Стрессорные изменения физиолого-метаболических характеристик эритроцитов и их коррекция экстрактом из ламинарии японской

Кондратьева, Елена Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Стрессорные изменения физиолого-метаболических характеристик эритроцитов и их коррекция экстрактом из ламинарии японской
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Стрессорные изменения физиолого-метаболических характеристик эритроцитов и их коррекция экстрактом из ламинарии японской"

Кондратьева Елена Викторовна

СТРЕССОРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ФИЗИОЛОГО-МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК ЭРИТРОЦИТОВ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ЭКСТРАКТОМ ИЗ ЛАМИНАРИИ ЯПОНСКОЙ

03.03.01 - физиология 14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

- 9 ЛЕК 2910

Владивосток - 2010

004616285

Работа выполнена на кафедре фармацевтической технологии и биотехнологии с курсом ФПК и ППС ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ и в лаборатории биохимии Отдела биохимических технологий Учреждения Российской академии наук Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева Дальневосточного отделения РАН.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Амурская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Защита состоится « 21 » декабря 2010 г. в 10 часов на заседании объединенного диссертационного совета ДМ 005.008.03 при Учреждении Российской академии наук Институт биологии моря им. A.B. Жирмунского Дальневосточного отделения РАН по адресу: 690041, г. Владивосток, ул. Пальчевского, 17.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии наук Институт биологии моря им. A.B. Жирмунского Дальневосточного отделения РАН по адресу: 690041, г. Владивосток, ул. Пальчевского, 17.

Хотимченко Юрий Степанович

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор Кушнерова Наталья Федоровна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Дюйзен Инесса Валерьевна

доктор биологических наук, профессор Новгородцева Татьяна Павловна

Автореферат разослан « » ноября 2010 г.

Ученый секретарь объединенного диссертационного совета, к.м.н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Физиолого-метаболические характеристики

мембран эритроцитов являются тонким показателем, характеризующим состояние мембран других клеток органов и тканей на уровне целого организма (Эндакова и др., 2002). Интерес к исследованию липидной составляющей мембран эритроцитов и показателей их антиоксидантной защиты для оценки общего напряжения при стрессе возник после того, как было показано, что при многих стрессорных заболеваниях или болезнях адаптации (атеросклероз, язвы желудочно-кишечного тракта, хроническая усталость и др.) нарушения липидного гомеостаза проявляются в изменениях на уровне сывороточных липидов, а также в состоянии процессов липопероксидации (Ланкин и др., 2001, 2009). Вместе с тем изучению эритроцитов как модели для исследования стрессорной нагрузки на биомембраны посвящены единичные работы (Кушнерова, Лесникова, 2003; Лесникова, 2006; Кушнерова и др., 2008, 2010). Поэтому очевидна актуальность изучения взаимосвязи физиолого-метаболических нарушений эритроцитов при воздействии мембраноповреждающих стрессовых факторов, а также возможности их коррекции растительными препаратами.

На сегодняшний день известен ряд препаратов, обладающих стресс-протекторным действием, так называемых адаптогенов, включающих широко известные средства традиционной и народной медицины. К ним относятся корни женьшеня, элеутерококка колючего, аралии маньчжурской, родиолы розовой, семена лимонника китайского (Брехман, 1968; Дардымов, 1987; Хасина, 1986; Горькавая и др., 2007; Шахматов и др., 2007).

В работе приняты следующие сокращения: АОЗ - антиоксидантная защита, Г-ЭН - восстановленный глутатион, ГХС - гиперхолестериновый рацион, ДГДГ -дигалактозилдиацилглицерин, ЖК - жирные кислоты, КЛ - концентрат ламинарии, ЛФХ - лизофосфатидилхолин, ЛФЭ - лизофосфатидилэтаноламин, ЛХАТ — лецитин:холестеринацилтрансфераза, МДА - малоновый диальдегид, МГДГ -моногалакгозилдиацилглицерин, МПХ - медные производные хлорофилла, НЖК — ненасыщенных жирных кислот, ПГ - простагландинов, ПНЖК -полиненасыщенные жирные кислоты, ПОЛ - перекисное окисление липидов, СДЭ - средний диаметр эритроцита, СОЭр - средний объем эритроцита, СЖК -свободные жирные кислоты, СМ - сфингомиелин, СОД - супероксидцисмутаза, СХДГ — сульфохиновозилдиацилглицерин, ТАГ - триацилглицерин, ФИ -фосфатидилинозит, ФК - фосфатидная кислота, ФС - фосфатидилсерин, ФХ -фосфатидилхолин, ФЭ - фосфатидилэтаноламин, ХС - холестерин, ЭЖК - эфиры жирных кислот, ЭХС - эфиры холестерина

Однако использование корней и семян приводит к катастрофическому снижению запасов этих растений. Следовательно, возникает необходимость поиска и изучения новых источников сырья, имеющегося на территории Российской Федерации, для получения препаратов со стресс-протекторными свойствами, в частности среди морских водорослей. Одним из сырьевых источников является ламинария японская (Laminaria japónica), в состав которой входят биологически активные соединения, такие как полисахариды, полифенолы, каротиноиды, пищевая клетчатка, белки, витамины, минералы и т.п. (Имбс и др., 2009; Kostetsky et al., 2004; Sanina et al., 2008). Полифенольные соединения (флоротаннины и их олигомерные и полимерные формы) представляют одну из наиболее значимых групп биологически активных веществ, характеризующих фармакологическую ценность водорослей. В связи с этим был выделен экстракт из ламинарии японской (Laminaria japónica), в состав которого входят полифенольные соединения в количестве 35 % (Спрышн и др., 2009).

В настоящем исследовании анализируется действие мембраноповреждающих факторов (вертикальная фиксация крыс за дорзальную шейную складку, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестериновый рацион) на физиологические характеристики эритроцитов, систему показателей «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» и липидную составляющую мембран эритроцитов, а также демонстрируется возможность коррекции наблюдаемых отклонений с помощью водно-спиртового экстракта из ламинарии японской.

Цель работы - проанализировать стрессорные изменения физиолого-метаболических характеристик эритроцитов крыс и оценить возможность их коррекции с помощью экстракта из ламинарии японской.

Задачи исследования:

1. Изучить размерные характеристики эритроцитов крыс и осмотическую резистентность к гемолизирующему агенту при действии мембраноповреждающих факторов (вертикальная фиксация за дорзальную шейную складку, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестериновый рацион).

2. Изучить липидную составляющую мембран эритроцитов (нейтральные и фосфолипидные фракции) и показатели антиоксидантной защиты

при действии мембрано-повреждающих факторов (вертикальная фиксация за дорзальную шейную складку, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестериновый рацион).

3. Изучить особенности физиолого-метаболических характеристик мембран эритроцитов в период депривации после интоксикации крыс четыреххлористым углеродом.

4. Сравнить мембранопротекторные свойства экстракта из ламинарии японской и элеутерококка в условиях экспериментальной модели стресса.

5. Сравнить мембранопротекторные свойства экстракта из ламинарии японской и «Легапона»™ в условиях экспериментальной модели интоксикации четыреххлористым углеродом.

6. Оценить изменения физиолого-метаболических характеристик эритроцитарных мембран при введении экстракта из ламинарии японской животным в условиях гиперхолестеринового рациона.

Научная новизна. Получены новые знания о характере нарушений процессов антиоксидантной защиты и перекисного окисления липидов при действии на организм повреждающих факторов (вертикальная фиксация, интоксикация СС1|, гиперхолестериновый рацион).

Впервые выполнено системное исследование мембранопротекторных свойств водно-спиртового экстракта из ламинарии японской и получено их экспериментальное подтверждение. Показано, что экстракт из ламинарии японской нормализует показатели в системе «перекисное окисление липидов -антиоксидантная защита» за счет собственной антиоксидантной активности, регулирует реакции этерификации холестерина и нормализуют соотношение фосфолипидных фракций, что обусловливает восстановление размерных характеристик эритроцитов, повышение их эластических свойств и расширение границ осмотической устойчивости.

Теоретическая и практическая значимость. Исследование расширяет недостаточно разработанные в науке представления об участии эритроцитарной системы в физиологических механизмах стрессорной реакции. Исследование дополняет современное знание о мембранопротекторных свойствах растительных полифенолов морского происхождения.

Материал о стресспротекторном и мембранопротекторном действии экстракта из ламинарии японской в отношении изменений показателей системы «перекисное окисление липидов-антиоксидантная защита», физиологических и структурных характеристик эритроцитов при действии повреждающих факторов может быть использован при разработке медико-биологической документации на применении этого экстракта в качестве биологически активной добавки как в нативном виде, так и в составе функциональных продуктов питания. На экстракт из ламинарии японской подана заявка на патент (№ 2009128692, приоритет от 24.07.2009 г.) и получено положительное решение от 01.07.2010 г.

Материалы диссертации включены в курс лекций кафедры фармацевтической технологии и биотехнологии с курсом ФПК и ППС ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Положения, выносимые на защиту:

1. Изменения размерных характеристик эритроцитов, соотношения нейтральных и фосфолипидных фракций в мембране эритроцитов, напряжение системы антиоксидангаой защиты, активация перекисного окисления липидов носят неспецифический характер, что может рассматриваться как атрибут стрессорной реакции.

2. Экстракт из ламинарии японской нормализует показатели системы ПОЛ-АОЗ, размерные характеристики эритроцитов (СДЭ, СОЭр), повышает их эластические свойства (расширяет границы осмотической устойчивости) в условиях действия мембраноповреждающих факторов за счет регуляции этерификации холестерина и нормализации соотношения фосфолипидных фракций.

Личный вклад. Автор участвовал в планировании, постановке цели и задач исследования. Подбор и анализ литературы, проведение экспериментов, статистическая обработка экспериментальных данных и их анализ осуществлялись непосредственно соискателем.

XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010), 14-й Международной Пугцинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Путцино, 2010), Международной научно-практической конференции «Дальневосточная весна-2010» (Комсомольск-на-Амуре, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, включенных в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации на соискание ученой степени доктора и кандидата наук», утвержденный ВАК.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 138 страницах компьютерного набора и содержит введение, обзор литературы, характеристику материала и методов исследования, описание результатов собственных исследований, обсуждение и выводы. Список литературы включает 271 источник, в том числе 143 отечественных и 128 зарубежных авторов. Текст иллюстрирован 23 рисунками и 16 таблицами.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Экспериментальные животные. В экспериментах использовано 114 крыс-

самцов линии Вистар. Крыс получали из питомника «Столбовая» (г. Чехов Московской области). Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными, отраженными в «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1985). Проведение исследования одобрено этическим комитетом ГОУ ВПО ВГМУ Росздрава, протокол № 1 от 9 ноября 2009 г.

Изучение влияния стресса (вертикальная фиксация за дорзальную шейную складку на 22 часа) на физиолого-метаболические характеристики эритроцитов крыс. Животные были разделены на две группы по 6 крыс в каждой: 1-я - контроль (интактные животные), 2-я - стресс.

Изучение влияния интоксикации СС14 и периода депривации на физиологические и структурные характеристики эритроцитов крыс. Животные были разделены на 3 группы по 6 крыс в каждой: 1-я - контроль (интактные), 2-я -

СС14 (введение в течение 6 дней подкожно 50% масляного раствора ССЦ); 3-я -введение ССЦ с последующей отменой (депривация) в течение 7 дней.

Изучение изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов крыс при гиперхолестериновом рационе. Животные были разделены на 2 группы по 6 1фыс в каждой: 1-я - контроль (интакгные, стандартный рацион); 2-я - гиперхолестериновый рацион (введение в рацион животных повышенного содержания насыщенных жиров в течение 6 недель).

Изучение влияния экстракта из ламинарии японской на стресс-индуцированные изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов крыс. Животные были разделены на четыре группы по 6 крыс в каждой: 1-я - контроль (интакгные животные), 2-я - стресс, 3-я - стресс + экстракт ламинарии, 4-я - стресс + экстракт элеутерококка. Водный раствор экстракта из ламинарии и водный раствор аптечного экстракта элеутерококка вводили крысам внутрижелудочно в дозе 0,4 мл непосредственно перед вертикальной фиксацией и через 6 ч. после начала эксперимента.

Изучение влияния экстракта из ламинарии японской на изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов крыс в период депривации после интоксикации СС14. Животные были разделены на 5 групп по 6 крыс в каждой: 1-я - контроль (интакгные), 2-я - СС14; 3-я - введение ССЦ с последующей отменой (депривация) в течение 7 дней, 4-я - введение ССЦ в течение 4 дней с последующей отменой и введением экстракта ламинарии в течение 7 дней, 5-я - введение ССЦ в течение 4 дней с последующей отменой и введением препарата сравнения легалона в течение 7 дней.

Изучение влияния экстракта из ламинарии японской на физиологические и структурные характеристики эритроцитов крыс при гиперхолестериновом рационе. Животные были разделены на 3 группы по 6 крыс в каждой: 1-я -контроль (штопаные, стандартный рацион); 2-я - гиперхолестериновый рацион; 3-я - гиперхолестериновый рацион + экстракт из ламинарии.

Острый стресс моделировали вертикальной фиксацией животных за дорзальную шейную складку на 22 часа (Добряков, Брехман, 1996).

Интоксикация четыреххлористым углеродом. Животным в течение 6 дней подкожно (дорзальная шейная складка) вводили 50 % масляный раствор

четыреххлористого углерода (CCI4) в дозе 2 мл/кг 1 раз в сутки (Венгеровский и др., 1999).

Экспериментальную гиперхолестеринемию вызывали в течение 6 недель введением в рацион животных повышенного содержания насыщенных жиров (растительное сало 25 % от веса рациона), включающих 2,5 % холестерина (Мещерская и др. 1966).

По завершении каждого эксперимента животных выводили из него методом декапитации под легким эфирным наркозом. Кровь для исследований собирали из шейной вены животных в пробирку с 1 % раствором гепарина из расчета 0,02 мл раствора на 1 мл крови.

Выделение эритроцитов. Гепаринизированную кровь центрифугировали 10 мин при 3000 g. Плазму удаляли, а эритроциты отмывали 0,9 % раствором NaCl, хорошо перемешивая, осаждали цешрифугированием, супернатант удаляли (Новгородцева и др., 2003).

Выделение эритроцитариых мембран. Эритроциты помещали в дистиллированную воду, где .происходил их гемолиз. Затем центрифугировали 10 мин при 3000 g, супернатант удаляли (Новгородцева и др., 2003).

Физиологические характеристики эритроцитов. В мазках крови, окрашенных азур-эозиновой смесью, с помощью окуляр-микрометра определяли диаметр эритроцитов (мкм). Средний объем эритроцита (СОЭр) вычисляли по формуле: СОЭр = d3 х 0,2 (мкм3), где d - средний диаметр эритроцита (Гольдберг и др., 1973). Осмотическую резистентность эритроцитов измеряли по методу, предложенному Б.Л. Эндрю (1972).

Биохимические методы. Состояние антиоксидантной системы оценивали по величине активности супероксиддисмутазы (КФ 1.15.1.1) (Paoletty et al., 1986), глутатионпероксидазы (КФ 1.11.1.9) и уровня восстановленного глутатиона (Новгородцева и др., 2003), малонового диальдегида (Гончаренко, Латинова, 1985). Для определения содержания фракций фосфолипидов и нейтральных липидов применяли следующие методы: экстракция липидов из эритроцитов (Folch et al., 1957); определение общих фосфолипидов (Vaskovsky et al., 1975); приготовление систем растворителей для микротонкослойной хроматографии и реактивов для идентификации фосфолипидов (Кейтс, 1975; Wagner et al., 1961; Rouser et al., 1967;

Vaskovsky et al., 1975); микротонкослойная хроматография фосфолипидов (Svetachev, Vaskovsky, 1972); определение количественного содержания фракций фосфолипидов (Vaskovsky et al., 1975); хроматографическое разделение и количественное определение фракций нейтральных липидов (Amenta, 1964).

Экстракт из ламинарии японской. Экстракт из ламинарии готовили методом реперколяции. Измельченное сырье экстрагировали 70 % этанолом с целью освобождения от альгинатов, при соотношении сырья к экстрагенту 1:1 (об/об). Выход экстракта составлял 1 л из 1 кг сухого сырья. Экстракт представляет собой жидкость зеленого цвета со специфическим запахом и вкусом. Имеет сложный композиционный состав различных классов веществ. Содержание общих полифенолов составляло 10,5-12,8 мг/мл.

Предварительно освобожденный от спирта экстракт (путем упаривания в вакууме) животным вводили в виде водного раствора внутрижелудочно (по 0,4 мл) в дозе, соответствующей 100 мг общих полифенолов на кг массы тела животного (Венгеровский и др., 1999).

Статистические методы. Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерной программы Instat (Graph Pad Software Inc.USA, 2005), включая определение средней арифметической величины (М), стандартной ошибки средней (т), оценку достоверности различий по t-критерию Стьюдента.

Результаты исследований и их обсуждение Физиологические и структурные характеристики эритроцитов при воздействии повреждающих факторов

Изучение физиологических характеристик эритроцитов крыс при исследовании влияния повреждающих факторов в условиях экспериментальных моделей (стресс-вертикальная фиксация, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестеринемия) показало однонаправленность изменений в величинах среднего диаметра эритроцита и его объема (рис. 1).

Во всех экспериментах отмечалось увеличение СДЭ и СОЭр (на 30-38 %, р < 0,001). Аналогично увеличивался СОЭр (на 121-164 %, р < 0,001). Обращает на себя внимание тот факт, что также во всех экспериментах в эритроцитах возрастало содержание холестерина и снижалось количество общих фосфолипидов. Уровень ХС при пшерхолестеринемии и интоксикации СС14 увеличился на 19 % (р < 0,001),

тогда как при стресс-вертикальной фиксации его величина увеличилась на 12 % (р <0,001).

[в Стресс В С СИ ГД ГХС~|

Рис. 1. Изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов крыс в условиях повреждающих факторов.

Примечание: СДЭ - средний диаметр эритроцита, СОЭр - средний объем эритроцита, ХС - холестерин, ОФЛ - общие фосфолипиды, ХС/ФЛ -холестерин/фосфолщщцы. *** - р < 0,001.

Количество общих фосфолипидов при интоксикации СС14, стресс-вертикальной фиксации и гиперхолестеринемии снизилось на 20-27 % (р < 0,001). Известно, что в результате встраивания холестерина в мембрану эритроцитов увеличиваются их размеры и изменяется форма: происходит превращение двояковогнутых дисков в сфероциты (Лопухин и др., 1983; Но et al., 1994; Simonetty et al., 1995; Lindi et al., 1998). Сравнивая величины роста коэффициента ХС/ФЛ следует отметить, что при воздействии стресс-вертикальной фиксации его величина возросла на 38 % (р < 0,001), тогда как при интоксикации СС14 и при ГХС - на 63 % (р < 0,001) и 54 % (р < 0,001), соответственно. Известно, что увеличение содержания холестерина в мембране эритроцитов приводит к существенному изменению ее физико-химических свойств: увеличивается микровязкость мембраны, ухудшается деформируемость и способность к прохождению в микроциркулярном русле, снижается активность Ыа+,К+-АТФазы (Tsuzuki et al., 2000; Ohvo-Rekila, 2002; Filippov et al., 2003; Koter et al., 2004; Lee et al., 2004; Kempaiah, Srinivasan, 2005). При анализе всех вышеназванных параметров следует отметить, что наиболее существенным изменениям подвергались исследуемые величины при ГХС и интоксикации четыреххлористым углеродом. Следовательно,

данные экспериментальные модели вызывают более глубокие нарушения структуры мембран.

При анализе осмотической резистентности эритроцитов были выявлены специфические особенности в изменении этого физиологического параметра. Так, при действии стресс-вертикальной фиксации и интоксикации четыреххлористым углеродом происходит сдвиг начала гемолиза и его завершения влево относительно контроля, т.е. в сторону меньшей устойчивости к более высоким концентрациям №С1 (0,50 % при стрессе, 0,62 % при интоксикации четыреххлористым углеродом). При ГХС, напротив, наблюдается сдвиг начала гемолиза вправо относительно контроля, т.е. в сторону высокой устойчивости эритроцитов к более низким концентрациям ЫаС1 (начало гемолиза при концентрации ЫаС1 0,35 %). Завершение гемолиза также было значительно позже при ГХС (при концентрации №С1 0,30 %), тогда как при стресс-вертикальной фиксации и интоксикации четыреххлористым углеродом, соответственно, при 0,45 % и 0,47 %. Но следует отметить, что интервал концентраций №С1 между началом и завершением гемолиза при ГХС и стресс-вертикальной фиксации был минимальным (0,05 %), тогда как при интоксикации четыреххлористым углеродом - 0,15 %. Это свидетельствует о том, что проницаемость мембран эритроцитов при ГХС и стресс-вертикальной фиксации была ниже, чем таковая в группе интоксикации четыреххлористым углеродом за счет большего количества холестерина в мембране, являющегося ее стабилизатором. Так как холестерин снижает эластичность мембраны, то при ГХС и стресс-вертикальной фиксации эритроцит имеет меньшие возможности к растяжению, чем при интоксикации четыреххлористым углеродом, что и обусловило более быстрое завершение гемолиза.

При анализе показателей системы ПОЛ-АОЗ в крови крыс при стресс-вертикальной фиксации и интоксикации четыреххлористым углеродом относительно таковых величин в контроле прослеживается однонаправленность изменений, но степень их выраженности различается. Наибольшее напряжение и тенденция к истощению антиоксидантной защиты наблюдается при интоксикации четыреххлористым углеродом: активность СОД возросла на 48 %, тогда как при стрессе на 41 %. В пользу этого говорит то факт, что величина восстановленного

глутатиона (Г-вН) в крови животных при стресс-вертикальной фиксации была снижена на 12 %. В то же время при интоксикации четыреххлористым углеродом величина восстановленного глутатиона была снижена на 32 %. Более интенсивно протекает процесс перекисного окисления липидов при интоксикации четыреххлористым углеродом, так как уровень МДА при этом был увеличен в крови крыс на 38 %, а при стрессе величина этого показателя возросла на 15 %.

При анализе нейтральных липидов в эритроцитах всех экспериментальных групп возрастает количество ТАГ и СЖК (рис. 2). Это обусловлено биохимическим механизмом стрессовой реакции, при которой активируется липолиз в адипоцитах жировой ткани, развивается выраженная гипертриглицеридемия, что сопровождается повышением этих липидов в мембране эритроцитов.

Рис. 2. Изменения липидных фракций эритроцитов крыс в условиях повреждающих факторов.

Примечание: ТАГ - триацилглицерин, СЖК - свободные жирные кислоты, ЭЖК -эфиры жирных кислот, ХС - холестерин, ЭХС - эфиры холестерина, ФХ - фосфатидилхолин, ЛФХ - лизофосфатидилхолин, СМ - сфингомиешш, ФЭ - фосфатидилэтаноламин, ЛФЭ -лизофосфатидилэтаволамин, ФС - фосфатидилсерин, ФИ - фосфатидилинозит, ФК -фосфатиднаякислота. * — р<0,05; **-р<0,01; ***-р<0,001.

В то же время, стресс-вертикальная фиксация, интоксикация СС14 и гиперхолестеринемия сопровождаются угнетением этерифицирующей функции печени (Кушнерова и др., 2002; Спрыгин и др., 2002; Вегеоп й а1., 2001; 1аезсЬке, 2002), что приводит к нарушению синтеза и катаболизма липопротеинов. Кроме того, одинаковая направленность в снижении ЭХС во всех экспериментальных

группах, как при стресс-вертикальной фиксации, интоксикации CCI4, так и при гиперхолестеринемии, по-видимому, связано со снижением активности лецитин-холестерин-ацилтрансферазы (J1XAT) (Никифорова, 1981; Sasso et al., 1989; Carrasco et al., 1998), фермента, участвующего в катаболизме липопротеинов, богатых ТАГ (хиломикронов) и ЛПОНП.

При анализе фосфолипидного спекгра следует отметить примерно одинаковое снижение ФХ во всех группах, в среднем, на 7-11 % (р < 0,05 - 0,001) относительно контроля. При этом по некоторым параметрам отличалась группа с гиперхолестериновым рационом. Так, при стрессе и при интоксикации четыреххлористым углеродом у животных однонаправлено возрастает количество ЛФХ и ЛФЭ, что свидетельствует об активации фосфолипазы А2 и увеличении проницаемости мембран (Kabarowsky et al., 2002). При гиперхолестериновом рационе увеличивается только ЛФХ, а количество ЛФЭ остается неизменным. То есть гиперхолестериновый рацион в данной экспериментальной модели затрагивает наружный монослой биомембраны и не повреждается внутренний монослой. Однако компенсация недостатка ФХ в наружном монослое мембран эритроцитов осуществилась за счет повышения количества СМ. Такое соотношение фосфолипидных фракций в мембране предполагает уменьшение жидкостных свойств (в мембранах с высоким содержанием холестерина низкое содержание воды) и увеличение микровязкости липидного бислоя (Надиров и др.,1986; Broncel et al., 2005; Ridgway, 2000). При исследовании изменений фосфолипидных фракций, характеризующих внутренний монослой мембраны эритроцитов (ФЭ, ЛФЭ, ФС), также отмечались рассогласования в их соотношении. Количество ФЭ снижалось в группах животных, подвергнутых стрессу и интоксикации четыреххлористым углеводом. Наибольшее снижение содержания ФЭ происходило в эритроцитах крыс при стресс-вертикальной фиксации (на 15 %). При воздействии гиперхолестеринемии изменения в количестве ФЭ и ФС были незначительными, что говорит о нарушении в основном только наружного монослоя биомембран эритроцитов и не затрагивает внутреннего монослоя.

На основании вышеизложенного следует, что воздействие стресс-вертикальной фиксации, интоксикации СС14, гиперхолестеринового рациона

сопровождается неспецифической реакцией организма, которая проявляется в одинаковой направленности изменений липидной составляющей мембран эритроцитов, и обусловливает увеличение их размерных характеристик. В связи с этим все исследуемые нами факторы воздействия на организм следует считать стрессорными.

Изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов в период депривации

В данной работе в одном эксперименте исследовались физиологические и структурные параметры эритроцитов в период отмены стрессорного агента (депривация), то есть в период после интоксикации ССЦ в течение 7 дней. Через 7 дней после отмены воздействия токсических агентов большинство изученных физиологических и структурных параметров эритроцитов не нормализовалось, более того, отмечалось еще большее отклонение от нормы ряда биохимических показателей, что свидетельствовало о продолжающемся токсическом стрессе и недостаточности собственных защитных сил организма противостоять развитию токсической патологии.

Влияние экстракта из ламинарии японской и экстракта элеутерококка на стресс-индуцированные изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов

При введении животным экстракта из ламинарии и препарата сравнения известного стресс-протектора экстракта элеутерококка нормализовались многие исследуемые параметры. Восстановились и даже расширились границы устойчивости к гемолизирующему агенту. Однако экстракт элеутерококка показал меньшую эффективность в процессах восстановления: сохранялись повышенными размерные характеристики эритроцитов, что обусловлено увеличенным коэффициентом ХС/ФЛ (рис. 3). При сравнении полученных результатов по количественным характеристикам фосфолипидных фракций в эритроцитах при введении экстрактов из ламинарии и элеутерококка на фоне стресса с таковыми у контрольных животных отмечается нормализация практически по всем показателям (рис. 4), за исключением более низкой величины ЛФХ на 5 % (р <

0,05) и более высоких величин ФК на 32 % (р < 0,001) и ФИ на 9 % (р < 0,001) при введении экстракта из ламинарии.

□ Стресс Ш Стресс+экстракт ламинарии В Стресс+экстракт элеутерококка

Рис. 3. Влияние экстракта из ламинарии и элеутерококка на физиологические характеристики эритроцитов крыс и показатели системы ПОЛ-АОЗ при стрессе. Примечание: СДЭ - средний диаметр эритроцита, СОЭр - средний объем эритроцита, ХС - холестерин, ОФЛ - общие фосфолипиды, ХС/ФЛ - холестерин/фосфолипиды, СОД -супероксиддисмутаза, Г-ЭН - восстановленный глугатион, МДА - малоновый диальдегид.* -р<0,05; ** -р<0,01; *** -р<0,001.

□ Стресс И Стресс+экстракт ламинарии В Стресс+экстракт элеутерококка

§ 30 а.

% 20 и

5 10 «

и 0 «

|-10

! -20 Э4

-30

* * * ГтШ т т # Л р- р *** а У г

ни 1 1 • ГТТПТТТ * Г' Ш" - • ** 1' Ы1 1 1 1Ш 1

ТАГ СЖК ЭЖК ЭХС ФХ ЛФХ СМ ФЭ ЛФЭ ФС ФИ ФК ХС

Рис. 4. Влияние экстракта из ламинарии и элеутерококка на липидный состав мембран эритроцитов крыс при стрессе.

Примечание: ТАГ - триацилглицерин, СЖК - свободные жирные кислоты, ЭЖК -зфиры жирных кислот, ХС - холестерин, ЭХС - эфиры холестерина, ФХ -фосфатидилхолин, ЛФХ - лизофосфатидилхолин, СМ - сфингомиелин, ФЭ -фосфатидилэтаноламин, ЛФЭ - лизофосфатидилэтаноламин, ФС - фосфатидилсерин, ФИ -фосфатидилинозит, ФК - фосфатидная кислота. * - р < 0,05; **-р<0,01;***-р< 0,001.

Данный феномен может считаться одним из механизмов более эффективного репаративного действия экстракта ламинарии по сравнению с экстрактом' элеутерококка, так как эти две фосфолипидные фракции являются основой для синтеза фосфолипидов, нарушенного стрессом. По остальным показателям экстракт из ламинарии проявлял свойства, сходные с таковыми из элеутерококка.

Влияние экстракта из ламинарии и легалона на изменение физиологических и структурных характеристик эритроцитов при интоксикации четыреххлористым углеродом в период депривации

Введение экстракта из ламинарии и препарата сравнения легалона в период депривации способствовало нормализации практически всех изученных физиологических и структурных характеристик эритроцитов. При сопоставлении эффектов экстракта из ламинарии и легалона в период депривации показало, что при введении легалона оставалась повышенными СОЭр, активность СОД, уровень МДА и сниженной концентрация ОФЛ и Г-БН (рис. 5). В течение 7 дней после прекращения интоксикации четыреххлористым углеродом экстракт из ламинарии был более эффективен, чем легалон в плане нормализации антиоксидантной защиты.

□ СС14 □ Депривация О Депривация+экстрах ламинарии Н Депривадия+Легалон

Рис. 5. Влияние экстракта из ламинарии и легалона на физиологические характеристики эритроцитов крыс и показатели системы ПОЛ-АОЗ при интоксикации четыреххлористым углеродом и в период депривации.

Примечание: СДЭ - средний диаметр эритроцитов, СОЭр — средний объем эритроцитов, ХС - холестерин, ОФЛ - общие фосфолипиды, ХС/ФЛ -холестерин/фосфолипиды, СОД - супероксиддисмутаза, Г-БН - восстановленный глутатион, МДА - малоновый диальдегид. * — р < 0,05; **-р<0,01; *** —р < 0,001.

Обращает на себя внимание более высокий, чем в контроле, уровень ФК при введении экстракта из ламинарии (рис. 6), что может считаться одним из механизмов репаративного действия экстракта, так как этот фосфолшшд является основой для синтеза всех фосфолипидов. Действие легалона оказалось менее эффективным, чем экстракта из ламинарии в восстановлении липидной составляющей мембран эритроцитов и снятии токсического стресса. Полученные результаты указывают на мембранопротекторный эффект как экстракта из ламинарии, так и легалона.

[□ СС14 ИДепривация О Депривация+экстракт ламинарии И Депривация+Легалон

Рис.6 Влияние экстракта из ламинарии и легалона на липидный состав мембран эритроцитов крыс при интоксикации четыреххлористым углеродом и в период депривации.

Примечание: ТАГ—триацилглицерин, СЖК - свободные жирные кислоты, ЭЖК -эфиры жирных кислот, ХС - холестерин, ЭХС - эфиры холестерина, ФХ -фосфатидилхолин, ЛФХ - лизофосфатадилхолин, СМ - сфингомиелин, ФЭ -фосфатидилэтаноламин, ЛФЭ - лизофосфагидилэтаноламин, ФС - фосфатидилсерин, ФИ — фосфатидшшнозит, ФК - фосфатидная кислота. * -р < 0,05; ** -р < 0,01; *** -р <0,001.

Влияние экстракта из ламинарии на изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов при гиперхолестериновом рационе

Введение экстракта из ламинарии оказало позитивный эффект на исследованные параметры. Снизился уровень холестерина в мембране, восстановился уровень общих фосфолипидов, что обусловило снижение коэффициента ХС/ФЛ. Значительно уменьшился объем эритроцитов, хотя и оставался достоверно увеличенным (рис. 7). Границы осмотической устойчивости

расширились до 0,1 %, что говорит об увеличении эластичности мембраны эритроцитов.

| □ ГХС Ш ГХС+экстражт ламинария |

тип . I I

иг

I |ШШ

ТТТТТГ

сдэ

СОЭр

ОФЛ ХС/ФЛ начало окончание

гемолиза гемолиза

Рис. 7. Влияние экстракта из ламинарии на физиологические характеристики эритроцитов крыс и показатели системы ПОЛ-АОЗ при гиперхолестеринемии.

Примечание: СДЭ - средний диаметр эритроцитов, СОЭр - средний объем эритроцитов, ХС - холестерин, ОФЛ - общие фосфолипиды, ХС/ФЛ -холестерин/фосфолипиды. * -р < 0,05; ** -р <0,01; *** -р < 0,001.

Введение экстракта из ламинарии на фоне ГХС сопровождалось увеличением ЭХС (рис. 8). Данный феномен обусловлен активацией фермента лецитин-холестерин-ацилтрансферазы (ЛХАТ) полифенолами препарата (Гаскина и др., 1989) и, соответственно, насыщением липопротеинов эфирами холестерина. Следует отметить нормализацию уровня СЖК. При сравнении количественных показателей других фракций нейтральных липидов прослеживается выраженный птотриглицеридемический эффект экстракта.

Анализ фосфолипидного спектра (рис. 8) показал восстановление фракционного состава до контрольных значений, за исключением ФК, величина которой была выше на 22 % (р < 0,01). В то же время, при сравнении с группой гиперхолестеринового рациона отмечались достоверные различия по ряду показателей.

Сопоставляя полученные результаты и оценивая позитивный эффект применения экстракта из ламинарии, следует отметить его высокий мембранопротекгорный эффект в условиях гиперхолестеринового рациона.

Данный феномен объясняется тем, что молекулы полифенолов активируют 7а-холестерингидроксилазу, участвующую в окислении ХС в желчные кислоты, а также ЛХАТ (Гаскина и др., 1989), что обусловливает выведение холестерина из мембран и поступление в гепатоцит возросшего потока холестерина в этерифицированной форме в составе липопротеинов высокой плотности. По-видимому, эти механизмы лежат в основе гипохолестеринемического действия экстракта из ламинарии японской.

□ ГХС Ш ГХС+зкстракт ламинарии

*** ■п П _ Т7Т 1 ггщ ** *** 1,П ,

и у ЬГ' *** \Г ***

ТАГ сжк ЭЖК ЭХС ФХ ЛФХ СМ ФЭ ЛФЭ ФС ФИ ФК хс

Рис. 8. Влияние экстракта из ламинарии на лшшдный состав мембран эритроцитов крыс при гиперхолестеринемии.

Примечание: ТАГ - триацилглицерин, СЖК - свободные жирные кислоты, ЭЖК -эфиры жирных кислот, ХС - холестерин, ЭХС - эфиры холестерина, ФХ -фосфатидилхолин, ЛФХ - лизофосфатидилхолин, СМ - сфингомиелин, ФЭ -фосфатидилэтаноламин, ЛФЭ - лизофосфатидилэтаноламин, ФС - фосфатидилсерин, ФИ - фосфатидшшнозит, ФК - фосфатидная кислота. * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001.

ВЫВОДЫ

1. Совокупность изменений в липидном составе мембран эритроцитов при действии на крыс повреждающих факторов (стресс-вертикальная фиксация за дорзальную шейную складку, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестериновый рацион) имеет стереотипный характер (напряжение системы антиоксидантной защиты, усиление перекисного окисления липидов, увеличение размерных характеристик эритроцитов, изменение их осмотической резистентности, образование лизофракций фосфолипидов, увеличение содержания холестерина, триацилглицеринов), что позволяет рассматривать их как атрибут стрессорной реакции.

2. Наряду со снижением содержания количества структурных фосфолипидов (ФХ и ФЭ), происходит увеличение содержания СМ и лизофракций (ЛФХ и ЛФЭ). Перераспределение отдельных классов фосфолипидов внутри липидного бислоя эритроцитарной мембраны свидетельствует о формировании компенсаторной реакции в ответ на действие повреждающего фактора.

3. При стресс-вертикальной фиксации животных, интоксикации СС14, а также гиперхолестериновом рационе изменения в липидной составляющей мембран эритроцитов обусловливают увеличение их размера и ослабление осмотической резистентности.

4. В период депривации после действия на крыс интоксикации четыреххлористым углеродом восстановления исследованных физиолого-метаболических характеристик эритроцитов не происходит, что указывает на продолжающееся и углубляющееся состояние дестабилизации их мембранных структур, обусловленное сохранением свободнорадикальных процессов и активацией фосфолипаз.

5. Экстракт из ламинарии японской проявляет мембранопротекторные свойства в условиях воздействия мембраноповреждающих факторов у животных.

6. Экстракт из ламинарии японской нормализует показатели системы «перекисное окисление липидов-антиоксидантная защита» за счет собственной антиоксидантной активности, регулирует реакции этерификации холестерина и нормализуют соотношение фосфолипидных фракций, что обусловливает

восстановление размерных характеристик эритроцитов (средний диаметр и средний объем эритроцитов), повышение их эластических свойств и расширение границ осмотической устойчивости.

7. Экстракт из ламинарии в условиях стресс-вертикальной фиксации животных по своей восстанавливающей активности превосходит экстракт из элеутерококка по способности увеличивать в мембране эритроцитов эфиры жирных кислот и фосфатидную кислоту.

8. Экстракт из ламинарии в период депривации после интоксикации четыреххлористым углеродом превосходит полифенольный препарат «Легалон»™ по способности снижать напряжение системы антиоксидангной защиты и перекисного окисления липидов, нормализовать размерные характеристики эритроцитов, снижать холестерин, что обеспечивало восстановление порога осмотической устойчивости эритроцитов к гемолизирующему агенту.

9. Экстракт из ламинарии японской обладает гипохолестеринемическим эффектом в условиях гиперхолестеринового рациона, усиливает этерификацию холестерина и выведение его из мембран, нормализует соотношение лшшдных компонентов и восстанавливает осмотическую устойчивость эритроцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Физиологические параметры эритроцитов (средний диамеггр, средний объем и осмотическая резистентность) целесообразно использовать в клинической практике для оценки интенсивности стрессовых воздействий различной природы.

2. Использование определения фракций нейтральных липидов и фосфолипидов в мембране эритроцитов, а также показателей антиоксидантной защиты целесообразно для исследования физиологических механизмов нарушения структурной организации мембран при действии повреждающих факторов и механизмов восстановления при применении фармакологических препаратов.

3. Рекомендуется применение экстракта из ламинарии японской для коррекции нарушений липидного бислоя эритроцитарных мембран. Перспективным направлением является применение экстракта из ламинарии японской при воздействии вредных экологических и производственных факторов.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кушнерова Т.В., Кондратьева Е.В., Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Спрыгин В.Г., Лесникова Л.Н. Коррекция физиолого-метаболических характеристик эритроцитов при гиперхолестериновом рационе экстрактом из ламинарии японской II Тихоокеанский медицинский журнал. 2010. № 2. С. 36-38.

2. Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Спрыгин В.Г., Кушнерова Т.В., Хотимченко Ю.С., Кондратьева Е.В., Другова Л.А. Экстракт из бурой водоросли Laminaria japónica - перспективный стресс-протекторный препарат // Биология моря. 2010. Т. 36, № 3. С. 215-220.

3. Кушнерова Т.В., Фоменко С.Е., Кушнерова Н.Ф., Спрыгин В.Г., Лесникова Л.Н., Хотимченко Ю.С., Кондратьева Е.В. Антиоксидантные и мембранопротекгорные свойства экстракта из бурой водоросли Laminaria japónica //Биология моря. 2010. Т.36, № 5. С. 384-389.

4. Кондратьева Е.В., Кушнерова Т.В. Использование экстрактов из морских водорослей как мембранопротекгоров при стрессе // Актуальные проблемы технологии живых систем: Сб. мат. III Международной научно-технической конференции молодых ученых. 8-10 октября 2009 г., Владивосток. Владивосток: Изд-во ТГЭУ, 2009. С. 211-213.

5. Кушнерова Т. В., Кондратьева Е. В. Коррекция стрессовых нарушений мембран эритроцитов экстрактом из ламинарии японской // Биология -наука XXI века. 14-я международная Пущинская школа-конференция молодых ученых. 19-23 апреля 2010 г., Пущино: Сб. тезисов. Пущино, 2010. Т. 1. С. 151.

6. Кондратьева Е.В., Кушнерова Т.В. Гипохолестеринемические свойства экстракта из ламинарии японской // // Биология - наука XXI века. 14-я международная Пущинская школа-конференция молодых ученых. 19-23 апреля 2010 г., Пущино: Сб. тезисов. Пущино, 2010. Т. 1. С. 142.

7. Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Спрыгин В.Г., Лесникова Л.Н., Кушнерова Т.В., Кондратьева Е.В. Экстракт из ламинарии японской -профилактическое средство при гиперхолестеринемии // Дальневосточная весна -2010: Мат. 10-й международной научно-практической конференции (г. Комсомольск-на-Амуре, Россия, 20-21 мая 2010 г.). Комсомольск-на-Амуре, 2010. С. 438-440.

8. Фоменко С.Е., Кушнерова Н.Ф., Спрыгин В.Г., Кушнерова Т.В., Кондратьева Е.В, Сизова Л.А., Другова Е.С. Стресс-протекторные свойства экстракта из ламинарии японской (Laminaria japónica) // XVII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сб. мат. конгресса (тезисы докладов). 12-16 апреля 2010 г., Москва. Москва, 2010. С. 735.

Кондратьева Елена Викторовна

СТРЕССОРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ФИЗИО ЛОГО-МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК ЭРИТРОЦИТОВ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ЭКСТРАКТОМ ИЗ ЛАМИНАРИИ ЯПОНСКОЙ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кондратьева, Елена Викторовна

ВВЕДЕНИЕ 5 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Современные представления о структурно-метаболических повреждениях биомембран при действии стрессорных факторов различной природы

Глава 2. Ламинария японская {Laminaria japónica Aresch.) источник биологически активных веществ

2.1. Ботаническая характеристика

2.2. Химический состав ламинарии японской (Laminaria japónica Aresch.)

Глава 3. Фармакологические аспекты действия препаратов из морских водорослей и трав на организм животных и человека

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 4. Материалы и методы исследования

Глава 5. Влияние стресса (вертикальная фиксация за дорзальную шейную складку) на физиолого-метаболические характеристики эритроцитов крыс

Глава 6. Влияние интоксикации четыреххлористым углеродом и периода депривации на физиологические и структурные характеристики эритроцитов крыс

Глава 7. Изменение физиологических и структурных характеристик эритроцитов крыс при гиперхолестериновом рационе

Глава 8. Влияние экстракта из ламинарии японской на стресс-индуцированные изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов крыс

Глава 9. Влияние экстракта из ламинарии японской на изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов крыс в период депривации после интоксикации четыреххлористым углеродом

Глава 10. Влияние экстракта из ламинарии японской на физиологические и структурные характеристики эритроцитов крыс при гиперхолестериновом рационе

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Стрессорные изменения физиолого-метаболических характеристик эритроцитов и их коррекция экстрактом из ламинарии японской"

Актуальность проблемы. Физиолого-метаболические характеристики мембран эритроцитов являются тонким показателем, характеризующим состояние мембран других клеток органов и тканей на уровне целого организма (Эндакова и др., 2002). Интерес к исследованию липидной составляющей мембран эритроцитов и показателей их антиоксидантной защиты для оценки общего напряжения при стрессе возник после того, как было показано, что при многих стрессорных заболеваниях или болезнях адаптации (атеросклероз, язвы желудочно-кишечного тракта, хроническая усталость и др.) нарушения липидного гомеостаза проявляются в изменениях на уровне сывороточных липидов, а также в состоянии процессов липопероксидации (Ланкин и др., 2001, 2009). Вместе с тем изучению эритроцитов как модели для исследования стрессорной нагрузки на биомембраны посвящены единичные работы (Кушнерова, Лесникова, 2003; Лесникова, 2006; Кушнерова и др., 2008, 2010). Поэтому очевидна актуальность изучения взаимосвязи физиолого-метаболических нарушений эритроцитов при воздействии мембраноповреждающих стрессовых факторов, а также возможности их коррекции растительными препаратами.

Однако использование корней и семян приводит к катастрофическому снижению запасов этих растений. Следовательно, возникает необходимость поиска и изучения новых источников сырья, имеющегося на территории Российской Федерации, для получения препаратов со стресс-протекторными свойствами, в частности среди морских водорослей. Одним из сырьевых источников является ламинария японская (Laminaria japónica), в состав которой входят биологически активные соединения, такие как полисахариды, полифенолы, каротиноиды, пищевая клетчатка, белки, витамины, минералы и т.п. (Имбс и др., 2009; Kostetsky et al., 2004; Sanina et al, 2008). Полифенольные соединения (флоротаннины и их олигомерные и полимерные формы) представляют одну из наиболее значимых групп биологически активных веществ, характеризующих фармакологическую ценность водорослей. В связи с этим был выделен экстракт из ламинарии японской (Laminaria japónica), в состав которого входят полифенольные соединения в количестве 35 % (Спрыгин и др., 2009).

В настоящем исследовании анализируется действие мембраноповреждающих факторов (вертикальная фиксация крыс за дорзальную шейную складку, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестериновый рацион) на физиологические характеристики эритроцитов, систему показателей «перекисное окисление липидов -антиоксидантная защита» и липидную составляющую мембран эритроцитов, а также демонстрируется возможность коррекции наблюдаемых отклонений с помощью водно-спиртового экстракта из ламинарии японской.

Задачи исследования:

1. Изучить размерные характеристики эритроцитов крыс и осмотическую резистентность к гемолизирующему агенту при действии мембрано-повреждающих факторов (вертикальная фиксация за дорзальную шейную складку, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестериновый рацион).

2. Изучить липидную составляющую мембран эритроцитов (нейтральные и фосфолипидные фракции) и показатели антиоксидантной защиты при действии мембрано-повреждающих факторов (вертикальная фиксация за дорзальную шейную складку, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестериновый рацион).

5. Сравнить мембранопротекторные свойства экстракта из ламинарии японской и «Легалона»™ в условиях экспериментальной модели интоксикации четыреххлористым углеродом.

Научная новизна. Получены новые знания о характере нарушений процессов антиоксидантной защиты и перекисного окисления липидов при действии на организм повреждающих факторов (вертикальная фиксация, интоксикация СС14, гиперхолестериновый рацион).

Впервые выполнено системное исследование мембранопротекторных свойств водно-спиртового экстракта из ламинарии японской и получено их экспериментальное подтверждение. Показано, что экстракт из ламинарии японской нормализует показатели «перекисное окисление липидов-антиоксидантная защита» за счет собственной антиоксидантной активности, регулирует реакции этерификации холестерина и нормализуют соотношение фосфолипидных фракций, что обусловливает восстановление размерных характеристик эритроцитов, повышение их эластических свойств и расширение границ осмотической устойчивости.

Положения, выносимые на защиту:

1. Изменения размерных характеристик эритроцитов, соотношения нейтральных и фосфолипидных фракций в мембране эритроцитов, напряжение системы антиоксидантной защиты, активация перекисного окисления липидов носят неспецифический характер, что может рассматриваться как атрибут стрессорной реакции.

Апробация работы. Основные результаты работы представлены, доложены и обсуждены на III Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2009), XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010), 14-й Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2010), Международной научно-практической конференции

Дальневосточная весна —2010» (Комсомольск-на-Амуре, 2010).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Кондратьева, Елена Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Совокупность изменений в липидном составе мембран эритроцитов при действии на крыс повреждающих факторов (стресс-вертикальная фиксация за дорзальную шейную складку, интоксикация четыреххлористым углеродом, гиперхолестериновый рацион) имеет стереотипный характер (напряжение системы антиоксидантной защиты, усиление перекисного окисления липидов, увеличение размерных характеристик эритроцитов, изменение их осмотической резистентности, образование лизофракций фосфолипидов, увеличение холестерина, триацилглицеринов), что позволяет рассматривать их как атрибут стрессорной реакции.

2. Наряду со снижением концентраций структурных фосфолипидов (ФХ и ФЭ) происходит увеличение содержания СМ и лизофракций (ЛФХ и ЛФЭ). Перераспределение отдельных классов фосфолипидов внутри мембранного бислоя эритроцитарной мембраны свидетельствует о наличии структурно-функциональных нарушений при стрессе и формировании компенсаторной реакции в ответ на действие повреждающего фактора.

3. При стресс-вертикальной фиксации животных, при интоксикации ССЦ, а также при гиперхолестериновом рационе, изменения в липидной составляющей мембран эритроцитов обусловливают увеличение их размера и ослабление осмотической резистентности.

4. В период депривации после действия на крыс интоксикации четыреххлористым углеродом восстановления исследованных физиолого-метаболических характеристик эритроцитов не происходило, что указывает на продолжающееся и углубляющееся состояние дестабилизации их мембранных структур, обусловленное сохранением свободнорадикальных процессов и активацией фосфолипаз.

6. Экстракт из ламинарии нормализует показатели системы «перекисное окисление липидов-антиоксидантная защита» за счет собственной антиоксидантной активности, регулирует реакции этерификации холестерина и нормализуют соотношение фосфолипидных фракций, что обусловливает восстановление размерных характеристик эритроцитов (средний диаметр и средний объем эритроцитов), повышение их эластических свойств и расширение границ осмотической устойчивости.

8. Экстракт из ламинарии в период депривации после интоксикации четыреххлористым углеродом превосходит полифенольный препарат «Легалон»™ по способности снижать напряжение системы антиоксидантной защиты и перекисного окисления липидов, нормализовать размерные характеристики эритроцитов, снижать холестерин, что обеспечивало восстановление порога осмотической устойчивости эритроцитов к гемолизирующему агенту.

9. Экстракт из ламинарии японской обладает гипохолестеринемическим эффектом в условиях гиперхолестеринового рациона, усиливает этерификацию холестерина и выведение его из мембран, нормализует соотношение липидных компонентов и восстанавливает осмотическую устойчивость эритроцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Физиологические параметры эритроцитов (средний диаметр, средний объем и осмотическая резистентность) целесообразно использовать в клинической практике для оценки интенсивности стрессовых воздействий различной природы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кондратьева, Елена Викторовна, Б.м.

1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. Л.: Наука, 1985. - 230 с.

2. Агаркова В.В. Биохимические основы биотических взаимоотношений серого морского ежа Strongylocentrotus intermedius и бурой водоросли Laminaria japónica. Автореф. дисс. канд. биол. наук. — Владивосток. 2007.

3. Аминина Н.М., Вишневская Т.Н., Гурулева О.Н., Ковековдова Л.Т. Состав и возможности использования бурых водорослей дальневосточных морей // Вестник ДВО РАН. 2007. № 6. С. 123-130.

4. Антипова Л.В., Толпыгина И.Н., Батищев В.В., Дворянинова О.П. Новые тенденции в технологии специальных продуктов питания на основе гидробионтов // Успехи современного естествознания. 2002. № 6. С. 76-79.

5. Арчаков А.И., Карузина И.И. Молекулярные механизмы взаимодействия четыреххлористого углерода с мембранами эндоплазматического ретикулума печени. // В кн.: Успехи гепатологии. Рига, 1973, вып. 4. С. 39-59.

6. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. М., 1976.340 с.

7. Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г., Кудряшов Ю.Б. Перекисное окисление и стресс. СПб.: Наука, 1992. 148 с.

8. Барабой В.А., Хомчук Ю.В. Механизм антистрессового и противолучевого действия растительных фенольных соединений // Укр. биохим. журн. 1998. Т. 70, № 6. С. 13-23.

9. Беседнова H.H., Запорожец Т.С. Фундаментальные и прикладные аспекты изучения биополимеров из гидробионтов тихого океана // Бюлл. Сибирского отделения РАМН. 2008. № 4. С. 16-21.

10. B.Г. Беспалова, В.Б. Некрасовой. СПб.: Эскулап, 2000. 468 с.

11. Билан М.И., Захарова А.Н., Грачев A.A. и др. Полисахариды водорослей. Фукоидан из тихоокеанской бурой водоросли Analipus japonicus (Harv.) Winne (Ectocarpales, Scytosiphonaceae) // Биоорг. химия. 2007. Т. 33, № 1. C.44-53.

12. Брехман И.И. Элеутерококк. JL: Наука, 1968. - 186 с.

13. Бунятян Н.Д., Герасимова O.A., Сахарова Т.С., Яковлева JI.B. Природные антиоксиданты — как гепатопротекторы // Экспер. клин, фармакол. 1999. Т. 62, № 2. С. 64-67.

14. Васьковский В.Е. Липиды // Сорос, образоват. журн. 1997. № 3.1. C. 32-37.

15. Венгеровский А.И., Маркова И.В., Саратиков A.C. Доклиническое изучение гепатозащитных средств // Ведомости фарм. комитета. 1999. № 2. С. 9-12.

16. Венгеровский А.И., Головина Е.Л., Чучалин B.C., Саратиков JT.C. Влияние энтеросорбентов на терапевтические эффекты гепатопротектора Максара при экспериментальном токсическом гепатите // Хим.-фарм. журн. 2000. Т. 34, №5. С. 9-11.

17. Венгеровский А.И., Головина E.JL, Чучалин B.C., Саратиков JI.C. Влияние энтеросорбентов на метаболические эффекты гепатопротектора Лохеина при экспериментальном токсическом гепатите // Вопр. биол. мед. и фарм. хим. 2000а. № 4. С. 40-43.

18. Венгеровский А.И., Хазанов В.А. Влияние силимарина и его комбинации с янтарной кислотой на биоэнергетику головного мозга при экспериментальном ингибировании ß-окисления жирных кислот // Экспер. клин, фармакол. 2007. Т. 70, № 2. С. 51-55.

19. Вишневская Т.И., Аминина Н.М., Гурулева О.Н. Разработка технологии йодсодержащих продуктов из Laminaria japónica II Известия ТИНРО-Центра. 2001. Т. 129. С. 2-8.

20. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.,: Наука, 1972. 259 с.

21. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Сорос, образоват. журн. 2000. № 12. С. 13-19.

22. Гершанович M.JL, Беспалов В.Г., Александров В.А. и др. Клиническое изучение таблетированной пищевой добавки кламин в онкологии. СПб.: Эскулап, 1996. 88 с.

23. Голиков А.Н., Жирмунский A.B., Краснов Е.В. и др. Животные и растения залива Петра Великого. JL: «Наука», 1976. 363 с.

24. Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д., Шубин Н.Г. Гематология животных. Томск, 1973. 100 с.

25. Гончаренко М.С., Латинова A.M. Метод оценки перекисного окисления липидов // Лаб. дело. 1985. № 1. С. 60-61.

26. Гордиенко А. Д. Гепатопртекторный механизм действия флавоноидов // Фармация. 1990. Т. 39, № 3. С. 75-78.

27. Горохова В.Г., Кузнецова Э.Э., Горохов А.Г. и др. Изучение свободнорадикальных процессов в эритроцитах больных крыс. // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2005. № 1. С. 56-57.

28. Горькавая А.Ю., Маркина Л.Д., Стрелкова Ю.В. и др. Дифференцированное влияние экстракта элеутерококка на умственную работоспособность мужчин и женщин // Вестник ДВО РАН. № 6. 2007. С. 7378.

29. Дардымов И.В. Механизмы действия препаратов женьшеня и элеутерококка. Автореф. дисс. доктора мед. наук. Ленинград, 1987. 46 с.

30. Енина О. В., Совершаева С. Л., Макарова С. Ф. Физиологические аспекты антиэкотоксических эффектов препаратов на основе морских водорослей // Экология человека. 2007. Т. 10. С. 3-9.

31. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.Е. Лабораторные животные Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев: Вища школа, 1974. 304 с.

32. Запорожец Т.С., Иванушко Л. А., Звягинцева Т.Н. и др. Цитокининдуцирующая активность биополимеров морских гидробионтов // Мед. иммунол. 2004. Т. 6, № 1-2. С. 89-96.

33. Запорожец Т.С., Кузнецова Т.А., Смолина Т.П. и др. Иммунотропные и антикоагулянтные свойства фукоидана из бурой водоросли fucus evanescens: перспективы применения в медицине // Журн. Микробиол., эпидемиол. иммунобиол. 2006. № 3. С. 54-58.

34. Звягинцева Т.Н., Шевченко М.Н., Кусайкин М.И. Бурые водоросли и сохранение среды обитания морских организмов // Подводные технологии и мир океана. 2006. № 3. С. 44-49.

35. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. М.: Наука / Интерпериодика, 2001. 343 с.

36. Зинчук В.В. Деформируемость эритроцитов: Физиологические аспекты // Успехи физиол. наук. 2001. Т. 32, № 3. С. 66-78.

37. Иржак Л.И. Состав и функции крови // Соровский образовательный журнал. 2001. № 2. С. 11-19.

38. Кейтс М. Техника липидологии. М.: Мир, 1975. 221 с.

39. Клочков A.A., Клочкова Н.Г. Возможности использования камчатских бурых водорослей для профилактики и лечения онкологических заболеваний //Вопр. рыболовства. 2008. Т. 9, № 1-3. С. 179-192.

40. Коленченко Е. А., Сонина JI. Н., Хотимченко Ю. С. Сравнительная оценка антиоксидантной активности низкоэтерифицированного пектина из морской травы Zostera marina и препаратов-антиоксидантов in vitro // Биология моря. 2005. Т.31, №5. С. 380383.

41. Конев C.B. Структурная лабильность биологических мембран. -Минск: Наука и техника, 1987. 240 с.

42. Коровкина Н.В., Богданович Н.И., Кутакова H.A. Исследование состава бурых водорослей Белого моря с целью дальнейшей переработки // Химия растит, сырья. 2007. № 1. С. 59-64.

43. Коровкина Н.В., Кутакова H.A., Богданович Н.И. Экстракты бурых водорослей для обогащения рациона питания природными минеральными веществами // Химия растит.о сырья. 2008. № 4. С. 167-170.

44. Костецкий Э.Я., Кушнерова Н.Ф. Микрометод определения содержания общих липидов, общего холестерина и липидного фосфора в липидном экстракте из плазмы крови // Рац. предложение № 418/60 от 16.11.78 г., утвержденное БРИЗ ВГМИ.

45. Костюк В.А., Потапович А.И., Терещенко С.М., Афанасьев И.Б. Антиокислительная активность флавоноидов в различных системах перекисного окисления липидов // Биохимия. 1988. Т. 53, Вып. 8. С. 13651368.

46. Костюк В.А., Потапович A.A. Биорадикалы и биоантиоксиданты. Минск: БГУ. 2004. 174 с.

47. Крылова С.Г., Фомина Т.И., Ефимова JI.A. и др. Противоязвенное действие пектата кальция на модели хронического язвенного процесса слизистой желудка у крыс // Экспер. клин, фармакол. 2009. Т. 72, № 2. С. 3538.

48. Кузнецова Т.А. Применение фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза на модели эндотоксинемии // Бюлл. экспер. биол. и мед. 2009. № 1. С. 71-74.

49. Кузнецова Т. А., Беседнова H.H., Урванцева A.M. и др. Сравнительное исследование биологической активности фукоиданов из бурых водорослей // Вестник ДВО РАН. 2006. № 6. С. 105-110.

50. Кушнерова Н.Ф., Спрыгин В.Г., Фоменко С.Е. и др. Эффективность применения растительного препарата Диприм для восстановления функционального состояния печени после поражения этиловым спиртом // Гиг. и сан. 2002. № 1. С. 56-60.

51. Кушнерова Н.Ф., Лесникова Л.Н. Влияние хаурантина на процессы восстановления липидной составляющей мембран эритроцитов после поражения этиловым спиртом // Наркология. 2003. № 5. С. 25-28.

52. Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Рахманин Ю.А. Профилактика стрессовых состояний у студентов очной формы обучения // Гиг. и сан. 2007. № 4. С. 47-49.

53. Кушнерова Т.В. Влияние экстракта из отжима калины Саржента и гребней винограда амурского на физиологические и структурные характеристики эритроцитов. Автореф. дис. канд. мед. наук. Владивосток. 2007а. 24 с.

54. Кушнерова Н.Ф., Лесникова Л.Н., Кушнерова Т.В. Изменения физиологических и структурных характеристик эритроцитов у лоцманов-операторов // Бюлл. физиол. и патол. дыхания. 2008. Вып. 29. С. 34-38.

55. Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Кушнерова Т.В., Другова Е.С. Влияние ацетона на физиологические и биохимические показатели эритроцитов крыс и их коррекция экстрактом из калины (Viburnum sargentii) // Наркология. 2010. № 2. С. 48-54.

56. Лазарева Г.А., Бровкина И.Л., Прокопенко Л.Г. Эссенциале и рибоксин как индукторы иммуномодулирующей активности стромы эритроцитов в норме и при токсических формах анемии. // Экспер. и клин, фармакол. 2004. Т. 67, № 5. С. 23-27.

57. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях // Пособие для врачей. Изд. 2-е, испр. и доп. М.: РКНПК МЗ РФ, 2001. 78 с.

58. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Кумскова Е.М. и др. Карбонильный стресс и модификация липопротеидов низкой плотности: патофизиологическое и диагностическое значение // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2009. № 4-5. С. 99-101.

59. Лапшина Л.А., Реунов А.В., Нагорская В.П. и др. Действие фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens на формирование втм-специфических включений в клетках листьев табака // Физиол. растений. 2007. Т.54, № 1.С. 127-130.

60. Левачев М.М. Пищевые детерминанты липидного состава биологических мембран//Вестник АМН СССР. 1986. № 11. С. 15-21.

61. Лесникова Л.Н. Стрессорные изменения физиологических свойств эритроцитов и их коррекция с помощью экстракта из туники асцидии (Halocynthia aurantium). Автореф. дис. канд. биол. наук. Владивосток, 2006. 24 с.

62. Лизенко Е.И., Регеранд Т.И., Лизенко М.В. и др. Сравнительное исследование уровня структурных липидов в сыворотке и липопротеидах крови человека и некоторых животных // Вопр. биол. мед. и фармацевт, химии. 2004. № 1. С. 32-37.

63. Лоенко Ю.Н. Биологическая активность и механизм действия биополимеров из морских организмов. Автореф. Дисс. доктора биол. наук. Владивосток, 1999. 48 с.

64. Лоенко Ю.Н., Артюков A.A., Козловская Э.П. и др. Зостерин. Владивосток: Дальнаука, 1997. 212 с.

65. Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.А., Коган Э.М. Холестериноз. М.: Медицина, 1983. 352 с.

66. Макаренкова И.Д., Компанец Г.Г., Беседнова H.H. и др. Ингибирующее действие фукоиданов на адсорбцию вируса хантаан на модели перитонеальных макрофагов in vitro // Вопр. вирусологии. 2008. Т.53, №3. С. 12-15.

67. Макеева A.B., Попова Т.Н., Матасова Л.В. Действие тиоктовой кислоты на функционирование антиоксилантной глутатионзависимой системы при токсическом гепатите у крыс // Биомед. хим. 2007. Т. 53, Вып. 2. С. 18-189.

68. Максема И.Г., Макаренкова И.Д. Противовирусная активность фукоиданов природного происхождения при экспериментальной инфекции, вызванной хантавирусом // Тихоокеанский мед. журн. 2008. № 2. С. 86-89.

69. Мари Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. М.: Мир. 1993. Т. 1. 381 с.

70. Мгедлишвили Г.И. Значение проблемы микрореологии крови для патологии // Пат. физиол. и эксп. терап. 1986. № 2. С. 3-11.

71. Меерсон Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и стресс-лимитирующие системы организма / В кн.: Физиология адаптационных процессов. Под ред. Газенко О.Г., Меерсона Ф.З. М., 1986. С. 521-631.

72. Меерсон Ф.З. Общий механизм адаптации и роль в нем стресс-реакции, основные стадии процесса // В кн.: Физиология адаптационных процессов. Под ред. Газенко О.Г., Меерсона Ф.З. М., 1986. С. 77-123.

73. Меныцикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К. и др. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. М.: Слово, 2006. 556 с.

74. Меныцикова Е. Б., Зенков Н. К., Ланкин В. 3. и др. Окислительный стресс: патологические состояния и заболевания. Новосибирск: APTA, 2008. 284 с.

75. Методические указания. 2.3.2. Пищевые продукты и пищевые добавки. Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище. М.: Минздрав России. 1999. 90 с.

76. Мискевич Д.А., Петушок Н.Э., Лелевич В.В. и др. Состояние свободнорадикальных процессов в динамике развития хронической морфиновой интоксикации // Биомед. хим. 2007. Т. 53, Вып. 2. С. 190-195.

77. Надиров Н.К., Ленская Е.Г., Токмурзин Ж.У. и др. Влияние различных видов алиментарного дисбаланса на степень перекисного окисления и вязкость мембранных липидов // Вопр. питания. 1986. № 1. С. 47-51.

78. Некрасова В.Б., Беспалов В.Г., Никитина Т.В., Курныгина В.Т. Разработка и изучение антиканцерогенной активности препарата

79. Альгиклам» второго поколения препарата «Кламин» // В кн.: Изучение и применение лечебно-профилактических препаратов на основе природных биологически активных веществ. Под ред. В.Г. Беспалова, В.Б. Некрасовой. СПб.: Эскулап, 2000. С. 174-180.

80. Нехорошев М. В., Ревина А. А., Апрышко Г. Н. Черноморские организмы источник потенциальных противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевт, журн. 2004. Т. 3, № 2. С. 26.

81. Никифорова A.A. Лецитин: холестерин-ацилтрансфераза плазмы крови // В ich.: Биохимия липидов и их роль в обмене веществ / Под ред. акад. С.Е. Северина. М.: Наука, 1981. С. 95-105.

82. Новгородцева Т.П. Липиды эритроцитов крови при формировании наследуемой кардиальной патологии: Автореф. дис. докт. биол. наук. Владивосток. 1999. 47 с.

83. Новгородцева Т.П., Эндакова Э.А., Козычева Е.В., Китайская Л.С. Модификация липидов эритроцитарных мембран больных сердечнососудистой патологией в процессе комплексной бальнеотерапии // Вопр. курорт, физиотер. и леч. физкультуры. 1999. № 1. С. 12-15.

84. Новгородцева Т.П., Эндакова Э.А., Янькова В.И. Руководство по методам исследования параметров системы "Перекисное окисление липидов антиоксидантная защита" в биологических жидкостях. Владивосток: Изд-во Дальневост. ун-та, 2003. С. 45-48.

85. Панин Л.Е. Биохимические механизмы стресса. Новосибирск: Наука, 1983. 233 с.

86. Патент № 2034560 (РФ). Средство для профилактики рака «Кламин». / В.Б. Некрасова, Т.В. Никитина, В.Т. Курныгина, А.И. Фрагина, В.Г. Беспалов, В.А. Вайнштейн, В.В. Иванова. Опубл. В Б.И., 1995. № 13.

87. Патент №2041656 (РФ). Способ получения пищевого полуфабриката из ламинарии японской / Подкорытова A.B., Аминина Н.М., Ковалева Е.А. С1, А 23L 17337. 1995. №23.

88. Патент № 2085208 (РФ). Средство радиационной защиты организма. / Т.А. Ермакова, В.Б. Некрасова, Е.В. Иванов, Т.В. Пономарева, Г.Н. Меркушев, Т.В. Никитина, В.Т. Курныгина. Опубл. В Б.И., 1997. № 21.

89. Подкорытова A.B., Вишневская Т.И. Морские водоросли -естественный источник йода // Парафармацевтика. 2003. Сообщ. 1. № 2. С. 22-23. Сообщ. 2. № 3. С. 18-20.

90. Покровский A.A. Биохимические методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1969. 625 с.

91. Покровский A.A., Левачев М.М., Львович H.A. и др. Влияние качественных особенностей жирового компонента рациона на жирнокислотный состав мембран эритроцитов и тромбоцитов у здоровых людей //Вопр. питания. 1977. № 3. С. 12-17.

92. Проказова Н.В., Звездина Н.Д., Коротаева A.A. Влияние лизофосфатидилхолина на передачу трансмембранного сигнала внутрь клетки//Биохимия. 1998. Т. 63. С. 38-46.

93. Пятчина О.В., Одинцова М.В., Хотимченко Ю.С. Клинико-лабораторная оценка эффективности использования пектина у больных с хронической почечной недостаточностью // Вопр. питания. 2003. Т. 72, № 2. С. 43-45.

94. Романовская В.Н., Старосельская А.Н., Каплан М.А., Зяблицкий В.М. Экспериментальное изучение эффективности фотодинамической терапии саркомы м-1 с помощью Laminaria japónica и Fucus sp. II Вопр. онкологии. 2008. T. 54, № 5. С. 623-624.

95. Савченко О.В., Хотимченко Ю.С. Энтеросорбция свинца детоксалом у детей // Педиатрия. 2002. № 1. С. 76.80.

96. Саратиков A.C., Литвиненко Ю.А., Буркова В.Н. и др. Антиоксидантная и гепатопротекторная активность комбинаций лохеина и эплира // Хим.-фарм. журн. 2001. Т. 35, № 6. С. 48-50.

97. Саратиков A.C., Чучалин B.C., Ратькин A.B. и др. Гепатопротекторные свойства полифенольных комплексов из древесины иклеточной культуры маакии амурской // Экспер. клин, фармакол. 2005. Т. 68, №2. С. 51-54.

98. Сафина И.Н. Использование морских бурых водорослей ундарии перистонадрезной и костарии ребристой в технологии салатов и напитков: Автореф. дисс. канд. техн. наук. Владивосток, 2007. 24 с.

99. Сгребнева М.Н. Активация полисахаридами зостерином и хитозаном белоксинтетической функции печени // Вестник ДВО РАН. 2006. №5. С. 101-104.

100. Сгребнева М.Н., Тюпелеев П.А., Хасина Э.И. Влияние пектина зостерина на метаболизм в печени в условиях свинцовой интоксикации // Микроэлементы в медицине. 2004. Т. 5, вып. 4. С. 124-126.

101. Селиванова О.Н., Жигадлова Г.Г., Хэнсен Г.И. Пересмотр систематики водорослей порядка Laminariales (Phaeophyta) из Дальневосточных морей России на основании молекулярно-генетических данных//Биология моря. 2007. Т.ЗЗ №5. С. 329-340.

102. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М.: Медгиз, 1960.254 с.

103. Сергущенко И.С., Ковалев В.В., Бедняк А.Е., Хотимченко C.B. Сравнительная оценка металлсвязывающей активности низкоэтерифицированного пектина из морской травы Zostera marina и других сорбентов // Биология моря. 2004. Т. 30. № 1. С. 83-85.

104. Силуянова С.Н., Андрианова JI.E., Лесничук С.А. Печень. Обезвреживание токсических веществ // Вопр. биол. мед. и фармацевтич. химии. 2002. № 3. С. 50-56.

105. Сливкин А.И. Полиурониды. Структура, свойства, применение (обзор) // Вестник ВГУ. Серия химия, биология. 2000. №1. С. 30-46.

106. Сонина Л.Н., Хотимченко М.Ю. Эффективность пектина, выделенного из морской травы Zostera marina, при поражении печени свинцом в эксперименте // Биология моря. 2007. Т.ЗЗ, №3. С. 240-241.

107. Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф. Метод оценки и стандартизации олигомерных проантоцианидиновых комплексов, полученных из различных видов растительного сырья // Хим.-фарм. журн. 2002. Т. 36, № 3. С. 31-35.

108. Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф., Гордейчук Т.Н., Фоменко С.Е. Стресс-протективное действие диприма // Экспер. клин, фармакол. 2002. Т. 65, № 4. С. 56-58.

109. Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф., Рахманин Ю.А. Антиоксидантное действие олигомерных проантоцианидинов, выделенных из калины, при поражении печени четыреххлористым углеродом и профилактике его токсического эффекта // Гиг. и сан. 2003. № 3. С. 57-60.

110. Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е. и др. Гепатопротекторная активность экстракта из бурой водоросли Laminaria Japónica II Бюллетень Московского общества испытателей природы. Отдел биологический. 2009. Т. 114, № 3, ч. 2. С. 380-383.

111. Сторожок С.А., Панченко Л.Ф., Филиппович Ю.Д., Глушков B.C. Изменения физико-химических свойств биологических мембран при развитии толерантности к этанолу // Вопр. мед. хим. 2001. № 2. С. 47-53.

112. Титов A.M. Морские водоросли уникальное сырьё для изготовления лекарственных препаратов и БАД. // Рынок БАД. 2001. № 2.

113. Титов A.M. Целительные свойства морских водорослей. Спб.: Издательский дом «Нева», 2004. 128 с.

114. Урванцева A.M., Бакунина И.Ю., Ким Н.Ю. и др. Выделение очищенного фукоидана из природного комплекса с полифенолами и его характеристика//Химия растит, сырья. 2004. 3. С. 15-24.

115. Усов А.И., Билан М.И. Фукоиданы сульфатированные полисахариды бурых водорослей // Успехи химии. 2009. Т. 78, № 8. С. 846862.

116. Хасина Э.И. Влияние экстракта элеутерококка на реадаптацию крыс после 2-суточной гипокинезии. // Новые данные об элеутерококке : Материалы Второго междунар. симпоз. по элеутерококку. Москва, 1984 г. Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1986. С. 110-113.

117. Хасина Э.И., Бездетко Г.Н., Янькова В.И. Протективное действие зостерина при экспериментальном токсическом поражении печени // Бюл. СО РАМН. 1998. № 1.С. 51-55.

118. Хотимченко C.B. Липиды морских водорослей макрофитов и трав. Структура, распределение, анализ. Владивосток: Дальнаука, 2003. 234 с.

119. Хотимченко C.B., Гусарова И.С. Красные водоросли залива Петра Великого как источник арахидоновой и эйкозапентаеновой кислот // Биология моря. 2004. Т. 30, № 3. С. 215-218.

120. Хотимченко Ю.С., Ермак И.М., Бедняк А.Е. и др. Фармакология некрахмальных полисахаридов // Вестник ДВО РАН. 2005. № 1. С. 72-82.

121. Хотимченко Ю.С., Хасина Э.И., Ковалев В.В. и др. Эффективность пищевых некрахмальных полисахаридов при экспериментальном токсическом гепатите // Вопр. питания. 2000. Т. 69, № 1. С. 22-26.

122. Хотимченко Ю.С., Хасина Э.И., Шевцова О.И. и др. Лечебное действие полисахаридов из морских гидробионтов при экспериментальном токсическом гепатите // Дальневост. мед. журн. 1997. № 4. С. 58-59.

123. Черников О.В., Чикаловец И.В., Молчанова В.И. и др. Водоросли залива Петра Великого Японского моря как источник лектинов // Биология моря. 2007. Т. 33, № 5. С. 379-381.

124. Чухно Т. Лекарственные растения. Иллюстрированный энциклопедический словарь. М., «Эксмо», 2007. 768 с.

125. Шахматов И.И., Бондарчук Ю.А., Вдовин В.М. и др. Влияние элеутерококка на систему гемостаза у иммобилизированных крыс // Экспер. клин, фармакол. 2007. Т. 70, № 2. С. 45-47.

126. Шевченко О.Г., Шишкина JI.H., Кудряшева А.Г. Влияние попопуляционных факторов на состав фосфолипидов различных тканей полевки-экономки Microtus oeconomus природных популяций // Эвол. биохим. и физиол. 2002. Т. 38, № 2. С. 131-135.

127. Шевченко Н.М., Анастюк С.Д., Герасименко Н.И. и др. Полисахаридный и липидный состав бурой водоросли Laminaria gurjanovae II Биоорг. химия. 2007. Т. 33, № 1. С. 96-107.

128. Шретер А.И. Целебные растения Дальнего Востока и их применение. Владивосток, ИПК «Дальпресс», 2000. — 144 с.

129. Эндакова Э.А., Новгородцева Т.П., Светашев В.И. Модификация состава жирных кислот крови при сердечно-сосудистых заболеваниях. Владивосток: Дальнаука, 2002. 296 с.

130. Эндрю Б.Л. Экспериментальная физиология. М.: Мир, 1972.324 с.

131. Acharya М.М., Katyare S.S. Structural and functional alterations in mitochondrial membrane in picrotoxin-induced epileptic rat brain // Exp. Neurol. 2005. V. 192, N. 1.Р. 79-88.

132. Amenta J.S. A rapid chemical method for quantification of lipids separated by thin-layer chromatography // J. Lipid Res. 1964. V. 5, N. 2. P. 270272.

133. Andersen O.M., Markham K.R. Flavonoids: chemistry, biochemistry and applications. 2006. 1237 p.

134. Ansell R.J., Lowe C.R. Artificial redox coenzymes: biomimetic analogues of NAD+//Appl. Microbiol. Biot. 1999. V. 51. P. 703-710.

135. Atlas R.O., Lemus J., Reed J. et al. Second trimester abortion using prostaglandin E2 suppositories with or without intracervical Laminaria japonica: a randomized study// Obstet. Gynecol. 1998. V. 92, N 3. P. 398-402.

136. Berson A., Fau D., Formacciari R. et al. Mechanism for experimental buprenorphine hepatotoxicity: Major role of mitochondrial dysfunction versus metabolic activation // Hepatology. 2001. V. 34. P. 261-269.

137. Berteau O., Mulloy B. Sulfated fucans, fresh perspectives: structures, functions, and biological properties of sulfated fucans and overview of enzymes active toward this class of polysaccharide // Glycobiology. 2003. V. 13, N 6. P. 2940.

138. Boonstra J., Post J.A. Molecular events associated with reactive oxygen species and cell cycle progression in mammalian cells // Gene. 2004. V. 337. P. 1-13.

139. Brand M.D., Affourtit C., Esteves T.C. et al. Mitochondrial superoxide: production, biological effects, and activation of uncoupling proteins // Free Radical. Bio. Med. 2004. V. 37. P. 755-767.

140. Bravo L. Ph. D. Polyphenols: chemistry, dietary sources, metabolism, and nutritional significance //Nutr. Rev. 1998. V. 56, N. 11. P. 317-333.

141. Broncel M., Chojnowska-Jezierska J., Koter-Mikhalak M., Franiak I. Erythrocyte fluidity in patients with hyperlipidemia during statins therapy // Pol. Arch. Med. Wein. 2005. V. 113,N. 6. P. 531-537.

142. Brown J.E., Khodr H., Hider R.C., Rice-Evans C.A. Structural04dependence of flavonoid interactions with Cu ions: implications for their antioxidant properties // Biochem. J. 1998. V. 330. P. 1173-1178.

143. Byon Y.Y., Kim M.H., Yoo E.S. et al. Radioprotective effects of fucoidan on bone marrow cells: improvement of the cell survival and immunoreactivity // J. Vet. Sci. 2009. V. 9, N 4. P. 359-365.

144. Cadenas E., Davies K.J.A. Mitochondrial free radical generation, oxidative stress, and aging // Free Radical. Bio. Med. 2000. V. 29. P. 222-230.

145. Caro A.A., Cederbaum A.I. Oxidative stress, toxicology, and pharmacology of CYP2E1 // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2004. V. 44. P. 2742.

146. Carrasco M.P., Segovia J.L., Marco C. Incorporation of exogenous precursors into neutral lipids and phospholipids in rat hepatocytes: effect of ethanol in vitro // Biochem. Pharmacol. 1998. V. 56, N. 12. P. 1639-1644.

147. Chapman D. Biomembrane structure and function: recent studies and new techniques//Parasitology. 1988. V. 96. Suppl: SI 1-23.

148. Chapman D., Haris P.I. Biomembrane structures. Fourier transform infrared spectroscopy and biomembrane technology // Biochem. Soc. T. 1989. V. 17, N. 6. P. 951-953.

149. Cheng I.F., Breen K. On the ability of four flavonoids, baicalein, luteolin, naringenin, and quercetin, to suppress the Fenton reaction of the iron-ATP complex//Biometals. 2000. V. 13. P. 77-83.

150. Chkhikvishvili I.D., Ramazanov Z.M. Phenolic substances of brown algae and their antioxidant activity // Appl. Biochem. Microbiol. 2000. V. 36, N 3. P. 289-291.

151. Closa D., Torres M., Hotter G. et al. Prostanoids and free radicals in Cl4C-induced hepatotoxicity in rats: effect of astilbin // Prostaglandins, Leukotrienes and Essential Fatty Acids. 1997. V. 56, N. 4. P. 331-334.

152. Cooper R.A. Lipids of human red cell membrane: normal composition and variability in disease // Semin. Hematol. 1970. V. 7, N. 3. P. 296-322.

153. Crocenzi F.F., Pellegrino J.M., Pozzi E.J.S. et al. Effect of silymarin on biliary bile salt secretion in the rat // Biochem. Pharmacol. 2000. V. 59. P. 1015-1020.

154. Edwards K.F., Pfister C.A., Van Alstyne K.L. Nitrogen content in brown alga Fucus gardneri and its relation to light, herbivory and wave exposure // J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 2006. N 336. P. 99-109.

155. Ercan M., Konukoglu D., Erdem T., Onen S. The effects of cholesterol levels on hemorheological parameters in diabetic patients // Clin. Hemorheol. Micro. 2002. V. 26, N. 4. P. 257-263.

156. Fetterman J.W., Zdanowicz M.M. Therapeutic potential of n-3 polyunsaturated fatty acids in disease // Am. J. Health-Syst. Ph : AJHP : official journal of the American Society of Health-System Pharmacists. 2009. V. 66, N 13. P. 1169-1179.

157. Filippov A., Oradd G., Lindblom G. The effect of cholesterol on the lateral diffusion of phospholipids in oriented bilayers // Biophys J. 2003. V. 84, N. 5. P. 3079-3086.

158. Folch J., Less M., Sloane-Stanley G.H. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissue // Biol. Chem. 1957. V. 226. P. 497-509.

159. Fukuta K., Nakamura T. Induction of hepatocyte growth factor by fucoidan and fucoidan-derived oligosaccharides // J. Pharm. Pharmacol. 2008. V. 60, N4. P. 499-503.

160. Hailstones D., Sleer L., Parton R.G. et al. Regulation of caveolin and caveolae by cholesterol in MDCK cells // Lipid Res. 1998. V. 39. P. 369-379.

161. Hay M.E. Marine chemical ecology. Chemical signals and cues structure marine populations, communities and ecosystems. // ARI. 2008. N 9. P. 193-212.

162. Hayashi S., Itoh A., Isoda K. et al. Fucoidan partly prevents CC14-induced liver fibrosis // Eur. J. Pharmacol. 2008. V. 580, N 3. P. 380-384.

163. Hogberg J. Lipid peroxidation of rat liver microsomes. Its effect on the microsomal membrane and some membrane bound microsomal enzymes // Eur. J. Biochem. 1973. V. 37. N 1. P. 51-59.

164. Hollman P., Arts I.CW. Flavonols, flavones and flavanols-nature, occurrence and dietary burden // J. Sci. Food Agr. 2000. V. 80. P. 1081-1093.

165. Holtkamp A., Kelly S., Ulber R., Lang S. Fucoidans and fucoidanases-focus on techniques for molecular structure elucidation and modification of marine polysaccharides // Appl. Microbiol. Biot. 2008. V.82, N 1. P. 1-11.

166. Hou X., Yan X., Chai C. Chemical species of iodine in some seaweeds. Iodinebound biological macromolecules // J. Radioanal. Nucl. Chem. 2000. V. 245, N 3. P. 461-467.

167. Hurrell R.F. Bioavailability of iodine // Eur. J. Clin. Nutr. 1997. V. 51. P. 9-12.

168. Jaeschke H., Gores G.J., Cederbaum A.I. et al. Mechanisms of hepatotoxity. // Toxicol. Sci. 2002. V. 65. P. 166-176.

169. Jiao H., Wang S.Y. Correlation of antioxidant capacities to oxygen radical scavenging enzyme activities in blackberry // J. Agric. Chem. 2000. V. 48, N. 11. P. 5672-5676.

170. Johnson E., Bogwald J., Seljelid R. Evidense that agarose must be internalized to simulate mouse macrophages in vitro // Scand. J. Immunol. 1982. V. 16, N6. P. 525-530.

171. Kabarowski H.S., Xu Y., Witte O.N. Lysophosphatidylcholine as a ligand for immunoregulation // Biochem. Pharmacol. 2002. V. 64. P. 161-167.

172. Kandaswami C., Middleton E. Jr. Free radical scavenging and antioxidant activity of plant flavonoids // Adv. Exp. Biol. 1994. V. 336. P. 351376.

173. Kaneko T., Matsuo M., Baba N. Inhibition of linoleic acid hydroperoxide-induced toxicity in cultured human umbilical vein endothelial cells by catechins // Chem. Biol. Intern. 1998. V. 114. P. 109-119.

174. Kaneko T., Baba N. Protective effect of flavonoids on endothelial cells against linoleic acid hydroperoxide-induced toxicity // Biosci. Biotech. Bioch. 1999. V. 63. P. 323-328.

175. Kempaiah R.K., Srinivasan K. Influence of dietary spices on the fluidity of erythrocytes in hypercholesterolaemic rats // Brit. J. Nutr. 2005. V. 93, N. l.P. 81-91.

176. Khotimchenko Yu.S. Polysorbovit: properties and using of pectin preparations. Seoul: Korea Health Policy News. 2003. 91 p.

177. Kikuchi Y., Da Q.W., Fujino T. Variation in red blood cell deformability and possible consequences for oxygen transport to tissue // Microvasc. Res. 1994. V. 47, N. 2. P. 222-231.

178. Kostetsky E.Y., Goncharova S.N., Sanina N.M., Shnyrov V.L. Season influence on lipid composition of marine macrophytes // Botanica marina. 2004. N47. P. 134-139.

179. Koter M., Franiak I., Strychalska K. et al. Damage to the structure of erythrocyte plasma membrane in patients with type-2 hypercholesterolemia // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2004. V. 36, N. 2. P. 205-215.

180. Kropacova, K. Misurova E, Hakova H. Protective and therapeutic effect of silymarin on the development of latent liver damage // Radiats. Biol. Radioecol. 1998. V. 38, N 3. P. 411-415.

181. Lee I.A., Popov A.M., Sanina N.M. et al. Morphological and immunological characterization of immunostimulatory complexes based on glycoglycerolipids from Laminaria japonica II Acta Biochim. Pol. 2004. V. 51, Nl.P. 263-272.

182. Lee K.-S., Choi Y.-S., Seo J.-S. Sea tangle supplementation lowers blood glucose and supports antioxidant systems in streptozotocin-induced diabetic rats // J. Med. Food. 2004. V. 7, N 2. P. 130-135.

183. Lee N.Y., Ermakova S.P., Choi H.-K. et al. Fucoidan from Laminaria cichorioides inhibits AP-1 transactivation and cell transformation in the mouse epidermal JB6 cells // Mol. Carcinogen. 2008. V. 47, N 8. P. 629-637.

184. Li B., Lu F., Wei X., Zhao R. Fucoidan: structure and bioactivity // Molecules. 2008. V. 13, N 8. P.1671-1695.

185. Li C., Gao Y., Li M. et al. Effect of Laminaria japonica polysaccharides on lowing serum lipid and anti-atherosclerosis in hyperlipemia quails // Journal of Chinese medicinal materials. 2005. V. 28, N8. P. 676-679.

186. Liashenko V.P., Politaieva V.I. Relationship between hypercholesteremia and morphological changes in the aorta and kidney // Fiziol. Zh. 2003. V. 49, N. 6. P. 64-69.

187. Lindi C., Montorfano G., Marciani P. Rat erythrocyte susceptibility to lipid peroxidation after chronic ethanol intake // Alcohol. 1998. V. 16, N. 4. P. 311-316.

188. Luscher T.F., Oemar B.S., Yang Z., Noll G. Molecular and cellular mechanisms of arteriosclerosis and restenosis: possibilities of gene therapy // Z Kardiol. 1996. V. 85, N. 7. P. 495-508.

189. Maie N., Behrens A., Knicker H., Kogel-Knabner I. Changes in the structure and protein binding ability of condensed tannins during decomposition of fresh needles and leaves // Soil Biol. Biochem. 2003. V. 35. P. 577-589.

190. Mizuno M., Nishitani Y., Tanoue T. et al. Quantification and Localization of Fucoidan in Laminaria japónica Using a Novel Antibody // Biosci. Biotech. Bioch. 2009. V. 73. N. 2. P. 335-338.

191. Moini H., Rimbach G., Packer L. Molecular aspects of procyanidin biological activity: disease preventative and therapeutic potentials // Procyanidin Biol. Activity. 2000. V. 17, N. 1-4. P. 237-259.

192. Nagayama K., Iwamura Y., Shibata T. et al. Bactericidal activity of phlorotannins from the brown alga Ecklonia kurome // J. Antimicrob. Chemoth. 2002. V. 50. P 889-893.

193. Noda H., Amano H., Arashima K. Antitumour activity of polysaccharides and lipids from marine algae // Nippon suisan gakkaishi. 1989. V.55.N7.P. 1265-1271.

194. Ohvo-Rekila H., Ramstedt B., Leppimaki P., Slotte J.P. Cholesterol interaction with phospholipids in membranes // Prog. Lipid Res. 2002. V. 41, N.l. P. 66-97.

195. Okey A.B., Franc M.A., Moffat I.D. et al. Toxicological implications of polymorphisms in receptors for xenobiotic chemicals: The case of the aryl hydrocarbon receptor //Toxicol. Appl. Pharm. 2005. V. 207 (2 Suppl). P. 43-51.

196. Pande S.V., Parvin K.R., Venkitasubremanian T.A. Microdetermination of lipids and serum total fatty acid // Anal. Biochem. 1963. V. 6. P. 415-423.

197. Paoletty F., Adinucci D., Mocali A., Caparrini A. A sensitive spectrophotometric method for the determination superoxide dismutase activity in tissue extracts //Anal. Biochem. 1986. V. 154. P. 536-541.

198. Patel S.P., Katyare S.S. Effect of alloxan-diabetes and subsequent treatment with insulin on lipid/phospholipids composition of rat brain microsomes and mitochondria//Neurosci. Lett. 2006. V. 399, N. 1-2. P. 129-134.

199. Peeples W.J., Given F.T., Bakri Y.N. The use of Laminaria japonica in intracavitary radiation therapy when anesthesia is contraindicated // Int. J. Radiat. Oncol. 1983. V. 9, N 9. P. 1405-1406.

200. Pinon F., Merino J.F., Ferer J.C. et al. Plasma lipids and blood fluidity in parients with polygenic hypercholesterolaemia treated with fluvastatin // Clin. Hemorheol. Micro. 2002. V. 27, N. 3-2 P. 193-199.

201. Powers S.K., Ph D., Ed D. et al. Antioxidants and exercise // Nutr. Aspects of Exercise. 1999. V. 18, N. 3. P. 525-536.

202. Przybylska M., Faber M., Zaborowski A., Bryszewska M. Cholesterol sulfat induces changes in human erythrocyte thermostability // Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. V. 46, N. 2. P. 399-410.

203. Ragan M.A., Glombitza K.V. Phlorotannins, brown algal polyphenolics // Progress in Phycological Research, Bristol. 1986. V. 4. P. 129241.

204. Raheja R.K., Kaur C., Singh A., Bhatia I.S. New colorimetric method for the quantitative estimation of phospholipids without acid digestion // J. Lipid Res. 1973. V. 14. P. 695-697.

205. Reinhart W.H., Chien S. Role of cell geometry and cellular viscosity in red cell passage through narrow pores // Am. J. Physiol. 1985. V. 248, N. 5. P. 473-479.

206. Ridgway N.D. Interactions between metabolism and intracellular distribution of cholesterol and sphingomyelin // Biochem. Biophys. Acta. 2000. V. 1484. P. 129-141.

207. Rice-Evans C.A., Miller N.J., Paganga G. Antioxidant properties of phenolic compounds // Trends Plant Sci. 1997. V. 2. P. 152-159.

208. Robak J., Gryglewski R.J. Bioactivity of flavonoids // Polish J. of Pharmacol. 1996. V. 48, N. 6. P. 555-564.

209. Rouser G., Kritchevsky G., Yamamoto A. Column chromatographic and associated procedures for separation and determination of phosphatides and glicolipids // Lipid chromatogr. Anal. N.Y.: Dekker. 1967. V. 1. P. 99-162.

210. Ruperez P., Ahrazem O., Leal J.A. Potential antioxidant capacity of sulfated polysaccharides from the edible marine brown seaweed Fucus vesiculosus // J. Agr. Food Chem. 2002. V. 50, N 4. P. 840-805.

211. Saija A., Scalese M., Lanza M. et al. Flavonoids as antioxidant agents: importance of their interaction with biomembranes // Free Radical. Bio. Med. 1995. V. 19, N4. P. 481-486.

212. Samee H., Li Z.-X., Lin H. et al. Anti-allergic effects of ethanol extracts from brown seaweeds // J. Zhejiang Univ-Sc. B. 2009. V. 10, N 2. P. 147153.

213. Sanina N.M., Goncharova S.N., Kostetsky E.Y. Fatty acid composition of individual polar lipid classes from marine macrophytes // Phytochemistry. 2004. V. 65, N 6. P. 721-730.

214. Sanina N.M., Goncharova S.N., Kostetsky E.Y. Seasonal changes of fatty acid composition and thermotropic behavior of polar lipids from marine macrophytes // Phytochemistry. 2008. V. 69, N 7. P. 1517-1527.

215. Sanina N.M., Kostetsky E.Y. Thermotropic behavior of major phospholipids from marine invertebrates: changes with warm-acclimation and seasonal acclimatization // Comp. Biochem. Phys. B. 2002. V. 133. N 2. P. 143153.

216. Sanina N.M., Kostetsky E.Y., Goncharova S.N. Thermotropic behavior of membrane lipids from brown marine alga Laminaria japonica II Biochem. Soc. T. 2000. V. 28, N 6. P. 894-897.

217. Santos-Buelga C., Scalbert A. Proanthocyanidins and tannin-like compounds-nature, occurrence, dietary intake and effects on nutrition and health // J. Sci. Food Agr. 2000. V. 80. P. 1094-1117.

218. Sasso G.F., Ceccanti M., Nardi E. et al. Cholesterol-acyltransferase (LCAT) activity in alcoholic liver disease // Panminerva Med. 1989. V. 31, N 1. P.30-33.

219. Satoh T., Cohen H.T., Katz A.I. Intracellular signaling in the regulation of renal Na-K-ATP-ase. II. Role of eicosanoids //J. Clin. Invest. 1993. Vol. 91. P. 409-415.

220. Scalbert A., Williamson G. Dietary intake and bioavailability of polyphenols // Am. Soc. Nutr. Sci. 2000. V. 130. P. 2073-2085.

221. Sharon N., Lis H. History of lectins: from hemagglutinins to biological recognition molecules // Glycobiology. 2004. V. 14, N11. P. 53-62.

222. Shibata T., Ishimaru K, Kawaguchi S. et al. Antioxidant activities of phlorotannins isolated from Japanese Laminariaceae // J. Appl. Phycol. 2007.

223. Shibata T., Nagayama K., Tanaka R. et al. Inhibitory effects of brown algal phlorotannins on secretory phospholipase A2s, lipoxygenases and cyclooxygenases // J. Appl. Phycol. 2003. V. 15. P. 61-66.

224. Shibata, T., Ishimaru, K., Kawaguchi, S. et al. Antioxidant activities of phlorotannins isolated from Japanese Laminariaceae.// Proceedings of the International Seaweed Symposium 19. 2009. P. 255-261.

225. Silva R. A. Munoz S. E., Guzman C. A. Effects of dietary n-3, n-6 and n-9 polyunsaturated fatty acids on benzo(a)pyrene-induced forestomach tumorigenesis in C57BI6J mice // Prostag. Leukotr. Ess. 1995. V. 53. P. 273-277.

226. Site selection for kelp (Laminaria japonica Aresch). Culture of Kelp (Laminaria japonica) in China. Regional Seafarming Development and Demonstration Project. 1989. P. 31.

227. Smirnova L.E., Pestova V.G., Pekarskii D.E., Chizhik O.P. Effect of the osmotic diuretics, urea and mannite, on erythrocyte morphology // Problemy gematologii i perelivaniia krovi. 1971. V.16, N 2. P. 47-50.

228. Suzuki Y., Yamamoto I., Umezawa I. Antitumor effect of seaweed: partial purification and the antitumor effect of polysaccharides from Laminaria angustata Kjellman var. Longissima Miabe // Chemotherapy (Tokyo). 1980. V. 29. P. 165-170.

229. Svetachev V.I., Vaskovsky V.E. A simplified technique for thin layer microchromatography of lipids // J. Chromatogr. 1972. V. 67, N. 2. P. 376-378.

230. Srivastava S.P., Chen N.Q., Holtzman J. L. The in vitro NADPH-depent inhibition by CCI4 of the ATP-depent calcium uptake of hepatic microsomes from male rats // Biol. Chem. 1990. V. 265, N. 15. P. 8392-8399.

231. Terao J. Dietary flavonoids as antioxidants in vivo: conjugated metabolites of (-)-epicatechin and quercetin participate in antioxidative defense in blood plasma // J. Med. Invest. 1996. Vol. 46. P. 159-168.

232. Theret N., Bard J.M., Nuttens M.C. et al. The relationship between the phospholipid fatty acid composition of red blood cells, plasma, lipids and apolipoproteins//Metabolism. 1993. V. 42, N. 5. P. 562-568.

233. Tirkey N., Pilkhwal S., Kuhad A., Chopra K. Hesperidin, a citrus bioflavonoid, decreases the oxidative stress produced by carbon tetrachloride in rat liver and kidney // BMC Pharmacol. 2005. V. 5, N. 1. P. 2.

234. Tuquet C., Dupont J., Mesneau A., Roussaux J. Effecta of tamoxifen on the electron transport chain of isolated rat liver mitochondria // Cell. Biol. Toxicol. 2000. V. 16, N. 4. P. 207-219.

235. Uchida K., Shiraishi M., Naito Y. et al. Activation of Stress Signaling Pathways by the end product of lipid peroxidation // Biol. Chem. 1999. V. 274, N. 4. P. 2234-2242.

236. Valko M., Leibfritz D., Moncol J. et al. Free radicals and antioxidant in normal physiological functions and human disease // Int. J. Biochem. Cell B. 2007. V.39. P. 44-84.

237. Van Acker F.A., Schouten O., Haenen G.R. et al. Flavonoids can replace a-tocopherol as an antioxidant// FEBS Lett. 2000. V. 473. P. 145-148.

238. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin I.M. An universal reagent for phospholipid analysis // J. Chromatogr. 1975. V. 114, N. 1. P. 129-141.

239. Vaskovsky V.E., Latyshev N.A. Modified Jungnickel's reagent for detecting phospholipids and other phosphorus compounds on thin-layer chromatograms //J. Chromatogr. 1975. V. 115, N 1. P. 246-249.

240. Venkata Rao E., Ramana K. Structure and in vitro anti-coagulant activity of a new sulphated polysaccharide from a green seaweed Cladophora socialis. //17 IUPAC. 1 symposium of the chemistry of natural products. India. 1990. P. 226.

241. Venkatesan P., Rao M.N.A. Structure-activity relationships for the inhibition of lipid peroxidation and the scavenging of free radicals by synthetic symmetrical curcumin analogues // J. Pharm. Pharmacol. 2000. V. 52. P. 11231128.

242. Wagner H., Horhammer L., Wolff F. Thin-layer chromatography of phosphatides and glycolipides //Biochem. Z. 1961. Bd, 334. P. 175-184.

243. Wang J., Zhang Q., Zhang Z., Li Z. Antioxidant activity of sulfated polysaccharide fractions extracted from Laminaria japonica II Int. J. Biol. Macromol. 2008. V. 42, N 2. P. 127-132.

244. Wang Y., Tang X. Relationships between antioxidant activities and heat-resistant features of two Laminaria japonica strains // J. Appl. Ecol. 2005. V.16, N 8. P.1507-1512.

245. Weber L.W.D., Boll M., Stampfl A. Hepatotoxicity and mechanism of action of haloalkanes: carbon tetrachloride as a toxicological model // Crit. Rev. Toxicol. 2003. V. 33, N. 2. P. 105-136.

246. Yokota T., Nagashima M., Ghazizadeh M., Kawanami O. Increased effect of fucoidan on lipoprotein lipase secretion in adipocytes // Life Sci. 2009. V. 84, N 15-16. P. 523-529.

247. Yuan Y.V., Walsh N.A. Antioxidant and antiproliferative activities of extracts from a variety of edible seaweeds // Food Chem. Toxicol. 2006. N 44. P. 1144-1150.

248. Zaragoz M. C., Lopez D., Saiz M.P. et al. Toxicity and antioxidant activity in vitro and in vivo of two Fucus vesiculosus extracts // J. Agr. Food Chem. 2008. V. 56, N 17. P. 7773-7780.

249. Zhu B.T., Taneja N., Loder D.P. et al. Effects of tea polyphenols and flavonoids on liver microsomal glucuronidation of estradiol and estrone // J. Steroid Biochem. 1998. V. 64, N. 3-4. P. 207-215.

250. Zou Y., Qian Z.-J., Li Y. et al. Antioxidant effects of phlorotannins isolated from Ishige okamurae in Free Radical Mediated Oxidative Systems // J. Agr. Food Chem. 2008. V. 5, N 16. P. 7001-7009.

Информация о работе

Кондратьева, Елена Викторовна
кандидата биологических наук
Б.м., 2010
ВАК 03.03.01

Диссертация

Стрессорные изменения физиолого-метаболических характеристик эритроцитов и их коррекция экстрактом из ламинарии японской - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Стрессорные изменения физиолого-метаболических характеристик эритроцитов и их коррекция экстрактом из ламинарии японской - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы