Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Создание новой TyA-опосредованной системы экспрессии в дрожжах Saccharomyces cerevisiae

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Марченко, Алексей Николаевич

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Транспозон дрожжей Ту

1.1. История открытия Ту транспозонов и их роль в формировании генома дрожжей.

1.2. Строение транспозона Ту 1.

1.3. Протеолитический процессинг белков транспозона Ту1 и морфогенез вирусоподобных частиц.

1.4. Морфология вирусоподобных частиц транспозона Ту1.

1.5. Организация белковых субъединиц в составе вирусоподобных частиц.

1.6. Упаковка РНК вирусоподобной частицей.

1.7. Разнообразие Ту1 элементов.

1.8. Эволюция Ту элементов дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

1.9. Регуляция транскрипции Ту 1.

1.10. ROAM-активация структурных генов транспозоном Ту1.

ГЛАВА 2. ГИБРИДНЫЕ ВПЧ

2.1. Создание и использование гибридных ВПЧ.

2.2. Структура гибридных ВПЧ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Создание новой TyA-опосредованной системы экспрессии в дрожжах Saccharomyces cerevisiae"

ТУ^-опосредованная система экспрессии основана на использовании способности дрожжевого белка р 1, кодируемого открытой рамкой считывания ТуА транспозона Ту1 дрожжей Басскаготусез сегеУ1з1ае, к самосборке в вирусоподобные частицы (ВПЧ) [43, 114]. Было показано, что присутствие на Сконце белка р1 фрагмента гетерологичного белка не препятствует формированию вирусоподобной частицы [3]. Это свойство белка р1 широко используется в биотехнологии для создания гибридных вирусоподобных частиц. К настоящему моменту опубликованы данные о создании множества гибридных ВПЧ на основе белка р1, в состав которых входят фрагменты гетерологичных белков различного размера и структуры [65, 134].Наиболее ценным с точки зрения практического использования свойством гибридных ВПЧ является высокая имуногенность, как результат их полимерной структуры. Причем, что особенно важно для создания вакцин, гибридные ВПЧ способны индуцировать как В-, так и Т-клеточный иммунный ответ организма [74, 99,138, 160]. Это открывает возможность использования белка р1 для создания безъадювантных вакцин. Принцип создания вакцин на основе гибридных ВПЧ реализован для таких серьезных заболеваний, как СПИД и малярия [91, 124, 125].В литературе также описано использование гибридных ВПЧ для различных лабораторных целей, не связанных с созданием вакцин, например, для получения антител к интересующему белку, картирования эпитопов и, даже, в качестве экспрессионной системы для продукции и очистки свободных белков [26, 134, 138, 160].С точки зрения технологии производства, белок р1 также весьма привлекателен, так как дрожжи Васскаготусез сегеугзгае уже длительное время находятся в лидирующей группе микробиологических объектов, используемых для продукции белков, обладающих медицинской или технической ценностью [86, 108, 156, 170]. К числу несомненных достоинств дрожжей, как продуцентов следует отнести: 1) относительную простоту организации и хорошую изученность данного вида дрожжей; 2) доступность простых методов трансформации клеток и генетических манипуляций; 3) высокоразвитую экспрессионную базу; 4) удовлетворительный уровень продукции различных гетерологичных белков; 5) безопасность организма.Следует отметить, что в последнее время, в связи с полным секвенированием генома дрожжей, появилась практически исчерпывающая информация о разнообразии транспозонов Ту1 [83]. Многие аспекты жизненного цикла Ту1, такие как: транскрипция, формирование вирусоподобной частицы были подробно изучены. Все эти данные могут быть использованы для изучения новых возможностей и повышения эффективности системы экспрессии гибридных ВПЧ на основе белка р 1.В связи с вышесказанным определены цели работы: сравнить различные природные варианты гена ТуА с точки зрения эффективности образования вирусоподобных частиц, установить закономерности формирования гибридных ВПЧ и продемонстрировать новые возможности использования этой системы экспрессии.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Марченко, Алексей Николаевич

1. Создана ТуЛ-опосредованная система экспрессии. Показано, что использование гена ТуА транспозона УМЬТу1-3 предпочтительно для ее создания по сравнению с ранее использовавшимся для этой цели геном ТуА транспозона

2. Продемонстрировано, что фрагмент 1-301 нуклеотид кодирующей части гена ТуА несет сигнал, необходимый и достаточный для обеспечения упаковки РНК в ВПЧ.

3. Получены гибридные белки р1, содержащие №концевые гетерологичные эпитопы. Показано, что присутствие фрагмента гетерологичного белка на М-конце белка р1 не нарушает его способности к самосборке в вирусоподобные частицы.Это свойство белка р1 использовано для создания бивалентных гибридных ВПЧ за счет одновременного присутствия двух различных фрагментов гетерологичного белка на его К- и С-концах.4. Установлено, что самосборка вирусоподобных частиц происходит в цитоплазме статистически из общего пула белков р1.5. Статистический характер формирования ВПЧ использован для объединения вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей антитела к у интерферону человека в функциональный антиген-связывающий центр.БЛАГОДАРНОСТИ Автор выражает благодарность И.С. Преториусу (University of Stellenbosch, South Africa), Д.В. Корогодину (Институт Вирусологии РАМН), В.П. Вейко (ГосНИИ Генетика) за предоставление плазмид; C.B. Козловскому (МГУ), В.В. Редченко за помощь в электронной микроскопии; Л.Г. Алексеевой (ИБХ РАН) за синтез пептидов; Е.В. Свирщевской (ИБХ РАН) за теоретическую и практическую помощь в иммунологических исследованиях; а также всем сотрудникам лаборатории №18 ГосНИИ Генетика.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Марченко, Алексей Николаевич, Москва

1. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. 1984. Молекулярное клонирование.М., «Мир».

2. Adams S.E., Burns N.R., Layton G.T., Kingsman A.J. 1994. Hybrid Ту virus-likeparticles./п?. Rev. Immunology. 11:133-141.

3. Adams S.E., Dawson K .M . , Gull K., Kingsman S.M., Kingsman A.J . 1987. Theexpression of hybrid HIV:Ty virus-like particles in yeast. Nature. 329:68-70.

4. Adams, S.E., Mellor, J., Gull, K., Sim, R.B., Tuite, M.F., Kingsman, S.M., Kingsman,A.J . 1987. The functions and relationships of Ty-VLP proteins in yeast reflect those of mammalian retroviral proteins. Cell. 49:111-119.

5. Adams S.E., Senior J.M., Kingsman S.M., Kingsman A.J. Induction of HIVantibodies by Ту :HIV hybrid virus-like partikles. In Technological Advances in vaccine development. (Lasky, L., ed.), Liss, New York, pp. 117-126.

6. Andrianopoulos A. , Timberlake W.E. 1991. ATTS, a new and conserved D N Abinding domain. Plant Cell. 3:747-748.

8. Azzazy H.M. , Highsmith W.E. 2002. Phage display technology: clinical applicationsand recent innovations. Clin. Biochem. 35:425-445.

9. Belcourt M.F., Farabaugh P.J. 1990. Ribosomal frameshifting in the yeastretrotransposon Ty: tRNAs induce slippage on a 7 nucleotide minimal site. Cell. 62:339-352.

10. Birnboim H.C. and Doly J. 1979. A rapid alkaline extraction procedure for screeningrecombinant plasmid DNA. Nucleic. Acids Res. 7:1513.

11. Boeke J.D., Eichinger D., Castrillon D., Fink G.R. 1988. The Saccharomycescerevisiae Genome Contains Functional and Nonfunctional Copies of Transposon Ty 1. Molecular and Cellular Biology. 8:1432-1442.

12. Boeke J.D., Garfmkel D.J., Styles C.A., Fink G.R. 1985. Ty elements transposethrough an RNA intermediate. Cell. 40:491-500.

13. Brachmann C.B., Boeke J.D. 1997. Mapping the multimerization domains of the Gagprotein of yeast retrotransposon Ty 1. J. Virol. 71:812-817.

14. Braddok M. , Chambers A. , Wilson W., Esnouf M.P., Adams S.E., Kingsman S.M.,Kingsman A.J . 1989. HIV-1 TAT "activates" presynthesized RNA in the nucleus. Cell. 58:269-279.

15. Bradford M . M . 1976. A dye binding assay for protein. Anal.Biochem. 72:248-254.

16. Braiterman L.T., Boeke J.D. 1994. Ty l in vitro integration: effects of mutation in cisand in trans. Mol. Cell Biol. 14:5731-5740.

17. Braiterman L.T., Monokian G.M., Eichinger D.J., Merbs S.L., Gabriel A. , Boeke J.D.1994. In-frame linker insertion mutagenesis of yeast transposon T y l : phenotypic analysis. Gene. 139:19-26.

18. Braiterman L.T. 1993. PhD thesis. The Johns Hopkins University, Baltimore, Md.

19. Broach J.R., Strathern J.N. and Hicks J.B. 1979. Transformation in yeast: development ofahybrid cloning vector and isolation ofthe C A N ! gene. Gene. 8:121-133.

20. Brookman J. L., Stott A . J., Cheesman P. J., Bums N . R., Adams S. E., Kingsman A .J., Gull K . 1995. An immunological analysis of Ty l virus-like particle structure. Virology. 207:59-67.

21. Brookman J. L., Stott A . J., Cheesman P. J., Adamson C. S., Holmes D., Cole J. S.,Bums N . R. 1995. Analysis of TyA protein regions necessary for formation of the Tyl virus-like particle structure. Virology. 212:69-76.

22. Burck C.L., Chernoff Y.O., Liu R., Farabaugh P.J., Liebman S.W. 1999.Translational suppressors and antisuppressors alter the efficiency of the T y l programmed translational frameshifl. RNA. 5:1451-7.

23. Burglin T.R. 1991. The TEA domain: a novel, highly conserved DNA-binding motif.Ce//. 66:11-12.

24. Bums N.R., Gilmour E.M. , Dawson K .M . , Gull K. , Kingsman S.M., Kingsman A.J. ,Adams S.E. 1994. Production and purification of hibrid Ty-VLPs. Molecular Biotechnology. 1:137-145.

25. Calos M.P., Miller J.H. 1980. Transposable elements. Cell. 20:579-595.

26. Cameron J.R., Loh E.Y., Davis R. 1979. Evidence for transposition of dispersedrepetitive DNA families in yeast. Cell. 16:739-751.

27. Carey N . , Roy D.J., Dalziel R.G. 1993. Use of recombinant gpl35 to study epitopespecific antibody responses to maedi visna viras. J. Virol. Methods. 43:221-232.

28. Chaleff D.T., Fink G.R. 1980. Genetic events associated with an insertion mutationin yeast.Ce//. 21:227-37.

29. Clare J.J., Farabaugh P.J. 1985. Nucleotide sequence of a yeast Ty element: evidencefor an unusual mechanism of gene expression. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82:2829-2833.

30. Clare J.J., Belcourt M . , Farabaugh P.J. 1988. Efficient translational frameshiftingoccurs within a conserved sequence of the overlap between the two genes of a yeast Ty l transposon. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:6816-6820. 1.l l

31. Company M . , Adler C , Errede B. 1988. Identification of a Ty l regulatory sequenceresponsive to STE7 and STE12. Mol. Cell. Biol. 8:2545-2554.

32. Company M . , Errede B. 1987. Cell-type-dependent gene activation by yeasttransposon Tyl involves multiple regulatory determinants. EMBO. J. 1:1133-1140.

33. Coney L.R., Roeder G.S. 1988. Control of yeast gene expression by transposableelements: maximum expression requires a functional Ty activator sequence and a defective Ty promoter. Mol. Cell. Biol. 8:4009-4017.

34. Curcio M.G. , Garfinkel D.J. 1994. Heterogeneous functional Ty l elements areabundant in the Saccharomyces cerevisiae genome. Genetics. 136:1245-1259.

35. Curcio M.G. , Garfinkel D.J. 1992. Posttranslation control of Ty l retrotranspositionoccurs at the level of protein processing. Molecular and cellular biology. 12:2813-2825.

36. Curcio M.G. , Garfinkel D.J. 1991. Regulation of retrotransposition in Saccharomycescerevisiae. Mol. Microbiol. 5:1823-1829.

37. Curcio M.G. , Garfinkel D.J. 1991. Single-step selection for Ty l elementtransposition. Proc. Natl. Acad Sci. USA. 88:936-940.

38. Curcio M.G. , Hedge A .M . , Boeke J.D., Garfinkel D.J. 1990. Ty RNA levelsdetermine the spectrum of retrotransposition events that activate gene expression in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Gen. Genet. 220:213-221.

39. Degols G., Jauniaux J.C., Wiame J.M. 1987. Molecular characterization oftransposable-element-associated mutations that lead to constitutive L-ornithine aminotransferase expression in Saccharomyces cerevisiae. Eur. J. Biochem. 165:289-296.

40. Dobson M.J., Mellor J., Fulton A .M . , Roberts N.A. , Bowen B.A. , Kingsman S.M.,Kingsman A.J. 1984. The identification and high level expression of a protein encoded by the yeast Ty element. EMBO /.3:1115-1119.

41. Dolan J.W., Kirkman C , Fields S. 1989. The yeast STE12 protein binds to the D N Asequence mediating pheromone induction. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:5703-5707.

42. Dubois E., Jacobs E., Jauniaux J.C. 1982. Expression of the R O A M mutations inSaccharomyces cerevisiae: involvement of trans-acting regulatory elements and relation with the Ty 1 transcription. EMBO 1:1133-1139.

43. Eibel H., Philippsen P. 1984. Preferential integration of yeast transposable elementTy into a promoter region. Nature. 307:386-388.

44. Eichinger D.J., Boeke J.D. 1988. The DNA intermediate in yeast Ty l elementtransposition copurifies with virus-like particles: cell-free Ty l transposition. Cell. 54:955-966.

45. Elder R.T., Loh E.Y., Davis R.W. 1983. RNA from the yeast transposable elementTyl has both ends in the direct repeats, a structure similar to retrovirus RNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80:2432-2436.

46. Elder L.T., St.John T.P., Stinchcomb D.T., Davis R.W. 1980. Studies on thetransposable element of yeast.l.RNA gomologous to Ty l . Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 45:581-584.

47. Errede B., Ammerer G. 1989. STE12, a protein involved in cell-type-specifictranscription and signal transduction in yeast, is part of protein-DNA complexes. Genes. Dev. 3:1349-1361.

48. Errede B., Cardillo T.C., Sherman P., Dubios E., Deschamps J.,Wiame J.M. 1980.Mating signals control expression of mutations resulting from insertion of a transposable repetitive element adjacent to diverse yeast genes. Cell. 25:427-436.

49. Errede B., Cardello T.S., Wever G., Sherman F. 1980. Cold Spring Harbor Symp.Quant. 5zo/. 45:961-981.

50. Errede B., Company M . , Hutchinson III.A. 1987. T y l sequence with enhancer andmating-type-dependent regulatory activities. Mol. Cell. Biol. 7:258-65.

51. Errede B. 1993. M C M l binds to a transcriptional control element in T y l .Mol. Cell. Biol. 13:57-62.

52. Farabaugh P.J., Fink J.R. 1980. Insertion of the eukaryotic transposable element Ty lcreates a 5-base pair dupUcation. Nature. 286:352-356.

53. Fields S., Chaleff T.D., Sprague G.F.Jr. 1988. Yeast STE7, STEll, and STE12 genesare required for expression of cell-type-specific genes. Mol. Cell. Biol. 8:551-6.

54. Fink G.R., Boeke J.D., Garfmkel D.J. 1986. The mechanism and consequences ofretrotransposition. TIG Reviews, pp. 118-123.

55. Finnegan D.J. 1985. Transposable elements in eukaryotes. International Review ofCytology. 93:281-326.

56. Fiskerstrand C , Roy D.J., Green I.R., Sargan D.R. 1992. Cloning, expression andcharacterization of ovine interleukins 1 alpha and beta. Cytokine. 4:418-428.

57. Friesen P.D., Rice W.C., Miller D.W., Miller L .K . 1986. Bidirectional transcriptionfrom a solo long terminal repeat of the retrotrasposon TED: symmetrical R N A start sites. Molecular and Cellular Biology. 6:1599-1607.

58. Garfmkel D.J., Boeke J.D., Fink G.R. 1985. Ty Element Transposition: ReverseTranscriptase and Virus-like Particles. Cell. 42:507-517.

59. Gavrias V., Andrianopoulos A., Gimeno C.J., Timberlake W.E. 1996.Saccharomyces cerevisiae T E C l is required for pseudohyphal growth. Mol. Microbol. 19:1255-1263.

60. Gilbert S.C., Plebanski M . , Harris S.J., Allsopp E .M. , Thomas R., Layton G.T., Hil lV.S. 1997. A protein particle vaccine containing multiple malaria epitopes. Nat. Biotechnol. 15:1280-1284.

62. Gilbert S.C. 2001. Virus-like particles as vaccine adjuvants. Mol. Biotechnol.19:169-177.

63. Gilmour J.E., Senior J.M., Bums N.R., Esnouf M.P., Gull K., Kingsman S.M.,Kingsman A.J., Adams S.E. 1989. A novel method for the purification of HIV-1 p24 protein from hybrid Ty virus-like particles (Ty-VLPs). AIDS. 3:717-723.

64. Green I.R., Fiskerstrand C , Bertoni G., Roy D.J., Peterhans E., Sargan D.R. 1993.Expression and characterization of bioactive recombinant ovine TNF-alpha: some species specificity in cytotoxic response to TNF. Cytokine. 5:213-223.

65. Green M . M . 1980. Transposable elements in Drosophila and other Díptera. Annu.Rev. Genet 14:109-120.

66. Hagen D.C., McCaffrey G., Sprague G. 1991. Pheromone response elements arenecessary and sufficient for basal and pheromone-induced transcription of the FUSl gene of Saccharomyces cerevisiae. Mol. Cell. Biol. 11:2952-2961.

67. Herskowitz I. 1995. M A P kinase pathways in yeast: for mating and more. Cell.80:187-197.

68. Hoogenboom H.R. 2002. Overview of antibody phage-display technology and itsapplications. Methods Mol. Biol. 178:1-37.

69. Ito H. , Fukuda Y. , Murata K. , Kimura A . 1983. Transformation of intact yeast cellstreated with alkali cations. J. Bacteriol. 153:163-168.

70. Jordan I.K., McDonald J.F. 1999. Tempo and mode of Ty element evolution inSaccharomyces cerevisiae. Genetics. 15:1341-1351.

71. Jordan I.K., McDonald J.F. 1999. The role of interelement selection inSaccharomyces cerevisiae Ty element evolution. J. Mol. Biol. 49:352-357.

72. Kartasheva N.N. , Kuchin S.V., Benevolensky S.V. 1996. Genetic aspects of carboncatabolyte repression of the STA2 glucoamylase gene in Saccharomyces cerevisiae. Yeast. 12:1297-1300.

73. Kawakami K., Shafer B.K. , Garfmkel D.J., Strathern J.N., Nakamura Y. 1992. Tyelement-induced temperature-sensitive mutations of Saccharomyces cerevisiae. Genefe5.131:821-832.

74. Kenna M.A. , Brachmann C.B., Devine S.E., Boeke J.D. 1998. Invading the yeastnucleus: a nuclear localization signal at the C terminus of Ty l integrase is required for transposition in vivo. Mol. Cell. Biol. 18:1115-1124.

75. Kim J.M., Vanguri S., Boeke J.D., Gabriel A. , Voytas D.F. 1998. TransposableElements and Genome organization: A Comprehensive Survey of Retrotransposons Revealed by the Complete Saccharomyces cerevisiae Genome Sequence. Genome Research. 8:464-478.

76. Kingsman A.J. , Burns N.R., Layton G.T., Adams S.E. 1995. Yeast retrotransposonparticles as antigen delivery systems. Ann. N. Y. Acad. Sci. 754:202-213.

77. Kingsman A.J. , Kingsman S.M. 1988. Ty: A retroelement moving forward. Cell.53:333-335.

78. Kingsman S.M., Kingsman A.J. , Mellor J. 1987. The production of mammalianproteins in Saccharomyces cerevisiae. TIBTECH. 5:53-57.

79. Kingsman S.M., Kingsman A.J. 1988. Polyvalent recombinant antigens: a newvaccine strategy. Vaccine. 6:304-306.

80. Kirchner J., Sandmeyer S. 1993. Proteolytic processing of Ty3 proteins is requiredfor transposition. Journal of virology. 67:19-28.

81. Kleckner N . 1977. Translocatable elements in procaryotes. Cell. 11:11-23.

82. Kozlov D.G. 1997. Regulated system of gene expression in yeast S.cerevisiae. Ph.D.thesis. State Research Institute for Genetics and Selection of Industrial Microorganisms, Moscow, Russia.

83. Kunkel T.A., Roberts J.D., Zakour A. 1987. Rapid and efficient site-specificmutagenesis without phenotypic selection. Methods Enzymol. 154:367-382.

84. Kupiec M . , Petes T.D. 1988. Meiotic recombination between repeated transposableelements in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Cell. Biol. 8:2942-2954.

85. Laloux I., Dubois E., Dewerchin M . , Jacobs E. 1990. TECf a gene involved in theactivation of Ty l and Tyl-mediated gene expression in Saccharomyces cerevisiae: cloning and molecular analysis. Mol. Cell. Biol. 10:3541-3550.

86. Laloux I., Jacobs E., Dubois E. 1994. Involvement of SRE element of Ty ltransposon in TEC 1-dependent transcriptional activation. Nucleic Acid Res. 22:999-1005.

87. Langedijk AC , Honegger A, Maat J, Planta RJ, van Schaik RC, Pluckthun A . 1998.The nature of antibody heavy chain residue H6 strongly influences the stability of a V H domain lacking the disulfide bridge. J Mol Biol. 283:95-110.

88. Lawler J.F.Jr. Haeusser D.P., Dull A. , Boeke J.D., Keeney J.B. 2002. T y l defect inproteolysis at high temperature. J. Virol. 76:4233-4240.

89. Liu H., Styles C.A., Fink J.R. 1993. Elements of the yeast pheromone responsepathway required for filamentous growth of diploids. Science. 262:1741-1744.

90. Lorenz M.C. , Heitman J. 1997. Yeast pseudohyphal growth is regulated by GPA2,a G protein g homolog. EMBO Journal. 16:7008-7018.

91. Lushnig C , Bachmair A. 1997. RNA packaging of yeast retrotransposon T y l inthe heterologous host со//. 5/0/. Chem. 378:39-46.

92. Lushnig C , Hess M . , Pusch 0., Brookman J., Bachmair A. 1995. The gaghomologue of retrotransposon Tyl assembles into spherical particles in E.coli. Eur. J Biochem. 228: 739-744.

93. Madhani H.D., Fink G.R. 1997. Combinatorial control required for the specificityof yeast МАРК signaling. Science. 275:1314-1317.

94. Malim M.H. , Adams S.E., Gull K., Kingsman S.M., Kingsman A.J. 1987. Theproduction of hybrid Ty:IFN virus-like particles in yeast. Nucleic Acids Res. 15:7571-7580.

95. Martin C.E., Scheinbach S. 1989. Expression of proteins encoded by foreign genesin Saccharomyces cerevisiae. Biotech. Adv. 7:155-185.

96. Martin-Rendon, E., Hurd, D.W., Marfany, G., Kingsman, S.M., Kingsman, A.J .1996. Identification of proteolytic cleavage sites within the gag analogue protein of Ty l virus-like particles. Mo/. Microbiol. 22:1035-1043.

97. Martin-Rendon E., Marfany G., Wilson S., Ferguson D.J.P., Kingsman S. M . ,Kingsman A . J. 1996. Structural determinants within the subunit protein of Ty l virus like particles. Mol. Microbiol. 22:667-679.

98. McCafferty J., Griffiths A.D. , Winter G., Chiswell D.J. 1990. Phage antibodies:filamentous phage displaying antibody variable domains. Nature. 348:552-554.

99. McClintock B. 1951. Chromosome organization and genie expression. ColdSpring Harbor Symp. Quant. Biol. 16:13-47.

100. McClintock B. 1965. The control of gene action in maize. Brookhaven Symp. Biol.18:162-184.

101. Mellor J., Fulton A .M . , Dobson M.J., Roberts N.A. , Wilson W., Kingsman A.J. ,Kingsman S.M. 1985. The Ty transposon of Saccharomyces cerevisiae determines the synthesis of at least three proteins. Moll. Cell. Biol. 13:6249-6263.

102. Mellor J., Fulton S.M., Dobson M.J., Wilson W., Kingsman S.M., Kingsman A.J .1985. A retrovirus-like strategy for the expression of a fusion protein encoded by yeast transposon Tyl. Nature. 313:243-246

103. Mellor J., Malim M . , Gull K. , Tuite M.F., McCready S., Dibbayawan T.,Kingsman S.M., Kingsman A.J . 1985. Reverse transcriptase activity and Ty RNA are associated with virus-like particles in yeast. Nature. 318:583-586.

104. Merculov G.V., Swiderek K . M . , Brachmann C.B., Boeke J.D. 1996. A crificalproteolytic site near the C terminus of the yeast retrotransposon Ty l gag protein. Journal of virology. 70:5548-5556.

105. Monokian G.M. , Braiterman L.T., Boeke J.D. 1994. In-frame linker insertionmutagenesis of yeast transposon Ty 1: mutations, transposition and dominance. Gene. 139:9-18.

106. Moore S.P., Garfmkel D.J. 1994. Expression and partial purification ofenzymatically active recombinant Tyl integrase in Saccharomyces cerevisiae. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 91:1843-1847.

107. Moore S.P., Rinckel L.A. , Garfmkel D.J. 1998. A Tyl integrase nuclearlocalization signal required for retrotransposition. Mol. Cell. Biol. 18:1105-1114.

108. Mosch, H.-U., Fink, G.R. 1997. Dissection of filamentous growth by transposonmutagenesis in Saccharomyces cerevisiae. Genetics. 145:671-84.

109. Muller P., Brühl K.H. , Freidel K., Kowallik K .V . , Ciriacy M . 1987. Processing ofTyl proteins and formation of Ty l virus-like particles in Saccharomyces cerevisiae. Molecular and general genetics. 207:421-429.

110. Nagai K. , Thogersen H.C. 1984. Generation of beta-globin by sequence-specificproteolysis of a hybrid protein produced in Escherichia coli. Nature. 309:810-812.

111. Natsoulis G., Boeke J.D. 1991. New antiviral strategy using capsid-nucleasefusion proteins. Nature. 352:632-635.

112. Palmer K.J. , Tichelaar W., Myers N . , Burns N.R., Butcher S.J., Kingsman A.J. ,Fuller S.D., Saibil H.R. 1997. Cryo-Electron Microscopy Structure of yeast Ty Retrotransposition virus-like particles. Journal of virology. 71:6863-6868.

113. Peters B.S., Cheingsong-Popov R., Callow D., Foxall R., Patou G., Hodgkin K. ,Weber J.N. 1997. A pilot phase II study of the safety and immunogenicity of HIV pl7/p24:VLP (p24-VLP) in asymptomatic HIV seropositive subjects. J. Infect. 35:231-235.

114. Philip J. Farabaugh. 1995. Post-transcriptional Regulation of Transposition by TyRetrotransposons of Saccharomyces cerevisiae. Journal of Biological Chemistry. 270:10361-10364.

115. Picologlou S., Dicig M.E. , Kovarik P., Liebman S.W. 1988. The sameconfiguration of Ty elements promotes different types and frequencies of rearrangements in different yeast strains. Mol Gen. Genet. 211:272-281.

116. Pi H. , Chien C , Fields S. 1997. Transcriptional activation upon pheromonestimulation mediated by a small domain of Saccharomyces cerevisiae Stel2p. Mol. Cell. Biol. 17:6410-6418.

117. Pini A , Bracci L. 2000. Phage display of antibody fragments. Curr. Protein Pept.Sci. 1:155-169.

118. Poggeler S., Schwerk C , Kamper U. , Kuck U. 1996. Efficient synthesis of a 72kDa mitochondrial polypeptide using the yeast Ty expression system. Bloc hem. Biophys. Res. Commun. 219:890-899.

119. Promislow^ D.E., Jordan I.K., McDonald J.F. 1999. Genomic demography: a lifehistory analysis of transposable element evolution. Proc. R. Soc. Long B. Biol. Sci. 266:1555-1560.

120. Ramm K, Gehrig P, Pluckthun A . 1999. Removal of the conserved disulfidebridges from the scFv fragment of an antibody: effects on folding kinetics and aggregation. J Mol Biol. 290:535-546.

121. Rathjen P.D., Kingsman A.J., Kingsman S.M. 1987. The yeast R O A M mutationidentification of the sequences mediating host gene activation and cell-type control in the yeast retrotransposon Ty. Nucleic. Acids Res. 15:7309-7324.

122. Reyburn H.T., Roy D.J., Blacklaws B.A. , Sargan D.R., McConnell I. 1992.Expression of maedi-visna virus major core protein, p25: development of a sensitive p25 antigen detection assay. J. Virol. Methods. 37:305-320.

123. Roberts R.L., Fink G.R. 1994. Elements of a single MAP kinase cascade inSaccharomyces cerevisiae mediate two developmental programs in the same cell type: mating and invasive growth. Genes Dev. 8:2974-2985.

124. Roberts R.L., Mosch H.U., Fink G.R. 1997. 14-3-3 proteins are essential forRAS /MAPK cascade signaling during pseudohyphal development in S. cerevisiae. Cell. 89:1055-1065.

125. Roeder G.S., Fink G.R. 1980. DNA rearrangements associated with a transposableelement in yeast. Cell. 21:239-49.

126. Roeder G.S., Fink G.R. 1983. Transposable elements in yeast. In Mobile GeneticElements (ed. J.A. Shapiro), pp.299-328. Academic Press, New York.

127. Rose M . , Winston F. 1984. Identification of a Ty insertion within the codingsequence of the .S. cerevisiae URA3 gene. Mo I. Gen. Genet. 193:557-560.

128. Rose M.D., Winston F. and Hieter P. 1989. Methods in yeast genetics. ColdSpring Harbor Laboratory. 24:213-215.

129. Roth J.F., Kingsman S.M., Kingsman A.J. , Martin-Rendon E. 2000. Possibleregulatory function of the Saccharomyces cerevisiae Ty l retrotransposon core protein. Yeast. 16:921-932.

130. Roth J.F. 1999. Regulation and assembly of the yeast Tyl virus-like particles. PhDthesis. St Hugh's College. Department of Biochemistry. University of Oxford.

131. Roth J.F. 2000. The yeast Ty virus-like particles. Yeast. 16:785-795.

132. Sandmeyer S.B. 1992. Yeast retrotransposons. Curr. Opin. Genet. &Deu.2:705-711.

134. Sanger F., Nicklen S. and Coulson A.R. 1977. DNA sequencing with chainterminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 74:5463-5467.

135. Schonten A , Roosien J, Bakker J, Schots A. 2002. Formation of disulfide bridgesby a single-chain Fv antibody in the reducing ectopic environment of the plant cytosol. J. Biol. Chem. 277:19339-19345.

136. Shapiro J.A., Cordell B. 1982. Transposable element T y l . Biol. Cell. 43:31-54.

137. Simchen G., Winston F., Styles C.A., Fink G.R. 1984. Ty-mediated geneexpression of the LYS2 and HIS4 genes of Saccharomyces cerevisiae is controlled by the same SPTgenes. Proc. Natl. Acad Sei. USA. 81: 2431-2434.

138. Smit A.F .A. , Toth G., Riggs A.D. , Jurka J. 1995. Ancestral, mammahan-widesubfamihes of LINE-1 repetitive sequences. J. Mol. Biol. 246:401-417.

139. Svirshchevskaya E.V., Alekseeva E.G., Marchenko A.N. , Viskova N . , AndronovaT.M., Benevolenskii S.V., Kurup VP. 2002. Immune response modulation by recombinant peptides expressed in virus-like particles. Clin. Exp. Immunol. 127:199-205.

140. Valenzuela P. 1987. Synthesis and secretion of pharmaceutical products by yeast.Biotec. 1:11-19.

141. Varmus H. 1983. RNA viruses. Reverse transcription in plants? Nature.304:116-117.

142. Voytas D.F., Boeke J.D. 1992. Yeast retrotransposon revealed. Nature. 358:717.

143. Weber J., Cheingsong-Popov R., Gallow D., Foxall R , Patou G., Hodgkin K. ,Martin S., Gotch P., Kingsman A. 1995. Immunogenicity of the yeast recombinant pl7/p24:Ty virus-like particles (p24-VLP) in healthy volunteers. Vaccine. 13:831-834.

144. Wilke C M . , Maimer E., Adams J. 1992. The population biology and evolutionarysignificance of Ty elements in Saccharomyces cerevisiae. Genética. 86:155-173.

145. Williamson V . M . 1983. Transposable elements in yeast. Int. Rev. Cytol. 83:1-25.

146. Williamson V .M . , Young E.T., Ciriacy M . 1981. Transposable elementsassociated with constitutive expression of yeast alcohol dehydrogenase II. Cell. 23:605-614.

147. Wilson W., Malim M.H. , Mellor J., Kingsman A.J. , Kingsman S.M. 1986.Expression strategies of the yeast retrotransposon Ty: a short sequence directs ribosomal íromQÚiiftmg. Nucleic Acids Res. 14:7001-7016.

148. Winston F., Durbin K., Fink G.R. 1984. The SPT3 gene is required for normaltranscription of Ty elements of Saccharomyces cerevisiae. Cell. 39:675-82.

149. Wittenberg C , Reed S.I. 1996. Plugging it in: signaling circuits and the yeast cellcycle. Curr. Op. Cell Biol 8:223-230.

150. Xiao J.H., Davidson 1., Matthes H. , Gamier J.M., Chambón P. 1991. Cloning,expression, and transcriptional properties of the human enhancer factor TEF-1. Cell. 65:551-568.

151. Xu H., Boeke J.D. 1991. Inhibition of Ty 1 transposition by mating pheromones inSaccharomyces cerevisiae. Mol And Cell. Biol. 11:2736-2743.

152. Xu H. , Boeke J.D. 1990. Localisation of sequences required in cis for yeast Ty 1Element Transposition near the long Terminal repeats: analysis of mini-Tyl Elements. Molecular and cellular biology. 10:2695-2702.

153. Yeast genetic engeneering. 1989. Edited by P.J.Barr, A.J.Brake, and P.Valenzuela.Stonenam, Massachusetts: Butterworths.

154. Youngren S.D., Boeke J.D., Sanders N.J., Garfinkel D.J. 1988. Functionalorganisation of the retrotransposon Ty from Saccharomyces cerevisiae: Ty protease is required for transposition. Molecular and cellular biology. 8: 1421-1431.

155. Yuan Y .L . , Fields S. 1991. Properties of the DNA-binding domain of theSaccharomyces cerevisiae STE12 protein. Mol Cell. Biol. 11:5908-5910.

156. Y u G., Fassler J.S. 1993. SPT13 (GALU) of Saccharomyces cerevisiae negativelyregulates activity of the M C M l transcription factor in Tyl elements. Mol. Cell. Biol. 13:63-71.