Специфические органические вещества лечебных грязей как источник пелондопрепаратов гуминового ряда

Агапов, Альберт Иванович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Специфические органические вещества лечебных грязей как источник пелондопрепаратов гуминового ряда
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Специфические органические вещества лечебных грязей как источник пелондопрепаратов гуминового ряда"

На правах рукописи

АГАПОВ АЛЬБЕРТ ИВАНОВИЧ

Специфические органические вещества лечебных грязен как источник пелоидопрепаратов гушшового ряда

03.00.04 - биохимия 02.00.03 - органическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Уфа, 1999

Работа выполнена в Самарском государственном медицинском университете

Научный консультант: заслуженный деятель науки

Российской Федерации, доктор медицинских наук профессор Ф.Н. Гильмиярова

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор В.А.Вахитов; доктор химических наук, профессор В.И.Слесарев; доктор биологических наук, С.А.Башкатов

Ведущая организация: Российский научный центр реабилитации и физиотерапии МЗ Российской Федерации

Защита диссертации состоится « » О-ё-/^?!^' 1999 г. в & часов на заседании диссертационного совета Д 084.3 5.01 при Башкирском государственном медицинском университете (450000, г. Уфа, ул.Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государствен ного медицинского университета (450000, г. Уфа, ул.Ленина, 3)

Автореферат разослан « ^У»

1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук,

профессор Х.М.Насыров

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

В настоящее время грязелечение рассматривают как сочетанное воздействие на организм физических (тепло, гидростатическое давление) и химических факторов (минеральные компоненты, неспецифические и специфические органические вещества). Известно, что грязевые процедуры оказывают на организм разностороннее действие: положительно влияют на трофику тканей, синтез белков, нейрофизиологический статус (Коуапк , 1988), стимулируют функции иммунной системы (Алресин, 1986). Показаны их антимикробный и антивирусный эффекты (Дегтяренко и др., 1985), противоопухолевое действие (Сево-стьянова, 1998; Р1ш§е1 а1„ 1989).

Грязелечение, как высокоэффективный немедикаментозный метод лечения, реабилитации и профилактики большого числа заболеваний находит все более широкое применение не только в санаторно-курортной системе, но и в больничных стационарах, профилакториях и поликлиниках. С другой стороны, грязевые процедуры имеют много ограничений и даже противопоказаний в связи с наличием у больных сопутствующих заболеваний, например, выраженной патологии сердечно-сосудистой системы, диабета, астмы и многих других заболеваний, что снижает эффективность использования бесценного дара природы, каким являются лечебные грязи.

С ростом мирового производства, несмотря на его спад в нашей стране в последние годы, увеличивается количество химических веществ, мигрирующих через атмосферу планеты и имеющих существенное биологическое значение для биогеоценозов водоемов, где формируются лечебные грязи. Специфические органические вещества их, выполняя биосферную функцию экологического щита человечества, практически необратимо поглощают многие из токсикантов антропогенного происхождения, но при этом сами становятся непригодными для лечебного пользования.

Более десяти лет назад ученые-курортологи Сибири (Стариков и др., 1988), где запасы лечебных грязей, казалось бы, велики, выступили, тем не менее, с инициативами, направленными на их охрану и экономию. Обеспокоенность вопросами сохранения курортных ресурсов, в том числе и грязевых, высказали ведущие ученые России, Российского научного центра реабилитации и физиотерапии МЗ РФ, руководители санаторно-курортных учреждений. Эти вопросы рассматривались на заседаниях научно-методического Совета по проблеме «Курортология» санаторно-курортного объединения федерации независимых профсоюзов «Профкурорт» 4 июня 1997 года и 2 февраля 1999 года в г. Москве.

препараты могут быть получены из некондиционных и бывших в употреблении лечебных грязей. Расход лечебной грязи при лечении такими препаратами снижается в тысячи раз по сравнению с нативной пелоидотерапией, что имеет большое эколого-экономическое значение.

Одной из трудных проблем на пути разработки теории и практики получения и применения пелоидопрепаратов является недостаточная изученность тех компонентов сложнейшего биогеохимического тела природы, каким являются пелоиды, которые в первую очередь обуславливают их терапевтическую эффективность (Самутин, Кривобоков, 1997).

Работами ряда авторов (Лещинский с соавт., 1982,1989; Цветкова с соавт., 1986; Низкодубова, 1987; Шустов, 1988,1996; Сидоров, Мамиляева, 1997; Самутин, Кривобоков, 1997) показана большая роль химического фактора в механизме лечебного действия грязей. По мнению многих исследователей терапевтическая ценность пелоидов обусловлена наличием в них органических веществ различной природы, как неспецифических, так и специфических, характерных только для таких систем, как лечебные грязи. Если неспецифические вещества пелоидов (аминокислоты, белки, липиды, витамины, гормоны как продуценты микрофлоры) в какой-то мере изучались, то специфические органические вещества, абсолютно преобладающие в составе общего органического вещества пелоидов, изучены недостаточно или фрагментарно. В то же время многие авторы считают их ведущим фактором в проявлении биологической активности пелоидов (Самутин, Кривобоков, 1997). Высокая и многообразная активность гуминовых веществ обусловлена строением и свойствами, большим набором функциональных групп их макромолекул, способных к образованию разного вида химических связей, внутрикомплексных соединений. Полидисперсность и полифункциональность обеспечивает высокую буферность гуминовых веществ в отношении окислительно-восстановительных, кислотно-основных и комплексообразовагельных процессов.

Благодаря работам Матис (1983), Низкодубовой с соавт. (1983) и другим получены и ограниченно используются пелоидопрепараты на основе липидных фракций органических веществ, в то время как пелоидопрепараты на основе именно специфических органических веществ - единичны (Косьянова, 1985; Аввакумова, 1992).

Изложенное, вслед за большинством ученых, занимающихся разработкой механизмов терапевтического действия лечебных грязей и препаратов на их основе, позволяет нам утверждать, что одним из ведущих направлений развития исследований в настоящее время является изучение физико-химических, биохимических основ действия гуминовых веществ как нативных грязей, так и в преформированном виде - в виде пелоидопрепаратов.

Цель исследования

Обосновать возможность получения биологически активных веществ и получить на их основе пелоидопрепараты гумикового ряда с высокой терапевтической и эколого-экономической эффективностью из иловых сульфидных, низ-

коминерализованных лечебных грязей.

Задачи исследования

1. Дать количественную характеристику состава и структурной организации специфических органических веществ иловых сульфидных грязей на фракци-онно-групповом уровне

2. Опираясь на результаты исследования состава специфических органических веществ на субмолекулярном уровне, количественные характеристики физико-химических свойств как суммарного органического вещества, так и его групп, установить наличие ряда гуминовых веществ.

3. Оценить степень изменчивости состава и свойств гуминовых веществ пе-лоидов в одной и в разных природных зонах в зависимости от биогеохимических условий формирования грязевых месторождений с учетом сезонов года.

4. Определить физико-химические параметры выделенных и очищенных препаратов гуминового ряда на количественном уровне, в том числе как диаг-ностико-идентификационные критерии.

5. Количественно охарактеризовать кислотно - основные и комплексообра-зовательные свойства препаратов гуминового ряда.

6. Да н, лабораторно-клииичсское обоснование возможности и эффективности применения препаратов гуминового ряда.

7. На основе обобщения результатов комплекса использованных методов исследования провести анализ и дать сравнительную оценку биологической активности и терапевтической эффективности препаратов гуминового ряда в зависимости от их структуры и свойств.

8. Разработать способы получения базовых пелоидопрепаратов гуминового ряда.

9. Получить информацию, позволяющую повысить уровень биохимического знания специфического органического вещества иловых сульфидных грязей, составляющих основу грязевого фонда России.

Научная новизна

Впервые на основе знания структурной организации общего органического вещества пелоидои выделен генетический ряд гуминовых препаратов с закономерно изменяющейся структурой, свойствами и биологической активностью.

Впервые для гуминовых препаратов пелоидов получены количественные критерии кислотно-основных и комплексообразовательных хелатирующих свойств.

Впервые выявлено влияние препаратов гуминового ряда на активность ключевых ферментов окислительного метаболизма, ангиоксидантной защиты (супероксиддисмутаза, каталаза, лакгатдешдрогеназа, малатдегидрогеназа) как в модельных опытах in vitro, так и in vivo, а также на некоторые показатели иммунного статуса организма.

Впервые выявлена высокая эффективность физиотерапевтического лечения препаратами гуминового ряда больных с неврологическими заболеваниями и

заболеваниями опорно-двигательного аппарата.

Разработаны способы получения трех базовых препаратов гуминового ряда, эффективных в терапевтическом и эколого-экономическом отношениях (патенты РФ №2028149 от 09.02.95 г.; № 2043107 от 10.09.95 г.; №2122414 от 27. 11. 98 г.)

Научно-практическая значимость

Совокупность новых сведений о составе, строении, физико-химических и биологических свойствах и биохимических механизмах действия гуминовых веществ пелоидов и препаратов гуминового ряда является фактическим руководящим материалом как в оценке лечебных свойств нативных пелоидов и пе-лоидопрепаратов, так и обоснования способов их применения.

Полученные препараты гуминового ряда, как очищенные концентраты основных действующих веществ лечебных грязей, позволяет обеспечить лечение тех больных, которым противопоказана пелоидотерапия как основной лечебный фактор грязевого курорта из-за ее высокой «нагрузочности», например, на сердечно-сосудистую систему, при диабете, астме или спинальным больным с пролежнями.'

Препараты гуминового ряда не являясь альтернативой нативным грязям, а дополняя их, позволяют осуществить ресурсосберегающий подход к использованию лечебных грязей, обеспечивают экономию кондиционных лечебных грязей, способствуют экологической защите курортных зон.

Эколого-экономическая эффективность препаратов велика: по минимальным оценкам можно считать, что из той массы лечебной грязи, которая расходуется на цикл лечения одного больного может быть получено такое количество препарата, которым можно пролечить не менее 10 тысяч больных, причем возможно использование некондиционной грязи.

Апробация и внедрение результатов работы

Результаты исследований представлены на съезде фармацевтов (.Ярославль, 1987), научно-практической конференции, посвященной 50-летию образованию курорта Янган-Тау (Уфа, 1987), областной научно-практической конференции «Научно-технический прогресс и медицина (Куйбышев, 1988), 14-й научно-практической конференции по вопросам курортного лечения (Куйбышев, 1988), республиканской научно-практической конференции «Современные проблемы использования физических факторов в комплексном лечении и реабилитации больных заболеваниями опорно-двигательного аппарата, нервной системы и женских половых органов» (Одесса, 1989), республиканской научно-практической конференции «Пути уменьшения антропогенного воздействия на природные курортные ресурсы» (Одесса, 1990), 1-м Международном конгрессе «Иммунореабилитация и реабилитация в медицине» (Дагомыс, 1994), научно-практической конференции, посвященной 25-летию фармацевтического факультета СамГМУ (Самара, 1996), 1П-м Международном конгрессе «Иммунореабилитация и реабилитация в медицине» (Эйлат, Израиль, 1997), междуиа-

родной научной конференции «Природные (курортные) и преформированные физические факторы в профилактике и лечении болезней человека» (Москва-Иваново-Оболсуново, 1997), научной конференции «Моделирование и прогнозирование заболеваний, процессов и объектов» (Самара, 1998), Международной научно-практической конференции «Экономика природопользования» (Пенза, 1998), Международной научно-практической конференции «Почва, отходы производства и потребления: проблемы охраны и контроля» (Пенза, 1998), IV-м Международном конгрессе «Иммунореабилитация и реабилитация в медицине» (Сочи, 1998), Межрегиональной научно-практической конференции «Роль природных факторов в санаторно-курортном лечении» (Казань, 1998), Международной научно-практической конференции «Экология I! жизнь» (Пенза, 1999), заседании научно-методического совета по проблеме «Курортология» департамента медицинской работы санаторно-курортного объединения ФНПР «Проф-курорт» (Москва, 1999), на совместном заседании Самарского отделения биохимического общества Российской Федерации и кафедр биологической и клинической биохимии; общей и биоорганической химии; фармацевтической химии; органической, физической, коллоидной химии фармацевтического факультета; лаборатории иммунологии научно-исследовательского центра Сам-ГМУ.

Изданы методические рекомендации для врачей физиотерапевтов, гинекологов, невропатологов: «Физиотерапевтические способы применения пелоидо-препаратов из лечебных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды» при заболеваниях опорно-двигательного аппарата» (Самара, 1994), «Физиотерапевтическое применение пелоидопрепаратов из лечебных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды» при гинекологических заболеваниях» (Самара, 1994); для сотрудников геолого-гидрохимических лабораторий - методические рекомендации «Определение группового и фракционного состава специфических органических веществ иловых сульфидных грязей» (Самара, 1994).

Получено патентов на изобретения - 3; подано заявок на патенты и получено приоритетных справок - 3.

Основные положения, выносимые па защиту

1. Состав, строение и свойства специфических органических веществ пс-лоидов являются функцией биогеохимических условий их формирования в грязевых месторождениях. Особенно существенные отличия имеют специфические органические вещества пелоидов разных природных зон. Менее существенно различаются по составу и свойствам специфические органические вещества пелоидов одного региона, которые формируются в условиях геохимически различающихся подстилающих пород, минерализации грязевого раствора и окислительно-восстановительных условий. По этим причинам как в целях на-тивиой пелоидотерапии, так и при получении пелоидопрепаратов гуминового ряда необходимо учитывать групповой состав гуминовых веществ.

2. Фульвокислоты, гиматомелановые, гуминовые кислоты и суммарное органическое вещество являются сложными высокомолекулярными полидис-

персными, поликонденсированными полисопряженными веществами, закономерно отличающимися степенью выраженности перечисленных признаков, мо-лекулярно-массовым распределением, элементным составом макромолекул, степенью окисленности и ароматичности, термодинамической устойчивостью, концентрацией свободных радикалов, кислотно-основными, окислительно-восстановительными и комплексообразовательными (хелатирующими) свойствами. На основании общности путей образования групп специфических органических веществ и отмеченного выше их химического сходства можно считать фульвокислоты, гиматомелановые, гуминовые и суммарное органическое вещество генетическим рядом гуминовых веществ пелоидов.

3. Фульвокислоты, гиматомелановые, гуминовые и суммарное органическое вещество пелоидов обладают разнообразной биологической активностью, принимая участие в биохимических процессах, обуславливающих ферментативный и иммунный статус, что в свою очередь обеспечивает достаточно высокую терапевтическую эффективность этого ряда гуминовых препаратов.

4. Уровень биологической и терапевтической активности препаратов гуми-нового ряда находится в достаточно хорошо выраженной зависимости от их состава, строения, свойств и проявляется при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, неврологических и гинекологических заболеваниях.

5. Преимуществом пелоидопрепаратов гуминового ряда является относительная однородность, отсутствие нежелательных примесей (экологическая чистота), возможность дозированного регулируемого электрофоретического применения, наличие меньшего количества противопоказаний по сравнению с классической пелоидотерапией.

6. Пелоидопрепараты гуминового ряда позволяют реализовать ресурсосберегающие подходы в курортной практике, они обладают высокой эколого-экономической эффективностью и повышают культуру труда врачей - пелоидо-терапевтов.

Объем н структура диссертации

Диссертация состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, указателя литературы. Библиография содержит 353 источника, в том числе 266 на русском и 87 на иностранных языках. Работа изложена на 278 страницах машинописного текста, иллюстрирована 29 таблицами и 74 рисунками.

Объекты и методы исследования

В качестве объекта исследования нами было избрано органическое вещество иловых сульфидных низкомииерализоваиных грязей четырех наиболее крупных озер, находящихся на территории Самарской области ( лесостепная зона Среднего Заволжья) и являющихся базовыми грязевыми месторождениями курорта «Сергиевские минеральные воды» и многих санаториев - профилакториев, действующих в данном регионе. Для сравнения исследовалась широко применяемая и наиболее изученная с точки зрения органических веществ ле-

чебиая грязь озера Большой Тамбукан курорта «Кавказские минеральные воды», природная зона степей Предкавказья (Черепанова, 1971, 1976; Косьянова, ¡985; Мальчуковский, Карпова, !985). Она с давних пор известна своими лечебными свойствами, широко используется на курортах Кавказа, а также вывозится в другие регионы нашей страны. Согласно современной классификации, тамбуканекая иловая лечебная грязь относится к типу высокоминерализованных сильносульфидных.

Все грязевые месторождения курорта «Сергиевские минеральные воды» по условиям водно-солевого питания являются озерно-ключевыми. Качественный и количественный состав минеральных элементов грязевого раствора по данным Центрального научно-исследовательского института курортологии и физиотерапии (198], 1991), гидрохимические и геологические условия были сходственными у трех озер. Одно из озер (оз. Тепловка ) отличалось мелковод-ностью, более высоким окислительно-восстановительным потенциалом, более высокой минерализацией грязевого раствора, а также тем, что грязевая залежь непосредственно подстилалась серыми глинами, а не сапропелями, как у остальных озер. Таким образом, для изучения избраны органические вещества пелоидов разных месторождений различных природных зон, а в пределах одной зоны - с существенными гидрогеохимическими отличиями.

Групповой и фракционный анализ специфических органических веществ иловых сульфидных грязей производили в соответствии с методикой Пономаревой, Плотниковой ( 1989) для почвенного органического вещества, с допустимыми методикой изменениями, учитывающими специфику объекта исследования. Тип специфических органических веществ устанавливали по отношению содержания углерода гуминовых кислот к содержанию углерода фульвокислот С,к: С,|Ж Выделение препаратов гуминовых веществ в кислотной форме из лечебных грязей проводили по методике Орлова (1990), предназначенной для исследования почв, в которую внесены изменения, учитывающие специфику объекта исследования. В выделенных препаратах определяли содержание углерода, водорода, зольность - по методу Коршун-Климовой (1975), азот - микрометодом Кьельдаля (Черонис , Ма, 1973). Содержание кислорода рассчитывали по разности. Степень окисленности (W) гумусовых кислот пелоидов рассчитывали по формуле Орлова (1992).

Полидисперсность гуминовых веществ определяли с помощью гель-хроматографии (Орлов с соавт., 1978, 1982). Исследование проводили с проточной кварцевой кюветой и автоматической записью характера молекулярио-массового распределения в ультрафиолетовой области при А, = 280 им на «Спектроме-203».

Спектры поглощения в видимой области были получены на спектрофотометре СФ-26. При этом подготовка растворов гуминовых веществ проводилась в соответствии с методическими рекомендациями Кононовой (1963) и Орлова (1981, 1992). Для сравнительной характеристики препаратов использовали соотношение поглощения при Х= 465 и Я = 665 (Е*:Еб) как коэффициент цветности.

Инфракрасные спектры гуминовых веществ были получены на спектрофотометре Бресогс! -Ш. Подготовку образцов и съемку проводили методом традиционной КВг-техники. Спектр регистрировали в диапазоне 4200-400 см с использованием дифракционной решетки.

При термографических исследованиях в качестве регистрирующего прибора использовали многоточечный автоматический потенциометр ЭПР-09МЗ с усилением сигнала на микровольтмикроамперметре Ф-116/1. В качестве эталона использована прокаленная окись алюминия. Тигли платиновые, термопара

рт/яи.

Наличие парамагнитных центров в препаратах гуминовых веществ определяли на спектрометре ЕРЯ. Е-104. Определение относительного содержания ПМЦ производили по формуле:

, - к- . 1

1 = К. * —г * ——

п а|1 , где: I - относительная интенсивность сигнала; К -коэффициент усиления; I - высота пика, мм; Ь- высота образца в кювете, см; а-навеска исследуемого вещества, мг.

Лотенциометрическое титрование в целях исследования кислотно-основных свойств и процесса комплексообразования гуминовых, гиматомела-новых, фульвокислот и суммарного препарата с ионами металлов выполняли в режиме кислотно-основного микротитрования, с термостатированием, при постоянной ионной силе 0,1. Величины рН измеряли с помощью тщательно отка-либрованного стеклянного электрода (в паре с сереброхлоридным электродом сравнения) на иономере ЭВ - 74. Масса беззольных гуминовых препаратов от 10 до 20 мг.

В случае исследования комплексообразования моль-эквивалентные соотношения препарат: ион металла в титруемых растворах были 2:1 и 1:1. Эквивалентную концентрацию кислот рассчитывали по расходу щелочи до достижения рН = рН полунейтрализации. Кажущуюся константу диссоциации (ионизации) рассчитывали по уравнению Гендерсона-Хассельбаха.

Для количественного определения константы равновесия комплексообразования принимали гумусовые кислоты за одноосновные, а их металл-производные нерастворимыми. Константу равновесия рассчитывали по формуле: 1дКр = 21д [Н>1д[м£]=2рН + 1д[М<П (Орлов,1992).

Для электрофоретических исследовании описанные препараты концентрировали выпариванием в вакууме при температуре 40°. В результате получены 0,015 М растворы гумусовых кислот. При этом в объеме 0,03 мл, наносимом на одну электрофоретическую полоску, содержалось 0,0005 моля кислот, а в препаратах их металл-производных - 0,0005 моль-эквивалентов ионов кобальта, цинка и меди (при сотношении 1:1).

Электрофорез проводили в шведской горизонтальной электрофоретической камере ЬКВ, выполненной из органического стекла, электроды платиновые, бумага специальная английского производства «Ватман Змм» и «Ватман N4", в буферных растворах с величинами рН 5,55; 7,0 и 8,68 и ионной силой 0,1, пред-

ставляющих собой смеси 1/30 М растворов одно- и двузамещенных фосфатов натрия и калия, с охлаждением.

Электрофореграммы разрезали на три части, соответствующие зоне старта, анодной и катодной частям. В них после озоления определяли содержание ионов металлов спектрофотометрическим методом с нитрозо-Я-солью для Со2+ и с дитизоном - для Си2+ и Zn2'. По количеству Ме2+, передвинувшихся в сторону анода в форме комплексного аниона с органическим веществом, судили о величине комплсксообразоаателыюй способности данного органического вещест ва и рассчитывали К нестойкости.

Активность малатдегудрогеназы и лактатдегидрогеиазы в опытах in vitro определяли по методу ( Romberg , 1955; Spieiniann et al., 1973; Bergmann et al., 1974) со спектрофотометрическим завершением на СФ-26.

Экспрессию Е-рецептора мембранн лимфоцитов характеризовали по Лебедеву, Понякиной (1990). Генерацию активных форм кислорода фагоцитами исследовали по Хаитову, Пикегику (1995). Активность каталазы и супероксиддисмутазы определяли соответственно по Королюк (1988) и Гуревич (1990).

Содержание иммуноглобулинов класса A., G, М, циркулирующие имунные комплексы определяли по описанию (Гембицкий, 1987), а концентрацию фиб-ронектина по Хаитову, Пинегину (1995).

Физиотерапевтическое применение исследуемых пелоидопрепаратов осуществляли на основе методических рекомендаций «Способы применения пре-ператов из лечебной грязи и рапы в физиотерапии», утвержденных МЗ СССР 29 декабря 1988 года.

Результаты экспериментов обрабатывали методами вариационной статистики с использованием коэффициента Сгьюдента (Алесковский и др., 1988) по компьютерной технологии с расчетом коэффициента достоверности различий.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Групповой состав гуминовых веществ иловых сульфидных лечебных грязей

Относительное содержание гуминовых веществ (гумусовые кислоты + гу-мин) в пелоидах исследуемых озер курорта «Сергиевские минеральные воды» практически одинаково по сезонам года и грязевым месторождениям и находится в пределах от 83,78% до 89,07% от общего органического вещества.

Относительное содержание гуминовых веществ в лечебной грязи оз. Б.Тамбукан существенно ниже - 73,13% (р< 0,01). И тамбуканская грязь с содержанием органического вещества 5,90%, и серноводская с содержанием его 9,05%, удовлетворяют классификационному признаку отнесения грязей к иловым (содержание общего органического вещества < 10%).

Однако, в соответствии с данными аиализа, гуминовые вещества как серно-водских, так и тамбуканской грязей в большей части представлены относительно более «подвижными» гумусовыми кислотами (суммой гуминовых, гимато-

мелановых и фульвокислот), чем менее подвижными веществами гумина. Гу-мина было существенно больше в специфическом органическом веществе там-буканской грязи - 28,3% и несколько ниже в грязи оз. Тепловка, которое отличается от других озер мелководностыо, значительно большим окислительно-восстановительным потенциалом, непосредственным подстиланием глинистых пород, а также наибольшей минерализацией грязевого раствора. Оз. Солодовка по гидрогеологическим критериям приближается к оз. Тепловка, и содержание гумина в его грязевых отложениях тоже достаточно высокое, в отличие от озер Молочка и Серное. Таким образом, результаты анализа состава специфических органических веществ четко отразили различия условий его формирования в различных озерак, как одной природной географической зоны (Среднее Поволжье), так и разных зон (оз. Б. Тамбукан, зона южных степей Предкавказья). Специфические органические вещества пелоидов серноводских грязей в целом являются более «подвижными», их извлекаемоегь щелочными растворами значительно выше. Распределение специфических органических веществ по группам показано в табл. 1.

