Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структурно-функциональные изменения брыжечных и печеночных лимфатических узлов при введении лизосомотропных веществ

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Структурно-функциональные изменения брыжечных и печеночных лимфатических узлов при введении лизосомотропных веществ"

На правах рукописи

Шуева Наталья Викторовна

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ БРЫЖЕЕЧНЫХ И ПЕЧЕНОЧНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ВВЕДЕНИИ ЛИЗОСОМОТРОПНЫХ ВЕЩЕСТВ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология 14.00.02 - анатомия человека

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

НОВОСИБИРСК-2004

Работа выполнена на кафедре анатомии человека Новосибирской государственной медицинской академии и ГУ Научном центре клинической и экспериментальной медицины ГУ СО РАМН, г. Новосибирск.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, заслуженный деятель науки РФ, профессор

Шкурупий Вячеслав Алексеевич

доктор медицинских наук, профессор

Машак Александр Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

Агеева Татьяна Августовна

доктор медицинских наук, профессор

Летягин Андрей Юрьевич

Ведущая организация: ГОУ Алтайский государственный медицинский

университет МЗ РФ (г. Барнаул)

Защита состоится

л/7 » Ш&МЛ-

2004 г. на заседании

диссертационного совета Д 208.062.05 Новосибирской государственной медицинской академии (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52).

Автореферат разослан

2004.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

А.В.Волков

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Лизосомотропные препараты (ЛТП) на основе декстрана и поливинилпирролидона широко используют, в качестве плазмозаменителей, детоксикантов, а в последнее время, носителей при направленной доставке лекарственных средств, пролонгаторов их действия (Выренков В.Я., 1981; Куприянов В.В., Бородин Ю.И. и др., 1983; Панченков Р.Т. и др., 1984; Шкурупий В.А., 1986, 1987; 1989; 1992; Гаврилин В.Н., 1986; Курунов Ю.Н., и др., 1992; 1994; Чернова Т.Г., 1993; Агеева Т.А., 1994; Петренко Т.И., 1996; Филимонов П.Н., 1996). В качестве плазмозамещающих средств их вводят в больших количествах, в экстремальных условиях для организма (кровопотеря, интоксикации, шок и т.д.). Все они, независимо от химической структуры и механизма их захвата клетками,.при введении в организм избирательно концентрируются в лизосомах и действуют на клетку опосредовано через эти органеллы (de Duve et al., 1974), исходя из этого следует, что в практической медицине существует проблема возможности развития различных осложнений, вызванных лекарственными препаратами с выраженными лизосомотропными свойствами, которые не принимаются во внимание. Общеизвестно, что органы лимфатической системы осуществляют ряд функций - циркуляторную, клиринговую, детоксикационную и формирования иммунного ответа, которые существенным образом могут быть модифицированы при введении ЛТП в ситуациях, связанных с кровопотерей и риском инфицирования, что может существенно изменить, развитие патологического процесса. В частности, после инфузии реополиглюкина (раствора декстрана) при синдроме длительного сдавления в экспериментальных исследованиях наблюдали развитие дистрофических и некробиотических изменений паренхиматозных клеток печени через 7 суток после введения (Лукьянова Е.С., Шкурупий ВА, Ефремов А.В. 1995; Лукьянова Е.С. 1995; Шкурупий Лукьянова B.C.. Ефремов А.В. 8 5

1 qqq\ i roc национальная!

i библиотека j ! cnmrfm 0% ]

3 • ОЭ

По концепции Ю.И. Бородина (1993) структурно-функциональный ответ лимфатических узлов на средовые влияния носит черты общей стереотипии, однако подвержен модуляциям в связи со свойствами действующего фактора и функциональной специализацией лимфатического узла. Структурные преобразования регионарных лимфатических узлов после влияния на них ЛТВ и, особенно собирающих лимфу от органов, с большой концентрацией макрофагов, блокируемых ЛТВ по эндоцитарной функции, не изучены. Отсутствуют сведения о соотношениях структурных компонентов лимфатических узлов и их клеточном составе в этих условиях. Не ясно так же в какой степени модифицируется структурная организация лимфатических узлов при введении ЛТВ в зависимости от их топографического положения, характеристики ЛТВ по их биодеградабельности, «блокады» вакуолярных систем фагоцитирующих клеток и, следовательно, способных модифицировать клиринговую и антигенпрезентирующую функции фагоцитов лимфатических узлов, являющихся частью системы мононуклеарных фагоцитов организма. В этой связи, учитывая масштабы применения- лекарственных средств с лизосомотропными свойствами, способных существенно модифицировать развитие патологических процессов, которые не принимаются во внимание в клинике, проведение данного исследования представляется актуальным.

Цель исследования: Изучить структурно-клеточные особенности печеночных и брыжеечных лимфатических узлов в норме и после однократного внутривенного введения лизосомотропных препаратов -поливинилпирролидона и декстрана, различающихся по биодеградабельности и физико-химическим свойствам.

Задачи исследования: 1. Изучить и сравнить морфологическое строение и клеточный состав брыжеечных и печеночных лимфатических узлов в норме.

2. Изучить в динамике (через 1, 3 и 7 сутки) и сравнить структурные преобразования в брыжеечных и печеночных лимфатических узлах после внутривенного введения поливинилпирролидона и декстрана.

3. Изучить и сравнить цитологический состав брыжеечных и печеночных лимфатических узлов в разные периоды (через 1, 3 и 7 сутки) после внутривенного введения поливинилпирролидона и декстрана.

Научная новизна результатов исследования: Впервые изучены структурные преобразования в брыжеечных и печеночных лимфатических узлах в ответ на однократное внутривенное введение поливинилпирролидона и декстрана с учетом их регионарной специализации в условиях нормы.

Впервые отмечена закономерность, проявляющаяся постоянством концентрации клеточных элементов (за исключением фагоцитов) в единице объема лимфатического узла вне зависимости от его величины объема, топографического положения и типа введенного НТВ.

Впервые выявлены цитоморфологические особенности преобразований в брыжеечных и печеночных лимфатических узлах в разные сроки после однократного введения плазмозамещающих лизосомотропных веществ (поливинилпирролидона с молекулярной массой 24 000 Да и декстрана с молекулярной массой 30 000 - 40 000 Да), обладающих различными физико-химическими свойствами, проявляющиеся морфологическими признаками активации клеточного компартмента СМФ брыжеечных и печеночных лимфатических узлов во все сроки постинфузионного периода эксперимента.

Отмечены характерные особенности влияния ПВП на печеночные лимфатические узлы, заключающиеся в усилении плазмоклеточной реакции, увеличении количества бластных клеток, в угнетении пролиферативной активности и усилении деструктивных процессов в ранний и поздний постинфузионный периоды эксперимента.

В брыжеечных лимфатических узлах отмечено снижение плазмоклеточной реакции, усиление пролиферативных процессов и гибели клеток в ранний и поздний постинфузионный периоды эксперимента.

Установлены характерные особенности влияния декстрана на лимфатические узлы различной локализации, заключающиеся в усилении плазмоклеточной реакции и снижении пролиферативных процессов, как в печеночных, так и в брыжеечных лимфатических узлах и усилении деструктивных процессов в печеночных лимфатических узлах в ранний и поздний постинфузионный периоды эксперимента.

Выявлены структурные и цитологические отличия печеночных и брыжеечных лимфатических узлов в условиях нормы, обусловленные особенностями состава афферентной лимфы регионов печени и слепой кишки.

Теоретическое и практическое значение работы: Результаты проведенного исследования показывают, что при введении веществ, обладающих лизосомотропными свойствами, необходимо учитывать реакцию лимфоидных органов, участвующих в осуществлении процессов специфической и неспецифической резистентности организма.

Результаты исследования показывают, что введение лизосомотропных препаратов, поливинилпирролидона и декстрана, с различными физико-химическими свойствами сопряжено с увеличением количества макрофагов в печеночных и брыжеечных лимфатических узлах.

При введении препаратов на основе небиодеградабельного поливинилпирролидона и биодеградабельного декстрана следует учитывать возможность снижения пролиферативной активности и усиления деструктивных процессов и как следствие - снижение естественной резистентности макроорганизма в ходе лечения заболеваний.

Сведения об особенностях динамики действия лизосомотропных препаратов с различными физико-химическими свойствами могут лечь в основу разработки новых патогенетически обоснованных подходов к выбору оптимальной стратегии и тактики лечения препаратами на основе декстрана и поливинилпирролидона и, тем самым, помочь избежать или профилактировать осложнения в ходе лечения.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Установлено наличие анатомических и цитологических отличий печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, обусловленных особенностями состава афферентной лимфы регионов печени и слепой кишки.

2. Введение лизосомотропных веществ, обладающих различными физико-химическими свойствами приводит к изменению структурного гомеостаза в обоих типах лимфатических узлов вне зависимости от типа ЛТВ, что проявляется как изменением клеточного состава в микроанатомических зонах, так и перестройкой морфологических структур лимфатического узла по компактному типу. Вместе с тем, концентрация клеток в лимфатических узлах остается постоянной вне зависимости от их топографического положения и вида ЛТВ.

3. Введение лизосомотропных веществ (биодеградабельного декстрана и небиодеградабельного поливинилпирролидона) сопряжено со структурными перестройками, свидетельствующими, о глубоких изменениях условий осуществления иммунных реакций по клеточному и гуморальному типу.

При введении ПВП происходит увеличение количества макрофагов в обоих типах лимфатических узлов (печеночных и брыжеечных) на протяжении всего постинфузионного периода, плазматических и погибших клеток в печеночных лимфатических узлах.

При инфузии декстрана происходит увеличение количества макрофагов на 1 и 3 сутки в брыжеечных лимфатических узлах, а в печеночных лимфатических узлах на протяжении всего постинфузионного периода и увеличение количества плазматических клеток как в печеночных, так и в брыжеечных лимфатических узлах на протяжении всего эксперимента.

Апробация результатов исследования: Материалы диссертации

докладывали в 2000 году на научной конференции с международным

участием «Проблемы экспериментальной клинической и профилактической лимфологии».

Публикации: По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Структура и объем диссертации: Диссертация состоит: из введения, 5 глав, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 198 страницах машинописного текста, содержит 33 таблицы, 59 рисунков. Список литературы включает 303 источников, из которых 125 зарубежных авторов. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал н методы исследования.

В качестве экспериментальных животных использовали белых крыс-самцов породы массой 170-180 г. Животные были получены из

питомника ЦНИЛ НГМА МЗ РФ. Выбор животных крыс-самцов диктовался необходимостью получения стабильных результатов, исключая влияние циклических изменений, характерных для организма самок (Сахаров П. П. и др., 1952; Западнюк И.П. и др., 1983).

Животных в виварии содержали в стандартных условиях. Перед проведением эксперимента животных не менее двух недель адаптировали к условиям содержания и рациону вивария. Во время адаптации и проведения эксперимента рацион крыс был полноценным, не изменялся количественно и качественно, животные имели свободный доступ к воде и пище.

Эксперимент проводили в летне-осенний период. Все экспериментальные воздействия и забор материала осуществляли в утренние часы.

С целью нагрузки ретикулоэндотелиальной системы (РЭС) и системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) чужеродными материалами различными по физико-химическим свойствам, животным однократно в бедренную вену под эфирным наркозом в течение 2-3 минут вводили лизосомотропные вещества (ЛТВ): поливинилпирролидон и декстран (Шкурупий В.А., 1999;

de Duve С, 1974). Животным экспериментальных групп вводили 10% раствор декстрана с молекулярной массой - 30 000 - 40 000 Да, для чего использовали коммерческий раствор реополиглюкина (Красноярск) или 10% раствор поливинилпирролидона (ПВП) с молекулярной массой - 24 000 Да (Loba Feinbiochemica) в 0,9% растворе хлорида натрия из расчета по 0,5 мл соответствующего раствора на 100 г массы тела животного (что сопоставимо с объемом, вводимым человеку капельными инфузиями) (Гусель В.А., Маркова И.В., 1989). Контролем служили интактные животные. В качестве объекта исследования были выбраны печеночные лимфатические узлы, взятые в печеночно-двенадцатиперстной связке, позади воротной вены и брыжеечные лимфатические узлы, взятые в брыжейке слепой кишки. Выбор печеночных лимфатических узлов был обусловлен тем, что печень является наибольшим компартментом клеток системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) и осуществляет, среди прочих, одну из важных функций -клиринговую - в этом смысле сходную с лимфатическими узлами. Исследовали вероятную реакцию «дополнения печени» у печеночных лимфатических узлов по клиринговой функции при нагрузке организма лизосомотропными препаратами. Для сравнения были взяты брыжеечные лимфатические узлы, которые также испытывают большую нагрузку антигенами, хиломикронами и токсинами. Материал для исследований брали спустя 1, 3 и 7 суток после введения препаратов. В каждой серии использовали по 10 крыс. Умерщвление животных осуществляли путем одномоментной декапитации под эфирным наркозом на 1, 3 и 7 сутки после введения лизосомотропных веществ.

Методы исследований и изучаемые показатели.

Для светооптического исследования материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина в течение двух суток. Затем обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заключали в смесь парафина и воска.. С помощью ротационного микротома готовили срезы толщиной 5-7 мкм. Срезы лимфатических узлов были сделаны через длинник узла (Котье А., 1973; Бородин Ю.И., Летягин А.Ю., Григорьев В.Н., 1991). Для изучения

морфоцитоархитектоники лимфатических узлов срезы окрашивали гематоксилином и эозином, азуром-2-эозином (Елисеев В.Г. и др., 1972). Окрашенные срезы лимфатических узлов заключали в канадский бальзам (Волкова О.В., Елецкий O.K., 1982).

Выделение структурных компонентов и клеточных элементов лимфоидной паренхимы в лимфатических узлах проводили согласно Международной гистологической номенклатуре под редакцией Ю.И.Афанасьева (1987).

Морфометрию структур лимфатического узла производили в соответствии с ранее опубликованными данными (Шкурупий В.А., Овсянко Я.У.и др., 1993).

С помощью стандартной окулярной сетки (256 точек) методом точечного счета при 32-кратном увеличении на микроскопе МБС-10 определяли общую площадь срезов и площади основных структурных компонентов печеночных и брыжеечных лимфатических узлов в 10 полях зрения.

Сетку предварительно откалибровывали с помощью объект-микрометра в абсолютных размерах и определили площадь, представленную одной точкой в кв. мм (мм2). Расчет абсолютной площади каждой структуры производили, умножая количество точек, попавших на данную структуру, на площадь, представленную одной точкой тест-системы. При этом выполняли основные требования: на структуры, занимающие наименьшую площадь, приходилось не менее одной точки (Христолюбова Н.Б. и др., 1974; Ташке К., 1980; Непомнящих Л.М. и др., 1984). При исследовании лимфатических узлов определяли размеры общей площади среза, площадь капсулы, краевого синуса, лимфатических узелков со светлыми центрами и без таковых, коркового плато, паракортикальной зоны, мякотных тяжей и мозговых синусов. Определяли площади коркового и мозгового вещества. Для всех морфометрических данных вычисляли абсолютные и относительные показатели. За 100% принимали площадь лимфатического

узла, срезанного в продольном направлении по максимальным его диаметрам.

Для определения морфофункционального типа лимфоузлов измеряли и рассчитывали отношение абсолютной площади коркового и мозгового вещества (КМ индекс) (Бородин Ю.И.,1968, 1978).

Исследование клеточного состава лимфатических узлов: малых лимфоцитов, средних лимфоцитов, бластных форм, зрелых и незрелых плазмоцитов, макрофагов, моноцитов, ретикулярных клеток, погибших клеток, клеток в состоянии митоза в структурах лимфатического узла (в лимфоидных узелках со светлыми центрами, в паракортикальной зоне, мякотных тяжах и мозговых синусах) проводили с помощью микроскопа МБИ-15 при увеличении в 900 раз в масляной иммерсии, с помощью окулярной морфометрической вставки, представляющую собой закрытую квадратную тестовую систему, площадью 2500 мкм2.

Коэффициент отношения количества митозов во всех структурно-функциональных зонах лимфатических узлов к количеству погибших клеток рассматривали как интегративный показатель процессов физиологической репарации в условиях физиологической нормы и как адаптивный - при воздействии иных факторов (в данном случае ЛТВ) (Шкурупий В.А. и др., 1998).

Количество клеток всех типов в единице тестовой площади и площади лимфатического узла использовали для решения вопроса о причинах, обусловливающих изменение размера органа - отеком или процессами истинной гипертрофии (Шкурупий В.А. и др., 1998).

Коэффициент отношения площади лимфатических узелков со светлыми центрами и без таковых рассматривали как показатель степени антигенной стимуляции компонентами лимфы, притекающей к печеночным и брыжеечным лимфатическим узлам (Шкурупий В.А. и др., 1998).

Статистическая обработка результатов исследований.

Обработку данных выполняли на персональном компьютере типа Pentium II с использованием пакета прикладных программ «Excel 7,0». В

тексте и таблицах представлены средние величины исследуемых показателей и ошибка репрезентативности средних величин (М±т).

Определение вероятности достоверности различий сравниваемых средних величин проводили с использованием параметрического критерия Стьюдента. Различия в сравниваемых группах считали достоверными при уровне значимости 95% (Р<0,05) (Лакин Г.Ф., 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

После изучения структурной организации и клеточного состава печеночных и брыжеечных лимфатических узлов в условиях нормы мы пришли к выводу, что они отличаются по ряду морфофункциональных показателей, очевидно, обусловленных особенностями состава афферентной лимфы регионов печении слепой кишки.

Большая площадь брыжеечных лимфатических узлов за счет компонентов коркового вещества, и в том числе лимфоидных узелков со светлыми центрами (Рис. 1-2.), возможно, обусловлена более интенсивной антигенной стимуляцией по сравнению с печеночными лимфатическими узлами, имеющими перед собой (по току лимфы) мощный макрофагальный барьер, роль которого выполняют клетки печени Купфера и, кроме того, гепатоциты. Вследствие этого, площадь печеночных лимфатических узлов почти в 2 раза меньше, как и площадь лимфоидных узелков с центрами размножения. Согласно классификации Бородина Ю.И. печеночный лимфатический узел следует относить к узлам промежуточного типа (индекс К/М 0,92), а брыжеечный - к компактному типу (индекс К/М 2,3).

В брыжеечных лимфатических узлах, находящихся под перманентной антигенной стимуляцией афферентной лимфы, имеются морфологические свидетельства доминирования иммунных механизмов по гуморальному типу по сравнению с печеночными лимфатическими узлами. Об этом

Рис. 1. Площадь брыжеечного и печеночного лимфоузла в норме.

Рис. 2. Площадь первичных (Ф1) и вторичных фолликулов (Ф2), коркового плато (КП) паракортикальной зоны (ПКЗ) брыжеечного (БУ) и печеночного (ПУ) лимфатических узлов.

свидетельствует большее содержание малых лимфоцитов в лимфоидных узелках со светлыми центрами и в паракортикальной зоне бластных и плазматических клеток в мякотных тяжах. Кроме того, для этих узлов характерно большее количество погибших клеток и меньшее количество митотически делящихся клеток

Меньшая, чем в брыжеечных лимфатических узлах антигенная стимуляция печеночных лимфатических узлов проявляется меньшим содержанием малых лимфоцитов и плазматических клеток, большим количеством средних лимфоцитов и бластных клеток во ЛУ2 и ПКЗ, митотически делящихся клеток во ЛУ2 и МС. Регионарные лимфатические узлы печени имеют потенциально более высокие, чем брыжеечные -возможности по формированию иммунного ответа по клеточному типу, о чем свидетельствует большее количество макрофагов во всем узле в целом и в лимфоидных узелках со светлыми центрами, в частности.

Однократное внутривенное введение декстрана приводит к структурной перестройке брыжеечных и печеночных лимфатических узлов.

Волнообразное изменение площади брыжеечных лимфатических узлов было сопряжено с синхронным изменением площадей компонентов как коркового, так и мозгового вещества.

Уменьшение площади печеночных лимфатических узлов на протяжении всего периода эксперимента было сопряжено с уменьшением площади компонентов мозгового вещества, абсолютная площадь компонентов коркового вещества не отличалась от величин этих показателей в контроле.

Однократное внутривенное введение декстрана сопровождается увеличением количества макрофагов на 1 и 3 сутки в брыжеечных лимфатических узлах, а в печеночных лимфатических узлах на протяжении всего постинфузионного периода (Рис.3-4.), что, видимо, является следствием миграции этих клеток из печени, а не активации механизмов

Рис.3. Абсолютное количество макрофагов в светлых центрах (ГЦ), паракортикальной зоне (ПКЗ), мозговых тяжах (МТ) мозговых синусах (МС) брыжеечных лимфоузлов через сутки, 3 суток и 7 суток после введения декстрана.

Рис.4. Абсолютное количество макрофагов в светлых центрах (ГЦ), паракортикальной зоне (ПКЗ), мозговых тяжах (МТ), мозговых синусах (МС) печеночных лимфоузлов через сутки, 3 суток и 7 суток после введения декстрана

клеточного иммунитета, т.к. количество моноцитов в этих узлах не увеличивалось.

Введение декстрана преимущественно активирует гуморальное звено иммунитета как в печеночных, так и в брыжеечных лимфатических узлах на протяжении всего постинфузионного периода в эксперименте, что сопровождается увеличением количества плазматических клеток.

Увеличение количества бластных форм клеток, как предшественников плазматических, в печеночных и брыжеечных лимфатических узлах в данном случае физиологически логично. Деструктивные процессы в брыжеечных лимфатических узлах на введение декстрана, обладающего сорбционными свойствами, были менее выражены по сравнению с печеночными лимфатическими узлами, т.к. большая часть токсических продуктов обезвреживается в печени гепатоцитами и клетками Купфера, но по условиям эксперимента вакуолярный аппарат этих клеток наряду с синусоидальными клетками, был заблокирован ЛТВ (Шкурупий В.А., 1987; Гаврилин В.Н., 1988; Агеева ТА., 1995).

После введения ПВП динамика изменений площади брыжеечного лимфатического узла соответствовала таковым после введения декстрана. Печеночный лимфатический узел перестраивался из промежуточного типа в компактный морфофункциональный тип.

Инфузия поливинилпирролидона обусловливает увеличение количества макрофагов в обоих типах лимфатических узлов (печеночных и брыжеечных) на протяжении всего постинфузионного периода (Рис. 5-6.), видимо, механизмом, сходным с таковым при введении декстрана.

Причем, прирост их численности был меньшим, чем на введение декстрана, вероятно, вследствие биодеградабельности последнего.

Однократное внутривенное введение поливинилпирролидона, приводит к структурным изменениям, свидетельствующим об активации механизмов гуморального иммунитета в печеночных лимфатических узлах на протяжении всего постинфузионного периода (обусловленных блокадой

эндоцитозной способности макрофагов и транспортом антигенного материала в печеночные лимфатические узлы), что сопровождается увеличением количества плазматических клеток.

Нагрузка вакуолярного аппарата клеток СМФ и РЭС поливинилпирролидоном, приводит к снижению захвата и детоксикации эндотоксинов, что, сопряжено с увеличением количества погибших клеток в брыжеечных и печеночных лимфатических узлах на 3-7 сутки после инфузии, причем в брыжеечных лимфатических узлах количество погибших клеток было больше, чем в печеночных. Количество митотически делящихся клеток в печеночных лимфатических узлах снижалось на протяжении всего эксперимента, а в брыжеечных - увеличивалось на 3-7 сутки. Очевидно, это обусловлено более эффективной, чем в печеночных лимфатических узлах реакцией компенсации утраченных клеток в связи с «прессингом» эндотоксинов (Рис.7-10.).

При анализе изменения размеров лимфатических узлов вне зависимости от периода наблюдений, топографического положения и типа ЛТВ, было отмечено постоянство величин концентрации клеток в лимфатическом узле (количество клеток всех изученных типов в единице объема лимфатического узла) (Рис. 11-12.).

ВЫВОДЫ:

1. Для брыжеечных лимфатических узлов, в условиях нормы,

резорбирующих антигенный материал и токсины содержимого кишечника, характерны большее количество погибших клеток, меньшая активность пролиферативных процессов, чем в печеночных лимфоузлах, а также особенности в соотношении клеток разного типа, свидетельствующие о доминирование иммунных механизмов по гуморальному типу (большие площадь структур коркового вещества, количества малых лимфоцитов и плазматических клеток во вторичных лимфоидных узелках, паракортикальной зоне, мякотных тяжах и мозговых синусах) по сравнению с печеночными лимфатическими узлами.

Погибшие клетки брыжеечных ЛУ

Рис.7. Абсолютное количество погибших клеток в светлых Петрах (ГЦ), паракортикалыюй зоне (ПКЗ), мозговых тяжах (МТ), мозговых синусах (МС) брыжеечных лимфоузлов через сутки, 3 суток и 7 суток после введения 1ШП

Митозы ■ брьмс««чных ЛУ

Рис.9. Абсолютное количество митозов в светлых центрах (ГЦ), паракортикалыюй зопе (ПКЗ), мозговых тяжах (МТ), мозговых синусах (МС) брыжеечных лимфоузлов через сутки, 3 суток и 7 суток после введения ПВП

N Погибшие клетки печеночных ЛУ

Рис.8. Абсолютное количество погибших клеток в светлых центрах (ГЦ), паракортикальной зоне (ПКЗ), мозговых тяжах (МТ), мозговых синусах (МС) печеночных лимфоузлов через сутки, 3 суток и 7 суток после введения ПВП

Рис.10. Абсолютное количество митозов в светлых центрах (ГЦ), паракортпкальпой зоне (ПКЗ), мозговых тяжах (МТ), мозговых сииусах (МС) печеночных лимфоузлов через сутки, 3 суток и 7 суток после введения ПВП

А мм2 х Ю Площадь среза 700 600 500 400 300 200 100 О

БУ ПУ 1 3 7

■ 3

Na«10 Суммарное кол-во клеток

250 200 150 100 50 0

БУ ПУ 1 3 7

É 1Н

S rh ¡11 11 d k

Рис. и. брыжеечный и печеночный лифоузел через 1,3 и 7 суток после введения

декстрана

700

600 4*

А мм2 х 10 Площадь среза

400 Ш 300 ц

ин

500 ^

200

100

0 ^ БУ ПУ

. 3

^АХ 10 Суммарное кол-во клеток 250

N /мкм2 Х10*3

л Концентрация клеок

50

40 30 20 10 0

ИН

и

■ БУ ПУ

to-

rfi

rh

Ш

Í

I ih

Рис. 12. БРЫЖЕЕЧНЫЙ И ПЕЧЕНОЧНЫЙ ЛИМФОУЗЕЛ ЧЕРЕЗ 1,3 И 7 СУТОК ПОСЛЕ ВЕДЕНИЯ

ПОЛИВИНИЛПИРРОЛИДОНА

2. В условиях нормы регионарные для печени лимфатические узлы, содержат больше клеток СМФ, чем брыжеечные лимфатические узлы, меньше малых лимфоцитов, плазматических и погибших клеток, что Свидетельствует о потенциально высоких возможностях в формировании иммунного ответа по клеточному типу.

3. Уменьшение площади брыжеечных и печеночных лимфатических узлов через сутки после внутривенного введения лизосомотропных веществ, видимо, обусловлено сокращением стромы узла в связи с реакцией на стрессирующий фактор - эфирный наркоз и введение ксенобиотиков. Вместе с тем, не было отмечено изменений суммарной концентрации (количество клеток в единице объема лимфоузла) всех изученных типов клеток в лимфатических узлах в связи с их топографическим положением, с типом ЛТВ и периодами эксперимента. Эта закономерность не проявлялась в отношении макрофагов.

4. Однократное внутривенное введение декстрана сопровождается увеличением количества макрофагов на 1 и 3 сутки в брыжеечных лимфатических узлах, а в печеночных лимфатических узлах на протяжении всего изученного постинфузионного периода, что, видимо, является следствием миграции этих клеток из печени, а не активации механизмов клеточного иммунитета, т.к. количество моноцитов в этих узлах не увеличивалось.

5. Введение декстрана преимущественно активирует гуморальное звено иммунитета как в печеночных, так и в брыжеечных лимфатических узлах на протяжении всего постинфузионного периода, что сопровождается увеличением количества незрелых плазматических клеток.

6. Инфузия поливинилпирролидона обусловливает увеличение количества макрофагов в обоих типах лимфатических узлов (печеночных и брыжеечных) на протяжении всего изученного

постинфузионного периода, видимо, механизмом, сходным с таковым при введении дскстрана.

7. Однократное внутривенное введение поливинилпирролидона, приводит к структурным изменениям, свидетельствующим об активации механизмов гуморального иммунитета в печеночных лимфатических узлах на протяжении всего постинфузионного периода (обусловленных блокадой эндоцитозной способности макрофагов и транспортом антигенного материала в печеночные лимфатические узлы), что сопровождается увеличением количества как зрелых, так и незрелых форм плазматических клеток.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ВНЕДРЕНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выявленные особенности действия препаратов на лимфатические узлы дополняют сведения о биологических эффектах лизосомотропных веществ. Их следует учитывать при создании лекарственных средств с клеточной адресацией на полимерных матрицах-носителях, новых плазмо- и кровезамещающих средств.

' Результаты могут быть полезны при использовании изученных препаратов в клинике, так как позволят избежать вероятных осложнений.

Результаты работы могут быть использованы в лекционных циклах на кафедрах анатомии человека и патологической анатомии, в практике научных исследований Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шуева Н.В., Шкурупий В.А., Машак А.Н. Морфологические изменения интактных брыжеечных лимфатических узлов при парентеральном введении лизосомотропных препаратов.// Морфология и хирургия.- Вып. 2.- Научные труды.- Т. 151.-Новосибирск, 2000.- С. 173-174.

2. Шуева Н.В., Шкурупий ВА, Машак А.Н., Позднякова СВ.. Морфологические изменения интактных печеночных лимфатических узлов при парентеральном введении декстрана //Научная сессия, посвященная 65-летию Новосибирской государственной медицинской академии: Тезисы докладов. - Новосибирск, 2000. - С. 228.

3. Шуева Н.В. Морфологические изменения брыжеечных лимфатических узлов при парентеральном введении поливинилпирролидона // Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии: Материалы международного симпозиума.- Новосибирск, 2000. - С. 318-320.

4. В.АШкурупий, Н.В.Шуева, А.Н.Машак. Изменения клеточного состава светлых центров фолликулов брыжеечных лимфатических узлов после однократного внутривенного введения декстрана. // Проблемы клинической, экспериментальной и профилактической лимфологии: Научная конференция с международным участием. - Новосибирск, 2002. — Т. 9. - С. 379-380.

5. Шуева Н.В., Шкурупий ВА, Машак А.Н., Позднякова СВ. Морфологические изменения интактных печеночных лимфатических узлов при парентеральном введении поливинилпирролидона //1 Съезд лимфологов России,- Москва, 2003. - Т. 4. - С. 41.

И1 744

Подписано к печати 26.04.2004 формат-60х84 - 1 печатный лист

Бумага: офсетная ПечатыИлзо СЯ 1610 Тираж: 90экз. Номер заказа 1649 Копировальный центр ООО «Компания Юзерс" г. Новосибирск, ул. Красный проспект, 157/1