Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Создание исходного материала перца сладного с комплексной устойчивостью к ВОМ-1, ВТМ и пониженным полижительным тепературам

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Создание исходного материала перца сладного с комплексной устойчивостью к ВОМ-1, ВТМ и пониженным полижительным тепературам"

г Г Б ОД ■

/

1 Б МДР О На правах рукописи

МИШИН Сергей Петрович

СОЗДАНИЕ ИСХОДНОГО МАТЕРИАЛА ПЕРЦА СЛАДКОГО С КОМПЛЕКСНОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ВОМ-1, втм и ПОНИЖЕННЫМ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ ТЕМПЕРАТУРАМ

(06.01.05 Селекция и семеноводство)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

МОСКВА — 1998

На правах рукописи

МИШИН Сергей Петрович

СОЗДАНИЕ ИСХОДНОГО МАТЕРИАЛА ПЕРЦА СЛАДКОГО

С КОМПЛЕКСНОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ВОМ-1, ВТМ И ПОНИЖЕННЫМ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ ТЕМПЕРАТУРАМ

( 06.01.0S Селекция и семеноводство)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

МОСКВА -1998

»

Работа выполнена во ВНИИ селекции и семеноводства овощных культур в 1994-1997 гг.

Научный руководитель:

Доктор сельскохозяйственных наук, профессор, академик РЛСХН

В.Ф. Пивоваров

Официальные оппоненты: - доктор сельскохозяйственных наук, профессор Лудилов В. А.; кандидат сельскохозяйственных наук, ст.н.с. Бочарникова Н.И.

Ведущее учреждение: Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева.

Защита состоится '/■¥" 1998 г. в /3 — час. на заседании

диссертационного совета К 120.89.01 во ВНИИ селекции и семеноводства овощных культур ( 143080, Московская обл., Одинцовский р-н., п/о Лесной городок, пос. ВНИИССОК)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИ селекции и семеноводства овощных культур

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета К 120.89.01

доктор сельскохозяйственных наук Епихов В.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Наличие исключительных диетических и лечебных качеств обеспечили сладкому перцу Capsicum annuum L. в последние 1015 лет, рост популярности у российского потребителя. В силу ряда причин, существующий сортимент перца пока в большей степени предназначен для открытого грунта, в то время как биологические особенности этой овощной культуры в климатических условиях Нечерноземья позволяют получать гарантированные урожаи только в теплицах. Поэтому, для удовлетворения возросшего спроса, необходимо выведение новых сортов и гибридов F"i с комплексной устойчивостью к наиболее вредоносным заболеваниям защищенного грунта и адаптированным к неблагоприятным факторам среды.

В связи с этим, в мировой селекционной практике особое внимание уделяется гетерозисным гибридам перца. Такие гибриды не только имеют лучшее качество плодов, более урожайны и устойчивы, но и, благодаря эффекту гетерозиса, в ряде случаев, лучше адаптированы к неблагоприятным факторам среды. Более того, особенности получения таких гибридов являются надежными гарантами соблюдения авторских прав селекционера. В 1994 году в России был районирован всего один гибрид острого перца F1 Тульский. В 1997 году количество F1 гибридов достигло 28 или 60% от районированного сортимента. Из них только восемь предназначены для условий защищенного грунта.

Современные экономические реалии требуют ускорения темпов селекционного процесса, что особенно актуально для селекции на устойчивость к патогенам. Как показала практика, для решения поставленных задач необходимо применение методов, опирающихся на современные достижения селекции, генетики, биотехнологии, а так же разработка экспресс-методик, позволяющих быстро и объективно оценить исходный материал.

В защищенном грунте III световой зоны для перца наиболее вредоносны заболевания, вызываемые вирусами ВОМ-1 и ВТМ, которые не только снижают урожайность на 19-90 % в зависимости от возбудителя, но и значительно ухудшают товарные качества плодов. Кроме того, существенным

экологическим фактором, лимитирующим выращивание перца в пленочных теплицах северных районов России, являются пониженные положительные температуры, в начале и конце вегетации.

В литературе имеется несколько сообщений о разработке экспресс-методов оценки комплексной устойчивости к группе вирусов и неблагоприятным факторам среды. Однако методик, оценивающих комплекс ВОМ-1, ВТМ и пониженные температуры до настоящего времени не описано. Отсутствуют так же сведения о получении у подобных генотипов андрогенных растений, как непосредственных источников чистых линий для гетерозисной селекции.

Цель и задачи исследований. Цель проведенных исследований - создание исходного материала перца сладкого, предназначенного для выведения F1 гибридов, устойчивых к пониженным температурам и вирусным заболеваниям.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1) Создать и оценить коллекцию Capsicum annuuin L., составленную из лучших образцов коллекции ВНИИССОК, а так же образцов, полученных из ВИРа, Приднестровского НИИСХа и Уругвая на устойчивость к наиболее вредоносным штаммам вирусов ВТМ и ВОМ-1 и пониженным положительным температурам (14-16°С).

2) Разработать методику экспресс-оценки на комплексную устойчивость к наиболее вредоносным для перца штаммам вирусов ВТМ и ВОМ-1 и пониженным положительным температурам (14-16°С),

3) Исследовать штаммовый состав вирусов естественного инфекционного фона защищенного грунта ВНИИССОК.

4) Оценить активность андрогенеза у генотипов, обладающих комплексной устойчивостью, с целью ускоренного получения чистых линий.

5) На культуре перца разработать методы ускоряющие получение чистых линий с комплексной устойчивостью к биотическим и абиотическим факторам среды.

Научная новизна работы. Впервые показана возможность комплексной оценки к наиболее вредоносным в условиях защищенного грунта III световой зоны штаммам вирусов ВТМ, ВОМ-1 и пониженным положительным температурам (14-16°С). Выделен ряд высокоустойчивых образцов с комплексным иммунитетом. Выявлена реакция образцов перца на заражение новым агрессивным лопуховым штаммом ВОМ-1. Впервые выделены источники устойчивости к этому возбудителю. Дана оценка возможности ускоренного получения чистых линий с устойчивостью к ВОМ-1 и ВТМ с помощью методов индуцированного андрогенеза и соматического эмбриогенеза.

Практическая значимость работы. Выделены перспективные образцы с комплексной устойчивостью к ВОМ-1, ВТМ и пониженным положительным температурам и созданы линии для селекции Fl гибридов, предназначенных для условий защищенного грунта III световой зоны. Разработана методика комплексной экспресс-оценки к наиболее вредоносным штаммам вирусов ВТМ и ВОМ-1 и пониженным положительным температурам (14-16°С). Показана возможность получения чистых линий из образца с комплексной устойчивостью Chimes с помощью методов индуцированного андрогенеза в пыльниках. Показан эмбриогенный потенциал соматических тканей у генотипов перца с высоким уровнем комплексной устойчивости.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены в докладе на Ежегодной конференции молодых ученых в сельскохозяйственной академии им. К.А. Тимирязева (Москва, 1996); на VII съезде Белорусского общества генетиков и селекционеров, (Беларусь, Горки, 1997); на Международном симпозиуме "Гетерозис сельскохозяйственных растений" ( Москва, 1997),

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 3 работы.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 115 стр. машинописного текста и состоит из введения, литературного обзора, экспериментальной части и обсуждения результатов, выводов, списка литературы. Список литературы включает 250 наименований (150 отечественных и 100 иностранных ). Диссертация иллюстрирована 20 рисунками и содержит 11 таблиц.

4 . и .

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Материалы и методы исследований. Для проведения исследований была создана коллекция сортов и гибридов сладкого перца, состоящая из 96 образцов. В коллекцию был включен материал, полученный из четырех источников: ВИРа, Приднестровского НИИСХа, ВНИИССОКа и Уругвая, обладающий наряду с устойчивостью к вирусам ВОМ-1 и ВТМ хозяйственно-ценными признаками. Выращивание рассады и последующий уход за растениями проводили по традиционной для культуры перца технологии. Во время вегетационного периода осуществляли фенологические наблюдения и морфологическое описание образцов по методике ВНИИИР.

Определение реакции сверхчувствительности по отделенным листьям проводилось по методике, предложенной Glen, Singh (I960 ) и усовершенствованной Балашовой H.H. и др. (1983). Искусственное заражение сеянцев ВТМ и ВОМ-1 проводилось в фазе 2-4 настоящих листьев по общепринятой методике. На листья напыляли тонкий слой карборунда и натирали его ватным тампоном, смоченным в растворе соответствующего.вируса, при получении которого чистый вирусный препарат разводили в 5-10 раз рабочим раствором забуференного физиологического раствора pH 7.4. Визуальную оценку проводили 3 раза за вегетацию: через 15 дней после заражения; через 30 дней после .'заражения; в фазу плодоношения образцов. Фито-патологическую оценку поражаомости ВТМ проводили по общепринятой шкале ВИР( Гешеле, 1978).

При составлении шкалы балльного учета симптомов, вызываемых штаммом ВОМ-1, выделенного из Arctium spp. пользовались рекомендациями Чумакова А.Е. (1974).

Визуальная оценка поражаемости дублировалась иммуноферментным анализом. Анализ осуществлялся с использованием оборудования фирмы Dynatech. Диагностикум к ВТМ (0 томатный штамм), ВОМ-1 (штамм, выделенный из Arctium spp.) положительный и отрицательный контроля были любезно предоставлены сотрудниками кафедры вирусологии МГУ. Оценка поражаемости сортообразцов перца вирусом ВТМ осуществлялась по

"сэндвпч"-варианту нммуноферментного анализа. Оценка поражаемости сортообразцов перца лопуховым штаммом ВОМ-1 осуществлялась по непрямому варианту нммуноферментного анализа с длиной волны 405 нм.( Гнутова, 1985). Принимали следующие градации поражаемости вирозом в зависимости от относительной концентрации ИФА: устойчивый - от 0,000 до 0,099, поражаемость слабая - от 0,100 до 0,199, пораЖаемость средняя - от 0,200 до 0,499 и поражаемость сильная от 0,500 и выше ( Uemachi et al., 1995). Латентное наличие вирусов в бессимптомных образцах коллекции Capsicum annum L. проверялось на растениях-индикаторах: к ВТМ на индикаторе Nicotiana glutinosa L., к ВОМ-1 на растениях Chenopodium guinoa Willd. Сок из листьев перцев разбавляли водопроводной водой или фосфатным буфером в отношении 1:1. Учет результатов проводили через пять, десять, двадцать пять дней после заражения. При заключении о принадлежности возбудителя мозаики к определенной группе пользовались рекомендациями Смит К.(1960), Балашова и др.(1983).

Оценку перца на комплексную устойчивость к ВОМ-1, ВТМ и пониженным температурам осуществляли в необогреваемой пленочной теплице. Каждый образец коллекции заражался ВОМ-1 и ВТМ в отдельности, а также смесью вирусов на двух температурных фонах: обогреваемая пленочная теплица 20-22°С; необогреваемая пленочная теплица 14-16 °С. Семена высевали по общепринятой методике в ящики с торфоперегнойной смесью, заправленной полным минеральным удобрением с микроэлементами. В один ящик высевали по 4-5 образцов. Общее количество высеваемых семян каждого образца - 100-150 штук. К заражению приступали в фазе семядольных листьев, примерно через неделю после массовых всходов. Для заражения использовали препараты идентифицированных штаммов, полученные на кафедре вирусологии МГУ.

Разбавленным вирозным соком натирали семядольные листья, с предварительно нанесенным карборундом. Для дозировки инфекции на лист капали по капле вирусного препарата и травмировали его пинцетом. Затем, зараженные листья смывали дистиллированной водой. После заражения,

растения одной повторности оставляли в обогреваемой стеклянной теплице при температуре 20-25 °С, другую повторность выдерживали в течение трех дней при температуре 20-25°С, затем переносили в необогреваемую пленочную теплицу с температурой 14-16 °С. В фазе 2-3 настоящих листьев (примерно через 15 дней после заражения) проводили первую оценку. Учитывали появление симптомов мозаики, задержку роста и количество погибших растений.

Исследования индуцированного андрогенеза проводили на 8 генотипах, показавших высокий уровень устойчивости. Опыт проводился под све-тоустановкой с лампами ДРИ-700, обеспечивающих освещенность 5 тыс. люкс на уровне растений. Соблюдали 16 ч. фотопернод, при температуре 2830 °С днем, 19-20 °С ночью. Посев семян проводился 13 декабря 1996 г. по общепринятой методике. Сеянцы заражали в фазе семядольных листьев. Через 15 дней после заражения бессимптомные здоровые растения переносили в пластиковые сосуды диаметром 15 см. В дальнейшем выращивание растений проходило традиционным способом. 25 апреля 1997 г. растения в сосудах переносились в обогреваемую стеклянную теплицу. Температура 17-19 °С ночью, 21-23 °С днем. 23 июня растения в сосудах переносились в вегетационную камеру, освещенность лампами ДРЛ и ДРИ-700 составляла 6-10 тыс. люкс на уровне растений, с температурой 24-26 °С днем и 20-22 °С ночью. Для культивирования пыльников использовали следующие агаризова-ные среды: безгормональная среда Нича ( Nitsch, 1969), с добавлением 10 г/л активированного древесного угля ( I ); среда С ( Dumas de Vaulx, 1981) с добавлением кинетина - 0,01 мг/л, 2,4 Д - 0,01 мг/л (II), кинетина - 0,5 мг/л, 2,4 Д - 0,5 мг/л (III), 2,4 Д - 0,5 мг/л, БАП - 0,5 мг/л (IV); среда R ( Dumas de Vaulx, 1981) с добавлением 0,1 мг/л кинетина; агаризованная среда MS ( Murashige et al., 1962) с добавлением 2,4 Д - 0,2 мг/л, БАП - 0,5 мг/л (V); 2,4 Д - 0,2 мг/л, TDZ - 1,5 мг/л (VI); жидкая среда MS ( Murashige et al., 1962) с добавлением 2,4 Д - 0,2 мг/л, БАП - 0,5 мг/л; 2,4 Д - 0,2 мг/л, TDZ -1,5 мг/л;

Бутоны собирали, когда длина лепестков и чашелистиков была одинаковой. При этом пыльники находились на стадии одноядерных микроспор или первого митоза микроспор (Sibi et al., 1979; Dumas de Vaulx, 1981; Тюка-

вин и др., 1990). Стерилизацию бутонов после предварительной обработки в 96 % этаноле (30 сек), проводили в 2,5% водным раствором хлорамина Б в течение 30 мин. После стерилизации бутоны трижды промывали в стерильной дистиллированной воде по 10 минут. Окрашивание ацетокармином проводили по общепринятой методике ( Юрцев и др., 1968 ) после фиксации объектов исследований в фиксаторе по прописи Карнуа.

Статистическая обработка результатов исследований проводилась с помощью программы StatGraphics 2.1+ с 5% уровнем значимости. Графики и рисунки выполнены в программе Microsoft Excel 7.0.

Результаты исследований.

Исходный материал сладкого перца с комплексной устойчивостью к ВОМ-1. ВТМ и пониженным положительным температурам.

На основании изучения коллекции, состоящей из 96 образцов сладкого перца, нами был отобран перспективный исходный материал, предназначенный для выведения сортов и гибридов с комплексной устойчивостью к ВОМ-1, ВТМ пониженным положительным температурам, а также обладающих другими хозяйственно-ценными признаками. Всего выделено 14 образцов с разной степенью устойчивости к ВТМ и 80 образцов с устойчивостью к ВОМ-1.

Наибольший интерес представляют 8 образцов ( табл. 1 ), имеющих, наряду с высоким уровнем устойчивости к вирозам и неблагоприятным факторам среды ряд ценных селекционных признаков - высокую продуктивность, скороспелость, отличные характеристики плода и габитуса куста.

Таким образом, в результате исследований получен ценный исходный материал, использование которого дает возможность более эффективного ведения селекции сладкого перца для условий защищенного грунта Нечерноземной зоны России.

Оценка коллекционных сортообразцов на вертикальную устойчивость к ВТМ по отделенным листьям.

Оценка коллекционных сортообразцов на наличие некротической реакции с использованием методики заражения отделенных листьев показало, что из 96 образцов коллекции только у 6 образцов ( 6%) обнаружена некротическая

Таблица 1.

Характеристика исходного материала перца сладкого для селекции на комплексную устойчивость к ВОМ-1, ВТМ и неблагоприятным факторам среды. (1995-1997 гг.)____

Название образца Тип куста ОГТ ВСХОДОВ до созревания дней описание плода ВОМ-1 ВТМ

форма окраска масса грамм толщина стенки мм продуктивность балл средняя оценка поражаемое™ 1995-96г. средняя оценка поражаемое™ 1995-96Г.

L9 полудетерминан тный, компактный 109-116 удлиненно-призмовид- ный, без вдавливаний темнозеленый с антоцианом, красный 90-95 7,6-8 2 устойчив слабая

Агаповский полудетерминан тный, компактный 106-112 призмовид-ный, гладкий темнозеленый, красный 118-122 7,6-8 3 устойчив средняя

Здоровье индетерминант-ный, полураскидистый 85-89 конусовидный пониклый зеленый, красный 35-45 3-4 3 устойчив средняя

Д28+ полудетерминаь тный, компахт-ный 75-85 призмовид- ный без вдавливаний светлозеленый красный 35-100 6-6,5 2,5 устойчив средняя

Chimes пoлyдeтepминa^ тный, средне-облиственный 116-124 призмовид-ный, гладкий, глянцевый темнозеленый, красный 80-85 7-7,5 2 устойчив устойчив

Иоланта индетерминант-ный, раскидистый 89-98 конусовидный молочножел-тый, красный 65-70 5,5-6,5 2 устойчив слабая

Autona детерминант-ный, компактный 114-122 призмо-видный темнозеленый. красный 95-100 7-7,5 2,5 слабая слабая

Гибрид 54 индетерминант-ный, полураскидистый 98-107 конусовидный зеленый, красный 65-70 6-6,5 2,5 устойчив слабая

реакция на заражение штаммом ВТМ, причем устойчивость к ВТМ показал только образец Chimes. Остальные 5 образцов ( F1 Capri; F1 Memphis; Florida resistant giant; P 7118 hybrid; гибрид 48) при заражении в условиях теплицы реагировали системно: после образования некрозов на инокулирован-ных листьях, сбрасывали их. В дальнейшем происходила некротизация поверхностных и внутренних тканей стебля в его средней и нижней частях. Растения были незначительно угнетены.

Таблица 2.

Характеристика вертикального типа устойчивости у некоторых изученных сор-тообразцов при искусственном заражении вирусами ВТМ и ВОМ-1._

Название образца вирус Наличие некротической реакции Дней после инокуляции

4-5 6-7 8-9 10-20

Chimes ВТМ + :ветлокоричн евые некрозь 4-5 мм в диаметре с обозначенным ободком гемнокоричне вые некрозы 6-7 мм в диаметре с обозначенным ободком коричневые некрозы диаметром 6-7 мм с ясно различимым темным ободком диаметром 8 мм, опадение инокулированных листьев

ВОМ - - - - -

F1 Memphis ВТМ + - светлокорич невые некрозы 6-7 мм без четких границ светлокорич невые некрозы 10-15 мм без четких границ опадение инокулирован ных листьев, системный некроз

ВОМ - - - - -

Р 7118 hybrid ВТМ + - светлокорич невые некрозы 5-6 мм без четких границ светлокорич невые некрозы 9-13 мм без четких границ опадение инокулирован ных листьев, системный некроз

ВОМ - - - - -

Здоровье ВТМ - - - - -

ВОМ - - - - -

+ - наличие некротической реакции; - - отсутствие некротической реакции

Кроме того характер некротических поражений у сорта Chimes отличался от остальных образцов: через 5 дней после заражения образовывались светлокоричневые некрозы размером около 4 мм в диаметре с более темным ободком. Впоследствии некроз темнел и увеличивался в размере до 6-7 мм.

Инокулированные листья опадали через 2 недели. Образцы с системной некротической реакцией реагировали на заражение светлокорнчневыми некрозами 6-7 мм без четких границ, впоследствии увеличивающихся до 10-15 мм и появлением системных некрозов.Некротической реакции на заражение лопу-ховым штаммом ВОМ-1 в коллекции обнаружено не было, (табл.2) Поражаемость коллекционных сортообразцов ВОМ-1 и ВТМ. В результате проведенной оценки поражаемое™'коллекционных сорго-образцов ВОМ-1 и ВТМ с помощью ИФА в 1995-1996 гг установлено, что среди коллекционных образцов практически отсутствует устойчивость к томатному штамму (0) ВТМ: выделен один образец с вертикальной некротической устойчивостью ( Chimes ) и 7 образцов с слабой поражаемостью, 91% образцов коллекции поражаются в средней и сильной степени.( рис.1)

слабая устойчивые 8% 1%

■ устойчивые

□ слабая

□ средняя Всильная

Рисунок 1. Поражаемость сортообразцов ВТМ, % (ИФА) 1995-96 г. И напротив, 82% образцов обладают иммунитетом к ВОМ-1, 11 % поражается в слабой степени, и только 4 % образцов поражаются болезнью в средней и сильной степени, (рис.2)

сильная 0% средняя 4%

Я устойчивые

□ слабая Ш средняя

□ сильная

Рисунок 2. Поражаемость сортообразцов ВОМ-1, % (ИФА) 1995-96 г.

Визуальная оценка поражаемости обоими вирусами дала примерно такие же результаты, однако распределение образцов по степени устойчивости имело несколько иной характер. Например при балльной оценке степени поражения ВОМ-1 количество устойчивых образцов составляло 35% от всей коллекции, слабо поражаемых 37% , среднепоражаемых 23% и сильнопора-жаемых 1%. Причем, увеличение количества слабо- и среднепоражаемых сортов (по визуальной оценке) произошло в основном за счет устойчивых (по оценке ИФА). (рис.3)

■ усто№иеые Вслабая [Передняя 9 сильная

Рисунок 3. Сравнительная средняя поражаемость коллекционных сортооб-разцов ВОМ-1, определенная визуально и ИФА, % 1995-1996 гг.

Оценка устойчивости коллекционных сортобразцов к ВТМ методом

ИФА и визуально не выявила такого разночтения в степени устойчивости. (рис.4). В то время как, увеличение группы из среднепоражаемых сортов по визуальной оценке, произошло большей частью за счет группы сильнопора-жаемых по ИФА сортов.

■ усто№ивые 5 слабая Шсредняя В сильная

Рисунок 4. Сравнительная средняя поражаемость коллекционных сортооб-разцов ВТМ, определенная визуально и ИФА, % 1995-1996 гг.

Таким образом, очевидно несоответствие уровня концентрации используемых в исследованиях штаммов вирусов в растении перца со степенью выраженности вызываемых ими симптомов заболевания. Поэтому, для получения объективных результатов при исследовании степени выносливости селекционного материала к вирусной инфекции, необходимо одновременно использовать нескольких параллельных методик оценки. Причем, предпочтение, видимо, следует отдавать методикам, оценивающим концентрацию вируса в растении. Поскольку, именно генотипы редуцирующие репликацию вируса в растении позволяют ограничить широкое распространение болезнй и исключить передачу вируса с семенами.

Исследование корреляционной зависимости между поражаемостью перца ВОМ-1 и ВТМ в единицах относительной коннентранни ИФА.

Результаты, изложенные выше, дают основание предположить наличие отрицательной корреляционной зависимости между поражаемосгыо ВОМ-1 и ВТМ. Однако проведенный регрессионный анализ между поражаемостью перца ВОМ-1 и ВТМ в единицах относительной концентрации ИФА не выявил статистически существенной зависимости.

Уравнение линейной регрессии поражаемости вирусом огуречной мозаики-1 от поражаемости вирусом табачной мозаики, выглядит следующим образом: ВОМ-1 (ИФА) = 0,0605035 + 0,00550983*ВТМ (ИФА)

где: ВОМ-1 (ИФА) - относительная концентрация ВОМ-1 в растениях перца (ИФА); ВТМ (ИФА) - относительная концентрация ВТМ в растениях перца (ИФА); Коэффициент корреляции г = 0,106445; Коэффициент детерминации ёух= 1,13306 %; Стандартная ошибка оценки 8 = 0,0567008.

Коэффициент корреляции равняется 0,106445, указывая на слабую связь между переменными. Коэффициент детерминации с!ух= 1,13306 % указывает, что поражаемость вирусом табачной мозаики определяет только 1,13306 % изменчивости поражаемости вирусом огуречной мозаики-1.

Уравнение линейной регрессии поражаемости вирусом табачной мозаики, от поражаемости вирусом огуречной мозаики-1 выглядит следующим образом:

ВТМ (ИФА) = 0,430844 + 2,05643* ВОМ-1 (ИФА), где: ВТМ (ИФА - относительная концентрация ВТМ в растениях перца (ИФА); ВОМ-1 (ИФА) -относительная концентрация ВОМ-1 в растениях перца (ИФА); Коэффициент корреляции г = 0,106445; Коэффициент детерминации dyx= 1,13306 %; Стандартная ошибка оценки S= 1,09541

Таким образом, степень поражаемости коллекционных образцов вирусом ВОМ-1 практически не зависит от степени поражаемости вирусом ВТМ, и обратное, степень поражаемости образцов коллекцни'вирусом ВТМ не зависит от поражаемости вирусом ВОМ-1. Такой результат указывает на возможность одновременной фитопатологической оценки генотипов перца на устойчивость к данным штаммам вируса.

Оценка коллекционных сортообразцов на комплексную устойчивость к ВОМ-1 н ВТМ на фоне пониженных температур.

Заражение растений перца в фазе семядольных листьев приводит к более выраженным симптомам вирозов, что особенно заметно на неблагоприятном для перца температурном фоне t=16 °С. Воздействие двух неблагоприятных экологических факторов пониженная температура и агрессивный штамм вируса требуют от растения наличия генов устойчивости к вирозу и генов, стабилизирующих физиологические процессы в растении при низких температурах. Отсутствие любого из этих двух генетических компонентов приводит к выраженному угнетению растений вплоть до гибели. Поэтому одним из наиболее информативных критериев оценки комплексной устойчивости к экстремальным факторам среды было выбрано процентное отношение выживших растений через 21 день после заражения на соответствующем температурном и инфекционном фоне.

В проведенных нами исследованиях были выявлены следующие закономерности:

Влияние различных температурных фонов на поражаемость растений перца вирусами ВОМ-1 и ВТМ. В опытах установлена различная реакция растений перца, на заражение, проводимое в условиях двух температурных фонов, в зависимости от вида вируса. Количество погибших растений, в процентном отношении, при заражении ВОМ-1 статистически значимо различалось на разных температурных фонах.

В свою очередь, при заражении ВТМ на разных температурных фонах статистически значимых различий не наблюдалось.( рис.5)

%,90 80 70 60

ВОМ-1 (НСР03=4,35) 60

-© 40

ВТМ (НСР03=4,78) 30

--------<$> 20

10 0

14-16°С 23-2Б°С

температурный фон

Рисунок 6. Среднее количество выживших растений через 21 день после заражения ВОМ-1 и ВТМ на разных температурных фонах.

Возможно, подобная закономерность определяется разным механизмом детерминации признака устойчивости к каждому из вирусов. Моногенная устойчивость к ВТМ по всей видимости значительно меньше подвержена влиянию модифицирующих средовых факторов чем полигенно наследуемая устойчивость к ВОМ-1.

Таблица 3.

Влияние разных температурных и инфекционных фонов на количество выживших растений, через 21 день после заражения, %, 1995-1997 г. (НСР= 3,01).

температурный фон степень поражаемое™ растений выживших после заражения на образец, % инфекционный фон

ВОМ-1 ВТМ ВОМ-1+ВТМ

14-16°С неустойчивые средняя слабая устойчивые 0-20 2,8 6,9 63

21-60 7,2 8,9 26

61-80 33,3 64,6 14

81-100 69,3 31,1 5,7

22-25°С неустойчивые средняя слабая устойчивые 0-20 0,33 0,33 22,9

21-60 4,1 8,6 31,2

61-80 14,6 30,6 32

81-100 76,1 69,4 7,8

81'3ф-=гт-73,к >----

"ф86,9 ^76,7

Лоражаемость сортообразцов при одновременном заражения ВОМ-1 и ВТМ на разных температурных фонах. Одновременное заражение растений обоими штаммами вирусов как в экстремальных температурных условиях, так и в нормальных, увеличивала степень поражаемости сортообразцов коллекции (табл.3). Причем, наибольшая амплитуда в поражаемое™ отмечалась при 1=14-16°С.

Результаты многофакторного дисперсионного анализа наглядно иллюстрируют эффекты действия и взаимодействия факторов температурных и инфекционных фонов у разных по степени устойчивости к вирусам и выносливости к пониженным температурам сортообразцов. (рис.6)

% 90 80 70 60 РС 60

-14-16 40

----22-25 30

20 10 0

ВОМ-1 ВТМ ВОМ-1 + ВТМ

инфекционный фон

Рисунок в. Эффекты действия и взаимодействия факторов температурных и инфекционных фонов на количество выживших растений у разных по степени устойчивости к ВОМ-1, ВТМ сортов.

В частности, го графика видно что у сорта Богатырь, показавшего среднюю поражаемость ВТМ и слабую ВОМ-1, количество выживших растений при разных температурах статистически не существенно различается на инфекционном фоне с ВТМ, в то время как эта разница статистически существенна на инфекционных фонах с ВОМ-1 и комплексом вирусов. Причем одновременное заражение приводит к значительно большему количеству погибших растений , чем при раздельном заражении. Такие результаты могут указывать на отсутствие у данного - сорта адаптивности к пониженным температурам.

. СЫтев (НСРм=б,1бу --------г \—

"V........................................

Стала! (НСРо5=5,4б)

Богатырь (НСР05=4,12Х _____________________________

)

>-------------------

Для устойчивого к ВОМ-1 и сильно поражаемого ВТМ сорта Granat, в Данном случае, очевидны статистически значимые различия в количестве выживших растений как на разных температурных так и инфекционных фо-нах.Что может говорить об отсутствии модифицирующих генов адаптивности не только к признаку устойчивости к ВОМ, но и к ВТМ. Такое сочетание , в сумме с отсутствием устойчивости к ВТМ привело к гибели почти 2/3 сеянцев, на смешанном инфекционном фоне.

В то же время устойчивый обоим вирусам сорт Chimes практически одинаково реагирует на разные инфекционные и температурные фоны, небольшое понижение количества выживших растений на смешанном инфекционном фоне статистически не достоверно. Такие результаты свидетельствуют как о наличии комплексной устойчивости к обоим штаммам вирусов, так и о наличии в генотипе мощного комплекса генов стабилизирующих эту устойчивость при пониженной температуре. Кроме того, позволяют нам предположить о существовании определенного синергитического эффекта между изученными штаммами вирусов.

Таким образом, учитывая широкое распространение и высокий уровень патогенности, используемых в наших исследованиях вирусных штаммов ВОМ-1 и ВТМ, является обоснованной необходимость ведения селекции устойчивости к вирозам на смешанном инфекционном фоне.

Исследование андрогенной и эмбриогенной спосбности у генотипов, обладающих комплексной устойчивостью.

Влияние питательной среды на частоту каллусообразования.

Изучено влияние шести различных питательных сред. Результаты исследований показали, что образование каллусов из пыльников наблюдалось уже через неделю культивирования и достигало максимума через 6 недель на средах II, III, IV и 16 недель на среде I.

Наибольший % каллусообразования наблюдался на безгормональной среде I и достигал в среднем 10,8±1,1 Г/о. Наименьший - 2,57±1,11% на среде V, с температурной предобработкой +35°С в течение 8 суток, (табл. 4)

Таблица 4.

Количество пыльников с каллусом у сладкого перца на разных средах (средние по семи генотипам, %) НСР05 = 2,22

Среда пыльников с каллусом, %

1 Nitsch, 1969), с добавлением 10 г/л активированного древесного угля 10,80

и С ( Dumas de Vaulx et al., 1981) + кинетин 0,01 мг/л, 2,4 Д 0,01 мг/л, 3,10

m С (Dumas de Vaulx et al., 1981) + кинетин 0,5 мг/л, 2,4 Д 0,5 мг/л, 5,66

IV С (Dumas de Vaulx et al., 1981) + БАП 0,5 мг/л, 2,4 Д 0,5 мг/л, 5,57

V MS ( Murashige et al., 1962)+2,4 Д 0,2 мг/л, БАП 0,5 мг/л; 2,57

VI MS ( Murashige et al., 1962)+2,4 Д 0,2 мг/л, TDZ 1,5 мг/л; 3,92

Существенные различия в каллусообразовании наблюдались на средах III, IV и V. Обращает на себя внимание влияние концентрации гормонов группы цитокинииа в среде СР ( Dumas de Vaulx et al., 1981) на количество пыльников, индуцирующих каллус. Увеличение в 50 раз количества кинетина и БАП в среде, по сравнению с рекомендуемой по стандартной методике концентрацией, (0,01 мг/л кинетина), увеличило каллусообразование почти в два раза с 3,1 + 1,11% до5,7±1,11% и 5,6 ±1,11% соответственно.( табл.4).

Таким образом, состав питательной среды оказывает значительное влияние на индукцию каллусообразования in vitro у сладкого перца, причем, наибольшее количество пыльников индуцирует каллус на безгормональной среде I, без температурной предобработки +35°С.

' Влияние генотипа перца на частоту каллусобразоваиия.

Полученные нами результаты подтверждают отмечаемое многими исследователями (Dumas de Vaulx, 1981; Chambonnet, 1985; Pickersgill et al., 1991; Mityko et al., 1995; Fari, 1995; и др.) влияние генотипа растения перца на частоту каллусообразования.

Наибольшее количество пыльников с каллусом в опытах с температурной предобработкой наблюдалось у генотипа Chimes 6,55±1,51 %, наименьшее 2,21 ±1,51 % - у генотипа Гибрид 48. В целом, проявились четкие различия

между генотипом Гибрид 48 и генотипами Chimes, Здоровье; -К»214, Виктория, Pepper L9 и отсутствуют значимые различия с генотипом Gedeon Fl. В то же время нет существенных различий между генотипом Gedeon Fl и всеми остальными генотипами.

Влияние условий выращивания донорных растений на индукцию каллу-согенеза.

! Эмбриогенная активность микроспор повышается предобработкой пыльников перца высокой температурой ( +35°С).( Dumas de Vaulx, 1981; Qin et al., 1993; Regner, 1994 и др. ) В то же время, такая же предобработка бутонов оказалась неэффективной^ Chambonnet, 1985) Мы исследовали частоту каллу-сообразования у генотипов, выращиваемых в стеклянной теплице, с колебаниями температуры от +35-37 °С днем до 19-21 °С ночью и у тех же генотипов, выращиваемых в условиях вегетационной камеры с колебаниями температуры от +26-28 °С днем до 22-24 °С ночью.

Для индукции эмбриогенеза использовали два варианта среды СР ( Dumas de Vaulx et al., 1981) с добавлением БАП 0,5 мг/л, 2,4 Д 0,5 мг/л, и кинетика 0,5 мг/л, 2,4 Д 0,5 мг/л, при этом предобработка бутонов высокой температурой была исключена. Результаты исследований для генотипа Chimes представлены в табл. 5.

Таблица 5.

Влияние условий выращивания на количество пыльников с каллусом в зависимости от гормонального состава среды и предобработки высокой температурой у генотипа Chimes,%, (НСР=7,8)__

Среда Место выращивания донорных растений количество пыльников с каллусом, %

с предобработкой без предобработки

С ( Dumas de Vaulx, 1981)+кинетин 0,5 мг/л, 2,4 Д 0,5 мг/л, теплица 7,45 71

- вегетационная камера 9,1 15

С ( Dumas de Vaulx, 1981) + БАП 0,5 мг/л, 2,4 Д 0,5 мг/л, теплица 7,54 62

- вегетационная камера 8,7 22

Очевидна существенность различий между уровнем каллусообразования у пыльников растений, выращенных в теплице и растений, выращенных в условиях вегетационной камеры. В тоже время выделяется эффект взаимодействия условий выращивания с различным гормональным составом питательной среды. Среды не различаются по влиянию на уровень каллусообразоп.ч-ния у растений из вегетационной камеры, и статистически существенно влияют на растения из теплицы. Поэтому можно утверждать о тормозящем действии предобработки как для растений из вегетационной камеры, так и для растений из теплицы. Причем, для тепличных растений оно имеет более выраженный характер. В ряде исследований, проведенных на других видах семейства Solanaceae были получены аналогичные результаты ( Raghavan, 1978; Taguchi, Mii, 1982, Kristiansen, 1993).

Таким образом, высокий уровень индукции каллусообразования в бутонах растений, выращенных в неблагоприятных условиях теплицы, позволяет нам предположить, что подобные условия определенным образом сдвигают соотношение эндогенных гормонов, которое в свою очередь приводит к индукции каллусогенеза. Причем решающую роль, по видимому, играет реакция растения как организма в целом. Поэтому повторная предобработка температурным стрессом на среде с иным, чем эндогенный, гормональным составом приводит к дисбалансу этого процесса и тем самым снижает процентное количество пыльников, индуцирующих каллус.

Исследование эмбриогенной способности у различных типов каллуса.

В процессе культивирования пыльников на различных питательных средах описано образование шести типов каллусов, (табл. 6) Из них только каллусы III VI V типов содержали клеточные образования, способные при определенных условиях трансформироваться в эмбриональные структуры.

Содержание у типов I, II, III, IV в каллусной ткани стерильных пыльцевых зерен, а так же форма клеток и состояние их цитоплазмы позволяет предположить , что данные типы каллуса инициируются из клеток тапетума. Каллус V типа образовывался на среде MS + 2,4 Д 0,2 мг/л, TDZ 1,5 мг/л из соматических клеток пыльника (остатка тычиночной нити, связника и т.д.)

à

Таблица 6.

Сравнительная характеристика различных типов каллуса, индуцируемого в пыльниках Capsicum annuum L. с точки зрения их эмбриогенной активности.

Тип Среда Морфологическая характеристика каллуса Цитологическая характеристика каллуса Наличие эмбриогенной активности

1 Nitsch, 1969), с добавлением 10 г/л активированного древесного угля верхний слой рыхлый, цвет белый, с розовым оттенком, поверхность бугристая с выростами неправильной фор-«ы, сквозь верхний слой про свечивает очень плотный внутренний слой, темноко-аичневого цвета, на свету не зеленеет, при пассировании на гормональную среду МЭ прекращает рост. верхний слой состоит из ги-антских, сильно вакуолизиро ванных клеток, удлиненной [юрмы, с почти невидным яд ром, внутренний из удлиненных клеток с более толстой клеточной стенкой. эмбриональные клеточные комплексы и инициальные клетки эм-бриоидов отсут-свуют

II С ( Dumas de Vaulx, 1981) + кинетин 0,5 мг/л, 2,4 Д 0,5 мг/л, верхний слой рыхлый, бесцветный, бугристый, с участками разной плотности еленеет на свету. При пасси ровании на гормональную среду МЭ интенсивно растет состоит из удлиненных клеток паренхимного типа эмбриональные клеточные комплексы и инициальные клетки эм-бриоидов отсут-свуют

III С ( Dumas de Vaulx, 1981) + БАП 0,5 мг/л, 2,4 Д 0,5 мг/л, верхний слой опушенный есцветный или белого цветг на свету не зеленеет, рост средней интенсивности, при пересаживании на гормо-1альную среду МЭ трансфер мируется в желтоватый не опушенный каллус с интенсивным ростом. пушение представляет собо тяжи, состоящих из переплетены х нитевидных клеток, с юрошо прокрашиваемым яд юм и сильноаакуолизирован ной цитоплазмой, желтый аллус состоит из удлиненны клеток парен химного типа. в ткани желтого каллуса имеются диничные включе ния, состоящие из юмплекса двух хо рошо прокрашиваемых клеток неявного размера. Е клеточных тяжах признаки эмбриогенной активости отсутствут.

VI MS ( Mrashige et al., 1962) + 2,4 Д 0,2 мг/л, TDZ 1,5 мг/л; верхний слой неровный, :ильно бугристый, состоит и: участков разного цвета и лотности, интенсивно расте' участки коричневатого цветг зеленеют на свету, желтого цвет не меняют. желтые участки состоят из длиненных клеток паренхим нога типа, клетки зеленых участков имеют более вакуо-лизированную цитоплазму с плохо прокрашиваемым ядром. в ткани желтого каллуса имеются диничные включе ния, состоящие из юмплекса двух хо рошо прокрашиваемых клеток неравного размера.

V MS ( Mrashige et al., 1962) + 2,4 Д 0,2 мг/л, TDZ 1,5 мг/л; глобулярный, бесцветный, гладкий, блестящий каллус, тлотной консистенции, зеленеющий на свету, рост средней интенсивности, клетки средних размеров, с мелким ядром и хорошо прокрашиваемой цитоплазмой. I ткани каллуса на злюдаются группь мелких, богатых цитоплазмой изо-диаметрических клеток эмбриоген-ного типа

Таким образом можно говорить об определенном эмбриогенном потен-• циале у всех изученных генотипов. Образование эмбриоидов наиболее вероятно из каллусов IV и V типов.( Батыгина и др., 1978; Gunay et al., 1978; Phillips et al., 1985; Рахимбаев и др., 1992;) Полученные нами данные могут быть использованы при разработке методик соматического эмбриогенеза у данных генотипов.

Сравнительная характеристика морфологических параметров бутонов донорных растений со стадиями протекающего в иих микроспорогенеза.

Для успешного андрогенеза in vitro у перца решающее значение имеет стадия развития микроспор в момент изоляции их для культивирования. По сведениям Dumas de Vaulx et al.,(1981); Тюкавин Г.Б.,(1993); Mityko et al.,(1995) и др. наилучшей стадией развития микроспор для индукции андрогенеза является поздняя одноядерная, ранняя двухъядерная стадия, соответствующая равной длине лепестков и чашелистиков у бутона. Нашими наблюдениями установлено, что критерий равенства лепестков и чашелистиков не всегда является достаточным для определения оптимальной для андрогенеза стадии развития микроспор, поскольку прохождение этой фазы морфологического состояния бутона значительно растянуто во времени и занимает у разных сортов от 3 до 5 суток.( Ростовцева и др., 1981)

В проведенных нами на генотипе Chimes исследованиях соответствия определенной стадии развития микроспор морфологическим параметрам бутона было установлено, что прохождение микроспорами поздней одноядерной ранней двухъядерной стадии развития, соответствует изменениям морфологического состояния бутона от округлой формы с индексом Ф=0,95 и не-сегментированным венчиком темнозеленого цвета, в веретеновидную с индексом Ф=1,05, и появлением отчетливой сегментации венчика на лепестки свет-лозеленого цвета. В пыльниках из бутонов с индексом формы Ф более 1,1 наблюдались зрелые двухклеточные пыльцевые зерна, округлопродолговатой формы.( табл. 7)

Таким образом индекс формы бутонов Ф может быть использован для целей отбора подходящих пыльников для методик андрогенеза in vitro.

Таблица 7.

Сравнительная характеристика морфологических параметров бутонов донор-ных растений со стадиями протекающего в них микроспорогенеза_

Индекс формы бутона Ф Морфологическое состояние бутона Стадия развития микроспор

0,8 чашелистики закрывают не сегментированный венчик темнозеленого цвета, пыльники белого цвета стадия микроспороцитов

0,9 чашелистики закрывают не сегментированный венчик темноэеленого цвета пыльники белого цвета, мейоз на разных стадиях , образование тетрад

0,95 чашелистики закрывают не сегментированный венчик темноэеленого цвета , пыльники белого цвета распадение тетрады, образование одноядерных микроспор

1 поверхность венчика приобретает волнистый характер и светлозеленый цвет .пыльники белого цвета, увеличение микроспор

1,05 венчик четко сегментирован на лепестки светлозеленого цвета, пыльники белого цвета вакуолизация клетки микроспор, смещение ядра к клеточной стенке.

1,10 венчик длиннее чашелистиков на 1мм, лепестки белого цвета с зеленым оттенком, пыльники имеют бело-антоциановую окраску стадия первого митоза , в результате неравного деления образование крупной вегетативной клетки и более интенсивно окрашенной маленькой генеративной, линзовид-ной формы

1,20 венчик значительно длиннее чашелистиков, лепестки белого цвета, пыльники желто-антоцианового цвета зрелые двухклеточные пыльцевые зерна, трехпоровые, округло - продолговатой формы

Определение андрогеиной способности in vivo у генотипов обладающих комплексной устойчивостью.

В литературе имеются сведения об индукции андрогенеза в пыльниках перца in vivo. (Dharamadhaj, Prakash, 1978) Исследователи связывают это с изменением эндогенного баланса гормонов под влиянием неблагоприятных факторов среды. В проведенных нами исследованиях были отмечены хорошо прокрашиваемые ацетокармином 4-5 клеточные эмбриогенные образования в некоторых цитологических препаратах пыльников у генотипов Chimes и № 214, сделанных в разное время (таб. 8).

В то же время, у донорных растений, выращенных как в теплице, так и в вегетационной камере с температурными условиями +19-35°С и +22-28°С соответственно, установлено систематическое нарушение процесса микроспороге-неза после стадии образования тетрад. В результате чего, количество стерильных пыльцевых зерен в пыльниках составляло от 67% до 100%. Полученные нами сведения позволяют нам сделать вывод о возможности протекания прямого анд-рогенеза у этих генотипов при оптимизации условий выращивания донорных растений.

Таблица 8.

Андрогенетическая способность in vivo у генотипов обладающих комплексной устойчивостью_

Генотип Относительное количество эмбриогенных клеточных комплексов в одном пыльнике, %

Chimes 0,5

№ 214 0,02

По многочисленным литературным данным (Dumas de Vaulx et al., 1981; Vagera et al., 1985; Pundcva et al., 1995 и др.) для успешного применения методик андрогенеза наиболее оптимальными являются следующие условия выращивания донорных растений: t = 25±1°С, фотопериод h=16 ч. при освещенности не менее 20 тыс. люкс ВЫВОДЫ:

1) На основание комплексной фитопатологической оценки 96 образцов сладкого перца в условиях защищенного фунта Московской области было выделено восемь линий с комплексной устойчивостью к ВТМ, ВОМ-1 и пониженым положительным температурам, а так же обладающих комплексом хозяйственно-ценных признаков: Иоланта, Агаповский, L9, Chimes, Autona, Здоровье, Д28+, Гибрид 54. Четыре линии с высоким уровнем устойчивости к ВТМ: Р7118 hybrid, Р794, F1 Tango, Д9. Семьдесят одна линия , устойчивая к агрессивному штамму ВОМ-1. Использование этих источников в качестве нового исходного материала позволит интенсифицировать процесс селекции.

2) Установлено отсутствие корреляций между поражаемосгью растений перца томатным штаммом ВТМ и штаммом ВОМ-1, выделенном из Arctium spp.

3) Разработана шкала балльной оценки поражаемости растений перца новым агрессивным штаммом ВОМ-1, выделенным из Arctium spp. Описана симптоматика заболевания.

4) Разработана методика экспресс оценки на комплексную устойчивость растений сладкого перца к вирусам ВОМ-1 , ВТМ и пониженным положительным температурам основанная на реакции растений в стадии сеянцев, выращиваемых на низкотемпературном (14-16°С) фоне, при одновременном искусственном заражении штаммами ВОМ-1 и ВТМ.

5) Установлена зависимость степени поражаемости перца ВОМ-1 err температуры. Понижение температуры до 14-16 °С повышает поражасмость растений.

6) Установлен синергетический эффект поражаемости растений перца при одновременном заражении комплексом вирусов в стадии семядольных листьев на нормальном 22-26 °С и экстремальном 14-16 °С для перца температурном фоне.

8) Показана возможность индукции андрогенеза на генотипе с комплексной устойчивостью Chimes.

9) Морфологическим критерием для отбора бутонов с оптимальной для культуры пыльников стадией развития пыльцы является переход от несегменти-рованного на лепестки венчика к сегментированному, с индексом формы Ф= длина бутона/ ширина бутона 0,95 -1,05.

Рекомендации по селекции перца на комплексную устойчивость к ВОМ-1, ВТМ и пониженным положительным температурам.

1) В качестве источников комплексной устойчивости для селекции сладкого перца использовать образцы: Иоланта, Агаповский, L9, Chimes, Autona, Здоровье, Д28+, Гибрид 54.

2) Для интенсификации процесса селекции и создания сортов с комплексной устойчивостью к ВОМ-1 , ВТМ и пониженным положительным температурам рекомендуется применять экспресс оценку в фазе семядольных листьев с одновременным заражением двумя вирусами на неблагоприятном температурном фоне 14-16°С.

3) Для ускоренного получения чистых линий с комплексной устойчивостью к ВОМ-1 , ВТМ и пониженным положительным температурам с помощью методов индуцированного андрогенеза рекомендуется использовать генотип Chimes, обладающий андрогенной активностью.

4) В дальнейших исследованиях адаптации на перце методик соматического эмбриогенеза использовать безгормональную среду Нича (1969) с добавлением 10 г/л активированного угля.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации.

1) Мишин С.П., Мамедов М.И. "Исходный материал для селекции гетеро-зисных гибридов F1 перца сладкого с комплексной устойчивостью к ВТМ и ВОМ". В кн.: "Гетерозис с/х растений", междунар. симп., материалы докл., со-общ., Москва, 1997, стр. 132-133.

2) Методические указания "Создание исходного материала для селекции перца сладкого (Capsicum annuum L.) с комплексной устойчивостью к ВТМ , ВОМ и абиотическим факторам среды.", в соавторстве с Пивоваровым В.Ф., Мамедовым М.И и др. Москва, 1997, 15 стр.

3) Мишин С.П. "Оценка образцов сладкого перца (Capsicum annuum L.) на устойчивость к вирусам огуречной и табачной мозаики." Доклады ТСХА, выпуск 268, ( в печати ).