Совершенствование санитарно-паразитологических методов исследования воды в системе экологического мониторинга

Плехова, Нина Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Совершенствование санитарно-паразитологических методов исследования воды в системе экологического мониторинга
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование санитарно-паразитологических методов исследования воды в системе экологического мониторинга"

На правах рукописи

ПЛЕХОВА Нина Анатольевна

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ВОДЫ В СИСТЕМЕ ЭКОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА

03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 4 \т 2007

Курск-2007

003060025

Работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории «Паразитология» Курского государственного университета

Научный руководитель заслуженный деятель науки Российской Федерации,

доктор медицинских наук, профессор Романеико Николай Алексеевич

Официальные оппоненты заслуженный деятель науки Российской Федерации,

доктор биологических наук, профессор Горохов Владимир Васильевич

кандидат биологических наук Кузнецов Дмитрий Николаевич

Ведущая организация Московский государственный университет

прикладной биотехнологии (МГУПБ)

Защита диссертации состоится 200^/ в /^^гасов на заседании

диссертационного Совета Д 006 011 01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им К И Скрябина (ВИГИС)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС по адресу 117218, Москва, Б Черемушкинская ул, д 28

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор вк Бережко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время продолжает оставаться актуальной проблема обеспечения населения доброкачественной питьевой водой, поставленная на саммите в Йоханнесбурге (2002 г.) в число основных-Подтверждением этому является решение Организации Объединенных Наций о провозглашении десятилетия 2005-2015 гг. Международной декадой «Вода для жизни» вслед за завершимся годом пресной воды, международными водными форумами в Киото и Душанбе

Возникшая в России в последние десятилетия XX века экологическая обеспокоенность в связи с резко возросшими в глобальных масштабах антропогенными нагрузками на окружающую среду закономерно обусловила необходимость пересмотра взглядов на сложившуюся в нашей стране напряженную эпидемиологическую ситуацию по паразитарным болезням. Особое внимание обращает на себя значительный рост кишечных протозойных болезней, передающихся водным путем. Так, по данным В П Сергеева (2003), в 1991 г заболеваемость населения лямблиозом составила 45,0 на 100 тыс населения, а в 2003 г — 103,4, т.е. увеличилась более чем в 2 раза

В России первые водные вспышки лямблиоза были отмечены в 20002001 гг. в детских учреждениях гг. Перми, Вологды, Волгограда (Кучеря Т В и др 2002; Федотова Р.Л идр 2002; Коза Н.М. и др 2002; Авдюхииа Т И и др. 2003) По-видимому, число их значительно больше. По данным Г Г Онищенко (2003), ежегодно в стране регистрируется до 30 вспышек острых кишечных инфекций в результате употребления недоброкачественной питьевой воды

В этих условиях регулярный контроль и адекватная оценка качества воды поверхностных водных объектов и питьевой воды в отношении их парази-тологического загрязнения приобретает особое значение

Несмотря на это, экологический мониторинг за качеством водных объектов и питьевой воды в отношении их паразитарного загрязнения до сих пор не налажен. Для проведения санитарно-паразигологических исследований воды используется методика, рекомендуемая МУК 4.2.964-00 «Санитарно-паразитологические исследования воды хозяйственного и питьевого назначения» К сожалению, она громоздка, трудоемка, требует применения дорогостоящей аппаратуры, а эффективность невысокая Паразитологические исследования питьевой воды и воды поверхностных водных объектов проводятся эпизодически и только на отдельных территориях, практически отсутствуют сведения о многолетней и внутригодовой динамике контаминации питьевой и природной воды возбудителями паразитозов.

ООО «Комрис» (г. Зеленоград), проводятся специальные исследования, направленные на решение заданий НИР: «Разработка мероприятий по снижению риска заражения населения паразитозами Оптимизация профилактики паразитарных болезней», № госрегистрации 01 200 118799 (2001-2005 гг); «Эколого-паразитологический мониторинг на территории Курской области» № госрегистрации 01 2 006 08190 (2006-2010 гг.) Тема настоящего исследования является составной частью Российской научно-технической программы (2001-2005 гг.), задание 02 «Разработка новых теоретических подходов и принципов профилактики паразитарных болезней животных и охраны окружающей среды от паразитозов»

Цель работы

Совершенствование санитарно-паразитологических методов исследования воды в системе экологического мониторинга водных объектов

Задачи исследования

1) обобщить и систематизировать данные о методическом обеспечении санитарно-паразитологических исследований воды поверхностных водных объектов и питьевой воды в нашей стране и за рубежом,

2) выявить причины, снижающие эффективность применяемых на практике методик исследования воды,

3) предложить новые технологии, позволяющие облегчить забор и доставку в лабораторию проб природной и питьевой воды, их дальнейшую обработку и подготовку препаратов для микроскопического исследования,

4) выявить возможности использования насыщенных растворов в качестве флотирующей жидкости при проведении паразитологических исследований проб воды и определить особенности распределения цист лямблий в них,

5) изучить возможность и эффективность применения аналитических трековых мембран для санитарно-паразитологических исследований природной и питьевой воды;

6) обосновать возможность применения веществ, обладающих альгицид-ным действием, для предварительного осветления проб воды поверхностных водных объектов от цианобактерий при исследовании их,

7) предложить окончательный вариант усовершенствованной методики исследования воды по паразитологическим показателям.

Научная новизна

Разработана методика санитарно-паразитологического исследования воды, позволяющая увеличить пропускную способность паразитологических лабораторий и повысить эффективность экологического мониторинга водных объектов и питьевой воды до 82,3%; ее использование в практике лабораторий

позволит наиболее точно прогнозировать риск заражения населения и животных паразитозами.

Предложены для оптимизации отбора проб природной и питьевой воды и дальнейшего их исследования в лаборатории

- пробоотборник - концентратор гидробиологический «ПробоКонГ», позволяющий отбирать пробы воды объемом 400—1000 л и доставлять в лабораторию для обработки концентрат в количестве 100-150 мл;

- отборник флотанта фильтрующий (ОФФ-25), благодаря использованию которого возможно проводить осаждение паразитарных объектов из центрифужной пробирки непосредственно на аналитическую трековую мембрану.

Обосновано применение прозрачных трековых мембран с размером пор 0,2-0,4 мкм, обеспечивающих осаждение на своей поверхности 96,4±0,1% цист лямблий

Установлено, что модельная жидкость цист лямблий является гетерогенной При использовании в качестве флотирующего раствора 30%-ного водного раствора сахарозы жизнеспособные цисты на ранней стадии развития (92,3±0,2%) концентрируются в поверхностной пленке, цисты на поздней стадии обнаруживаются (4,4±0,1%) в толще растворе, а погибшие выпадают (3,1±0,1%) в осадок.

Рекомендовано использовать химические и биологические препараты для осветления концентрата пробы природной воды от цианобактерий путем осаждения ИХ'

в 20% растворе мочевины при экспозиции 1 час, что позволяет осадить 92,5% цианобактерий,

в 1% растворе препарата «Альгицид» при экспозиции 24 часа, эффективность осаждения микроводорослей достигает 98,4%,

в жидкой культуре штамма ЮМ-36 при экспозиции 24 часа, что позволяет привести к осаждению 87,9% цианобактерий, содержащихся в концентрате природной воды.

Данные препараты не влияют на целостность оболочки цист лямблий, а следовательно, не препятствуют флотированию паразитарных объектов в насыщенном растворе

Практическая значимость

Предложена методика санитарно-паразитологического исследования питьевой воды и воды поверхностных водных объектов Внедрение ее в практику паразитологических лабораторий увеличивает частоту индикации цист патогенных кишечных простейших в воде в 1,4—1,6 раз, повышает пропускную способность производственных лабораторий водоочистных сооружений и лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» до 400-1000 л. Это позволяет расширить возможности данных учреждений при организации экологического мониторинга за безопасностью воды в отношении ее паразитарного загрязнения.

Внедрение результатов в практику

Материалы исследований использованы при подготовке с нашим участием.

- МУ 3.2 1756-03 «Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями» (утверждены Минздравом Российской Федерации 28 марта 2003г.),

- МУ 3 2 1882-04 «Профилактика лямблиоза» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г),

- МУ 3.2 1880-04 «Профилактика дирофиляриоза» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г);

- МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г);

МУК 4.2.1881-04 «Санитарно-паразитологические исследования плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г)

Разработанные приборы (пробоотборник - концентратор гидробиологический «ПробоКонГ» и отборник флотанта фильтрующий ОФФ-25) предложены к использованию по назначению и апробированы на базе ООО «Агрозащи-та-плюс» (Курское региональное отделение) при проведении санитарно-паразитологического анализа воды естественно-водных объектов. Предложенные методы индикации цист лямблий в воде также апробированы на базе ЗАО «Институт экологической безопасности» и внедрены в процесс санитарно-паразитологичского анализа питьевой воды и естественных водных объектов при организации экологического мониторинга в отношении их паразитарного загрязнения

Материалы диссертационной работы вошли в циклы лекций по курсам «Общие вопросы паразитологии» (отделение «Социально-культурный сервис и туризм»), «Санитарно-паразитологический мониторинг объектов окружающей среды» (отделение «Экология») на естественно-географическом факультете, «Экология» на факультете искусств Курского государственного университета, использованы при проведении семинаров по профилактике паразитарных болезней для учителей, сотрудников и родителей учащихся МОУ «Средняя общеобразовательная школа № 31 г Курска» и МОУ «Школа с углубленным изучением отдельных предметов № 6 г. Курска».

Апробация работы

Материалы исследований по теме диссертации обсуждены на научно-практических конференциях «Интеграция медицины и образования» (Курск, 2006, 2007), «Диверсификация и стратегия медицины и образования» (Курск, 2006, 2007), «Научные подходы к решению региональных гигиенических проблем сохранения здоровья человека» (Липецк, 2005), «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005,2006,2007).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Использование новых технических устройств (ПробоКонГ и ОФФ-25) и технологий позволяет оптимизировать проведение санитарно-паразитологических исследований воды, что повышает эффективность и частоту выделения возбудителей паразитозов в воде и значительно облегчает организацию экологического мониторинга питьевой воды и водных объектов

2 Научное обоснование усовершенствованной санитарно-паразитологической методики исследования воды позволяет включить ее в систему экологического мониторинга за безопасностью питьевой воды и водных объектов в отношении их паразитарного загрязнения

Публикации

Основные результаты диссертации содержатся в 14 опубликованных работах, в том числе трех статьях в журналах и сборниках работ, включенных в перечень ВАК РФ

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 156 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, из которых одна посвящена обзору литературы, а 3 другие -результатам собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций Диссертация иллюстрирована 25 таблицами и 23 рисунками. Список литературы включает 133 работы, в том числе 95 отечественных и 38 зарубежных авторов.

Хотелось бы высказать искренние слова благодарности за оказанную помощь и поддержку в выполнении и написании диссертационной работы руководителю научно-исследовательской лаборатории «Паразитология» Курского государственного университета Наталье Семеновне Малышевой.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты работы, материал, методы и объем исследований

В качестве объектов работы выбраны методы санитарно-паразитологического исследования питьевой воды и воды поверхностных водных объектов, применяемые в настоящее время в нашей стране и рекомендуемые МУК 4 2.964 - 00 «Санитарно-паразитологическое исследование воды хозяйственного и питьевого использования»

Общий объем выполненных исследований представлен в таблице 1.

При выполнении работы исследовалась вода поверхностных водных объектов, питьевая вода централизованного и нецентрализованного водоснабжения и модельная жидкость, приготовленная в соответствие с методикой, рекомендуемой МУК 4 2 1174 — 02 «Использование модельных тестов цист лямблий и ооцист криптоспоридий для гигиенической оценки эффективности водоочистки».

Таблица 1

Общий объем выполненных исследований

№ Наименование работы Число

п/п исследований

1 Санитарно-паразитологические исследования воды в соответствии с методикой, рекомендуемой МУК 4.2.964-00

- поверхностных водных объектов 540

- питьевой воды централизованного водо- 180

снабжения

- питьевой воды нецентрализованного водо- 168

снабжения

Санитарно-паразитологические исследования во-

ды в соответствии с предложенной методикой-

- поверхностных водных объектов 252

- питьевой воды централизованного водо- 285

снабжения

- питьевой воды нецентрализованного водо- 192

снабжения

2. Экспериментальные исследования

по выявлению потерь инвазионного ма- 192

териала при проведении санитарнопарази-

тологического исследования воды;

по оценке эффективности выявления 480

цист лямблий порошковым фильтром про-

боотборника «ПробоКонГ»

по оценке эффективности методов ис- 480

следования воды, рекомендуемых МУК

4 2.964-00

изучению возможности применения 135

ATM для идентификации цист лямблий в

воде

по изучению гетерогенности культуры 246

лямблий

по оценке действия альгетиков на жиз- 1392

неспособность цианобактерий и цист лямб-

лий 288

оценке действия карбамида (мочевина)

на жизнеспособность цианобактерий и цист

лямблий 315

по оценке действия биопрепаратов на

жизнеспособность цианобактерий и цист

| лямблий

При анализе результатов исследования применяли методы математической статистики - вычисление интенсивных и экстенсивных показателей, оценку достоверности показателей определяли с помощью доверительного коэффициента Стьюдента

Результаты наших комплексных исследований и анализ данных литературы позволили сформулировать и обосновать следующие положения диссертации, представляемые к защите

В ходе проведенных санитарно-паразитологических исследований воды поверхностных водных объектов и питьевой воды в соответствии с МУК 4.2 964 - 00 установлены основные причины, сдерживающие применение данной методики при организации экологического мониторинга за паразитологи-ческой безопасностью водных объектов.

1) низкая эффективность выявления паразитарных патогенов в природной и питьевой воде;

2) трудность отбора проб воды (природной - 25 л и питьевой - 50 л) и их доставки в лабораторию, длительные сроки фильтрования;

3) потери паразитарных патогенов при осуществлении основных операций методики,

4) трудность идентификации в препаратах воды паразитарных патогенов от растительных объектов (сине-зеленых водорослей)

Повышение вероятности обнаружения возбудителей кишечных парази-тозов в природной и питьевой воде за счет увеличения объема проб, при одновременном снижении трудозатрат на их отбор, доставку в лабораторию и обработку достигается при создании специального пробоотборника - концентратора гидробиологического «ПробоКонГ» (рис.1)

ПробоКонГ - переносное устройство для концентрирования из воды методом фильтрования паразитарных патогенов (цисты кишечных простейших) с размерами более 1,5 мкм из воды непосредственно на месте отбора пробы

Он может использоваться при проведении контроля качества по гидробиологическим, экологическим и санитарным показателям воды на станциях водоочистки, в распределительной сети централизованного водоснабжения, в источниках индивидуального водоснабжения, в природных и искусственных водоемах, плавательных бассейнах, а также бутилированной воды Фильтрование осуществляется через намывной слой порошкового фильтрующего материала

Использование ПробоКонГ позволяет проводить отбор проб и фильтрование воды на месте пробоотбора, увеличить объем проб воды до 400-1000 л и получить концентрат объемом 100-150 мл, который можно легко транспортировать в паразитологическую лабораторию Это существенно увеличивает их пропускную способность и положительно сказывается на качестве экологического мониторинга питьевой воды и воды естественных водных объектов в отношении их паразитарного загрязнения

Обозначения:

1 - пластиковая бутылка;

2 - элемент Крапухина,

3 - распределительная головка, 4-кран;

5 - манометр;

6 - счетчик;

7 - входной патрубок,

8 - выходной патрубок,

9 - подвеска, 10-регулятор, 11 - опора

Рис. 1 Схема устройства пробоотборника - концентратора гидробиологического «ПробоКонГ» Результаты сравнительных экспериментальных исследований модельной жидкости цист лямблий, представленные в табл 2, показывают, что при использовании современных технических устройств наблюдается повышение эффективности выявления цист лямблий в модельной жидкости Считаем целесообразным обратить внимание на выявляемость паразитарных объектов в пробах модельной жидкости с их количеством 25 экз /пробу, т.к. это наиболее актуально при мониторинге водных объектов окружающей среды

Таблица 2

Эффективность индикации цист лямблий в пробах модельной жидкости

Используемая методика Содержание цист лямблий в пробе, экз Объем пробы, л Выявлено цист лямблий (экз) Эффективность выделения цист лямблий, (%±т)

Методика, рекомендуемая МУК 4.2 964-00 25 25 0 0

25 50 0 0

25 100 3,2±1 12,8±0,3

25 200 5,1±2 20,4±0,2

Методика с использованием пробоотборника «ПробоКонГ» 25 25 8,2±1 32,8±0,4

25 50 11,1 £2 44,4±0,2

25 100 14,5±1 58,0±0,1

25 200 17,2±1 68,8±0,3

Экспериментально установлено, что использование методики, рекомендуемой МУК 4 2 964 - 00, не позволяет выявлять цисты в пробах модельной жидкости объемом 25 и 50 л А при их обработке в соответствии с предложенной нами методикой обнаруживалось 32,8±0,4% и 44,4±0,2% экз в пробах объемом 25 и 50 л соответственно. Увеличение объема проб модельной жидкости объемом 200 л позволяет повысить эффективность их индикации до 68,4±0,3%, что в 3,4 раза выше, чем при использовании применяемой в настоящее время методики (20,4±0,2%)

Кроме этого нами было проанализировано изменение выявляемое™ цист лямблий в модельной жидкости в зависимости от объема проб Так, отбор проб при помощи ПробоКонГ показывает, что эффективность индикации патогенов в пробах модельной жидкости объемом 25 л составляет 32,8±0,4%, что в 2 раза ниже, чем при анализе проб объемом 200 л (68,4±0,3%)

Результаты экспериментальных исследований проб модельной жидкости, представленные в табл 3, показывают, что наблюдается и колебание экстенсивных показателей в зависимости от объема пробы, метода отбора и обработки полученного концентрата

Таблица 3

Результаты санитарно-паразитологического исследования модельной

жидкости

Используемая методика Содержание цист лямблий в пробе, экз. Объем пробы,л Выявлено положительных проб,

всего (% ± ш)

Методика, рекомендуемая МУК 4 2.964-00 25 25 0 0

25 50 0 0

25 100 2±1 13 3±0,3

25 200 4±1 26,6±0,5

Методика с использованием пробоотборника «ПробоКонГ» 25 25 6±1 40,0±0,3

25 50 7±1 46,7±0,2

25 100 7±1 46,7±0,3

25 200 10±1 66,7±0,2

При анализе проб модельной жидкости объемом 25 и 50 л по методике, рекомендуемой МУК 4 2 964 - 00, паразитарные объекты не обнаруживались Исследование проб объемом 25 и 50 л с использованием современных технических устройств позволяет выявлять цисты лямблий соответственно в 12 (40,0±0,3%) и 14 (46,7±0,2%) из 30

Увеличение объема проб модельной жидкости от 25 до 200 л и обработка их по предложенной нами методике повышает частоту обнаружения цист

лямблий от 40,0±0,1% до 66,7±0,2%, т е наблюдается увеличение количества положительных проб в 1,6 раз Теоретическое обоснование увеличения минимальных объемов проб исследуемой воды можно дать при помощи распределения малых чисел Пуассона.

Другим техническим решением, позволяющим усовершенствовать методику обработки флотирующего раствора и оптимизировать индикацию паразитарных патогенов в воде на этапе микроскопирования готовых препаратов, является отборник флотанта фильтрующий - ОФФ-25 (рис. 2)

Отборник флотанта фильтрующий применяется в паразитологических исследованиях для нанесения паразитарных объектов путем вакуумного фильтрования флотанта непосредственно из центрифужной пробирки на прозрачную аналитическую трековую мембрану для последующего микроскопического исследования приготовленного таким образом препарата

Аналитическая трековая мембрана изготавливается из тонкой прозрачной полиэтилентерефталатной пленки со сквозными порами диаметром от 0,05 до 5 мкм

Обозначения:

1 - шасси,

2 - вакуумметр,

3 - регулятор разряжения,

4 - шаровый кран,

5 - конусная муфта,

6 - конус;

7 - основание для АТМ;

8 - диск мембраны, 9 - цилиндр, 10 - гайка, 11 - амортизатор, 12-крышка;

14 — уплотнитель,

15 - трубка, соединяющая цилиндр с основанием, 16-штуцер,

17 - игольчатый регулятор,

18 - трубка, соединяющая цилиндр с атмосферой

Рис 2 Устройство отборника флотанта фильтрующего ОФФ-25

Результаты санитарно-паразитологических исследований модельной жидкости, представленные в табл 4, показывают, что эффективность осаждения паразитарных объектов на поверхности аналитической трековой мембраны зависит от размера пор

Установлено, что при проведении санитарно-паразитологического анализа воды предпочтительнее использовать трековые мембраны с размерами пор от 0,2-0,4 мкм, что обусловливает задержание 96,4±0,5% цист лямблий на

их поверхности Это обусловлено тем, что при использовании крупнопористой мембраны 1-3 мкм (поры соизмеримы с размером цист) при достаточном перепаде давления появляется возможность проскока цист лямблий через поры, а также создается неудобный для микроскопического исследования задний фон

Таблица 4

Эффективность задержания цист лямблий на поверхности аналитической трековой мембраны

№ Размер пор Исследо- Содержа- Обнаружено Эффективность

п/п используе- вано проб ние цист цист лямблий задержания

мых ATM, лямблий в на поверхности цист лямблий

мкм пробе, экз ATM, экз на поверхности

ATM, (ш±%)

1 0,2-0,4 30 10±1 9,64±1 96,4±0,1

2 2,5-3,0 30 10±1 9,5 8±1 95,8±0,1

3. 3,0-3,5 30 10±1 8,53±2 85,3±0,2

Всего 90 10±1 9,25±1 92,5±0,2

Результаты экспериментальных исследований показывают, что модельная жидкость цист лямблий гетерогенна, что является причиной неравномерного распределения их в насыщенном растворе Также флотирование частиц в растворе зависит от используемого флотирующего раствора, т.е его физико-химических характеристик

Установлено, что при микроскопировании проб в нижних слоях центрифужной пробирки выявляется 3,2±0,2% и 3,1±0,2% экз. погибших цист лямблий при использовании в качестве флотанта раствора сульфата цинка и сахарозы соответственно. Оболочки погибших цист имеют микроповреждения и через них теряют внутриклеточную воду Внутреннее содержимое не выражено При помещении таких цист в сильно осмомолярный флотирующий раствор плотность их возрастает, объем и плавучесть уменьшаются, в результате чего наблюдается осаждение в нижние слои раствора

В толще водного раствора семиводного сульфата цинка обнаруживается в среднем 11,2±0,1% экз, что 2,5 раза больше, чем при исследовании раствора сахарозы (4,4±0,1%) Это связано с тем, что силы притяжения между противоположно заряженными гидратированными ионами в растворе сульфата цинка обусловливают нахождение большего количества цист лямблий в столбце раствора Обнаруживались жизнеспособные цисты лямблий, вероятно находящиеся на поздних стадиях развития (их удельный вес соизмерим с плотностью раствора), а потому представляющие потенциальную опасность для здоровья человека и животных. Они имели характерную для них овальную форму и размеры (в среднем 10-12 мкм в длину и 6-8 мкм в ширину). Снаружи цисты Lamblia intestinalis покрыты плотной оболочкой, препятствующей поступлению окружающего раствора внутрь клетки

В поверхностных слоях концентрируется в среднем 79,4±0,2% и 92,3±0,2% экз. в растворе сульфата цинка и сахарозы соответственно. Всплы-вание цист лямблий на поверхность раствора обусловлено их небольшим удельным весом по сравнению с плотностью окружающего раствора и целостностью их оболочки. Цисты Lamblia intestinalis, обнаруженные в флотанте и представленные на рис. 3, имели овальную форму с размерами 10-12 мкм в длину и 6-8 мкм в ширину. Выявленные жизнеспособные цисты на ранних стадиях развития покрыты плотной оболочкой, не имеющей микроповреждений; под ней располагается хорошо оформленное внутреннее содержимое.

- ♦ к Л *,?«? . *

'S*.*/'.SS

*■> .л-. * ••

Рис. 3. Цисты Lamblia intestinalis. Окраска 1%-ным раствором Люголя (объектив 40х, окуляр 10*)

Это было принято нами во внимание при разработке пробоотборника «ПробоКонГ». Порошковый материал, применяемый в качестве фильтра, не травмирует целостность оболочки цисты лямблий. Отделение объектов от фильтрующего материала не требует таких механических воздействий, как со-нификация, стирание в пластиковых мешочках, интенсивное взбалтывание и т.п. Считаем, целесообразным также рекомендовать для обработки при помощи ОФФ-25 не только поверхностных слоев (флотанта), но и супернатанта, что позволит наиболее верно определить риск заражения человека и животных паразитарными болезнями.

Следующим этапом исследования стало изучение возможности очистки готовых препаратов от цианобактерий. Для этого предложено проводить предварительное осветление концентрата пробы от цианобактерий в результате осаждения их во флотирующем растворе при помощи химических и биологических веществ.

В ходе экспериментальных исследований изучалось альгицшшое действие альгетиков (препаратов, применяемых для борьбы с водорслями в аквариуме) «Алговек», «Алгостоп», «Альгицид», а также препарата «Аквастоп» с концентрацией действующего вещества 0,05 и 1%. Время экспозиции различно: 1,6 и 24 часа.

Результаты исследования проб, представленные на рис. 4, показывают, что наиболее эффективное разрушение оболочек цианобактерий наблюдается под воздействием на них препарата «Альгицид» при экспозиции 24 часа.

Аквастоп, I%

Аквастоп, 0,05%

| Альгацка, 1% *

| Альшцид, 0,05%

Н U X

2 Алгостоп, 1%

г* Oh

I Алгостоп, 0,05%

Е О

Алговек, 1% Алговек, 0,05%

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 111 час К2 часа 024 часа i логибшнх шшго&агарий

Рис. 4. Действие водных растворов альгетиков на жизнеспособность цианобактерий

Исследование осадка при экспозиции 24 часа показало, что растворы «Альгицид» с концентрацией 0,05% и I % приводят к утрате жизнеспособности В среднем 76,8% и 98,4% клеток цианобактерий. Эффективность препарата «Алгостоп» в борьбе с цианобактериями ниже в 1,8 раз, препарата «Аквастоп» - в 1,5 раза, а «Алговек» - в 10 раз. При этом увеличение концентрации «Альгицид» от 0,05% до 1 % приводит к повышению эффективности его воздействия в 1,3 раза.

Обработка модельной жидкости цист лямблий раствором данной кон-ценграции и экспозиции не приводит к нарушению целостности клеточной стенки цист лямблий, что позволяет рекомендовать использование 1 % раствора «Альгицид» при экспозиции 24 часа для предварительного осветления воды

естественных водных объектов от цианобактерий в ходе ее паразитологиче-ского исследования

Также изучалась возможность применения мочевины (карбамид ССХЫНгЬ) для очистки препаратов цист лямблий от цианобактерий Результаты экспериментальных исследований, показывают, что 0,5%, 1% и 5% водные растворы мочевины за указанные промежутки времени не приводят к нарушению целостности клеточной стенки цист лямблий и цианобактерий

Воздействие 10% и 20% растворов мочевины на цианобактерии оказывается губительным через 1 час Так, действие 10% раствора мочевины приводит к нарушению целостности клеточной стенки 67,8±0,2%, что в 1,4 раза меньше, чем при действии на них 20% раствора (92,5±0,1%) При увеличении экспозиции до 2 часов достигается полная гибель (100±0,1%) экз при действии 20% раствора мочевины. А действие 10% раствора приводит к гибели 94,3±0,2% клеток цианобактерий.

Данные экспозиции и концентрации вещества, обладающего альгицид-ным действием, также не вызывает осаждения цист лямблий во флотирующем растворе, что позволяет рекомендовать использование 20% раствора мочевины при экспозиции 1 час для осветления концентрата проб воды от цианобактерий

В качестве биологических средств борьбы с сине-зелеными водорослями были изучены наиболее перспективные штаммы бактерий ЮМ-17 и ЮМ-36, отнесенных на основании морфологических и физиолого-биохимических признаков к ВгеуЛасШиБ ЫегозрогиБ

Для этого к концентрату природных водорослей добавляли 96-часовую культуру бацилл в соотношении 1:2. Экспозиция составляла 20 мин, 1 и 24 часа В исследуемых пробах при экспозиции 20 мин и 1 час отмечалось вспенивание растворов, вызванное действием штаммов.

Результаты микроскопического исследования препаратов, представленные на рис 5, показывают, что через 24 часа в среднем было обнаружено 72,3±0,2% и 79,2±0,3% образовавшихся свободных нежизнеспособных клеток природных цианобактерий после воздействия на них штаммов ЮМ-17 и ЮМ-36 соответственно При дальнейшем помещении их во флотирующий (насыщенный) раствор наблюдалось их осаждение в нижние слои, что свидетельствует о нарушении целостности их клеточной стенки

Микроскопическое исследование препаратов позволяет сделать вывод, что полный лизис клеток природных цианобактерий наблюдался лишь у 2,8±0,3% и 8,7±0,1% экз после контакта их со штаммами бацилл ЮМ-17 и ЮМ-36 соответственно Это позволяет сделать вывод, что штамм ЮМ-36 за 24 часа обусловливает утрату жизнеспособности 87,9±0,3% клеток цианобактерий, что в 1,2 раза больше, чем при воздействии на них штамма ЮМ-17(75,1 ±0,4%)

При изучении действия штаммов ЮМ-17 и ЮМ-36 на цисты лямблий установлено, что при указанной экспозиции культуры штаммов ЮМ-36 и ЮМ-17 не влияют на их жизнеспособность Это позволяет рекомендовать ис-

пользование штамма ЮМ-36 при экспозиции 24 часа для предварительного осветления концентрата природной воды от цианобактерий.

Штамм ЮМ-17 Штамм ЮМ-36

Используемый препарат

Рис. 5. Влияние штаммов ЮМ-17 и ЮМ-36 на клетки природных цианобактерий при экспозиции 24 часа

Экспериментальные исследования на модельной жидкости цист лямблий позволили разработать методику санитарно-паразитологического исследовании природной и питьевой воды, основные этапы которой заключаются в следующем:

1. Центрифугирование отобранного концентрата воды (природной ли питьевой) следует проводить в качающемся роторе (бакет-роторе) в течение 10 мин при 1500 об./мин., надосадочную жидкость осторожно слить.

2. К осадку добавить 3 мл 30% раствора сахарозы с удельным весом не менее 1,26 и тщательно перемешать стеклянной палочкой. При использовании химических средств борьбы с цианобактериями флотацию следует осуществлять в 33% водном растворе семиводного сульфата цинка.

3. При исследовании природной воды для освобождения ее концентрата от цианобактерий в пробирку добавить 20% раствор мочевины в соотношении 1:! и оставить на I час. Возможно использование для этих целей культуры штамма бактерий ЮМ-36 в соотношении 1:2 при экспозиции 24 часа. Осаждение цианобактерий в растворе также можно добиться при помощи 1 % раствора препарата «Альгицид» при экспозиции 24 часа.

4. При исследовании природной воды провести повторное центрифугирование в течение 10 мин при 1500 об./'мин (режиме для флотирования биообъектов), при этом биологические объекты (циан о бактерии), части-

цы фильтрующего материала (ПФГ) переходят в осадок, а паразитарные агенты всплывают.

5. Затем супернатант отобрать на аналитическую трековую мембрану с помощью отборника флотанта фильтрующего ОФФ-25 по инструкции к нему, промыть дистиллированной водой

6. Приготовить микропрепарат, окрасить его раствором Люголя и провести микроскопическое исследование при увеличении объектив 10х - 40х, окуляр 10х

Сравнение результатов исследований, полученных при организации экологического мониторинга поверхностных водных объектов, питьевой воды в отношении их паразитарного загрязнения и представленных в табл 5, показывает, что наиболее полное представление об уровне паразитарного обсеменения воды было получено при внедрении современных технических средств отбора и обработки проб воды

Таблица 5

Результаты санитарно-паразитологического исследования поверхностных водных объектов и питьевой воды

Место отбора проб Методика исследования Выявлено положительных проб, %±т Обнаружено цист лямблий, в среднем на пробу, экз.

Река Тускарь Предложенная методика 54,2±0,3 8,7±0,2

Методика МУК 4 2 964 - 00 38,7±0,1 2,6±0,1

Река Сейм Предложенная методика 25,9±0,1 4,8±0,2

Методика МУК 4.2 964 - 00 17,6±0,2 1,6±0,2

Шахтные колодцы индивидуального пользования Предложенная методика 13,9±0,2 2,8±0,2

Методика МУК 4 2 964 - 00 8,3±0,2 1,1±0,1

Шахтные колодцы общественного пользования Предложенная методика 25,0±0,1 6,1±0,1

Методика МУК 4 2 964 - 00 16,7±0,1 2,3±0,2

Недействующие шахтные колодцы Предложенная методика 45,8±0,3 10,7±0,2

Методика МУК 4.2 964 - 00 29,2±0,1 3,9±0,3

Питьевая вода разводящей сети Предложенная методика 1,4±0,1 1,5±0,1

Методика МУК 4 2 964 - 00 0 0

При этом частота обнаружения паразитарных патогенов в воде увеличивается в среднем в 1,5 раза, а эффективность выявления — в 3 раза Внедрение предложенной методики в практику паразитологических лабораторий позволяет повысить эффективность экологического мониторинга воды при оценке ее паразитологической безопасности и наиболее точно прогнозировать риск заражения человека и животных цистами лямблий

Экспериментальные исследования модельной жидкости цист лямблий в соответствии с методикой, рекомендуемой МУК 4 2.964 — 00, и предложенной нами методикой, показывают, что обработка проб с использованием современных технических устройств повышает эффективность обнаружения цист лямблий в 3,5—4,5 раза При этом отмечается повышение экстенсивных показателей в 1,5 раза

Вычисление относительной погрешности каждой из методик позволяет сделать вывод, что предложенная нами методика с использованием современных технологий отбора проб воды и их исследования не нуждается в дальнейшей доработке и может быть использована в практике паразитологических лабораторий. Исходя из этого, при организации экологического мониторинга водных объектов мы провели санитарно-паразитологические исследования воды поверхностных водных объектов, расположенных на территории Курской области, и питьевой воды разводящей системы г Курска в соответствии с каждой из методик

ВЫВОДЫ

1 Разработана методика санитарно-паразитологического исследования воды с использованием современных технических устройств для отбора проб воды (пробоотборник - концентратор гидробиологический «ПробоКонГ») и их дальнейшей обработки в лаборатории (отборник флотанта фильтрующий ОФФ-25). Это позволяет отбирать пробы объемом до 400-1000 л, облегчает доставку в лабораторию полученного концентрата объемом 100-150 мл и обеспечивает более щадящий режим отделения (отстаивание или фильтрование) цист лямблий от фильтрующего материала Применение данной методики позволяет существенно облегчить организацию и проведение экологического мониторинга воды поверхностных водных объектов и питьевой воды в отношении их паразитарного загрязнения, а также повысить его эффективность

2 Внедрение новых технологий исследования воды сокращает время исследования до 8-10 часов, а приготовление микропрепарата отборником флотанта фильтрующего ОФФ-25 и микроскопическое исследование его на аналитической трековой мембране уменьшает потери инвазионного материала на 10-12%.

3. Использование усовершенствованной методики для обнаружения цист лямблий в модельной жидкости повышает эффективность их индикации в

3,4 раза При увеличении объема проб с 25 до 200 л выявляемость паразитарных патогенов возрастает в 2 раза и достигает 68,4%. При исследовании проб (200 л) цисты лямблий обнаруживаются в 2,5 раза чаще (66,7±0,2%) Увеличение объема пробы приводит к повышению количества положительных проб в 1,6 раза

4 Применение ПробоКонГ и ОФФ-25 в практике работы паразитологиче-ских лабораторий при организации экологического мониторинга водных объектов и питьевой воды повышает частоту выделения паразитарных агентов в воде в 1,4—1,6 раза, а также интенсивные показатели обсемененности воды в 3 раза

5. Аналитические трековые мембраны с размером пор 0,2-0,4 мкм обеспечивают удобный для микроскопического исследования задний фон, равномерное распределение цист лямблий на поверхности и способствуют задержанию на них 96,4% цист лямблий.

6. Гетерогенность цист лямблий обуславливает неравномерное распределение их во флотационной жидкости Жизнеспособные цисты лямблий на ранних стадиях развития (92,3±0,2%) концентрируются в поверхностном слое флотационного раствора (30% раствор сахарозы); жизнеспособные цисты на поздних стадиях развития (15,2±0,1%) обнаруживаются в толще взвеси, а погибшие цисты лямблий, имеющие нарушения целостности их клеточной стенки (3,2±0,2%), — оседают в нижние слои

7. Для борьбы с цианобактериями, затрудняющими идентификацию цист лямблий, необходимо использовать вещества, обладающие альгицидным действием- 20% раствор мочевины при экспозиции 1 час; 1% раствор препарата «Альгицид» и штамм бактерий ЮМ-36 при экспозиции 24 часа

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Шире внедрять в практику производственных лабораторий водоочистных сооружений и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» усовершенствованную методику санитарно-паразитологического исследования питьевой воды и воды поверхностных водных объектов, поверхностного стока.

2. Для отбора проб воды использовать пробоотборник - концентратор гидробиологический «ПробоКонГ», который обеспечивает отбор проб воды объемом 400-1000 л в течение 5-6 часов и доставку в лабораторию полученного концентрата объемом 100-150 мл

товых препаратов проводить непосредственно на мелкопористых аналитических трековых мембранах с размером пор 0,2-0,4 мкм 4. Для осветления приготовленного концентрата пробы воды от цианобак-терий проводить предварительную его обработку 20% раствором мочевины в течение 1 часа (соотношение 1:1) А также возможно применение для этих целей 1% раствора препарата «Альгицид» или биопрепарата, приготовленного на основе жидкой культуры бактерий Brevibacillus laterosporus (штамм IGM-36) при экспозиции 24 часа

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Эпидемический надзор за паразитарными болезнями Методические указания - М • Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004 - 83 с

2. Санитарно-паразитологические исследования плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции Методические указания — М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 19 с

3. Бунаков А В, Грибинюк М В., Плехова Н.А Санитарно-паразитологический мониторинг за централизованным водоснабжение в области // Научные подходы к решению региональных гигиенических проблем сохранения здоровья человека Научные труды Федерального научного Центра гигиены им ФФ. Эрисмана Вып 15. - Липецк, 2005 - С 426428

4. Малышева Н С , Дмитриева ЕЛ., Плехова Н.А Внедрение компьютерных технологий в систему формирования паразитологических представлений // Научные подходы к решению региональных гигиенических проблем сохранения здоровья человека- Научные труды Федерального научного Центра гигиены им Ф.Ф Эрисмана. Вып 15 - Липецк, 2005 -С 520-522

5 Профилактика лямблиоза- Методические указания. - М: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005 - 36 с.

6. Профилактика дирофиляриоза. Методические указания — М.. Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005. - 18 с.

7 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов Методические указания М. Федеральный ценгр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005 -75 с

8 Плехова Н А., Дмитриева Е.Л, Романенко H.A., Елизаров А С Совершенствование методов отбора и санитарно-паразитологического исследования воды // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями Матер науч конф -М , 2006 -С. 303-305.

9 Дмитриева Е Л, Малышева Н С, Плехова H.A., Самофалова Н А Мероприятия по снижению риска загрязнения окружающей среды ооцистами криптоспоридий // Интеграция медицины и образования Матер регион науч конф -Курск,2006 -С.21-22.

10 Плехова Н А, Малышева Н С., Дмиггириева Е.Л., Елизаров А С Некоторые аспекты методического обеспечения санитарно-паразитологических исследований воды // Интеграция медицины и образования- Матер регион науч. конф. - Курск 2006. - С. 82-84.

11. Дмитриева Е Л, Малышева Н С., Плехова Н А., Буряк М.В Распространение криптоспоридий в естественных экосистемах Курской области // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Матер науч конф М , 2006 -С 141-143.

12. Плехова Н.А, Малышева Н.С. Значение современных методических решений в совершенствовании современных санитарно-паразитологических исследований воды // Диверсификация и стратегия медицины и образования Матер междунар науч. конф в 2 ч. - Ч. 2 - Курск- КГУ, 2006 - С 43-46

13. Плехова Н А, Малышева Н.С Совершенствование методов санитарно-паразитологических исследований воды // Медицинская паразитология и паразитарные болезни -М., 2006 -№4-С 46-48

14. Романенко Н А , Комисарова Ю В., Плехова Н А. Состояние и перспективы улучшения санитарно-паразитологического контроля качества воды II Здоровье нации - основа процветания России. Матер науч.-практич. конгр. IIIВсероссийского фор. — М, 2007. — Т. 2.-Ч 1 -С 228-229.

Нина Анатольевна ПЛЕХОВА

Автореферат

Лицензия на издательскую деятельность ИД № 06248 от 12 11.2001 г. Подписано в печать 25 04 2007 Формат 60x84/16 Бумага офсетная. Печать офсетная Тираж 100 экз Заказ № 1801

Изд-во Курского государственного университета 305000, г Курск, ул. Радищева, д 33

Отпечатано в лаборатории информационно-методического обеспечения КГУ

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Плехова, Нина Анатольевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Методическое обеспечение санитарно-паразитологичес-ких исследований воды.

1.1. Роль воды в циркуляции цист лямблий в окружающей среде.

1.1.1. Морфологическое строение цист Lamblia intestinalis.

1.1.2. Обсемененность воды поверхностных водных объектов и питьевой воды цистами лямблий.

1.1.3. Выживаемость цист лямблий в поверхностных водных объектах.

1.2. Методическое обеспечение контроля безопасности воды по пара-зитологическим показателям в современных условиях.

ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 2. Объекты, материалы, методы и объем исследований.

2.1. Объекты, материал и методы исследований.

2.2. Оценка эффективности применяемого в настоящее время метода обнаружения цист лямблий в воде.

2.3. Факторы, влияющие на эффективность методов обнаружения цист лямблий в воде.

2.3.1. Минимальный объем проб исследуемой воды.

2.3.2. Потери инвазионного материала при санитарно-паразитологическом исследовании воды.

2.3.3. Затруднения в идентификации цист лямблий при исследовании природной воды.

2.4. Статистические методы.

2.5. Объем выполненных исследований.

ГЛАВА 3. Совершенствование методов индикации возбудителей кишечных протозоозов в воде.

3.1. Совершенствование методов отбора и первичной обработки проб воды поверхностных водных объектов и питьевой воды.

3.1.1. Возможность увеличения объемов проб исследуемой воды за счет применения новых современных технологий пробоотбора.

3.1.2. Оптимизация идентификации цист лямблий при использовании современных технологий на этапе микроскопирования готовых препаратов.

3.2. Устранение факторов, затрудняющих идентификацию цист лямблий в воде поверхностных водных объектов.

3.2.1. Использование химических веществ для повышения эффективности идентификации цист лямблий.

3.2.2. Использование веществ биологической природы для повышения эффективности индикации цист лямблий.

3.3. Методика, рекомендуемая для индикации цист патогенных кишечных простейших в природной и питьевой воде.

3.3.1. Усовершенствованная методика индикации цист патогенных кишечных простейших в воде.

3.3.2. Оценка эффективности обнаружения цист лямблий в воде усовершенствованной методикой.

ГЛАВА 4. Совершенствование экологического мониторинга за безопасностью питьевой воды и водных объектов окружающей среды по паразитологическим показателям.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Совершенствование санитарно-паразитологических методов исследования воды в системе экологического мониторинга"

Актуальность темы

В настоящее время продолжает оставаться актуальной проблема обеспечения населения доброкачественной питьевой водой, поставленная на саммите в Йоханнесбурге (2002 г.) в число основных дел о реализации стратегии устойчивого развития человеческого сообщества. Подтверждением этому является решение Организации Объединенных Наций о провозглашении десятилетия 2005-2015гг. Международной декадой «Вода для жизни» вслед за завершимся годом пресной воды, международными водными форумами в Киото и Душанбе.

Возникшая в России в последние десятилетия XX века экологическая обеспокоенность в связи с резко возросшими в глобальных масштабах антропогенными нагрузками на окружающую среду закономерно обусловила необходимость пересмотра взглядов на сложившуюся в нашей стране напряженную эпидемическую ситуацию по паразитарным болезням. Особое внимание обращает на себя значительный рост кишечных протозойных болезней, передающихся водным путем. Так, по данным В.П.Сергиева (2002) в 1991 г заболеваемость населения лямблиозом составила 45,0 на 100 тыс. населения, а в 2003 г. - 103,4, т.е. увеличилась более чем в 2 раза.

В России первые водные вспышки лямблиоза были отмечены в 20002001 гг. в детских учреждениях гг. Перми, Вологды, Волгограда (Кучеря Т.В. и др., 2002; Федотова P.JI. и др., 2002; Коза Н.М. и др., 2002; Авдюхина Т.Н. и др., 2003). По данным Г.Г. Онищенко (2003) ежегодно в стране регистрируется до 30 вспышек острых кишечных инфекций в результате употребления недоброкачественной питьевой воды.

В этих условиях регулярный контроль и адекватная оценка качества воды поверхностных водных объектов и питьевой воды в отношении их паразитарного загрязнения приобретает особое значение.

Несмотря на это экологический мониторинг за паразитологической безопасностью питьевой воды и водных объектов в нашей стране до сих пор не налажен. Для проведения санитарно-паразитологических исследований воды используется методика, рекомендуемая МУК 4.2.964-00 «Санитарно-паразитологические исследования воды хозяйственного и питьевого назначения». К сожалению, она громоздка, трудоемка, требует применения дорогостоящей аппаратуры, а эффективность невысокая. Паразитологические исследования питьевой воды и воды поверхностных водных объектов проводятся эпизодически и только на отдельных территориях; практически отсутствуют сведения о многолетней и внутригодовой динамике контаминации питьевой и природной воды возбудителями паразитозов.

С учетом важности этой проблемы нами, начиная с 2004 по 2007 год на базе научно-исследовательской лаборатории «Паразитология» Курского государственного университета совместно с Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского ММА им. И.М. Сеченова, Всероссийским институтом гельминтологии им. К.И.Скрябина, НИИФП, ООО «Комрис» (г. Зеленоград), проводятся специальные исследования, направленные на решение заданий НИР: «Разработка мероприятий по снижению риска заражения населения паразитозами. Оптимизация профилактики паразитарных болезней», № госрегистрации 01.200.118799 (2001-2005 гг.); «Эколого-паразитологический мониторинг на территории Курской области» № госрегистрации 01.2.006 08190 (2006-2010 гг.). Тема настоящего исследования является составной частью Российской научно-технической программы (2001-2005 гг.), задание 02 «Разработка новых теоретических подходов и принципов профилактики паразитарных болезней животных и охраны окружающей среды от паразитозов».

Цель работы

Совершенствование санитарно-паразитологических методов исследования воды в системе экологического мониторинга водных объектов.

Задачи исследования

2) выявить причины, снижающие эффективность применяемых на практике методик исследования воды;

Научная новизна

Предложены для оптимизации отбора проб природной и питьевой воды и дальнейшего их исследования в лаборатории:

- пробоотборник - концентратор гидробиологический «ПробоКонГ», позволяющий отбирать пробы воды объемом 400-1000 л и доставлять в лабораторию для обработки концентрат в количестве 100-150 мл;

Обосновано применение прозрачных трековых мембран с размером пор 0,2-0,4 мкм, обеспечивающих осаждение на своей поверхности 96,4±0,1% цист лямблий.

Установлено, что модельная жидкость цист лямблий является гетерогенной. При использовании в качестве флотирующего раствора 30%-ного водного раствора сахарозы жизнеспособные цисты на ранней стадии развития (92,3±0,2%) концентрируются в поверхностной пленке; цисты на поздней стадии обнаруживаются (4,4±0,1%) в толще растворе, а погибшие выпадают (3,1 ±0,1%) в осадок.

Рекомендовано использовать химические и биологические препараты для осветления концентрата пробы природной воды от цианобактерий путем осаждения их: в 20% растворе мочевины при экспозиции 1 час, что позволяет осадить 92,5% цианобактерий; в 1% растворе препарата «Альгицид» при экспозиции 24 часа; эффективность осаждения микроводорослей достигает 98,4%; в жидкой культуре штамма IGM-36 при экспозиции 24 часа, что позволяет привести к осаждению 87,9% цианобактерий, содержащихся в концентрате природной воды.

Данные препараты не влияют на целостность оболочки цист лямблий, а следовательно, не препятствуют флотированию паразитарных объектов в насыщенном растворе.

Практическая значимость

Предложена методика санитарно-паразитологического исследования питьевой воды и воды поверхностных водных объектов. Внедрение ее в практику паразитологических лабораторий увеличивает частоту индикации цист патогенных кишечных простейших в воде в 1,4-1,6 раз, повышает пропускную способность производственных лабораторий водоочистных сооружений и лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» до 400-1000 л. Это позволяет расширить возможности данных учреждений при организации экологического мониторинга за безопасностью воды при оценке ее по паразито-логическим показателям.

Внедрение результатов в практику

Материалы исследований использованы при подготовке с нашим участием:

МУ 3.2.1756-03 «Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями» (утверждены Минздравом Российской Федерации 28 марта 2003г.);

МУ 3.2.1882-04 «Профилактика лямблиоза» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г);

МУ 3.2.1880-04 «Профилактика дирофиляриоза» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г);

МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов» (утверждены Минздравом Российской Федерации 3 марта 2004 г);

Разработанные приборы (пробоотборник - концентратор гидробиологический «ПробоКонГ» и отборник флотанта фильтрующий ОФФ-25) предложены к использованию по назначению и апробированы на базе ООО «Агрозащита-плюс» (Курское региональное отделение) при проведении санитарно-паразитологического анализа воды естественно-водных объектов. Предложенные методы индикации цист лямблий в воде также апробированы на базе ЗАО «Институт экологической безопасности» и внедрены в процесс санитар-но-паразитологичского анализа питьевой воды и естественных водных объектов при организации экологического мониторинга в отношении их паразитарного загрязнения.

Материалы диссертационной работы вошли в циклы лекций по курсам: «Общие вопросы паразитологии» (отделение «Социально-культурный сервис и туризм»), «Санитарно-паразитологический мониторинг объектов окружающей среды» (отделение «Экология») на естественно-географическом факультете; «Экология» на факультете искусств Курского государственного университета; использованы при проведении семинаров по профилактике паразитарных болезней для учителей, сотрудников и родителей учащихся МОУ «Средняя общеобразовательная школа № 31 г. Курска» и МОУ «Школа с углубленным изучением отдельных предметов № 6 г. Курска».

Апробация работы

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

2. Научное обоснование усовершенствованной санитарно-паразитологической методики исследования воды позволяет включить ее в систему экологического мониторинга за безопасностью питьевой воды и водных объектов в отношении их паразитарного загрязнения.

Публикации

Основные результаты диссертации содержатся в 14 опубликованных работах, в том числе трех статьях в журналах и сборниках работ, включенных в перечень ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 156 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, из которых одна посвящена обзору литературы, а 3 другие -результатам собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Диссертация иллюстрирована 25 таблицами и 23 рисунками. Список литературы включает 133 работы, в том числе 95 отечественных и 38 зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Плехова, Нина Анатольевна

выводы

1. Разработана методика санитарно-паразитологического исследования воды с использованием современных технических устройств для отбора проб воды (пробоотборник - концентратор гидробиологический «ПробоКонГ») и их дальнейшей обработки в лаборатории (отборник флотанта фильтрующий ОФФ-25). Это позволяет отбирать пробы объемом до 4001000 л, облегчает доставку в лабораторию полученного концентрата объемом 100-150 мл и обеспечивает более щадящий режим отделения (отстаивание или фильтрование) цист лямблий от фильтрующего материала. Применение данной методики позволяет существенно облегчить организацию и проведение экологического мониторинга воды поверхностных водных объектов и питьевой воды в отношении их паразитарного загрязнения, а также повысить его эффективность.

2. Внедрение новых технологий исследования воды сокращает время исследования до 8-10 часов, а приготовление микропрепарата отборником флотанта фильтрующего ОФФ-25 и микроскопическое исследование его на аналитической трековой мембране уменьшает потери инвазионного материала на 10-12%.

3. Использование усовершенствованной методики для обнаружения цист лямблий в модельной жидкости повышает эффективность их индикации в 3,4 раза. При увеличении объема проб с 25 до 200 л выявляемость паразитарных патогенов возрастает в 2 раза и достигает 68,4%. При исследовании проб (200 л) цисты лямблий обнаруживаются в 2,5 раза чаще (66,7±0,2%). Увеличение объема пробы приводит к повышению количества положительных проб в 1,6 раза.

4. Применение ПробоКонГ и ОФФ-25 в практике работы паразитологиче-ских лабораторий при организации экологического мониторинга водных объектов и питьевой воды повышает частоту выделения паразитарных агентов в воде в 1,4-1,6 раза, а также интенсивные показатели обсеменен-ности воды в 3 раза.

6. Гетерогенность цист лямблий обуславливает неравномерное распределение их во флотационной жидкости. Жизнеспособные цисты лямблий на ранних стадиях развития (92,3±0,2%) концентрируются в поверхностном слое флотационного раствора (30% раствор сахарозы); жизнеспособные цисты на поздних стадиях развития (15,2±0,1%) обнаруживаются в толще взвеси, а погибшие цисты лямблий, имеющие нарушения целостности их клеточной стенки (3,2±0,2%), - оседают в нижние слои.

7. Для борьбы с цианобактериями, затрудняющими идентификацию цист лямблий, необходимо использовать вещества, обладающие альгицидным действием: 20% раствор мочевины при экспозиции 1 час; 1% раствор препарата «Альгицид» и штамм бактерий IGM-36 при экспозиции 24 часа.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Шире внедрять в практику производственных лабораторий водоочистных сооружений и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» усовершенствованную методику санитарно-паразитологического исследования питьевой воды и воды поверхностных водных объектов, поверхностного стока.

3. Приготовление препаратов паразитарных патогенов для микроскопиро-вания осуществлять из супернатанта, для чего использовать отборник флотанта фильтрующий ОФФ-25. Микроскопическое исследование готовых препаратов проводить непосредственно на мелкопористых аналитических трековых мембранах с размером пор 0,2-0,4 мкм.

4. Для осветления приготовленного концентрата пробы воды от цианобактерий проводить предварительную его обработку 20% раствором мочевины в течение 1 часа (соотношение 1:1). А также возможно применение для этих целей 1% раствора препарата «Альгицид» или биопрепарата, приготовленного на основе жидкой культуры бактерий Brevibacillus laterosporus (штамм IGM-36) при экспозиции 24 часа.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Плехова, Нина Анатольевна, Курск

1. Авчинников А.В., Соболь Р.Г., Рахманин Ю.А., Михайлова Р.И. // Вода: экология и технология: V1.й междунар. конгр. - М., 2000. - Т.1 - С. 215-216.

2. Агиров А.Х., Тютюнджан Е.Г., Цикуниб А.Д. Безопасность и физиологическая полноценность питьевой воды централизованных систем водоснабжения республики Адыгея // Гигиена и санитария 2004. - № 2. - С.17.

3. Адоева Е.Я., Баранова A.M., Бронштейн A.M. и др. Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы): Руководство для врачей под редакцией В.П. Сергиева, Ю.В. Лобзина, С.С. Козлова. Санкт-Петербург: - 2006. -592с.

4. Атлас анатомии простейших, патогенных для человека и животных. А.А. Авахян. М.: Медицина - 1975. - с. 312.

5. Белова Е.Г., Бунаков А.В., Самофалова Н.А., Новосильцев Г.И. Методическое обеспечение санитарно паразитологического контроля качества природной и питьевой воды. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2003. - № 4. - С.15-17.

6. Белошицкая И.Г., Вилешина Л.А. О состоянии заболеваемости и выявлении криптоспоридиоза в Житомирской области. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2004. - № 2. - С.21-23.

7. Беляев Е.Н., Чибураев В.И. и др. О санитарно-эпидемиологической обстановке, состоянии водоснабжения населения России и мерах по улучшению качества питьевой воды // Здравоохранение Российской Федерации М., 1996. -№2-С.7-11.

8. Бойцов А.Г., Ластовка О.Н. и др. Оценка качества воды по биологическим показателям: пути совершенствования // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова 2004. - №1 -С.86-89.

9. Беэр С.А., Романенко Н.А. и др. Роль водного фактора в распространении паразитарных болезней человека в России // Материалы Международного Конгресса: «Вода: экология и технология» М., 1994 - Т.4. - С. 120-121.

10. Высоцкий Л.И., Ильясов Г.А., Николаиди Н.П. и др. // Вода: экология и технология: 2-й международный конгресс М., 1996. - Т.1. - С. 203-204.

11. Высоцкий Л.И., Ильясов Г.А., Васина М.В. // Вода: экология и технология: 4-й международный конгресс. М., 2000. - Т. 1. - С.320-321.

12. Гигиенические требования к охране подземных вод от загрязнения: Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. Москва: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2001. - 19 с.

13. Глуховский И.И., Кузьмин С.М., Крапухин В.Б., Романенко Н.А. и др. Способ определения паразитарных возбудителей кишечных заболеваний в воде и устройство для его осуществления. // Патент на изобретение 2109815 от 27.04.1998.-4 с.

14. Использование модельных тестов цист лямблий и ооцист криптоспори-дий для гигиенической оценки эффективности водоочистки: Методические указания. М: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, -2003.- 16с.

15. Коза Н.М. и др. Распространение кишечных протозоозов среди населения крупного города // Материалы VIII съезда Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: Сб. статей в 4 томах. М: «Росинэкс», 2002.-Т 1, С.339-340.

16. Колмаков В.И. Методы предотвращения массового развития цианобактерий Microcystis aeruginosa в водных системах // Микробиология 2006. -Т 75, №2-С. 149-153.

17. Красовский Г.Н., Плитман С.И. и др. Тенденции изменения показателей качества воды как сигнал опасности для здоровья населения // Мед паразитология и паразитарные болезни 2003. - №6 - С.26-27.

18. Кузнецова Н.И., Григорьева Т.М., Николаенко М.А., Смиронова Т.А., Азизбекян P.P. Альгицидная активность штамма Brevibacillus laterosporus // Биотехнология 2006. - №4 - С.45-49.

19. Кузьмин С.М., Левин В.П., Новосильцев и др. На пути к паразитологиче-скому мониторингу воды // Тезисы доклада 2-го Международного Конгресса: «Вода экология и технология» М., 1996 - С. 427-428.

20. Кузьмин С.М., Левин В.П., Новосильцев и др. На пути к паразитологиче-скому мониторингу воды // Материалы VIII съезда Всероссийского Общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М., - 2002. - Т 1. - С. 347349.

21. Кучера Т.В., Полушкина М.Г., Анищенко Н.В. и др. Вспышка лямблиоза в детском дошкольном учреждении г. Перми // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 2002. - №2. - С. 51-53.

22. Ламова И. К вопросу о видовой специфичности Lamblia intestinalis и L. Muris // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1970. - №6 -С. 674-676.

23. Ларин В.Е. Современные аспекты биологии, таксономии, эпидемиологии и методов обнаружения простейших Giardia в питьевой воде // ЗНИСО 2001. - № 8. - С. 19-23.

24. Ларин В.Е. Состояние методического обеспечения санитарно-паразитологического контроля качества воды в России // ЭКВАТЕК-2002: Материалы конгресса под общ. ред. проф. Л.И. Эльпинера М., 2002. - С. 712.

25. Лысенко А.Я., Владимова М.Г., Кондрашин А.В., Майори Дж. Клиническая паразитология. Под общей редакцией Лысенко А.Я.: Руководство. Женева, ВОЗ:-2002.-752 с.

26. Мерзлова Н.Б., Романенко Н.А. Распространенность и клинико-лабораторная характеристика лямблиозной инвазии в Пермском регионе // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 2004. - №2. - С. 34-36.

27. Методы санитарно паразитологических исследований: Методические указания. - М: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России -2000. - 67с

28. Никитин С.В., Мубаракшин P.P. Гигиеническая оценка водоснабжения в сельском районе // Гигиена и санитария. 2005. - № 1. - С. 55-58.

29. Новосильцев Г.И., Продеус Т.В., Сергиев В.П., Романенко Н.А. Оценка загрязненности водоисточников цистами и ооцистами кишечных патогенных простейших // Четвертый международный конгресс: «Вода: экология и технология» ЭКВАТЭК - 2000 - М., 2000 - С.764.

30. Онищенко Г.Г. Заболеваемость паразитарными болезнями в Российской Федерации и основные направления деятельности по её стабилизации // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 2002. - №4. - С. 3-10.

31. Онищенко Г.Г. Устойчивое обеспечение питьевой водой населения России для профилактики заболеваемости инфекционными и неинфекционными заболеваниями // Гигиена и санитария 2003. - № 2. - С. 3-7.

32. Онищенко Г.Г. О мерах по усилению профилактики паразитарных болезней в России // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 2003. -№ 3. - С. 3-6.

33. Онищенко Г.Г. Актуальные проблемы реализации в России решения организации объединенных наций о провозглашении десятилетия 2005-2015г. международной декадой « Вода для жизни»// Гигиена и санитария 2005. -№4. - С. 3-5.

34. Онищенко Г.Г. Проблемы питьевого водоснабжения населения в системе международных действий по проблеме «Вода и здоровье. Оптимизация путей решения» // Гигиена и санитария 2005. - № 6. - С.3-7.

35. Павлов А.В., Романенко Н.А., Хижняк Н.И. Биологическое загрязнение окружающей среды и здоровье человека. Киев: «Здоровье», 1992. - 328 с.

36. Погорельчук Т.Я., Олейник В.А., Орлова Н.С. и др. Паразитарные болезни в структуре острых кишечных заболеваний // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 2003. - № 1. - С. 23-26.

37. Панкратов А.В., Махотина И.Г. Качество питьевой воды как фактор риска заболеваемости острыми кишечными инфекциями // Здравоохранение РФ -2001.-№2.-С. 52-54.

38. Протисты: Руководство по зоологии. СПБ.: Наука, - 2000. - 4.1. - 679с.

39. Профилактика лямблиоза: Методические указания. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005. - 36 с.

40. Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации: Санитарно эпидемиологические правила и нормативы. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, - 2003. - 67 с.

41. Рабинович Б.Е., Цыбина Т.Н., Мчедлишвили Б.В., Важенин А.В. и др. Методика исследования воды на наличие возбудителей паразитозов // Материалы VIII съезда Всероссийского Общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М., - 2002. - Т 1. - С. 382.

42. Рахманин Ю.А., Михайлова Р.И. Современные критерии гигиенической оценки доброкачественности питьевой воды // Гигиена и санитария 1994. -№8. - С.5-9.

43. Рахманин Ю.А., Михайлова Р.И., Кирьянова Л.Ф. Питьевое водоснабжение населенных мест в 21 веке // Проблемы биомедицины на рубеже 21 века. // Под ред. Ю.А. Рахманина, С.А. Беэра М.: РАЕН - 2000. - С. 146-153.

44. Рахманин Ю.А., Михайлова Р.И., Романенко Н.А. Состояние паразитологии питьевой воды на рубеже XXI века // Мед. паразитология и паразитарные болезни-2001.-№4.-С. 8-13.

45. Романенко Н.А., Новосильцев Г.Н, Рахманин Ю.А. и др. Современное состояние и задачи санитарно-протозоологических исследований питьевой воды // Гигиена и санитария 1992. - №2. - С.22.-25.

46. Романенко Н.А. Современные задачи санитарной паразитологии. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2001. - № 4. - С. 25-29.

47. Романенко Н.А. Место санитарно-паразитологического надзора в социально-гигиеническом мониторинге. // Материалы международной научной конференции «Образование в решении экологических проблем». Курск -2001.-С. 121-126.

48. Романенко Н.А., Новосильцев Г.И., Скрипова JI.B. и др. Санитарно- па-разитологическая характеристика различных источников питьевого водоснабжения // Мед. паразитология и паразитарные болезни 1993. - № 5. - С. 56-59.

49. Романенко Н.А., Гороненкова О.Н. Лексикова и др. Эпидемиологическая ситуация в отношении паразитозов в Мегаполисе Москвы: Сборник пленарных докладов научно-практического Совещания «Паразитарное загрязнение мегаполиса Москвы» М., 1994. - С. 30-42.

50. Романенко Н.А., Новосильцев Г.И. Санитарно-паразитологические показатели качества воды // Стандарты и качество 1995. - № 11 - С. 33-37.

51. Романенко Н.А., Новосильцев Г.И, Гафурова З.М. и др. Санитарно-паразитологическая характеристика источников питьевого водоснабжения // Тезисы доклада 2-го Международного Конгресса: «Вода: экология и технология» М., - 1996. - С. 253-254.

52. Романенко Н.А., Новосильцев Г.И. Усовершенствование метода санитарно-паразитологического исследования воды // Тезисы доклада Всероссийского симпозиума «Роль Российской гельминтологии в развитии паразитологии». -М.,-1997.-С. 41.

53. Романенко Н.А., Новосильцев Г.И., Рахманин Ю.А. и др. Научные основы паразитологического контроля качества воды // Гигиена и санитария -1998. №4. - С.23-24.

54. Романенко Н.А., Семенова Т.А. Совершенствование санэпиднадзора -необходимость повышения эффективности профилактических мероприятий при паразитозах // Мед. паразитология и паразитарные болезни 2000. - № 4.- С. 3-8.

55. Романенко Н.А., Падченко И.К., Чебышев Н.В. Санитарная паразитология руководство для врачей М.: «Медицина» - 2000. - 320 с.

56. Романенко Н.А., Новосильцев Г.И. Невидимые обитатели питьевой воды и здоровье населения // РЭТ инфо - 2001. - № 4 - С. 12-18.

57. Романенко Н.А., Сергиев В.П., Рахманин Ю.А. О необходимости включения ооцист криптоспоридий в число показателей эпидемической безопасности питьевой воды // Гигиена и санитария 2001. -№ 1. - С. 17-19.

58. Романенко Н.А. Паразитологический контроль качества питьевой воды: Научные труды «Охрана окружающей среды и здоровья населения Центральной России на основе интеграции гигиенической науки и практики». Вып. 3. Липецк 2002. - С. 320-321.

59. Романенко Н.А., Малышева Н.С. Среда обитания и паразитарные болезни- Москва Курск - 2002. - 63 с.

60. Романенко Н.А., Сергиев В.П., Новосильцев Г.И. Роль воды в распространении кишечных протозоозов // ЭКВАТЭК —2002, 5-й Международный конгресс: «Вода: экология и технология». М., 2002. - С. 716.

61. Романенко Н.А., Белова Е.Г., Самофалова Н.А., Малышева Н.С. Роль воды в распространении кишечных протозоозов: Тезисы выступлений форума «Питьевые воды России 2003» - М., - 2003. - С.38-45.

62. Романенко Н.А., Евдокимов В.В. Проблемные территории и паразитарные болезни. М. - 2004. - 312 с.

63. Романенко Н.А., Белова Е.Г., Бабурина JI.B. и др. Вода и кишечные пара-зитозы // Мед. паразитология и паразитарные болезни 2004. - №3. - С.3-6.

64. Романенко Н.А., Гузеева Т.М., Кузьмин Е.С., Кузьмин С.М., Рахманин Ю.А., Михайлова Р.И. // Гигиена и санитария 2006. -№6 - С.79-81.

65. Руководство по контролю качества питьевой воды. Т. 1. Рекомендации ВОЗ. Женева - 1994. - 249 с.

66. Самофалова Н.А. Роль воды в распространении паразитозов на сооружениях нецентрализованного водоснабжения // РЭТ-инфо 2005. - №1 - С.44-48.

67. Самофалова Н.А. Эколого-паразитологический мониторинг за нецентрализованным водоснабжением: Автореф. канд. биол. наук, Курск 2006. - 27с.

68. Санитарно паразитологическое исследование воды хозяйственного и питьевого использования: Методические указания. - М: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России - 2000. - 19 с.

69. Санитарно микробиологический и санитарно - паразитоогический анализ воды поверхностных водных объектов: Методические указания. - М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора - 2005. - 75 с.

70. Сафонкин С.В., Кирюшин В.А., Панин В.Ф., Чередникова В.И. О совершенствовании правовой базы в отношении эпидемической безопасности питьевой воды // Гигиена и санитария 2005. - №3. - С. 57-59.

71. Скрипова Л.В., Романенко Н.А. Санитарно паразитологическая надежность систем коммунального водоснабжения //Сб. научных трудов БелНИС-ГИ - Минск - 1996. - Т. 2 - С.75-76.

72. Скрипова Л.В., Романенко Н.А. Источники питьевого водоснабжения и их участие в распространении паразитарных болезней // Сб. научных трудов БелНИСГИ Минск - 1996. - Т. 2 - С. 77-79.

73. Скрипова Л.В., Романенко Н.А. Новосильцев Г.И. и др. Методические рекомендации: «Санитарно-паразитологические методы исследования объектов внешней среды на яйца гельминтов и цисты простейших. Минск - 1996. -с. 16.

74. Скрипова Л.В. Метод улавливания яиц гельминтов и цист простейших из источников хозяйственно-питьевого водоснабжения // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 2005. - №1. - С. 46-47.

75. Скрипова Л.В. Новый метод для улавливания яиц гельминтов и цист простейших из источников хозяйственно-питьевого водоснабжения // Гигиена и санитария-2005.-№4.-с. 61-61.

76. Соловьев М.М. Биология лямблий и взаимоотношения их с организмом хозяина. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 1968. - №6. - с. 720-726.

77. Соловьев М.М. Строение и биология лямблий, их взаимоотношения с организмом хозяина. Автореф. докт. дис. М., 1973. 42с.

78. Сонин М.Д., Беэр С.А., Райтман В.А., Сергиев В.П., Романенко Н.А. Паразитарное загрязнение урбанизированных экосистем.//Сб. Проблемы биомедицины на рубеже XXI века. М. - 2000. - С. 170-174.

79. Сотниченко С.А., Бравый Б.Г., Янгузарова Л.Р. // Вода: экология и технология: 2-й международный конгресс. М., 1996. - Т.1. - С.261-262.

80. Тарасов В.В. Простейшие, патогенные для человека и животных. М.: Изд-во МГУ-1987.- 156 с.

81. Терентьев В.И. и др. Перспективы совершенствования технологии обеззараживания воды поверхностных источников // Гигиена и санитария 2002. -№ 3. - С. 29-31.

82. Тимошенко Н.И., Новосильцев Г.И. Совершенствование санитарно-паразитологического контроля за качеством воды хозяйственного и питьевого использования. // Мед. паразитология и паразитарные болезни 2001. -№ 4.1. C. 33-35.

83. Ткаченко Г.М. К вопросу инцистирования лямблий. Сборник трудов Курского мединститута, вып. XVI, 1962, с. 302-305.

84. Хвесик М.А. О предупреждении загрязнения подземных и поверхностных вод // Гигиена и санитария 1990. - № 10. - С. 16-18.

85. Al-Ani, Mohammed J., Hendreeks David W., Logsdon Gary S., Hubler Charles P. Removing Giardia Cysts from low turbidity waters by rapid rate filtration. "J. Amer. Water Works Assoc". 1986, 78, №5, 66-73.

86. American Public Health Association. Standard methods for the examination of water and wastewater, 17th ed. American Public Health Association, Washington,1. D.C.

87. Anderson B. // Amer. J. Vet. Res. 1986, Vol. 47, P. 2272-2273.

88. Andrew D. Howe, Sue Forster, Stephen Morton et al. Cryptosporidium Oocysts in a Water Supply Associated with a Cryptosporidiosis Outbreak // University of East Anglia, Norwich, United Kingdom. 2003. - P. 34.

89. Andrik, Peter. A Giardia lamblia terjedese I vovis utjan lrodalmi attekintes 1. A vis eredetu giardiazis. "Hidrol. Kozl", 1987 -№ 6-7, P.316-322.

90. Anon L.A. Cryptosporidium in water supplies. Second Report of the group of experts; Chairperson, Sir John Badenoch // Department of the Environment, Department of Health. HMSO. London. 1995. - P. 46.

91. Anon L.A. Isolation of Giardia Cysts, Cryptosporidium Oocysts and Free-living Pathogenic Amoebae in Water // Methods for Examination of Waters and associated materials. HMSO. London. 1989. - P. 26-32.

92. Anon L.A. The Water Supply (Water Quality) Regulations 1989 (Statutory Instrument № 1147) (as amended by SI № 1384 (1989), SI № 1837 (1991) and SI № 2790 (1991)). London. HMSO.

93. Browning S.R., Ives P.Y. Environmental system health the water distribution a case history of an outbreak of giardiasis //S. Hist. Water Environm. Manag., 1987, 1, №1, P. 55-60.

94. Burne M. The detection Cryptosporidium spp. Oocysts and Giardia spp. Cysts in water // City Analysts Ltd. Biotechnology Centre, UCD. 2003. - P. 15-44.

95. Campbell P., Current W. // J. Clin. Microbiol. 1983. Vol. 18. P. 165-169.

96. Considine Robert F., Dixon David R., Drummond Calum I.// Oocysts of Cryptosporidium parvum and modcegand surfaces in agueods solutions: An Atomic force microscope (AFM) study.// Water Res. 2002 - 36, №14. - P. 3421-3428.

97. Craun J. Waterborne outbreaks of Giardiasis. Current Status // Giardia and Giardiasis: Biol. Pathogen. And Epidemiol. New-York, London, 1984, P. 243261.

98. Craun J., Gunther P. Waterborne outbreaks of Giardiasis. Current Status "Giardia and Giardiasis: Biol. Pathogen. And Epidemiol" New-York, London, 1984.

99. Craun J., Gunther P. Surface water supplies and health "G.Amer. Water Works Assoc.", 1988, 80, №2, P.40-52.

100. D 2777-96. 1996. Standard Practice for Determination of Precision and Bias of Applicable Test Methods of Committee D-19 on Water. Annual Book of ASTM Standards Vol. 11.01. ASTM West Conshohocken, PA.

101. Dai Xiaojun, Hozalski Raymond M. Effect of NOM and biofilm on the removal of Cryptosporidium parvum oocysts in rapid filters.// Water Res. 2002. -36, №14. P. 3523-3532.

102. De Leon R., et al. Enterovirus, Cryptosporidium and Giardia monitoring of wastewater reuse effluent in Arizona. In: Implementing water reuse. Proc. Of Symposium IV. Amer. Water Works Ass. Denver (1988).

103. Doe (1992) proceedings of the workshop on Cryptosporidium in water supplies. Progress with the National Research Programme. Department of the Environment, Welsh Office, Department of Health. London: HMSO.

104. EPA 821-R-98-010 September 1998 DRAFT, Method 1623: Cryptosporidium in water by Filtration/IMS/FA. United States Environmental Protection Agency, Office of Water, Washington, DC 20460.

105. Ford Т.Е. Microbiological Safety of Drinking Water: United States and Global Perspectives // Environmental Health Perspectives. 1999. - Vol. 107. - pp. 191— 205.

106. Ford Т.Е. Microbiological Safety of Drinking Water: United States and Global Perspectives // Environmental Health Perspectives. 1999. - Vol. 10. Supplement l.-P. 191-206.

107. Ford Т.Е. Microbiology Safety of Drinking Water: United States and Global Perspectives // Environm. Health Perspectives. 1999. - Vol. 107. - P. 1.

108. Fan Wei, Fu Iin-xiand, Wang Chang- Sheng, Li Nigt, Zhang Li cheng, Li Tong-yan // Shenyang iinzhu gondchend xueyuan xuebao. Ziran kexue ban = I. Saenyand Archit. And Civ. End. Univ. Natur. Sai.- 2003. -19,№2 - P. 150-153.

109. Fout, G., Schaefer, III, F.W., Messer, J.W., Dahling, D.R., and Stetler, R.E. April 1996. ICR Microbiological Laboratory Manual. EPA/600/R-95/178. United States Environmental Protection Agency, Office of Research and Development, Washington, DC 20460.

110. Fricker C.R. Detection of Cryptosporidium and Giardia in Water. In: Protozoan Parasites and Water. 1995. - P. 126-141.

111. Graczyk Т.К., Conn D.B., Marcogliese D.I., Graczyk H., de Lafontaine Y. Accumulation of human waterborne parasites by zebra mussels and Asian freshwater clams // Parasitol. Res. 2003 - 89, №2 - P. 107-112.

112. Guidance Manual for Compliance with Filtration and Disinfection Requirements for Public Water System using Surface Water October 1990 Edition, U.S. EPA Office of Drinking Water, Washington, D.C.

113. Hayes E.B., Matte T.D., O'Brien T.R. et al. Large community outbreak of Cryptosporidiosis due to contamination of a filtered public water supply // N. Engl. J. Med. 1989. - P. 1372-1376.

114. Housing and sanitation and their association with gastro-intestinal and respiratory illness; A case study of Githembe slums, Nairobi, Kenya Waniir C.O., Oogo Т.О., Mwangi I. M., Wainaina I.M., Hawa F.A., Muthwii S.M., Seki I., Wamalwa,

115. Chege., Osaki Y.// Koshu eisei kenkyu =1. Nat. Inst. Public Healih. 2002. - 51. №1 - P. 61-66.

116. Proposed Test Giardia Cysts and Cryptosporidium Oocysts in Low-Turbidity Water: 1992 Annual Books of ASTM Standards. Sec. 11: Water Inviron. Tech-nol., vol. 11.02.

117. Shepherd K.M., Wyn-Jones A.P.//Water Sci. Technol. 1995. Vol. 31, N 5 -6.-P. 425^129.

118. University of California Agriculture and Nature Resources: Giardia and Crip-tosporidium Levels are Low in Sierra Nevada Pack Stock. News Tips, December 1999.

119. Yao Yu Fends, Say Leong Ong, Yiang Yong Hu et. al.// Appl. Environ. Microbiol. 2003. - Vol.69. - P. 1898-1903.

Информация о работе

Плехова, Нина Анатольевна
кандидата биологических наук
Курск, 2007
ВАК 03.00.19

Диссертация

Совершенствование санитарно-паразитологических методов исследования воды в системе экологического мониторинга - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы