // Ветеринарная медицина.- 2005, №3-4.-С.11-13.

2. Мирзаева K.M. Технологические особенности получения комплексных препаратов на основе различных противопаразитарных субстанций / Мирзаева K.M., Мельницкая Т.И., Гусейнов Н.Г.: Материалы IV Международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». - М.: ЗАО «Экспо-биохим-технологии».-2007. - 4.1. - С. 305.

3. Мирзаева K.M. Действие препарата Ниацид плюс на иммунобиологические параметры животных / Мирзаева K.M. // Ветеринарная медицина. - 2007. - №2-3. - С. 35-37.

4. Гусейнов Н.Г. Методические рекомендации по применению препарата Ниацид плюс против паразитозов животных / Гусейнов Н.Г., Девришов Д.А., Мельницкая Т.И., Мирзаева K.M. // М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ.- 2009. - 11с.

5. Мирзаева K.M. Некоторые аспекты биохимических механизмов действия антипаразитарных средств на возбудителей инвазий / Мирзаева K.M., Мельницкая Т.И., Мирзаев М.Н., Джафаров М.Х. // Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: Сб. науч. тр. ФГОУ ВПО МГАВМиБ - М.: ФГОУ ВПОМГАВМиБ.- 2009.- С.65-66.

6. Синтез и изучение противопаразитарной активности новых гетероциклических соединений / Джафаров М.Х., Мирзаева K.M., Мельницкая Т.И. и др. // Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: Сб. науч. тр. ФГОУ ВПО МГАВМиБ - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ.- 2009.- С.62-65.

7. Эффективность препарата Ниацид плюс при лечении крупного рогатого скота от гельминтозов / Мирзаева K.M., Милаев E.H., Гусейнов Н.Г. и др. /Ветеринарная медицина. - 2009. -№1-2. - С. 60-61.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 13.11.2009 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов: 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мирзаева, Карина Микаилевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика авермектинов и клозантела как основы противопаразитарных препаратов.

1.1.1. Авермектины, продуцируемые Streptomyces avermitilis, химическая природа.

1.1.1.1. Противопаразитарные препараты на основе авермектинов. а). Препараты, содержащие в качестве действующего вещества натуральные авермектины. б). Препараты, содержащие в качестве действующего вещества ивермектин.

1.1.2. Клозантел - химическая природа, противопаразитарные свойства.

1.1.2.1. Противопаразитарные препараты на основе клозантела.

1.2. Влияние противопаразитарных препаратов на иммунобиологический статус животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Метод определения клозантела и компонентов абамектина в биосубстратах. а). Определение компонентов абамектина в биосубстратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. б). Определение клозантела в биосубстратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Технология получения противопаразитарного препарата

Ниацид плюс. а). Разработка и отимизация рецептуры препарата. б) Оптимизация последовательности операций при изготовлении препарата Ниацид плюс.

2.2.2. Общие свойства и стабильность препарата.

2.2.3. Исследование токсикологических параметров препарата Ниацид плюс. а) Изучение острой токсичности. б) Изучение хронической токсичности.

2.2.4. Действие препарата Ниацид плюс на иммунный статус организма животных. а) Влияние препарата на иммунобиологические показатели лабораторных животных. б) Влияние препарата на иммунобиологические показатели сельскохозяйственных животных. в) Определение аллергизирующих и раздражающих свойств препарата Ниацид плюс.

2.2.5. Переносимость препарата Ниацид плюс.

2.2.6. Установление сроков выведения остаточного количества Ниацид плюс из организма животных.

2.2.7. Терапевтическая эффективность Ниацид плюс при паразитозах животных. а) Эффективность препарата при смешанных инвазиях крупного рогатого скота. б) Эффективность препарата при смешанных инвазиях овец.

3. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ НИАЦИД ПЛЮС.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИСЛЕДОВАНИЙ.

5. ВЫВОДЫ.

6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ

ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Технология получения препарата Ниацид плюс и его влияние на иммунный статус животных"

Актуальность темы. Паразитозы сельскохозяйственных животных широко распространены во всем мире и наносят значительный экономический ущерб, связанный как со снижением продуктивности, так и ухудшением качества животноводческой продукции. Нередко инвазионные заболевания носят смешанный характер, что вынуждает ветеринарных специалистов применять разные лекарственные средства неоднократно, вызывая стресс у животных.

В последнее время особое внимание ветеринарных специалистов привлекает проблема возникновения резистентных к известным препаратам форм возбудителей инвазий. Например, установлено, что эффективность ивермектина против нематоды Haemonchus contortus у овец может снижаться до 10% [161, 164, 167]. Снижение эффективности ивермектина более чем 2 раза отмечено и в других работах (Гульчинская Т.С., 2001 [28]; Hejmadi М. V. et al. 2000 [142]; Kotze А. С. et al., 2002 [144]; Prichard R.K., 2007 [150]; Tyrrell К., Leo F 2009 [162] ). Появление полирезистентных штаммов возбудителей инвазий к антипаразитарным препаратам побуждает специалистов к поиску методов, повышающих эффективность химиотерапии при паразитозах животных и замедляющих развитие толерантности у паразитов.

Одним из перспективных направлений в создании новых антипаразитарных препаратов является разработка комплексных лекарственных средств, представляющих собой композицию двух и более активных веществ, эффективных одновременно против нематод, трематод, клещей и насекомых.

Применение комплексных препаратов позволяет уменьшить курсовую дозу каждого действующего вещества, входящего в состав лекарственного средства, снизить вероятность возникновения побочных реакций организма животного и одновременно повысить эффективность их применения. В то же время, при использовании противопаразитарных препаратов, одновременно содержащих в качестве активного начала субстанции с разным механизмом действия, замедляется возникновение устойчивости паразитов к ним и отбор резистентных форм (Дриняев В .А 2002 [17]; Бессонов А.С., 2003 [15]; Алексеев М.А., 2009 [2]).

В связи с выше изложенным, актуальной задачей современной ветеринарной медицины и биотехнологии является создание технологий получения и применения высокоэффективных лечебных средств на основе комбинаций различных противопаразитарных субстанций, например, авермектинов и клозантела.

Цель и задачи работы. Целью работы является разработка технологии получения комплексного противопаразитарного препарата Ниацид плюс, содержащего в качестве действующего вещества (ДВ) натуральные авермектины и, клозантел и изучение его влияния на иммунный статус животных.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. разработка оптимальной композиции препарата Ниацид плюс, содержащего в качестве ДВ натуральные авермектины (абамектин) и клозантел;

2. изучение параметров безвредности и стабильности препарата;

3. оптимизация технологических режимов получения препарата Ниацид плюс;

4. оценка влияния Ниацид плюс на основные иммунобиологические показатели организма животных;

5. изучение терапевтической эффективности препарата на сельскохозяйственных животных при смешанных паразитозах.

Научная новизна. Впервые получен комплексный антипаразитарный препарат широкого спектра действия, на основе комбинации натуральных авермектинов В1а и Bib (абамектин), клозантела и кунжутного масла, действие которого направлено против круглых и плоских гельминтов, а также эктопаразитов. Компонентный состав действующих веществ Ниацид плюс обеспечивает терапевтический эффект против трематод, нематод, клещей и насекомых в дозе 1 мл па 50 кг массы тела животного.

Практическая ценность работы. Для профилактики и лечения смешанных паразитозов животных предложен новый комплексный препарат. Экспериментальные данные, полученные в процессе выполнения работы, вошли в нормативно-техническую документацию (Инструкция, Стандарт организации), утвержденные Россельхознадзором РФ

Положения, выносимые на защиту

1. Технология получения Ниацид плюс и компонентный состав препарата.

2. Данные токсикологической и иммунобиологической характеристики препарата.

3. Результаты изучения терапевтической эффективности Ниацид плюс в производственных условиях.

Апробация работы. Результаты исследований представлены на IV Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 3 - в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, литературный обзор, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы, включающий 168 источников, в том числе 52 иностранных, и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы 12 рисунками и 41 таблицей.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Мирзаева, Карина Микаилевна

ВЫВОДЫ

1. Разработана технология получения нового противопаразитарного препарата Ниацид плюс, содержащего в качестве действующих веществ, натуральные авермектины В 1а и В16 (абамектин) и клозантел. Отработана последовательность операций внесения ингредиентов температурные режимы технологических опреаций.

2. Показано, что препарат стабилен при хранении без доступа света при температуре от 0 до 30 С, т.е. сохраняет нативность действующих веществ и противопаразитарную активность в течение 2 лет.

3. Установлено, что Ниацид плюс не оказывает отрицательного воздействия на основные иммунологические и биохимические показатели лабораторных (мыши, крысы кролики) и сельскохозяйственных (овцы, телята) животных.

4. На 2-5 сутки после применения препарата наблюдается достоверное изменение содержания Т- и В- лимфоцитов в крови животных, но параметры клеточного иммунитете приходят в норму к 25-30 суткам.

5. Ниацид плюс относится к III классу опасности по ГОСТ12.1.007-76, т.к. среднесмертельная доза (LD50) готовой лекарственной формы препарата для белых мышей составляет 363,3 мг/кг живой массы

6. Показано, что Ниацид плюс не обладает кумулятивными свойствами, при длительном введении внутрибрюшинно белым крысам в дозе 5000 мкг/кг в течение 35 дней не вызывает интоксикации животных.

7. Ниацид плюс в дозе 1 мл на 50 кг массы тела обладает высокой эффективностью (96 - 100%) против смешанных экто- и эндопаразитов животных (коровы, телята, овцы). Это исключает необходимость применения нескольких лекарственных средств против смешанных инвазий, вызываемых трематодами, нематодами, клещами и насекомымы.

6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты исследований использованы при разработке нормативно-технических документов на производство и применение препарата Ниацид плюс в ветеринарной практике (Инструкция по применению, СТО).

Предложенный оптимальный состав ингредиентов (действующих веществ и др. компонентов) препарата Ниацид плюс, обеспечивает терапевтический эффект в дозе 1 мл на 50 кг массы тела животного, что снижает объемы вводимых животным доз в несколько раз и резко сокращает объем работ при проведении массовых лечебно-профилактических мероприятий против нематод, трематод, насекомых и клещей одновременно.

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Новый комплексный препарат Ниацид плюс рекомендован для профилактики и лечения смешанных паразитозов, вызываемых круглыми и плоскими гельминтами (нематоды и трематоды), а также эктопаразитами.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мирзаева, Карина Микаилевна, Москва

1. Абрамов В.Е. Иммунотоксические свойства препарата сантомектин / Абрамов В.Е., Калинина Ю.Н., Даугалиева Э.Х. // Аграрная наука. -2001.-№>1.- С. 24-26.

2. Антипов А.А. Сравнительная эффективность некоторых антгельминтиков при метастронгилезе свиней / Антипов А.А. // Материалы научн.конф. «Легочные и желудочно-кишечные нематодозы человека и животных и меры борьбы с ними». М., 1993. - С.8.

3. Апалькин В.А. Эффективность ивомека при паразитозах жвачных животных / Апалькин В.А., Понамарев Н.М. // Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями животными. Новосибирск, 1992. - С. 111-114.

4. Арисов М.В. Распространение мониезиоза овец и иммунотерапия в аридной зоне юга России: Дис. .канд. вет. наук: 03.00.19 / М.В. Арисов: Нижегородская гос. сельскохоз. академия. Нижний Новгород, 2002. - 110 с.

5. Архипов И.А. Влияние антигельминтиков на прирост массы тела телят при диктиокаулезе / И.А. Архипов, К.Л. Мальцев, С.Д. Дурдусов // Ветеринария. -1999. № 10. - С. 28 - 30.

6. Архипов И.А. Эффективность ивомека при гельминтозах крупного рогатого скота / Архипов И.А., Архипова Д.Р. // Бюл. ВИГИС. 1990. -№.54. - С.3-8.

7. Архипов, И.А. Новый эндоэктоцид сантел /Архипов И.А., Архипов И.А., Шемяков Д.Н., Дурдусов С.Д., Рехвиашвили Э.И. // Ветинформ.1998.-№ l.-C. 6.

8. Архипов И.А. Выбор антгельминтиков для лечения животных / Архипов И.А., Мусаев М.Б. // Ветеринария. 2004. - №2. - С. 28-33.

9. Ю.Архипов И.А. Эффективность ивомека плюс при паразитарных заболеваниях крупного рогатого скота / Архипов И.А. // Ветеринарная газета. 1995. - №7.- С.5.

10. П.Архипов И.А. Эффективность дуотина против эндо и эктопаразитов крупного рогатого скота. / Архипов И.А., Аксенова И.Н., Земсков В.А. // Ветеринария . - 1995. - № 2. - С.38-39.

11. Архипов И.А. Эффективность Ивермека при паразитозах крупного рогатого скота / Архипов, И.А. Кидяев В.Н.,Семенов С.В // Труды ВИГИС. 2001.- Т.37. - С. 15-22.

12. Березкина С.В. Опыт применения ивомека при паразитарных болезнях овец / Березкина С.В. // Труды ВИГИС.- 1992.- Т. 31.- С. 22-30.

13. Бессонов А.С. Копроскопические и клинико-иммунологические пороги дегельминтизации крупного рогатого скота при основных гельминтозах (по материалам 18-й конференции WAAVP) / Бессонов А.С. // Ветеринария. 2003. - №11 - С. 53-57.

14. Бессонов А.С. Резистентность к паразитоцидам: система интегрированного управления развитием паразитов / Бессонов А.С. // Ветеринария. 2003. - №2. - С. 29-32.

15. Бурэнбаатар Б. Разработака технологии получения препарата Аверномек и оценка его эффективности против паразитов животных Монголии: Автореф. дис.канд. биол. наук / Б. Бурэнбаатар: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. М., 2009. - 16 с.

16. Викторов А.В. Развитие резистентности к авермектину / Викторов А.В., Дриняев В.А // Ветеринария. 2002. - №4,- С. 50-55.

17. Викторов А.В. Механизмы иммуномодулирующего действия авермектинсодержащих препаратов при инфекционной патологии / Викторов А.В., Черкасова Т.Д., Юркив В.А., Покровский В.И. //

18. Инфекционные болезни. 2009. № 7 (1). - С. 20-22.

19. Виолин Б.В. Химиотерапия при бактериальных и паразитарных болезнях / Виолин Б.В., Абрамов В.Е., Ковалев В.Ф. // Ветеринария. -2001. -№1.-С. 42-46.

20. Внутрикожное введение авермектинов при паразитарных болезнях молочного стада / Дриняев В.А., Стерлина Т.С., Кругляк Е.Б. и др. // Ветеринария. 2006. - №1. - С. 33-36.

21. Воз действие отечественных антигельминтных препаратов на иммуногенез свиней, спонтанно зараженных нематодами / Даугалиева Э.Х.; Савельев А.А.; Аринкин А.В. и др. // Свиноферма. 2007. - №10. -С. 57-60.

22. Волков Ф.А. Эффективность препаратов авермектина и милбемицина при нематодозах животных / Волков Ф.А.// Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии // Материалы докл. Научн. Конф. -М., 1995. -С.36-37.

23. Волков Ф.А. Эффективность применения ивомека при паразитарных болезнях крупного рогатого скота / Волков Ф.А., Димов С.К., Апалькин В.А. // Ветеринария.- 1994.- № 4,- С. 32-34.

24. Волкова Г.Н., Эффективность универма / Волкова Г.Н., Белякова А. Н. И Ветеринарная газета. 1996. - № 11 - С. 38.

25. Гаджиев И.М. Изучение возможного эмбриотоксического и тератогенного действия ивермектина / Гаджиев И.М. // Бюл. ВИГИС. -1984. -№.39 .- С. 14-16.

26. Горохов В.В. Опыт профилактики гельминтозов в хозяйствах России / Горохов В.В. // Ветеринария. 2002.- №8. - С. 3-5.

27. Гудкова А.Ю. Формирование паразитарной системы в организме свиней при нематодозах / Гудкова А.Ю., Петров Ю.Ф., Иванюк В.П., Бугаева А.А. // Ветеринария. 2008.- №3. - С. 31-33.

28. Гульчинская Т.С. Развитие резистентности к ивермеку. (Обзор зарубежных публикаций. Ситуация в России) / Гульчинская Т.С. //

29. Зооиндустрия. -2001. -№ 9. С. 1-4.

30. Гусейнов Н.Г. Разработка технологии получения препарата Ниацид-премикс и оценка его эффективности против паразитозов животных: Автореф. дис. .канд. биол. наук / Н.Г. Гусейнов: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. -М., 2004. 19 с.

31. Даугалиева Э.Х. Влияние Ивермека на показатели иммунного ответа у животных / Даугалиева Э.Х., Семенов С.В., Жемеричкин Д.А., Староверов С.А. // Ветеринария . 2000. - №12. - С. 29-31.

32. Дегтяревская Т.Ю. Иммуноморфологическая реактивность селезенки при диктиокаулезе овец на фоне дегельминтизации / Дегтяревская Т.Ю. // Ветеринария. 2007. - №1. - С. 31-34.

33. Деркач С.В. Сравнительная оценка эффективности препаратов на основе макроциклических лактонов при гельминтозах мясного скота породы лимузин / Деркач С.В. // Сб.научных трудов ВНИИВЭА.-Тюмень, 2007.-№48.- С.40-42.

34. Дудин Т.М. Эффективность ивомека плюс при смешанных паразитозах крупного рогатого скота / Дудин Т.М. // Проблемы адаптациисельскохозяйственных животных в Сибири / Под ред. П.Н. Смирнова. Новосибирск, 1995. - С.236-238.

35. Иванюк В.П. Эффективность антгельминтиков при микстинвазии свиней / Иванюк В.П., Петров Ю.Ф., Бугаева А.А., Зеленуха Е.А. // Ветеринария. 2007. - № 3. - С. 29-31.

36. Ивермек-гель при лечении мелких домашних животных / Староверов С.А., Пристенский Д.В., Сидоркин В.А. и др. // Ветеринария. 2005. -№1.-С.55 -57.

37. Ивомек при паразитозах животных / Никулин Т.Г., Ятусевич А.И., Карасев Н.Ф., Арестов И.Г. // Ветеринария. 1990. - № 7. - С. 42-44.

38. Иммунный статус новорожденных телят, полученных от зараженных гельминтами матерей / Петров А.Ф., Гудкова А.Ю., Еремеева О.Р. и др. // Ветеринария. 2003 - № 7. - С. 30-32.

39. Иммунопаразитан обоснования к применению / Сергеев В.А., Воинов А.П., Искандеров М.И. и др.'// Ветеринария. - 2004. - №2. - С. 16-17.

40. Кабанов А.А. Искусственные антигены и вакцины на основе неприродных полиэлектролитов / Кабанов В.А, Петров Р.В., Хаитов P.M. // Итоги науки. Иммунологии. ВИНТИ. М., 1984. - С. 6-63. ■

41. Катеман Г. Контроль качества химического анализа / Катеман Г, Пийперс Ф.В. // Челябинск, 1989, 448 с.

42. Кленова И.Ф. Зарубежные ветеринарные препараты в России: Справочник / Кленова И.Ф., Илюхина И.Н., Написанова JI.A. М.:

43. Компания Эверес, 1999.- 313с.

44. Клозантин 20 % перспективный препарат широкого спектра противопаразитарного действия / Дриняев В.А., Новик Т.С., Колесников В.И.,.Оробец В.А. и др. // Ветеринария. - 2006. - №2.- С. 33-36.

45. Колесников В.И. Клозантин возможность лечения фасциолеза у животных без болевой реакции / Колесников В.И., Оробец В.А. // Зооиндустрия. - 2003. - №11. - С. 22-24.

46. Корешков Н.М. Эффективность препаратов макроциклических лактонов при нематодозах животных. // Актуальные проблемы ветеринарии. / Материалы межд. Конф. Барнаул, 1995. -С. 129.

47. Коротких М.Н. Влияние антгельминтика аверсект-2 на иммунный статус организма овец / Коротких М.Н., Третьяков A.M., Евдокимов П.И. // Труды Кубанского государственного аграрного университета. -2009. -№1. ч.1. - С. 160-161.

48. Кулица М.М. Становление и современное состояние промышленного производства препаратов авермектинового ряда в России / Кулица, М.М., Мирзаева К.М., Зиновьев О.А. // Ветеринарная медицина.- 2005, №3-4.- С.11-13.

49. Мазур О.Е. Иммунный статус овец на фоне дегельминтизации альбамелином и аверсектом-2 / Мазур О.Е., Антухаев И.К., Шабаев В.А. //Ветеринария. 2005. - №1. - С. 32-35.

50. Мальцев K.JI. Диктиокаулез молодняка крупного рогатого скота / Мальцев К.Л., Архипов И.А., Кидяев В.И. // Ветеринария. 2005. - №5. - С. 30-32.

51. Мальцев К.JI. Легочные стронгилятозы животных в Центральной зоне Европейской части РФ (эпизоотология, меры борьбы): Автореф. дис. . док. вет. наук / К.Л. Мальцев: ФГОУ ВПО «Нижегородская гос. сельскохозяйственная академия»,- Н. Новгород, 2006. 42 с.

52. Мамыкова О.И. Способ коррекции нарушений иммунобиологических показателей с помощью применения иммуностимуляторов: / Тезисы докл. научн. конф. СПб., 1994. - С. 86-87.

53. Маннапова Р.Т. Коррекция иммунитета при ассоциативной инвазии лошадей / Маннапова Р.Т., Галин З.Р. // Ветеринария. 2008. - №7. - С. 33-36.

54. Манджиев О.Х. Авермектинсодержащие препараты против гельминтозов овец / Манджиев О.Х. // Ветеринария. 2004. - №3. - С. 11-12.

55. Манджиев О.Х. Эффективность некоторых авермектинсодержащих препаратов при лечении паразитозов крупного рогатого скота / Манджиев О.Х. , Гусейнов Н.Г. // Объединенный научный журнал. -2003. №2. - С. 72-74.

56. Мельницкая Т.И. Разработка технологии получения препарата Ниацид-гранулы и оценка его иммунобиологических свойств: Дис. .канд.биол. наук / Т.И. Мельницкая: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.-М., 2002. 115 с.

57. Мирзаева К.М. Действие препарата НИАЦИД плюс на иммунобиологические параметры животных / Мирзаева К.М. // Ветеринарная медицина. 2007. - №2-3. - С. 35-37.

58. Мирзаев М.Н. Эффективность и безвредность Ниацида / Мирзаев М.Н., Девришов Д.А., Савченков С.Н. // Ветеринария. 1997. - № 9.-С.26-27.

59. Мирзаев М.Н. Противопаразитарный препарат «НИАЦИД» (Биотехнологические основы биосинтеза, получения и применения в ветеринарии): Дис. . док. биол. наук / М.Н. Мирзаев: Акционерное общество «Биотехнология» в институте биотехнологии. - М.,1998.-312 с.

60. Мусаев М.Б. Противопаразитарная эффективность клозантекса / М.Б. Мусаев И.А. Архипов, K.JI. Мальцев и др. // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. М., 2004. - С. 263 - 265.

61. Морфологические и биохимические изменения крови свиней при трихинеллезе / Сапунов А .Я., Пшеничный А.А., Иващенко А.А. и др. // Ветеринария. 2005. - №7. - С. 28-31.

62. Онуфриенко М.Э. // Ветеринарная практика. 2002. -№2. -С.17-19.

63. Першин Г.Н. Определение среднесмертельной дозы / Першин Т.Н. // Фармакология и токсикология. 1950. - №3.- С.21-22.

64. Петров Ю.Ф. Сравнительное изучение эффективности некоторых антгельминтиков при трематодозах крупного рогатого скота / Петров Ю.Ф., Садов К.М., Еремеева О.Р., Волков А.Х. // Тр. Всерос. ин-та гельминтологии. Москва. - 2005. - Т. 41. - С. 286-293

65. Плиева A.M. Иммуносупрессия при экспериментальном эхинококкозе овец / Плиева A.M. // Ветеринария. 2007. - №3. - С.31-34.

66. Плохинский Н.А. Руководство по биометрии для зоотехников /Н.А. Плохинский. М.: Колос, 1978. - 256с.

67. Прохорова И.А. Изучение противопаразитарной эффективности новомека / Прохорова И.А. // Ветеринария. 2007. - №3. - С.14-17.

68. Прохорова И.А. Профилактика и лечение при паразитарных болезнях свиней / Прохорова И.А. //Ветеринария. 2006. - №1. - С. 14-16.

69. Ремез В.И. Эффективность подкожного введения ивомека при лечении саркоптоидозов овец и свиней / Ремез В.И. // Диагностика, лечение и профилактика инфекционных и паразитарных болезней с.-х. животных. Ставрополь. - 1984,- С. 23-25.

70. Розовенко М.В. Влияние новомека на морфо-биохимичсский состав крови свиней / Розовенко М.В., Родионова И.А., Рабинович М.И. // Ветеринария. 2001. - №8. - С.41-43.

71. Рославцева С.А. Новая группа инсектоакарицидов и нематоцидов / Рославцева С.А. // Агрохимия. 1987. - № 7 - С. 130-134.

72. Рославцева С.А. Современные инсектоакарициды / Рославцева С.А. // Агрохимия. 2008. - № 10 - С.82-86.

73. Савченков С.Н. Некоторые особенности технологии получения авермектинов / Савченков С.Н., Мирзаев М.Н., Девришов Д.А // Биотехнология.- 1997.- №3.- С.6-8.

74. Саушкин В.В. Влияние ивермага и альбазена на иммунобиологическую реактивность организма овец / Саушкин В.В., Топала А.С. // Ветеринария. 2007. - №12. - С. 30-32.

75. Сафиуллин Р.Т. Авермектины на российском ветеринарном рынке /

76. Сафиуллнн Р.Т. // Ветеринария. 2006. - №12. - С. 14-17.

77. Сафиуллин Р.Т. Эффективность ганамектина при гиподерматозе и стронгилятозах желудочно-кишечного тракта крупного рогатого скота / Сафиуллин Р.Т., Семенычсв А.В. // Ветеринария. 2006. - №4. -С. 8-10.

78. Сафнуллин Р.Т. Эффективность ганамектина при паразитарных болезнях свиней / Сафиуллин Р.Т., Хромов К.А. // Ветеринария. 2004. - №2. - С. 9-12.

79. Сафиуллин Р.Т. Роленол при фасциолезе и стронгилятозах крупного рогатого скота / Сафнуллин Р.Т., Хромов К.А. Беспалов О.А // Ветеринария. 2004. - №10. - С. 10-12.

80. Сафиуллин Р. Т. Эффективность цидектина, ивомека и пиперазина при кишечных нематодозах свиней. // Матер, докл. научн, конф. «Легочные и кишечные нематодозы человека и животных и меры борьбы с ними» -М., 1993. С.76-77.

81. Сафиуллин Р.Т. Экономическая эффективность субалина и абиктина при желудочно-кишечных болезнях поросят / Сафиуллин Р.Т., Тюрин И.Е. // Ветеринария. 2003. - №8. - С. 7-10.

82. Сенсибилизирующие свойства препарата Ивермек / Дауглиева Э.Х., Семенов С.В., Жемеричкин Д.А. и др. // Ветеринария. -2002.-№11.-С. 26-28.

83. Скосырских Л.Н. Ивомек при демодекозе крупного рогатого скота / Скосырских Л.Н. // Ветеринария. 1987. - № 12 - С. 46-47.

84. Сравнительная характеристика ивомека и аверсекта (АС-1) / Симецкий М. А., Удавлиев Д. И., Филиппов В. В. и др. // Ветеринария. 1994.1. С.42.

85. Стерлина Т.С Клозантин новая жизнь известного лекарства / Стерлина Т.С., Осеев А.В.// Рацветинформ. - 2007. - №3. - С. 13-14.

86. Тотиков, З.Д. Эфективность ивомека при диктиокаулезе овец. / Тотиков З.Д. // Бюл.ВИГИС.-М.1991.- Вып.53.-С.117.

87. Фрадкин В.А. Аллергены. М.: Медицина, 1978, с. 256.

88. Хаджиев И.М. Параметры острой токсичности ивермектина / Хаджиев И.М. // Бюл. ВИГИС. 1984. - №37. - С.47.

89. Хачатурян М.М. Антгельминтная эффективность ивомека, ринтала и фенкура при протостронгилидозах овец. / Хачатурян М.М. // Бюл. ВИГИС.-1989.-№52.-С.94-95.

90. Хачатурян М.М. Эффективность ивомека, ринтала, фенкура при смешанных протостронгилидозах овец в Армянской ССР. / Хачатурян М.М.,Сазанов A.M. //Бюл. ВИГИС,-1991. -№54.-С.110-111.

91. Хлопицкий В.П. Ивермаг при паразитозах крупного рогатого скота / Хлопицкий В.П., Воронкова В.В., Сафиуллин Р.Т., Попов В.И. // Ветеринария. 2006. - № 4. - С.27-30.

92. Хлопицкий В.П. Эффективность ивермага при смешанных паразитозах крупного рогатого скота / Хлопицкий В.П., Сафиуллин Р.Т. // Ветеринария. 2004. - №12. - С. 10-12.

93. Черепанов А.А. Резистентность гельминтов к антгельминтикам и методы их тестирования / Черепанов А.А., Кармалиев Р.С. // Ветеринария. 1992. - №9-12. - С. 31-34.

94. Шерстнёв В.В. Влияние противопаразитарного препарата Ниацид на показатели иммунобиологического статуса телят: Дисс. . канд. Биол. наук /В.В. Шерстнев: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. М., 2001.- 11 Ос.

95. Шерстнёв В.В., Мирзаев М.Н., Печникова Г.Н., Жарова Т.П., Девришов Д.А. Биологически активные метаболиты Streptomyces avermitilis /Материалы метод. И науч. Конф.//Сб. науч.трудов МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, -М,-2001., С.-138.

96. Эпизоотологический анализ фасциолеза крупного рогатого скота / Ярёменко Н.А., Кленова И.Ф., Горохов В.В. и др. // Ветеринария. -2005. -№4. -С.30-31.

97. ИЗ. Эффективность антгельминтиков при трематодозах жвачных животных / Петров Ю.Ф., Абдуллаев Х.С., Кузнецов В.М. и др. // Ветеринария. 2006. - №12. - С.34-37.

98. Эффективность абиктина при паразитарных болезнях северных оленей / Сафиуллин Р.Т., Газинский В.Н., Степкин Н.И. и др. // Ветеринария. 2003. - №4. - С. 27-30.

99. Эффективность цидектина при паразитарных болезнях жвачных животных в аридной зоне юга России / Лазарев Г.М., Пономарев И.А., Дурдусов С.Д. и др. // Ветеринария.- 1994.- № 2,- С. 29-32.

100. A Helminth Immunomodulator Reduces Allergic and Inflammatory

101. Responses by Induction of IL-10-Producing Macrophages / Schnoeller C., Rausch S., Pillai S. and et all // J. Immunol. 2008. - №6. - P.426 - 427.

102. ABC transporter modulation: a strategy to enhance the activity of macrocyclic lactone anthelmintics / Lespine A., Alvinerie M., Vercruysse J. and et all // Trend. Parasitol. 2008. - №8. - P.293.

103. Alternatively Activated Macrophages in Intestinal Helminth Infection: Effects on Concurrent BacterialColitis / Weng M., Huntley D., Huang F. and et all // J. Immunol. 2007. - №7. - P. 179.

104. Alvinerei M. Determination of ivermectin in milk by high performance liquid chromatography / Alvinerei M., Sutra J.F., Galtier P., Toutain P.L. // Arm. Rech. Vet. -1987. -18 P.269-274.

105. Antras V. Efficacite Closantel injectable surinfestation naturelle des bovins par Fasciola hepatica / Antras V., Mage C., Collet J.P. II Rev. med. vet. 1997. - №10. - P.777-780.

106. Benchaoui H.A. Determination of rafoxanide and closantel in ovine plasma by high performance liquid chromatography / Benchaoui H.A., McKellar Q.A. // Biomed Chromatogr. 1993. - №4. - P. 181 -183.

107. Brent R.L. Definition of a teratogen and the relationship of teratogenicity to carcinogenicity / Brent R.L. // Teratol. 1986. - N34. -P.359-360.

108. Campbell W.C. Ivermectin: a review of efficacy and safety / Campbell W.C., Benz G.V. // J. Vet. Pharm. and Therap. 1984 - №7 - P. 1 -16.

109. Campbell W.C. Ivermectin and Abamectin / Campbell W.C // J. Vet. Pharm. and Therap. 1989 - №3. - P. 3-7.

110. Characterization of local immune response against lungworms in naturally infected sheep / Gulbahar M.Y., Davis W.C., Yarim M. and et all // Veterinary Parasitology. 2009. - №3. - P. 285-294.

111. Clinical Toxicology of Commercial Products. H. Hodge H., Gosselin

112. R.E., Smith R.P. and et all / Acute Poisoning. Ed. IV. 1975. - 427 p.

113. Closantel, a new antiparasitic hydrogen ionophore. Van den Bossche H., Verhoeven H; Vanparus O. et all / Archives International's de Physiologie et de Biochemie. 1979. - №4. - P. 85-87.

114. Complete genome sequence and comparative analysis of the industrial microorganism Streptomyces avermitilis / Ikeda H., Ishikawa J., Hanamoto A. // Nature Biotechnology . 2003. - №2. - P.526 - 531.

115. Conole J. Some observations on the pharmacological properties of ivermectin during treatment of a mite infestation in mice / Conole J. , Wilkinson M.J., McKellar Q.A. // Contemp Top Lab Anim Sci. 2003. -№4. P.42-45.

116. Cooper J.R. The Biochemical Basis of Neuropharmacology / Cooper J.R., Bloom F.R., Roth R.H. //Oxford University Press. 1982. - №2.-P. 123.

117. Effect of parasitism with Nematodirus battus on the pharmacokinetics of levamisole, ivermectin and netobimin. Mckellar Q.A., Jakson F. Coop R.L. and et all. // Vet Parasitol. 1991.- №1-2. - P. 123-136.

118. Effect of Carbontetrachloride-Induced Hepatopathy on the Disposition Kinetics of Closantel in Goats / Jamir C., Debhath S.C., Kymar S. and et all // Iranian Journal of Pharmacology & Therapeutics. 2005. - №2. - P.76-79.

119. Fairweather I. Fasciolicides: efficacy, actions, resistance and its management / Fairweather I., Boray J. // Vet J.- 1999. №2. - P. 81 -112 .

120. Fisher M.H. Ivermectin and Abamectin / Fisher M.H., Mrozik H. //

121. Chemistry. 1989. -P. 1-23.

122. Gillan V. В cells play a regulatory role in mice infected with the L3 of

123. Brugia pahangi / Gillan V., Lawrence R., Devaney E. // Int Immunol . -2005. -№3. -P.373-382.

124. Gilleard J.S. Population genetics of anthelmintic resistance in parasitic nematodes / Gilleard J.S., Beech R.N. // Parasitology. 2007. - № 8. - P.40-47.

125. Gokbulut C. Plasma pharmacokinetics and faecal excretion of ivermectin, doramectin and moxidectin following oral administration in horses / Gokbulut C., Nolan A.M., McKellar Q.A. // Equine Vet J. 2001. -№5. - P.7-8.

126. Gray C. A. Interferon-gamma and nitric oxide production are not required for the immune-mediated clearance of Brugia malayi microfilariae in mice / Gray C. A., Lawrence R. A. // Parasite Immunol . 2002. - №12. -P. 329-336.

127. Hejmadi M.V. L-glutamate binding sites of parasitic nematodes: an association with ivermectin resistance / Hejmadi M. V., S. Jagannathan N. S., Delany G. C. Coles. //Parasitology. 2000. - № 120. - P. 535-545.

128. Hennessy D.R. Comparative pharmacokinetic disposition of closantel in sheep and goats / Hennessy D.R., Sangster N.C., Steel J.W., Collins G.H. J. // Vet. Pharmacol. Therap. 1993. - №2. - P.54-60.

129. Ivermectin: a potent new antiparasitic agent / Campbell W.C., Fisher M.H., Stapley E.O. and et all // Science. -1983. -№7. P.923-928.

130. Khera K.S. Material toxicity a possible factor in fetal malformation in mice / Khera K.S. // Teratology - 1984 -№29 - P.411-416.

131. Lawrence R. A. Immunity to filarial nematodes / Lawrence R. A. // Vet Parasitol. 2001. - №2. - P.33-44.

132. Michiels M. The metabolism and fate of closantel flkiver in sheep andcattle / Michiels M., Meuldermans W., Heykants J. I I Am. Chem. 1986. -№9. - P.191.

133. Perez A. Actividad closantel a sarna ovina naturalmente adquirida / Perez Arrieta A., Vidal J., Aloisi G. // Gaseta, Veterinaria -1982 -V.44. -№371 P. 683-685.

134. Prichard R.K. Ivermectin resistance and overview of the Consortium for Anthelmintic Resistance SNPs. / Prichard R.K. // Expert Opin Drug Discov. 2007. - №2. - P.41-52.

135. Regulation of Helminth-Induced Th2 Responses by Thymic Stromal Lymphopoietin / Thirumalai R., Ramalingam J.Т., Pesce J. and et all // Immunol. 2009. - №10. - P. 182.

136. Schnitzerling, H.J. Normal phase liguid chromatographic determination of nanogram quantities of ivermectin in cattle blood or plasma / Schnitzerling H.J., Nolan J.J. // Assoc. Office. Anal. Chem. 1985. №1. -P.36-40.

137. Springer J.P. The absolute stereochemistry and configuration of avermectin Bla / Springer J.P.,Arison B.H., Hirshfield J.M., Hoogsteen K. // J.Am.Ghem.Soc. 1981.-V.103-P.4221-4224.

138. Stapley E.O. Avermectins, antiparasitic lactones produced by Streptomices Avermitilis isolated from a soil in Japan / Stapley E.O.,Woodruff H.B // Frends in Antibiotic Research. 1982,- P. 154-170.

139. Swan, G.E. Efficacy of ivermectin against induced gastrointestinal nematode infections in goats / Swan G.E.,Gross S.J. // Vet.Rec.,1985.-V. 117.-P.147-149.

140. Swan G.E. Intravascular Plasma Disposition and Salivary Secretion of Closantel and Rafoxanide in Sheep / Swan G.E., Koeleman H.A., Steins H.S., Mulders M.S. // J South Afri Vet Assoc. 1999. - №9. - P.5-9.

141. Stromberg, B.E. Activity of closantel against experimentally induced Fascioloides magna infection in sheep / Stromberg B.E., Schlotthauer J.C., Seibert B.P., Conboy G.A. // Am. J. Vet. Research 1985. - №12.- P.446

142. Sutherland I.H. Ivermectin: a novel antiparasitic agent / Sutherland I.H //Vet. Rec.- 1981. №10 - P.228.

143. The detection of anthelmintic resistance in nematodes / Coles G., Jackson F, Pomroy W.E. and et all / Veterinary Parasitology. 2006.- №8. -P.167-185.

144. The degradation of dung produced by cattle treated with an ivermectin slow-release bolus / Barth D., Heinze-Mut Z.E.M., Roncalli R.A. and et all // Vet. Parasitol. -1993. V.48. - P. 215-227.

145. The prevalence of anthelmintic resistance in nematode parasites of sheep in southern Latin America: Brazil. / Echevarria F., M. Borba, A. Pinheiro and et all // Vet. Parasitol.- 1996. -№ 62. P. 199-206.

146. Tyrrell K. Overcoming Macrocyclic lactone resistance in Haemonchus contortus with pulse dosing of Levamisole / Tyrrell K., Leo F. / Veterinary Parasitology. 2009. -№11.- P.98-102.

147. Van Cauteren H. Toxicological properties of closantel / Van Cauteren H., Vanderberghe J., Herin V. // Drug. Chem. Toxicology. 1985. - V. 8. -№ l.-P. 101-123.

148. Varady M. Comparison of two versions of larval development test to detect anthelmintic resistance in Haemonchus contortus / Varady M., Cobra J., Letkova V., Kovac G. // Veterinary Parasitology. 2009. - №2-3. - P.267-271.

149. Waruiru R.M. The efficacy of closantel and rafoxanide against fenbendazole- and levamisole-resistant Haemonchus contortus in small ruminants / Waruiru R.M. // Vet. Res. Commun. 1997. - №1.- P.493-497.

150. Wislocki P.G. Environmental effects of the usage of avermectins in livestock. / Wislocki, P.G., Halley B.A., Vanden H. // Veterinar Parasitology. 1993. - №4. - P.109-125.

151. Wyk J.A. Resistance of field strains of Haemonchus contortus to ivermectin, closantel; rafoxanide and the benzimtdazoles in South Africa /