Таблица 1

Характеристика группового состава специфических органических веществ иловых сульфидных грязей по сезонам года и месторождениям

Месторождение грязи Сезон года (месяц) Содержание углерода Гумилевых О-В 1! % от возд.-сухой навески (п=6) СоогВ %% от углерода гуминовых веществ

Содержание упереда фульвокислот (п=б) Содержание углерода шмогомеяа-новьк к-т (п=6) Содержание углеро-дагумипо- БЫХК-Т (п=6) Содержание углерода гумина (п=б)

весна(ге) 3,54+0.05 14,50+1,29 12,92+0,33 53,9112,47 18,67+0,78

Оз.Молочка лето(УП) 4,2210,04 19,7710,24 12,6310,31 52,9011,15 14,6910.75

ссень(Х1) 4,50+0,07 18,82+0,66 12,0210,33 50,2310,81 18,93+0,66

весна(1У) 3,75+0,15 27,2015,07 11,7110,39 32,73+2,99 28,3710,63

Оз.Тепловка лето (VII) 4,13±0,13 25,38+0,68 12,2511,08 34,2511,88 28,1111,27

осень(Х1) 4,03±0,06 28,75±5,86 11,00+0,50 29,25+0,86 ^ 31,00+0,96

весна(1У) 3,9210,102 22,00+1,44 15,3610,58 52,35+0,26 20,29+0,75

Оз.Солодовка лето(У11) 4,96±0,04 22,5110,58 14,65+0,41 51,25+1,08 21,6011,19

осень(Х1) 4,37+0,105 20,3310,82 10,43±0,39 46,5210,57 22,7211,23

весна(1У) 4,26±0,08 17,3410,26 14,45+0,82 51,5111,21 16,69+1,18

Оз. Серное лето(УИ) 4,52+0,04 19,4611,37 13,9410,24 52,6110,42 13,9910,61

осень(Х1) 4,70+0,05 22,3511,64 13,7010,34 47,5710,36 16,3811,49

Оз.Б.Тамбу-кап лето(УН) 2,47±0,08 28,00+0,93 5,1410,2» 21,10+1,40 38,8611,59

Преобладающей, ведущей по количественному содержанию в специфиче-

ских органических веществах пелоидов серноводских озер безоговорочно является группа гуминовых кислот. Их содержание для всех озер, кроме оз. Теплов-ка, находится в достаточно узких пределах от 46,5% до 53,9%. Пелоиды оз. Те-пловка и здесь особенны: гуминовых кислот существенно меньше - от 29,3% до 34,3% (р<0,05). Тамбуканская грязь гуминовых кислот содержит еще меньше -27,1%. По сезонам года проявляется достаточно четкая тенденция к уменьшению содержания их к осени.

Результаты группового анализа специфических органических веществ позволяют определить тип гуминовых веществ, степень их подвижности и степень биогеотрансформации. По соотношению углерода гуминовых кислот к углероду фульвокислот выделяют типы: фульватный, гумато-фульватиый, фуль-вато-гуматный и гуматиый. Характеристика исследуемых объектов по данному показателю приведена на рис. 1.

Пелоиды серноводских источников представлены гуматными специфическими органическими веществами, характеризующимися высоким содержанием гуминовых кислот, где Сщ/С,^ > 2,0, в то время как пелоиды оз.Б.Тамбукан входят в группу гумато-фульватных гумусовых кислот, для которых соотношение С|К/СфК < 1,0. Органические вещества пелоидов оз. Тепловка характеризуются свойствами, несколько отличными от пелоидов остальных серноводских месторождений и более других приближаются к тамбуканским.

Данные, характеризующие тип исследуемых объектов по степени подвижности, приведены на рис. 2. Органические компоненты пелоидов озер Серное, Молочка и Солодовка характеризуются высокой подвижностью (углерод гуми-на < 20%); озер Тепловка и Б.Тамбукан - меньшей (углерод гумина > 20%).

Объективным показателем, характеризующим состояние специфических органических веществ, является степень биогеотрансформации (гуминизации), которая представляет собой отношение содержания углерода гуминовых кислот к общему содержанию углерода, выраженное в процентах.

По степени биогеотрансформации специфических органических веществ пелоиды серноводских месторождений и оз. Б.Тамбукан находятся в различных группах. Если органические вещества пелоидов озер Молочка, Солодовка и Серное характеризуются как очень высоко гуминизированные, то органические вещества пелоидов оз. Б.Тамбукан - средне гуминизированные; пелоиды оз. Тепловка занимают промежуточное положение между ними.

На основании полученных экспериментальных данных, можно сделать вывод, что, как общее содержание органических веществ в пелоидах, так и распределение их по группам зависят от термодинамических условий формирования грязевых месторождений различных природных зон, минерализации грязевого раствора, возможности непосредственного контакта с подстилающими глинистыми породами, в целом - гидрохимических условий одной природной зоны. Различный состав органических компонентов пелоидов обуславливает различный уровень биологической активности как самих пелоидов, так и пе-лоидопрепаратов на их основе.

1.5

0.5

¡3 Весна

ШЛето

□ Осень

оз.Тамбукэн

оз.Молочка оз.Тепновка оз.Солодовка оэ.Серное

Рис. I. Тип гумиповых веществ и зависимости от месторождении грязи и сезона года

С гумина/ С общее "100%

шРЯ

щр?

Щи

Щлл

Цр

Шр

Щй; шш

оз.Теп/ювка

К! Весна ШЛето □ Осень

оз.Молочка оз.Тешювка оз,Солодовка оэ.Серное оз.Тамбукан

Рис.2. Характеристика подвижности специфических органических веществ пелондов в зависимости от месторождения и сезона года

Сезонные колебания содержания гуминовых веществ базовых грязевых озер курорта «Сергиевские минеральные воды» не сопровождаются значительными изменениями группового состава. Относительно большим постоянством в содержании отличаются подвижные группы, представленные гиматомелано-выми и в меньшей степени фульвокислотами, что позволяет ожидать практически одинаковую биологическую активность пелоидов, обусловленную наличием специфических органических веществ одинакового типа, независимо от времени забора грязи.

Фракционный состав и показатели биогеотрансформации гуминовых веществ пелоидов

Фракционный состав специфических органических веществ, являясь функцией биохимических процессов пелоидообразования, позволяет сделать предварительный прогноз на проявление биологической активности,

Результаты фракционного анализа показали, что характер распределения гумусовых кислот между фракциями 2 и 3 примерно одинаковый у пелоидов всех месторождений.

Содержание гумусовых кислот фракции-2 относится к таковым фракции-3 в среднем как 2,3/1,0, что характеризует исследуемые органические вещества, с одной стороны, как весьма подвижные, а с другой - наиболее перспективные с точки зрения получения пелоидопрепаратов, так как они количественно преобладают.

Обращает на себя внимание увеличение подвижности, то есть увеличение доли фракции-2 органических веществ в летний период (до 2,90), что, по всей вероятности, связано с повышенным содержанием в этот сезон продуктов био-ты, способствующих подвижности специфического органического вещества. Это делает его более доступным для участия в процессах жизнедеятельности микроорганизмов в качестве энергетического материала. С точки зрения получения пелоидопрепаратов, обогащенных гуминовыми кислотами, предпочтительнее летние образцы грязи.

На основании фракционно-группового анализа можно сделать вывод, что гуминовые вещества разных природных зон различны по типу. Тамбуканские пелоиды имеют гумато-фульватный, а серноводские — фульвато-гуматный типы специфического органического вещества. Кроме того, как степень биогеотрансформации, так и подвижность гуминовых веществ сравниваемых пелоидов различны, что, естественно, необходимо учитывать при получении пелоидопрепаратов на их основе. Более того, даже для пелоидов одного региона возможны весьма существенные различия во фракционно-групповом составе гуминовых веществ, если имеют место гидрогеохимические различия формирования пелоидов. Пелоидопрепараты гуминового ряда, полученные на основе этих пелоидов, будут обладать различной биологической активностью.

Состав, строение и свойства специфических органических веществ пелондов

С целью разностороннего исследования специфических органических веществ пелоидов курорта «Сергиевские минеральные воды», как потенциальных источников биологически активных веществ, нами выделено 36 препаратов гу-миновых, гиматомелановых, фульвокислот и суммарного органического вещества. Для получения препаратов использовались пелоиды оз. Молочка, оз. Со-лодовка, оз. Серное. Озеро Молочка обладает максимальными грязевыми запасами и наиболее широко используется в курортологической практике Поволжского региона. Грязи озер Солодовка и Серное выбраны для исследования в связи с тем, что их запасы по разным причинам не могу т использоваться в на-тивном состоянии, именно с этой точки зрения они являются перспективными для получения пелоидопрспаратов.

Инфракрасные спектры гуминааых веществ. Анализ полученных И К-спектров пелоидопрепаратов, представленных па рис.3, позволяет с достаточной определенностью выявить как общие свойства представителей групп гумн-новых веществ, так и их отличительные стороны.

Рис.3.ИК-спектры препаратов гуминовогоряда (ГК - 1умиповыс кислоты, ГМК - гиматомелановые кислоты, ФК — фульвокислогы, СП - суммарный препарат, ГК-Мегск-гумиповая кислота фирмы "Мсгск"

Для гумиповых, гиматомелановых, фульвокислот и суммарного препарата общим является однотипность спектра в области 3600 - 600 см"1. В первом коротковолновом интервале широкая полоса поглощения 3800 - 3300 см"1 обусловлена колебаниями ОН - групп как свободных, так и различного характера, в той или иной мере связанных водородными связями, образование которых по-

нижает частоту колебаний, поэтому соответствующие волновые числа уменьшаются от 3600 см"', характерных для несвязанных гидроксогрупп, до 3400 -3300 см"1 и менее. Поглощения при 3000 - 2000 см"1 обусловлено полисопряженными ароматическими структурами с числом замещения атомов водорода более трех, ^С-Н валентными связями.

Стандартные полосы 2920 см"1 и 2860 см"1 характерны для валентных колебаний групп = СН2 и -СН3. Для метальной группы средние значения максимумов поглощения равны 2962 и 2872 см"', а метиленовой - 2926 и 2853 ±10 см'1. Максимумы поглощения в полученных нами спектрах приходится на 2880 и 2860 см'1, поэтому более вероятно, что наблюдаемые для гумусовых кислот полосы связаны не с концевыми метальными, а метиленовыми группами, о чем свидетельствует хорошее совпадение волновых чисел со стандартными значениями.

И во втором коротковолновом интервале от 1700 до 1400 см"1 наиболее интенсивной является полоса 1740 - 1700 см"', относящаяся колебаниям карбонильных групп в недиссоциированных карбоксилах с максимумом при 1730 см"'. В исследуемых препаратах наиболее четко выражена эта полоса у гумино-вых кислот. У фульвокислот данная полоса наименьшей интенсивности и она смещена к 1725 см"', что свидетельствует о метилировании данного препарата. Эта полоса может быть обусловлена и карбонилами альдегидов, и карбоксильных групп кетонов.

Полоса поглощения 1520-1550 см"', характеризующая ароматическую структуру (сопряженные кольца), более ярко выражена у гуминовых и гимато-мелановых кислот, что согласуется с представлениями о них, как наиболее конденсированных с хорошо выраженным ароматическим «ядром». В полученных нами спектрах наблюдается смещение полосы в коротковолновую область, что свидетельствует о наличие многоядерных структур. У суммарного препарата и, особенно, у фульвокислот, эта полоса выражена слабее, что также согласуется с литературными данными и результатами элементного анализа.

На основе ИК - спектров полученных препаратов можно сделать вывод об общности строения гуминовых веществ. В них присутствуют исс полосы поглощения, характерные для этого класса соединений. Несмотря на сходный характер ИТС - спектров препаратов, четко просматриваются и различия. Фульво-кислоты имеют более выраженную полосу в области поглощения спиртовых гидроксилов и простых эфиров. Группы гиматомелановых и гуминовых кислот характеризуются большей насыщенностью метальных групп. Интенсивность совокупных полос поглощения, характеризующих ароматическую структуру гумусовых кислот возрастает в ряду: фульвокислоты, суммарный препарат, ги-матомелановые кислоты, гумииовые кислоты.

Электронные спектры поглощения растворов гуминовых веществ. Отличительной чертой растворов гумусовых кислот является высокая интенсивность поглощения света. Это позволяет применить спектрофотометричсский анализ в качестве чувствительного индикаторного и диагностического метода

при изучении природы гумусовых кислот. Поглощение света гуминовыми веществами в видимой области спектра монотонно убывает по мере увеличения длины волны, что лишает спектры специфичности. Однотипность спектров указывает на схожесть химического строения исследуемых соединений. Однако, спектры отличаются крутизной линий, что находит отражение в различном значении отношения Е4:Еб. Как известно, коэффициент цветности, соотношение оптических плотностей Е4:Е6 не зависит от концентрации гуминовых веществ и определяется структурой. Данные коэффициенты были определены нами для всех фракций гумусовых веществ пелоидов. Они указывают на различную степень ароматичности не только отдельных групп гумусовых кислот, но и вполне характерны для каждой фракции. Коэффициент цветности закономерно убывает у растворов всех препаратов от фульвокислот фракции-2 к гуминовым кислотам этой фракции, несмотря на имеющиеся отличия этих значений по месторождениям грязей. Эти колебания достаточно велики у фульвокислот фракции-2, где коэффициент цветности Е4:Еб имеет значения от 5,4 в оз. Серное до 8,1 в оз. Солодовка. В группе гиматомелановых кислот данные величины изменяются от 3,67 в оз. Серное до 5,47 в оз. Молочка. Гуминовые кислоты и суммарный препарат второй фракции характеризуются стабильным значением коэффициента цветности (3,2 и 3,5 соответственно).

Для сравнительной характеристики препаратов гумусовых кислот различных пелоидов были определены коэффициенты экстинкции их щелочных 0,001% растворов. Данные табл. 2 показывают, что изменение значений оптической плотности 0,001%-ных растворов при длине волны 465 нм в зависимости от источника получения имеет свои закономерности. Наибольшие колебания данного показателя наблюдаются у фульвокислот, составляя 0,006-0,01, что свидетельствует об изменении оптической плотности этих препаратов в разных грязевых месторождениях почти в 2 раза.

Растворы гуминовых веществ явно различаются между собой по величине оптической плотности при 465 нм, имея свои характеристичные значения. Наибольшей оптической плотностью обладают щелочные растворы гуминовых кислот, являясь почти в 14 раз оптически более плотными по сравнению с фуль-вокислотами. Группа гиматомелановых кислот занимает промежуточное положение. Их окраска в 7,5 раза интенсивнее по сравнению с фульвокислотами, по почти в 2 раза оптически менее плотная по сравнению с гуминовыми кислотами.

Большей ароматичностью обладает группа гиматомелановых кислот. Для них соотношение П4:Е6 колеблется от 3,40 в оз. Серное до 3,58 в оз. Солодовка. Минимальное значение из представленных групп специфических органических веществ данное соотношение принимает у гуминовых кислот, где оно имеет небольшие колебания и в среднем составляет 2,42. Коэффициент цветности Е4:Е6 для общего экстракта принимает значение несколько более низкое, чем у гуминовых кислот, но в целом определяется содержанием именно этой группы гумусовых кислот.

Таблица 2

Средние значения коэффициентов экстинкции щелочных растворов гуминовых веществ (п = 6)

Источник Препарат о.Ло ¡% Е Х=465,1 0,001% Е Х.=665,1 Е4:Еб

Оз.Молочка Фульвокислоты 0,006±0,001 0 -

Гиматомелановые 0,052+0,004 0,015+0,006 3,46

Гуминовые кислоты:

весна 0,113+0,008 0,048+0,002 2,35

лето 0,114+0,008 0,048±0,002 2,35

осень 0,11810,008 0,048±0,001 2,46

Суммарный препарат 0,055+0,004 0,023+0,001 2,39

Оз.Солодовка Фульвокислоты 0,088+0,004 0 -

Гиматомелановые 0,061±0,003 0,017+0,004 3,58

Гуминовые кислоты 0,108±0,008 0,044+0,006 2,45

Оз. Серное Фульвокислоты 0,010+0,008 0 .

Гиматомелановые 0,06810,004 0,020+0,002 3,40

Гуминовые кислоты 0,118±0,008 0,048+0,003 2,46

Суммарный препарат 0,080±0,004 0,031+0,002 2,58

Изложенные выше результаты подтверждают принадлежность фульвокис-лот, гиматомелановых и гуминовых кислот серноводских источников к классу гуминовых веществ, так как значения коэффициентов экстинкции, являющиеся характеристичным генетическим признаком, укладываются в интервалы, характерные для данного класса соединений.

Оптические методы исследования подтверждают установленную в предыдущих экспериментах закономерность усложнения структуры, роста ароматичности, полисопряженности в ряду: фульвокислоты, гиматомелановые кислоты, гуминовые кислоты.

Элементный состав и сравнительные критерии структуры в ряду гуминовых веществ

Анализ количественных соотношений элементов показывает, что наиболее подвержены сезонным колебаниям фульвокислоты. Слабее изменения в элементном составе по сезонам выражены у гиматомелановых кислот. Гуминовые кислоты обладают практически постоянным элементным составом независимо от времени года (табл.3), колебания здесь не превышают 6%. Это подтверждает положение, что гуминовые кислоты являются наиболее термодинамически и химически устойчивыми среди групп гумусовых кислот биосферных специфических органических веществ, в том числе и пелоидов.

Таблица 3

Средний элементный состав гуминовых кислот пелоидов оз. Молочка

Определяемый Показатель Весна, п=6 Лето, п=6 Осень, п=6

Масс.% Мольн.% Масс.% Мольн.% Масс.% Мольн.%

Углерод 54,2511,40 37,7011,10 54,471135 41,23±0,95 55,87±1,48 39,2610,83

Водород 4,88±0,06 40,70±1,60 3,83±0,03 34,79±0,75 4,71±0,05 39,6811,10

Азот 4,1210,05 2,42±0,03 3,33±0,04 2,18+0,03 4,0310,07 2,44+0,05

Кислород 36,7511,2 19,1810,07 38,3811,10 21,80+1,0 35,39+1,10 18,6210,45

Н/С 1,08 0,84 1,01

О/С 0,51 0,53 0,47

Степень окисленности -0,06 -ЮД1 -0,06

Формула СтН^О» С19Н16ЫО,0 с16н,6мо8

Фульвокислоты и гиматомелановые кислоты более активно участвуют в процессах жизнедеятельности микроорганизмов, являясь для них более доступным энергетическим материалом. Их состав зависит от активности микрофлоры, которая подвержена сезонным колебаниям.

В связи с изменением элементного состава наблюдаются сезонные колебания и значений степени окисленпости препаратов. У фульвокислот степень окисленности уменьшается от весеннего периода (+0,67) к летнему (+0,20), а осенью принимает даже отрицательное значение (-0,14). Степень окисленности гиматомелановых кислот во все времена года отличается высоким отрицательным значением, что характеризует их как группу с явным преобладанием восстановительных свойств, которые достигают максимального значения в летнее время (-0,53). Для гуминовых кислот степень окисленности в весеннее и осеннее время практически равна нулю, что свидетельствует об одинаковой выраженности электронодонорных и электроно-акцепторных свойств этой группы гуминовых веществ. В летний период туминовые кислоты приобретают более выраженные окислительные свойства и степень окисленности принимает положительное значение. Следует отметить, что обсуждаемые сезонные колебания элементного состава гумусовых кислот невелики и не выходят ча рамки значений, характерных для каждой группы специфических органических веществ пелоидов.

Это позволяет с достаточной достоверностью предположить, что сезонные колебания не могут повлиять на химические и биологические свойства гуминовых веществ. Сказанное позволило нам не проводить сезонных наблюдений физико-химических свойств специфических органических веществ и ограничиться исследованиями летних образцов.

Из результатов элементного анализа следует, что при наличии определенных колебаний в количественном содержании основных элементов гуминовых веществ пелоидов разных месторождений четко прослеживается их определенная групповая принадлежность.

Анализируя элементный состав гуминовых веществ в мольных процентах,

мы наблюдаем значительное изменение доли участия элементов в построении вещества по сравнению с выражением через массовые проценты. Обращает на себя внимание относительное изменение содержания водорода с 4 массовых процентов у гуминовых кислот до 39 мольных %, с 6-8 масс.% у фульвокислот до 55-57 мольных процентов. У гиматомелановых кислот содержание водорода увеличивается с 7-8% до 48—-52%.

Тот факт, что даже в препаратах, где мольные отношения водород/углерод не превышают единицы, отчетливо выявляется высокий вклад водорода, указывает на значительную развитость боковых цепей, несущих группы г=СН, =СН2, -СН3.

При переходе к мольным процентам выявляется роль углерода. Наиболее «обуглероженные» по результатам массовых выражений гиматомелановые кислоты (59-62%) теперь уступают гуминовым кислотам, где содержание углерода становится более значительным (38-41 мольн.%) по сравнению с гиматоме-лановыми кислотами, где его предельное содержание не превышает 37 мольных процентов. Из сказанного следует, что по степени «обуглероженности» полученные препараты располагаются в следующем порядке: фульвокислоты, гиматомелановые кислоты, гуминовые кислоты.

В тамбуканской грязи соотношение водород/углерод гуминовых кислот составляет 1,42, что свидетельствует об обогащении молекул алифатическими цепями. Соотношение водород/углерод фульвокислот равно 1,75, что значительно ниже, чем в серноводских озерах. Данные обстоятельства указывают на наличие благоприятных условий для сохранения фульвокислот.

Сказанное выше позволяет сделать предположение о более активных биологических процессах трансформации органических веществ, протекающих в серноводских месторождениях по сравнению с тамбуканскими, что, на наш взгляд, в первую очередь обусловлено различной соленасыщенностью и значениями окислительно-восстановительного потенциала грязевых растворов сравниваемых месторождений.

Степень окисленности является важной характеристикой гумусовых кислот, отражающей внутримолекулярное соотношение окислительных и восстановительных структур.

По результатам анализа специфических органических веществ всех месторождений выделяется ярко выраженный окисленный характер фульвокислот, достигающий в грязи оз. Солодовка и оз. Серное значений +0,53 и +0,69 соответственно. Группа гиматомелановых кислот характеризуется явным преобладанием восстановительных свойств, так как степень окисленности имеет значения от -0,53 до -0,81. Для гуминовых кислот характерно значение степени окисленности близкое к нулю, что свидетельствует о высокой буферности и химической стабильности данной группы гуминовых веществ. Отрицательное значение степени окисленности гуминовых кислот тамбуканской грязи мы относим за счет того, что методика выделения этого препарата, полученного З.Ф. Косьяновой (1985), результаты исследований которой мы использовали для сравнения, не предусматривает выделения гиматомелановых кислот, что при-

водит к смещению степени окисленности в восстановленную область.

Степень бензоидности гумусовых кислот (а), которая является объективным групповым диагностическим признаком, мы рассчитывали по результатам элементного анализа. Изменение этого показателя по сезонам изучали на образцах гуминовых кислот педоидов оз. Молочка, при этом получили следующие результаты: а(весна) = 32,26%, а (лето) = 32,62%, а(осень)=33,49%. Незначительные колебания этого показателя позволили нам отказаться от сезонных исследований и ограничиться анализом летних образцов всех источников.

Количественная характеристика степени бензоидности гуминовых веществ позволяет выделить три отличающиеся группы, внутри которых колебания этого показателя весьма незначительны. Группа фульвокислот представлена менее конденсированными структурами, в которых степень бензоидности не превышает 7%. В гиматомелановых кислотах бензоидные структуры составляют от 17 до 21%. Наиболее развиты ароматические структуры в молекулах гуминовых кислот и составляют 32,62% - 39,61%. Этот показатель в серноводских источниках в 2,3 раза выше по сравнению с гуминовыми кислотами пелоидов оз. Б.Гамбукан, для которых бензоидные структуры выражаются лишь 14%. Приведенные данные свидетельствуют о более выраженном ароматическом характере серноводских гуминовых кислот и согласуются с изложенной выше структурной характеристикой данного класса соединений.

Таким образом, диагностические и генетические характеристики гумусовых кислот на основе элементного анализа выявляют их четкие групповые признаки, такие как содержание основных элементов, соотношение водород/углерод и кислород/углерод, степень окисленности, соотношение ароматических и алифатических фрагментов, простейшие формулы. Исследования показали, что они не имеют значительных колебаний по сезонам года.

Полученные в экспериментах и расчетах данные доказывают групповую общность фульвокислот, гиматомелановых, гуминовых кислот, суммарного препарата как представителей ряда гуминовых веществ, полученных из лечебных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды». Установлены выраженные отличия этих групп гуминовых веществ, выделенных из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды» и высокоминерализованных илов озера Б.Тамбукан.

Парамагнетизм в ряду гуминовых веществ

Из ЭПР-спектров следует, что для всех препаратов гуминовых веществ характерно наличие парамагнитных центров со значением §-фактора, равным 2,00. Как известно, данная величина 5~фактора определяется наличием в молекулах данного типа свободных радикалов, обусловленных сильно делокализо-ванным электронным облаком. Гуминовые вещества, являясь соединениями, содержащими полифункциональные группы, как электронодоиориые, так и электроноакцепторные, безусловно способны к образованию комплексов с переносом заряда, что и приводит к появлению двух неспаренных электронов.

В своих исследованиях мы не ставили целью определить истинную концен-

грацию парамагнитных центров в препаратах, так как отсутствие падежного стандарта для объектов подобного типа приводит к значительным ошибкам, достигающим 20% (Бабанин с соавт., 1977). Из сравнений величины g-фaктopa свободного электрона следует, что минимальное число свободных радикалов содержат молекулы фульвокислот, в то время как концентрация их в гиматоме-лановых кислотах превышает в 15 раз и достигает максимального значения в гуминовых кислотах, где их концентрация по сравнению с фульвокислотами возрастает в 26 раз. Концентрация свободных радикалов в суммарном препарате принимает промежуточное значение и определяется, в основном, содержанием гуминовых кислот. Наличие «узких» сигналов ЭПР свидетельствует, что гу-миновые вещества являются полимерами с хорошо развитой системой сопряженных двойных связей. Проведенные эксперименты подтвердили прямую зависимость интенсивности сигнала свободного электрона от величины системы сопряжения. Возрастание величины сигнала в ряду: фульвокислоты, гиматоме-лановые кислоты, суммарный препарат, гуминовые кислоты доказывает влияние увеличения системы с сопряженными связями на данный показатель.

Кроме одиночных сигналов на спектрах гиматомелановых, гуминовых кислот и суммарного препарата обнаружена тонкая структура. При выбранных условиях получения ЭПР-спектров в препаратах фульвокислот тонкой структуры обнаружить не удалось. Характер полученных тонких структур позволяет предположительно объяснить их возникиовение за счет семихинонных ион-радикалов. Они имеют несколько отличную структуру от спектра бензосемихи-нона, что, на наш взгляд, связано с наличием полисопряженных фрагментов, приводящих к образованию комплексов с переносом заряда.

Основываясь на утверждении многих авторов о связи биологической активности гуминовых веществ с концентрацией свободных радикалов в их молекулах, можно ожидать увеличения биологической активности в ряду: фульвокислоты, гиматомелановые кислоты, суммарный препарат и гуминовые кислоты. Это предположение, безусловно, требует подтверждения биологическими экспериментами.

Кислотно-основные свойства в ряду гуминовых веществ

Кислотно-основные свойства гумиповой, гиматомелановой, фульвокислот и суммарного препарата специфических органических веществ пелоидов, как и других биосферных тел, обусловлены в первую очередь кислородосодержащи-ми функциональными группами - карбоксильными -СООН, титрующимися преимущественно в интервале рН от 3 до 8 (кроме самых слабых карбоксильных), фенольными, а также некоторыми спиртовыми (рН 8-12). По характеру как обыкновенных, так и дифференциальных кривых потенциометрического титрования можно утверждать, что суммарный препарат, гуминовые, гиматомелановые и фульвокислоты являются мпогоосповными, полифункциональными кислотами. Четко выраженные перегибы и пики имеют кривые титрования фульвокислот и суммарного препарата. Их можно отнести к двух- и трехосновным кислотам соответственно. Расчеты позволяют установить, что у фульво-

кислот силовые показатели р1<1=6,0; р1С2=8,0, что соответствует сильным и слабым карбоксильным и наиболее сильным фенольным кислотным группам. Силовые показатели у суммарного препарата соответственно равны рК|=7,0; рК2=7,8; рК3=8,8, т.е. кислотность почти па порядок меньше, чем у фульвокпе-лот.

Количественное содержание сильных карбоксильных и слабых карбоксильных с сильными фенол ьными группами, как показывают расчеты, равно для фульвокислот соответственно 7,0 и 4,0 мМоль-экв/г; а для суммарного препарата 3,0; 2,0 и 2,0 мМоль-экв/г. Понятно снижение более, чем в 2 раза сильных карбоксильных групп, «закрывающихся» при образовании макромолекулы суммарного органического вещества. Кривые титрования гуминовых и гимато-мелановых кислот, представленные па рис.4, сходны между собой.

Рис.4. Кривые потенциометрического титрования препаратов гуминового ряда

Они отличаются от таковых у фульвокислот и суммарного препарата большей пологостью (буферностыо), отсутствием выраженных перегибов на обыкновенных и пиков на дифференциальных кривых. Отличия кривых гуминовых кислот и гиматомелановых кислот, выявляются лишь после величины рН=6,5 в кислотную сторону у последних. Тем не менее можно выделить одинаковые для гуминовых кислот и гиматомелановых кислот кислотные функциональные группы с рК|=4,0; рК2=5,4; рК3=7,25; а также различающиеся с рК4=8,5 для гиматомелановых кислот, и с рК4=8,8 и рК5=9,3 для гуминовых кислот.

Комнлсксообразователькан способность препаратов в ряду гуминовых веществ

Исследование взаимодействии гуминовых веществ с иошши метилпоа-биогепов методом дифференциально-термического анализа. Метод дифференциально-термического анализа ( ДТА) позволяет получить достоверную ин-

формацию не только о структурных особенностях гуминовых веществ, например, о соотношении центральной ароматической полисопряженной и периферической частей специфических органических веществ пелоидопрепаратов, но и о факте взаимодействия их с ионами мсталлои с образованием устойчивых фаз.

Кривые ДТА подтверждают принадлежность изучаемых препаратов к классу гумусовых кислот по их характерному трехчленному строению. Термограммы всех гуминовых веществ имеют 3 термоэффекта: эндотермический и два экзотермических. Эндотермический эффект, связанный с обезвоживанием препаратов и деструкцией наименее устойчивых алифатических цепей представленных углеводными компонентами, лежит в пределах невысоких температур. У всех исследуемых препаратов он начинается при температуре около 90°С и достигает максимального значения у фульвокислот и гиматомелановых кислот при 150°С, а гуминовых - при 160°С.

Температура, соответствующая первому термоэффекту, может быть принята критической, превышение которой в технологических процессах повлечет за собой необратимые изменения препаратов.

Первый экзоэффект, обусловленный дальнейшим разрушением алифатических цепей и их окислением, находится в интервале температур от 200°С для фульвокислот и достигает 350°С для гуминовых кислот и гиматомелановых кислот. Этот факт свидетельствует о меньшей термодинамической устойчивости фульвокислот, алифатические фрагменты в макромолекулах которых наиболее выражены. Экзоэффект у суммарного препарата находится в более высокой температурной области, равной 390°С. Второй экзоэффект, обусловленный разрушением ароматических структур и отщеплением отдельных циклов, находится у всех препаратов в области 550-560°С. Этот эффект у суммарного препарата несколько сдвинут в низкотемпературную область и наблюдается при температуре 530-540°С.

Из результатов термического анализа следует вывод о наличии как общих черт, так и особенностей в построении макромолекул групп специфических органических соединений. Все они представлены алифатическими и ароматическими структурами разной степени выраженности и относятся к термодинамически устойчивым системам. Характер термограмм свидетельствует о существовании межмолекулярных связей между отдельными группами гумусовых кислот, что повышает их термодинамическую устойчивость при совместном присутствии.

Термограммы металлических производных гуминого ряда самым существенным образом отличаются от исходных препаратов, свидетельствуя об образовании новых фаз. Так, например, на термограмме сереброгуматного производного сохранился низкотемпературный эндоэффект при 160°С, но появился хорошо выраженный низкотемпературный экзоэффект при 220°С; от экзоэф-фекта при 324°С остались только следы, как и от эндоэффекта при 396°С; зато сформировалась термодинамически устойчивая фаза с экзоэффектом при

520°С.

Г1а основании изложенного можно сделать вывод о том, что попы с1-металлов взаимодействуют с представителями ряда гумипоиых всщесги. Образующиеся новые фазы отличаются термической устойчивостью и соответствии с особенностями структуры как гуминовых веществ, так н попов металлов.

Исследование комплексообршоаннчл в ряду гуминовых веществ методом инфракрасной спектроскопии. Метод ДТА позволяет установить сам факт взаимодействия Ионов с1-мсгаллов - С нога юн с гумиповыми веществами с образованием фаз с той иной термодинамической устойчивостью, различной для разных металлов. Для установления тех функциональных групп, которые вовлекаются в процесс взаимодействия гуминовых веществ с попами Си2', Zn2', Со2+, Ген, нами получены ИК-спектры нх металл-производных, (рис.5).

(2) - ГК- Си, (3)-Г1С- 2п

Наиболее часто для доказательства взаимодействия ионов металлов с карбоксильной группой почвенных гуминовых веществ используют факт понижения плотности или полного отсутствия полосы при 1700-1720 см"1 и появления вместо нее полос при 1590 и 1390 см"1 в МК-спсктрах металлгумшювых производных. В ИК-спектрах мсталлопроизводпых гуминовых н гиматомелаповых кислот пелоидов, полученных нами, данный факт отчетливо имеет место для всех изучавшихся ионов с1-металлов и всех групп специфических органических веществ. Кроме того, на основании сравнительного анализа изменений структуры спектров препаратов специфических органических веществ и их мсталлопроизводпых можно сделать вывод, что во взаимодействие вовлекаются и дру-

гие функциональные группы и структуры макромолекул специфических орга-шгческих веществ.

Последнее обстоятельство позволяет предполагать, что продуктами взаимодействия являются комплексно-гетерополярные соли, содержащие металлы и в виде подвижного простого гидратированного катиона, и в виде сложного металлсодержащего комплексного аниона различной прочности, образующиеся, » частности, по схеме:

^(СООН)п г /ССЮ (СООН)п-

(ОН)т 1 ОН^ (ОН)т-у

Данная схема строения предполагаемых продуктов не противоречит данным ИК-спектроскопии, но уточнить их можно только на основе количественных исследований.

Исследование комплекспобрактаннн <! ряду Тумановых веществ методом потеицнометрического титрования. Метод потенциометрического кислотно-основного титрования водных растворов гуминовых препаратов одних и в присутствии ионов (1-металлов позволяет получить количественную информацию о процессе комплексообразования на основании измерения так называемого «рН -эффекта». Он заключается в том, что как минимум один ион ЬГ (НзО+) карбоксильной группы гуминовых препаратов замещается ионом металла в процессе комплексообразования, возможные схемы которого приведены ранее. Кроме того, с помощью титрования растворов гуминовых препаратов в присутствии ионов металлов в определенном количественном соотношении удается оценить количественно способность защищать ионы ё-металлов от осаждения в виде гидроксидов за счет комплексообразования.

Константа равновесия этого процесса может быть рассчитана на основе допущений по Орлову, если известна равновесная концентрация иона металла при определенном значении величины рН, т.е. для одной из точек кривых титрования:

Р [Ме21р

Данные, необходимые для расчетов Кр, были получены на основании математической обработки графиков. Рассчитанные величины констант равновесия изучаемых препаратов для избранных условий близки друг к другу, тем не менее, с точки зрения кинетики, предпочтение в прочности связывания ионов металлов следует отдать гиматомелановым и гуминовым кислотам (рК>10) по сравнению с фульвокислотами (рК<10).

Более корректные выводы о прочности образующихся комплексов могут быть получены на основании расчетов не констант равновесия, а констант устойчивости протонных комплексов, которые, в частности, численно зависят от того, каким набором возможных комплексов описывается изучаемая система. Расчет по модификации программы М1Ы1С)1Ш>75 Массачусетского техноло-

гического института (Westall et al., 1976), произведенный на основе наших экспериментальных графических данных (15-20 точек каждой кривой потенцио-метрического титрования), через систему Internet дал результаты одного порядка с результатами наших исследований, но полученных с помощью другого метода - количественного электрофореза на бумаге. Применение количественных электрофоретических измерений позволило нам исключить многие не вполне корректные допущения, описанные выше.

Исследование комплексообразования е ряду гуминоеых веществ методом электрофореза. Электрофоретическая подвижность исследуемых препаратов различна и зависит от условий проведения электрофореза, в частности, от величины рН буферного раствора. Различия электрофоретической подвижности имеются несмотря на то, что препараты были нанесены на фореграммы в количествах, выравненных по мМоль — эквивалентам водорода кислотных групп, титрующихся щелочью до рН=7,0, что, в сущности, означает выравнивание этих соединений по заряду. Но, как известно, электрофоретическая подвижность зависит не только от заряда, но и от площади и массы, на которой распределен этот заряд, от размера и формы частиц вещества. Вероятно, различия исследуемых препаратов по этим показателям, а также различия в заряде, который возникает при повышении рН с 7,00 до 8,68 вызвали существенные различия в скорости движения отрицательно заряженных компонентов. Они заключались в том, что суммарный препарат при щелочных условиях (рН= 8,68) имел наименьшую подвижность; фульвокислоты имели наибольшую подвижность; гуминовые и гиматомелановые кислоты занимали среднее положение между ними (скорость движения главных компонентов за 6 часов электрофореза была соответственно 0,111; 0,183 и 0,155 мм/мин).

Для исследования комплексообразования на количественном уровне был проведен электрофорез гуминовых, гиматомелановых кислот, фульвокислот и суммарного препарата и их смесей с ионами меди, цинка и кобальта. На элек-трофореграммах отчетливо видно, что зоны подвижных отрицательно заряженных компонентов смесей несколько отстают от соответствующих зон на фореграммах одних препаратов (без ионов металлов). Опрыскивание форе-грамм металлсодержащих препаратов аналитическими реактивами на ион кобальта (нитрозо-11-соль), меди и цинка (дитизон), комплексные соединения которых имеют яркий красный цвет, показало, что часть ионов в форме катиона продвигается на фореграмме в сторону катода, а часть - в сторону анода вместе с соответствующими анионами кислот. Об этом свидетельствовало покраснение электрофоретической полоски в тех местах, где сосредотачивался ион металла. Нахождение ионов меди, цинка и кобальта в составе сложных анионов кислот позволяют заключить, что часть их в смесях находятся в форме анионных комплексов. На рис. 6, 7 и 8 представлены денситограммы фореграмм гуминовых кислот и их смесей с ионами металлов в избранных буферных растворах. Как видно по денситограммам, подвижность комплексов ионов с гумино-выми кислотами меньше, чем одних кислот.

Рис. 6. Денситограммы гу ми но пых кислот (1), смссп гумшюиие с Со ** 3:1 (2), смссп гуминоиые с Со2+ 1:1 (3). ¡уфсрпый раствор с рН = 8»68

гтт

/ см

,1'пс. 7. Денситограммы гумпионых кислот (1), смссп гумнповыс с Со + 3:1 (2), смссп |умшювыесСо2+ 1:1 (3). Буферный раствор с рН = 7,0

/ СМ

ТО 60 50 <¡0 30

го 1о

|1'нс. 8. Денситограммы гумжшш.1,4 кислот (I), смссп гумнповыс с Со 21 3:1 (2), смссп гуминоиые о Со2+ Г.1 (3). Буферный раствор с рН = 5,55

Скорость движения главного компонента кислоты составила 0,133 мм/мин, атаковал для комплексов с соотношениями 3:1 и 1:1 соответственно 0,111 и 0,097 мм/мин (для иона кобальта). В данных условиях ионы металлов образуют с гуминовыми кислотами практически только подвижные отрицательно заряженные комплексы. В противном случае на старте оставалась бы часть органического вещества, что должно было бы вызвать увеличение на денситограмме пика, соответствующего зоне старта.

Таким образом, подвижность комплексов металлогуминовых комплексов в щелочной среде ниже, чем одной кислоты, причем, чем уже соотношение кислота: металл в смеси, тем меньше подвижность, тем на меньшее расстояние от старта продвигается подвижный компонент.

Денситограммы гуминовой кислоты и ее смесей с ионами Ме2+, полученных в буфере с рН=7,0 и с рН=8,68, очень сходны. Подвижность препаратов в нейтральных условиях значительно ниже: скорость перемещения гумат-иона была 0,093 мм/мин, а кобальт-, медь-, цинкгуминовых комплексов соответственно -0,079 мм/мин. В смеси ионов кобальта, меди, цинка с гуминовой кислотой с соотношением 1:1, судя по денситограммам, образуется несколько комплексов, имеющих разную подвижность. Об этом свидетельствует наличие ступеней на денситограммах.

Денситограммы фореграмм гуминовых кислот и ее смесей Ме~', полученных в слабокислой среде, очень сильно отличаются от таковых, полученных в нейтральной и щелочной средах. В данном случае по денситограммам отчетливо видно, что взаимодействие Ме2+ с гуминовыми кислотами приводит к образованию электрофоретически практически неподвижных (в случае, если соотношение было 1:1) и малоподвижных ( в случае, если соотношение было 3:1) металлоогранических комплексов. На это указывает большое увеличение стартового и пристартового пиков на денситограммах смесей по сравнению со стартовым пиком препарата кислоты без Ме2+. Но в слабокислой среде образуются не только неподвижные и малоподвижные комплексы. На денситограммах 2 и 3 хорошо отражены зоны и высокоподвижных компонентов, несколько отстающих от соответствующего компонента одной кислоты. Последнее позволяет предполагать, что эти компоненты, как и неподвижный и малоподвижный, являются комплексами.

Таким образом, характер взаимодействия гуминовой кислоты с Ме2+ сильно зависит от кислотности среды. Если в щелочной среде образуются достаточно однородные (только подвижные, отрицательно заряженные) комплексы как в случае соотношения кислота: Ме2+ 3:1, так и при соотношении 1:1, то в нейтральной среде в смеси с соотношением кислота: Ме2+=1:1 образуется уже несколько комплексов, различающихся по подвижностям. В слабокислой среде образуются не только малоподвижные, но и практически неподвижные нейтральные комплексы. На наш взгляд, такая дифференциация комплексов обусловлена изменением степени дисперсности, степени ионизации кислотных групп, принимающих участие в комплексообразовании с Ме2+, по мере изменения кислотности среды.

Характер взаимодействия общего органического вещества с Ме2+ существенно отличается от такового для гуминовых кислот. Гуминовые кислоты образовывали с Ме2+ как подвижные, так и неподвижные нейтральные комплексы, что зависело от условий кислотности. Общее органическое вещество образует неподвижные нейтральные комплексы как в слабокислой, гак и в нейтральной, и в щелочной средах. Оно более чувствительно к иммобилизирующему действию катионов Ме2+, чем гуминовые кислоты.

Результаты определений ионов металлов в разных частях электрофоре-грамм показывают, что значительное количество катионов металлов при электрофорезе их смесей с препаратами гуминового ряда передвигается в сторону анода в форме прочного сложного аниона. При пересчете количества ионов металла, передвинувшегося в форме сложного аниона к аноду на одинаковое количество углерода гуминовых веществ, мы получаем данные, убедительно свидетельствующие о том, что с фульвокислотами продвигается в сторону анода ионов кобальта, меди и цинка значительно больше, чем с гуминовыми кислотами и суммарным препаратом. Как известно, в реакциях комплексообразования большое значение имеют соотношения концентраций между ионами металлов и лигандами. Составляя смеси ионов металлов с препаратами в определенном молекулярном соотношении и пересчитывая количество ионов металлов, передвинувшихся к аноду, на количество миллимоль-эквивалентов водорода кислотных групп, мы учитывали это важное обстоятельство. О количестве молекул гумусовых кислот судили по количеству моль-эквивалентов водорода кислотных групп, оттитрованного до рН=7.4, соответствующему рК полунейтрализации.

При таком способе расчета оказывается, что не фульвокислоты, а гуминовые кислоты более энергично взаимодействуют с ионами металлов с образованием анионных комплексов. В слабокислой среде из смесей Ме2+ с гуминовыми кислотами в форме анионных комплексов продвинулось к аноду вдвое больше Ме"', чем с фульвокислотами и общим органическим веществом.

Снижение кислотности среды приводит к значительному увеличению коли-

2+ 2+ т 21-

чества Со , Си , лп , связываемого в анионные комплексы, т.е. при повышении величины рН комплексообразовательная способность гуминовых веществ в отношении Ме24 возрастает. По-видимому, это является следствием активирования в щелочной среде тех кислотных групп, которые не были активны в кислой и нейтральной средах из-за малой степени ионизации. В данном случае они участвуют в образовании комплексов.

Опираясь на результаты потенциометрического титрования, рассчитанные значения силовых показателей изучаемых препаратов, можно сделать заключение, что гуминовая кислота в пределах значений рН до 8,68 является четырех-протонной, а суммарный препарат и фульвокислоты - трехпротонными.

При введении в раствор ионов с!-металлов, имеющих повышенное сродство к препаратам, как лигандам, имеет место процесс:

Р 'Р

*НООСН2С Н2С—С *НООСН2С Нгр-С

О—Н \

(ГТС) + Ме2*==^= Г Ме + 2Н

/ \ ?"Н / \? ноосн2с н2с-счЧо .Н00СНгС/ н2ссъ

Н4ГК+ Ме2*- ' Нз[МеГК] + 2Н+

В условиях электрофореза в буферном фосфатном растворе с рН=5,55 более вероятным действующим лигандом является анион [ЬЬГК]В нейтральной, слабощелочной (рН=9) средах под действием ОН' он депротонируется ступенчато вплоть до ПС4", и реакция комплексообразования проходит между максимально ионизированной (депротонированной) формой и ионами металла наиболее интенсивно. Так как при увеличении кислотности среды концентрация [ГК4"]сильно понижается из-за протонирования, равновесие комплексообразования сильно сдвигается влево, а при подщелачивании - вправо.

Сочетанное применение методов потенциометрического титрования и количественного электрофореза представляют возможность более корректной количественной оценки комплексообразования в виде традиционной в химии константы - константы нестойкости анионных комплексов.

Расчетные уравнения для гуминовых кислот:

[Ме-ГК]2" - Мег+ + ГК"-,, ЛМе2*1ГГК<-1 нест [Ме-ГК]2"

где [Ме2+] - равновесная концентрация катиона металла в ммоль/л, обнаруженное после электрофореза в катодной зоне электрофореграмм; [ГК4"] = [ Ме2+] из-за стехиометрического соотношения Ме2+ : лиганд 1:1;

[Ме-ГК]2"- равновесная концентрация комплексного аниона, определяемая по количеству металла, обнаруженного в анодной зоне электрофореграмм;

Расчетные уравнения для суммарного препарата и фульвокислот:

[Ме-СГ!]'" ^-" Ме2*+СП3"

„ [Ме ;*][СП3"] "сст [Ме-СП]1"

Численные значения констант нестойкости изучаемых комплексов ионов металлов - биогенов кобальта, меди, цинка, полученные в наших исследованиях с помощью потенциометрии и электрофореза, находятся в хорошем соответствии с Кнест .рассчитанными по достаточно сложной программе для органических веществ почв и поверхностных вод американскими учеными (\iVestall й а!.,

1976, Ephraim et al.,1989). Они позволяют на количественном уровне оценивать хелатирующую способность изучаемых препаратов н ряду гуминовых веществ, количественно характеризовать их фармакинетику и фармакодинамику как фармпрепаратов.

Таблица 4

Константы нестойкости анионных комплексов ионов Cu2+, Zn2+, Со2+ с гуминовыми, фульвокислотами и суммарным препаратом* (молярное соотношение ! :3, исходные данные для расчетов достоверны,

р<0,01)

Препарат Величина pH среды

5,55 7,00 8,68

Си-ГК Си - ФК Си - СП 2,4 • 10"4 9,9 . 10"4 8,2 • 10"4 0,6 . 10"5 3,9 . 10"5 4,1 . 10"5 1,3 • 10"8 4,7 • 10"7 1,3 • 10"7

Zn - ГК Zn-ФК Zn-СП 4,43 • 10"4 7,55 • 10"4 5,29 • Ю"4 3,7 . 10'5 3,9 . 10"5 1,6 . Ю-5 5.3 . 10"8 1,1 • 10"7 4.4 . Ю-7

Со-ГК Со - ФК Со - СП 3,2 • Ю-4 1,4 • 10"4 9,5« 10"4 2,7 . 10"5 3,3 • 10"5 1,5 • 10"5 5,9 • Ю-8 2,2 . 10"7 2,6 « 10-7

*ГК - гуминовые кислоты, ФК - фульвокислоты, СП - суммарный препарат.

Исследование влиянии препаратов гумнпопого ряда на активность ма-лптдегидрогеиазы и .шктлтдсгндрогатзы в условиях «in vitro»

Для исследования биологической активности пелоидопрепаратов в ряду гуминовых веществ были выбраны два из наиболее информативных ферментов при хроническом воспалении (Савченко и др., 1998) — малатдегидрогеназа и лактатдегидрогеназа.

Данные экспериментов свидетельствуют о том, что препараты фульвокис-лот и ги.матомелановых кислот в условиях опыта не оказывают влияния на изучаемые ферментативные реакции в ткани печени. Скорость окисления НАДН остается на уровне контроля. При воздействии гуминовых кислот на реакцию, контролируемую мелатдегидрогеназой, наблюдается уменьшение ее скорости на 17 - 21% и в среднем составляет 18,7%( р < 0,05). Суммарный препарат уменьшает скорость взаимодействия фермента с субстратом на 10,6%.

Выявленное воздействие пелоидопрепаратов в гомогенате мышечной ткани более значимо. Препарат фульвокислот проявляет лишь тенденцию к уменьшению активности фермента. Гиматомелановые кислоты замедляют реакцию после инкубации в течение 1 и 5 минут на 17,6%, а к 20-й минуте скорость реак-

ции уменьшается почти па 24% (р< 0,05). Максимальный эффект воздействия наблюдается под влиянием гуминовых кислот, что приводит к уменьшению скорости реакции на 22% (р <0,02) через одну минуту и почти на 29% (р < 0,04) по истечении 5 минут инкубации. Суммарный препарат достоверно (р <0,001) изменяет скорость ферментативной реакции, но эффект действия менее выражен, чем у гуминовых кислот и составляет в среднем 21%.

Тот факт, что все гуминовые препараты понижают в разной мере активность малатдегндрогеназы, имеет относительное значение. Нами в дополнительном эксперименте было выяснено, что ионы кобальта, меди и цинка в концентрации 10* м проявляли себя как сильные ингибиторы малатдегндрогеназы, понижавшие ее активность на 95%. В присутствии гуминовых препаратов имела место нейтрализация этого сильного ингибирования малатдегндрогеназы, но в разной мере. В случае гуминовых кислот, являющихся самыми сильными хе-латирующими агентами, проявилось даже достоверное увеличение активности (рис.9).

й" 31111.1.

5.310,2

3.010,1

7.21(1.3

Нри|

4,1+0,26 В

б.'ио.зклз

8,6 ±0.4

'¿0.510.9

В присутсгп&ии 10.fi 'О -'М Со 2 '

ЯШ ГумивовыеЦ С^уммарныйЩ Гимато- [ кислоты препарат МЕлаповые

кислоты

| Фулыю-

КИС1Ю1|,[

Рис.9. Изменение активности малатдегндрогеназы в мышцах в присутствии препаратов гуминового ряда и ионов металлов

При исследовании ферментативных реакций, контролируемых лактагдегид-рогеназой в мышцах, выявлено, что все пелоидопрепараты на основе гуминовых веществ уменьшают скорость окисления НАДИ. Фульвокислоты изменяют удельную активность лактатдегидрогеназы в среднем на 17%, причем действие нарастает с увеличением срока инкубации, в итоге достигая снижения на 20,13%(р< 0,05).

Изменение активности лактатдегидрогеназы в мышцах при воздействии ги-матомелановых кислот несколько превышает активность фульвокислот, составляя в среднем 19%, в итоге - 22,44% (р < 0,01).

Из сравнительной характеристики действия всех гумусовых кислот в зависимости от срока инкубации следует, что наибольшее влияние на исследуемую

реакцию оказывают гуминовые кислоты. По усилению влияния на активность малатдегилрогеназы и лактатдеглдрогеназы в мышцах препараты образуют ряд: фульвокислоты, гиматомелановые кислоты, общий экстракт, гуминовые кислоты. Полученный ряд идентичен установленному при исследовании увеличения степени полисопряженности, ароматичности, оптической плотности, концентрации парамагнитных центров, комплексообразовательной (хелатирующей) способности.

Результаты исследований позволяют предположить существование взаимодействия препарата с ферментом. Вполне вероятно, что специфические органические вещества могут выполнять роль донора водорода, тем самым заменяют НАДН в реакции. В процессе реакции НАДН и гуминовые вещества вступают в конкуренцию за фермент. Обладая меньшим сродством к ферменту, они требуют большего времени контакта для достижения НАДН-оксидазной активности. Данное предположение позволяет говорить не об ингибировании ферментативных реакций под влиянием исследуемых препаратов, а о конкурентном действии НАДН и гуминовых веществ. При достаточном контакте фермента с гумусовыми кислотами реакции протекают с использованием водорода препаратов, что приводит к уменьшению расходования НАДН. В этой связи нам представляется более корректным говорить о НАДН-оксидазной активности, присущей препаратам на основе гуминовых веществ.

Проведенные исследования доказывают, что выделенные на основе специфических органических веществ препараты гуминового ряда обладают биологической активностью, оказывая влияние на окислительно-восстановительные процессы, протекающие в тканях организма под действием дегидрогеназ.

Результаты исследования влияния препаратов на экспрессию Е-рецептора па мембранах лимфоцитов

Предварительная инкубация лимфоцитов крови доноров с суммарным препаратом в 70% случаев приводила к стимуляции реакции Е-розеткообразования. При этом в присутствии этого препарата 74,211,53% клеток образовали Е-розетки, число чувствительных к препарату лимфоцитов составило в среднем 7,6710,67%,а индекс стимуляции - 1,53+0,84%. Это свидетельствует о способности суммарного препарата усиливать экспрессию СД2-рецептора на поверхности лимфоцитов, что приводит к увеличению числа клеток, активных в реакции Е - розеткообразования.

Инкубация лимфоцитов с препаратом гуминовых кислот также приводит к росту числа розеткообразующих лимфоцитов, причем данный феномен отмечен во всех наблюдениях (100%). Число чувствительных к препарату клеток составило 12,67+1,45%, индекс стимуляции - 19,07+2,02%. Оба названных параметра у гуминовых кислот достоверно (р<0,05) выше по сравнению с суммарным препаратом. Полученные результаты свидетельствуют о выраженной способности гуминовых веществ пелоидов стимулировать лимфоциты крови, данный эффект усиливается при использовании препарата гуминовых кислот.

Результаты исследования влияния препаратов на генерацию активных форм кислорода

Предварительная инкубация как с суммарным препаратом, так и с гумино-выми кислотами не вызывает значительных изменений в уровне спонтанной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов, более того, отмечается тенденция к снижению выработки активных форм кислорода клетками, находящимися в состоянии относительного покоя (табл. 5).

Таблица 5

Влияние суммарного препарата и гуминовых кислот на уровень хемилюминесценции лейкоцитов

Вещество Параметры Суммарный препарат, п—6 Гуминовые кислоты, п=6 Контроль, п=6

Максимальный уровень спонтанной хемилюминесценции 95,2+6,98 101,2+11,3 125,3±10,8

Максимальный уровень стимулированной хемилюминесценции 121,2+6,35* 165,1110,2* 510,5±28,3

Индекс стимуляции ],16+0,12* 1,50±0,16* 3,57+0,39

Индекс сдвига 2,86+0,27 2,29±0,15* -

* достоверность отличия от контроля р<0,05

Иная картина наблюдается при оценке хемилюминесценции активированных фагоцитов: интактные фагоциты (контроль) были способны увеличивать кислородный метаболизм, оцениваемый интенсивностью хемилюминесценции, до 510,5±28,3 имп/мин, в то время как при предварительной инкубации клеток с суммарным препаратом и гуминовыми кислотами максимальный уровень стимулированной хемилюминесценции достигал лишь 121,2+6,35 и 165,1+10,2 имп/мин соответственно. О подавлении изучаемыми препаратами способности фагоцитов активировать респираторный взрыв свидетельствуют и низкие значения индексов стимуляции: для суммарного препарата индекс стимуляции составил 1,16±0,12, что в 2,86+0,27 раза меньше контрольных значений; в случае гуминовых кислот индекс стимуляции выше - 1,50±0,16, но также достоверно меньше контроля, индекс сдвига составил для гуминовых кислот 2,29+0,15.

Приведенные данные, на наш взгляд, свидетельствуют о том, что выявленный в клинических наблюдениях противовоспалительный эффект гуминовых препаратов объясняется депрессивным воздействием на фагоциты крови и прежде всего на их способность генерировать активные формы кислорода, которые играют роль повреждающего компонента в тканях при воспалительной реакции. Одновременно гуминовые вещества активируют способность части фагоцитов крови к фагоцитированию, что способствует поглощению ими продуктов распада. В предыдущих опытах, кроме того, была показана способность препаратов (в большей степени - гуминовых кислот) активировать рецептор адгезии на поверхности лимфоцитов, чья роль в реакции воспаления реализуется на

стадии репарации.

Результаты исследования влияния прапаратов гуминового ряда на активность каталазы и супсроксидднсмутазы «in vivo»

Больные-добровольцы курорта «Сергиевские минеральные воды», имевшие основной диагноз «остеохондроз» по наличию сопутствующих заболеваний были разделены на 3 группы по 10 человек. Результаты определений приведены в табл. 6.

Таблица б

Влияние препаратов гуминового ряда на активность каталазы и супероксиддисмутазы сыворотки крови больных остеохондрозом с сочетанными заболеваниями

Показатели Контроль, % Гуминовые кислоты,% Суммарный препарат, %

ДО лечения после лечения изменение, % до лечения после лечения изменение, % ДО лечения после лечения изменение, %

1 группа (п=10): остеохондроз, артрит, СОЭ >15

Катал аза, (н.Моль/мл. мин) 90,9 ±5,50 105,0 ±5,30 +15,5 88,1 ±2,50 128,8 ±10,20 +46,2 92,3 +4,80 113,2 ±5,20 +22,6

Суперок-сиддксмута-за, (усл.ед.) 1,84 ±0,12 1,99 ±0,14 +8,15 1,74 ±0,15 2,29 +0,28 +31,6 1,89 ±0,15 2,15 ±0,20 +13,8

2 группа (п=10): остеохондроз, артрит, СОЭ <15

Катал аз а, (н.Моль/мл. мин) 87,7 ±6,80 98,7 ±4,80 +12,5 90,1 ±4,30 117,3 ±8,80 +30,2 92,8 ±3,20 107,4 +5,20 +15,7

Суперок-сиддисмута-за, (усл.ед.) 1,94 ±0,13 2,07 ±0,21 +6,70 1,86 +0,25 2,12 ±0,15 +13,9 1,78 ±0,20 2,01 +0,18 +12,9

3 группа (п= 10): остеохондроз, СОЭ <15

Кат&таза, (н.Моль/мл. мин) 91,8 +5,80 101,2 ±5,30 +10,2 92,1 +4,90 107,3 ±9,20 +16,5 92,9 +5,10 101,4 ±5,80 +9,14

Суперок-сидцисмута-за, (усл.ед.) 1,88 ±0,15 1,% ±0,20 +4,30 1,89 ±0,14 2,02 ±0,20 +6,8 1,81 +0,20 1,97 ±0,15 +8,8

Первую группу составили больные, у которых сопутствующим заболеванием был артрит, значение СОЭ больше 15 мм/час. Вторая группа отличалась от первой тем, что больные имели СОЭ <15. Третью группу составили больные, страдающие только остеохондрозами. У всех больных до и после лечения по методике, приведенной и [-лаве 2, было определено содержание каталазы и супероксиддисмутазы в сыворотке крови.

Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что в результате лечения электрофорезом гуминовых препаратов как активность каталазы, так и су-пероксиддисмутазы сыворотки крови больных остеохондрозами в сочетании с другими видами патологии существенно увеличивается. Особенно значительный прирост активности этих ферментов (46,2% для каталазы и 31,6% для су-пероксидцисмутазы, с р<0,01 по отношению к контролю и вариантам) имеет место у больных первой группы. Для второй группы больных увеличение активности еще хорошо выражено и достоверно (+30,2% - +15,7% по каталазе и 13,9% - 12,9% по супероксиддисмутазе, р<0,05), а третьей группе больных выявляется лишь тенденция к увеличению активности.

На наш взгляд в результатах данного исследования примечательно то, что изменение активности каталазы и супероксиддисмутазы является согласованным, а также соответствующим результатам предыдущих экспериментов и клиническим наблюдениям.

Результаты исследования влияния препаратов гумннового ряда на некоторые показатели иммунного статуса больных остеохондрозом

Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что показатели СОЭ в результате цикла электрофоретического лечения гуминовыми препаратами больных первой группы понизились, причем наиболее существенно и достоверно в случае гуминовых кислот (р<0,05 по отношению к контролю). Содержание сывороточных иммуноглобулинов А, О, М и циркулирующих комплексов у всех больных находится в пределах практической нормы.

Достоверное снижение (в пределах нормы) иммуноглобулина О и циркулирующих комплексов имеет место после цикла лечения больных первой группы электрофорезом гуминовых кислот. Действие суммарного препарата противоречиво: он способствовал некоторому увеличению (в пределах нормы) иммуноглобулинов С и А в сыворотке больных второй и третьей групп.

Более определенными является динамика фибронектина, с увеличением содержания которого связывают усиление воспалительного процесса (Титов, Самфирова,1994), особенно в соединительной ткани. Содержание фибронектина до лечения у всех больных выше нормы в 1,5 - 2 раза.

Традиционное лечение в условиях курорта «Сергиевские минеральные воды» не приводило к снижению фибронектина у больных всех трех групп, в то время как цикл лечения и гуминовыми кислотами, и суммарным препаратом обеспечивал снижение фибронектина практически до нормы (р<0,01).

РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ГУМИНОВОГО РЯДА В УСЛОВИЯХ КУРОРТА «СЕРГИЕВСКИЕ МИНЕРАЛЬНЫЕ ВОДЫ»

С 1995 по 1998 годы прошли циклы лечения электрофорезом гуминовых препаратов 170 женщин и 58 мужчин-добровольцев (в возрасте от 35 до 68 лет), страдающих деформирующим остеохондрозом разных стадий заболевания, ко-

торым грязевые ванны были противопоказаны. При поступлении на лечение они предъявляли жалобы на быструю утомляемость, боли и «хруст» в суставах (чаще в коленных) как во время движения, так и покоя, к перемене погоды, утреннюю скованность движений. Рентгенологически выявлялось сужение суставных щелей, заострение мыщелковых бугорков; биохимически выявлены повышенные значения СОЭ, наличие С - реактивного белка у 35% больных. Эти больные составили первую группу. Вторую группу больных составили 195 женщин и 25 мужчин (в возрасте от 40 до 72 лет) с диагнозом «ревматоидный артрит» со средней активностью 69,4 % и с малой - 30,6 %. У 91 % больных врачами отмечалась различной степени выраженности гипотрофия мышц и сгибательные контрактуры; жалобы на скованность по утрам, боли в суставах, имело место нарушение локомоторной функции. В крови больных этой группы установлено увеличение СОЭ в пределах 20 - 40 мм/час, наличие повышенного уровня С - реактивного белка и сиаловых кислот. Больным и первой, и второй групп нативная пелоидотерапия была противопоказана.

Третью, контрольную, группу составили 100 больных курорта, которые не получали лечения электрофорезом гуминовых препаратов. Их лечение ограничивалось сероводородными ваннами, лечебной физкультурой и массажем. Больные первой и второй групп перечисленные виды лечения получали.

Наиболее наглядны результаты лечения больных второй группы (ревматоидный артрит). Уменьшение болевого синдрома, скованности движений, отсутствие инфильтративных изменений в тканях, улучшение локомоторной функции отметили 98 % больных с малой активностью заболевания и 75 % - со средней активностью. Биохимически выявлена нормализация СОЭ или ее значительное снижение, как и сиаловых кислот.

У больных первой группы имеет место нормализация СОЭ, отсутствие С -реактивного белка, у 58 % больных в историях болезни отмечены улучшение локомоторной функции, исчезновение «хруста», уменьшение или отсутствие болей в суставах при подъеме и спуске по лестнице. Улучшение общего состояния отметили 32 % больных, 10 % - без улучшения. В контрольной группе в историях болезни увеличение объема движения и уменьшение болевого синдрома отмечено у 58 % больных, но менее выраженное по сравнению с первой и второй группами.

Таким образом, в исследованиях влияния препаратов гуминового ряда на активность ферментов, экспрессию Е-рецептора на мембранах лимфоцитов, генерацию активных форм кислорода, показатели иммунного статуса, так и по клиническим наблюдениям выявляется их высокое положительное биологическое и терапевтическое действие, особенно препарата гуминовых кислот.

ВЫВОДЫ

1. Специфические органические гуминовые вещества лечебных грязей -сложнейшая динамическая система, совокупность высокомолекулярных, поли-конденсированных, полисопряженных соединений, закономерно отличающихся

степенью выраженности перечисленных признаков.

2. Целостная система гуминовых веществ с помощью кислотно-основного воздействия может быть разделена на группы, представляющие генетический ряд веществ, различающихся полисопряженностью, ароматичностью, бензо-идностью, поликонденсированностью, термодинамической устойчивостью, мо-лекулярно-массовым распределением, концентрацией свободных радикалов, кислотно-основными, окислительно-восстановительными и комплексообразо-вательными свойствами.

3. Представители групп - гуминовые, гиматомелановые, фульвокислоты и суммарный препарат - имеют сходственный элементный состав, структуру и свойства, различия в которых обусловлены термодинамическими условиями формирования пелоидов в разных природных географических зонах, а также гидрогеохимическими условиями в одной природной зоне. Структурную организацию гуминовых веществ разных пелоидов необходимо учитывать при получении пелоидопрепаратов.

4. Гуминовые, гиматомелановые, фульвокислоты и суммарный препарат могут быть идентифицированы с помощью ИК-спектров, элементного анализа, степени окисленности, степени бензоидности, коэффициента цветности и оптической плотности 0,001°/о растворов их натриевых солей, которые могут оказаться необходимыми и достаточными показателями стандартизации этих веществ как лекарственных препаратов.

5. По степени выраженности полисопряженности, ароматичности, бензоидности гуминовых препаратов имеет место ряд: гуминовые кислоты > гиматомелановые кислоты > суммарный препарат > фульвокислоты.

6. Возрастание относительного количества свободных радикалов гуминовых препаратов соответствует ряду:

гуминовые кислоты > суммарный препарат > гиматомелановые кислоты > фульвокислоты.

7. Возрастание полифункциональности и основности гумусовых кислот соответствует ряду:

фульвокислоты < суммарный препарат < гиматомелановые кислоты < гуминовые кислоты. Сила кислот изменяется в обратном порядке.

гуминовые кислоты > гиматомелановые кислоты > суммарный препарат > фульвокислоты.

9. Состав, строение и совокупность разнообразных физико-химических свойств препаратов гуминового ряда обеспечивают наличие разнообразной биологической активности. На молекулярном уровне биологическая активность препаратов гуминового ряда проявляется через влияние на активность ферментов - каталазы, супероксиддисмутазы, малатдегидрогеназы и лактатдегидроге-назы, через нормализацию показателей иммунного статуса сыворотки крови.

10. На клеточном уровне биологическая активность проявляется через по-

давление генерации активных форм кислорода и стимуляцию лимфоцитов крови.

11. На уровне организма биологическая активность гуминовых препаратов проявляется через высокий противовоспалительный эффект при таких заболеваниях, как ревматоидный артрит, остеохондрозы, гинекологические заболевания.

12. Разработанные способы получения препаратов гуминового ряда позволяют получить в условиях курортов очищенные, терапевтически высокоэффективные, эколога - экономически выгодные препараты для физиотерапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение группового состава, позволяющее установить тип специфических органических веществ, необходимо включить в нормативно-техническую документацию при оценке качества лечебных грязей.

2. Перспективными источниками получения пелоидопрепаратов гуминового ряда являются пелоиды, содержащие специфические органические вещества фульп.это-гуматного типа с большей долей гуминовых кислот. Экологически и экономически выгодно использование некондиционных лечебных грязей.

3. Перспективным способом получения пелоидопрепаратов гуминового ряда является кислотно-основный способ с применением экологически безопасных реактивов и технологии, позволяющей получить очищенные от вредных примесей терапевтически эффективные препараты.

4. Идентификацию и стандартизацию гуминовых веществ следует производить по ИК-спектрам и элементному составу, а отдельных представителей гуминового ряда - по оптической плотности 0,001%-ных растворов их натриевых солей.

5. Наиболее эффективно электрофоретическое применение изотонированной водной 0,05% - 0,1%-ной лекарственной формы гуминовых кислот при лечении больных артритами, остеохондрозами и гинекологическими заболеваниями.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Исследование комплексообразования Со2+ с органическими соединениями почвы. Сообщение 1. Потенциометрическое титрование гумусовых кислот почвы и торфа// Агрохимия.- 1966,- № 9.-С.88-94.

2. Электрофоретическое исследование образования комплексов с органическими соединениями почвы// Тезисы докладов научно-практической конференции «Механизмы биологических процессов».- Изд-во ЛГУ., 1966.-С.64.

3. Влияние некоторых органических соединений почвенного гумуса на поглощение ионов кобальта и молибдена минеральными коллоидами почвы / Н.А.Туев //Тезисы докладов научно-практической конференции «Механизмы биологических процессов»,-Изд-во ЛГУ., 1966.-С.65.

4. Исследование комплексообразования ионов кобальта (11) с перегнойными кислотами почвы и торфа / В.П.Цыпленков // Тезисы докладов 5-го Всесоюзного совещания «Микроэлементы в сельском хозяйстве и медицине»,-Улан-Удэ.,1966,- т. К- С.77.

5. Исследование комплексообразования Со2+ с органическими соединениями почв. Сообщение 2. Электрофорез комплексов Со21" с гумусовыми кислотами почвы и торфа // Агрохимия,- 1968.- № Л,- С.106-112.

6. Влияние минералогического состава и органического вещества па поглощение микроколичеств Со2+илистой фракцией дерново-подзолистой почвы / В.А.Бойчук // Известия АН БССР, серия сельскохозяйственных наук.- Минск.,1968.- Вып. 1 .-С. 17-22.

7. Сорбция бенз(а)пирена некоторыми природными сорбентами / В.И.Коннов И Материалы Пленума комитета по канцерогенным веществам и мерам профилактики «Вопросы профилактики загрязнения внешней среды, в частности водоемов, канцерогенными веществами»,- Горький., 1972,- С.54-58.

8. Электрофорез иодсодержащих препаратов В.В.Миронова // Тезисы докладов XI научно-практической конференции врачей Ульяновской области, посвященной 106 годовщине со дня рождения В.И.Ленииа- Ульяновск.,1976.-С.47.

9. Специфические органические вещества пелоидов как потенциальный источник металлоеодержащих биологически активных комплексных соединений / Г.Е.Штер., Н.П.Аввакумова // Материалы Всероссийского съезда фармацевтов. - Ярославль., 1987.- С.299-300.

Ш.Оценка содержания хлорорганических ядохимикатов в лечебной грязи курорта «Сергиевские минеральные воды» / Н.П.Аввакумова, Л.Н.Самыкина // Материалы научно-практической конференции, посвященной 50-летию курорта Янган-Тау. Тезисы докладов,- Уфа., 1987.-С.15-16.

11. Специфические органические вещества пелоидов как фактор повышения эффективности пелоидотерапии / Н.П.Аввакумова, Н.Б.Сорокина II Областная научно-практическая конференция врачей «Научно-технический прогресс и медицина».- Куйбышев.,1988,- С. 163-165.

12.Внедрение модифицированной методики определения фракции липидов (битумов) лечебных грязей / Н,П. Аввакумова, С.А.Арджеванишвили // Областная научно-практическая коференция врачей по вопросам курортного лечения. Тезисы докладов - Куйбышев., 1988,- С.93-95.

13.Молекулярно-массовое распределение органических веществ лечебных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды» / Л.Н.Самыкина, Н.П.Аввакумова, Е.Б.Милановский // Материалы XVI областной научно-

практической конференции врачей по вопросам курортного лечения. Тезисы докладов.- Куйбышев., 1988- С.95-96.

14.Характеристика первичной биодоступности различных фракций органического вещества пелоидов. / Н.П.Аввакумова, В.Б.Туровский // Материалы межтерриториальной научно-практической конференции «Современные проблемы использования физических факторов в комплексном лечении и реабилитации заболеваниями опорно-двигательного аппарата, нервной системы, женских половых органов»,-Одесса., 1989.-С.184.

15.Синтез и анализ комплексов металлов-биогенов с гумусовыми кислотами как потенциальных компонентов пелоидопрепаратов/ Н.П. Аввакумова, O.JI. Буткова, В.И. Коннов// В книге «Куйбышевскому медицинскому институту им. Д.И.Ульянова - 70.» Тезисы докладов юбилейной научной сессии. - Куйбышев., 1989,-С.5-6.

16.Оценка содержания некоторых групп органических веществ и пестицидов и прогнозирование качества лечебных грязей Н.П.Аввакумова, О.Л.Буткова // Материалы межреспубликанской научно-практической конференции «Пути уменьшения антропогенного воздействия на курортные ресурсы». - Киев., 1990,- С.54-55.

17.Humic préparations as a factor of immuno- fermentai rehabilitation / N.P. Avvakumova, T.V. Korshikova // International journal of immunoreabilitation. -1994,- N.I.- C.27.

18.Определение группового и фракционного состава специфических органических веществ иловых сульфидных грязей / Н.П. Аввакумова, В.Г. Яковлев, Н.И. Межевалова. // Методические рекомендации для сотрудников геолого- гидрохимических лабораторий, врачей по пелоидотерапии.-Самара., 1994.- 14 с.

19.Физиотерапевтическое применение пелоидопрепаратов из лечебных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды» при гинекологических заболеваниях / Н.П. Аввакумова, Т.В. Корщикова., Е.К.Баталова и др.// Методические рекомендации для врачей физиотерапевтов, гинекологов, терапевтов." Самара., 1994.- 7с.

20.Физиотсрапевтические способы применения пелоидопрепаратов из лечебных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды» при заболеваниях опорно-двигательного аппарата / Н.П. Аввакумова, В.Г. Яковлев, Л.В.Фунтикова и др.// Методические рекомендации для врачей физиотерапевтов, невропатологов, терапевтов.-Самара., 1994,-8 с.

21.Гуминовые вещества серноводских лечебных грязей как основа пелоидопрепаратов / Н.П.Аввакумова // Тезисы докладов научно-практической конференции посвященной, 25-летию фармацевтического факультета СамГМУ «Современное состояние и перспективы научных исследований в области фармации».-Самара., 1996.-С. 74-75.

22.Сравнительная характеристика органических веществ иловых сульфидных грязей различной минерализации / Н.П.Аввакумова, В.А.Кархалев //

В сборнике «Новое в курортологии и физиотерапии»,- Самара.,1996.-C.S2-53.

23.Исследование группового состава гуминовых веществ иловых сульфидных грязей / Н.П. Аввакумова, Е.К. Баталова, Т.В.Коршикова // В сборнике « Новое в курортологии и физиотерапии».- Самара., 1996,-С.54-55.

24.Эффективность гуминовых препаратов при реабилитации неврологических больных / Н.П.Аввакумова, Н.И.Захаркин // International journal of immunoreabilitation. - 1997,- N.4.-P.119.

25.Лечение хронического аднексита микроэлектрофорезом гуминовых кислот / Н.А. Гаврилова, Н.П. Аввакумова, Т.А. Гаврилова. // Материалы международной научно-практической конференции: «Природные (курортные) и преформированные физические факторы в профилактике и лечении болезней человека»,-Москва-Иваново-Оболсуново., 1997,-С. 34-35.

26.Результаты применения пелоидин-электрофореза в комплексном лечении больных ревматоидным артритом на курорте «Сергиевские минеральные воды» / Н.Ф. Давыдкин, К.А. Баранова, JIB. Фунтикова.// Материалы международной научно-практической конференции «Природные (курортные) факторы в профилактике и лечении болезней человека». - Москва-Иваново-Оболсуново. 1997.-С.10.

27.Пелоидопрепараты как средство повышения пелоидотерапии. Сообщение 1. Физико-химическая характеристика органических веществ иловых сульфидных грязей / Н.П.Аввакумова, Т.В.Коршикова П Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры.-1998.- № 4.- С.43-45.

28.Моделирование воздействия гуминовых препаратов на полиферментные системы тканей «in vitro» / Н.П.Аввакумова // Материалы научной конференции « Моделирование и прогнозирование заболеваний, процессов и объектов». - Самара., 1998,- С. 6-8.

29.Эколого-экопомическое и социальное значение применения пелоидопре-паратов гуминового ряда / 1 1.П.Аввакумом, М.А.Космарчук // Сборник материалов международной научно-практической конференции «Экономика природопользования».- Пенза., 1998.-С. 12-14.

ЗО.Металл-гуминовые препараты как средство решения эколого-экономических проблем грязелечения / М.А.Кривопалова, Н.П.Аввакумова // Сборник материалов международной научно-практической конференции « Почва, отходы производства и потребления: проблемы охраны и контроля». - Пенза., 1998 - С.49-51.

31.Эколого-экономические аспекты применения пелоидопрепаратов / Н.П. Аввакумова // International journal on immunoreabilitation. - 1998.-N.8 - P. 168.

32.Пелоидопрепараты гуминового ряда как средство повышения эффективности пелоидотерапии /'Н.П. Аввакумова, Т.В. Коршикова и др. // Тезисы докладов межрегиональной научно-практической конференции «Роль природных факторов в санаторно-курортном лечении»,- Казань., изд. «Медицина»., 1998.- С. 5-6.

33.Исследование хомплексообразования как основы биогеохимических функций гуминовых веществ в биосфере // Сборник материалов международной научно-практической конференции «Экология и жизнь»,- Пенза., 1999,- С. 23-25.

34.Гуминовые вещества пеяоидов как неспецифические экопротекторы / Н.П.Аввакумова, В.И.Коннов // Сборник материалов научно-практической конференции «Экология и жизнь»,- Пенза., 1999.- С. 75-77.

35.Биогеохимические аспекты экологической безопасности грязелечения // Сборник материалов международной научно-практической конференции «Экология и жизнь».- Пенза., 1999,- С. 77-79.

36.Пелоидопрепараты как средство повышения эффективности пелоидотерапии. Сообщение 2. Способ получения пелоидопрепаратов гуминового ряда / Н.П.Аввакумова, Е.К.Баталова // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры.- 1999,- № 2,- С.74-77.

37.Исследование коагулирующей способности ионов некоторых металлов как механизма протекторной функции гуминовых кислот / М.А.Кривопалова, Н.П.Аввакумова // Сборник материалов международной научно-практической конференции «Экономика природопользования и природоохраны». -Пета., 1999,- С.5-7.

38.Количественная характеристика комплексообразования гуминовых веществ пелоидов как неспецифических экопротекторов в биосфере II Сборник материалов международной научно-практической конференции «Экономика природопользования и природоохраны».- Пенза., 1999,- С.3-5.

39.К вопросу об использовании пелоидов в зонах активного антропогенного воздействия / Н.П.Аввакумова // Сборник материалов международной на-цчно-практической коференции «Охрана атмосферного воздуха: системы мониторинга и защиты»,- Пенза., 1999.- С. 22-24.

40. Получение, терапевтическая и эколого-экономическая эффективность пелоидопрепаратов / Н.П.Аввакумова // Тезисы докладов научно-практической конференции «Современные тенденции развития фармации», посвященной 80-летию фармацевтической службы Самарской области, Самарского государственного медицинского университета и Самарского аптечного склада.-Самара., 1999.-С. 31-32.

41.Характеристика пелоидопрепарата на основе гиматомелановых кислот /Н.П.Аввакумова // Тезисы докладов научно-практической конференции «Современные тенденции развития фармации», посвященной 80-летию фармацевтической службы Самарской области, Самарского государственного медицинского университета и Самарского аптечного склада,- Самара., 1999.-С.76-77.

42.Характеристика пелоидопрепарата для физиотерапии на основе гуминовых веществ / Н.П.Аввакумова II Тезисы докладов научно-практической конференции «Современные тенденции развития фармации», посвященной 80-летию фармацевтической службы Самарской области, Самарского государ-

ственного медицинского университета и Самарского аптечного склада - Самара., 1999.-С. 77-78.

43 .Характеристика пелоидопрепарата для физиотерапии на основе гуминовых кислот / Н.П.Аввакум ова // Тезисы докладов научно-практической конференции «Современные тенденции развития фармации», посвященной 80-летию фармацевтической службы Самарской области, Самарского государственного медицинского университета и Самарского аптечного склада,- Самара., 1999.-С. 78-79.

44.Пелоидопрепараты гуминового ряда как способ рационального использования лечебных грязей / Н.П.Аввакумова, Е.А.Сытник, Е.К.Баталова // Тезисы докладов научно-практической конференции «Природные лечебные ресурсы: состав и свойства, механизмы действия, вопросы охраны, разработки и рационального использования», посвященной 50-летию Трускавецкой гидрогеологической режимно-эксплуатационной станции.- Трускавец., 1999.- С.

45 .Исследование органического вещества как необходимое дополнение к общему анализу лечебных грязей / Н.П.Аввакумова, В.А.Кархалев, Н.И. Ме-жевалова // Тезисы докладов научно-практической конференции «Природные лечебные ресурсы: состав и свойства, механизмы действия/вопросы охраны, разработки и рационального использования», посвященной 50-летию Трускавецкой гидрогеологической режимпо-эксплуатационной станции,-Трускавец., 1999,-С.25-27.

46.Гуминовые препараты в лечении ревматоидного артрита / Н.П.Аввакумова // International journal on immunoreabilitation. - 1999.-N. 12-P. 302.

47.Новый способ стимулирования прорезывания ретинированных зубов / Г.В.Степанов, Н.П.Аввакумова // International journal on immunoreabilitation. - 1999.-N.12 - P. 455.

48.Способ получения экстракта биологически активных веществ для физиотерапии из иловых сульфидных грязей /Н.П.Аввакумова // Патент РФ № 2028149 от 09.02.95 г.,- Бюлл. № 4. - б с.

49.Способ получения препарата для физиотерапии / Н.П.Аввакумова // Патент РФ № 2043107 от 10.09.95 г.-Бюлл. 25.-6 с.

50.Способ получения препарата па основе гиматомслановых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей для физиотерапии / Ф.Н.Гильмиярова, Н.П.Аввакумова // Патент № 2122414 от 27.11.98 г.-Бюлл. № 33. - 16 с.

31-33.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Агапов, Альберт Иванович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ПУТИ ОБРАЗОВАНИЯ, СОСТАВ, СТРОЕНИЕ, СВОЙСТВА И ФУНКЦИИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ОРГАНИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ В БИОСФЕРЕ (обзор литературы)

1.1. Пути образования и представления о структуре гуминовых веществ

1.2. Элементный состав и функциональные группы.

1.3. Природа химической связи в макромолекулах гуминовых веществ и их свойства.

1.4. Состав, строение, свойства специфических органических веществ биосферных объектов и пелоидов.

1.5. Биологическая активность специфических органических веществ пелоидов и пелоидопрепаратов на их основе.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Выбор и характеристика объектов исследования.

2.2. Методы исследования органических веществ пелоидов.

2.2.1. Методы определения группового и фракционного состава специфических органических веществ иловых сульфидных грязей.

2.2.2. Получение и физико-химические методы исследования препаратов гуминовых веществ.

2.3. Методы лабораторно-клинического обоснования применения препаратов гуминового ряда.

2.3.1. Методы исследования влияния препаратов на активность лактатде-гидрогеназы и малатдегидрогеназы in vitro.

2.3.2. Методы исследования иммуномодулирующего действия препаратов гуминового ряда in vitro.

2.3.2.1. Методика исследования влияния препаратов на экспрессию

E-рецептора на мембранах лимфоцитов и активность фагоцитов.

2.3.2.2. Методика исследования влияния препаратов на генерацию активных форм кислорода.

2.3.3. Методы исследования влияния препаратов на активность каталазы и супероксиддисмутазы in vivo.

2.3.4. Методы исследования влияния препаратов на некоторые показатели иммунного статуса сыворотки крови.

2.3.5. Методика физиотерапевтического применения препаратов гуминового ряда.

Глава 3. ГРУППЫ И ФРАКЦИИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ОРГАНИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ (результаты экспериментальных исследований).

3.1. Групповой состав гуминовых веществ иловых сульфидных лечебных грязей.

3.2. Фракционный состав и показатели биогеотрансформации гуминовых веществ пелоидов.

Глава 4. СОСТАВ, СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА СПЕЦИФИЧЕСКИХ ОРГАНИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ ПЕЛОИДОВ.

4.1. Состав, строение и оптические свойства препаратов гуминового ряда

4.1.1. Инфракрасные спектры гуминовых веществ.

4.1.2. Электронные спектры поглощения растворов гуминовых веществ

4.2. Элементный состав и сравнительные критерии структуры в ряду гуминовых веществ.

4.3. Парамагнетизм в ряду гуминовых веществ.

4.4. Кислотно-основные свойства в ряду гуминовых веществ.

4.5. Комплексообразовательная способность в ряду гуминовых веществ

4.5.1. Исследование взаимодействия гуминовых веществ с ионами метал- 137 лов-биогенов методом дифференциально-термического анализа.

4.5.2. Исследование комплексообразования в ряду гуминовых веществ методом инфракрасной спектроскопии.

4.5.3. Исследование комплексообразования в ряду гуминовых веществ методом потенциометрического титрования.

4.5.4. Исследование комплексообразования в ряду гуминовых веществ методом электрофореза.

Глава 5. ЛАБОРАТОРНО-КЛИНИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ПЕЛОИДОПРЕПАРАТОВ ГУМИНОВОГО РЯДА.

5.1. Исследования влияния препаратов гуминового ряда на активность малатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в условиях in vitro.

5.1.1. Исследования влияния препаратов гуминового ряда на активность малатдегидрогеназы в условиях in vitro.

5.1.2.Влияние пелоидопрепаратов на активность лактатдегидрогеназы в условиях in vitro.

5.2. Результаты исследования иммуномодулирующего действия гуминовых препаратов in vitro.

5.2.1. Результаты исследования влияния препаратов на экспрессию E-рецептора на мембранах лимфоцитов периферической крови

5.2.2. Результаты исследования влияния препаратов на генерацию активных форм кислорода.

5.3. Результаты исследования влияния препаратов гуминового ряда на активность каталазы и супероксиддисмутазы in vivo.

5.4. Результаты исследования влияния препаратов гуминового ряда на некоторые показатели иммунного статуса больных остеохондрозом.

5.5. Результаты применения препаратов гуминового ряда в условиях курорта «Сергиевские минеральные воды».

Глава 6. СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕЛОИДОПРЕПАРАТОВ ГУМИНОВОГО РЯДА.

6.1. Способ получения экстракта биологически активных веществ для физиотерапии из иловых сульфидных грязей.

6.2. Способ получения препарата для физиотерапии на основе гуминовых кислот.

6.3. Способ получения препарата для физиотерапии на основе гиматомелановых кислот.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Специфические органические вещества лечебных грязей как источник пелондопрепаратов гуминового ряда"

Актуальность проблемы

В настоящее время грязелечение рассматривают как сочетанное воздействие на организм физических (тепло, гидростатическое давление) и химических факторов (минеральные компоненты, неспецифические и специфические органические вещества). Известно, что грязевые процедуры оказывают на организм разностороннее действие: положительно влияют на трофику тканей, синтез белков, нейрофизиологический статус (Коуапк II., 1988), стимулируют функции иммунной системы (Апресин Э.А., 1986). Показаны их антимикробный и антивирусный эффекты (Дегтяренко В.И. и др., 1985), противоопухолевое действие (Севостьянова Н.В., 1998; Flaig а1., 1989).

Грязелечение, как высокоэффективный немедикаментозный метод лечения, реабилитации и профилактики большого числа заболеваний находит все более широкое применение не только в санаторно-курортной системе, но и в больничных стационарах, профилакториях и даже поликлиниках. С другой стороны грязевые процедуры имеют много ограничений и даже противопоказаний в связи с наличием у больных сопутствующих заболеваний, например, выраженной патологии сердечно-сосудистой системы, диабета, астмы и многих других заболеваний, что снижает эффективность использования бесценного дара природы, каким являются лечебные грязи.

С ростом мирового производства, несмотря на спад в нашей стране в последние годы, увеличивается количество химических веществ, мигрирующих через атмосферу планеты и имеющих существенное биологическое значение для биогеоценозов водоемов, где формируются лечебные грязи. Специфические органические вещества их, выполняя биосферную функцию экологического щита человечества, практически необратимо поглощают многие из токсикантов антропогенного происхождения, но при этом сами становятся непригодными для лечебного пользования.

Более десяти лет назад ученые-курортологи Сибири (Стариков Н.М. и другие, 1988), где запасы лечебных грязей, казалось бы, велики, выступили, тем не менее, с инициативами, направленными на их охрану и экономию. Обеспокоенность вопросами сохранения курортных ресурсов, в том числе и грязевых, высказали ведущие ученые России, Российского научного центра реабилитации и физиотерапии МЗ РФ, руководители санаторно-курортных учреждений. Эти вопросы рассматривались на заседаниях научно-методического Совета по проблеме «Курортология» санаторно-курортного объединения федерации независимых профсоюзов «Профкурорт» 4 июня 1997 года и 2 февраля 1999 года в г. Москве.

В результате вышеизложенного, в последнее десятилетие сформировалась необходимость создания на основе лечебных грязей таких препаратов, которые сохраняли бы высокую терапевтическую активность нативных грязей и были свободны от выше указанных негативных сторон классической пелоидотерапии. Они расширили бы ее возможности, снизив число противопоказаний, и повысили эффективность лечения в целом. Такие препараты могут быть получены даже из некондиционных и бывших в употреблении лечебных грязей. Расход лечебной грязи при лечении такими препаратами снижается в тысячи раз по сравнению с нативной пелоидотерапией, что имеет большое эколого-экономическое значение.

Работами ряда авторов (Лещинский А.Ф. с соавторами, 1982,1989; Цветко-ва Л. с соавторами, 1986; Низкодубова C.B., 1997; Шустов Л.П., 1988,1996; Сидоров В.Д., Мамиляева Д.Р., 1997; Самутин Н.М., Кривобоков Н.Г., 1997) показана ведущая роль химического фактора в механизме лечебного действия грязей. По мнению многих исследователей терапевтическая ценность пелоидов обусловлена наличием в них органических веществ различной природы, как неспецифических, так и специфических, характерных только для таких систем, как лечебные грязи. Если неспецифические вещества пелоидов (аминокислоты, белки, липиды, витамины, гормоны как продуценты микрофлоры) в какой-то мере изучались, то специфические органические вещества, абсолютно преобладающие в составе общего органического вещества пелоидов, изучены недостаточно или фрагментарно. В то же время многие авторы считают их ведущим фактором в проявлении биологической активности пелоидов (Самутин Н.М., Кривобоков М.Г., 1997). Высокая и многообразная активность гуминовых веществ обусловлена строением и свойствами, большим набором функциональных групп их макромолекул, способных к образованию разного вида химических связей, внутрикомплексных соединений. Полидисперсность и полифункциональность обеспечивает высокую буферность гуминовых веществ в отношении окислительно-восстановительных, кислотно-основных и комплексообразо-вательных процессов.

Благодаря работам Матис Е.Я. (1983), Низкодубовой C.B. с соавторами (1983) и другим получены и ограниченно используются пелоидопрепараты на основе липидных (неспецифических) фракций органических веществ, в то время как пелоидопрепараты на основе именно специфических органических веществ - единичны (Косьянова З.Ф., 1985; Аввакумова Н.П., 1992).

Обосновать возможность получения биологически активных веществ и получить на их основе иелоидоирепараты гуминового ряда с высокой терапевтической и эколого-экономической эффективностью из иловых сульфидных низкоминерализованных лечебных грязей.

Задачи исследования

1. Дать количественную характеристику состава и структурной организации специфических органических веществ иловых сульфидных грязей на фр^к-ционно-групповом уровне

3. Оценить степень изменчивости состава и свойств гуминовых веществ пелои-дов в одной и в разных природных зонах в зависимости от биогеохимических условий формирование грязевых месторождений с учетом сезонов года.

4. Определить физико-химические параметры выделенных и очищенных препаратов г уминового ряда на количественном уровне, в том числе, как диагно-стико-идентификационные критерии.

5. Количественно охарактеризовать кислотно - основные и комплексообразова-тельные свойства препаратов гуминового ряда.

6. Дать лабораторно-клиническое обоснование возможности и эффективности применения препаратов гуминового ряда.

7. На основе обобщения результатов комплекса использованных методов исследования провести анализ и дать сравнительную оценку биологической активности и терапевтической эффективности препаратов гум и нового ряда в зависимости от их структуры и свойств.

8. Разработать способы получения базовых иелоидопрепаратов гуминового ряда.

Научна^ новизна

Впервые на основе знания структурной организации общего органического вещества пелоидов выделен генетический ряд гуминовых препаратов с закономерно изменяющейся структурой, свойствами и биологической активностью.

Вцервые для гуминовых препаратов пелоидов получены количественные критерии кислотно-основных и комплексообразовательных хелатирующих свойств.

Впервые выявлена влияние препаратов гуминовою ряда на активности ключевых ферментов окислительного метаболизма^ антиоксидантной защиты (су-нероксиддисмутаза, каталаза, лактагдегидрогеназа, малатдегидрогеназа) как в модельных опытах in vitro, так и in vivo, а также на некоторые показатели иммунного статуса организма.

Впервые получена информация о высокой эффективности физиотерапевтического лечения препаратами гуминового ряда больных с неврологическими заболеваниями и заболеваниями опорно-двигательного аппарата.

Впервые предлагаются способы получения препаратов гуминового ряда, эффективных в терапевтическом и эколого-экономическом отношениях.

Научно-практическая значимость

Совокупность новых сведений о составе, строении, физико-химических и биологических свойствах и биохимических механизмах действия гуминовых веществ пелоидов и препаратов гуминового ряда является фактическим руководящим материалом как в оценке лечебных свойств нативных пелоидов и пелои-допрепаратов, так и обоснования их применения.

Полученные препараты гуминового ряда, как очищенные концентраты основных действующих веществ, переведенных в более активную форму, позволяют регулировать воздействие на организм путем изменения концентраций их растворов и режимов физиотерапии. Это позволяет снизить число больных, которым противопоказана пелоидотерапия как основной лечебный фактор грязевого курорта из-за ее высокой «нагрузочности», например, на сердечнососудистую систему, при диабете, астме или спинальным больным с пролежнями.

Эколого-экономическая эффективность препаратов велика: по минимальным оценкам можно считать, что из той массы кондиционной лечебной грязи, которая расходуется на цикл лечения одного больного может быть получено такое количество препарата, которым можно пролечить не менее 10 тысяч больных, причем возможно использование некондиционной грязи. Экономический эффект применения препаратов может быть еще более увеличен, повышена культура труда врачей - пелоидотерапевтов, например, при сочетанном применении гуминовых препаратов с такими современными технологиями лечения как микроэлектрофорез по биологически активным точкам.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Состав, строение и свойства специфических органических веществ пе-лоидов являются функцией биогеохимических условий их формирования в грязевых месторождениях. Особенно существенные отличия имеют специфические органические вещества пелоидов разных природных зон. Менее существенно различаются по составу и свойствам специфические органические вещества пелоидов одного региона, которые формируются в условиях геохимически различающихся подстилающих пород, минерализации грязевого раствора и окислительно-восстановительных условий. По этим причинам как & целях нативной пелоидотерапии, так и при получении пелоидопрепаратов гуминового ряда необходима учитывать групповой состав гуминовых веществ.

2. Фульвокислоты, гиматомелановые, гуминовые кислоты и суммарное органическое вещество являются сложными высокомолекулярными полидисперсными, поликонденсированными полисопряженными веществами, закономерно отличающимися степенью выраженности перечисленных признаков, молекулярно-массовым распределением, элементным составом макромолекул, степенью окисленности и ароматичности, термодинамической устойчивостью^ концентрацией свободных радикалов, кислотно-основными, окислительно-восстановительными и комплексообразова-тельными (хелатирующими) свойствами. На основании общности путей образования групп специфических органических веществ и отмеченного выше их химического сходства можно считать фульвокислоты, гиматомелановые, гуминовые и суммарное органическое вещество генетическим рядом гуминовых веществ пелоидов.

3. Фульвокислоты, гиматомелановые, гуминовые и суммарное органическое вещество пелоидов обладают разнообразной биологической активностью, принимая участие в биохимических процессах организма, обуславливающих его ферментативный и иммунный ллатус, что в свою очередь обеспечивает достаточно высокую терапевтическую эффективность этого ряда гуминовых препаратов.

4. Уровень биологической и терапевтической активности препаратов гуми-нового ряда находится в достаточно хороша выраженной зависимости от состава, строения и свойств представителей гуминового ряда и проявляется при многих заболеваниях (опорно-^ двигательный аппарат, неврологические заболевания).

5. Преимуществом пелоидопрепаратов гуминового ряда является относительная однородность, отсутствие нежелательных примесей (экологическая чистота), возможность дозированного регулируемого применения, наличие меньшего количества противопоказаний но сравнению с прямой пелоидотерапией.

6. Пелоидопрепараты гуминового ряда позволяют реализовать ресурсосберегающие подходы в курортной практике, они обладают высокой экодо-го-экономической эффективностью и повышают культуру врачей - пелри-дотерапевтов.

Апробация и внедрение результатов работы

Результаты исследований представлены на съезде^ фармацевтов (г.Ярославль, 1987 г.), научно-практической конференции, посвященной 50-летию образованию курорта Янган-Тау (г.Уфа, 1987 г.), областной научно-практической конференции «Научно-технический прогресс и медицина (г.Куйбышев, 1988 г.), 14-й научно-практической конференции по вопросам курортного лечения (г.Куйбышев, 1988 г.), республиканской научно-практической конференции «Современные проблемы использования физических факторов в комплексном лечении и реабилитации больных заболеваниями опорно-двигательного аппарата, нервной системы и женских половых органов» г.Одесса, 1989 г.), республиканской научно-практической конференции «Пути уменьшения антропогенного воздействия на природные курортные ресурсы» (г.Одесса, 1990 г.), 1-м Международном конгрессе «Иммунореабилитацид и реабилитация в медицине» (Дагомыс, 1994 г.), научно-практической конференции, посвященной 25-летик> фармацевтического факультета СамГМУ (Самара, 1996 г.), Ш-м Международном конгрессе «Иммунореабилитация и реабилитация в медицине» (Эйлат, Израиль, 1997г.), международной научной конференции «Природные (курортные) и преформированные физические факторы в профилактике и лечении болезней человека» (Москва-Иваново-Оболсуново, 1997 г.), научной конференции «Моделирование и прогнозирование заболеваний, процессов и объектов» (Самара, 1998 г.), Международной научно-практической конференции «Экономика природопользования» (Пенза, 1998), Международной научно-практической конференции «Почва, отходы производства и потребления: проблемы охраны и контроля» (Пенза, 1998 г.), 1У-м Международном конгрессе «Иммунореабилитация и реабилитация в медицине» (Сочи, 1998 г.),

Межрегиональной научно-практической конференции «Роль природных фащюf ров в санаторно-курортном лечении» (Казань, 1998 г.), Международной научно-практической конференции «Экология и жизнь» (Пенза, 1999г.), заседании научно-методического совета но проблеме «Курортология» департамента медицинской работы санаторно-курортного объединения ФНПР «Профкурорт» (Москва, 1999 г.), на совместном заседании Самарского отделения биохимического общества Российской Федераций и кафедр биологической и клинической биохимии; общей и биоорганической химии; фармацевтической химии; органической, физической, коллоидной химии фармацевтического факультета; лаборатории иммунологии научно-исследовательского центра СамГМУ.

Изданы методические рекомендации для врачей физиотерапевтов, гинекологов, невропатологов «Физиотерапевтическое применение пелоидопрепаратов из лечебных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды» при гинекологических заболеваниях», «Физиотерапевтические способы применения пелоидо-препаратов из лечебных грязей курорта «Сергиевские минеральные воды» при заболеваниях опорно-двигательного аппарата»; для сотрудников геолого-гидрохимических лабораторий - методические рекомендации «Определение групповрго и фракционного состава специфических органических веществ иловых сульфидных грязей».

Получены патенты на изобретения;

1. «Способ получения экстракта биологически активных веществ для физиотерапии из иловых сульфидных грязей» №2028149 от 20.07.1992г.

2. «Способ получения препарата для физиотерапии» №2043107 от 20.07.1992г.

3. «Способ получения препарата на основе гиматомелановых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей для физиотерапии» №21:22414 от 1&04,1997г.

4. Удостоверение на рационализаторское предложение №325 от 09:03.1999г. Самарской областной клинической стоматологической поликлиники «Индивидуальная ложка для проведения аппликаций экстрактами лечебной грязи.

Поданы заявки на патенты и получены приоритетные справки;

1. «Способ лечения хронического аднексита»,

Регистрационный номер 97119551/14(020785),

2. «Способ лечения ревматоидного артрита»,

Регистрационный номер 98112715114(014134),

3. «Способ стимуляции задержавшихся в прорезывании постоянных зубов», Регистрационный номер 98118948,

Гуминовые препараты на основе методических рекомендаций «Способы применения препаратов из лечебной грязи и рапы в физиотерапии»* утвержден

16 ных МЗ СССР 29 декабря 1988 г. внедрены в лечебный процесс врачами курорта «Сергиевркие минеральные воды».

Данные по характеристике, строению, свойствам органических веществ пе-лоидов включены в учебный процесс кафедр общей и биоорганической химии, кафедры курортологии и физиотерапии СамГМУ.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, указателя литературы. Библиография содержит 330 источников, в том числе 234 на русском языке и 96 на иностранном, Работа изложена на 278 страницах машинописного текста, иллюстрирована 29 таблицами и 74 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Агапов, Альберт Иванович

ВЫВОДЫ

4. Гуминовые, гиматомелановые, фульвокислоты и суммарный препарат могут быть идентифицированы с помощью ИК-спектров, элементного анализа, степени окисленности, степени бензоидности, коэффициента цветности и оптической плотности 0,001% растворов их натриевых солей, которые могут оказаться необходимыми и достаточными показателями стандартизации этих веществ как лекарственных препаратов.

6. Возрастание относительного количества свободных радикалов гуминовых препаратов соответствует ряду: гуминовые кислоты > суммарный препарат > гиматомелановые кислоты > фульвокислоты.

7. Возрастание полифункциональности и основности гумусовых кислот соответствует ряду: фульвокислоты < суммарный препарат < гиматомелановые кислоты < гуминовые кислоты. Сила кислот изменяется в обратном порядке.

8. Комплексообразователъная способность - фундаментальное свойство гуминовых веществ. По способности к образованию хелатных анионных комплексов гуминовые вещества образуют ряд: гуминовые кислоты > гиматомелановые кислоты > суммарный препарат > фульвокислоты.

9. Состав, строение и совокупность разнообразных физико-химических свойств препаратов гуминового ряда обеспечивают наличие разнообразной биологической активности.

10. На молекулярном уровне биологическая активность препаратов гуминового ряда проявляется через неоднозначное влияние на активность ключевых ферментов - каталазы, супероксиддисмутазы, малатдегидрогеназы и лактатде-гидрогеназы, через нормализацию показателей иммунного статуса сыворотки крови.

11. На клеточном уровне биологическая активность проявляется через подавление генерации активных форм кислорода и стимуляцию лимфоцитов крови.

12. На организменном уровне биологическая активность проявляется через высокий противовоспалительный эффект при таких заболеваниях, как ревматоидный артрит, остеохондрозы, гинекологические заболевания.

13. Предлагаемые способы получения препаратов гуминового ряда позволяют получить в условиях курортов очищенные, терапевтически высокоэффективные эколого - экономически выгодные препараты для физиотерапии.

практические рекомендации

2. Перспективными источниками получения пелоидопрепарагов гуминового ряда являются пелоиды, содержащие специфические органические вещества фульвато-гуматного типа с большей долей гуминовых кислот. Экологически и экономически выгодно использование некондиционных лечебных грязей.

3. Перспективным способом получения пелоидопрепарагов гуминового ряда является кислотно-основной способ с применением экологически безопасных реактивов и технологии,позволяющей получить- очищенные от вредных примесей терапевтически эффективные препараты для физиотерапии.

5. Наиболее эффективно электрофоретическое применение изотонированной водной 0,05% - 0,1%-ной лекарственной формы гуминовых кислот при лечении больных артритами, остеохонд розам и и гинекологическими заболеваниями.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Агапов, Альберт Иванович, Самара

1. Абросимова Е.К., Саранина К.Н. Природные лечебные факторы курорта «Сергиевские минеральные воды». Свердловск, 1959. - 51 с.

2. Аввакумова Н.П. Физико-химическая характеристика и биологическая активность гумусовых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей: Автореф. дисс. . канд.биол. наук.-Уфа, 1992.-21с.

3. Авторское свидетельство № 1500918 СССР МКИ 01 № 21/47. Способ определения содержания гумуса пахотных почв / В.В.Кузнецов, В А.Бочков. № 4317508/31-25; Заявлено 1410.87. Опубликовано 15.08.89. Бюлл. № 30.

4. Авторское свидетельство № 1172559 СССР 4А61К35/78. Способ получения каратиноидов из иловых грязей /А.Л. Шинкаренко, И.Ф. Щербак. № 3613440/28-13; Заявлено 30 06.83; Опубликовано 15.08.85. Бюлл. № 30.

5. Авторское свидетельство № 1215719 СССР МКИ А 61 К 1/30. Способ лечения ревматоидного артрита /Л О Голосова, Е.Л.Боровикова, Н.М.Стариков и др. № 3602411/28-14; Заявлено 18.04. 83; Опубликовано 07.08.86. Бюлл, № 9.

6. Авторское свидетельство № 1313442 СССР МКИ А 62 Н 23/60. Способ лечения хронических воспалительных заболеваний в стадии обострения /С.В.Низкодубова и др. № 332953/2844; Заявлено 28.07.81; Опубликовано3005.87. Бюлл. № 20.

7. Агапов А.И., Аввакумова Н.П. Способ получения экстракта биологическиактивных веществ дня физиотерапии из иловых сульфидных грязей: Патент РФ № 2028149 от 09.02.95. Бюлл. № 4.-6 с.

8. Агапов. А.И., Аввакумова Н.П. Способ получения препарата для физотера-пии: Патент РФ № 2043107 от 10.09.95. Бюлл. № 25,- 6 с.

9. Адилов В.Б., Михеева Л. С., Требухов Я.А. К вопросу о систематизации лечебных грязей //Вопросы изучения лечебных минеральных вод, грязей и климата; Труды ЦНИИКиФ. М.: 1980. - Т. 53. - С. 90.

10. Александрова Л.Н. Органическое вещество почвы и процессы его трансформации. -М.: 1980. — 287с.

11. Александрова Л.Н., Назарова A.B. Гетерогенность гуминовых кислот и ее происхождение // Проблемы почвоведения. -1978. С. 48-^2.

12. Алесковский В.Б; Физико-химические методы анализа -Л.: 1988,- С.23-31.

13. Алиев С.А., Эфендиева Ф.М., Алиев A.A., Кадыров A.A. Органическое-вещество сопочных грязей Азербайджанской ССР // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1981. № 2. - 73-75.

14. Алиев С.А. Парамагнетизм и физиологическая активность гумусовых веществ // Тезисы докладов VIII Всесоюзного съезда почвоведов,- Новосибирск : 1989. С. 10.

15. Алябина Г.А., Жигунов A.B., Шурухина С.И. Использование гель-хромотографии в изучении гуминовых веществ почвы // Почвоведение.1975.-№ 9.-С. 55-62.

16. Аммоеова Я.М., Балаганская Е.Д. Свойства гуминовых кислот окультуренных подзолистых почв Мурманской области // Почвоведение. 1991. - № 7. -С. 29-39.

17. Аммоеова Я.М., Косья нова З.Ф., Орлов Д.С. Сравнительная ха-хактеристика гумусовых кислот почв и лечебных грязей // Тезисы докладов 2-го Всесоюзного совещания по геохимии углерода; -М.: 1986. С. 238.

18. Антонова З.П., Скалабан В.Д., Сучилкина Л.Г. Определение содержания в почвах гумуса//Почвоведение. 1984. -№ 11. - С.77т78.

19. Апресин Э.А. Эффективность комплексного лечения антибактериальными препаратами и пелоидопрепаратами у больных туберкулезом легких: Авто-реф. дисс. канд. мед. наук. Казань, 1986.-19 с.

20. Ахмедов Н.К., Бабаева М.Я. Влияние грязе- и мапштотерапии в раннее сроки после травмы сосудов на восстановление окольног о кровотока // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры.-1990,- № 2,-С.55т57.

21. Бабанин В. Ф. Исследование взаимодействия гуминовых кислот с катионами металлов методом электронного парамагнитного резонанса и магнитныхизмерений//Почвоведение. 1983,- № 7.- С.66-69.

22. Бабанин В.Ф., Ильин Н.П.Г Орлов Д,С. и др. О природе линий в спектрах

23. ЭПР гумусовых кислот//Почвоведение.-1977. № 1. - С. 65-72.

24. Бабина Л.М., Котляров В.В., Цветков В.А. Влияние лечебных процедур различных температурных режимов на состояние детей больных детским церебральным параличом // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебнойфизкультуры. 1991,- № 5.- С.54.

25. Базелян В.Л., Коломейченко Г.Ю., Ткаченко Г.Г. и др. Исследование гумусовых кислот различного происхождения методом ИК-спектроскопии // Сборник научных трудов ГосНИИ озерного и речного рыбного хозяйства. -М. : 1988.-№287.-С. 109-114.

26. Баталкин Г.Г. О природе действующего начала физиологически активных гуминовых кислот // Труды международного симпозиума IV и XI комиссии МТО «Торф, его свойства и перспективы применения»,- Минск : 1982.-С. 1:15-119.

27. Бахман В.И., Овсянникова К.А., Вадковская А.Д. Методика анализа лечебных грязей (пелоидов)/ ЦНИИКиФ- М.: 1965.- 217 с.

28. Баширова JI.B. Характеристика морфологических реакций нервных элементов кожи при действии постоянного тока и электрофореза 1%-ного раствора сухого экстракта грязи // Препараты из лечебной грязна и рапы,- Томск : 1983-.-с.

29. Беллами Л. Новые данные по ИК-спектрам сложных молекул М,: 1963. -318 с.

30. Бийчанинова А.Д., Низкодубова C.B., Буркова ВН. Липидные компоненты грязевых препаратов и возможный механизм их действия на организм а позиции концепции информации // Лечебное применение пелоидов и препаратов на их основе. -Томск : 1988,-С. 21- 27.

31. Блюменфельд Л.А., Воеводский В.В., Семенов А.Г. Применение электронного парамагнитного резонанса в химии. Новосибирск : 1962,- 240 с.

32. Бескровный A.M., Котляренко И.П., Сукачева O.A. и др. Биологически активные искусственные гуминоподобные соединения // Биологические науки. Почвоведение. 1979. № 3. - С.85-89.

33. Богданова И.В., Лютова О.В. Сравнительная характеристика состава жидких и сухих препаратов на основе лечебной грязи озера Карачи // Препараты из лечебной грязи и рапы. -Томск : 1983. -С. 7-11.

34. Бракш H.A. Сапропелевые отложения и пути их использования. Рига : 197 К- 5,6 с.

35. Бродской Д.С., Никитин Л.Н. Анализ гуминовых кислот почв методом ли-ролитическсй масс-спектрометрии И Почвоведение. 1983. - № 10. - С. 17-21.

36. Брожек Б;, Бенда Я. Об исследовательской проблематике & области пелоидотерапии и пелоидологии // Труди VI Всесоюзного съезда физиотерапевтов и курортологов. -М.: 1973. С. 234-2ß8.

37. Валиев Б., Сизиков С. Изменение содержания гумуса и питательных элементов в серо-бурых почвах при освоении // Проблемы освоения пустынь. -1988. № 4. - С. 76-^8.

38. Варшал Г.М., Бугаевский A.A., Холин Ю.В. и др. Моделирование равновесий в растворах фульвокислот природных вод // Химия и технология воды.

39. М. : 1990. № 11- G. 979-986.

40. Варшал Г.М., Кащеева И.Я. Геохимические пути миграции искусственных радионуклидов в биосфере и др. // Тезисы докладов 4-ой конференции Научного Совета при ГЕОХИ АН СССР по программе «АЭС-ВО». М.: -1990. -С.12Ц22.

41. Варшал Г.М., Велюханова Т.К., Кощеева И.Я. Геохимическая роль гумусовых кислот в миграции элементов // Гуминовые вещества в биосфере.- М.: 1993.-С. 97-117.

42. Варшал I '.М., Велюханова Т.К., Кощеева И.Я. и др. // Комплексообразова-ние благородных металлов с фульвокислотами природных вод и геохимическая роль этих процессов // Аналитическая химия редких элементов,- М. : 1988. С. 112-146.

43. Венгеровский В.Н., Буркова ВН., Паульс О.В. и др. О гепатозащитых свойствах липидов иловых грязей // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1988. № 5. - С. 46.

44. Возбуцкая А.Е. Химия почвы. М. : 1968. - 412 с.

45. Воинова В.Н., Таранина Л.Ф. Активность редоксферментов при разложении гумусовых препаратов в почве // Тезисы докладов VIII Всесоюзногосъезда почвоведов. Новосибирск : 1989,- С.210.

46. Выгоднер Е.Б., Серебряков С.Н., Рузова Т.К. и др. Применение физическихфакторов на воротниковую область при язвенной болезни желудка и 12-перетной кишки // Вопросы курортологии^ физиотерапии и лечебной физкультуры. -1990. ~№ 2. С. 41-45.

47. Гаранина О.П., Протеолитическая и липолитическая активность плесневых грибов и актиномицетов лечебных грязей Красноярского края Тувы // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1985. - № 4. - С. 21г25.

48. Гильмиярова Ф.Н., Агапов А.И., Аввакумова H.H. Способ получения препарата на основе гиматомелановых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей для физиотерапии // Патент № 2122414 от 27.11.98. -Бюлл. № 33. С. 16

49. Гембицкий Е.В. Оценка иммунного статуса организма в лечебных учреждениях Советской Армии и Военно-Морского флота. Методическое пособие. М.: 19&7,- бас.

50. Глазкова Л.П., Улащик B.C., Пуптус Ф;А. Некоторые итоги экспериментального изучения электрофореза гуминовых кислот // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1984. № 2.-С.5-12.

51. Глебова Г.И. Гиматомелановые кислоты почв и их место в системе гумусовых веществ: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М.: 1980. - 21.

52. Глебова Г.И. Гиматомелановые кислоты почв,- М.: 1985. 73 с.

53. Глебова Г.И., Ларионова A.A. Гиматомелановые кислоты почв ру-хостепного ряда//Вестник МГУ. Серия 17. - 1990; -№ 1, - С. 26-30.

54. Глебова Г.И., Ларионова A.A., Орлов Д.С. Структурные различия гимато-мелановых и гуминовых кислот чернозема типичного // Почвоведение. -1985. -№? 7. С. 3-1-37.

55. Глебова Г.И., Орлов Д,С. Элементный состав и коэффициент экстинкыии гиматомелановых кислот почв // Научные доклады высшей школы. Серия : биологические науки. -1980. № 9. - С. 95-100.

56. Горовая А. И., Н.М.Грановский, Л.В.Кравцова и др. Влияние физиологически активных веществ гумусовой природы на функциональную активность растительных, животных и мшфобных клеток // Тканевая терапия по Филатову. Одесса: 1977. - 31 с.

57. Горовая А.И. Влияние гумусовых соединений н пестицидов на миотичес^ий цикл меристем корней7/ Клеточный цикл растений. Киев: 1992. - 195 с.

58. Горовая А.И., Орлов Д.С, Щербенко О.В. Гуминовые вещества,- Киев: 1995.-С. 304.

59. Горчакова Г.А. Изучение механизма действия и клинического применения лечебной грязи в Одесском НИИ курортологии в 10-ой пятилетке // Курортология и физиотерапия. Киев : 1982. -С. 3-7.

60. Горчакова Г.А., Павлова Е.С., Ручкииа A.C., Скридоненко А.Д. Грязелечение больных ревматоидным артритом с иммунологической недостаточностью // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры.-1989.-№5.- С. 32-35.

61. Гришина Л.А. Трансформация органического вещества и гумусное состояние почв: Дисс. докт. биол. наук, М.: 1983,- 453, с.

62. Гулько А.Е. Взаимодействие пероксидазы с гуминовыми кислотами // Труды 10-й научной конференции молодых ученых факультета почв, МГУ. -Деп. в-ВИНИТИ 21,07.89. 4884-В&9. -1989. С.17-18.

63. Гумусовые вещества, выделенные из природных лечебных грязей (природа, состав и физико-химические свойства) : Отчет о НИР ЦНИИ курортологии и физиотерапии / Руководитель Черепанова Н.М. Инв. № 02850011826 -М.: 1985.- 54 с.

64. Гуревич В,С., Кантирщинова К.Н., Шатилин Н.В. Сравнительный анализ двух методов определения активности суиероксиддисмутазы // Лабораторное дело. 1990. - № 4,- С. 44-47.

65. Гусаров И.И. Проблема преформирования природных лечебных факторов // Лечебное применение пелоидов и препаратов на их основе. Томск : 1988. -С. 111-119.

66. Державин Л.М., Седова Е.В. К вопросу о воспроизводстве гумуса,// Агрохимия. 1988. - № 9, - С. П7-127.

67. Дегтяренко В.И., Зеваков В.Ф., Дивога В.А., Лященко В.Ю. Противовирусная активность гуминовых веществ Куяльницкой грязи // Пелоидотерапия распространенных заболеваний. Пятигорск : 1985. - С. 40-45.

68. Драгунов С.С. Химическая природа гумусовых кислот // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Киев : 1962. - 11 с.

69. Драгунов С.С., Мурзаков Б.Г. Гетерогенность фульвокислот обыкновенного чернозема// Почвоведение. № 3. 1970. -С. 1Г5-421.

70. Дриневский Н.П., Г'армаш О.И. Состояние тромбоцитарного звена гемостаза у детей, больных ревматоидным артритом, и его изменения под влиянием грязелечения // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1988. -№3, С. 26.

71. Жуков Б.Н., Яковлев В.Г., Шебуев М.Г., Коршикова Т.В. Курорт "Сергиевские минеральные воды" и его лечебные факторы // Саратов; 1990— С. 4.

72. Заводяк М.И., Цокало В.А., Шманько В И. Эффективность озокерито-, бальнео- и физиотерапии в комплексном лечении больных сахарным диабетом (отдаленные результаты} // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры, 1988. - № 4, -С. 55.

73. Загула Д.Г. Микробиологические аспекты научения злокачественных опухолей. Киев : 1976. - 211 с.

74. Збинден Р. Инфракрасная спектроскопия высокополимеров. М. : 1966. -355 с.

75. Зинин H.Q. Изучение и применение лечебной грязи озера Молочка на курорте "Сергиевские минеральные воды" // Грязи и их лечебное применение -Киев : 1969; -С.32-£3.

76. Золотарева Т.А. Исследование некоторых сторон механизма действия лечебных грязей при экспериментальном гепатите // Вопросы курортологи^, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1979, - № 1, - С. 45-48.

77. Золотарева Т. А. О роли химического фактора в биологическом действии лечебной грязи // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1988. -№ 2. ^С. 50-52.

78. Золотовицкая Л.Е. Федоров А,А. Новые методики физиотерапии при язвенной болезни 12-иерспюй кишки // Актуальные вопросы учения о язвенной болезни. Саратов : 1986. - С. 91-94.

79. Зольникова А.И. К вопросу о действии пелоидов на организм // Материалы Всесоюзной научной конференции по экспериментальной курортологии и физиотерапии. М.: 1962. - С. 128-132.

80. Зубрилина II.Г. СМТ-форез экстракта грязи при неврологических проявлениях шейного остеохондроза // Лечебное применение пелоидов и препаратов на их основе. Томск : 1988. -С. 71-75.

81. Зырин Н.Г. Физико-химические методы исследования почв,- М. : 1980. -381 с.

82. Иванов В.В. Рекомендации по изучению месторождений лечебных грязей. -М. : 1975.-327 с.

83. Иванов В.В-., Малахов^ A.M. Генетическая классификация лечебных грязей (пелоидов) СССР // Материалы по изучению лечебных грязей, грязевых озер и месторождений. М. : 1963. - С. 9-25.

84. Ильин Н.П., Глебова Г.И., Орлов Д.С. Фотолиз и деформация молекул гу-миновых кислот при изменении освещенности, влажности и температуры // Гуминовые удобрения. Теория и практика применения. Днепропетровск : 1973. - С. 228.

85. Ингрэм Д. ЭПР в свободных радикалах. М. : 1961. - 319 с.

86. Ингрэм Д. Электронный парамагнитный резонанс в биологии, М.: 1912. -С. 191493.

87. Иощенко С.Е. О влиянии гуминовых и фульвокислот сапропеля на НАДН-оксидазную активность митохондрий печени // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1986. № 5. - С. 31-33.

88. Иванова Т.Г., Тронова Т.М., Капилевич Л.В, и др. Использование canjpo-пелей при остеохондрозе у участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1997. - № 3. - С. 23-25.

89. Карпухин А.И. Состав и свойства комплексных соединений органическоговещества почвы с ионами металлов. Известия ТСХА,- 1989. - Вып.1.- С.58-67.

90. Касаточкин В.И., Зильбербранд О.И. Рентгенография и ИК-спектроскопия в применении к исследованию строения гумусовых веществ // Почвоведение. -1956. -№-5. С. 80^5.

91. Каспаров C.B., Тихомиров Ф.А., Флесс А.Д. Применение метода диск-электрофореза для фракционирования гуминовых кислот // Вестник МГУ. Серия почвоведения, -1981. № 1,- С.59-61.

92. Кеель Э,И. Новый лечебный препарат "Гумизоль", изготовленный из Эстонской морской грязи // Тезисы докладов совещания по материалам апробации лечебного препарата "Гумизоль". Таллин : 1960, - С. 4-5.

93. Кеель Э.И. Факторы действия лечебной грязи и "I умизоля" У/ Труды Эстонского института экспериментальной и клинической медицины AfylH СССР. Таллин: : 1966. - Вып. 3. - С. 7-14.

94. Кесслер М. Методы инфракрасной спектроскопии в химическом анализе. -М. : 1964.-411 с.

95. Климова В. А. Основные микрометоды анализа органических соединений. -М. : 1975.-С. 52-83.

96. Колесников М П., Аммосова Я.М. ЭПР-спектроскопия свободных радикалов почвенных гуминовых кислот // Накопление и преобразование седикахи-тов,- М. : 1979. С. 187-194.

97. Комиссаров И.Д. Химическая природа гумусовых веществ, их образование и трансформация в биосфере // Тезисьг доютадов совещания "Проблемы jry-муса в земледелии". Новосибирск : 1986. - С. 7-9.

98. Комиссаров И,Д., Климова А.А> Влияние гуминовых кислот на биокатадитические процессы // Труды Тюменского сельскохозяйственного института. -Тюмень : 1971. Т. 14. - G. 225-242.

99. Комиссаров И.Д., Логинов Л.Ф. Электронный парамагнитный резонанс в гуминовых кислотах // Гуминовые препараты. Тюмень: 1971. - С. 17.

100. Комиссаров И.Д., Логинов Л.Ф., Стрельцова И.Н. Спектры поглощения гуминовых кислот // Труды Тюменского сельскохозяйственного института. -Тюмень : 1971. Т. 14. - С. 75-90.

101. Комиссаров И.Д., Логинов Л,Ф. Молекулярная структура и физико-химические свойства гумусовых веществ // Тезисы докладов У111-го Всесоюзного съезда почвоведов. Новосибирск : 1989. - С. 45.

102. Кононова М.М. Органическое вещество почвы, ею природа, свойству и методы изучения. М. : 1963. - С. 192.

103. Кончиц В.А., Черников В.А. Влияние приемов препаративного выделения гуминовых кислот на их элементарный состав // Известия ТСХЛ, -1977. № 1, -С. 99-109.

104. Корнилова М.Г. К вопросу изучения антибактериального действия сапропеля оз. Малый Тараскуль // Грязи и их лечебное применение. Киев : 1969. -С. 35-36.

105. Костадинов Д., Кръстева Д., ДафиноваЯ. и др.Терапевтични възможности на нов български торфен препарат "Торфосол" при болни с остеоартроза // Курортология, физиотерапия. София : 1987. - Т. 24. - № 14. - С. 21-27.

106. Косьянова З.Ф. Химическая характеристика и биологическая активность гумусовых кислот некоторых лечебных грязей: Автореф. . канд. биол. наук. M. : 1-98-5-. - С. 20.

107. Косьянова З.Ф., Шинкаренко А.Л. Спектрофогометрическое определениесодержания гуминовых кислот в лечебных грязях // Труды VII Всесоюзного семинара «Органические вещество в современных и ископаемых осадках)}. -Ташкент: 1982.

108. Кочетов А.И. Определение углерода в почвах на экспресс анализаторе АН-7529 // Тезисы докладов VII Всесоюзного съезда общества почвоведов^. -Ташкент: 1985. С. 122.

109. Кревелен Д.В. Графостатический метод изучения струкгуркг и образования угля // Химия твердого топлива. М. - JI. : 1951. - Т. II. - С. 11-43.

110. Критерии оценки качества лечебных грязей при^разведке, использование и охране. М. : 1987.-С. 37.

111. Крылов O.A. Фундаментальные исследования в развитии курортологии и физиотерапии // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры.-1986.6. С. 3-11.

112. Куклин Д.Н. Отчет о ревизионной разведке грязевых месторождений Те-пловка и Молочка it детальной разведке оз, Солодовка курорта "Сергиевские минеральныеводы". -М. : 1978.-56с.

113. Кухаренко Т. А., Екатеринина Л.Н. Гиматомелановые кислоты ископаемых углей-// Почвоведение. 1960. -№ 12. - С. 64-70.

114. Ларина Н.К., Касаточкин В.И; Спектральные методы исследования гуминовых веществ почв // Физико-химические методы исследования почв-; Адсорбционные и изотопные методы. М. : 1966. - 171 с.

115. Лебедев К.А., Понякина И.Д.Иммунограмма в клинической практике. Методические указания. М. : Наука, 1990,- С. 68-70.

116. Лещинекий А.Ф: О механизме действия пелоидотерапии на воспаление // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1979. -№1,-С. 9-11.

117. Лещинский А.Ф. Изучение роли химического состава и некоторых физико-химических особенностей пелоидов в их экспериментально-терапевтическом эффекте //Ревматизм. -М.: 1975. Вып. 8. - С. 166-171.

118. Лещинекий А.Ф., Павлова Е.С. Изучение механизма влияние лечебной грязи на иммуногенез при экспериментальном аллергическом артрите // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1967. №2. -С. 146451.

119. Лещинекий А.Ф., УлащикВ.С. Комплексное использование лекарственных средств и физических лечебных факторов при различной патологии. Киев: 1989. - С. 240.

120. Лиштван И.И., Круглицкий H.H., Третинник В.Ю. Физико-химическая механика гуминовых веществ, Минска 1976. - С. 262.

121. Лукошко Е.С. Хоружик A.B., Смычник Т.П. Влияние возраста торфа на состав гуминовых веществ. М. : 1982,- С. 167.

122. Мазина О.И. Изучение гуминовых кислот тростникового торфа методом термического анализа// Известия АН БССР, серия химических наук; Минск : 1982. - № 1. - С. 85п89.

123. Малама A.A. Влияние меланиновых пигментов^ образуемых микроорганизмами, на резистентность мышей к рентгеновскому облучению // Радиобиология. -1972. Т. 12. - С. 289-291.

124. Малахова И.Г., Дементьева Т.В. Химические и биологические свойства низинных торфов // Тезисы докладов XI научно-технической конференции молодых специалистов " Торфяная промышленность народному хозяйству". -Л. : 1991.-С. 15-17.

125. Мальчуковский Л.Б., Карпова К.В. Сезонная динамика БАВ и других компонентов Тамбуканской лечебной грязи // Пелоидотерапия распространенных заболеваний. Пятигорск : 1985. - С. 33-40.

126. Манская С.М., Дроздова Т.В. Органическое вещество современных и ископаемых осадков, М. : 1971. - С. 143-169.

127. Маргоул А., Конделик П. Растворимость гуминовых кислот в спиртах // Почвоведение; 1965. - № 3. - С. 96-97.

128. Мастиашвили А.Г. Бактерицидные свойства грязи оз. Масазыр // Сборник научных трудов Азербайджанского НИИКиФ; Баку : 1960. -№ 5. - С. 327331.

129. Матис Е.Я., Кураколова Е.А. и др. Антиокислительная активность липидов и их отдельных фракций из различных лечебных грязей // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов, Томск : 1984.-С. 166-169.

130. Матис Е.Я., Буркова В.Н. Оценка антиокислительной способности лечебной грязи // Препараты из лечебной грязи и рапы. Томск : 1983. С. 1922.

131. Матис Е.Я., Кураколова Е.А. Липиды лечебных грязей и их биологическая активность. Методы получения из различных пелоидов и общие свойствали-пидов // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск: 1984. - С. 163-166.

132. Милановский Е.Ю. Применение ионного детергента в гель-хроматографии гумусовых кислот почв // Почвоведение. -1984.- № 8. С.47-49.

133. Милевская С. Г., Родионова Т.Ф. Лазеротерапия в сочетании с фонофоре-зом мази "Пелан" в лечении псориатического аргрита // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1991. -№ 2. С. 52-54.

134. Михеева Л,С. Лечебные минеральные сульфидные грязи (к вопросу о классификации) И Труды ЦНИИКиФ. 1984. - С. 82-98.

135. Михеева Л.С. Состав и свойства лечебных минеральных сульфидных грязей // Обобщения материалов по изучению курортных ресурсов в лечебных целях. М. : 1985. - С. 87-98.

136. Михеева Л.С., Требухов Я.А. Лечебно-грязевая база курортов и пути её расширения // Материалы Всесоюзного симпозиума по вопросам изучение, разведки и использования минеральных вод, лечебных грязей. М. : 1983. -G. 25-31.

137. Михеева Л.С., Требухов Я.А. Критерии оценки качества лечебных грязей при их разведке, исследовании и охране // Методические указания; М. : 1987. -23, с.

138. Мишустин E.H., Никитин Д.И. Атакуемость гуминовых кислот почвенной микрофлорой // Микробиология. -1961. Т. 30. - Вып. 5. - С. 841-848.

139. Монцевичюте-Эрингене. Упрощенные математическо-статистические методы в медицинской исследовательской работе // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. -1964. Т. 8. -№ 4. - С. 71-78.

140. Москвин В.П., Белоусова Т. В., Опалйнская А.М. К вопросу о формировании лечебных свойств сульфидных грязей // Лечебное применение пелоидов и препараты на их основе. Томск: 1988. - С. 44-50.

141. Муляк В.Г., Муляк C.B., Семенец Ю.М. Влияние гумата натрия на оплодотворяем осгь, послеродовый период у коров и на внутриутробное развитие плода // Тезисы докладов научной конференции по тканевой терапии,.

142. Одесса: 1983.-Т. 2. С. 77.

143. Мурзаков Б.Г., Ермекбаева Г.А. О фракционировании гуминовых кислотчерноземной почвы Северного Казахстана // Плодородие почв Казахстану. -Алма-Ата: 1989. №5,- С. 75-84,

144. НавошаЮ.Ю. О вкладе семихинонцых ион-радикальных состояний^ я парамагнетизм гуминовых кислот // Химия твердого топлива. М. : 1982.2. С. 24-26.

145. Нагаллер А.М., Федуров Я.Н. Механизм действия и эффективность лечебного применения грязевых процедур при заболеваниях гепатито-билиарной системы // Труды VI Всесоюзного съезда курортологов и физиотерапевтов. -М. : 1973. С. 377-379.

146. Невструева B.C. Состояние нейрогуморальных систем регуляции при действии пелоидов различного химического состава // Тезисы докладов. Всесоюзной научно-практической конференции Одесса : 1974, - С. 38.

147. Низкодубова C.B. Экспериментальное обоснование и клиническое применение экстрактов лечебной грязи И Вопросы курортологии^ физиотерапии и лечебной физкультуры. -1986. № 5,- С. 15.

148. Низкодубова C.B., Табацкая A.A., Нечай Г.М. Сравнительная оценка биологической активности липидных фракций иловой грязи // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1982. № 7. - С.54-55.

149. Никитина Б. А. Влияние условий экстракции на растворимость и состав извлекаемых гумусовых кислот // Агрохимия. -1970. -№ Ю. С. 88-83.

150. Никитин Б.А, Методика определения содержания гумуса в почве // Агрохимия. -1972. № 3. - С. 87-91.

151. Новикова II.В. Сульфидная иловая грязь и хлоридные натриевые ванны в лечении больных остеоартрозом // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1989. № 2. - С. 35-37.

152. Овсянникова К.А., Бахман В.И. Об изучении органического вещества лечебных грязей СССР // Лечебные грязи СССР. M : 1971,- С. 387.

153. Олефиренко В,Т., Рыжова Г.Л., Шустов Л.П., Бирюкова A.A. О классификации грязевых препаратов// Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1980.- № 2.- С. 10-14.

154. Олефиренко В Т., Бирюкова A.A. Сравнительный анализ^ и особенности некоторых способов приготовления нефармакопейных грязевых препаратов // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1982.1,-С. 35-39.

155. Околелова A.A., Барановская В.А. О возможности применения метрда окисления перманганатом калия в щелочной среде при исследовании гуми-новых кислот // Агрохимия. -1986, № 26. - С. 37-39.

156. Омаров И. А., Мусаев A.B. Механизм действия нафтеновых углеводородов на выработку условных рефлексов у мышей // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1990. № 4. - С. 58-60.

157. Овчаренко М.М., Зенин A.A., Зилеев H.A. и др. Определение гумусов анализатором "Инфрапид-61" // Химизация сельского хозяйства. М. : 1988. -№ 11. - С. 45-46.

158. Орлов Д.С. Элементный состав и степень окисленности гуминовых кислот // Научные доклады высшей школы; Биологические науки. -1970. №1. -G. 5-20.

159. Орлов Д.С. Применение инфракрасной спектроскопии в почвенных исследованиях // Методы минералогического и микроморфологического изучения почв. -М. : 1971. С. 148-172.

160. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв. М. : 1974. - С. 317.

161. Орлов Д.С. Кинетическая теория гумификации и схема вероятного строения гуминовых кислот // Научные доклады высшей школы. Биологические науки, -1977. -№9. -С: 5-16.

162. Орлов Д.С. Химия почв М.: 1985. - 38^ с.

163. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. М.: 1990. -325 с.

164. Орлов Д.С. Инфракрасные спектры гумусовых кислот и таблицы волновых чисел // Органическое вещество целинных и освоенных земель, М-.: 1972. -С. 245-256.

165. Орлов Д.С. Гуминовые вещества в биосфере. М.: 1993, - 238 с.

166. Орлов Д.С. Гуминовые вещества в биосфере // Соровский образовательный журнал. М. : 1997.- № 2,- С. 56-63.

167. Орлов Д.С., Аммоеова Я.М., Милановский Е.Ю. Применение гель-хроматографии в почвоведении, мелиорации и сельском хозяйстве // Методические указания, М. - Новочеркасск : 1978. - 60 с.

168. Орлов Д.С., Аммоеова Я.М. Милановский Е.Ю. Возможности гель-хроматографии при оценке молекулярных параметров гумусовых веществ торфов, почв, сапропелей // Торф, его свойства и перспективы применения. -Минск : 1982. С. I00-IÇ5.

169. Орлов Д.С. Барановская В.А., Околелова A.A. Степень бензоидности гу-миновых кислот и способ её определения И Доклады AI I СССР. М. ; 1987. Т. 293.-№6.-1479 с.

170. Орлов Д.С., Бирюкова O.E., Суханова Н.И. Органическое вещество почв Российской Федерации. М. : 1966. -256 с.

171. Орлов Д.С., Глебова Г.И., Мироненкова Т.Н. Фракционирование гумино-вых кислот с помощью метода дробного осаждения // Научые доклады высшей школы. Биологические науки. -1976. № 10. - С. 125-130.

172. Орлов Д,С., Глебова Г.И., Мироненкова Т.Н. Фракционный состав гумино-вых кислот типичного мощного чернозема // Вестник МГУ. Серия почвоведение. -1977.-№ 1.-С. 41-53.

173. Орлов Д.С., Горшкова Е.И, Размеры и форма частиц гуминовых кислот из чернозема и дерново-подзолистой почвы // Научные доклады высшей шкоды. Биологические науки, -1965. № 1. - С. 207-212.

174. Орлов Д.С., Гришина Л .А. Практикум по химии гумуса. М. : 1981. -271 с.

175. Орлов Д.С., Иванушкина К.Б. Гуминовые вещества в биосфере, народнохозяйственное значение и экологическая роль // Почвоведение. -1991. № 2. - С. 152-156.

176. Орлов Д.С., Лозанская H.H., Николаева С.А. Химические процессы в орошаемых и мелиорируемых почвах. М. : 1990,- 476 с.

177. Орлов Д.С., Лозанская И.Н., Попов П.Д. Органическое вещество почв иорганические удобрения. M. : 1985. -184 с.

178. Орлов Д.С., Осинова H.H. Инфракрасные спектры почв и почвенных компонентов. М. : 1988. -89 с.

179. Орлов Д.С., Осипова H.H. Оценка устойчивости гуминовых веществ по электронным и молекулярным спектрам // Гуминовые вещества в биосфере. -М. : 1993. С. 227-232.

180. Орлов Д.С., Розанова О Н., Матюхина С.Г. Инфракрасные спектры поглощения гуминовых кислот // Почвоведение. 1988. №1. - С. 16-25.

181. Осипова H.H., Дмитриев Е.А., Орлов Д.С. Об ошибках метода инфракрасной спектроскопии при исследовании твёрдых фаз почв // Вестник МГУ. Серия почвоведения. М. : 1976. - № 3. - С. 90-99.

182. Отчет о результатах поисковых исследований грязевых месторождений в районе г. Куйбышева // Свердловский НИИКиФТ. Свердловск : 1987.-125 с.

183. Плотникова Т.А., Орлова Н Е. Исследование модифицированной схемы Пономаревой-Плотниковой для определения состава, природы, свойств гумуса почв // Почвоведение. -1984. № 8. - С. 33-35.

184. Логосов B.C., Шеина А.Н., Тюрютикова Л.В. Сочетанное применение ультразвука и пелоидина в лечении больных хроническими аллергическими риносинуситами // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1986. -№ 4. - С. 48-50.

185. Пономярева В.В., Плотникова Т.А. Определение группового и фракционного состава гумуса по схеме И.В.Тюрина в модификации Пономаревой и Плотниковой // Агрохимические методы исследования почв. М. : 1975. - С. 45-60.

186. Пономарева Б.В. Плотникова Т.А. Гумус и почвообразование. Л. : 1980. -222 с.

187. Прищеп Т.П., Рыжова ГЛ., Стариков Н.М. и др. Дифференцированное действие сухих стандартизированных препаратов, полученных на основе рапы и нативной жидкой фазы грязи // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1985. № 6. - С. 54-57.

188. Пунтус Ф.А. Химическая природа гуминовых кислот сапропелей БССР: Автореф. дисс. канд. хим. наук. Минск : 1976,- 18 с.

189. Радионченко A.A., Теплякова М.В. Комплексное лечение острых воспалительных заболеваний внутренних половых органов с применением рапы // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1989,- >|Ь 2. С. 47^50.

190. Рыковский В.Е., Батуро В.А. К вопросу об определении порога коагуляции гуминовых кислот // Химия и генезис торфа и сапропелей. Минск: 1962. 44-51.

191. Рычкова М.А. и др. Влияние лечебных грязей на активность лизосомных ферментов у больных неспецифическими заболеваниями легких // Вопросыкурортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1988. - № 1. -С. 25.

192. Раскатов В.А. Исследование, состава и физических свойств почвенныхфульвокислот: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М.: -18 с.

193. Русина Т.В., Каспаров C.B., Жарикова A.B. Электрофоретическое исследование гумусовых веществ в почвенных растворах // Почвоведение. -1985. -С. 38-41.

194. Рыжова Г.Л., Прищеп Т.П. Химические и фармакологическое свойства водорастворимых сухих препаратов из лечебной грязи и рапы // Проблемы освоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего Востока. Томск : 1983. -С. 11-13.

195. Саратиков A.C., Венгеровский А.И., Прищеп Т.П. и др. Гепатозащитное действие новых природных соединений // Тезисы докладов 14-й Всесоюзной конференции по физиологии пищеварения и всасывания. Тернополь-Львов : 1985. -253 с.

196. Семенова Н.К. Метод выделения гумусовых кислот из кислот и кислых почвенных вытяжек (декальцинатов) // Химия гумусовых кислот, их роль в природе и перспективы использования в народном хозяйстве. Тюмень : 1981.-17 с.

197. Серебрин В.Н. Дифференцированное применение полостной пелои-домагнитотерапии при различных формах хронического ирокго-сигмоиди га // Вопросы курортологии^ физиотерапии и лечебной физкультуры. -1989. -№5, С. 38-41.

198. Симаков В.Н., Алябина Г.А. Изучение фракционного состава гуминов^лх кислот некоторых типов почв методом гель-фильтрации // Почвоведение. -19-72.-№7.- С. 63-^6.

199. Сокрут В-.И. Влияние физиологически активных веществ^ полученных из торфа, на рост молодняка крупного рогатого скота и свиней // Гуминовые удобрения. Теория и практика применения. Днепропетровск : 1977. - Т. 6.1. С. 116-119.

200. Соловьева В.П. Влияние комплекса гуминовых кислот торфа на фагоцитарную активность лейкоцитов // Химия гумусовых кислот, их роль в природе и перспективы использования в народном хозяйстве. Тюмень : 198-1. -79с.

201. Соловьева В.П. Перспективы использования торфа в медицине // Торф, его свойства и перспективы применения. Минск : 1982. - С. 229-231.

202. Стариков Н.М., Быкова В В., Голосова Л.О. Лечебные ресурсы озер Сибири и некоторые проблемы их охраны и освоения // Лечебной применение пе-лоидов и препаратов на их основе. Томск : 1988. - С. 4Г15.

203. Степаненко Л.С., Ребачук Н.М., Максимов Т.Б. Использование хроматографии на гелях для изучения состава и реакционной способности гуминовых кислот // Новые методы исследования гуминовых кислот. Владивосток : 1972.-С. 90-105.

204. Степанов И.О. Применение КВч-техники в инфракрасной спектроскопии почв// Почвоведение. -1972. -№9. -С. 96-108.

205. Степанов И.С. О расшифровке инфракрасных спектров почв// Почвоведение. -1974. № 6. - С. 76-88.

206. Степанов И.С. Способ извлечения из почв фракций органо-минеральных веществ физическими методами // Почвоведение. -1981. № 4. - С. 114-120.

207. Стригуцкий В.Н, О природе парамагнетизма торфа// Торф, его свойства и перспективы применения. Минск : 1982. - С. 73-77.

208. Суй В.М., Симм Т.К. Лечение гумизолем больных с заболеваниями суставов и сопутствующим поражением сердечно-сосудистой системы // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1978, -№ 4. - С. 5659.

209. Технологическая схема разработки грязевых месторождений Тепловка, Солодовка, Молочка и использования их лечебных грязей на курорте "Сергиевские минеральные воды". М. : 1981, -91 с.

210. Трапезникова Н.К. Орлова Л.П. К вопросу внедрения в практику новых достижений в области лечебного применения грязевых препаратов // Лечебное применение пелоидов и препаратов на их основе. Томск : 1988. - С. 2836.

211. Тюрин И.В. Органическое вещество почв и его роль в почвообразовании и плодородии, М. : 1937. -285 с.

212. Тюрин И.В. Некоторые результаты работ по сравнительному изучению состава гумуса в почвах СССР // Труды почвенного института им. В.В.Докучаева. Работы по органическому веществу почвы. М. : 1951. - Т. 38. - С. 22-32.

213. Улащик B.C. Теория и практика лекарственного электрофореза. Минск: 1976.-216 с.

214. Улащик B.C. Физико-химическая медицина и лечение физическими факторами 11 Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1985, -№4.- С. 4-7.

215. Улащик B.C. Участие кожи в реализации действия лечебных физических факторов // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1990.- №2,- С. 8-15.

216. Успенский В.А. Методы битуминологических исследований. Л. : 1975. 326 с.

217. Фещенко З.М., Потапова Г.В. Динамика иммунного статуса у больных ревматоидным артритом при СМТ-форезе раствора "сухой" рапы // Пелоидо-препараты. Томск : 1988. - С. 76-78.

218. Фролов В.П. Определение содержания и некоторых свойств гумуса почв по тепловому эффекту его сгорания // Тез. доки. VII съезда Всесоюзного общества почвоведов. Ташкент : 1985. - 123 с.

219. Хазиев О.Х., Гулько А.Е. Некоторые свойства гумус-перокеидазиого комплекса // Почвоведение. —1990. № 2. — С. 30-36.

220. Хазиев P.M., Пинегин Ь.В., Иетамов Х.И. Экологический иммунитет // М. : 1995.- С. 156-158.

221. Хлесткова E.JI. Возможности использования метода ИКС при изучеции почвенных компонентов // Агрохимия и почвоведение. Киев : 1986. -'№ 9. -С. 85-89.

222. Хлестакова Е.А. Использование некоторых показателей гумусного состря-ния почв в целях диагностики // Почвоведение. -1991. № 6. - С. 38-46.

223. Хмельницкий P.A. Современные методы исследования агрономических объектов. -М. : 1981.-256 с.

224. Христева JI.A. Действие физиологически активных гуминовых кислот на растения при неблагоприятных внешних условиях // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск : 1973. - Т. 4. - С. 3.

225. Христева JI.A. К природе действия физиологически активных гумусовых веществ на растения в экспериментальных условиях // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения, -Днепропетровск: 1977. Т. 4. - С. 3-15.

226. Христева Л.А. Влияние органического вещества почвы и удобрений на снятие поражений^ вызванных пестицидами // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения, Днепропетровск : 1973. - Т. 4. - С. 58-73.

227. Христева Л,А. Физиологически активные вещества гумусовой приррды как фактор адаптации сельскохозяйственных культур к гербицидам // Торф, его свойства и перспективы применения. Минск : 1982. - С. 106-110.

228. Царфис П.Г., Киселев И,Б. Лечебные грязи и другие теплоносители. JVL: 1990. -126 с.

229. Цветкова Л., ДофановаЯ. Экспериментальное исследование торфа и гуминовых кислот на реактивность организма // Курортология и физиотерапия. -София : 1986. Т. 23. № 2. - С. 16-21.

230. Цыпленков В.П., Кузнецов В В., Чуков С.Н. Физико-химические методы изучения и контроля органического вещества почв // Бюлл. почвенного института ВАСХНИЛ. М. : 1986. - № 43. - С. 47-49.

231. Цыпленков В.П., Чеков С.Н. Использование метода электронного парамагнитного резонанса доя изучения органического вещества почв // Гумус и почвообразование в нечерноземной зоне. Л.: 1985. - С. 32-43.

232. Черепанова М.Н. Физико-химическая характеристика гуминовых веществ торфяных грязей // Грязи и их лечебное применение. Киев: 1969. - С. 27-29.

233. Черепанова М.Н, Органическое вещество лечебных грязей и его связь с неорганическими компонентами // Лечебные грязи СССР. М. : 1971. - С. 1418.

234. Черепанова М.Н. Изменение состава органического вещества иловой сульфидной грязи оз. Репное по сезонам и глубине залегания // Вопросы изучения лечебных минеральных вод, грязей, климата, 1975. - Т. 30. - С. 41-43.

235. Черепанова М.Н. Групповой состав органических веществ^ лечебных грязей // Вопросы изучения лечебных минеральных вод, грязей и климата. 1970. -Т. 34. - С. 142-146.

236. Черепанова М.Н., Котова Т.И. Химический состав органического вещества лечебных грязей// Грязевые препараты. Томск : 1981. -27 с.

237. Черепанова М.Н., Солдатов Б.В. Гуминовые кислоты торфа и их действие на кожу животных // Лечебные грязи СССР. М.: 1971.

238. Черников Б.А., Кончиц В.А. Исследование строения гумусовых кислот почв дериватографическим методом // Биологические науки. Серия почвоведения. -М. : 1979. № 2. -С. 70-75.

239. Черонис Н.Д., Ма Т.С. Микро- и полумикрометоды органического функционального анализа. Л. : 1973. - С. 527-531.

240. Чуков С.Н., Надпорожская М.А. Сравнительное изучение методов экстракции гуминов на примере дерново-подзолистой почвы //- М. : 1991. № 2. - С. 96-101.

241. Шварц В.Я., Якушкина Г.Е., Рассветаева Г.И. Влияние бальнео-грязелечения на состояние гепатобилиарной системы у больных язвенной болезнью после операции на желудочке // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1988. № 2. - 11 с.

242. Швец В.М., Кирюхин В.К. Органическое вещество в лечебных минеральных водах // Бюлл. МОИП, отделение геологии. — М. : 1974. -Т. 49. Вып. 6. -С. 83-96.

243. Шестиалтынова Т.В. Вторичная профилактика ревматизма у детей пелои-дофонофорезом области миндалин // Тезисы докладов IV-ro Украинского съезда физиотерапевтов и курортологов. Одесса : 1985. - С. 386-387.

244. Шинкаренко A.JI. Органическое вещество донных отложений // Тамбукан-ское озеро и его лечебная грязь. Ставрополь: 1954. - С. 50-68.

245. Шмакова И.П., Горбатюк А.Л., Г'ордиенко О.С., Дудкова О.Р. Применение вакуум-фонофореза пелоидина у больных неврологическими синдромами поясничного остеохондроза // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1990. № 4. - С. 30-33.

246. Шурухина С.И., Чабаевский А.И. О природе сиирторасгворимой фракции гуминовых кислот// Почвоведение. -1978, № 2. - С. 43-^8.

247. Шустов Л,П. Препараты из иловой сульфидной грязи // Лечебное применение пелоидов и препаратов на их основе. Томск : 1988. - С. 15-20.

248. Шустов Л.П. Экстракты иловой сульфидной грязи и их лечебное применение. Томск : 1996. 81 с.

249. Эфендиева Ф.Н. Богданов Т.П. Сравнительное изучение гуминовых кислот грязей и торфов методами электронного парамагнитного резонанса и инфракрасной спектроскопии // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. -1985, № 4. - С. 43-45.

250. Юхнин A.A., Орлов Д.С. Фракционирование фульвокислог на угле // Научный доклад Высшей школы. Биологические науки, М. : 1972. - № 5. - С. 138-141.

251. Яшин И.М. Выделение из почв мобильных форм гумусовых соединений водным раствором нейтральной соли // Актуальные вопросы агрохимии почв. -М. : 1988. -С. 44-50.к

252. Alegret S., Alio R., Alcaniz J,, Casassas E. Characterizationof fulvic acids from acid soils from Catalonia // Agrochimica. -1989.-Vol.33.- № 1-2. -P.31-40.

253. Amacher M.C., Henderson R.E., Burpbacher R.H., Scdbcrry J.E. Dichromate-oxidisable and total organic carbon contents of representative soils of the major aress of Louisiana //Commun. Soil. Sci. and Plant. Anal. 1986. - Vol.17. - №10. -P. 1019-1032.

254. Andersen H.A., Hepburn A. Fractionation of huinic acid by gel permabion chromatography // J. Siol. Sci. 1977,-Vol.28. -№ 4. - P.634-644.

255. Baes A.U., BloomP.R. Fulvic acid ultraviolet-visible spectra: influence of solvent and pH // Soil. Sci. Soc. Acoer. J.-1990. Vol.54. -№5. -P. 1248-1254.

256. Barriuso E., Andreux F., Portal I.M. Quantification des acidea hucaiqucs et ful-viques d'um sol acide de moatagoe. Discussion methodologique // Sci.Sol.-1985,-T.41. P.23.

257. Barriuso E., Andreux F., Portal I.M. Quantitative study of humic and fulvic acidesr extracted from a mountain soil (Umbric dystrochrept)^ a methodological discussion // Sci Sol. 1986. - № 1. - P.31.

258. Bartlett R.J., Ross D.S. Colcrimetrie determination of oxidizabic carbon in acid soil solution // Soil. Sci. Soc. Acer. J.-L988.-VoL52.- М» 4. Р.1191-П92.

259. Bartlett R.J., Ross D.S. Colcrimetric determination of oxidizabic carbon in acid soil solution // Soil. Sci. Soc. Acer. J.- 1988. VoL52. - Ж4. - P.U91-U92.

260. Ben-Dor E., Banin A. Determination of organic matter content in acid-zone soils using a simple "loss-on-ignition" method // Comaun.Soil.Sci.and Plant. Anal. -1989. Vol.20. - № 15-16. - P.1675-1695.

261. Bennani A., Bailly J R. Purification des fractions d'acides humiqueg separees par isoelectrofocalisation // AgFochimica. 1939. - Vol.33. -№ 6. -P. 471-477.

262. Blondeau R. Separation of low molecular weight humic acids with Sephadex

263. G-25 11 Plant, and Soil. 1985. - Vol.87. -№ 3. - P.441-444.

264. Chlebarov S. Dermatologische Indikationen und Kontraindika-tionen fur Sihi-icktherapie // Heilbad, u. Kurort. 1987. - Bd.39. - № 9-10. - P. 240-242.

265. David M.B. Use of loss-on ignition to assess soil organic carbon in forest soils // Coramun.Soil.Sci.and PlanLAnal. 1988. - Vol. l9. - № 14. - P. 1593-1599.

266. De Kimpe C.R., Schnitzer M. Low-temperature ashing of humic and fulvic acid // Soil. Sei. Soc. Amer. J. 1990. - Vol.54. -K 2. - P. 339-403.

267. Dkhar G.D., Prasad B., SmhaM.K, Characterization of humic and fulvic acids of forest and cultivated soils // J. Indian. Soc. Soil. Sei. 1966. - Vol.34. - №> I. - P. 29-37.

268. Domke K. Untersuchungen zum Huminstoffgehalt einiger Korn-grossenfraktionen mehrer Boden unter Anwendung einer erwei-terten Humuskomplexanalyse // A1 brecht-Thaer-Arch. 1969. - Bd. 13. - № 3. - P.243.

269. Duchaufour Ph., Jacquin F. Nouvelles sur I' extraction et ie fractionncment des composes humiques // Bull, de l'Ecole Nat. Super.Agronom, de Nancy. -1966.1. Jfe L -Pr3.

270. Eberhard R. Anwendungsformen der Moortherapie und Behandlung rheumatischer Krankheiten mit Moor // Z.Phys.Med.Baln.Med. Klim. -1988. B417. - № 6. -P.405-410.

271. Elemental, infrared, spectrophotometric and electron spin resonance investigation of nonchcmically isolated humic materials // Geochim.Acta. 1976. - Vol.40. -P. 369.

272. Ephraim J. H., Boren H., Petterson C. at all, A nove description of the acidbase properties of an aguatic fuivic acid // Environ Sei. And Technol.- 1989.- V. 23. -№ 3. P. 356-362.

273. Ephraim J.II., Marinsky J. A., Cramer S.J. Complex-forming properties of natural organic acids. Fulvic acid complexes witb cobalt, zinc and europium //Talanta.-1989,- V. 36. № 4. - P. 417-443.

274. Ephrain J.II., Marinsky J.A. Ultrafiltration as a technique for studying metalhumate iterations: Studies with iron and copper // Anal, cliim. Acta, 1990. 1. -P. 171-180.

275. Fallek C., Chiglione C., Negre R. Sur les matieres lixivia-ble dc deux rankers Pyreneena // C.R.Acad,Sei.Paris,-1973. T.287. - № II.- P. 987-990.

276. Flaig W., Goecke G. Moortherapie Grundlage» und Anwendun-gen // Heil-bad.u.Kurort. - 1989,- Bd.41.-№> 5. - P.136-141.

277. Forsyth W.G.L. The characterization of thehumic complexes of soil organic matter // J.Agric. Sei. 1947. - Vol.37. - P. 132.

278. Freiberger B. Ghemie der Fulvo- und Huminsauren. Leipzig : Deutscher Verlag fiir Grundstoffindustrie. -1969.

279. Fuchs W. Die Chemie der Kohle. Berlin : 198L-S.510.

280. Ghosh K., Schnitzer M. Effects of pH and neutral electrolyte concentration an free radicals in humic substances // Soil. Sei. Soc. Amer.J. 1980. - Vol.44. - № 5. - P. 975-978.

281. Gillman G.P., Sinclair D.F., Beech T.A. Recovery of organic carbon by the Walkley and Black procedure in highly weathered soils// Cotnciun. Soil. Sei. and PlantAnal. 1986, - Vol. 17. - №» 8. - P. 885-892.

282. Goecke C. Balneotherapie gynAkologischer Erkrankungen // Z. Phys.Med.Baln.Med.Klim. 1988. - Bd.17. - № 6. - P. 411-412.

283. Grimalt J.O., Saiz-Gimenez C. Lipids of soil humic acids, I. The hyrna-tomeianic acid fraction // ScLTotal Environ. -1989. №81-82. - P. 409-420.

284. Guminski S. The effect of humus compounds on some physiological processes and plant nutrition // TransactJntern.Symp. "Humus et Planta". Prague : 1967. -P. 255.

285. Haworth R.D. The chemical nature of humic acid // SoiLSci.- 1971. VolIU. -№1.-P. 71.

286. Hergmann V., Moon T.W., Laidler K.J. //BiocheE., 1974. Vol.13. - P. 51-82.

287. Herasndez M.T., Moreno J.I., Costa F. et al. Structural features of humic ^cidlike substances from sewage sladges I I Soil. Sei. 1990. - Vol.149, - № 2. -P. 6368.

288. Hohermuth H.J. Kongress der schweizerischen Gesellachaft for Balneologie ijnd Bioklimatologie // Z.Phys.Med.Baln.Med. Klint. 1987. - Bd. 16. - № 4, - P. 195249.

289. Jambu P., Dupuis T. Etude par electrophorese et spectrographie d' absorption infrarouge des acides hymatomelanique de sol calciques hydromorphes // Sei. Soil. 197k- .N« 1.

290. Knauf H., Fuchs U., Kuhnert M. Chemische Isolierung voQ Hu-minsAuren aus Naturstoffen unter Berücksichtigung toxiach wirkender Nebenprodukte // Z.Physiotherapie. 1933. - Bd. 35. - № 3. - S.143-149.

291. Knopf D. Zur Problematik der Effekti vittsbeurtei 1 ung der Kurorttherapie bei Rheumatoid Arthritis^// Z.Physiotherapie. -1987. Bd.39. - № 3. -S. 131-140.

292. Knopf I)., Walther II., Puchta B. Indikationsprofil der Rheu-matoid Arthritis für die antiphlogistische Wirkimg der Moorkurorttherapie // Z. Physiotherapie. -1989,- Bd41. -№ 1. S.37-45.

293. Kodama H., Schnitzer M. Kinetics and mechanism of the thermal decomposition of fulvic acids // Soil.ScL 1970. -VoLl09.-15.

294. Kornberg A. Meth. in enzymol. 1955. - № 2. - P.442.

295. Kosaka J,, Honda C., lscki A. Fractionation of humic acid with organic solvents // J. Sei. Soil, and Man. 1961. - Vol. 32. - № 7. - P. 333-337.

296. Kovarik R. Stellenwert der Moortherapie in der Behandlung der weiblichen Sterilität//Z.Phys.Med.Baln.Med.Klim. -. 1988. Bd. 17. -№ 6. - S.413-417.

297. Krevelen D.W. Graphical-statistical method for the study of structure and reaction processes of coal // Fuel. -1950. Vol.29. -№12 -P. 1142-1144.

298. Kuban G., Weber K.M., Horbach L. et al. Klinische Prüfung der analgetischen Wirksamkeit von Rheumabadem bei Lumboischialgien // Therapiewoche. -1985. -Bd.35. № 17. - P. 2026-2033.

299. Linch D.G., Wright L.M., Olney H.O. Qualitative and quantitative chromatographic analyses of the carbohydrate constituents on the acid-insoluble fraction of soil organic matter// Soil. Sci. 1957. - Vol.84. -№ 5,-P. 405-411.

300. Lobartini G.C.,.Tan K.H, Asmussen L.Ii. et al. Humic matter isolated from soils and water by the XAD-8 resin and conventional NaOH methods // Commun. Soil. Sci. and Plant.Anal. -1989, Vol.20. - № 13-14. - P. 1453-1477.

301. Lu C.C. Some physico-chemical properties of soil humic substances // Acta Pe-dol.Sinica. 1965. - Vol.13. - № 4. - P. 442-448.

302. MacFarlame, Bruce P. Molecular weight of humic distribution and fulvic acids of sediments from a North Florida // Geochim. et Cosmochim.Acta. 1978. -Vol.42.-№10.-P. 1579-1582.

303. Mady G., Buzas I., Havas F. et al. Talajhuminsavak kinyeress es frakcionalasa elektroelucios eljarass // Agrokem. es talaj, 1990. - Vol.39. -№ 1-2. - P. 138-155.

304. Martia P., Saiz-Gimenez C., Cort A. Pyrolysis-gas chromatography mass spectrometry of soil humic fractions. 1. The low boiling point compounds // Soil. Sci. Soc. Amer. J. -1971. Vol.4L - № 6. - P. 1114-1118.

305. Michaelia W., Richnow H.H., Jenisch A. et al. Structural studies of marine and riverine humic matter by chemical degradation // Sci. Total. Environ. 1989 - № 81-82.-P. 41-50.

306. Mishra B., Strivastava L.L. Physico-chemical characteristics of humic substances of major soil association of Bihar (India) // Plant, and Soil. 1990. -Vol.122. -№ 2.

307. Pal Samir Sengupta M.B. Nature and properties of humic acid prepared from different sources and its effect on nutrient availability // Plant, and Soil 1985. -№ l.-P. 71-91.

308. Piccolo A. Characteristics of soil humic extracts obtained by some organic and inorganic solvents and purified by HCI-HF treatment // Soil. Sci. 1988. - Vol 146. -№6. - P. 418 -426.

309. Prasad B., Kumar M. Changes in free radicals of fulvic acid of organic wastes in corporated in calcareous soil// X. Indian. Soc. Soil. Sci. 1989. - Vol.37. - №3. - P.558.561.

310. Riffaldi R., Schnitzer M. Electron spin resonance spectrometry of humic substances I I Soil. Sei. Soc. Amer. Proc. -1992. Vol.36. - P. 301.

311. Rochus W. Ultrafiltration as a new method for characterizing humic acids in peat // Recent Technol. Use Peat. Rept. Int. Symp. Bad. Zwischenahn., Nov., 5-8, 1979. Stuttgart, 1983. - P. 69-70.

312. Sarkar J.M., Malcolm R.L., Bollag J.M. Enzymatic coupling of 2— 4-dichlorophenol to stream fulvic acid in the presence of oxidoreductases // Soil. Sei. Soc. Amer. J. 1988. - VoL52. - №>3. - P. 688-694.

313. Schipperges H. Kuren im Jahre 2000 entbehriiches Relikt oder medizinische Notwendigkeit // Z. Phys. Med. Baln. Med. Klim. - 1989. - Bd.41. - № 8. - S. 244254.

314. Schmidt K.L. Die Bedeutung der natürlichen Heilmittel aus der Sicht des Klinikers und Hochschullehrers // Z. Phys. Med. Baln. Med. Klim. 1989. - Bd.41. -№8.-S. 204-205.

315. Schmidt W., Scheibner H. Zur Bestimmung des Gehaltes in organischer Substanz von Torfen und Muddca // Arch. Acker, und Pflanzenbau und Bodenl^. -1988. Bd.32. - № 7. - S. 423-433.

316. Schnitzer M., Schupp!i P. Method for the sequential extraction of organic matter from soils and soil fractions //Soil Sei. Soc. Amer, J. 1989. - Vol.53. - №5. - P. 1418-1424.

317. Schnitzer M., Schuppli P. The extraction of organic matter from selected soils and particle size fractions with 0,5 M NaOH, 0,1 M Na^O? solutions // Can. J. Soil. Sei. 1989. - Vol.69. - №2.-P. 253-262.

318. Schnitzer M., Skinner S.I.M. Free radicals in soil humic compounds // Soil. Sei. 1969. - Vol.108. - № 6. - P. 383-390.

319. Spielmann H., EricksonR.P., EpsteinC.I. // FEBS Lett. 1973. - Vol.39. -P. 19.

320. Steelink C., Tollin G. Stable free radicals in soil humic acid // Bioehioa. Bio-phys. Acta. 1962. - Vol.59. -№ 1. -P. 25-34.

321. Stevenson F.J. Molecular size distribution of soil humic substances withionic strength // Sci. Total. Environ. 1989. - № 81- 82. - P.471-479.

322. Stevenson F.J., Butler H.A. Chemistry of humic acid and related pigments // In: Organic geochemistry / Eds. G. Englington, M.T. Murphy. N.Y.: Springer- Verlag : 1969. - P. 534-557.

323. Stevenson F.J., Goh K.M. Infrared spectra of humic acids and related substanees // Geoehim. Cosmochim. Acta. -1971. -VoL35. № 5.- P. 471.

324. Stevenson F.J. Stability constant of Cu2+, Pb2+ and Cd2+ compleoces with humic acids // Soil. Sci. Soc. Amer. Journ. -1976,- V.40.- № 5,- P. 1246-1250.

325. Tan K.H. Infrared absorption similarities^ between hymatomelanic acid and methylated humic acid// Soil. Sci. Soc. Amer. J. 1975. - Vol.39. - № 1. - P. 7073.

326. Tancic N., Kostic N., Poharc-Logar V. IK-apektroskopija huminskin kiselina humogleja, semigleja i eugleja // Arh. poljopr. nauke. 1989. - Vol.50. - № 179 -P. 205-212.

327. Tancic N., Kostic N., Poharc-Logar V. // Arh. poljopr. nauke.- 1990. Vol.51. -№ 184 —P. 283-393.

328. Tate K.R., Yamamoto K., Churchman G. et al. Relation between the type and carbon chemistry of humic acids from some New Zealand and Japanese soils // Soil. Sci. and Plant. Nutr. 1990. - VoL36. - K«4. - P. 611 - 621.

329. Toledo Adalberto P.P., Lima Carvalho Jussara de. Comparacao sobre a capaci-dade de extracao de substancias húmicas por varies solventes // Ciec. e. cult. -1985. Vol.37.- № 7. - P. 1117-1118.

330. Traina S.J., Novak J., Smeck N.L. An ultraviolet absorbance method of estimating the percent aromatic carbon content of humic acids // J. Environ. Qual- -1990. Vol.19. - № 1. - P. 151-153.

331. Tsutsuki K., Kuwatsuka S. Determination of molecular weights of humic acids by osmotic pressure measurement and by permeation chromatography on controlled pore glass // Soil. Sci. and Plant. Nutr. 1989. - Vol.35. - № 3. - P. 393-403.278

332. Usha P.B., Jose A.J. Fractionation of soil organic matter in laterite soils of Kerala // Agr. Res. J. Kerala. 1984. - Vol.22.-№1. -P. 1-10.

333. Visser S.A. Viscosimetric studies on molecular weight fractions of fulvic and humic acids of aquatic, terrestrial and microbial origin // Plant, and Soil. 1985.1. Vol.87.-№2-P. 209-221.

334. Waither H. Moorpackungen // Deine Gesundheit. 1989. - № 3,- S. 20-26.

335. Wikander G., Norden В. Investigations of paramagnetic species in peat // Soil. Sei. 1988. - Vol.145.- №4.- P. 289-297.

336. Yeomans J.C., Bremner J.M. A rapid and precise method for routine determination of organic carbon in soil // Commun. Soil. Sei. and Plant. Anal. 1988. -Vol.19.-№13.-P. 1467-1476.

337. Yonebayashi K., Ilattori T. Chemical and biological studies on environmental humic acids. Composition^ of elemental and functional groups of humic acids // Soil. Sei. and Plant. Nutr. 1988. - Vol.34. - № 4. - P. 571-584.

338. Zimmermann W. Therapeutische Möglichkeiten der Moorbestandteilen // Fortschr.Med. 1989. - Bd. 107. - № 23. - S. 24-25.

339. Пейчева В. Микробиологичны прочувания върху антибактералните свойства на байкалския торф // Курортология, физиотерапия,- 1985. : София :- Т.22. № 2. - С. 61-64.

Информация о работе

Агапов, Альберт Иванович
доктора биологических наук
Самара, 1999
ВАК 03.00.04

Диссертация

Специфические органические вещества лечебных грязей как источник пелондопрепаратов гуминового ряда - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы