Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная эколого-биологическая характеристика видов азотобактера, распространенных в почвах Армянской ССР

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная эколого-биологическая характеристика видов азотобактера, распространенных в почвах Армянской ССР"

-ZSjbS' „

. - АКАДЕМИЯ НАУК АДИНСКОЙ ССР

ОТДЕЛЕНИЕ ЕИОЛОГМЧЕСНИХ НАУК

На правах рукописи

Ж.С .ЫБШМЯН

СРАВНИТЕЛЬНАЯ. ЭКОДОГО-ЕИОЛОГЙЧБСКАЯ ■ ХАРШЖРИСТИКА адов АЗОТОБАКТЕРА, РАСПРОСТРАНЕННЫХ В ПОЧВАХ АРМЯНСКОЙ ССР

Джссерсацяя на русской языке (03.00.07-1шнро биологи я)

Автореферат ' диссертации на coi екание ученой степени кандидата биологических наук

Ереван - ЗЭ75

АКАДЕМИЯ НАУК АВИНСКОД ССР

ОТДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

На правах рукописи

Ж.С.КЕЛХОНЯН

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЭКОЛОГО -БИОДОГИ ЧЕС КАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИДОВ АЗОТОБАКТЕРА, РАСПРОСТРАНЕННЫХ В ПОЧВАХ АРМЯНСКОЙ ССР

Диссертация не русском языке (03.00.07-иихробнояогия)

Автореферат диссертации я а соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ереван - 1975

Дслралш&и Шуча^и ИосаавсноИ цд. Ссг.;; .

Работа выполнена в лаборатории аэотфиксируювдх микроорганизмов Института иикробиологи и Академия наук Армянской ССР.

Научный руководитель -

кандидат биологических наук А.В.КИРАКОСЯН

Официальные оппоненты: докто^бяо^огических паук

Ведуцее предприятие: кафедра физиологии, анатомии

растений и микробиология Ереванского государственного университета.

Работа аздокене на 147 страницах,в тон числе приложения - 15 страниц, включает б глав, 31 таблицу, 54 иллюстрации. Список литературе содержит 288 названий работ, в тон числе 220 отечественных.

Автореферат разослав " " Л uf^euf 1975 г.

Защита состоится "Jo " 1975 г. на заседа-

нии Ученого Совета К 2 Отделения Биологических Наук АН Ари.ССР.

С диссертацией нежно ознакомиться в библиотеке Отделения Биологических наук АН Ари.ССР (Ереван, ул.Пушкина, 12).

Отзывы (в 2 экземплярах о заверенной дадписьп) направлять по адресу: 375Q0I, Ерввав-I, уд.Абовяиа 15, Отделение Биологических Наук АН Ари.ССР, Совет Ш 2,

Ученвб секретарь Совета

канд.с.х.наук Т.Г Лусарян

. ВВЕДЕНИЕ

Проблема биологической фиксация молекулярного азота привлекает внимание широкого яруга »следователей. Познание роли микроорганизмов а круговороте азота в природе связано с изучением их экологии, физиол ого-би охи ми чес ких особенностей и взаимоотношений с другими организмами.

Биологическая фиксация азота осуществляется в природ« свсбодноживу щями и сххбпотнческимн микроорганизмами .Объектом особого внимааяя исследователей из свободножявуцих азот-фиксаторов оказался азотобактер. Этому роду бактерий посвящено работ как ото чеотве нныг, тая и зарубежных авторов больае, чем каному-лябо другому почвенному микроорганизму. Исследовании азотобахтера посвящены работы Виноградового, 0ивлян-ского, Костычева» Красильюакова, иишустива, Федорова» Рубеи-чика и др.

Вначале азотобактер привлекал внимание ученых как орга-квзи,фиксирующий атмосферный азот и играющий больную роль в азотной гатавйи растений. Последующими работами было установлено стимулирующее влияние азотобактера на рост и продуктивность растений в связи с продуцированием им в значительных количествах витаминов, ауксинов, аминокислот, ферментов и других соединения. Исследования последних лет показала,что азотобактер вырабатывает антибиотические вещества,подавляющие рост грибов-возбу^ителеВ болезней растений.

Несмотря на вмещайся в литературе обширный материал по идеятифииацки и классификация азотобактера,определение видовой принадлежности его сопряжено со значительными затруднениями из-за недостаточной разработанности систематики данной группы. Многие исследователя пытались уточнить классификацию бактерий родаАк^оЬас^ег . Однако, полученные данные часто носят противоречивый характер,что затрудняет использование огромного литературного материала по различным вопросам экологии и биологии азотобактера.

Основной задачей ваших исследований являлось научение экологии и биологических особенностей азотобахтера е целью использования их для дифференциации и идентификации раахич-

них видов. В соответствии о этим ставилась задача выявить закономерности распространения различных видов азотобактера по разный почвенно-климатическии зонах Армении г связи с окультуренвостьв почв. В процессе этих работ наш было установлено в от да льнах почвах Ариении очаговое распространение Дг;,е£х1е. На основании всестороннего морфо-физиологячесвого изучения выделенных культур ряд втаимов бал выделен в описан как новые разновидности отдельных видов азотобактера о приводе вне и подробного диагноза для идентификации этих таксонов.

Для характеристики штампов,наряду с иорфо-физиологичео-ими л культуральныии особенностями »изучались способность биосинтеза физиологически активных веществ культурами азотобактера »строение -их хгутикового аппарата,образование пигментов и другие признаки.

Учитывая практическое значение азотобактера,изучен характер взаимоотношений этого вида с другими группами почвенных микроорганизмов, в частности - фитопатогенных.

В связи с перспектива ни практического использования азотобактера для изготовления аеклеудобрительных и кормовых препаратов бшга проделана работа по сравнительное характеристике различных методов хранения культур этого вида. Особое вникание при этой уделялось выявлению условия,обеспечивающих сохранение физиологической и азотфикоируюаей активности культур азотобактера при их длительном хранении.

В соответствии с поставленными задачами изучены:

1. распространение а видовой состав азотобактера в различных по чвенно-климатических условиях Армении;

2. культуральяо-морфологические и физиологические особенности разных видов азотобактера;

3. внутри- и межвидовые взаимоотношения азотобактера; биосинтез физиологически активных веществ азотобактером;

5. вэаямоотионеияя азотобактера с другими группами.микроорганизмов;

6. сохраняемость хизнеспособности культур азотобактера и их, азотфиксирующах свовств в различных-условиях хранения.

ОБЪККШ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Распространение азотобактера изучалось а различных типах почв на основных эколого-почвенвых условий Армянской ССР - бурах,каштановых,чериозеиах.горно-лесных и горно-дуговнг. Было отобрано 280 почвенных образцов из 19 районов. Объектом наших исследований явились 270 штаммов азотобактера,выделев-вых <3 этих почв в течение 1948-65гг, Были использованы также msauuii разных видов азотобактера, по луче иные вэ отечественных а зарубежных коллекций.

Для изучения распространения культур азотобактера в почвах и их выделения приыеяялся метод раскладывания почвенных комочков на поверхность агаризоваиной среды Эшби,а также метод почвенных пластин во Вявотрадскому.

Идентификаций выделенных культур проводилась по определителям Краснлышкова (1949) и Берге (Breed et al.,1957). При этой учитывался комплекс культуральных и иорфо-физиологичес-кях особенностей, а в отдельных случаях идентификация уточнялась другими дополнительными признаками - образованием флуоресцирующих и физиологически активных веществ,формой жгутикового аппарата и т.д.

Иорфо-фазиодогические и культуральные особенности азотобактера изучались на средах: Эвби-агаре с разными источниками углерода (сахароза, глюкоза, маннит, этиловый спирт, бекзойяо-кислый натрий, молочнокислый кальций), жидкой среде Эвби, Эа-би-желатине, МПА, ИЗБ, сусло-агаре, картофеле и молохе. Морфология клеток изучалась в динамике развития в окрашенных фуксином пазках и живых препаратах.

Отношение к различным источникам углерода определялось ауксонографическим методом на среде Зшби. Жгутиковый аппарат разных видов азотобактера изучался в электронном микроскопе.

Азотфиксирующея активность культур определялась ва жидкой среде Федорова с сахарозой (2%) микрометодом Кьежьдаля, остаточный сахар в среде - методом Шорля (Церв вита нов,1938).

Для выявления биосинтеза витаминов груплы В культуры азотобактера выращивались на среде Вияоградского с Z% глюкозы. Ейотин, тиамин, шридоксин, никотиновая и пантотеновая кисло-

5

tii определялись с помощью дрожжевых индикаторных организмов метолом,предложенным ВШИВ, витамин В12 - методом Букина и соаът.(195*0 ,а рибофлавин - флуороиетрическии методом(разработанным Поволощсой и еоавт.(1955).

Образование флуоресцирующего пигмента у культур азотобактера изучалось флуорометрическим методом Джонстона (Johnstone,1957)-

Ддя выясвеяия внутри- и межвидовых антагонистических взаимоотношения бактерий применялся метод наложения агаровых блоков (Краскльников,1950).

Качественный состав свободных аминокислот изучался методом восходящей бумажной хроматографии (Зайцева, Белозерский, 1957).

РАСПРОСТРАНЕНИЕ АЗОТОБАКТЕРА В РАЗЛИЧНЫХ ЭКОЛОГОЧЮЧБЕННЫХ УСЛОВИЯХ АРМЯНСКОЙ ССР

Вопросы еколого-географйческого распространения азотобактера изучались многими авторами на большом материале. Данные исследований в зтой области обобщены в монографиях отечественных авторов (Сушина,1949; Блинков, 1959; Рубен чин, I960; Зиновьева,1962; Пишу с тин, Шильникова,1968).

Изучение распространения азотобактера в почвах Армянской ССР было начато в середине 30— годов и продолжалось в последующие годы (Петросян К соавт. ,1936,1940; Киракосян,1940;Па-носян,Иеграбян,1940; Паяосяи,194й; Киракосян и соавт.,1955а, б, 1958 и др.).

Из литературных данных известно,что наиболее характер-Sim и широко распространенным видом азотобактера во всех изученных почвеяно-климатическах зонах Советского Союза является Ал.сьгоососсит. Почвы Армении оказались своеобразным хранилищем культур разных гидов и разновидностей азотобактера: As. «uroococctm (пигментированные и бесцветные штаммы),его раэ-60ЕВДНость Az.beijeriacVii, Az.nigricans и Az.agile о разновидностью Az.vitreum.

Образцы исследовалних бурых, каштановых и черноземных почв брались,в основном, из-окультуренных участков (с глуби-вы 0-20cm),занятых разными сельскохозяйственными, бахчевыми ■в садовыми культурами. Как видно из табл.1, культуры As.

Распространение. азотобактера в различных тагах почв Арцянсвой ССР

(обрастание почвенных коиочков ва среде Зщби в

Почвенные Типы почв 1 1« О б яа руIе « о

зоны оо о« а Аг (СЬгоососсш Аа.т£Г1саиэ Аг.

почвенные образцы обрастай, почвенных почвеявые образцы обрастал, почвенных потаенны? образцы обрастай. почвенных

(ЖЧЛ ь§ к-во % коиочков I 95х/ к-во % КРЮЧКОВ 45 к-во % коиочков 1 95

Волупустынная Бурые 85 33 100 61,7*65,5 а 9,6 10,4*17,2 9 10,8 52,4*67,6

Предгор-вая Натановне 71 57 60 35,4*32,6 32 45 47,6*52,6 0 0 0

Горво-степяая Чернове иные 64 23 36 32,8*37,6 5 7,8 2,2*5,8 0 0 0 .

Горнолесная Лесные, черноземные 16 5 зг 7,0*13,0 0 0 о' 0 0 0

Горнолуговая Горнодуговые 46 3 6,5 0,9*8,3 0 0 0 0 0 0

* - относительный доверительные интервал о вероятность» 95^,

сЬгоососсмт обнаружены во всех образцах бурых, в 57 ( 80%) из 72 образца каштановых, в 23 (36%) из 64 образцов черноземных, в 5 (31%) йз 16 образцов лесных и в 3 (.6,5%) из 46 образцов горно-луговых пота. Наибольшее количество штаммов Аг.сЬхоосойсит обнаруживается в бурых почвах (обрастание почвенных комочков составляло 61,7-65,5%). В каштановых почвах и типичных черноземах этот вид обнаруживается в сравнительно меньшем количестве (обрастание почвенных комочков -32,8-38,6%), а в горно-лесных и горно-луговых - количество их резко снижается.Аг> иаес1саив чаще встречается в каштановых почвах. Указанные почвы в отличие от бурых и черноземных богаче этим видом. Так, из исследованных образцов каштановых почв обросли 47,6-52,6% воыочков, из образцов бурых и черноземных почв обросли соответственно 10,4-1е,2 и 2,2-5,8% комочков. Культуры выделены только из бурых почв

Арташатсного района с высокостоящимк груатовыии водами. В других типах почв даже с высокостояцнш грунтовыми водами этот вид не удалось обнаружить.

Представленный в таблице 2 материал доказывает,что степень распространенности азотобактера в ризосфере зависит, в основном, не от вида растении, а от типа почв. В бурых почвах ¿г. сЬгоовоссщв обнаруживается в достаточном количестве в ризосфере всех сельскохозяйственных культур, в каштановых - его количество сильно варьирует, а в черноземах встречается меньше.Аи. и1®г1с»пе в ризосфере растений,культивируемых на каштановых почвах,развивается хорошо, а в бурых почвах и черноземах под теми же растениями встречается редко.

Влияние рН среды ка развитие экологических рас азотобактера исследовалось нами на культурах Аа.сЬтоососсш» , выделенных из бурых, каштановых, черноземных и горно-луговых почв (Хиракосяв,Ывлкошш,Аванян,1964).Солучеаные данные показывают , что большинство культур,независимо от их происхождения, развивается в интервале рВ от 6,0 до 8,0. При рН 4,5-5,5 они, как правило,не растут. Как показывают литературные данные (Блинков,1953; Работвова,1$57),а также результаты наших исследований, культуры азотобактера,несмотря на наличие в сре-

Распространение азотобактера в различных тинах почв Армении под различным растительным покровом (средний процент обрастания почвенных комочков при раскладывании 0,2г почвы)

п Растительный Si Р 0 б наруже а о

&6Б

8 покров оой se__ Az.chxoococ Azt&igricens Ах*ágil«

а д о п он о flj —у к-во \% Об- К-ВО % об- к-во % об-

я DNfl образ! рэс- образ рас- образ рас-

н ЦОв тения нов тания по в тания

I 2 3 4 1 5 б 7 8 9

Аотаиатсяий район

Пшеница 6 6 70 0 0 0 0

Люцерна 6 6 91 0 0 0 0

0> ¡g Кукуруза г 2 95 0 0 I 10

О. Хлопчатник 18 18 73 8 14 5 84

Р-, Томат г 2 100 0 0 0 0

№ Виноградник 13 13 87 0 0 3 55

Октемберанений раб он

Пшеница 7 7 47 0 0 0 0

Лщерна 4 4 54 0 0 0 0

Хлопчатник 8 8 67 0 0 0 0

Виноградник г 2 88 0 0 0 0

Ашта раке кий район

Пшеница 5 3 76 2 94 0 0

Люцерна г 2 13 2 20 0 0

О Эспарцет 4 4 60 2 22 0 0

а я Ячмень 4 3 38 4 14 0 0

о Кукуруза 3 I 50 3 98 0 0

м Картофель г I 54 2 80 0 0

<0 t-r Фруктов.сад 4 81 0 0 0 0

ЕЗ Тали не кий район

а Пшеница 4 I 62 5 34 0 0

se Наотнинскай район

Пшеница 5 5 41 0 0 0 0

Картофель г 2 25 0 0 0 0

Га бал 2 2 40 0 0 0 0

Продолжение таблицы 2

I 2 3 4 5 1 6 7 8 9

Абовянский район

» Пшеница 3 2 12 3 1 92 0 0

я «а Казанский район

а Пшеница 4 * 40 0 0 0 0

4S Лес 3 3 25 0 0 0 0

Анийский оайон

Пшеница 2 2 18 2 7 0 0

Эспарцет+лю- 46

цераа 2 2 0 0 0 0

Я Артикский район

а Эспарцет 2 I б о 0 0 0

V Ячмень 2 2 30 0 0 0 0

о Апаранений район

33 пшеница 5 I 6 1 0 1 0 0 0

о. Калининский район

а> Луг 5 0 0 □ 0 0 0

Пашня 5 0 0 0 0 0 0

Степанавансний район

Картофель 2 2 43 0 о 0 0

де фосфатных буферов, подщелачивают более кислые в подкисляю« более щелочные среды,приспосабливая их тек самым к сбоям потребностям. Однако,некоторые культуры,выделенные из бурых и каштановых почв,имеющих рН от 7,06 до 7,66, хорошо растут иа средах с диапазоном рК 7,4-8,0 и почти не поникают значения реакции среды,тогда как культуры,выделенные из черноземов и горно-луговых почв с рН от 6,24 до 6,8,развиваются только на средах с реакцией близкой к рН почвы. При низких рН они не растут, а при высоких если и растут,то значительно понижают реакцию среды (табл.3).

Таким образом, у некоторых культур, выделенных из слабощелочных почв, отмечается адаптация к щелочным средам. Культуры,выделенные из слабовислых почв,такого приспособительного свойства к вислой реакции не проявляют,что по всей вероятности,объясняется чувствительностью азотобактера к Ю

Влияние рб среды на рост культур Аг.сЬгооеоесш, выделенных из различных типов почв

(кол-во клеток в тыс./га среды)

Шт.212 из «ума почвы рН 7,66 Вт,367 из каштановой почвы рН 7,06 Шт.52 из черноземной почвы рН 6,23 шт.298 из горно-луговой почвы рй 6,24

Исходный рН Спустя 5 стт. Исходный рй Спустя 5 стт. Исход- Спустя 5 сл. Исходный рН Спустя 5 су?.

рН кол-во клеток рН иод-во клеток ный рй рН кол-во клеток рН кол-во клеток

4,56 5,02 0 4,9? 5,13 0 5,42 5,73 0 5,15 5,51 0

5,45 5,51 0,2 5,31 5,36 0,2 5,89 5,86 0 5,26 5,61 0

6,42 6,33 360 6,35 6,36- 3300 6,41 6,20 3580 5,89 5,87 0

6,69 6,66 19« 6,96 >,91 1680 6,96 6,66 4930 6,34 6,20 1400

7,56 7,24 1300 7,38 /,29 400 7,34 6,88 3160 6,89 6,85 3520

8,06 8,13 460 7,62 7,65 0 7,66 7,08 850 7,30 6,95 720

8,29 8,27 0 8,06 3,04 0 7,иь 7ь0 7,58 7,14 470

8,34 7,11 1100 7,80 7,45 240

8,15 7,78 7,4

Примечание: заражение производилось из расчета 100 тыс. клеток на I шг среды.

кислой среде.

Проведенные исследования во распространению азотобактера s почвах Армении позволили нам выделить из различных почвенно-клиliaтяческих зон культуры азотобактера s создать коллекции в количестве 270 штаммов,подробные данные о происхождении которых приводятся в работе.

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУР АЗОТОБАКТЕРА.ВЫДЕЛЕННЫХ 113 ПОЧВ А ЕЫЯ НС КОЙ ССР

Выделенные из почв Армении иного численные штаммы азотобактера, оказались весьма разнообразными и их изучение представляло большой интерес. Данные по идентификации этих культур я изучении свойств отдельных видов приводятся няне.

Azotobacter agile Bsi^ericclc)

Известно, что до настоящего времени шташсы Ая,agile были выделены разными авторами,в основной, из воды. Местные втаюш данного вида выделены наш в большом количестве из бурых почв Арташатского района. По морфол оги че скй м признакам эти. культуры оказались Сходными о описанным в литературе ВИДОК As.agile Beijari nf.lf. Они представлены крупными но-надоподобяымн клетками с немой прозрачной плазмой и мелкими зернышками,иногда наблюдались вакуоли. Они отличались кудьтуральныма свойстваш как друг от друга,так и от типичных зеленых штаммов. Исследовалось 20 наиболее характерных итаинов,которые по сходству культурально-морфологических особенностей подразделены ва 5 групп,

Кукмуральные и морфологические особенности местных штаммов азотобактера подробно изучались в динашке роста в течение 45 суток. Их краткая характеристика приводится аи-хе по отдельвыи грушах.

. I;группа. Клетки монадоподобные зернистые, величиной 3,2-4,8ке s диаметре, расположены одиночно,парами и цепочкой. Колонии гладкие,выпуклые,слизистые,серого цвета. Пигмент хромопарный (диффундирует в среду),который с возрастом непосредственно под колонией становится фиолетово-бурый.

В группа. Зернистые монады у штаммов этой группы яруп-

нее - 3,6-6,0 мк в диаметре, расположены одиночно, парами и цепочкой. Колония слабо-морщинистые, крупно-норцин к стые и зернисто-морщинистые. Пигыент хроыопарный бурого или теино-бурого цвета с фиолетовым оттенком.

Ш группа. Конады сравнительно мельче,чей у первых двух групп (2,0-3,2 «к в диаметре), более крупные {до 3,6мк)встре-чаются реже. Колонии слабо выпуклые, гладкие, светло-серого цвета. Среда окрашивается в светло-фиолетово-бурый одет.

IV группа. Клетки кокковидные (2,0-3,6 мк в диаметре) и овальные (2,9-3,8 х 2,0-2,2 мк) с 2-4 зернышками,расположены в скоплениях. Молодые палочки и кокки чаще вакуолированные. Колонии гладкие,плоские,стекающие светло-розово-фиолетового цвета, который с возрастом у одних штаммов не меняется, а у других - становится темно-коричневым.

V группа. В эту группу входят выделенные нами нтаммы As. vitreum LtJhnia «t westermann ,1909. Клетки корковидные

с гладкой плазмой, редко с 1-3 зернышками, величиной 2,0-3,6 мк в диаметре. Расположенные в ларах кокки сплюснуты в месте соприкосновения,что очень типично для культур Az. vitreum. Колонии выпуклые, слизистые гладкие и сильно морщинистые,пигмент хромопарный темно-бурого или черного цвета с фиолетовым оттенком.

В молодых культурах клетки штаммов у всех пяти групп представлены слабо подвижными гомогенными палочками и кокками. В старых культурах клетки инцистируются. Консистенция колоний местных штаммов Ав.agile, за исключением культур 1У группы, которые остаются мягкими до конца, в первые сутки жидковато-слизистая, спустя 2-3 суток плотная, а через 1-1,5 месяца становится кожистой, трудно отделимой от среды.

Все изученные штаммы Az.agile хорошо развиваются на среде Эшби с сахарозой, глюкозой, маннитом; слабо - на Ш1А,ШШ, этиловом спирте; не растут на бенэойноиислом натрии, сусло-агаре, картофельных ломтиках. Культуры 1У группы в НПБ не растут, на сусло-агаре развиваются слабо. На Эшбк-желатине рост культур слабее,чем на агаровой среде,среда окрашивается в розовый цвет. Исключение составляют штаммы У группы,кото-

рыв оОраэувт темно-бурый хромопарный пигмент. Желатину не разжижают. Молоко не пептонизируют. При культивировании на НПА и !ШБ клетки сильно деформируются. На 1г усвоенной сахарозы фиксируют 10-14мг атмосферного азота.

Для сравнительной характеристики местных штаммов,параллельно исследовались следущие коллекционные культуры az, agile : дельт ский,3akuti ав , 22-Д, ИНШ, ВНИИ с.-х. микробиологии, H-I, ЗК, а также As .nacr ocyt ogeaea J вив en О и атамм As.vi&elandii ШШИ, Проведенные исследования показали, что из всех коллекционных штаммовА».agile только штамм Az.agiJe ¿abitiae и дельфтский штамм по своим культуральным и морфологическим признакам принадлежат к указанному виду, A z.. mac-rocyt:ogen«B полностью идентичен со штаммом Az.agile jalcu-tiae . Остальные штаммы Az. agile как по куль ту pa лысым, так и по морфологическим особенностям являются типичными штаммами As.vinelaodii с характерными для этого вида сильно подвижными гомогенными палочками, образованием кист, отсутствием монадоподойных клеток и фиолетово-бурого пигмента в старых культурах. В литературе неоднократно указывалось, что в противоположность штаммам Az.agil« , которые не усваивают бензойнокислый натрий, штаммы Az.vioelandii усваивают его (ВквоградскиЙ ,19 52; Derx ,1951Ъ ; Deban ,1953Ъ ; Voete, Cede-fcen ,1966), Отнесенные нами к виду Az. vinelaxidii штаммы Az.agile ,растут на среде с бензойнокислым натрием. Очевидно, как отмечали некоторые авторы, здесь также имело место ошибочное причисление втаммовАг. vi&el&ndii по их зеленому пигменту К виду Az.agile (Випоградский, 1952; Kluyver, van-Eee-■пеп ,1933). Использованный нами метод флуоресцентного анализа (Нелкокяп и coas т.,1966), предложенный Джонстоном и Фивбейном ( Johnston« ,1955,1957; Jobaetone,£is]¿bein ,1956), дополнительно подтвердил принадлежность этих штаммов, за исключением штамма 22-Д, к виду Az. vinelatiüii (табл.4). На основе этого метода водорастворимый зеленый пигмент штаммов Ае. agile светится под УФ лучами белым, а у штаммов Az.vi-selendii - зеленым цветом. Авторы этого метода отмечали,что цвет флуоресцирующего пигмента не зависит от цвета видимого

Выявление флуоресцирующих веществ у коллекционных культурAa.agll« И As»vin«l«ndii при УФ облучении (интенсивность свечения обозначена по пятибальной система)

¡55 ' (Цвет куль typ адь а ой

жтаммов Виды, штаммы \ жидкости

по ИНИИАРМ. {при оолуче-f нии Уф дри дневном свете

401 Ab, agile 22-Д желтый

406 ' 400 ■ 407 ; " (дельфтский) " jabitiae As * nacrooytogwn.ee « +++++ о ♦+♦+ о -м-н- буро-зеленый буро-желтый а

403 As. «eile (ВНИИ c/x микроб.) +++ желтый

404 : H-I (ЕеЛГУ) »+-M- зеленый

405 3ü и Я +++ V

402 ■ Az. vinelaadii (ЩШ СССР] в +++++ к

412 410 - 411 :: <Ин-* й^Г " (Ин-т почво-ве^.АН Груз. • о ю +++++ +++++ It м о

Контроль - среда I свечения вд^

при дневном свете. Так,у коричневого штамма As* agil« они наблюдали флуоресценции белым цветом. Местные итакмы а г. agile , которые выделяют в среду фиолетово-бурый пигмент и мало образуют флуоресцирующих веществ - при УФ облучении светились слайо белым цветом.

Таким образом, крупные размеры клеток, их моиадоподоб-ная форма, нежная прозрачная плазма с мелкой зернистостью, отсутствие роста на среде с бензойнокислым натрием,характер

образования флуоресцирующего пигмента у изученных местных втаммов »позволяют отнести их к виду As. agile. Лестные вханмы

в отличие от типичных образуют фиолетово-бурый пигмеях. Бей-ерияк и ряд других авторов указывали,что зеленые псаммы в старых культурах образуют темно-фиолетовый и коричневый пигмент, диффундирующий в среду (, Beij«rinck ,1901; zluyver ,

van-R«tensa , 1933;Ид1уу«г, van den Bout, 1936). To же самое отметил в своих наблюдениях и Джоне (Jonee ,1912). По его данным Аг.agileс возрастом образует черный пигмент, a Az.vine-landü - не образует его. Клюйвер и соавт,(1933,1936) выделили и описали бесцветные штаммы ¿г.agile. Авторы считали пигментации культур свойством непостоянным, на что указывается и в определителе Красильнииова(1949). Местные штаммы отличаются от типичных также наличием цист. Некоторые авторы считали цистообразование таксономическим признаком (Ви-ноградский,1952; lebaa ,I953bj. Одаако, это свойство культур,очевидно, ооусдавливается энологическими условиями, Иэ-вестно,что первоначально описанные штаммы выделялись из чистых водоемов. Местные же штаммы Оыли выделены из бурых почв,что наложили свой отпечаток на те особенности,которыми они отличается от описанных в литературе втаммов. Исходя из этого, считаем возможным описать местные штаммы как разновидность Ав.agile и назвать Az* agile Beijerinck var.ex-me-асм (Киракосян,Меляонян,19б<0. .

Штаммы As.agile , входящие в 1У группу, своими культу-рально-морфологическими особенностями оказались близкими к коллекционным штаммам Ass.agile jakutiae и Az.macrocytogenee. На этом основании они могут оыть объединены в одну группу вместе с дедвфтежим атамиом, который мало отличается от отмеченных двух коллекционных штаммов.

Культуры азотобактера, объединенные в У группу своими прозрачными колониями и морфологическими особенностями,сходны с описанным ХЗиисом и Вестерманом Az.vitrawm, но значительно отличаются хороиим ростом, интенсивной пигментацией колоний и среда, а также активной азотфиксирущей способность». По кудьтуральным к физиологическим свойствам эти культуры близки к A*,agile . Поэтому мы придерживаемся классификации Красильникова (1949),отнесшего Az.vitreumк разно-видно сти Аг.egile, и считаем возможным выделить местные штаммы в отдельную разновидность Az.vitreum bBbnie et Western мш var.axm«niaeae (Киракосян,11елконян,19б4).

Аао^юЪасЬер еЬгоососсцм, Всд^еНТ"ч-1г11УМ

Наряду с широко известными пигментированными культурами нами были выделены слабоокраиекные (светдо-*евтые ил« крановые) и бесцветные формы Аг.сЬхоососстж , некоторые из них в старых культурах окрашиваются в светло-коричневый цвет. Для исследований было отобрано 25 пигментированных я слабоокраиенных штаммов Аи.сЬгоососсиш , в ток числе и код-лекционный ютами 53 (ВНИИ с/х микробиологии).

В молодой культуре клетки представлены подвижными гомогенными палочками. Зрелые клетки зернистые«крупные овальные 2-8-4,8 х 2,0-2,8мк) и кокковидкые (1,8-3,2мк в диаметре), расположены одиночно, попарно, в пакетах,цепочкой ж в вида тетракокяоз. В старых культурах образует цисты. Цистообраао-вание у слабоокраиенных в бесцветных штаммов наступает позже,чем у пигментированных. Колонии изучевшх культур,выпуклые, гладкие или морщинистые, слизистые ля* сухие* стекающие или компактные (пастообразные). Пигмеях хромофорный (не диффундирует в среду) от светло-коричневого до темно-бурого или черного цвета, за исключением слабоовраленных ятаммов.

Хорошо растут на сахарозе, глюкозе* этилозоИсмрте; некоторые втамны не развиваются ва манните, молочнокислом кальцин, бензойноннсдом натрии. Штаммы,растущие на бенэоЯяо-кислои натрии,в том числе и бесцветные, образуют двффундвру-вдий в среду бурый пигмент. Слабо развиваются ва ЫПА, ШШ в сусло-агаре; на ломтиках картофеля не растут. Желатину не разжижают, растут слабо, пигмент не образуют. Молоко яе пеп-тонизирум. Клетки на ВША,ЦДЬ,сусло-агаре и молоке сильно деформируются. Фиксируют 10-15мг азоте на 1г усвоенной сахарозы .

Таким образом, исследовании показали,что местные штаммы ¿г.сЬдоососсша является типичными представителями данного вида.

адо^оъасьег ъе5 1 ьгырд«'*,')'*^

Штаммы Аг.ЪеьЗбмпскИ в почвах Армении обнаруживаются редко и были выделены наыи из бурых почв Еревана и Октемберя-на. Они являются наиболее малочисленными из имеющихся в на-

вей коллекции видов азотобактера. Исследовано всего шесть итаммов.

В колодой культуре клетки в виде гомогенных подвижных палочек и неподвижных кокков. В последующей клетки зернистые овальные (4,3 х 2,3тс) и кокковидяые (2,7-3,2щс в диаметре),расдолохены одиночно, попарно, редко цепочкой. Образование цис* ае наблюдается. Встречаются колонии двух ти,-пов: сухие, бугристые, пигментация желтая и слизистые штаммы, хорошо расту tute, колонки выпуклые, стекающие, гладкие, белые или светло-желтые, последние с возрастом окрашиваются в светло-коричневый цвет.

Хорошо растут на сахарозе, глюкозе, манните, этиловом спирте, слабо - на ШЗА, МПБ, сусло-агаре, молочнокислом кальции, желатине и бензойнокнслом натрии. На последнем два штамма не развиваются, а выросшие культуры образуют хроко-наркый бурый пигиент. Не развиваются на ломтике картофеля, три штамма совершенно не растут на манните. Иодоко не пепто-нкэируют. Ори культивкрованви на средах с молочнокислым кальцием я этиловым спиртом обнаруживаются инцистированнде. клетки. Это говорит о том,что цистообразование зависит от условий среды.

Таким образом, штаммы Az »bei 3erincbii отличаются от слабопигиеатированаых штаммов Az.cinooooccusi только отсутствием цист на основных средах. Хотя следует отметить,что у последках цистообразование наступает позже,чем у пигментированных форм Az.cLroococcvn . На сходство непигментированных штаммов Az. chfoococcum о As.beiSerimitii указывали Лёиис и Смет ( LBbnie, Smith ,1923)« Ряд авторов по сходству некоторых признаков объединил Az*b*ij«riackii с As.ciirooeoccum рассматривая его как разновидность ав. curoecoeeum (Красиль НИКОВ, 1949; Рубенчше,1960; XBimie, s®ith ,1923; Azo.Voehid* 1928í Snith ,1934,1935; Grew. ,1935;Вгее4 ®t al. ДЭ48),дру гие авторы выделили их в отдельный вид (Виноградский,1952; Sebea, I953b;Jeneea ,1951»;Сnllao,Moatoya ,1960; Tóete , DeOekea ,1966),>0 подвижности этой культуры мнения также расходятся. Чен, Иенсен, Взтс и Дедекен считают культуру не

подвижной, Лёни с ;i Вестерыакн ( LBbr-is, iesteríuiüii ,1909) -подвижкой. Некоторае из указанных авторов отмечает различия в размере влеток - ош у л г .ъ ei ¿ erinctii крупнее, чем у Az.chr«ococcum.

В результате наших исследований мы, как и большинство авторов, считаем целесообразны?: рассматривать Az.beiíerie-«Jcii как разновидность ¿г.сьгоососетш . Исследованные нами штаккы дг,ъei3erinctii идентичны с описанными в литературе культурами, с тем различием, что местные штаммы не превышает по размерам клетки Д£*сЬгоососс\ш и более активно фиксируют азот атмосферы - 14-16 иг/с усвоенного сахара (Красильников,194Э; Jeasen Voets, Dedekeu ,1966). ■

Agoto'bftcter дгкг^шар Кт-пчят ]n-}lrny,ig^C|

Впервые Az. ni grietaba выделен из почв Средней Азии и описан Красильниновым (1949). По сравнзшш с Ai.cbroococcum данный вид редко встречается в ¡гочве. Из многочисленное коллекции nTflttuoBÁz.tiibTicejie вами исследовано 18 культур, выделенных в основном из каштановых почв и только некоторые из бурых.

В суточной культуре слабо подвижные в основном гомогенные,иногда с 1-2 сильно прсяошшвдиыи свет зернышками(Крупные палочки. В дальнейшем преобладают овальные и продолговатые четко зернистые клетки размером 4,0-5,2 и 2,2-2,5мк и более. Река встречается кокни величиной 2,0-2,9 мк в диаметре. Клетки рассоложены в скоплениях. Наблюдается образование цист. Рост культур по сравнению с Аг.сЬгоосос&иш не интенсивный. Колонии гладкие или слегка бугристые; консистенция слизистая, в основном стекающая, иногда кашицеобразная, у колоний с сухой поверхностью - сухая, сыпучая. Пигмент хромопарный от коричнево-бурого до черного цвета, часто с фиолетовым оттенком. Фиксируют 9-15мг азота ва Ir усвоенной сахарозы.

По характеру роста, а такие по форма и расположении клеток в скоплениях, штаммы ¿a.nigricans близки к культурам 1У группы Az.&giie. Отмечаются также некоторые обще признаки

со всеми группяннля.авэ.!« (характер образование пигмента, рост на Эиби-жедгатине, отсутствие роста на бензойнокислоы натрии),что указывает на родство этих двух видов, а, по-видимому, культуры 1У группы являются связывающим переходным звеном между этими систематическими категориями.

По нашему мнению, некоторые исследователи ошибочно цри-нимают Аг.щ£пс*п« за разновидность Ае»с1и?оососсвд1 (Рубеи-чик,1960;д*ив«п,1Э54>. Наши повседневные наблюдения показали, что по морфологическим особенностям этот вид значительно отличается от Аг.сЬсооооссит - зернистость более ярко "- выражена, клетки в основном продолговатые и овальные, расположены в скоплениях н более склонны к деформации. Характер роста колоний на агаровых пластинках и косяках Эиби,проникновение пигмента в среду также отличают культуры дх.шб-г1сапя от Аг.сЫоФвосст . Имеются отличия и в отаооении к питательным средам. В противоположность Аа.сЬгоососсит штаммы Дж»пд£г1сшм не растут ва бензоЙнокислом натрии,иОА и мпь, на этиловом спирте развиваются слабо.

Полученные результаты показали,что местные штампы Ах. п±бг1сааа до морфологическим особенностям н азотфихсирую-цей активности отличаются от культуры, описанной Красильни-ковым,поэтому отнесены ж указанному виду как его разновидность Я В&ЗВаны А*.па£гхемш КгадвЛгпкОУ V6Li-.aXDieni.acae.

Из литературных данных известно,что азотобактер использует в качестве источника углерода мояо-, ди-, три-, полисахариды, спирты, органические кислоты и их соли (Федоров, 1952; Рубенчик,1960,1965; 11ивустин,Пильвиков8,196В; ^пвеп, 1954). Однако,по данным различных авторов относительно усвоения отдельных источников углерода имеются разногласия, которые объясняются птамховыми отличиями. Нами использовано 33 источника углерода - углеводы, спирты и органические кислоты. Результаты опытов показали,что все 272 штамма, в том числе и 9 коллекционных, усваивают в разной степени глюкозу. Фруктозу, сахарозу, налвтозу, трегалозу, янтарную, фумаровую и лимонную кислоты; не используют манкозу, ксилозу, рибоэу, Сорбозу, лактозу, целлобиозу, крахмал, инулин, глицерин,

дульцит*, стеариновую, щавелевую, налей новую, виннокаменную, салициловую, Фталевую и сульфаниловую кислоты. Отмечается вариабилькость культур как в пределах одного вида,так и между видаш азотобактера в отношении некоторых источников углерода - галактозы, раффинозы, нанки?а, сорбита, уксуснокислого натрия, молочнокислого кальция, бензойной кислоты. Тах, из 79 ятаныов Ав.ввИе только 16 усваивают раффинозу, 9 - молочнокислый кальций и 49 - уксуснокислые натрий.Штампы Аг . сЬгоососсит и Аг*1и£г1свпя обнаруживают вариабиль-ность в отношении мандата, сорбита) уксуснокислого натрия и молочнокислого кальция (табл.5).

Таблица 5

Отношение культур разных видов азотобактера к различный источникам углерода

Виды азотобактера о я п 09 О В§1 о о и 3)ХВ Количес»! 10 КУЛЬТУ! ). уС1 шиваки НИХ

1 о и Э" ь & 0 я 1 к 1 3 и й о и 1 о вяя щ 1 О ¡5 а ОЧ о 32 а як к а к ж €

Аг.сЬгоососсиш Аа.веИе III 73 79 III 73 0 ш 65 16 94 33 79 104 35 79 95 53 49 24 18 9 96 0 0

Всего 263 184 1& цоь 218 197 51 96

Примечание: в табл.5 и б - к остальным источникам углерода культуры азотобактера проявили одинаковое отношение.

Ьармзбильяость к различным источникам углерода отмечается -и между отдельными видами. Так,если штаммы Ах.оЫоосо-есип и Аг..ш.е?1сфш1 усваивают галактозу, то штаммы Аг.«в1-1* , за исключением коллекционных,не усваивают ее. В отличие от культур Аг.сЪгоососоит , усваивающих раффинозу И, в подавляющем большинстве, бензойную кислоту, атасны Аа.&е1-1а я Аг.п1гг1с*пвне используют бензойную кислоту, а некоторые мз них я раффинозу. Все штаммы Аг.«в11*,за исключением дельфтского коллекционного штамма, используют в качест-

ве источника углерода ианнит, сорбит, а многие штаммы да. сЬгоососотда ц A2.nigrica.ns не усваивают их. Коллекционные штаммы дг.ае*1е 22-д, ИШАЛ, ВЩ]« с.-х. микробиологии и Н-1, которые по культурально-морфологическии признакам оказались сходными с культурами Аг.\гале1втШ. , по углеродноыу питанию также не отличаются от них (табл.б).

Таблица С

Отношение коллекционных культур азотобактера к различным источникам углерода .

Виды, штаммы 1 я п>| >&т И о! ©о ПН; со « jt-< ;рц * e-i { n в 1 @ SO 1 o, to ' о 3 1 u i 2 « dstf ss say »а Э >jH Щ о ч л ООН чоч ка я ая en М Я[ S3 к w I S? о а ПК Н ЕО ) «Я W

(В1Ш if^ш^оЧЙд.) 1 + !+ ...

i ! Az.agile деяьфтский i - j - - 1 1 ♦ | + j -

At,agile 3akuti5e Az .»acrocytogenes ♦! + + + ♦ ! - ! - 1 1

4г. egile,___шт.шт. 22-д ^UMii ,ВШЙ c/x цикробиологии, H-I As.vioelandii iiUXl + + j + i+ + + +

Жгутиковый аппарат азотобактера

Относительно количества и расположения жгутиков азотобактера существовали разноречивые мнения,которые объяснялись несовершенством техники приготовления препаратов, а такке ограниченными возможностями светового микроскопа. Впоследствии, с появлением электронного микроскопа было установлено,что азотобактер имеет в основной неритрихиальное расположение жгутиков, число которых доходит до нескольких десятков (Красильников и соавт.,1952; Мелконян,1973;но1вг • 1944; Baillie et bA.,I962 и др.).

Жгутиковый аппарат местных культур азотобактера изучался У 44 штаммов Az.agile, ВТОМ числе II -Aa.vitreum, 20 штаммов Az.cbroococcum и 20 штаммов As.nigricans. Исследованы также и коллекционные штаммы Аа.agile Jabjtiae ,дельфт-

СКИЙ, 22-Д, Az «ma.crocytogetiea и As,vinslanüii -чШЬИ, H-I, парижский, всего штамп.

Наблюдения показали, что нее штампы As.agiie и as» vitreum являются перитрихаш. Жгутики длинные, тонкие, эластичные с сегиентообразной структурой. У некоторых штампов наблюдаются видоизмененные утолщенные, разветвленные жгутики с шаровидными вздутиям» на ноыцвх, у других - кол-басовидные и мешковидные выросты. Коллекционные штаммы, подобно местным, имеют длинные,тошеие, эластичные жгутики.Все они перитрихи,кроме Az. шасгосу-togeiies , который имеет полярное жгутикование.

По форме жгутикования штаммы Aa.cbxoooocoum похожи на Az.agile . Однако, некоторые штаммы Ав.сЬгооооссвт, наряду с длинными имеют и короткие жгутики, иногда в виде завитков. Подобную форму агутккования у указанного вида наблюдали Красильннков и соавт.{1952), Кольцеобразное расположение жгу тиков, о пи с энное Кр а сильник овым для штаммов Az.xiigricaiie , мы наблюдали только у единичных штаммов Az. сЬгооеоссчш. У штаммов а г•ohroooоссив встречаются и нетипичные жгутики - короткие, разветвленные с шаровидными образованиями на концах.

Особый интерес представляет жгутиковый аппарат штаммов Az.nigricaiLe . Электронномикроскопические исследования показали, что все штаммы перитрихи л имеют одинаковую форму жгу-тиковакия,однако, они значительно отличаются от рассмотренных видов тем, что у представителей данного вида жгутики утолщенные, прямые,четко сегментированные с заметными или мало заметными шаровидными образованиями на кокках. Наблюдения показали,что такая форма жгутиков,по-видимому,присуща более зрелым клеткам, молодые, только зарождающиеся клетки имеют тонкие, длинные, эластичные жгутики. У атаммов As.nigricans нетипичные жгутики, мешковидные и колбасовид-ные образования встречаются чаще,чем у Az.cgileH Аа.сьго-ос осени . Форма жгу ти кования Az.nigrioan» являете я устойчивым признаком и в числе других признаков может характеризовать данный вид.

Все исследованные виды азотобактера,в той числе и коллекционные, киеют сегментообразнув структуру жгутиков. Каляев и соавт.(1962) описали сегментообразное строение жгу-тинов бактерий,принадлежа«их к разный семействам, родам и гидам, что связывалось ими в рядом других авторов со спиралевидной формой кгутиков ( аоЬег118, РгеасЫ ,1951; БЪахх , »Шлтв Д952 и др.).

Внутривидовые и межвидовые взаимоотношения азотобактера

Внутри- и межвидовые взаимоотношения микроорганизмов привлекали внимание многочисленных исследователей,однако до сих пор мнения ко этому вопросу остаются разноречивыми,особенно относительно внутривидовых взаимоотношений.Ряд исследователей, принимая межвидовой антагонизм,совершенно отрицает существование антагонизма между итанмами одного и того же вида (Новогрудсний,1950а,б;Красильников,1951а,б; Краснль-нкков и соавт.,1951а,б,1963; Муромцев,1953), другие же признают наличие антагонизма как между гидами, так и внутри вида (Нахимовская,1939; Старыгина,1956; Дьяков,1958; Шевелев, 195В и др.). Красильииков и соавт. (1951а,б,1963) считают специфику межвидового антагонизма настолько постоянным свойством, что его можно использовать в систематике микроорганизмов для распознавания видов. Такими же постоянными признаками считают они и внутривидовые взаимоотношения микробов.

Вопрос внутривидовых и межвидовых взаимоотношений культур азотобактера также был в центре внимания ряда исследователей (Худякова,1950; Красильников, 19516; Афракян, Ару-тпнян,1953 и др.). Авторы во всех случаях имели дело с ограниченным числом культур азотобактера, поэтому их выводы о наличии антагонизма только между видами и отсутствии его внутри вида, не могут быть приняты за основу. Исследованиями, проведенными в нашей лаборатории,на многочисленных культурах разных видов азотобактера было установлено,что антагонистические взаимоотношения существуют и между штаммами,принадлежащими к одному виду (Киракосян,Каримнн,1958а; Кирако-сян,Мелконян,1964б). Изучен 121 штамм Az.agi.le , 12? - Ах,

сЬгоооосстаи и 60 - Аь. п1ргз.сеад. В результате исследований выявлено, что 50 штампов (41,3%)Az.agi.le , 40 (31,5%)-Ак,сЬгсоооосиш и б (10%) - ¿г. ю1ег1сввз угнетают рост культур своего вида. Антагонистические свойства штампов да. П1£г1сава внутри вида выражены значительно слабее, чей у двух других видов. Полученные .данные показали неоднородность штаммов азотобактера,принадлежащая к одному виду.Разнородность антагонистических свойств штаммов не коррелирует с их культуральниш и морфо-физиологическими особенностями. Качественно однородные в проявлении антагонистических свойств штаммы, по культуральным и физиологическим свойствам не сходны и, наоборот, некоторые тест-культуры и нуль-туры, подавляющие их рост оказываются сходными. При изучении межвидовых взаимоотношений азотобактера были отобраны культуры, образующие антибиотические вещества против штаммов своего вида и культуры не обладающие этим свойством. Выяснилось,что культуры,образующие антибиотические вещества против штаммов своего вида, в основном подавляют рост штаммов и других видов.

Таким образом, принцип специфики межвидовых и внутривидовых взаимоотношений в отношении культур азотобактера оказался неприемлемым.

БИОСИНТЕЗ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ КУЛЬТУРАМИ РАЗНЫХ ВИДОВ АЗОТОБАКТЕРА

За последние годы накоплен большой фактический материал, свидетельствующий о важной роли почвенных микроорганизмов, как продуцентов физиологически активных веществ - витаминов, аминокислот, ауксинов, гиббереллинов и других соединений, стимулирующих рост и развитие растений и повышающих их урожайность. Среди почвенных микроорганизмов особого внимания заслуживает культура азотобактера.синтезирующая в значительных количествах физиологически активные вещества - витамины (Гебгардт,Ковальчук,Х958; Красильнинов,

Гвамичава, 1962;Зиковьева, 1962;КанопкаЙта,196Ф;Рубен-чнк, 1965;Клвшшкова,1966;Свндрак, 1971;вошмгДЭ37;¿опея * бгеелг*в ,1943; Ьвв, Вигг1в ,1943 и др.), ауксины (Бере80-

ва и соавт.,1936; Сиалий,Бершова,194Sa,б,1957¡Наумова и Соавт.,1962; BuJcatscb, Heitzer ,1952; jaurger, Bukatecb, I95fc; Vaacura,Lacvira ,1960 u др.) ,гиббередлнны (Красильня-ков,1962;Уаумова и с оавт.,1962; Van сига, IS 51; Brown, Buxling-Ьав ,IS6£) ,ашнокисдоты (Зайцева,Еелозерскии, 57 ;ьеяозер-схнй и соавт.,К5ъ;Заацева и соавт.,1959,19ьЗ;Красильников И соавт.,IS6I;Bukatscli et al.,I956; SchlUtter, Buiatach , 1959 и др.) и другие соединения, вышеуказанные авторы отмечает, что интенсивность биосинтеза витаминов зависит от свойств отдельных штампов и не полет считаться видовым признаком .Однако,все эти исследования проводились на весьма ограниченном числе культур азотобактера. В наших исследованиях по биосинтезу витаминов группы Л использовано в среднем по 25-30 ятамков видов лг.agile, Дг.сЬгоососсш: и Аг. nigricans . делью этих изучений было выявить об сие закономерности для характеристики отдельных видов. Результаты исследований показали,что хотя среди представителей всех видов встречаются ютаимы»синтезирующие отдельные витамины с разной активностью,тем не менее каадоцу влду специфичен более интенсивный синтез определенного витамина. Как показывают данные таблицы 7, биотип более активно синтезирует большинство штаммов ¿г. cbxoococcvm и As.nigrioeiu (40-120 ыкг/л), менее активны - птаммы Az.agile( 10-40 мкг/л); но тнаиинобразованию более активно большинство штаммов а«* chroococcum (200-700мкг/л), менее - штаммы Az.agile п As. nigricaaeC 50-200мкг/л). Штаммы as*agile заметно отличаются от штаммов других изученных видов азотобактера своей активностью синтезировать пантотеновую кислоту (200-900мкг/л) .В то время как штаммы Аг.сЬгоососстт и At.nigricans синтезируют этот витамин в пределах 50^200мхг/л,причем II из исследованных штаммов As.cbrooooccum и EJ-Aa.nigricanB не синтезируют пантотеновую кислоту* Но интенсивности биосинтеза пи-ридоксина у изученных видов нет существенных различий -все штаммы синтезируют пиридоксин в пределах 2Q0-b00мкг/л. Никотиновую кислоту активнее синтезируют представители видов As.cLroococcum и As.nigricans от 700 до 2000-2500мкг/л,

Биосинтез витаминов группа и культурами разных видов азотобактера (содержание витаминов в мкг/л)_

азотобакте-i Биоти^Тиамин pa j II ант от e новая' к-та Г Пиры- |Никоти- Рибо-док- новая фла-син к-та »вин

Аа. agile | 10-40 ! 50-200 Az.chroococ- 40-120j2C0-7Ü0 cum | As.nigricans' 40-90 \ 50-200 200-900 50-200 50-200 200-800 400-1300)20-45 L i 200-800 700-2500 J2D-45 200-60017QO-2ÖOO 7-20

менее активно Az.agile - в пределах 400-1ЗООмкг/л.Количес-

тво рибофлавина, синтезируемое штампами As.agile и Az.chxo-ococcum составляет 20-45мкг/л, ¿z.nigricans -7-20мкг/л. Витамин üj2 местные штаммы азотооактера синтезируют в пределах 0,2-1,Омкг/л. иаиболыпее количество штаммов,активных по витаминообразованию,выявлено у вида Az.ctooococcum, за-темАв.ебИ«, в то время как большинство штаммов As.nigricans мало активно.

Изучение состава свободных аминокислот у культур азотобактера особых качественных и количественных отличий между видами не выявило. В клеточном экстракте, в зависимости от штамма,обнаружено от 12 до 17 сиирторастворивых аминокислот.

Биосинтез ауксинонодобных веществ культурами азотобактера определялся методом учета роста колеоптилей пшеницы, предложенным Бояркиным(1947,1948).Полученные данные показали,что местные штаммы всех трех видов азотобактера в бояь-нинстве синтезируют ауксиноподобные вещества с различной интенсивностью.Однако,культуры Aa.cbroococcum как по количеству штаммов, синтезирующих ауксиноподобные вещества.так и по активности превосходят штаммы Да.agile и Аа.nigricans.

Биосинтез гиббереллина культурами азотобактера нам не удалось выявить ни биологическим, ни химическим методами. ,

Таким образом,полученные данные по биосинтезу физиологически активных веществ местными штаммами азотобактера дополняют имеющийся материал о возможных путях влияния этой бактерии на высшие растения.

ВЗАКМООТШЙШЕЯ АЬОТОБАШРА С ДРИЧШ ГРУШШлИ .¿ШРОО РГАЛлЗ аов

Существенным факторов,влияющий на жизнедеятельность азотобактера является микрофлора почвы,которая весьма разнообразна по своии физиологический свойствам и продуктами жизнедеятельности может ингибировать или стимулировать размножение и азот$иксирушщую способность азотобактера.

Отечественные и зарубежники авторами изучено влияние различных групп микроорганизмов - актиномицетов, грибов,споровых и других бактерий, а также различных антибиотиков на рост и развитие азотобактера (Езчзнская,Петросян,1937;Афри-кян,Арутюнян,1953;Африкян,1954; Красильнинов и соавт.,1955; Колешко,1955;!1аплекова,1959; Паносян и соавт.,1962; Сабельни кова,19о2; ааве1 ,1555,1962;2ге14йус,Не1тесг1 ,1961;ЗсЬге-ven ,1963 и др.).

О способности культур азотобактера вырабатывать антибиотические векоства,подавляющие рост других микроорганизмов, до последних лет не было известно. В борьбе с инфекци-онныш заболеваниями растений широко исследовались антибиотики и их основные продуценты - актиноиицеты и грибы. Азотобактер изучался как объект,связывающий атмосферный азот, а также как продуцент биологически активных веществ. Хотя,как в первые годы применения азотобактера, так и в последующие, шюггсе исследователи отмечали,что при обработке семян ила корней рассады различных сельскохозяйственных растений азотобактером,процент пораяаеыости их некоторыми грибами и бактериями понижается (Березова и соавт.,1938; Ьаумова, 1939, 1956; Бельгшова,1955; Сидоров,1954; Линчевская, Калиберда, 195Ь; Петренко, 1958; '1'улабоев,1965), йеханизм же действия азотобактера на заболеваемость растений авторами не был установлен, хотя высказывались предположения о том,что азотобактер косвенно { Коу&к, 1Лта£'акота .1555) или прямо (Петренко,1956) угнетает рост патогенных бактерий. Только исследованиями Никустина и его сотрудников было доказано, что азотобактер может так*е быть продуцентом антибиотических веществ, угнетающих рост фитопатогенных грибов (Мишустин,Пет-

2В

рова,1958; Марьенко,1963,1965; Мишустин и соавт.,1963,1964; Ыищустин, Марьенко,1965).

Для выявления действия почвенных микроорганизмов на рост культур азотобактера использованы различные виды ахти-ношцетов (14 штампов) и ни ко 0 акте рий (II ш та uno в) из коллекции Института микробиологии'АН Ари.ССР (1ШШ1 Ары.), Института микробиологии АН СССР (ílHilil) и Всесоюзной коллекции микроорганизмов (ВКУ). В качестве тест-культур использовано 73 штамма трех видов азотобактерами 4 коллекционные нультуры. Из изученных культур актиномицетов три не угнетали рост азотобактера, восемь оказали антимикробное действие в отношении почти всех штаммов, три в отношении только некоторых штаммов Az.egile и Aa.nigricsus.Более активным» антагонистами являются актяношцеты из глобиспориновой группы, менее -Act.vioiaceus . Испытанные наш шташы макобактерай не оказали антагонистического действия на культура азотобактера. Результаты исследований по действию антибиотиков показали, что все культуры азотобактера, за исключением двух коллекционных (Az.nsile Jafcutiae и As.macrocytogeaeB - устойчивых к испытанным антибиотикам), более чувствительны к стрептомицину, несколько слабее - к биомицину и резистентны к пенициллину, Как актиномицеты-и «икобактерии, так и антибиотики в отношении отдельных видов азотобактера специфичности не проявляют.

Исследования Нишустина с сотрудниками и ряда других авторов (Марго,1967; Сардарян,1969; Икляр, Сардарян,1969) посвящены изучению антагонистического действия азотобактера на рост фитопатогенных грибов. В отношении фитопатогенных бактерий' в литературе данных не имеется. В наших исследованиях в качестве тестов использованы фитопатогенные бактерии (26 штаммов) и грибы (12 штаммов) из коллекции лаборатории микробных стимуляторов Института микробиологии АН Арм.ССР. Испытано 120 штаммов Аг.еЬгоососсиш , в том числе штаммы ВШИ с.-х.микробиологии 53 и 56, а также по Ю штаммов Az.asile и As.nigx-ioaaa.Результаты анализов показали,что штаммы Az.cüro-ососфот по антибиотической активности и спектру действия

превосходят два других вида. Иэ испытанных 120 штаммов ¿г. сЬгоососдала 101 штамм оказал угяатаадео действие на

рост фи то патогенных бактерий, а 77 (64$) - на рост грибов. Йтаиаы 4,7,142,147,167,266 и др. отличаются широкий спектром действия и антимикробной активность» (радиус зоны угнетения роста от 7 до 16им). Результаты опытов обобщены в таблицах 8 и 9.

Таблица 8

Антагонистическое действие культур Ав.сЬгоососсит на фитопатогенные бактерии

Тест-культуры •Ьыявлено культур антаго- кол-во антагонистов по зонам угнетения роста

ииС1 ов слабое умеренное сильное

к-во

Хш^Ьопюма садреа —

ИТ.80036 7 5,8 б I 0

я « шт.12 7 5,8 6 I 0

в шаХг&аолххш, ит.1 14 11,7 II 3 0

я » шт.2 0 0 0 0 0

а Ъе1;ьсо1а, шт. 135 20 17,0 14 4 г

к " шт.157 14 11,7 10 3 I

л теы.окЬог1*е ,ит.593 14 11,7 13 0 I

п " шт.605 32 27,0 32 0 0

РвешЮпюлде ЪттеГал1еа« ,шт.55 5,0 5 I 0

я » ит.141 0 0 0 0 0

п 1 огЪтупапл > шт ^28 2 I,? 0 0 г

а « шт.73 5 4 I 0

а 0 0 0 ■о 0

■ » шт.30 12 ю,о 8 2 г

и 1ус орвгвхогш, ш т. 159 6 5,0 I 3 г

в 0 шт.161 12 10,0 4 6 г

йГИЛЛА с*то1;отогв, ш т. 830 г 1,7 I I 0

в " шт.843 хз И,0 13 0 0

я 4 шт.924 62 57,0 35 20 7

п » шт.927 47 40,0 37 9 I

в атоЮеа*,ШТ.718 15 хг,5 13 г 0

* п ВТ.766 10 8,3 9 X 0

Продолжение табл.8

С 01-уп.»Ъа<^ егзляа лис&£—

йепеяав , шт. 50 5 3 2,5 3 0 0

" " вгг.583 3 2,5 3 0 0

ю 8,3 0 4 6

н " вт.21 I 0,8 I 0 0

Примечание: в данной таблице и таблице 9 слабое - угнетение роста по радиусу 1-5мн; умеренное - 5-Юмм; сильное! — 20-18иы.

Таблица 9

Антагониствческое действие культур Аа.сЬюососсша на фяаюватогенные грибы

Тест-культурм выявлено культур антаго- лол-во антагонистов по зонам угнетения роста

нистов сла- умерен- силь-

к-во > бое ное ное

Риаагдддш охувросши II 9,1 Ю I 0

" тодЛтГдгя» II 9,1 II 0 0

7 5,8 3 I 3

аХЬс—*6яииь,1йТ.5 7 5,8 3 0 4

ЕЬ±аооЪо1ц.ь воХввдСоятречн,) 6 5,0 3 2 I

» « (вартаф.) 0 0 0 0 0

Во-Ьгу-Ьо.« схпагв®. , ет.£ I 0,8 I 0 0

АХЪегпагха. воХвдЛ 2 I,? 0 0 2

Ру-£1ц.ит dв Вагуавпл 3 2,5 0 0 3

СоИе'Ьо'ЬгасЬит гзлал-Ьит 3 2,5 2 I 0

Тг1сЬо^всх1дт говев 56 47,0 49 6 I

С1аЛоврогдлш1 ЬегЬахт 16 13,3 15 0 I

Полученные даншю свидетельствуют о том, что азотобактер представляет определенный интерес и с точки зрении возможного его использования в борьбе с возбудителями некоторых болезней растений.

УСЛОВКЯ ХРАНЕНИЯ К ПОДДЕРЖАНИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КУЛЬТУР АЗОТОБАКТЕРА

Проблема сохранения культур микроорганизмов без утраты их основных свойств имеет актуальное значение, как в связи с созданием больших коллекций микроорганизмов, так и для повседневных работ с кики. В настоящее время в Советском Союзе и за рубежом накоплен больной фактический материал относительно методов хранения различных групп микроорганизмов. Предлагаются различные способы хранения: под минеральным маслом, яри температурах ниже нуля, в лиофили-зированнои состоянии, в стерильной почве, в песке и в других наполнителях. Однако, исследования показали, что указанные методы могут быть использованы не для всех групп, видов и даже штаммов микроорганизмов. В то же время в качестве основного метода хранения коллекционных культур грибов, бактерий, антиномицетов рекомендуется метод лиофи-лизации (Кузнецов и соавт.,1962;Кудрявцев,1963;Белякова и соавт.,1967;данилова и соавт.,1967;Кузнецов,1967 и др.). Относительно хранения культур азотобактера в литературе мало работ (Пумпянская,1964;Надирова я соавт.,1972; Gheor-gbiu et ai.,1У61),

Jj наших исследованиях культуры Ав,agile, Az.chroococ-cujb и az. nigricans по одному штамму хранились в течение четырех лет в бурой почве, черноземе, речном песке при комнатной температуре и под минеральным маслом на питательных средах Эшби, Федорова и Виноградского при 6-8°, 12-14° и 27-28°.Шесть штаммов Az.cbroococeun в том числе коллекционный ятамм 53 (Внйй с/х микроб.), хранились в лио-фияьво высушенном состоянии в течение двух лет. Полученные данные показали, что культура Ass.agile при Хранении в черноземе и речном песке спустя год утратила жизнеспособность, а йтаммы Az,chroococcum и Дг.nigricans сохранились во всех субстратах. Культурально-морфологические особенности изученных штаммов не изменились при хранении в бурой почве, а в черноземе и речном песке - видоизменились, особенно штамм Аг.nigricans.Основные коллекционные культу-32

Таблица 10

Выживаемость и азотфиксирущая активность дяофилизированных культур Az, сЬгоососсш

Штаыиы Суспензионные с [.еды количество клеток в млн./мл исходной суспензии Фиксация азота в иг/г усвоенной сахарозы

50 лио-Ешшаа-ции непосредственно после лиофшшзации при хранении спустя 2 года

исходная при хранении спустя 2 года

число *

53(ВНИИ о/л микрооиол.) Са1арозо-келатвновая(10^-1%) меласса f20%) 8000 1000 1800 560 22,5 56,0 1000 0,0004 13,4 13,6 12.2

32 сахарозо-жела7иновая( lOJi-IJí) меласса f20í) 4 ft 00 2500 720 1700 1,6 68.0 6,4 0.4 12,0 12,0 11,8

} сахароз о-хе ла тшюв а я ( 10 1 меласса (20,9 96ÜÜ 112 00 740Q 10800 77,0 96.0 3800 юоо 12,2 12,7 12.0

! сахароэо-желатилогайС10^-Й) i меласса (2Q"¿) 40ü0 2600 1900 2200 47,5 84,5 32 800 13.0 13 ■ 13.2

171 сахароз о-же ла тмов ая меласса (20$) 3000 2800 1400 1800 47,U 64,0 180 j I3 J 13,3 920 j 13,6

250 1 сахарозо-желатиновая (IQJí-I£ меласса (20,ь) 20'ju0 15200 8000 4600 40,Üj 7200 1 I3 2 13,0 31,5] 260 1 ' 13,0

ры (267 штаммов)»хранившиеся'ь стеркльной бурок почве,спустя шесть лет не утратили киэнеспособность, за мсклвчением двух бесцветных штаммов Az,сЬхоосоасчш и трех штампов Az. bei-jerincitii . Уто слабо инци с тирующиеся и некнцвстирующиеся культуры азотобактера. Культуральнае и морфологические особенности их оказались стабильными. Яри хранении под минеральный маслом культуры азотобактера в основном изменялись, особенно при 27-28°. При температуре й-8е штаммы Az. agile и Az.nigricans спустя три год1 утратили визнеспособность. Различные способы хранении на азотфиксирующую активность культур не повлияли. Данные исследований по лиофилизации штаммов лг.сйгоососоит , лредставлелные ъ тайлице 10, показывают, что спустя два года титр клеток, за исключение« одного штамма, оставался высоким. Процесс лиофилизации и последующее хранение не снизили азотфиксируюздю, дегидрогеназ-ную и инвертазную активность культур.

В U В О Д Ü

1. Азотобактер широко распространен в бурых и каштановых почвах Армянской СОР, в сравнительно меньшем количестве встречается в типичных черноземах, а в горно-лесных и горколу говы^с обнаруживается редко. Окультуривание почвы ведет к повышению в ней содержания азотобактера.

2. Выявлена определенная закономерность распространения отдельных видов азотобактера в различных типах почв.¿а. ciirooooccuai больше распространен в бурых, сравнительно меньше в каштановых почвах и черноземах; Az.nigricans в больших количествах обнаруживается в каштановых почвах,значительно меньше в бурых и черноземах, в горно-лесных к горно-луговых отсутствует; As.agile и Az.vitieunt выделялись только из бурых почв Арташатского района с высокостоявдиии грунтовыми водами.

3. На основании изучения 270 культур азотобактера, относящихся к As.ciuroococouia, Az.beijerinckii, Аг,agile, Az. vitreum и As.nigricans описаны новые разновидности некоторых видов как Ае,agile v.armeniscae, Az.vitreum v.armeni-

ьсае Vt AZ. ni eric ада v.ar»eniacae.

Коллекционные штаммы Аа.а£11е(22-Д, H-I, 3!», ВНИИ c/x мкнробиол.) из различные музеев по шор^о-физиологическим, нультуралышм особенностям и по характеру образования флуоресцирующего водорастворимого зеленого пигмента оказались типичными культурами Az.vineiandii. По тем же признакам штамм Az.macrocytogenes Jensen идентичен с Az.agile v.Да-Icutiae Kraaailn.

Выделенные из почв Армении культуры разных видов азотобактера на 1г усвоенной сахарозы фиксируют атмосферный азот в пределах -Az. agile - IQ-I4ur, Az.vitreum - 13-14мг, As. chroococcvmi -10-15ИГ, Az. bei¿erinckii - -16мг, Az. nigricans - 9-13мг.

5. Изучение жгутикового аппарата Az.agile (у шам-шв, в том числе II штаыиов Az.vitreum ), Аг.сЬгоососсгвв

(у 20 штаммов), Az. nigricans (у £О штампов) и коллекционных культур Ая.agile и А г. vinelandii( у 7 атаьшов) показало,что все они имеют спиралеобразное строение, форма жгутикования перитрихиальная, что затрудняет их использование для видовой дифференциации,за исключением az.nigricans .утолщенные прямые жгутики которых в числе других признаков могут быть использованы для идентификации этого вида.

6. Культуры азотооактера,выделенные из почв Армении, синтезируют в значительных количествах витамины группы В. Свойство витаминообразования у различных культур (изучено в среднем во 25-30 штаммов каждого вида) проявляется неодинаково и в определенной степени зависит от их видовой принадлежности. Биотин и никотиновую кислоту активнее синтезирует большинство штаммов Aa.chroococc-um и Az.nigricans , менее активно - Az.agile. Тиамин активнее продуцируют штаммы Az . obroococcvm, значительно меньше Az.agile в Аг.nigricans. Большинство штаммов Аг.сЬгоососситДAs.nigricaneHO синтезируют пантотеновую кислоту к витамин В12,в то время как штаммы Az.egiiesBAHttTca активными продуцентами этих витаминов.

В биосинтезе пиридоксина и рибофлавина существенных отличий между изученными видами не наблждается.

7. В составе слирторастворимых свободных аминокислот качественных отличий ,у отдельных видов азотобактера не отмечается. В зависимости от штамма в клеточных экстрактах культур обнаруживается от 12 до 17 аминокислот.

8. Все описанные виды азотобактера синтезируют с различной активностью ауксиноподобиые вещества. Наибольшее количество активных лтамков продуцентов этих веществ,по сравнению cAí.agils и Az.nisrioana отмечается у As. chioo-соссши

9. Изучение межвидовых и внутривидовых взаимоотношений азотобактера выявило наличие культур-антагонистов но отношению как к культурам своего, так и других видов. Причем, в основном, культуры,подавляющие рост штаммов своего вида, оказались антагонистами и в отношении штаммов других видов азотобактера.

Культуры разных видов азотобактера в целом одинаково подвержены воздействию определенных видов культур-антагонистов и антибиотиков, в результате чего дифференциация видов азотобактера по этому признаку оказалась невозможной.

10. Выявлено антагонистическое действие штаммов различных видов азотобактера на фитопатогенные грибы и бактерии. Наибольшее количество антагонистов обнаруживается среди штаммов Az.chrooeoccum , отличающихся как активностью, так

и широким спектром действия. Отмечается избирательное угнетающее действие к культурам возбудителей болезней растений

XantíiomoiLas caapestria, Xanth.baticola, Xantb.vesicatorias, Srwíait, cerotovora, aroideae, Tricbothecium roeeum.

11. Выделенные активные штаммы азотобактера - продуценты антибиотических и физиологически активных веществ, могут быть использованы для повышения урожайности, а также в борьбе с возбудителями болезней сельскохозяйственных растений.

12. Изучение методов хранения коллекционных культур азотобактера в почве, под минеральным маслом и в лиофильном состоянии показало:

а/дизнеспособность клеток и культурально-морфологи чес-

кие осооенности азотобактера хорошо сохраняются в течение четырех лет в бурой почве, худе - в черноземе и речном песке.

б/Йа питательных средах Эшои, Ввноградского и Федорова под минеральным маслом культуры азотобактера в течение четырех яет не утрачивают жизнеспособности. Культурально-морфо-логические особенности штаммов под влиянием минерального масла изменяются,сравнительно лучше они сохраняются на среде Этой. Наилучшая температура хранения - 12-14°.

в/Количество кизнеспособных клеток у лиофилизированных штаммов азотобактера ло мере хранения уменьшается,однако, в течение двух лет сохраняется в достаточном количестве.Культу рально-морфо логические особенности и ферментативная активность лиофилизированных культур,по сравнению о исходными, не изменяются.

г/Использованные методы хранения не снижают исходную азотфиксирующую активность азотобактера.

Список

работ, опубликованных по материалам диссертации

1. 0 внутривидовых взаимоотношениях азотобактера.Вопросы ■ микробиологии АН Арм.ССР,2(12), 73,1964(coaвт.Кирако-

сян A.B.),

2. Влияние р!1 среды на развитие экологических форм Asoto-bacter сЛгоососстда. Вопросы микробиологии АН Арм.ССР, 2(12),87,1964 (соавт.Кнракосян А.В.,Ананян Л.Г.).

3. Новые разновидности Asotobaoter agile из почв Лрм.ССР. Известия АН Арм.ССР (бкол.науки), 12, te 33, 1964 (соавт.Киракрсяв A.B.),

4. Определение некоторых видов азотобактера флуорометри-чесвви методом. Биологический журнал Армении, 19, й 6, 39, 1966(соавт.Киракосяя А.З.,Карапетян U.M.).

5. 1гутиковидные выросты у азотобактера. ДМ! СССР, 164.

» 931, 1965 (соаат.Красилъников Н.А.,БолтянскаяЭ.В,, Соколов A.A.).

6.Биосинтез витаминов группы В разными видами азотобактера.Вопросы микробиологии АН Арм.ССР, 4(14), 220, 1969 (соавт.Кнракосян A.B., Карапетяв М.М., Саркисян М.Б., Овсепян Э.А., Тапалцяи С.Х.).

7. Влияние некоторых групп микроорганизмов и антибиотиков на азотобактер. Попроси микробиологии АН Арм.ССР, 4(14), 2<tl, 1969.

8. Актагонистическое действие видов азотобактера на фито-патогенные микроорганизмы. Вопросы микробиологии АН Арм.ССР, 6(16), III, 1973.

9. 2гутиковый аппарат у разных видов азотобактера. Вопросы микробиологии АН Ары.ССР, 6(16), IIS, 1973.

10.Хранение производственных и коллекционных штаммов клубеньковых бактерий и азотобактера. Вопросы микробиологии AB Арм.ССР, 6(16), 130, 1973 (соавт.Киракосян

A.B.,Овсепян Э.А.,Мкртчян U.M.).

3e*a» 16 216_Tnoaa 250

Подписано к петатя 18,4,75г. Объем 2,5, уч.-изд. листа Экспериментально щршммсдсмеюаи пояшграфвческая лаборатория Ервввж, московящ, 35, АрШИНТИ