Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Стевия (Stevia rebaudiana Bertoni) в Центральном Черноземье
ВАК РФ 06.01.09, Растениеводство
Автореферат диссертации по теме "Стевия (Stevia rebaudiana Bertoni) в Центральном Черноземье"
На правах рукописи
Верзилина Наталья Дмитриевна
1
у
г Стевия ^ода геЬаисПапа ВеПош)
в Центральном Черноземье
(агробиологические и физиолого-биохимические аспекты культуры)
06.01.09 - растениеводство
03.00.12 - физиология и биохимия растений
АВТОРЕФЕРАТ
)
диссертации на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук
Воронеж - 2005 г.
Работа выполнена на кафедре ботаники и физиологии растений ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К. Д. Глинки»
Научный консультант:
заслуженный работник высшей школы РФ, доктор биологических наук, профессор
А.В. Никулин
Официальные оппоненты:
доктор сельскохозяйственных наук, профессор
В.И. Манжесов
доктор биологических наук, профессор
М.Н. Кондратьев
доктор сельскохозяйственных наук, профессор
И.Я. Пигорев
Ведущая организация:
ФГОУ ВПО «Воронежская государственная лесотехническая академия
Защита диссертации состоится 18 октября 2005 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д.220.010.03 ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки» по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1.
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Воронежского государственного аграрного университета имени К.Д. Глинки.
Автореферат разослан _15 сентября 2005 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор сельскохозяйственных наук,
профессор
Д.И. Щедрина
4¡LSъ8
¡tumo
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность
Сохранение и укрепление здоровья всех слоев населения в настоящее время является стратегической задачей правительства Российской Федерации, которое приняло «Концепцию государственной политики в области здорового питания населения на период до 2005 года», разработанную ведущими учеными и специалистами страны.
Цивилизация человечества тесным образом была связана с введением в культуру диких растений и дальнейшей селекцией их на урожайность и качество продукции. Необходимо отметить, что культуры, входящие в рацион питания человека, традиционно были высококалорийными. Это объясняется тем, что в прежние времена деятельность большинства людей была связана с тяжелым физическим трудом, когда для восполнения затраченной энергии требовалась калорийная пища. Сложившийся стереотип питания привел к тому, что люди в развитых странах, производящих достаточное количество сельскохозяйственной продукции, потребляют с пищей чрезмерное количество калорий, что вызывает у большого количества людей появление избыточного веса и даже ожирение. Вследствие этого особую роль в питании приобретают растения, имеющие низкую калорийность, но обладающие традиционными качествами. К таким культурам относится стевия, содержащая дитерпе-новые гликозиды, основным из которых является стевиозид, обладающий высокой степенью сладости при практически нулевой калорийности. Кроме того, эти вещества не требуют для усвоения выработки инсулина и, следовательно, могут употребляться в пищу людьми, больными сахарным диабетом. В ряде стран комплекс сладких гликозидов стевии применяют при производстве напитков, кондитерских и кулинарных изделий. Пищевая промышленность России также начинает проявлять интерес к натуральным диетическим заменителям сахара. Внедрение стевии в сельскохозяйственное производство и налаживание промышленного производства стевиозида и различных пищевых продуктов на его основе будут способствовать созданию в России внутреннего рынка натуральных подсластителей растительного происхождения.
Стевия (Stevia rebaudiana Bertoni) - это молодая культура в современном растениеводстве, которая пока не заняла достойного места в сельскохозяйственном производстве нашей страны. Ее возделывание ограничено территориально, а валовой сбор листа достигает всего нескольких десятков тонн. Однако эта культура обладает большим адаптивным потенциалом и способна формировать большую урожайность вегетативной массы.
Широкое использование стев1 ченностью этой культуры.
В связи с этим постановка темы в направлении изучения агробиологических и физиолого-биохимических свойств стевии при интродукции в центральном Черноземье России весьма актуально.
Целью исследований было установить основные агробиологические особенности роста и развития стевии, способствующие повышению ее продуктивности в условиях ЦЧР и выявить ценные биохимические свойства растительного сырья и продуктов его переработки. Работа выполнялась в соответствии с целевыми научными программами, координируемыми Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в соответствии с планом НИР ФГОУ ВПО «Воронежский госагроуни-верситет имени К.Д.Глинки».
В задачи исследований входило:
1. Изучить морфологоанатомические, физиолого-биохимические особенности стевии в процессе онтогенеза.
2. Изучить способность стевии к вегетативному и семенному размножению стевии и разработать метод выращивания семенных растений для получения семян в условиях закрытого грунта.
3. Установить влияние удобрений и физиологически активных веществ на повышение продуктивности стевии.
4. Выявить изменения физиологических функций у форм стевии различной плоидности.
5. Усовершенствовать методику выделения стевиозида из листьев стевии и контроля его содержания в растительном сырье и продуктах его переработки.
6. Изучить аминокислотный и углеводный состав, антиоксидантную активность стевии и продуктов ее переработки, характеризующие данную культуру как источник ценной пищевой добавки для питания человека.
Положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Морфолого-физиологические особенности стевии и их взаимосвязь с возрастными периодами развития в условиях ЦЧР расширяют представление о природе онтогенеза и определяют степень продуктивности растений при интродукции и используются для определения степени адаптации в новых условиях возделывания.
2. Разработанный способ позволяет в условиях закрытого фунта выращивать семенные растения стевии и получать семена.
3. Использование регуляторов роста дает возможность обеспечивать активизацию ростовых процессов, улучшать качество получаемой рассады и повышать продуктивность стевии за счет более эффективного использования минеральных удобрений.
4. Изменения физиологических и биохимических функций у растений стевии разной плоидности свидетельствуют о зависимости функционирования ассимиляционного аппарата и продуктивности от уровня компенсационных процессов полиплоидных организмов.
5. Химический состав и антиоксидантная активность стевии и продуктов ее переработки позволяют характеризовать данную культуру как ценный объект для использования в рационе питания человека в качестве пищевой добавки.
6. Использование современных физико-химических методов позволяет проводить высококачественную очистку продуктов переработки стевии и контролировать содержание стевиозида.
Научная новизна исследований.
Впервые в климатических условиях ЦЧР были исследованы агробиологические особенности стевии, дана ее ботаническая характеристика. Выявлены морфолого-анатомические особенности вегетативных и генеративных органов, свидетельствующие об отношении стевии к растениям мезофитного типа и подтверждена ее принадлежность к семейству А51егасеае.
Установлена продолжительность этапов и особенности органогенеза в процессе онтогенеза, общий ход которого подчиняется закономерностям развития поликарпических растений с побегами, развив мощими-ся по монокарпическому типу.
Установлено, что удлинение вегетационного периода до 5 месяцев способствует переходу растений в генеративный период, активному цветению и плодоношению в условиях закрытого фунта. Это явилось основой для разработки метода выращивания семенных растений, использование которого позволяет получать семена. Основным фактором способствующим регулированию процессов вегетативного роста и цветения является укорочение фотопериода до 12 часов.
Показано, что в формировании и функционировании аалмиляци-онного аппарата стевии участвует вся листовая поверхность при наибольшей фотосинтетической активности листьев средних ярусов, но при раннем отмирании нижних листьев. Посчитано критическое число клеток в микроареолах листа стевии, составляющее 1545 штук определяющее ростовые процессы и переход растений от одного этапа развития растений к другому. Установлена тесная связь корневой системы и ассимиляционного аппарата, способствующая улучшению жизнгдеятель-ности растений. Эти исследования расширяют и углубляют теоретические представления о ростовых процессах и природе фотосинтеза стевии и имеют значение в практике растениеводства для повышения продуктивности данной культуры.
Получены оригинальные данные по изучению мсрфолого-
физиологических характеристик форм стевии различной плоидности, где триплоид превосходил диплоидную и тетраплоидную формы по приросту надземной массы и толщине листа, которые обеспечивали ему повышенную фоюсинтетическую активность и более высокую продуктивность, которая связана не столько с уровнем плоидности, сколько с уровнем компенсационных процессов полиплоидного организма.
Определено влияние регуляторов роста экзогенного происхождения на степень использования стевией минеральных веществ, а также на получение высококачественной рассады. Установлено, что ростовые вещества нового поколения (ретардант с проауксиновым эффектом 577) в сочетании с минеральными удобрениями стимулируют рост и развитие черенков, способствуют полной приживаемости растений.
Получены, неизвестные ранее, данные о содержании аминокислот в вегетативных органах стевии различной плоидности. Достоверно показано, что сорт Рамонская сластена отличается высоким содержанием глицина в верхних листьях и относительно невысокой концентрацией серина, тогда как у дикой формы наблюдается обратная зависимость. Это свидетельствует о связи свободных аминокислот листьев стевии с ее окультуриванием, которая приводит к изменению в распределении и содержании некоторых аминокислот.
Получены новые данные о высокой антиоксидантной активности стевии и продуктов ее переработки, что определяет перспективность использования стевиозида в виде биологически активных добавок в пищевых продуктах профилактического назначения. Выявлены незначительные изменения в содержании хлорогеновой кислоты характеризующей антиоксидантную активность у форм различной плоидности.
Определены научно-методические принципы процесса очистки полученного экстракта из растительного сырья стевии, основанные на обессоливании и обесцвечивании ионитами экстракта без использования дорогостоящих и ядовитых реактивов. Это послужило отдельным этапом при создании принципиальной технологической схемы переработки сухих листьев стевии.
Усовершенствован метод определения стевиозида на основе жидкостной хроматографии, позволяющий анализировать растительное сырье и продукты его переработки, включая пищевые продукты.
Впервые показано, что применение комбинации методов многоволновой ВЭЖХ и главных компонент позволяет выделить идентификационные признаки экстракта стевии и пищевых продуктов на его основе, что имеет большое практическое значение для использования при определении подлинности вещества.
Практическая значимость заключается в решении народнохозяйственной проблемы введения стевии в ареал возделываемых сельскохозяйственных культур ЦЧР, что позволит широко использовать это ценное продовольственное и лекарственное растение.
Разработанный метод выращивания семенных растений, основанный на удлинении периода вегетации позволит получать семена стевии в условиях закрытого фунта, что будет способствовать распространению данной культуры среди населения.
Выявленные морфологические особенности онтогенеза стевии представляют практический интерес для возделывания этой культуры в полевых условиях ЦЧР.
Установленные закономерности фотосинтеза являются надежной оценкой для выявления наиболее продуктивных форм растений. Полиплоидный материал, обладающий высокой активностью фотосинтеза и повышенной продуктивностью можно рекомендовать для возделывания в условиях ЦЧР.
Полиплоидные формы (триплоиды) обладающие повышенной продуктивностью, активностью фотосинтеза можно рекомендовать для возделывания в условиях ЦЧР и селекционной работе.
Разработанный метод очистки экстракта из растительного сырья стевии рекомендуется для использования в технологической схеме получения очищенного стевиозида.
Усовершенствованный метод определения стевиозида на основе высокоэффективной жидкостной хроматофафии может найти применение в качестве контроля при выращивании стевии и ее первичной и вторичной переработки.
Разработанные рецептуры низкокалорийных диетических молочных продуктов могут быть рекомендованы для использования в пищевой и молочной промышленности.
Метод главных компонент (разновидность корреляционного анализа) дает статистический паспорт вещества и может найти применение в биологических анализах при обработке данных по выделению наиболее значимых показателей.
Результаты исследования могут быть использованы в учебном процессе по биологическим дисциплинам в высших и средних учебных сельскохозяйственных заведениях.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались и получили положительную оценку на:
Международных симпозиумах и научных конференциях: «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования» (2003, 2005 гг., г. Пущино); «Экологические аспекты интенсификации сельскохозяйственного производства» (2002 г., г. Пенза); «Про-
блемы современного растениеводства» (2002 г., г. Пенза); «Анатомия и морфология растений» (1997, 2002 гг., г. Санкт-Петербург); «Медицинской ботаники» (1997 г., г. Киев); юбилейная конференция к 100-летию со дня рождения Н.В. Цицина (1998 г., г. Киев);
Всесоюзной научной конференции: «Научное наследие П.П. Семе-нова-Тяньшанского и его роль в развитии современной науки» (1997 г., г. Липецк);
Всероссийских научно-практические конференции: «Молодые ученые и специалисты сельскому хозяйству» (1997 г., г. Курск); «Резервы стабилизации аграрного производства» (1996 г., г. Воронеж); «Рациональное использование ресурсного потенциала в агропромышленном комплексе» (1998 г., г. Воронеж); «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования» (2005 г., г. Воронеж);
координационных совещаниях НИИ и вузов ЦентральноЧерноземного региона: (2000-2005 гг., Воронеж);
конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Воронежского ГАУ им. К.Д.Глинки (2000-2005 гг.)
Публикации. Материалы диссертационной работы опубликованы в двух монографиях, учебнике и учебном пособии, а также в тридцати пяти научных и научно-методических работах, опубликованных в различных изданиях, в том числе в центральной печати. Приняты к рас-смопренио две заявки на изобретения: № регистрации 2005117463 и № регистрации 2005117464.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения , 7 глав, выводов и предложений по практическому использованию результатов исследований, она изложена на 300 страницах машинописного текста, содержит 35 таблиц, 73 рисунка, 12 приложений, список литературы из 480 наименований, в том числе 114 иностранных авторов.
Автор глубоко признательна своим учителям: научному консультанту, доктору биологических наук, профессору Никулину А.Н., доктору биологических наук, профессор^ Ьурень В.1УЦ, доктору биологических наук Жужжаловой Т.П., доктору технических наук, профессору Полянскому К.К., профессору Шевченко В.Е., кандидату сельскохозяйственных наук Филатову Г.К. за ценные советы при выборе научного направления исследований, оформлении диссертации, помощь и поддержку, (¡сем сотрудникам кафедры ботаники и физиологии растений, коллективам ботанического сада им. Б.А.Келлера и отдела биотехнологии ВНИ4С им. А.Л. Мазлумова за участие в проведении экспериментальных исследований.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Современное состояние агробиологических и физиолого-биохимических исследований стевии.
В главе приведен анализ отечественной и зарубежной литературы, посвященной биологии стевии, возможности интродукции её в России, особенностям агротехники возделывания. Рассматриваются также химические свойства дитерпеновых гликозидов и других веществ, содержащихся в стевии, показаны их положительные качества при лечении и профилактике ряда заболеваний. На основании анализа литературных данных сделан вывод, что интродукция в России новой культуры стевии изучена еще недостаточно. Исследования ее, как правило, проводились в климатических условиях, отличных от таковых в ЦентральноЧерноземном регионе. Поэтому для стевии, выращиваемой в ЦЧР, необходимы исследования различных сторон ее жизнедеятельности , в том числе физиологических особенностей, связанных с формированием продуктивности, исходя из новых для нее условий возделывания.
Глава 2. Условия и методика проведения исследований 2.1. Почвенно-климатические условия лесостепи ЦЧР
Изучение агробиологических и физиолого-биохимических особенностей стевии проводилось в Ботаническом саду имени Б. А. Келлера Воронежского государственного аграрного университета имени К.Д. Глинки, а отдельные опыты закладывались во Всероссийском научно-исследовательском институте сахарной свеклы и сахара имени А.Л. Мазлумова.
В главе дана почвенно-климатическая характеристика лесостепной зоны Центрально-Черноземного региона, в которой интродуцируется стевия, и на основе этих данных делается вывод о лимитирующих абиотических факторах при возделывании этой культуры. Недостаток в тепле обусловливает возделывание стевии как однолетней культуры.
2.2 Объекты, методы и техника исследований
Исследования, представленные в диссертационной работе проводились на кафедре ботаники и физиологии растений Воронежского аг-роуниверситета в течение 15 лет.
Объектом исследований явилась культура из группы сахароносных растений - стевия (81еу1а геЬаисНапа ВеПош). В работе использовали сорт Рамонская сластена и растения различных форм плоидности, полученные и любезно предоставленные нам для исследований отделом биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института сахарной свеклы и сахара им. А.Л. Мазлумова. Для сравнения, в качестве контрольных образцов, изучали растения дикой формы стевии. Основой диссертационной работы явились вегетационные опыты, наблюдения, учеты и лабораторные исследования.
Исследовательскую работу выполняли по общепринятым методикам:
Структурный (анатомический) анализ выполнялся на серии поперечных срезов, которые готовились лезвием от руки под бинокулярным микроскопом (МБС-9) при увеличении 6x2, 6x4. Срезы помещались в глицерин и окантовывались лаком. Препараты нижней и верхней эпидермы листа готовились путем соскабливания.
При изучении этапов органогенеза руководствовались методикой Куперман Ф.М. (1963). Растения были высажены в количестве 500 штук. Пробы брали не реже, чем через день, начиная с прорастания семян и до наступления V этапа органогенеза; на УЫХ этапах органогенеза пробы брали ежедневно, на Х-ХП этапах - с интервалами 3-5 дней.
Изучение особенностей развития стевии при различной длине дня - (10, 12, 14 и 16 часов) проводили при выращивании растений в теплице. Повтэрность опыта 9-кратная. Субстратом служила смесь песка и чернозе ма в соотношении 1:1. Измерение высоты растений, образование пар листьев проводили ежедекадно. Площадь листьев измеряли в период начала бутонизации, подсчет количества цветков проводили в фазу марсового цветения.
При изучении влияния регуляторов роста на продуктивность рассады стезим в закрытом грунте обработку растений ростовыми веществами проводили во время посадки черенков. Препаратом эмпактсупер обрабатывав почву перед посадкой черенков. Внесение минеральных веществ проводилось из расчета Ы8Р8К8 г/м2 перед посадкой черенков. Статистическая повторность опыта - трехкратная, биологическая - 15 растений
В опытах по изучению отзывчивости стевии на обработку регуляторами роста в сочетании с удобрениями растения выращивались в ящиках размером 30x30x30 см. Перед посадкой рассады стевии вносили: СаОЮ3)2 - 4,19 г, №Н2Р04 - 3,20г, КС1 - 1,38 г, что соответствовало внесению в почву дозы Ы80Р80К80, в другую часть - Са(Ы03)2 - 6,33 г, ЫаН2Р04 - 4,81 г и КС1 - 2,06 г, что соответствовало дозе N |20Р 120^120-В контрогтьные варианты соли не вносили. Растения опрыскивали регуляторами роста с помощью ранцевого опрыскивателя через месяц после высадки рассады. Полив проводили при посадке рассады и, по мере необходимости, в процессе приживания. Почва, взятая для опыта, - чернозем выщелоченный тяжелосуглинистый с содержанием гумуса - 4,55,0%, сте ленью насыщенности основаниями 84-88%.
Площадь листьев определяли методом отпечатков на бумаге путем взвешивания массы бумаги, соответствующей площади листьев (Третьяков, Карнаухов, Паничкин и др., 1990). Определение хлорофилла осуществлялось после экстракции его из листьев этанолом на спектрофотометре "Сиекол" (Баславская, Трубецкова, 1964).
Чистую продуктивность фотосинтеза (ЧПФ), относительный
(процентный) рост (R), абсолютную скорость роста (К) определяли по формулам, представленным А.Д. и М.Д. Гродзинскими (1973).
Объем корневой системы измерялся методом Д.А. Сабинина и H.A. Колоскова (Баславская, Трубецкова, 1964). Проба для определения физиологических характеристик и проведения анализов составляла 20 растений.
Содержание свободных аминокислот в листьях и стебля к стевии определяли на автоматическом анализаторе Ш-1200Е с помощью нин-гидрина (Плешков, 1985, Рядчиков (1978).
Углеводный состав определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с рефрактометрическим УФ - детектором (Рудаков, Федоров, Полянский, 2004).
Для изучения антиоксидантной активности использовали электрохимический прибор Яуза-ААА-01, работающий на основе амперомет-рического метода детектирования (Яшин, Яшин, Пахомов, 2003).
Определение хлорогеновой кислоты осуществляли колориметрическим методом. (Храмов, Комарова 1999).
Математическую обработку результатов биологических исследований проводили методом дисперсионного анализа (Доспехов 1979). Статистическую обработку и апраксимацию биохимических данных в главе 7 проводили с использованием программ Microsoft Exel ХР, Statistica v. 6.0.
Глава 3. Агробиологические особенности стевии при
выращивании в условиях ЦЧР 3.1. Морфологоанатомические особенности стевии.
Стевия - многолетнее травянистое растение, с продолжительностью жизни около восьми лет (рис. 1). Систематическое положение стевии определяли согласно общепринятой системе опргделения (Тахтаджяну 1966).
Отдел Magnoliophyta, класс Magnoliopsida, п/класс Asteridae, порядок Asterales, семейство Asteraceae, род Stevia, вид Stevia rebaudiana Ber-toni.
Родина стевии - Южный Парагвай, где климат тропический, со среднегодовой суммой осадков 2000 мм в год, со среднесуточной температурой воздуха самого холодного месяца 17-18° С, а самого жаркого - 27-29°С, суммой эффективных температур 8000°С, относительной влажностью воздуха - 80-100%, то есть стевия является теплолюбивой, влаголюбивой и светолюбивой культурой. В условиях центральных областей России стевия возделывается по однолетнему циклу с использованием вегетативного размножения (Знаменская, Жужжалова, Е',влакова, 1997). Оптимальная температура для ее роста и развития 20-25"С, однако она хорошо вегетирует и в интервале температур от 15 до 30с'С. Влага для стевии в ЦЧР лимитирующий фактор. При ее дефиците рост
растений резко замедляется. Стевия не выдерживает суровых зим нашей зоны. Её критическая температура 0 - -2 °С. Отсюда видно, что возделывание стевии в Центрально-Черноземном регионе сталкивается с определенными трудностями и поэтому необходимы широкие исследования биологии этой культуры для разработки мероприятий по успешному, экономически оправданному, ее выращиванию в данных климатических условиях.
Описание морфологоанатомических признаков стевии - корневой системы, стебля, листового аппарата, цветка и соцветия проводилось в динамике ее роста и развития. Корневая система стевии формируется с образованием главного корня, который уходит в почву на глубину до 25-30 см.. Диаметр его равен 4-5 мм. Боковые корни в основном 1-го, 2-го (редко 3-го) порядков. Весной следующего года, когда у стевии образуется ряд новых корней, старые, предыдущего года, постепенно отмирают. Во взрослом состоянии у растений главный корень отсутствует, придаточные корни скучены в виде кисти на укороченной подземной стеблевой оси (Верзилина Н.Д., Камаева Г.М., 1997; Верзилина Н.Д., 1998).
Стебель у стевии прямостоячий, достигает высоты 80-90 см, имеет частичное одревеснение в нижней части на расстоянии от 2 до 7 см от уровня почвы. В верхней части стебель зеленый, сильно опушенный. Высота прикрепления нижних боковых ветвей от 2,0 до 30,0 см. Весной следующего года у стевии образуется ряд новых стеблей от основания стебля прошлого года. Рост проходит более интенсивно и повторно отрастающие, после срезки, растения образуют до 15-20 побегов высотой 80-100 см.
Листорасположение супротивное. Листья сидячие, без прилистников, ланцетовидные с пильчатым краем , жилкование сетчатое, имеется небольшое опушение, менее густое, чем у стебля.
Центральная жилка имеет один проводящий пучок, в ксилеме которого установлено наличие двух спиральных сосудов и одного кольчатого. Различные участки листовой пластинки различаются по числу устьиц на единицу поверхности. Расположение их беспорядочное, что характерно для растений с сетчатым жилкованием. Устьица находятся на одном уровне с эпидермальными клетками, следовательно, стевия относится к мезофитному типу растений. Устьичный аппарат ономоцитного типа.
Общее соцветие стевии представлено тирсом с элементарными небольшими корзинками. Корзинки содержат пять цветков в общей обертке, цветоложе не выражено. При цветении первыми распускаются цветки в нижней части соцветия. Цветки обоеполые, актиноморфные, четы-рехкруговые, пятичленные с двойным околоцветником. Длина соцветия в среднем составляет 2,5 см. Общее число корзинок на одно соцветие
подсчитать невозможно, так как корзинки формируются и зацветают в разное время. Число листочков обёртки равно пяти, их длина 0,7 см, ширина 0,1 см. Длина корзинки составляет 1,2 см, ширина - 0,4 см.
Обшая длина цветка составляет 0,8 см, а ширина - 0,2 см. Все цветки в корзинке одинакового размера и строения (трубчатый тип), то есть корзинки гомогамные. Чашечка видоизменена в паппус. Паппус состоит из 19 остей, каждая из которых в свою очередь тоже покрыта одноклеточными волосками, в которых обнаружены хлоропласты. Венчик спальнолепестный, лепестки срослись в трубку длиной 4-5 мм и густо покрыты волосками снаружи и внутри, кроме отгиба. Андроцей состоит из пяти тычинок. Тычиночные нити одинаковой толщины на всем протяжении. Гинецей состоит из двух плодолистиков, столбик длинный (до 3 мм), нитевидный, рыльце - двураздельное. Завязь - нижняя с одной анатропнэй семяпочкой, имеющей один интегумент.
Созревший плод стевии - одногнездная семянка с кожистым околоплоднике м. Семена мелкие, 2-4 мм длиной, темно-коричневого цвета. Видоизмененная'чашечка высыхает, образуя хохолок, который служит для распространения семян ветром. На поверхности семян видны 4-5 светлых иертикальных полос. Семя заключено в оболочку и имеет первичный корешок и две удлиненные семядоли, между которыми находится точка роста в виде овального бугорка. Период созревания семян растянут, семена созревают неравномерно, что затрудняет уборку. На этом этапе заЕ.ершается полный цикл развития однолетнего побега. После созревания семян растение усыхает и вступает в период покоя.
Таким образом, нами изучены морфолого-анатомические особенности вегетативных и генеративных органов стевии и подтверждена принадлежность этого растения к семейству Asteraceae.
3. 2. Возрастные изменения стевии в онтогенезе
Как и все виды покрытосеменных растений, стевия проходит в онтогенезе 12 основных этапов органогенеза. Результаты проведенных исследований позволили нам разработать схему и определить продолжительность этапов органогенеза в онтогенетическом развитии стевии (табл.1) (Верзилина Н.Д., Жужжалова Т.П., Дубянский М.Н., 2004; Вер-зилина Н.Д., 2005). В состоянии зародыша и в первое время после прорастания стевия находится на I этапе органогенеза. На II этапе конус нарастай ля образует вегетативные органы. К концу второго этапа растения увеличиваются в высоту, достигая 20-40 см. Стевия в это время формирует до семи основных стеблей, одревесневших в нижней части III этап связан с дифференциацией главной оси зачаточного соцветия, образова -шем сегментов оси соцветия. Прохождение IV этапа заключается в формировании генеративных органов - появляются боковые конусы оси соцветия, они начинают ветвиться. На V-VII этапах идут процес-
сы формирования генеративных органов. VIII этап связан с завершением формирования органов соцветия и цветков IX этап органогенеза - это процессы цветения, опыления, оплодотворения. X этап - рост и формирование семени, дифференциация зародышевых органов. XI этш - накопление питательных веществ в семени. На XII этапе идут процессы превращения питательных веществ в запасные вещества семян.
Проведенный морфолог ический анализ органогенеза отра кает развитие стевии в климатических условиях ЦЧР. Нами установхена продолжительность этапов органогенеза стевии и особенности морфогенеза в процессе онтогенетического развития, общий ход которых подчиняется закономерностям развития поликарпических растений с побегами, развивающимися по монокарпическому типу.
Таблица 1. - Продолжительность различных этапов органогенеза _стевии сорта Рамонская сластена___
Этапы органогенеза I II III IV V-VII VIII IX X XI XII
Время прохождения этапов, дней 2-5 60-90 3-6 4-10 10-24 5-12 5-10 25-35
Полученные результаты позволяют составить не только более полное представление о процессах морфогенеза, сопровождающих рост и развитие этой новой культуры, но и будут способствовать целенаправленному вмешательству в репродуктивный процесс для реализа ции важнейших элементов ее продуктивности.
Глава 4. Изучение способов размножения стеви я 4.1 Особенности семенного размножения Как показали наши исследования, выращивание стевии в открытом грунте позволяет растениям вступить в генеративное возрастное состояние. Укорочение дня стимулирует процессы формирования соцветий и бутонизации, которые происходят, начиная с середины июля. К середине августа количество растений в генеративном состоянии достигает 95%, из которых зацветает только 40%. Так как период формирования семян происходит в конце августа - начале сентября, то есть в конце вегетационного периода, когда происходит снижение температуры воздуха, то семена формируются на единичных растениях в незначительном количестве и часто не вызревают.
С целью изучения биологических особенностей развитая стевии и возможности получения семян растения выращивали в открытом грунте и в условиях пленочной теплицы. Исследования проводились на 2 вариантах: (1-почва; 2-почва+перегной) (табл.2).
15
Таблица 2. - Развитие стевии в условиях пленочной теплицы
Даш измерений Почва Почва + перегной
Высота растений. см Прирост от начальной высоты, см Прирост после каждого измерения, см Количество боковых побегов, шт. Высота растений, см Прирост от начальной высоты, см Прирост после каждого кзмерения, см Количество боковых побегов, шт
12.05 (посадка) 3,7 2 - 3 4,4 - - 4
26.05 5,2 1,5 1,5 3 6,4 2,2 2,2 4
09.06 12,1 8,4 6,9 3 13,6 9,2 7,2 5
23.06 22,1 18,4 10,0 3 26,9 22,5 13,3 5
07.07 40,4 36,7 18,3 4 45,2 40,8 18,3 6
21.07 57,5 53,8 17,1 5 63,1 58,7 17,9 8
04.08 66,4 62,7 8,9 5 76,4 72,0 13,3 8
18.08 73,0 69,3 6,6 5 87,0 82,6 10,6 9
01.09 76,0 72,3 3,0 5 90,5 86,1 3,5 9
15.09 79,8 76,1 3,8 5 96,9 92,5 6,4 9
В открытом грунте, вегетационный период продолжался только 3,5 месяца, а в начале второй декады сентября начинались заморозки и растения погибали. В пленочную теплицу рассадная культура стевии высаживалась на две недели раньше, чем в открытый грунт, на те же варианты, а уборка растений проводилась на 2 месяца позже. Это позволило увеличить вегетационный период до 5 месяцев.
Сроки наступления фаз бутонизации и цветения были аналогичны растениям из открытого фунта, с середины июля до середины августа, однако количество растений, сформировавших генеративные органы, было значительно выше в условиях пленочной теплицы. На варианте с почвой процент растений в фазе бутонизации составил 92,8%, в фазе цветения 71,4%, на варианте почва + перегной фаза бутонизации наблюдалась у 92,8% растений, которые впоследствии зацвели на 100%. Масса 1000 семян составила на первом варианте 0,29 г, на втором - 0,32 г, всхожесть соответственно 48 и 62 %.
Проведение посева стевии непосредственно в фунт затруднено, так как семена этого растения очень легкие и мелкие (всего 2-4 мм) и не требуют заделки почвой. Кроме того, стевии для появления всходов требуется повышенная влажность почвы и воздуха, а также температура в пределах 20-25°С. В связи с этим и исходя из результатов наших наблюдений по биологии стевии был разработан способ выращивания в тепличных условиях растений способных цвести и завязывать семена при удлинении вегетационного периода (Верзилина Н.Д., Жужжалова Т.П., Знаменская В.В., Земин М.И., 2005).
Формирование репродуктивных органов стевии в нашей зоне имеет свои особенности. Несмотря на то, что растения нормально вегетируют все теплое время лета, они могут и не зацвести, так как лимитирующим фактором в закладке генеративных органов является фотопериод. Известно, что стевия относится к растениям короткого дня с фотогериодом 13-14 часов. Закладка репродуктивных органов замедляется или совсем не происходит в условиях длинного дня.
Таблица 3. - Влияние длины дня на рост и развитие растений стевии
Длина дня, час Высота стебля, см Пар листьев, шт Площадь листа, см2 Количесп во Ц (СТКОВ, шт
10 31,0 8,9 6.9 71,6
12 34,6 8,1 8,4 73,9
14 42,5 12,2 10,3 -
16 41,3 11,8 7,9 -
НСР05 3.9 0.5 1.9
Поскольку стевия в условиях умеренного климата характеризуется неустойчивым продуцированием семян, то для выявления фотопериодических условий ее выращивания в наших условиях были проведены исследования.
Установлено, что длина дня менее 14 часов (10 и 12 часов) вызывает остановку закладки новых листьев, уменьшение их площади и формирования цветков (табл. 3) При данных условиях выращивания стевии количество листьев в двух вариантах было примерно одинаковым и составляло около 9 пар, а площадь листьев на 10-часовом фотопериоде составила 6,9 см2, на 12-часовом - 8,4 см2 (Знаменская В.В., Верзилина Н.Д., Жужжалова Т.П., 2004).
Увеличение длины дня с 14 до 16 часов вызывало усиление развития вегетативных органов - высоты стебля и количества листьев, без появления цветоносных побегов и цветков. Переход растений в генеративное состояние происходил на 30-36 день как при длительном воздействии 12-часовым фотопериодом в течение 30 дней, так и при кратковременных циклах в течение 4-6-8 дней (табл.4).
Массовое цветение растений и образование цветков в количестве 53 штук наблюдалось при 30-дневном воздействии 12-часовым фотопериодом, что сопровождалось уменьшением высоты растений до 29,4 см и количества листьев до 8 шт.
Таблица 4. - Биометрические показатели растений стевии при ............... --------- 11--------- . ---.
Вариант воздействия, дней Высота, см Пар листьев, шт Площадь листа, см2 Количество цветков, игт
4 35,4 8,9 6,2 16,0
6 34,8 8,4 4,9 19,4
8 35,6 8,3 5,6 27,9
30 29,4 7,8 6,3 52,8
НСР05 3,6 0,7 1,6
Учитывая, что кратковременные воздействия фотопериодом способствовали более активному вегетативному росту растений, и в то же время вызывали цветение и плодоношение растений, то можно считать, что для перехода растений в генеративное состояние достаточно выдержать их на 12-часовом фотопериоде 4-8 дней.
Таким образом, основным фактором, способствующим регулированию процессов вегетативного роста и цветения стевии является использование 12-часового фотопериода.
4.2. Особенности вегетативного размножения
Зеленое черенкование, основанное на способности отдельных частей растения формировать корневую систему, восстанавливать рост и функции организма, обеспечивает получение генетически однородных растений. При изучении оптимального состава субстрата для выращивания рассады стевии был заложен опыт в тепличных условиях. Хорошо себя проявили субстраты из смеси чернозем+песок в соотношении 1:1. Уже на 10-ый день от посадки все черенки формировали корни и трогались в рост. Рассада, выращенная на этом субстрате, была выровненной с хорошо развитым стеблем и корневой системой. В среднем высота растений составила 11,7 см, длина корней - 11,5 см. Приживаемость черенков составляла 99%, прирост высоты черенков - 9,5 см (табл. 5). При использовании субстрата песок+перегной+опилки приживаемость снизилась до 22%. Растения почти не росли, и прирост высоты составил всего 1,3 см, что было ниже контроля на 87,3%. По-видимому, добавление опилок к субстрату вызывает повышенную кислотность почвы, что неблагоприятно сказывается на развитии растений.
Таблица 5. - Рост и развитие рассады стевии на различных типах
субстратов
Субстрат 1 1 1 Количество растений, цл Приживаемость, % Высота побега, см Прирост высоты растений, см %от контроля
через
Посажено Выжило 2 недели 7 недель
Чернозем, песок (контроль) 100 99 99 2,2 11,7 9,5 100
Песок, перегной, опилки 100 22 22 2,1 3,4 1,3 13,7
Чернозем, лесок, гидрогель 100 98 98 2,6 17,2 14,6 153,7
Перегной, песок, опилки, гидрогель 100 23 23 1,1 6,1 5,0 52,6
Добавление гидрогеля к субстрату вызвало мощное развитие и больший прирост черенков, что превышало контроль на 53,7%. Влияние на рост и развитие черенков стевии проявилось на 10-й день после посадки, а к концу опыта, на 50 - й день, эта разница оказалась еще бо-
19
лее значительной. Наши наблюдения показали, что состав субстрата определяет развитие корневой системы. Наиболее благоприятной оказалась смесь чернозема, песка и гидрогеля, которая стимулировала развитие корней у 85% черенков.
Гидрогель значительно улучшал физические свойства почвы - плотность, объемную массу, аэрацию, влажность. Поэтому на данном субстрате наблюдалась лучшая приживаемость растений, больший рост побегов, равномерное размещение корней, высокая укореняемость и целост -юсть корневой системы при пересадке.
При сравнении разных сроков черенкования с целью определения оптимального, установили что наилучшие показатели при первом сроке (конец февраля), в более поздние сроки (март, апрель) наблюдалось их резкое снижение.
Глава 5. Физиологические и физиолого-генетические аспекты формирования продуктивности стевии 5.1. Формирование и функционирование ассимиляционного аппарата
Развитие листа является важным этапом индивидуальной жизни растения, которое связано с началом его фотосинтетической деятельности, за счет чего активно развивающийся организм снабжается метаболитами и энергией. Изучение формирования листового аппарата стевии важно и в селекционной работе, и при разработке агротехнических мероприятий по повышению ее продуктивности, так как основная часть сладких веществ находится именно в листьях. Как показали наши ис-следова?ия, наибольшую фотосинтезирующую поверхность у стевии формируют листья средних ярусов. К концу вегетации отмирает большая часть низовых листьев, а остальные функционируют до наступления пониженных температур. Количество листьев на одно растение стевии, их площадь и масса сухого вещества увеличивались до определенного периода, а затем начинали снижаться вследствие отмирания части нижних листьев (рис. 2), ассимилянты которых пошл и, возможно, на обеспечение нужд стебля и корней. Но вследствие того, что стебель продопжал увеличивать свою массу, общая надземная масса, представляющая хозяйственно ценную часть растения, продолжала увеличиваться (Филатов Г.В., Шевченко В.Е., Верзилина Н.Д., 2004).
Поскольку происходит довольно раннее отмирание ценных с хозяйственной точки зрения листьев нижнего яруса, то необходимо обеспечить возделывание стевии агротехническими условиями, способствующими более продолжительному их росту, а в селекционной работе необходимо создавать формы, нижние листья которых способны были бы функционировать более продолжительное время.
Дни и месяцы
Рис. 2. Динамика роста количества листьев на одно расте -ше (А), их площади (В) и массы сухого вещества листьев (С)
5.2 Формирование и функционирование корневой системы
Нарастание длины и поглощающей поверхности корней непосредственно связано с нарастанием поверхности листьев и усилением их деятельности. Несмотря на уменьшение площади ассимиляционной поверхности стевии вследствие засыхания и отмирания нижних листьев, идет прирост массы корневой системы стевии. Возможно, что это связано с биологическими особенностями стевии, которая формирует придаточные побеги, для чего необходимы пластические вещества, синтезируемые листьями. Многочисленные исследования ряда авторов, проведенные на различных сортах в разные по увлажнению годы, указывают на наличие связи корневой системы с надземной массой, что подтверждается в наших опытах со стевией (рис. 3).
Рис. 3. Динамика роста площади листьев и массы надземных органов и корневой системы стевии в ходе вегетации; 1 - надземная масса 1 растения; 2 - масса корневой системы 1 растения; 3 - площадь листьев
1 растения.
Тесная связь корневой системы стевии с ее ассимиляционным аппаратом указывает на необходимость использования факторов, способствующих совместному улучшению их жизнедеятельности и, вследствие этого, повышению урожайности стевии.
5.3 Физиолого-генетические особенности формирования продуктивности полиплоидных форм стевии.
Увеличение продуктивности растений, устойчивости к неблагоприятным условиям среды, болезням и вредителям осуществляется в настоящее время двумя путями: за счет агротехнических мероприятий и благодаря селекционным преобразованиям. Стевия еще недостаточно изучена в селекционно-генетическом плане.
Одним из путей получения более продуктивных форм этого растения является полиплоидия. Исследования функционирования ассимиляционного аппарата и корневой системы полиплоидных форм стевии позволили выяснить возможность селекционного отбора форм на высокую продуктивность.
Скорость листообразования, являясь косвенным показателем активности фотосинтетического аппарата и распределения ассимилятов на рост надземных органов служит одним из диагностических признаков типа растения, обладающего высокой потенциальной продуктивностью.
Облиственность диплоида и триплоида значительно превышает об-лиственность тетраплоида (рис. 4). На последнем этапе развития не наблюдается увеличение числа листьев у триплоидой и тетраплоидной форм, что объясняется отмиранием листьев нижнего яруса, а у диплоида происходит даже уменьшение их количества.
15,07
30,07 15,08 Дни и месяцы
1,09
□ Диплоид '
I
|ВТрИПЛОИД |
О Тетраплоид
Рис. 4 Количество листьев на одном растении стевии различной плоидности
Новые, более молодые листья, естественно, имеют меньшую площадь, что при приводит в конечном счете к сокращению ассимиляционной поверхности, особенно у диплоилной формы (рис. 5).
15,07
-г■
30,07 15,08
Дни и мтеяцы
-Ч—Диплоид ^^Трттид —Твтралломд
Рис. 5 Площадь листьев растений стевии различной плоидности
15,07
30,07 15,06
Дни и месяцы
1,09
-♦-Диплаад —Триплоцд ——Тетраплоид
Рис. 6. Масса сухого вещества листьев стевии различной плоидности
30,07 15,06
Дни и месяцы
-Диплоад -Триплмщ -Теграппоид
Рис. 7. Изменение удельной плотности листьев стевии в онтогенезе
Необходимо отметить превосходство в площади листьев у диплоидной и особенно у триплоидной форм над тетраплоидной. Все это сопровождалось снижением веса сухого вещества листьев в расчете на одно растение у диплоида, при остановке накопления сухого веса листьев у триплоида, тогда как тетраплоид продолжал увеличивать массу листьев (рис.6). Наблюдаемый прирост надземной массы у триплоидного растения в последний период и сохранение той же массы у диплоида обусловливались в основном увеличением в ходе вегетации массы стебля.
Удельная плотность листьев стевии всех форм, как видно из рис. 7, резко повышается в период с 15 августа по 1 сентября, что связано, как следует полагать, со старением и утолщением листьев. Несмотря на превосходство триплоида по ряду морфофизиологических показателей, он занимает промежуточное положение по УПП листа. Очевидно, это дает ему определенное преимущество, поскольку такая толщина пластинки листа обеспечивает лучшее функционирование его фотосинтетической деятельности, нежели при большей или меньшей толщине, как у других форм
Содержание хлорофилла на отдельных этапах роста было выше у тетраплоида, тогда как триплоид в данном случае уступал обеим формам. Очевидно, утолщение листовой пластинки будет увеличивать трудности для диффузии С02 к центрам карбоксилирования. и поэтому толщина листьев и содержание хлорофилла у триплоида являются результатом компромиссного и вместе с тем эффективного использования листом как потоков энергии света при средних его интенсивностях, так и усвоения С02 из воздуха с очень низкими ее концентрациями.
Возрастание в отдельные этапы развития каких-либо физиологических показателей у той или иной формы является компенсацией на ослабление других физиологических характеристик, и этот компенсаторный механизм работает на восполнение продукционной активности организма.
Характерной особенностью тетраплоида являлся медленный рост корней в начале онтогенеза. Триплоид, несколько отставая по абсолютному приросту на втором этапе, резко увеличил прирост объема в конце роста (Верзилина Н.Д., Филатов Г.В., 2004).
Как результат деятельности продукционных процессов на последнем этапе исследований масса растения диплоидной, триплоидной и тетраплоидной форм были равны соответственно 2,24,2,07,2,02 г.
Таким образом, использование в селекционных целях тех или иных полиплоидов с целью получения продуктивных форм будет, очевидно, связано не столько с уровнем плоидности, сколько с уровнем компенсационных процессов полиплоидного организма.
Слава 6. Влияние абиотических факторов на повышение продуктивности стевии
Регуляторы роста растений привлекают к себе большое внимание практиков сельского хозяйства. С их помощью пытаются решать те вопросы ПС' устранению "узких" мест у ряда культур, которые не могла решить селекция. Но наряду с положительными результатами синтетические фитогормоны имеют существенный недостаток - нестабильность их действия, которая зависит от почвенно-климатических и метеорологических условий, от сортовых особенностей. В настоящее время известно большое количество регуляторов, способных стимулировать рост растений Однако для того, чтобы они эффективно действовали в производственных условиях, необходима их строгая проверка в научно-исследовательских учреждениях с тем, чтобы дать обстоятельную оценку особенностям их действия.
Поэтому нами были проведены исследования по изучению действия ряда регуляторов совместно с минеральными веществами с целью изучения их влияния на рост и развитие рассады.
6.1. Влияние регуляторов роста на продуктивность рассады стевии в условиях закрытого грунта
Обработка в наших опытах зеленых черенков стевии ростовыми веществами в комплексе с подкормкой имела значительный эффект. Особенно эффективным оказалось опрыскивание рассады раствором ретарданта с проауксиновым эффектом 577 в концентрации 0,05 мл/л. В этом варианте наблюдалось увеличение высоты растений на 59,7%, количества листьев на 15,8% и площади одного листа на 41,1%. Растения были с хорошо развитым стеблем и листовым аппаратом. Максимальный рост достигался не за счет вытягивания междоузлий в длину, а за счет новой закладки. Процент растений с боковыми побегами был достаточно высок (табл. 6).
Положительное действие оказала обработка черенков стевии раствором ретарданта с проауксиновым эффектом 344 в сочетании с подкормкой полным минеральным удобрением. Высота побегов превышала контроль, на 49,7-56,4%, площадь листьев - на 39,5-40,5%.
Усилению роста укоренившихся черенков и получению сильной и развитой рассады способствовала подкормка полным минеральным удобрением с добавкой микроэлементов. Высота растений достигала 17,1 см, превысив контроль на 21%, прирост корней составлял 13,2 см, что было больше контроля на 4,8%.Таким образом, на получение сильной и хорошо развитой рассады стевии значительный эффект оказала обработка зеленых черенков ростовыми веществами.
Таблица б. - Влияние ростовых веществ в сочетании с минеральной подкормкой на рост и развитие
рассады стевии
Вариант ольгга Приживаемость, % Высота побега, см Площадь одного листа, см2 Количество листьев, шт
Контроль 1 (один субстрат) 98 4,71 3,98 7,1
Контроль 2 (субстрат+подкормка удобрением) 100 5,05 3,99 8,0
Цитодеф+подкормка удобрением 20 мг/л 2 мг/к 0, 2 мг/л 91 91 93 2,89 4,88 7,35 2,77 4,00 5,98 6,0 6.5 8,2
Ретардант 344+подкормка удобрением 0,5 мл/л 0,05 мл/л 0 005 мл/л 100 100 100 10,04 10,90 11,57 6,60 6,64 6,71 8,9 9,0 9,5
Ретардант 577+подкормка удобрением 0,5 мл/л 0,05 мл/л 0 005 мл/л 100 100 100 11,48 11,68 8,97 6,70 6,77 6,20 9,3 9,5 8,5
Эмпакт супер+подкормка удобрением I мл С,! м/1 0,01 мл 100 98 98 5,86 7,16 7,41 5,10 5,87 6,00 8,0 8.0 8,2
6.2 Действие минеральных удобрений и физиологически активных веществ на продуктивность стевии
Представляло интерес определить наличие стимулирующего эффекта ростовых веществ на степень использования растениями стевии минеральных удобрений и исследовать в ходе онтогенеза совместное действие физиологически активных соединений и минеральных веществ на формирование ее продуктивности.
Применение дозы удобрений NgoPgoKso значительно повлияло на массу растений, но картолин существенно (на 19 г) увеличил эффективность действия удобрений. Дальнейшее увеличение дозы удобрений с применением стимулятора дало прибавку к массе, но она была не столь эффективной (табл. 7).
К концу вегетации масса растений стевии, обработанных этамоном, превосходила массу образцов, необработанных регулятором, на варианте с N120Pi2oKi2o- В этом опыте не отмечалась эффективность применения этамона на фоне Ng0P8oKgo, наблюдалось даже уменьшение веса растений, правда, статистически недостоверное, однако при дозе внесения Ni2oPi2oK-i2o этамон показывал большой положительный эффект.
ПАБК+ДА, как и этамон, в отличие от картолина, не влиял на повышение действия удобрений в дозе NgoPgoKeo. Это возможно связано с тем, что эти препараты взаимодействуют более активно с эндогенными фитогормонами стевии, чем другие физиологически активные вещества, а поскольку содержание их в тканях находится в прямой зависимости от дозы удобрений (Якушкина, Воронков, 1968; Анисимов, Леонтьева, Коньков, 1981), то, следовательно, более низкая доза удобрений снижает стимулирующий эффект регуляторов роста.
Таблица 7. - Совместное действие регуляторов роста и минеральных удобрений на массу растения стевии к концу вегетации
Варианты опыта Обработка регуляторами роста Масса растения (г) под действием регулятора
Картолина Этамона ПАБК+ДА
Без удобрений - 75 75 75
+ 84 90 78
NajKsiiP««» - 97 97 97
+ 116 86 99
NiaïKiîuPuu - 101 101 101
+ 123 124 119
HCP„5 19 18 19
Снижение в первоначальный период роста массы растений при действии регуляторов роста не является статистически достоверным, однако тенденция наблюдалась практически во всех случаях. Это явление можно предположительно объяснить тем, что инициация ростовых процессов под действием физиологически активных веществ в определенной степени лимитируется поступлением необходимого количества соответствующих элементов минерального питания, и такое неравновесие между этими двумя процессами устраняется несколько позже. После устранения дисбаланса при достаточном количестве питательных веществ в почве, как в случае с фоном М^оРюоК^о, скорость ростовых процессов обеспечивается интенсивным поступлением минеральных веществ в растение, что в конечном итоге и приводит к увеличению продуктивности стевии.
Глава 7. Биохимические характеристики вегетативных
органов стевии 7.1. Аминокислотный состав вегетативных органов стевии
Содержание свободных аминокислот в тканях растения является одним из наиболее характерных показателей физиологического состояния организма. В связи с этим мы проводили определение свободных аминокислот в тканях вегетативных органов дикой формы стевии, сорта Рамонская сластена и тетраплоидной формы.
Самым высоким содержанием свободных аминокислот обладают верхние листья (рис. 8, 9, 10). Поскольку именно в молодых органах наиболее активно идут процессы деления и роста клеток, новообразования клеточных структур, это связано с интенсивным синтезом белка, требующим определенного фонда аминокислот. Следует отметить высокое содержание в листьях и стеблях стевии аспартата, серина, глютама-та, то есть аминокислот, которые являются исходными в соответствующих группах аминокислот.
Все формы стевии отличаются высоким содержанием в листьях и стеблях пролина, и это неудивительно, если иметь в виду его важное физиологическое значение. Возможно, что более высокое по сравнению с дикой формой и тетраплоидной содержание пролина в верхних листьях у сорта Рамонская сластена объясняется именно протекторными свойствами этой аминокислоты, поскольку Рамонская сластена была отселектирована для возделывания в более неблагоприятных условиях в сравнении с дикой формы.
Сорт Рамонская сластена отличается очень высоким содержанием глицина в верхних листьях и относительно невысокой по сравнению с другими формами концентрацией серина, тогда как у дикой формы наблюдается обратная завимость.
Эти аминокислоты связаны между собой генетически, и такие различия у форм стевии в содержании этих аминокислот могут говорить о различающихся путях их метаболизма у дикой формы и сорта Рамонская сластена. Полиплоидизация приводит к снижению содержания глицина при соответствующем увеличении серина у тетраплоидной формы.
■л
I1
Рис. 8. Содержание свободных аминокислот в листьях и стеблях дикой формы стевии: 1 - верхние листья; 2 - нижние листья; 3 — стебли
Рис. 9. Содержание свободных аминокислот в листьях и стеблях стевии сорта Рамонская сластена: 1 - верхние листья; 2 - нижние листья; 3 - стебли
Рис. 10. Содержание свободных аминокислот в листьях и стеблях стевии тетраплоидной формы: 1 - верхние листья; 2 - нижние листья; 3 - стебли
Если по содержанию отдельных свободных аминокислот в верхних листьях различные формы стевии резко отличаются друг от друга, то их нижние листья, как правило, имеют небольшие различия в содержании аминокислот. Исключение составляют лизин, лейцин, пролин, глюта-мин.
Рассматриваемые формы стевии, несомненно, имеют отличающиеся друг от друга генетические системы, и это должно обусловливать особенности их обмена веществ, который выражается, как видно из приведенных выше данных, в различном содержании аминокислот в вегетативных органах различных форм, что может свидетельствовать о разных путях их метаболизма. Окультуривание дикой формы, а та<же поли-плоидизация приводят, как уже отмечалось, к изменению в содержании и распределении некоторых аминокислот.
7.2. Антиоксидантная активность препаратов стевии
В последнее время интерес исследователей вызывает антиоксидантная активность лекарственных препаратов, биологически активных веществ, пищевых продуктов. Это объясняется тем, что причиной возникновения наиболее опасных заболеваний человека является накопление свободных радикалов в его организме. Противодействовать этому могут легкоокисляющиеся вещества - антиоксиданты. Заслуживающим внимания фактом является обнаружение высокой антиоксидантной активности у натурального подсластителя, выделяемого из стечии, - сте-виозида. Антиоксидантная активность стевиозида в сочетании с открытыми ранее его свойствами (весьма низкая калорийность, антивирусная, антибактериальная и антигрибковая активность, способность стимулировать секрецию инсулина клетками поджелудочной железы и др.) определяет перспективность использования стевиозида в различных продуктах профилактического назначения в виде биологически активных добавок.
В листьях стевии в значительных количествах находите?' вещество полифенольной природы - хлорогеновая кислота. В последнее время внимание к этой кислоте привлечено в связи с обнаружением заметного тормозящего эффекта ее на глюкозо-6-фосфатазу печени и вследствие этого с возможным применением хлорогеновой кислоты и ее аналогов в качестве гипогликемических средств. Отмечено протекторно»; действие этого соединения при перекисном окислении липидов. В связи с этим определение антиоксидантной активности, содержания хлорогеновой кислоты в растениях стевии представляет несомненный интерес, и в своих исследованиях мы провели ряд определений подобных характеристик стевии, используя последние методические разработки в этой области.
Как свидетельствуют литературные данные антиоксидантная ак-
тивность (АОА) продуктов из стевии высока и превышает таковую даже для меда и хмеля. Определение хлорогеновой кислоты в растениях стевии, отличающихся плоидностью показало, во-первых, на высокое содержание этого соединения в листьях стевии и, во-вторых, на довольно большие различия в содержании кислоты у селекционных форм различной плоидности, что говорит о довольно большом генетическом разнообразии стевии в отношении содержания хлорогеновой кислоты (табл. 8).
Таблица 8. - Содержание хлорогеновой кислоты в листьях селекционных форм стевии различной плоидности
№№ образцов Плоидность Содержание хлорогеновой кислоты, мМ/г
Сорт Рамонская сластена Диплоид 0,104
37 Триплоид 0,150
28 Тетраплоид 0,112
35 Тетраплоид 0,152
36 Тетраплоид 0,100
Не отмечено зависимости между плоидностью образцов стевии и содержанием в них хлорогеновой кислоты, но обнаруженный значительный размах в содержании этого антиоксиданта у различных образцов стевии указывает на то, что в ходе селекционных преобразований возможны отбор и получение нужных форм с повышенным содержанием в них хлорогеновой кислоты и других антиоксидантов.
7.3. Выделение стевиозида из растительного сырья
Для изучения вариативности содержания и качества стевиозидсо-держащего сырья, перспектив получения диетических пищевых продук- <
тов с применением дитерпеновых гликозидов была проведена совместная разработка способов получения очищенных экстрактов стевии (Рудаков, Верзилина, Подпоринова, Полянский, 2004). г
В настоящее время для получения и очистки экстракта из стевии и удаления сложных эфиров применяют ряд органических растворителей (хлороформ, этилацетат, метанол, 1 -бутанол и др.). Эти растворители либо ядовиты, либо обладают большой летучестью, имеют неприятный запах или дорогостоящи. Поэтому необходим поиск новых технологий получения подсластителя на основе стевиозидов. В последнее время наблюдается тенденция использовать в качестве экстрагента теплую или горячую воду, что позволяет избавиться от дорогостоящих и небезвредных органических растворителей. Первичный водный экстракт содержит много примесей, в частности, органические пигменты и неорганические соли, придающие экстракту горьковатый привкус
32
и темную окраску, что делает продукт малопригодным в пищевой индустрии.
Поэтому особое внимание необходимо было уделить очистке экстрактов от высокомолекулярных соединений и веществ коллоидной дисперсности с целью получения экстракта, обладающего достаточной прозрачностью, отсутствием примесей и высоким содержанием подсластителя. С этой целью нами отрабатывались различные схемы очистки выделенных из растений стевии гликозидов.
а) Очистка экстрактов стевии для получения сиропов.
Эксперименты по изучению возможности эффективной очистки
сока с использованием метода электрокоагуляции проводились по следующей схеме: экстракт, полученный в диффузионном аппарате, после охлаждения до 20-25°С направляли на установку для ультрафильтрации, работающую в непрерывном режиме. Полученный фильтрат подвергали электрохимической обработке, после чего фильтровали. Полученный фильтрат направляли для деионизации и обесцвечивания на ионообменную установку, работающую по схеме катионит + анионит. отработки режима работы ионообменной установки фильтрат пропускали через ионообменные колонки со скоростями от 5 до 10 мм в час.
Во всех экстрактах определяли изменение доброкачественности и рН. По полученным данным определяли оптимальный техчологиче-ский режим.
На основании исследований был предложен следующий режим очистки экстрактов стевии:
1. Давление сока на ультрафильтрации в пределах 1,5-2,0 атм. Такое давление обеспечивает наибольшую производительность оборудования.
2. Скорость пропускания сока через ионообменную установку - 10 м/час. Такая скорость обеспечивает оптимальные условия для проведения очистки сока: высокую производительность и хорошие качества сока.
б) Применение центрифугирования для очистки продуктов
переработки стевии
В процессе исследований был выявлен существенный недостаток ультрафильтрационной установки, работающей в непрерывном режиме с использованием стандартных ультрафильтров с тангенциальным подводом сока. Этот недостаток заключается в том, что в процессе фильтрации образуется около 30% экстракта с повышенным содержанием органических несахаров. Очистка этой части сока затруднена В связи с этим, в ходе дальнейших исследований предполагалась разработка способа ультрафильтрации диффузионного сока, лишенного этого не-
достатка.
РОС НАЦИдНАЛЬНАЯ,
В качестве ультрафильтруюш ;го мМнрнвдтюдрользЬвали слой из-
„ Слет*,«,,,. I Р3 О* 800 аду Д
мельченного глауконита, который намывался на сито фильтрующей центрифуги. На намытый слой осадка подавали экстракт стевии, который под действием центробежной силы подвергался ультрафильтрации. Необходимый размер пор осадка достигался за счет неравномерности размеров его частиц. При этом более мелкие частицы, располагаясь в промежутке между более крупными, создавали необходимый размер пор, позволяющий отфильтровывать вещества коллоидной дисперсности. Для определения оптимального режима работы ультрафильтрую-щей центрифуги был проведен расчет зависимости давления, создаваемого центробежными силами, от числа оборотов. Результаты исследований показали, что увеличение давления при ультрафильтрации экстракта выше 3 атм нецелесообразно. Эффект удаления коллоидов при таком способе ультрафильтрации составляет 70-75%. Доброкачественность очищенного экстракта по сравнению с типовой схемой очистки повышалась на 6-7%. Исходя из полученных результатов очистки экстракта стевии, предлагается для промышленных условий использовать горизонтальную шнековую фильтрующую центрифугу. Очищенный на ионообменной установке экстракт сгущали в выпарной установке под разрежением до содержания сухих веществ 40-45%. Сгущенный экстракт высушивали при температуре 55-60°С, сухой остаток измельчали.
Таким образом, на основании проведенных исследований была разработана схема получения концентрата стевиозида без использования органических растворителей.
в) Экстрагирование гликозидов из растительного сырья стевии с помощью солей металлов
Известно, что некоторые неорганические соединения обладают высокой сорбционной способностью и могут удалять высокомолекулярные вещества коллоидной дисперсности (Воюцкий, 1964). К таким соединениям относятся соли алюминия и гидрат окиси кальция, которые и были использованы в наших опытах.
С целью получения и очистки экстракта из сухих листьев стевии без применения органических растворителей была разработана новая технологическая схема, позволяющая получать дитерпеновые гликози-ды 85% - ой чистоты. Заключается она в том, что первичный водный экстракт смешивается с раствором, содержащим ион двух- или трехвалентного металла, например, Сан2 или А1+3 (Рудаков, Верзилина, Федоров, Полянский, 2004).
Концентрация добавляемой соли алюминия оказывает существенное влияние на удаление красящих веществ из экстракта стевии (табл. 9). При использовании концентрации сернокислого алюминия 0.25 и 0,5 моль/л цвет экстракта был соломенный, так как с повышением концентрации сернокислого алюминия образуется больше осадка гидро-ксида алюминия, адсорбирующего красящие компоненты.
Таблица 9. - Влияние концентрации добавляемых реагентов на очистку экстракта стевии
Концентрация А12(5СМ, 18Н2 О, моль/л Содержание су\ич веществ, % рН Цвет экстракта
с Са(ОН)2 с (ЫНОз-НРО.,
0,05 2,5 10,5 8,0 Темно-коричневый
0,125 2,4 10,6 7,0 Коричневый
0,125 2,4 11,8 7,5 Темно-желтый
0,25 2,2 11,3 7,5 Соломенный
0,5 2,1 10,6 7,5 Соломенный с зеленоватым оттенком
Аналогичное действие оказывает и добавление гидроксида кальция с рН в интервале 10,5-11,3, которое вызывает образование осадка гидроксида алюминия и способствует коагуляции веществ коллоидной дисперсности, удалению сульфат-иона, образованию нерастворимого осадка сульфата кальция. Для получения слабощелочного экстракта и удаления оставшихся ионов используемых солей применяли аммоний фосфорнокислый двузамещенный. В щелочной среде и в присутствии гидроксида аммония происходило выпадение осадка фосфорнокислых солей кальция и алюминия.
Исходя из полученных результатов опыта, мы в дальнейшей работе использовали растворы сульфата аммония концентрацией 0,25 и 0,5 моль/л, раствор гидроокиси кальция концентрацией 50 г на Ш0 мл воды и кристаллический аммоний фосфорнокислый двузамещенный, которые добавляли к раствору сульфата алюминия до рН 10,6-11,3 и 7,5-8,0 соответственно.
Дополнительное осветление экстракта и удаление катионов и анионов проводили на катионите КУ-2 в Н4-форме и аниошпах АВ-17 и АН-181-С в ОН - форме.
Проведенные исследования показали, что очистка экстракта от солей и высокомолекулярных веществ коллоидной дисперсности неорга-
ническими соединениями, обессоливание и обесцвечивание его ионита-ми позволяют получать очищенный экстракт без использования дорогостоящих и ядовитых реактивов. Таким образом, результаты проведенных экспериментов позволили создать принципиальную схему переработки сушх листьев стевии, которая включает экстрагирование сладких веществ, фильтрацию раствора, осаждение примесей, очистку и выпаривание.
Разработанная схема дает возможность проводить глубокую очистку жстракта с производительностью 10 кг сухих листьев за смену, что позволяет рекомендовать ее для получения концентрата сладких веществ стзвии в полупромышленных условиях.
7.4. Контроль содержания стевиозида в растительном сырье
Грь проведении работ селекционного характера и опытов в растениеводстве, при переработке сырья стевии возникает необходимость не только выделения из растительного материала, но и определения в нем содержания стевиозида. В свете вышесказанного особую важность приобретает разработка простого, надежного и универсального метода определения, так как большинство методов слишком сложны и требуют больших временных затрат.
Поэтому мы поставили задачу разработать простой и надежный количественный хроматографический метод контроля содержания стевиозида в растительном сырье, включая пробоподготовку Актуальность разработки таких методик определяется еще и тем, что дорогие природные подсластители (стевиозиды) фальсифицируются дешевыми синтетическими подсластителями - аспартамом или сахарином, вследствие чего необходим контроль пищевой продукции (Соколов, Верзилина, Рудаков, 2004).
Схема использованной нами градиентной системы ВЭЖХ с формированием состава подвижной фазы на линии высокого давления представлена на рис. 11. Растворители из емкостей (1) через входные фильтры (9) подаются прецизионными насосами высокого давления (2 и 11) через динамический смеситель потока (10) в систему ввода образца (3), туда же вводится проба. За работой насосов следит управляющий модуль системы (контролер) с помощью управляющей программы компьютера. Системы такого типа формируют бинарный градиент. Через inline фильтр (8) образец с потоком подвижной фазы поступает в разделительную колонку (4), затем элюат поступает в детектор (5) и удаляется в сливную емкость (7). При протекании элюата через измерительный контур детектора происходят регистрация хроматограммы и передача данных ia регистратор (6). В нашем случае хроматограммы регистрировались и сохранялись в виде файлов на жестком диске ЭВМ.
В настоящей работе были исследованы и оптимизированы три стадии анализа растительного сырья стевии: экстракция стевиозтда т листьев, очистка первичного экстракта и хроматографическое разделение. В качестве экстрагента для выделения дшерпеновых глико!идов использовали по указанным выше причинам воду, экстракция которой позволяет максимально снизить содержание сопутствующих примесей
И • 1 •
Рис. 11. Схема градиентной системы ВЭЖХ
Наибольшее извлечение стевиозида из растшельного сырья массой 1 г обеспечивает трехкратная экстракция 20 мл кипящей воды в течение 30 минут. Оптимальный размер частиц сырья - 0,5 мм.
Порцию экстракта объемом 2 мл пропускали через NN2-картридж для твердофазной экстракции, предварительно кондициониэозанный 3 мл ацетонитрила и 3 мл деионизированной воды Первую аликвоту 1 мл экстракта отбрасывали, а последующую часть очищенного экстракта собирали и использовали для анализа.
Очищенный и обесцвеченный экстракт анализировали при томоши ВЭЖХ. Нижний предел обнаружения стевиозида составляет 0,1 г'л (рис.12).
Методика отличается простотой пробоподготовки: она разработана для применения в рутинных анализах на стандартом хроматографиче-ском оборудовании с применением современных сорбентов и техники твердофазной экстракции.
Определение с помощью разработанной нами методики стевиозида в селекционных формах стевии с различной плоидностью показало, что эти формы отличаются содержанием этого вещества в листьях 1табл 10).
14 28 ^^
Рис. 12. Типовая хроматофамма экстракта из листьев стевии сорта
Рамоиская сластена полученная с помощью градиентной ВЭЖХ с УФ-детектором (210 нм) на аминопропильной неподвижной фазе.
По этому показателю выделяется тетраплоидная форма №36, и этот образец может явиться исходной формой для селекции на высокое содержание стевиозида. Рекомендовано использовать его для селекционной работы по получению форм, обладающих повышенной концентрацией подсластителя.
Таблица 10. - Содержание стевиозида в селекционных образцах стевии различной плоидности
Номер образца Плоидносгь Содержание стевиозида, %
Сорт Рамонская сластена диплоид 6,1
.37 Триплоид 6.8
28 Тетраплоид 6.9
35 Тетраплоид 6.7
36 Тетраплоид 8,5
г
Таким образом, разработана методика контроля содержания стевиозида в растительном сырье с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Благодаря этому методу выделен образец, который рекомендован для селекционной работы по получению форм с высоким содержанием подсластителя.
Выводы
1. Выявлены особенности прохождения этапов органогенеза сте-вии и установлена наибольшая продолжительность в онтогенезе II этапа, составляющая в условиях ЦЧР 60 - 90 дней. Общий ход онтогенеза сте-вии подчиняется закономерностям развития поликарпических растений с побегами развивающимися по монокарпическому типу. Особенностью культуры является замедление в ее развитии с конца мая по конец июня после чего следует период интенсивного роста до сентября.
2. Установлено, что удлинение вегетационного периода до 5 месяцев способствует переходу растений в генеративный период, активному цветению и плодоношению в условиях закрытого грунта. На основе этих исследований разработана методика выращивания семенных растений и получения семян, имеющих высокую лабораторную всхожесть 62-95%. Показано, что основным фактором способствующим регулированию процессов вегетативного роста и цветения является укорочение фотопериода до 12 часов.
3. Определены морфологические изменения в онтогенезе стевии сопровождающие формирование листового аппарата и репродуктивных органов. Показано, что развитие листового аппарата характеризуется плавным переходом от зародышевого типа к низовому и верховому. Наибольшую фотосинтезирующую поверхность формирует средний ярус. Особенностью стевии является отмирание в ходе вегетации ценных, в производственном отношении, нижних листьев, что в конечном счете снижает продуктивность культуры. Поэтому агротехнические мероприятия должны быть направлены на обеспечение роста и сохранности нижних листьев.
4. Определены особенности формирования и функционирования ассимиляционного аппарата и корневой системы полиплоидных форм. Выявлены факторы повышенной продуктивности триплоидной формы. В вегетационных опытах показано, что триплоид превосходил диплоидную и тетраплоидную формы по динамике роста, количеству и площади листьев. Масса сухого вещества триплоида на последних этапах развития была больше на 69,2%, чем у диплоида, и на 50,3%, чем у тетрап-лоида. Как результат деятельности продукционных процессов, масса сухого вещества растений на последних этапах роста у диплоидной, триплоидной и тетраплоидной форм была 2,24, 2,74 и 2,02 грамма и масса сухих корней 1,14, 1,40 и 0,96 грамма соответственно. Это свидетельствует, что в ходе генетических преобразований растений стевии, возможно получение форм, отличающихся ценными признаками, в частности, обладающих более интенсивными продукционными процессами.
5. Показано положительное действие фитогормонов на рост и развитие рассады стевии. Особенно эффективным из них был ретар-
дант с проауксиновым эффектом 577, при действии которого наблюдалось увеличение высоты растений ка 59,7%, количества листьев - на 15,8% и площади листа - на 41,1% по сравнению с контролем. Для эффективной вегетации стевии в условиях закрытого фунта
6. Показано положительное влияние регуляторов роста этамона и карголина на повышение эффективности минеральных удобрений. Усиление ростовых процессов при действии стимуляторов приводит к увеличению поглощения минеральных веществ из почвы, что, в конечном счете связано с более положительным действием высоких доз удобрений на продуктивность стевии, выражающуюся в повышении массы рестения на 58,7-65,3% по сравнению с контролем.
7. Важной особенностью стевии является высокая антиокси-дантная активность полученных из нее препаратов. Это определяет перспективность использования стевиозида в виде биологически активных добавок в пищевых продуктах профилактического назначения. Выявлены незь ачительные различия в содержании хлорогеновой кислоты у форм различной плоидности.
8. Усовершенствован метод контроля количественного содержания стевиозида с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии I. процессе технологической переработки и выделения стевиозида из растительного сырья. Метод позволяет не только контролировать содержание стевиозида в экстракте и продуктах переработки стевии, а дает возможность проводить массовые анализы при отборе растительных образцов на содержание других сладких гликозидов. Применение комбинации методов многоволновой ВЭЖХ и главных компонент позволяет выделить идентификационные признаки экстракта стевии для последующего их использования при определении подлинности этого экстракта.
9. Определены научно-методические принципы процесса очистки полученного экстракта из растительного сырья стевии, основанные на обессоливании, обесцвечивании экстракта ионитами без использования дорогостоящих и ядовитых реактивов. Это явилось отдельным этапом при создании принципиальной схемы переработки сухих листьев стевии на пилотной установке производительностью 10 кг сухих листьев за смену, что позволяет рекомендовать ее для получения концентрата сладких веществ стевии в полупромышленных условиях.
10. Рецептуры использования стевии как источника низкокалорийных подслащивающих компонентов в производстве молочных продуктов диетического назначения позволяют получать ценные в медицинском плане коктейли, йогурты и другие прюдукты, обладающие высокими вкусовыми качествами.
Предложения по практическому использованию результатов исследований
1. Разработанный метод выращивания семенных растений для получения семян в условиях закрытого фунта, основанный на удлинении периода вегетации может быть использован в сельскохозяйственном производстве.
2. Для улучшения качества выделяемого концентрата сладких веществ стевии из растительного сырья рекомендуется солевая очистка с использованием неорганических соединений, которая является отдельным важным этапом при переработке.
3. Усовершенствованная методика количественного определения стевиозида с использованием высокоэффективной жидкостной хромато-фафии, рекомендуется для контроля в процессе переработки растительного сырья и проведении массовых анализов при отборе растительных образцов.
4. Разработанные рецептуры низкокалорийных диетических молочных продуктов могут быть рекомендованы для использования в пищевой и молочной промышленности.
Список основных опубликованных работ по теме диссертации
1. Растениеводство Центрально-Черноземного региона: учебник для студентов высших учебных заведений по афономическим специальностям. / Федотов В.А., Коломейченко В.В.; Верзилина Н.Д. и др.-Воронеж: Центр духовного возрождения Черноземного края, 1998. -464с.
2. Верзилина Н.Д. Практикум по физиологии растений с основами биохимии: учебное пособие / Верзилина Н.Д., Олейникова Е.М., Рубцов А.Н. - Воронеж: ВГАУ, - 2003. - 150 с.
3. Филатов Г.В. Физиологическая генетика продукционных процессов сельскохозяйственных растений /Филатов Г.В., Шевченко В.Е., Верзилина Н.Д. - Воронеж: ФГОУ ВПО ВГАУ, 2003. - 249с.
4. Верзилина Н.Д. Онтогенез и продуктивность растений / Верзилина Н.Д. - Воронеж: ВГАУ, 2005. - 195 с.
5. Полянский К.К. Использование концентрата стевии в пищевых продуктах / Полянский К.К., Подпоринова Г.К., Верзилина Н.Д. // Вестник РАСХН. 2004. - №5. - с.86-88.
6. Верзилина Н.Д. Особенности семенного размножения стевии в Центрально-Черноземной зоне / Верзилина Н.Д., Жужжалова Т.П., Знаменская В.В., Зимин М.И. // Вестник РАСХН. 2005,- №4.-С.31-33.
7. Верзилина Н.Д. Формирование ассимиляционной поверхности стевии в связи с ее плоидностью / Верзилина Н.Д. // Вестн. РАСХН.
- 2005. - .Vk5.- С. 34-35.
8. £>ерзилина Н.Д. Особенности ростовых процессов стевии в связи с плоидностью / Верзилина Н.Д., Филатов Г.В. // Докл. Россель-хозакадемии. - 2004. -№5. - С.38-39
9. Полянский К.К. Совершенствование технологии получения концентрзта стевии /Полянский К.К., Верзилина Н.Д., Подпоринова Г.К. // Пищевая промышленность. - 2004. - №9. - С. 87-88.
10. Соколов М.И. Экспресс-анализ Сахаров методом высокоэффективной »идкостной хроматографии / Соколов М.И., Верзилина Н.Д., Рудаков О.Б. // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2004. - №3.
- С. 94-95.
11. Подпоринова Г.К. Изучение химического состава стевии / Подпоринова Г.К., Верзилина Н.Д., Полянский К.К. // Пищевая промышленность. - 2005.- №7. - С. 68
12. Подпоринова Г.К. Получение порошкообразного подсластителя из стевии с использованием распылительной сушки / Подпоринова Г.К., Полянский К.К., Верзилина Н.Д., Богомолов Д.М. // Пищевая промышленность - 2005.-№8. - С. 75.
13. Подпоринова Г.К. Прогрессивные способы извлечения дитер-пеновых гликозидов из стевии / Подпоринова Г.К., Полянский К.К., Верзилина Н.Д. // Пищевая промышленность. - 2004. №12. - С. 61.
14. Рудаков О.Б. Контроль стевиозида в сырье методом высокоэффективно й жидкостной хроматографии / Рудаков О.Б., Верзилина Н.Д., Федоров C.B., Полянский К.К. // Молочная промышленность. - 2004.
- № 7. - С. 54-55.
15. Пономарев А.Н. Натуральный подсласитель из стевии / Пономарев А. П., Подпоринова Г.К., Верзилина Н.Д. и др. // Молочная про-мышленьость. - 2005. - №1,- С. 42.
16. Подпоринова Г.К. Стевия и продукты её переработки: использование при производстве продуктов лечебно-профилактического назначения / Подпоринова Г.К., Полянский К.К., Верзилина Н.Д. // Изв. высш. учгб. заведений «Пищевая технология». - 2005 .-№4.- С. 38-39.
17. Верзилина Н.Д. Влияние корневых остатков некоторых сахароносных культур на активность гидролитических ферментов почвы / Верзилина Н.Д. // Молодые ученые и специалисты - сельскому хозяйству: Материалы обл. науч.-практ. конф. -Курск, - 1987.- С. 17-18.
18. Верзилина Н.Д. О возможности культуры стевии в условиях ЦЧЗ в свои с её агробиологическими особенностями / Верзилина Н.Д. // Доклады науч. конф. гос. аграр. ун-та: резервы стабилизации аграрного производства. - Воронеж, 1996. - С.14-15.
19. Верзилина Н.Д. О возможности культуры стевии в условиях Центрально-Черноземной полосы / Верзилина Н.Д. // Проблемы интродукции v экологии Центрального Черноземья: Сб. науч. тр. ВГУ: - Во-
ронеж, 1997. - С. 122-124.
20. Верзилина Н.Д. Экологическая роль фитоценозов в с /кцессиях почвенных микроорганизмов / Верзилина Н.Д. // Проблемы интродукции и экологии Центрального Черноземья: Сб. науч. тр. ВГУ:. - Воронеж, 1997.-С. 118-122.
21. Верзилина Н.Д. Морфологические особенности стевии в Центрально-Черноземной полосе / Верзилина Н.Д. // Материалы Всероссийской конференции «Научное наследие П.П. Семенова-Тяньшанского и его роль в развитии современной науки»: - Липецк, 1997. - С. 17.
22. Верзилина Н.Д. Влияние полевых культур и их корнег.ых остатков на активность окислительно-восстановительных ферментов / Верзилина Н.Д. // Науч. основы совершенствования систем земледелия: Сб. науч. тр. - Воронеж, 1997. - С. 84-88.
23. Верзилина Н.Д. Морфолого-анатомические особенности стевии в условиях Центрально-Черноземной зоны / Верзилина Н.Д., Камаева Г.М. // Труды междунар. конф. по анатомии и морфологии растений. -СПб., 1997,- С.24-25.
24. Верзилина Н.Д. Морфолого-анатомические характеристики стевии при интродукции в условиях ЦЧП / Верзилина Н.Д., Хвостова О.Н. // Материалы IV междунар. конф. медицинской ботаники. - Киев, 1997. -С. 187-189.
25. Верзилина Н.Д. Интродукция и рациональное использование стевии в агрокультуре / Верзилина Н.Д. // Рациональное использование ресурсного потенциала в агропромышленном комплексе: материалы Всерос. науч.-практ. конф. - Воронеж, 1998. - С. 79.
26. Верзилина Н.Д. Морфолого-анатомические особенности репродуктивных органов стевии в условиях ЦЧЗ / Верзилина Н.Д. // Интродукция растений и отдаленная гибридизация: сб. науч. тр. междунар. конф., посвящ. 100-летию со дня рождения Н.В. Цицина. - Киев, 1998. - с. 82-85.
27. Верзилина Н.Д. Влияние регуляторов роста на эффективность размножения стевии зелеными черенками. / Верзилина Н.Д. // Актуальные вопросы современного земледелия ЦЧЗ: материалы науч.-практ. конф. - Курск, 2000. - С. 14-17.
28. Верзилина Н.Д. Структурная организация растений стевии / Верзилина Н.Д. // Труды II междунар. конф. по анатомии и морфологии растений. - СПб., 2002. - С. 96-98.
29. Верзилина Н.Д. Повышение эффективности зеленого черенкования стевии при интродукции в ЦЧЗ // Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования: V междунар. симпозиум: материалы симпозиума. - 2003. - С. 139-142.
30. Знаменская В.В. Основные способы размножения стевии при интродукции в Центральной Черноземной зоне / Знаменская З.В., Вер-
зилина Н.Д., Жужжалова Т.П. // Итоги науч.-исслед. работ афон. факультета: Сб. науч. тр., посвящ. 90 - летаю со дня рождения афономи-ческого факультета, ВГАУ - Воронеж, - 2004. - С.40-46.
31. Верзилина Н.Д. Биологические особенности роста и развития стевии в условиях умеренного климата / Верзилина Н.Д., Жужжалова Т.П., Дубянский М.М. // Итоги науч.-исслед. работ афономического факультета: Сб. науч. тр., посвящ. 90- летию со дня рождения афономического факультета, ВГАУ, - Воронеж, - 2004. - С.26-33.
32. Верзилина Н.Д. Морфофизиологические характеристики растений стевии с различным уровнем плоидности / Верзилина Н.Д., Филатов Г.В. // Итоги науч.-исслед. работ афон. факультета: Сб. науч. тр., посвящ. 90- летию со дня рождения афон. факультета, ВГАУ, - Воронеж, -2004.-С. 176- 184.
33. Верзилина Н.Д. Фотосинтетическая активность растений стевии с различным уровнем плоидности / Верзилина Н.Д., Филатов Г.В. // Итоги науч.-исслед. работ афономического факультета: Сб. науч. тр., посвящ. 90- летию со дня рождения афон. факультета, ВГАУ, - Воронеж, -2004.-С. 184- 192.
34. Рудакова Л.В. Амперометрическое определение антиоксидант-ной активности стевии и других растительных экстрактов / Рудакова Л.В., Полянская Н.К., Верзилина Н.Д. и др. // Материалы 2-ой Всерос. конф. «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования», - Воронеж, ВГУ, - 2005, С. 31-34.
35. Подпоринова Г.К. Изучение химического состава растительного сырья стевии / Подпоринова Г.К., Верзилина Н.Д. // Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования:тез. докл. науч.-практ. конференции. - Пущино, 2005.- С.123-125.
36. Верзилина Н.Д. Получение идентификационных признаков экстракта стевии комбинацией методов многоволновой ВЭЖХ и главных компонент / Гавршшна В.А., Сычев С.Н., Верзилина Н.Д., Подпоринова Г.К., Полянский К.К. // Пищевая промышленность. (В печати).
Тип. ВГАУ. 3. № 275 - 2005 г. 2,0 п. л. Т. 100.
! i
I >
]
i i i
i ¡
i
i ¡
i
*
»
л
d
Í168 75
РНБ Русский фонд
2006-4 12568
Содержание диссертации, доктора сельскохозяйственных наук, Верзилина, Наталья Дмитриевна
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. Современное состояние агробиологических и физиолого-биохимических исследований стевии (обзор литературы).
1.1 Происхождение, распространение и интродукция стевии.
1.2 Соединения специализированного обмена стевии.
Глава 2. Условия и методика проведения исследований.
2.1Почвенно-климатические условия лесостепи ЦЧР.
2.2 Объекты, методы и техника исследований.
Глава 3. Агробиологические особенности стевии при выращивании в условиях ЦЧР.
ЗЛМорфологоанатомические особенности стевии.
3.2Возрастные изменения стевии в онтогенезе.
Глава 4. Изучение способов семенного и вегетативного размножения стевии.
4.1 Особенности семенного размножения.
4.20собенности вегетативного размножения.
Глава 5. Физиологические и физиолого-генетические аспекты формирования продуктивности стевии.
5.1 Формирование и функционирование ассимиляционного аппарата.
5.2Формирование и функционирование корневой системы.
5.3Физиолого-генетические особенности формирования продуктивности полиплоидных форм стевии.
Глава 6. Влияние абиотических факторов на повышение продуктивности стевии.
6.1 Влияние регуляторов роста на продуктивность рассады стевии в условиях закрытого грунта.
6.2 Действие минеральных удобрений и физиологически активных веществ на продуктивность стевии.
Глава 7. Биохимические характеристики вегетативных органов стевии.
7.1 Аминокислотный состав вегетативных органов стевии.
7.2 Антиоксидантная активность препаратов стевии.
7.3 Выделение стевиозида из растительного сырья.
7.4 Контроль содержания стевиозида в растительном сырье.
7.5 Рецептуры молочных продуктов с использованием экстракта стевии.
7.6 Использование метода главных компонент при анализе экстракта стевии.
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Стевия (Stevia rebaudiana Bertoni) в Центральном Черноземье"
Актуальность
Цивилизация человечества тесным образом была связана с введением в культуру диких растений и дальнейшей селекцией их на урожайность и качество продукции. Новые культуры чрезвычайно обогатили пищевой рацион людей, изменяя иногда традиционные особенности питания ряда народов.
Необходимо отметить, что культуры, входящие в рацион питания человечества, традиционно были высококалорийными. Это объясняется тем, что в прежние времена деятельность большинства людей была связана с тяжелым физическим трудом, когда для восполнения затраченной энергии требовалась калорийная пища. Подобные традиции высококалорийного питания вошли в культуру многих народов, и интенсивное сельскохозяйственное производство развитых стран способно сейчас производить большое количество высококалорийных продуктов питания. Особенно это видно на примере сахарной свеклы и сахарного тростника и получаемого из них сахара. Углеводы в настоящее время являются важным элементом питания, в первую очередь как подсластители, а также как высокоэнергетический продукт, и медицинские нормы питания предусматривают довольно высокое количество потребления углеводов. Однако сложившийся стереотип питания привел к тому, что люди в развитых странах, производящих достаточное количество сельскохозяйственной продукции, потребляют с пищей чрезмерное количество калорий, и особенности такого питания вызывает у большого количества людей появление избыточного веса и даже ожирение. Это может быть вызвано в определенной степени нерациональным питанием, когда потребляется большое количество углеводов, которые, как известно, входят в состав хлебобулочных и кондитерских изделий, различных напитков. Огромная часть населения Земли начинает свой трудовой день с чашки чая или кофе, непременным компонентом которой служит сахар, чрезмерное использование которого является, как считают медики, причиной увеличения людей, больных диабетом. Поэтому, в настоящее время, возникает необходимость снижения потребления человеком с пищей количества калорий, в том числе и тех, которые поступают в организм в виде углеводов, например, моно -и дисахаров, способных, как известно, быстро усваиваться и легко попадать в кровь, что представляет угрозу здоровью, в первую очередь, людям, больным диабетом. Исключить из питания сахар, придающий высокие вкусовые качества получаемым с их помощью продуктам, не представляется возможным, так как это значительно обесценит вкусовую гамму кулинарных изделий. Поэтому в настоящее время должна измениться система питания человека, и на смену высококалорийным продуктам должна приходить пища с относительно невысокой энергетической ценностью, но с высоким содержанием витаминов, минеральных веществ и физиологически активных веществ. Вследствие этого особую роль приобретают растения, имеющие низкую калорийную эффективность, но обладающие традиционными качествами. К таким культурам относится растение, родиной которого является Южный Парагвай, - стевия, содержащая в себе сумму дитерпеновых гликозидов, основным из которых является стевиозид, обладающие высокой степенью сладости при практически нулевой калорийности. Кроме того, эти вещества не требуют для своего усвоения выработки инсулина и, следовательно, могут употребляться в пищу людьми, больными сахарным диабетом. В ряде стран комплекс сладких гликозидов стевии применяют при производстве напитков, кондитерских и кулинарных изделий, при приготовлении жевательной резинки, зубной пасты. Пищевая промышленность России также начинает проявлять интерес к таким натуральным диетическим заменителям сахара. Внедрение стевии в сельскохозяйственное производство и налаживание промышленного производства стевиозида и различных пищевых продуктов на его основе будут способствовать созданию в России внутреннего рынка подсластителей.
Интродукция стевии в центральную Европу и, особенно в Россию, начата только в последние десятилетия (Балашова, 1997). Кроме Южной Америки, стевия, благодаря интродукции, культивируется в ряде стран, где за ней видят большое будущее (Sasson, 1988). В России, Украине, Белоруссии и Грузии стевия вводится в культуру только с начала 80-х годов, хотя о "медовой траве" в России известно еще с 50-х годов (Алексеев, 1956).
Распространение в различных ареалах полезных для человека растений всегда было характерной чертой развития мирового сельского хозяйства. Именно благодаря интродукции расширились площади возделывания многих зерновых и зернобобовых культур, технических, овощных и кормовых растений (рожь, пшеница, кукуруза, сахарная свекла, картофель, подсолнечник и др.), имеющий самые различные центры происхождения. Поэтому в настоящее время все большее значение приобретает наука об интродукции, цель которой заключается в переселении отобранных, полезных растительных ресурсов в новые условия их произрастания, что должно сопровождаться их разносторонним и комплексным изучением (Андреев, Головкин, 1998 Кириченко, 1998, Кузьмин 1998; Коровин, 1998; Коровин, Демидов, 1998; Скворцов, 1998; Трулевич, 1998; Агаев, 2000). Интродукционные исследования, следовательно, являются научным направлением в разработке методов привлечения растений для переноса их в новые природно-климатические условия, для изучения реакции растений на изменившиеся факторы внешней среды и оценки результатов испытания растений в несвойственных природе условиях (Некрасов, 1980).
Современную интродукцию растений нужно рассматривать как интегральную науку, использующую не только комплекс традиционных ботанических исследований, но и современные методы других биологических дисциплин. Поэтому современная интродукция представляет собой междисциплинарную область исследований (Андреев, 1998; Кириченко, 1998; Коровин, Демидов; 1998; Агаев, 2000).
При интродукции нередко возникает проблема, когда изучаемые растения обнаруживают неспособность приспособиться к новым условиям существования, если таковые отличаются значительным образом от первоначальных. Это обусловлено тем, что способность растений приспосабливаться к новым условиям среды ограничивается нормой реакции генотипа. Поэтому успешная их интродукция связана с выведением новых сортов и форм, экологически более стойких, чем исходный материал. Акклиматизация является одной из форм интродукции при активном вмешательстве человека в наследственность растения, когда его приспособленность к новым условиям обитания происходит за счет генетических изменений на основе естественного и искусственного отборов (Некрасов, 1980; Агаев, 1998; Виноградова, 1998; Коробова, 1998). Важными методами преобразования природы растения при перенесении его в новые экологические условия являются, по мнению Н.В.Цицина (1974), современные методы генетики.
Выведение новых сортов и форм, экологически более стойких, чем исходный материал, связано с генетическими преобразованиями на основе естественного и искусственного отборов (Виноградова, 1998; Коробова, 1999).
Продуктивность культурных растений или растений, вводимых в культуру, зависит как от биологических особенностей растений, а также от степени обеспеченности их определенными условиями жизни: световыми, температурными, почвенными факторами и др. Поскольку растения в ходе эволюции выработали определенные требования к условиям своего обитания, то отрицательный эффект при интродукции какой-либо культуры может являться результатом новой эколого-почвенной обстановки относительно прежнего места обитания. В соответствии с этим научная работа по интродукции растений должна проводиться не только в направлении улучшения уже существующих растений и выведении новых более продуктивных сортов, но и в выявлении и создании условий, обеспечивающих их наивысшую продуктивность (Лапин, 1956, Лапин, 1978).
Растительный организм проявляет специфические и неспецифические реакции адаптации к биотическим и абиотическим факторам среды. Кроме изменений морфолого-анатомического строения органов и тканей растений, происходит перестройка различных физиологических функций и биохимических процессов (Некрасов, 1980). Поэтому большое значение имеет физиологическое и биохимическое изучение интродуцируемых растений, выявление их защитных реакций и подбор физиологически активных веществ эндогенного и экзогенного происхождения, повышающих их устойчивость (Лапин, 1978).
Физиология растений как дисциплина, исследующая такие важные процессы жизнедеятельности растительного организма, как фотосинтез и формирование продуктивности, минеральное питание, водообмен, процессы, связанные с ростом и развитием, и др., должна служить научной базой мероприятий по рациональному использованию интродуцируемых культур в определенных почвенно-климатических зонах.
Отсюда следует, что интродукция растений должна проводиться как в направлении выявления и создания условий, обеспечивающих наиболее оптимальные условия для их роста и развития и формирования максимальной продуктивности (эти вопросы являются прерогативой, в основном, физиологии растений), так и в направлении улучшения уже существующих растений и выведения новых, более устойчивых и продуктивных селекционных форм (это связано, в первую очередь, с генетико-селекционным направлением исследований).
Необходимо отметить, что в настоящий период в ряде стран осуществляется интенсивное изучение биологических особенностей, роста и развития стевии в естественных и искусственных условиях, биохимизма синтеза гли-козидов и экстрагирования их, возможностей промышленного использования гликозидов в пищевой промышленности. Однако такие исследования проводились, как правило, в климатических условиях, отличных от условий Центрально-Черноземной полосы, и потому для стевии, выращиваемой в нашей области, необходимы разработки применительно к условиям зоны, что и явилось целью исследований. Еще только начавшаяся интродуцироваться в России и конкретно в Центрально-Черноземной зоне стевия изучена, на наш взгляд, недостаточно. Это можно отнести к области изучения биологических особенностей, онтогенетического развития стевии, ее физиологии в климатических условиях зоны, и знание этих аспектов жизнедеятельности данной культуры должно явиться отправным пунктом для разработки агротехнических мероприятий по возделыванию стевии. Широкое использование стевии в нашей стране затрудняется недостаточной изученностью этой культуры в агробиологическом, физиолого-биохимическом плане.
В связи с этим постановка темы в направлении изучения агробиологических и физиолого-биохимических свойств стевии при интродукции в центральном Черноземье России весьма актуально.
Целью исследований было установить основные агробиологические особенности роста и развития стевии, способствующие повышению ее продуктивности в условиях ЦЧР и выявить ценные биохимические свойства растительного сырья и продуктов его переработки. Работа выполнялась в соответствии с целевыми научными программами, координируемыми Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в соответствии с планом НИР ФГОУ ВПО «Воронежский госагроуниверситет имени К.Д.Глинки».
В задачи исследований входило:
1. Изучить морфологоанатомические, физиолого-биохимические особенности стевии в процессе онтогенеза.
2. Изучить способность стевии к вегетативному и семенному размножению стевии и разработать метод выращивания семенных растений для получения семян в условиях закрытого грунта.
3. Установить влияние удобрений и физиологически активных веществ на повышение продуктивности стевии.
4. Выявить изменения физиологических функций у форм стевии различной плоидности.
5. Усовершенствовать методику выделения стевиозида из листьев стевии и контроля его содержания в растительном сырье и продуктах его переработки.
6. Изучить аминокислотный и углеводный состав, антиоксидантную активность стевии и продуктов ее переработки, характеризующие данную культуру как источник ценной пищевой добавки для питания человека.
Положения диссертации, выносимые на защиту
1. Морфолого-физиологические особенности стевии и их взаимосвязь с возрастными периодами развития в условиях ЦЧР расширяют представление о природе онтогенеза и определяют степень продуктивности растений при интродукции и используются для определения степени адаптации в новых условиях возделывания.
2. Разработанный способ позволяет в условиях закрытого грунта выращивать семенные растения стевии и получать семена.
3. Использование регуляторов роста дает возможность обеспечивать активизацию ростовых процессов, улучшать качество получаемой рассады и повышать продуктивность стевии за счет более эффективного использования минеральных удобрений.
4. Изменения физиологических и биохимических функций у растений стевии разной плоидности свидетельствуют о зависимости функционирования ассимиляционного аппарата и продуктивности от уровня компенсационных процессов полиплоидных организмов.
5. Химический состав и антиоксидантная активность стевии и продуктов ее переработки позволяют характеризовать данную культуру как ценный объект для использования в рационе питания человека в качестве пищевой добавки.
6. Использование современных физико-химических методов позволяет проводить высококачественную очистку продуктов переработки стевии и контролировать содержание стевиозида.
Научная новизна исследований
Впервые в климатических условиях ЦЧР были исследованы агробиологические особенности стевии, дана ее ботаническая характеристика. Выявлены морфологоанатомические особенности вегетативных и генеративных органов, свидетельствующие об отношении стевии к растениям мезофитного типа и подтверждена ее принадлежность к семейству Asteraceae.
Установлена продолжительность этапов и особенности органогенеза в процессе онтогенеза, общий ход которого подчиняется закономерностям развития поликарпических растений с побегами, развивающимися по моно-карпическому типу.
Установлено, что удлинение вегетационного периода до 5 месяцев способствует переходу растений в генеративный период, активному цветению и плодоношению в условиях закрытого грунта. Это явилось основой для разработки метода выращивания семенных растений, использование которого позволяет получать семена. Основным фактором способствующим регулированию процессов вегетативного роста и цветения является укорочение фотопериода до 12 часов.
Показано, что в формировании и функционировании ассимиляционного аппарата стевии участвует вся листовая поверхность при наибольшей фотосинтетической активности листьев средних ярусов, но при раннем отмирании нижних листьев. Посчитано критическое число клеток в микроареолах листа стевии, составляющее 1545 штук, определяющее ростовые процессы и переход растений от одного этапа развития растений к другому. Установлена тесная связь корневой системы и ассимиляционного аппарата, способствующая улучшению жизнедеятельности растений. Эти исследования расширяют и углубляют теоретические представления о ростовых процессах и природе фотосинтеза стевии и имеют значение в практике растениеводства для повышения продуктивности данной культуры.
Получены оригинальные данные по изучению морфолого-физиологических характеристик форм стевии различной плоидности, где триплоид превосходил диплоидную и тетраплоидную формы по приросту надземной массы и толщине листа, которые обеспечивали ему повышенную фотосинтетическую активность и более высокую продуктивность, которая связана не столько с уровнем плоидности, сколько с уровнем компенсационных процессов полиплоидного организма.
Определено влияние регуляторов роста экзогенного происхождения на степень использования стевией минеральных веществ, а также на получение высококачественной рассады. Установлено, что ростовые вещества нового поколения (ретардант с проауксиновым эффектом 577) в сочетании с минеральными удобрениями стимулируют рост и развитие черенков, способствуют полной приживаемости растений.
Получены, неизвестные ранее, данные о содержании аминокислот в вегетативных органах стевии различной плоидности. Достоверно показано, что сорт Рамонская сластена отличается высоким содержанием глицина в верхних листьях и относительно невысокой концентрацией серина, тогда как у дикой формы наблюдается обратная зависимость. Это свидетельствует о связи свободных аминокислот листьев стевии с ее окультуриванием, которая приводит к изменению в распределении и содержании некоторых аминокислот.
Получены новые данные о высокой антиоксидантной активности стевии и продуктов ее переработки, что определяет перспективность использования стевиозида в виде биологически активных добавок в пищевых продуктах профилактического назначения. Выявлены незначительные изменения в содержании хлорогеновой кислоты характеризующей антиоксидантную активность у форм различной плоидности.
Определены научно-методические принципы процесса очистки полученного экстракта из растительного сырья стевии, основанные на обессоливании и обесцвечивании ионитами экстракта без использования дорогостоящих и ядовитых реактивов. Это послужило отдельным этапом при создании принципиальной технологической схемы переработки сухих листьев стевии.
Усовершенствован метод определения стевиозида на основе жидкостной хроматографии, позволяющий анализировать растительное сырье и продукты его переработки, включая пищевые продукты.
Впервые показано, что применение комбинации методов многоволновой ВЭЖХ и главных компонент позволяет выделить идентификационные признаки экстракта стевии и пищевых продуктов на его основе, что имеет большое практическое значение для использования при определении подлинности вещества.
Практическая значимость заключается в решении народнохозяйственной проблемы введения стевии в ареал возделываемых сельскохозяйственных культур ЦЧР, что позволит широко использовать это ценное продовольственное и лекарственное растение.
Разработанный метод выращивания семенных растений, основанный на удлинении периода вегетации позволит получать семена стевии в условиях закрытого грунта, что будет способствовать распространению данной культуры среди населения.
Выявленные морфологические особенности онтогенеза стевии представляют практический интерес для возделывания этой культуры в полевых условиях ЦЧР.
Установленные закономерности фотосинтеза являются надежной оценкой для выявления наиболее продуктивных форм растений. Полиплоидный материал, обладающий высокой активностью фотосинтеза и повышенной продуктивностью можно рекомендовать для возделывания в условиях ЦЧР.
Полиплоидные формы (триплоиды) обладающие повышенной продуктивностью, активностью фотосинтеза можно рекомендовать для возделывания в условиях ЦЧР и селекционной работе.
Разработанный метод очистки экстракта из растительного сырья стевии рекомендуется для использования в технологической схеме получения очищенного стевиозида.
Усовершенствованный метод определения стевиозида на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии может найти применение в качестве контроля при выращивании стевии и ее первичной и вторичной переработки.
Разработанные рецептуры низкокалорийных диетических молочных продуктов могут быть рекомендованы для использования в пищевой и молочной промышленности.
Метод главных компонент (разновидность корреляционного анализа) дает статистический паспорт вещества и может найти применение в биологических анализах при обработке данных по выделению наиболее значимых показателей.
Результаты исследования могут быть использованы в учебном процессе по биологическим дисциплинам в высших и средних учебных сельскохозяйственных заведениях.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались и получили положительную оценку на:
Международных симпозиумах и научных конференциях: «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования» (2003, 2005 гг., г. Пущино); «Экологические аспекты интенсификации сельскохозяйственного производства» (2002 г., г. Пенза); «Проблемы современного растениеводства» (2002 г., г. Пенза); «Анатомия и морфология растений» (1997, 2002 гг., г. Санкт-Петербург); «Медицинской ботаники» (1997 г., г. Киев); юбилейная конференция к 100-летию со дня рождения Н.В. Цицина (1998 г., г. Киев);
Всесоюзной научной конференции: «Научное наследие П.П. Семенова-Тяньшанского и его роль в развитии современной науки» (1997 г., г. Липецк);
Всероссийских научно-практические конференции: «Молодые ученые и специалисты сельскому хозяйству» (1997 г., г. Курск); «Резервы стабилизации аграрного производства» (1996 г., г. Воронеж); «Рациональное использование ресурсного потенциала в агропромышленном комплексе» (1998 г., г. Воронеж); «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования» (2005 г., г. Воронеж); координационных совещаниях НИИ и вузов Центрально-Черноземного региона: (2000-2005 гг., Воронеж); конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Воронежского ГАУ им. К.Д.Глинки (2000 - 2005 гг.)
Публикации. Материалы диссертационной работы опубликованы в двух монографиях, учебнике и учебном пособии, а также в тридцати пяти научных и научно-методических работах, опубликованных в различных изданиях, в том числе в центральной печати. Приняты к рассмотрению две заявки на изобретения: № регистрации 2005117463 и № регистрации 2005117464.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения , 7 глав, выводов и предложений по практическому использованию результатов исследований, она изложена на 300 страницах машинописного текста, содержит 35 таблиц, 73 рисунка, 12 приложений, список литературы из 480 наименований, в том числе 114 иностранных авторов.
Заключение Диссертация по теме "Растениеводство", Верзилина, Наталья Дмитриевна
Выводы
1. Выявлены особенности прохождения этапов органогенеза стевии и установлена наибольшая продолжительность в онтогенезе II этапа, составляющая в условиях ЦЧР 60 - 90 дней. Общий ход онтогенеза стевии подчиняется закономерностям развития поликарпических растений с побегами развивающимися по монокарпическому типу. Особенностью культуры является замедление в ее развитии с конца мая по конец июня после чего следует период интенсивного роста до сентября.
2. Установлено, что удлинение вегетационного периода до 5 месяцев способствует переходу растений в генеративный период, активному цветению и плодоношению в условиях закрытого грунта. На основе этих исследований разработана методика выращивания семенных растений и получения семян, имеющих высокую лабораторную всхожесть 62-95%. Показано, что основным фактором способствующим регулированию процессов вегетативного роста и цветения является укорочение фотопериода до 12 часов.
3. Определены морфологические изменения в онтогенезе стевии сопровождающие формирование листового аппарата и репродуктивных органов. Показано, что развитие листового аппарата характеризуется плавным переходом от зародышевого типа к низовому и верховому. Наибольшую фото-синтезирующую поверхность формирует средний ярус. Особенностью стевии является отмирание в ходе вегетации ценных, в производственном отношении, нижних листьев, что в конечном счете снижает продуктивность культуры. Поэтому агротехнические мероприятия должны быть направлены на обеспечение роста и сохранности нижних листьев.
4. Определены особенности формирования и функционирования ассимиляционного аппарата и корневой системы полиплоидных форм. Выявлены факторы повышенной продуктивности триплоидной формы. В вегетационных опытах показано, что триплоид превосходил диплоидную и тетраплоид-ную формы по динамике роста, количеству и площади листьев. Масса сухого вещества триплоида на последних этапах развития была больше на 69,2%, чем у диплоида, и на 50,3%, чем у тетраплоида. Как результат деятельности продукционных процессов, масса сухого вещества растений на последних этапах роста у диплоидной, триплоидной и тетраплоидной форм была 2,24, 2,74 и 2,02 грамма и масса сухих корней 1,14, 1,40 и 0,96 грамма соответственно. Это свидетельствует, что в ходе генетических преобразований растений стевии, возможно получение форм, отличающихся ценными признаками, в частности, обладающих более интенсивными продукционными процессами.
5. Показано положительное действие фитогормонов на рост и развитие рассады стевии. Особенно эффективным из них был ретардант с проауксиновым эффектом 577, при действии которого наблюдалось увеличение высоты растений на 59,7%, количества листьев - на 15,8% и площади листа - на 41,1% по сравнению с контролем. Для эффективной вегетации стевии в условиях закрытого грунта
6. Показано положительное влияние регуляторов роста этамона и карто-лина на повышение эффективности минеральных удобрений. Усиление ростовых процессов при действии стимуляторов приводит к увеличению поглощения минеральных веществ из почвы, что, в конечном счете связано с более положительным действием высоких доз удобрений на продуктивность стевии, выражающуюся в повышении массы растения на 58,7-65,3% по сравнению с контролем.
7. Важной особенностью стевии является высокая антиоксидантная активность полученных из нее препаратов. Это определяет перспективность использования стевиозида в виде биологически активных добавок в пищевых продуктах профилактического назначения. Выявлены незначительные различия в содержании хлорогеновой кислоты у форм различной плоидности.
8. Усовершенствован метод контроля количественного содержания стевиозида с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в процессе технологической переработки и выделения стевиозида из растительного сырья. Метод позволяет не только контролировать содержание стевиозида в экстракте и продуктах переработки стевии, а дает возможность проводить массовые анализы при отборе растительных образцов на содержание других сладких гликозидов. Применение комбинации методов многоволновой ВЭЖХ и главных компонент позволяет выделить идентификационные признаки экстракта стевии для последующего их использования при определении подлинности этого экстракта.
9. Определены научно-методические принципы процесса очистки полученного экстракта из растительного сырья стевии, основанные на обессоли-вании, обесцвечивании экстракта ионитами без использования дорогостоящих и ядовитых реактивов. Это явилось отдельным этапом при создании принципиальной схемы переработки сухих листьев стевии на пилотной установке производительностью 10 кг сухих листьев за смену, что позволяет рекомендовать ее для получения концентрата сладких веществ стевии в полупромышленных условиях.
10. Рецептуры использования стевии как источника низкокалорийных подслащивающих компонентов в производстве молочных продуктов диетического назначения позволяют получать ценные в медицинском плане коктейли, йогурты и другие продукты, обладающие высокими вкусовыми качествами.
Предложения по практическому использованию результатов исследований
1. Разработанный метод выращивания семенных растений для получения семян в условиях закрытого грунта, основанный на удлинении периода вегетации может быть использован в сельскохозяйственном производстве.
2. Для улучшения качества выделяемого концентрата сладких веществ стевии из растительного сырья рекомендуется солевая очистка с использованием неорганических соединений, которая является отдельным важным этапом при переработке.
3. Усовершенствованная методика количественного определения стевиозида с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, рекомендуется для контроля в процессе переработки растительного сырья и проведении массовых анализов при отборе растительных образцов.
4. Разработанные рецептуры низкокалорийных диетических молочных продуктов могут быть рекомендованы для использования в пищевой и молочной промышленности.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Стевия в последнее время привлекает внимание исследователей в связи с наличием у нее подслащивающих веществ с низкой калорийностью, что имеет большое значение для людей, которым противопоказано потребление высококалорийных продуктов.
Хотя стевия является культурой южного происхождения и имеет в связи с этим свои биологические особенности - требования к длине дня, температуре, влажности почвы и воздуха, показана возможность интродукции и возделывания ее во многих районах страны, в том числе и в нашей зоне. Но для того, чтобы успешно возделывать стевию в климатических условиях нашей зоны, необходимы исследования ее биологических составляющих характеристик, вследствие чего нами было проведено изучение особенностей ее органогенеза, морфогенеза, требований к долготе дня, формирования ее генеративных органов, листьев, представляющих собой, во-первых, ассимиляционный аппарат, определяющий продуктивность растений, и, во-вторых, наиболее хозяйственную часть продукции стевии. Изучение ее биологических особенностей показало, что эта многолетняя теплолюбивая культура, в отличие от своего естественного ареала, может возделываться в нашей зоне по однолетнему циклу с использованием вегетативного размножения. Установлено, что особенностью стевии является замедление ее роста и развития с конца мая и по конец июня, после чего следует период интенсивного роста до сентября. Стевия проходит те же 12 этапов органогенеза, которые характерны для цветковых растений. Характерной особенностью органогенеза стевии является продолжительность II этапа, составляющая 60-90 дней. Показана связь определенных этапов органогенеза с формированием определенных элементов продуктивности растения - числом узлов, междоузлий, листьев, числом и размером семян в плодах. Таким образом, полученные данные дают не только более полное представление о процессах морфогенеза, но и позволяют в определенной степени осуществлять контроль за репродуктивным процессом с целью реализации наиболее важных элементов продуктивности стевии.
Изучение особенностей формирования листьев у стевии показало, что наибольшей фотосинтезирующей поверхностью характеризуются листья среднего яруса, а для листьев нижнего яруса характерно, начиная с определенного момента, их отмирание. Отсюда следует, что агротехнические мероприятия при выращиванию стевии должны быть направлены на сохранение наиболее ценной в производственном отношении части стевии - ее листьев, а селекционная работа должна вестись в направлении создания форм с наиболее продолжительным временем функционирования листьев нижнего яруса.
Вследствие климатических особенностей нашей зоны и биологических особенностей стевии выращивание ее возможно рассадным способом. Получение семян можно осуществить только при удлинении вегетационного периода в условиях тепличного комплекса, что, естественно, связано с дополнительными затратами труда и средств. Однако, это имеет важное значение для селекционных работ, связанных с проведением скрещиваний. Поэтому нами предложена методика выращивания растений стевии, которая позволяет повысить завязываемость семян и их качество. Установлено, что для индукции цветения и плодоношения достаточно выдержать стевию на 12-часовом фотопериоде в течение 4-8 дней. Также были разработаны приемы, способствующие получению качественной рассады стевии. Подобран состав субстрата для черенков, который обеспечивал наилучшее формирование корней, определен оптимальный срок черенкования.
В связи с возможностью селекционного улучшения растений, нами были исследованы формы стевии, отличающиеся плоидностью, и было показано, что триплоидная форма в сравнении с диплоидом и тетраплоидом имела ряд преимуществ по количеству и площади листьев, их массе, продолжительности функционирования нижних листьев, что обусловило ее более высокую продуктивность. Таким образом, этим было показано, что в ходе генетических преобразований растения возможно улучшение его физиологических характеристик, способствующих увеличению продуктивности данной культуры.
Большую роль в увеличении продуктивности сельскохозяйственных культур, их устойчивости к неблагоприятным воздействиям внешней среды, ускорении роста и развития играют природные фитогормоны и их синтетические аналоги. На получение сильной и хорошо развитой рассады в наших исследованиях большой эффект оказывала обработка зеленых черенков ростовыми веществами, среди которых наиболее действенным был ретардант с проауксиновым эффектом 577, положительно влиявшим на высоту растений, площадь листьев, облиственность. Также применение ряда фитогормонов позволило значительно - на 23-27% - повысить действие минеральных удобрений на продуктивность стевии. Изучение биохимических особенностей стевии, в частности, содержания свободных аминокислот в листьях различных селекционных образцов, показало, что изменение генетической системы растения в ходе окультуривания и полиплоидизации приводит к изменению в содержании некоторых аминокислот. Важной особенностью стевии является, показанная в наших экспериментах, высокая антиоксидантная активность ее препаратов, что обусловливает высокую медицинскую ценность этого растения. Кроме того, было выявлено генотипическое разнообразие стевии по содержанию хлорогеновой кислоты, обладающей антиоксидантной активностью, что обусловливает возможность селекции стевии на увеличение содержания в ней антиоксидантов.
Результаты проведенных экспериментов позволили нам усовершенствовать технологическую схему переработки сухих листьев стевии для получения концентрата стевиозида. Предложена пилотная установка, с помощью которой в полупромышленных условиях возможно проводить глубокую очистку экстракта стевии с производительностью 10 кг сухих листьев за смену. Разработанная нами методика контроля содержания стевиозида в растительном сырье с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, отличающаяся простотой определения и возможностью массового анализа, может применяться как для анализа продуктов питания, так и для анализа селекционных образцов. С помощью этого метода был выделен образец, имеющий повышенное содержание стевиозида, который был рекомендован для селекционной работы по получению форм с повышенным содержанием этого подсластителя.
Таким образом, в результате наших разносторонних исследований были изучены биологические особенности стевии и были выявлены такие ее особенности, которые необходимо учитывать при возделывании в условиях нашей зоны, как замедление ее роста в первый период вегетации, продолжительность II этапа морфогенеза, характеристика фотоморфогенеза. Исследованы вопросы формирования ассимиляционного аппарата растений стевии в связи с возможностью селекционного улучшения параметров ее фотосинтетического аппарата. Разработаны методы, способствующие получению высококачественной рассады и семенного материала. Изучено действие фитогор-монов в отношении усиления действия минеральных удобрений на продуктивность стевии. Разработана технологическая схема выделения стевиозида и методика контроля его содержания в растительном сырье.
Была проведена работа по использованию стевии как источника натуральных низкокалорийных подслащивающих компонентов диетического назначения и получены продукты: молочные коктейли, йогурты, имеющие гармоничный вкус и нежную консистенцию.
Подытоживая результаты нашей работы, необходимо отметить, что исследованиями были затронуты, с одной стороны, основные моменты биологической деятельности стевии, связанные с теоретическими и практическими задачами ее возделывания в климатических условиях зоны и приемами повышения ее продуктивности, а с другой, биохимия и технология процессов, связанных с получением основных, представляющих интерес в пищевом отношении, продуктов жизнедеятельности стевии - стевиолгликозидов.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора сельскохозяйственных наук, Верзилина, Наталья Дмитриевна, Б.м.
1. Агаев Ю.М., Гуламов А.А. Закономерности клеточногоморфогенетического эффекта плоидности (на примере рода Morns L.)// Экспериментальная полиплоидия у шелковицы. Баку: ЭЛМ, 1976. - С. 232-255.
2. Агафонов Н.С., Кутовой А.А., Шумейко А.Ф. Влияние пролина на метаболические процессы, связанные с морозостойкостью озимой пшеницы// Сборник научных работ НИИСХ ЦЧП им. В.В.Докучаева. -1975.- Т. 9, вып. 1.-С. 11-18.
3. Агроклиматические ресурсы Белгородской области. Л.: Гидрометеоиздат,- 1978, -№7.-79 е.
4. Агроклиматические ресурсы Липецкой области. 1971,
5. Агроклиматические ресурсы Воронежской области. -Л.: Гидрометеоиздат, 1972, 119 е.
6. Агроклиматические ресурсы Курской области. Л.: Гидрометеоиздат,- 1971.,- 104 с.
7. Агроклиматические ресурсы Орловской области. Л.: Гидрометеоиздат, -1972.,- 119 с.
8. Агроклиматические ресурсы Тамбовской области. 1974., - 102 с.
9. Агроклиматические ресурсы областей ЦЧР, 1971, 1972, 1974
10. Алексеев В.П. Медовая трава "каа-хэ"// Бюллетень ВНИИ чая и субтропических культур. №1. 1956. - С. 12-14, С. 168-169.
11. Алиев Д.А. Фотосинтетическая деятельность, минеральное питание и продуктивность растений. Баку: Изд. "ЭЛМ", 1974. - 335 с.
12. Алиев Д.А., Азизов И.В., Касумов К.М., Асадов А.А. Особенности первичных реакций фотосинтеза в хлоропластах различных генотипов пшеницы// Известия АН АзССР, сер. биол. наук. 1988. - N 3. - С. 3-12.
13. Алиев Д.А., Казибекова Э.Г. Значение фотосинтетических признаков в урожайности и использование их в селекции идеальной пшеницы// Фотосинтез и продукционный процесс. М.: Наука, 1988. - С. 237-242.
14. Алиев Д.А., Керимов С.Х., Ахмедов А.А., Джангиров А.А. Транспорт и распределение ассимилятов при различных донорно-акцепторных отношениях у генотипов пшеницы// Изв. АН Азербайджана, сер. биол. наук. 1990.-N1.-С. 114-119.
15. Алиев Д.А., Керимов С.Х., Гулиев Н.М., Ахмедов А.А. Особенности метаболизма углерода у генотипов пшеницы, контрастных по фотосинтетическим признакам// Физиол. раст. 1996. - Т. 43, N 1. - С. 4956.
16. Амелин А.В. Морфобиологические особенности растений гороха в связи с созданием сортов усатого типаЛ Селекция и семеноводство. 1997. - N 2.-С. 9-14.
17. Амелин А.В. Морфофизиологические основы повышения эффективности селекции гороха: Автореф. дисс. докт. биол. наук. М., 2001. - 46 с.
18. Ангел Н. Сравнительные исследования форм 2n, 3n, 4n Citrullus vulgaris// Генетика. 1969. - Т.5, N8. - С. 103-109.
19. Андреев JI.H., Головкин Б.Н. Проблемы интродукции растений в XXI веке// Проблемы ботаники на рубеже XX-XXI веков: Тезисы докл. 2 (X) съезда Русского бот. об-ва. СПб.: Ботанический институт РАН (Т. 2), 1998.-С. 268.
20. Андреева Т.Ф. Фотосинтез и азотный обмен листьев. М.: Наука, 1969. -200 с.
21. Андреева Н.М., Лютаревич А.А. Содержание хлорофилла и рост ассимилирующей поверхности у различных сортов ярового ячменя// Зеледелие и растениеводство в БССР. Минск, 1980. - Вып. 23. - С. 73-77.
22. Андреенко С.С., Алехина Н.Д. Изменение содержания азота и свободных аминокислот в растениях кукурузы при различных рН среды// Научн. докл. высшей школы, сер. биол. наук. 1962. - N 4. - С. 167-170.
23. Анисимов А.А., Леонтьева А.Н., Конькова Е.А. Влияние элементов минерального питания на транспорт ассимилянтов, энергетику и содержание ауксинов у сахарной свеклы// Современные проблемы физиологии и биохимии сахарной свеклы. Киев, 1981. - С. 121-125.
24. Анишин С.Л. Влияние площади питания стевии на урожай сухого листа в Западной лесостепи Украины// Введение в культуру стевии -низкокалорийного заменителя сахара. Киев: Изд. ВНИС,1990. - С. 6366.
25. Антонов В.И. Оптимальные сроки зеленого черенкования стевии в условиях защищенного грунта// Введение в культуру стевии -низкокалорийного заменителя сахара. Киев: Изд. ВНИС, 1990. - С. 4449.
26. Бабужина Д.И. Особенности фотосинтетической деятельности короткостебельной озимой ржи: Автореф. дис. . канд. биол. н. С.-П., 1998. - 23 с.
27. Бажанова Н.В. Динамика хлорофилла и интенсивность фотосинтеза вонтогенезе некоторых растений под влиянием различных внешних воздействий// Проблемы фотосинтеза. М.: Изд. АН СССР. - 1959. - С. 185-190.
28. Баранов Е.С. Полиплоидия сахарной свеклы. М.: Наука, 1963. - 300 с.
29. Баславская С.С., Трубецкова О.М. Практикум по физиологии растений. -М.: Изд. МГУ, 1964.-328 с.
30. Бассам Д.А., Кальвин М. Путь С02 в фотосинтезирующем растении// Труды V Междунар. биохим. конгресса, симп. VI. М.: АН СССР, 1962. -С. 300-335.
31. Беденко В.П. Фотосинтез и продуктивность пшеницы на юго-востоке Казахстана. Алма-Ата: Изд. "Наука Казахск. ССР", 1980. - 224 с.
32. Беденко В.П., Сидоренко О.И. Фотосинтетические аспекты продукционного процесса у пшеницы в связи с явлением гетерозиса// Физиол. и биохимия культурн. раст. 1989. - Т. 21, N 4. - С. 333-338.
33. Безлер Н.В. Физиологически активные вещества и адаптация стевии в ЦЧЗ// Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования: Тезисы докл. II междунар. симпозиума, т. 2. Пущино. 1997. - С. 27-28.
34. Белецкий Ю.Д. Пара-аминобензойная кислота новое биологически активное соединение. - Ростов-на Дону: Изд. университета, 1993. - 61 с.
35. Беликов И.Ф. Основные закономерности транспорта и распределения ассимилятов у сельскохозяйственных растений// Тр. Биолого-почвенного ин-та (Владивосток). Т. 20 (123). - С. 154-160.
36. Белоус В.Е., Олейник Н.А., Бердышев Р.Г., Анишин C.J1. Развитие зародышей стевии в естественных и искуственных условиях// Введение в культуру стевии низкокалорийного заменителя сахара. - Киев: Изд. ВНИС, 1990.-С. 92-96.
37. Бельденкова А.Ф. Влияние гиббереллина на рост и развитие некоторых сельскохозяйственных и декоративных растений// Рост, развитие растений и урожай. M.-JL: Наука, 1964. - С. 24-34.
38. Бирюков С.В., Бабенко В.И., Комарова В.П. Возможность сокращения яровизационного процесса с целью ускоренного выращивания озимой пшеницы в условиях фитотрона// Научно-технический бюллетень ВСГИ. 1978. -п31. -С. 13-15.
39. Благовещенский А.В. Биохимическая эволюция цветковых растений. -М.: Наука, 1966.-326 с.
40. Бодруг М.В. Интродукция стевии (Stevia rebaudiana Bertoni) в Молдове// Биологическое разнообразие. Интродукция растений: Материалы Второй междунар. конф. СПб., 1999. - С. 142-143.
41. Боннер Дж. Молекулярная биология развития. М.: Изд. "Мир", 1967. -179 с.
42. Боос Г.В. Генетические и физиолого-биохимические аспекты изучения гетерозиса культурных растений// Бюлл. Всесоюз. НИИ растениеводства им. Н.И.Вавилова. 1972. - N 24. - С. 11-17.
43. Бреславец Л.П. Полиплоидия в природе и опыте. М.: Изд. АН СССР, 1963.-364 с.
44. Бритиков Е.А., Липскенс Г.Ф. влияние пролина на поглощение кислорода тканями растений// Физиол. раст. 1970. - Т. 17, N 4. - С. 645-654.
45. Бугаенко И.Ф. Достижения в производстве и применении сахара и подслащивающих веществ// Итоги науки и техники. 1990. - Т. 3. - 130 с.
46. Бурень В.М., Недорезков В.Д. Онтогенез пшеницы в числах и схемах (Труды Аристотелевской Академии Формы, том 6). Спб.: Изд. Спб. ГАУ, 2001.- 291 с.
47. Бурень В.М., Бурень О.В. Биология и нанотехнология /Материалы длясовременной и будущей бионики. Труды Аристотелевской академии формы. Санкт-Петербург, 2004. - 114 с.
48. Бурень В.М. Самоформирование клеток и многоклеточных организмов// Механизмы корневого давления и развития растений (Труды Аристотелевской Академии Формы, том 11). Спб.: Изд. Спб. ГАУ, 2002. -С. 17-26.
49. Бурханова З.А. Сравнительное изучение действия 6-бензиламинопурина, тидиазурина и картолина, на рост интактных проростков тыквы// Физиол. раст. 1984. - Т. 31, вып. 2. - С. 216-223.
50. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964,- 271 с.
51. Бутенко Р.Г., Баскаков Ю.А., Оголовец И.В., Смитюк В.В., Самыгин Г.А. Влияние картолина на морозостойкость культуры каллусной ткани озимой пшеницы// Докл. АН СССР. 1982. - Т. 2, N 1. - С. 253-253.
52. Быков О.Д., Зеленский М.И. О возможности селекционного улучшения фотосинтетических признаков сельскохозяйственных растений// Физиология фотосинтеза. М.: Наука, 1982. С. 294-310.
53. Быстрых Е.Е., Володарский Н.И. Фотофосфорилирование и продуктивность яровой пшеницы// Сельскохоз. биол. 1983. - N 9. - С. 2730.
54. Верзилина Н.Д. Онтогенез и продуктивность растений. Воронеж, 2005. -с. 195
55. Верзилина Н.Д., Филатов Г.В. Формирование ассимиляционной поверхности стевии в связи с ее плоидностью /Вестник РАСХН. 2004. -№5.- с. 38-39
56. Верзилина Н.Д., Жужжалова Т.П., Знаменская В.В., Зимин М.И. Особенности семенного размножения стевии в Центрально-Черноземной зоне /Вестник РАСХН. 2005.- №4.-с.31-33
57. Валеева З.Т. Ускоренный способ определения плоидности растений// Труды по селекции и семеноводству овощных культур. М.: Колос, 1976. - С. 49-50.
58. Васшькев1ч C.I., Хасянев1ч A.I., Адамчык Г.Г., Бярузчавец Л.Г. Ф1таб1ялапчныя даследаванне Stevia rebaudiana як натуральнага подсаложвальшка// Вес. АН БССР, сер. биол. н. 1991. - N 3. - С. 114117.
59. Вечер А.С., Голынская А.А., Решетников В.Н. Некоторые сведения о возрастных изменениях клеточных органелл листьев ди- и тетраплоидной ржи// Изв. АН БССР, сер. биол. 1974. - N 3. - С. 109-111.
60. Вечер А.С., Масько А.А., Решетников В.Н. Исследование состава свойств белков хлоропластов диплоидных и тетраплоидных растений// Физиолого-биохимические аспекты роста и развития растений. Минск: Наука и техника, 1975. - С. 3-6.
61. Виноградова Ю.К. Микроэволюция интродуцированных растении: теория и эксперимент// Проблемы интродукции растений и отдаленной гибридизации: Тез. докл. Междунар. конф. М., 1998. - С. 30-32.
62. Власюк П.А., Шкварук Н.М., Сапатый С.Е., Шамотиенко Г.Д Химические элементы и аминокислоты в жизни растений, животных и человека. Киев: Наукова думка, 1979. - 280 с.
63. Вознесенский B.JL, Заленский О.В., Семихатова О.А. Методы исследования фотосинтеза и дыхания растений. M.-JI.: Наука, 1965. -305 с.
64. Володарский Н.И.,Быстрых Е.Е., Николаева Е.К. Фотохимическая активность хлоропластов высокопродуктивных сортов озимой пшеницы// Сельскохоз. биол. 1980. - Т. 15, N 3. - С. 366-373.
65. Володарский Н.И., Быстрых Е.Е., Николаева Е.К. Первичные реакции фотосинтеза у высокопродуктивных сортов озимой пшеницы// Докл. ВАСХНИЛ.- 1981.-N2.-С. 12-14.
66. Володарский Н.И., Быстрых Е.Е. Использование показателей первичных реакций фотосинтеза для диагностики высокой продуктивности яровой пшеницы// Докл. ВАСХНИЛ. 1982. - N 12. - С. 4-6.
67. Воскресенская Н.П. Принципы фоторегулирования метаболизма растений и регуляторное действие красного и синего цвета на фотосинтез// Фоторегуляция метаболизма и морфогенеза растений. М.: Наука, 1975. - С. 16-36.
68. Воюцкий С.С. Курс коллоидной химии. М.: Изд. "Химия", 1964. - 574 с.
69. Гавриленко В.Ф., Рубин Б.А., Жигалова Т.В. Фотосинтетическое фосфорилирование изолированных хлоропластов и интенсивность фотосинтеза у проростков пшеницы различной продуктивности// Сельскохоз. биология. 1974. - Т. 9, N 3. С. 345-351.
70. Гавриленко В.Ф., Жигалова Т.В. Особенности фотосинтетического энергообмена сортов пшеницы различной продуктивности// Физиолого-биохимические особенности пшениц разной продуктивности. М.: Колос, 1980.-С. 5-44.
71. Гавриленко В.Ф., Жигалова Т.В., Бассарская Е.М. Активность фотоэнергетических реакций у проростков различных по продуктивности сортов пшеницы// Физиол. и биохим. культ, раст. // 1985. Т. 17, N 3. - С. 275-279.
72. Галочкина З.Н. О некоторых вопросах корнеобразования у яровой пшеницы в Целиноградской области// Научн. тр. Целиноградского с/х инта. 1968. - Т. 4,N2.-С. 70-78.
73. Гаценко Р.В., Тимошенко Г.Л. Связь урожайности озимой пшеницы с показателями ассимиляционной поверхности// Вопросы физиологии пшеницы. Кишинев: Штиинца, 1981. - С. 50-52.
74. Гвасалия В.П., Коваленко Н.В., Гаргулия М.Ч. Изчение возделывания двулистника сладкого (медовая трава каа-хэ) в условиях Абхазии// Субтропические культуры. 1990. - N 5. - С. 149-156.
75. Генкель П.А., Кудряшов Л.В. Ботаника. М.: Изд. Просвещение, 1964. -С.695.
76. Генов М. Възможности за получеване на тетраплоидни линии при царевицата чрез мутагени въздействия// Генет. и селек. 1990. - Т. 23, N 6. - С. 532-544.
77. Гершанович В.Н. Биохимия и генетика транспорта амнокислот у бактерий// Успехи биологической химии. М.: Наука, 1975. - Т. XVI. - С. 135-164.
78. Глущенко Н.Е., Хорьков Е.И., Реш Ф.М. Влияние различных химических соединений на скорость прохождения яровизации пшеницы// Докл. ВАСХНИЛ. 1973. - N 8. - С. 2-4.
79. Головко Т.К., Лавриненко О.В. Влияние плотности популяции райграсса однолетнего на листовую поверхность и продукционный процесс//
80. Физиол. раст. 1994. - Т. 41, N 3. - С. 331-337.
81. Гребинский С.А. Рост растений. Львов: Изд. Львовского госуниверситета, 1961. - 296 с.
82. Гресь Е.И., Ковальчук М.И., Шендрин Е.Н., Кирилюк В.Г. Изучение действия подкормок на отрастание корнеотпрысковых побегов стевии// Введение в культуру стевии низкокалорийного заменителя сахара. -Киев: ВНИС, 1991. - С. 20-23.
83. Гриб С.И., Еременко В.А., Свиридова Т.Е. Опыт использования сооружений искусственного климата// Селекция и семеноводство. 1979. -N5.-C. 27-29.
84. Грин Д., Гольдбергер Р. Молекулярные аспекты жизни. М.: Мир, 1968. -400 с.
85. Гродзинский A.M., Гродзинский Д.М. Краткий справочник по физиологии растений. Киев: Наукова думка, 1973. - 591 с.
86. Горбатенко Л.Е., Дзюба О.О. Использование стевии при консервировании плодов и овощей// Второй междун. симпоз. "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования". Тезисы докл., Пущино, 1997. - С. 867-868.
87. Ю1.Гуламов А. А. Ультраструктура хлоропластов и митохондрий у диплоидной и полиплоидной форм рода Morns L.// 2-й симпозиум по экспериментальной полиплоидии у шелковицы, Баку, 12-15 октября 1972 г.: Тез. докл. Баку, 1972. - С. 52-53.
88. Гуляев Б.И., Голик К.Н. Некоторые физиологические особенности различных по продуктивности сортов яровой пшеницы// Вопросы физиологии пшеницы. Кишинев: Штиинца, 1981. - С. 41-43.
89. Данильчук П.В., Пыльнев В.М., Литвиненко Н.А., Новицкая Н.А. Особенности развития корневой системы у короткостебельных мутантов озимой пшеницы//Докл. ВАСХНИЛ. 1980. - N 10. - С. 6-8.
90. Дегтярева Г.В. Погода, урожай и качество зерна яровой пшеницы. М.-Л.: Гидрометеоиздат, 1981. - 216 с.
91. Денисова Г.А. Терпеноидсодержащие структуры растений. Л.: Наука, 1989.-90 с.
92. Дзюба О.О., Горбатенко Л.Е. Изменчивость признаков у клонов стевии, полученных из каллусной ткани// Тезисы докл. П(Х) съезда Русского ботан. общества. Санкт-Петербург, 1998. - Т. 1. - С. 115.
93. Дзюба О.О. Стевия Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsley - интродукция, морфология, биология, возделывание: Автореф. дис. . канд. биол. н. -Санкт-Петербург, 1999. - 15 с.
94. Дорохов Б.А., Баранина И.И. Зимний газообмен озимой пшеницы при различном минеральном питании// Фотосинтез и пигменты основных сельскохозяйственных растений Молдавии. Кишинев: Штиинца, 1970. -С. 3-20.
95. Доспехов Б.Н. Методика полевого опыта. М.: Колос, 1979. - 416 с.
96. Дубинин Н.П., Панин В.Я. Новые методы селекции растений. М.: Колос, 1967.-360 с.
97. Дубровицкая Н.И. Регенерация и возрастная изменчивочть растений. -М.: Изд. АН СССР, 1961. 230 с.
98. Дубянский М.М. Биологические особенности коллекционных образцов стевии (Stevia rebaudiana Bertoni) и создание исходного селекционного материала: Автореф. дис. канд. с/х наук. Рамонь, 1999. - 21 с.
99. ИЗ.Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф. Новые продукты питания. М.:МАИК «Наука», 1998, - 304 с.
100. Дэвидсон Дж. Биохимия нуклеиновых кислот. М.: Мир, 1968. - 334 с.
101. Евлакова Е.С., Жужжалова Т.П. Развитие рассады стевии в зависимости от внесения элементов минерального питания и ростовых веществ// Всерос. научн.-произв. конф. "Интродукция нетрадиц. и редких с./х. растений": Материалы. Пенза, 1998; Т.З. - С. 89-91.
102. Жирмунская Н.М., Приходько Н.В., Овсянникова Т.В., Шаповалов А.А. Новый регулятор роста этамон стимулятор роста корневой системыII Агрохимия. - 1991. - N 1. - С. 96-104.
103. Жужжалова Т.П., Знаменская В.В., Ващенко Т.Г. Интродукция новых сахароносных растений// Экологич. проблемы интродукции растений на современном этапе вопросы теории и практики: Материалы Междунар. научн. конф. - Краснодар, 1993.-Часть 1. - С. 311-312.
104. Зак Е.Г., Ничипорович А.А. Образование аминокислот при фотосинтезе: идентификация и деградация глицина, аланина и серина// Физиол. раст. -1964.-Т. 11,N 1. С. 20-30.
105. Зак Е.Г., Ничипорович А.А. К вопросу о путях использования аминокислот при фотосинтезе// Физиол. раст. 1964а. - Т. 11, N 6. - С. 945-950.
106. Знаменская В.В., Жужжалова Т.П., Евлакова Е.С. Вегетативное размножение Stevia rebaudiana Bertoni в культуре изолированных тканей// Информационный листок. N 5. - Воронеж: ЦНТИ, 1997. - 2 с.
107. Зубенко В.Ф. Новый природный заменитель сахара// Вестник с.-х. науки. 1990. -N3.- С. 93-96.
108. Зубенко В.Ф., Чудновский Б.Д. Рождение новой отрасли// Сахарная свекла. 1990.- N 5. - С. 49-50.
109. Зубенко В.Ф., Роговский С.В., Педос В.П. Возбудители болезней стевии и оценка пораженности растений// Введение в культуру стевии. Киев: ВНИС, 1990.-С. 67-73.
110. Зубенко В.Ф., Роговский С.В., Чудновский В.Д. Стимулирование фитогормонами приживаемости черенков стевии и рост рассады// Докл. ВАСХНИЛ. 1991.-N2.-С. 16-18.
111. Зубенко В.Ф., Ковальчук М.И., Гресь Е.И., Чудновский В.Д. Хранение корневищ стевии при размножении зелеными черенками// Докл.
112. ВАСХНИЛ. 1991. - N 6. - С. 20-22.
113. Зубенко В.Ф., Ковальчук М.И., Гресь Е.И. Выращивание рассады стевии// Сахарная свекла. 1992. - N 6. - С. 38-39.
114. Зубенко В.Ф. Корневая система стевии при вегетативном размножении// Сахарная свекла. 1995. - N 10. - С. 117-118.
115. Иберла К. Факторный анализ. М.: Статистика, 1980. 398 с.
116. Иванов П.К., Рашковский Е.М., Белоглазов Е.А. Потребление воды и питательных веществ озимой рожью, озимой пшеницей, яровой пшеницей и ячменем// Научн. тр. Сарат. с/х ин-та. 1976. - Вып. 67. - С. 70.
117. Иванова Й.А. Фитогормоны и регуляция метаболизма в онтогенезе растений// Гормональная регуляция онтогенеза растений. М.: Наука, 1984.-С. 127-141.
118. Ильенко И.И., Яворская Т.К., Бех Н.С., Скульская Т.А. Продуктивность самоклональных вариантов стевии и качественный состав фитотерпеновых гликозидов в ее листьях// Введение в культуру стевии. -Киев: ВНИС, 1990. С. 79-86.
119. Ильин О.В., Ильина Т.О. Возделывание стевии в интенсивной светокультуре// Тез. I Междунар. симпозиума "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования". Пущино, 1995. - С. 500-501.
120. Ищенко О.В. Миниареола как эффект взаимодействия клеток листа двудольного растения// Тезисы докл. V съезда общества физиологов растений России и Международной конференции "Физиология растений -основа фитобиотехнологии". Пенза, 2003. - С. 100-101.
121. НЗ.Кабишева Т., Ракова Н.М. Аминокислотный обмен корней кукурузы в условиях засоления среды// Тезисы докладов V республиканской конференции "Физиологические основы повышения продуктивности и устойчивости зерновых культур". Целиноград, 1984. - С. 98.
122. Казарян В.О., Давтян В.А. К вопросу о ранней диагностике урожайности пшеницы// Тр. Ботан. ин-та АН Арм.ССР. 1972. - N18. - С. 48-55.
123. Карпиловская Е.Д., Цапко Е.В., Федюк Е.А., Петрищенко JI.H. Исследования мутагенной активности сахарола// Введение в культуру стевии источника низкокалорийного заменителя сахара. - Киев: ВНИС, 1990.-С. 125-130.
124. Каррер П. Курс органической химии. JI.: Гос. научно-техн. изд-во химической литературы. - 1216 с.
125. Кефели В.И. Действие света на рост и морфогенез высших растений// Фоторегуляция метаболизма и морфогенеза растений. М.: Наука, 1975. -С. 209-227.
126. Ким Ю.М., Талалова Е.Е. Интродукция стевии в Узбекистане// Сб. научных тр. по прикл. ботанике, генетике и селекции. СПб., 1991.- Т. 144.-С. 186-191.
127. Ким Ю.М., Дусейнов Т.К. Выращивание новой культуры стевии в условиях поливной зоны Узбекистана// Растит, ресурсы Центр. Азии и их селекционное значение. Ташкент, 1994. - С. 102-112
128. Кириченко Ф.Г. Влияние отбора растений по мощности корневой системы на повышение урожая и улучшение его качества в потомстве// Вестник с/х науки. 1963. - N 4. - С. 3-20.
129. Кириченко Ф.Г. Краткая инструкция по проведению отбора растений с мощной корневой системой в целях селекции и семеноводствасельскохозяйственных культур// Изд. ВАСХНИЛ, 1965. 12 с.
130. Кириченко Е.Б. Прогресс фитофизиологии и совершенствование принципов интродукции растений// Проблемы интродукции растений и отдаленной гибридизации: Тез. докл. Междунар. конф. М., 1998. -С. 8385.
131. Кислякова Т.Е., Голубкова Б.М., Богачева И.И. Взаимосвязь структуры и функции фотосинтетического аппарата в онтогенезе картофеля// Физиол. раст. 1967. - Т. 14, N 1. - С. 5-14.
132. Кисничан Л.П., Мику В.Е. Размножение Stevia rebaudiana семенами// Материалы III Междунар. конф. по селекции, технологии возделывания и переработке нетрадиционных растений. Симферополь, 1994. - С. 66-67.
133. Кисничан Л.П., Мику В.Е. Способы размножения стевии// Второй междун. симпоз. "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования". Тезисы докл., Пущино, 1997. - Т. 5. - С. 694-696.
134. Кихара X. Триплоидные арбузыII Полиплоидия. М.: Изд. ИЛ, 1956. -С.228-240.
135. Кляченко В.И., Борисюк В.А. Физиолого-биохимические особенности ассимиляционного аппарата различных генотипов сомаклональных вариантов стевии// Введение в культуру стевии. Киев: ВНИС, 1990. С. 110-111.
136. Кобылянец М.С. Некоторые физиолого-биохимические показателиявления гетерозиса у гибридов кукурузы и их родительских форм// Автореф. дис. канд. биол. наук/ Горки, Белорусск. с/х академия, 1968.-20 с.
137. Ковальчук М.И., Гресь Е.И., Кирилюк О.Г., Шендрин Е.И. Применение нитроаммофоски для выращивания рассады стевии из зеленых черенков// Введение в культуру стевии низкокалорийного заменителя сахара. -Киев: Изд. ВНИС, 1990. - С. 50-57.
138. Колосов И.И. Поглотительная деятельность корневых систем растений.1. М.: АН СССР, 1962.-356 с.
139. Комиссаренко Н.Ф., Деркач А.И., Коваль И.П., Бублик Н.П., Черменева Г.А., Котов А.Г., Зинченко В.В. Дитерпеновые гликозиды и фенилпропаноиды листьев Stevia rebaudiana Bertoni// Растительные ресурсы. 1994. - Т. 30, N 1-2. - С. 53-64.
140. Кондарова И.В. Особенности азотного обмена зимостойких и незимостойких древесных растений// Физиология морозостойкости древеных растений. М.: Наука, 1964. - С. 95-104.
141. Константинов П.Т., Бабушкин Л.Н. Фотосинтез у кукурузы при орошении// Зерновые и кормовые культуры на орошаемых землях. -Кишинев: Штиинца, 1972. С. 108-112.
142. Корниенко А.В., Никульников И.М., Удовидченко Л.П., Безлер Н.В., Кураков В.И., Жужжалова Т.П., Знаменская В.В. Возделывание стевии// Сахарная свекла. 1995. - N 10. - С. 22-24
143. Коробова М.М. Особенности развития черенков Stevia rebaudiana в Санкт-Петербурге// Материалы конф. "Анализ и прогнозирование результатов интродукции декоративн. и лекарств, растений мировой флоры в ботанические сады". Минск, 1995. - С. 98-99.
144. Коробова М.М. Опыт выращивания Stevia rebaudiana в Ленинградской области// Биологическое разнообразие. Интродукция растений:
145. Материалы II Междунар. конф. СПб., 1999. - С. 387-389.
146. Коробова М.М. Биологические особенности и химический состав Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsl. при интродукции в Ленинградскую область: Автореф. дис. канд. биол. н. Санкт-Петербург, 2000. - 19 с.
147. Коровин СЕ., Демидов А.С Еще раз о направлении интродукци-онных исследований в ботанических садах// Проблемы интродукции растений и отдаленной гибридизации: Тез. докл. Междунар. конф. -М., 1998. С 107108.
148. Корочкин Л.И. Взаимодействие генов в развитии. М.: Наука, 1977. - 279 с.
149. Костина В.В. Натуральный подсластитель стевиозид// Молочная промышленность. 2004. - N 1. - С. 44-45.
150. Кочетов А.А. Влияние световых условий выращивания на рост и продуктивность растений стевии в регулируемой агроэкосистеме// Управление продукционным процессом растений в регулируемых условиях: Тезисы докл. Всерос. конф. СПб., 1996. - С. 156-158.
151. Кочетов А.А. Размножение стевии зелеными черенками в регулируемых условиях// Всерос. научно-производ. конференция "Интродукция нетрадиционных и редких с/х растений". Пенза, 1998. Т. 3. - С. 147-149.
152. Кочетов А.А. Стратегия ускорения интродукции новых культур при использовании регулируемой агроэкосистемы (на примере стевии и дайкона)// Аграрн. Россия. 2001. - N6. - С. 60-62.
153. Красильникова JI.A., Авксентьева О.А., Жмурко В.В., Садовниченко Ю.А. Биохимия растений./Под ред. Красильниковой J1.A. Ростов на Дону: «Феникс», Харьков: Торсинг, 2004. - 224 с.
154. Красичкова Г.П., Гиллер Ю.Е., Турбин Н.В. Сравнительная характеристика фотосинтетическогго аппарата различных форм тритикале// Физиол. раст. 1982. - Т. 29, N 5. - С. 959-963.
155. Кренке Н.П. Теория циклического старения и омоложения растений. М.: Сельхозгиз, 1940. - 136 с.
156. Кренке Н.П. Регенерация растений. -M.-JL: Изд. АН СССР, 1950. 675 с.
157. Кретович B.JI. Основы биохимии растений. М.: Советская наука, 1952. -487 с.
158. Кретович B.JL, Каган З.С. Усвоение и превращение азота у растений// Физиология сельскохозяйственных растений, том ". М.: Изд. МГУ, 1967. -С. 217-288.
159. Кретович B.JI. Обмен азота в растениях. М.: Наука, 1972. - 527 с.
160. Крутошикова А., Угер М. Подслащивающие вещества в пищевой промышленности. М.: Агропромиздат, 1988. - 157 с.
161. Ксенз Л.И., Сичкар Л.А., Корчак В.В. Действие удобрений на продуктивность стевии// Введение в культуру стевии низкокалорийного заменителя сахара. - Киев: Изд. ВНИС, 1990. - С. 58-62.
162. Ксенз Л.И., Савенкова О.В., Шишко Л.П. Выращивание рассады стевии на разных фонах удобрений// Введение в культуру стевии -низкокалорийного заменителя сахара. Киев: Изд. ВНИС, 1990. - С. 3643.
163. Кузьмин В.П. Селекция и семеноводство зерновых культур в целинном крае Казахстана. М.: Колос, 1965. - 198 с.
164. Кузьмин З.Е., Коровин СЕ. Интродукция растений и экологическаябезопасность// Проблемы интродукции растений и отдаленной гибридизации: Тез. докл. Междунар. конф. М., 1998. - С. 115-116.
165. Кузьмина К.М. Фотосинтетическая деятельность различных по скороспелости форм яровой пшеницы на Юго-Востоке: Автореф. дис. . канд. биол. н. JL, 1972. - 24 с.
166. Кулаева О.Н. О механизме действия цитокининов// Рост растений и природные регуляторы. М.: Наука, 1977. - С. 216-234.
167. Кумаков В.А. Структура фотосинтетического потенциала разных сортов яровой пшеницы// С/х биол. 1968. - Т. 3, N 3. - С. 362-368.
168. Кумаков В.А. Эволюция показателей фотосинтетической деятельности в процессе селекции яровой пшеницы// Теоретические основы фотосинтетической продуктивности. М.: Наука, 1972. - С. 500-503.
169. Кумаков В.А. Физиология яровой пшеницы. М.: Колос, 1980. - 207 с.
170. Кумаков В.А. Итоги исследований по частной физиологии яровой пшеницы и физиологическое обоснование модели сорта// Физиологические и генетические основы селекции. Саратов, 1984. - С. 3-11.
171. Кумаков В.А. Физиологическое обоснование модели сортов пшеницы. М.: Колос, 1985.-270 с.
172. Кумаков В.А. Модель современного сорта и место физиологии в ее разработках// Вопросы ботаники Юго-Востока. Саратов, 1989 (вып. 6). -С. 20-22.
173. Куперман Ф.М., Дворянкин Ф.А., Ростовцева З.П., Ржанова Е.И. Этапы формирования органов плодоношения злаков. М.: Наука, 1955. - 254 с.
174. Куперман Ф.М. Морфология растений. М.: Высшая школа, 1963. - 288 с.
175. Куперман Ф.М., Ржанова Е.И. Биология развития растений. М.: Высшая школа, 1963. - С. 424.
176. Куперман Ф.М. Физиология развития, роста и органогенеза пшеницы// Физиология с/х растений, т. 4. М.: Изд. МГУ, 1969. - С. 7-203.
177. Куперман Ф.М. Морфофизиология растений. М.: Высшая школа, 1984.- 240 с.
178. Курбанов К.Б., Касумов К.М., Рустамов Б.Э. Об энергетической эффективности фотосинтеза у сортов пшеницы различной урожайности// Проблемы фотоэнергетики растений и повышение урожайности. Львов, 1984. - С. 86-87.
179. Курсанов А.Л. Транспорт ассимилятов в растении. М.: Наука, 1976. -646 с.
180. Лайск А.Х. Соответствие фотосинтезирующей системы условиям среды// Физиология фотосинтеза. М.: Наука, 1982. - С. 221-234.
181. Лапин В.К. Особенности роста и развития полиплоидных форм цитрусовых// Докл. АН СССР. 1948. - Т. 60, N 1. - С. 141-145.
182. Лапин М.М. Растениеводство с основами селекции и семеноводства. М.: Гос. изд-во сельскохоз. лит-ры, 1956. - 560 с.
183. Лапин П.И. Пути охраны и обогащения растительности. М.:3нание, 1978. - 64 с.
184. Лаптев Ю.П., Макаров П.П., Глазова М.В., Шугаева Е.В., Махайлова С.П., Архангельская М.А., Владимирова И.А. Устьичный аппарат и пыльца как показатели плоидности растений// Генетика. 1971. - Т. 12, N 1.-С. 47-54.
185. Лебедев С.И. Физиология растений. М.: Колос, 1982. - 462 с.
186. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1976. - 957 с.
187. Леопольд А. Рост и развитие растений. М.: Мир, 1968.- 494 с.
188. Лисицин В.Н., Волович Е.Л. Стевия подсластитель или лекарственное растение// Молочная промышленность. - 2002. - N 5. - С. 1-4.
189. Литвиненко Л.Г., Гуляев Б.И. О связи между фотохимическойактивностью хлоропластов и интенсивностью фотосинтеза некоторых сельскохозяйственных растений// Физиол. и биохимия культурн. растений. 1972. - Т. 4, N 3. - С. 230-232.
190. Литвиненко Л.Г. Фотохимическая активность хлоропластов и продуктивность сельскохозяйственных растений// Научн. труды Украинской с.-х. акад. 1974. - Вып. 102. - С. 59-65.
191. Лобов С.В. Синтез и выделение продуктов трансгликозирования стевиозида// Введение в культуру стевии. Киев: ВНИС, 1990. - С. 109.
192. Лоули Д., Максвелл А. Факторный анализ как статистический метод. М.: Мир, 1967.- 144 с.
193. Лукаткин А. С., Кирдякова И. А., Пугаев С. В. Влияние препарата цитодеф на холодоустойчивость и качество плодов огурца// Агрохимия. -2005.-№1. С. 44-50
194. Лукашэвич Н.П. Фотасштэтычная дзейпасуль пасевау гароху ва умовах Беларуси/ Весщ Акад. Аграрн. наук БеларуЫ / Весщ АН БССР. Сер. сельскагасп. н. 1992. - С. 21-28.
195. Лучков П.Г. Особенности формирования листовой поверхности у самоопыленных линий и гибридов кукурузы // Ученые записки Кабардино-Балкарского гос. университета,сер. с/х наук. 1963. - Вып. 18.-С. 71-74.
196. Лыфенко С.Ф. Сортовые различия озимой пшеницы по площади листового аппарата и связь их с продуктивностью// Теоретические и прикладные аспекты селекции и семеноводства пшеницы, ржи, ячменяи тритикале. Одесса: Изд. ВСГИ, 1981. - С. 102-103.
197. Ляпшина З.Ф. Зависимость урожая зерна от продуктивности фотосинтезаяровой пшеницы// Важнейшие проблемы фотосинтеза в растениеводстве. -М.: Наука, 1970. С 161-170.
198. Ляховкин А.Г., Чан Динь Лонг, Май Фыонг Ань, Солдатов В.Н., Титов Д.А. Медовая трава во Вьетнаме. Ханой, 1992. 36 с.
199. Ляховкин А.Г., Солдатов В.Н., Титов Д.А., Теханович Г.А., Чан Динь Лонг, Нгуен Лок. Результаты изучения мировых растительных ресурсов во Вьетнамо-Российском центре интродукции, селекции и семеноводстве с/х культур. Ханой, 1992. - С. 111-112.
200. Ляховкин А.Г., Николаев А.П., Учитель В.Б. Стевия медовая трава: Рстение лекарственное и пищевое в вашем доме. - СПб., 1999. - 96 с.
201. Максимова А.А. Особенности фотосинтетической деятельности кукурузы при оптимизации условий выращивания в степи УССР: Автореф. дисс. . канд. биол. н. Кишинев, 1980. - 23 с.
202. Мамедов Н.Д., Храмова Г.А., Низовская Н.В., Кренделева Т.Е., Пащенко
203. B.З. Структурно-функциональная организация электронтранспортной цепи фотосинтеза у разных генотипов пшеницы// Физиол. раст. 1990. -Т. 37, N 3. - С. 476-483.
204. Мамулаишвили И., Кобалия О. Стевия// Субтропические культуры. -1990.-N3.-С. 125.
205. Мансуров Н.И., Мечиславский Ю.А., Кривкина Н.П., Медведовская JI.E. Некоторые физиолого-биохимические особенности гетерозисных гибридов хлопчатника// Докл. АН ТаджССР. 1971. - Т. 14, N- С. 72-75.
206. Мережко А.Ф. Проблема доноров в селекции растений. Санкт-Петербург: ВНИИ растениеводства, 1994. - 127.
207. Милаев Я.И. Исследование физиолого-биофизических особенностей гибридов кукурузы и их родительских форм// Гетерозис с/х растений, его физиолого-биохимические и биофизические основы. М.: Колос, 1975.1. C. 230-237.
208. Мицик В.Е., Шульгина Л.М. Новые виды молочных продуктов с использованием стевиозида// Введение в культуру стевии. Киев, 1990. -С. 131-137.
209. Моисеева Т.В. Влияние регуляторов роста на продуктивность и газообмен яровой пшеницы и ячменя в условиях засухи: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1989. - 23 с.
210. Мокроносов А.Т. Общие пути углеродного питания растений// Биохимия и биофизика фотосинтеза. М.: Наука, 1965. - С. 290-304.
211. Мокроносов А.Т. Онтогенетический аспект фотосинтеза. М.: Наука, 1981.- 195 с.
212. Мокроносов А.Т., Федосеева Г.П. Структурно-функциональные изменения фотосинтетического аппарата при полиплоидии//
213. Популяционно-генетические аспекты продуктивности растений. Новосибирск: Наука (Сибирск. отд.), 1982. С. 65-77.
214. Морозова Э.В., Осипова JI.B., Ниловская Н.Т., Моисеева Т.В. Влияние кинетина на продуктивность яровой пшеницы в условиях засухи// Регуляторы роста растений. Д.: Изд. ВИР, 1989. - С. 39-42.
215. Муромцев Г.С. Регуляторы роста растений и урожай// Вестник с/х науки. 1984.-N 7.-С. 75-83.
216. Навашин М.С. Изменчивость клеточного ядра у видов Crepis в отношении к видообразованию// Ztsch. Zellforschungsmicrosk. Anat. -1927.-N 4.-S. 171-215.
217. Насыров Ю.С., Гиллер Ю.Е., Усманов П.Д. Генетический контроль биосинтеза и образования нативных форм хлорофилла// Хлорофилл. -Минск: Наука и техника, 1974. С. 259-269.
218. Некрасов В.И. Актуальные вопросы развития теории акклиматизации растений. М.: Наука, 1980. - 102 с.
219. Николаева Л.Ф., Рубин Б.А., Флорова Н.Б. Перспективы использования метода флуоресцентной спектроскопии для выявления потенциальной продуктивности сортов// Сельскохоз. биол. 1975. - Т. 10, N 3. - С. 343347.
220. Никольский Ю.К., Иванченко В.М. Количественные различия по фотохимической активности изолированных хлоропластов диплоидных и тетраплоидных форм ячменя и ржи// Гетерозис и количественная наследственность. Минск: Наука и техника, 1977. - С. 184-187.
221. Ничипорович А.А. Фотосинтез и теория получения высоких урожаев. -М.: Наука, 1956.-94 с.
222. Ничипорович А.А. Фотосинтетическая деятельность растений в посевах. -М.: Наука, 1961.- 136 с.
223. Ничипорович А.А. Неуглеводные продукты фотосинтеза// Труды V Междунар. биохим. конгресса, симп. VI. М.: АН СССР, 1962. - С. 360384.
224. Ничипорович А.А. О путях повышения продуктивности фотосинтеза растений в посевах// Фотосинтез и вопросы продуктивности растений. -М.: Изд. АН СССР, 1963. С. 5-36.
225. Ничипорович А.А. Пути управления фотосинтетической деятельностью растений с целью повышения их продуктивности//Физиология с/х растений (том 1). М.: Изд. МГУ, 1967. - С;' 309-353.
226. Ничипорович А.А. Теория фотосинтетической продуктивности растений// Итоги науки и техники (физиология растений, т. 3). М., 1977. - С. 11-54.
227. Ничипорович А.А. Физиология фотосинтеза и продуктивность растений// Физиология фотосинтеза. М.: Наука, 1982. - С. 7-33.
228. Образцов А.С. Биологические основы селекции растений. М.: Колос, 1981.-271 с.
229. Образцова В.И., Никифорова Л.И. Азотный обмен деревьев и кустарников в условиях степной зоны УССР// Рост и устойчивость растений. Киев: Наукова думка, 1966. - С. 210-216.
230. Опарин А.И. Зеленый дыхательный пигмент подсолнечника// Изв. Российской АН. 1922. - Сер. 6, т. 16. - С. 535-538.
231. Орлов А.А., Стаценко А.П. Способ повышения морозостойкости растений// Тезисы докл. V съезда общества физиологов растений Россиии Международной конференции "Физиология растений основа фитобиотехнологии". - Пенза, 2003. - С. 313-314
232. Остапенко Д.И., Нагорная Р.В. Содержание аминокислот и нуклеиновых кислот в генеративных органах кукурузы в связи с гетерозисом// Физиол. и биохимия культурн. растений. 1977. - N9, вып. 1. - С. 35-39.
233. Палилова А.Н., Лосева З.И., Матошко И.В., Кудрявцева З.П. Содержание свободных аминокислот в образцах кукурузы с различной цитоплазмой// Генетика гетерозиса. Минск: Ураджай, 1964. - С. 75-83.
234. Паршина З.С., Кершанская О.И., Кичигина С.Н., Косолапова И.И. Физиологические процессы у гибридов озимой пшеницы// Повышение продуктивности и устойчивости зерновых культур. Алма-Ата: Изд. "Наука Казахской ССР", 1979. - С. 174-180.
235. Пахомов В.П., Яшин Я.И., Яшин А.Я., Багирова В.Л., Арзамасцев А.П., Кукес В.Г., Ших Е.В. Способ определения антиоксидазной активности биологически активных соединений. Патент на изобретение N2003123072/15(024964). Дата подачи заявки 25.07.2003.
236. Пашкарь С.И. Физиологически активные соединения в селекционно-генетических процессах. Кишинев: Штиинца, 1970. - 172 с.
237. Пашкарь С.И. К биохимической диагностике гетерозиса, цитоплазматической мужской стерильности и полиплоидии у кукурузы в процессе селекции// Физиология растений в помощь селекции. М.: наука, 1974.-С. 161-177.
238. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений. М.: Колос, 1976.-255 с.
239. Плешков Б.П. Биохимия сельскохозяйственных растений. М.:
240. Агропромиздат, 1987. 494 с.
241. Подпоринова Г.К. Разработка промышленной технологии получения концентрата сладких веществ стевии без использования органических растворителей: Дис. канд. с/х н. Рамонь, 2000 с. 196
242. Подпоринова Г.К., Полянский К.К., Верзилина Н.Д. Стевия и продукты её переработки: использование при производстве продуктов лечебно-профилактического назначения /Известия высших учебных заведений «Пищевая технология». 2005г.-№4.-с. 74-75
243. Поликарпова JI.П. Хранение коллекций растений. М.: Наука, 1990.- 52 с.
244. Полянский К.К., Рудакова JI.B. Актульная проблема антиоксидантная активность пищевых продуктов// Молочная промышленность. - 2004. - N 11.-С.74.
245. Полянский К.К., Подпоринова Г.К., Верзилина Н.Д Использование концентрата стевии в пищевых продуктах /Вестник РАСХН. 2004. №5. -с.86-88.
246. Полянский К.К., Верзилина Н.Д., Подпоринова Г.К. Совершенствование технологии получения концентрата стевии /Пищевая промышленность. 2004. №9. - с.87-88
247. Портуровская С.П. Фотосинтетическая деятельность растений озимого ячменя при различных условиях выращивания// Научн. труды Ставропольского с/х института. 1972. - Т. 1, вып. 35. - С. 88-91.
248. Разиев С.Э., Низовская Н.В., Храмова Т.А., Алиев Д.А. О первичных процессах фотосинтеза в проростках пшеницы разной продуктивности// Физиол. раст. 1987. - Т. 34, N 2. - С. 237-243.
249. Ратнер Е.И. Питание растений и жизнедеятельность их корневых систем. -М.: АН СССР, 1958.-93 с.
250. Роговский С.В., Чудновский Б.В. Влияние эндогенных фитогормонов на приживаемость черенков стевии и последующий рост рассады и растений// Введение в культуру стевии источника низкокалорийного заменителя сахара. - Киев: Изд. ВНИС, 1990. - С. 24-32.
251. Роговский СВ. Размножение стевии (Stevia rebaudiana Bertoni) черенками и особенности выращивания в условиях правобережной лесостепи Украины// Автореф. канд. дисс. Киев, 1992. - 25 с.
252. Роговский СВ., Забигайло Э.Е. Применение регуляторов роста для стимуляции укоренения и роста травянистых черенков стевии// Физиол. и биохимия культурн. раст. 1993. - Т. 25, N 5. - С 514-517.- 3
253. Родионова Н.С., Глаголева Л.Э., Полянсий К.К. Лечебно-профилактические белковые продукты с модифицированным углеводным составом// Молочная промышленность. 1998. - N 2. - С. 13-14.
254. Росс Ю., Бихеле 3. Расчет фотосинтеза растительного покрова// Фотосинтетическая продуктивность растительного покрова. Тарту, 1969.-С. 5-41.
255. Рубин Б.А. Курс физиологии растений. -М.: Высшая школа, 1961. 584 с.
256. Рудаков О.Б., Полянский К.К. Хроматография и хроматографические приборы// Молочная промышленность. 2004. - N 4. - С. 38-39.
257. Рудаков, О.Б. Физико-химические системы сорбат сорбент - элюент в жидкостной хроматографии / О.Б. Рудаков, В.Ф. Селеменев. - Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 2003. - 300 с.
258. Рудаков, О.Б. Растворитель как средство управления процессом в жидкостной хроматографии / О.Б. Рудаков. Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 2003.-300 с.
259. Рудаков О.Б., Востров И.А., Федоров С.В. и др. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии / Воронеж :1. Водолей, 2004.-528 с.
260. Рядчиков В.Г. Улучшение зерновых белков и их оценка. М.: Колос, 1978.-368 с.
261. Сабинин Д.А. Физиологические основы питания растений. М.: АН СССР, 1955.- 512 с.
262. Савенкова О.В., Корчак В.В. Определение оптимального режима полива при доращивании рассады стевии, полученной методом культуры ткани// Введение в культуру стевии низкокалорийного заменителя сахара. -Киев: Изд. ВНИС, 1990. - С. 33-35.
263. Савченко Н.И. Использование биохимических методов при изучении явления гетерозиса в селекции гибридной пшеницы// Гетерозис сельскохозяйственных растений, его физиолого-биохимические и биофизические основы. М.: Колос, 1975. - С. 156-158.
264. СанПиН 2.3.2.1078-01.Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов.
265. Санкин JI.C. Экспериментальная полиплоидия у дыни// Цитология и генетика культурных растений. Новосибирск: Изд. "Наука", 1967. - С. 65-89.
266. Сарджвеладзе Г.П., Кутубидзе В.В., Харебава Л.Г., Цилосани М.В. Композиция для безалкогольного напитка: Пат. 1792627// Изобретения. -1993.-N5.-С. 9.
267. Сарджвеладзе Г.П., Цанава В.П., Джугели Р.Я., Харебава Л.Г. Способ приготовления низкокалорийного напитка: Пат. 1797816// Изобретения. -1993.-N8.-С. 11.
268. Сарджвеладзе Г.П., Лазишвили Л.А., Абхазава Д.М., Каландия А.Г., Харебава Л.Г. Способ производства лечебно-тонизирующего напитка: Пат. 1813400//Изобретения. 1993. -N 17. - С. 15.
269. Сарджвеладзе Г.П., Харебава Л.Г. Способ получения концентрата из растения Stevia rebaudiana Bertoni: Пат. 1796128// Изобретения. 1993. - N7. С. 9.
270. Сафаров С.А., Ахмедов Ш.А. К морфологическому обоснованию создания скороспелых высокоурожайных сортов пшеницы// Вестник с/х науки Азербайджана. 1989. - N 5. - С. 9-11.
271. Сахарова О.В., Корж Б.В. Пигменты инбредных и гибридных форм кукурузы и их связь с процессом роста и урожайностью// Генетика фотосинтеза. Душанбе: Дониш, 1977. - С. 250-256.
272. Сикорская СБ. Биолого-морфологические особенности стевии /Stevia rebaudiana (Bertoni)/ при интродукции в условиях ЦЧЗ России: Автореф. дио. канд. биол. наук. Курск, 2004. - 20 с.
273. Синнот Э. Морфогенез растений. М.: Изд. ИЛ, 1963. - 603 с.
274. Скворцов А.К. О некоторых общих аспектах интродукции растений// Проблемы интродукции растений и отдаленной гибридизации: Тез. докл. Междунар. конф. М., 1998. - С 188-190.
275. Смирнова Н.П. Некоторые особенности фотосинтетического аппарата инбредной и гибридной кукурузы// Гетерозис в растениеводстве. -Ставрополь, 1966. С. 82-90.
276. Смирнов К.В., Саленков С.Н., Перепелицина Е.П. Особенности применения гиббереллина на бессемянных и ретардантов на семенных сортах винограда// Применение регуляторов роста растений всельскохозяйственном производстве. М., 1985. - С. 94-103.
277. Смоляр В.И., Салий Н.С., Цапко Е.В., Лаврушенко Л.Ф., Григоренко С.Н. Медико-биологическое исследование листьев стевии// Введение в культуру стевии низкокалорийного заменителя сахара. - Киев: ВНИС, 1990.- С. 112-117.
278. Станков Н.З. Корневая система полевых культур. М.: Колос, 1964. - 264 с.
279. Стеббинс Дж.Л. Распространение и природа полиплоидных типов// Полиплоидия. М.: Изд. ИЛ, 1956. - С. 25-36.
280. Струк Т.И., Осипова З.А. Влияние гибридизации и полиплоидии на структурную организацию листа у сахарной свеклы// Популяционно-генетические аспекты продуктивности растений. Новосибирск: Наука (Сибирск. отд.), 1982. - С. 77-86.
281. Суханова М.А. Синтез и накопление стевиол-гликозидов в растениях и культурах клеток стевии (Stevia rebaudiana Bertoni)// Дисс. канд. биол. н. -М., 2002.- 113 с.
282. Суханова М.А., Решетняк О.В., Бондарев Н.И., Носов A.M. Особенности синтеза стевиол-гликозидов в растениях Stevia rebaudiana Bertoni// Тезисыдокл. V съезда физиологов. Пенза, 2003. -С.526.
283. Сытник К.М., Мусатенко Л.И., Богданова Т.Д. Физиология листа. Киев: Наукова думка, 1978. - 392 с.
284. Сычев С.Н. Применение метода главных компонент (факторного анализа) для анализа хроматографических данных в ВЭЖХ. // Сорбционные и хроматографические процессы», 2004.-Т.4- Вып.2 С.134- 142.
285. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Мальцева О.И, Волчков А.Н. Применение метода главных компонент для свертки информации при обработке многоволновых хроматограмм вина. // Известия ОрелГТУ, серия «Естественные науки», № 3-4, 2003. С. 138 - 142.
286. Табенцкий А.А. Фотосинтез листьев кукурузы в связи с водным режимом// Пути повышения интенсивности и продуктивности фотосинтеза (вып. 2). Киев: Наукова думка, 1967. С. 47-65.
287. Тарчевский И.А., Андрианова Ю.Е. Содержание пигментов как показатель мощности развития фотосинтетическогоаппарата// Физиол. раст. 1980. - Т. 27, N 2. - С. 341-348.
288. Тахтаджян А.Л. Система и филогения цветковых растений. М.-Л.: Наука, 1966.-611 с.
289. Ткаченко Ф.А., Герасиков Л.Г. Методика получения тетраплоидных форм арбуза для создания гетерозисных гибридов//Гетерозис сельскохозяйственных растений, его физиолого-биохимические и биофизические основы. М.: Колос, 1975. - С. 102-104.
290. Третьяков Н.Н., Карнаухов Т.В., Паничкин Л.А. и др. Практикум по физиологии растений. М.: Агропромиздат, 1990. - 271 с.
291. Третьяков Н.Н., Кошкин Е.Н., Макрушин Н.М. и др. Физиология и биохимия сельскохозяйственных растений. Под ред. Третьякова Н.Н. -М.: Колос, 1998.-640 с.
292. Трулевич Н.В. Ботанико-географические коллекции природной флоры (научный, природоохранный, образовательнвй аспекты)// Проблемы интродукции растений и отдаленной гибридизации: Тез. докл. Междунар.конф.-М., 1998.-С 210-212.
293. Удовидченко Л.П., Корниенко А.В., Жужжалова Т.П. Введение стевии в культуру в ЦЧЗ России// Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования: И-й Международный симпозиум, Пущино, 1997: Тез. докл. Пущино, 1997,- С. 778-779.
294. Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка. М.: Мир, 1984.-512 с.
295. Устенко Г.П. Фотосинтетическая деятельность растений в посевах как основа формирования высоких урожаев// Фотосинтез и вопросы продуктивности растений. М.: Наука, 1963. - С. 37-70.
296. Устименко А.С., Данильчук П.В., Гвоздиковская А.Т. Корневые системы и продуктивность сельскохозяйственных растений. Киев: Урожай, 1975. -368 с.
297. Фауден Л. Биогенез аминокислот// Биохимия растений. М.: Мир, 1968. -С. 204- 224.
298. Федоров П.С. Биохимическая разнокачественность семян родительских форм двойного межлинейного гибрида кукурузы ВИР 156// Труды Киргизского НИИ земледелия. 1960. - N 3. - С. 3-11.
299. Федоров П.С. Биохимическая разнокачественность семян родительских форм гибридов// Кукуруза. 1961. - N 2. - С. 38-39.
300. Федоров П.С. Биохимические и физиологические основы гетерозиса. -Фрунзе: Кыргызстан, 1968. 195 с.
301. Филатов Г.В., Шевченко В.Е., Верзилина Н.Д. Физиологическая генетика продукционных процессов сельскохозяйственных растений /Воронеж: ФГОУ ВПО ВГАУ, 2003. 249с
302. Федотов В.А., Коломейченко В.В., Коренев Г.В. и др. Растениеводство Центрально-Черноземного региона./Под ред. В.А. Федотова и Коломейченко В.В.- Воронеж: Центр духовного возрождения Черноземного края, 1998. 464 с.
303. Халва Э., Храбе Ф. Формирование урожая многолетних бобовых трав// Формирование урожая основных сельскохозяйственных культур. М.: Колос, 1984.-367 с.
304. Холупенко И.П., Медянников В.М. Поступление продуктов фотосинтеза в семе на сои из листьев главного стебля/ Биол.-почв. ин-т ДВНЦ АН СССР. Владивосток, 1973. - 22 с. - Деп. в ВИНИТИ 18.06.74, N1658-74Деп.
305. Храмов В.А., Комарова В.И. Способ определения хлорогеновой кислоты в растительных объектах// Санитария и гигиена. 1999. - N 6. - С. 71.
306. Цанава В.П., Сарджвеладзе Г.П., Харебава Л.Г. Исследование летучих соединений двулистника сладкого// Субтропические культуры. 1989. - N 3.-С. 73-79.
307. Цанава В.П., Сарджвеладзе Г.П., Харебава Л.Г. Влияние некоторых технологических приемов на состав летучего комплекса травы двулистника сладкого// Субтропические культуры. 1991. - N 3. - С. 1115.
308. Цветова М.И., Ишин А.Г. Характер изменчивости некоторых морфофизиологических признаков у индуцированных аутотетраплоидов сорго// Биологические основы селекции. / РАСХН. Саратов, 1991. - С. 49.
309. Цитович И.К. Курс аналитической химии. М.: Высшая школа, 1964. -378 с.
310. Цицин Н.В. Ботанические сады СССР. М.: Наука, 1974. - 191 с.
311. Чайлахян М.Х. Гормональная теория развития растений. M.-JL: Изд. АН СССР, 1937.- 190 с.
312. Чайлахян М.Х. Регуляция цветения высших растений// Гормональная регуляция онтогенеза растений. М.: Наука, 1984. - 1984. - С. 9-28.
313. Чудновский Б.В., Запольский О.Ю. Способы выращивания рассады стевии из материала, полученного in vitro// Введение в культуру стевии -низкокалорийного заменителя сахара. Киев: ВНИС, 1991. - С. 24-28.
314. Шатилов И.С., Замараев А.Г. Использование физиологически активной радиации кукурузой при разной густоте стояния// Известия ТСХА. 1965. -Вып. 5-6.-С. 148-161.
315. Шафферт Е.Э. Морфолого-анатомическое и цитоэмбриологическое исследование вегетативно-репродуктивной системы стевии (Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsl.) в условиях интродукции на южном берегу Крыма: Автореф. дис. .канд. биол. н. Ялта, 1992. - 22 с.
316. Шафферт Е.Э., Чеботарь А.А. Строение, топография и онтогенез трихомов Stevia rebaudiana// Ботан. журнал. 1994. - Т. 79, N 4.- С. 38-48.
317. Шванитц Ф. Исследование полиплоидии растений. Признаки гигантизма у культурных растений и их значение для селекции полиплоидии// Полиплоидия. М.: Изд. ИЛ, 1956. - С. 130-153.
318. Шевелуха B.C. Закономерности ростовых процессов и продуктивность сельскохозяйственных растений// Физиолого-генетические основы повышения продуктивности зерновых культур. М.: Колос, 1975. - С. 2534.
319. Шевелуха B.C., Шанбанович Г.Н. Влияние картолина на засухоустойчивость ячменя// Тезисы докладов V республиканской конференции "Физиологические основы повышения продуктивности и устойчивости зерновых культур". Целиноград, 1984. - С. 15.
320. Шевелуха B.C., Шанбанович Г.Н., Чайка М.Т., Михайлова С.А., Суховер
321. Л.К., Чканикова Я.А., Климович А.С., Соколов В.Н., Белявская Л.И. Действие картолина на продуктивность и фотосинтетический аппарат ярового ячменя в условиях засухи// Докл. ВАСХНИЛ. 1985. - N7. - С. 14-16.
322. Шевелуха B.C., Ковалев В.М., Лезжова Т.В., Тучков В.П., Шанбанович Г.Н. Эффективность действия регуляторов роста картолина на продуктивность ярового ячменя в условиях почвенной засухи// Сельскохоз. биол. 1987. - N 9. - С. 3-6.
323. Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Дегтярев С.В. и др. Сельскохозяйственная биотехнология. М.: Высшая школа, 1998. - 416 с.
324. Шеренкова Х.А., Селиванкина С.Ю., Романко Е.Г., Творус Е.К., Лобанова Т.А., Генкель П.А., Баскаков Ю.А., Кулаева О.Н . Активизация картолином РНК-полимеразы в листьях ячменя при действии засухи// Физиол. раст. 1983. - Т. 30, N 5.
325. Шпессер Л. "Клейнванцлебенская Поли" новый сорт сахарной свеклы// Полиплоидия. - М.: Изд. ИЛ, 1956. - С. 220-224.
326. Шульгин И.А., Щербина И.П., Айдосова С.С., Панкрухина Т.В., Галушевская И.Ю. Архитектура растений пшеницы как фактор их продуктивности//Биол. науки. 1986. - N 5. - С. 5-25.
327. Штернберг М.Б. О возможном участии ростовых веществ и нуклеиновых кислот в механизме действия фитохрома// Регуляторы роста растений и нуклеиновый обмен. М.: Наука, 1965. - С. 65-102.
328. Щербаков В.Г., Лобанов В.Г., Прудникова Т.Н. и др. Биохимия./Под ред. Щербакова В.Г. Изд. 2-е., перераб. и доп.-СПб; ГИОРД, 2003. 440 с.
329. Якушкина Н.И., Воронков Л.И. Влияние питания растений на содержание в них естественных фитогормонов// Агрохимия. 1968. -N 10. - С. 77-84.
330. Ярмолюк Г.И., Бшоус В.Е., Перфшьева Л.П., С1чкар А.А. Боташчна та ембрюлопчна характеристика Stevia rebaudiana Bertoni (Asteraceae)// Укр. ботан. журн. 2000. - Т. 37, N 3. - С. 321-326.
331. Ярмолюк Г.И., Белоус В.Е. Ботаническая и морфологическаяхарактеристика стевии// Введение в культуру стевии источника низкокалорийного заменителя сахара. - Киев: ВНИС, 1990. - С. 6-8.
332. Ярмолюк Г.И., Рогова А.И. Микроспорогенез и развитие мужского гаметофита у стевии// Введение в ультуру стевии низкокалорийного заменителя сахара. - Киев: ВНИС. - 1990. - С. 97-101.
333. Яшин Я.И., Яшин А.Я., Пахомов В.П. Установка для определения суммарной антиоксидантной активности биологически активных соединений. Патент на изобретение N2003123073/15(024965). Дата подачи заявки 25.07.2003.
334. Baptista s.w., seima-Dzimitas R. Efeito do acido giberelico no desenvolvimento de plantas de estevia (Stevia rebaudiana (Bert.) Bertoni)// Cientifica. 2003. - V. 31, N 1. - P. 31-41.
335. Bennet R. Biosynthesis of steviol from kaurene// Phytochem. 1967. - V. 6. -P. 1107-1110.
336. Bjorkman J. Characteristics of the photosynthetic apparatus as revealed by laboratory measurements// Prediction and measurement of photosynthetic productivity. Pudoc, Wageningen, 1970. - P. 193-231.
337. Bjurmen B. The photosynthesis in diploid and tetraploid Ribes satigrum// Physiol. Plantarum. 1959. -V. 12, N 2. - P. 183-187.
338. Borthwick H.A., Hendricks S.B., Parker M.W. The reaction controlling floral initiation// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1952. - V. 38, N 11. - P. 929-934.
339. Borthwick H.A., Hendricks S.B. Photoperiodism in plants// Science. 1960. -V. 132, N3435.-P. 1223-1228.
340. Carmi A., Heuer B. The role of roots in control of bean shoot growth// Ann. Bot. 1981. - V. 48, N4. - P. 519-527.
341. Collins J., Kern K. The origin and significance of triploid and tetraploidpineapples// Proc. Hawaian Acad. Sci.: Tenth Annual Meet./ Bernice Bishop Museum (Spec. Publ.), 1935. P. 26.
342. Crammer В., Ikan R. Sweetening// Chem. Soc. Rev. 1977. - V. 6, N 3. - P. 431.
343. Crammer В., Ikan R. Sweet glyosides from the Stevia plant// Chem. Brit. -1986. V7 22, N 10. - P. 915-916, 918.
344. Czechowiak C., Dubois J., Vasseur J. Culture in vitro du Stevia rebaudiana Bertoni// C.r. Acad. sci. 1984, ser. 3. - V. 298, N 6. - P. 173-176.
345. Damisch W. Beitrage zur Ertragsphysiologie der Getreides. 2. Mitt. Die Attractiones-Productionsbeziehungen in der Kornfullungspervode beiverchoelenen Winterweizengenotypen// Arch. Zuctungsforseh. 1973. - T. 3, N 4. - S. 285-296.
346. Darise M., Mizutaki K., Tanuka O., Kitahata S., Okada S., Ogawa S., Murakami K., Chen J.H. Enzymatic transglucosylation of ribuloside and the structure sweetness relationship of steviolbisglucosides// Agric. Biol. Chem. -1964.-V. 45, N 1. P. 24-48.
347. De Maggio A.E., Steller D.A. Polyploidy and gene dosage effects on chloroplasts of fern gametophytes// Exp. Cell. Res. 1971. - V. 67, N 2. - P. 287-294.
348. Dobberstein R.H., Suzuki F.A. Flavor enhancing and modifying materials. -U.S. Pat. N 4612942, 8.03-84-23.09.86.
349. Dorfman R.J., Ness W.R. Antiadrogenous activities of steviol// Endocrinology. 1960.-N67.-P. 282-285.
350. Downs R.J. Photoreversibility of flower initiation// Plant Physiol. 1956. - V. 31,N4.-P. 279-284.
351. Dujardin M., Kvien C., Hanna W.W. Morphological characteristics and leaf pigment contents of isogenic-diploid and tetraploid pearl millet inbred lines// Cytologia. 1989. - V. 54, N 4. - P. 699-703.
352. Dupaigne P. Some natural sweeteners with the strong sweetness ability// Plant medicinale of phytoterapy. 1974. - V. 7, N 2. - P. 104-108.
353. Ekdahl J. Comparative studies in physiology of diploid and tetraploid barley//
354. Arkiv. bot. 1944. - В. 31A, N 1. - S. 1-45.
355. Ekdahl J. Gigas properties and acreage yield in autotetraploid Galeopsis ^ pubescans// Heriditas. 1949. - V. 35, N 2. - P. 397-421.
356. Esaki S., Tanaka R., Kamiya S. Synthesis and taste of certain steviol glycosides (Diterpenes contained in Stevia rebaudiana// Agric. Biol. Chem. -1984.-V. 48, N7.-P. 1831-1834.
357. Ferreira C.M., Handro W. Some morphogenetic responses in leaf explants of Stevia rebaudiana cultured in vitro// Revista Brasileira Botanica. 1987. - V. 10,N1.-P. 113-117.
358. Ferreira C.M., Handro W. Production, maintenance and regeneration from cell suspension cultures of Stevia reubadiana (Bertoni) Hemsley// Plant Cell Reports. 1988. - N 7. - P. 123-126.
359. Frankenberger W.J.Jr., Chang A.C., Arshad M. Response of Raphanus sativus to the auxin precursor L-tryptophan applied to soil// Plant and Soil. 1990. - V.129, N2.-P. 235-241.
360. Fujita S., Taka K., Fujita Y. Miscellaneous contribution to the essential oils of the plants from various territories. XLI. On the components og the essential oil of Stevia rebaudiana Bertoni// J. Pharm. Soc. Jap. 1977. - V. 97, N 6. - P. 692-694.
361. Galperin de Levy R.H. Stevia rebaudiana Bertoni: extraccion, purificacion у щ empleo del stevisiodo// 5 Reun. teen. nac. espec. у prod. arom. у med.,
362. Costelar Comun. Buenos Aires. 1982. - P. 47-57.
363. Goenadi D.H. Effect of slope position on the growth of stevia in Indonesia// Comn. Soil and Plant Anal.- 1987.-V. 18,N 11.P. 1317-1328.
364. Handro W., Well K.G., Kerbayu G.B. Tissue culture of Stevia rebaudiana, a ' sweetening plant// Plant Medica. 1977. - V.32, N 1. - P. 115-117.
365. Handro W., Ferreira C.M. Stevia reubadiana Bertoni: production of natural щ sweeteners// Med. and aromat plants. Berlin, 1989. - P. 468-487.
366. Hanson J.R., White A.F. Studies in terpenoid biosynthesis-II of steviol//
367. Phytochem. 1968. - V. 7, N 4. - P. 595-597.
368. Heilborn O. Reduction division, pollen lethality and polyploidy in apples// Acta horti Bergiani. 1937.-N9.-P. 129-184.
369. Hesse R. Vergleichende Untersuchungen an diploiden und tetraploiden Petunien// Z. indukt. Abstammung- und Vererbungslehre. 1938. - N 73. - S. 1-23.
370. Hatch M.D. The C4-pathway of photosynthesis. Evidence for an intermediate pool of carbon dioxide and the identify of the donor C4-dicarbolic acid// BiochemJ.- 1971.-V. 125,N2.-P. 425-432.
371. Kaneda N. Chemical studies on sweet diterpene-glycosides of Stevia rebaudiana: Convertion of stevioside into rebaudioside A// Chem. Pharm. Bull. 1977. - V. 25, N 9. - P. 2466-2467.
372. Kawatani Т., Kaneki Y., Tanabe Т., Sakamoto I. On the cultivation of kaa-he-e to nitrogen fertilization rates and to the major elements of fertilizer// Jap. J. Trop. Agric.- 1978. V. 21, N 1. - P. 173-178.
373. Kehrer J. Free radical as mediators of tissue injury and desease// Critical reviews in toxicology. 1993. - V. 23, N 1. - P. 21-48.
374. Keresztes A., Faludi-Daniel A. Ultrastructure, pigment content and photosynthetic activity of the normal and mutant chloroplasts in developing Tradescantia leaves// Acta biol. Acad. Sci. hung. 1973(1974). - V. 24, N 3-4. -P. 175-179.
375. Kinghorn A.D., Soejarto D.D. Current status of stevioside as a sweetening agent gor humen use// Economic and medicinal plant research. 1985. - V. 1, N 1. - P. 54-59.
376. Kinghorn A.D., Soejarto D.D. Sweetening agents of plant origin// Critic reviews in plant sciences. 1986. - N 4. - P. 79-120.
377. Kirk P.R., Leech R.M. Amino acid biosynthesis by isolated chloroplasts during photosynthesis// Plant Physiol. 1972. - V. 50, N 2. - P. 228-234.
378. Kitada Y., Sasaki M., Yamazoe Y. Simultaneous determination of stevioside, ^ rebaudioside A and С and dulcoside A in foods by high-performance liquidchromatography// J. Chromatogr. 1989. - V. 37, N 2. - P. 229-237.
379. Kobayashi M., Horikana S., Yamasaki K., Degrandi I.H., Ueho J., Mitsuhashi H. Dulcosides A and B, new diterpene glucoside from Stevia rebaudiana// Phytochemistry. 1977. - V. 7, N 1. - P. 16-25.
380. Kohda H., Kasai K., Yamasaki M. New sweet diterpene glycosides from Stevia rebaudiana// Phytochem. 1976. -V. 15. - P. 981-983.
381. Kostoff D., Kendal R. Studies in certain petunia aberants// J. Genetics. 1931. -V. 24, N1.-P. 165-178.
382. Kudo M., Koga J. Photoperiodic response and its variation in Stevia rebaudiana Bertoni// Jap. J. Trap. Agric. 1977. - V. 20, N 2. - P. 211-217.
383. Kupka J., Truong Quang Tan. Fotosynteza a obsah chlorofylu v ontogenezi j kukurice// Rostl. vyroba. 1975. - T. 21, N 4. - S. 403-408.
384. Laber I.J., Latzko E., Gibbs M. Photosynthetic path of carbon dioxide in spinach and corn leaves// J. Biol. Chem. 1974. - V. 249, N 11. - P. 34363441.
385. Lesley J. Trisomic types of the tomatos and their relation to the genes//
386. Genetics. 1932. - V. 17, N 4. - P. 545-560.
387. Levan A. Tetraploidy and octoploidy induced by colchicine in diploid Petunia// Hereditas. 1939. - V.25, N 1. - P. 109-131.
388. Levan A. The pigment content of polyploid plants// Hereditas. 1943. - V. 29, N2.-P. 255-268.
389. Lovkova M., Buzuk G., Sokolkva S., Kliment,eva N. Chemical features of medicinal plants// Applied Biochemistry and Microbiology. 2001. - V. 37, N 3.-P. 229-237.
390. Makapugay H.C., Nanayakkara N.P.D., Kinghorn A.D. Improved high-performance liquid chromatographic separation of the Stevia rebaudiana sweet diterpene glicosides using linear gradient elution// J. Chrom. 1984. - V. 283, N3.-P. 390-395.
391. Martelli A., Frattini C. Unusial essential oils with aromatic properties. I. Volatile components of Stevia rebaudiana Bert.// Flavour and Fragnance J. -1985.-V. 1, N 1. P. 3-7.
392. McCoy T.J. A potential solution to the chromosome instability problem in hexaploid alfalfa, Medicago sativa L.// Genome. 1989. - V. 32, N 2. - P. 302306.
393. McCree K.J., Troughton J.H. Prediction of growth rate at different levels from measured photosynthesis and respiration rates// Plant Physiol. 1966. - V. 41, N4.-P. 559-566.
394. Metivier J.R., Viana A.M. Determation of microgram quantities of steviosides from leaves of Stevia rebaudiana Bert, by two dimensional thin layer chromatography// J. Exp. Bot. 1979. - V. 30, N 6. - P. 805-810.
395. Metivier J.R., Viana A.M. The effect of long and short daylength upon the growth of whole plants and the level of soluble proteins, sugar and stevioside in leaves of Stevia rebaudiana Bert.// J.Exp. Bot. 1979a. - V. 30. - P. 12111222.
396. Mitsuhashi H., Ueno J., Sumida I. Studies on growing Stevia rebaudina Bertoni. Determination of stevioside// Yakugaki zasshi. 1975. - Vol. 95, N12.-P. 1501-1503.
397. Mitsukami M., Shiiba K., Ohasha H. Enzymatic determination of stevioside in Stevia rebaudiana//Phytochem. 1982. - V. 21, N 8. - P. 1927-1930.
398. Miyagawa H., Fujioka N., Kohda H., Yamasaki K., Taniguchi A., Tanaka R. Studies on the tissue culture of Stevia rebaudiana and its components. II. Induction of shoot primordia// Planta Med. 1986. - N 4. - P. 321-323.
399. Molero J.F.L. La prorogation de Kee hee Stevia rebaudiana Bertoni// Primer simposio National de la stevia (Kee hee) (Asuncion, Paraguay, Julio 1983). -29 p.
400. Monteiro W.R., Gifford E.M. Histichemical aspects of the shoot apex of Stevia rebaudiana (Bert.) during transition to flowering// Res. Bras. hot. 1988. - V. l.-P. 11-21.
401. Monyo J.H., Whittington W.I. Inheritance of plant growth characters and their relation to yield in wheat substitition lines// J. Agr. Sci. 1971. - V. 76, N 1. -P. 167-172.
402. Mosettig E., Ness B.R. Stevioside. II. The structure of the aglucon// J. Org. Chem. 1955. - V. 20. - P. 884-889.
403. Nabeta K., Kasai Т., Sugisawa H. Callus culture of Stevia rebaudiana// Agric. Biol. Chem. 1976, - V. 40. - P. 2103-2104.
404. Niwa K., Ohta S., Sakamoto S. Spontaneous triploids of collected in Turkey// Cytologia. 1989. - V. 54, N 3. - P. 483-487.
405. Peto F.H., Boyce J. W. Comparison of diploid and triploid sugar beets// Can. J. Research. 1940. - V. 18, N 2. - P. 273-282.
406. Pezzuto J.M., Compadre C.M., Iwanson S.M., Nanayakkara H.F., Kinghorn A.D. Metabolically activated steviol, the adlycone of stevioside is mutagenic// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. - V. 82, April. - P. 2478-2482.
407. Phillips K.S. Stevia: step in developing of a new sweetener. Newbure: Berkshire UK, 1989. - 106 p.
408. Planas G.M., Kuc J. Contraceptive property of Stevia rebaudiana// Science (Washington). 1968. - N 162 (3857). - P. 1007.
409. Planchon С. Relations entre 1,assimilation chlorophyllienne nette la teneur en chlorophylle et la temperature chez le ble tendre (Ttiticum aestivum L.)// C. r. Acad. sci. 1971. - D 272, N 1. - P. 68-71.
410. Rao J.S., Mengesha M.H., Rao S. Cytomorphological studies of a spontaneous triploid in Pennisetum hohenackeri Hochst. ex Stend// Genome. 1989. - V. 32, N3.- P. 404-407.
411. Randal D.D., Nelson C.I., Assay K.H. Ribulose bisphosphate carboxylase// PI. Physiol. 1977. - V. 59, N 1. - P. 38-41.
412. Ruddat M., Lang A., Mosettig E. Gibberellin activity of steviol, a plant terpenoid// Naturwissensch. 1963. - Bd. 50. - S.23.
413. Sakaguchi M., Kan T. Japanese researches on Stevia rebaudiana Bertoni and stevioside// Cit. Cult. 1982. - N34. - P. 235-248.
414. Sasson A. Biotechnologies and development. Paris: Unesco Techn. centre for agr. and rural cooper. - 1988. - 361 p.
415. Schwanitz F. Die Zellgrosse als der entschiedende Factor fur die Entsteung der verschiedenen Sortengruppen beim Kulturlein//Naturwissenschaften. 1951. -B. 38, N 1. - S. 44-45.
416. Sestak Z., Catsky I. Intensity of phosynthesis and chlorophyll content as related to leaf age in Nicotiana sanderae hort.// Biol, plant. Acad, scient bohemosl. 19622. V.4, N 2. - P. 131-140.
417. Shephard D.C., Levin W.B. Biosynthesis in isolated Acetabularia chloroplasts. I. Protein amino acids// J. Cell. Biol. 1972. - V. 54, N 2. - P. 279-294.
418. Shigekata Y. Studies on carbohydrate formation in Stevia rebaudiana. I. A simple determination way by means of TLC-densitometer of glycosides content during the plant growth// Jap. J. Crop Sci. 1986. - V. 55, N 2. - P. 189-195.
419. Shock C.C. Rebaudi's stevia: natural noncaloric sweetener// Calif. Agric. -1982.-V. 36, N9-10.-P. 4-5.
420. Shock C.C. Experimental cultivation of Rebaudi's stevia in California-Davis// Agron. Progr. Rept. Univ. Calif. 1982a. - Coop. Extn. Agr. Exp. Sta., 122.-81. P.
421. Soejarto D.D., Kinghorn A.D., Farnworth B.B. Potential sweetening agents of plant origin. III. Organoleptic evalution of stevia leaf herbarium samples for sweetness// J. Nat. Prod. 1982. - V. 45, N 5. - P. 590-599.
422. Stolfelt M. Kohlensaureassimilation und Atmungder grosswuchsigen Polyloiden// Arkiv. bot. 1943. - В. 30A, N 1. - S. 121.
423. Straub J. Quantitative und qualitative Verschiedenheiten innerhalb von polyploiden Pflanzenreihen// Biol. Zbl. 1940. - B. 60, N 4. - S. 659-669.
424. Sullivan J.D. World and U.S. sugar outlook: 1986-87 crop year// The California sugar beet. 1986. - P. 15-18.
425. Sumida T. Reports on Stevia rebaudiana Bertoni introduced from Brasil as a new sweetnes resourse in Japan// Misc. Pub. Hokkaido Natl. Agric. Exp. Sta. -1973.-N2.-P. 69-83.
426. Sumida T. Problems of stevia growing technology// Jap. Food Sci. 1978. - V. 17,N8.-P. 24-30.
427. Sumida T. Studies on stevia rebaudiana Bertoni as a new possible crop for sweetening resource in Japan// J. Cent. Agric. Exp. Stn. 1980. - V. 31, N 1. -67-71.
428. Takanashi K., Matsuda M., Ohashi K. Analysis of anti-rotavirus activity of extract from Stevia reubadiana// Antiviral Research. 2001. - V. 49, N 1. - P. 15-24.
429. Tamura Y., Nakamura S., Fukui H., Tabata M. Comparison of stevia plants grown from seeds, cutting and stem-tip culture// Plant Cell Repts. 1984. - V. 3, N 5. - P. 180-182.
430. Tamura Y., Nakamura S., Fukui H., Tabata M. Clonal propagation of Stevia rebaudiana Bertoni by stem-tip culture// Plant Cell Repts. 1984a. - V. 3, N 5. -P. 183-185.
431. Tanaka O. Chemistry of Stevia rebaudiana Bertoni// Recent Adv. Nat. Prod. Res. 1980.-V. 1,N l.-P. 111-119.
432. Valio J.F., Roche R.F. Effect of photoperiod on growth and flowering of Steviarebaudiana Bertoni// Japan Journ. Crop Sci. 1977. - V. 46, N 2. - P. 243-248.
433. Viana A.M., Metivier J.R. Changes in the levels of total soluble proteins and sugars during leaf ontogeny in Stevia rebaudiana Bert.// Ann. Bot. 1979. - V. 15, N3.-P. 469-474.
434. Watson D.J., Witts K.J. The net assimilation rates of wild and cultivated beets// Ann. bot., N. S. 1959. - V. 23, N 91. - P. 431-439.
435. White J.R., Kramer J., Campbell P.K., Bernstein R. Oral use of a topical preparation containing an extract of Stevia rebaudiana and the chrysantemum flower in the management of hyperglycemia// Diabet Care. 1994. - V. 17(8), N6.-P. 940-941.
436. Whittingham C.P. Photorespiration: its mechanism and significance// Agron. Jusitana. 1979. - V. 39, N 2-3. - P. 115-129.
437. Willenbrink J. Transport 14C-markierter Assimilate in Phloem von Pelargonium zonale und Phaseolus vulgaris// Planta. B. 71, N 1. - S. 171183.
438. Wollenweber E., Dietz V.H. Occurrence and distribution of free flavonoid aglycones in hlants// Phytochem. 1981. - V. 20, N 5.- P. 869-932.
439. Wood H.B., Allerton R., Diehl H.W., Fletcher H.G. Stevioside. I. The structure of the glucose moieties// J. Org. Chem. 1955. - V. 20, N 7. - P. 875-883.
440. Yamamoto N.S., Kelmer A.M., Bracht E.S., Ishii F.S., Kemmelmeier M.A., Bracht A. Effect of steviol and its structural analogues on glucose production and oxygen uptake in rat renal tubules// Experimentia. 1985. - V.26, N 1. - P. 41-45.
441. Yang J.W., Chang W.C. In vitro plant regeneration from leaf explants of Stevia rebaudiana Bertoni//Z. Pflanzenphysiol. 1979. - B. 93. - S. 337-343.
442. Zaidan L.B.P., Dietrich S.M.C., Fellipe G.M. Effect of photoperiod on flowering and stevioside content in plants ofStevia rebaudiana Bertoni// Jap. J. Crop Sci. 1980. - V. 49, N 4. - P. 569-574.
443. Zeevaart J. A.D. Hormonal signals in flowering// Physiol, plant. 1990. - V. 79, N2, Pf2. - P. 18.
444. Zilian B.P., Sonia M.C., Dietrich A., Fellipe G.M. Effect of photoperiod on flowering and steviosidae cjntent in plants of Stevia rebaudiana Bertoni// Japanese Journal of Crop Science. 1980. - V. 49, N 4. - P. 569-672.
445. Zin W., Novick A. Substitution of hihg fructose corn syrup for sugar trends and outlook// Sugar and sweetener situation and outlook. 1988. - N 2. - P. 2021.
446. Zipinsky E.S., Kresovich S. Sugar crops as a solar energy converter// Experimentia. 1982. - V. 1, N 1. - P. 13-18
-
Верзилина, Наталья Дмитриевна
-
доктора сельскохозяйственных наук
-
Б.м., 0
-
ВАК 06.01.09
- Хозяйственно-биологическая оценка стевии сорта рамонская сластена при введении в культуру на выщелоченных черноземах
- Элементы технологии возделывания стевии (Stevia Rebaudiana Bertoni) на черноземе выщелоченном Центрального Предкавказья
- Биолого-морфологические особенности стевии /Stevia rebaudiana (Bertoni)/ при интродукции в условиях ЦЧЗ России
- Биологические особенности и химический состав stevia rebaudiana (bertoni) hemsl. при интродукции в Ленинградскую область
- Стевия - Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsley, интродукция, морфология, биология, возделывание
