Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Вирусные болезни перца в Узбекистане

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Вирусные болезни перца в Узбекистане"

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК имени В. И. ЛЕНИНА

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ

ВИРУСНЫЕ БОЛЕЗНИ ПЕРЦА В УЗБЕКИСТАНЕ (свойства возбудителей, разработка мер борьбы)

Специальность: 06.01.11—Защита растений от вредителей и болезней

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ЮЛДАШОВ ЖУМАБАИ

На правах рукописи

ЛЕНИНГРАД 1991

Работа выполнена в Институте микробиологии Академии наук Узбекской ССР и Институте микробиологии и вирусологии им. акад. Д. К. Заболотного Академии наук Украинской ССР.

Научный руководитель — доктор биологических наук, профессор А. Д. Бобырь.

Официальные оппоненты — доктор биологических наук, профессор Ю. И. Власов; кандидат сельскохозяйственных наук М. В. Воронина.

Ведущая организация — Ташкентский сельскохозяйственный институт.

Защита диссертации состоится «23» 1*7АЙ 1991 года на

заседании Специализированного совета, шифр Д 020.01.01., при Всесоюзном научно-исследовательском институте защиты растений по адресу: 189620, г. Ленинград—Пушкин-6, шоссе Подбельского, д. 3, ВИЗР.

9

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института защиты растений.

Автореферат разослан « /К а/, 1991 года.

Ученый секретарь Специализированного совета ВИЗР

Наседкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

. Актуальность теми. Перец относится к культурам с высокими вкусовыми и хозяйственными качествами, отличается повышенным содержанием витамина С, что определяет его широкое районирование и постоянное расширение площадей, занятых под этой культурой в открытом и защищенном грунте многих стран мира, Еклклая СССР. Между тем, перец подверчен влиянию вредоносных вирусных инфекций, |яктически не изученных в условиях Узбекистана. Не ясен видовой состав возбудителей вирусных болезней, хотя последние служат причиной значительного снижения урожая'и качества плодов. Отсутствие данных по биологии возбудителей затрудняет построение практических рекомендаций и в ряде случаев их вообще не применяют. Изложенное подтверждает актуальность теш для республики, где под перцами заняты большие плогдцп.

Цель и задачи исследований. Целью исследований послужило изучение болезней перца вирусной этиологии, а такжо научное обоснованно практических рекомендаций, с производственной апробацией наиболее важных приемов.

В задачи исследований входило:

1. Определить ареал вирусных заболеваний перца.

2. Установить видовой состав возбудителей наиболее распространенных вирусных заболеваний перца и их вредоносность при искусственном заражении.

3. Для возбудителей вирусных заболеваний перца изучить следующие вопросы: круг растений-хозяев, способы передачи и резервации в природных услогиях Узбекистана, физические свойства, а также ультраструктуру и морфологию пораженных клеток.

4. Изучить иммунологические свойства вирусовприготовить ^агностические антисыворотки к ВТМ и ВОМ, усовершенствовать ме-?од Еиробактериальной агглютинации /АБВ-тест/ применительно к шрусным патогеншл перца.

5. Разработать меры борьбы против вирусных заболеваний пер-1а, включающие в себя обработку семян, борьбу с переносчиками и >пепку сортообразцов с применением ускоренного метода диагности-си - АЕБ-теста.

Научная новизна. Впервые для условий Узбекистана изучены «■русине болезни перца, представлена карта их распространенности 1 вредоносности по зона;/, представлена' симптоматика Заболеваний.

В качестве основных возбудителей зафиксированы ВШ вирус табачной мозаики/ и ВОМ /вирус огуречной мозаики/, изучены их свойства, способы передачи, особенности резервации в природе. Подтверждена роль семян перца районированных в Узбекистане сортов в сохранении и передаче инфекции. Изучены природные очаги инфекции ВОМ, с указанием новых растений-резерваторов: Osimun basiiicum l., Impatieus balsamlna К., Ualva neglecta Wall. Проведены методические разработки по идентификации возбудителей. Впервые диагностические сыворотки к В'Ш получены на курах. Модифицированы методы очистки ВОМ и получены диагностические препараты к этим вирусам с высокими титрами. Для диагностических целей использован метод виробак-териальной агглютинации применительно к объектам исследований, который внедрен в практику при оценке сортообразцов перца на устойчивость к вирусам.

Практическая ценность. Установление роли семян перца в резервации ВТМ послужило основанием для разработки нового метода обеззараживания семян перца: впервые для этих целей апробирована 6 М мочевина, показан бысокий экономический эффект ПРИ условном чистом доходе 175 руб/га.

Полученные высокотитражные диагностические сыворотки использованы в_' реакции виробактериальной агглютинации при оценке 120_ _ сортообразцов перца. В результате выявлен ряд сортообразцов, не-поражаемих В'Ш либо 1Ш или обоими вирусами. Получен и передан в ^оссортоиспытание сорт "Пикантный" с комплексной устойчивостью.

Публикации и апробация работы. По результатам диссертации, опубликовано 6 работ,'изданы методические рекомендации "Ускоренная диагностика растительных вирусов реакцией виробактериальной агглютинации" .

Материалы диссертации доложены на П и 1У республиканских научно-теоретических конференциях молодых ученых-микробиологов /Ташкент, 1978, 1989/, на Ш конференции биохимиков республик Средней Азии и Казахстана /Душанбе, 1981/, на УП съезде ВМО /Алма-Ата, 1985/, на научно-практическом совещании "Вирусология - народному хозяйству" /Киев, 1987/.

Структура и объем работы. Диссертационная работа содержит введение, обзор литературы, посвященный ан&пизу изучения вирусных болезней перцев и характеристике основных вирусов-возбудителей " болезни перца - ВТМ и ВОМ. Диссертация содержит описание материалов и методов исследований, результаты исследований, включающие

в себя 5 глав, выводы, рекомендации производству, список литературы и приложения.

Общий объем диссертации составляет 137 стр., 26 таблиц^ 14 рисунков, список литературы содержит 178 наименований.

Материал!,' и методы исследований. Экспериментальные исследования проводили на базе Гяститута микробиологии All УзССР и Института микробиологии и вирусологии им. акад. Д.К.Заболотного АН УССР. На ряде этапов работы большую научно-методическую помощь оказал зав.кахедрот" микробиологии и низших растений ТашГУ ттм. В.И.Ленина доктор биологических наук А.Х.ВахабоЕ, за что автор внрат.ает ему искреннюю благодарность.

1'сходнш материалом для экспериментально,! работы служил! растения слабого перца сортов Болгарский 79 и Ласточка. Обследования проводи ли в Ташкентской, Ферганской, Самаркандской и Андижанской областях УзССР. На производственных посевах учет больных растений перца проводили согласно методическим указаниям Э.К.Власова к Е.С.Лантас /1902/. При проведении вирусологических анализов различных образцов на содержание БТ;Л и ВСМ использовали следующие методы вирусологических исследований; индикаторный, серологический и электронномикроскогшческий. Для идентификации вирусов /ВТМ и ВОМ/, поражающих перцн, а так-ite при идентификации вирусов из сорных и декоративных растений использовали специально отобранные наборы тест-растений /Методические указания по диагностике вирусов, поражащих овощные культуры, 1975/.

Злоктроннсг.тЛфоскоппческие исследования проводили на микроскопах dEM-7 и УЗМБ-100 Б. Препараты готовили методом погружения /Brand.es , 1957/ и методом ультратонких срезов/ Уикли, 1978/.

Для определения вредоносности вирусных болезней перца было проведено искусственное заражение сортов Болгарский 79 и Ласточка. Вредоносность определяли по проценту поракаемости,'патологическим изменениям в росте, развитии и снижении урожайности. Математическую обработку ряда опытов и наблюдений проводи.™ по методикам И.В.Попова /1ГС7/ и Б.А.До'спсхова /1973/. Для изучения физических свойств ВТМ и ЕОМ из перца 'использовали общепринятые методики /Власов др.* 1963; Проценте, 1906/. 3 работе по определению круга растеш^-хозпев анализирован? сорные, декоративные растеши: Sisymbrium Loselii L., Golanura nigrum L., Datura stramonium L., Malva neglecta '.Vail., c.imaQ bs.oilioun L., Inpatieri3 balaa-niina K. 1' др.

ö

Для приготовления диагностических антисивороток к ВОМ и ВТМ за основу были взяты методы, используемые за рубежом /тошИпзоп et al. , 1959; Scott , 1963; Takahami et al. , 1969; Pelet et al.

1971/. Иммунизации животных /кроликов и кур/ проводили по общепринятым методам /Шаскольская и др., 1967/.

Для выявления непоражаемых сортообразцов применяли ускоренный метод виробактериальной агглютинации /Чирков, 1982/ с модификацией, разработанной нами. Оценку сортообразцов проводили в Среднеазиатском филиале ВНР им. Н.И.Вавилова по общепринятой шкале /Методические указания по изучению и поддержанию мировой коллекции оеощньж пасленовых культур: томат, перец, баклажаны. Ленинград, 1977/.

В качестве детергента при обработке семян сладкого перца использовали 0,03 % метиленовуу синь, 0,5 % марганцовокислый калий, 10 % трехзамещенный фосфорнокислый натрий, 20 % соляную кислоту. В производственных испытаниях использовали 6 М мочевину.

'РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Распространенность и симптоматика вирусных болезней перца

Для выявления распространенности вирусных заболеваний на перцах в Узбекской ССР проводили маршрутные обследования в хозяйствах Ташкентской, Самаркандской, Ферганской и Андижанской областей на районированных сортах: Болгарский 79, Дар Ташкента и Ласточка. Во время обследования учитывали два типа проявления болезни: первый - мозаика и второй - мозаика, сопровождающаяся отставанием растений в росте и измельчением листовой пластинки. В результате проведенного в течение двух лет обследования установлено, что наибольший процент поражения мозаикой.наблюдался в Андижанской области на сорте Болгарский 79 - до 55 %, наименьший процент поражения по тому же сорту в Ташкентской области составил 40,0. Мозаика с мелколистностью проявлялась в меньшей степени: так, поражение по Андижанской области составляло 25 %, а по Ташкентской области - 18 % /рис. 1/.

-1'

2. Вредоносность вирусных болезней перца

Вредоносность йозашси и мозаики с измельчением листьев изучали при акспсриментальном инфицировании перцпв сорта Болгарский

в /

£

Рис. I. Картосхема'пораженности пэрца мозаикой и иозаикой

о малколистностью в УзССР. Условный обозначения: а - мозаика о малколистностью; б -мозаика. I - Андияанская обл., 2 - Фарганокая обл., 3 -Нананганская об л., 4— Ташкентская обл.', 5 - Сырдарьин-окая обл., 6 - Джизакская обл.,- 7 - Самаркандская обл.', 8 - Кашкадарьинсвая обл., 9 - Сурхандарьинская обл., 10 - Бухарская обл., II - Навоийская обл., 12 - Хорэзм-ская обл., 13- Каракалпакская АССР.

79 и Ласточка соком больных растений, учитывая влияние инфекции на рост и развитие растений, а также на качество и урожай плодов.

Опыты проводили на территории совхоза -"Пазарбек" Калининского района Ташкентской области. Первый учет проводим на 10-й день после инокуляции, каждые два последующих учета проводили с интервалом в 25-30 дней.

Установлено, что при заражении растений перца мозаикой и мелколистностью по обоим сортам отмечалось значительное отставание растений в росте по сравнению с контролем. Разница между двумя вариантами опытов не существенна, в сравнении же с контролем она составляет по сорту Болгарский 79 -,21,1 см и сорту Ласточка 17,5 см. Урожайность при 100 %-иом заражении сорта Болгарский 79 мозаикой снижается на 1,6 кг, а при заражении мозаикой с мелколистностью - на 3,4 кг, что определяет потери урожая соответственно на 32,2 % и 60,8 По сорту Ласточка снижение урожайности в первом варианте опыта составляет 2,0 кг и во втором 3,3 кг соответственно, потери урожая по отношению к контролю составляют 40,5 % и 70,2 из расчета на 1 м2.

3. Возбудители вирусных болезней перца

Идентификации возбудителей, вызывающих симптомы мозаики и мелколистности на перце-проводили преимущественно двумя методами . фитовирусологического анализа: индикаторным я электронномикроско-пическш. Результаты анализа, приведенные в таблица 1, по реакции тест-растений показали, что болыше растения перца с симптомами мозаики поражаются только ВТМ, >мозаики с мелколистностью -двумя вирусами /ВТМ и ШЛ/. Злектроннокикроскопический анализ подтвердил данные индикаторного-"метода.

Для выявления возбудителя с растений с симптомами мозаики с мелколистностью использовали метод ультратонки^ срезов. В исследованных ультратонких срезах констатировали наличие палочковидных частиц размером 300x18 нм /ВТМ/ и сферических частиц размером 35 нм /ВО"//. Результаты в дальнейшем были подтверждены серологическими методами' капельной агглютинации и АБВ-тестом..

Таблица 1

Тест-растения и результаты проявления симптомов после механической инокуляции соком больных растений перцев

Симптомы иа перца

Тест-растенкя " Мозаика Мозаика с мелколистное тью

ÍJicotiana glutinosa L. bsUiIl L:LLI1; SiH

H.tabacun с. Самсун 47/10 - LsVcjN LiNi Б; S:U

Datura stramonlua L. LsLbIJ LtLLUf SiSp; Dia

Cucumis 3ativus L. с.Узбекский-740 - В: yMo

Ch.enopod.iim quinoa Willd. LlLLlI LlLLII

Chenopodium amaranticolor. C03te et Reyn LiLbH LiLLN

Fheseolua vulgaris L.V.Saza - -

Lycopersicon esculentun Hill S!Tc j П SiVci M; Dis.

с. Подарочный

Условные обозначения: L местная реакция; ы, - местные поврездения; н - некроз;. В - системная реакция; Ve - посвет-ление жилок; М -.мозаика; Bp- - пятнистость; У - пожелтение; Dia - деформация.

Круг растений-хозяев BirpycoB перца

Перед нами стояла задача выявления природных очагов инфекции ВТМ и ВОМ на перце.'При обследовании перцев в хозяйствах на распространенность вирусных болезней одновременно вели наблюдения за сорными, дикорастущими и декоративными растениями с симптомами мозаики вокруг и на плантациях перца. Отобранные в полевых условиях растения проанализированы в лаборатории индикаторным методом. В качестве тест-растения использовали, набор икдика-торов, реагирующих локально и системно на ВОМ и ВТМ. Нами проанализированы такие сорные растения, как Sisymbrium ЬозеШ L., Golanun nigrum Ь., Datura stramoniun Ь., f.!alva Deglecta ffall., Ooinun bssilicun L. , Inpatiens Ьа1заа1па Ъ. , проявившие СИ1.Ш-

томы мозаики, деформации листьев и изменение габитуса куста.

Результат анализа зафиксировал поражение, вызванное вирусом ■ огуречной мозаики.

•Особый интерес как новые резерваторы ВОМ представляют найденные нами в природе растения Maiva neglecta с симптомами мозаики на листьях и декоративные растения: базилик обыкновенный /Osimum basilicum / и бальзамин /Impatiens balsamina /. Кроме вышеуказанных растений, мы выяеили ряд видов однолетних растений, которые уже известны в литературе как источники и резерваторы ВОМ /Исамухамедов, 1970; Паршин, 1974/.

I

. Физические свойства вирусов перца, ультраструктура и морфология пораженных клеток

При выполнении данной задачи были определены такие параметры, как предельное разведение, точка тепловой инактивации, сохранение инфекционности сока при выстаивании при комнатной температуре и в изолированных листьях растений- перца. Для ВОМ точка предельного разведения' составляет 10-^, температура инактивации 73°С, длительность сохранения в соке при комнатной температуре - 96 SA-oOÊ>. Для ВТМ точка предельного разведения составила 'Ю-', а температура инактивации - порядка 100°С.

При изучении ультраструктуры и морфологии пораженных клеток ' наш использован метод ультратонких срезов. В результате анализа срезов мозаичных и нитевидных листьев перца нами отмечено," что частицы ВТМ и ВОМ локализуются в цитоплазме клеток хозяина. '

Анализируя патологические изменения в структуре клеток под влиянием вирусных частиц, нужно.отметить следующее: I/ хлороплас-ты теряли свою структуру, что выражалось в разбухании и разрушении грани и ламеллы; 2/ крахмальные зерна резко увеличены по сравнению со здоровой клеткой;-3/ часто резко нарушена ультраструктура митохондрий. Кристы расширяются, число их сокращается, наружная оболочка органблл разрушается.

'. Способы передачи вирусов и их циркуляция в природе

* Одним из актуальных вопросов при'изучении вирусных заболеваний растений считается вопрос о способах передачи вирусов и циркуляции их в природе. В отечественной литературе имеется ограни-

ченное количество работ ло изучению передачи вирусов семенами перца /Ю.Абдулразак, 1984; Х.Халил, 1990/.

Представляло интерес изучить содержание ВТМ в семенах перца и проследить визуальные признаки поражения семян вирусной инфекцией. В опыте использовали семена перца сортов Болгарский 79 и Ласточка, отобранных из больных и здоровьсс растений в количество по 50 шт. Гомогенатом, приготовленным из тех и других, заражали половинки отдельных листьев н.glutinosa , которые помещай! во влажную камеру. Количество некрозов подсчитывали на 3 день после инокуляции. В опытном варианте насчитывали до 40 некрозов на пандой половинке листа при их отсутствии в контроле. Установлено опытным путем,"что процент передачи ВИЛ семенами перца составил 1,7 %. В поле семенная инфекция проявляется уже на сеянцах,'ВТМ может концентрироваться на поверхности оболочки семян перца и проникать в более глубокие ткани, вызывая их некротические поражения. Как пра-еило, в пораженных некрозом семенах вирус содержался в большой концентрации. Проросток может быть заражен ВИЛ при прорастании через насыщенную вирусом оболочку семени. Это возможно для" вируса с такой контагиозностыо, как ВТМ. Для контактных вирусов обменные инфекции имеют очень большое значение, особенно, если культура требует ухода в процессе вегетации. Одним из способов ограничения этого Источника инфекции служит -противовирусное обеззараживание семян одним из многих уже.известных способов. Мы исследовали несколько препаратов, показав,'что 6 М мочевина служит одним из наиболее эффективных и наиболее безопасных. • ■

В связи с тем, что ВОМ передается от одного растения к другому посредством насекомых, нами исследовались .некоторые вопросы циркуляции его в природе.

Передачу инфекции с больного растения перца на здоровое осуществляли по методу Г.М.Развязкиной /1953/ при помощи тлей /хлопковая, персиковая, бахчевая/. В результате установлено, что персиковая и хлопковая тли после питания на больном растении более 2 млн. осуществляли 100 % передачу вируса, а бахчевая - после 5 мин. питания. При одномннутном писании персиковой тли передача осуществляется на 20/5, а бахчевой - при 2 мин питания на 60 %. ■

Указанные виды тлей являются преобладающими на посадках перца и среди растений дико" флоры. Они питаются в отсутствии культурных хсзяег на этих растениях. Для хлопково* и бахчевой тл" -хояятагя: служат те лее ту-дч рястенг;'', которые служат резеряятора-

Ш вируса. Предпочитаемым хозяином бахчевой тли служит Malva neglecta,Oalmum basilloum и Impatiens balsamina.

Циркуляция ВОМ в природе применительно к перцам представляется нам в виде схемы /рис. 2/.

Рис. 2. Циркуляция ВОМ в ^рироде посредством тлей с учетом культуры перца.

^. -Иммунологические свойства вирусов

Очистка вирусов. Для изучения иммунологических свойств вирусов, выделенных из перца, необходимо бцло провести исследования по выделению и очистки вирусов с последующей иммунизацией теплокровных животных для получения антисыворотки. Для этого в начальном этапе нами была проведена очистка ВТМ и ВОМ.

ВТМ, выделенный из перца, после биологической очистки пассированием через мононекроз накапливали на растении Шсо1;1апа га-Ьасии с системной реакцией на ВТМ.- Очистку и концентрирование вируса проводили по общепринятым методикам с использованием либо 25 % сульфата аммония, либо полиэтиленгликоля /ПЭГ/ с молекулярной массой 6000. Окончательная очистка вирусного препарата осу- ществлялась гельфильтрацией на, колонке с сефарозой 4 В или дифференциальным центрифугированием. Инфекционность полученного препарата проверяли методом индикаторных растений. Спектрофотометри-рование показало, что препараты поглощают УФ-лучи с максимумом при 260 нм, соотношение оптинеских плотностей 260-380 нм было ,равным 1,2-1,3.

* Антигенная целостность и инфекционность препарата ВТМ из перца была доказана в лабораторных экспериментах,

Для накопления ВОМ использовали растения огурца с.Узбекский

740, которые заражали инокулюмом из естественно инфицированных растений перца с. Болгарский 79. После проявления четких симптомов мозаики на 15-16 день после заражения больные растения использовали для выделения и очистки вирусов. Дтя препаративного выделения ВОМ использовали метод Томлинсона /Tonlinson et al. , 1959/ и Скотта /Scott н. , 1963/ с некоторой модификацией. Схема выделения ВОМ заключалась в следующем: зараженные листья огурца гомогенизировали в 0,3 М глициновом буфере pH - 7,5, содержащем 0,1 % меркаптоотанол. Гомогенат после осветления низкоскоростным центрифугированием обрабатывали Я-бутанолом /конечная концентрация 8 5 %/, добавляли ПЭГ и äaCI до конечной концентрации 6 и 2 %, соответственно. Осадок после растворения осветляли и пропускали через 30 #-ную сахарозную "подушку" при 30 тыс.. об/мин в течение 2 час. Осадок экстрагировали 0,3 М глициновым буфером pH 7,5 и осветляли низкоекоростннм центрифугированием. Полученный вирусный экстракт подвергался 2-х кратному ультрацентрифугкрованию при 30 тыс. об/мин в течение 2 часов. Чистоту полученного препарата ВОМ определяли на спектрофотометре; максимум поглощения 73-лучей отмечен при 2G0 нм. Полученный таким способом препарат.' был инфекци-онен, что доказано инокуляцией растений Ohenopodiun cjuinoa , у которых па 7-8 день проявились некрозы. Полеченный очищенной препарат ЕСМ использовали для дальнейших исследований.

Получение антлсывороток. Серологический метод диагностики основан на использовании специфических антисыворсток. В связи с этим была поставлена задача получить диагностические антисыворотки к ВТМ и ВОМ, выделенным из больных растений перца. В качестве иммунизируемого объекта были использованы как кролики, так и куры. При иг.глунизации кролика антигеном ВТМ была получена антисыворотка, титр которой составлял 1:1024.•

Титр сывороток, полученных на курах, варьировал в зависит,гос-т от способа иммунизации и составил 1:8 при подкожном /под лопатки/ введении антигена. Сыворотка работала в серологических реакциях капельной агглютинации и АБВ-тесте. Тем самым была показана принципиальная возможность использования кур в качестве объекта для приготовления антисыворотки.

Способ получения специфической антисыворотки из кроликов к ВОМ в наших исследованиях не имел принципиальных изменений в сравнении с существущими способами. Наш получена антнскворотка к

ВОН с достаточно высоким титром антител /1:8/, которая .использована при проведении исследований по оценке сортообразцов перца на устойчивость к ЕОМ.

. Использование метода виробактериальной агглютинации /АБВ-тест/ применительно к диагностике вирусных заболеваний перца

В литературе нет сведений об использовании АЕВ-теста для •массовой диагностики ВТМ на перце и томате. В связи с этим перед нами была поставлена задача исследовать возможность использования этого экспресс-метода для диагностики ВТМ и ВОМ - возбудителей вирусных болезней перца в условиях производства с использованием полученных антиснвороток.

При приготовлении образцов антигена для анализа обычно mi- ' фекционный сок готовится растиранием растения в ступке пли другим способом, затрачивается большое количество времени, что усложняет использование и внедрение этого метода для массовых анализов. Нами в этом направлении, как усовершенствование данного метода, был .использован полуавтоматический пресс высокой производительности,' позволяющий в течение нескольких секунд приготовить сок из одного образца. Кроме того, затраты времени на иммунодиагностику ВОМ и ■ ВТМ с помощью АЕВ-теста сокращаются в 4,4 раза в сравнении с ка- . пельным методом. По этому направлению работы нами получены акты о массовом внедрении и экономической эффективности.

Разработка мер борьбы

Обработка семян. Для проведения исследований по разработке мероприятий по снижению вирусной инфекции на перцах.мы опирались в основном на известные данные по биологии возбудителей этих болезней, а т^кже на существуйте мероприятия против ВТМ-и ВОМ не только на перце, но и на других культурных растениях.

Первичным источником инфекции мозаики, вызванной ВТМ на перце, являются семена, что было установлено нами в экспериментальных условиях. . '

В целях элиминации семенной пн$екгаш испктян ряд препаратов, таких, как 20 % соляная кислота, 0,3 % метгленовая синь, 10 % трехзамещеннкй *осфорнокислн* натрий и 6 М мочевина, применяемых ранее для обработки семян томатов от ВТМ. Наиболее о^'^ктпвнк.е:

оказались 20 % HCl и 6 М мочевина, в связи с чем было исследовано их влияние на посевные качества семян /табл. 2/.

Таблица 2

Эффективность обработки семян перца соляной кислотой и мочевиной и влияние этих обработок на их посевные качества /среднее из 4-х повторностей/

Среднее число Посевные качества семян перца.

Препарат некрозов на -

половинке лис- Энергия про- Всхожесть Всхожесть та Nicotiana растания, лаборатор. полевая, glutinosa в % в % ъ%

/шт./ Х+т Х+т Х+т

67,5+0,95 81,0+1,3 68,0+1,41 81,5+1,9 94,5+0,95 88,5+0,5

64,5+3,4* х 78,0+0,82х* 70,5+0,05х*

.___ 1

* Примечание: х - семена, замоченные в соке больногорастения j

зсх - семена, замоченные в воде. '

Нами установлено, что и соляная кислота и мочевина в одинаковой степени положительно влияют на инактивацию вируса, но по.результатам определения посевных качеств семян установлен более высокий процент энергии прорастания и всхожести при использовании 6 М мочевины; 6 М мочевина,или карбамид,наряду с элиминирующим влиянием на ВТМ оказывает стимулирующее действие на семена.

Оценка сортообтзцов. В 1987-198,9 годах нами была произведена оценка образцов перца на коллекционном участке САФВНИИР им. Н.И.Вавилова с целью определения степени поражаемости перца ВИЛ и ВОМ и выявления устойчивых образцов. Для выполнения данной работы использовали ускорешцЙ! метод диагностики - виробактериальную агглютинацию /АЕВ-тест/.

В результате проведенных анализов были выявлены растения, которые поражаются как ВТМ, так и ВОМ. Часто оба вируса поражают перец одновременно. Все образцы после анализа разбивались на 5 групп по проценту поражаемости. Всего проанализировано 102 образца. В табл. 3 приведены данные о непоражаемых в поле образцах, а

20 % HCl 0 х

МочеЕина 6 М О х

Контроль■ 94 х

также практически устойчивых формах перца, лоражаемость. которых не превышала 10 %.

Таблица 3

Непорах.аемые и практически устойчивые образцы перца при естественной зараженности ВТМ и ВОМ на коллекционном участке САФВНШР, выявленные АБВ-тестом.

Вирус Образцы перца на коллекционном участке САФВНИИР /название образца, каталог ВИР&, происхождение/

Непоражаёмые образцы

ВТМ ïaskai , 2687 /Венгрия/ Aurora , 2645 /ФРГ/ : Harria Earliest , 2577 /Канада/ Маргеланский-330 /УзССР/

ВОМ Местный, 2681 /Амурск.обл./ Aurora , 2645 /ФРГ/

Практически устойчивые обтазцы

вш Шипка зеленесладка, 1850 /Болгария/ Колобок, 2617 /МодцНИКЗО/ , Hongrous Zanne Cize Fort , 2703 /Канада/

ВОМ Hongrous Zanne Cize Fort ' , 2703 /Канада/ Chili , 171 /США/ ' Cluster , 6119 /1ДР/ Terla , 5709 /ЧССР/ .

Начиная, с 1987 года, мы изучали хозяйственные и кюлунологи-ческие признаки образца Hongrous Zanne Cize Fort , вр.кат. 2703, Канада, с комплексной устойчивостью к ВОМ и ВТМ. Отобрана Линия-73, в дальнейшем названная сортом полуострого перца "Пикантный", переданным в 1989 году в Госсортоиспктание для районирования в условиях Узбекистана /ю.нется акт о сдаче сорта "Пикантный" б Госсортоисхштапие/.

Производственные испытания и экономическая эффективность

Для практической оценки предложенных мероприятий с целью предотвращения поражения порца нами в течении двух лет в совхозе "Пазарбек" Калининского района Ташкентской области проведены производственные испытания.

Семена перца сорта Болгарский 79 обрабатывали 6 Ы мочевиной в течение 1 часа, затем тщательно промывали в проточной воде и высевали в ящик, где до высадки в открытий грунт выращивали в лабораторной теплице Института микробиологии АН УзССР. После высадки в открытый грунт в точение всего вегетационного периода проводили учет проявления болезни и урожайности.

В результате обработки семян перца 6 М мочевиной за счет снижения поражаекости мозаикой и мозаикой с мзлколистностью урожайность повышалась на 4,С5 ц на площади 0,3 га.

Экономическая эффективность от выаеуказанного приема составила при перерасчете на 1 га 175 рублей чистого дохода /табл. 4/.

Таблица 4

Экономическая. эффективность предпосевной обработки 6 М мочевиной семян перца Болгарский 79

Показатели Варианты .

Необработанные семена Обработанные семена

Урожайность перна, ц/га 86,0 101,5

Повышение урожая - 15,5

Затраты на выращивание перца, с 1 га/руб. ' 1032,00 1167,00

Реализационная цена 1 ц перца, в руб. 20,0 20,00

Выручка от реализации перца, в руб. 1720,00 2030,00

Условно чистый доход от обработки семян перца 6 М мочевиной, руб/га 0 176,00

В, Ы В. 'О Д И

1. Впервые в условиях Узбекистана изучены вирусные болезни перца, составлена карта распространенности, дана характеристика симптомов в зависимости от возбудителя. Установлено, что мозаика на перце вызывается одним вирусом - ВТМ, а мозаика с мелколист-ностью - смесью вирусов: ВТМ и ВОМ.

2. В результате исследований по искусственному заражению . "сортов сладкого перца Болгарский 79 и Лмточка установлено, что урожайность с 1 м2 при мозаике снижается на 32,2 при мозаике

с мелколистностью - на 60,8 % по сорту Болгарский 79. Почти такая же картина наблюдается по сорту Ласточка.

3. Нами установлено, что дополнительными растенхями-хоэяева-ми для ВОМ в СССР н, в частности, в условиях Средней Азии, являются декоративные растения базилик обккновепный /tislmum baslii-oum L, /, бальзамин /Xmpatleno balsamina К, /и дикорастущий просвирник пренебрежений 4talva negleota w. /, которые ранее

не были описаны как растения-хозяева для этого вируса.

4. Проведены морфологические исследования пораженных клеток и установлены изменения, происходящие в клеточных органеллах перца под воздействием вирусных инфеющй ВТМ и ВОМ.

5. Доказано, что первичным источником ВТМ для перцев являются семена, передача инфекции семенами составляет 1,7 %. Выявлена циркуляция ВОМ в природе.и на посадках перца.

6. На основании иммунологических исследований ВТМ и ВОМ из перца предпринята попытка получения антисывороток, используя нетрадиционные объекты /куры/. Осуществлена модификация АБВ-теста, проведена его апробация при диагностике ВТМ и ВОМ, выделенных из перцев.

7. Высокочувствительный метод иммунологического анализа АЕВ-^гест впервые использован для оценки, сортообразцов, гибридов и линий перца на коллекционном участке СА.ФВНШР им. Н.И.Вавилова. В результате выявлено: 4. образца перца, непоражаемые ВТМ и 4 - с практической устойчивостью к этому вирусу; 2 образца перца, непоражаемые ВОМ и 5 - с практической устойчивостью к вирусу. Получен; новый сорт полуострого перца "Пикантный" с комплексной устойчивостью к ВОМ и ВТМ, который находится в Госсортопспнташш для районирования в Среднеазиатском регионе.

8. Для борьбы с ВТМ на перцах впервые предложен перспективный, ранее ■ ме.изученный препарат для обработки семян перца - 6 М мочевина, обладающий наряду с детергентными свойствами стимулирующим эффектом.

9. Проведена производственная предпосевная обработка семян

6 М мочевиной, условно чистый доход от приема составил 175 руб/га.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

Для борьбы с вирусными болезнями на перце рекомендуются следующие мероприятия:

1. Против ВТМ на перце проводить обработку семян 6 М мочевиной в течение 1 часа, с последующей промывкой в проточной воде

до исчезновения слизи.

2. Использовать в практике внсокоустойчивый к ВТМ и БОМ, высокопродуктивный сорт полуострого перца "Пикантный".

3. В селекционно-семеноводческих хозяйствах и научно-исследовательских институтах при оценке сортообразцов использовать для диагностики вирусов усовершенствованный метод виробактери-альной агглютинации /АБВ-тест/. '

Основные результаты диссертации изложены в следующих работах:

1. йпдашов Я., Исамухамедов М.З. О выявленных вирусных болезнях перца в Узбекистане // Тезисы докладов .II Республик, науч. теорет. конфереп. молодых уч. микробиол. Ташкент, 1978. - С.124-125.

2. Илдашов Ж., Исамухамедов М.З. Мозаичные вирусы перца и их электронномпкроскопическое изучение // Молекулярн., биол., бисхикпя растен., биохимия микроорган. Иммунология. Тез. докл.

10 конферен. биохимиков республ. Средней Азии и Казахстана. Душанбе: Изд-во "Донка", 1981. - Т. 1. - С. 233.

3. Давранов К.С.^ Вахабов АД., Юлдаогов Е., Исамухамедов М.З. Методы гзкспресс-дпагностикн ВТМ в культуре томатов и перце // Тез. докл. УП съезда ВМО. Алма-Ата, 1985. - Т. 5. - С. 7.

4. Илдашов Ж., Вахабов А.Х., Калягина Л.Г., Калягин Ю.Н. Выявление вирусов растений с помо-щью АБВ-теста // "Вирусологии -народному хозяйству", 9-10 апреля, Киев, 1987. - С. 22,

5. Дагронов К.С., Вахабов А.Х., Юддашов I., Заитова А.З.,

Ксамухамедов М.З. Применение экспресс-метода диагностики вируса табачной мозаики // Бактерии, водоросли, грибы /экология, физиология, биохимия/, Ташкент, "Фан", 1987. - С. 151-156.

6. Вахабов Л.Х., йвдашов Н., Давранов К.С., Дехканова З.Н., Рахимов М.М. Ускоренная диагностика растительных вирусов реакцией виробактериальной агглютинации. Методические рекомендации. Ташкент: "Фан", 1988. 16 с.

7. Юлдашов Е., Прокофьева О.Б., Еахабов Л.Х. Вирусные болезни перца в Узбекистане // Тезисы докладов 1У Республик, науч. те-орет". конферен. молодых ученых-микробиол. Ташкент, 1989. - С. 69.

8. ¡йвдашов Н. Изменение клеточной 'структуры растений перца под действием вирусной инфекции // Узбекск. биол. журнал» 1990, № 6. - С. 9-11.