Супрамолекулярные биохимические системы в исследованиях биомембран и биологических жидкостей животных

Зайцев, Сергей Юрьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Супрамолекулярные биохимические системы в исследованиях биомембран и биологических жидкостей животных
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Супрамолекулярные биохимические системы в исследованиях биомембран и биологических жидкостей животных"

На правах рукописи

ЗАЙЦЕВ Сергей Юрьевич

ии3057352

СУПРАМОЛЕКУЛЯРНЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ В ИССЛЕДОВАНИЯХ БИОМЕМБРАН И БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ ЖИВОТНЫХ

03.00.04 - Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва 2007

003057352

. Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина», в Институте биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской Академии Наук.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Букова Наталья

Константиновна,

доктор биологических наук, профессор Карпенко Лариса Юрьевна; доктор биологических наук, профессор Клопов Михаил Иванович.

Ведущая организация - ГНУ «Всероссийский государстЕзенный научно-исследовательский институт животноводства» РАСХН.

.уАО

Защита'состоится 23 мая 2007 года в часов на заседании

диссертационного совета Д 220.042.04 при ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» по адресу: 109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. 377-9383.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И, Скрябина».

Автореферат разослан «» апреля 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Фомина В.Д.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема создания, изучения и применения супрамолекулярных биохимических систем (СБС) с заданными свойствами, представляющих собой высокоорганизованные комплексы белков, липидов и других биологически активных соединений (БАС), является современной и находится «на стыке» биологической и биоорганической химии; био- и нанотехнологии; фундаментальной медицины и ветеринарии. Решение фундаментальных и прикладных аспектов этой комплексной проблемы имеет важное значение для биохимических исследований биологических жидкостей животных, моделирования биомембран, создания бионаноматериа-лов и т.д. [Афонский С.И., 1966; Овчинников Ю.А., Иванов В.Т. й др., 1974; Березин И.В., 1985; Friedrich Р., 1986; Kuhn Н„ Moebius D„ 1993; Лен Ж.-М, 1998; Lvov У., Moehwald Н., 2000-2006 и др.].

Среди СБС наибольшее значение имеют комплексы на основе белков, прежде всего - ферментов, применяющиеся в медицине, сельском хозяйстве, ветеринарии, а также в промышленности: пищевой, фармацевтической, косметической, текстильно-кожевенной. К настоящему времени накоплен значительный экспериментальный материал и сформулированы теоретические представления о методах иммобилизации различных ферментов [Mosbach К., 1976; Березин И.В. и др., 1987; Кабанов В.А. и др., 1987; Вудворд Дж., 1988; Варфаломеев С.С. и др., 1999; Штильман М.И., 2006 и др.], однако исследований по направленному изменению ферментативной активности липаз в трехкомпонентных комплексах на основе двух противоположно заряженных полимеров до начала наших работ не проводилось. Многие ферменты, детектируемые в плазме крови и широко применяемые для диагностики физиолого-биохимического статуса животных, можно рассматривать как «эндогенные» СБС высоких уровней организации, поскольку они состоят из нескольких полипептидных цепей (субъединиц), которые, комбинируясь различными способами, образуют четвертичную структуру фермента. Так, лактатдегидрогеназа (ЛДГ) состоит из 4 субъединиц 2 типов (Н и М); креатиншназа (КК) - из 2 субъединиц 2 типов (В и М). Более того, у животных обнаружено 5 изоформ ЛДГ и 3 изофор-мы КК. Все эти ферменты и их изоформы в крови животных составляют характерный набор («ферментные» СБСФ или «ферментный профиль»), который зависит от патологических изменений органов и тканей животных, что явилось нашей базовой моделью для био-

химических исследований крови животных и совершенствования биохимических методов анализа. Новыми «интегральными» характеристиками не только плазмы крови, но и других биологических жидкостей являются данные по их поверхностному натяжению (ПН), которые в последние годы используются в диагностике заболеваний человека в ряде научно-медицинских центров ФРГ и Украины Поэтому актуальным является клиническое исследование ПН плазмы крови животных в сравнении с данными биохимических анализов,'которое выполнено'для животных в ФГОУ ВПО МГАВМиБ впервые в мире.

Важную роль играют СБС на основе липидов, что обусловлено их знаМением в биоэнергетике, биомембранах, биологических жидкостях животных. Известно, что биохимический (в т. ч. - липидный) состав кроёй и молока претерпевает значительные изменения во время лактации у коров. Однако детальные исследования изменений липидно-го 'сбЬтава молозива и молока коров по семидесяти жирным кислотам при различных состояниях животных до сих пор не проводились. Эти исследования становятся все более актуальными в связи с вопросом о качестве и подлинности вырабатываемых молочных продуктов. Другим важным аспектом «липидных» СБСП является структурно-функциональное моделирование биомембран, что привлекает все большее внимание ученых [Singer S.J., Nicolson G.L., 1972; Бергельсон Л. Д.7 í 975, 1981; Лев A.A., 1976; Овчинников Ю.А., 1987; de Kruijff В., 1987; Moehwald H, Moebius D„ 1991; Chapman D., 1993; Теннис P., 1997; Agre P., MacKinnon R., 2003 и др.]. Актуальным является исследование фрагментов биомембран, комплексов липидов, белков, БАС и их аналогов в монослоях, которые представляют собой «ли-пидные» и «синтетические» СБСЛ, имеющие как фундаментальное (для моделирования биопрсцессов самоорганизации, молекулярного узнавания и т.д.), так и прикладное значение (для создания бионано-материалов и т.д.).

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось создание и структурно-функциональное изучение супрамолекулярных биохимических систем (СБС) с заданными свойствами и уровнями организации для моделирования ряда биологических процессов, совершенствования биохимических методов исследований биологических жидкостей животных, создания био- и наноматериалсв.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: - разработать принципы систематизации СБС на основе ферментов (СБСф) и липидов (СБС„) по уровням структурной организации;

- разработать модель и определить константы гидролиза липазами липидоподобных субстратов в монослое (как СБСФ 1го уровня);

- изучить влияние поверхностно-активных веществ и полимерно-ионного окружения на каталитические свойства СБСФ 2го - 4го уровней (на основе липаз и трипсина) для создания биоматериалов;

- выявить корреляцию «ферментного профиля» сыворотки крови (как СБСф 5го уровня) у собак старших возрастов с изменениями в деятельности сердца;

- разработать методик;/ и провести исследования поверхностного натяжения модельных систем и сыворотки крови здоровых лошадей (как СБС 6го уровня) в сравнении с биохимическим анализом крови;

- изучить влияние «экзогенной» СБС (на примере биологически активной добавки «Nurisol») на «эндогенную» СБС (на примере изменений жирнокислотного состава молозива и молока коров);

-•! изучить изменения жирнокислотного состава молозива и молока (как СБСЛ 1го уровня) у коров в течение первых недель лактации при сравнении здоровых и больных животных;

- получить и исследовать СБСЛ 2го и 3го уровней (различные типы рлонослоев на основе липидов с включенными белками и пептидами) как моделей биомембран, био- и наноматериалов;

- получить и изучить монослои мембранных фракций клеток с различным содержанием П-гликопротеина (как СБСЛ 4го уровня);

- получить и изучить монослои новых мембрано-активных соединений - амсЬифильных фотохромных комплексонов (АФК) как «синтетических» СБС, моделирующих определенные структурно-функциональные параметры СБСЛ 2го - 4го уровней.

Научная новизна работы. Разработаны принципы создания и изучения сулрамолекулярных биохимических систем с заданными свойствами и уровнями организации. На основании детального исследования особенностей структурной организации «ферментных» v «липидкых» СБС предложена их систематизация по уровням с регулируемым составом. Разработана модель и определены константы гидролиза липазами новых липидоподобных субстратов в монослое на границе раздела фаз. Получены комплексы на основе липазы и двух полиэлектролитов, проявляющие повышенную каталитическую активность. Предложена схема формирования этих многокомпонентных СБСФ и показано влияние полимерно-ионного окружения на ферментативную активность липазы из поджелудочной железы свиней, бактериальных липаз и трипсина.

Разработана методика определения поверхностного натяжения модельных СБС и сыворотки крови животных (как «эндогенной» СБС высшего уровня). Впервые определены характеристические ' значения ПН у здоровых лошадей и обнаружены достоверные отличия у жеребцов й кобыл. Показано, что статические (начальные) ■ значения ПН определяются липидным и солевым составом сыво-Г: ротки крови, а динамические значения ПН - постепенной адсорбцией белков сыворотки крови из объёма на границу раздела фаз.

Впервые проведено сравнительное изучение «ферментного профиля» сыворотки крови (как;СБСф 5го уровня) у собак старших возрастов в норме и при хронической сердечной недостаточности (ХСН) на основании: как определения активности аланинами-Нотрайсферазы (АЛТ), аспартатамйнотрансферазы (ACT) и у-глутамилтрансферазы (ГГТ), так и содержания изоферментных '"'фо|Зм лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и крёат'йНкиназы (КК). Важно, что во всех контрольных группах происходит снижение активности этих ферментов с возрастом; а во всех опытных группах (при ХСН) происходит увеличение в 2-4 раза активности АЛТ, ACT и ГГТ; в 8 раз активности ЛДГ (преимущественно за счет фракций ЛДГ, и ЛДГ2); в 4 раза активности КК (за счет фракций КК-МВ и КК-ММ).

Впервые детально*исследовано изменение содержания большого числа (71ой) жирных кислот (ЖК), в том числе 33х изомеров ЖК, в молозиве и молоке (как «ЖК профиль» или СБСЛ 1го уровня) у коров в первые недели лактации в норме и при патологии, а также при введении в рацион добавки «Nurisol» (как «экзогенной» СБСЛ).

Изучены мембраны на основе липидов, пептидов и беЛков (СБСЛ 2го - 4го уровней), перспективные для моделирования биомембран и создания биосенсоров. Определены 'условия получения монослоев мембранных фракций клеток с различным содержанием (до 32%) П-гликопротеина (ПГП). Максимальней эффект действия верапаллила (модулятора ПГП) наблюдается, когда количество молекул верала-мила в субфазе сравнимо с количеством молекул ПГП в монослое, что указывает на специфические изменения в структуре мембранных фракций клеток. Детально изучены «синтетические» СБСЛ 2го-4го уровней на основе новых меМбранно-актйвных соединений (АФК) и разработаны принципы создания био- и наноматериалов с комплексом заданных свойств. ' 1

Теоретическая и практическая значимость'работы. Определены оптимальные условия для иммобилизации лйпаз в комплексы

с полиэлектролитами, позволяющие получить биоматериалы на основе СБСф с заданными свойствами. На основе сравнительного исследования различных комплексов липаз микробного и животного происхождения получены ферментные препараты с регулируемой активностью в широком температурном интервале, что представлено в заявках автора и др. №2006111372, №2006111373 и №2006111374 на получение патентов РФ на изобретения (положительные решения от 13.02.2007 г. с приоритетом от 14.06.2006 г.).

Разработана методика проведения исследований ПН сыворотки крови лошадей и показана перспективность внедрения в практику ветеринарии, зоотехнии и биологии достаточно простого и удобного метода экспресс-диагностики физиолого-биохимического статуса животных. Результаты изучения биохимических показателей крови у собак при ХСН показали возможность комплексной диагностики ХСН и разработки эффективных методов коррекции возникших изменений, что используется в работе ветеринарных клиник г. Москвы.

Впервые получен «ЖК профиль» по 71ой жирной кислоте молока и молозива коров черно-пестрой породы в зависимости от периода лактации, состава рациона и состояния здоровья животных, что имеет огромное значение при разработке процессов получения диетических молочных продуктов и необходимо для разработки нормативных документов на молочную продукцию (ГОСТ Р 522532004 и др.), где ЖК состав является одним из показателей, позволяющих выявить фальсификат и недоброкачественную продукцию.

Изучены различные типьГлипид-белковых монослоев и показана их эффективность для моделирования процессов молекулярного узнавания и транспорта в биомембранах, что важно для ряда биохимических методов анализа. Разработаны методики и получены серии образцов нанокомпозитных материалов на основе новых мембранно-активных соединений (АФК) для детекции катионов металлов и диаминов: акты №1, №2, №3 от 06.11.'2006 г. при сдаче темы ИН-12.1/015/027 Минобр'науки РФ по гос. контракту №02.434.11.2039 от 09.11.2005 г., выполнейной совместно с учёными ЦФ РАН с получением патента РФ на изобретение №2292368 с приоритетом от 27.12.2005 г.

высшей квалификации по специальности 012300 - Биохимия, а также для подготовки аспирантов, докторантов и соискателей в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по специальности 03.00.04 - Биохимия.

Основные положения и результаты, выносимые на защиту:

- принципы систематизации и особенности структурной организации СБС «на основе ферментов» (СБСФ) и «липидов» (СБСЛ);

- разработанная модель и полученные константы гидролиза липазами липидоподобных субстратов в монослое (СБСФ 1го уровня);

- данные по влиянию поверхностно-активных веществ и полимерно-ионного окружения на каталитические свойства СБСФ 2го - 4го уровней (из липаз и трипсина) и созданные на их основе биоматериалы;

- закономерности изменения «ферментного профиля» сыворотки крови (как СБСф 5го уровня) собак старших возрастов в норме и при хронической сердечной недостаточности;

- разработанная методика и данные исследования поверхностного натяжения модельных систем и сыворотки крови здоровых лошадей (как СБС 6го уровня) в сравнении с биохимическим анализом крови;

- данные по влиянию «экзогенной» СБС (на примере биологически активной добавки «Nurisol») на «эндогенную» СБС (на примере изменений жирнокислотного состава молозива и молока коров);

- закономерности изменения жирнокислотного состава молозива и молока (как СБСЛ 1го уровня) у коров в течение первых недель лактации при сравнении здоровых и больных животных;

- данные по СБСЛ 2го и 3го уровней (различные типы монослоев на основе липидов с включенными пептидами и белками) как моделей биомембран и перспективных материалов для биосенсоров;

- данные по монослоям мембранных фракций клеток с различным содержанием П-гликопротеина (как СБСЛ 4го уровня);

- закономерности структурно-функциональных изменений для новых мембранно-активных соединений (АФК) в модельных мембранах (как «синтетических» СБСЛ 2го- 4го уровней) и нанокомпозитные материалы на их основе с сенсорными свойствами.

общей и прикладной химии, (С-Петербург, 1998; Казань, 2003); 2-я и 3-я Международные конференции "Химия высокоорганизс?ванных веществ и научные основы нанотехнологии" (С-Петербург, ,1998, 2001); 7th, 8th, 9th, 10th European Conferences on Thin Organized Films (Potsdam, Germany 1998, Otranto, Italy, 2001, Valladofid, Spain, ,2004, Riga, Latvia, 2006); International Symposium "Lipid and surfactar*t.dis-persed systems", (Moscow, Russia, 1999); 9th International conference of Organized Molecular Films (Potsdam, Germany, 2000); Всероссийская конференция с международным участием «Сенсор-2000»,(С,-Петербург, 2000); 3-я Национальная конференция RQH3 (Москва, 2001); XX International Conference on Photochemistry (Moscow, 2001); 3-ий Съезд биохимического общества РФ (С-Петербург--2002); Всероссийская научно-производственная конференция по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); International Conference "Nanotechnologies in the area of physics/chemistry and biotechnology" (St. Petetsburg, Russia, 2002); 2nd, 3rd International Symposium "Molecular Design and Synthesis of Supramolecular Architectures" (Kazan, Russia, 2002, 2004); XIXth IUPAC Symposium on Photochemistry (Budapest, Hungary, 2002); XVIth, XVIIth European Conference Chemistry at Interfaces Conference (Vladimir, Russia, 2003, Loughborough, UK, 2005); XXVIII, XXX International Symposium on Macrocyclic; Chemistry (Gdansk, Poland, 2003, Dresden, Germany, 2005); Всероссийская научно-техническая конференция (Мурманск, 2003); IX international conference The problems of solvation and complex formation in solution" (Plyos, Russia, 2004); 2, 3 и 4 Всероссийские Каргинские Конференции (Черноголовка, 2000; МГУ, Москва, 2004 и 2007); European Polymer Congress (Moscow, Rus'sia;'!2005); Xth international seminar on inclusion compounds (Kazan, Russia, 2005); Московские международные ветеринарные конгрессы (Москва, 2004-2006); Международная научно-производственная конференция агробиологической промышленности (Курск, 2006); Международная научно-практическая конференция по болезням лошадей (Москва, 2006); На^но-практические конференции ИБХ PAW~(Mock-ва, 1996-2004) и ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2001-2006).

Публикации результатов исследований. По' теме диссертации опубликовано "?80 печатных работ, из них: 3 книги, 88 статей в журналах и научных сборниках (из них в изданиях, рекомендованных ВАК РФ: 24 статьи в российских и 26 статей в международных рецензируемых журналах), 89 тезисов докладов; г^;-гак5ке 1 патент и 3 положительных решения на патенты РФ, 9 методических работ.

9 . ■ - ■

Личный вклад автора. Автором предложены основные направления исследований и разработаны важнейшие методики для экспериментального подтверждения предложенных им идей. Все ключевые эксперименты выполнены лично автором и лишь второстепенные - аспирантами и сотрудниками при участии автора. Лично автором проведена основная; работа по обработке и оформлению полученных результатов, по Написанию всех научных проектов и публикаций. В исследованиях,'выполненных совместно с другими лабораториями в России и за рубежом, вклад автора заключался в обсуждении и постановке задач, в проведении экспериментов са-!мим автЬром в период его регулярных внутренних и заграничных командировок в эти лаборатории, в обработке и оформлении результатов в виде печатных работ.

1 Объем и структура диссертации. Материалы диссертационной работы изложены на ¿tfi страницах машинописного текста. В работе приведено 63 рисунков и таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), результатов экспериментов и их обсуждения (главы 2, 3 й 4), выводов, списка литературы и приложений. В список литературы включено отечественных и З&У зарубежных источников. ■

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исслёдования проведены в -1995-2006 гг. по темам НИР ФГОУ ВПО МГАВМиБ й ИБХ РАН;-ло-цаучным проектам российского фон-'¡ца фундаментальных исследований (РФФИ) №№ 95-03-08496, 9803-33318, 98-03-04135, 01-03-33287, 02-03-04004, 04-03-32791 (199&-2006 г.т.); по проекту РФФИ ориентированные фундаментальные' исследования 05-03-08162 (2005-2Ó06 г.г.); грантам 436 RUS 113/686 и 113/697 Немецкого научно-исследовательского общества (ННИО 1998-2005); фанту ИНТАС 2001-0267 Европейского сообщества (2001-2005 гг.); по теме ИН-12.1/015/027. Минобрнауки РФ на 2005-2006 гг. по ФНТЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» Минобрнауки РФ.

Matepiiaríbi. Работа по созданию и исследованию полиэлектро-ли-гных комплексов с иммобилизованными липазами (ПЭЛК); по межфазной тензиометрии и исследованию поверхностного натяжения (ПН) белок-липидных систем и крови животных проводилась как в России, так и в Макс-Планк-Институте коллоидной химии (МПИ-КХ)

в ФРГ. Изготовлены 340 образцов ПЭЛК различных типов; изучены их структурно-механические и каталитические свойства; выданы рекомендации.по выбору оптимальных композиций ПЭЛК. В работе использовались липазы, выделенные из: Pseudomonas fluorescens с начальной активностью 36 Е/мг и 2998 Е/мг (обозначены как препараты Л-1 и Л-2); поджелудочной железы свиней (Над pancreas) с активностью 42 Е/мг (обозначена как Л-3); Mucor javanicus с активностью 696 Е/мг (обозначена как Л-4), а также трипсин из поджелудочной железы свиней с активностью 2-104 БАЕЕ Е/мг. Использованы синтетические полиэлектролиты - 3 образца полианионов: по-листиролсульфонат натрия (ПСС) с ММ = 6,6-104, 1,83-105 или 1,0-10® г/моль; 2 образца поликатионов: полидиаллилдиметиламмо-ний хлорид (ПАМА) с ША = 2,4-105 г/моль или сополимер ПАМА/акриламида с ММ = 1,44-106 г/моль и содержанием ПАМА звеньев в 47 мол. % (СОП-47).

Исследованы 75 проб сыворотки крови, отобранных на Центральном московском ипподроме от 18 здоровых лошадей разного пола и возраста. Исследованы 148 проб сыворотки крови, взятых на базе ветеринарной клиники «Центр» от 37 собак (пудели-кобели), которых разделили на группы: 1) здоровые животные (15), 2) собаки (22), страдающие хронической сердечной недостаточностью. Собаки всех групп были разделены на три подгруппы в зависимости от возраста: 6-7 лет, 8-9 лет, 10-11 лет. Все животные подбирались по принципу аналогов. Кровь у всех животных брали в утренние часы натощак и получали сыворотку стандартным центрифугированием.

Работы по изучению особенностей жирнокислотного состава молозива и молока в первые недели лактации у коров черно-пестрой породы в норме и при патологии, а также при добавлении в рацион «Nurisol», выполнены совместно с ГУ НИИПХ (г. Москва), МУП ГПЗ «Петровское» (Московская область), Аграрным университетом Хо-энхайм (ФРГ). Всего исследовано проб молозива и молока - 647, в каждой из которых определено по 71ой жирной кислоте. Пробы отбирались у коров, подобранных в группы по принципу аналогов: в 1ой серии опытов - 10 коров, во 2ой - 19 коров, во Зеи - 16 коров.

Эксперименты по моделированию мембран проводились как а ФГОУ ВПО МГАВМиБ, так и в ИБХ РАН, ЦФ РАН и в Макс-Планк-Институте биофизической химии (г. Геттинген, ФРГ) с получением и исследованием 820 образцов 20 типов модельных мембранных систем и 480 образцов 40 типов композитных материалов.

Методы. Относительную активность трипсина в полиэлэктролит-ных комплексах определяли в % к активности контрольного раствора трипсина (в нормальных условиях), которую измеряли спеюгрофотометрически по субстрату (1 мМ раствор БАЕЕ) при 255 нм в 50 мМ Tris-HCI буфере с рН 7,5. Относительную активность липазы в ПЭЛК определяли в % к активности раствора данной липазы (в н. у.), которую измеряли методом потенциометрического титрования субстрата (0,1 М раствор триацетина) в смеси 0,05 М CaCI2 и 0,05 М NaCI при рН 7,0. Данные обработаны с помощью программы «Stat Talk». Измерения светорассеяния ПЭЛК проводили в МПИ-КГ (ФРГ) на приборе «Sofica» (Франция); центрифугирование П£ЭЛК на «Optima L 70» (США). Измерение динамического поверхностного натяжения белок-липидных систем и сыворотки крови лошадей проводилось с помощью приборов «ВРА-1Р» и «РАТ» (ФРГ) методами падающей капли и максимального давления в пузырьке. Биохимический анализ крови животных проводился на приборах КФК-2-УХЛ (РФ) и «Helios» (ФРГ) с использованием биохимических наборов фирм «Human» и «Диаком». Исследования активности АЛТ, ACT, ГГТ, ЛДГ и КК в крови собак проводили фотометрическим методом; изоферментный спектр ЛДГ и КК определяли методом электрофореза в ПААГ. Определение жирнокислотного состава молозива и молока производили по их метиловым эфирам методом газожидкостной хроматографии на хроматографах «Varian Star 3400 СХ» и «Varían 3900» (США) по методике ГУ НИИПХ. Для исследования биологических и модельных мембран (moho-, би- и мультислоев, тонких пленок) использовались методы: рефлектометрия и микроскопия Брустеровского рассеивания (БАР и БАМ) на установках «BAR-NFT» и «ВАМ-1» (ФРГ). спектроскопия резонансного комбинационного рассеяния (РКР) и гигантского комбинационного рассеяния (ГКР) на установках «РНО double Raman Spectrometer» (Франция), сканирующая туннельная микроскопия (СТМ) и микроскопия атомных сил (АСМ) на установках «Nanoscope 3» и «Nanoscope 4» (ФРГ) и «СММ-2000» (РФ) в сочетании с методами изучения изотерм поверхностного давления и потенциала на установках «Lauda 2FW» (ФРГ) и «NFT-NIMA» (ФРГ-Англия), спектров флуоресценции на спектрофлуориметре «Shimadzu RF 5001» (Япония) и спектров поглощения на спектрофотометрах «Beckman» (США),«Hitachi 330» (Япония). Только сочетание этих

современных методов позволяет получить адекватную структурно-функциональную информацию о таких сложных СБС

Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета программ для Windows. Определены критические 7 значения критерия достоверности на осноае распределения Стъгадента с учетом принятых для научных экспериментов величин уровня значимости 0,05 (*); 0,01 {**); 0,001 (***).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Структурная организация и свойства сулрамолекулярных ферментных систем и биоматериалы на их основе

Ферментативный гидролиз j гипидоподобных субстратов в монослоях под действием гипаз является примером функционирования простейшей по структурной организации супрамолекулярной биохимической системы {ферментной СБСФ 1го уровня). В работах Verger R.. de Haas G.H. и сотр. (1973-1990) изучался гидролиз в монослоях под действием липаз, но только традиционных липидов и кинетические параметры определены в «двумерных» величинах, не-приемлимых дпя сравнительного анализа. Нами предложена модель межфазного ферментативного гидролиза новых липидоподоб-ныхсубстратов (Вал-ПГ, Лей-ПГ, Фен-ПГ) в монослое липазой (Л-1).

о |, а э о о I

S ШЙ

е Е. V р V ■ ' J- ■■ >f V '

Рис. 1. Строение новых лмлидопо-добных субстратов: производных глицерина, жирных кислот и аминокислот (Вал-ПГ, Лей-ПГ, Фзн-ПГ) Рис. 2. Модель ферментативного гидролиза липмдоподобных субстратов в монослое, где I - объем субстрата в монослое, V-объем водной фазы

Впервые показано, что Вал-ПГ, Лей-ПГ, Фен-ПГ (рис. 1) способны образовывать монослои на границе раздела фаз (рис. 2) с дав-

лениями их коллапса (33-34 мН/м) и площадями на молекулу (0,85, 0,76 и 0,68 нм2), указывающими на достаточно прочную и плотную упаковку молекул в монослое. Для описания кинетики ферментативного гидролиза предложена модель: субстрат (Б) находится в монослое на поверхности водной фазы (объем монослоя I); фермент (Е) распределен между водной фазой (объемом V) и монослоем субстрата; причем молекула фермента, контактирующая с монослоем, немедленно образует фермент-субстратный комплекс (рис.2). По нашей модели на основании уравнений материального баланса для фермента, субстрата и условия стационарности ([ЕЗ]=соп81.) получим уравнение скорости реакции (у0) в виде (1),

у„ = ^,[Я5,] = -___(1) где [Е]0 - концентрация

■ *"" фермента; [5]3 - кон-

к- г центрация субстрата.

" В выбранных нами условиях [Е]0 варьируется от 0,75-Ю"11 до 3,40-10"1? М, а отношение 1А/ составляет 1 ¡4-1,8-10"7, т.е. вкладом [Е]0 в знаменателе уравнения (1) следует пренебречь. Однако, даже в таком случае из (1) можно получить только отношения констант. Для определения отдельно каталитической константы (ккат) разработан новый экспериментально-теоретический подход (описанный в диссертации), упрощающий уравнение (1) до (2):

К -' ^ М(каж) у . л

(2) Для определения Км(каж) приравняем правые (3) части уравнений 1 и 2 и получим . ■ уравнение (3):

Эффективные константы гидролиза липазой в монослое липофиль-ных субстратов (Вал-ПГ, Лей-ПГ и Фен-ПГ) составляют ккат (13,0; 7,0 и 11,0 с"1); Км(каж) (2,0; 1,9 и 1,7*10"® М). Полученные значения ккат свидетельствуют о более высоких скоростях превращения этих субстратов, по сравнению с трилаурином (ккат 4,0 с ). Таким образом, супрамолекулярная организация субстрата в монослое позволяет создавать высокоэффективные ферментные СБСФ 1го уровня.

Взаимодействие липазы с поверхностно-активными веществами на границе раздела фаз и его влияние на каталитические процессы следует рассматривать как структурно-функциональное исследова-

ние СБСф 2го уровня организации. Предложен новый метод иммобилизации липазы из Р.ПиогезсепБ (Л-1) путем ее включения в ряд поверхностно-активных веществ (ПАВ), содержащих алифатические радикалы от-С12Н25 До -С18Н37. Найдены оптимальные соотношения компонентов, обеспечивающие высокую эффективность включения фермента в ПАВ (СБСФ 2го уровня) и увеличение активности иммобилизованной липазы до 12,5 раз относительно исходного фермента. Найдена корреляция между активацией фермента в СБСФ и параметрами смешанных монослоев липазы с ПАВ. Получение высокоактивных СБСф 2го уровня на основе липазы требует наличия «жидко-растянутого» состояния монослоя ПАВ и его расширения при адсорбции фермента. Данные результаты делают перспективным использование таких бионаноматериалов для получения важных оптических изомеров биологически-активных соединений.

Двухкомпонентные комплексы из полиэлектролита с иммобилизованными липазами из различных источников - пример ферментных СБСФ 3го уровня, в которых фермент взаимодействует с одним заряженным полимером. При эквимолярных количествах полианиона (ПСС) активность Л-2 увеличивается на 26%, а Л-4 - на 52% (табл. 1), что связано с активацией этих липаз на границе раздела фаз, сформированной полимерными клубками ПСС. При избытке ПСС активность Л-2 и Л-3 меняется незначительно (табл. 1).

Таблица 1. Относительная активность (А, %) липаз из поджелудочной железы свиньи (Л-3), Mucor javanicus (Л-4) и Pseudomonas fiuorescens (Л-2) в комплексах с ПАМА и ПСС при соотношениях полимер:липаза от 1:1 до 100:1_" 1_

Состав комплексов А при 1:1, % А при 10:1, % А при 100:1, %

ПАМА Липаза Л-2 95±2" 102+7* 90+7*

Липаза Л-3 73+8* 94±7* 44±4*

Липаза Л-4 96+5* 108+7* 116+8*

ПСС Липаза Л-2 126+2** 111+7* 94+6*

Липаза Л-3 23+9 117+9* 115+9*

Липаза Л-4 152+7* 63±7* 108+5*

В присутствии ПАМА активность Л-1 изменяется незначительно, а активность Л-3 существенно снижается. Такое уменьшение активности липазы (заряженной отрицательно при нейтральных рН) в присутствии поликатиона (ПАМА) можно объяснить их сильным электростатическим взаимодействием, приводящим к конформаци-онным изменениям белка. Таким образом, активность липазы существенно зависит как от природы и заряда полимера, так и от его

концентрации относительно фермента. В присутствии солей (типа КН2Р04) активность Л-3 в комплексе с одним полиэлектролитом (ПСС или ПАМА) увеличивается при молярных соотношениях по-лимер:липаза=10:1 (142% или 127%), но мало изменяется - при 100:1 (100% или 104%) и 1:1 (98% или 102%). Такой «солевой» эффект при действии Л-3 на триацетин в присутствии полиэлектролитов свидетельствует о возможности управления активностью фермента путем изменения его полимерно-ионного окружения. Этот вывод подтверждается данными изучения этих комплексов при вы соких температурах, поскольку при 80°С активность комплекса ли-паза:ПАМА увеличивается в 4,5 раза, а при 60°С активность комплекса липаза:ПСС увеличивается в 7,6 раза по сравнению с контролем при 25°С. Это свидетельствует о создании новых эффективных каталитических биоматериалов с заданными свойствами.

Трехкомпонентные комплексы из двух полиэлектролитов и фермента - уникальный пример СБСФ 4го уровня для моделирования гидролитических процессов в желудочно-кишечном трасте животных. В ряде работ [Кабанов В.А., Зезин А.Е>. и др., 1987; Даутцен-берг X. и др., 1994; Штильман М.И., 2006 и другие] были детально изучены механизмы электростатического взаимодействия между синтетическими полиионами, ПАВ и ферментами. Однако получение и изучение комплексов липаз с двумя полиэлектролитами (ПЭЛК) до начала наших работ не проводилось. Активность липазы Л-2 в ПЭЛК была наивысшей при рН 9,0 (66%), что согласуется с рН-оптимумом липазы (рН 8,0-9,0), а при рН 3,0 или 10,0 - значительно уменьшается. Соотношение полимеры:липаза=100:1 дает наилучшие результаты как по активности Л-2 в ПЭЛК, так и по структурным параметрам самого комплекса (по сравнению с соотношениями 10:1 и 1:1). По-видимому, при увеличении концентрации липазы в ПЭЛК происходит конкуренция между белком и полимером, в результате которой белок вытесняется из комплекса. Эти же эффекты характерны для других липаз (табл. 2).

Таблица 2. Активность: общая (А0), в супернатанте (Ас), эффективная в ПЭЛК (А3ф) липазы (в % от исходной) из поджелудочной железы свиньи (Л-3) в трех-комгтонентных комплексах с ПСС и ПАМА (№ ПЭЛК) при соотношении все полимеры : липаза = 100:1 (М/М): " - ПСС с ММ=1,0-106 г/моль; "-только раствор Л-3

№ ПЭЛК 1 2 3й 4«» 5"" 6™ ySSJ 8

ПЭ1:ПЭ2 0,3 0,6 0,3 0,6 0,3 0,6 1,0' 0,6

РН 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 11,0

А0, % 15±2* 14±2* 72±4** 72+4** 180±6* 180+6* 177+6* 38+3*

Ас, % 1,0+0,5 6±1* 9+1* 4±1* 135±6' 140+6* 116+5* 14±2*

АЭсЬ, % 14+2* 8±2* 63+4" 68±4** 45±6* 40±6* 61+6* 24+3*

Комплексы, в которых липаза приготовлена в фосфатном буфере, а растворы ПЭ - в воде, проявляют высокую общую и эффективную активность (ПЭЛК 3 и 4). Наивысшую активность Л-3 в системе (дисперсии и супернатанте) наблюдали при образовании ПЭЛК 5 и 6, где все растворы были приготовлены в 10 мМ №2нр£Ь|, но эффективная активность сохраняется в ПЭЛК только на уровае 45-40%. Несмотря на высокую эффективную активность Л-3 в случае ПЭЛК 7, коэффициент мольного соотношения ПАМА:ПСС=1:1 приводит к агрегации частиц и нестабильности комплексов. ¡ При этом соотношение полимеры:липаза=100:1 является ключевым для приготовления ПЭЛК с высокой активностью. Таким образом, ПЭЛК 3 и 4 являются наиболее перспективными для получения каталитических биоматериалов с заданной структурой и свойствами.-!т>; , „

Таблица 3. Активность трипсина: общая (А0), в супернатанте (Ас), эффективная в ПЭЛК (АЭф) в комплексах полимеры-фермент различного состава: образцы пэли(стиролсульфоната) следующих молекулярных масс: 66000 (ПСС), 183000 (ПСС£) и 1000000 (ПСС") или его сополимера (СОП47), полимеры (ПЭ)

Комплекс Ns, РН ПЭ: трип- А0> Ас, АЭф,

Полимеры 1-2 син, М/М % % %

1, ПСС-ПАМА 3,0 5 52±2* 10±1* 42+2*

2, ПСС-ПАМА 3,0 10 1 74+3* 12±1* 62+3*

3, ПСС-ПАМА 3,0 20 1 82+3* 8±1* 74±3*

4, ПСС-ПАМА 7,5 10 1 72±2* 23+1* 49i2*

5, ПАМА-ПСС 11,0 10 1 15±1* 10±1* 5+1*

6, ПСС:-ПАМА 3,0 10 1 89±3* 7+1* 82±3*

7, ПСС'с-ПАМА 3,0 10 93±3* 9+1* 84±3*

8, ПСС-СОП47 3,0 10 41+2* 133:1* 28±2*

9, ПСС£-СОП47 3,0 10 68+3* 10+1* 58±3*

10, ПСС-СОП47 7,5 10 53+2* 37+1* 16±2* I

Разработанные подходы и методы были использованы для получения СБСф 4го уровня с другими ферментами. Так, получены комплексы полимеры-трипсин с сохранением более 80% активности трипсина (табл. 3). Определены оптимальные условия смешивания компонентов при соотношении трипсин:(ПСС-ПАМА)=1:10 (рН 3,0), причем ПСС с ММ=106. Полученные СБСФ перспективны'для моделирования гидролитических процессов как in vitro, так wiiU/My;

3.2. Супрамолекулярные системы на основе белков и липидов в исследовании биологических жидкостей животных и совершенствовании биохимических методов анализа

«Ферментный профиль» крови собак следует рассматривать как один из примеров СВСф 5го уровня, поскольку при характеристике физиолого-биохимического статуса животных и многих заболеваниях требуется исследование совокупности основных ферментов в крови животных, которые составляют характерный набор («ферментный профиль»), Зависящий от нормального состояния или патологических изменений органов и тканей конкретного животного. Кроме того, у животных обнаружено 5 изоформ ЛДГ и 3 изоформы КК (используемые в клинической диагностика), которые,усложняют характерный «ферментный профиль» крови животных, что является дополнительным подтверждением правильности его рассмотрения как СБС высокого уровня организации. Для опытов (с помощью сотр. ветклиники «Центр») взяты 22 пуделя (кобели), страдающие хронической сердечной недостаточностью различной этиологии, для контроля - 15 здоровых пуделей. Всех 37 собак разделили на 3 подгруппы по возрасту и изучали «ферментный профиль» крови по активности ферментов ACT, АЛТ,ГГТ, ЛДГ и КК (табл. 4).

Таблица 4. Активность (А, Е/л) аланинамйнотрансферазы (АЛТ) аспартатамино-1 трансферазы (ACT), у-глутамилтрансферазы (ГГТ) лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и креатинкиназы (КК) в крови собак (6-11 лет): здоровые (конт ); больные (ХСН)

п А (Е/л), 6-7 лет п А (Е/л), 8-9 лет п А (Е/л), 10-11 лет

Контроль 5 34,6±1,9 (АЛТ) 32,4+1,1 (ACT) 4,7±0,2 (ГГТ) v 120±9 (ЛДГ) 52±5 (КК) 5 26,6±1,7* (АЛТ) 24,5±1,4" (ACT) 4,1±0,3* (ГГГ) 113±8 (ЛДГ) 61±5 (КК) 5 16,2±1,7" (АПТ) 16,1±1,2"(АСТ) 3,5±0,2" (ГГТ) 116±12(РДГ) 55±5 (КК)

ХСН 7 53,7+1,8" (АЛТ) 60+2"* (ACT) 12,6+0,4"* (ГГТ) 1009+79*" (ЛДГ) 213+17*** (КК) 9 54+2"* (АЛТ) 63+3*" (ACT) 12,6+0,9"* (ГГГ) 837+76***,(ЛДГ) 204+14"* .(КК) 6 52+2*** (АЛТ) 62+2*** (ACT) 11,7+0,7!"*,(ГГТ) 965+65*" :(ЛД Г) 226+19"* (КК)

; У здоровых собак (контрольная группа)^ отмечено снижение активности ряда ферментов в крови с возрастом: у собак 10-11 лет активность АПТ была ниже на 53%, активность АСТ - на £0%, активность ГГТ - на 26%, по сравнению с подгруппой собак 6-7 лет, тогда как активность ЛДГ и КК изменялась мало (табл. 4). У собак с ХСН выявлено достоверное повышение активности всех изученных

ферментов, причем наиболее значительно это проявляется для ЛДГ (в ~8 раз) и КК (в ~4 раза) у собак всех возрастных групп.

Для более полного анализа состояния «ферментных» СБС крови, степени влияния на них возраста и проявления ХСН, определены не только общая активность ЛДГ и КК крови собак, но и их «изо-ферментный спектр» (табл. 5). Наибольшая активность среди всех изоферментых форм ЛДГ у здоровых собак присуща фракции ЛДГ,,: для 6-7 лет - 45±3 Е/л; 8-9 лет - 42±2 Е/л; 10-11 лет - 44±5 Е/л, причем у всех собак отсутствуют достоверные отличия с возрастом для всех изоферментых форм ЛДГ. У собак всех возрастов с ХСН отмечали значительное достоверное увеличение активности фракций ЛДГ: ЛДГ, в -15 раз, ЛДГ2 - в -14 раз, ЛДГ3 - в ~2 раза, ЛДГ4 - в 1,4 раза. Активность КК при ХСН увеличивается в основном за счет фракций КК-МВ и КК-ММ (табл. 5).

Таблица 5. Активность (А, Е/л) креатинкиназы (КК) по фракциям (ВВ, МВ, ММ) в, крови собак (6-11 лет): здоровые (контроль) и больные (ХСН)_,.,. .

п А (Е/л), 6-7 лет п А (Е/л), 8-9 лет N А (Е/л), 10-11 лет

Контроль 5 15,1±1,6 (ВВ) 10,3±0,9 (МВ) 22,1±2 (ММ) 5 16,8±1,4 (ВВ) 12,1±1,2 (МВ) 25,3±2 (ММ) 5 15,6±1,2 (ВВ) 11,91:1,1 (МВ) 23,5±2 (ММ)

ХСН 7 15±2 (ВВ) 69±7*" (МВ) 123±9*** (ММ) 9 16±2 (ВВ) 67±3*** (МВ) 111+9"* (ММ) 6 17±2 (ВВ) 81+6*" (МВ) 120±11*"(ММ)

Таким образом, у больных собак в крови отмечено значительное увеличение активности всех исследуемых ферментов и определенных изоферментов (табл. 4 и 5, СБСФ 5го уровня) по сравнению с контролем для собак всех возрастов.

Межфазная тензиометрия в исследовании поверхностного натяжения крови животных и модельных систем предполагает изучение интегральных характеристик «сверхсложных эндогенных» СБС 6го уровня. Это особенно важно сейчас, учитывая приоритетное значение разработки новых (более эффективных) и совершенствование имеющихся биохимических методов и средств для ранней диагностики и контроля лечения заболеваний животных. Совместные работы проф. Р. Миллёра и др. (ФРГ) и проф. В.Б.Файнермана и др. (Украина) [1996-2006] по йзучению поверхностного натяжения (ПН) биологических жидкостей У' йюдей позволили установить общую зависимость между изменением ПН и патологическими процессами

в организме (в том числе - изменениями в белковом, углеводном, жировом, минеральном обменах). Однако для животных, работ такого уровня (до наших исследований в ФГОУ ВПО МГАВМиБ) в мире не проводилось. Впервые проведены исследования поверхностного натяжения (ПН) крови здоровых лошадей Центрального московского ипподрома. Поскольку полученные кривые (тензиограммы) имеют сложную форму, то выделяли значения ПН за 0,01 сек. (ПН1), 1 сек. (ПН2) и 100 сек. (ПНЗ) существования поверхности, а также проводили экстраполяции начального (ЭН) и конечного (ЭК) участков, что позволяет количественно сравнивать кривые любой; сложности. Значения 75,0-75,1 мН/м (ПН1) и 72,4-73,5 мН/м (ПН2) могут служить общими критериями нормы для всех лошадей, тогда как заметные отличия в ПНЗ связаны с полом у молодых животных (табл. 6). Значения ЭН и ЭК для кобыл более низкие по сравнению с жеребцами одного возраста (табл. 6). Эти эффекты объясняются различиями в содержании ряда белков и липидов в крови лошадей в зависимости от пола и возраста. Полученные данные биохимического анализа крови в целом соответствуют физиологическим нормам для лошадей данного возраста и пола. При сравнительном анализе выявлены сильные и средние корреляционные связи у показателей тензиометрии с уровнем общего белка, альбумина, триглицеридов, глюкозы, кальция, калия, натрия. Это связано с наличием в крови животных БАС и ПАВ, образующих адсорбционные слои, ПН которых зависит от конкретного биохимического состава жидкости.

Таблица 6. Значения поверхностного натяжения (ПН1, ПН2 и ПНЗ) и данные экстраполяции тензиограмм (ЭН и ЭК) для лошадей разного пола и возраста

Параметры Жеребцы 2-3 лет Кобылы 2-3 лет Жеребцы 4-6 лет Кобылы 4-6 лет

л 15 5 13 5

ПН1, мН/м 75,1+1,1" 75,0+1,0" 75,0+0,9" 75,0±1,0"

ПН2, мН/м 72,7+1,1" 72,4+1,0" 72,5±1,0" 73,5+1,1"

ПНЗ, мН/м 65,0+1,2" 69,2+1,2" 62,2+1,2" 62,5+1,2"

ЭН; (мН/м)"1 с1" 6,0±1,4" 4,5±1,1" 5,0±1,5" 3,3±1,4"

ЭК, (мН/мГ'.с1" 9,0±1,5" 4,5+1,3" 11,3+1,3" 10,1±1,6"

Для. обобщения результатов, полученных при изучении крови животных, впервые изучено ПН водных дисперсий белков (БСА, липаз), триглицеридов и фосфатидилхолина (ФХ), их комплексов в различныхлконцентрациях и условиях среды, моделирующих плаз-

му крови животных. При добавлении БСА и №С1 к диСперсииг-ФХ наблюдаются значения ПН1 дисперсий в среднем 71-74 мН/м, ПН2 - 64-66 мН/м, ПНЗ - 55-58 мН/м в зависимости от состава (табл. 7), что существенно отличается от ПН для исходных компонентов.

Таблица 7. Поверхностное натяжение (ПН1, ПН2, тина (Л) с белком (БСА) в присутствии соли (NaCI)

ПНЗ) водйых дисперсий леци и данные экстраполяции (ЭН)

Пипид+Белок+Соль мМ + г/л + мМ

ПН1 мН/м

ПН2 мН/м

ПНЗ мН/м

ЭН (мН/м)У'

1Л+60БСА+140МаС1

71,1±0,5**

65,3+0,4*

57,0±0,4*

7,9+0,2*

2Л+60БСА+140МаС1

73,4+0,5*'

66,1±0,4**

57,2±0,4*

10,7±0,3*

ЗЛ+60БСА+140ЫаС1

73,7±0,5*

65,5±0,4*

58,1 ±0,4**

11,3+0,3*

4Л+60БСА+140МаС1

73,4±0,5**

65,1+0,4*

58,3+0,4*

10,3±0,3*

4Л+40БСА+140МаС1

72,0+0,5*

65,3±04*

58,4+0,4*

9,5+0,3**

4Л+80БСА+140МаС1

74,3+0,5*

65,4+0,4*

58,0 ±0,4*'

9,9+0,3**

4Л+40БСА+120NaCI

71,4±0,5**

64,6+0,4**

55,4+0,4*

8,2+0,3*

4Л+40БСА+130МаС1

72,7+0,5*

66,4+0,4**

54,5+0,4"

6,2+0,3**

4Л+40БСА+1 SONaCI

70,5i0,5*

63,9+0,4*

57,8+0,4*

8,9+0,3*

В целом, значения ПН1 и ПН2 определяются солевым и липид-ным составом сыворотки крови, а значения ПНЗ - постепенной адсорбцией белков из объёма на границу раздела фаз. Из полученных данных следует перспективность простого и удобного экспресс-метода измерения поверхностного натяжения крови животных.

Влияние биологически активных добавок на биохимические показатели биологических жидкостей, что можно рассматривать как влияние «экзогенных» СБС на основные параметры «эндогеннь1Х» СБС (крови, молока и т.д.). Одним из новых и важных примеров этому является проведенное под руководством автора исследование влияния биологически активной добавки «Nurisol» на жирнокис-лотный состав молозива и молока коров. В опытном"хозяйстве Аграрного университета Хоэнхайм (ФРГ) были сформирована Я.груп-пы коров; 1) получавших в рационе «Nurisol» ("эксперимент) 2) стандартного кормления (контроль) - подробности в диссертации.

Обнаружено, что массовая доля С18:0 увеличивается в молозиве "эксп. группы коров (относительно контрольной), однако к 21м сугкам ее содержание становится практически одинаковым вобеих группах. Это наблюдается и для С4:0, С8:0, С20:0, тогда как для С12:0, С14:0, С16:0 характерно небольшое уменьшение содержания к 21м суткам у коров обеих групп. Показательным для мононенасыщенных ЖК (табл, 8) являются изменения С18:1: несмотря на ее большое содержание в подкормке (37,9%), в молозиве ее содержание снижено (17,9%) по сравнению с контролем (21,8%).

Таблица 8. Содержание ряда моно- и полиненасыщенных жирных кислот (%) в молозиве й молоке коров, получавших «Nurisol» ("эксперимент) к контролю

Сут- С16:1 С18:1 С18:2 С18:3

км Конт. "Эксп. Конт. *Эксп. Конт. *Эксп. Конт. "Эксп.

1е 1 утро» 0/ /0 2,25 1,86 21,8 17,9 2,61 3,41 0,56 0,56

+0,11 ±0,09** ±0,7 ±0,7** ±0,13 ±0,17" ±0,03 ±0,03

2е, 2,13 1,73 19,0 16,6 2,42 3,11 0,42 0,61

% ±0,11 ±0,09** ±0,6 ±0,6** ±0,12 ±0,16" ±0,03 ±0,04*

3#, 2,11 , 1,70 22,6 21,0 2,63 3,09 0,52 0,72

% ±0,11 . ±0,09** ±0,8 ±0,7** ±0,13 ±0,15" ±0,03 ±0,04*

ве, 2,01 1,56 24,0 21,2 2,31 2,81 0,59 0,73

Уо ±0,10 ±0,08** ±0,7 ±0,6** ±0,11 ±0,14" ±0,04 ±0,04*

12е, 2,08 1,59 26,7 24,2 2,24 2,77 0,61 0,71

% +0,10 ±0,08** ±0,8 ±0,7" ±0,11 ±0,14" ±0,03 ±0,04*

21е, 2,40 1,95 28,1 25,5 2,14 : 2,96 0,51 0,61

а/ .... /о ±0,12 ±0,10** ±0,8 ±0,8** ±0,11 ±0,13" ±0,03 +0,04*

В молозиве первого удоя у коров (#эксп.) обнаружен высокий уровень С18:2 (3,41%), который снижался (до 2,96%) к 21м суткам, но оставался выше ее уровня в молоке контрольной группы. Эта тенденция 'характерна для всех полиненасыщенных ЖК, при неко-торЬ1х;ко'личественных отличиях (табл. 8). Поскольку недостаток пошнёнасыЩенМЙх ЖК в организме приводит к негативным последствиям у телят, то необходимо поддерживать организм матери и новорождённого соответствующим рациональным кормлением, что решается добавкой к рациону «Мипэо!» (он является доставщиком как комплекса ЖК./гак- и метаболитов для их биосинтеза; в орга-низме^аетирующи^ животнь^)., Таким образом, препарат «Мипео!» служит ярким примером положительного влияния «экзогенных» ,. СБС на биохимические параметры «эндогенных» СБС, что приво- -дит к улучшению всех основных показателей животных.

Сравнительное исследование жирнокислотного состава молозива и молока коров в первые недели лактации (как «липидной» СБС^ 1го уровня) исключительно важно для понимания биохимических механизмов синтеза этих сложных природных СБС. Изучение жирных кислот (ЖК) молозива коров в первый день лактации у здоро- '' выхжйвотнйх свидетельствует о высоком содержании насыщенных ЖК С'1'6:0>'С14:0>СЧ8:0>С12:'0>С8:0=С4:0>С20:0 (табл. 9).

Таблица 9. Содержание ряда «ключевых» жирных кислот (%) в молозиве и мо-локе^здоровых (конт. группа) и больных родильным парезом (парез) коров- : ^

Сут- С14:0 С16:0 С18:0 С18:1

ки Копт. Парез Конт. Парез Конт. Парез Конт. Парез

1е, 9,8 16,8 30,6 32,8 7,8 6,7 16,3 11,1

% ±0,2 ±0,5** ±0,9 ±1,0** ±0,3 ±0,3* ±0,8 ±0,6**

2\ 11,3 13,4 26,5 31,4 9,0 10,2 20,5 16,6

% ±0,3 ±0,3** ±0,8 ±0,9** ±0,4 ±0,4* ±0,9 ±0,8**

зв, 9,3 14,5 25,9 26,8 10,5 14,8 24,8 19,1

% ±0,4 ±0,6** ±0,8 ±0,8* ±0,4 ±0,6** ±0,7 ±0,8**

6е, 8,3 10,1 25,0 25,3 13,4 13,5 27,1 23,7

% ±0,2 ±0,2* ±0,8 ±0,8 ±0,5 +0,5 ±1,1 ±1,0**

10е, 8,9 10,2 24,2, 25,2 13,3 13,1 28,6 23,5 ,

% ±0,2 ±0,2* ±0,7 ±0,8* ±0,5 ±0,5 ±1,2 ±1,0**

На 10ые сутки лактации отмечено увеличение содержания ЖК С18:0 (на 72%), C4.0 (на 92%) и снижение С16:0 (на 21%), С14:0 (на 9%) по сравнению с 1м" сутками, однако суммарное содержание насыщенных ЖК в молоке изменяется мало. За этот периодсодержа-ние ЖК С18:1 увеличивается (на 72%), а остальных мононенасыщенных ЖК - уменьшается. В молозиве первого удоя содержался достаточно высокий уровень линолевой кислоты (4,1%), который к 10м суткам снизился до 3,7%. Поскольку уровень каждой из полиненасыщенных ЖК (С18:3, С20:3 , С20:4, С20:5) был всегда менее 1%, то снижение их содержания к 10м суткам было значительным (в 2-4 раза). Все эти эффекты объясняются изменениями в биохимическом метаболизме у коров в процессе лактации, что особенно заметно при патологических процессах, типа родильного пареза.

Массовая доля насыщенных ЖК с 1х по 10ь,е сутки в молоке здоровых животных возрастает с 61,4% до 62,3%, а у больных родильным парезом снижается с 75,5% до 65,2%, но остается достоверно выше, чем у здоровых животных. За этот период массовая доля мононенасыщенных ЖК в молоке возрастает с 23,8% до 35,4% у здоровых и с 18,7% до 30,1% у больных коров. Отмечено низкое содержание С18:1 в пробах молозива, взятого у больных коров,, (табл. 9). Суммарная массовая "доля полиненасыщенных ЖК в мо^. локе с 1х по ЮТ сутки уменьшается с 6,9% до 5,4% у здоровых; с 5,3% до 4,7% у больных 'коров: Таким образом, общее количество ненасыщенных ЖК в молозиве и молоке больных животных ниже, чем у здоровых, что может служить характеристическим показателем протекания патологических процессов в молочной железе.

3.3. Многофункциональные супрамолекулярные системы в моделировании биомембран и создании био- и наноматериалов

Выделение и исследование различных типов липидов, их смесей с пептидами и белками в монослоях. Среди множества примеров структурно-функционального изучения СБСЛ 2го и 3го уровней, наиболее удачным является исследование изменений состава тилако-идных липидов мембран М. ро1утогр11а под воздействием света высокой интенсивности, которое было проведено совместно с коллегами в ФРГ. Ключевым в этом примере является доказательство того, что поведение белковых компонентов фотосистемы II (ФСИ) зависит от взаимодействий с этими липидами. На первом этапе -усовершенствована методика выделения липидов из тилакоидных мембран М. ро1утогрЬа и установлен их базовый липидный состав (как СБСЛ 2го уровня), который под действием света высокой интенсивности претерпевает количественные, Но не качественные изменения^ Особо ценным явилось определение состава ненасыщенных ЖК для каждой фракции липидов. Выявлено перераспределение двойных связей в ЖК остатках липидов в результате воздействия на клетки света высокой интенсивности. Показано, что тилакоидные липидьпу^аствуют в* регуляции биохимических процессов в мембране, посредством изменений жирнокислотного состава их липидов.

5 И. £ в 1 3 »• V 0 1 »■ 0 1 « V в о т р а ж • е н и е и

Площадь монослоя. нм'/мопек 0

«о угол луча, град 50

Рис. 3. Изотермы давление - площадь для монослоев фосфатидилинозитола -ФИ (1), диталактозилдиглицерида -ДГДГ (2), ФСИ:ФИ=1:100 (3), ФСИ:ДГДГ= 1:100 (4), 5 мМ МЕЭ-буфере, рН 7,0 Рис. 4. Кривые отражения луча от 5иосенсорной мембраны: А) контроль; В) с монослоем ФСИ; С) с монослоем ФСИ при детекции растворов ПО"6 М динитрофенола

Впервые изучены смешанные монослои тилакоидных липидов и белковых комплексов ФСН (рис. 3), как СБСЛ 3го уровня. Площадь

липидного монослоя значительно увеличивалась в присутствии небольших количеств ФСП при низких значениях давления (рис. 3), что связано со встраиванием молекул ФСП в липидный монослой. При давлениях выше 30 мН/м изотермы для монослоев ФИ и ФИ:ФСИ=1:100 (кривые 1 и 3 на рис. 3) становятся практически одинаковыми, что обьясняется «выдавливанием» белка из липидного монослоя в водную субфазу при «сверхсжатии» монослоя. Напротив, площадь для монослоев ДГДГ в присутствии молекул ФСП остается при 30 мН/м в -3,5 раза больше, чем для монослоя ДГДГ без ФСП (кривые 4 и 2 на рис. 3), что свидетельствует о сохранении молекул ФСП в монослое ДГДГ вплоть до коллапса монослоя. Наличие белка в смешанном монослое с ДГДГ при всех давлениях была показана методом микроэлектрофореза с додецилсульфатом натрия. Это служит прямым свидетельством образования прочных и специфических комплексов ФСП только с ДГДГ и аналогами, как специфическими липидами тилакоидных мембран. Впервые получены моно- и мультислои ФСИ на твердых подложках (золото, кварц) с сохранением функциональной активности этих комплексов и показана их перспективность для создания биоматериалов и биосенсоров на биоорганические вещества (рис. 4). Показано, что по своим спектральным и фотоэлектрическим свойствам такие СБСЛ перспективны как фоточувствительные мембраны биосенсорных устройств.

Сравнительное исследование монослоев мембранных фракций клеток с разным содержанием П-гликопротеина важно как пример СБСЛ 4го уровня. Производство клетками «опухолей» мембранного белка П-гликопротеина (ПГП) в ответ на действие токсичных противоопухолевых соединений является одной из основных причин появления фенотипа так называемой «множественной лекарственной устойчивости» клеток. Функция ПГП по выводу лекарств из клетки может быть блокирована рядом соединений-модуляторов, которые конкурируют с лекарственными соединениями за места связывания на ПГП. Главной проблемой в разработке эффективных модуляторов ПГП является недостаток информации о молекулярных механизмах взаимодействия белка с его модуляторами и липидами. Поэтому, главной задачей и достижением работы являлось получение и изучение монослоев из мембранных фракций клеток с различным содержанием ПГП; изучение воздействия на структуру этих монослоев наиболее известного модулятора ПГП - верапамила.

Полученные нами монослои мембранных фракций без ПГП, а также фракций с 32% содержанием ПГП (относительно остальных белков), имеют наибольшее давление коллапса (рис. 5). Найден оптимальный состав субфазы для монослоев мембранных фракций: 10 мМ Тле-НС!, рН 6,5. Зависимость площади монослоя от содержания ПГП имеет нелинейный характер, а эта зависимость для потенциала - линейна (рис. 5), что позволяет оценить площадь на молекулу ПГП в монослое. Используя значения Алипидов=5,5 см2/мкг и полученные нами результаты изменения площади монослоев мембранных фракций с различным содержанием ПГП, получим для молекулы ПГП в растянутом состоянии значение АПгп=39±5 см2/мкг. Среднее расстояние между молекулами ПГП в монослое неизменно и равно 30±2 нм, т.е. молекула ПГП организует вокруг себя молекулы липидов в виде ПГП-липидного домена (СБС). Плотность упаковки молекул липидов в такой СБС растет в присутствии ПГП.

Площадь монослоя, см /мкг (Белка)

Плоцдоь момослоя. см'/мкг (белка)

Рис. 5. Изотермы давление (п) - пло щадь (А) (кривые 1-4) и потенциал • площадь (кривые 5-8) для монослоев мембранных фракции нормальных клеток (кривые 1 и 5) и резистентных <леток с повышенным содержанием ПГП : 11% (кривые 2 и 6), 24% (кривые 3 и 7), 32% (кривые 4 и 8)_

Рис. 6. Изотермы давление (п) - площадь (А) (кривые 1-5) и потенциал -площадь (кривые 6-10) в зависимости от содержания верапамила в субфазе к содержанию ПГП (11%) в монослое: 0 - (кривые 1 и 6); 0.2 - (кривые 2 и 7); 0.5 - (кривые 3 и 8), 1.0 - (кривые 4 и 9), 100-(кривые 5 и 10)___

Влияние верапамила на формирование монослоев мембранных фракций резистентных клеток, содержащих ПГП, характеризуется увеличением площади монослоя, потенциала и давления коллапса (рис. 6). Наибольшие изменения наблюдаются в случае, когда количество молекул верапамила в субфазе сравнимо с количеством

молекул ПГП в монослое (рис. 6). Значения площадей монослоев при «скачке» потенциала и я=15±5 мН/м, изменяется на 15-35%. В случае избытка верапамила, его влияние на свойства монослоев снижается. По-видимому, молекула ПГП содержит несколько сайтов связывания верапамила, взаимодействие с которыми зависит от топологического состояния молекулы белка и влияет на «множественную лекарственную устойчивость» клеток.

Супрамолекулярные системы на основе новых мембранно-активных соединений, липидоподобных мономеров и полимеров (как примеры «синтетических» СБСЛ 2-4Г0 уровня). Среди всех СБСЛ - монослои амфифильных фотохромных компл.ексонов.(АФК) служат наилучшими моделями для исследования процессов самоорганизации и молекулярного узнавания на границе раздела фаз, которые характерны для биомембран, а в практическом аспекте - перспективны как хемосенсорные наноматериалы. В связи с этим нами получены и исследованы монослои новых АФК, синтезированных в лаб. проф. С. П. Громова (ЦФ РАН). Наличие краун-эфирного фрагмента в АФК способстЕгует их селективному связыванию с катионами.металлов. Фотохромные свойства АФК обусловлены возможностью превращений их молекул в ходе двух «фотореакций»: транс-цис-изомеризации двойной связи и [2+2]-циклоприсоединения.

Впервые показано, что для АФК-la, АФК-lb и АФК-lc (рис. 7) площадь (А), приходящаяся на молекулу в монослое, минимальна 'на поверхности воды и возрастает с увеличением концентрации солей в водной субфазе, что указывает на образование комплексов АФК с катионами этих металлов. Например, при давлении 20 мН/м для АФК-la в монослое А составляют 0,65 нм2 и 0,78 нм2; для АФК-lb -0,55 нм2 и 0,57 нм2; для АФК-lc - 0,38 и 0,44 нм2 (на воде и 1 мМ KCl, соответственно). Примерно в 2 раза меньшие значения площади, занимаемой в монослое молекулой АФК-lc, по сравнению с АФК-la и АФК-lb, свидетельствуют о существенном изменении организации монослоя мембран за счет направленных изменений в структуре исходных АФК. Методом атомно-силовой микроскопии показано, что структура монослоев АФК-lb, перенесенных с поверхности воды, представляет собой образование большого количества крупны* агрегатов неправильной формы с размерами в плоскости 2,5-3,0 мкм и высотой 1,8 нм. В присутствии солей картина для монослоев АФК-lb существенно изменяется: образуется сплошная, без видимых дефектов пленка. Такая структура монослоев характерна и для

других АФК, что является прямым свидетельством образования комплексов АФК с катионом.

Я *2 (1) ^чХ Аж 0.1S oto 0.Ü5 Сс)

300 350 400 450 500 550 600 II M

Рис. 7. Структурные формулы АФК: la) R1 = ОСНз, R2 = Ci8H37, n=:i; ...■.■ Ib) R1 = ОСНз, R2 = С1вНз7,- п ,-2; le) R1 = NHCO(CH2)ieCH3, R2 = C2HS, n = 1 Рис. 8. Спектры поглощения АФК-lb в монослое на поверхности воды (1) и 10 мМ растворах KCI (2), СаС!г (3), MgCI2 (4), NaCi (5) при 10 мН/м

Важная информация об упаковке АФК и их комплексообразова-нии в монослоях на границе разделов фаз получена из данных абсорбционной спектроскопии (рис. 8). Обратимые изменения интенсивности поглощения при фоторблучении обнаружены для монослоев АФК на поверхности растворов солей (рис. 9), что обьясняет-ся транс-цис-транс-изомеризацией молекул АФК в комплексах с катионами.. Таким образом, комбинацией методов измерения изотерм давления, АСМ, БАМ, БАР и спектроскопии показано, что монослои АФК (пример «синтетических» СБСЛ) перспективны как хе-мосенсоры на заданные катионы металлов.

ом 0.12 (Ь) t

0.12 0,1 J 0.03 оМ 0.10 0.08 0.06 t

8 10 , 12 14 16 18 20 0.04 10 12 14 16 18 20 22

Рис., 9. Обратимые изменения интенсивности поглощения (А446) при Х44в для ^ФК-lb в монослое от времени (мин.) облучения светом с ^s и темновой релаксации (4- - включение света, t - выключение света): а) 10 мМ раствор KCl, 3 мН/м (1) и 9 мН/м (2); Ь) 10 мМ раствор NaCI, 3 мН/м (1) и 14 мН/м (2)

При изучении монослоев АФК, содержащих два атома серы вместо кислорода в циклополиэфирном кольце молекул (АФК-Па, АФК-ИЬ, АФК-11с), показано, что эти АФК селективны на катионы тяжелых металлов, однако претерпевают необратимые изменения интенсивности поглощения при фотооблучении, что затрудняет их применение как хемосенсоров. На основании исследований смешанных монослоев АФК-На, АФК-ПЬ, АФК-Пс с липидоподобными мономерами и полимерами, найдены два типа смесей этих АФК, которые способны к обратимому связыванию Нд2+, что делает эти пленки прототипом наноматериалов, перспективных для хемосенсоров на катионы тяжелых металлов. Разработанные выше процессы позволили получить высокоселективные нанокомпозитные материалы для детекции не только катионов щелочно-земельных и тяжелых металлов, но и биогенных диаминов.

ВЫВОДЫ

1. Сформулированы принципы создания и изучения супрамоле-кулярных биохимических систем (СБС) на различных уровнях структурной организации. На основании изучения «ферментных» -СБСф 1го уровня разработана модель гидролиза липазами новых липидоподобных субстратов (производных глицерина, жирных кислот и аминокислот) в монослое и определены кинетические константы данного ферментативного процесса: кгат от 7 до 11 с'1;:КМ(кг1Ж) от 1,7 до 2,0'Ю"6 М. Полученные значения констант свидетельствуют о высоких скоростях превращения этих субстратов, что подтверждает влияние строения субстратов и уровня их организации на границе раздела фаз на каталитические свойства СБСФ.

2. Установлены оптимальные соотношения компонентов, обеспечивающие высокую эффективность включения липаз в ряд поверхностно-активных веществ (ПАВ) с радикалами от -С12Н25 до -С1аН37 и увеличение активности иммобилизованной липазы до 12,5 раз относительно исходного фермента. Показана корреляция между активацией фермента в таких ПАВ и параметрами их смешанных монослоев с липазами. Такие СБСФ 2го уровня являются перспективными бионаноматериалами для получения важных биологически активных соединений заданного строения и свойств.

3. Установлены оптимальные условия получения многокомпонентных комплексов (СБСФ 3го и 4го уровней) на основе разнозаря-

женных полиэлектролитов и ферментов (трипсина, липаз из бактерий и поджелудочйой железы свиней) с высокой ферментативной активностью, что реализуется только при заданных мольных соотношениях между полимерами и ферментами в этих-сложных комплексах и определенных условиях среды. Изучение этих СБСФ при высоких температурах показало увеличение активности иммобилизованной липазы в 4,5-7,5 раз при 60-80°С по сравнению с контролем при 25°С. Обнаруженное повышение активности липаз после иммобилизации в полимерное окружение является основой создания новых бионаноматериалов с уникальными свойствами.

4! Изменения в «ферментном профиле» плазмы крови (СБСФ 5го уровня)' проявляются при старении организма и имеют важное значение для диагостики хронической сердечной недостаточности.

4.1. Показано, что активность аспартатаминотрансферазы, ала-нинаминотрансферазы, у-глутамилтрансферазы, лактатдегидро-геназы (ЛДГ), креатинкиназы (КК) уменьшается с возрастом у здоровых животных, тогда как у собак с сердечной недостаточностью происходит увеличение активности этих ферментов: особенно для ЛДГ (в ~8 раз) и КК (в -4 раза) у собак всех возрастных групп.

4.2. Характерные изменения в «изоферментном профиле» плазмы крови собак проявляются у собак всех возрастов с хронической сердечной недостаточностью. Обнаружено увеличение активности ЛДГ фракций: ЛДГ, в -15 раз, ЛДГ2 - в -14 раз, ЛДГ3 - в ~2 раза, ЛДГ4 - в 1,4 раза. Активность КК при этом увеличивается в основном за счет фракций КК-МВ и КК-ММ у собак всех возрастов.

5. Разработана методика динамической тензиометрии крови животных и модельных белок-липид-солевых систем, которая является «интегральной» характеристикой СБС 6го уровня.

5.1. Установлены как общие параметры поверхностного натяжения (ПН) сыворотки крови для всех лошадей: 75,0-75,1 мН/м (ПН1) и 72,4?73,5 мН/м (ПН2), так и специфические возрастные: 62,2-62,5 мН/м (ПНЗ, для животных 4-6 лет); 65,0-69,2 мН/м (ПНЗ, для животных 2-3 лет). Путем экстраполяции начального (ЭН) и конечного (ЭК) участков удалось количественно охарактеризовать сложные тензиограммы для определенных групп лошадей: для 2-3-летних кобыл (ЭН и ЭК - 4,5 мН/м) и жеребцов (ЭН и ЭК - 6,0 и 9,0 мН/м), для 4-6-летних кобыл (ЭН и ЭК - 3,3 и 10,1 мН/м) и жеребцов (ЭН и ЭК - 5,0 и 11,3 мН/м). Доказана корреляционная связь между этими параметрами и биохимическими показателями крови лошадей

{уровнем общего белка, альбуминов, триглицеридов, .глюкозы, хлоридов, кальция, натрия). Показана перспективность данного метода для оценки физиолого-биохимического статуса лошадей!

5.2. Установлены значения ПН сложных водных дисперсий белков: бычьего сывоточного альбумина (БСА) и липаз из различных источников; липидов: триглицеридов, фосфатидалхолина (ФХ) в различных концентрациях и условиях среды, моделирующих плазму крови животных. Показано, что при включении БСА и солей в дисперсию ФХ наблюдаются, значения 71-74 мН/м (ПН1), 64-66 мН/м {ПН2), 55-58 мН/м (ПНЗ) в зависимости от состава дисперсии, что существенно отличается от ПН для исходных компонентов. В целом, значения ПН1 и Г1Н2 определяются солевым и липидным составом сыворотки крови, а значения ПНЗ- постепенной адсорбцией белков из объёма на границу, раздела фаз. Показана важность этих параметров для интерпретации биохимических данных крови животных.

6. Установлено влияние «экзогенной» СБС на «эндогенную» СБС на примере изменения жирнокислотного состава молозива и молока при введении в рацион коров биологически активной добавки «Nurisol», содержащей «протективные липиды». Показательным для ненасыщенных жирных кислот (ЖК) является содержание С18:1 (17,9%) в молозиве первого удоя у коров экспериментальной группы; также как и содержание С18:2 (3,41%), которое снижается (до 2,96%) к 21м суткам, но остается выше ее содержания в молоке контрольной группы. Эта тенденция характерна для всех моно- и полиненасыщенных ЖК, при отдельных количественных отличиях, что демонстрирует положйтельнре, влияние препарата «Nurisol» на содержание ненасыщенных ЖК в молозиве и молоке коров.

7. Показано биохимическое знамение изменений содержания 71ой ЖК, в том числе 33х изомеров ЖК (представляющих собой «жирнокислотный „профиль» иди. «липидную» СБС„ 1го уровня) в молозиве и молоке коров ¿. первые недели лактации в норме и при родильном парезе. Массовая доля, насыщенных ЖК с 1х по Юые сутки в молоке здоровых животных возрастает с 61,4% до 62,3%, а у больных - снижается с 75,5% до 65,2%; доля мононенасыщенных ЖК в молоке у здоровых коров, возрастает с 23,8% до 35,4%, у больных - с 18,7% до 30,1%; доля полиненасыщенных ЖК в молоке уменьшается с 6,9% до 5,4% у здоровых коров и с 5,3% до 4,7% у больных коров. Относительное понижение доли моно- и полинена-

сыщенных ЖК в молозиве больных животных может служить показателем протекания патологических процессов у коров.

8. Установлены особенности липидного состава («липидные» СБСЛ 2го уровня) тилакоидных мембран. Показано, что изменения в жирнокислотном составе липидов являются одним из факторов эффективной адаптации биомембран к сложным фотохимическим процессам. Установлено, что монослои на основе липидов с включенными пептидами и белками (СБСЛ 3го уровня) являются уникальными инструментами для количественной характеристики межмолекулярных взаимодействий в биомембранах, прежде всего -молекулярного узнавания и самоорганизации на границе раздела фаз. Обнаружена возможность направленного изменения структурно-функциональных характеристик фоточувствительных белков в моно- и мультислоях с липидами. Установлено, что по своим спектральным свойствам такие монослойные мембраны перспективны как фоточувствительные элементы биосенсорных устройств.

9. Определены условия получения стабильных монослоев мембранных фракций (СБСЛ 4го уровня) клеток с различным содержанием П-гликопротеина (ПГП), ответственного за вывод ряда лекарственных соединений из клеток. Обнаружено, что максимальный эффект действия верапамила (модулятора транспортной функции ПГП) наблюдается, когда количество молекул верапамила в субфазе сравнимо с количеством молекул ПГП в монослое. Это доказывает специфические изменения в структуре монослоев мембранных фракций клеток с высоким содержанием ПГП. Установленные закономерности открывают перспективы для совершенствования биохимических методов анализа биомембран и лекарственных средств;

10. Показано, что монослои новых мембранно-активных соединений - амфифильных фотохромных комплексонов (АФК) являются «синтетическими» СБСЛ 2го, 3го и 4го уровней в зависимости от учета определенных структурно-функциональных параметров. Так,1 в 2 раза меньшие значения площади, занимаемой в монослое молекулой АФК-lc, по сравнению с АФК-la и АФК-lb (как и ряд других структурных параметров), свидетельствуют о существенном изменении организации монослоя мембран за счет направленных изменений в • химическом строении исходных АФК, что является определяющим для моделирования СБСЛ 2го уровня. Установлена высокая селективность определенных типов АФК по катионам щелочных, щелоч-но-земельных или тяжелых металлов, а также их способность к

транс-цис-изомеризации при фотоактивации, что моделирует СБСЛ 3го уровня. Комбинацией современных методов впервые показано взаимное влияние фоточувствительных и ионоселективных свойств АФК в монослоях, а также возможность направленного изменения характеристик АФК при встраивании в монослои липидов, липидо-подобных мономеров и полимеров («синтетические» СБСЛ 4го уровня). Разработанные выше процессы позволили получить высокоселективные нанокомпозитные материалы, перспективные для детекции катионов щелочных, щелочно-земельных и тяжелых металлов, а также аналогов биогенных диаминов.

Сведения о практическом использовании и рекомендации по использованию результатов исследования

Данные по биохимическому изучению крови собак внедрены в практику ветеринарных клиник г. Москвы. Показана перспективность внедрения в практику метода измерения ПН крови лошадей. Полученные полиэлектролит-липазные комплексы перспективны для использования как каталитические биоматериалы, что представлено в заявках №2006111372, №2006111373 и №2006111374 Зайцева С.Ю. и сотр. на получение патентов РФ с положительным решением от 13.02.2007 г. и приоритетом от 14.06.2006 г. Полученные данные по жирнокислотному составу молока используются при разработке нормативных документов на молочную продукцию, в которых одним из обязательных параметров исследования является жирнокислотный состав (например, ГОСТ Р 52253-2004 «Масло и паста масляная из коровьего молока. Общие Технические условия»). Данные об изменениях жирнокислотного состава молока при включении в рацион коров «Ыипзо!» и разработанные методики определения транс-изомеров полиненасыщенных жирных кислот перспективны для использования в технологии получения диетических продуктов с повышенным содержанием полиненасыщенных жирных кислот.

Разработаны методики и получены образцы высокоселективных нанокомпозитных материалов (НКМ) на основе новых биоорганических соединений для детекции катионов металлов: акты испытаний №1, №2, №3 от 06.11.2006 г. при сдаче темы 2005-ИН-12.1/015/027 по проекту Минобрнауки РФ гос.контракт №02.434.11.2039 от

09.11.2005 г. Получен патент РФ на изобретение №2292338 Громова С.П. Зайцева С.Ю. и др. с приоритетом от 27.12.2005 г.

Результаты, диссертации используются для подготовки студентов, аспирантов, соискателей ФГОУ ВПО МГАВМиБ по специальности,«Биохимия», в частности по следующим методическим работам:

1. Физико-химические методы в биологии / Зайцев С.Ю., Фролова Л.А., Жир-нова: К.Г и'другие // Методические указания к учебной практике для студентов ВБФ. -^М.": МГАВМиБ им. К.И: Скрябина. - 2002. - 33 с.

2. Зайцев С.Ю- Биологические мембраны / Зайцев С.Ю. // Лекция для студентов ВБФ. - М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2003. - 12 с.

3. Зайцев С.Ю. Методы иссле'довани'я'биологических мембран / Зайцев С.Ю. //Лекция для студентов ВБФ. -М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2004. - 12с.

4. Зайцев С.Ю. Биологические мембраны и модельные мембранные системы / Зайцев С.Ю., Царькова М. С. // Лекция для студентов ВБФ. - М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. -2004.-12 с.

5. Ере'м'ёев Н.Л. Энзимология. Кинетика и термодинамика ферментативных реакций / Еремеев Н.Л., Зайцев С.Ю. // Учебно-методическое пособие (гриф УМО ВУЗов РФ). - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2004. - Часть1. -26 е.; 2004. - Часть 2. - 36 с.

6. Зайцев С.Ю. Основы биоэнергетики. Дыхательная цепь и АТФ-синтаза / Зайцев С.Ю., Гарбуз Д.Г., Прыгунова Е.В. // Учебное пособие (гриф МСХ РФ). -М.: МГАВМиБ им. К-И Скрябина. - 2005. - 44 с.

.7. Еремеев Н.Л. Особенности кинетического поведения иммобилизованных ферментов / Ерёмеев Н.Л., Зайцев С.Ю. // Учебно-методическое пособие (гриф УМО ВУЗов РФ). - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2007. - 43 с. . & Биологическая химия с основами физической и коллоидной химии / Зайцев С.Ю., Белоновская О.С., Жирнова К.Г и др. // Учебно-методическое пособие (гриф УМО ВУЗов РФ). - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И.Скрябина - 2007 -146с/

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Книги

1. Зайцев С.Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты / С.Ю. Зайцев, Ю.В. Конопатов. - 2-е изд. - СПб: Лань, 2005. - 384 с.

2. Зайцев С.Ю. Супрамолекулярные системы на границе раздела фаз как модели биомембран й наноматериалы / С.Ю. Зайцев. - Донецк, Москва: Норд Компьютер, 200S. - 189 с.

3- Зайцев С.Ю. Мембранные структуры на основе синтетических и природных полимеров / С.Ю. Зайцев. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2006. - 190 с.

Статьи в журналах и сборниках научных трудов

4; Zaitsev S.Yu. X-ray reflectivity analysis of Langmuir-Blodgett films of reaction center proteins from photosynthetic bacteria / Zaitsev S.Yu., Lvov Yu.M. И Thin Solid Films. - 1995. - Vol. 254. - P.257-262.

5. Zaitsev S.Yu. Mixed monolayers of valinomycin and dipalmitoylphosphatidic acid / Zaitsev S.Yu., Zubov V.P., Moebius D. // Colloids & Surfaces. - 1995. - Vol. 94. -P.75-83.

6. Zaitsev S.Yu. Effect of aqueous subphase exchange on the monolayer characteristics of valinomycin / Zaitsev SLYuJ Kalmer U„ Moebius D. // Colloids & Surfaces. -1995.-Vol. 94.-P.137-143. ' "'

7. Zaitsev S.Yu. Polymeric Langmuir films with glucose oxidase as prototype-biosensors / Zaitsev S.Yu. // Sensors & Actuators'. - 1995. - Vol.24-25. - P. 177-179. ~

8. Зайцев С.Ю. Исследование моно- и мультислойных мембран на основе.белков реакционных центров из фотосистемы II шпината / Зайцев С.Ю. II Биологические мембраны. - 1996. - №1. - С. 50-56. '

9. Смешанные липид-белковые пленки на основе фотосинтетических реакционных центров. (.Исследование смешанных монослоев на поверхности раздела вода/воздух / Калабина Н.А., Зайцев С.Ю., Лукашев В.П., Кононенко А.А., Захарова Н И., Зубов В.П.'//Биологические мембраны. - 1996. - №4. - С. 410-4223

10. Смешанные липид-белковые пленки на основе фотосинтетических реакционных центров.ДШсследование смешанных мультислоев на твердых подложках / Лукашев В.Пм Зайцев С.Ю., Калабина Н.А., Кононенко А.А., Сейфулина Н.Х., Зубов В.П.//Биологические мембраны. - 1996. - №5. - С. 497-503. г.у\

11. Образование комплексов включения плюроник-циклодекстрин в монослоях на границе раздела, вода-воздух / Клямкин АХ, Топчиева И.Н., Зайцев С.Ю., Зубов В.П. //Биологические мембраны. - 1996. - №3. - С. 339-347.

12. Кинетические /особенности полимеризации липидоподобных мономеров в монослоях / Зайцев С.Ю., Клямкин А.А., Плясова Е.П., Верещетин В.В., Зубов В.П. // Высокомолекулярные соединения - 1996. -T.37. №10. - С.1762-1764: с.

13. Агрегация и, фотоизомеризация амфифильного краун-содержащего стири-лового красителя, в монослоях На границе раздела фаз / Крюков Е.Ю., Феофанов А.В., Олейников'В.А., Верещетин В.В., Зубов В.П. Зайцев С.Ю. // Известия Академии наук. - 1996. - №. 10^ - С. 2490-2496.

14. Zaitsev S.Yu. Polymerization and molecular recognition in the monolayers of the surface-active derivatives of crown-ethers / Zaitsev S.Yu., Vereschetin V.P., Zubov V. P. // Macrornolecular Symposia. - 1996 - Vol. 106. - P. 379-386.

15. Polymer ultrathin films with immobilized photosynthetic reaction center proteins / Kalabina N.A., Zaitsev S.Yu.,. Zubov V.P., Lukashev E.P., Kononenko A.A. // Bio-chimica Biophysica Acta. - 1996, - Vol. 1284, - P. 138-142.

16. Study of biochemical reactions in thin organic films by means of evanescent optical wave / Ksenevich T.I., Beloglazov A.A., Nikitin P.I., Kalabina N.A., Zaitsev S.Yu. //Applied Surface Science. - 1996.-Vol. 92. - P. 426-430

17. Polymer films with immobilized proteins / Zaitsev S.Yu., Zubov V.P., Lukashev E.P., Kononenko AA, Kalabina N.A,// Macrornolecular Symposia.'- 1996 - Vol. 106. - P. 193-203. .....,,:':■'"' P.

18. Ionic selectivity of valinomycin in the dipalmitoylphosphatidyicMoline!mondlayers / Zaitsev S.Yu., Vereschetin V.P., Zubov V.P., Zeiss W:, Moebius D. // Thini^plid Films. - 1996. - Vol. 284:285. - P. 667-670.

19. Comparative study of the mixed monolayers of valinomycin with dioctadecyl-dimethylammonium bromide and dipalmitoylphosphatidylethariolamine / Zaitsev S.Yu., Vereschetin V.P., Zubov V.P., Zeiss W., Moebius D.'// Colloids & Surfaces. -1997. -Vo!. 121. -P. .37-46. ..............' > ч

20. Interaction of "carboxycriethylchitiri with Langmuir and adsorption monolayers of cationic surfactants / Babak V.GM Kaiabiria N.A.V Vikhoreva G.A.; Gal'ich E.F.rZaitsev S.Yu., Zubov V.P,// Mendeleev Communications. - 1997. - Vol:7. - P. '1-3:

21. Синтез и полимеризация в мрнослоях липидоподобных мономеров с метакри-ловыми группами на конце углеводородной цепи / Барышникова Е.А., Зайцев С.Ю.. Зубов В.П. II Высокомолекулярные"соединения. - 19'97. - № 6. - С. 927-932;' •

22. Immobilization of trypsin in polycation-polyanion complexes / Dautzenberg H., Karibyants N., Zaitsev S.Yu. // Macromolecular Rapid Communications. - 1977. -Vol.18.-P. 175-182.

23. Polymerization of the 12-(methacryloy!)oxydodecanoic acid and a corresponding phospholipid in monolayers at interfaces / Zàitsev S.Yu., Baryshnikova E.A., Vereschetin V.P., Zubov V.P. // Macromolecular Symposia. - 1997. - Vol.113. - P.197-206.

24. Photosensitive supramolecular systems based on amphiphilic crown-ethers / Zaitsev S.Yu., Vereschetin V.P., Gromov S.P., Fedorova O.A., Alfimov M.V., Huesmann H., Moebius D. II Supramolecular Science. - 1997. - Vol.4. - P. 519-524.

25. Monolayers of an amphiphilic crown-ethers styryl dye / Zaitsev S.Yu., Gromov S.P., Fedorova O.A., Gromov S.P., Fedorova O.A., Baryshnikova E.A., Vereschetin

V P., Zeiss W., Huesmann H., Alfimov M.V., Moebius D. // Colloids & Surfaces. -

1998,- Vol. 131.-№1-3. -P. 325-332.

26. Purification and monolayer study of the thylacoid lipids of moss Marchantía polymorphe / Zaitsev S.Yu., Volchenkova T.A., Kalabina N.A., Schaefer C., Zubov V.P. // Macromolecular Symposia. - 1998. - Vol.136. - P. 119-129.

27. Synthesis and polymerization of the 16-(methacryloyl)oxyhexadecanoic acid and phospholipid in monolayers / Baryshnikova E.A.,,Sergeeva T.I., Novikova O.S., Zubov

V P., Zaitsev S.Yu. II Macromolecular Symposia. - 1998. - Vol.136. - P.109-118.

28. Зайцев С.Ю. Монослои биологически активных соединений как основа функциональныхнадмолекулярных систем i Зайцев С.Ю. // Российский химический журнал.-1998. - №1-2.-С. 103-115.

29. Photosensitive and ionoseíective properties of the amphiphilic crown ether dye In monolayer / Zaitsev S.Yu., Vereschetin V.P., Baryshnikova E.A., Gromov S.P., Fedorova O.A., Alfimov M.V., Huesmann H., Moebius D. //Thin Solid Films. - 1998. -VDI 329.-P. 821-823 . . .

30. Молекулярное/конструирование полимерных материалов для биотехнологии и медицины / Зубов В.П, Иванов А.Е., Жигис Л.С., Рапопорт Е.М., Марквиче-ва Е.А:, Лукин Ю.В., Зайцев С.Ю. II Биоорганическая химия. - 1999. -№11,- С. 883-895. ■ •

31. Synthesis and monolayer study of a new amphiphilic photochromic crown-ether / Zaitsev S;Yu., Sergeeva T.I., Baryshnikova E.A., Zeiss W., Moebius D., Escheulova O.V., Gromov S.P., Fedorova O.A., Alfimov M.V. // Material Science & Engineering. -

1999.-C. 8-9.-P. 469-473.

32. A comparative study of the photosystem II membrane proteins with natural lipids in monolayers / Zaitsev S.Yu., Kalabina N.A., Herrman В., Schaefer C., Zubov V.P. // Material Science & Engineering. - 1999. - C. 8-9. - P. 519-522.

33. Comparative study of the polydimethylsiloxane monolayer with styrene and polystyrene / Marchenko S.B., Gritskova I.A., Zaitsev S.Yu. // Macromolecular Symposia. - 1999. - № 146. - P. 179-185.

34. Monolayers of the photosensitive benzodithia-15-crown-5 derivative / Zaitsev S.Yu., Baryshnikova E.A., Sergeeva T.I., Gromov S.P., Fedorova O.A., Escheulova O.V., Alfimov M.V., Hacke S,, Zeiss W., Moebius D. // Colloids & Surfaces. - 2000. -№ 171.-P. 283-290.

35. Синтез амфифильных фотохромных 6енза-15(18)-краун-5(6)-эфиров и их исследование в монослоях / Федорова O.A., Громов С.П., Ещеулова O.A., Цейсс В., Мебиус Д., Барышникова Е.А., Верещетин В.П., Сергеева Т.И., Зайцев С.Ю., Алфимов М.В. // Биоорганическая химия. - 2000. - №9. - С. 724-734.

36. Polymer monolayers with a photosensitive crown-ether I Baryshnikova E.A., Sergeeva T.I., Oertel U., Nagel J., Zaitsev S.Yu. II Macromolecular Rapid Communications. - 2000. - Vol.21. - P. 45-47.

37. Исследование гидролиза в монослоях новых липидоподобных субстратов и трмлаурмна под действием липазы Pseudomonas fíuoroscens I Зайцев С.Ю., Аха Б, Волченкова Т.Д., Белов С.В., Шнайдер М.П., Иванов А.Е. // Биоорганическая химия. - 2000. - №3. - С. 224-230.

38. Исследование липидов тилакоидной мембраны мха Marchantía polymorphs в монослоях / Волченкова Т.А., Калабина Н.А., Шефер С., Зубов В.П., Зайцев С.Ю.//Биологические мембраны, - 2000.-Т. 176.-С. 464-469.

39. Зайцев С.Ю. Ферментативная активность трипсина в комплексах по-ли(стиролсульфоната) с поли(диаллилдиметиламмоний хлоридом) / Зайцев С.Ю., ДаутценбергХ. //Сб. науч. трудов. -М.: МГАВМиБ.-2000. - С.8-13.

40. Определение холестерина в клеточных мембранах с использованием по-листирольных латексных частиц / Генералова А.Н., Грицкова И.А., Гусев С.А., Зайцев С.Ю. //Сб. науч. трудов.-М.: МГАВМиБ. - 2000. - С. 170-175.

41. Моделирование межфазного адсорбционного слоя полистирольных частиц методом Ленгмюра / Марченко С.Б., Жданов А.А., Грицкова И.А., Зайцев С.Ю. // Высокомолекулярные соединения. - 2001. - Т.43, - № 3. - С. 452-458.

42. Зайцев С.Ю. Модельные мембраны на основе валиномицина и дипальми-тоилфосфатидной кислоты / Зайцев С.Ю., Мебиус Д. //Доклады РАСХН. - 2001. - № 6. - С. 40-42.

43. Anion-capped benzodithia-18-crown-8 styryl dye monolayers / Zaitsev S.Yu., Sergeeva T.I., Baryshnikova E.A., Gromov S.P., Fedorova O.A., Alfimov M.V., Hacke S., Moebius D. // Colloids & Surfaces. - 2002. - V.198-200. - P. 473-483.

44. Supramolecular assemblies of photochromic benzodithia-18-crown-6-ethers in crystals, solutions, and monolayer / Fedorova O.A., Fedorova Yu.V., Vedernikov A.I., Escheulova O.V., Gromov S.P., Alfimov M.V., Kyzmina L.G., Chyrakov A.V., Howard J., Zaitsev S.Yu., Sergeeva T.I., Moebius D. // New Journal of Chemistry. - 2002. -№26(5). - P. 543-553.

45. Polymer-surfactant interfacial layer of polystyrene particles modeling by monolayer technique / Marchenko S.B., Gritskova I.A., Zaitsev S.Yu. // Colloids & Surfaces. - 2002. - V. 198-200. - P. 501 -508.

46. Investigation of enzymatic hydrolysis of lipid-like substrates and trilaurin in monolayers / Ivanov E.A, Aha В., Volchenkova T.A., Zaitsev S.Yu. // Colloids & Surfaces. - 2002. - B.23. - P. 349-356.

47. Изучение смешанных полимерных монослоев на основе неионных ПАВ / Марченко С.Б., Рогова Е.В., Грицкова И.А., Зайцев С.Ю. // Высокомолекулярные соединения. - 2002. - Т. 44. - №.8. - С. 1405-1411.

48. Исследование методом Лэнгмюра-Блоджетг влияния Р-гликопротеина на свойства липидных монослоев / Зайцев С.Ю., Волченкова Т.А., Устинова О.А., Каштиго Т.В., Флери Ф., Мадулет К., Набиев И.Р., Олейников В.А. // Биофизика. -2002. - Т. 47. - №6. - С. 1073-1079.

49. Регуляция ферментативной активности липаз из Pseudomonas Fluorescens в полиэлектролитных комплексах / Зайцев С.Ю., Горохова И.В., Каштиго T.B., Даутценберг X. // Сб. науч. трудов. - М.: МГАВМиБ. - 2002. - С.4-9.

50. Влияние мембранного Р-гликопротеина на свойства липидных монослоёв /' Зайцев С.Ю., Каштиго T.B., Волченкова Т.А., Устинова О.А., Олейников В.А. // Сб. науч. трудов. -М.: МГАВМиБ. -2002. - С. 9-18.

51. Получение и исследование монослоёв амфифильных фотохромных бензо-15(18)-краун-5(6)-эфиров / Сергеева Т.И., Зайцев С.Ю., Царькова М.С., Фёдорова О.А., Громов С.П. //Сб. науч.трудов. -М.: МГАВМиБ. -2002. - С.19-27.

52. Синтез полистирольных латексов в присутствии,смеси ПАВ для иммуноди-агностических тест-систем./ Марченко С.Б., Рогова Е.В., Грицкова И.А., Зайцев С.Ю. // Сб. науч. трудов. - М.: МГАВМиБ. - 2002. - С^28-31.

53. Изменение жирнокислотного состава молозива и молока в начальный период лактации / Зайцев С.Ю., Макарова Т.Е., Крапивкин Б.А., Жирнова К.Г. // Сб. науч. трудов. - М.: МГАВМиБ. - 2002. - С.35-41.

54. Изучение взаимодействия и активации липазы цз Pseudomonas fluorescens в монослоях и. преципитатах ПАВ / Горохова И.В., Иванов А.Е., Зайцев С.Ю., Зубов В.П. // Известия Академии наук. - 2003. - №4. - С. 38-47.

55. General approach for lipases immobilization in polyelectrolyte complexes / Zait-sev S.Yu., Gorokhova I.V., Cashtigo T.V., Zintchenco A., Dautzenberg H. // Colloids & Surfaces. - 2003. - Vol. 221. - P. 209-220.

56. Monolayers of a novel ionoselective butadienyl dye / Sergeeva T.I., Zaitsev S.Yu., Tsarkova M.S., Gromov S.P., Vedernikov A.I., . Kapichnikova M.S., Alfimov M.V., Druzhinina T.S.i Moebius D. II Journal of Colloids & Interface Science. - 2003. -Vol.265. - P. 77-82.

57. Зайцев С.Ю. Исследование изменения содержания жирных кислот в молозиве и молоке коров в начальный период лактации / Зайцев С.Ю., Крапивкин Б.А., Макарова Т.Б. II Доклады РАСХН. - 2003. - №5. - С. 41-42.

,- 58. Зайцев С.Ю. Исследование мембран на основе белков реакционных центров изфютосистемы шпината / Зайцев С.Ю. // Сб. науч. трудов. - М.: МГАВМиБ. -2003. - С. 4-13.

59. Зайцев С.Ю. Монослои амфифильного фоточувствительного бутадкениль-ного краун-эфира / Зайцев С.Ю., Громов С.П., Мебиус Д. // Сб. науч. трудов -М.: МГАВМиБ.-2003.-С. 14-21.

60. Зайцев С.Ю. Получение и исследование монослоёв белка эктатомина из яда Муравьёв / Зайцев С.Ю., Плужников К.А. II Сб. науч. трудов. — М.: МГАВМиБ. -2003.-С. 21-29.

61. Зайцев С.Ю. Исследование фотохромных жидкокристаллических мономеров и полимеров в монослоях / Зайцев С.Ю., Стаханов А.И., Шибаев В.П. II Сб. науч. трудов. - М.: МГАВМиБ. - 2003. - С. 29-36.

62. Исследование закономерностей формирования межфазных слоев ПАВ на границе раздела фаз жидкость-газ методом висячей капли / Зайцев С.Ю., Генералова А Н., Марченко С.Б., Грицкова И.А., Миллер Р. // Сб. науч. трудов. - М.: МГАВМиБ. - 2003. - С. 36-42.

63. Influence of polymeric nonionic surfactants on the surface tension of styrene and on the styrene polymerization process / Zaitsev S.Yu., Generalova A.N., Marchenko S.B., Makievski A.V., Kraegel J., Miller R. //Colloids & Surfaces. - 2004. - Vol. 239. -P. 145-149.

64. Interaction of calix [4] resorcinarene derivatives on monolayers with copper ions from the aqueous subphase / Turshatov A.A., Melnikova N.B., Semchikov Yu.D., Pyzhkina l.S., Pashirova T.N., Moebius D., Zaitsev S.Yu. // Colloids & Surfaces. -2004. - Vol. 240. - P. 101-106.

65. Synthesis and ion-selective properties of an amphiphilic butadienyl dye / Zaitsev S.Yu., Sergeeva T.I., Moebius D., Vedernikov A.I., Kapichnikova M.S., Gromov S.P. // Mendeleev Communications. - 2004. - Vol. 14. - №5. - P. 199-200,

66. Modelling of polymer - surfactant interfacial layers of latex particles by monolayer technique / Zaitsev S. Yu., Marchenko S. В., Generalova A. A., Gritskova I. A. // Progress in Colloid and Polymer Science. - 2004. - P. 154-158.

67. Иммобилизация панкреатической липазы свиньи в полиэлектролитные комплексы / Зайцев С.Ю., Каштиго Т.В., Иванова О.А., Горохова И.В., Даутцен-берг X. // Доклады РАСХН. - 2004. - № 6. - С. 39-40.

68. Супрамолекулярные структуры на основе краун-эфиров / Зайцев С.Ю., Коршикова А.В., Царькова М.С-.; Фролова Л.А. // Сб. науч. тр. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - 2005. - С. 9-16.

69. Исследования влияния разнозаряженных полиэлектролитов и условий протекания каталитической реакции на активность липазы из бактерии Pseudomonas fluorescence / Каштиго Т.В., Зайцев С.Ю. -II Сб. науч. тр. — ,-■ М.; ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - 2005. - С. 16-20.

70. Метод межфазной тензиометрии и его применение в терапии / Гуревич И.В., Зайцев С.Ю., Фролова Л.А., Миллер P. II Сб. науч. тр. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - 2005. - С. 20-24.

71. Содержание натрия, калия и кальция в крови собак при хронической сердечной недостаточности / Бардюкова Т.В., Зайцев С.Ю., Максимов В.И. // Сб. науч. тр. М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - 2005. - С 41-45.

72. Mixed Langmuir monolayers of an amphiphilic chromo-ionophore and the phospholipid-DMPC / Sergeeva T.I., Gromov S.P., Vedernikov A.I., Kapichnikova M.S., Alfimov M.V., Moebius D., Zaitsev S.Yu. // Applied Surface Science. - 2005. - № 246. - P. 377-380.

73. Spectroscopic properties of an amphiphilic styryl pyridinum dye in Langmuir-Blodgett films / Turshatov A.A., Bossi M.L., Moebius D., Hell S.W., Vedernikov A.!., Lobova N.A., Gromov S.P., Vedernikov A.I., Kapichnikova M.S., Alfimov M.V., Zaitsev S.Yu. // Thin Solid Films. - 2005. -№ 476. - P. 336-339.

74. Influence of the counter-anion on the interaction of cations with the benzodithia-18-crown-6 butadienyl dye in monolayers I Sergeeva T.I., Gromov S.P., Vedernikov A.I.-, Kapichnikova M.S., Alfimov M.V., Vinh-Thuan Lieu, Moebius D., Tsarkova M.S., Zaitsev S.Yu.//Colloids & Surfaces. - 2005. - A. 255. - P. 201-209.

75/ Organisation in monolayers at air-water interface of butadienyl dyes containing benzodithiacrown-ether or dimethoxybenzene / Sergeeva T.I., Gromov S.P., Vedernikov A.I., Kapichnikova M.S., Alfimov M.V., Moebius D., Zaitsev S.Yu. // Colloids & Surfaces. - 2005.-A. 264. - P. 207-214.

76. Возможности метода межфазной тензиометрии для исследования поверхностного натяжения растворов липазы в комплексах с полидиаллилдиметилам-моний хлоридом / Зайцев С.Ю., Максимов В.И.,Милаёва (Гуревич) И.В., Генералова А Н., Фролова Л.А., Царькова М.С., Миллер Р. // Сб. науч. тр. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - 2006. - С. 4-9.

77. Влияние триацетата глицерина на поверхностное натяжение комплексов полиэпектролитов с липазой из поджелудочной железы свиньи / Зайцев С.Ю., Максимов В.И., Милаёва И.В., Генералова А.Н., Царькова М.С., Фролова Л.А., Миллер Р. // Сб. науч. тр. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - 2006. - С. 10-16.

78. Изучение влияния полиэлектролитов и параметров среды на активность липазы из поджелудочной железы свиньи / Тульская Е.В., Зайцев С.Ю., Каштиго Т В., Фролова Л.А., Миллер Р. // Сб. науч. тр. - М.: МГАВМиБ. - 2006. - С. 20-24.

79. Влияние температуры на активность комплексов липазы из гриба Мисог javanicus с полиэлектролитами / Зайцев С.Ю., Шароменко О.В., Тульская Е.В., Каштиго Т.В., Миллер Р., Фролова Л.А. // Сб. науч. тр. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - 2006. - С. 16-19.

60. Метод атомно-силовой микроскопии для характеристики ионоселективных пленок, моделирующих биологические мембраны / Зайцев С.Ю., Сункин Н.С., Фролова Л.А., Логинов Б.А. // Сб. науч. тр. - М.: МГАВМиБ. - 2006. - С.24-30.

81. Molecular organisation of an amphiphilic styryl pyridimium dye in monolayers et the air/water interface m the presence of various anions / Turshatov A.A., Moebius D., Bossi M.L., Hell S.W., Vedernikov A.I., Lobova N.A., Gromov S.P., Aifimov M.V,, Zaitsev S.Yu. // Langmuir (Am.Chem.Soc.). - 2006. - № 22. - P. 1571-1579.

82. P-glycoprotein effect on the' properties of its natural lipid environment probed by Raman spectroscopy and Langmuir-Blodgett technique / Oleinikov V.A., Fleury F., lanoul A., Zaitsev S.Yu., Nabiev t. // FEBS Letters. - 2006. - № 580. - P. 4953:4958.

83. Исследование поверхностного натяжения сыворотки крови животных / Ми-лаёва Й.В., Максимов В.И., Зайцев С.Ю., Миллер Р., Козлов С.А. // Ветеринарная медицина. - 2006. - №2-3. - С.57-58.

34. Влияние параметров среды на активность липазы из поджелудочной железы свиньи, иммобилизованный в полиэлектролитные комплексы / Тульская Е.В., Зайцев С.Ю., Каштиго T.B. // Ветеринарная медицина. - 2006. - №2-3. - С.59-60.

35. Изучение активности симпато-адреналовой системы у собак с хронической сердечной недрстаточностью / Бардюкова T.B., Зайцев С.Ю., Максимов В.И. // Ветеринарная медицина. - 2006^- №2-3. - С.28-29.

86. Ферментный профиль крови собак в норме и при хронической сердечной недостаточности / Бардюкова Т.В., Максимов В.И., Тульская Е.В., Зайцев С.Ю. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины. - 2006. - Т. 185. - С.3-9.

87. Особенности некоторых физиологических показателей сыворотки крови лошадей в связи с полом и возрастом / Максимов В.И., Зайцев С.Ю., Милаёва И.В., Козлов С.А., Миллер Р. // Ученые записки Казанской государственной академий ветеринарной медицины. - 2006. - Т.,185. - С.208-213.

88. Polymer films with an amphiphilic crown-ether styryl dye as prototype of chemo-sensoring materials / Zaitsev S.Yu,, Varlamova E.A., Tsarkova M.S., Staroverova l.N., jGogasov K.A., Gromov S.P., Aifimov M.V., Turshatov A.A., Moebius D. //Mendeleev Communications. -2006. - Vol. 16. - №6. - P. 300-301.

89. Зайцев С.Ю. Особенности жирнокислотного состава молозива и молока в первые недели лактации у коров черно-пестрой породы при родильном парезе / Зайцев С.Ю. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины. - 2006. - Т. 186. - С. 135-141.

90. Биоселективный нанокомпозитный материал на основе фоточувствительного молекулярного сенсора / Зайцев С.Ю., Бондаренко В.В., Варламова Е.А., Староверова И.Н., Фролова Л.А., Царькова М.С. II Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины. - 2006. - T.186. - С. 141143.

91. Исследование поверхностного натяжения сыворотки крови лошадей / Милаёва И.В., Зайцев С.Ю., Максимов В.И., Козлов С.А., Миллер Р. // Российский ветеринарный журнал. - 2006. - №3. - С. 26-27.

Сдано а производство 6.04.2007 г. Ризограф Тираж 100

Заказ 86

Издательско-полиграфический отдел ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.

109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Зайцев, Сергей Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о структурной организации и свойствах ряда ферментов, важных для биохимического анализа

1.2. Общие принципы иммобилизации ферментов и свойства супрамолекулярных ферментных систем

1.3. Межфазная тензиометрия модельных растворов и биологических жидкостей

1.4. Супрамолекулярные ферментные системы в биосинтезе жирных кислот и их влияние на особенности жирнокислотного состава молока в норме и при патологических состояний животных

1.5. Методы формирования и исследования моделей биомембран и перспективные направления их применения

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И СВОЙСТВА СУПРАМОЛЕКУЛЯРНЫХ ФЕРМЕНТНЫХ СИСТЕМ И БИОМАТЕРИАЛЫ НА ИХ ОСНОВЕ

2.1. Фундаментальные аспекты гидролиза триглицеридов и новых липидоподобных субстратов в монослоях под действием липаз

2.2. Изучение взаимодействия липазы с поверхностно-активными веществами и его влияния на процессы ферментативного гидролиза на границе раздела фаз

2.3. Исследование двухкомпонентных комплексов с липазами из различных источников и влияния условий среды на их ферментативную активность

2.4. Трехкомпонентные комплексы из двух полиэлектролитов и фермента

ГЛАВА 3. СУПРАМОЛЕКУЛЯРНЫЕ СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКОВ И ЛИПИДОВ В ИССЛЕДОВАНИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ ЖИВОТНЫХ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИИ

БИОХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ АНАЛИЗА

3.1. Изменения ряда биохимических параметров крови собак в зависимости от возраста и при хронической сердечной недостаточности

3.2. Межфазная тензиометрия в исследовании белок-липидных систем и крови животных

3.3. Сравнительное исследование жирнокислотного состава молозива и молока в первые недели лактации у коров черно-пестрой породы

3.4. Влияние биологически активных добавок на биохимические показатели биологических жидкостей животных

ГЛАВА 4. МНОГОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СУПРАМОЛЕКУЛЯРНЫЕ СИСТЕМЫ В МОДЕЛИРОВАНИИ БИОМЕМБРАН И

СОЗДАНИИ БИО- И НАНОМАТЕРИАЛОВ

4.1. Выделение и исследование различных типов липидов, их смесей с белками реакционных центров в монослоях

4.2. Исследование супрамолекулярных систем липидов с белками (пептидами) и их взаимодействия с катионами металлов для моделирования процессов молекулярного узнавания в биомембранах

4.3. Сравнительное исследование монослоев мембранных фракций клеток с разным содержанием П-гликопротеина

4.4. Супрамолекулярные системы на основе новых мембранно- активных соединений, липидоподобных мономеров и полимеров

ВЫВОДЫ

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Супрамолекулярные биохимические системы в исследованиях биомембран и биологических жидкостей животных"

Актуальность проблемы. Проблема создания, изучения и применения супрамолекулярных биохимических систем (СБС) с заданными свойствами, представляющих собой высокоорганизованные комплексы белков, липидов и других биологически активных соединений (БАС), является современной и находится «на стыке» биологической и биоорганической химии; био- и нанотехнологии; фундаментальной медицины и ветеринарии. Решение фундаментальных и прикладных аспектов этой комплексной проблемы имеет важное значение для биохимических исследований биологических жидкостей животных, моделирования биомембран, создания бионано-материалов и т.д. [5-11,13-15,51-59, 70-73,84-88, 111, 117, 150,202,215,273, 281-288,291,309,374-377].

Среди СБС наибольшее значение имеют комплексы на основе белков, прежде всего - ферментов, применяющиеся в медицине, сельском хозяйстве, ветеринарии, а также в промышленности: пищевой, фармацевтической, косметической, текстильно-кожевенной. К настоящему времени накоплен значительный экспериментальный материал и сформулированы теоретические представления о методах иммобилизации различных ферментов [15, 48, 52, 93, 111, 150, 202, 215, 195-198, 241, 281-288, 309], однако исследований по направленному изменению ферментативной активности липаз в трехкомпонентных комплексах на основе двух противоположно заряженных полимеров до начала наших работ не проводилось. Многие ферменты, детектируемые в плазме крови и широко применяемые для диагностики физиолого-биохимического статуса животных, можно рассматривать как «эндогенные» СБС высоких уровней организации, поскольку они состоят из нескольких полипептидных цепей (субъединиц), которые, комбинируясь различными способами, образуют четвертичную структуру фермента. Так, лактатдегидрогеназа (ЛДГ) состоит из 4 субъединиц 2 типов (Н и М); креатинкиназа (КК) - из 2 субъединиц 2 типов (В и М). Более того, у животных обнаружено 5 изоформ ЛДГ и 3 изоформы

КК [74, 75, 78,107, 114]. Все эти ферменты и их изоформы в крови животных составляют характерный набор («ферментные» СБСФ или «ферментный профиль»), который зависит от патологических изменений органов и тканей животных, что явилось нашей базовой моделью для биохимических исследований крови животных и совершенствования биохимических методов анализа. Новыми «интегральными» характеристиками не только плазмы крови, но и других биологических жидкостей являются данные по их поверхностному натяжению (ПН), которые в последние годы используются в диагностике заболеваний человека в ряде научно-медицинских центров ФРГ и Украины [53-56, 98, 187-193, 292-295, 302, 303]. Поэтому актуальным является клиническое исследование ПН плазмы крови животных в сравнении с данными биохимических анализов, которое выполнено для животных в ФГОУ ВПО МГАВМиБ впервые в мире.

Важную роль играют СБС на основе липидов, что обусловлено их значением в биоэнергетике, биомембранах, биологических жидкостях животных [5-9, 32-34, 74-78, 107, 114, 374-376]. Известно, что биохимии-ческий (в т. ч. - липидный) состав крови и молока претерпевает значительные изменения во время лактации у коров. Однако детальные исследования изменений липидного состава молозива и молока коров по семидесяти жирным кислотам при различных состояниях животных до сих пор не проводились. Эти исследования становятся все более актуальными в связи с вопросом о качестве и подлинности вырабатываемых молочных продуктов. Другим важным аспектом «липидных» СБСЛ является структурно-функциональное моделирование биомембран, что привлекает все большее внимание ученых [1, 10, 13, 84-88, 150, 209, 374-377]. Актуальным является исследование фрагментов биомембран, комплексов липидов, белков, БАС и их аналогов в монослоях, которые представляют собой «липидные» и «синтетические» СБСЛ, имеющие как фундаментальное (для моделирования биопроцессов самоорганизации, молекулярного узнавания и т.д.), так и прикладное значение (для создания бионаноматериалов и т.д.) [32-34, 70-73, 118-122,126, 150,164-170,195-198,215,265-268,307].

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- разработать принципы систематизации СБС на основе ферментов (СБСФ) и липидов (СБСЛ) по уровням структурной организации;

- разработать модель и определить константы гидролиза липазами липидоподобных субстратов в монослое (как СБСф 1го уровня);

- разработать методику и провести исследования поверхностного натяжения модельных систем и сыворотки крови здоровых лошадей (как СБС 6го уровня) в сравнении с биохимическим анализом крови;

- изучить изменения жирнокислотного состава молозива и молока (как СБСЛ 1го уровня) у коров в течение первых недель лактации при сравнении здоровых и больных животных;

- получить и исследовать СБСЛ 2го и 3го уровней (различные типы монослоев на основе липидов с включенными белками и пептидами) как моделей биомембран, био- и наноматериалов;

- получить и изучить монослои мембранных фракций клеток с различным содержанием П-гликопротеина (как СБСЛ 4го уровня).

- получить и изучить монослои новых мембрано-активных соединений -амфифильных фотохромных комплексонов (АФК) как «синтетических» СБС, моделирующих определенные структурно-функциональные параметры СБСЛ 2го-4го уровня.

Научная новизна работы. Разработаны принципы создания и изучения супрамолекулярных биохимических систем с заданными свойствами и уровнями организации. На основании детального исследования особенностей структурной организации «ферментных» и «липидных» СБС предложена их систематизация по уровням с регулируемым составом. Разработана модель и определены константы гидролиза липазами новых липидоподобных субстратов в монослое на границе раздела фаз. Получены комплексы на основе липазы и двух полиэлектролитов, проявляющие повышенную каталитическую активность. Предложена схема формирования этих многокомпонентных СБСФ и показано влияние полимерно-ионного окружения на ферментативную активность липазы из поджелудочной железы свиней, бактериальных липаз и трипсина.

Разработана методика определения поверхностного натяжения модельных СБС и сыворотки крови животных (как «эндогенной» СБС высшего уровня). Впервые определены характеристические значения ПН у здоровых лошадей и обнаружены достоверные отличия у жеребцов и кобыл. Показано, что статические (начальные) значения ПН определяются липидным и солевым составом сыворотки крови, а динамические значения ПН - постепенной адсорбцией белков сыворотки крови из объёма на границу раздела фаз.

Впервые проведено сравнительное изучение «ферментного профиля» сыворотки крови (как СБСФ 5го уровня) у собак старших возрастов в норме и при хронической сердечной недостаточности (ХСН) на основании: как определения активности аланинаминотрансферазы (AJIT), аспартатаминотрансферазы (ACT) и у-глутамилтрансферазы (ГГТ), так и содержания изоферментных форм лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и креатинкиназы (КК). Важно, что во всех контрольных группах происходит снижение активности этих ферментов с возрастом; а во всех опытных группах (при ХСН) происходит увеличение в 2-4 раза активности АЛТ, ACT и ГГТ; в 8-10 раз активности ЛДГ (преимущественно за счет фракций ЛДГ] и ЛДГ2); в 4-6 раз активности КК (за счет фракций КК-МВ и КК-ММ).

Впервые детально исследовано изменение содержания большого числа (71ой) жирных кислот (ЖК), в том числе 33х изомеров ЖК, в молозиве и молоке (как «ЖК профиль» или СБСЛ 1го уровня) у коров в первые недели лактации в норме и при патологии, а также при введении в рацион добавки «Nurisol» (как «экзогенной» СБСЛ).

Изучены мембраны на основе липидов, пептидов и белков (СБСЛ 2го - 4го уровней), перспективные для моделирования биомембран и создания биосенсоров. Определены условия получения монослоев мембранных фракций клеток с различным содержанием (до 32%) П-гликопротеина (ПГП). Максимальный эффект действия верапамила (модулятора ПГП) наблюдается, когда количество молекул верапамила в субфазе сравнимо с количеством молекул ПГП в монослое, что указывает на специфические изменения в структуре мембранных фракций клеток. Детально изучены «синтетические» СБСЛ 2Г0-4Г0 уровня на основе новых мембрано-активных соединений (АФК) и разработаны принципы создания био- и наноматериалов с комплексом заданных свойств.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана методика проведения исследований ПН сыворотки крови лошадей и показана перспективность внедрения в практику ветеринарии, зоотехнии и биологии достаточно простого и удобного метода экспресс-диагностики физиолого-биохимического статуса животных. Результаты изучения биохимических показателей крови у собак при ХСН показали возможность комплексной диагностики ХСН и разработки эффективных методов коррекции возникших изменений, что используется в работе ветеринарных клиник г. Москвы.

Определены оптимальные условия для иммобилизации липаз в комплексы с полиэлектролитами, позволяющие получить биоматериалы на основе СБСф с заданными свойствами. На основе сравнительного исследования различных комплексов липаз микробного и животного происхождения получены ферментные препараты с регулируемой активностью в широком температурном интервале, что представлено в заявках автора и др. №2006111372, №2006111373 и №2006111374 на получение патентов РФ на изобретения (положительные решения от 13.02.2007 г. с приоритетом от 14.06.2006 г.).

Впервые получен «ЖК профиль» по 71ой жирной кислоте молока и молозива коров черно-пестрой породы в зависимости от периода лактации, состава рациона и состояния здоровья животных, что имеет огромное значение при разработке процессов получения диетических молочных продуктов и необходимо для разработки нормативных документов на молочную продукцию (ГОСТ Р 52253-2004 и др.), где ЖК состав является одним из показателей, позволяющих выявить фальсификат и недоброкачественную продукцию.

Изучены различные типы липид-белковых монослоев и показана их эффективность для моделирования процессов молекулярного узнавания и транспорта в биомембранах, что важно для ряда биохимических методов анализа. Разработаны методики и получены серии образцов нанокомпозитных материалов на основе новых мембрано-активных соединений (АФК) для детекции катионов металлов и диаминов: акты №1, №2, №3 от 06.11.2006 г. при сдаче темы ИН-12.1/015/027 Минобрнауки РФ по гос. контракту №02.434.11.2039 от 09.11.2005 г., выполненной совместно с учеными ЦФ РАН с получением патента РФ на изобретение №2292368 с приоритетом от 27.12.2005 г.

Результаты и основные научно-методические положения диссертации используются в лекционных курсах и лабораторных практикумах для студентов 2-5 курсов при подготовке специалистов высшей квалификации по специальности 012300 - «Биохимия», а также для подготовки аспирантов, докторантов и соискателей в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по специальности 03.00.04 - «Биохимия».

Основные положения и результаты, выносимые на защиту:

- принципы систематизации и особенности структурной организации СБС «на основе ферментов» (СБСф) и «липидов» (СБСЛ);

- разработанную модель и полученные константы гидролиза липазами липидоподобных субстратов в монослое (СБСФ 1го уровня);

- данные по влиянию поверхностно-активных веществ и полимерно-ионного окружения на каталитические свойства СБСф 2го - 4го уровней (из липаз и трипсина) и созданные на их основе биоматериалы;

- закономерности изменения «ферментного профиля» сыворотки крови (как СБСф 5 го уровня) собак старших возрастов в норме и при хронической сердечной недостаточности;

- разработанную методику и данные исследования поверхностного натяжения модельных систем и сыворотки крови здоровых лошадей (как СБС 6го уровня) в сравнении с биохимическим анализом крови;

- данные по монослям мембранных фракций клеток с различным содержанием П-гликопротеина (как СБСЛ 4го уровня);

- закономерности структурно-функциональных изменений для новых мембрано-активных соединений (АФК) в модельных мембранах (как «синтетических» СБСЛ 2го - 4го уровня) и нанокомпозитные материалы на их основе с сенсорными свойствами.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались с 1996 по 2006 годы на 32 всероссийских и международных съездах, конференциях, симпозиумах и семинарах по актуальным пробле-мам биохимии, физико-химической биологии, полимеров, коллоидов, ветеринарии и зоотехнии: 2nd, 3rd, 4th International Symposium "Molecular Order and Mobility in Polymer Systems" (Russia, St.-Petersburg 1996, 1999, 2002); XVI и XVII Менделеевские съезды по общей и прикладной химии, (С-Петербург 1998, Казань 2003); 2-я и 3-я Международные конференции "Химия высокоорганизованных веществ и научные основы нанотехнологии" (С-Петербург, 1998, 2001); 7th, 8th, 9th, 10th European Conferences on Thin Organized Films (Potsdam, Germany 1998, Otranto, Italy, 2001, Valladolid, Spain, 2004, Riga, Latvia, 2006); International Symposium "Lipid and surfactant dispersed systems", (Moscow, Russia, 1999); 9th International confe-rence of Organized Molecular Films (Potsdam, Germany,

2000); Всероссийская конференция с международным участием «Сенсор-2000» (С.-Петербург, 2000); 3-я Национальная конференция РСНЭ (Москва,

2001); XX International Conference on Photochemistry (Moscow, 2001); 3-ий Съезд биохимического общества РФ (С-Петербург, 2002); Всероссийская научно-производственная конференция по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); International Conference "Nanotechnologies in the area of physics, chemistry and biotechnology" (St. Petetsburg, Russia, 2002); 2nd, 3rd International Symposium "Molecular Design and Synthesis of Supramolecular Architectures" (Kazan, Russia, 2002, 2004); XIXth IUPAC Symposium on Photochemistry (Budapest, Hungary, 2002); XVIth, XVIIth European Conference Chemistry at Interfaces Conference (Vladimir, Russia, 2003, Loughborough, UK, 2005); XXVIII, XXX International Symposium on Macrocyclic Chemistry (Gdansk, Poland, 2003, Dresden, Germany, 2005);

Всероссийская научно-техническая конференция (Мурманск, 2003); IX International conference "The problems of solvation and complex formation in solution" (Plyos, Russia, 2004); 2, 3 и 4 Всероссийские Каргинские Конференции (Черноголовка, 2000; МГУ, Москва, 2004 и 2007); European Polymer Congress (Moscow, Russia, 2005); Xth international seminar on inclusion compounds (Kazan, Russia, 2005); Московские международные ветеринарные конгрессы (Москва, 2004-2006); Международная научно-производственная конференция агробиологической промышленности (Курск, 2006); Международная научно-практическая конференция по болезням лошадей (Москва, 2006); Научно-практические конференции ИБХ РАН (Москва, 19962004) и ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2001-2006).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 180 печатных работ, из них: 3 книги, 88 статей в журналах и научных сборниках (из них в изданиях, рекомендованных ВАК РФ: 24 статьи в российских и 26 статей в международных рецензируемых журналах), 89 тезисов докладов; а также 1 патент и 3 положительных решения на патенты РФ, 9 методических работ.

Личный вклад автора. Автором предложены основные направления исследований и разработаны важнейшие методики для экспериментального подтверждения предложенных им идей. Все ключевые эксперименты выполнены лично автором и лишь второстепенные - аспирантами и сотрудниками при участии автора. Лично автором проведена основная работа по обработке и оформлению полученных результатов, по написанию всех научных проектов и публикаций. В исследованиях, выполненных совместно с другими лабораториями в России и за рубежом, вклад автора заключался в обсуждении и постановке задач, в проведении экспериментов самим автором в период его регулярных внутренних и заграничных командировок в эти лаборатории, в обработке и оформлении результатов в виде печатных работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Зайцев, Сергей Юрьевич

выводы

1. Сформулированы принципы создания и изучения супрамолекулярных биохимических систем (СБС) на различных уровнях структурной организации. На основании изучения «ферментных» - СБСФ 1го уровня разработана модель гидролиза липазами новых липидоподобных субстратов (производных глицерина, жирных кислот и аминокислот) в монослое и определены кинетические константы данного ферментативного процесса: ккат от 7 до 11 с"1; КМ(каж) от 1,7 до 2,0'10"6 М. Полученные значения констант свидетельствуют о высоких скоростях превращения этих субстратов, что подтверждает влияние строения субстратов и уровня их организации на границе раздела фаз на каталитические свойства СБСф.

2. Установлены оптимальные соотношения компонентов, обеспечивающие высокую эффективность включения липаз в ряд поверхностно-активных веществ (ПАВ) с радикалами от -С12Н25 до -С18Н37 и увеличение активности иммобилизованной липазы до 12,5 раз относительно исходного фермента. Показана корреляция между активацией фермента в таких ПАВ и параметрами их смешанных монослоев с липазами. Такие СБСФ 2го уровня являются перспективными бионаноматериалами для получения важных биологически-активных соединений заданного строения и свойств.

3. Установлены оптимальные условия получения многокомпонентных комплексов (СБСФ 3го и 4го уровней) на основе разнозаряженных полиэлектролитов и ферментов (трипсина, липаз из бактерий и поджелудочной железы свиней) с высокой ферментативной активностью, что реализуется только при заданных мольных соотношениях между полимерами и ферментов в этих сложных комплексах и определенных условиях среды. Изучение этих СБСф при высоких температурах показало увеличение активности иммобилизованной липазы в 4,5-7,5 раз при 60-80°С по сравнению с контролем при 25°С. Обнаруженное повышение активности липаз после иммобилизации в полимерное окружение является основой создания новых бионаноматериалов с уникальными свойствами.

4. Изменения в «ферментном профиле» плазмы крови (СБСФ 5го уровня) проявляются при старении организма и имеют важное значение для диагостики хронической сердечной недостаточности.

4.1. Показано, что активность аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, у-глутамилтрансферазы, лактатдегидро-геназы (ЛДГ), креатинкиназы (КК) уменьшается с возрастом у здоровых животных, тогда как у собак с сердечной недостаточностью происходит увеличение активности этих ферментов: особенно для ЛДГ (в ~8 раз) и КК (в ~4 раза) у собак всех возрастных групп.

4.2. Характерные изменения в «изоферментном профиле» плазмы крови собак проявляются у собак всех возрастов с хронической сердечной недостаточностью. Обнаружено увеличение активности ЛДГ фракций: ЛДГ1 в ~15 раз, ЛДГ2 - в ~14 раз, ЛДГ3 - в ~2 раза, ЛДГ4 - в 1,4 раза. Активность ЮС при этом увеличивается в основном за счет фракций КК-МВ и КК-ММ у собак всех возрастов.

5.1. Установлены как общие параметры поверхностного натяжения (ПН) сыворотки крови для всех лошадей: 75,0-75,1 мН/м (ПН1) и 72,4-73,5 мН/м (ПН2), так и специфические возрастные: 62,2-62,5 мН/м (ПНЗ, для животных 4-6 лет); 65,0-69,2 мН/м (ПНЗ, для животных 2-3 лет). Путем экстраполяции начального (ЭН) и конечного (ЭК) участков удалось количественно охарактеризовать сложные тензиограммы для определенных групп лошадей: для 2-3 летних кобыл (ЭН и ЭК - 4,5 мН/м) и жеребцов (ЭН и ЭК - 6,0 и 9,0 мН/м), для 4-6 летних кобыл (ЭН и ЭК - 3,3 и 10,1 мН/м) и жеребцов (ЭН и ЭК - 5,0 и 11,3 мН/м). Доказана корреляционная связь между этими параметрами и биохимическими показателями крови лошадей (уровнем общего белка, альбуминов, триглицеридов, глюкозы, хлоридов, кальция, натрия). Показана перспективность данного метода для оценки физиолого-биохимического статуса лошадей.

5.2. Установлены значения ПН сложных водных дисперсий белков: бычьего сывоточного альбумина (БСА) и липаз из различных источников; липидов: триглицеридов, фосфатидалхолина (ФХ) в различных концентрациях и условиях среды, моделирующих плазму крови животных. Показано, что при включении БСА и солей в дисперсию ФХ наблюдаются значения ПН1 дисперсий в среднем 71-74 мН/м ПН2 - 64-66 мН/м, ПНЗ 55-58 мН/м в зависимости от состава, что существенно отличается от ПН для исходных компонентов. В целом, значения ПН1 и ПН2 определяются солевым и липидным составом сыворотки крови, а значения ПНЗ -постепенной адсорбцией белков из объёма на границу раздела фаз. Показана важность этих параметров для интерпретации биохимических данных крови животных.

6. Установлено влияние «экзогенной» СБС на «эндогенную» СБС на примере изменения жирнокислотного состава молозива и молока при введении в рацион коров биологически активной добавки «Nurisol», содержащей «протективные липиды». Показательным для ненасыщенных жирных кислот (ЖК) является содержание С 18:1 (17,9%) в молозиве первого удоя у коров экспериментальной группы; также как и содержание С 18:2 (3,41%), которое снижается (до 2,96%) к 21м суткам, но остается выше ее содержания в молоке контрольной группы. Эта тенденция характерна для всех моно- и полиненасыщенных ЖК, при отдельных количественных отличиях, что демонстрирует положительное влияние препарата «Nurisol» на содержание ненасыщенных ЖК в молозиве и молоке коров.

7. Показано биохимическое значение изменений содержания 71ой ЖК, в том числе 33х изомеров ЖК (представляющих собой «жирнокислотный профиль» или «липидную» СБСЛ 1го уровня) в молозиве и молоке коров в первые недели лактации в норме и при родильном парезе. Массовая доля насыщенных ЖК с Г по 10ые сутки в молоке здоровых животных возрастает с 61,4% до 62,3%), а у больных - снижается с 75,5%) до 65,2%; доля мононенасыщенных ЖК в молоке у здоровых коров возрастает с 23,8% до 35,4%, у больных - с 18,7% до 30,1%; доля полиненасыщенных ЖК в молоке уменьшается с 6,9% до 5,4% у здоровых коров и с 5,3% до 4,7%) у больных коров. Относительное понижение доли моно- и полиненасыщенных ЖК в молозиве больных животных может служить показателем протекания патологических процессов у коров.

8. Установлены особенности липидного состава («липидные» СБСЛ 2го уровня) тилакоидных мембран. Показано, что изменения в жирнокислотном составе липидов являются одним из факторов эффективной адаптации биомембран к сложным фотохимическим процессам. Установлено, что монослои на основе липидов с включенными пептидами и белками (СБСЛ 3го уровня) являются уникальными инструментами для количественной характеристики межмолекулярных взаимодействий в биомембранах, прежде всего - молекулярного узнавания и самоорганизации на границе раздела фаз. Обнаружена возможность направленного изменения структурно-функциональных характеристик фоточувствительных белков в моно- и мультислоях с липидами. Установлено, что по своим спектральным свойствам такие монослойные мембраны перспективны как фоточувствительные элементы биосенсорных устройств.

10. Показано, что монослои новых мембрано-активных соединений -амфифильных фотохромных комплексонов (АФК) являются «синтетическими» СБСЛ 2го, 3 го и 4го уровней в зависимости от учета определенных структурно-функциональных параметров. Так, в 2 раза меньшие значения площади, занимаемой в монослое молекулой АФК-Ic, по сравнению с АФК-Ia и АФК-Ib (как и ряд других структурных параметров), свидетельствуют о существенном изменении организации монослоя мембран за счет направленных изменений в химическом строении исходных АФК, что является определяющим для моделирования СБСЛ 2го уровня. Установлена высокая селективность определенных типов АФК по катионам щелочных, щелочно-земельных или тяжелых металлов, а также их способность к транс-z/ис-изомеризации при фотоактивации, что моделирует СБСЛ 3го уровня. Комбинацией современных методов впервые показано взаимное влияние фоточувствительных и ионоселективных свойств АФК в монослоях, а также возможность направленного изменения характеристик АФК при встраивании в монослои липидов, липидоподобных мономеров и полимеров («синтетические» СБСЛ 4го уровня). Разработанные выше процессы позволили получить высокоселективные нанокомпозитные материалы, перспективные для детекции катионов щелочных, щелочно-земельных и тяжелых металлов, а также аналогов биогенных диаминов.

Сведения о практическом использовании и рекомендации по использованию результатов исследования

Данные по биохимическому изучению крови собак внедрены в практику ветеринарных клиник г. Москвы. Показана песпективность внедрения в практику метода измерения ПН крови лошадей. Полученные полиэлектролит-липазные комплексы перспективны для использования как каталитические биоматериалы, что представлено в заявках №2006111372,

2006111373 и №2006111374 Зайцева С.Ю. и сотр. на получение патентов РФ с положительным решением от 13.02.2007 г. и приоритетом от 14.06.2006 г. Полученные данные по жирнокислотному составу молока используются при разработке нормативных документов на молочную продукцию, в которых одним из обязательных параметров исследования является жирнокислотный состав (например, ГОСТ Р 52253-2004 «Масло и паста масляная из коровьего молока. Общие технические условия»). Данные об изменениях жирнокислотного состава молока при включении в рацион коров «Nurisol» и разработанные методики определения транс-изомеров полиненасыщенных жирных кислот перспективны для использования в технологии получения диетических продуктов с повышенным содержанием полиненасыщенных жирных кислот.

Результаты диссертации используются для подготовки студентов, аспирантов, соискателей ФГОУ ВПО МГАВМиБ по специальности «Биохимия», в частности по следующим методическим работам:

1. Физико-химические методы в биологии / Зайцев С.Ю., Фролова JI.A., Жирнова К.Г и другие // Методические указания к учебной практике для студентов ВБФ. М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2002. - 33 с.

2. Зайцев С.Ю. Биологические мембраны / Зайцев С.Ю. // Лекция для студентов ВБФ. М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2003. - 12 с.

3. Зайцев С.Ю. Методы исследования биологических мембран / Зайцев С.Ю. // Лекция для студентов ВБФ. М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. -2004. - 12с.

4. Зайцев С.Ю. Биологические мембраны и модельные мембранные системы / Зайцев С.Ю., Царькова М. С. // Лекция для студентов ВБФ. М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2004. - 12 с.

5. Еремеев Н.Л. Энзимология. Кинетика и термодинамика ферментативных реакций / Еремеев Н.Л., Зайцев С.Ю. // Учебно-методическое пособие (гриф УМО ВУЗов РФ). М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2004. -часть1 - 26с.; 2004. - часть2 - 36с.

6. Зайцев С.Ю. Основы биоэнергетики. Дыхательная цепь и АТФ-синтаза / Зайцев С.Ю., Гарбуз Д.Г., Прыгунова Е.В. // Учебное пособие (гриф МСХ РФ). М.: МГАВМиБ им. К.И.Скрябина. - 2005. - 44 с.

7. Еремеев Н.Л. Особенности кинетического поведения иммобилизованных ферментов / Еремеев Н.Л., Зайцев С.Ю. // Учебно-методическое пособие (гриф УМО ВУЗов РФ). М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - 2007. - 43 с.

8. Биологическая химия с основами физической и коллоидной химии / Зайцев С.Ю., Белоновская О.С., Жирнова К.Г и др. // Учебно-методическое пособие (гриф УМО ВУЗов РФ). М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И.Скрябина - 2007 - 146с.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Зайцев, Сергей Юрьевич, Москва

1. Абдулаев Н. Г. Биоорганическая химия зрительного процесса / Абдулаев Н. Г., Артамонов И. Д. // Биологические мембраны 1984.- Т.1.- №.8.-С.775-793.

2. Абрамзон А.А. Поверхностно-активные вещества / Абрамзон А.А. // Л.гХимия, 1981.-304 с.

3. Адамсон А. Физическая химия поверхностей / Адамсон А // М.:Мир, 1979.-568 с.

4. Алексеева Н. Ю. Состав и свойства молока как сырья для молочной промышленности: Справочник/ Алексеева Н. Ю., Аристова В. П., Патратий А. П. и др.; Под ред. Костина Я. И. // — М.: Агропромиздат, 1986. —239 с.

5. Алиев А.А. Обмен веществ у жвачных животных. / Алиев А.А. // М.: НИЦ «Инженер», 1997,- 419 с.

6. Алиев А.А. Оперативные методы исследований с.-х. животных. / Алиев А.А. // Л.: Наука, 1974.-362 с.

7. Алиев А.А. Липидный обмен и продуктивность жвачных животных. / Алиев А.А. // М.: Колос, 1980,- 382 с.

8. Алиев А.А. Лимфа и лимфообразование у жвачных животных. / Алиев А.А. // Л.: Наука, 1982.- 284 с.

9. Ю.Арсланов В. В. Полимерные монослои и пленки Ленгмюра-Блоджетт. Влияние химической структуры полимера и внешних условий на формирование и свойства организованных планарных ансамблей / Арсланов В. В. // Успехи химии 1994.- Т. 63.- N.I.- С. 3-42.

10. Афонский С. И. Новое в учении о биокомплексах и их роли в жизнен-ном процессе / Афонский С. И. // Биокомплексы и их значение в обмене веществ М.: Наука, 1966. - с.3-29.

11. Ахрем А. А. Тонкослойная хроматография / Ахрем А. А., Кузнецова А. И. //М.: Наука, 1965.- 145 с.

12. Бадер X. Полимерные монослои и липосомы модели биологических мембран / Бадер X., Дорн К., Хупфер Б., Рингдорф X. // Успехи химии -1987.- Т. 56.- вып. 12.- С. 2028-2077.

13. Балашов С. П. Фотохимические превращения бактериородопсина / Балашов С. П., Литвин Ф. Ф. // М:МГУ, 1985.- 164 с.

14. Березин И. В. Иммобилизованные ферменты / Березин И. В., Клячко Н. Л., Левашов А. В., Мартинек К., Машаев В. В., Чмельницкий Ю. Л. // М.:Высшая школа, 1987. 159 с.

15. Барачевский В. А. Фотохромизм и его применение. / Барачевский В. А., Лашков Г. И., Цехомский В. А. // М.: Химия, 1977.- 280 с.

16. Бардюкова Т.В. Изучение активности симпато-адреналовой системы у собак с хронической сердечной недостаточностью. / Бардюкова Т.В., Зайцев С.Ю., Максимов В.И. // Ветеринарная медицина. 2006. - №2-3. -С.28-29.

17. Барменков Ю. О. Динамические амплитудно-фазовые решетки в бактериородопсине. / Барменков Ю. О., Кожевников Н. М. // Письма в ЖТФ 1990.- Т. 16.- вып. 1.- С. 65-66.

18. Барменков Ю. О. Адаптивный голографический интерферометр для измерения ступенчатых субмикронных смещений. / Барменков Ю. О., Кожевников Н. М. // Письма в ЖТФ 1991.- Т. 17.- вып. 2.- С. 32-36.

19. Бергельсон Л. Д. Препаративная биохимия липидов./ Бергельсон Л. Д., Дятловицкая Э. В., Молотковский Ю. Г., Батраков С. Г., Барсуков Л. И., Проказова Н. В. //№: Наука, 1981.- 256 с.

20. Бергельсон Л.Д. Ультраструктура биологических мембран./ Бергельсон Л.Д. // ЖВХО, 1975,- т. 20,- № 3.- С. 322-334.

21. Блинов JI. М., Физические свойства и применения ленгмюровских моно- и мультимолекулярных структур. / Блинов Л. М. // Успехи химии 1983.- Т. 52.- С. 1263-1300.

22. Богатский А. В. Краун-эфиры и криптанды. / Богатский А.В., Лукяненко Н.Г., Кириченко Т.И. // Журнал ВХО им. Д.И.Менделеева 1985. - Т. 30. -N.5. - С. 487-499.

23. Богатский А. В. Биологические аспекты действия краун-эфиров, криптандов и их аналогов / Богатский А.В., Назаров Е.И., Головенко Н.Я. // Журнал ВХО им. Д.И.Менделеева 1985. - Т.ЗО.- №.5.- С. 593-599.

24. Богуславский Л. И. Фотоиндуцированный перенос протонов, катализируемый бактериородопсином / Богуславский Л. И., Бойцов В. Г., Волков А. Г., Козлов И. А., Метельский С.Т. // Биоорган, химия 1976.- Т. 2,-№.8.-С. 1125-1130.

25. Брокерхоф X. Липолитические ферменты./ Брокерхоф X., Дженсен Р.; Под ред. Акад. А.Е.Браунштейна и Е.В.Горяченковой // М.:Мир, 1978. -396 с.

26. Бурмистров Е. Н. Клиническая лабораторная диагностика. Основные исследования и показатели / Бурмистров Е. Н. // М.:«Шанс», 2005. 92 с.

27. Вейганд К. Методы эксперимента в органической химии / Вейганд К, Хильгетаг Г.//М.:Химия, 1968.- 944 с.

28. Владимиров Ю. А. Структурная организация мембран / Владимиров Ю.А., Поглазов А. Ф. // В кн.: Биологические мембраны. М.: Медицина, 1973.- С.135-412.

29. Войцицкий В. М. Фотоэлектрические ответы бактериородопсина в системах липид-вода / Войцицкий В. М., Драчев Л. А., Каулен А. Д., Скулачев В. П. // Доклады АН СССР 1979.- Т. 245.- С. 726-729.

30. Войцицкий В. М. Фотоэлектрические ответы бактериородопсина в системах липид-вода. / Войцицкий В. М., Драчев Л. А., Каулен А. Д., Скулачев В. П. // Биоорган, химия 1979.- Т. 5.- №.8.- С. 1184-1195.

31. Всеволодов Н. Н. Биопигменты-фоторегистраторы: фото-материалы на основе бактериородопсина / Всеволодов Н. Н. // М:Наука, 1988.- 224 с.

32. Втюрина И. Ю. Иммунохимическое изучение бактериородопсина с помощью моноклональных антител / Втюрина И. Ю., Курятов А. Б., Киселев А. В. и др. // Биол. мембраны 1984.- Т.1.- №.11,- С. 1161-1170.

33. Гевод В. С. Искусственные мембранные структуры и перспективы их практического применения. / Гевод В. С., Ксенжик О. С., Решетняк И. JI. // Биологич. мембраны 1988.- Т. 5.- №.12.- С. 1237-1269.

34. Горбатова К. К. Биохимия молока и молочных продуктов. / Горбатова К.К. // М: Легкая и пищевая промышленность, 1984. — 344 с.

35. Горбатова К. К. Химия и физика белков молока./ Горбатова К. К. // М.: Колос, 1993. —192 с.

36. Горохова И. В. Изучение взаимодействия и активации липазы из Pseudomonas fluorescens в монослоях и преципитатах ПАВ / Горохова И.

37. B., Иванов А. Е., Зайцев С. Ю., Зубов В. П. // Известия Академии наук. -2003.-№4.-С. 38-47.

38. Давыдова С. Л. Макромолекулярные макроциклические лиганды. / Давыдова С. Л. // Журнал ВХО им. Д.И.Менделеева 1985.- Т. 30.- N.5.1. C. 556-561.

39. Егоров В. В. Радикальная полимеризация ассоциатобразующих мономеров в воде / Егоров В. В., Зайцев С. Ю., Зубов В. П. // Высокомолек. соедин. 1991,- Т. ЗЗА,- №.8.- С. 1587-1608.

40. Егоров В. В. Кинетическое описание радикальной полимеризации в мицеллах поверхностно-активных мономеров / Егоров В. В. // Высокомолек. соедин. 1991.- Т. 33.- №.7.- С. 483-487.

41. Егоров В. В. Кинетическое описание радикальной полимеризации в монослоях мономеров на границе вода-газ. / Егоров В. В., Клямкин А. А. // Вестн. Моск. ун-та, сер. 2, Химия 1992.- Т. 33.- N.2.- С. 197-200.

42. Егоров В. В. Влияние природы инициатора на кинетику радикальной полимеризации NjN-диметил, N-ацетоксидецил, N-метакрилоилэтиламмоний бромида в воде / Егоров В. В., Батракова Е. В., Зубов В. П. // Высокомолек. соедин. 1988.- Т. ЗОА.- №.9.- С. 1859-1861.

43. Егоров В. В. Влияние различных факторов на коллоидные свойства катионных поверхностно-активных мономеров в воде / Егоров В. В., Ксенофонтова О. Б., Пермин А. Б. // Коллоид, журнал 1990.- Т. 52.-№.6.-С. 1175-1179.

44. Егоров В. В. Структурообразование в монослоях непредельных алкил-аммоний галогенидов на границе воде-газ / Егоров В. В., Зайцев С. Ю., Клямкин А. А. Ксенофонтова О. Б., Зубов В. П. // Коллоид, журнал -1990.- Т.52. №.4.- С. 770-774.

45. Егоров В. В. Влияние органических ПАВ на коллоидно-химическое поведение 1\Г,1\Г-диметил, N-ацетоксидецил, N-метакрилоилэтиламмоний галогенидов в воде / Егоров В. В., Ксенофонтова О. Б., Клямкин А. А., // Коллоид, журнал 1991.- Т. 53.- №.1.- С. 14-20.

46. Егоров В. В. Особенности коллоидно-химического поведения ПАВ на основе диметиламиноэтилметакрилатов в присутствии водорастворимых полимеров / Егоров В. В., Батракова Е. С., Ксенофонтова О. Б. // Коллоид, журнал 1991.- Т. 53.- №.2.- С. 143-148.

47. Ивков В.Г., Берестовский Г.Н. Динамическая структура липидного бислоя / Ивков В.Г., Берестовский Г.Н. // М.:Наука, 1981.- 296 с.

48. Кабанов В. А. Полиэлектролитные комплексы / Кабанов В. А., Зезин А. Б., Изумрудов В. А. // «Итоги науки и техники». Серия «Биотехнология» -М:ВИНИТИ, 1987. Т.4. - С.159-198.

49. Казаков В. Н. Межфазная тензиометрия биологических жидкостей: Вопросы теории, методы и перспективы использования в медицине / Казаков В.Н., Синяченко О.В., Постовая М.В. и др. // Арх. Клин. Экспер. Мед. 1998. - Т.7. - №1. - С.5-12.

50. Казаков В. Н. Факторы, влияющие на динамические межфазные тензио-граммы крови и мочи у здоровых людей / Казаков В.Н., Возианов А.Ф., Синяченко О.В. и др. // Арх. Клин. Эксп. Мед. 1999. - Т.8.-№8.- С.19-24.

51. Казаков В. Н. Межфазная тензиометрия и реометрия биологических жидкостей в терапевтической практике / Казаков В.Н. // Донецк: Мед. Университет, 2000. 296 с.

52. Казаков В. Н. Межфазная тензиометрия биологических жидкостей в терапии / В.Н. Казаков, О.В. Синяченко, Г.А. Игнатенко и др. // Донецк: Донеччина, 2003. 584 с.

53. Каштиго Т. В. Ферментативная активность липаз в полиэлектролитных комплексах / Каштиго Т.В., Зайцев С.Ю., Кривошеев А.А. // Сб. научных трудов «Наука и образование» часть4. Мурманск 2003. - С. 169-171.

54. Кейтс М. Техника липидологии / Кейтс М. // М.: Мир, 1975.- 322 с.

55. Клесов А. А., Ферментативный катализ / Клесов А. А., Березин И. В.// М:Издательство МГУ 1980.- 264 с.

56. Конев С. В. Структурная лабильность мембран. / Конев С. В., Аксенцев С. // Биохимия, 1977.- Т. 42,- №2.- С. 187-197.

57. Конев С. В. Структурные перестройки биологических мембран. / Конев С., Волотовский И. Д. // В кн.: Биомембраны: Структура, функции, методы исследования. Рига: Зинатне, 1977. С. 42-76.

58. Конев С. В. Межклеточные контакты / Конев С. В., Мажуль В. М. // Минск: Наука и техника, 1977. 312 с.

59. Кононенко А. А. Модельные устройства на основе бактериородпосина. Прототипы позиционно-чувствительных датчиков. / Кононенко А. А., Лукашев Е. П., Броун JI.C., Чаморовский С.К., Круминг Б.А., Якушев С.А. // Биофизика 1993,- Т. 38.- вып. 6.- С. 996-1002.

60. Котык А. Мембранный транспорт / Котык А., Яначек К. // М.:Мир, 1980.- 338 с.

61. Корочкин JI. И. Генетика изоферментов / Корочкин JI. И., Серов О. JL, Пудовкин А. И. и др. // М.: Наука, 1977. 278 с.

62. Крусь Г Н. Методы исследования молока и молочных продуктов. / Крусь Г Н., Шалыгина А. И., Волокитима 3. В. // М.: Колос, 2000. — 368 с.

63. Курочкин И. Н. Физико-химические и физические принципы функционирования биосенсоров / Курочкин И. Н., Попов Б. Н., Чернов С. Ф. //Биологич. мембраны 1990.- Т. 7.-N.10.- С. 1068-1080.

64. Лакшминараянайах Н. Мембранные электроды / Лакшминараянайах Н. //- Л.: Химия, 1979.- С. 360.

65. Ласкорин В. Н. Применение краунэфиров и криптантов для концентрирования и разделения ионов металлов / Ласкорин В. Н., Якшин В. В. // Журнал ВХО им. Д.И.Менделеева 1985.- Т. 30.- №.5.- С. 579-583.

66. Лев. А.А. Моделирование ионной избирательности клеточных мембран. / Лев. А.А. // Л.: Наука, 1976.- С. 210.

67. Львов Ю. М. Ленгмюровские пленки получение, структура, некоторые функции / Львов Ю. М., Фейгин Л. А. // Кристаллография - 1987.- Т. 32.-С. 802-817.

68. Макарова Т. Б. Изменение жирнокислотного состава молозива и молока в начальный период лактации / Макарова Т. Б., Крапивкин Б. А., Жирнова К. Г., Зайцев С. Ю. // Сб. науч. трудов. М.:МГАВМиБ. 2002. - С.35-41.

69. Максимычев А. В. Бактериородопсин, как возможный элемент мембранных биореакторов / Максимычев А. В., Чаморовский С. К. // Успехи химии 1988.- Т. 57.- №.6.- С. 1058-1079.

70. Мари Р. Биохимия человека / Мари Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. // М.:Мир, 1993.-Т.1.-384 е., т.2,-415 с.

71. Маршалл В. Дж. Клиническая биохимия / Маршалл В. Дж. // М.-СПб.: «БИНОМ»-«Невский Диалект», 1999. 368 с.

72. Менцлер Д. Биохимия. Химические реакции в живой кдетке. Под. ред. акад. А.Е. Браунштейна. / Менцлер Д. //М.: Мир.,1980. Т. 1. - 395 с.

73. Милаева И. В. Исследование поверхностного натяжения сыворотки крови животных / Милаева И. В., Максимов В. И., Зайцев С. Ю., Миллер Р., Козлов С. А. // Ветеринарная медицина. 2006. - №2-3. - С.57-58.

74. Молотковский Ю. Г. Новые типы полимеризуемых фосфатидилхолинов, синтез и свойства. / Молотковский Ю. Г., Дергоусов А. А., Бергельсон Л. Д.//Биоорган, химия- 1988.-Т. 14.-Ж11.- С. 1557-1564.

75. Набиев И. Р. Гигантское комбинационное рассеяние и его применение к изучению биологических молекул, / Набиев И. Р., Ефремов Р. Г., Чуманов Г. Д. //Успехи физических наук. 1988.- Т. 154.- вып. З.-С. 459-496.

76. Найденский М.С. Эффективность применения растворов рибав для коррекции роста и развития яичных цыплят./ Найденский М.С., Зайцев

77. С.Ю., Азарнов Т.О., Азарнова Л.Ю. Куксин Ю.Ф. // Ветеринарная медицина. 2006. - №2-3. - С.34-40.

78. Петров Р. В., Иммунология, / Петров Р. В. // М:Медицина,1982,- 367 с.

79. Платэ Н.А., Валуев Л.И. Проблемы создания биоспецифических синтетических полимеров для контакта с биологическими средами / Платэ Н.А., Валуев Л.И. // Журн. ВХО им. Д.И. Менделеева 1985. - Т.ЗО, №4.-С. 402-410.

80. Плужников К. А. / Выделение и исследование белка эктатомина // Плужников К. А., Нольде Д. Е., Тертышкова С. М., Суханов С. В. и др. // Биоорганическая химия 1994. - Т.20, №8-9. - С.857-870.

81. Попов С. М. Клеточные механизмы регуляции секреторного процесса в молочной железе. / Попов С. М. // — СПб.: Изд. ЛГУ, 1989. — 201 с.

82. Пустовалова Л. М. Практические работы по биохимии / Пустовалова Л. М. // Ротов н/Д:«Феникс», 2004. 320 С.

83. Русанов А.И. Межфазная тензиометрия / А.И. Русанов, В.А. Прохоров,-Санкт-Петербург: Химия, 1994.- 400 с.

84. Синяченко О.В. Динамическая межфазная тензиометрия крови и мочи здоровых людей / Синяченко О.В., Казаков В.Н., Москаленко С.В. и др. // Лабораторная диагностика. 1998. - Т.4. - №6. - С.52-55.

85. Скурихин И. М. Химический состав пищевых продуктов. Кн. 2: Справочник / Под ред. Скурихина И. М. и Вол гарева М. Н. // М.: Агропромиздат, 1987. — 360 с.

86. Справочник технолога молочного производства. Технология и рецепту-ры в 4-х томах (Т. 1. Цельномолочные продукты. Т. 2. Масло коровье и комбинированное. Т. 3. Сыры. Т. 4. Мороженое) — СПб.:ГИОРД, 2003.

87. Степаненко П. П. Микробиология молока и молочных продуктов: Учебник для вузов. / Степаненко П. П. // Сергиев Посад: ООО «Подмосковье», 1999. — 415 с.

88. Тульская Е. В. Влияние параметров среды на активность липазы из поджелудочной железы свиньи, иммобилизованный в полиэлектролитные комплексы / Тульская Е. В., Зайцев С. Ю., Каштиго Т. В. // Ветеринарная медицина. 2006. - №2-3. - С.59-60.

89. Тёпел А. Химия и физика молока. / Тёпел А. // — М.: Пищевая промышленность, 1979. — 623 с.

90. Тривен М. Иммобилизованные ферменты. Вводный курс и применение в биотехнологию / Тривен М. // М.:Мир, 1983.- 213 с.

91. Турко И. В., Селективная гидрофобизация фрагментов Fab иммуноглобулинов G и формирование из них ленгмюровских пленок. / Турко И. В., Пикулева И. А., Ерохин В. В., // Биологич. мембраны 1990.Т. 7.-N10.- С. 1068-1080.

92. Тютюнников Б. Н. Химия жиров / Тютюнников Б. Н., Бухштаб 3. И., Гладкий Ф. Ф. и др. // 3-е изд., М.: Колос, 1992. - 448 с.

93. Уайт А. Основы биохимии. / Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. // Под ред. Ю.А. Овчинникова. М.:Мир, 1985.- Т.1.-534 с.

94. Физер Л. Стероиды / Физер Л., Физер М. // М:Мир, 1964.- 982 с.

95. Финеан Дж. Мембраны и их функции в клетке / Финеан Дж., Колмэн Р., Мичелл Р. // М.: Мир, 1977. 199 с.

96. Чаморовский С. К., Светочувствительные биосенсоры / Чаморовский С.К., Кононенко А. А., Лукашев Е. П. // Итоги науки и техники (серия Биотехнология) М:ВИНИТИ, 1990.- Т. 26.- С. 76-133.

97. Штильман М. И. Полимеры медико-биологического назначения / Штильман М. И. // М.:ИКЦ «Академкнига», 2006. 400 с.

98. Шидловская В. П. Органолептические свойства молока и молочных продуктов. / Шидловская В. П. // М.: Колос, 2000. — 280 с.

99. Шидловская В. П. Ферменты молока / Шидловская В. П. // М.: Агропромиздат, 1985. — 152 с.

100. Хазипов Н. 3., Аскарова А. Н. Биохимия животных / Хазипов Н. 3., Аскарова А. Н. // Казань:КГАВМ. 1999. - 286 с.

101. Фал ер Д. М. Молекулярная биология клетки. Руководство для врачей / Фалер Д. М., Шилдс Д. // М.:БИНОМ-Пресс, 2003. 272 с.

102. Abraham В. М. Determination of the Viscosity of Valinomycin Monolayers as a Function of Surface Density and a Comment on Conformation. / Abraham В. M., Ketterson J. B. //Langmuir- 1985.- Vol.1.- N.4.- P.461-464.

103. Ahlers M. Specific Interactions with Functional Lipid Monolayers Ways of Simulating Biomembrane Processes. / Ahlers M., Mueller W., Reichert A., Ringsdorf H., Venzmer J., // Angew. Chem., Int. Ed. Engl. - 1990.- Vol.29.-P.1269-1285

104. Ahluwalia A. Thermodynamic Study of Langmuir Antibody Films for Application to Immunosensors. / Ahluwalia A., De Rossi D., Monici M., Schirone A. //Biosensors & Bioelectronics- 1991.- Vol.6.- P. 133-141.

105. Ahluwalia A. A Comparative Study of Protein Immobilization Techniques for Optical Immunosensors. / Ahluwalia A., De Rossi D., Monici M., Schirone A., //Biosensors & Bioelectronics 1991.- Vol.7.- P.207-214.

106. Ahluwalia A. Antigen Recognition Properties of Antibody / Ahluwalia A., De Rossi D, Schirone A., // Thin Solid Films 1992.- Vol.210/211.- P.726-729.

107. Ahuja R. C. Charge-Transfer Complex Formation in Monolayers at the Air-Water Interface, / Ahuja R. C., Moebius D., Matsumoto M., // Thin Solid Films 1992.- Vol.210/211.- P.60-63.

108. Ai H. Biomedical Applications of Electrostatic Layer-by-Layer Nano-Assembly of Polymers, Enzymes and Nanoparticles. / Ai H., Lvov Y., Jones S. // Cell Biochemistry and Biophysics.-2003.- Vol.39.- P.23-43,

109. Ai H. Nanoencapsulation of Furosemide Microcrystals for Controlled Drug Release / Ai H., Jones S., de Villiers M., Lvov Y., J. // Controlled Release, 2003.- Vol.86.- P.59-66,

110. Ai H. Electrostatic Layer-by-Layer Nano-Assembly on Biological Microtemplates: Platelets / Ai H., Fang M., Jones S., Lvov Y. // Biomacromolecules.- 2002.- Vol.3.-P. 560-564.

111. Aksenenko E.V. Surface dilational rheology of mixed adsorption layers at liquid interfaces E.V. Aksenenko, V.I. Kovalchuk, V.B. Fainerman et al. // J. Colloid Interface Sci.-1994.- Vol. 162.- P. 215-220.

112. Aizawa M. Molecular Film Technology for Biosensors / Aizawa M., Owaku K., Matsuzawa M., Shinjhara H., Ikariyama Y. // Thin Solid Films 1989, Vol.180, P.227-233.

113. Akimoto A. Vesicles Polymer Model Membranes. / Akimoto A., Dorn K., Gros L., RingsdorfH. //Angew. Chem.:Int. Ed. Engl.- 1981.- Vol. 20.- P.90-91.

114. Alegria G. Langmuir-Blodgett Monolayer Films of the Rhodopseudomonas viridis Reaction Centers: Determination of the Order of the Hemes in the Cytochrome С Subunit. / Alegria G., Dutton P. L. // Biochim. Biophys Acta -1991.- Vol.1057.- N.2.- P.258-272.

115. Aliev K.V. Liposomes in Net; Spontaneous Polymerization of 4-Vinylpyridine on Acidic Liposomal Surfaces. / Aliev K.V., Ringsdorf H., Schlarb B. // Macromol.Chem., Rapid Common. 1984.- Vol.5.- P.345-352.

116. Allen J.P. Structure of the Reaction Centers from Rhodobacter sphaeroides R-26: Protein-Cofactor (Quinones and Fe) Interactions. / Allen J.P., Feher G., Yeates Т.О., Komiya H., Rees D.C. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988.-Vol.85.- N.22 - P.8487-8491.

117. Allen J. P. Structure of the Reaction Centers from Rhodobacter sphaeroides R-26: the Protein Subunits. / Allen J. P., Feher G., Yeates T. Komiya H., Rees D. C. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1987.- Vol.84.- N.7.- P.6162-6166.

118. Andrade J. D. Thin Organic Films of Proteins. / Andrade J. D. // Thin Solid Films 1987.- Vol.152.- P.335-343.

119. Ariga K. Assembling Alternate Dye-Polyion Molecular Films by Electrostatic Layer-by-Layer Adsorption / Ariga K., Lvov Y., Kunitake Т., Am J. // Chem. Soc.- 1997.- Vol. 119.- P.2224-2231.

120. Ariga K. Self-Assembly of Functional Protein Multilayers: From Flat Films to Microtemplate Encapsulation //Ariga K., Lvov Y. // Biopolymers at Interfaces Ed. M. Malmsten, M. Dekker Inc, 2003, NY.-P.367-391.

121. Arizawa S. Quantitative Characterization of Enzyme Adsorbed onto Langmuir-Blidgett Films and the Application to a Urea Sensor. / Arizawa S., Yamamoto R. // Thin Solid Films 1992.- Vol.210/ 211.- P.443-445.

122. Bader H. Liposomes from Dipolar Amphiphiles with a Polymerizable Diyne Moiety in the Hydrophobic Chain. / Bader H., Ringsdorf H. //J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. 1982. - Vol. 20. - P. 1623-1628.

123. Bader R. Watersoluble Polymers in Medicine. / Bader R., Ringsdorf H., Schmidt B. //Angew. Chem. Makromol.- 1984.- Vol. 123/124.- P.457-485.

124. Bangham A.D. Diffusion of Univalent Ions Across the Lamellae of Swollen Phospholipids. / Bangham A.D., Standish M.M., Watkins J.C. // J. Mol. Biol. -1965.- Vol. 13.-P. 238-252.

125. Bangham A. D. Membrane models with phospholipids / Bangham A. D. // In: «Progress in biophysics and molecular biology». Oxford : Pergamon Press, 1968.-Vol. 18.-p. 29-96.

126. Benjamins J. Surface Dilatational Rheology of Proteins Adsorbed at Air/Waret and Oil/Water Interfaces / J. Benjamins, E. H. Lucassen-Reynders // in "Proteins at Liquid Interfaces", Elsevier.-1998.-Vol. 7.- P. 241-284.

127. Boury F. Dilatational properties of poly (d,l-lactic acid) and BSA monolayers spread at the air/water interface / Boury F., Ivanova Т., Panaiotov I. et al. // Langmuir.-1995.- Vol. 11.- P. 599-606.

128. Bueschl R. Polyreactions in Oriented Systems, 30. Mixed Monolayers and Liposomes from Natural and Polymerizable Lipids. / Bueschl R., Hupfer В., Ringsdorf H. // Macromol. Chem., Rapid Commun. 1982.- Vol. 3.- P.589-596.

129. Bueschl R. Mixed membranes Containing Natural and Polymerizable Lipids. / . Bueschl R, Hupfer В., Ringsdorf H. // Macromol. Symp. 1982.-P.342.

130. Bueschl R. Electric Field-Induced Fusion of Large Liposomes from natural and Polymerizable Lipids. / Bueschl R., Ringsdorf H., Zimmermann U. // FEBS Lett.-1982.-Vol. 150,-N. 1.-P.38-42.

131. Binnig G. Surface Studies by Scanning Tunneling Microscopy. / Binnig G., Rohrer H., Gerber Ch., Weibel E. // Phys. Rev. Letters 1982,- Vol.49.- N.I.-P.57-61.

132. Birge R. R. Photophysics and Molecular Tlectronic Applications of the Rhodopsin. / Birge R. R. // Ann. Rev. Phys. Chem. 1990.- Vol.41.- P.683-733.

133. Birge R. R. Nature of the Primary Photochemical Events in Rhodopsin and Bacteriorhodopsin // Biochim. Biophys. Acta 1990.- Vol.1016.- P.293-327.

134. Birge R. R. Optical Random Access Memory Based on Bacteriorhodopsin. / Birge R. R., Zhang C.-F., Lawrence A. F. // In: "Molecular Electronics: Biosensors and Biocomputers" Ed. by Hong F. T. N. Y.: Plenum Press 1989.-P.369-379.

135. Birdi K. S. Lipid and Biopolymer Monolayers at Liquid Interfaces. / Birdi K. S. // N.Y. & London: Plenum Press, 1989.- P.325.

136. Bodalia R. R. Polymerization of 2-Pentadecyl-aniline at Fluid Surfaces: Kinetics, Thermodynamics and Mechanism. / Bodalia R. R., Duran R. S. // J. Am. Chem. Soc. 1993.- Vol.115.- P.l 1467-11474.

137. Bretscher M. S. The structure of cell membranes. / Bretscher M. S. // -Biochem. Soc. Trans.- 1974.- Vol. 2.- № 4.- P. 715.

138. Bretscher M. S. Mammalian plasma membranes. / Bretscher M. S., Raff M. C. // Nature, 1975.- Vol. 258.- № 5530.- P. 43-49.

139. Capaldi Roderick A. A dynamic model of cell membranes. / Capaldi Roderick A. // Sci. Amer.- 1974.- Vol 230.- № 3.- P. 27-33.

140. Caruso F. Lateral Diffusion Study of Amphiphiles in Air-Water Monolayer Films of Polymerizable Surfactants / Caruso F., Grieser F., Thistlethwaite P. J., Furlong D. N. // Macromolecules 1994.- Vol.27.- P.77-86.

141. Chemel A. Polymerization of Vinyl Stearate Multylayers . / Chemel A., Fort T. Jr., Lando J.B. // J. Polym. Sci. 1972. - Vol. 10. - P. 2061-2083.

142. Chen P. Axisymmetric Drop Shape Analysis (ADSA) and its Application, / P. Chen, D.Y. Kwok, R.M. Prokop et al. // in "Drops and Bubbles in Interfacial Science", Elsevier.-1998.- Vol. 6.- P. 61-138.

143. Clark D.C. Evidence of extraneos surfactant adsorbtion altering adsorbed layer properties of P-lactoglobulin / Clark D.C., Husband F., Wilde P.J. et al. // J. Chem. Soc. Faraday Trans.-1995.- Vol. 91(13).- P. 1991-1996.

144. Cui T. Field Effect Transistor Fabricated by Electrostatic Layer-by-Layer Nanoassembly./ Cui Т., Lvov Y., // IEEE Electronic Devices. 2004. - Vol.51.-P.503-507.

145. Cui Т. Nanoassembly for Polymer Electronics // Cui Т., Lvov Y. // Nanotechnology Ed. H. Nalwa, NY.:Academic Press. 2004. P.24-56.

146. Daemen F. J. M. Vertebrate rod outer segment membranes. / Daemen F. J. M // Biochim. Biophys Acta. 1973.- Vol.300.- P.255-288.

147. Davis F. Study of a Polymeric Langmuir-Blodgett Multilayer Film / Davis F., Heatley F., Hodge P., Towns C. // Polymer 1994.- Vol.35.- N.4.- P.885-887.

148. Day D. Polymerization of Diacetylene Carbonik Acid Monolayers at the Gas-Water Interface. / Day D., Ringsdorf H. //J. Polym. Sci.: Polym Lett. Ed. -1978.- Vol.16.- P. 205-210.

149. Day D. Polyreactions in Ordered Systems, 19. The Monolayer Polymerization of 10,12-Nonacosadiynoic Acid Studied by a Spectroscopic Technique. / Day D., Ringsdorf H. // Makromol. Chem.- 1979.- Vol. 180.-P.1058-1063.

150. Day D. Polymerization of Mono- and Bifunctional Diacetylene Derivatives in Monolayers at the Gas-Water Interface. / Day D., Hub H. H., Ringsdorf H. // Israel J. Chem. 1979.- Vol.18.- P.325-329.

151. Day D. Polyreactions in Ordered Systems, 19. The Monolayer Polymerization of 10,12-Nonacosadiynoic Acid Studied by a Spectroscopic Technique. / Day D., Ringsdorf H. // Makromol. Chem. 1979.- Vol. 180.-P.1058-1063.

152. Day D. Polymerization of Mono- and Bifunctional Diacetylene Derivatives in Monolayers at the Gas-Water Interface. / Day D., Hub H. H., Ringsdorf H. // Israel J. Chem. 1979.- Vol.18.- P.325-329.

153. Day D., Lando Y. B. Electron Diffraction Studies of Multilayers of Vinyl Stearate. / . Day D., Lando Y. B. // J. Polym. Sci.:Polym. Chem. Ed.- 1978.-Vol.16.- P.1431-1434.

154. Day D. Morphology of Crystalline Diacetylene Monolayers Polymerized at the Gas-Water Interface / . Day D., Lando Y. B. // Macromolecules.- 1980.-Vol.13.- P.1478-1483.

155. Day D. Structure Determination of a Poly-(diacetylene) Monolayers. / Day D., Lando Y.B. // Macromolecules.- 1980.- Vol.13.- P.1483-1487.

156. Dautzenberg H. Polyelectrolyte Comlpexes / Dautzenberg H., Hartmann J., Rother G. // in "Macro-ion Characterization", ACS Symposium Series 548, Schmitz K. S. Eds., Washington:ACS.- 1994. Chapterl6. - P.210-283.

157. Deisenhofer J. The Photosynthetic Reaction Centre from the Purple Bacterium Rhodopseudomonas Viridis (Nobel Lecture). / Deisenhofer J., Michel H. // EMBO Journal 1989.- Vol.8.- N.8.- P.2149-2170.

158. DeVilliers M. Nanocapsules for Drug Delivery // DeVilliers M., Lvov Y. "Nanotechnologies for Life Sciences," v.10, Berlin:Wiley-VCH, 2006. 365 p.

159. Dhathathreyan A. Characterization of Complex Gramicidin Monolayers by Light Reflection and Fourier Transform Infrared Spectroscopy. / Dhathathreyan A., Baumann U., Mueller A., Moebius D. // Biochim. Biophys. Acta 1988.-Vol.944.- N.2.- P.265-272.

160. Dorn K. Permeability Characteristics of Polymeric Bilayer Membranes from Methacryloyl and Butadiene Lipids. / Dorn K., Klingbiel R.T., Specht D.P., Tyminski P.N., et. al //J. Am. Chem. Soc. 1984.- Vol.106.- P.1627-1633.

161. Dorn K. Molecular Weight of Polimers from Metacryloyl Lipids in Bilayer Membranes. / Dorn K., Patton T.V., Klingbiel R.T., O'Brien D.F., Ringsdorf H. // Macromol. Chem., Rapid Commun., 1983.- Vol.4.- P.513-517.

162. Douillard R. State Equation of P-casein at the air/water interface / Douillard R., Daoud M., Lefebvre J. et al. // J. Colloid Interface Sci.-1994.- Vol. 163.-P.277-288.

163. Dubin P.L. Macromolecular Complexes in Chemistry & Biology / Dubin P.L., Bock J., Davies R.M., et. al. // BerlinrSpringer 1994. - 301 P.

164. Dussaud A. Surface properties of protein alcoholic solutions / Dussaud A., Han G. В., Ter Minassian-Saraga L. et al. // J. Colloid Interface Sci.- 1994.-Vol.167. P.247-255.

165. Egger M. Wet Lipid-Protein Membranes Imaged at Submolecular Resolution by Atomic Force Microscopy. / Egger M., Ohnesorge F.,

166. Weisenhorn A. L., Heyn S. P., et. al // J. Struct. Biology 1990. - Vol.103. -P.89-94.

167. Elbert R. Saturated and Polymerizable Amphiphiles with Fluorocarbon Chains. Investigation in Monolayers and Liposomes. / Elbert R., Folda Т., Ringsdorf H. // J. Am. Chem. Soc. 1984.- Vol.106.- P.7687-7692.

168. Engel A. Biological Applications of Scanning Probe Microscopes. / Engel A., // Ann. Rev. Biophys., Biophys. Chem. -1991.- Vol.20.- P.79-108.

169. Enkelmann V. Polymerization of Ordered Tail-to-Tail Vinyl Stearate Bilayers. / Enkelmann V., Lando Y.B. // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. -1977.- Vol.15.- P.1843-1854.

170. Evans W. H. The liver plasma membrane as a functional mosaic. / Evans W. H. // Biochem. Soc. Trans.- 1976.- Vol.4.- № 6.- P. 1007-1011.

171. Fainerman V.B. Adsorption Isotherms of Proteins at Liquid Interfaces / Fainerman V.B. and Miller R. // in "Proteins at Liquid Interfaces".- Elsevier.-1998.-Vol. 7.- P. 51-102.

172. Fainerman V.B. Anomalous dynamic surface tension of mixtures of nonionic suhfactants with different partial molar areas at the water-air interface / Fainerman V.B., Miller R. // Langmuir-1997.- Vol.13.- P. 409-413.

173. Fainerman V.B. Dynamic surface tension of surfactant mixture at the water-air interface / V.B. Fainerman, R. Miller // Colloids & Surfaces A.- 1995.-Vol.97.- P. 65-82.

174. Fainerman V.B. Dynamic surface tension of micellar solutions in the millisecond and submillisecond time range / V.B. Fainerman, V.D. Mys, A.V. Makievski et al. // J. Colloid Interface Science. 2006.- Vol.302. - P.40-46.

175. Fainerman V.B. Competitive adsorption from mixed nonionic surfactant/protein solutions / Fainerman, S.A. Zholob, M. Leser et al. // Journal of Colloid and Interface Science.- 2004.- N274.- P. 496-501.

176. Feher G. Chemical Composition and Properties of Reaction Centers. / Feher G., Okamura M. Y., // in "The photosynthetic bacteria" (Ed. by R.K. Clayton and W.R. Sistrom), New York: Plenum Press 1978.- P.349-386.

177. Fendler J.H. Membrane Mimetic Chemistry: Characterizations and Applications of Micelles, Microemulsions, Monolayers, Bilayers,Vesicles, Host-Guest Systems and Polyions. / Fendler J.H. // N.Y.: Wiley-Interscience.-1982.- P.522.

178. Fendler J.H. Membrane Mimetic Chemistry / Fendler J.H. // Chem. Eng. News. 1984.- Vol.62.-N.l. - P.25-38.

179. Fendler J.H. Polymerized Surfactant Vesicles. / Fendler J.H. // Israel J. Chem. 1985.- Vol.25.- N.I.- P. 3-10.

180. Fendler J.H. Photochemical Solar Energy Convertion. An Assessment of Scientific AccomplisHments. / Fendler J.H. // J. Phys. Chem. 1985.- Vol. 89,-N. 13.-P. 2730-2740.

181. Finean B. The development of ideas on membrane structure / Finean B. // Sub-Cellul. Biochem.- 1972.- Vol.1.- № 4.- P.363—373.

182. Finean B. The nature and extent of lipid-protein interactions in cell membranes / Finean B. // Biochem. Soc. Trans. 1973. - Vol.1. - P.327-329.

183. Fiol C. Elaboration of a Glucose Biosensor Based on Langmuir-Blodgett Technology / Fiol C., Valleton J.-M., Delpire N., Barbey G., Barraud A., Ruaudel-Teixier A. // Thin Solid Films 1992.- Vol.210/ 211.- P.489-491.

184. Friedrich P. Supramolecular enzyme organization. Quaternary structure and beyond / Friedrich P. // Akademiai Kiado, Budapest. 1984. - p. 3

185. Frommer J. Scanning Tunneling Microscopy arid Atomic Force Microscopy in Organic Chemistry / Frommer J. // Angew. Chem., Int. Ed. Engl. 1992.-Vol.31.- P.1298-1328.

186. Fujiwara I. Atomic Force Microscopy Study of Protein-Incorporating Langmuir-Blodgett Film / Fujiwara I., Ohnishi M., Seto J. // Langmuir 1992.-Vol.8.-P.2219-2222.

187. Furuno T. Denaturation of Purple Membranes at the Air/Water Interface Studied by SEM. / Furuno Т., Sasabe H. // J. Colloid Interface Sci. 1991.-Vol.l47.-N.l.- P.225-229.

188. Furuno T. Photovoltaic Properties of Purple Membrane Langmuir-Blodgett Films. / . Furuno Т., Takimoto K., Kouyama Т., Ikegami A., Sasabe. H. // Thin Solid Films-1988.-Vol.160.- P.145-151.

189. Gabrielli G. Polymethylmethacrylate and Stearic Acid Compatibility in Monolayers. / Gabrielli G., Puggelli M., // Colloid & Polymer Sci. 1987.-Vol.265.- P.432-435.

190. Gabrielli G. Binary Systems in Monolayers: Polymethylmethacrylate and Ionizable Low Molecular Weight Compaunds. / Gabrielli G., Puggelli M. // Colloid & Polymer Sci. 1985.- Vol.263.- P.879-887.

191. Gaines G.L. Insoluble Monolayers at Liquid Gas Interfaces / Gaines G.L. // - N.Y.: Intersciece, 1966,- 386 p.

192. Ghan R. Enzyme Catalyzed Polymerization of Phenols within Polyelectrolyte Microcapsules / Ghan R., Shutava Т., John V., Lvov Y. // Macromolecules.- 2004,- Vol.37.-P. 4519.

193. Gitler C. Plasticity of biological membranes / Gitler C. // Annu. Rev. Biophys. and Bioeng.- 1972.- Vol.1.- P. 51-92.

194. Gottesman M. M. Mechanism of cancer drug resistance / Gottesman M. M. // Ann. Rev. Med. 2002. - Vol.53. - P.615-627.

195. Graham D.E. Adsorbtions of proteins at the interfaces / Graham D.E., Philips M.C. // J. Colloid Interface Sci.- 1979.- Vol.70.- P. 427-435.

196. Grigoriev D. О. p-Casein Bilayer Adsorption at the Solution/Air Interface: Experimental Evidences and Theoretical Description / D. 0. Grigoriev, V. B. Fainerman, A. V. Makievski et al. // Colloids & Surfaces A. 1996. - Vol.114.-P.245-254.

197. Gros L. Polymeric Antitumor Agents on a Molecular and on a Cellular Level. / Gros L., Ringsdorf H., Schupp H. // Angew. Chem., Int. Ed. Engl., 1981.- Vol.20. -P.305-325.

198. Gurr M. I. Lipid biochemistry / Gurr M. I., Harwood J. L. // London: Chapman&Hall, 1991,- 406 P.

199. Hansen F.K. The kinetics of albumin adsorbtion to the air/water interface measured by automatic axisymmetric drop shape analysis / Hansen F.K., Myrvold R. // J. Colloid Interface Sci.- 1995.- Vol. 176.- P. 408-417.

200. Heckl W.M. Portein-Lipid Interaction in Phospholipid Monolayers Containing the bacterial Antenna Protein B800-850 / Heckl W.M., Loesche M., Scheer H., MoehwaldH. //Biochim. Biophis. Acta 1985.- Vol.810. - P.73-83.

201. Heckl W.M. Langmuir-Blidgett Films Containing Proteins of the Photosynthetic Process. / Heckl W.M., Loesche M., Moehwald H. // Thin Solid Films 1985.- Vol. 133.-P.73-81.

202. Heckl W. M., Scanning Tunneling Microscopy and Atomic Force Microscopy on Organic and Biomolecules. / Heckl W. M. // Thin Solid Films -1992,- Vol.210/211.- P.640-647.

203. Henderson R. Model for the Structure of Bacteriorhodopsin Based on High-resolution Electron Cryo-microscopy. / Henderson R., Baldwin J. M., Ceska T. A., Zemlin F., et. al //J. Mol. Biol. 1990.- Vol.213.- P.899-929.

204. Hendler R. W. Protein disposition in biological membranes.- In: Biomembranes. / Hendler R. W. // N. Y.; L.: Plenum Press, 1974. Vol.5. - P.4.

205. Hermel H. Effect of the secondary structure of poly-L-lysine on the adsorption at the water/dodecane interface / Hermel H., Miller R. // Colloid Polym. Sci.-1995.- Vol. 273 P. 387-391251-273.

206. Herweh J.E. Пат. США 4438251, Polyurethane Polymers Comprizing Macrocyclic Crown Ethers in the Polymer Backbone. // РЖХ.-1984.- P. 216219.

207. Hodge P. Efficient Second-Harmonic Generation from All-Plymeric Langmuir-Blodgett "AB" Films Containing up to 600 layers. /. Hodge P., Ali-Adib Z., West D., King T. A. // Thin Solid Films 1994,- Vol.242.- P. 10071011.

208. Hoenig D. Morphology of Pentadecanoic Acid Monolayers at the Air/Water Interface Studied by BAM. / Hoenig D., Overbeck G., Moebius D., // Adv. Materials 1992.-Vol.4.- N.6.- P.419-424.

209. Hoenig D. Morphology of Pentadecanoic Acid Monolayers at the Air/Water Interface Studied by BAM. / Hoenig D., Overbeck G., Moebius D. // Adv. Materials 1992.- V.4.- N.6.- P.419-424.

210. Hoerber J. К. H. Scanning Tunneling Microscopy of Lipid Films and Embedded Biomolecules. / Hoerber J. К. H., Lang C. A., Haensch T. W., Heckl W. M. et. al // Chem. Phys. Letters 1988.- Vol.145.- N.2.- P. 151-158.

211. Hong F. T. The Bacteriorhodopsin Model Membrane System as a Prototype Molecular Computing Element. / Hong F. T. // BioSystems 1986.- Vol. 19,-P.223-231.

212. Honger T. Phospholipase A2 activity and physical property of lipid-bilayer substrates / Honger Т., Jorgensen K., Stokes D. // Methods in Enzymology.-1997.-Vol. 286.- P.168-190

213. Howarth V. A. Infrared Studies of Valinomycin-Containing Langmuir-Blodgett Films. / Howarth V. A., Petty M. C., Davies G. H., Jarwood J. // Langmuir- 1989.- Vol.5.-P.330-332.

214. Howarth V. A. The Deposition and Characterization of Multilayers of the Ionophore Valinomycin. / Howarth V. A., Petty M. C., Davies G. H., Jarwood J. //Thin Solid Films 1988.- Vol.160.- P.483-489.

215. Hua F. Ultrathin Cantilevers Based on Polymer-Ceramic Nanocomposite Assembled through Layer-by-Layer Adsorption / Hua F., Cui Т., Lvov Y. // Nano Letter.- 2004.- Vol.4.- P.878-882.

216. Hua F. A Lithographic Approach of Spatial Separation for Multiple Types of Layer-by-Layer Self-Assembled Nanoparticles / Hua F., Lvov Y., Cui T. // Thin Solid Films.- 2004.- Vol.449.- P. 222-225,201.

217. Huang C. Studies on Phosphatidylcholine Vesicles: Formation and Physical Characteristics / Huang C. // Biochim.- 1969.- Vol. 8.- P. 344-359.

218. Hua F. Fabrication and Characterization of Capacitor Based on Layer-by-Layer Self-Assembled Thin Films / Hua F., Lvov Y., Cui T. // Nanotechnology.- 2003.- Vol.14.- P. 453-457.

219. Hua F. Patterning of Layer-by-layer Self-assembled Multiple Types of Nanoparticle Thin Films by Lithographic Technique / Hua F., Lvov Y., Cui T. // Nano Letters.-2002.-Vol.2.-P. 1219-1222.

220. Hua F. Lithographic Approach to Pattern Self-Assembled Polyelectrolyte Multilayers / Hua F., Lvov Y. // Langmuir.- 2002.- Vol.18.- P. 6712-6715.

221. Hub H.H. Polymerizable Phospholipid Analogues New Stable Biomembrane and Cell Models / Hub H.H., Hupfer В., Koch H., Ringsdorf H. //Angew. Chem.:Int. Ed. Engl.- 1980.- Vol. 19.- P.93 8-940.

222. Hult К. H. Kinetics, Molecular Modeling and Synthetic Applications with Microbial Lipases / Hult К. H., Holmquist M. // Methods in Enzymology.-1997.- Vol.286.- P. 386-405.

223. Hupfer B. Spreading and Polymerization Behavier of Diacetylenic Phospholipids at the Gas-Water Interface. / Hupfer В., Ringsdorf H. //Chem. Phys. Lipids. 1983.-Vol.33.-P. 263-282.

224. Hupfer B. Liposomes from Polymerizable Phospholipids. / Hupfer В., Ringsdorf H., Schupp H //Chem. Phys. Lipids 1983.- Vol.33.- P.355-374.

225. Hupfer В. Polyreactions in Oriented Systems. 21. Polymeric Phospholipid Monolayers. / Hupfer В., Ringsdorf H., Schupp H. // Macromol. Chem.- 1981.-Vol. 182.- P. 247-253.

226. Hwang S. Structural and Spectroscopic Characteristics of Bacteriorhodopsin in Air-Water Interface Films. / Hwang S., Korenbrot J. Т., Stoeckenius W. // J. Membr. Biol. 1977.- Vol.36.- P.l 15-136.

227. Hwang S. Proton Transport by Bacteriorhodopdin through an Interface Films. / Hwang S., Korenbrot J. I., Stoeckenius W. // J. Membr. Biol. 1977.-Vol.36.- P.137-158.

228. Hwang S. Purple Membrane Vesicles: Morphology and Proton Translocation. / Hwang S., Korenbrot J. I., Stoeckenius W. // J. Membr. Biol. -1977,- Vol.33.-P.325-350.

229. Jain M. K. Long-range order in biomembranes / Jain M. K., White H. B. // -Adv. Lipid Res.- 1977.- Vol. 15.- P. 1-28.

230. Jegota Suzana Spontaneous formation of vesicles / Suzana Jegota, D. Tehak / / Advances in Colloid and Interface Science.- 2006.- Vol. 121.- P. 51-75.

231. Johnston D. S. Phospholipid Polymers Synthesis and Spectral Characteri-zations. / Johnston D. S., Sanghera S., Pons M., Chapman D. // Biochim. Biophys. Acta- 1980.-Vol.602.-P.57-69.

232. Joos P. Adsorbtion kinetics of lower alkanols at the air/water interface: effect of structure makers and structure breakers / Joos P., Serrien G. // J. Colloid Interface Sci.-1989.- Vol. 127.- P. 97-103.

233. Jung-Il J. Complex Formation of Polyamides Containing Dibenzo-18-crown-6 Moieties with Alkali Metal Ions. / Jung-Il J., Myoung-Soo L., Si-Joohg K. //Polym. J. 1984.-Vol.16.- N.7.- P.547-551.

234. Kalischewski К. Investigation of protein foams obtained by bubbling / Kalischewski K., Schugerl K. // Colloid and Polymer Sci. 1979.- Vol. 257.-P.1099-1110.

235. Kani R. Highly Oriented Polysilane Films Prepared by the Langmuir-Blodgett Technique. / Kani R., Yoshihiko Y., Murai S., Mori Y., Kawata Y., Hayase S. // Langmuir 1993,- Vol. 9.- P. 3045-3049.

236. Karube I. Novel Immunosensors. / Karube I., Suzuki M. // Biosensors -1986.- Vol. 2.- P. 343-362.

237. Keszthelyi L. Intramolecular Charge Shifts During the PhotoreactionCycle of Bacteriorhodopsin. / Keszthelyi L. // In: Information and Energy Transduction in Biological Membranes, N.Y.:Interscience 1984.- P.51-71.

238. Kell B. Trypsin / Kell B. // in "Trypsin in Enzymes" Boyer Eds., N.Y.:Academic Press.-1971. -P.249-275.

239. Kitzing E.V., Primary Electron Transfer in Photosynthetic Reaction Centers. / Kitzing E.V., Kuhn H. // J. Phys. Chem. 1990.- Vol.94.- P. 1699-1702.

240. Koch H. Polymerization in Oriented Systems: Topochemical Polymerization of a Diacetylene Sulfolipid Analog in Monolayers and Liposomes. / Koch H., Ringsdorf H. // Makromol. Chem. 1981.- Vol.182.- P.255-259.

241. Kommireddy D. Layer-by-Layer Assembly of Ti02 Nanoparticle for Stable Hydrophilic Biocompatible Coating / Kommireddy D., Shutava Т., Mills D., Lvov Y. // J. Nanoscience Nanotechnology.- 2005.-Vol.5.- P. 1081-1087.

242. Kopolow S. Polyvinyl macrocyclic polyethers). Syntheses and Cation Binding Properties. / Kopolow S., Smid J. // Macromol. 1973.- Vol. 6.- N.2.-P.133-142.

243. Kragel J. Dynamic surface tension and surface shear rheology studies of mixed (3-lactoglobulin/Tween 20 systems / Kragel J., Wustneck R., Clark D. et al. // Colloids and Surfaces A.-1995.- Vol. 98.- P. 127-135

244. Kuhn H. Monolayer Assemblies (Chapter 6). /. Kuhn H., Moebius D., // in Physical Methods of Chemistry (Ed. by Rossiter B. W. and Baetzold R. C.), Volume IXB: Investigations of Surfaces and Interfaces-Part B, N.Y.:Wiley-Interscience -1993.- P.375-542.

245. Kuhn. H. Present Status and Future Prospects of Langmuir-Blodgett Film Research / Kuhn. H. // Thin Solid Films 1989.- Vol.178.- P.l-16.

246. Kunitake T. Chemistry of Synhetic Bilayer Membranes. / Kunitake T. // J. Macromol. Sci.- Chem. -1979,- Vol. 5. P 587-602.

247. Kunitake T. Vesicles of Polymeric Bilayer and Monolayer Membranes. / Kunitake Т., Nakashima N., Takarabe K. // J. Am. Chem. Soc. 1981. -Vol.103. - P.5945-5947.

248. Kusumi A. Dinamic and Structural Properties of Polymerized Phosphatidylcholine Vesicle Membranes. / Kusumi A., Singh M., Tirrell D.A., Oehme G., Singh A., Samuel N.K.P., Hyde Y.S., Regen S.L. // J. Am. Chem. Soc.- 1983.-Vol. 105.-P. 2975-2980.

249. Lassen B. Competitive protein adsorbtion studied with TIRF and Ellipsometry / Lassen В., Malmsten M. // J. Colloid Interface Sci. 1996.- Vol. 179.-P. 470-477.

250. Lee A. G. Functional properties of biological membranes: The physical-chemical approach. / Lee A. G. // Progr. Biophys. and Mol. Biol.-1975.-Vol.29.- № 1.- P. 3-56.

251. Lehn J.M. Cryptates: Inclusion Complexes of Macropoly-cyclic Receptor Molecules. / Lehn J.M. // Pure Appl. Chem. 1978.-Vol.50.- P.871-892.

252. Lenard J., Compans R. W. The membrane structure of lipid-containing viruses./ Lenard J., Compans R. W // BBA.-1974.- Vol. 344.- № 1.- P. 51-94.

253. Lenaz G. Lipid-protein interactions in the structure of biological membranes./ Lenaz G. // Sub.-Celul. Biochem.- 1974.- Vol. 3,- № 3.- P. 167— 248.

254. Letts S.A. Polymerization of Oriented Monolayers of Vinyl Stearate. / Letts S.A., Fort T.Yr., Lando Y.B. // J. Coll. Interface Sci.- 1976.- Vol.56.- N.I.-P.64-75.

255. Li J. R. Enzyme Electrodes with Conductive Polymer membranes and Langmuir-Blodgett Films. / Li J. R., Cai M., Chen T. F., Jiang L. // Thin Solid Films 1989.- Vol. 180.- P.205-210.

256. Loesche M. On the Lipid Head Group Hydration of Floating Surface Monolayers Bound to Self-Assembled Molecular Protein Layers. / Loesche M., Erdelen C., Rump E., Ringsdorf H., Kjaer K., Vaknin D. // Thin Solid Films -1994.- Vol.242.- P.112-117.

257. Loesche M. Molecular Recognition Processes at Functionalized Lipid Surfaces: a Neutron Reflectivity Study. / Loesche M., Piepenstock M., Vaknin D., Als-Nielsen J., //Thin Solid Films -1992.- Vol.210/211.- P.659-661.

258. Lucy J. A. Lipids and membranes. / Lucy J. A // FEBS Lett.- 1974.-Vol.40.- P.105-111.

259. Lvov Y. Biocolloids with Ordered Urease Multilayer Shells as Enzymatic Reactors / Lvov Y., Caruso F. // Analytical Chemistry. 2001. - Vol.73.-P.4212-4217.

260. Lvov Y. Urease Encapsulation in Nano/organized Microshells / Lvov Y., Antipov A., Mohwald H., Sukhorukov G. // NanoLetters. 2001.- Vol.1. -P.125-128.

261. Lvov Y. Nanoscale Patterning on Biologically Derived Microstructures / Lvov Y., Price R., Singh A., Selinger J., Schnur J. // Langmuir.- 2000.-Vol.16.- P. 5932-5935.

262. Lvov Y. Direct Electrochemistry of Myoglobin and Cytochrome P450 in Alternate Layer-by-Layer Films with DNA and other Polyions / Lvov Y., Schenkman J., Rusling J. // J. Am Chem. Soc.-1998.- Vol.120.- P. 4073-4080

263. Lvov Y. Assembly of Multicomponent Protein Films by Means of Electrostatic Layer-by-Layer Adsorption / Lvov Y., Ichinose I., Kunitake T. // J. Am Chem. Soc. 1995.- Vol.117.- P. 6117-6122.

264. Lvov Y. Polyion / Protein Nanostructures / Lvov Y. // Encyclopedia of Surface and Colloid Science Ed. A. Hubbard. Marcel Dekker, NY, 2002.- P. 4162-4171.

265. Lvov Y. Handbook for Surfaces and Interfaces, Volume 3: Nanostructured. Materials / Lvov Y.// "Thin Film Nanofabrication by Alternate Adsorption of Polyions, Proteins and Nanoparticles," Ed: H. Nalwa, Academic Press, NY, 2001.-P. 170-189.

266. Lvov Y. Electrostatic Layer-by-Layer Assembly of Proteins and Polyions. / Lvov Y. // Protein Architecture: Interfacial Molecular Assembly and Immobilization Biotechnology, Ed: Y. Lvov and H. Mohwald, Marcel Dekker Publ.,NY, 2000-P. 125-167.

267. Lykashev E.P. Photoelectrical Properties of Bacteriorhodopsin in Langmuir Films / Lykashev E.P., Zaitsev S.Yu., Kononenko A.A., Zubov V.P. // Studia Biophysica.- 1989.-V. 132.-N. 1-2 . Ill 118.

268. Machtiger N. A. Biochemistry of bacterial membranes. / Machtiger N. A., Fox C. F. // Annu. Rev. Biochem.- 1973.- Vol.1.- P. 575-600.

269. Maier T. Architecture of mammalian fatty acid synthase at 4.5 A resolution / Maier Т., Jenni S., Ban N. // Science 2006. - Vol.311. - P. 1258-1262.

270. Makievski A.V. Determination of equilibrium surface tension value by extrapolation via long time approximation / Makievski A.V., Fainerman V.B., Miller R. et al. // Colloids & Surface A. 1997. - Vol.5. - N2. - P.372-381.

271. Makievski A.V. Adsorption of proteins at the liquid/air and liquid/oil interfaces as studied by the pendent drop method / Makievski A.V., Miller R., Fainerman V.B. et al. // Royal Soc. Chem.-1999.-P.269-284.

272. Makievski A.V. Determination of equilibrium surface tension value by extrapolation via long time approximation / A.V. Makievski, V.B. Fainerman, R. Miller et al. // Colloids & Surfaces A.- 1997.- Vol. 122.- P. 269-273.

273. Makievski A.V. Adsorption of Proteins at the Liquid/Air and Liquid/Oil Interfaces as Studied by the Pendent Drop Method / A.V. Makievski, R. Miller, V.B. Fainerman et al. // in "Food Emulsions anf Foams", Seville, RSC.- 1998.-P. 269-284.

274. Malhotra S. K. Molecular structure of biological membranes: functional characterization. / Malhotra S. K. // In: Subcellular Biochemistry, N. Y., 1978.- Vol. 5.- P. 221-259.

275. Marchesi V. T. The red cell membrane. / Marchesi V. Т., Furthmayr H., Tomita M. // Annu. Rev. Biochem.- 1976.- Vol. 45,- P. 667-698.

276. Marti O. Atomic Force Microscopy of an Organic Monolayers. / Marti 0., Ribi H. O., Drake В., Albrecht T. R., Quate C. F., Hansma P. K. // Science -1988.- Vol. 239.- P.50-52.

277. McNutt U. S. Ultrastructure of the myocardial sarcolemma./ McNutt U. S. // Circulat. Res.-1975.- Vol. 37.- № 1.- P. 1-13.

278. McShane M. Layer-by-Layer Electrostatic Self-Assembly for Biomaterials // McShane M., Lvov Y. Ed. J. Schwartz, C. Contescu, M. Dekker Publ Encyclopedia of Nanoscience & Nanotechnology, 2005. P.l-24.

279. Miller R. Relaxation behavior of human albumin adsorbed at the solution/air interface / Miller R., Policova Z., Sedev R. et al. // Colloids & Surfaces A.-1993.- Vol.76.- P. 179-185.

280. Miller R. Experimental studies on the desorption of adsorbed proteins from liquid interfaces / R. Miller, D.O. Grigoriev, J. Kragel et al. // Food Hydrocolloids.- 2005.- N19.- P. 479-483.

281. Mino N. Photoreactivity of 10,12-Pentacosadiynoic Acid Monolayers and Color Transitions of the Polymerized Monolayers on an Aqueous Subphase / Mino N., Tamura H., Ogawa K. // Langmuir- 1992.- Vol.8.- P.594-598.

282. Mita T. Interaction of Phospholipid and Antibiotic Ionophores, Gramicidin A and Valinomycin, in Mixed Monolyers. / Mita Т., Sairyo Y. // Biosci. Biotech. Biochem.-1992.- Vol.56.-N. 12.- P.1971-1975.

283. Miyashita T. Polymerization of N-Octadecylacrylamide in Mixed Langmuir-Blodgett Films / Miyashita Т., Sakaguchi K. // Langmuir 1992. - Vol.8. -P.336-337

284. Moebius D. Structural Characterization of Monolayers at the Air-Water Interface. / Moebius D., Moehwald H. // Advanced Materials 1991.- Vol.3.-P. 19-24.

285. Moriizumi T. Langmuir-Blodgett Films as Chemical Sensors. / Moriizumi Т., // Thin Solid Films 1988.- Vol.160.- P.413-429.

286. Mosbach K. Immobilized Enzymes. Methods in Enzymology / Mosbach K. // N. Y.:Academic Press, 1976. Vol.44. - 999 P.

287. Naegele D. Polymerization of Cadmium Octadecylfumarate in Multylayers. / Naegele D., Ringsdorf H. //Macromolecules. 1977. - Vol. 10.-N6. - P.1399-1344.

288. Naegele D. Polymerization of Vinyl Monomers in Monolayers at the Gas-Water Interface. / Naegele D., Ringsdorf H. // in Polymerization of Organized Systems Ed. by Elias H.-G., N.Y.:Gordon & Breach Science Publishers -1977.- P.79-88.

289. Nakamae K. Monolayers of Graft and Block Copolymers. / Nakamae K., Takeya Т., Fojimura Y., Sakai I., Matsumoto T. // J. Macromol. Sci.-Phys. -1980.- Vol.l7B.- N.2.- P.191-210.

290. Nakamae K. Monomolecular Film and Absorption Behavior of Polymers Having Carboxyl Groups./ Nakamae K., Takeya Т., Fojimura Y., Sakai I., Matsumoto Т., // J. Macromol. Sci.-Phys. 1980.- Vol.21B.- N.2.- P.157-172.

291. Nicolini С. Highly Sensitive Immunosensor Based on LB Technology and Nanogravimetry. / Nicolini C., Adami M., Erokhin V., Facci P., Sartore M. // The Fifth International Meeting on Chemical Sensors, Technical Digest -1994.- Vol.1.- P.142-145.

292. Niemi H. E.-M. Bacteriorhodopsin in Langmuir-Blodgett Films Imaged with a Scanning Tunneling Microscopy. / Niemi H. E.-M., Ikonen M., Levlin J. M., Lemmetyinen H. // Langmuir 1993.- Vol.9.- P.2436-2447.

293. Nordli Borve K. G., Properties of Mixed Monomolecular Films of Poly(benzyl-methacrylate) and Arachidic Acid. / Nordli Borve K. G. // Colloid & Polymer Sci. 1992.- Vol.270.- P.140-145.

294. Noskov B.A. Dynamic surface elasticity of surfactant solutions / B.A. Noskov, G. Loglio// Colloids & Surfaces A.- 1998.- Vol. 143.- P. 167-183.

295. Ogawa K. Polymerization of a Chemically Adsorbed Monolayer of an Acetylene Derivative. / Ogawa K., Mino N., Tamura H., Hatada M. // Langmuir -1990.- Vol.6.-P.1807-1809.

296. Okahata Y. Langmuir-Blodgett Films of an Enzyme-Lipid Complex for Sensor Membranes. / Okahata Y., Tsuruta Т., Ijiro K., Ariga K. // Langmuir -1988.- Vol.4.-P.1373-1382.

297. Okahata Y. Preparation of Langmuir-Blodgett Films of Enzyme-Lipid Complexes: a Glucose Sensor Membrane. / Okahata Y., Tsuruta Т., Ijiro K., Ariga K. // Thin Solid Films 1989.- Vol.180.- P.65-72.

298. Ovchinnikov Yu. A. Membrane proteins as Light-energy Transducers. / Ovchinnikov Yu. A. //Biopolymers 1985.- Vol.24.- N.I.- P.l57-166.

299. Ovchinnikov Yu. A. Rhodopsin and Bacteriorhodopsin: Structure-Function Relationship / Ovchinnikov Yu.A. // FEBS Letters 1982.- Vol.148.- P. 179191.

300. Pabst R. Light-driven Proton Transport of Bacteriorhodopsin incorprated into Long-term Stable Liposomes of Polymerizable Synthetic Sulfolipid. / Pabst R., Ringsdorf H., Koch H., Dose K. // FEBS Lett. 1983.- Vol.154.-N.I.- P.5-9.

301. Papahadjopoulos D. Phospholipid Model Membranes 1. Structural Characteristics of Hydrated Liquid Crystals. / Papahadjopoulos D., Miller N. // Biochim. Biophys. Acta. 1967.- Vol.135.- P. 624-638.

302. Papahadjopoulos D. Phospholipid Model Membranes 2. Permeability Properties of Hydrated Liquid Crystals. / Papahadjopoulos D.,Watkins J.C. // Biochim. Biophys. Acta.- 1967.- Vol.135.- P. 639-652.

303. Paulsson M. Surface film pressure of p-Lactoglobulin, a-Lactalbumin and BSA at the Air/Water interface studied by Wilhelmy Plate and Drop volume / Paulsson M., Dejmek P. // J. Colloid Interface Sci.-1992.- Vol. 150.- P. 394403.

304. Pearson C. A Field Effect Transistor Based on Langmuir-Blodgett Films of an Ni(dmit)2 Charge Transfer Complex. / Pearson C., Moore A. J., Gibson J. E., Bryce M. R., Petty M. C. // Thin Solid Films 1994.- Vol.244.- P.932-935.

305. Pedersen C.J. Cyclic Polyethers and Their Complexes with Metal Salts. / Pedersen C.J. // J.Am.Chem.Soc. 1967.- Vol.89.- N.26.- P.7017-7036.

306. Phillips M. C. The physical state of phospholipids and cholesterol in monolayers, bilayers, and membranes. / Phillips M. C. // In: Progress in surface and membrane science. N. Y.: Acad. Press, 1972,- Vol. 5.- P. 139-221.

307. Piepenstock M. Steric and Electro-static Aspects of Antibody Bindding to Hapten Functionalized Lipid Monolayers. / Piepenstock M., Loesche M. // Thin Solid Films 1992.- Vol.210/211.- P.793-795.

308. Pignol D. Critical role of micelles in pancreatic lipase activation revealed by small angle neutron scattering / Pignol D., Ayvazian L., Kerfelec B. // J Biol Chem.- 2000.- Vol. 275.- P. 4220-4224.

309. Pillet L. Immunoglobulin Immobilization by the Langmuir-Blodgett Method. / Pillet L., Perez H., Ruaudel-Teixier A., Barraud A. // Thin Solid Films 1994.- Vol.244.- P.857-859.

310. Popovic Z. D. Electron-field Dependence of the Quantum Yield in Reaction Centers of Photosynthetic Bacteria. / Popovic Z. D., Kovacs C. J., Vincett P. S., Alegria G., Dutton P. L. // Biochim. Biophys Acta 1986.- Vol.851.- P.38-48.

311. Prelog V. Chiral Ionophores // Pure Appl. Chem. -1978.- Vol.50.- P.893-904.

312. Putman C. A. J. Polymerized LB Films Imaged with a Combined Atomic Force Microscope Fluorescence Microscope. / Putman C. A. J., Hansma H. G., Gaub H. E, Hansma P. K, //Langmuir- 1992.-Vol.8.-P.3014-3019.

313. Rabe J. P. Surface Chemistry with the Scanning Tunneling Microscope. / Rabe J. P. // Angew. Chem., Advanced Materials 1989.- Vol.101.- N.I.-P.l 17-122.

314. Raetzsch M. Fotopolymerisation von Styren mit Maleinsaeureanhydrid. / Raetzsch M., Schicht G., Arnold M., Barton J., Caper I. // Chem. zvesti -1984.- Vol.38.- N.6.- P.823-838.

315. Rayfield G. W. Ultra High Speed Bacteriorhodopsin Photodetectors. / Rayfield G. W. // In: "Molecular Electronics: Biosensors and Biocomputers" Ed. by Hong F. T. N. Y.: Plenum Press, 1989.- P.361-368.

316. Regen S.L. Polymerized Phosphatidylcholine Vesicles. Synthesis and Characterization. / Regen S.L., Singh A., Oehme G., Singh M. //J. Am.Chem. Soc. 1982.-Vol.104.- N 3.- P. 791-795.

317. Regen S.L. Polymerized-Depolymerized Vesicles. A Reversible Phosphatidylcholine Based Membrane. / Regen S.L., Yamaguchi K., Samuel N.K.P., Singh M. //J. Am. Chem. Soc. - 1983.- Vol.105.- P. 6354-6355.

318. Regen S.L. Polymer Encased Vesicles. / Regen S.L., Shin J.S., YamaGushi K. // J.Am.Chem.Soc. - 1984,- Vol.106.- N.8.- p.2446-2447.

319. Regen S.L. Chost Vesicles. / Regen S.L., Shin J.S., Haifeld J.F., Wall J.S. // J.Am.Chem.Soc. 1984.- Vol. 106.- N.9.- P.5756-5757.

320. Regen S.L. Singh A Polymerized Vesicles. / Regen S.L., Czech B.//J. Am. Chem. Soc.- 1980.- Vol.102.- P. 6638-6640.

321. Riddihough G. Picture an enzyme at work / Riddihough G. // Nature -1993.- Vol. 362.-P.793.

322. Ries H. E., Effect of the Spreading Solvent on Monolayers of Valinomycin. / Ries H. E. // Langmuir 1990.- Vol.6.- P.883-885.

323. Ringsdorf H. Polymerization of Substituted Butadienes at the Gas-Water Interface. / Ringsdorf H., Schupp H. // Org. Coat. Plast. Chem. 1980. -Vol.42.- P. 379-385.

324. Roberts G. G., An Applied Science Perspective of Langmuir-Blodgett Films. / Roberts G. G. // Advances in Physics 1985.- Vol.34.- N.4.- P.475-512.

325. Roberts G. G., Transducer and Other Applications of Langmuir-Blodgett Films. / Roberts G. G. // Sensors & Actuators 1983.- Vol.4.- P.131-145.

326. Robertson B. Pulmonary Surfactant: From Molecular Biology to Clinical Practice / B. Robertson, L.M.G.Van Golde, J.J. Batenburg // Amsterdam : Elsevier, 1992. P.265-268.

327. Robertson B. Surfactant Therapy for Lung Disease / Robertson B. and TluschH.W. New York: Marcel Dekker Inc., 1995. - P.127-131.

328. Robinson G. B. Principles of membrane structure.- In: Biological membranes: Twelve essays on their organization, properties and functions. / Robinson G. B. // Oxford, 1975.-P. 33-54.

329. Rothman J. E. Membrane asymmetry. / Rothman J. E, Lenard J. // Science.-1977.- Vol. 195.-P. 743-753.

330. Rottenberg Y. Axisymmetric Drop Shape Analysis / J. Y. Rottenberg, L. Boruvka, A.W. Newmann // J. Colloid Interface Sci.-1983.- Vol.93.- P. 169183.

331. Rouser G. Lipid composition of animal cells membranes, organells and organs. / Rouser G., Nelson G. J., Fleischer S., Simon G. //- In: Biological membranes: Physical fact and function. L.; N. Y.: Acad. Press, 1968,- P. 5.

332. Runge F. E. Thin Films of a Binary Polymer System: Poly(vinylacetate)/Poly(dimethysiloxane) Layers at the Air/Water Inaterface. / Runge F. E., Hyuk Yu. //Langmuir- 1993.- Vol.9.- P.3191-3199.

333. Salton M. R J. Bacterial membrane structure. / Salton M. R J, Owen P. //-Annu. Rev. Microbiol.- 1976.- Vol.30.- P. 451-482.

334. Scheller F. Second Generation Biosensors / Scheller F., Schubert F., Neumann B. et al. // Biosensors & Bioelectronics. 1991. - V.6. - P. 245-253.

335. Schifferer F. Evidence for the Presence of a Specific Ganglioside GMl/Valinomycin Complex in Mixed Monolayers. / Schifferer F., Cordroch W., Beitinger H., Moebius D., et. al. // J. Biochem. 1991.-Vol. 109.- P.622-626.

336. Sergeeva Т. I. Organisation in monolayers at air-water interface of butadienyl dyes containing benzodithiacrown-ether or dimethoxybenzene / Sergeeva T.I., Gromov S.P., Vedernikov A.I., Kapichnikova M.S., Alfimov

337. M.V., Moebius D., Zaitsev S.Yu. // Colloids & Surfaces. 2005. - A. 264. - P. 207-214.

338. Schupp H. Surface Characterization of Functional Poly- (diacetylene) and Poly(butadiene) Mono- and Multylayers. / Schupp H., Hupfer В., Van Wagenen R. A., Andreade J. D., et. al. //J. Coll. Polym Sci.- 1982.- Vol.260.-P.262-267.

339. Seki N. Phase Separation of Polymerized Lipids in Hybrid Liposomes. / Seki N., Tsuchida E., Ukaji K., Sekiya Т., Nozava Y. // Polym. Bull. 1985.-Vol. 13.- P.489-492.

340. Serrien G. Dynamic surface properties of adsorbed protein solutions: BSA, casein and buttermilk / Serrien G., Geeraerts G., Ghosh L. et al. // Colloids & Surfaces.-1992.- Vol.68.- P. 219-233.

341. Shchori T. Permeabikities to Salts and Water of Macrocylic Polyethers -Polyamide Membranes. / Shchori T. // J. Appl. Polym. Sci. 1976.- Vol.20.-P.773-788.

342. Shchukin D. Fabrication of Polyelectrolyte/Protein Microarrays Using a Laminar Flow Microfluidic Device / Shchukin D., Cui Т., Sukhorukov G., Lvov Y. // Advanced Materials.- 2004.- Vol.16.- P. 389-393.

343. Shchukin D. Nanoassembly of Biodegradable Microcapsules for DNA Encasing / Shchukin D., Sukhorukov G., Lvov Y., // J. Am. Chem. Soc.- 2004.-Vol.126.- P. 3374-3376.

344. Shich P. Photo-Induced Potentials Across a Polymer Stabilizied Planar Membrane in the Presence of Bacteriorhodopsin. / . Shich P., Packer L. // Biochem. Biophis. Acta Commun. 1976.- Vol.71.-N.2.- P.603 -609.

345. Shutava Т. рН Responsible Decomposable Layer-by-Layer Films and Capsules on the Basis of Tannic Acid / Shutava Т., Prouty M., Lvov Y. // Macromolecules.-2005.- Vol.38.- P. 2850-2856.

346. Shutava T. Microcapsule Modification with Peroxidase Catalyzed Phenol Polymerization / Shutava Т., John V., Lvov Y. // Biomacromolecules.-2004.-Vol.5.- P. 914-921.

347. Singer S. J. A fluid lipid-globular protein mosaic model of membrane structure. / Singer S. J // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1972.- Vol.195.- P. 16-23.

348. Singer S. J. The molecular organization of membranes. / Singer S. J. // -Annu. Rev. Biochem.- 1974.- Vol.43.- P. 805-833.

349. Singer S. J. The proteins of membranes. / Singer S. J. //- J. Colloid and Interface Sci.- 1977.- Vol.58.- № 3.- P. 452-458.

350. Skulachev V. P., A Single Turnover Study of Photoelectric Current-Generating Proteins. / Skulachev V. P. // Method Enzymol. 1982.- Vol.88.-P.35-45.

351. Spector A.A. Biological and therapeutic potential of membrane lipid modification in tumors / Spector A.A., Burns C.P. // Cancer Res.-1987.-Vol.47.-P.4529-4537.

352. Sriyudthsak M. Enzyme-Immobilized Langmuir-Blodgett Film for a Biosensor. / Sriyudthsak M., Yamagishi H., Moriizumi T. // Thin Solid Films -1988.- Vol.160.- P.463-469.

353. Stoeckenius W. Bacteriorhodopsin and the Purple Membrane of Halobacteria. / Stoeckenius W., Lozeir R.H., Bogomolni R.A. // Biochim. Biophys. Acta 1979.- Vol.505.- N.3-4.- P.215-278.

354. Stoeckenius W. Discussion paper: membrane models. / Stoeckenius W. // -Ann. N. Y. Acad Sci.-1972.- Vol.195.- P. 85-36.

355. Suttisprasit P. The surface activity of a-Lactalbumin, p-Lactoglobulin, and BSA / Suttisprasit P., Krisdhasima V., McGuire J. // J. Colloid Interface Sci.-1992.-Vol. 154.- P. 316-326.

356. Tiede D. M. Spectrophotometric and Voltage Clamp Characterization of Monolayers of Bacterial Photosynthetic Reaction Centers. / Tiede D. M., Mueller P., Dutton P. L. et al. // Biochim. Biophys Acta 1982.- Vol.681.-N.I.- P.191-201.

357. Tieke B. Polymerization of Diacetylenes in Multilayers. / Tieke В., Lieser G., Wegner G. // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. 1979 . - Vol.17.- P. 1631-1644.

358. Tieke B. Polymerization of Mono- and Multilayer Forming Diacetylenes. / Tieke В., Graf H.J., Wegner G. et al. // J. Coll. Polym. Sci. 1977.- Vol.255.-P.521-531.

359. Tronin A. Langmuir-Blodgett Films of Immunoglobulines IgG. Ellipsometric Study of the Deposition Process and of Immunological Activity / Tronin A., Dubrovsky Т., De Nitti C. et al.// Thin Solid Films 1994,-Vol.238.- P.127-132.

360. Tonoi Masao. Phase-Transfer Reactions Catalyzed by Polymer-Supported Crown Ethers. / Tonoi Masao, Vanai Norijuki, Shiiki Satoshi, Kakiuchi Hirishi. // J. Polym. Sci., Polym. Chem. Ed. 1984.- Vol.22.- N.4.- P.911-926.

361. Tournois H. Interfacial Propeties of Gramicidin and Gramicidin-Lipid Mixtures Measured with Static and Dynamic Monolayer Techniques. / Tournois H., Gieles P., Demel R. A., de Gier J., de Kruijff B. // Biophys. J. -1989.-Vol.55,- P.557-569.

362. Travassos L. R„ de. Microbial membranes, I. Structure and molecular organization. / Travassos L. R., Souza W. // Rev. microbiol.- 1976.- Vol.7.- № 1.- P. 7-30.

363. Trissl H.-W., Photoelectric Measurements of Purple Membranes. / Trissl H.-W. //Photochem. Photobiol. 1990.- Vol.51.- P.793-818.

364. Turko I. V. Langmuir-Blodgett Films of Immunoglobulin G for Immunosensors. / Turko I. V., Yurkevich I. S., Chashchin V. L., // Thin Solid Films 1992.- Vol.205.- P.l 13-116.

365. Turko I. V. Oriented Immunoglobulin G Layer onto the Langmuir-Blodgett Films of Protein A. / Turko I. V., Yurkevich I. S., Chashchin V. L. // Thin Solid Films 1992.- Vol.210/211.- P.710-712.

366. Turner A. P. F. Biosensors. Fundamentals and Applications./ Turko I. V., Yurkevich I. S., Chashchin V. L. // Oxford Univeristy Press, Oxford, 1987.770 p.

367. Turro N.J. Ananthapadmanabhan K.P., Aronson M., Spectroscopic probe analysis of protein-surfactant interactions: the BSA/SDS system / Turro N.J., Lei X.-G. // Langmuir- 1995.- Vol. 11.- P. 2525-2533.

368. Trukhin D.V. Dynamic surface tension and surface rheology of biological liquids / Trukhin D.V., Kazakov V.N., Sinyachenko O.V. // Colloids & Surfaces В.- 2001.-Vol.21.-P.231-238.

369. Ulman A., An introduction to Ultrathin Organic Films from Langmuir-Blodgett to Self-assembly / Ulman A. // Boston:Academic Press, 1991.- 442 p.

370. Vodyanoy V. Stearic Acid Assisted Complexation of K+ by Valinomycin in Monolayers. / Vodyanoy V.,Pathirana S., Neely W. // Langmuir 1994.-Vol.10.- P.1354-1357.

371. Wagner N. Incorporation of ATP Syntherase into Long-term Stable Liposomes of Polymerizable Synthetic Sulfolipid. / Wagner N., Dose K., Koch H., Ringsdorf H. // FEBS Lett. 1981.- Vol.132.- N.2.- P.313-318.

372. Wallach D. F. H. The plasma membrane: dynamic perspectives, genetics and pathology. / Wallach D. F. H. // N. Y.: Springer Verl., 1972. 186 p.

373. Walsh S. P., Monolayer Properties of an Amine-Based Diacetylene. / Walsh S. P., Lando J. B. //Langmuir- 1994.- Vol.10.- P.252-256.

374. Walsh K. A. Trypsinogen and Trypsin of Various Species / Walsh K. A. // in "Proteolytic Enzymes. Methods in Enzymology" Perlmann G.E. and Lorand L. Eds., N.Y.:Academic Press. 1970. Vol.19. - P.41-68.

375. Wang J. Y., Fullerene Films and Fullerene-Dodecylamine Adduct Monolayers at Air-Water Interfaces Studied by Neutron and X-ray Reflection. / Wang J. Y., Vaknin D., Uphaus R. A., Kjaer K., Loesche M. // Thin Solid Films 1994.- Vol.242.- P.40-44.

376. Wantke K.D. The Oscillating Bubbles Method / K.D. Wantke, H. Fruhner // in "Drops and Bubbles in Interfacial Science", Elsevier.-1998.-Vol.6.-P.327-366.

377. Wegner G. The Structure of Polyconjugaded Macromolecules. / Wegner G. // Macromol. Chem., Suppl. -1981.-Vol.4.- P.155-175.

378. Weisenhorn A. L. Molecular-Resolution Images of Langmuir-Blodgett Films and DNA by Atomic Force Microscopy. / Weisenhorn A. L.,Egger M., Ohnesorge F. et al.// Langmuir 1991.- Vol.7.- P.8-12.

379. Williams G. Conductivity and Electroluminescence in an Organometallic Langmuir-Blodgett Film/Anthracene Structure. / Williams G., Moore A. J., Bryce M. R., Petty M. C. // Thin Solid Films 1994.- Vol.244.- P.936-938.

380. Winter H.-J. Polymerizable Monolayers Derived form Crown Ether Surfactants. / Winter H.J., Manecke G. // Makromol. Chem. 1985.- Vol. 186.-N.10.- P.1979-1986.

381. Wolthaus L. Structural Investigation of Dipping Lines in Langmuir-Blodgett Films by Scanning Force Microscopy. / Wolthaus L., Schaper A., Moebius D., Jovin Т. M. // Thin Solid Films 1994.- Vol.242.- P. 170-173.

382. Wustneck R. Dynamic surface tension and adsorbtion properties of P-casein and P-lactoglobulin / Wustneck R., Kragel J., Miller R. et al. // Food Hydrocolloids -1996.- Vol.10.-N4.- P.395-405.

383. Xu S. Kinetics of adsorbtion of proteins at the air-water interface from a binary mixture / Xu S., Damodaran S. // Langmuir -1994.- Vol. 10.- P. 472480.

384. Yao Z. Q. Studies on Non-linear Optical Properties of Langmuir-Blodgett Films Formed From Azobenzocrown Ether Derivatives. / Yao Z. Q., Liu P., Yan R. Z, Liu L. Y., Liu X. H., Wang W. C., // Thin Solid Films 1992.-Vol.210/211.- P.208-210.

385. Yaseen M. The Structure of Zwitterionic Phosphocholine Surfactant Monolayers / Yaseen M., J. R. Lu // Langmuir.- 2006.- №22.- P. 5825-5832.

386. Zaitsev S.Yu. Polymer Membranes with Immobilized Bacteriorhodopsin / Zaitsev S.Yu., Dzekhtser S.V., Zubov V.P. // Studia Biophysica. 1989. -V.132.-N. 1-2.-P. 105-110.

387. Zaitsev S.Yu. Monolayers of Photosynthetic Reaction Centers of Green and Purple Bacteria / Zaitsev S.Yu.,Kalabina N.A., Zubov V.P. et al. // Thin Solid Films. 1992. - V. 210/211. - P. 723 - 725.

388. Zaitsev S.Yu. Kinetics of Dynamic Hologram Recording in Polymer Films with Immobilized Bacteriorhodopsin / Zaitsev S.Yu., Kozhevnikov N.M., Barmenkov Yu. O., Lipovskaya M. Yu. // Photochemistry & Photobiology. -1992. V.55. - N.6. - P. 851 - 856.

389. Zheng Z. Layer-by-Layer Nanocoating of Lignocellulose Fibers for Enhanced Paper Properties / Zheng Z., McDonald J., Shutava Т., Grozdits G., Lvov Y. // J. Nanoscience Nanotechnology. 2006. - Vol.6. - P. 324-332.

Информация о работе

Зайцев, Сергей Юрьевич
доктора биологических наук
Москва, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Супрамолекулярные биохимические системы в исследованиях биомембран и биологических жидкостей животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы