Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная морфобиологическая и иммунологическая характеристика цистообразующих кокцидий родов Sarcocystis и Toxoplasma

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная морфобиологическая и иммунологическая характеристика цистообразующих кокцидий родов Sarcocystis и Toxoplasma"

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА и ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИЙ Р Г Б 0 flCAHKT_nETEPByPrCKK3 ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

- 5 СЕН 19Я4

На правах рукописи

НОВАК Михаил Дмитриевич

im 619:616.993.1.636.2

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЮРЮБИОЛОГИЧЕСКАЯ И ЛШУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИСТООБРАЗУВДИХ НОЮЩИЙ РОДОВ SARCOCYSTIS И TOXOPLASMA

03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ - 1994

министерство сельского хозяйства и продовольствия российской федерации стт-шедатжий ветеринарии инсотгут

На правах рукописи

НОЗАК Кахаял Дмитриевич

УДК 619:616.993.1.636.2

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ШРвОЕЙОЛСгаЧЕСКАЯ И ИШУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦКСТООВРАЗУЩИХ КОКЦЙДИЗ НЩЗЗ SA.RCtXrVSTIS И TOXOPLASMA

03.00.10 - паразитологии

АВТОРЕФЕРАТ диссертации па соискание ученой степени доктора биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ - 1994

Работа выполнена в лаборатории протозоологии Института «зоологии HAH Республики Казахотаа.

Научные консультанты - доктор биологических наук, профессор С.М. Пак, доктор медицинских наук, профессор Б.В. Каравышк.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, прсфэооор, заслуженный деятель науки Российской * Федерации Б.А. Тимофеев, доктор биологических наук, профессор Т.Д. Шибанова, доктор ветврииар(шх наук О. П. Илотечгага

Ведущее учреждение - Московская ветерннарная академия имени академике К.И. Скрябина.

Защита диссертации состоится " ¿£AtSS&fL£,' 1SSA г. в /vff&ßob на васедаиии специализированного совета Д 120.20.02 по присудденгео ученой степей» доктора наук при Санкт-Петербург-оком ветеринарной институте.

Адрео института: 195084, г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская. Б.

С диссертацией машго оенакокиться в виблиотеке Саакт-Петербургского ветеринарного института.

Автореферат разослал " /У" 1ОД г.

Ученья секретарь специализированного совета,

кандидат биологических наук О.В. Увшова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Аптуадэеяк'та теми. Одним из путей (»хранения поголовья и повышения продуктивности сельскохозяйственных животных является разработка профилактических мероприятий против широко раоп(И>стряненти нротоэойных заболеваний - саркоцистоза и ток-сопл згиоза. Важным ввенм» в комплексе мер, направленных ва предупреждение заболеваний, служит их ранвяя диагностика о использованием иммунодпагаостических тестов. В связи с тем, что ряд паразитов имеет и эпидемиологическое значение (человек может быть дефинитивным и промежуточным ховяином значительного количества возбудителей), возникает необходимость тщательного изучения инвазии тавотных в человека, разработки новых ишунореа-гентов, методов иммунодиагностики я способов иммунопрофилактики. Известен строгай спектр иммунологических тестов, используемых для диагностики инфекционных в паразитарных заболеваний -РСЖ, РА, РП, РИФ, РИГА и другие. Однако некоторые иэ этих методов не могут удовлетворить диагностическую службу иэ-за невысокой чувствительности а вначительной трудоемкости. В настоящее время кроме вышеназванных используются более эффективные и чувствительные иммунологические теста. Широко применяется в медицинской практике йммунсферментный анализ (ИФА).

Большое значение в достоверной диагностике протозойных заболеваний имеет специфичность антигенных препаратов, степень их очистки of балластных вещеста белковой природы и антигенных фракций таксономически родственных паразитических простейших. Все данные о распространении токсоплаэмоза, его реальной роли в различных видах патологии животных » человека, имеющиеся до настоящего времени в мире и нашей стране, получены ва основе использования в иммунодиагностике суммарных антигенов токсопяазы, содгрягпцгх общие коипонэнтн о тахсовомнчески близкими простей-виш, в частности с Sarcocystis. Учитывая широкое распространение сгокоцистоза среди животных, роль саркоспорцдий в зтиолопга миокардитов и острых кишечных заболеваний человека, необходимо определить реальную параде гаг ость яяготнш. и дпдей кжеоплагда-зш с использованием новых токсоплагыеняых и саркоцасгимх имму-нореагеятов, обеспечяяагадя отрогу» специфичность.

Значительный экояоикческий ущерб, причиняемый саркоцисто-зом и токсоллзамогою, как в отдельности, так и при сочетании,

широкое распространение ¡заболеваний требуют разработки эффективных иммунопрофилактических препаратов. Последние в нааей стране биологической промышленностью не выпускаются. Особый интерес представляют иммунологические препараты нового поколения - ачтивдиотилические антитела (Ат-2), применение которых перспективно в качестве диагностических и иммунопрофклактичес-ких средств.

Необходимы полные сведения о морфологии, особенностях биологии, видовом разнообразии г - антигенной структуре цистообра-аующях кокцидий родов Sarcocystis и Toxoplasma. Существенное значение для биологической науки имеет изучение жизненных циклов, эволюционных взаимосвязей паразитических простейших отряда Coccidiia, представляющих переходные формы от облкгатно- ом хенных (Eimeria, Tizzpria, Cariospora) к факультативно- (Toxoplasma) и облигатно-гетероксенным (Sarcocystis, Hairmondia, Frenkelia) паразитам.

С?ль и задачи исследования. Целью наших исследований являлось комплексное изучение морфобиологичеосш особенностей, основ метаболизма, антигенных.взаимосвязей цистообрааующия кок-цидий родов Sarcocystis и Toxoplasma, специфичности и эффективности новых иммунореагентов, иммунологических особенностей организма хозяина, а тауде экономического ущерба при саркоцисто-ае. Для осуществления поставленной цели были решены следующие задачи.

1. Провести сравнительное изучение морфобиологических и цитохимических особенностей некоторых видов Sarcocystis и Toxoplasma gondii.

2. Изучить антигенные взаимосвязи Sarcocystis н Toxoplasma.

3. Выяснить особенности иммунитета пги сарксцнстоэе и ток-соплазмоэе.

4. Разработать способы получений саркоцистных, токсоплаз-менных, других антигенных и ант-чтельных иммуиореагентов для РИГА и ИФА, изучить их специфичность и чувствительность.

Б. С помощью полученных ковн/. нмм.нореагенгов определить возмодносгь выявления стадии развития Sarcocystis и Toxoplasma.

6. Отработать параметры получи т саркоцистных, токсоплвэ-мешшх еитииднотипичееких антител, изучить их диагностическое значение и вогмпаиооть исшш зования для специфической иммуно-

- Б -

профилактики саркоцистоза и токсоплазмоаа.

7. Изучить экономический ущерб при саркоцистозе крупного рогатого скота.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Установлен элц Sarco^ystia diaphragmatica sp. п., Novae, Fedoseenko, Orasaltnova, 198?, характеризующийся отсутствием при заражении половых стадии развития в кишечнике дефинитивных хозяев (собака, лиса, кошка, человек). Особенностью вида является локализация преимущественно в диафрагме макроскопических форм саркоцист размером от 1,5 до 25 мм х 0,5-1 мм. Изучена ультраструктура цветных стадий развития. Мембрана цистной стенки образует грибовидные выступы, представленные тонкой ножкой и эллипсоидной шляпкой с контрастно очерченной электронно-плотной стреловидной структурой. Микронемы мерозоитов нового вида имеют палочковидную форму в отличив от округлой других видов.

Зарегистрирован вид Sarcocystys bovivulpes sp. п., отлкча-к: дайся от S.bovicanis особенностями морфологии ццстной стенки, а также продолжительностью препатентного периода в организме дефинитивного хозяина (лиса, собака).

При помошя методов иммунодиагностики, иммунобиохимии выявлены родственнее антигенные связи меяду двумя родами цистообра-■зующих кокцидий - Sarcocystis и Toxoplasma, Родстве1 ше о Sar-cocystis антигенные детерминанты имеются у Toxoplasma; Sarcocystis не содержат общих антигенов с Toxoplasma.

•Выяснены особенности гуморального иммунитета при саркоцистоэе у молодняка крупного рогатого скота.

Отработаны параметры выделения высоко'очищенных специфичных токсоплаэменных и саркоциотных антигенов, а также приготовления иммунореагентов для РИГА и ИФА.

Человек, по-ввдимому, колет иммунизироваться растворимыми саркоциотпыми антигенами, употреблю- в пишу коровье молоки. Поэтому, в связи с наличием антигенных связей Toxoplasma a Sarco-cystia, э практике лабораторной диагностики с^лечают лодзополо- ' «Отельные реакции на токсошгазмоз.

Получена антиидготилические саркоцистнье и токооштзменные . нммунореагенты, установлена их диагностическая ценаооть и воз-ыоанооть использования Аг-2 для спецкфичеокой ишувопрофилакти-кя саркоцистоза и токсоплазмоаа.

- б -

Определен экономический ущерб при саркоцистозе молодняка крупного рогатого скота.

Практическая ценность работы. Результаты исследований по иэуче- то специфичности и чувствительности саркоцисткых и ток-соплзгменных антигенных препаратов позволяют проводить точную дифференциальную диагностику токсоплазмоза, исключать ложнопо-ложительные реакции, что особенно важно, так как истинный ток-соплазмоз яг-ляется оппортунистической инфекцией при СПИД.

Разработана методика получения саркоцистного антигена иэ доступного сырья - макроскопчческих цист Sarcocystís diaphrag-mat.\;a sp. п.

Антиидн типические саркоцистные и токсоплазменные иммуно-реагенты являются пригодными в качестве диагностических препаратов. Установлена достаточно высокая иммунопрофилактическая эффективность саркоцистных и токсоплагменных антиидиотипичес-ких антител.

р^яультаты оригинальных исследований по описанию нового вида Sarcocystís diaphragmatica sp. п., особенностей биологии, антигенного родства различных таксонов цистообразующих кокци-дий могут найти применение р руководствах по подготовке студентов, аспирантов, научных работников и преподавателей, работающих в области общей биологии, ветеринарии, медицины.

На основание изучения экономического ущерба при саркоцистоэе рекомендо! да система ветеринарно-санитарных мероприятий с учетом механизма и путей передачи возбудителя. :

Апробация работы. Материалы исследований, изложенные в наставлении "Применени реакции флуоресцирующих антител при сар-коспоридиозе крупного рогатого скота", используются в областных ветеринарных лабораториях Республики Казахстан при серологической дифференциальной диагностике саркоцистоза и токсо-плазмоэа. Практические предложения включены в методические ре--комендации "Саркоспоридиоз животных и меры борьбы с ним", разработанные сотрудниками Института зоологии HAH Республики Казахстан, Кае НИВИ ; ДЗЕИ.

Ученым Советом Костромской Государственной с/х академии и Областным управлением сельского хозяйства одобрены и рекомен-ЙОМНН АЛЯ утверждения в ЕГНКИ и Государственном департаменте вСТСpuHdJWM так н ич е с ки е условия и наставления на следующие ди-

агностические препараты. 1. Диагностикам эритроцитарный сарко-цистный антигенный жидкий для реакции непрр та гемагглютинации 2. Диагностикум • ритроцитарный токсоплазменный антигенный жидкий для реакции непрямой гемагглютинации. 3. Антиген саркоцчст-ни« сухой мля определения антител иммунсферментным методом. 4. Антиген токсоплазменчый очищенный жидкий для определения антител иммуноферментным методом.

Результаты исследований включены в соответствующие разделы лекционных курсов и лабораторных занятий по паразитологии и иивазионым болеепм с/х животных для студентов, аспирантов, слушателей факультетов повышения квалификации, Еетврачс.-й на ветеринарных факультетах ВУЗов Российской Федерации.

Основные положения диссертации рассмотрены и одобрены на ученых Советах Института зоологии НАН Республики Казахстан и Костромской Государственной сельскохозяйственной академии.

Фрагме;. .ы работы доложены на Х-й конференции Украинского общества паразитологов (Киев, 1986), 1У съезде ВОПР "Современные проблемы протозоологии" (Ленинград, 1987), III Всесоюзном симпозиуме пс токсоплазмозу (Новосибирск, 1989), научной конференции, посвяценкой 60-летию Института.зоологии АН РК " Животный мир Казахстана и проблемы его охраны" (Алма-Ата, 1992), У-м съезде протоэоологов (Витебск, 1992), научно-практической конференции (Кострома, 1993), межвузовской научно-методической конференции (Ярославль, 1994).

Публикация результатов исследила;гнй. По материалам диссертации опубликовано в печати 30 работ. .

Объем н структура ряссертацин. Диссертация изложена на русском языке, объемом 430 страниц машинописного текста и состоит иэ разделов: введение, список основных сокращений, обзор литературы, глава "Материалы и методы исследований", шесть глав собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предлоаения, список литератур*, включающий 530 источников, в том числе 443 работа иностранных авторов. Диссертация иллюстрировала 81 рисуа-№м и 42 таблицами. ,

Осуотме пологагоя». явпоспмма ва гагаггу.

1. Описание козого спда БагсооузИз ^арЬгедтязИса ар. п., !!очао, Ребозе.пко, ОгазаНпоуа, 1В87 на апектрсшю^геткроскопи-

ческом уровне.

2. Цитохимические особенности, характер метаболизма цисто-образующих кокцидий родов Sarcocystis и Toxoplasma.

3. Антигенные взаимосвязи между двумя родами цистообразую-щич кокцидий - Sarcocystis и Тохор]:sma.

4. Параметры получения высоко специфичных саркоциотных и токсоплазменных иммунореагентов.

Б. Получение антиидиотипических саркоцистных и токсоплаз--менных иммуноре^ентов. Диагностическая ценность антиидиотипи-чеоких антител ч возможность использования для иммунопрофилактики саркоцистоэа и токсоплазмоза.

6. Особенности иммунитета при саркоциотозе молодняка крупного рогатого скота.

7. Экономический ущерб при саркоцистозе крупного рогатого скота.

Вмадршшв вшулататин работы. .

Разработаны ¿.внедрены методические рекомендации (наотав- , ление) "Применение реакции флуоресцирующих антител при сарко- ' споридиозе крупного рогатого скота", "Кайнар", Алма-Ата, 1986. Результаты исследований используются при преподавании куроа па'' раэитологии и инвазионных болезней с/х животных'на ветеринарных факультетах ВУЗов Российской Федерации.

2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования представляю! собой несколько разделов плановых законченных тем Института зоологии HAH Республики Казахстан, самостоятельно выполненных о 1984 по 1992 годы (Н N гоорегиот-рации 01840022704, 0185004LJ04, 01.89.063308, 01.89.0076829). Кроме того, йаучныэ исследования проводились в соответствии о договором о научном сотрудничестве Института зоологии и Казахским ИяотИтутсм эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней.

В p?i5otö попользованы антигенные препараты Sarcocystis (цветная я половая стадии), а также антигены токсоплазм собственного приготовлэния; токсоплазмешшй антиген для РИФ и ИФА одесского производственного объединения бактериальных препарате и токооплазме!ншй антиген для РСК КазНИВИ (Алма-Ата).

Материал для приготовления токсоплавменного антигена полу-

чали путем внутрибрюиииного сведения кнтактным Селим мызгам 0,2 мл перитонеального этеудатз, разведенного стерильным фиэ. раствором п содержало 50-100 тстссоплазм штамма RH в поле зрения микроскопа ок.8 х об.40.

В иммунилгахимических исследованиях для выделения специфическифракций аятигевсз использовали метод иммуносорбцип ira Сп Вг - активированной агарпе. Определение бедкз в полу иных антигенных препаратах проводили спектрсфотометрически в ультрафиолетовом спектре при помощи Pye Unicam Sp 1800В. Кроме того, в серологических ис зелованиях (РИФ, РНГА, Y&*) применяли гипериммунные сыворотки против Saroocystis dlsphragraatica sp. n. и S.bovicanis, S.bertrani, Toxoplasma gondii штамма RH, Eesno-itia besnoiti и набор токсоплаэмэнных сывороток фирмы Abbout. Иммунные сыворотки получали путем 3-4-х кратной (1 раз в неделю) подкодной и внутримышечной иммунизации кроликов различными антигенными препарата},m в область поверхностных лимфатических узлов (с полным и неполным адъявзнтом Срейнда) и поясничных ■мышц. Реиммунизацию проводили через 2-3 недели, путем двукратного внутримыш-. jHOro введения антигенов. В ходе цикла иммуниаа-ции и в завершении проводили серологический контроль сывороток крови на активность специфических антител. Крсзь у кроликов брали иэ вены или артерии уха.

В качестве' одного из компонентов для РНГА использовали эритроциты барана и кур, формалинивированные по Weinbach R. (1958). Сенсибилизация эпвдроцптов проводили при помощи танина по методу Boyden S.V. (1951) в модификации Каральник^ З.В. (1981) или хлорида хрома по иэтеду Jandl J,, Sinsons R.(1957). Дл- выполнения- поставленных задач били приготовлены и апробированы антигенные зритроцитаркые диагностику^ из Sarcocystis bovicanis, S.bovihominis, s.diaphraswatica sp. п., S. bertra^i, S.ovlfelis, T. gondii - отачм F.H. Постановку .НГА.и KöA осуществляли микрометодом. При оценке результате ч НРКФ использовали микроскопы 1АЛ 2А и "ЖЫАМ". FHTA проводили в пластинах микро-титратора "Такачи". Оценку результатов У. А производили визуально и нз спектрофотометре "Titert>:4 Uniskan" с длиной золны 492. Фекалии от подопы-ных плотоядных лсизотных исследовали при помощи флотационно-седиментацшнного метода (в пасыцекном растворе хлориотс. о натрия1».

Опыты вылсишены у.ч 6 телках в возрасте шесть мес., 24 двухмесячные ягнятах, 5 двухмесячных козлятах, 35 кроликах весом 2,5-3 кг, 1450 белых мышах весом по 9-11 гр. Всего проведено: компре--орных исследований - 580,гисто- и цитохимических - 175, микроскопических - 2505, биохимических - 145, сероиммунологи- " ческих - 6492. Серологически при помост НРИФ, РИГА и ИФА исследовало 1617 сывороток крови человека, 3230 - крупного рогатого скота, 817 - овец, 380 - лошадей, 42 - свиней, 56 - верблюдов, 350 - кроликов.

Материал для исследований (сыворотки крови, мышцы, внутренне органы, головной мозг) взят в Алма-Атинской и Кзыл-Ординс-кой областях. Ис" \дьзуя метод переваривания в 0,25 7. трипсине зиды Sarcocystis определили в пробах диафрагмы 1050 голов крупного рогатого скота, 140 лошадей и в пищеводе, сердце 10 овец. Приготовлены и исследованы 1200 нативных препаратов из макроскопических саркоцист крупного рогатого скота, лошадей, овец.

Результаты экспериментального исследования обработаны методами вариационной статистики (Плохинский, 1970 и др.).

3. РЕЗУЛЬТ/ТН ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Морфобиологические и цитохимические особенности некоторых видов Sarcocystis в сравнении с Toxoplasma gondii

В нативных препаратах из проб диафрагмы и пищевода крупного рогатого скота, л шадей и овец проводил], определение ъл-дор зрелых микро- и макроскопических саркоцист. У крупного рогатого скота в большинстве случаев выявляли вид Sarcocystis bovicanls, несколько реже S.bovihomirus и очень незначительное количество S.bo«ifelis.

Вид S.bovicanls (дефинитивные хосяева - собака, волк, лиса, шакал и другие представители семейства Canidae) может достигать макроскопических раэмероь - 1,5-15 мм; встречается у BOSS* животных, макроскопические саркоцисты обнаружены только в диафрагме и поясничных мышцах. Цистные стадии - мерозоиты и промежуточна клетки (95,5Х),а также метроциты (4,57.), как правило, неподвижны, но в ряде случаев отмечено характерное движение мерозоитов - впячиванг^ и выпячивание, вращение переднего полярного конца, содержащего коноид и другие органеллы апикального комплекса. Промежуточные клетки S.bovicanls делятся эндо-

диогенией; наблюдается деление ядра митозом и постепенное обо- -собление двух ядер будущих мерозоитов, Зарегиотрироваи выход иэ метроцитов промежуточных клеток. Способность метроцитов к многократной .репродукции» по-видимому, свойственна всем представителям рода sarcocystis,

Вид S.bovifelis (деф;,штивные хозяева - кошка, другие представители семейства Pelidae). В форме макроскопических цист размером до 10 мм встречается в диафрагме. Выявлен у 8-13 7. животных.' 'г'-..'

Вид S.bovihominiL (дефинитивный хозяин - человек).локализу- •. ется в диафрагме, верхней и средней, частях пищевода. В диафраг-1 М9 развивается до макроскопических цист размером 3-15 мм. Экстенсивность зараженности составляет 25-40%.

. Вид «-агсосузИз bovlvulpes sp. п» "(дефинитивные хозяева -лиса, собака) локализуется преимущественно в диафрагме и пищеводе. Предстойлен . в основном микроскопическими саркоцистэли. Встречается у 4-10 7. животных. Сравнение морфологии цистной стенки, а также размеров мерозоитов Sarcocystis bovlvulpes sp. . п. и S.tovicánij показало существенные различия этих параметров. Диетная утенка S.bovlvulpes sp. п. тонкая - до 1 мкм, оснащена . тончайшими волосовидными выступами толщине" 0,03-0,05 1 мкм и длиной Б,5-9 мкм.Мерозоиты банаковидной Форш, 14,5-15 х 3,6-4,5.мкм, промежуточные кяетки^овальные, 14,0-14,5 х 5,5-6,5 мкм, метроцг-ы округлой,овальной формы 14,5-16,0 х 8,0-8,5 мкм. Опыты по заражение дефинитивного хозяина показали положительный результат в случае инокуляции изолированных цист лисам и собакам. Препатентный период составил 13-14 дней в отличии от 10-12 дней у вида S.fc?vicsnis. Отмечены различия по форме и размерам спороцист S.bovlvulpes sp.n. и S.bovicania. Полученные данные подтверждены иллюстративным материалом.

: Вид Sarcocystis diaphragmatica sp. n. ( Novao, Fedoseenko, Orasalinova, 1987)докаяизуется преимущественно в диафрагме в форме макроскопических ирст; встречается у 1» 5-ИХ животных. Макроскопические цисты S.diaphragmatica s*'. п. размером 1,5-25 мм о крупными овальными и многоугольными септами. Цистная стен- " ка толщиной 5,5-7,5 мкм : характеризуется конуоовидиыыя выступами длиной 7,6 мкм, шириной в' оснований 1,5 мкм, в верите - 0,8 мкм. Размер» выбтупов несколько варьируют в зависимости от воз-

с

раста цист, хотя морфологически сходны. tlaposoffifu Сшаноэддиой формы, 12,5-14,0 х 3,5-4,0 мкм; промежуточные доеткя сзааькйе, 14,о- ¡,5 х 5,о—,5 мкм; метроциты округлые, еазшотойдиыэ - %р. 6-8 мкм в диаметре. Для выявлениядефнщттвого хозяина шыжу~' ценные на мышц макроскопические саркг'вюты шяг/лнроашш (со 10 цист) аести собакам, однойлисе, трем ковкам водноиу чедоаеку-добровольцу - Подопытные животные н человек ив еыдэлялй соцвста и спороцисты Sarcocystis в течение всего срока даОк.'.жа (£В дней), на электрс-но-ыикроскопическш уроаие cniicsa оригина»-ный тип цистной стенки Sarcocystis diaphragaatica sj>. п., •морфологически отливающийся от всех известных "идоа. Шмбрана цистной стенки образует мелкие пузыръюоаидные инвагинации. Комплекс мембраны и электронно- плотного материала формирует в est» очередь выступы, направленные в сарколемму котки хозяина. Грибовидные выступы представлены тонкой колкой, ез которой располагается адяипооидная шляпка с кситрестою счгрче»ю& »лекгроя-но-плотной стреловидной структурой. Ussposs-»-» uegteoim» шет палочковидную форму в отличие от схфуглой сругяа задов Sarco-CVStiS. , -с"

В зарубежной литературе имеются ояисаяяз трех евдоэ свр-коцист лошади - S. iertrami, S.equlcanls. S.ieyert. Однако су-цествуют ^окаг-тельства (Hinaldy, Loupal, 1632). что два последних вида не являются самост ятедькыш!. Поэтому S. equicinis и S.bertrarai принят., ¿читать синонимами. Колучешше в «щ* сз-а-г-.'довании результаты подтвердили даличкв у лоаэдей двух шр-фологичесю) различных типов цпстнш стенок саркоцисг, циотого-итов, отличающихся со размерам н форда. Дефннитшнш. sazsju. обоих видов Sr.-oocystls - соб-ча, Обнаруженные езд|/ JvadiTC®asa-рованы кач S.bertrarai и S.fayeri; их преимущественная гюшлза-ция - мьицы диафрагмы. Саркоцйсты выявлены у 61 Z лиг эщк.

Toxoplasma gondii по класи.фясации Бейер Т.В., Пшиншио Ю.И. (1979) относится к роду Toxoplasma внутри подсеьи Лства Isosf orinae и является единственным видом, распрос5раненньм среди животных и тадей,в мире. Токсоплагкы соединены в одно семейство (Eimerildae) сэймэриями и подсемайстго (tsosporl-пае) о иеоспорахи, оаркоапорндиями и другими иистсоСраэуша« кокцидаями. В отличие от Sarcocystis, для которых является характерным облитатно-Г"тероксеинцй цикл развития, Toxoplesaa

ЦЭДОМЗДвШ! Фаяультативно-гетероксеннымн паразитами. Морфоло-ПТОДО f&mamtt пжхшгаы сходны с мерозоитаи! Sarcoc. jtis ЯМ ва С8ОТО-, tax и ка эдектронно-юв^оскопическом уровне, но /рМШри Ю аиамитмько меньше (в х 1,6-2 мкм). Свободные фо; ы TtttQJ>]SE8» gondH ю бровного эксудата мышей - тахиэситы, ине-ВГ ворог ювунесяца, размером'в,в-8,0 х 1,5-2 мкм. Их передний {ХЗДси сооДОЗФ'й коксид, заострен, а протиаопсложный - закруглю. Ли» расаоясиеио по направлению к заднему полярному кон-IV ваш в ¿..играемойчат ¡1 клетки; хроматин в ф.рме г лыс-ж сосредоточен оо всему ядру. При внутрибрюшинном вв&денг - та-ИИГОЯТоа интаюкому хозяину (белы» мши) происходит размноже-Ш9 0*сповоз путем, мяавественным делением внутри клетки хозяина (воряго^ааные изкрофаги, лимфоциты). Для дндодиогении характерно формирование внутри материнской двух дочерних клеток. Материнская метка Тохор1а.сота eondli - метроцит, овальной яаа с эуглaft фарш, в-8 х 4,5-e.f мкм.

Тахкхжты процоупапт размножатся эндодиогенией до те пор, СОИ» яяетка хозяина че заполнится паразитами. Группы тахиэои-то» от S до 25-ЭО наблюдали в клетках печени, селезенки, моно нукаеарных клетках лимфатических узлов у экспертаентадьнп зараженных козлят. Кроме розеток из тахигоитов в зти же сроки после- заражения (57-58 дни) в иазках-отпечаткзх из сердца и лнм-фоузлоа находили свободные одиночные тахизоиты, 12-14 х 2-? 5 мха, по 3-5 клеток в одном препарате. Аналогичные по морфология клетки паразитов выя шип также в мазках-отпечатняч к гисто-срезах из головного мозга кролшотв, экспериментально зараженных Toxoplasma gondii - от. RH и убит»'" на 17-й д^ъ.

Как и у Garcocystis, аммопчшш является основным питательным, энергетическим материалом тахиэоитов Т. ffondii. Цис-тогоиты токсоадагм отличаются от тихи; оитов высоким с пержанн-еи амилопектииа, чему способствует уменьшение ;.^олиферативной активности цястисй стадии. Они |.зааичаются также по содержанию РНК. Цистою»ы 8 отличии от тахкгоитоа [¡оказывает интенсивную реакцию в-льгена. РНК присутствует в цитоплазме бесполы- стадий развития всех наученных кжшций, а том числе' Sar oocyst ш. Высшая пнречгенофилия характерна дан тахизоитов (трофозоит <в, эн-дозоитов) Toxoplasma gondii, что свидетельствует з высокий про-ляферативиоЛ активности этой стадии. Окислительный мета .ол>.гм

цистозоитов Т. ffondil, как и у Sarcocystis, является смешанным, включающим гликодиз и биологическое окисление при участии ферментов цикла Кребса. Единство морфологических признаков, сходство ультраструктуры, некоторых особенностей развитие а также наличие сходных обменных процессов свидетельствуют о филогенетической близости Toxoplasma и Sarcocystis. Исходя из вышеизложенного следует, что цистооОразущив кокцидии могут содержать общие антигенные детерминанты и тлеть похожую отру,.гуру поли-чептидов.

3.2. Антигенные взаимосвязи Sarcocystis и Toxoplasma, а также между некоторыми видами и различными стадиями развития Sarcocystis

Для выявления родственных антигенных детерминант сарко-споридий, токсоплазм и беаноитий в НРИФ использовали корпускулярные антигены иэ цельных цистозоитов Sarcocystis diaphragma-ticasp. п., S.bovihoßiinis, S.bertrami, S.ovifelis, тахизс.лов Toxoplasma eondii штамма RH, циотовоитов Besnoltia bösnoiti. Специфичность реакций контролировали, используя следующие кро- -личьи гипергммунные сыворотки. 1. саркоцистная против S. dia-phragmatica sp. п. - рабочий титр 1;Б12; 2. S. bovihominis -1:256; г. S. bertrami - - 1:512) 4. токсоплазменная - 1:1024;' Б. бевноитиозная ~ 1:256. Установлено,что саркоцистные корпускулярные антигены иэ S. diaphraematica sp. п., S. bovihominis и S.bertrami реагируют положительно о токсоплазменной сывороткой в невысоких титрах (1:10; 1:16; 1:20 ~ соответственно), ' токсоплазменный антиген положительно реагируот с иммунной сар-коцистной сывороткой, но в более высоких разведениях (1:16 -1:40). Саркоцис.нын антиген и иммунная Сеаноитиоэная сыворотка показывают слабоположительныв результата: - 1:4 - 1:6, а токсоплагменный антиген о этой же сывороткой - 1:8 - 1:16. Используя 5 различных корпускулярных антигенов - S.diaphrapnatlca sp. п., S. bovihominis, S. bertrami, S. muris, Sarcocystis. sp. n. кеклика и гипериммунныэ кроличьи сыворотки к первым 3-м на них, при постановке НРИФ в гомологичной и гетерояогичвой системах' определили, чтг :вде изучаемые саркоцистные антигены довольно однородны по антигенной структур и не значительно отличаются по специфичности.

о

При изучении антигенных Еэшжювязей ¿¡агсссузиэ, Тг.чор1ач-|» та, ВеБпоШа, Е1тег1а, i также между некоторыми видами и стадиями развития Багсосугиз с помощью непрямого ИФА установили рабочие титры сарксздистных и токсоплаэменных антигенов по ибще-принятои методике. Активность иммунных сыворото" от кроликов из рззличных серий опытов варьировала и составляла! саркоцистная -от 1:1500 - 1:3200 до 1:6400, в одном случае титр -чтигел достигал 1:51200; спорозоитная - 1:400 - 1:3200; токсопла.«менная

- от 1:400 до 1:1600 - .:3200. Рабочие разведения антигенов, определяемые в каждом конкретном опыте, не тлели сущес.^енннх различий, Саркоцистный антиген - 1:50 - 1:100; токсог-ззмен-ий

- 1:20 - 1:40, 1:50. Полученные в различных сериях опытов сходные резульг.ты по активности антигенов свидетельствуют о достаточно высоких показателях их стандартизации. Постановка "»прямого ИФА в гомологичной и гетерологичной си'-~емах показала следующие результаты. Саркоцистный антиген (С Аг) + саркоцистная сыворотка (СС) - 1:3200 - 1:6400; С Аг + токсоплазменнаь сыворотка (ТС)-1:200; С Аг + спорозоитная сыворотка (СП С) - 1:2(43

- 1:400; С Аг + безноитиозная сыворотка (ЕС) - отрицательный результат; токсоплззменный антиген (Т Аг) + токсоплззменчэя оы-воротка (ТС) - 1:400 - 1:3200; Т Аг + СС - 1:400; Т Аг + Сп С -1:80 (табл. 1). /

■ Используя ИФА, проводили изучение антигенного родства , зг-лнчных видов ЗагсосузЫз. Иэучасиж саркоцисткые антигены оказались близки по антигенным свойствам и оущественж не отличались по спец)!фичности. Выявленные'отличия антигенной специфичности проясняют некоторые вопр ^ы филогенг. I простейших род-БагсосузЦз и в ряде случаев их иеобход зло учитывать при серологической диагностике саркоцнотоза. Установлена разница уровня титров антител в зависимости от того, какой антшч:) (Багсо-суэИз с)ЗарЬгаеиаЬ1са зр. п. или Б.Ье^гдаи используется в ге-терологичной системе. ИФА с антигеном Б .ЪеКгагШ в гетерологичной системе показал различие о гомологичной системой на 1-2 -азведения, о антигеном Э.сНарЬгафпаИоа зр. п. - на £ 1 разве де"ия. Данный факт можно объяснить наличием и З.ЬегЬгат! большего количества свойственных для ЗагоосузИз общеродовых антигенных эпитопов, чем таковых у З.сИярЬгавтаиоо зр. п. Основной опыт в ИФА о целью изучения антигенных ^чаимосвявей предотави *

Таблица 1

Перекрестные иммунологические реакции между антигенами Sarcocystis, Toxoplasma, Besnoitia и Einterla в ИФА

-1-1----;-

Номер | Название | Антигены (рабочее разведение)

крсаш-| иммунных )-1-1-1—1-

ка | сывороток | Саркощг г-1 Спорозоит-1 Токооллаа-1 Эймерийный | | ный ) ный |менный |

i | 1:100 I 1:50 | 1:50 | 1:50

j_' ■---1__l

1,9,10 Спороаоит- 1:400 1:1600- 1:80

ьая сывот- 1:5200

ка (Сп С)

2,7,11 СП С 1JZOO- 1:3200- -

ls 400 1:6400

3,8,12 Сп С 1:400 1:3200 .1:80

4,6,13 Сп С 1:400 1:1600 1:80

14,?- Отрицательный контроль

16,16 Саркоцист- 1:3200- 1:400 1:200-

ная сыво- 1:6400- 1:400

ротка (СС)

17 Токсоплаз-менная сы- 1:200 1:80 1:640

18, воротка 1:200 1:160 1:640-

ia а (ТС) 1:5120

26 Безноити-озная сы- -

воротка <,БС)

телей рода ЗагсооузЫз показал следующие результаты. Аг Б.сДа-рЬгастоаНса яр. п. + иммунная кроличья сыворотка (С) против 5. сЛарЬгавтаЫса Бр. п. - 1:6120; Аг З.сЬарЬгаетаиса эр. п. + С Б.ЬоуЦкя^та (раб. титр 1:2560) - 1:640; Аг З.сИарЬгагтаИся зр. п. + С Б. Ьег1гш1 (раб.титр 1:6400) - 1:400; Аг 5.с11арЬгаг-таИса яр. п. + С 5.0У1Гв118 (раб. титр 1:1600) - 1:400-1:800; Аг Э. Ьоу1Ьои1п1з ♦ С З.ЬоУ1Ьот1тз - 1:2560: Аг Б. Ьоу1Ьоп)1п18

+ С S.diaphTEgmatlca зр. п. - 1(640 - 1:1280; Ar S.bovihominis + С S.bsrtrami-l: 1ZB0; Ar S.bovihorninis + С S.ovifells - 1:640; Ar S.bertrarai + С S.bertrs.Mi - 1:6400; Ar S.bertrami +■ С S.dia-phragmatica sp. n. - 1:6120; Ar S.bertrami + С S. bovihominls -1:2560; Ar S.bertrami + С S.ovifells - 1:1280; Ar S.ovifells + С S. diaphragmatica sp. n. - 1:540; Ar S. ovifelis + С S.bovihominis - 1:640 - 1:1280; Ar S.ovlfelis + С S.bertrami - 1:1280 (табл. 2).

Таблица 2

Перекрестные иммунологические реакции между антигенами различных видов Sarcocystis в ИФА

Иммунные I Антигены и их рабочее разведение

сыворотки |

1 1 1 i i

против IS.diaphrag.IS.bovihomi- IS.bertrami tS.ovifelii

антигенов Isp.n. ItSOO'lnis 1:60 • 1 | 1:100 i | 1:50 t

Sarcocysti3 . 1:5120 1:640 1:400 1:400-

diaphragmati -

са sp. п. 1:800

S.bovihomi- 1:640- 1:2560 1:1280 1:640

nis 1:1280

S.bertrami 1:5120 1:2560- 1:6400 1:1280

1:6120

S.ovifells 1:640 1:640- 1:1280 1:1260

1:1280 <

Таким образом, при помощи имиунодиагнос^ческих тестов -ИРИФ, РИГА и ИФА выявлены антигенные вашыосвяэи между цистооб-рагующлт кокцидиями родов Sarcocystis и Toxoplasma, а также установлена отепень антигенного родогва различный видов Saietv cystis.

3.3. Использование иммунологических тестов для диагностики

саркоциотоза и токсоолазмоза дивоишх и челове.са Для изучения специфичности, чувотвительноотн антигенных и антительных саркоцк^тных и токсоплаэменных диагшютикумов имчу-нореагеиты различной специфичное!и вщюбировали при номе™ ПН'А

и ИФА в гомологичной и гетерологичной системах. Активность выделенных иэ сывороток крови специфических иммуноглобулинов Jg Q составляла: саркоцистных - 1:5120 - li 40930, спора- «итных -1:1600 - 1:6400, токсошшзмешшх - 1:640 - 1:3200. Учитывая то, что сенсибилизацию эритроцитов и твердофазного носителя (полистирол) проводили растворимыми антигенами родовой специфичности, а следовательно, в известной степени общей для ¡..j-cocystis и Toxoplasma, скрининг показал наличие родственных антигенных связей в титрах от 1:80 - 1:16и (РИГА) до 1:320 - 1:400 (ИФА). Уровень -чтров антител зависит от варианта поотановки иммуно-диагностического теста (использование в гетерологичной сиотеме различных антигенов,сывороток), что связано с присутствием тод-с"">енных антигейов только у одного из паразитов. Toxoplasma gondii имеют общие для Sarcocystis антигены; у представителей рода Sarcocystis антигенные детерминанты, свойственные Toxoplasma, не зарегистрированы.' Только при достаточно высоком ур^не антител, за верхней границей диагностического титра (РИГА - Is 200, ИФА - 1:400) можно судить о заражении (иммунизации) тем . или иным возбудителем.

В совхозе "Тургенский" Енбеылисазахокого района о помощью ИФА на саркоцистоз и токсоплазмоэ обследовали 84 год. овец.' На саркоциотоз в титрах 1:400-1:1600 положительно реагировали 68 (80,9 X), 1:50-1:100 - 5 (6,9 %); на токсоплазмоэ - 1:4001:1600 - 44 (52,3 X), 1:50-1:100 - 18 »1,4 X). Испольвуя предварительно оттитрованные кроличьи саркоциотные и токсопдаэмен- • ные lg G, - выявляли в сыворотках крови овец циркулирующие антигены Sarcocystis и Toxoplasma. Достаточно четкие положительные результаты на а^игены Sarcocystis удалось получить в 8 случаях из 68 (11,7 X). Подобные исследования приведены в совхозе "Као-келенский" Илийского района при индикации саркоцистных антител и антигенов в сыворотках крови коров. Предварительно кроличьи саркоциотные Iff S тщательно оттитровывзли о антигеном в разведении от 1:25 до 1:400. Антитела выявлены у 34 из 48 (70 X) об оледованных животных, положительные ре шиит на антигены Saroo cystis отмечены i 3 оыворотках крови (6,21). Специфичность кои тролировали при помощи РИГА о антительными cap ко плотными диаг-иоотикумами. При обследовании крупного рогатого окота в РИГА о антигенными и антитвлышми диагнсютикумами получены бледующи»

результаты: из 10? коров на саркоцистоэ по антителам положительно реагировали 51 (47,6 X), по антигена 15 (14.0 X), на токсоплазмоз только г ) антителам -2(1,85 X); из 39 телок на cap коцистоэ по антителам '--•ложительно реагировали 24 (61,5 X), по антигенам - "О (51,2 7.), на токсоплазмоз - 1 (2,56 X). из 40 6-8 - месячных телят на саркоцистоэ по антителам положительно реагировали 32 (80 X), по антигенам - 24 (60 X), на токсоплазмоз получены о-'^ицательные результаты; среди 25 телят 4-5 -мес. на саркоцистоэ по антителам положительно эагировали -11 (44 X), по антигенам - 7 (28 X), на токсоплаэменные антитела и антигены получены отрицательные результаты; из 26 тегчт 3-мес. на саркоцистоэ по антителам положительно реагировали 3 (11,БХ), по антигенам - 1 (3,8 X), на токсоплазмоз зарегистрированы отрицательные результаты.

При помощи НРИФ обследовали на саркоцистные и токсоплаэменные антитела 802 сыворотки крови женш;:н (возраст от лет и старше), положительные результаты получены у 458 (57,1 X) и 168 '20.9 X) соответственно в титрах 1:32-1:512. Применение РИГА в комплексе с РСК при обследовании сывороток крови людей показало следующие результаты: в РИГА исследовано .¡а антитела к Sarcocystis' 250 проб, положительно реагировали 8 (3,2 X), на антитела к Toxoplasma gondii - 150, положительными оказались , 13 (9,7 ">), нз токсоплазмоз в РСК - 230, положительный результат получен у 53 (23 X). Иа 407 сывороток мужчин и женщин в возрасте 21-45 лет при обследовании в РСК, НРИФ, РИГА и ИФА положительные реакции на саркоциотные антитела зарегист рированы в 184 (45,2 X) случаях, на токсоплазменные а»титела -110 (27 X). Только по РСК реагировали положительно на токоо-плазмоэ 25 (6,1 X), по НРИФ - 7 (1,7 X), по ИФА - 25 (8,IX), по РИГА - 14 (3,4 X). 8 остальных случаях получ иные результаты на токсоплазмоз совпадали в 2-х, 3-х или всех 4-х тестах. Результаты ИФА я НРиФ соответствовали на 62,6 А. Такой ««»мелкий процент совпадения результатов в 2-х вышеназванных тест ьж можно объяснить гипердиагностикой токсоплазыоза » НРИФ вследствие выраженных перекрестных ре-кций между Toxoplasma gondii и Sarcocystis. Совпадение результатов ИФА и РИГА отмечено в 90,4 % случаев, ИФА и РСК - 76,98 X, РИГА и РСК - 76,5 X, ЯНГА и НРИФ - 70,78 X, НРИФ и РСК - 65,9 Г. Тачое же сопоставление

- г.о -

чувствительности различных иммунологических тестов провали при выявлении саркоцистнщ антител. Результаты оказались следующими. ИФА и НИ® - 91,37 X, ИФА и РИГА - 92,59 7., РНГЛ и НРИФ - 86,6 7.. Кроме специфических антител у людей и зыда. -нчх удалось выявить растворимые саркоцистные и токсоплаэмённые антигены. Хотя антигены БагсосузИз у людей встречались значительно реже, чем у животных, в ряде случаев (4,7 7.) иммунный ответ выявлен.

Таким образом, использование иммунологических тестов для диагностики саркоцистоза и токсоллазмоза у животных и людей позволило выявить саркоцистоз у 70 7. коров, 80,9 X овец, токсоплаз-моз - 1,8 7. коров, 52 % овец, 23 - 27 % людей.

3.4. Выделение очищенных фракций токсоплааменного антигена и изучение их специфичности

Фракционирование предварительно очищенного токсоплааменного антигена проводили на колонке (50 х 2,5 см), заполненной к.дму-иосорбенлш. Элюци» осуществляли при помоци карбоиатно-бикарбо-натного буфера РК~Э,0. У пролиферативных форм токсоплазм уста-, новлены общи^ для рода Saroocystis антигенные компоненты. Их удалось вьщелить, используя трехкратное озвучивание и соедиие- ' ние токсоплааменного антигена о кроличьими саркоцистными антителами на иммуносорбенте о последующим кислотным гидролизом им-мунокомплексов. Всего получено 5 фракций, из которых 2 были иммунодогически активными. Одна из ни: тсложительно реагировала в ИФА и РИГА только со стандартной токсоплазмениой сывороткой . (фирма Abbout, Голландия) - специфический токсоплазменный антиген, другая положительно реагировала как с токсоплазменной, так ,и саркоцистной сывороткой - общий токсоплазменный антиген. В ка-• честве материала для апробации получение фракций токсоплазменного антигена, а также исходного саркоцистного антигена использовали сыворотки крови 7 ягнят, искусственно зараженных per as спороцистами Saroocystis ovicanis. Два ягненка оставили иеаара-же иными. Динамику титров антител изучали при помощи ИФА и РИГА в течение 123 дней. Полученные результаты позволяют констатировать сдедущзе. Со специфической фракцией токсоплааменного антигена сыворотки крови подопытных ягнят во все сроки исследования реагируют отрицательно; о исходным токсоплазменным антиге-

пои отмечены положительные реакции а титрах 1:40-1:320 (Р'чТД), 1:160-1:840 (КОА); с общей для Saicocystis фракцией токсспаэ-менного антигена титры ан».ггел достигай'" 1:40-1:610 (РИГА), 1: 160 - 1:2560 (ИФА); исходной сзркоцистний антиген положительно реагирует - 1:160-1:5120 С-НГА), 1:160-1:10240 (№А). фрглции токсоплазменного антигена, а также саркоцистный а'- .¡иен показывают отрицательные результаты с сыворотками крови, полученными от ягнят до заражения и от контрольных животных. Иэуч ние полученных фрак"мй токсоплазменного антигена в опыте на естественно зараженных Sarcccystis коровах и рожденных от них телятах (в динамике) позволяет отметить сходство динамики титров антител к гомологичному саркоцистному антигену и общей дл*. Sarco-cystis фракции токсоплазменного антигена. Зарегистрировано совпадение по дн...-i пиков подъема уровня антител к изучаемым антигена!,!. Результаты исследований использованием специфи1^ «их иммунореагентов при производственном испытани. показали их высокую диагностическую ценность.

Учитывая широкое распространение саркоцистоьа сред»; животных (высокий процент ьстречаемооти видов S.' jvihotnirus и S.su' hominis), роль Sarcocystis в этиологии миокардитов и остра', кишечных заболеваний, необходимо выяснить реальную порьл&нк-¿ть людей и животных токсоплазмозом с использованием новых токсо-плазменных и саркоцистных иммунореагентов, обесл ;.чива»глх строгую специфичность. Решение проблемы специфичности диагностик: токсоплазмоза обеспечит оценку реальной значимости заболевания в патологии человека и ливотны\, подготовку и реави^ац-аэ конкретных мероприятий, направленных на профилактику и лечение.

3.5. Получение и использование новых ..ммуьореагентов

С тем чтобы получить специфические антиидиотшшческие антитела Ig Q (Ат-2), наиболее активные саркоцистные спори^оитные и токсоплазмениые идиотипические Ig Я (Ат-1) использовали.для последующей иммунизации кроликов. Получен, je антиидиотшшческие антитела Аг-2 подвергали чистке от антиалло- и антиизотипов, а Тс «е несп-цифических идиогипов ме'эдом кммуносорГцни на Л Вг-акти '.фовашюй агярозе. Для очистим определенного антиидлоги-па использовали гь1 [OTich кгоен т(.: же самых про иков, от которых получен Ig G Ат-2, взятие д- имнунизацин. Связыват-- ь -

тиидиотипа с антителом-мишенью регистрировали при помощи имму-нофермен'. ¡¡ого анализа. Испытание очищенных специфических анти-вдиог. шических антител Ic G Ат-2 проводили с гомологичными и гетерологичными Ат-1 Ig В. Контроль диагностической ценности полученных очищенных антиидиотипических антител проводили только при помощи ИФА, сравнивая активность проверяемых идиотипов Ат-1 с таковыми при использовании в ИшА И РИГА антигенных (сар-коцистный, токсоплазменный) диагностик->юв. Для выяснения диагностической ценности и иммунопрофилакти-ческих свойств антиидиотипических антител провели опыт на 7 козлятах, 4 ягнятах ч 9 ярках, зараженных Sarcocystis и Toxoplasma. Использованные для диагностики серологические методы с применением различных иммунореагентов позеолили одинаково надежно контролировать специфический антительный ответ у подопытных животных. Наиболее высокие титры антител в период гчзогонии, цио-тообразовашш Sarcocystis и пролиферации эндозоитов Toxoplasma gondii выявлены при помощи ИФА с антигенными диагностикумами. На одно разведение ниже или такими же были титры антител в ИФА

0 антиидиотипическими диагностикумами. •

Для того чтобы установить иммунопрофнлактические свойства проверяемых ан? шд-отипическ"^ антител, а также информарматив-ность используемых методов диагностики и новых (Ат-2) иммуног реагентов произвели убой подопытных животных и компрессорное исследование мыиц на саркоцистоз, мазков-отпечатков из внутренних органов, головного мозга - на токсоплазмоз. Козлята были убиты на 67-й день после заражения, ягнята и ярки - на 71-й., Результаты исследования приведены в таблице 3. По литературным данным (Mehlhorn, Heydorn,1978) после заражения овец и коз сар-коцисты в мышцах впервые регистрируются на 45-60-й д.п.з. ч достигают разменов от 20 до 40-50 мкм. Из таблицы 3 следует, что экотенсивность и интенсивность саркоцистозной инвазии зараженных и иммунизированных животных в 4-10 раз меньше, чем у контрольных (положительный контроль на саркоцистоз). Оообен-

1 показательными являются размеры оаркоциот, встречаемых у им-муниеировангчх и неиммунизированных животных. Так, из 4-х подопытных иммунизированных ягнят (N 2S, 29 , 30, 31) саркоцисты o'f 28 до ЗБ мкм обнаружены только у 2-х: N 29 - 2, 30 - 1. В группе подопытных ярок (N 22, 23, 24) оаркоциоты размером 45-55 икм

Таблица 3

Результаты компре горного исследования мышц подопытных животных на наличие оаркоциот

-1--—--1—'-

Номера | Количеотво 1 подопытных| оаркоциот в | Размеры, мкм животных |5 срезах мышц|

_I___I__

28 20 70-195

7 93

29 21 70-93-140

2 28-35

°0 19 70-93-140

1 36

31 17 93-140

22 10 70-93-140-195

1 45

23 13 93-140-280-420

3 45-Б5

24 21 93-140-210-280

3 46

28 16 70-93-140

8 36-45-55

26 29 --- 70-93-140-280

21 28-35-46

87 10 " 70-93-140-280

8 35-45

32 18 70-63-140-280

83 28-35-45

33 21 ЗВ-4Б-Б6

34 28 70-93-140-280

7 4Е 55

13 14 03-140-196

14 21 70-9Э-140~1ва

19 17 70-93-14СК103

7 £8-36-48

ЕО 48 70-03-140 16о

в 86-15

выявлены у ьсех животных в количестве 1-3. Тогда как количество • саркоцист от 28 до 65 мкм у контрольных животных было значительно выше - от 7 до 86. Эту же зависимость пронаблюдали на иммунизированных саркоцистными антиидиотипами козлята;'.-- Так, у козлят N 13, 14 удалось обнаружить саркоциоты только больших размеров 70-93-140-195 мкм, в то ьремз как у положительных контрольных животных N 19, 2и выявили 6, 7 паразитов - 28-35-45 мкм. В мазках-отпечатках из внутренних органов и го^-свнаго мозга ярок Н 25,26,27,33, иммунизированных токсоплазменными Ат-2, тахизоиты Toxoplasma gondii не зарегистрировшш. При исследовании мазков крови ярки N 25 обнаружили трофозоиты, по морфологии сходные с Toxoplasma gondii. 8 остальных исследованных мазках, крови токсоплаэмы нэ установлены.

Таким образом, в результате экспериментальных исследований установлена пригодность саркодастных и токсоплазменных антиадио-типических антител в качества диагностических и иммунопрофилак-тических средств.

3.6. Особенности иммунитета при саркоцистозе и токсоплаа-мозе ■ - .

При помощи ИфА и ЙРЩ проведены исследования по выявлению саркоцистных а токсоплазменных антител, антигенов у взрослого крупного рогатого скота. Ш 350 коров Алатауской породы (412 лет) положительно реагировали на саркоцистоа 296 (84,6 X), токсоплазмоэ - 5 (14.2Z). Среди 85 теле . олучного возраста антитела к Sarcocystis обнаружены у 72 (84,7Х). Кроме того, обследовано клинически и серологически на саркоцистоз и токсоплазмоэ 280 стельных коров. Антитела к Sarcocystis выявлены у £39 (851) животных, однако клинические признаки заболевании отсутствовали. На токсоплазмов получены отрицательные результаты. Саркоцистные антитела установлены в пробах молозива от положительно реагирующих (по сыворотке крови) коров в титрах 1:64 -1:128.

Имму поре агентами для РНГА служили антигенные и антительные арнтроцитарные саркоцистные и тонсоплазмешше диаг'ноотикумы. Используя вшеук£~<ашше иммунореагенты в сыворотке крови живот ыых выявляли антитела, антигены к Saroooystis и Toxoplasma, а также ооотвметвущие иммунокомппенсы При помощи РНГА о ври-

троцитаркймп саркоцистными антительнымг. диагностику!,шми получены прямые доказательства присутствия в молоке В,5 - 46 7. кпров растворимых саркоцистных г.тигенов. Полученные данные предотав-лены в таблице 4.

Таблица 4

Результаты исследования сывороток крови и молока гаэроь на саркоцистные и токсоплазменнае антитела, антигены и иммунокомллексы при помсщи РИГА

--1-------

I Процент положительно реагирующих

1-1-1-:-1-1--'--------

N N |Сарк. Аг |Сарк. Ат | РКАК |Токс. Аг |Токс. Ат I РНАК жив-х| эд | эд |сарк. эд | ад I ад |токо. эд

I—-)-,-1-,-1-,-(-,-;---,--

1С | М 1С |М |С 1С |М |С ' М 1 О |М |С

_. .!,,.. I..... I_I , , , I. , , ) , I . ,1_1-1-1______

Коровы

19792193, 68,5 62,8 17,1 8,5 17,1 14,2 8,Б 5,7 О 0 5," 2,8 10501931*, 47,6 44,8 37,3 31,7 13,08 11,2 2,8 О 0 0 0 О 69196976 61,5 56,4 51,2 46,1 17,9 15,о 12,8 5,1 7,6 2,Ь 5,] 2,5

Примечание: Сарк. - саркоцштний; Токе.- токссчлг.вменныЛ; Аг - антигенный; Ат - антительный; чд - зритрс парной диагностику«; С - сыворотка крови; Ч • ы.мюко.

Исходя из собственных результатов и информации за^ежн ученых, становятся понятными чаете ьстречаици^ея у л.одеЛ ж положительные реакции на токооплазмсэ. Основной прнчшпи, по-видимому, является кммуш'-зция с г хпокои антиген ¿мп Sart-ocys-ti филогенетически близкими Toxoplasma eon! я.

Ча антитела к Sarcocystis и Toxoplasma в РИГА и ИФА сЛсле-дованы овцы. Из 2 - летних валухов на саркочистоз положительно реагировали 152 (70,3 I), :ia токсоплаэмиз 74 (3-1.2 Г),

- Z6 -

Тигры антител на саркоцистоз - 1:40 - 46 (21,2 7.); 1:80 - 49 - -(22,6 X); 1:160 - 1:320 - 69 (31,9 X); 1:640 - 2.(0,92 X); 1: 1; 1280 - 8 (3,7 X). Титры антител на токсоплазмоз - .■'.: 40 - 43 (19,0 X)} 1:80 - 24 (li,l X); 1:160 - 11 (6,09 X); 1:320 - 3 (1.3Х)} 1:640 - 1 (0,46 X); 1:1280 - 2 (0,92 %); Sa нижней границей диагностического титра (1:160) наблюдалась корреляция положительных результатов на токсоплазмоз и саркоцис-. з. Послед нее еще раз подтверждает наличие у Toxoplasma и Sarcocystis антигенов общей специфичности.

Дд? выяснения особенностей формирования иммунитета у молодняка крупного рогатого скота при саркоцистозе исследовано кли- -нически и серологически (НРИФ) 118 отельных коров, а затем 42 удившихся от них теленка. Новорожденный молодняк до 7 - дневного возраста получал молозиво, затем до 2 мэояцев - цельное молоко, о 2 до 3 месяцев - обрат. У коров кроме сыворотки крови исследовали молозиво и молоко, начиная с первого дня оте..а по 10-й. Телят тестировали, начиная с радения до 2,6-3 г месячно- . го возраста. Установлено» что 60,2 X телок, -47,6 X . первотелок и 77,1 X кор-,в серологически положительно реагируют на садко- ' цистоз. Антитела к Sarcooystls выявлены в пробах молозива от -положительно резгирующих '(по сыворотке крови) коров и первотеле« в значительных титрах. Причем на ЬЗ дни после отела уровень титров антител'4 молозиве был максимальным, а в последующие дни снижался, Достигая минимума н< 7 день. Исходя из установленных закономерностей иммунитета, уровень титров антител в молозиве прамо пропорционально зависит от такового в крови. Такая корреляция наблюдалась у большинства обследованных живот. ных. Серонегаг^аные коровы оказались отрицательными и по моло-• зиву. Первое обнаружение оаркоцистных '^нтител в молозиве и их динамика подчинены определенной закономерности, В первые 3 дня после отела наблюдается подъем уровня антител, а затем - период плато, когда титры антител держатся на одном уровне в течение 3-4 дней. Период выявления оаркоцистных антител в молозиве коров - не продолжительный, но уровень титров антитед доотаточ;. > высокий, что способствует надежной передаче их новорожденным телятам. В последующих исследованиях определяли возможность ,пе~ ^ редачи антитед о молозивом от коров телятам, а также длительно-'" оть и напряженнооть колострального иммунитета. Б :льшинство те-

лят, рожденных от серопозитивных коров, per-ируют положительно. Из 42 обследованных животных положительные реакции отмеч .ш у 37 (88,09 X). Как правило, антитела ¡ Sarcocystis выявляются впервые на 7-14 дни жизни телят. Уровень титров антител дс i-гает максимума на 25-ЕО дни (1:64 - 1:256) и к 60 дню снижается. В более поздние сроки антитела в большинстве ■ лучаев не обнаруживаются. Установлено также, что саркоцистные антителз могут регистрироваться в сыворотке крови телят, рожденьях о? отрицательно еагирующих коров. Эти телята начинают положительно реагировать на саркоцистоз в возрасте 60 дней и старше. 0-нако значительное количество телят от отрицательных на саркоцистоз коров, показывают отрицательный результат. Отмечены полижитель-ные серологические реакции у телят от серопояитиакых коров в первые дни жизни. У 7 из 37 (19 X) новорожденных телят антитела к Sarcocystis выявлены на 1-3 и 4-8 дни после рождения. Уривеиь антит»л у большинства иэ них на 1-6 дни cocí.ллял 1:128-1:512, а затем снижался до 1:32 - 1:64 на 15 день и о небольшими колебаниями держался в этих пределах до 60 дня. Несмотря на различные варианты динамики гуморального иымунн ло ответа, его парг.-метры определяются у большинства телят постепенным повышением уровня антител до 1:32 на 15 день, 1:64 на 20-25 дни и постепенным снижением - 1:32 - 30-40, 1:16 - 50-60 дням.

Проведены исследования 3-8 - месячных телят, которые не получали молока и обрата и содержались в обычных условиях фермы (открытые загоны). Антитела к Sarcocystis выявлены v 4б X 3 -месячных, 22 7. 4 - месячных, 57 5 - месячных. 83,3 X б - месячных телят. Несмотря на серопозитивнссть телят, ни у одного животного не отмечено признаков сь^коцистоза. вероятно, появление специфических антител у телят в ьозраете J-4 - мес. связа-зано с заражением спороцистами Síicocyr.tis. Положительные реакции на саркоцистоз у телят от серопоэитивнш оров ь первые дни жизни ряд исследователей объясняет тем, что SaicovslíJ на отадии мерогоьии опособны преодолевать 'Ллчцэнтгфш сарьер и продолжать развитие в тк. iax плодов. При гистологическом иссле-д'-аании тканей 22 плодов равного возраста mé ренты, меро&1 иты и сар/.ицисты нами не обнаружены. Таким образом, vc¡зновлен факт, что саркоцистнш а- . итела передают-я молодняку к' чшого ¡богатого енота пассивно вместе о мчлоэьаом и при однов! именном )&..:-

чии рватворимых сариоодогав витиг+иоэ обусяоааиеии вторачша ишушшй ответ.

В теч&аие длительного период» времени изучаю) дик лягу гш-титедооврвгованяя вря еотеотаемжв* оарионастоае моларияца крупного рогатого окота. Серагогтесхм яосяедования тедят с клиническими признака« вабшевашю, проведению в динамике. по»со-лшш выявить случаи сарипциптова ори вастСявжм содержании. Характерная динамика <№ителоо6г*и>овш1ия окагаяась схсдноА с таковой у вявпершентально вврменних телят. Ups: сьркоодктоге не совсем да понятны особеяюста развития паразита в начальный период инвазии и uasgy ыериюиией и цнстроергзоааишем; к* до конца выяснены и заяоеомерюсти иммунитета. Так, в а№Перя"9ате : таиоглено, что антитела a Sarcocystis втрвыа появляются аа 20-25 дни после ааражеииа «иаотньи, а первая генерация мероатов отмечена на 14-18 дав. По завершении мерогоиии {23-40 дни) уро-sew тито» отпел существенно еюшается и следуюаай at*««eu наблюдается тояыаз в период вдстооСрзгорзниа (55-6? дна мв&а-зии). Таким образом, верное антителообрззование отмечается через 6-10 ДХсй поем немала мерогошш, а второе - через 22-52 дня после «• аавершения. По-внднмсиу, это сраки, необходимые для ПОДГОТОВКИ впуска плеточий-гуморального «дамучигета как & качаю »шагая, так я в датентный период. Для последнего яре двукратных вараввяия* мюактерны более короткие промежутки времени между вэраодша антите*оо6рзаовь..йя (8-Н дней). Данный факт свэдюая&опуе? о тем» что при повторных инвазиях иммунитет становится более вкраг&ннш. Еишеприведеакы» результат» явно падтваридиет форииромвию нестерильного ишушгеета. Рад особенностей & антитмообразоватш щ и с&гкоцистоае мошо ооадс-нить иадичаеи у Sarcocystis "мимикрирующее" антигенов или значительных отруюурко-Сишаа^ски); преобразований на определенных стадиях развития паразитов, для проникновения пр*диястного мерозонта в швечнуи клетку ему в силу редукции у бесполых <£»рм Saroocystia яоноааа, необходимо но биохимической структуре напоминать белее хомюа* Возможно, чти в период мерогонни (внутриклеточного лиственного деления) происходят глобальны*? переотройка структура ДНК. генов паразита, которые иачият копировать ДНК Я гею ховякаа. Таким образом, предцистнае мерогой-ты, Оев оутаптпт препятствий проникавшие йкл.-гку хозяина,

на седррз&з отгдахгейКфзчвш азтагенов, свойственных цистоэои-там Ззтсвс/зИз а воззшу'пэ выявляются гагмунпдиагностическшн таоима. О язш&з? ■ я» пря формировании адитной стенки Багсосуз-Цз на^щатся сСрагшй сроцэсо радзифровгаа скрытых ("шмикри-ру^и.-:'.") гик.а ; а резит» пооащуяяв« щюпшх стадий. Дня дан-пай Фзга е^свшюго разитет задается характерным замедленный 1!*таЗо2кзз» «э ссснотрз нз это взйггщавтся активный глтятелоге-иеэ, кЕигерйЗ рагаюрвруотш »иаг/нсйпагаостяадсгшма тестами. .

.^фя.вввзата вззазгаа (БогсосугИз + Тояор1аяпз) а эксперт»«® устзясвагш "«явтгрнэ ссоЗешюстя антш ушного ответа, аажичзэдгся а «ш> го£хсйпзз?,геякыэ антитела в швс^отках крозз .варааздюи япзстяуз регпмрйруютса рзвъве» чем к Багсо-сузМз (пэ 9-Э-З дена еюозв антенна), а и 13-ку дш> доотягают кзшиааяы* гшггэшй. Такая данзмика анготёлаовразования сва-02за о .¿ародарзйй вйэззюм щшш Тохср1азша догеШ, виру-;айтовю» яг аааа ЯЯ а-там, чтавирудкяян» дгааш иногда вы- . 4 кгцястсгсйатз.: Еозтшу двотелькая пршшф'рацип тахигои-тсв ЕШЗН . к» внутренних оршш яйвотных вызывает

пвсякгасэ СТ15-У~ таротдяд» фатгсроэ яммузшхета, нзчгошя с первых гнеа всззэ эярагшет. йй^кше» пра дааошшмог», также как и сзз саряайвто»» взтраашЭ, оВуеяовлавакгея клеточными и гу-игразаазгя фактора«. Езсвтелз ввш*®вгзш форм тиксопяаам при сзргаеавя кя вфузятамв-во попйгзт и, кш врагмю. ш прслв-«ш?. ердогзюа Свгг-ггз. СгсС&ннести игздагета-вря токсоплазмо-зэ п о&згзяти !шгазгзз ггг^сят от ..«1рух«Яйоега птагма госву-ядаагз» Е2Л1Г.5М П02ТС5ГЛ ггрзаеяцй, а кзяга совпадете *ттрья п?ргодов 'зшигиагмогэ а еэркоеятсзэ. Осйевшэ ваконгкертган ^гри^зоашзя щкукзтз^а ера езршдасзше и теясшлагшэв .сзвзз-5за<и,кя» что ьагсос^зиз а язщДазшэ одвдявз тущаттта--' • го о«5азв»ви. 8 ифазд&важем' дазссзгазмайз «^¿гшаэ .даш- ■ гкст екгяйялпзасэ ссрагмз» тказеа . гэта£г -ятгаш ггцгшктз," -кстсрг»: явлзотсв агетр'еша. По ияив» Вегчвва&э 0.0.. (1632) . а еаг.айг1!23го Зз*сзсуз11э ашяэаго ' езпяэ' пзЗгадавт-

ся гшфшшхтооакы». ршаяз. а-твйдазядаивик» иэ-

' ровша первой гвззрзгпз Е^гсг^Из« . сеасзСазззйг/зтсз кэ- . , роятгзя гшзр-^й гег^ища, чэто воззиовт си&ко еы- -

ргззяшд глзгрггчвошэ резотз э $шаях.

3.7. Экономический ущерб при саркоцистозе и токсоплазмозе

Интерес к изучению саркоцистоза животных объясняется значительным эконош. .еским увербом, особенно у молодняка. Для ост-" poro серкоцистоза в большинстве случаев характерно тяжелое те-ченг , уменьшение и ухудшение мясной . молочной продуктивности.

Заболевание регистрируется как у взрослых животных (коровы и телки случного возраста), так и молодняка разных возоастных групп. У взрослого поголовья саркоцистоз протекает субклиннчес-к;-., в латентной фс..ме, так как сформирован напряженный, нестерильный иммунитет. Только при пастбищном содержании молодняка 8-12 - месячного возраста наблюдаются клинически выраженные случаи. В ассоциации с рядом незаразных и инфекционных болезней саркоцистоз обусловливает снижение мясной продуктивности животных, а иногдс. приводит к истощению. Экономический ущерб в группе 8-12 - месячных телят за весенне-летний •период составил 352£ 13 руб. Несмотря на отсутствие клинических признаков заболевания у телок олучного возраста ущерб сострил 852482 руб. га один месяц.

Sarcocystis имеют и «эпидемиологическое значение. Кишечный оаркоспоридиоэ человека известен для медицинской практики о недавних пор. Вызываю! заболевание два установленных в настоящее время видг Sarcicystis - S.bovihominis и S.suíhominis. Исследованию различных аспектов кишечного саркоспоргдиоза человек.^ посвящено значительное количество зарубежных работ. Выявлены случаи (более 40) мышечного саркоцистоза человека (Beaver et al., 1979; Aearwal, Srivastava, 1983; Breve, 1985). Однако пока не0 раскрыт жизненный цикл S.lindemanl и окончательно не установлены пути цирку¿..ции Sarcocystis у человека. Серологические ис-следова-::1Я людей на саркоцистоз позволили зарегистрировать от ¿5 до 57 % положительно реагирующих. Основн;' задача последующих изысканий г -сличается в четкой дифференциации случаев, кишечного саркоспоридиоза,состояний иммунизации растворимыми сар-коциотными *чтнгенами с молоком и мышечного саркоцистоза.

Человек высоко к:>спри:<мчнв и к токсопдаэмозу. По данным ВОЗ в Великобритании и США в возрасте от 1 до 10 лет заражено 10 X 1 населения, до 20 лет - около 20 X, более старшего возраста - до to X. В России и странах СНГ серологически положительно реаги-Р'тот „а токсоплазмоз т 35 X люден (Гайдамавичене, 1989; Лен-

каускайте, 1989).' Токсоплазмоз наносит ощутимый вред здоровью людей, вызывая патологию беременности, аборты, поражения цент- -ральиой нервной системы, глаз (гидроцефалия новорожденных, энцефаломиелит, кератит и др., Ленкаускайте, 1989). Проявление заболевания* при ОВД становится более выраженным и приводит к генералигданному поражению головного мозга, лимфатической системы и иммунокомпетентных'органов. Проведенные нами исследования при помощи НРИФ, РИГА к. ИФА позволили выявить токсоплазмен-йые антитела у 8,7-42,2 7. людей. Токсоплазмоз является опасной инф -эдей в медико-социальном плане. Последствиями могут быть временная : шш посеянная нетрудоспособность, нарушение психического развития, пожизненные уродства при внутриутробной патологии токсоплазмозной этиологии. Токсоплазмоз - общее заболевание для человека и животных (зооноэ), поэтому пути заражения многое равны.

В последние годы в зарубежной литературе появились данные - о экономическом ущербе при сочетании саркоцистоза и токсоплаз-' моза у молодняка сельскохозяйственных животных.. Как в сочетании, так и в отдельности саркоцистоз и токсоплазмоз наносят - значительный экономический ущерб разным отраслям животноводства. Обслед>л крупный рогатый скот и овец на токсоплазмоз в Ал' ма-Атинской области,. положительные результаты г.. и помощи РИГА и ИФА зарегистрировали в 7-9 7. и 34-58 % соответственно. У взрослого крупного рогатого скота заболевание протекает бессимптомно; дл большинства случаэв хэ^зктерна хроническая форма без выраженного острого периода. При исследовании нескольких абортированных плодов отмечены кератоконъюнктивиты, поражения центральной нервной системы. Инфекционные заболевания по данным л.ЗораТорной "диагностики были исключены. Среди положительно реагирующих овцематок Также установлены аборты. 1,5-2,5 -. месячные Плоды овец оказались недо-завитыми, о поражениями глаз и центральной нервной системы. При вскрытии плодов у некоторых обнаружены множественные некротические о-;лги в коре головного мозга.

Таким образом, учитывая ветеринарно санитарное, эпидемиологическое у медико-социальное значение саркоцистоза и токсоплаэ-моза, необходимо стро/о ооблюдать ветеринарную и санитарно-эпидемиологическую отчетность, своевременно диагностировать забо-

леванля (с использованием новых иммунореагентов), выявлять источит! инвазии, назначать соответствующее лечение и проводить комплексные профилактические мероприятия.

ВЫВОДЫ

1. Установлен ранее неизвестный в литературе вид саркоспоридий крупного (.Ъгатого скота - Sarcocystis diaphragmatica sp. п., Novar. Fcdoseenko, Orasallnova, 1987, характеризующийся грибо-

. ¡-идными выступа: диетной стенки, палочковидной формой микр^-Ht-м мерозоитов и отсутствием при заражении половых стадш": развития в гашечниг.е дефинитивных хозяев (соС .ка, лиса, коц -а, человек) .

2. Спс-цифические аь^итела к Sarcocystis с молозивом телята получают в по.'Вые дни жизни. Кроме того, по-видимому, наблюдается (шмуннзация растворимыми саркоцистными антигенами, выявленными в тлоке 22,8 - 50 X коров.

3. Клинически выраженные случаи саркоцисто i зарегистрированы у 12,3 и 8-12 - месячных телят; они характеризуются лихорадкой, увеличением поверхност.-.^'. лимфатических узлов, бронхопневмониями, диспепсиями, снижением упитанности. У 61,8 7. телят заболевание протекало с/-клинически. Пики подъема температуры и уроЕ-• i титре - ан: .тел у животных соответствовали 2-3.генерации ме-рогонии (25-35 денО и цистос-разованш (75-85 день) Sarcocystis.

v. Экономический ущерб от снижения упитанности при саркоцистозе в группе 8-12 - месячных телят и у телок случного возраста составил 3528643 руб. и 771биа руб. соответственно за весенне-лет-, ний период. .

5. Пр« смешанных инвазиях - Sarcocystis + Toxoplasrna токсоплаэ-менные антитела регистрируют^ на 6-8 дент после заражения (сар-коцистные - 1^-25) и к 18-му дню достигают максимальная зкаче-ний.

6. Между двумя родами цистооСрззуюших коадвдий - Sarcocystis и Toxoplasrna (Т. е id i i ".¡т. RH) имеются родственные антигенные связи (в ПРИ« - 1:40, FHFA - 1:80 - 1:160, ИФА - 1:200-1:400).

7. Экспериментальным путем при помощи метода иммуносорбции ус-таноьлено, что пролифератиьные стадии Toxoplasrna gondii содер-

родственные для -arcocystí:- антигенные фракции. Сыворотки

- аЗ -

крови зараженных S, ovicanis ягнят реагируют о исходным токсо-олавмешшм антигеном в титрах li40-1:320 (РНГ ), 1:160 - 1:640 (ИФА), с саркоциотьым антигеном - 1:160 - 1:5120 (РИГА), 1:160 '- 1:10240 (ИФА) и о общей для Sarcocystis фракцией токсоплаа-Менного ангтена - 1:40 - 1:640 (РИГА), 1:160 - 1:2560 (ИФА).

8. Цитохимические, иммунологические и иммунобиохимические исследования свидетельствуют г филогенетической близости Toxoplasma и Sarcocystis, что согласуется с последовательным, поэтапно развитием цистообразующих кокцидий от факультативно-до облигатно-гетероки ¿иных.

9, Во избежание ложноположительных серологических реакций необходимо учитывать родственные антигенные связи тех паразитических простейших (Sarcocystis, Toxoplasma gondii), антигенами которых могли быть иммунизированы животные и человек. Поэтому рекомендуется следовать определенной тактике проведения иммунологических тестов. Для дифференциальной диагностики указанных паразитов постанови теста должна осуществляться в двух вариантах.

• l.Ar 1 + гетеродогичная иммунная сыворотка против Аг 2; 2. Аг 2 + гетерологичная" иммунная сыворотка против Аг 1. 10.. При исследовании сывороток крови мужчин и женщин в возрасте ■ 18-76 лет.антитела к Sarcocystis выявлены в НРИФ, РИГА и ИФА у 3,2 - 57 X, что.связш}о,;йо-видимому, о иммунизацией растворимыми, термостабильным» антигенами Sarcocystis, содержащимися в полога.

11. Использование новых ¡гчунореагентов оо отрогой токсоплаз-менной и саркоцистной специфичностью позволило дифференцировать саркоцистоз и токсоплазмоз у лизогньи и человека. Антитела к Sarr->cysti3 в тярах 1:400 - 1:1600 (ИФА) зарегистрированы у 68 из 84 овец (80,9 X), антитела к.Toxoplasma gondii - 1:400 - 1: 1600 у 44 (52,3 X). Иэ 41 сыворотп крови людей, в которых при помощи ИФА выявлены антитела к компонентам походного препарата токсоплазм, антитела к специфическим антигенам токооплазм обнаружены в 34 (8L,9 х), а к антигена! общей для Saroooyatis специфичности в 28 (68,3 X) случаях.

12. Саркоцистные и токооплазменныэ аитиидиотшшческив антитела - Ат-2 положительно реагируют о ооответствуюиямя ндиотипами -Ат-1 В первом случав - 1:5120, во втором - 1:2560. По чувстви- • , те»1Юеп1 . они соответствуют антигенным эритроцитарта» дгаигн^-'

- 34 -%

о nitty мам в РИГА, но уступают на одно разведение антигенным ш-мунореагентам в ИФА.

13. При парентеральном, двукратном введении (подкожно, о едгю-вантом Фрейнда 0,5-2 мл, в/мышечно - 1 мл) ягнятам и козлят.'« саркоцистных и токсоплазмешшх анхиидиотипических антител (активность в первом случае - 1:6120, го втором - 1:1280 - 1:2560)

0 профилактической целью. был достигнут иммунизирующий эффект. Количество саркоцист S. ovicanis и S. capracanis определенного размера (35-55 мкм), соответствующего сроку заражения в опыте

- (67-71 день), у иммунизированных животных снизилось в 4-10 раз по сравнению о положительным контролем.

14. Иммунизация per os телят за 45 дней до заражения с.лучен-ными Б6000 Р спороцисташ S.bovicanis в дозе 10000, однократно, вызывает формирование напряженного нестерильного иммунитета.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 В хозяйствах, где'зарегистрированы случал клинически выраженного саркоциотоза и токсоплазмоза,; рекомендуется.проводить . серологическую в том числе дифференциальную диагностику, использовать методику приготовления антигенов, постановки РИФ, а также систему мероприятий, изложенные в разработанном нами нао-,

' тавлешш "Применение реакции флуоресцирующих антител при сгрко-споридиоэе крупного рогатого окота", Кайяар, Алма-Ата, 18BS г.• Практические предадкення включены в методические рекомендации "Сяркоопоридиоэ животных и меры борьбы о ним", разработанные оотрудниками Института зоологии HAH PK, Каз КИВИ п АЗВИ.

2. С целые точной дифференциальной диагностики тошэпдазыога, для предупреждения ложных серологических результатов на тсксо-плазмоз рекомендуется по раа,)абототой нами матодкке попользовать эш^тт фракции пролиферативнш стадий Toxoplasma gondii, не содержащие внтигеног общих с Sarcocystis.

3. Оригинальное описание видов Sarcocystia и их- морфобяадоги-чеокая характеристика, иллюстративный материал (морфология, им-мунсфгуореоцентный метод диагностики) испсшьзуютоя в лекционной курсе и практических занятиях по паразитологии и инвазионным болезням о/х животных на ветеринарных факультетах ВУЗов Российской Федерации. Результаты исследований могут быть рекомендованы ври написании соответствующих разделов учебных пособий по п&рмнтологшь ,

- 35 -

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Левченко Н.Г., Поломошнов А.П., НовакМ.Д., Га-у зо Е.Д. Саркоспоридии крупного рогатого скота. - В сб. Саркоспоридии животных в Казахстане, "Наука", Алма-Ата, 1984, с. 11-20.

2. Левченко Н.Г., Поломошнов А.П., НовакМ.Д., Галузо Е.Д. Саркоспоридии овцг. - В сб. Саркоспоридии животных в Казахстане, "Наука", Алма-Ата, 1984, о. 20-32.

3. Левченко Н. Г., Поломошнов А.П., НовакМ.Д., Галузо Е.Д. Саркоспоридии свиньи. - В сб. саркоспоридии животных в Казахстане, "Наука", Алма-Ата, 1984, с. 37-41.

4. Левченко Н. Г., Поломошнов А.П., НовакМ.Д., Галузо Е.Д. Саркоспоридии лопади. - В сб. Саркоспордии животных в Казахстане, "Наука", Алма-Ата, 1984, с. 41-43.

Б. Новак М.Д. Идентификация стадий развития Sarcocystis bovi-canis у промежуточного хозяина прямой реакцией флуоресцирующих антител. - Деп. рукопись К 7418 - В-84, 1984 с. 1-14.

6. Новак М..Д. Применение реакции флуоресцирующих антител при саркоспорвдиозе крупного рогатого скота. - Рекомендации (наставление), "Кайнар", Алма-Ата, 1986, с. 1-12.

7. Новак М.Д. О действии химкокцида на крупный рогатый скот, зараженный саркоспоридиями. - Мат-лы Х-й конф. Укр. общ. паразита. Ч.2, Киев, 1986, с. 68.

8. НовакМ.Д., Омарол B.C. Клиническая картина, показатели уровня электролитов и глюкозы у телят при заражении Sarcocystis bovicanls. - Мат-лы 1У-го съезда ВОПР. Современные проблемы протозоологии, Ленинград, 1987, с. 218.

9. Омаров B.C., Новак М.Д. Динамика антителогенеза и белковых фракций в сыворотке крови телят при заражении Sarcocystis bo-vicanis. - Мат-лы 1У-го съезда ВОПР. Современные проблемы протозоологии, Ленинград,- 1987, с. 151.

10. НовакМ.Д., Федосе-^ико В. М., Оразалинова В. А. Ультраструктурное изучение Sarcocystis sp. крупного рогатого скота. - Известия АН Каз ССР, N 2, 1987, с. 46-49.

11. Новак М.Д., Фариаова О.М. Особенности формирования иммунитета у молодняка крупного рогатого скота при саркоспоридпоэе.

- Деп. рукопись N 3018 - 37, 1987, с. 1-21.

12. Новак М.Д., Фзрирова D.M. Динамика антителообразования при спонтанном саркоспоридиоэе молодняка крупного рогатого скота. -Деп. рукопись N 1652 - 88, 1988, с. 1-21.

13. Ноьак М.Д. Экономический ущерб и эффективность лечения при саркоспоридиоэе крупного рогатого скота.- Деп. рукопись N 1653 - 68, 1989, с. 1-15.

14. Срозалинова В.А., Федосеенко В.М., Новак М.Д. Саркоцисты лошадк. - Деп. рукопись N 2065-88, 1988, с. 1-15.

15. Нокак М.Д., Дымкова К.Д. Гисто- и цитохимическое исследован»"« шютных стадий Sarcocystis bov anis и Sarcocystis bovi-felis крупного рогатого cicots. - Деп. рукопись N 1239-89, 1989, с. 1-14.

16. Каральник Б.Б,, Кузьмин Ю.А., Новак М.Д. О значении антигенных связен Toy plasma gondii и Sarcocystis в диагностике т к-соплазмоэа. - Мат-лы 111-го Всесоюзного симпозиума по sjkcd-плазмозу. Новосибирск, 1989, с. 129-131.

17. Дымкова Н.Д., Новак М.Д. Гисто- и цитохимическое исследование шстных стадийC5arcccystis bovihominis и Sarcocystis species крупног рогатого скота. - Известия АН Каз ССР, N 1, 1990, с. 53-55.

18. ЧовакМ.Д., ПакС.М., Яковлева О.М. Серологические исследования на саркоцистоэ и токсоплаэмоз крут, го рогатого скота в уолоьиях молочно-товарной фермы. - Деп. рукопись N 195-90, КчО, о. 1-15.

19. Новак М.Д., Дымкова Н.Д. Способ очистки спороцист Sarcocystis в центрнфул..jm градиенте плотности сахарозы. - Удостоверение н-'. рац.: предложение, Институт зоологии HAH РК, N 178, 1990. ,

20. Новак М.Д., Дымыэва Н.Д. Гисто- и цитохимическое исследование цистных стадий Sarcocystis species лошади. - Деп. рукопись N 1360-В90, 1990, с. 1-8.

21. Новак М.Д., Кузьмин Ю.А., Каральник Б.В. Специфичность иммунологических реакций на то» оплат юз и саркоцистоэ. - Деп. рукопис* N-: 1111 - В91, 1991, о. 1-30.

22. Новак М.Д., Кузьмин Ю.А.. Каральник Г..8., Дымкова Н.Д. Изучение специфичности фракций токсоплазменного и саркоцистно-го антигенов при помощи иммуноферментного анализа. - Деп. рукопись' N 1112 - В91, 1991, с. 1-14.

23. Новак М.Д., Куз .тн 'г>. А., Каральиик Б.В. Дифференциальная диагностика токсоплазмоза с использованием реакции пассивной гемагглшинации. - Экспресс информация. Новости науки Казахстана. 19'а1, К 4, С. 41-42.

24. Веркинбаев О., ПакС.М., Пинаеаа Л.1.1... Новак М.Д., Кушго-ккн Г.И. Эпизоотология паразитозов овец в равнинной и гприой зонах Алма-Атинской области. - Информ. лиоток Каа НШНТИ, II 38, 1991, о. 1-5.

25. Новак М.Д., Дымкова Н.Д., Рисмухвмбетова А.Т. Диагностическая ценность токсоллазмешшх и саркоцистных антнлдиотипических антител. - Деп. рукопись И 1400 - В92, 1S92, с. 1-25.

29. Новак М.Д., Дьакова Н.Д., Рысмухамбетова А.Т. Им.../нопрофи-дактическаг эффективность саркоцистных и токсоплазменных анти-идиотипических антител. - Деп. рукопись Н 1401 - В92, 1992, о. 1-14.

27. Новак М.Д., Рысмухамбатова АЛ. Антитела к Sarcooystis и Toxoplasma gondii у людей. - У-й Всесоюзный съезд протозооло-гов, Витебск, 1392, Цитология, Т. 34, В. 4, 1992, о. 109.

28. Новак М.Д., Дымкивз Н.Д., Рысмухамбетова А.Т. Диагностические и иммунопрофшшктические свойства антиидьотилических токсо-пдазменных и саркоцистных антител. - Известия HAH Республики Казахстан, Н 4, 1S93, с. 36-39.

29. Новак М.Д. Диагностика саркоцистоза и токсоплаэмоза в РШ > при помощи антигенных и антительных иммунореагентов. - В об. "Ученые аграрники сельскохозяйственному производству". Кострома, 1693, с. 52.

30. Новак М.Д. Перспективы использования метаболических антигенов в диагностике протозойных булезней. - Материалы межвузовской научно-методической конференции. Ярославль, 19Р4, о. 155.